CZ302709B6 - Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru - Google Patents
Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302709B6 CZ302709B6 CZ20080040A CZ200840A CZ302709B6 CZ 302709 B6 CZ302709 B6 CZ 302709B6 CZ 20080040 A CZ20080040 A CZ 20080040A CZ 200840 A CZ200840 A CZ 200840A CZ 302709 B6 CZ302709 B6 CZ 302709B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- tumor
- treatment
- pser
- protein
- kinase
- Prior art date
Links
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 108091006082 receptor inhibitors Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 35
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims abstract description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 abstract description 11
- 102000003861 Ribosomal protein S6 Human genes 0.000 abstract description 4
- 108090000221 Ribosomal protein S6 Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 14
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 13
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 11
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 11
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 8
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 8
- 101150096038 PTH1R gene Proteins 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 5
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 5
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 5
- 208000017891 HER2 positive breast carcinoma Diseases 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 4
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101000972286 Homo sapiens Mucin-4 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022693 Mucin-4 Human genes 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000002599 biostatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007473 univariate analysis Methods 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 1
- 229940125497 HER2 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000002136 L01XE07 - Lapatinib Substances 0.000 description 1
- 208000009277 Neuroectodermal Tumors Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004993 emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229960004891 lapatinib Drugs 0.000 description 1
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000008806 mesenchymal cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- -1 phospho Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru stanovením biomarkeru pSer.sup.235/236.n. posttranslacne modifikované formy ribosomálního proteinu S6 v nádoru. Je-li pSer.sup.235/236.n. posttranslacne modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru prítomna, je nádor rezistentní k biologické lécbe inihibitory HER-2 receptoru jako je napr. trastuzumab. Naopak v prípade, že tato forma proteinu S6 není v nádoru prítomna, je nádor na lécbu inhibitory HER-2 receptoru senzitivní a pacient má celkove príznivou prognózu.
Description
Způsob zjištění senzitivity pacientů s nádorovým onemocněním na léčbu inhibitory HER-2 receptoru
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu zjištění senzitivity pacientů s nádorovým onemocněním na léčbu inhibitory HER 2 receptoru.
Dosavadní stav techniky
Rostoucí incidence a náklady na léčbu zhoubných nádorů jsou významným medicínským problémem s přímým a nežádoucím dopadem pro celou společnost. Typickým příkladem jsou zhoubné novotvary (ZN) prsu, které představují druhou nej častější malignitu u žen ve vyspělých zemích světa, Za posledních 25 let vzrostl počet nově hlášených ZN prsu v České republice téměř dvojnásobně. Z posledních kompletních údajů NOR o incidenci vyplývá, že v roce 2004 dosáhl absolutní počet nových případů 5628 nemocných, tj. incidence 107,4 na 100 000 žen a mortalita 40,06 na 100 000 žen (www.svod.cz), U přibližně 20 až 25 % pacientek vykazuje karcinom prsu nadměrnou expresi HER-2 receptoru (dále jen HER-2 pozitivní karcinomy), která vzniká na podkladě amplifikace jeho genu. Tyto karcinomy jsou charakteristické vysokým stupněm agresivity, a tedy i nepříznivou prognózou. Na straně druhé existuje účinná terapie, cíleně vyvinutá proti HER-2 receptoru. Jedná se o monoklonální protilátku trastuzumab, která je v současnosti indikována k adjuvantní i paliativní léčbě pacientek s HER-2 pozitivním karcinomem prsu. V kombinaci s chemoterapií přináší tato protilátka v případě adjuvantní léčby významné snížení rekurence choroby, a tedy zvýšení počtu vyléčených pacientek, nebo významné prodloužení života, je-li podávána pacientkám s diseminovaným onemocněním.
Přestože je trastuzumab podáván úzce vyselektované skupině pacientů s HER-2 pozitivním karcinomem, odpověď na tuto cílenou léčbu je variabilní, a to jak ve velikosti, tak i délce trvání. Obecně nastane v cca 40 % případů. Příčiny rezistence onemocnění k trastuzumabu nejsou dosud jednoznačně určeny. Může se jednat o poškození HER-2 receptoru, jenž pak není schopen vlastní kinázové aktivity nebo navázání monoklonální protilátky trastuzumabu. Alterovány mohou být rovněž jednotlivé signální dráhy HER-2 receptoru, nebo jejich regulátoři. Rostoucí počet probíhajících klinických studií dokumentuje vysokou účinnost inhibitorů směřovaných do rodiny HER v řadě klinických indikací, kde je klasická cytotoxická léčba nedostatečně účinná, nicméně ani z této cílené léčby nemají prospěch všichni pacienti a opět zhruba u nadpoloviční většiny pacientů není tato léčba účinná. S ohledem na vysokou homologii jednotlivých členů rodiny HER a podobnost jejich signálních drah lze předpokládat, že biomarkery účinnosti jsou podobné.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je způsob zjištění senzitivity pacienta s nádorovým onemocněním na léčbu inhibitory HER-2 receptoru prováděný na biologickém materiálu odebraném z těla pacienta, jehož podstata spočívá vtom, že se stanoví biomarker pSer235'236 posttranslačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru. Bylo zjištěno, že je-li pSer233236 posttranslačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru přítomna, je nádor rezistentní k biologické léčbě inhibitory HER-2 receptoru, a naopak, není-li pSer235 236 posttranslačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru přítomna, je nádor na léčbu inhibitory HER-2 receptoru senzitivní a pacient má celkově příznivou prognózu.
Léčbou HER-2 inhibitory se rozumí podání specifického nízkomolekulámího (obvykle syntetická organická molekula) nebo vysokomolekulámího inhibitoru (obvykle protein, nejčastěji protilátka) buněčné signalizace, např.:
a) nízkomolekulámích inhibitorů HER-2 receptoru, například lapatinib,
b) vysokomolekulámích inhibitorů 111.R 2 receptoru, například trastuzumah, panitumab.
Význakem způsobu podle vynálezu je, že biologickým materiálem je bioptický vzorek nádoru, vc ? kterém lze stanovit přítomnost vyšetřovaného biomarkeru.
Význakem způsobu podle vynálezu dále je, že nádorovým onemocněním je zhoubný či nezhoubný nádor lidského či zvířecího původu, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující nádory krvetvorby, nádory epiteliálního, mezenchymálního a neuroektodermálního původu, zejména zhoub10 ný novotvar prsu, kolorekta, plic, pankreatu, hlavy, krku, mozku, prostaty nebo kůže.
Stanovení lze provést s použitím metody detekce vybrané ze skupiny zahrnující obecně imunoanalytické postupy, imunohistochemické metody, imunocytochemické metody, imunofluorescenční techniky, enzymovou analýzu, radiometrickou analýzu, scintigrafickou analýzu, pozit15 ronovou emisní spektrometrii, chemiluminiscenční analýzu, tluorimetrickou analýzu, imunoprccipitační techniky a techniky založené na principu hmotnostní spektrometrie, s výhodou se provádí s použitím imunohistochemické metody detekce.
Naše výsledky ukazují, že posttranslačně modifikovaná forma ríbosomálního proteinu S6 je
2» nadějným prediktívním markérem odpovědi HER-2 pozitivního karcinomu prsu na cílenou léčbu trastuzumabem, případně i jiným inhibitorem HER-2 receptoru.
V souvislosti se všemi zde uvedenými údaji je zřejmé, že diagnóza a léčba ZN je významným medicínským problémem s přímým a nežádoucím dopadem pro celou společnost. Cílená proti25 nádorová terapie vykazuje na jedné straně výše uvedené přednosti, na straně druhé i významnou ekonomickou zátěž. Náklady na použití cílených protinádorových léčiv na bázi molekulárních protilátek běžně překračují částku jednoho milionu korun u jednoho pacienta. Použití detekce posttranslačně modifikované formy ríbosomálního proteinu S6 k predikci odpovědi na protinádorovou terapii cílenou proti HER-2 reeeptorům může vést k racionalizaci terapie, ušetření značit) ných finančních prostředků a ke snížení zbytečné zátěže pacientů, jejichž pravděpodobnost terapeutického benefitu z HER—2 inhibice je minimální. Navíc může být nemocným s nádorem pozitivním na posttranslačně modifikovanou formu ríbosomálního proteinu S6 poskytnuta jiná, efektivnější léčba.
Přehled obrázků na výkresech io
Obrázky znázorňují vždy projeden biomarker příklady fotografií preparátů imunohistochemického stanovení exprese jednotlivých biomarkeru ze světelného mikroskopu podle příkladu 1, vždy jedna fotografie nádoru prsu s expresí biomarkeru (pozitivní nádor) a jedna fotografie nádoru bez exprese biomarkeru (negativní nádor). Dále je na obrázcích znázorněn výsledek biostatického hodnocení významu exprese (celková nebo v buněčných kompartmentech: jádře, cytoplasmě, nebo v jejich kombinaci) daného biomarkeru v kontextu délky terapeutické účinnosti trastuzumabu hodnoceno dobou do progrese nemoci, PFS (kumulativní přežití na ose y a čas v měsících na ose x); a celkového přežití, OS (kumulativní přežití na ose y a čas v letech na ose x); MSI'- střední čas přežití (měsíce/roky); hladina statistické významnosti (p) hodnocená log-rank testem podle příkladu 2.
Obr. I: Biomarker: celková Akt (pan) kináza; protilátka: (1IE7) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 2: Biomarker: pSer47, Akt kináza; protilátka: (587F11) myší mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 3: Biomarker: pSer/Thr Akt kináza; protilátka: substrátová, králičí mAb (Cell Signaling, USA)
CZ 302709 Β6
Obr. 4: Biomarker: pThr308 Akt kináza; protilátka; (244F9H2) králičí mAb (Cell Signál ing, USA)
Obr. 5: Biomarker: celková ERK1/2 kináza; protilátka: p44/42MAP králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 6: Biomarker: pERKl/2 kináza; protilátka: p44/42MAPK (Thr202/Tyr204) (20G11) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 7: Biomarker: celková GSK3p kináza; protilátka: (27C10) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 8: Biomarker: pSer9 GSK3p kináza; protilátka: králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 9: Biomarker: celková mTOR kináza; protilátka: (700) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 10: Biomarker: pSer2448 mTOR kináza; protilátka: (49F9) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 11: Biomarker: celkový anti MUC4 protein; protilátka: (1G8) myší mAb (Zymed, USA)
Obr. 12: Biomarker: celkový PTEN protein; protilátka: (I38G6) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 13: Biomarker: celkový S6 ribosomální protein; protilátka: S6 Ribosomal Protein (5G10) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Obr. 14: Biomarker: pSer235/236 S6 ribosomální protein; protilátka: phospho - S6 Ribosomal Protein (91B2) králičí mAb (Cell Signaling, USA)
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Imunohistochemické stanovení exprese biomarkerů
K imunohistochemické detekci lze použít různě zpracovaný nakrájený bioptický materiál, nejČastěji tkáně zalité do parafinu. Imunohistochemická reakce představuje vizualizaci vazby tkáňového antigenu s primární protilátkou. Podle konkrétní použité metody je následovaná i specifickou reakcí sekundární, případně terciární protilátky nebo jiného signál-amplifikujícího systému. V závislosti na typu použitého, nejčastěji enzymového značení dochází k vizualizaci antigenu příslušným chromogenem v místě, kde došlo ke specifické vazbě. Samotná vazba antigenu s protilátkou pobíhá bez viditelné reakce. Abychom mohli preparát pozorovat běžnými metodami světelné či fluorescenční mikroskopie, je nutno k vizualizaci lokalizace antigenu a na něj navázaných molekul v preparátu použít tzv. chromogenů. Při imunofluorescenci se nejčastěji užívá FÍTC (fluorescein-isothiokyanát). Pri imunoenzymových reakcích jsou protilátky značené konjugací s enzymem, např. křenová peroxidáza či alkalická fosfatáza. Často se v imunohistochemii nebo imunofluorescenci používá pro lokalizaci pozitivních struktur v tkáňovém kontextu podbarvení preparátů, např. hematoxylinem nebo fluorescenčními barvivý typu Hoechst.
Po nakrájení tkáně na podložní sklíčka ajejich případné deparafinizaci standardními postupy je provedena blokace nespecifických vazebných míst blokačním roztokem (např. 3% odtučněné mléko v Tris-pufrovaném fyziologickém roztoku pH 7,2-7.4, TBS) nalitím cca 0,5 ml na sklíčko, inkubace obvykle 1 hodinu pri pokojové teplotě. Po odlití blokačního roztoku opláchneme sklíčka krátce 2x v TBS. Aplikujeme vhodně naředěnou primární protilátku obvykle v koncentraci l-lOgg/ml buď v blokačním roztoku, nebo v jiném vhodném vehikulu doporučeném výrobcem. Inkubujeme sklíčka ve vlhké komůrce obvykle 2 hodiny pri pokojové teplotě nebo
CZ 302709 Bó přes noc v lednici. Následně odmyjeme primární protilátky 2x rychlým oplachem v I BS a pak iiikublijeme 3x5 minut v TBS za mírného míchání na třepačce. Poté aplikujeme vhodně naředěnou sekundární protilátku značenou například peroxidázou, obvykle opět v blokačním roztoku. Pří pokojové teplotě inkubujeme ve vlhké komůrce 10 až 60 minut. Následně odmyjeme primární protilátky 2x rychlým oplachem v I BS a pak inkubujeme 3 x 5 minut v I BS za mírného míchání na třepačce. Finálně sklíčka přelijeme čerstvě připraveným substrátovým roztokem, například s obsahem diaminobenzidinu (II) mg/ml a 0,3% peroxidu vodíku) v případě použití detekčního systému založeném na peroxidáze, po dobu 10 až 20 minut. Reakci ukončíme slitím substrátového roztoku a promytím 2x v TBS. Preparáty podbarvíme roztokem hematoxylinu obvykle κι 1 minutu a vypláchneme v tekoucí vodě. Preparát odvodníme, zamontujeme a prohlížíme ve světelném mikroskopu. Hodnotíme semikvantitalivnč procento pozitivních buněk v cílové populaci, případně subcelulámí lokalizaci antígenu (např. cytoplazmatieká versus nukleární pozitivita). Výsledky hodnotíme jako: (.negativní, pokud je pozitivních méně než 5 až 10 procent buněk v cílové populaci, 2. slabě pozitivní, pokud jc pozitivních více než 10 a méně než 50 procent is buněk v cílové populaci, a 3. silně pozitivní, pokud je pozitivních více než 50 procent buněk v cílové populaci. Výsledky vyšetření jednotlivých sledovaných biomarkerů (celková Akt kináza, pSer4'7 Akt kináza, pSer/Thr Akt kináza, pThr308 Akt kináza, celková ERK1/2 kináza, pThr2o2/Tyr204 ERK1/2 kináza, celková GSK3p kináza. pSer9 GSK3P kináza, celková mTOR kináza, pSer2448 mTOR kináza, MUC4 protein, celkový PTEN protein, celkový S6 ribosomální protein, pSer2357236 S6 ribosomální protein) jsou znázorněny na obrázcích 1 až 14.
Příklad 2
Biostatické hodnocení významu jednotlivých biomarkerů
V letech 2004 až 2007 jsme řešili výzkumný projekt podpořený Interní grantovou agenturou MZ ČR (NR8335), jehož cílem bylo objasnit, které mechanismy způsobují rezistenci na trastuzumab. V rámci tohoto projektu jsme stanovili výskyt a aktivitu přibližně 20 různých proteinů .to v primárních HER-2 pozitivních karcinomech prsu u 140 žen, přičemž polovina těchto pacientek byla léčena cílenou biologickou léčbou, trastuzumabem. Z našich dosavadních výsledků jednoznačně vychází, že jeden ze sledovaných proteinů, a to ribosomální protein S6, je silným prediktorem rezistence onemocnění trastuzumabu. Navíc se jedná o biomarker s dostatečnou četností pozitivity (penetrací) v populaci HER-2 pozitivních nádorů a umožňuje tak s vysokou přesností před i kovat odpověď na HER-2 inhibiční terapii a to i v případě jeho použití jako jednogenového prediktoru.
Jako příklad pro validaci klinického významu jednotlivých markérů byla použita skupina pacientek s diagnózou pokročilého HER-2 pozitivního karcinomu prsu léčených trastuzumabem, to jejichž nádory byly vyšetřeny na sledované biomarkery (celková Akt kináza, pSer473 Akt kináza, pSer/Thr Akt kináza, pThr168 Akt kináza, celková ERK 1/2 kináza, pThr202/Tyr204 ERK 1/2 kináza, celková GSK3P kináza, pSer9 GSK3P kináza, celková mTOR kináza, pSer2448 mTOR kináza,
MUC4 protein, celkový PTEN protein, celkový S6 ribosomální protein, pSer2357236 S6 ribosomální protein). Jako klinické proměnné byly použity doba do progrese (PFS), a celkové přežití (OS) v měsíc ích/letech. Doba do progrese je stanovena jako čas od zahájení léčby do potvrzené progrese onemocnění nebo data posledního kontaktu s nemocným. Celkové přežití je doba od diagnózy do úmrtí nebo posledního kontaktu. Křivky přežití byly vytvořeny pomocí Kaplan-Meierovy metody (Kaplan, J Am Stát Assoc 1958). K identifikaci rizikových faktorů sdružených s dobou do progrese, a celkovým přežitím byla provedena univariační analýza. Rozdíl mezi křiv50 kaini přežití byl porovnán pomocí log rank testu (Peto, J R Stát Soc 1972). V univariační analýze byly vyhodnoceny následující faktory: pozitivita imunohistoehemického barvení, střední Čas přežití (MST) do progrese nemoci a celkové přežití pacientek (obojí v měsících). Výsledky statistického vyhodnocení významu jednotlivých sledovaných biomarkerů (celková Akt kináza, pSer47’ Akt kináza, pSer/Thr Akt kináza, pThr’08 Akt kináza, celková ERK1/2 kináza, pThrO2/Tyr204 ERK1/2 kináza, celková GSK3p kináza, pSer9 GSK3P kináza, celková mTOR
-4 CZ 302709 B6 kináza, pSer2448 mTOR kináza, MUC4 protein, celkový PTEN protein, celkový S6 ribosomální protein, pSer235/23ů S6 ribosomální protein) jsou znázorněny na obrázcích 1 až 14.
Průmyslová využitelnost
Způsobem podle vynálezu lze ze skupiny pacientů indikovaných k léčbě inhibitory signální dráhy HER—2 receptorů vytipovat pouze ty, kterým tato léčba s největší pravděpodobností přinese prospěch. Takto individualizovaná terapie přináší optimalizaci léčebných nákladů a nemocní nejsou zatížení neúčinnou léčbou, která pro ně představuje nežádoucí toxicitu a snížení kvality života.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob zjištění senzitivity pacienta s nádorovým onemocněním na léčbu inhibitory HER-2 receptorů prováděný na biologickém materiálu odebraném z těla pacienta, vyznačený tím, že se stanoví biomarker pSer2357236 posttranslačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru, přičemž jedi pSer2357236 posttrans lačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru přítomna, je nádor rezistentní k biologické léčbě inhibitory HER-2 receptorů, a není-li pSer2357236 posttranslačně modifikovaná forma ribosomálního proteinu S6 v nádoru přítomna, je nádor na léčbu inhibitory HER-2 receptorů senzitivní.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že biologickým materiálem je bíoptický vzorek nádoru.
- 3. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že nádorovým onemocněním je zhoubný či nezhoubný nádor lidského či zvířecího původu, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující nádory krvetvorby, nádory epiteliálního, mezenchymálního a neuroektodermálního původu.
- 4. Způsob podle nároku 3, vyznačený tím, že nádorové onemocnění je vybráno ze skupiny zahrnující zhoubný novotvar prsu, kolorekta, plic, pankreatu, hlavy, krku, mozku, prostaty a kůže.
- 5. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že léčbou inhibitory je podání specifického nízkomolekulámího nebo vysokomolekulámího inhibitoru HER-2 receptorů.
- 6. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se stanovení provádí s použitím imunohistochemické metody detekce.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20080040A CZ302709B6 (cs) | 2008-01-25 | 2008-01-25 | Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru |
| US12/863,517 US8465936B2 (en) | 2008-01-25 | 2009-01-23 | Method for determining the sensitivity of patients suffering from a cancer disease to biological therapy |
| EP10100001.6A EP2241890B1 (en) | 2008-01-25 | 2009-01-23 | Method for determining the sensitivity of patients suffering from a cancer disease to biological therapy |
| EP09704221A EP2235538A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-01-23 | Method for determining the sensitivity of patients suffering from a cancer disease to biological therapy |
| PCT/CZ2009/000006 WO2009092338A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-01-23 | Method for determining the sensitivity of patients suffering from a cancer disease to biological therapy |
| JP2010543368A JP5295268B2 (ja) | 2008-01-25 | 2009-01-23 | がん疾患に罹患している患者の生物学的療法に対する感受性を測定するための方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20080040A CZ302709B6 (cs) | 2008-01-25 | 2008-01-25 | Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ200840A3 CZ200840A3 (cs) | 2009-08-05 |
| CZ302709B6 true CZ302709B6 (cs) | 2011-09-14 |
Family
ID=40451258
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20080040A CZ302709B6 (cs) | 2008-01-25 | 2008-01-25 | Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8465936B2 (cs) |
| EP (2) | EP2235538A1 (cs) |
| JP (1) | JP5295268B2 (cs) |
| CZ (1) | CZ302709B6 (cs) |
| WO (1) | WO2009092338A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5871816B2 (ja) | 2009-12-22 | 2016-03-01 | エクスプレッション、パソロジー、インコーポレイテッドＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ． | インスリン受容体基質１（ｉｒｓ１）タンパク質ｓｒｍ／ｍｒｍアッセイ |
| CN114121150B (zh) * | 2020-08-27 | 2024-09-20 | 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 | 癌症药物敏感性预测方法、系统、存储介质及终端 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060127928A1 (en) * | 2004-12-10 | 2006-06-15 | Bacus Sarah S | Targeted therapy marker panels |
| WO2007109571A2 (en) * | 2006-03-17 | 2007-09-27 | Prometheus Laboratories, Inc. | Methods of predicting and monitoring tyrosine kinase inhibitor therapy |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2509543C (en) * | 2002-12-11 | 2017-06-06 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method for predicting the response to her2-directed therapy |
| WO2007090032A2 (en) * | 2006-01-27 | 2007-08-09 | Serenex, Inc. | Ribosomal protein s6 as a pharmacodynamic marker for hsp90 inhibition |
-
2008
- 2008-01-25 CZ CZ20080040A patent/CZ302709B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-01-23 WO PCT/CZ2009/000006 patent/WO2009092338A1/en not_active Ceased
- 2009-01-23 EP EP09704221A patent/EP2235538A1/en not_active Withdrawn
- 2009-01-23 US US12/863,517 patent/US8465936B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-01-23 EP EP10100001.6A patent/EP2241890B1/en not_active Not-in-force
- 2009-01-23 JP JP2010543368A patent/JP5295268B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060127928A1 (en) * | 2004-12-10 | 2006-06-15 | Bacus Sarah S | Targeted therapy marker panels |
| WO2007109571A2 (en) * | 2006-03-17 | 2007-09-27 | Prometheus Laboratories, Inc. | Methods of predicting and monitoring tyrosine kinase inhibitor therapy |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| Bacus a kol. (2005) Personalized Medicine, vol. 2, no. 4, 301-315 * |
| Bõrlund a kol. (2000) Journal of the National Cancer Institute, vol. 92, no. 15, 1252-1259 * |
| Konecny a kol. (2006) Cancer Research, vol. 66, no. 3, 1630-1639 * |
| Lu a kol. (2001) Journal of the National Cancer Institute, vol. 93, no. 24, 1852-1857 * |
| Nahta a kol. (2005) Cancer Research, vol. 65, no. 23, 11118-11128 * |
| Nahta a kol. (2007) Molecular Cancer Therapeutics, vol. 6, no. 2, 667-674 * |
| Smith a kol. (2004) British Journal of Cancer, vol. 91, 1190-1194 * |
| Van der Hage a kol. (2004) British Journal of Cancer, vol. 90, no. 8, 1543-1550 * |
| Vazquez-Martin a kol. (2006) European Journal of Cancer, vol. 4, no. 12, str. 168, poster 554 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20110014637A1 (en) | 2011-01-20 |
| EP2235538A1 (en) | 2010-10-06 |
| WO2009092338A1 (en) | 2009-07-30 |
| EP2241890A2 (en) | 2010-10-20 |
| CZ200840A3 (cs) | 2009-08-05 |
| US8465936B2 (en) | 2013-06-18 |
| JP2011510306A (ja) | 2011-03-31 |
| JP5295268B2 (ja) | 2013-09-18 |
| EP2241890B1 (en) | 2014-04-09 |
| EP2241890A3 (en) | 2010-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Haugen et al. | Towards improving the utility of fine-needle aspiration biopsy for the diagnosis of thyroid tumours. | |
| Khan et al. | Early diagnostic value of survivin and its alternative splice variants in breast cancer | |
| US11656230B2 (en) | Method for predicting cancer sensitivity | |
| US20250290153A1 (en) | Methods of diagnosing, determining the progression of, and treating a prostate cancer | |
| KR101976219B1 (ko) | 유방암의 바이오마커 | |
| Li et al. | Expression of NDRG2 in human lung cancer and its correlation with prognosis | |
| JP2011501741A (ja) | がんの診断および治療のためのｔａｚ／ｗｗｔｒ１ | |
| JP5767116B2 (ja) | 白金に基づく治療に対する応答の予測 | |
| KR20200111730A (ko) | 암의 약물 반응성을 예측하기 위한 방법 | |
| Cao et al. | Relationship of 14-3-3zeta (ζ), HIF-1α, and VEGF expression in human brain gliomas | |
| Giles et al. | Ovarian tumor expression of an oviductal protein in the hen: a model for human serous ovarian adenocarcinoma | |
| Chen et al. | Autophagy induction causes a synthetic lethal sensitization to ribonucleotide reductase inhibition in breast cancer cells | |
| JP6348115B2 (ja) | がん療法のためのエンドサイトーシス阻害剤および抗体の使用 | |
| CZ302709B6 (cs) | Zpusob zjištení senzitivity pacientu s nádorovým onemocnením na lécbu inhibitory HER-2 receptoru | |
| US8158373B2 (en) | Method of detecting cancer and evaluating cancer prognosis | |
| WO2011129427A1 (ja) | 癌の診断剤および治療剤 | |
| US20100081192A1 (en) | Early prostate cancer antigens (epca), polynucleotide sequences encoding them, and their use | |
| JP5798916B2 (ja) | Ｈｍｇｃｒタンパク質に関係する処置予測 | |
| US20250327822A1 (en) | Companion diagnostic assay for globo-h related cancer therapy | |
| JP4256169B2 (ja) | Ｔｕｃａｎを用いて癌患者の予後を決定するための方法 | |
| WO2003062828A2 (en) | Determining chemotherapeutic effectiveness | |
| US20170122949A1 (en) | Diagnosis and treatment of ciliated hepatic foregut cysts | |
| Akhmedkhanov et al. | BIOLOGY–PROGNOSTIC FACTORS | |
| Coker | The expression of p53 and related proteins in human breast tumours and malignant melanomas | |
| CN110488015A (zh) | 趋化因子cxcl14在预测结肠癌预后中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20190125 |