CZ377296A3

CZ377296A3 - Stabilized and sterilizably filterable nano particles, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof

Info

Publication number: CZ377296A3
Application number: CZ963772A
Authority: CZ
Inventors: Michel Laborie; Joel Vacus; Thierry Verrecchia; Marie-Christine Bissery
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer Sa
Priority date: 1994-06-22
Filing date: 1995-06-20
Publication date: 1997-04-16
Also published as: DE69506867D1; DE69506867T2; HUT76549A; FR2721510A1; CA2192712A1; NO965458L; EP0766555B1; DK0766555T3; CN1151114A; BR9508363A; EP0766555A1; MX9606490A; FI965165A7; JPH10501804A; FI965165A0; PL317893A1; SK166696A3; FI965165L; NO965458D0; US6146663A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nanočástic velmi malých rozměrů, ktprp krrimp vvhn/^v c t^qc í va ί ί p í v tfin vých problémů cirkulovat v krevním řečišti na úrovni kapilár, mají ještě další výhody, mezi které patří jejich schopnost stabilizace, sterilní filtrace a lyofilizace.

Dosavadní stav techniky

V patentových přihláškách EP 523 183, _EP 520 888 a EP 520 889 byly popsány sférické částice malých rozměrů, jejichž výhoda spočívá v tom, že mohou být injikovány. Avšak takto připravené nanočástice máji střední průměr asi v rozmezí od 50 do 500 nm a nelze je tudíž bez výrazných ztrát na výtěžku sterilizovat sterilizující filtrací, přičemž tyto nanočástice nejsou ani lyofilizovatelné vzhledem k nedostatečné stabilitě.

V Eur.J.Pharm.Biopharm.39(5), 173^191 (1993) autoři zkoumali současně disponovatelné technologie v oblasti nanočástic určených pro farmaceutický průmysl. Na straně 182 se uvádí, že sterilní filtrace nanočástic dosud nebyla nikde· popsáná'7

V mezinárodní patentové přihlášce WO 90/15593 je popsán způsob přípravy monodispergovaných částic účinných látek s nízkou rozpustností. Uvedené částice mohou přípa_dně obsaho-_ vat polymer ve funkci ochranného koloidů, který je lokalizován na povrchu částic.

Podstata-vynálezu

Nyní bylo zjištěno - a toto zjištění tvoří .podstatu vynálezu - že je možné připravit částicem jejichž střední průměr je z 95 % nižší než 100 nm a přesněji, jejichž střední průměr leží mezi 20 a 75 nm a které mohou tedy být podrobeny sterilizační (mikrobiální) filtraci na filtrech 0,22, aniž by při této sterilizující filtraci docházelo ke snížení výtěžku nanočástic. Tyto částice jsou navíc stabilnější než částice, které mohou být získány v rámci dosavadního stavu techniky, a mohou bvt lvofilizovánv, aniž by...oři lyofilize doSUBSTITUTE SHEET cházelo k aglomeraci částic.

V rámci vynálezu nanočástice obsahují alespoň jeden hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nebo kopolymer emulgovaný ve vodném roztoku nebo vodné dispersi fosfolipidů a žlučových solí.

Účinná látka může být do nanočástic v rámci vynálezu zavedena společně s polymerem nebo kopolymerem.

Fosfolipidy se zvolí například z množiny zahrnující přírodní, syntetické nebo polosyntetické fosfolipidy. Zejména se použijí lecitiny {fosfatidylcholin), jako například purifikované vaječné nebo sójové lecitiny (lecitin El00 , lecitin E80 , Phospholipony* , například Phospholipon 90 , fosfatidylethanolamin, fosfatidylserin, fosfatidylinositol, faůfatidylglycerol, dipalmitoylfosfatidylcholin, dipalmitoylglycerofosfa tidylcholin, dimyristoylfosfatidylcholin, distearoylfosfatidyl cholin, kyselina fosftatidová a směsi výše uvedených látek.

Žlučovými solemi jsou v rámci vynálezu například soli odvozené od kyseliny cholové, zejména choláty, taurocholáty, glykocholáty, deoxycholáty, dehydrocholáty nebo také deriváty těchto solí nebo jejich směsi. Výhodně se použijí sodné soli.

Hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nebo kopolymer může být zvolen z množiny zahrnující biokompatibilní a biodegradovatelné polymery, například polymery kyseliny mléčné nebo glykolové, jakož i jejich' kopo ly měr y/ 'nebo kbpolymery na 'báz'i kyseliny polymléčné' a polyethylenoxidu (nebo polypropylenoxidu), mající výhodně molekulovou hmotnost mezi 1000 a- 200000, polymery kyseliny polyhydroxymáselné, polylaktony mastných kyselin obsahujících alespoň 12 uhlíkových atomů nebo polyanhydridy.

— Nanočástice podle vynálezu jsou naprosto vhodné pro aplikace“ spojené s použitím hydrofobních účinných látek. Použitelné účinné látky mohou být zvoleny z velké skupiny léčivých látek určených pro humánní a veterinární medicínu. Těmito účinnými látkami mohou být i účinné látky určené pro kosmetický průmysl, pro živočišnou výrobu nebo pro diagnostická činidla.

Jako příklady farmaceuticky použitelných účinných látek lze neomezujícím způsobem uvést protirevmatická činidla, nesteroidní protizánětová činidla, analgetika, účinné látky působící proti kašli, psychotropní látky, steroidy, barbiturátv, antimikrobiálhí činidla, anťialergická činidla, antiastmatická činidla, spasmolytika, antisekreční činidla, kardiovaskulárně účinné láJtky-._c&reh-r-á-i-n-í—va-s-Qd-i-l-a-bá-t-ory-;cerebrální protektory, hepatické protektory., terapeutická činidla gasfcrointestinálního traktu, protirakovinová činidla, protivirová činidla, vitaminy, antikoncepční látky a očkovací látky.

ι i

ι

I i

í (

Podle vynálezu mohou být.nanočástice získány technikou odpaření rozpouštědla z vodného roztoku nebo vodné disperze fosfolipidů a žlučových solí, do kterého, resp. do které je přidána nemísitelná organická fáze obsahující účinnou látku __ a hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nebo kopolymer. Směs se . předemulguje a potom podrobí homogenizaci a odpaření organického rozpouštědla, přičemž se získá vodná suspenze nanočástic velmi malých rozměrů.

Provedení tohoto způsobu je detailněji popsánďv příkladech.

Nemísitelná organická ,fáze--se--výhodně- zvo-l-í-'z'(nn'ožiny zahrnující těkavá rozpouštědla, která mohou být dobrými rozpouštědly zvoleného polymerního;systému,_ Je_například-mož^———— né použít estery, zejména ethylacetát, chlorovaná rozpouš_ A tědla, například dichlormethan nebo chloroform, nebo také ketony, jako například methylethylketon.

Obecně účinná látka tvoří výhodně asi 25 % hmotnosti zavedeného polymeru. Nicméně toto množství se může měnit ,a může být případně ještě nižší nebo může obsah účinné látky činit až 50 % hmotnosti, vztaženo na hmotnost zavedeného polymeru nebo kopolymeru.

Nemísitelná organická fáze je konstituována takovým způsobem, že účinná látka a polymer nebo kopolymer představují 0,1 až 7 % hmotnosti roztoku.

Vodná fáze tvořená vodným roztokem nebo vodnou disperzí fosfolipidů a žlučových solí obsahuje výhodně tyto složky ve vzájemném molárním poměru 1:1. Nicméně tento poměr se může měnit takovým způsobem, že se molární poměr fosfolipidů ke žlučovým solím pohybuje od 0,1 do 1.

Vodná fáze je konstituována takovým způsobem, že fosfolipidy ažlučové soli představují celkem 0,2 až 2 % hmotnosti roztoku.

Vzájemná množství organické fáze a vodné fáze jsou zvolena tak, že organická fáze představuje 20 až 60 % objemu vodné fáze.

Takto získané nanočástice mohou být filtrovány v

V dobrém výtěžku, aniž by při filtraci docházelo k problémům spojeným s ucpáváním filtru. Tato filtrace- se' provádí jako kaskádová filtrace na filtrech se zmenšující se porositou s — následnou poslední filtrací na filtru 0,22 mikrometru.

Po filtraci se získaná suspenze výhodně lyofilizuje v přítomnosti jednoho nebo několika kryoprotekčních činidel. Obsah kryoprotekčního činidla činí asi 5 % (hm./obj.), vztaženo na suspenzi podrobenou lyofilizaci*.

Roztok určený k lyofilizaci obsahuje některé přísady, jako neionogenní sloučeniny, například kryoprotekční či.....hidTo”'ňěbo'čihÍ'ďló určené' k nastavění iš'ó'tdnicitý 'f inální'h'ó.........

injekčního roztoku. Tato činidla mohou být zvolena z množiny zahrnující cukry (glukóza, mannitol, sorbitol, sacharóza), polymery /například dextran (dextran 1500, dextran 40000), polyvinylpyrrolidony schopné injikování, polyethylenglykol.../, aminokyseliny'(například glykokol) nebo libovolná jiná činidla schopné vykonávat'uvedenou funkci.

Uvedený roztok může rovněž obsahovat jedno nebo několik konzervačních činidel. Lyofilizát může být případně v okamžiku bezprostředně před aplikací vyjmut vodou za vzniku injikovatelného přípravku. Je třeba uvést, že uvedené operace nemodifikují rozměry částic.

NanoČastice podle vynálezu jsou obzvláště zajímavé vzhledem k jejich stabilitě. Tato stabilita zejména umožňuje získat lyofilizát dobré kvality se zlepšenou možností jeho převedení na roztok nebo/a suspenzi v průběhu jeho aplikace, přičemž rekonstituovaná suspenze obsahuje částice, jejichž průměr je blízky průměru výchozích nanočástic.

_N.art.oč.ás-ti-ce_podle^/y-nál^zu—mohou—bý-^-po-u-šity'—p-ropřípravu sterilních kompozic určených pro farmaceutickou nebo veterinární oblast, pro kosmetickou oblast, pro agroalimentač ní oblast a pro oblast diagnostických činidel.

Uvedená technika je obzvláště zajímavá vzhledem k tomu, že umožňuje v průmyslovém měřítku přípravu stabilizovaných a dekontaminovaných nanopartikulárních suspenzí, které případně obsahují účinné látky, což až dosud nebylo možné.

Kromě toho vykazují stabilizované nanočástice podle vynálezu značnou výhodu v případě některých účinných látek, jakými jsou například protirakovinová činidla ze skupiny taxoidů. Tyto nanočástice ve skutečnosti umožňují zvýšit účinnost účinné látky ve srovnání s použitím takové účinné látky v rámci klasických formulací.

Sloučenina z příkladu 6, která byla testována při intravenózní .aplikaci u myší na melanolu B16 se ukázala dva.kr.á.t. účinnější při. aplikaci <ve--formě- -nanočá-s-tic-ve—s-rov-nán-í- ~ s účinností této sloučeniny aplikované v klasické formulaci tvořené směsí polysorbátu 80, ethanolu_a5%_roz toku _dext r o zy_ ve vodě v objemovém poměru 5:5:90.

Vynález se rovněž týká farmaceutických kompozic tvořených nanočásticemi podle vynálezu, které jsou případně v kombinaci s jednou nebo několika kompatibilními a farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami nebo přísadami. Tyto farmaceutické kompozice jsou výhodně tvořeny injikovatelnými farmaceutickými kompozicemi.

Podání parenterální cestou zahrnuje intravenózní, intraperitoneální, intramuskulární nebo subkutánní podání. Obzvláště výhodným způsobem podání je intraperitoneální nebo intravenózní podání.

Uvedené kompozice mohou obsahovat alespoň 0,01 % terapeuticky účinné sloučeniny. Množství účinné sloučeniny v kompozici je takové, že může být předepsáno vhodné dávkování. Výhodně se uvedené kompozice připraví takovým způsobem, že jednotková dávka obsahuje od 0,01 do 1000 mg účinné látky při parenterálním podání.

U člověka se uvedené, dávky obvykle pohybují v rozmezí mezi.0,01 a 200 mg účinné látky na kilogram tělesné hmot· nosti pacienta. Při intravenózním podání dávky účinné látky obecně činí 0,1 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti, výhodně 0,1 až 8 mg/kg tělesné hmotnosti. Je samozřejmé, že na volbu vhod ·>·<

něho dávkování bude mít vliv způsob podání, tělessná hmotnost pacienta, jeho celkový zdravotní stav, jeho věk a všechny další faktory, které mohou ovlivnit účinnost léčení.

V následující části popisu bude.vynález blíže objas něn pomoci konkrétních příkladů jeho provedení,· přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen formulaci paten tových nároků.

Příklady 'Příklad!

4,0 g kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou hmotností 2000 D a 1,0 g (3aS,4S,7aS}-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl) 2-/2-( 2-methoxyf eny 1) — (S) -propionyl/-4-perhydroisoindolo lu se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu zahřátého na vodní lázni na teplotu 45 °C (roztok A). 1j25 g cholátu sodného a 1,75 g lecitinu E80 se za míchání v zařízení Ultraturrax disperguje v 500 ml vody pro injekce (roztok B).

Roztok A se předemulguje v roztoku B po dobu 1 miR nuty v zařízení Ultraturrax . Tato předběžná emulze se potom provedení vynalezu zavede do homogenizátoro typu Microfluidizer 110 Τ', kde se vystaví 20 následným průchodům při provozním tlaku 0,6 MPa a teplotě chlazení 0 °C.

610 ml získané emulze se zavede do baňky o obsahu 2 litrů. Ethylacetát se odpaří za vakua v rotační odparce při teplotě 30 °C a v průběhu asi 45 minut. Získá se 450 ml suspenze nanočástic a tento objem se doplní na 500 ml vodou pro injekce.

_Zi.sk a ná_sjj spenz e—se—zí-i-l-Lruj®—^za—t-l-a-k-u—0-,-Qfi^M-P-apod dusíkovou atmosférou postupně přes 4 membrány na bázi

D esterů celulózy (Millipore“) o průměru 45 mm s postupně klesající porositou.··RAWP 1,2 mikrometru, AAWP 0,8 mikrometru, HAWP 0,45 mikrometru a GSWP 0,22 mikrometru.

Sterilizačně zfiltrovaná suspenze se rozdělí na 2 Části. První čásť se lyofilizuje v přítomnosti 5¾ (hm./obj.) glukózy, zatímco druhá část se lyofilizuje v přítomnosti 5% (hm./obj.) sacharozy.

Střední průměr částic_ měřený rozptylem světla v zařízení Brookhaven před lyofilizací a po vyjmuti lyofilizátu stejným objemem vody pro injekce je v obou případech roven asi 70 nm.

Provozní výtěžek, vyjádřený jako poměr koncentrace (3aS, 4S,7aS ).-7,7-difenyl-4-( 2-methoxyfenyl)-2-/2-(2-methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindololu po filtraci k výchozí teoretické koncentr-aci—(2 mg/ml-)·,-- činí 9-5—%.---------------- Optická hustota suspenze při 405 nm před a po poslední filtracina f il tru 0,22_mikr ome tru _ č i η í _. 2_, 2_0_- r.e s p.__

2,10.

Koncentrace ( 3aS, 4S, 7aS) - 7,7-dif eny l-'4-( 2-methoxyfenyl)-2-/2-( 2-methoxyfenyl)- (S) -propionyl)/-4-perh-ydroisoindololu před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru zůstala nezměněna.

( 3aS, 4S, 7aS )-7,7-difeny 1-4-( 2-methoxyfenyl.)-2-/2(2-methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindolol může být připraven způsobem popsaným v patentové přihlášce WO93/21155.

Příklad 2

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, přičemž se však vychází ze 4,0 g dvojblokového kopolymeru tvořeného kombinaci kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou hmotností 30 kD a polysthylenglykolu s molekulovou hmotností 2 kD (PLA-PEG) a 1,0 g (3aS,4A,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl)-2-/2-(2methoxyfenyl)-{S)-propionyl//-4-perhydroisoindololu a získá se nanočásticova suspenze.

Tato suspenze se zfiltruje pod tlakem dusíku 0,05 MPa postupně přes 4 membrány na bázi esterů celulózy (Millipore^^-) mající průměr 45 nm a postupně klesající porositu: RAWP 1,2 mikrometru, AAWP 0,8 mikrometru, HAWP 0,45 mikrometru a GSWP 0,22 mikrometru.

Sterilizačně zfiltrovaná suspenze se lyofilizuje v přítomnosti 5¾ (hm./obj.) glukózy.

Střední průměr částic měřený difúzí světla v zařízení Brookhaven před lyofilizací a po vyjmutí získaného lyofilizátu stejným objemem vody pro injekce činí v obou případech asi 75 nm.

Procesní výtěžek, vyjádřený jako poměr koncentrace {3aS,4S,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl)-2-/2-(2-methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindololu po filtraci k výchozí teoretické koncentraci (2 mg/ml), činí 98 %.

Optická hustota získané suspenze při 405 nm před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru činí 2,7 resp.

Koncentrace (3aS,4S,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl)-2-/2-(2-methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindololu před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru zůstala nezměněna.

Příklad 3

160 mg kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou hmotností 70 000 D a 40 mg ( 3aS,-4S, 7aS)-7,7-difenyl-4-( 2-methoxyfenyl)-2-/2-(2-methoxyfenyl) - (S)-propionyl/-4-perhydroisoindo9 lolu se rozpustí ve 4 ml ethyiacetátu zahřátého na vodní lázni na teplotu 45 °C (roztok A). 100 mg cholátu sodného a 70 g lecitinu E80 se disperguje za míchání v zařízení Ultraturrax ve 20 ml vody pro injekce (roztok B).

Roztok A se potom předemulguje v roztoku B v průběhu jedné minuty v zařízení Ultraturrax. Získaná předběžná emulze se potom zavede do homogenizátoru typu Microfluidizer 110 S , kde se vystaví 3 minutovému kontinuálnímu recyklování _pÍjL^a.plikačn.íin—tlaku—0-,-6-MRa—a—p-i-i—tep-l-ot-ě—ehia-zen-í— G—;— ml získané emulze se zavede do baňky o obsahu 200 ml. Ethylacetát se odpaří v rotační odparce za vakua při teplotě 30 °C v průběhu 45 minut. Získá se 19'ml nanopartikulární suspenze, která se doplní- na objem 20' ml vodou pro injek ce.

Suspenze se potom postupně zfiltruje na dvou membránách na bázi esteru celulózy (Millipore ) mající průměr 25 mm a klesající porositu: HAWP 1,2 mikrometru a SLGS 0,22 mikro metru.

Sterilizačně zfiltrovaná suspenze se rozdělí na 2 Částí. První část se lyofilizuje v přítomnosti 5% (hm./obj.) glukózy, zatímco druhá část se lyofilizuje v přítomnosti 5% — -(hm./obj.) sacharózy.

Střední průměr částic, měřený rozptylem světla v zařízení Brookhaven před lyofilizací a po vyjmutí získaného

.....lyof il izátu- s te j ným objemem vody pro- injekce, -či-n-í-vobou^-př rpadech asi 60 nm.

Op t i cká _ hus tot a _ s uspěn ze^p.r i,_4_Q 5_n'm., před... a- po .-po--_.

slední filtraci na filtru 0,22 mikrometru činí 1,29resp.1,14 .

Koncentrace (3aS,4S,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyf enyl )-2-/2- ( 2-methoxyfenyl) - (S) -propionyl/-4-perhydroisoindololu před a po poslední filtraci na filtru 0,-22 mikrometru zůstala nezměněna.

Příklad 4

160 mg kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou hmot10 ností 70 000 D a 40 mg {3aS,4Ξ,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl )-2-/2-(2-methoxyfenyl)-{S)-propionyl/-4-perhydroisoindololo se rozpustí ve 4 ml ethylacetátu zahřátého na vodní lázni na teplotu 45 °C (roztok A). .50- mg cholátu sodného a 70 mg lecitinu Ξ80* se za míchání disperguje v zařízení Ultraturrax ve 20 ml vody pro injekce (roztok B).

Roztok A se předemuiguje v roztoku B v průběhu 1 minuty v zařízení Ultraturrax . Tato předběžná emulze se potom zavede do homogenizéru typu Microfluidizer 110 S , kde se podrobí 3 minutové kontinuální recyklaci při aplikačním tlaku 0,6 MPa a teolotě chlazení 0 °C.

ml získané emulze se potom zavede do baňky o obsahu 200 ml. Ethylacetát se odpaří za‘vaku v rotační odparce při teplotě 30 °C v průběhu 45 minut. Získá se 19 ml nanopartikulární suspenze, která se doplní na finální objem 20 ml vodou pro injekce.

Suspenze se potom zfiltruje postupně přes dvě membrány na bází esterů celulózy (Millipore ), mající průměr 25 mm a klesající porositu: HAWP 1,2-mikrometru a SLGS 0,22 mikrometru .

Sterilizačně zfiltrovaná suspenze se potom rozdělí na dvě Části. První část se lyofilizuje v přítomnosti 5% {hm./. obj.) glukózy, zatímco druhá část se lyofilizuje v přítomnosti 5% (hm./obj.) sacharózy.

Střední průměr částic, měřený rozptylem světla v zaTří zení Broókhavén 'přeď lyóf'i'liz'ací'a' p'O vyjmutí'získaného ' fv*· lyofilizátu stejným objemem vody pro injekce, činí v obou-případech asi 70 nm.

Optická-hustota suspenze při 405 nm před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru činí 1,88 resp. 1,80 .

Koncentrace ( 3aS, 4S, 7aSj'-7~, 7-difenyl-4-( 2-methoxyfenyl ) -2-/2-(2-methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindololu před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru zůstala nezměněna.

Příklad 5

400 mg dvojblokového kopolymerů tvořeného kombinací kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou hmotností 30 kD a polyethylenglykolu s molekulovou hmotností 2 kD (PLA-PEG) a 100 mg (3aS,4S,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl)-2-/2-( 2methoxyfenyl)-(S)-propionyl/-4-perhydroisoindololu se rozpustí v 10 ml ethylacetátu zahřátého na vodní lázni na teplotu °C (roztok A). 125 mg cholátu sodného a 175 mg lecitinu ESO R se disperguje za míchání v záříz.ení_r].l-t.ratu.r-ra.x—ve—5-0—m-1—vsd-y pro injekce (roztok B).

Roztok A se předemulguje v roztoku B po dobu jedné minuty v zařízení Ultraturrax . Tato předběžná emulze se-potom zavede do homogenizátoru typu. Microfluidizer 110 S , kde se podrobí 10 minutové kontinuální recyklaci při aplikačním tlaku 0,6 MPa a při teplotě chlazení 0 °C, ml získané emulze se zavede do baňky.o obsahu 200 ml. Ethylacetát se odpaří v rotační odparce za vakua při teplotě, 30 °C v průběhu asi 45 minut. Získá se 45 ml nanoparti kulární suspenze, jejíž objem se doplní na 50 ml vodou pro injekce.

t Získaná suspenze se postupně zfiltruje přes dvě ' membrány na bázi esterů celulózy (Millipore) mající průměr 25 mm a klesající porositu: HAWP 1,2 mikrometru a SLGS 0,22 mikrometru.

....... Sterilizačně. zfi.ltr.ovaná-..suspenze--se-1-yof-i-l-izu-je~--------v přítomnosti 5% (hm./obj.) glukózy.

. Střední průměr částic, měřený, rozptylem světlajy^-zařízení Brookhaven^R před lyofilizací a po vyjmutí získaného' lyofilizátu stejným objemem vody pro injekce, činí v obou případech asi 60 nm. ·Optická hustota suspenze při 405 nm před. a po .poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru činí 0,87resp.0,81 .

Koncentrace (3aS,4S,7aS)-7,7-difenyl-4-(2-methoxyfenyl )-2-/2-( 2-methoxyfenyl) — (S) -propionyl/-4-perhydroisoindololu před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru' zůstala nezměněna.

Příklad 6

300 mg (15 mg/ml teor.) dvojblokového kopolymeru tvořeného kombinací kyseliny poly-d,1-mléčné s molekulovou.' hmotností 30 kD a polyethylenglykolu s molekulovou hmotností 2kD (PLA-PEG) a 100 mg (5 mg/ml teor.) (2R,3S)-4alfa,10betadiacetoxy-2alfa-benzoyloxy-5beta,20-epoxy-1beta-hydroxy-7beta, 8beta-methylen-9-oxo-19-nor-11-taxen-13alfa-y1-3-terč.butoxykarbonylamino-2-hydroxy-3-fenylpropionátu se rozpustí v 8 ml ethylacetátu (ro2tok A). 70 mg lecitinu E80 a 50 mg cholátu sodného se disperguje ve 20 ml 5% (hm,/.obj._) roztoku glukózy (roztok B). Roztok A se potom emulguje v_roztoku B v zařízení Ultraturrax a takto získaná předběžná emulze se potom zaR vede do homogenizátoru typu Mikrof luidizer *11 0 Ξ , kde se zpracuje po do dobu 3 minut při teplotě 10 °C. Získá se asi “ ” .li ml emulze (30 g). Ethylacetát se odstraní pomocí rotační odparky za sníženého tlaku 13,3 kPa až k získání 17 ml suspenze (17 g). Suspenze se potom zfiltruje přes dva sériově zařazené filtry s klesající porositou (1,2 mikrometru - Miniart

R R

NML a 0,22 mikrometru - SLGS ). Připraví se dvě identické suspenze za stejných podmínek, které se sloučí v jediné baňce. Zfiltrovaná suspenze je sterilní.

Střední průměr částic měřený rozptylem světla v zařízení Brookhaven Činí asi 75 nm.

Optická hustota suspenze při 405 nm před a po poslední filtraci na filtru 0,22 mikrometru činí 7,2.

.....Procesní' výteŽěk, 'vyjádřený jako poměř 'koncentrace (2R, 3S) -4alfa, 1 0beta-diacetoxy-2alfa-be.n.zoyloxy-5beta, 20-epoxy 1beta-hydroxy-7beta,8beta-methylen-9-oxo-19-nor-11-taxen13alfa-yl-3-terc .butoxykarbonylamino-2;-hydroxy-3-fenylpropionátu po filtraci k výchozí teoretické koncentraci (5 mg/ml), činí 94 %. -Koncentrace dvojblokového kopolymeru PLA-PEG (vypočtená vzhledem k výtěžku (2R,3S)-4alfa,1Obeta-diacetoxy2alfa-benzoyloxy-5beta,20-epoxy-1beta-hydřoxy-7beta,8betamethylen-9-oxo-19-nor-11-taxen-13alfa-yl-3-terc.butoxykarbo13 nylamino-2-hydroxy-3-fenylpropionátu) činí 14,1 mg/ml.

(2R,3S)-4alfa,10beta-Diacetoxy-2alfa-benzoyloxy-

5beta,20-epoxy-1 beta-hydroxy-7beta,8beta-9-oxo-19-nor-11-taxen-1 3alf a-y.l.-3-terc. butoxykarbonylamino-2-hydroxy-3-f enylpropionát může být připraven způsobem popsaným v patentové přihlášce WO94/13654.

ING. EDUARD HAKR patentový zástupce

Claims

1. Stabilizované a sterilizačně filtrovatelné nanočástice, vyznačené tím, že obsahují alespoň jeden hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nebo kopolymer emulgovaný v roztoku fosfolipidů a žlučových solí. , _ .

2. Stabilizované a sterilizačně filtrovatelné'nanočástice podle nároku 1, vyznačené tím ,,Je společně s polymerem nebo.kopolymerem je zavedena účinná látka.

3. Stabilizované a sterilizačně filtrovatelné nanočástice podle nároku 1,vyznačené tím, že hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nel bo kopolymer je zvolen z.množiny zahrnující biokompatibilní a biodegradovatelné polymery.

4. Stabilizované a sterilizačně filtrovatelné nanočástice podle nároku Γ nebo 2,vyznačené tím, že jejich střední průměr je z 90 % nižší než 100 nm., .

5. Způsob přípravy nanočástic podle některého z nároků

1 až 4,vyznačený tím, že se připraví vodný roztok -nebo’ vodná di-sperze ίΌείοΙχρΐάύ’δ'-ζΙυδονγσίϊ’ΗοΐΊ,/άο'^εΓέίϊΌ resp. do které Se přidá nemísitelné organická fáze obsahující hydrofobní, ve vodě nerozpustný a ve vodě nedispergovatelný polymer nebo kopolymer a případně účinnou látku, načej.se provede předběžná emulgace a získaná směs se podrobí homogenizaci •an a odpaření organického rozpouštědla a získaná suspenze se případně zfiltruje a případně lyofilizuje.

6. Použití stabilizovaných nanočástic podle “některého z nároků 1 až 4 pro přípravu sterilních kompozic získaných po

- 15 sterilizační filtraci.

7. Stabilizované nanoČástice podle některého z nároků

1 až 4 sterilní kvality, vyznačené tím, že byly podrobeny sterilizační filtraci.

S. Stabilizované nanoČástice podle nároku-7-, -v y z n-ačené tím, že se sterilizační filtrace provede kaskádoy_i.tě na filtrech s klesající porositou._

9.

Stabilizované a steriiizačně filtrovatelne nanocasti ce podle některého z nároků 1 až 4, 7 nebo 8, vyznačené t í m , že jsou lyofilizované.

10. Stabilizované a steriiizačně filtrovatelné nanoČástice podle některého z nároků 1 až 4 nebo 7 až 9, vyznačené t í m , že byly podrobeny sterilizační filtraci, lyofilizaci a opětovnému převedení do roztoku.

11. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že je tvořena nanočásticemi podle některého z nároků 1 až 4 nebo 7 až 10, které jsou případně v kombinaci s jednou nebo několika kompatibilními a farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami nebo přísadami.