CZ302102B6 - Zpusob zvýšení výtežku jednotek proteinu v proteinovém roztoku podrobeném deaktivaci viru pomocí pridání rozpouštedla-detergentu - Google Patents
Zpusob zvýšení výtežku jednotek proteinu v proteinovém roztoku podrobeném deaktivaci viru pomocí pridání rozpouštedla-detergentu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302102B6 CZ302102B6 CZ20070842A CZ2007842A CZ302102B6 CZ 302102 B6 CZ302102 B6 CZ 302102B6 CZ 20070842 A CZ20070842 A CZ 20070842A CZ 2007842 A CZ2007842 A CZ 2007842A CZ 302102 B6 CZ302102 B6 CZ 302102B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- solution
- protein
- detergent
- solvent
- yield
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003599 detergent Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 title claims description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 17
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 14
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 13
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 abstract description 13
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 abstract 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 229940050929 polyethylene glycol 3350 Drugs 0.000 description 12
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 11
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 6
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 6
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 5
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 5
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 5
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 4
- 102000016799 Leukocyte elastase Human genes 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 2
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 2
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 102000018616 Apolipoproteins B Human genes 0.000 description 1
- 108010027006 Apolipoproteins B Proteins 0.000 description 1
- 108010032608 Cohn fraction IV Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 101710190786 PI protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N trimethylxanthine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
- C07K14/8125—Alpha-1-antitrypsin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/811—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an inorganic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Zpusob zvýšení výtežku jednotek .alfa.-1-PI (inhibitor alfa - 1 proteinázy) v roztoku .alfa.-1-PI podrobeném deaktivaci viru pomocí pridání rozpouštedla-detergentu, jenž zahrnuje pridání sacharidu v množství, od 10 % do 20 % hmotn. k uvedenému roztoku. Výhodne se jako sacharid použije sacharóza.
Description
Oblast techniky
Tento vynález se týká způsobu zvýšení výtěžku jednotek proteinu v proteinovém roztoku, který byl podroben deaktivaci virů pomocí rozpouštědla-detergentu.
io
Dosavadní stav techniky
Inhibitor α-1-proteinasy (zde též α-1-ΡΙ), známý rovněž, jako α-antitrypsin, je sérový glykoprotein o molekulové hmotnosti 52 000. Tato látka je syntetizována v játrech aje obsažena v séru v množstvích mezi 150 až 350 mg/dl (což je ekvivalentem 30 až 80 μΜ) stanoveno pomocí testování plazmovými standardy.
α—1—Pl působí v plicích za účelem inhibice neutrofilní elastasy, serinproteasy, jejíž přítomnost ve velkých množstvích může vést k destrukci alveolámích stěn. V normálních plicích zajišťuje a-120 Pl více než 90 % anti-neutrofilní ochrany elastasy v nižším dýchacím traktu.
Nedostatek α-1-ΡΙ je autosomální, recesivní dědičná porucha, která se projevuje celou řadou allelických variant a která je charakteristická allelickým uspořádáním označovaným jako proteasový inhibiČní systém (Pi). Tyto allely jsou seskupeny na bázi hladin α-1-ΡΙ, které jsou dosaho25 vány v séru různých jedinci. Normální jedinci mají normální sérovou hladinu α-1-ΡΙ (normální jedinci se označují jako jedinci s PiMM fenotypem). Deficientní jednotlivci mají sérovou hladinu α-1-ΡΙ nižší než odpovídá 35 % průměrné normální hladiny (tito jedinci se označují jako jedinci s PiZZ fenotypem). Nuloví jedinci mají nedetekovatelný obsah a l PI proteinu v séru (tito jedinci se označují jako jedinci s Pi(nula)(nula fenotypem].
Nedostatek α—1-PI je charakterizován nízkými hladinami α-1-ΡΙ v séru (méně než 35 % průměrné normální hladiny) a v plicích. Tito deficientní jedinci jsou vystaveni vysokému riziku vývoje panacinámího emfyzému. Tento emfyzém převládá u jedinců s fenotypy PiZZ, PiZ(nula) a PiZ(nula) (nula). Symptomy tohoto stavu se obvykle projeví u postižených jedinců v třetí nebo čtvrté dekádě jejich života.
Emfyzém spojený s nedostatkem α-1-ΡΙ se rozvíjí v důsledku koncentrací α-1-ΡΙ v nižších částech dýchacího traktu, které jsou nedostatečné pro inhibici neutrofilní elastasy, což vede k destrukci pletiva pojivové tkáně plicního parenchymu. Jedinci s nedostatkem α-1-ΡΙ jsou málo chráněni proti neutrofilní elastase, uvolňované neutrofily v nižší části dýchacího traktu. Tato nerovnováha proteasa: inhibitor proteasy u jedinců s nedostatkem α-1-ΡΙ se projeví chronickým poškozováním a posléze i destrukcí plicního parenchymu a alveolámích stěn.
Jedinci s vážným nedostatkem α-1-ΡΙ se vyznačují typicky endogenními sérovými hladinami a45 1—PI pod 50 mg/dl, dle stanovení standardizovanými postupy. U jedinců s tak nízkými sérovými hladinami α-1-ΡΙ existuje více než 80% riziko, že se u nich během života vyvine emfyzém. Odhaduje se, že alespoň u 40 000 pacientů v USA, neboli u 2 % ze všech pacientů trpících emfyzémem, je toto onemocnění výsledkem poškození genu kódujícího α-1-ΡΙ. Nedostatek α-1-ΡΙ představuje jednu z nejběžnějších dědičných smrtelných poruch u bělochů žijících ve Spojených so státech a v Evropě.
Léčení pacientů s nedostatkem a-1-PI je zaměřeno na náhradu nebo zvýšení hladiny α-1-ΡΙ v séru. Očekává se, že zvýsí-li se hladina α-1-ΡΙ v séru, zvýší se v důsledku jeho koncentrace v plicích, čímž se upraví nerovnováha neutrofilní elastasa:a l -PI v plicích a zabrání se destrukci
-1 CZ 302102 B6 plicní tkáně, nebo se tento pochod zpomalí. Studie normální a α-1-ΡΙ defícientní populace vedly k vyslovení názoru, žc minimální ochranná hladina α-1-ΡΙ v séru odpovídá 80 mg/dl nebo μΜ (přibližně 57 mg/dl; při použití čistých standardů). V důsledku toho je většina terapií al-Pl-deficientních pacientů zaměřena na zajištění minimální ochranné hladiny α-1-ΡΙ v séru, protože sérový α-1-ΡΙ je zdrojem alveolámího α-l—Pl.
Přípravky s obsahem α-1-ΡΙ pro terapeutické použití jsou dostupné od let 80. let 20. století. Hlavní využití nacházejí při terapii spočívající ve zvýšení (náhradě) vrozeného nedostatku a-lPI. Poločas lidského α-1-ΡΙ in vivo odpovídá 4,38 dne se standardní odchylkou 1,27 dne. V souio časnosti doporučovaná dávka 60 mg α-1-Pl/kg tělesné hmotnosti týdně upraví nízkou hladinu a-1-Pí v séru na hladinu překračující minimální ochrannou hladinu 1 ΙμΜ nebo 80 mg/dl.
Dříve byl α-1-ΡΙ čištěn různými způsoby. Jeden z těchto způsobů kombinuje chromatografií na aniontové—výměnném chromatografickém médiu s následným srážením pomocí PEG. Jiné způsoby čistění využívají srážení pomocí PEG s následnou aniontově-výměnnou chromatografií, nebo několikanásobné srážení pomocí PEG a následnou aniontově-výměnnou chromatografií. Dále byly použity kombinace srážení pomocí PEG, jednoho či více stupňů aniontově-výměnné chromatografie a stupně chromatografie na bázi chelátů kovů.
Další způsoby využívají pro čištění α-1-ΡΙ techniku dělení fází. Pro přečištěný α-1-ΡΙ se uvádí specifické aktivity 1,26 jedn./mg.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je způsob zvýšení výtěžku jednotek α-1-ΡΙ v roztoku α-1-ΡΙ podrobeném deaktivaci viru pomocí přidání rozpouštědla-detergentu, který zahrnuje přidání sacharidu v množství od 10 % do 20 % hmotn. k uvedenému proteinovému roztoku.
jo Ve výhodném provedení vynálezu se jako sacharid k roztoku α-1-ΡΙ přidává sacharóza.
Předmětný vynález je výsledkem zjištění, že přítomnost sacharidu, například sacharózy, jakožto stabilizátoru během deaktivace viru pomocí přídavku rozpouštědla-detergentu zvyšuje výtěžek α-1-ΡΙ, přičemž vlastní deaktivace viru pomocí přídavku rozpouštědla se provádí např. v rámci níže popsaného způsobu čištění α-1-ΡΙ.
Uvedený způsob zahrnuje opatření znečištěné proteinové frakce, s výhodou pastové Cohnovy frakce lVt + IV4, jež obsahuje α—1—Pl. Tato znečištěná proteinová frakce se suspenduje ve studené vodě nebo v solném roztoku při pH přibližně 6, aby došlo k rozpuštění rozpustných pro40 teinů, včetně albuminu, α-2-globulinu (α-2-makroglobulinu a hatoglobulin) a β-globulinu (transferrinu). Suspenze se poté filtruje, čímž se získají nerozpustné proteiny včetně α-1-ΡΙ, které se promyjí vodou (nebo solným roztokem). Frakce promytých nerozpustných proteinů se znovu suspenduje ve vodě (nebo v solném roztoku), hodnota pH se upraví na přibližné 8,5 a přidáním PEG se vysráží α-2-globulin. Supematant se odlije a přidáním chloridu zinečnatého se vysráží surový α-1-ΡΙ. Tato surová látka se znovu rozpustí vNaEDTA pufru a viry se deaktivují přidáním činidla Tween 80 a tri-n-butylfosfátu (TNBP). S výhodou se přidá některý ze sacharidů, jakoje sacharóza, maltosa, glukosa apod., aby se stabilizoval α-1-ΡΙ v průběhu uvedené deaktivace vírů a zvýšil se tak jeho výtěžek.
Takto zpracovaný roztok se nanese na aniontově-výměnné médium za účelem oddělení ot-l-PI od dalších zbývajících proteinů. Frakce obsahující α-1-ΡΙ se oddělí a výhodně se k nim přidá bentonit, aby se tak odstranily jakékoli apolipoproteiny, které jsou v této frakci přítomné. Vzniklý přečištěný roztok cx-1 —Pl se izoluje a zahustí.
-2CZ 302102 B6
Tímto způsobem přečištěný α-1-ΡΙ má specifickou aktivitu větší než 1,0 jedn./OD^so· Tímto postupem lze dosáhnout výtěžku více než přibližně l,0jedn./g pasty, s výhodou pak více než přibližně 1,3 jedn./g pasty.
Použitím tohoto způsobu, který využívá předmětný vynález, se zlepší kvalita i výtěžek α-1-ΡΙ. Dále se tímto způsobem zkrátí doba čistění ve srovnání s jinými způsoby.
Zmíněný způsob zahrnuje jedinečnou kombinaci stupňů čistění, kterou se dosáhne vysokého výtěžku a vysoké specifické aktivity α-1-ΡΙ.
Čistění α-1-ΡΙ vychází ze znečištěné proteinové frakce. Touto znečištěnou proteinovou frakcí může být plazma, dále α-1-ΡΙ získaný rekombinantními metodami nebo jakýkoli jiný zdroj obsahující α-1-ΡΙ protein. Ve výhodném provedení je znečištěnou proteinovou frakcí pastová Cohnova frakce IV! + IV4, jejíž příprava je v daném oboru velmi dobře známa.
Výchozí zpracování pastové frakce IVi + IV4.
Pastová frakce IV! + IV4 (nebo jiná znečištěná proteinová frakce) se suspenduje v 5 ± 2 dílech vody nebo solného roztoku tj. od přibližně 0,05 do přibližně 0,15 M chloridu sodného na 1 díl frakce, tedy IV] + 1V4) při teplotě nižší než přibližně 15 °C a pH přibližně 6,0 ± 0,2, a to alespoň přibližně jednu hodinu. Rozpustné proteiny, včetně albuminu, α-2-globulinu a β-globulinu, se poté oddělí od nerozpustných proteinů, včetně inhibitoru α-1-proteinasy, a to pomocí filtračního lisu, odstředění apod. Zbytek se promyje pri teplotě nižší než 15 °C vodou nebo solným roztokem při pH 6 ± 0,2, čímž se odstraní jakýkoli další rozpustný protein zachycený fyzicky v nerozpustné pastě, přičemž objem vody nebo solného roztoku použitého k promývání činí přibližně pětinásobek původního objemu pasty.
Bylo zjištěno, že suspendováním pastové frakce IV i + IV4 ve vodě nebo solném roztoku při pH 6,0 ± 0,2 s následným promýváním se odstraní téměř veškerý albumin a vysráží se většina a-2a β-proteinů z frakcí IV! + IV4.
Srážení s použitím PEG
Nerozpustný proteinový zbytek se znovu suspenduje v přibližně 5 ± 2 objemech vody na objem zbytku, při pH 8,5 ± 0,5, a to při teplotě přibližně 15 °C ± 5 °C, výhodně po dobu přibližně 6 hodin, ačkoliv se mohou využít kratší či delší časy. Kratší doby nejsou výhodné, protože výtěžek se s prodlužující se dobou suspendace zvyšuje. Jako optimální kombinace doby suspendace a výtěžku se v současnosti jeví doba 6 hodin. Poté se přidá pevný Tris do konečné koncentrace 10 ± 5μΜ, pevný chlorid sodný do konečné koncentrace 150 ± 20mM a hodnota pH se upraví na 8,0. Následně se přidá polyethylenglykol 3350 (PEG) do konečné koncentrace 15 ± 5 % hmotn. a reakční směs se míchá přibližně hodinu při teplotě 15 ± 5 °C. PEG se přidává za účelem vysrážení α-2-globulinu.
Sraženina, jež se vyloučí po přidání PEG, se odstraní pomocí filtračního lisu. Filtrační lis se promyje před filtrací i po filtraci roztokem obsahujícím 150 ± 25 mM chloridu sodného a 5 % hmotn, PEG, při pH 8,0 ± 0,5. Alternativně lze sraženinu odstranit odstředěním.
Srážení chloridem zinečnatým
K PEG supematantu se přidá chlorid zineěnatý (100± lOmM) až do konečné koncentrace 6 ± 5m a pH roztoku se upraví na 7,5 ± 0,5. Roztok se ochladí na teplotu 5 ± 5 °C a míchá se nejméně hodinu. Chlorid zineěnatý vysráží surový α-1-ΡΙ. Surový α-1- ΡΙ se oddělí filtrací,
-3CZ 302102 B6 s výhodou použitím filtrace Prostak \ jak je popsána například v publikaci „Prostak OpenChannel Modules“, Millipore Corporation, jejíž obsah je zde zahrnut formou odkazu, nebo odstředěním a filtrát se odstraní. Koncentrovanou suspenzi nebo sraženinu lze pro další upotřebení zmrazit.
Deaktivace virů zpracováním bez použití rozpouštědla
Surový α-1-ΡΙ se znovu rozpustí v přibližně 50mM roztoku NaEDTA s použitím filtrace Prostak a recirkulace. Přidá se sacharid, s výhodou sacharóza, a to v množství přibližně 15 ± 5 % hmotn. io (nebo přibližně 0,25 ± 0,05 citranu sodného), které slouží jako stabilizátor během deaktivace viru. Roztok se míchá při teplotě 15 ± 5 °C, dokud se sacharóza nerozpustí.
Roztok obsahující a-l~Pl se z hlediska viru deaktivuje přidáním rozpouštěj ladetergen tu.
K roztoku α-1-ΡΙ se přidá roztok 10 ± 1% hmotn./obj. polysorbátu 80 a 3 ± 0,3 % hmotn. tri—n— 15 butyl fosfátu, a to až do konečné koncentrace 1,0 ±0,5 % hmotn./obj. polysorbátu-80 a 0,3 ±
0,15 % hmotn. tri-n-butylfosfátu. Poté se roztok inhibuje při teplotě 27 °C ± 3 °C, pH 8 ± 0,5 po dobu nejméně 6 hodin, čímž se deaktivují jakékoli viry, které mohou být přítomné v α-1-ΡΙ.
Bylo zjištěno, že přítomnost sacharidu, například sacharózy, jakožto stabilizátoru během deakti20 vace viru pomocí přídavku rozpouštědla-detergentu zvyšuje výtěžek al-PI v jednotkách ve srovnání s kontrolním pokusem, tj. s deaktivací viru v roztoku α-1-ΡΙ přídavkem rozpouštědladetergentu bez použití sacharidu jakožto stabilizátoru. Zvýšení výtěžku činí s výhodou nejméně %, s výhodou nejméně 20 % a nejvýhodněji nejméně 30 %.
Po inkubaci se ošetřený roztok α-1-ΡΙ ochladí na 0 °C až -10 °C, pH se potom upraví na 8,0 ±
0,1.
Aniontově-výměnná chromatografie io Upravený roztok se zředí přibližně jedním objemem vody na objem upraveného roztoku. Zředěný roztok se dále nanese na předem ekvilibrované chromatograflcké médium QAE nebo na jiné podobné médium pro výměnu aniontů, jež váže α-1-ΡΙ, což umožňuje oddělení této látky od jiných proteinů. Lze použít buď vsázkovou chromatografii nebo sloupcovou chromatografii. Jakmile se α-1-ΡΙ absorbuje na médium, promyje se toto pufrem obsahujícím 20 ± 10 mM chloridu sodného a 20 ± 10 mM dihydrogenfosforečnanu sodného (NaHiPCM při pH 8 ± 1, čímž se odstraní nenavázané podíly, včetně β-proteinů. Poté se z chromatografíckého média pro výměnu aniontů vymyje α-1-ΡΙ, a to elucí promývací kapalinou, která obsahuje 100 ± 50 mM chloridu sodného a 20 ± 10 mM fosforečnanu sodného, při pH 8 ± 1. Eluát obsahující α-1-ΡΙ se jímá pro další zpracovávání.
Po odstranění ct—I —Pl se médium pro výměnu aniontů vyčistí postupným promytím následujícími složkami: vodným roztokem obsahujícím 2 ± 0,2 mM chloridu sodného a 20 ± 10 mM fosforečnanu sodného, pH 8± 1 ; vodou pro injekce (WFI); vodným roztokem obsahujícím 500 mM hydroxidu sodného; a potom znovu WFI. Chromatograflcké médium se potom uchovává v rozto45 ku obsahujícím 2 ± 0,2 M roztoku chloridu sodného, 20 ± 10 mM roztoku fosforečnanu sodného, pH8± 1.
Zpracování eluátu s obsahem α-1-ΡΙ so Eluát obsahující α-1-ΡΙ se spojí a přidá se k němu 0,1 až 1,0 % (hmotn./hmotn.) bentonitu, a to na přibližně 1 hodinu, čímž se sníží množství apolipoproteinů na méně než přibližně 0,01 mg/ml apolipoproteinu A a na méně než přibližně 0,1 mg/ml apolipoproteinů B. Bentonit se odfiltruje,
-4CZ 302102 B6 s výhodou použitím filtrace Cuno®, například tak, jak je popsáno v publikaci „Zeta Plus C Series Filter Medium“, Cuno lne., jejíž obsah je formou odkazu zahrnut v tomto testu. Získaný roztok se zahušťuje pomocí ultrafiltrační membrány dokud aktivita α-1-ΡΪ není alespoň 10 jedn./ml. Koncentrovaný produkt se dále filtruje přes filtr s póry o velikosti 0,45 pm, čímž se odstraní jaký kol i s částicový materiál. α-1-ΡΙ se filtruje technologie „Plánová“, čímž se odstraní virus, sterilně se filtruje přes filtr s póry o velikosti 0,22 pm, filtrát se rozdělí do lékovek a pro uskladnění se lyofílizuje. α-1-Ρϊ se skladuje při teplotě 2 ± 8 °C.
Lyofilizovaný α-1-ΡΙ se může znovu rozpustit ve sterilní vodě za účelem podání pacientovi.
Testy aktivity α-1-ΡΙ
Chromogenní test se může využít k detekci α-1-ΡΪ aktivity rekonstituovaného α-1-ΡΙ. Test využívá trypsin-sensitivní chromogenní substrát, ze kterého se v přítomnosti trypsinu uvolňuje p-nitroanilin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri). Uvolněný p-nitroanilin se detekuje pri vlnové délce 405 nm, α-1-ΡΙ inhibuje uvolňování p-nitroanilinu ze substrátu. Aktivita α-1-ΡΙ v produktu se stanoví porovnáním s kalibrační křivkou aktivity α-1-ΡΙ. Při chromogenním testu rekonstituovaného lyofilizovaného α-1-ΡΙ, připraveného výše popsaným způsobem, je vykazována specifická aktivita alespoň přibližně 1,0 jedn./OD280·
Podávání
Pacientovi lze podávat α-1-ΡΙ infuzemi rychlostí přibližně 0,08 ml/kg tělesné hmotnosti za minutu po dobu prvních 10 minut. Pokud si pacient na nic nestěžuje, lze rychlost podávání zvýšit na tolerovanou míru. Pokud je toto podávání tolerováno, lze následné infúze témuž pacientovi podávat zvýšenou rychlostí. Dojde-li k opaku, sníží se rychlost podávání nebo se infúze přeruší do vymizení symptomů. Poté lze infuzi obnovit, a to rychlostí, ježje pacientem tolerována. Majíli se podávat vysoké dávky, pak lze několik ampulí α-1-ΡΙ spojit s použitím aseptické techniky do prázdného, sterilního i.v. infuzního zásobníku.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
600 g pastové frakce IVj + IV4 zCohnova frakcionačního schématu se suspenduje při teplotě 5 °C a pH 6,0 v 1800 ml vody, bez jakékoli titrace po dobu jedné hodiny. Po skončení suspendace se suspenze filtruje pri tlaku 10CP přes filtr (Cuno). Filtrát se izoluje, testuje a změří se specifická aktivita (S. A.) α-1-ΡΙ (A1PI) a optická hustota při 280 nm (OD28onm)· Pasta zbylá ve filtračním lisu se promyje 600 ml vody o teplotě 5 °C, filtrát se jímá a tento postup se opakuje čtyřikrát. Všechny filtráty se spojí, testují a měří se specifická aktivita (S. A.) a optická hustota (OD280mn). Hmotnost výsledné pasty: 350 g. Specifická aktivita a optická hustota vzorků získaných tímto postupem je popsána v následující tabulce I.
-5CZ 302102 B6
Tabulka I
Aktivita AlPI a O.D. 280 nm frakcí vymytých vodou
| Vzorek | Objem (ml) | AlPI (jedn./ml) | Celkový AlPI (jedn.) | O.D. 280 nm | S.A. (jedn./OD) |
| Promytí 0 | 1450 | 0,06 | 87 | 22,2 | 0,003 |
| Promytí 1 | 600 | 0,1 | 60 | 29,9 | 0,003 |
| Promytí 2 | 600 | 0,08 | 48 | 25,5 | 0,003 |
| Promytí 3 | 600 | 0,04 | 24 | 13,0 | 0,003 |
| Promytí 4 | 600 | 0 | 0 | 4,8 | 0 |
| Promytí 5 | 600 | 0 | 0 | 3,0 | 0 |
Příklad 2
350 g výsledné pasty z příkladu 1 se resuspenduje v 1050 ml vody pri pH 8,5 a teplotě 18°Cpo dobu 6 hodin. Přidá se pevný Tris do koncové koncentrace lOmM a pevný chlorid sodný do koncové koncentrace 150mM, pH se upraví na hodnotu 8,0. Dále se přidá polyethylenglykol (PEG 3350) do koncové koncentrace 15 % (hmotn.) a výsledná směs se míchá jednu hodinu při 18 °C. Vzniklá sraženina se odstraní pomocí filtračního lisu s 10 CP filtrem, čímž se získá supernatant. Pasta ve filtračním lisu se následně promývá roztokem s obsahem 15 % (hmotn.) polyethylenglykolu PEG-3350, 10 mM Tris a 150 mM chloridu sodného. Filtrát a filtrát z následného promývání se spojí. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.
Tabulka 2
PEG-3350 srážení
| Vzorek | Objem (ml) | AlPI (jedn./el, | Celkový AlPI (jedn.) | O.D. 280 nm | S.A. (jedn. /OD) |
| Resusp. | 1400 | 1,063 | 1488 | 13,32 | 0,0798 |
| PEG- filtrát | 2465 | 0,513 | 1265 | 2,16 | 0,2375 |
-6CZ 302102 B6
Příklad 3
K získanému filtrátu PEG-3350 z příkladu 2 se přidává chlorid zinečnatý do koncové koncentra5 ce 2mM, hodnota pH se upraví na 7,5 a teplota se sníží na 5 °C, čímž dojde k vysrážení surového
A1P1. Po jedné hodině míchání se surový AlPI odfiltruje pomocí filtrace Prostak a získaná suspenze se znovu rozpustí v roztoku NaEDTA. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.
io Tabulka 3
Srážení chloridem zinečnatým
| Vzorek | Objem (al) | AlPI (jedn./ml) | Celkový AlPI (jedn.) | O.D. 280 | S.A. (jedn./OD) |
| Prostak filtrát | 2200 | 0,0159 | 35 | 0,15 | 0,106 |
| NaEDTA resusp. | 264 | 4,305 | 1065 | 13,72 | 0,3138 |
Příklad 4
Sacharóza v množství 16,7% (hmotn.) se přidá k rekonstituovanému NaEDTA roztoku z příkladu 3 a výsledná směs se míchá při teplotě 18°C až do úplného rozpuštění sacharózy. K tomuto roztoku se přidá polysorbát-80 do konečné koncentrace 1,0% a trin-butyl fosfát do konečné koncentrace 0,3 %. Roztok se dále inkubuje při teplotě 27,5 °C po dobu alespoň 6 hodin, aby došlo k deaktivaci možného kontaminujícího lipidem obaleného viru. Po skončení inkubace se roztok ochladí na 5 °C a hodnota pH se upraví na 8,0. Pro kontrolu se výše uvedený postup opakuje bez přidání sacharózy. Stabilita AlPI během působení rozpouštědla-detergentu (SD) v přítomnosti 16,7% sacharózy a bez sacharózy (kontrolní pokus) je vyjádřena v následující tabulce 4.
Tabulka 4
Stabilita AlPI během úpravy pomocí rozpouštědla-detergentu v přítomnosti sacharózy
| Vzorek | Objem (al) | AlPI (jedn./ml) | Celkový AlPI (jedn.) | % AlPI z NaEDTA |
| SD-A1PI | 311 | 3,35 | 1042 | 97,8 |
| Kontrola | 293 | 2,13 | 624 | 58,6 |
-7CZ 302102 B6
Příklad 5
K získanému SD A1PI roztoku z příkladu 4 se přidá 311 g destilované vody, aby se snížila iontová síla před nanesením na QAE kolonu. Roztok se nanese na 300 ml předem ekvilibrované QAE kolony pro výměnu iontů s průtokem 12 ml/min. Kolona se promyje s použitím 6 ml solného fosfátového pufřu (20mM NaCl, 20mM NaH2PO4, pH 8,0). Dále se Al PI eluuje pomocí 1,8 I solného fosfátového pufru (lOOmM chlorid sodný, 20mM NaH2PO4, pH 8,0).
lontoměničovtí médium se postupně promyje: 2M NaCl, 20mM NaH2PO4, pH 8,0, 500mM NaOH a destilovanou vodou. Chromatografické médium se uchovává v 2M roztoku chloridu sodného, 20mM NaH2PO4, pH 8,0. Spojené frakce s obsahem Al Pl se testují a výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 5.
Tabulka 5
QAE-iontová chromatografie
| Vzorek | Objem (ml) | A1PI (jadn./al) | Celkový A1PI (jedn.) | O.D. 280 nm | S.A.. (jedn./OD) |
| Eluát | 1500 | 0,62 | 930 | 0,58 | 1,058 |
Příklad 6
Ke spojenému eluátu z příkladu 5 se přidají 3,0 g depyrogenovaného bentonitu a vzniklá směs se míchá jednu hodinu při 20 °C. Bentonit se bdstraní filtrací (Cuno). Filtrát se zahustí ultrafiltrací. Koncentrát se filtruje (Plánová) a dále se sterilně filtruje v sériích. Filtrát se rozdělí do lékovek a lyofílizuje se za účelem skladování. Všechny procesní vzorky byly testovány a výsledky jsou shrnuty v tabulce 6.
Tabulka 6
| Vzorek | Ob jen dni) | Λ1ΡΙ Oadn./Bl) | Celkový A1PI (jedn.) | O. D. 280 nm | S. A. (jedn. /OD) |
| Filtrát (Cuno) | 1710 | 0,52 | 885 | 0,385 | 1,351 |
| Koncentrát | 75 | 11,6 | 870 | 8,092 | 1,434 |
| Konečný vzorek | 92 | 0,4 | 865 | 6,225 | 1,510 |
-8CZ 302102 B6
Claims (2)
1. Způsob zvýšení výtěžku jednotek α-1-ΡΙ v roztoku α-1-ΡΙ podrobeném deaktivaci viru pomocí přidání rozpouštědla-detergentu, vyznačující se tím, že zahrnuje přidání sacharidu v množství od 10 % do 20 % hmotn. k uvedenému proteinovému roztoku.
i o
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedeným sacharidem je sacharóza.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/673,064 US5616693A (en) | 1996-07-01 | 1996-07-01 | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ302102B6 true CZ302102B6 (cs) | 2010-10-13 |
Family
ID=24701177
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20070842A CZ302102B6 (cs) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Zpusob zvýšení výtežku jednotek proteinu v proteinovém roztoku podrobeném deaktivaci viru pomocí pridání rozpouštedla-detergentu |
| CZ0435698A CZ300452B6 (cs) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Zpusob cištení inhibitoru alfa-1-proteinasy |
| CZ20070841A CZ301332B6 (cs) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Zpusob odstranení apolipoproteinu z proteinového roztoku |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0435698A CZ300452B6 (cs) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Zpusob cištení inhibitoru alfa-1-proteinasy |
| CZ20070841A CZ301332B6 (cs) | 1996-07-01 | 1997-06-27 | Zpusob odstranení apolipoproteinu z proteinového roztoku |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5616693A (cs) |
| EP (2) | EP0944392B1 (cs) |
| JP (3) | JP4390855B2 (cs) |
| KR (1) | KR20000022480A (cs) |
| AT (2) | ATE420111T1 (cs) |
| AU (1) | AU726233B2 (cs) |
| BR (1) | BR9710107B1 (cs) |
| CA (2) | CA2489773A1 (cs) |
| CZ (3) | CZ302102B6 (cs) |
| DE (2) | DE69737294T2 (cs) |
| DK (2) | DK1762576T3 (cs) |
| ES (2) | ES2281104T3 (cs) |
| IL (1) | IL127774A (cs) |
| PL (3) | PL188873B1 (cs) |
| PT (2) | PT944392E (cs) |
| WO (1) | WO1998000154A1 (cs) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5616693A (en) * | 1996-07-01 | 1997-04-01 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
| US6849605B1 (en) * | 1999-03-05 | 2005-02-01 | The Trustees Of University Technology Corporation | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of viral infections |
| WO2000051624A2 (en) | 1999-03-05 | 2000-09-08 | The Trustees Of University Technology Corporation | Methods and compositions useful in inhibiting apoptosis |
| US6489308B1 (en) | 1999-03-05 | 2002-12-03 | Trustees Of University Of Technology Corporation | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of nitric-oxide-induced clinical conditions |
| WO2000051625A1 (en) * | 1999-03-05 | 2000-09-08 | The Trustees Of University Technology Corporation | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of herpes viruses |
| US6462180B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-10-08 | Bayer Corporation | Method of preparing α-1 proteinase inhibitor |
| EP1343809B2 (en) | 2000-12-14 | 2023-03-15 | Grifols Therapeutics Inc. | Method of preparing alpha-1 proteinase inhibitor |
| KR100406870B1 (ko) * | 2001-05-25 | 2003-11-21 | 주식회사 두산 | 침전법을 이용한 계란 난황에서의 유용 수용성 성분의분리방법 및 침전 부산물의 이용 방법 |
| EP1417301B1 (en) * | 2001-08-07 | 2006-11-02 | Novozymes A/S | Carbohydrates and polyols for dissolving protein crystals |
| EP1520012B1 (en) * | 2002-07-01 | 2009-01-07 | Novozymes A/S | Monopropylene glycol added to fermentation |
| US7777006B2 (en) * | 2002-12-31 | 2010-08-17 | Csl Behring L.L.C. | Method for purification of alpha-1-antitrypsin |
| US20040220242A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Leland Shapiro | Inhibitors of serine protease activity, methods and compositions for treatment of nitric oxide induced clinical conditions |
| JP2007504144A (ja) | 2003-08-26 | 2007-03-01 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ コロラド ア ボディー コーポレイト | セリンプロテアーゼ活性阻害因子、ならびに細菌感染の治療法および組成物におけるその使用方法 |
| US7807435B2 (en) * | 2005-08-11 | 2010-10-05 | Baxter International Inc. | Method for the purification of alpha-1 proteinase inhibitor (a1PI) |
| GB0524432D0 (en) * | 2005-11-30 | 2006-01-11 | Nhs Blood & Transplant | Method |
| US20080124303A1 (en) * | 2005-12-12 | 2008-05-29 | Cavit Sciences, Inc | Methods and compositions for treatment of viral infections |
| WO2007112953A1 (en) * | 2006-03-30 | 2007-10-11 | Baxter Internaional Inc. | Process for the purification of recombinant alpha 1-antitrypsin involving a step of anion exchange chromatography |
| US8772240B2 (en) | 2006-05-19 | 2014-07-08 | Baxter International Inc. | Ethanol dependence of alpha1 antitrypsin C-terminal lys truncation by basic carboxypeptidases |
| CA2836478A1 (en) | 2011-05-27 | 2012-12-06 | Baxter International Inc. | Therapeutic protein conjugated to water-soluble polymers via reduced cysteine sulfhydryl group |
| JP6216921B2 (ja) | 2011-06-24 | 2017-11-01 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイトＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲＡＤＯ，ａ ｂｏｄｙ ｃｏｒｐｏｒａｔｅ | アルファ−１抗トリプシン融合分子のための組成物、方法および使用 |
| KR20140137347A (ko) | 2012-01-10 | 2014-12-02 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트 | 알파-1 안티트립신 융합 분자용 조성물, 방법 및 용도 |
| TWI629283B (zh) | 2012-02-23 | 2018-07-11 | 巴克斯歐塔公司 | 來自血漿中的免疫球蛋白之ｉ-ｉｖ-１部分沉澱 |
| US9353165B2 (en) | 2012-07-25 | 2016-05-31 | Grifols, S.A. | Purification of cell culture derived alpha1 protease inhibitor |
| CA2943938A1 (en) | 2013-03-29 | 2014-10-02 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for preparing a subject for organ or non-organ implantation |
| IL267923B2 (en) | 2018-08-02 | 2023-06-01 | Grifols Worldwide Operations Ltd | The composition containing the most concentrated alpha-1 type protein inhibitor and a method for obtaining it |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0292003A2 (en) * | 1987-05-22 | 1988-11-23 | Armour Pharmaceutical Products, Inc. | Stabilzation of biological and pharmaceutical products during inactivation of viral and bacterial contaminants |
| WO1995035306A1 (en) * | 1994-06-17 | 1995-12-28 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for separating alpha1-proteinase inhibitor from cohn fraction iv1 and iv4 paste |
| EP0698615A1 (en) * | 1994-08-24 | 1996-02-28 | Bayer Corporation | Purification of alpha-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions |
| EP1762576A1 (en) * | 1996-07-01 | 2007-03-14 | Baxter International Inc. | Process for separating alpha-1-proteinase inhibitor from Cohn Fraction IV1+IV4 paste |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2770616A (en) * | 1951-01-29 | 1956-11-13 | Protein Foundation Inc | Fractionation of proteinaceous materials in blood plasma and liver tissue |
| US2761808A (en) * | 1952-09-06 | 1956-09-04 | Ortho Pharma Corp | Plasma fractionation process |
| US4056614A (en) * | 1972-09-22 | 1977-11-01 | Marc Bonneau | Immunity depressant medicine |
| JPS52128205A (en) * | 1976-04-16 | 1977-10-27 | Green Cross Corp:The | Prophylactic and therapeutic drugs for cerebro-vascular contraction |
| US4379087A (en) * | 1982-06-17 | 1983-04-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4439358A (en) * | 1982-06-17 | 1984-03-27 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3426903A1 (de) * | 1984-07-20 | 1986-01-23 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Eine immunglobulinpraeparation in kombination mit einer anderen pharmakologisch wirksamen praeparation zur verwendung bei der behandlung von krankheiten |
| US4684723A (en) * | 1985-09-11 | 1987-08-04 | Miles Laboratories, Inc. | Method of separating proteins from aqueous solutions |
| US4697003A (en) * | 1985-11-01 | 1987-09-29 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4656254A (en) * | 1985-12-02 | 1987-04-07 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor and antithrombin III |
| US4629567A (en) * | 1986-03-07 | 1986-12-16 | Smithkline-Rit | Alpha-1-antiprotease purification |
| JPS6317899A (ja) * | 1986-07-09 | 1988-01-25 | Green Cross Corp:The | ハプトグロビンの精製方法 |
| JPS63132898A (ja) * | 1986-11-26 | 1988-06-04 | Meito Sangyo Kk | 蛋白質の分離精製方法 |
| US5093316A (en) * | 1986-12-24 | 1992-03-03 | John Lezdey | Treatment of inflammation |
| US4829054A (en) * | 1987-04-13 | 1989-05-09 | Miles Laboratories, Inc. | Method of decreasing lung damage in a host following the onset of gram negative septicemia/endotoxemia |
| ES2053606T3 (es) * | 1987-04-27 | 1994-08-01 | Miles Inc | Metodo de preparacion de un inhibidor de alfa-1-proteinasa de alta pureza. |
| US5073487A (en) * | 1989-01-30 | 1991-12-17 | Athens Research And Technology, Inc. | Rapid assay for functional human α1 -proteinase inhibitor |
| FR2672895B1 (fr) * | 1991-02-15 | 1995-05-12 | Transgene Sa | Procede de purification d'une proteine fortement glycosylee. |
-
1996
- 1996-07-01 US US08/673,064 patent/US5616693A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-31 US US08/829,223 patent/US5981715A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 CA CA002489773A patent/CA2489773A1/en not_active Abandoned
- 1997-06-27 DE DE69737294T patent/DE69737294T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 PT PT97932347T patent/PT944392E/pt unknown
- 1997-06-27 AT AT06025342T patent/ATE420111T1/de active
- 1997-06-27 CZ CZ20070842A patent/CZ302102B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 EP EP97932347A patent/EP0944392B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 ES ES97932347T patent/ES2281104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 PT PT06025342T patent/PT1762576E/pt unknown
- 1997-06-27 EP EP06025342A patent/EP1762576B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 DK DK06025342T patent/DK1762576T3/da active
- 1997-06-27 PL PL97363606A patent/PL188873B1/pl unknown
- 1997-06-27 BR BRPI9710107-9A patent/BR9710107B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 CZ CZ0435698A patent/CZ300452B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 DK DK97932347T patent/DK0944392T3/da active
- 1997-06-27 CZ CZ20070841A patent/CZ301332B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 KR KR1019980710920A patent/KR20000022480A/ko not_active Ceased
- 1997-06-27 PL PL97363607A patent/PL188874B1/pl unknown
- 1997-06-27 AU AU35831/97A patent/AU726233B2/en not_active Expired
- 1997-06-27 CA CA002259499A patent/CA2259499C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-27 IL IL12777497A patent/IL127774A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-06-27 ES ES06025342T patent/ES2320919T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 DE DE69739212T patent/DE69739212D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 JP JP50433698A patent/JP4390855B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-27 WO PCT/US1997/011256 patent/WO1998000154A1/en not_active Ceased
- 1997-06-27 PL PL97330934A patent/PL188830B1/pl unknown
- 1997-06-27 AT AT97932347T patent/ATE352569T1/de active
-
2008
- 2008-01-04 JP JP2008000174A patent/JP4588770B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-06-02 JP JP2009133123A patent/JP5245079B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0292003A2 (en) * | 1987-05-22 | 1988-11-23 | Armour Pharmaceutical Products, Inc. | Stabilzation of biological and pharmaceutical products during inactivation of viral and bacterial contaminants |
| WO1995035306A1 (en) * | 1994-06-17 | 1995-12-28 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for separating alpha1-proteinase inhibitor from cohn fraction iv1 and iv4 paste |
| EP0698615A1 (en) * | 1994-08-24 | 1996-02-28 | Bayer Corporation | Purification of alpha-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions |
| EP1762576A1 (en) * | 1996-07-01 | 2007-03-14 | Baxter International Inc. | Process for separating alpha-1-proteinase inhibitor from Cohn Fraction IV1+IV4 paste |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ302102B6 (cs) | Zpusob zvýšení výtežku jednotek proteinu v proteinovém roztoku podrobeném deaktivaci viru pomocí pridání rozpouštedla-detergentu | |
| JP2008120822A6 (ja) | タンパク質溶液からアポリポタンパク質を除去する方法 | |
| JP4324102B2 (ja) | フィブリノーゲンの調製方法 | |
| US6284874B1 (en) | Process for separating α1-proteinase inhibitor from cohn fraction IV1 and IV4 paste | |
| US20150031621A1 (en) | Method for purification of complement factor h | |
| CA2538998C (en) | Large scale preparation of alpha-1 proteinase inhibitor and use thereof | |
| EP1654284B1 (en) | Process for preparing an alpha-1-antitrypsin solution | |
| CN114787185A (zh) | 一种凝血因子ⅷ中间品的冻存方法 | |
| JP4521143B2 (ja) | タンパク質の精製法 | |
| AU743904B2 (en) | Purification of proteins | |
| MXPA06001112A (en) | Process for preparing an alpha-1-antitrypsin solution |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20170627 |