CZ254797A3 - Kinasa příbuzná PIK kontrolního prvku buněčného cyklu, látky a způsoby - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se obecně týká genů kódujících kinasu příbuznou fosfatidylinositol kinase (PIK) kontrolního prvku buněčného cyklu a proteinů, které jsou důležité pro odpověd buněk na poškození DNA. Kinasy kontrolního prvku mají důležitou úlohu při dozoru nad poškozením DNA, k němuž dochází v důsledku replikačních chyb, chybného párování DNA, léčby ozařováním a podávání chemoterapeutik. Tyto kinasy musí být přítomny v regulačních drahách zajištujících zastavení buněčného cyklu, jež poskytuje buňkám upozornění, že došlo k poškození DNA a čas, aby byly léze opraveny před zahájením replikace DNA. Konkrétně se vynález týká nové kinasy příbuzné PIK člověka, Mammalian Cell Cycle Surveillance 1 (MCCS1) (v překladu dozor nad cyklem savčích buněk č. 1), polynukleotidů kódujících tuto kinasu příbuznou PIK a způsobů stanovení a modulace enzymatické aktivity této a příbuzných kinas.

Dosavadní stav techniky

Proces růstu a dělení eukaryontní buňky představuje somatický nebo mitotický buněčný cyklus, který se skládá ze čtyř fází: fáze Gj, fáze S, fáze G₂ a fáze M. Fáze G_x, S a G₂ se kolektivně označují jako interfáze buněčného cyklu.

Ve všech druzích eukaryontních buněk je buněčný cyklus strukturně a funkčně konzervován, pokud se týče jeho základního průběhu a způsobu regulace. Během fáze G^ (mezera - gap) postupují biosyntetické aktivity v buňce vysokou rychlostí. Fáze S (syntéza) začíná při zahájení syntézy DNA a končí, když byl obsah DNA v jádře buňky replikován a vytvořily se dva totožné soubory chromosomů. Potom buňky vstupují do fáze G₂ (mezera - gap), která pokračuje tak dlouho, dokud nezačne mitóza. Během mitózy dochází k párování a separaci chromosomů za vzniku dvou nových jader. Při cytokinese se samotná buňka štěpí na dvě dceřinné buňky, z nichž každá obdrží jedno jádro obsahující jeden ze dvou souborů chromosomů. Mitosa a cytokinesa dohromady tvoří fázi M (mitosa) buněčného cyklu. Cytokinesa ukončuje fázi M a označuje začátek interfáze následujícího buněčného cyklu. Pořadí, v němž probíhají jednotlivé procesy v buněčném cyklu je přísně regulováno tak, že začátek jednoho procesu buněčného cyklu je závislý na dokončení předchozího procesu buněčného cyklu. Tím je zaručena věrnost duplikace a segregace genetického materiálu z jedné generace na druhou.

Pod označením kontrolní prvky (checkpoints) buněčného cyklu se rozumějí proteiny, signály, procesy a regulátory zpětné vazby, které integrují diskontinuální procesy probíhající při replikaci buněk, aby se zachovaly podstatné závislosti v rámci buněčného cyklu. Tento vynález se specificky týká kontrolního prvku buněčného cyklu, který zajištuje, že mitosa je odložena do té doby, dokud není ukončena syntéza DNA a/nebo přesná oprava poškození DNA.

Selhání kontrolních prvků buněčného cyklu predisponuje individua pro mnohé chorobné stavy, jako jsou rakovina, ataxia telangiectasia, abnormality embrya a různé imunologické poruchy spojené s vývojem aberantních B- a Tbuněk nebo přímo takové chorobné stavy vyvolává. Výše uvedené imunologické poruchy jsou spojeny s patologickými stavy jako jsou lupus, arthritis a autoimunitní choroby. Proto se intenzivní výzkum zaměřil na identifikaci kontrol• · · · · ·

« · nich prvků buněčného cyklu a proteinů, které jsou podstatné pro funkci těchto kontrolních prvků.

Při genetické analýze kvasinek Schizosaccharomyces pombe a Saccharomyces cerevisiae byla indentifikována řada genů, které jsou důležité pro zastavení buněčného cyklu a opravy DNA v odpovědi na ionizující záření (přehled viz Carr a Hoekstra, Trends in Cell Biology, 5: 32 až 40 (1995)). Jeden z takových genů, který byl identifikován v obou kvasinkách, je potřebný pro kontrolní prvek poškození DNA, který zastavuje buněčný cyklus ve fázi G₂ a také pro příbuzný kontrolní prvek, který monitoruje dokončení syntézy DNA a zastavuje buněčný cyklus ve fázi S. Tento gen, který byl označen jako rad3+ v S. pombe [Seaton et al., Gene,

119: 83 až 89 (1992)] a MEC1/ESR1 v S. cerevisiae [Kato et al., Nuc. Acids Res. 22 (15): 3104 až 3112 (1994)], je v tomto popisu dále označován názvem rad3+. Buňky obsahující mutace genu rad3+ nejsou schopny zaznamenat nebo řádně odpovědět na poškození DNA a po expozici klastogenním činidlům nebo procesům (například ionizačnímu záření, činidlům poškozujícím DNA a mutacím ovlivňujícím integritu chromosomu, ztrácejí svou životaschopnost rychleji než buňky divokého typu [viz Weinert et al., Genes & Development, 8: 652 až 665 (1994) a Al-Khodairy et al., Embo. J. 11(4): 1343 až 1350 (1992)]. Citlivost vůči ionizačnímu záření (radiosensitivita) může být vyvolána defekty v odpovědích kontrolních prvků nebo defekty přímo při reakcích opravy DNA.

Produktem genu rad3+ je přibližně 270kDa protein, který spadá do rostoucí třídy vysokomolekulárních kinas příbuzných PIK. Diskuse vztahující se k této třídě kinas je uvedena v publikaci Hunter, Cell, 83: 1 až 4 (1995). Primární struktury katalytických domén, které se vyskytují v členech této třídy genů mají těsný vztah k dobře • · · · · · charakterizovaným fosfatidylinositol kinasám. Tento strukturní vztah stál na počátku předpokladu, že kinasy příbuzné PIK by mohly být schopny fosforylovat lipidy. Když se však u kinas příbuzných PIK zkouší substrátová specificita, zdá se, že tyto enzymy působí jako protein kinasy a okolnost, zda fosforylují fosfatidylinositidy, je teprve třeba prokázat. Hartley et al. (Cell 82: 849 až 856 (1995) oznámili, že purifikované přípravky s vysokou protein kinasovou aktivitou nevykazují lipid kinasovou aktivitu. Další identifikované kinasy příbuzné PIK zahrnují produkt genu TELÍ z S. cerevisiae, který ovlivňuje délku telomeru, Greenwell et al., Cell 82: 823 až 829 (1995) a produkt genu Mei41+ z Drosophila melanogaster, který je důležitý pro kontrolní prvek ve fázi G₂ a pro miotický vývoj (Hari et al., Cell 82: 815 až 821 (1995)), produkt genu DNA-PK z myši, který je důležitý při přesmycích imunoglobulinu a při zpracování zlomů dvouřetězcové DNA a produkt genu FRAP, který je důležitý při přechodu z fáze do fáze S [Brown E. et al., Nátuře, 377: 441 až 446 (1995)]. Mutace genu DNA-PK mohou mít za následek syndrom prudké kombinované imunitní nedostatečnosti (Severe Combined Immunodeficiency Syndrome SCID) (Hartley et al., výše uvedená citace).

U člověka, je známo méně o molekulárních složkách potřebných pro funkci kontrolních prvků. Jedna složka mechanismu kontrolního prvku u savce byla identifikována analýzou syndromu choroby člověka ataxia-telangiectasia (AT). Pacienti postižení AT vykazují rozmanitý soubor klinických symptomů, včetně predispozice k různým typům nádorů. Fibroblasty pacientů postižených AT jsou radiosensitivní a po ošetření ionizačním zářením u nich nedochází k zastavení buněčného cyklu, což vede k jevu označovanému názvem radioresistentní syntéza DNA. Existuje zde jasná reminiscence na poruchu rad3 u S. pombe, kde buňky nejsou schopny zaznamenat nebo správně odpovídat na poškození DNA. Zajímavé je, že • · · · · · nedávno byl popsán (Savitsky et al., Science, 268: 1749 až 1753 (1995)) lokus zodpovědný za AT, mutovaný gen ataxietelangiectasie (ATM), přičemž parciální cDNA kóduje protein s aminokyselinovou podobností vzhledem ke genu rad3+. V citaci Savitsky et al., Human Molecular Genetics, 4 (11): 2025 až 2032 (1995) je popsána izolace cDNA kódující ATM o plné délce. Zvýšená radiosenzitivita rad3+ kvansinkových mutantů a savčích buněk postrádajících funkční ATM ukazuje, že tyto proteiny by mohly zahrnovat třídu proteinových kontrolních prvků.

Kuerbitz et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89:

7492 až 7495 (1992) tvrdí, že pro kontrolní prvek ve fázi Gj a pro zastavení buněčného cyklu pozorované po poškození DNA je potřebný nádorový supresor p53. Ozáření buněk má za následek zvýšení hladiny p53, které vede k transkripční aktivaci p53 responsivních genů. Jedním takovým p53-indukovaným cílem je produkt genu WAF1 (také nazývaného p21, CIP1 a sdil). WAF1 je členem rozšiřující se třídy regulátorů buněčného cyklu, které jsou označovány názvem proteiny inhibující cyklin-dependentní kinasu. Aktivity cyklin-dependentních kinas řídí přechody v buněčném cyklu. Transkripční aktivace WAF1 tedy zajištuje přímou vazbu mezi indukcí p53, jež je závislá na poškození buněk a inhibici kinas, které jsou podstatné pro pokračování buněčného cyklu (viz Elledge a Harper, Current Opinion in Cell Biology 6:

847 až 852 (1994)). Mutace genu p53 jsou jedněmi z nejčastějších genetických změn při rakovinách u člověka. Tak například Baker et al. (Science, 244: 217 až 221 (1989)) uvádějí, že přibližně 70 % karcinomů kolorekta obsahuje delece v genu p53 nebo mutantní kopie tohoto genu. Kromě toho Fearon et al. (Cell 61: 759 až 767 (1990)) uvádějí, že nádory prsu, plic, močového měchýře a mozku jsou spojeny se ztrátou chromosomu 17p, což je oblast, v níž je gen p53 umístěn.

• · ·· ·· ····

V současné době je poměrně málo známo o molekulárních složkách kontrolních prvků fáze G₂ v savčích buňkách. Kofein je chemická látka, která eliminuje řízení kontrolním prvkem fáze G₂· Russell et al. (Cancer Res., 55: 1639 až 1642 (1995) a Powell et al. (Cancer Res., 55: 1643 až 1648, (1955)) uvádějí, že analýza buněčných linií lišících se jen přítomnosti nebo nepřítomností funkčního genu p53 ukázala přednostní sensitizaci vůči ionizačnímu záření zvýšenou kofeinem u buněk postrádajících p53-dependentní kontrolní prvek fáze G-^. Konverze potenciálně letálního poškození na letální poškození je tedy větší v buňkách postrádajících kontrolní prvky fáze Gj a G₂ ve srovnání s buňkami, v nichž je kontrolní prvek fáze G·^ neporušen.

Zatímco u některých buněk dochází k zastavení buněčného cyklu v odpovědi na poškození DNA, jiné buňky zřejmě odpovídají na poškození DNA zahájením vnitřního sebevražedného programu označovaného názvem apoptosa nebo programovaná smrt buněk. Faktory určující, ke kterému z těchto procesů dojde, nejsou dosud plně objasněny. Nedávná práce ukázala na důležitou úlohu genu p53 jak při regulaci přechodů buněčného cyklu ve fázi Gj, tak při apoptose. Symonds et al. (Cell 78, 703 až 711 (1994)) uvádějí, že p53 dependentní apoptosa potlačuje růst nádorů a jejich progresi in vivo.

Při léčení nádorů se na nádorové buňky aplikují vysoké dávky záření a chemoterapie, aby se jejich DNA do té míry poškodila, aby buňky zahynuly. Přestože však nádorové buňky obsahující mutace v genu p53 jsou defektní z hlediska kontrolního prvku ve fázi G^, jsou stále ještě schopny opravit si poškození DNA vyvolané radiací nebo chemoterapií. Tento vynález je založen na předpokladu, že by inhibice kontrolního prvku ve fázi G₂ u nádorových buněk měla vést ke • · · · · stavu, kdy by byly nádorové buňky neschopné opravit si poškození DNA, čímž by tedy byly nádorové buňky sensitizovány vůči činidlům poškozujícím DNA. Normální buňky obsahující neporušené kontrolní prvky Gj a G₂ by měly být schopny opravit si poškození DNA za přítomnosti inhibitoru specifického vůči kontrolnímu prvku G₂. Léčení nádorových onemocnění podáváním inhibitoru specifického vůči kontrolnímu prvku G₂ s následující aplikací radiace nebo chemoterapie by tedy mělo zvýšit účinnost usmrcování buněk a tím zajistit možnost snížení požadované dávky toxických činidel poškozujících DNA.

Přetrvává tedy potřeba identifikovat savčí proteiny, které slouží jako kontrolní prvky buněčného cyklu, aby bylo možno vyvinout terapie chorobných stavů člověka, které jsou spojeny s defektními kontrolními prvky buněčného cyklu. Přetrvává i potřeba izolovat geny kódující tyto proteiny, které by mohly být samy užitečné jako léčiva nebo které by umožnily vývoj terapeuticky užitečných modulátorů proteinů kódovaných těmito geny.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou nové humánní kinasy příbuzné PIK, které jsou důležité pro kontrolní prvek buněčného cyklu, jenž responduje ve fázi G₂ buněčného cyklu na poškozenou a nereplikovanou DNA.

Jedním z aspektů tohoto vynálezu jsou purifikované a izolované polynukleotidy (například DNA a RNA, a to jak kódující, tak nekódující řetězce těchto DNA a RNA), které kódují kinasu příbuznou PIK kontrolního prvku buněčného cyklu, MCCS1, a polynukleotidy kódující jiné kinasy příbuzné PIK kontrolního prvku buněčného cyklu, které vykazují asi 50%, asi 60% nebo asi 65% nukleotidovou shodu s oblastí • · polynukleotidu MCCS1, jež kódují MCCS1 kinasovou doménu (MCCSla nukleotidy 6579 až 7562 ze SEQ ID NO: 30 nebo MCCSip nukleotidy 6457 až 7440 ze SEQ ID NO: 32). Alternativně vykazují kinasy příbuzné PIK typu MCCS1 asi 40%, asi 45% nebo asi 50% aminokyselinovou shodu s MCCS1 kinasovou doménu (MCCSla aminokyseliny 2083 až 2410 ze SEQ ID NO: 31 nebo MCCSip aminokyseliny 2152 až 2480 ze SEQ ID NO: 33). Polynukleotidy spadající do rozsahu tohoto vynálezu zahrnují genomové DNA, RNA, cDNA a úplně nebo zčásti chemicky syntetizované DNA. Přednostní polynukleotidy podle vynálezu zahrnují sekvenci DNA MCCSla znázorněnou v SEQ ID NO: 30, částečnou sekvenci DNA MCCSip znázorněnou v SEQ ID NO: 3, sekvenci DNA MCCSip o plné délce znázorněnou v SEQ ID NO. 32 a sekvence DNA, které hybridizují k nekódujícím řetězcům takových sekvencí za striňgentních podmínek, nebo které by takto hybridizovaly, nebýt redundance genetického kódu. Jako příklad stringentních hybridizačních podmínek je možno uvést hybridizaci při 65°C v 3X SSC, 20mM fosforečnanu sodném o pH 6,8 a promývání při 65°C v 0,2X SSC. Odborníkům v tomto oboru je zřejmé, že tyto podmínky je možno obměňovat v závislosti na délce a obsahu nukleotidové báze GC v sekvencích, které mají být hybridizovány. Pro stanovení přesných hybridizačních podmínek je možno použít standardních postupů tohoto oboru, viz Sambrook et al., 9.47 až 9.51 v Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, USA (1989). DNA MCCSla mající sekvenci SEQ ID NO: 30 byla uložena ve sbírce ATCC (American Type Culture Collection, 12301, Parklawn Drive, Rockvile, Maryland 20852, USA 3. listopadu 1995, jakožto insert v plasmidu pBSHFB/HT2-27 v E. coli DH5a a bylo jí přiděleno přírůstkové číslo sbírky ATCC 69951. DNA MCCSip mající sekvenci SEQ ID NO: 32 byla uložena ve sbírce ATCC 7. listopadu 1995, jakožto insert v plasmidu 517 v E. coli DH5a a bylo jí přiděleno přírůstkové číslo sbírky ATCC 69950.

• · ·· ···

Informace o sekvencích DNA uvedené v popisu tohoto vynálezu umožňují identifikovat a izolovat DNA kódující příbuzné molekuly dobře známými technikami, jako je hybridizace DNA/DNA popsaná výše a klonování za použití řetězové reakce katalyzované polymerasou (PCR). Jak ukazuje jedna série příkladů, znalost sekvence cDNA kódující MCCS1 umožňuje izolaci DNA/DNA hybridizací sekvencí genomové DNA kódujících kinasu a regulačních sekvencí řídících expresi, jako jsou promotory, operátory apod. Podobně také znalost částečné sekvence cDNA kódující MCCS18 umožňuje izolovat úplnou cDNA. Podobně se také očekává, že DNA/DNA hybridizační postupy prováděné za použití sekvencí DNA podle tohoto vynálezu za stringentních podmínek umožní izolovat DNA kódující alelové varianty kinasy příbuzné PIK; nehumánních druhů enzymů homologických vzhledem ke kinase příbuzné PIK a jiných strukturně příbuzných proteinů vykazujících jednu nebo více jejich enzymatických účinností nebo schopností reagovat se členy nebo regulátory v dráze kontrolního prvku buněčného cyklu, na níž se MCCS1 podílí. Detegovatelně označené polynukleotidy podle vynálezu budou také užitečné při hybridizačnich stanoveních za účelem detekce schopnosti buněk syntetizovat MCCS1. Informace o sekvencích DNA uvedené v tomto popisu také umožňují za použití strategií homologní rekombinace nebo knockout (viz Capecchi,

Science, 244: 1288 až 1292 (1989)) vyvinout hlodavce, kteří nejsou schopni exprimovat funkční MCCS1 nebo kteří exprimují variantní MCSS1. Takoví hlodavci jsou užiteční jako modely pro studium aktivit MCCS1 a modulátorů MCCS1 in vivo. O polynukleotidy podle vynálezu se také mohou opírat diagnostické metody užitečné pro identifikaci genetických změn v místě MCCS1, které jsou příčinou chorobného stavu nebo stavů. Za použití vynálezu se také stanou dostupnými kódující polynukleotidy, jež jsou schopny regulovat expresi MCCS1, v takových buňkách, které tuto látku obvykle exprimuj í.

Předmětem vynálezu jsou také autonomně se replikující rekombinantní konstrukty, jako jsou vektory plasmidové a virové DNA, které obsahují polynukleotidy podle vynálezu, zejména vektory, v nichž jsou polynukleotidy funkčně vázány k endogenní nebo heterologní expresní kontrolní sekvenci DNA a transkripčnímu terminátoru.

Dalším aspektem vynálezu jsou hostitelské buňky, zvláště unicelulární hostitelské buňky, jako prokaryontní a eukaryontní buňky, které jsou stabilně transformovány nebo transfekovány DNA podle vynálezu způsobem umožňujícím expresi kinasy příbuzné PIK v těchto buňkách. Hostitelské buňky podle vynálezu jsou vysoce užitečné při mnoha způsobech produkce MCCS1 ve velkém měřítku, při nichž se buňky pěstují ve vhodném kultivačním médiu a požadované enzymy se izolují z buněk nebo média, v němž buňky rostou.

Do rozsahu vynálezu spadají také MCCS1 produkty obsahující část nebo celou aminokyselinovou sekvenci, která je znázorněna v SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 4 nebo SEQ ID NO: 33. Očekává se, že za použití savčích hostitelských buněk dojde k post-translačním modifikacím (například myristoylaci, glykosylaci, zkrácení, lipidaci a fosforylaci tyrosinu, šeřinu nebo threoninu), jež mohou být potřebné pro udělení optimální biologické účinnosti rekombinantním expresním produktům podle vynálezu. Enzymovými produkty podle vynálezu mohou být polypeptidy o plné délce, jejich fragmenty nebo varianty. Varianty zahrnují produkty MCCS1, v nichž je jedna nebo více specifikovaných (tj. přirozeně kódovaných) aminokyselin deletována nebo nahrazena, nebo v nichž je jedna nebo více nespecifikovaných aminokyselin přidána: 1. beze ztráty kinasové aktivity specifické pro MCCS1; nebo 2. s eliminací kinasové aktivity specifické pro MCCS1; nebo 3. s eliminací schopnosti interakce se členy nebo regulátory dráhy kontrolního prvku buněčného cyklu.

• · · · · · • · · · ·

Substráty pro MCCS1 a proteiny interagující s MCCS1 je možno identifikovat různými zkouškami.

Substráty pro MCCS1 se mohou identifikovat zkouškou kinasové aktivity za použití zkoušených sloučenin.

Kinasa MCCS1 se resuspenduje v kinasovém pufru a inkubuje buď za přítomnosti nebo za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny (například kaseinu, histonu H1 nebo vhodného substrátového peptidu). Molární množství fosfátu převedeného kinasou na zkoušenou sloučeninu se stanoví autoradiografií nebo scintilací. Převod fosfátu na zkoušenou sloučeninu ukazuje, že zkoušená sloučenina je substrátem pro kinasu.

Interagující proteiny je možno stanovit následujícími zkouškami:

První zkouška, které se používá podle vynálezu, představuje dvouhybridový screening. Dvouhybridový systém byl vyvinut u kvasinek (Chien et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88: 9578 až 9582 (1991)) a je založen na funkční in vivo rekonstituci transkripčního faktoru, který aktivuje reporterový gen. Konkrétně se polynukleotid kódující protein vykazující interakci s MCCS1 izoluje následujícím způsobem: Vhodná hostitelská buňka se transformuje nebo transfekuje konstruktem DNA zahrnujícím reporterový gen, který je pod kontrolou promotoru regulovaného transkripčním faktorem obsahujícím vazebnou doménu DNA a aktivační doménu; v hostitelských buňkách se exprimuje první hybridní sekvence DNA kódující první fúzovaný produkt části nebo celé MCCS1 a buď vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru; v hostitelských buňkách se exprimuje knihovna sekvencí druhé hybridní DNA kódující druhý fúzovaný produkt části nebo všech vazebných proteinů putativní MCCS1 a vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru, jež nebyla zavedena do prvního fúzovaného produktu;

deteguje se vazba proteinu interagujícího s MCCS1 k MCCS1 v konkrétní hostitelské buňce detekcí produkce produktu reporterového genu v hostitelské buňce; a z této konkrétní hostitelské buňky se izolují sekvence druhé hybridní DNA kódující interagující protein. V současné době se při provádění této zkoušky přednostně používá promotoru lexA pro pohánění exprese reporterového genu, lacZ reporterového genu, transkripčního faktoru obsahujícího DNA vazebnou doménu lexA a transaktivační doménu GAL4 a kvasinkových hostitelských buněk.

Jiná stanovení pro identifikaci proteinů, které interagují s MCCS1, mohou zahrnovat imobilizaci MCCS1 nebo zkušebního proteinu, detegovatělně značení neimobilizovaného vazebného partnera, společnou inkubaci vazebných partnerů a stanovení množství navázaného značícího činidla. Navázané značící činidlo ukazuje, že zkoušený protein interagu je s MCCS1.

Jiný typ stanovení, kterým se identifikují proteiny interagující s MCCS1, zahrnuje imobilizaci MCCS1 nebo jejího fragmentu na pevném nosiči, který je potažen (nebo který je napuštěn) fluorescentním činidlem, značení zkoušeného proteinu sloučeninou schopnou excitovat fluorescentní činidlo, kontaktování imobilizovaného MCCS1 se značeným zkoušeným proteinem, detekci světelné emise fluorescentního činidla a identifikaci interagujících proteinů, jakožto zkoušených proteinů vyvolávajících emisi světla fluorescentního činidla. Alternativně je při této zkoušce možno imobilizovat putativní interagující protein a značit MCCS1.

Do rozsahu tohoto vynálezu spadají také protilátky (například monoklonální a polyklonální protilátky, jednořetězcové protilátky, chimérické protilátky, CDR-roubované protilátky apod.) a jiné vazebné proteiny (jako jsou pro• · · · teiny identifikované při výše uvedených zkouškách, které jsou specifické vůči MCCS1 kinasám podle tohoto vynálezu. Vazebné proteiny je možno vyvinout za použití izolovaných přírodních nebo rekombinantních enzymů. Vazebné proteiny jsou samy dále užitečné pro purifikaci rekombinantních a přirozeně se vyskytujících enzymů a pro identifikaci buněk produkujících tyto enzymy. Konkrétními ilustrativními monoklonálními protilátkami podle tohoto vynálezu jsou monoklonální protilátky produkované hybridomálními buněčnými liniemi 224C a 224F, které byly uloženy ve sbírce kultur ATCC (American Type Culture Collection, 12301, Parklawn Drive, Rockvile, Maryland 20852, USA) 7. listopadu 1996, přičemž jim byla přidělena přírůstková čísla HB12233 (linie 224C) a HB 12234 (linie 224F). Zkoušky zaměřené na detekci a kvantifikaci proteinů v buňkách a tekutinách mohou zahrnovat jedinou protilátku nebo několik protilátek (sendvičové stanovení). Vazebné proteiny jsou také zjevně užitečné při modulaci (tj. blokování, inhibici nebo stimulaci) interakcí enzym/substrát nebo enzym/regulátor. Do rozsahu vynálezu spadají také anti-idiotypické protilátky, které jsou specifické vůči vazebným proteinům pro kinasu příbuznou PIK.

Vynález je založen na předpokladu, že mutace genu MCCS1 mající za následek ztrátu normální funkce produktu genu MCCS1 jsou příčinou chorobných stavů člověka, na nichž se podílí selhání kontrolního prvku fáze G₂ buněčného cyklu. Genová terapie zaměřená na restauraci aktivity MCCS1 by tedy byla indikována při léčení takových chorobných stavů (jako je například rakovina varlat). Doprava funkčního genu MCCS1 do vhodných buněk se provádí in vivo nebo ex vivo za použití virálních vektorů (například za použití vektorů odvozených od adenoviru, adenoasociovaného viru nebo retroviru) nebo ex vivo za použití fyzikálních metod přenosu DNA (například za použití liposomů nebo chemického působení). Přehled technologie genové terapie je možno nalézt v publikacích • · • · ·

Friedmann, Science, 244: 1275 až 1281 (1989); Verma, Scientific American: 68 až 84 (1990) a Miller, Nátuře, 357: 455 až 460 (1992). Také se předpokládá, že výše uvedená genová terapie by mohla být užitečná i při léčení jiných chorobných stavů člověka, při nichž dochází k bránění exprese nebo inhibici aktivity MCCS1. Předpokládá se, že terapie antisense nebo genová terapie by mohla být aplikována za účelem negativní regulace exprese MCCS1. Kódující (antisense) nukleové kyseliny (přednostně 10 až 20bp oligonukleotidy) schopné specificky vázat kontrolní sekvence exprese MCCS1 nebo MCCS1 RNA se zavedou do buněk (například prostřednictvím virálního vektoru nebo koloidního dispersního systému, jako je liposom). Kódující nukleová kyselina se naváže k cílové MCCS1 sekvenci v buňce a zabrání transkripci nebo translaci této cílové sekvence. Pro terapeutické využití tohoto vynálezu jsou konkrétně uvažovány fosfothioátové a methylfosfátové kódující oligonukleotidy. Kódující oligonukleotidy mohou být dále modifikovány polyLysinem, transferrin polylysinem nebo cholesterolovými skupinami u 5' konce.

Kromě toho, je-li například určitá konkrétní forma rakoviny důsledkem mutace v jiném genu než genu MCCS1, jako v genu p53, může se použít činidla inhibujícího transkripci enzymatické aktivity MCCS1 a tedy kontrolního prvku fáze G₂ buněčného cyklu pro sensitizaci rakovinných buněk vůči chemoterapii nebo radiační terapii. Terapeutickou hodnotu takového činidla je možno osvětlit dále uvedeným způsobem: Současná radiační terapie nebo chemoterapie ve většině případů nijak nečelí schopnosti p53 mutantní rakovinné buňky zaznamenat a opravit poškození DNA, jež je důsledkem léčení. Díky tomu si může rakovinná buňka jednoduše opravit poškozenou DNA. Modulační činidla podle tohoto vynálezu mohou tedy sloužit jako adjuvanty při chemoterapii a radiační • · · · · ·

terapii nebo mohou být přímo účinná jako chemoterapeutická léčiva.

Činidla modulující MCCS1 kinasovou aktivitu je možno identifikovat inkubací zkoušené sloučeniny s MCCS1 imunopurifikovanou z buněk přirozeně exprimujících tuto kinasu příbuznou PIK, s MCCS1 získanou z rekombinantních prokaryontních nebo eukaryontních hostitelských buněk exprimujících tento enzym nebo s purifikovanou MCCS1, přičemž se stanovuje účinek zkoušené sloučeniny na aktivitu MCCS1. Aktivita kinasy příbuzné PIK se může měřit stanovením počtu ³²P-fosfátu přeneseného kinasou z gamma-³²P-ATP bud na sebe samou (autofosforylace) nebo na exogenní substrát, jako je lipid nebo protein. Množství fosfátu zavedeného do substrátu se měří scintilací nebo autoradiografií. Zvýšení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je aktivátorem kinasy MCCS1. Naopak, snížení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že modulátor je inhibitorem MCCS1 kinasy. Modulátory mohou modulovat jak MCCS1, tak ATM, nebo mohou modulovat pouze jeden z těchto enzymů. Činidla modulující MCCS1 se hledají screeningem při stanovení kinasy, které je popsáno výše, při němž je fosforylačním enzymem ATM.

Při zkoušce, které se dává v současné době přednost, se MCCS1 - specifická protilátka navázaná na agarosové perly inkubuje s buněčným lysátem připraveným z hostitelských buněk exprimujících tuto kinasu. Perly se promyji, aby se odstranily proteiny nespecificky navázané na perly a potom se perly resuspendují v kinasovém pufru. Reakce se

« ·· 9· ······ · • · · · · zahájí přídavkem gamma-³²P-ATP a vhodného exogenního substrátu, jako lipidu nebo peptidu. Aktivita kinasy se měří stanovením počtu molů ³²P-fosfátu přeneseného buď na samotnou kinasu nebo na přidaný substrát. V přednostním provedení se používá hostitelských buněk, které neobsahují endogenní MCCS1 a/nebo ATM kinasovou aktivitu. Selektivita sloučeniny jež moduluje kinasovou aktivitu MCCS1 se může vyhodnotit porovnáním jejího účinku na MCCS1 s účinkem na jiné známé kinasy příbuzné PIK. Kombinace rekombinantních produktů MCCS1 podle vynálezu s produkty jiných kinas příbuzných PIK v sérii nezávislých stanovení představuje systém pro vývoj selektivních modulátorů MCCS1.

Za použití stanovení výše popsaného typu se mohou na modulační aktivitu zkoušet dále také kombinatoriální knihovny, peptidy a mimetika peptidů, definované chemické látky, oligonukleotidy a knihovny přírodních produktů.

Zkouška zaměřená na identifikaci modulátorů aktivity kinasy MCCS1 se například provádí tak, že se přípravek obsahující kinasu MCCS1 v kinasovém pufru inkubuje s gamma-³²P-ATP a exogenním substrátem pro kinasu jednak za přítomnosti a jednak za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny a měří se počet molů fosfátu přeneseného na substrát. Zvýšení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je aktivátorem této kinasy MCCS1. Naopak, snížení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že modulátor je inhibitorem této kinasy MCCS1.

Zkoušení zaměřené na identifikaci sloučenin, které modulují interakci MCCS1 s jinými proteiny se může provést dále uvedeným způsobem: Vhodná hostitelská buňka se transformuje nebo transfekuje konstruktem DNA zahrnujícím reporterový gen, který je pod kontrolou promotoru regulovaného transkripčním faktorem obsahujícím vazebnou doménu DNA a aktivační doménu; v hostitelských buňkách se exprimuje první hybridní sekvence DNA kódující první fúzovaný produkt části nebo celé MCCS1 a vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru; v hostitelských buňkách se exprimuje sekvence druhé hybridní DNA kódující část nebo celý protein, který interaguje s MCCS1 a vazebnou doménu DNA nebo aktivační doménu transkripčního faktoru, jež nebyla zavedena do prvního fúzovaného produktu. Účinek zkoušené sloučeniny na interakci mezi MCCS1 a proteinem se provádí detekcí vazby proteinu interagujícího s MCCS1 k MCCS1 v konkrétní hostitelské buňce měřením produkce produktu reporterového genu v hostitelské buňce za přítomnosti nebo za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny; a identifikují se modulační sloučeniny, jako ty sloučeniny, které mění produkci produktu reporterového genu ve srovnání s produkcí produktu reporterového genu za nepřítomnosti modulační sloučeniny. V současné době se při provádění této zkoušky přednostně používá promotoru lexA pro pohánění exprese reporterového genu, lacZ reporterového genu, transkripčního faktoru obsahujícího DNA vazebnou doménu lexA a transaktivační doménu GAL4 a kvasinkových hostitelských buněk.

Jiný typ stanovení pro identifikaci sloučenin, které modulují interakci MCCS1 a interagujícím proteinem, mohou zahrnovat imobilizaci MCCS1 nebo přírodního proteinu interagu jícího s MCCS1, detegovatelné značení neimobilizovaného vazebného partnera, společnou inkubaci vazebných partnerů a stanovení účinku zkoušené sloučeniny na množství navázaného značícího činidla. Snížení množství navázaného • « • · · · · · ·

- 18 - ··· ·· ....... ·· · značícího činidla za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s množstvím navázaného značícího činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušené činidlo je inhibitorem interakce mezi MCCS1 a proteinem. Naopak, zvýšení množství navázaného značícího činidla za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s množstvím navázaného značícího činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že putativní modulátor je aktivátorem interakce mezi MCCS1 a proteinem.

Ještě další typ stanovení, kterého se podle vynálezu používá pro identifikaci sloučenin modulujících vazbu mezi MCCS1 a interagujícím proteinem, zahrnuje imobilizací MCCS1 nebo jejího fragmentu na pevném nosiči, který je potažen (nebo který je napuštěn) fluorescentním činidlem, značení interagujícího proteinu sloučeninou schopnou excitovat fluorescentní činidlo, kontaktování imobilizované MCCS1 se značeným interagujícím proteinem za přítomnosti nebo nepřítomnosti zkoušené sloučeniny, detekci světelné emise fluorescentního činidla a identifikaci modulujících sloučenin, jakožto zkoušených sloučenin, které ovlivňují emisi světla fluorescentního činidla ve srovnání s emisí světla fluorescentního činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny. Alternativně je při této zkoušce možno imobilizovat protein interagující s MCCS1 a značit MCCS1.

Podle vynálezu je také možno provádět komplementační stanovení založené na buňkách za účelem identifikace sloučenin modulujících aktivitu MCCS1 nebo ATM. Toto stanovení zahrnuje komplementaci fenotypového rysu spojeného s genetickou alterací buňky. Tak například genetická alterace identifikovaná jako esrl-1 má za následek citlivost buněk vůči poškození DNA v kvasinkových buňkách (Kato et al., Nuc. Acids Res. 22 (15): 3104 až 3112 (1994)). Buňky esrl-1 nejsou schopny zaznamenat poškození DNA po expozici DNA

škodlivým činidlům, jako je ionizační záření nebo klastogenní činidlo, nebo na toto poškození řádně reagovat. Fenotypový rys geneticky pozměněné buňky se doplní transformací a expresí MCCS1 nebo ATM v této buňce. Transformované buňky se exponují působení vlivu poškozujícího DNA (například ionizačního záření) za přítomnosti nebo nepřítomnosti zkoušené sloučeniny a měří se citlivost buněk na poškození DNA.

Činidla ovlivňující citlivost buněk na škodlivé působení MCCS1 a/nebo ATM se identifikují jako modulátory.

Modulátory MCCS1 mohou ovlivňovat její kinasovou aktivitu, její lokalizaci v buňce a/nebo její interakce se členy dráhy kontrolního prvku buněčného cyklu. Modulátory MCCSl je možno zpracovávat na prostředky obsahující farmaceuticky vhodné nosiče. Takové prostředky mohou přídavně obsahovat chemoterapeutická činidla. Dávková množství, která jsou ilustrována v tomto popisu postačují pro modulaci aktivity MCCSl in vivo. Selektivní modulátory mohou například zahrnovat polypeptidy nebo peptidy, které se specificky vážou k MCCSl nebo nukleové kyselině MCCSl, oligonukleotidy, které se specificky vážou ke kinase příbuzné PIK nebo nukleové kyselině kinasy příbuzné PIK a/nebo jiné nepeptidové sloučeniny (například izolované nebo syntetické organické molekuly, které specificky reagují s MCCSl nebo nukleovou kyselinou MCCSl). Do rozsahu tohoto vynálezu spadá také použití mutantních forem MCCSl, které ovlivňují enzymatickou aktivitu nebo buněčnou lokalizaci MCCSl divokého typu. V současné době jsou za přednostní oblasti kinas příbuzných PIK, které představují cíle pro vývoj selektivních modulátorů, považovány například následující čtyři oblasti: MCCSla aminoterminální efektorová doména (aminokyseliny 1 až 1081 ze SEQ ID NO: 31), MCCSip aminoterminální efektorová doména (aminokyseliny 1 až 1150 ze SEQ ID NO: 33), MCCSla rad3+ doména (aminokyseliny 1082 až 2082 ze SEQ ID NO: 31), MCCSip rad3+ doména (aminokyseliny • ·

• · · · · • · · · · · · • · · · ······· · · *

1151 až 2151 ze SEQ ID NO: 33), MCSSla PIK doména (aminokyseliny 2083 až 2410 ze SEQ ID NO: 31) a MCSSip PIK doména (aminokyseliny 2152 až 2480 ze SEQ ID NO: 33).

Příklady provedení vynálezu

Vynález je blíže ilustrován v následujících příkladech. Příklad 1 podrobně popisuje izolaci různých cDNA kódujících kinasy MCCS1. Příklad 2 popisu mapování genu MCCS1 člověka v lidském chromosomu 3. V příkladu 3 je popsána rekombinantní exprese MCCS1 v buňkách E. coli.

V příkladu 4 je popsána rekombinantní exprese MCCS1 v hmyzích buňkách. V příkladu 4 jsou kromě toho uvedena stanovení, kterými se měří aktivita kinasy MCCS1. Příklad 5 popisuje produkci MCCSl-specifické polyklonální a monoklonální protilátky. V příkladu 6 je popsána imunoprecipitace aktivity spojené s MCCS1 kinasou pocházející z myších varlat. V příkladu 7 se zkouší exprese MCCS1 mRNA v různých lidských tkáních a rakovinných buněčných liniích. V příkladu 8 jsou popsány analýzy MCCS1 mRNA a exprese proteinu v myších varlatech. V příkladu 9 jsou popsány analýzy exprese MCCS1 proteinu v miotických buňkách. V příkladu 10 jsou popsána stanovení substrátů a interagujících proteinů MCCS1. V příkladu 11 jsou popsány modulátory a stanovení používaná v případě modulátorů kinasové aktivity MCCS1.

V příkladu 12 je popsáno komplementační stanovení založené na buňkách zaměřené na identifikaci modulátorů MCCS1 a/nebo ATM a příklad 13 popisuje kinasovou aktivitu ATM.

Příklad 1

Různé cDNA kódující kinasu příbuznou PIK MCCS1 byly izolovány za použití série PCR reakcí.

Přiřazení aminokyselinových sekvencí S. pombe rad3+ (Hari et al., výše uvedená citace) a S. cerevisiae MEČI (Kato et al., výše uvedená citace) se stalo základem pro konstrukci sedmi denegerovaných oligonukleotidů kódujících oblasti nejvyšší homologie/nejnižší degenerace mezi sekvencemi (nebo komplementárních k těmto oblastem) a obsahujících vhodná restrikční místa pro usnadnění klonování amplifikačních produktů. Těchto oligonukleotidů bylo potom použito pro stanovení založené na PCR zaměřené na izolaci příbuzné sekvence člověka.

Nejprve byly PCR amplifikace provedeny na přípravcích cDNA pocházejících z krysích T-buněk, lidských jednojaderných buněk periferní krve (PBMC) a genomové DNA z S. cerevisiae. Pro prvotní amplifikace bylo použito 5 oligonukleotidových párů: oDH15a/oDH16, oDH15b/oDH16, oDH17a/ 0DHI6, oDH15a/oDH17b a oDH15b/oDH17b. Sekvence oligonukleotidových primérů zahrnují inosiny a jsou uvedeny dále, přičemž pro polohy degenerovaných polynukleotidů je použito názvosloví IUPAC.

oDH15a (SEQ ID NO: 5)

5' GCA GAC GGA TCC GGI WCI GAY GGI AAY ΗΊΊ TAY 3' oDH15b (SEQ ID NO: 6)

5' GCA GAC GGA TCC GGI WCI GAY GGI AAY 3'

0DHI6 (SEQ ID NO: 7)

5' GCA GAC GAA TTC RCA RTY RAA RTC IAC RTG 3' oDH17a (SEQ ID NO: 8)

5' GCA GAC GGA TCC AAR TTY

CCI CCI RTI YTI TAY SAR TGG TT 3' oDHI7b (SEQ ID NO: 9)

5' GCA GAC GAA TCC AAC CAY

TSR TAI ARI AYI GGI GGR AAY TT 3’ • ·

Pro PCR se použije reakční směsi skládající se z IX PCR pufru (Perkin Elmer Cetus, Emeryville, Kalifornie, USA), 2 až 3μΜ oDH primerů, l,5mM chloridu manganatého,

200μΜ fosfátů dNTP a 0,5μΜ polymerasy Amplitaq. Reakce se provádí v zařízení Perkin-Elmer Cetus Thermocycler Model 480 za následujících podmínek: denaturace při 94°C po dobu 1 minuty, teplotní hybridizace při 64C po dobu 2 minut a prodlužování při 72°C po dobu 1 minuty (3 cykly). Poté se postup opakuje s teplotní hybridizací při 60°C (3 cykly), při 56°C (3 cykly), dokončí se denaturací při 94°C podobu minuty. Následuje teplotní hybridizace při 54°C po dobu minut a prodlužování při 72C po dobu 1 minuty (30 cyklů). Produkty PCR se oddělí na 2 nebo 4% Tris Acetátu EDTA (TAE) agarosovém gelu a obarví ethidiumbromidem. DNA produkty se vizualizují UV fluorescencí.

Z primárních amplifikaci kvasinkové genomové DNA, cDNA krysích T-buněk a lidské PBMC cDNA, poskytne viditelný amplifikační produkt pouze jediná reakce, a to reakce kvasinkové genomové DNA (oDH17a/oDH16) za vzniku produktu, který má očekávanou velikost v oblasti genu S. cerevisiae MEČI mezi použitými primery. Proto byla provedena další analýza oDH17a/oDH16 amplifikaci za použití krysích T-buněk a PBMC cDNA. Pro odstranění oligonukleotidů a dimerních primerů, které by mohly interferovat s následující PCR reakcí byly primární reakční směsi před reamplifikací purifikovány.

Bylo použito hnízdové (nested) strategie PCR a amplifikace byly opakovány s dvojicemi primerů oDH18a/oDH16 a oDH18b/oDH16 za reakčních podmínek popsaných výše s následujícím uspořádáním cyklu: denaturace 1 minuta při 94°C, teplotní hybridizace 1 minuta při 55°C a prodlužování 30 sekund při 72°C (30 cyklů). Sekvence oligonukleotidových primerů oDH18a a oDH18b zahrnují inosiny a jsou

uvedeny dále, přičemž pro polohy degenerovaných polynukleotidů je použito názvosloví IUPAC.

oDH18a (SEQ ID NO: 10)

5' GCA GAC GGA TCC YTI GGI YTI GGI GAY CGI CA 3' oDH18b (SEQ ID NO: 11)

5' GCA GAC GGA TCC YTI GGI ΥΊΊ GGI GAY AGR CA 3’

Při reamplifikaci primárních reakčních produktů získaných za použití kvasinkové genomové a lidské PBMC cDNA byl pozorován přibližně 90bp produkt (což odpovídá očekávané velikosti amplifikačního produktu v případě použití těchto primerů. Žádný 90bp produkt nebyl pozorován v případě reamplif ikace primárního reakčního produktu cDNA z krysích T-buněk, a proto nebyla tato reakce dále analyzována.

Kromě přibližně 90bp produktu bylo také přítomno několik nespecifických pásů, přestože těchto nespecifických pásů bylo podstatně méně, než když byla reamplifikace provedena s primárním reakčním produktem získaným za použití oDH17a/oDH16. Zatímco přibližně 90bp produkt byl přítomen v reamplifikačních produktech získaných za použití jak oDH18a/oDH16, tak oDH18b/oDH16 a primárního reakčního produktu kvasinkové genomové DNA, fragment o vhodné velikosti byl v případě reamplifikace lidského primárního reakčního produktu PMBC cDNA získán pouze za použití oDH18a/oDH16. Předpokládá se, že tato skutečnost odráží využití kodonu v lidském genu (srovnej primery oDH18a a oDH18b). Přibližně 90bp produkt z reamplifikace primárního reakčního produktu lidské PMBC cDNA za použití oDH18a/oDH16 byl purifikován na gelu a subklonován do klonovacího vektoru pBluescript SKII+ (Stratagene, La Jolla, Kalifornie, USA) a sekvencován.

Analýza sekvence kódované 90bp produktem ukázala, že dedukovaná aminokyselinová sekvence byla podobná sekvenci S. cereviciae MEČI a S. pombe rad3+, ale nebyla s nimi identická. Pro identifikaci větší oblasti kódující sekvence a pro rozšíření porovnání sekvencí byl pro použití při přídavných amplifikačních reakcích syntetizován nedegenerovaný oligonukleotid, jehož sekvence byla označena jako SEQ ID NO; 12

ODH23 5' GACGCAGAATTCACCAGTCAAAGAATCAAAGAG 3'.

Reamplifikace primárního reakčního produktu PBMC cDNA s oDH17a/oDH23 vedla k tvorbě 174bp amplifikačního produktu. Tento fragment byl purifikován, subklonován a sekvencován, jak je to popsáno výše. Počítačová analýza konceptuálního translačního produktu potvrdila jeho vztah (podobnost, ale nikoliv identitu) k MEČI a rad3+. Tohoto fragmentu PCR se použije jako próby pro screening plasmidové knihovny obsahující makrofágovou cDNA za následujících hybridizačních podmínek: inkubace nitrocelulosových filtrů s radioizotopem značenými próbami v médiu 3X SSC, 5X Denhardtův roztok, 0,1% sarkosyl, 20mM pufr na bázi fosforečnanu sodného (pH 6,8), 100 μg/ml jednořetězcové DNA z lososího spermatu po dobu 18 až 24 hodin při 65°C. Promývání bylo prováděno třikrát v 0,2X SSC, 0,1% SDS při 65°C po dobu 30 minut (s výměnami promývacího pufru). Byly izolovány 4 pozitivní klony a u každého z nich byla stanovena nukleotidová sekvence. Počítačová analýza těchto 4 sekvencí ukázala, že se jedná o překrývající se klony pocházející z místa vykazujícího homologii vzhledem ke genu rad3+ z S. pombe. Klon 517 (ATCC 69950) obsahuje 2,8kbp insert. Jeho sekvence DNA je uvedena v SEQ ID NO: 3a příslušná dedukovaná aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 4. Tento klon obsahuje otevřený čtecí rámec kódující aminoterminální zkrácený proteinový produkt z 870 aminokyselin. Shoda • · • ·· · s C-terminální sekvencí rad3+ činí 39 %. Proteinový produkt tohoto cDNA insertu byl označen zkratkou MCCSip.

Sekvence klonu 517 bylo použito pro konstrukci oligonukleotidů mo3 5'-CTAGAGAGCCAAGGAG-3' (SEQ ID NO: 13) a mo6 5'-TCGAGCTATGCTACTAGTGGGC-3' (SEQ ID NO: 14).

Těchto oligonukleotidů bylo použito pro vytvoření próby za použití gelově purifikovaného fragmentu EcoRI pocházejícího z klonu 517, jako templátu. Bylo použito následujících podmínek PCR: 50 ng fragmentu DNA, IX PCR pufr (Perkin-Elmer Cetus), l,5mM chlorid hořečnatý, 200μΜ dATP, dGTP a TTP, ΙμΜ dCTP, 50 μθί a³²P-dCTP, 10 ng/ml každého oligonukleotidů, 1U AmpliTaq (Perkin-Elmer Cetus). Reakce byla provedena v zařízení Perkin-Elmer Cetus Thermocycler Model 480, přičemž počáteční denaturační cyklus byl proveden při 94°C (4 minuty) a potom následovalo 20 cyklů při 94°C (15 sekund)

60°C (15 sekund) a 72°C (30 sekund). Neinkorporované nukleotidy byly odstraněny na sloupci Stratagene Nuc-trap, Push Column.

Jelikož analýzy Northern Blot ukázaly, že exprese mRNA odpovídající klonu 517 je nejvyšší ve varlatech, bylo 10⁶ klonů z cDNA knihovny lidských varlat (Stratagene č. 939202) podrobeno screeningu s próbou vytvořenou pomocí PCR, přičemž bylo získáno 11 klonů. Pro analýzu byly zvoleny dva nejdelší klony HT2 a HT9. HT2 obsahuje 4,7kb insert (odpovídající sekvenci od nukleotidu 2974 ze SEQ ID NO: 30 za sekvencí SEQ ID NO: 1 s ohledem na směr exprese. HT9 obsahuje 5485bp insert (odpovídající nukleotidům 2152 až 7624 ze SEQ ID NO: 30). Analýza nukleotidové sekvence ukázala, že v oblasti společné pro oba dva klony cDNA je

- 26 vložen jediný pár bází T v nukleotidové poloze 3233 HT9. Vložení tohoto nukleotidu způsobuje posun a poté terminaci předvídaného aminokyselinového čtecího rámce a zdá se, že se jedná o omyl zavedený reversní transkriptasou do klonu HT9.

Za účelem izolace klonu obsahujícího přídavný 2,5kb byl podroben screeningu 1 milion klonů z každé ze tří přídavných cDNA knihoven. cDNa knihovna z fetálního lidského mozku (Stratagene č. 93206), cDNA knihovna z lidského srdce (Stratagene č. 936207) a cDNA knihovny z liské aorty (ClonTech Laboratories č. HL1136a, Palo Alto, Kalifornie, USA). Sekvence nejkrajnější 5' oblasti HT9 bylo použito pro konstrukci a syntézu dvou oligonukleotidů

OHT9-1 5'-CCTAGTCCAGTAAAACTTGC-3' (SEQ ID NO: 15) a

OHT9-4 5'-TTTGCGGCCCTTCCAATATC-3' (SEQ ID NO: 16).

Těchto oligonukleotidů bylo použito pro vytvoření 317bp PCR próby za podmínek, kterých bylo použito pro konstrukci próby uvedené výše. Z cDNA knihovny z lidského srdce ani aorty nebyly získány žádné pozitivní klony, zatímco z cDNA knihovny z fetálního liského mozku byly získány 2 pozitivní klony. Jeden z těchto klonů, HFB2, obsahuje 4,5kb cDNA insert zahrnující přibližně 2300 bp přídavné sekvence.

Insert HFB2 odpovídá nukleotidům 1 až 3194 ze SEQ ID NO: 30.

Z klonů HFB2, HT9 a HT2 byla zkonstruována kompozitní cDNA kódující MCCSla. Tyto tři klony byly spojeny. Rozštěpením HFB2 za použití restrikčních enzymů KpnI a Sáli byl vytvořen fragment zahrnující 5' konec tohoto kompozitního klonu. Štěpením HT9 pozicí restrikčních enzymů KpnI a Notl byl vytvořen fragment obsahující 3' konce tohoto kompozitního klonu. Tyto izolované fragmenty byly potom ligovány do • · vektoru pBS SK (Stratagene), který byl před tím rozštěpen restrikčními enyzma Sall a Notl. Oblast fragmentu NT9 obsahující jednonukleotidový insert byla nahrazena fragmentem EcorV obsahující nukleotidy 3174 až 5282 z klonu HT2. Výsledný plasmid obsahující 7621pb insert byl označen názvem pBSHFB2HT2-27 (ATCC 69951). Sekvence DNA tohoto insertu je uvedena v SEQ ID NO: 1 a odpovídající dedukovaná aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 2. Kódující doména této cDNA začíná s ATG v nukleotidové pozici 333 a končí terminačním kodonem v nukleotidové poloze 7560, což předvídá kódující sekvenci 2409 aminokyselin a 265kDa protein. Proteinový produkt tohoto cDNA insertu byl označen zkratkou MCCSla. Následná analýza sekvence tohoto insertu v plasmidu pBSHFB2HT2-27 (ATCC 69951) ukázala sekvenační omyly v SEQ ID NO: 1. Opravená sekvence DNA je uvedena v SEQ ID NO: 23 a odpovídající dedukovaná aminokyselinová sekvence se uvedena v SEQ ID NO: 24. I další analýza sekvence insertu v plasmidu pBSHFB2HT2-27 ukázala sekvenační omyl v SEQ ID NO: 23. V nukleotidové pozici 6317 (SEQ ID NO: 23) byl omylem uveden G a mezi polohami 6338 a 6339 sekvence chybí A. Opravená sekvence DNA MCCSla je uvedena v SEQ ID NO: 30 a příslušná dedukovaná aminokyselinová sekvence je uvedena v SEQ ID NO: 31.

Porovnání předvídané aminokyselinové sekvence MCCSla z částečnou aminokyselinovou sekvencí MCCSip předvídanou z klonu 517 ukázalo přítomnost 70aminokyselinové delece v produktu MCCSla. Aminokyselinová sekvence klonu 517 MCCSip odpovídá aminokyselinám MCCSla v rozmezí polož 1611 až 2410 ze SEQ ID NO: 31. K 70aminokyselinové deleci v MCCSla (tj. deleci 70 aminokyselin, které, pokud by byly vloženy, poskytly by produkt totožný s MCCSip) dochází mezi aminokyselinami 2065 a 2066 ze SEQ ID NO: 31, 17 aminokyselin před (s ohledem na směr exprese) kinasovou doménou. Jelikož si oba klony uchovávají otevřený čtecí rámec, byl klon cDNA • ·

pBSHFB2HT2-27 zřejmě vytvořen z alternativně sestřižené mRNA. Karboxyterminální domény obsahující kinasové domény jsou v klonu MCCSla (aminokyseliny 2083 až 2410 ze SEQ ID NO: 31 a klonu MCCSip (aminokyseliny 543 až 870 ze SEQ ID NO: 4) totožné.

Kompozitní klon obsahující úplnou kódující sekvenci MCCSip (se 70aminokyselinovým insertem) je uveden v SEQ ID NO: 32. Aminokyselinová sekvence dedukovaná z tohoto klonu je uvedena v SEQ ID NO: 33. Tento klon je zkonstruován nahrazením sekvence mezi místem BSTXI, které se štěpí za nukleotidem 3229 a místem Notl v polylinkerové sekvenci u 3'-konce pBSHFB2HT2-27 (SEQ ID NO: 1) sekvencí obsaženou v HT2 mezi místem BstXI a místem Notl u 3' konce HT2. Tento klon tedy obsahuje sekvence, jež jsou identické s nukleotidy MCCSla 1 až 5 159 ze SEQ ID NO: 1 (které kódují aminokyseliny 1 až 1609 ze SEQ ID NO: 2) připojené k sekvencím, jež jsou identické s nukleotidy klonu 517 v poloze 1 až 2610 v SEQ ID NO: 3 (které kódují aminokyseliny 1 až 870 ze SEQ ID NO: 4). Jak již bylo uvedeno výše, následná sekvenční analýza odhalila omyly v nukleotidech 1 až 5159 v SEQ ID NO: 1. Opravená DNA MCCSip a dedukované aminokyselinové sekvence zahrnující stejné opravy, jaké se vyskytují v sekvencích MCCSla SEQ ID NO: 23 a 24, jsou uvedeny jako sekvence SEQ ID NO: 25 a 26. Klon odpovídající SEQ ID NO: 25 představuje cDNA kódující MCCSip kinasu v úplné délce. Další sekvence MCCSip zahrnují opravy chyb, které byly identifikovány při novém sekvenování klonu MCCSla a jsou znázorněny v SEQ ID NO: 32 a 33.

Produkty MCCS1 je možno rozdělit do tří oblastí na základě podobnosti s jinými kinasami příbuznými PIK. Tyto oblasti zahrnují: aminoterminální doménu (MCCSla aminokyseliny 1 až 1081 ze SEQ ID NO: 31 a MCCSip aminokyseliny 1 až 1150 ze SEQ ID NO: 33), oblast, která je podobná rad3+

(MCCSla aminokyseliny 1082 až 2082 ze SEQ ID NO: 31 a MCCSip aminokyseliny 1151 až 2151 ze SEQ ID NO: 33) a doménu PIK (MCCSla aminokyseliny 2083 až 2410 ze SEQ ID NO: 31 a MCCSip aminokyseliny 2152 až 2480 ze SEQ ID NO: 33), která zahrnuje kinasovou doménu. Aminoterminální oblast a oblast rad3+ jsou regulační domény modulující kinasovou aktivitu enzymu a tyto oblasti se podílejí na interakcích s asociovanými proteiny.

Výsledky porovnání nukleotidových a aminokyselinových sekvencí MCCSla a MCCSip se sekvencemi jiných kinas příbuzných PIK a ne-příbuzných PIK je uvedeno v tabulce 1. Konkrétně byl porovnáván 3' konec MCCSla (nukleotidy 6579 až 7652 ze SEQ ID NO: 30, které kódují kinasovou doménu), 3' konec MCCSip (nukleotidy 1627 až 2379 ze SEQ ID NO: 32, které kódují kinasovou doménu), doména rad3+ MCCSla (nukleotidy 3576 až 6578 ze SEQ ID NO: 30) a doména rad3+ MCCSip (nukleotidy 1 až 1626 klonu 517 ze SEQ ID NO: 3) s analogickou oblastí lidského ATM [Savitski et al., výše uvedená citace], humánní DNA-PK [Huntley et al., Cell, 82: 849 až 856 (1995)], lidského FRAP [Brown et al., výše uvedená citace], lidského pllO [Hu et al., Mol. Cell. Biol. 13(12): 7677 až 7688 (1993)], S. cerevisiae MEČI [Weinert et al., Genes Def., 8(6): 652 až 665 (1994)], S. pombe rad3+ [Seaton et al., výše uvedená citace a Hari et al., Cell., 82: 815 až 821 (1995)] a cAMP dependentní protein kinasy (PKA) [Beebe et al., Mol. Endocrinol., 4(3): 465 až 475 (1990)]. V tabulce 1 je pro každou kinasu shoda (totožnost) nukleotidů v procentech uvedena na horní řádce, shoda (totožnost) aminokyselin je uvedena na prostřední řádce a podobnost aminokyselin v % (tj. identické aminokyseliny a konzervativní obměny aminokyselin včetně) je uvedena na spodní řádce. Označení konzervativní obměny, jak se ho používá v této souvislosti označuje biologicky podobné zbytky. Jako příklady konzervativních obměn je možno uvést nahrazení ·· ··· · • · · · · · « ·· · · · · · · · • · · · · · hydrofobního zbytku, jako je zbytek isoleucinu, valinu, leucinu nebo methioninu, jiným takovým zbytkem nebo nahrazení polárního zbytku jiným polárním zbytkem, jako například nahrazení lysinu argininem, kyseliny aspartové kyselinou glutamovou, asparaginu glutaminem apod. Zkratka NS uvedená v tabulce 1 znamená, že příslušná hodnota nebyla stanovena bud z toho důvodu, že nukleotidová sekvence kódující kinasu (tj. rad3+) nebyla veřejně dostupná nebo z toho důvodu, že kinasa (tj. FRAP, ρΙΙΟβ nebo PKA) neobsahuje konkrétně srovnávanou doménu.

····

Tabulka 1 ·· · ·· • « »9 β 9 · · • · · · · · · • « · · ····** • ♦ -· · · ·

Protein kinasa	MCCSla/MCCSljS kinasová doména	MCCSla rad3 + doména	MCCS1/3 rad3+ doména
S. pombe rad3 +	ND	ND	ND
	56	22	30
	72	46	53
S. cerevisiae MEČI	51	42	44
45	21	24
	63	46	49
h - ATM	50	41	41
	38	22	24
	60	46	47
h - DNA-PK	43	39	43
	29	19	20
	53	45	49
h - FRAP	45	ND	ND
	37	ND	ND
	61	ND	ND
h - pl 10/3	45	ND	ND
	24	ND	ND
	54	ND	ND
h - PKA	39	ND	ND
	16	ND	ND
	39	ND	ND

Příklad 2

Prostřednictvím stanovení založeného na PCR byl gen MCCS1 zamapován do chromosomu 3. Jako templátu bylo použito lidských/hlodavčích somatických buněčných hybridů obsahujících různé lidské chromosomální panely dostupné v NIGMS Human Genetic Mutant Cell Repository [Drwinga et al., Genomics, 16: 311 až 314 (1993)].

Pro amplifikací části tohoto genu bylo použito dvou oligonukleotidových primerů oDH23 (SEQ ID NO: 12) a

ODH26 5' TGGTTTCTGAGAACATTCCCTGA 3' (SEQ ID NO: 19), založených na cDNA sekvenci MCCSla. Tyto primery poskytnou 237bp PCR produkty. PCR se provádí za těchto podmínek: 50 ng genomové DNA, 0,5 gg každého z primerů, 200μΜ různé dNTP, l,5mM chlorid hořečnatý, IX PCR pufr (Perkin-Elmer Cetus) a jedna jednotka polymerasy Amplitaq (Perkin-Elmer Cetus) v reakčním objemu 25 μΐ. Vzorky byly denaturovány 4 minuty a potom bylo provedeno 35 cyklů denaturace (45 sekund), teplotní hybridizace (30 sekund) a prodlužování (45 sekund) v zařízení Model 480 Cetus Thermocycler. 5 μΐ výsledného produktu PCR bylo podrobeno elektroforéze na 3% agarosovém gelu a obarveno ethidiumbromidem. DNA odpovídající hybridu lidského/hlodavčího chromosomu 3 poskytla pozitivní amplifikační produkt.

Při druhém souboru amplifikačních reakcí bylo stejných oligonukleotidových primerů použito pro sublokalizaci genu MCCS1 do specifické oblasti chromosomu 3. Templáty pro tyto amplifikace zahrnovaly vzorky DNA od pacientů s omezeným chromosomem 3 [Leach et al., Genomics 24: 549 až 556 (1994)]. Amplifikace byly prováděny způsobem popsaným v předcházejícím odstavci. Profil pozitivních amplifikačních produktů zúžil lokalizaci do intervalu q21 až q25.1.

Příklad 3

Polynukleotidy kódující karboxyterminální části kinasy MCCSip příbuzné PIK byly exprimovány rekombinantními technikami v E. coli.

Byly zkonstruovány dva expresní plasmidy E. coli exprimující buď karboxyterminální aminokyselinový zbytek 423 nebo 571 kinasy v expresním/purifikačním systému s fúzovaným proteinem Pinpoint (Promega, Madison, Wisconsin, USA). Použitý postup lze v krátkosti popsat takto: sekvence DNA kódující karboxyterminální část kinasy (nukleotidy 1339 až 2630 nebo nukleotidy 898 až 2630 ze SEQ ID NO. 3) se fúzují do rámce s karboxylovým koncem 13kDa peptidu pocházejícího z transkarboxylasového komplexu Propionibacterium shermanii. Tato oblast podléhá biotinaci v E. coli, a tedy poskytuje prostředek pro monitorování exprese a purifikace fúzovaných proteinů. Exprese se pohání tac promotorem v pinpointu

Xa3. Exprese fúzovaného proteinu se indukuje 0,lmM IPTG a potvrdí za použití streptavidin alkalické fosfatasy za použití formátu pseudo-Western podle instrukcí výrobce.

Příklad 4

Rekombinantní verze MCCSl mohou být také exprimovány v kvasinkách nebo hmyzích buňkách SF9 za použití baculovirového expresního systému. Kinasa FRAP byla exprimována, purifikována a byla enzymaticky účinná po expresi v systému baculoviru (Brown et al., výše uvedená citace).

Kódující oblast MCCSl se fúzuje u aminokonce k heterologní peptidové sekvenci, jako značící (tag) sekvenci

FLAG • ·

·· ·

MDYKDDDDK (SEQ ID NO: 20) nebo šestihistidinové značce (tag) a rekonstruuje do vhodných vektorů. Po expresi v hmyzích buňkách se použije monoklonální protilátky rozpoznávající značku FLAG (Eastman Kodak, Rochester, New York, USA) pro purifikaci velkých množství fúzovaného proteinu FLAG-kinasa příbuzná PIK). Infikované hmyzí buňky se inkubují 48 hodin a potom podrobí lysí v lysačním pufru (25mM 2-glycerolfosfát, 50mM fosforečnan sodný o pH 7,2, 0,5% Triton-X 100, 2mM EDTA, 2mM EGTA, 25mM fluorid sodný, ΙΟΟμΜ vanadičnan sodný, lmM PMSF, 1 μg/ml leupeptin, 1 μg/ml pepstatin, lmM benzamidin a 2mM DTT). Exprimované fúzované proteiny FLAG se purifikují na sloupci afinitní pryskyřice M2 (Eastman Kodak) obsahující anti-FLAG protilátku. Sloupec se promyje 20 sloupcovými objemy lysačního pufru, 5 objemy 0,5M chloridu lithného, 50mM Tris o pH 7,6 a lmM DTT a potom se eluuje budf 0,lM glycinem o pH 3,0 s následující okamžitou neutralizací, nebo se provede kompetitivní eluce za použití peptidu FLAG. V případě proteinů značených 6 histidiny se pro purifikaci proteinu použije Ni-NTA agarosy (Qiagen).

Krátce po podání přihlášky USSN 08/558,666 popsali Antony M. Carr a jeho spolupracovníci (osobní sdělení) gen identifikovaný jako ATR. ATR zřejmě kóduje stejný nebo blízce příbuzný protein MCCS1, což vyplývá z porovnání aminokyselinových sekvencí ATR a MCCS1. Sekvence DNA ATR je uvedena jako SEQ ID NO: 28 a dedukovaná aminokyselinová sekence jako SEQ ID NO: 29. Rozdíly mezi ATR a MCCSip zahrnují: ATR obsahuje přídavně 98 aminokyselinových zbytků u N-konce, v nukleotidové poloze 1284 (SEQ ID NO: 32) se vyskytuje konzervativní změna báze z A (ΜΟΟβΙβ) na T (ATR) a v nukleotidové poloze 4176 je přítomna přídavná konzervativní změna báze z C (MCCSip) na T (ATR).

• · · ·

Značka FLAG byla fúzována k aminokonci zkrácené molekuly ATR postrádající prvních 66 aminokyselin ATR. Značka FLAG byla přidána PCR následujícím způsobem: pro PCR reakci se použije oligomerů FLAG-ATR

5'-CGGGATCCGCCATGGACTACAAGGACGATGACAAGATGTTGCTTGATTTC-3' a oligomerů HFB24

5'-CTTAAGCCGCATGAGCACACCGTC-3'.

PCR se provádí za následujících podmínek: 100 ng pcDNAATR (získáno od A. M. Carra) jako templát, IX PCR pufr (Perkin-Elmer Cetus), l,5mM chlorid hořečnatý, 200μΜ každý z dATP, dGTP, dCTP a TTP, 10 ng/μΐ každého z primerů, IU AmpliTaq (Perkin-Elmer Cetus). Reakční směs se denaturuje při 94°C (4 minuty) a potom se provede 30 cyklů při 94°C (30 sekund), 60^eC (30 sekund) a 72°C (30 sekund). Výsledný, přibližně 800bp PCR produkt se štěpí BamHI a Nhel a liguje k lOkb fragmentu savčího ATR exprexního plasmidů, pcDNAATR rozštěpenému BamHI a BstXI spolu se zbytkem ATR kódujících sekvencí obsažených v 2,5kb BstXI až Nhel fragmentu. Sekvenční analýza potvrdí adici značky FLAG. Insertu obsaženého v tomto plasmidů se potom použije pro konstrukci baculovirového expresního plasmidů, který má exprimovat FLAG-značený ATR-trunkát. 5' konec ATR obsažený ve fragmentu BamHI až BstXI a 3' konec ATR obsažený ve fragmentu BstXI až Sáli pocházejícím z pBTM ATR se liguje k baculovirovému expresnímu vektoru, pFB (Gibco/BRL), který byl rozštěpen BamHI a Sáli. Tento plasmid byl označen zkratkou pFMBCCS/PFLAG.

Úplná kódující oblast ATR byla fúzována pomocí PCR u aminokonce k šestihistidinové značce. Při PCR reakci, jejímž účelem bylo přidat šestihistidinovou značku • · ··· ·

k sekvencím kódujícím aminokonec ATR, bylo použito oligonukleotidů MCCS6his

5'-CGGGATCCAGCATGCATCACCATCACCATCACATGGGGGAACATGGGC-3' a FrplR

5'-CATGACCACTGGCCATTCCACACG-3'

PCR byla prováděna za těchto podmínek: Jako templátu bylo použito 100 ng PstA 12ATR (získaného od Antony M. Carra); IX PCR pufr (Perkin-Elmer Cetus); l,5mM chlorid hořečnatý, vždy 200μΜ dATP, dGTP, dCTP a TTP; 10 ng/μΐ každý primer, 1U AmpliTag (Perkin-Elmer Cetus). Reakční směs byla denaturována 4 minut při 94°C a poté bylo provedeno 25 cyklů při 94°C (30 sekund), 60°C (30 sekund) a 72°C (30 sekund). Přibližně 800bp PCR produkt byl rozštěpe BamHI a MscI a ligován ke dvěma jiným fragmentům, lOkb fragmentu z pcDNAATR, rozštěpenému BamHI a BstXI a přibližně 3kb fragmentu MscI až BstXI obsahujícímu zbytek ATR kódující sekvence. Adice šestihistidinové značky byla ověřena analýzou sekvence. Výsledný plasmid kódující molekulu ATR o úplné délce označené šestihistidinovou značkou byl označen jako pcDNA6hísATR.

Pro sestrojení baculovirového expresního plasmidu exprimujícího celou kódující sekvenci ATR byl l,2kb BamHI až Agel fragment z pFBMCCS/PFLAG ligován k BamHI až Agel fragmentu z pcDNA6hisATR. Výsledný plasmid označený jako pFB/HisX6MCCSl byl transformován do E. coli kmene DH5a (Gibco/BRL) za účelem screeningu rekombinantů. Plasmid byl purifikován za použití soupravy Wizard Mini-Prep Kit (Promega) a potom transformován do buněk E. coli aSF9 (Invitrogen) za použití protokolu Cellfectin popsaného firmou Gibco/BRL.

• · · · hodin po transfekci se peleta buněk SF9 a baculovirus produkovaný tranfekovánými buňkami sklidí. Virus se skladuje při 4°C v Graceho úplném médiu s obsahem 10 % FBS, směsi penicilinu a streptomycinu a gentamicinu. Tohoto virového přípravku se použije pro vytvoření zásobního virového přípravku s vysokým titrem (P2). Zásobního virového přípravku P2 se použije pro infekci 50ml kultury buněk SF9. Buňky se shromáždí 48 hodin po infekci a odstředí při nízké rychlosti, aby došlo k peletizaci bez lyse. Buněčná peleta se před lysí skladuje 24 hodin při -20°C. Buňky se podrobí lysi v 5ml lysačním pufru (50mM Tris, pH 8,0; 500mM chlorid sodný, 1% NP40; ΙΟΟμΜ PMSF). Exprese ATR se potvrdí imunoblotem za použití polyklonální protilátky anti-AgDH2, jako próby. Baculovirus FBHisX6 ATR produkoval přibližně 300kDa protein, který byl imunoreaktivní s anti-AgDH2 protilátkami a společně migroval s proteinem v extraktu buněk z myších varlat.

Zásobního virového přípravku P2 bylo také použito pro infekci dvoulitrové kultury buněk SF9. Buňky byly shromážděny 48 hodin po infekci, odstředěny při nízké rychlosti, aby došlo k peletizaci bez lyse a peleta byla skladována při -20°C. Buněčná peleta ze 150 ml kultury byla podrobena lysi v 7,5 ml lysačního pufru (50mM fosforečnan sodný, pH 7,2; 0,5% NP-40; lOmM imidazol, 25mM fluorid sodný, ΙΟΟμΜ vanadičnan sodný; 0,5mM AEBSF; 1 μg/ml leupeptin; 1 μg/ml pepstatin A) a lysát byl inkubován na ledu po dobu 15 minut. Potom byl lysát 30 minut odstřelován při 10 000 x g. Supernatant byl odstraněn a všechna DNA v lysátu získaném z rozbitých jader byla podrobena smykovému namáhání odsátím jehlou číslo 20. Částicová látka byla odstraněna filtrací přes filtr s průměry pórů 0,8 μιη a poté přes filtr s průměry pórů 0,2 μιη. V čirém lysátu byla nastavena koncentrace β-merkaptoethanolu 5mM a chloridu sodného 0,4M. Sloupec Ni-NTA-agarosy o objemu 1 ml (Qiagen) • · · · byl ekvilibrován v pufru A (0,4M chlorid sodný; 5mM βmerkaptoethanol; 0,1% Triton X100, 50mM fosforečnan sodný; lOmM imidazol; 25mM fluorid sodný; ΙΟΟμΜ vanadičnan sodný; 0,5mM AEBSF; 1 μ9/ιη1 leupeptin a 1 μ9/πι1 pepstatin A) a potom byl na sloupec nanesen vyčeřený lysát. Nanášení vzorku bylo prováděno průtokovou rychlostí 0,25 ml/min. Potom byl sloupec promyt 5 ml purfu A a eluován 10 ml pufru A s imidazolovým gradientem 50 až 500mM. Byly sbírány frakce o objemu 0,5 ml a tyto frakce byly zkoušeny na kinasovou aktivitu následujícím způsobem: 5 μΐ každé frakce bylo inkubováno v kinasovém pufru, 10 μθί ³²P-gammaATP, 10μΜ ATP a 5 μg substrátu PHAS-1 (Stratagene) a inkubováno 20 minut při 37°C. Reakční směs byla nanesena na fosfocelulosové rotační sloupce a centrifugována při 2500 x g. Sloupce byly dvakrát promyty 0,5 ml 75mM kyseliny fosforečné a jednou 0,5 ml absolutního ethanolu. Fosfocelulosové disky byly potom přeneseny do scintilačních nádob a byla zaznamenána radioaktivita přenesená do proteinů PHAS-1 v počtech rozpadů za minutu. Aktivita vůči PHAS-1 byla zjištěna ve frakcích 4 až 9 a imunoblotová analýza potvrdila, že také ATR byl přítomen ve stejných frakcích.

Plasmidová DNA kódující MCCS1 byla transformována do diploidního kvasinkového kmene esrl-1

Mata leu2-l his4-4canl ura3 cyh2 ade6 ade2 esrl-1/MAT a Ieu2-27his4 trpí met2 ade2 esrl-1 a buňky byly pěstovány do semilogaritmické fáze v médiu obsahujícím bud galaktosu nebo glukosu. Buňky byly peletizovány a promyty. Všechny stupně byly prováděny při 4°C. Buněčná pasta byla resuspendována v pufru (20mM Tris o pH 8,0, 300mM chlorid sodný, 10% glycerol, 0,lmM PMSF, 0,25 mg/ml pepstatin, leupeptin a aprotinin) a poté byly buňky podrobeny lysi ve francouzském lisu nebo za použití skleně39 • ·· '· ···· ných perel. Po nízkorychlostním otáčení (10K) a vysokorychlostním otáčení (100K) byla lyse ověřena mikroskopicky a supernatant byl nanesen na 1,5 ml sloupci Ni-NTA agarosy (Qiagen, lne., Chatsworth, Kalifornie, USA), který byl předběžně promyt IX pufrem. Sloupec byl promyt 6 objemy sloupce pufru a potom byl stupňovitě eluován 8 ml lOmM, 50mM, lOOmM a 250mM imidazolu v pufru. Frakce byly shromážděny a byla provedena analýza Western za použití 15 μΐ každého elučního píku. Kinasová aktivita byla měřena způsobem popsaným výše.

Příklad 5

Polyklonální a monoklonální protilátky specifické vůči MCCS1 byly vytvořeny za použití standardních technik tohoto oboru.

Byly zkonstruovány dva rozdílné bakteriální expresní plasmidy, pGEXl-MEC a pGEX3-MEC pro rekombinantní produkci částí polypeptidů MCCS1, jakožto produktů fúzovaných ke karboxylovému konci glutathion S-transferasy (GST). Obou plasmidů bylo použito pro vytvoření antigenů AgDH-2 (z pGEXl-MEC) a AgDH-3 (z pGEX3-MEC) pro použití při standardním imunizačním protokolu. p-GEXl-MEC obsahuje EcoRI fragment kódující aminokyselinové zbytky 566 až 870 ze SEQ ID NO: 4, který je fúzován k GST ve vektoru pGEXl (Pharmacia Biotech, Milwaukee, Wisconsin, USA); p-GEX3-MEC obsahuje EcoRI fragment kódující aminokyselinové zbytky 118 až 567 ze SEQ ID NO: 4, který je fúzován k GST ve vektoru pGEX3 (Pharmacia Biotech). Indukce promotoru pGEX tac 0,lmM IPTG vedla k vysoké úrovni exprese každého fúzovaného proteinu v nerozpustné formě (inkluzní tělesa). Po lysi indukovaných kultur ve francouzském lisu byly extrakty z AgDH-2 a AgDH-3 centrifugovány přes 35% roztok sacharosy obsahující O,1M chlorid sodný, 0,01M Tris o pH 7,5 a 0,001M EDTA (STE).

Pelety byly dvakrát promyty a poté resuspendovány v STE.

·· ····

Pro vytvoření polyklonálního antiséra v králících byly AgDH-2 a AgDH-3 dále purifikovány za použití preparativní elektroforézy na SDS polyakrylamidovém gelu a elektroelucí každého antígenu z plátků gelu. Primární imunizace samic novozélandského bílého králíka byla provedena vždy za použití 200 μg každého antígenu smíšeného s úplným Freundovým adjuvantem. Tento prostředek byl podán subkutánní injekcí v několika místech. Následné imunizace byly prováděny za použití 100 μg antígenu smíšeného s neúplným Freundovým adjuvantem přibližně v 21-denních intervalech. Odběry krve byly provedeny po 3., 4. a 5. imunizaci. Analýza Western blot extraktů tkáně lidských varlat ukazázala reaktivitu protilátky proti přibližně 270kDa proteinu v imunním, ale nikoliv preimunním antiséru. Imunní sérum kromě toho ukázalo reaktivitu proti MCCS pinpoint fúzovaným proteinům popsaným v příkladu 3, což představuje důkaz vytvoření MCCS1 specifických protilátek.

MCCSl-specifické protilátky byly purifikovány dále uvedeným způsobem. Přípravky s inkluzními tělesy z AgDH-2 a AgDH-3 byly kopulovány ke kyanogenbromidem (CNBr)-aktivované Sepharose (Pharmacia, Alameda, Kalifornie, USA).

Antigen (2 mg) byl solubilizován v 1% SDS (konečný objem 4 ml) a dialyzován přes noc proti kopulačnímu pufru (0,lM hydrogenuhličitan sodný/0,1% SDS). Ke každému antigenovému přípravku bylo před inkubací s CNBr Sepharose přidáno 0,5 ml 5M chloridu sodného. Lyofilizovaná CNBr Sepharose (0,4 g/ antigen) byla resupendována v lmM kyselině chlorovodíkové a promyta ve fritovém filtru 250 ml lmM kyseliny chlorovodíkové přidané v několika alikvotních dílech během 15 minut. CNBr-Sepharose promytá kyselinou chlorovodíkovou byla potom přenesena do 15ml zkumavky se zaklapovacím uzávěrem a promyta 2 x 5 ml kopulačního pufru. K promyté Sepharose byl potom přidán přípravek s dialyzovaným antigenem, načež následovala inkubace při teplotě místnosti po dobu 1,5 ·· ···· • ·· hodiny na pomalu se otáčejícím kotouči. Sepharose byla jednou promyta 5 ml kopulačního pufru, jednou 10 ml O,1M Tris o pH 8,0 a potom inkubována v 10 ml O,1M Tris o pH 8,0 2 hodiny při teplotě místnosti, aby byly blokovány všechny zbývající reaktivní skupiny pryskyřice. Kopulační účinnost byla podle analýzy SDS-PAGE 60 až 80%. Sloupce s antigenem byly potom promyty 15 ml 6M hydrochloridu guanidinu (pro odstranění nekopulovaného antigenu), 25 ml pufru A (50mM Tris, pH 7,4), 15 ml pufru B (4,5M chlorid hořečnatý/1 mg/ml BSA/50mM Tris o pH 7,4) a potom 50 ml pufru A. Potom bylo 30 ml králičího séra z imunizovaných zvířat (králík 4747 imunizovaný AgDH-3 a králík 4779 imunizovaný AgDH-2) necháno projít sloupcem s příslušným antigenem v průběhu 3 hodin. Potom byly sloupce promyty 20 ml pufru A, 40 ml ÍM hydrochloridu guanidinu a potom ekvilibrovány za použití dalších 20 ml pufru A. Eluce protilátek anti-AgDH-3 a anti-AgDH-2 z příslušných antigenových sloupců byla poté provedena 10 ml pufru B. Byly sbírány lml frakce. Frakce obsahující IgG byly spojeny a dialyzovány proti 1 litru fosforečnanem pufrovaného roztoku chloridu sodného (PBS) po dobu 3 hodin a potom přes noc proti 1 litru PBS s obsahem 35 % glycerolu.

Kopulací 15-aminokyselinového peptidů (zbytky 1359 až 1373) ke Keyhole Limpet Hemocyanin - s použitím EDC způsobem popsaným výrobcem (Pierce) a následujícím injekčním podáním kopulovaného imunogenu králíkům se vytvoří antipeptidové protilátky proti lidskému protenu ATM. Protilátky se nejrpve vysrážejí ze séra (# 6076) stejným objemem nasyceného roztoku chloridu amonného a poté se resupendují a diylazují proti PBS. Afinitní purifikace se provede za použití peptidového sloupce připraveného kopulací antigenního peptidů k Sepharose (Pharmacia) aktivované kyanogenbromidem (podle instrukcí výrobce). Potom se protilážky navážou na peptidový sloupec a promyjí 2M KC1-BPS. Eluce se ·· ····

provede 20 ml S m Nal (v lmM thiosíranu sodném) , který se ihned nato dialyzuje proti PBS.

Pro vytvoření monoklonálních protilátek se samice myši Balb/c imunizují 50 gg AgDH-2 nebo AgDH-3. Další myši se imunizují 25 až 50 gg AgDH-2 nebo AgDH-3 ve spojení se stejným molárním množstvím mAb 61F3B, což je monoklonální protilátka vykazující specifickou reaktivitu vůči GST. Třetí skupina myší se imunizuje plátky polyakrylamidového gelu s SDS, který obsahuje AgDH-2 nebo AgDH-3. Imunogen pro každou skupinu myší se připraví v kompletním Freundově adjuvans a následující posilovači dávky (25 gg) (podávané v intervalech přibližně 21 dnů) se připraví v nekompletním Freundově médiu. Buněčné linie produkující monoklonální protilátky byly izolovány způsobem, který lze v krátkosti popsat takto: Suspenze jednotlivých buněk se vytvoří rozmělněním sleziny imunizovaných myší v séraprostém RPMI 1640, které je doplněno L-glutaminem (2mM), pyrohroznanem sodným (lmM), penicilinem (10 U/ml) a streptomycinem (100 gg/ml) (RPMI, Gibco, Kanada). Suspenze buněk se přefiltruje přes sterilní buněčný cedák (Nitex, velikost otvoru 212 μιη) (Becton Dickinson, Parsippany, New Jersey, USA) a buňky se dvakrát promyj í centrifugací při 200 x g po dobu 5 minut s následným resuspendováním pelety ve 20 ml séraprostého RPMI. Tímto způsobem se připraví thymocyty odebrané třem naivním myším Balb/c.

Myelomární buňky NS-1 uchovávané v logaritmické fázi v RPMI s 11 % fetálního hovězího séra (FBS) (Hyclone Laboratories, lne., Logan, Utah, USA) po dobu 3 dnů před fúzí se 5 minut odstředují při 200 x g a vzniklá peleta se dvakrát promyje způsobem popsaným v předchozím odstavci. Po promytí se objem každé buněčné suspenze upraví na 10 ml séraprostým RPMI a 10 μί vzniklého přípravku se zředí v poměru 10 : 100. Z každého zředěného přípravku se odebere 20 ·· ··· ·

• ·· • · · μΐ a k tomuto vzorku se přidá vždy 20 μΐ 0,4% trypanové modři v 0,85% roztoku chloridu sodného (Gibco), směs se vnese do hemacytometru a změří.

Slezinné buňky (2 x 10⁸) se smísí s 4 x 10⁷ buněk NS-1, směs se odstředí a supernatant se odsaje. Buněčná peleta se rozdruží poklepem na zkumavku, k buňkám se za míchání v průběhu 1 minuty přidají 2 ml 50% roztoku polyethylenglykolu o molekulové hmotnosti 1500 v 75mM HEPES o pH 8,0 a teplotě 37°C (Boehringer Mannheim) a potom v průběhu 7 minut 14 ml séraprostého RPMI. Přidá se dalších 16 ml RPMI a buňky se 10 minut odstřeďují při 200 x g. Supernatant se zahodí a peleta se resuspenduje ve 200 ml RPMI s obsahem FBS (15%), hypoxanthinu sodného (ΙΟΟμΜ), aminopterinu (0,4μΜ), thymidinu (HAT, Gibco) (16μΜ), IL-6 (Mallinckrodt, Folcrost, Persylvánie, USA) (25 U/ml) a 1,5 x 10⁶ thymocytů/ml. Suspenze se rozdělí do 10 96-jamkových ploten s plochým dnem pro tkáňové kultury v množství 200 μΐ/jamka. Buňkám v jamkách se v době mezi fúzí a screeningem 3 až 4 x odsaje přibližně polovina média pomocí jehly č. 18 a toto médium se nahradí výše popsaným médiem, které však obsahuje 10 U/ml IL-6 a neobsahuje thymocyty.

Screening na fúzi se provádí, když buňky dosáhnou 60 až 80% konfluenče (7. až 9. den) za použití ELISA na AgDH-2 versus AgDH-3. Misky Immunlon 4 (Dynatech, Cambridge, MA, USA) se při 4°C přes noc potahují proteinem v 30mM uhličitanovém pufru o pH 9,6. Na každou jamku případně 100 ng proteinu. Misky se blokují 0,5% želatinou z rybí kůže v PBS po dobu 1 hodiny při 37°C (100 μg želatiny na jamku), promyjí 3 x PBS s obsahem Tween 20 (0,05%) (PBST) a přidá se 50 μΐ supernatantu kultury. Po 30-minutové inkubaci při 37°C a promytí, které se provádí výše popsaným způsobem, se přidá 50 μΐ konjugátu křenové peroxidasy a kozího protimyšího IgG/fc (Jackson, ImmunoResearch, West Grove, PA, USA) zředě·· ·· ··· ·

- 44 ·· · ·· ného v poměru 1 : 10 000 pomocí PBST. Misky se inkubují výše popsaným způsobem, čtyřikrát promyjí PBST a přidá se 100 μΐ substrátu obsahujícího 100 μ9/πι1 tetramethylbenzidinu a 0,15 μΐ/ml peroxidu vodíku ve lOOmM octanu sodném o pH 5,5. Barevná reakce se zastaví za 5 až 10 minut přídavkem 50 μΐ 15% kyseliny sírové. Ve čtecím zařízení pro misky se zjistí hodnota A_4go.

hybridomálních vzorků pozitivních při testu ELISA se podrobí screeningu na schopnost imunoblotovat a imunoprecipitovat MCCS z lysátu buněk myších varlat. Imunoblotová analýza za použití extraktu z myších varlat je popsána v příkladu 6. Imunoprecipitace se provádějí takto: Použije se 6% SDS polyakrylamidového gelu, následuje přenos na Immobilon-PVDF ve 192mM glycinu, 25mM Tris bázi, 0,1%

SDS, 20% methanolu a potom se provede blokování (1 hodina v 5% sušeném odtučněném mléku, 20mM Tris o pH 7,5, lOOmM chloridu sodném s 0,1 % Tween 20) a nastříhá se příslušný počet proužků. Primární protilátka (supernatant z jamky) se zředí výše uvedeným blokovacím roztokem a 1 hodinu inkubuje při teplotě místnosti, 4 x promyje v blokovacím roztoku bez mléka, inkubuje v kozím protimyším IgG (H+L) HRP (BioRad č. 170-6516), znovu promyje blokovacím roztokem bez mléka, přenese na reagens NEN Renaissance ECL a 5 minut vyvíjí.

Imunoprecipitace se provádí takto: 50 μΐ hybridomálního supernatantu se 1 hodinu inkubuje na ledu s 300 μg lysátu buněk z varlat (připraveného způsobem popsaným v příkladu 6). Přidá se 30 μΐ 50% suspenze protein A-agarosy (Pierce, Rockford, IL, USA) předem navázané na králičí protimyší můstkovou protilátku (5 μ9/Γβ3^β) (Pierce), načež následuje inkubace při 4’C za současného promíchávání kýváním. Imunitní komplexy se 3 x promyjí v lysačním pufru a potom se komplex antigen/protilátka eluuje vařením v SDS vzorkovém pufru (2% SDS, 20mM Tris, pH 6,8, 20% glycerol, »·»·

0,001% bromfenolová modř). Výsledný supernatant se oddělí na 6% SDS polyakrylamidovém gelu a přenese na Immobilon-PVDF (Millipore). Imunoblot se vytvoří za použití afinitně purifikovaného králičího anti-AgDH-2 polyklonálního antiséra. 4 hybridomy se klonují a charakterizují zkouškami zahrnujícími imunoblotování, imunoprecipitace a imunoprecipitace/působení kinasy způsoby popsanými v příkladu 6. 4 hybridomální buněčné linie se označí šiframi 224B,

224C (ATCC HB 12233), 224F (ATCC HB 12234) a 224G. Všechny čtyři monoklonální protilátky rozpoznávají MCCS1 při imunoblotování a imunoprecipitaci.

Příklad 6

Protein kinasová aktivita spojená s MCCS1 se imunoprecipituje za použití MCCSl-specifických polyklonálních protilátek popsaných v příkladu 5.

Z čerstvé tkáně varlat myší Balb/c se zhotoví extrakty. Rozmělněná varlata se homogenizují na ledu v lysačním pufru (50mM fosforečnan sodný, pH 7,2; 0,5% Triton X-100; 2mM EDTA; 2mM EGTA; 25mM fluorid sodný; 25mM 2-glycerofosfát; lmM fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF); 1 μg/ml leupeptin; 1 μg/ml pepstatin A; 2mM DTT) za použití 10 až 15 zdvihů těsně uloženého homogenizátoru (dounce) a inkubují na ledu po dobu 30 minut. Lysát se odstředí při 13 000 x g (10 minut, 4°C, stolní ultracentrifuga TL-100, Beckman), aby se odstranily nerozbité buňky a jiné nerozpustné látky.

Alikvoty buněčného lysátu se zmrazí v kapalném dusíku a skladují při -70°C. 500 μg extraktu z varlat se inkubuje bud s 5 μg afinitně purifikované anti-AgDH-2 polyklonální protilátky nebo 5 μg purif ikovaného králičího IgG (Zymed, So.,

San Francisco, CA, USA) v 1 ml lysačního pufru po dobu 1 hodiny na ledu v mikrocentrifugačních zkumavkách. K extraktům se přidá 30 μΐ protein A Sepharosových perel (Repligen, Cambridge, MA, USA) (promytých lysačním pufrem) a následuje inkubace dalších 30 minut při 4°C na kyvné podložce. Imunitní komplex/protein A Sepharosové perly se promyjí 4 x 1 ml lysačního pufru, 1 x 1 ml kinasového pufru (25mM HEPES, pH 7,7; 50mM chlorid draselný; lOmM chlorid hořečnatý; 0,1% NP-40; 2% glycerol; lmM DTT) a potom inkubují ve 20 μΐ kinasového pufru s 10 μΰί ATP (50 Ci/ml) po dobu 20 minut při 37’C. Reakce s kinasou se zastaví 20 μΐ 2X SDS vzorkového pufru a směs se zahřeje na 100°C, načež se provede separace na 6% polyakrylamidovém gelu. Gely se fixují směsí 20% methanolu a 7% kyseliny octové a potom, před autoradiografií, vysuší na papíru Whatman 3MM. Zatímco při kontrolních imunoprecipitacích nebyla zjištěna žádná nebo byla zjištěna jen malá fosforylace, imunoprecipitace za použití anti-AgDH-2 protilátky vykazovaly dva hlavní fosforylační pásy přibližně při 300 kDa a 180 kDa. Kromě toho bylo přítomno několik vedlejších fosforylačních produktů, z nichž jeden migroval současně se samotným proteinem MCCS1, což se projevilo při analýze Western blot (popis analýzy Western blot je uveden v příkladu 8). Analýza 300kDa proteinu na fosfoaminokyseliny ukázala přítomnost fosfoserinových zbytků. Přídavkem 5 μg AgDH-2, ale nikoliv AgDH-3, se dramaticky snížila nebo vymizela kinasová aktivita spojená s MCCS1 nalezená v imunoprecipitátech.

Příklad 7

Profil exprese MCCS1 v různých lidských tkáních byl zjišťován pomocí hybridizace Northern blot.

Nylonové membrány obsahující 2 μg podle velikost frakcionované polyA+ RNA z různých lidských tkání byly získány od firmy Clontech Laboratories lne. Postupuje se přesně podle hybridizačniho protokolu dodaného výrobcem, pouze s tím rozdílem, že se poslední promývání provádí při • · · ·

55°C, a nikoliv při 50°C, aby se minimalizovala možnost křížové hybridizace k příbuzným sekvencím. ³²P-značená DNA hybridizační próba se vytvoří pomocí PCR. DNA kódující 30 % karboxyterminálního MCCSla se použije jako templátu pro amplifikaci l,3kb fragmentu za přítomnosti ³²P-dCTP za použití primerů 279-3

5'-TGGATGATGACAGCTGTGTC-3' (SEQ ID NO: 21) a 279-6

5'-TGTAGTCGCTGCTCAATGTC-3' (SEQ ID NO: 22)

Výsledky analýzy Northern blot ukazují, že se MCCS1 exprimuje jako přibližně 9kb mRNA v celé řadě lidských tkání. Nejvyšší hladinu MCCS1 mRNA obsahuje tkáň varlat, přestože se tento transkript také exprimuje v tenkém střevu, vaječnících, prostatě, brzlíku, slezině, srdci, lymfocytech periferní krve, tlustém střevu, mozku, placentě, kosterním svalstvi, ledvinách a slinivce břišní.

Také byla zkoumána exprese MCCS1 mRNA v buněčných liniích lidské rakoviny za použití RNA blotu buněčné linie lidské rakoviny od firmy Clontěch. Tento RNA blot obsahuje RNA z buněčných linií HL-60 (promyelocytická leukémie),

HeLa (karcinom děložního čípku), K562 (chronická myelogenní leukémie), MOLT-4 (lymfoblastová leukémie), Ráji (Burkittův lymfom), SW480 (kolorektální adenokarcinom), A549 (karcinom plic) a G361 (melanom). Analýza Northern blot byla prováděna podle instrukcí výrobce, přičemž hybridizace se prováděla při 65 °C za použití 2,0kb fragmentu Kpnl-Sall z MCCS1 parciálního klonu HFB2. Exprese byla pozorována u buněčných linií HL-60, HeLa, K-562, Ráji, SW480 a G361, přičemž nejvyšší hladina exprese byla zjištěna u buněčné linie G361.

• · ·

Detegovatelná, ale nízká hladina exprese byla pozorována v buněčných liniích MOLT-4 a A549.

Příklad 8

Exprese MCCSl mRNA a proteinu v normálních a ozařovaných myších varlatech a v myších embryích byla měřena in sítu hybridižací, imunobarvením a/nebo imunoblotováním.

In sítu hybridizace

Tkáň varlat normálních a ozářených myších samců Balb/c se nařeže na plátky o tlouštce 6 μιη a zpracuje na preparáty umístěním na sklíčka Superfrost Plus^^R^ (VWR Scientific) a usušením na vzduchu při teplotě místnosti přes noc. Řezy se skladují při -70C, pokud se jich ihned nepoužije. Tkáňové řezy se fixují ve 4% paraformaldehydu (Sigma) v PBS po dobu 20 minut při 4°C, dehydratují se působením 70%, 95% a 100% ethanolu, vždy po dobu 1 minuty při 4°C a nakonec se usuší na vzduchu (30 minut při teplotě místnosti). Potom se preparáty acetylují v roztoku 0,25% (objemově) acetanhydridu (Sigma)/0,lM triethanolaminu o pH 8,0 za míchání při teplotě místnosti po dobu 10 minut, oplachují se 0,2X SSC po dobu 10 minut při teplotě místnosti a za míchání a nakonec se dehydratují způsobem popsaným výše a usuší se na vzduchu. Tkáň se hybridizuje in sítu s digoxigeninem značenou jednořetězcovou mRNA získanou z myší MCCSl DNA pomocí in vitro RNA transkripce, při níž se inkorporuje digoxigen-UTP (Boehringer Mannheim). Značená ribopróba (viz sekvence SEQ ID NO: 27) (1 μg/řez) a diethylpyrokarbonátem (depc)-ošetřená voda se přidá k hybridizačnímu pufru do konečné koncentrace formamidu 50%, chloridu sodného 0,3M, Tris o pH 7,5 20mM, dextransulfátu 10%, Denhardtova roztoku IX, dithiothreitolu (DTT) lOOmM a EDTA 5mM. Na každý řez se nanese 20 μΐ roztoku a preparát se zakryje sterilním

RNasy-prostým krycím proužkem 22 x 22. mRNA jak v řezu, tak v roztoku próby se denaturuje zahříváním preparátů na 85°C po dobu 10 minut v sušárně. Hybridizace se provádí přes noc (12 až 16 hodin) při 50°C.

Po hybridizaci se řezy 1 hodinu oplachují při teplotě místnosti 4X SSC/lOmM DTT, potom 30 minut při 50°C v 50% formamidu/2X SSC/lOmM DTT, 30 minut při 37°C v roztoku 500mM chloridu sodného, lOmM Tris-HCl, lmM EDTA o pH 7,5 (pufr ΝΤΕ), 30 minut při 37°C v lázni RNasy A (Boehringer Mannheim) o koncentraci 10 μg/ml v pufru NTE, 15 minut při 37’C v pufru NTE, 15 minut při teplotě místnosti v 2X SSC, minut při teplotě místnosti v 0,lX SSC a 2 minuty při teplotě místnosti ve lOOmM Tris-HCl, 150mM chloridu sodném o pH 7,5 (pufr 1). Pro detekci značených riboprób se asi 30 minut blokují při teplotě místnosti v roztoku normálního ovčího séra (Harlan Bioproducts for Science, Indianapolis,

IN, USA) (5%) a Tritonu X-100 (Sigma) (0,3%) v pufru 1 za mírného míchání. Poté se na tkáň nanese konjugát ovčí a-digoxigenin - zlato (Goldmark Biologicals, Philipburg, PA, USA) (150 μΐ/řez) a následuje dvouhodinová inkubace při teplotě místnosti. Preparáty se promývají pufrem 1 (3 x 5 minut), sterilní deionizovanou vodou (5x3 minuty), nadbytek kapaliny se z preparátu odstraní odsátím filtračním papírem a na každý řez se nanesou 2 kapky stříbrného zesilovacího roztoku a 2 kapky iniciačního roztoku (Goldmark Biologicals). Chemická reakce se nechá probíhat 23 minut při teplotě místnosti, potom se řezy důkladně opláchnou sterilní deionizovanou vodou, dobarví barvivém Nuclear Fast Red (Vector), znovu opláchnou sterilní deionizovanou vodou, usuší při teplotě místnosti na vzduchu přes noc a upevní těsnicím prostředkem Cytoseal 60 (VWR).

Jak ve varlatech normálních, tak ve varlatech ozářených myší byl pozorován signál v cytoplasmě sterma• · • · · · • ·· · ··· togonií a spermatocytů. Hladina exprese v ozářených varlatech nebyla zvýšena nad hladinu pozorovanou v normálních varlatech.

Imunobarvení

Tkáň varlat normálních myších samců Balb/c se nařeže na plátky o tloušťce 6 gm, zachytí na sklíčcích pro preparáty Superfrost Plus^^R^ (VWR Scientific) a usuší se přes noc při teplotě místnosti. Pokud se řezů ihned nepoužívá, skladují se při -70°C. Řezy se fixují v chladném (4°C) acetonu 10 minut při teplotě místnosti. Když se preparáty vyjmou z acetonové lázně, nechá se aceton z řezů odpařit. Každý tkáňový řez se blokuje 150 μΐ roztoku normálního krysího séra (Harlan Bioproducts) (30%), normálního kozího séra (Vector Laboratories) (5%) a hovězího sérového albuminu (BSA) (Sigma) (1%) v IX TBS 30 minut při teplotě místnosti. Po blokování se roztok opatrně odsaje z řezů filtračním papírem. Blokovacím roztokem se jednotlivě zředí anti-AgDH-3 a anti-AgDH-2-polyklonální protilátka a preimunitní sérum ze stejných králíků v poměru 1 : 50 a 1 : 100 a 100 μΐ zředěného vzorku se nanese na každý tkáňový řez, načež se řezy inkubují při 37°C po dobu 30 minut. Roztok protilátky se opatrně z řezů odstraní odsátím filtračním papírem a nenavázaná protilátka se z řezů odstraní promýváním preparátů IX TBS (3x5 minut).

Nadbytek TBS se z preparátu odstraní odsátím filtračním papírem a na každý řez se nanese 100 μΐ biotinylované kozí protikráličí protilátky obsažení v kitu Elitě Rabbit IgG Vectastain ABC kit (Vector) připravené podle příbalového letáku a řezy se inkubují 15 minut při 37°C. Po inkubaci se preparáty dvakrát promyjí (vždy 5 minut) v IX TBS a na každý řez se nanese 100 μΐ konjugátu streptavidin-zlato (Goldmark Biologicals) zředěného v poměru 1 : 100 roztokem obsahujícím normální krysí sérum (5%) a BSA (1%). Řezy se inkubují 1

9»

9 9 <9 hodinu při teplotě místnosti a potom se preparáty oplachují 3 x IX TBS (s každou lázni po dobu 5 minut) a na dobu 5 minut při teplotě místnosti nanese 100 μΐ 1% glutaraldehydu (Sigma) v pufru TBS. Potom se preparáty oplachují TBS (3 x 5 minut) a sterilní deionizovanou vodou (4x3 minuty). Nadbytek kapaliny se z každého preparátu odsaje filtračním papírem a na každý řez se nanesou 2 kapky stříbrného zesilovacího roztoku a 2 kapky iniciačního roztoku (Goldmark Biologicals). Chemická reakce se nechá probíhat 13 minut při teplotě místnosti, potom se řezy důkladně opláchnou sterilní deionizovanou vodou, dobarví barvivém Nuclear Fast Red (Vector), znovu opláchnou sterilní deionizovanou vodou, usuší se přes noc při teplotě místnosti na vzduchu a upevní těsnicím prostředkem Cytoseal 60 (VWR).

Signál byl detegován ve spermatogoniích a primárních spermatocytech v případě obou polyklonálních protilátek, ale nikoliv v případě preimunitního séra ze stejných zvířat.

Imunoblotování

Čerstvě získaná myší varlata se rozmělní holicí čepelkou v chladném PBS a rozmělněná tkáň se převede na buněčnou suspenzi za použití volně uloženého homogenizátoru (dounce). Buněčná suspenze se povaří se stejným objemem 2X SDS vzorkového pufru. Alikvoty (50 μg) každého extraktu se separují na 6% polyakrylamidovém gelu, následuje přenos na membrány Immobilon (Millipore, Bedford, MA, USA) a analýza na anti-MCCSl-reaktivitu za použití afinitně purifikovaných protilátek z příkladu 5 a HRP-konjugované kozí protikráličí sekundární protilátky a soupravy Renaissance Enhanced Chemiluminiscence Kit (DuPont/Nen, Boston, MA, USA). Extrakty připravené z čerstvých myších varlat obsahují vysokomolekulární látku (asi 294 kDa), která je rozpoznána oběma • · · · · · · ···· • · · · · · · «·« ·· ··· ···· · · afinitně purifikovanými antiséry. Žádná reaktivita vůči tomuto proteinu nebyla pozorována u kteréhokoliv preimunitního séra. Důležité je, že signál získaný z každého afinitně purifikovaného séra byl specificky blokován po preinkubaci protilátky s odpovídajícím imunogenem.

Je možno shrnout, že vysoká hladina MCCS1 mRNA a proteinu byla detegována v myších varlatech, a to ve spermatogoniích a primárních spermatocytěch, tedy buňkách, které jsou v časných stádiích miosy. To naznačuje, že MCCS1 hraje důležitou roli při meiotickém dělení buněk. Miosa je specializovaná forma dělení buněk, která produkuje germinální buňky u vyšších eukaryontů. Miosa se odlišuje od mitosy dvěma charakteristickými vlastnostmi. Zatímco při mitotickém dělení buněk vznikají geneticky totožné buňky obsahující dva od každého chromosomu, miotické dělení buněk má za následek tvorbu buněk obsahujících jeden od každého chromosomu. V časných stádiích miosy, během procesu redukčního dělení se sesterské chromatidy párují a v některých oblastech podléhají reciproční rekombinaci. Během tohoto procesu jsou tyto buňky exponovány zlomům v řetězci DNA. Je pravděpodobné, že buněčná odpověď na zlomy řetězce DNA během miosy je podobná, jako buněčná odpověď, která je pozorována u negerminálních buněk v odpovědi na poškození DNA indukované ozářením. Tato interpretace je dále opodstatněna studiemi, které ukazují, že MEČI je během sporulace regulována na 10- až 20-násobek, což ukazuje, že MCCS1 má, kromě úlohy při opravě DNA, také důležitou úlohu během miosy.

Příklad 9

Za účelem identifikace buněk ve vyvíjejících se varlatech myši, které exprimují MCCS1, byla provedena analýza Western blot na expresi MCCS1 v rámci populace miotických buněk. Extrakty purifikovaných pachytenických spermatocytú, kulatých spermatidů, kondenzujících spermatidů a epididymálních buněk spermatu byly zkoušeny na expresi MCCS1 způsobem popsaným v příkladu 8.

Pachytenické spermatocyty, kulaté a kondenzující spermatidy byly připraveny z vypouzdřených varlat dospělé myši postupnou disociací za použití kolagenasy a trypsinDNasy 1. Buňky byly separovány na oddělené populace na základě sedimentace při jednotkové gravitaci v 2% až 4% BSA gradientu v obohaceném Krebs-Ringerově hydrogenuhličitanovém médiu (Enriched Krebs Ringer Bicarbonate Medium - EKRB). Populace pachytenických spermatocytů a kulatých spermatidů vykazovala vždy alespoň 85% čistotu, zatímco populace kondenzujících spermatidů vykazovala čistotu asi 40 až 50 % (přičemž byla znečištěna především enukleovanými reziduálními tělesy a určitým množstvím kulatých spermatidů). Sperma bylo získáno z cauda epididymides. Purifikované populace spermatogenních buněk byly suspendovány přímo v SDS-vzorkovém pufru s obsahem DTT (40mM) zahřátém na 100°C (5 minut) a množství proteinu v každém vzorku bylo stanoveno postupem Amido-Black.

Nejvyšší hladina proteinu MCCS1 byla nalezena v pachytenických spermatocytech a podstatně nižší hladina byla zjištěna v kulatých spermatidech. V populaci kondenzujících spermatidů byla hladina MCCS1 proteinu ještě nižší, stěží detegovatelné, a to může odrážet přítomnosti kulatých spermatidů v tomto preparátu (viz výše). Analýza Western blot tedy potvrzuje imunocytochemická data a naznačuje roli MCCS1 v miotických buňkách.

» · A · · · · » · · * · · · ···· • · · · · · · ··· ·· ··· AAAA ·· A

Příklad 10

Substráty MCCS1 a proteiny, které interagují s MCCS1 (například členové dráhy kontrolního prvku buněčného cyklu a proteiny lokalizující MCCS1 v buňkách) je možno identifikovat různými zkouškami.

A) Identifikace substrátu

Substráty MCCS1 je možno identifikovat použitím zkoušených sloučenin při zkouškách na kinasovou aktivitu. Kinasa MCCS1 se resuspenduje ve 20 μΐ kinasového pufru (25mM HEPES, pH 7,4, 25mM chlorid draselný, lOmM chlorid hořečnatý, lmM DTT, 2% glycerol, 0,1% NP40, 0,5mM ATP, 10 μθΐ gamma-³²P-ATP) a inkubuje 30 minut buď za přítomnosti nebo za nepřítomnosti 4 μg zkoušené sloučeniny (například kaseinu, histonu H1 nebo vhodného substrátového peptidů). Separace reakčních směsí se provádí na 12% gelu PAGE a potom se gel vysuší na papíru Whatman a provede se autoradiografie. Množství fosfátu (v molech) přeneseného kinasou na zkoušenou sloučeninu se měří autoradiografií nebo scintilací. Přenos fosfátu ukazuje, že zkoušená sloučenina je substrátem pro kinasu.

Protein PHAS-1 byl identifikován jako in vitro substrát pro ATR (příklad 4). PHAS-1 je za tepla a v kyselém prostředí stálý protein, který se fosforyluje na několika místech in vivo v odpovědi na inzulín a růstové faktory. PHAS-1 se váže k mRNA faktoru vázajícímu se na čepičku mRNA cap binding factor, EIF-4E a zabraňuje translaci mRNA upravených čepičkou. Fosforylace PHAS-1 na specifickém serinovém zbytku má za následek disociaci PHAS-1 formy EIF-4E, a tedy uvolnění inhibice translace mRNA upravených čepičkou. Tento mechanismus umožňuje rychlou syntézu proteinu v odpovědi na konkrétní stimul. PHAS-1 může být • · · fosforylován několika protein kinasami in vivo, včetně protein kinasy, která je citlivá na rapamycin. Jelikož je rapamycin-sensitivní protein kinasa, FRAP, příbuzná ATR, bylo by rozumné předpokládat, že bude docházet k překrývání substrátové specificity mezi FRAP a ATR a že PHAS-1 bude substrátem pro obě tyto proteinkinasy in vitro. Pro ověření této hypotézy byl ATR imunoprecipitován z buněčného extraktu myších varlat nebo His-označeného ATR purifikovaného z baculovirem infikovaných buněk SF9 (příklad 4) inkubován s 10 μg PHAS-1 (Stratagene) v kinasovém pufru (25mM HEPES, pH 7,4, 25mM chlorid draselný, lOmM chlorid hořečnatý, lmM DTT, 0,1% NM-40), ΙΟμΜ ATP a a 10 pCi ³²P-gamma-ATP po dobu 20 minut při 37°C. Jelikož je známo, že fosforylovaný PHAS-1 se váže k papíru z fosfocelulosy, reakční směs byla nanesena na rotační sloupce z fosfocelulosy a podrobena centrifugaci při 2500 x g. Sloupce byly promyty 2 x 0,5 ml 75mM kyseliny fosforečné a 1 x 0,5 ml absolutního ethanolu. Disky z fosfocelulosy byly potom přeneseny do scintilačních nádob a byly změřeny a zaznamenány hodnoty reaktivity přenesené do proteinů PHAS-1 (rozpady za minutu). ATR snadno fosforyluje PHAS-1, zatímco negativní kontroly vykazují jen malou nebo nevykazují žádnou fosforylaci PHAS-1. Pro mapování, který zbytek byl fosforylován, byly syntetizovány následující peptidy reprezentující sekvence PHAS-1 obsahující serinové a threoninové zbytky.

Peptid PH-1

MSGGSSCQTPSRAIPATRR (SEQ ID NO: 36)

Peptid PH-2

GDYSTTPGGTLFSTTPGGTRR (SEQ ID NO: 37)

Peptid PH-3

ECRNSPVTKTRR (SEQ ID NO: 38)

Peptid PH-4

GVTSPSSDEPRR (SEQ ID NO: 39)

Peptid PH-5

MEASQSHLRR (SEQ ID NO: 40) ··· · · · · · »· · · · · · · · · · • · · · · · · *·♦ «· ··· ···· ·· ·

Peptid PH-6

RRNSPEDKJRAGG (SEQ ID NO; 41)

Peptid PH-7

GEESQFEMDIRR (SEQ ID NO: 42)

Tyto peptidy se zkoušely při stejné reakci s kinasou za účelem stanovení, který nebo které peptidy jsou fosforylovány ATR. Tohoto nebo těchto peptidů bylo potom použito jako substrátů pro ATR nebo MCCS1 při stanoveních, jako je stanovení popsané v příkladu 11, za účelem identifikace modulátorů.

Stejné reakce s kinasou bylo také použito pro stanovení, zda jsou proteiny, jako je histon H1 (Upstate Biotechnology lne., Waltham, NY, USA) a myelinový bázický protein (Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA), které jsou známými substráty jiných protein kinas, také substráty pro MCCS1 a ATR. Za podmínek tohoto stanovení nebyla zjištěna žádná fosforylace u histonu Hl, ani myelinového bázického proteinu. Kromě toho nebyl při této zkoušce fosforylován ani peptid z p53, o němž je známo, že je substrátem pro DNA-PK.

B) Identifikace interagujících proteinů

Interagující proteiny je možno identifikovat následujícími zkouškami:

První zkouška prováděná podle vynálezu představuje dvouhybridový screening. Dvouhybridový systém byl vyvinut v kvasinkách (Chien et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 88: 9578 až 9582 (1991)) a je založen na funkční in vivo rekonstituci trankripčního faktoru, který aktivuje reporterový gen. Konkrétně se polynukleotid kódující protein, který • · ··· · interaguje s MCCS1 izoluje tak, že se vhodné hostitelské buňky transformují nebo transfekují DNA konstruktem zahrnujícím reporterový gen, který je pod kontrolou promotoru regulovaného transkripčním faktorem obsahujícím vazebnou doménu DNA a aktivační doménu; v hostitelských buňkách se exprimuje první hybridní sekvence DNA kódující první fúzovaný produkt části nebo celé MCCS1 a bud vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru; v hostitelských buňkách se exprimuje knihovna sekvencí druhé hybridní DNA kódující druhý fúzovaný produkt části nebo všech vazebných proteinů putativní MCCS1 a vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru, jež nebyla zavedena do prvního fúzovaného produktu; deteguje se vazba proteinu interagujícího s MCCS1 k MCCS1 v konkrétní hostitelské buňce detekcí produkce produktu reporterového genu v hostitelské buňce; a z této konkrétní hostitelské buňky se izolují sekvence druhé hybridní DNA kódující interagující protein.

V současné době se při provádění této zkoušky přednostně používá promotoru lexA pro pohánění exprese reporterového genu, lacZ reporterového genu, transkripčního faktoru obsahujícího vazebnou doménu DNA lexA a transaktivační doménu GAL4 a kvasinkových hostitelských buněk.

Jiná stanovení pro identifikaci proteinů, které interagují s MCCS1, mohou zahrnovat imobilizaci MCCS1 nebo zkušebního proteinu, detegovatelné značení neimobilizovaného vazebného partnera, společnou inkubaci vazebných partnerů a stanovení množství navázaného značícího činidla. Navázané značící činidlo ukazuje, že zkoušený protein interaguje s MCCS1.

Jiný typ stanovení, kterým se identifikují proteiny interagující s MCCS1, zahrnuje imobilizaci MCCS1 nebo jejího fragmentu na pevném nosiči, který je potažen (nebo který je napuštěn) fluorescentním činidlem, značení zkoušeného

proteinu sloučeninou schopnou excitovat fluorescentní činidlo, kontaktování imobilizovaného MCCS1 se značeným zkoušeným proteinem, detekci světelné emise fluorescentního činidla a identifikaci interagujících proteinů, jakožto zkoušených proteinů vyvolávajících emisi světla fluorescentního činidla. Alternativně je při této zkoušce možno imobilizovat putativní interagující protein a značit MCCS1.

Příklad 11

Modulátory MCCS1 zahrnují varianty MCCS1 a jiné molekuly. Tyto modulátory mohou ovlivňovat MCCS1 kinasovou aktivitu, její umístění v buňce a/nebo její interakci se členy dráhy kontrolního prvku buněčného cyklu. V současné době jsou za přednostní oblasti MCCS1, které představují cíle pro mutaci nebo vývoj selektivních modulátorů, považovány následující čtyři oblasti: MCCSla aminoterminální efektorová doména (aminokyseliny 1 až 1081 ze SEQ ID NO:

31), MCCSip aminoterminální efektorová doména (aminokyseliny 1 až 1150 ze SEQ ID NO: 33), MCCSla rad3+ doména (aminokyseliny 1082 až 2082 ze SEQ ID NO: 31), MCCSlp rad3+ doména (aminokyseliny 1151 až 2151 ze SEQ ID NO: 33), MCSSla PIK doména (aminokyseliny 2083 až 2410 ze SEQ ID NO: 31) a MCSSip PIK doména (aminokyseliny 2152 až 2480 ze SEQ ID NO: 33).

Varianty MCCS1 vykazující mutace v kinasové doméně mohou být užitečné jako radiosensitizační činidla. Do rozsahu vynálezu spadají především mutace spočívající v tom, že se v MCCSla nahradí kyselina aspartová v aminokyselinové poloze 2241, asparagin v aminokyselinové poloze 2246 a kyselina aspartová v aminokyselinové poloze 2260 SEQ ID NO: 31 alaninem nebo methioninem. Také sem spadají odpovídající mutace MCCSip. Analogické mutace v rad3+ genu mají za následek vznik kvasinek, které jsou hypersensitivní vůči radiaci.

·· ···· * ··

Kromě toho se mutace kinasové domény ATM vyskytují u pacientů s AT, což je choroba vyvolávající citlivost vůči ozáření.

Za použití podobných stanovení, jako jsou stanovení výše popsaného typu, se mohou na modulační aktivitu zkoušet dále také kombinatoriální knihovny, peptidy a mimetika peptidů, definované chemické látky, oligonukleotidy a knihovny přírodních produktů.

Zkouška zaměřená na identifikaci modulátorů aktivity kinasy MCCS1 se například provádí tak, že se přípravek obsahující kinasu MCCS1 v kinasovém pufru inkubuje s gamma-³²P-ATP a exogenním substrátem pro kinasu jednak za přítomnosti a jednak za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny a měří se počet molů fosfátu přeneseného na substrát. Tak například se 2 μί 50mM imidazolového elučního vzorku přidají ke kinasovému pufru (viz příklad 6), reakční směs se inkubuje při 37’C po dobu 20 minut, vzorky se analyzují SDS page a poté podrobí autoradiografii nebo analýze Western. Zvýšení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je aktivátorem této kinasy MCCS1. Naopak, snížení počtu molů fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že modulátor je inhibitorem této kinasy MCCS1.

Zkoušení zaměřené na identifikaci sloučenin, které modulují interakci MCCS1 s jinými proteiny se může provést dále uvedeným způsobem: Vhodná hostitelská buňka se transformuje nebo transfekuje konstruktem DNA zahrnujícím reporterový gen, který je pod kontrolou promotoru regulo···· ·· · • · · · • · · · • · · · · • · • ·· · váného transkripčním faktorem obsahujícím vazebnou doménu DNA a aktivační doménu; v hostitelských buňkách se exprimuje první hybridní sekvence DNA kódující první fúzovaný produkt části nebo celé MCCS1 a vazebné domény DNA nebo aktivační domény transkripčního faktoru; v hostitelských buňkách se exprimuje sekvence druhé hybridní DNA kódující část nebo celý protein, který interaguje s MCCS1 a vazebnou doménu DNA nebo aktivační doménu transkripčního faktoru, jež nebyla zavedena do prvního fúzovaného produktu. Účinek zkoušené sloučeniny na interakci mezi MCCS1 a proteinem se provádí detekcí vazby proteinu interagujícího s MCCS1 k MCCS1 v konkrétní hostitelské buňce měřením produkce produktu reporterového genu v hostitelské buňce za přítomnosti nebo za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny; a identifikují se modulační sloučeniny, jako ty sloučeniny, které mění produkci produktu reporterového genu ve srovnání s produkcí produktu reporterového genu za nepřítomnosti modulační sloučeniny. V současné době se při provádění této zkoušky přednostně používá promotoru lexA pro pohánění exprese reporterového genu, lacZ reporterového genu, transkripčního faktoru obsahujícího DNA vazebnou doménu lexA a transaktivační doménu GAL4 a kvasinkových hostitelských buněk.

Jiný typ stanovení pro identifikaci sloučenin, které modulují interakci MCCS1 s interagujícím proteinem, mohou zahrnovat imobilizaci MCCS1 nebo přírodního proteinu interaguj ícího s MCCS1, detegovatelné značení neimobilizovaného vazebného partnera, společnou inkubaci vazebných partnerů a stanovení účinku zkoušené sloučeniny na množství navázaného značícího činidla. Snížení množství navázaného značícího činidla za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s množstvím navázaného značícího činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušené činidlo je inhibitorem interakce mezi MCCS1 a proteinem. Naopak, zvýšení množství navázaného značícího činidla za • · přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s množstvím navázaného značícího činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že putativní modulátor je aktivátorem interakce mezi MCCS1 a proteinem.

Ještě další typ stanovení, kterého se podle vynálezu používá pro identifikaci sloučenin modulujících vazbu mezi MCCS1 a interagujícím proteinem, zahrnuje imobilizaci MCCS1 nebo jejího fragmentu na pevném nosiči, který je potažen (nebo který je napuštěn) fluorescentním činidlem, značení interagujícího proteinu sloučeninou schopnou excitovat fluorescentní činidlo, kontaktování imobilizovaného MCCS1 se značeným interagujícím proteinem za přítomnosti nebo nepřítomnosti zkoušené sloučeniny, detekci světelné emise fluorescentního činidla a identifikaci modulujících sloučenin, jakožto zkoušených sloučeniny, které ovlivňují emisi světla fluorescentního činidla ve srovnání s emisí světla fluorescentního činidla za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny. Alternativně je při této zkoušce možno imobilizovat protein interagující s MCCS1 a značit MCCS1.

Příklad 12

Komplementační zkoušky na bázi buněk pro identifikaci modulátorů MCCS1 nebo ATM jsou popsány dále.

Při jednom typu stanovení se hostitelské buňky (například kvasinkové buňky esrl-1) transformují DNA kódující MCCS1 způsobem popsaným v příkladu 4. Kvasinkový kmen esrl-1 je normálně citlivý vůči působení ultrafialového světla, ale kvasinkové buňky esrl-1 exprimující MCCS1 nebo ATR již citlivé vůči působení UV světla nejsou. Transformované kvansinkové buňky se exponují zkoušeným sloučeninám a stanovuje se účinek zkoušených sloučenin na UV sensitivitu transformovaných hostitelských buněk. Pokud jsou • · · · zkoušené sloučeniny inhibitory aktivity MCCS1 nebo ATR, vrací UV sensitivitu buňkám esrl-1 transformovaným v MCCSl. Alternativně se místo kvasinkových buněk esrl-1 používá jako hostitelských buněk dvojnásobných mutantních kvasinkových buněk esrl-1 telí. Gen TELÍ je homologní vzhledem k ATM.

TELÍ mutace je popsána v Morrow et al., Cell, 82: 831 až 840 (1995). Podle vynálezu je možno konkrétně také DNA kódující ATM (SEQ ID NO: 34) transformovat mutantní hostitelské kvasinky esrl-1 nebo dvojnásobně mutantní hostitelské kvasinky esrl-1 telí.

V alternativním provedení zahrnují tato stanovení použití klastogenních činidel nebo postupů místo ošetření UV zářením. Může se například použít zpracování infračerveným zářením, hydroxymočovinou nebo činidly poškozujícími DNA. Jako vhodné hostitelské buňky pro taková provedení přicházejí v úvahu buňky, které jsou citlivé vůči takovým alternativním klastogenním činidlům nebo postupům.

Při jiném typu komplementačního stanovení se používá savčích hostitelských buněk, jako jsou buněčné linie pocházející z buněk AT pacientů. Jak to bylo popsáno výše v souvislosti s kvasinkovými buňkami, savčí buňky se transfekují DNA kódující MCCSl, ATR nebo ATM a potom exponují zkoušeným sloučeninám. Pokud jsou zkoušené sloučeniny inhibitory aktivity MCCSl, ATR nebo ATM, navracejí buňkám příslušný fenotyp netransformovaných hostitelských buněk (například citlivost vůči infračervenému záření).

Výše uvedených stanovení se může použít pro identifikaci sloučenin, které inhibují aktivitu MCCSl, ATR a ATM nebo sloučenin, které inhibují aktivitu pouze jednoho z těchto enzymů.

Při alternativním typu stanovení se mohou kvasinkové nebo savčí hostitelské buňky transformovat DNA kódující chimérické polypeptidy zahrnující různé kombinace domén MCCS1 a ATM. MCCS1 a ATM vykazují strukturní podobnosti a chimérické polypeptidy obsahující části MCCS1 a ATM jsou užitečné pro objasnění aktivních míst a vazebných domén jak MCCS1, tak ATM. Polynukleotidy kódující tyto chimérické polypeptidy je možno připravit standardními technikami molekulární biologie, které jsou známy odborníkům v tomto oboru a jejichž příklady jsou uvedeny v tomto popisu. Chimérické polypeptidy se exprimují v hostitelských buňkách a modulátory těchto chimér je možno identifikovat za použití stanovení uvedených v tomto popisu.

Příklad 13

Jak MCCS1, tak ATM se podílí na kontrolních prvcích miosy I. Jelikož, jak bylo ukázáno, MCCS1 vykazuje kinasovou aktivitu, byly provedeny zkoušky zaměřené na zjištění, zda ATM také vykazuje kinasovou aktivitu. Pro stanovení kinasové aktivity ATM byl ATM imunoprecipitován z fibroblastů MRC-5 (ATCC # 171-CCL) polyklonálním antisérem 6076. Buňky MRC-5 jsou diploidní fibroblasty plic lidského embrya. Buňky MRC-5 byly získány od ATCC v pasáži 19 a uchovávány v minimálním esenciálním médiu (MEM) doplněném fetálním hovězím sérem (10%), penicilinem (100 U/ml), streptomycinem (100 mg/ml) a neesenciálními aminokyselinami (lOOmM). Médium a jeho doplňky byly získány od firmy Gibco Life Technologies. Buněčné linie byly uchovávány v inkubátoru nasyceném vodou o teplotě 37°C s 5 % C. Extrakty buněk MRC-5 byly připraveny v lOcm miskách lysí buněk v logaritmické fázi v 0,5 ml lysačního pufru I (50mM fosforečnan sodný, pH 7,2; 0,5% Triton X-100; 2mM EDTA; 2mM EGTA; 25mM fluorid sodný; 25mM 2-glycerofosfát; lmM fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF); 1 μg/ml leupeptin, 1 μς/πιΐ pepstatin A; 2mM DTT) na ledu.

Buňky byly seškrabány z misek pomocí gumové špachtle a potom zpracovány ultrazvukem v zařízení Sonifier 250 (Branson Ultrasonics Corp., Danbury, CT, USA) při 100% výkonu po dobu 90 sekund. Lysáty byly vyčeřeny dvouminutovým odstřeďováním při 4°C v mikrocentrifuze. Předběžné čeření bylo provedeno za použití 10 μg purifikovaného králičího IgG (Zymed) a 30 μΐ suspenze Protein A - agarosy (Pierce). Poté následovala inkubace (60 minut při 4°C za protřepávání směsi). K předčeřeným lysátům bylo přidáno 10 μg afinitně purifikovaného antiséra 6076 (nebo 10 μg antiséra 6076 předběžně blokovaného po dobu 30 minut za použití 0,04 mg peptidu P45) a směs byla 60 minut inkubována na ledu. Imunoprecipitáty byly shromážděny přídavkem 30 μΐ suspenze Protein A - agarosy a následující inkubací (30 minut při 4^eC za protřepávání směsi). Následovalo čtyřnásobné promytí v lysačním pufru I.

Reakce s kinasou byla provedena postupem, který lze v krátkosti popsat takto: imunoprecipitát se jednou promyje kinasovým pufrem (25μΜ HEPES, pH 7,7; 50mM chlorid draselný; lOmM chlorid hořečnatý; 0,1% NP-40; 2% glycerol; lmM DTT) a poté se provede inkubace ve 20 μΐ kinasového pufru obsahujícího 10μΜ ATP + 10 μΟί gamma-³²P-ATP (50 Ci/mmol) během 20 minut při 37°C. Reakce se zastaví přídavkem 20 μΐ 2X SDS vzorkového pufru a pětiminutovým vařením. Provede se separace na 6% polyakrylamidovém gelu s SDS. Gely se vysuší a exponují na rentgenografický film (Kodak, XAR-5) při -80°C přes noc.

lOcm misky s buňkami MRC-5 v logaritmické fázi se jednou opláchnou PBS a potom inkubují v Dulbeccem modifikovaném Eaglově médiu (bez methioninu) s obsahem dialyzovaného fetálního hovězího séra (2 %) po dobu 30 minut. Buňky se označí přídavkem 200 μΟί ³⁵S-methioninu (1000 Ci/mmol TRAN³⁵S-LABEL, ICN Radiochemicals) po dobu 2 hodin. Ozna- 65 • · 9 999

999 9 • · ·· 9 čené buňky se jednou promyjí PBS a před imunoprecipitací se zmrazí při 80°C.

Inkubací imunoprecipitovaných komplexů v kinasovém pufru se získá fosforylovaný produkt s molekulovou hmotností přibližně 350 000, který v polyakrylamidových gelech migruje společně s ATM. Podobné výsledky se získají v případě imunitních komplexů ATR, které jsou imunoprecipitovány antiAgDH-2 (MCCS1) polyklonálním antisérem z příkladu 5. Zdá se tedy, že ATR a ATM jsou schopny aurofosforylace nebo asociace s protein kinasou.

Pro stanovení úlohy ATR a ATM při miose se pro lokalizaci ATR a ATM v miotických chromosomech použije techniky imunobarvení povrchu rozprostřených myších spermatocytů. Použije se protilátek rozpoznávajících ATR a ATM a myších protilátek proti Corl. Corl je složkou axiálních/laterálních prvků synapse chromosomů (Dobson et al., J. Cell. Sci., 107: 2749 až 2760 (1984)). K Corl chromosomálnímu barvení dochází, když se začínají formovat axiální prvky mezi sesterskými chromatidy každého homologu v leptonema nebo miotické profázi, před zahájením synapse. Při synapsi homologních bivalentů se k sobě přiřadí axiální prvky ze dvou homologů a mezi nimi se vytvoří centrální prvek doplňující tuto strukturu, která se označuje názvem synaptonemální komplex (SC).

Když se začínají objevovat krátké úseky Corl, před jakoukoliv známkou synapse, nelze detegovat ani ATR ani ATM. Když homology zahájí synapsi, oba tyto proteiny jsou pozorovány u párovacích vidliček (pairing forks); umístění a chování těchto dvou proteinů se však významně liší. U normálních zygotenních jader je ve stádiu, během kterého dochází k synapsi homologů, ATR pozorován v malých množstvím a přechodně v oddělených ohniscích podél asynaptických ·· ·· ···· • · · ··· · • · ·· · (nepárovaných) os. Když dojde k synapsi homologů, ATR z těchto míst vymizí. V oblastech, ve kterých je synapse zpožděna, je však často v blízkosti proximálních konců autosomálních bivalentů pozorována akumulace ohnisek ATR podél os, u nichž nedošlo k synapsi. ATR byl detegován v podobných místech u těchto dvou axiálních prvků. V jádrech, ve kterých celý autosom nenašel svého homologního pérovací ho partnera, jsou ohniska ATR detegovatelná podél celé délky těchto os, u nichž neproběhla synapse. U samců, u nichž chromosom X nemá žádný homolog, jsou ohniska ATR rozmístěna podél nepárované osy.

Také ATM byl vizualizován v podobě ohnisek a byl poprvé detegován během zygonema při synapsi homologů. Rozmístění ATM se však liší od rozmístění ATR. ATM byl poprvé pozorován podél synaptických os, když přišly do styku homologní autosomální axiální prvky. Během středního pachynema, po dokončení autosomální synapse byla však ohniska ATM pozorována na ose chromosomu X. Lokalizace ATM zůstala zachována v plně synaptovaných bivalentech i v pachynema, což je podstádium, které trvá 3 dny u myších oocytů a 6 dnů u myších spermatocytů. Během pachynema se počet ohnisek postupně snižuje, krátce se ustaluje ve středním pachynema a nakonec mizí ve středním až pozdním pachynema. ATR a ATM protein kinasy tedy hrají důležité a komplementární role v různých stádiích miosy I.

Účast ATR během časné miotické profáze je zřejmě přechodná, zatímto úloha ATM se zdá být delší. Jak ATR, tak ATM však koordinují různé procesy miotické profáze tím, že zajišťují podobné funkce kontrolních prvků.

Výše uvedené ilustrativní příklady se vztahují k provedení vynálezu, kterým se v současné době dává přednost. Odborníkům v tomto oboru je však zřejmé, že může ·· ····

existovat celá řada modifikací a variací vynálezu, přičemž všechny takové modifikace a variace spadají do rozsahu ochrany tohoto vynálezu, pokud se na ně vztahují dále uvedené patentové nároky.

·· ··· ·

SEZNAM SEKVENCÍ (1) OBECNÉ INFORMACE:

(i) PŘIHLAŠOVATEL: ICOS Corporation (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Kinasa příbuzná PIK kontrolního prvku buněčného cyklu, látky a způsoby (iii) POČET SEKVENCÍ: 42 (iv) ADRESA PRO KORESPONDENCI:

(A)	ADRESÁT:	Marshall, 0'Toole, Gerstein, Murray & Borun
(B)	ULICE:	6300 Sears Tower, 233 S. Wacker Drive
(C)	MĚSTO:	Chicago
(D)	STÁT:	Illinois
(E)	ZEMĚ:	USA
(F)	PSČ:	60606 (ZIP)

(v) STROJNĚ ČITELNÁ FORMA:

(A) TYP MEDIA: Disketa (B) POČÍTAČ: IBM PC kompatibilní (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentin Release #1.0, verze #1.30 (vi) DATA VZTAHUJÍCÍ SE K TÉTO PŘIHLÁŠCE:

(A) ČÍSLO PŘIHLÁŠKY: PV 2547-97 (B) DATUM PODÁNÍ: 11. 8. 1997 (C) ZATŘÍDĚNÍ:

(viii) INFORMACE O ZÁSTUPCI:

(A) JMÉNO: Advokátní a patentová kancelář

Čermák-Hořej š-Vrba (C) SPISOVÁ ZNAČKA: 01-1656-97-Če (ix) INFORMACE O TELEKOMUNIKAČNÍM SPOJENÍ (A) TELEFON: 02/24 211 678 (B) TELEFAX: 02/2421 4187 (C) TELEX: 122 991 APPC (2) INFORMACE O SEQ ID NO:1:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7621 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETÉZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: pBSHFB2HT2-27 (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 333..7559 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 1:

CTTGTGAAGA	GAATGTTTTA	CACTCTTGTT	agtgaagttt	ATTCTTTAAA	AGTCAATCGT	60
CAAGGATTTA	GCAKaTGAAT	TAGCACTTCG	gatatacttg	TTTATTTAAT	atcttttttg	120
TTTATTTCAA	AGAATTCAGT	AATTGGATCA	taacgagact	TCTGCGGATT	GCAGCAACTC	180
CCTCCTGTCA	TTTGTTACAC	AAGAAAATCT	gtgaagtcat	CTGTTCATTA	TTATTTCTTT	240
TTAAAAGCAA	GAGTCCTGCT	atttttgggg	tactcacaaa	AGAATTATTA	CAACTTTTTG	300

AAGACTTGGT

TTACCTCCAT

AGAAGAAATG

TG ATG GGT

CAT GCT GTG

GAA TGG

Met 1

Gly His Ala Val 5

Glu

Trp

CCA

GTG

GTC

ATG

AGC

CGA

TTT

TTA

AGT

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

Pro

Val

Val

Mec

Ser

Arg

Phe

Leu

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu

His

Met

Gly

10

15

20

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

CCT

TTG

CAG

TTG

ATG

AGT

ATG

CAA

AAA

TTA

GAA

Tyr

Leu

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu

Gin

Leu

Met

Ser

Met

Gin

Lys

Leu

Glu

25

30

35

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

TTA

TTA

ACG

GTT

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

Phe

Ile

Glu

Val

Thr

Leu

Leu

τη ι-

Val

Leu

Thr

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile

4 0

45

50

55

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

στό

TTA

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

Val

Phe

Phe

Arg

Arg

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys

Val

60

65

70

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

Leu

Leu

Glu

Tyr

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile

Ser

Phe

75

80

85

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

Leu

Thr

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

90

95

100

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu

Glu

Leu

Leu

Lys

His

Leu

Val

Glu

Met

105

110

115

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys

Leu

Tyr

Glu

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

120

125

130

135

AAG

ACA

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro

Phe

Glu

Ala

Glu

Ala

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro

140

145

150

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

Val

Tyr

Leu

Asn

Met

Leu

Leu

Glu

Lys

Leu

Cys

Val

Met

Phe

Glu

Asp

155

160

165

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

CTT

AAG

TCT

GAT

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

Gly

Val

Leu

Met

Arg

Leu

Lys

Ser

Asp

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

170

175

180

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

Val

Pro

Ala

Gly

Tyr

Glu

Ser

185

190

195

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

TAT

GTG

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

200

205

210

215

353

401

449

497

545

593

641

689

737

785

833

881

929

977 • · · · · ·

TTG Leu

GAT Asp

GTG Val

CTT Leu

GGA Gly 220

ATT GAG GTA GAT GCA GAG

TAC Tyr

TTG TTG GGC CCA

1025

Ile

Glu

Val

Asp

Ala 225

Glu

Leu

Leu

Gly 230

Pro

CTT

TAT

GCA

GCT

TTG

AAA

ATG

GAA

AGT

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

1073

Leu

Tyr

Ala

Ala 235

Leu

Lys

Met

Glu

Ser 240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu 245

Glu

Ile

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

1121

Gin

Cys

Gin 250

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn 255

Leu

Ser

Ser

Asn

Ser 260

Asp

Gly

Ile

TCA

ccc

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

1169

Ser

Pro 265

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu 270

Ser

Ser

Ser

Leu

Asn 275

Pro

Ser

Lys

Arg

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

1217

Al 3 2Θ0

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu 285

Glu

Ile

Lys

His

Val 290

Asp

Met

Asn

Gin

Lys 295

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

1265

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser 300

Ala

Leu

Lys

Gin

Lys 305

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin 310

Ile

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

1313

Ser

Leu

Glu

Tyr 315

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn 320

Pro

Val

Ile

Glu

Met 325

Leu

Glu

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

1361

Gly

Ile

Ala 330

Val

Val

Leu

Gin

Leu 335

Thr

Ala

Leu

Cys

Thr 340

Val

His

Cys

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

1409

Ser

His 345

Gin

Asn

Met

Asn

Cys 350

Arg

Thr

Phe

Lys

Asp 355

Cys

Gin

His

Lys

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

1457

Ser 360

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser 365

Val

Val

Ile

Thr

Trp 370

Met

Ser

Leu

Asp

Phe 375

TAC

ACA

ACA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

AGG

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

1505

Tyr

Thr

Thr

Val

Leu 380

Lys

Ser

Cys

Arg

Arg 385

Leu

Leu

Glu

Ser

Val 390

Gin

AAA

CGG

ACT

GGA

GGC

AAC

ATT

GAT

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

GCT

1553

Lys

Arg

Thr

Gly 395

Gly

Asn

Ile

Asp

Lys 400

Val

Val

Lys

Ile

Tyr 405

Asp

Ala

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

TCA

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

GAA

1601

Leu

Ile

Tyr 410

Met

Gin

Val

Asn

Ser 415

Ser

Phe

Glu

Asp

His 420

Ile

Leu

Glu

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

GAT

1649

Asp

Leu 425

Cys

Gly

Met

Leu

Ser 430

Leu

Pro

Trp

Ile

Tyr 435

Ser

His

Ser

Asp

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

TTA

1697

Asp 440

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu 445

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala 450

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu 455

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

TGT

1745

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser 460

Asp

Ser

Tyr

Ser

Pro 465

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg 4 70

Cys

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

AGA

1793

Val

Phe

Leu

Leu 475

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg 480

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu 485

Trp

Arg

• · ♦ · · ·

ACA GCA GTT

TAC AAC Tyr Asn

TGG Trp

GCC Ala

CTG Leu 495

CAG AGC TCC

CAT GAA GTA

ATC Ile

CGG Arg

1841

Thr

Ala

Val 490

Gin

Ser

Ser

His

Glu 500

Val

GCT

AGT

TGT

GTT

AGT

GGA

TTT

TTT

ATC

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

TCT

1889

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

Ile

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

505

510

515

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

TCT

1937

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

Ile

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

520

525

530

535

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

TCT

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

TGT

1985

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

540

545

550

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

TTC

2033

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

555

560

565

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

ACT

2081

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

570

575

580

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

AAG

2129

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

Gin

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

Cys

Lys

585

590

595

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

CTT

2177

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

Lys

Ile

Pro

Ser

Pro

Val

Lys

Leu

600

605

610

615

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

AGA

2225

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn

Leu

His

His

Leu

Cys

Lys

His

Leu

Asp

Phe

Arg

620

625

630

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

TTA

2273

Glu

Asp

Glu

Thr

Asp

Val

Lys

Ala

Val

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu

Asn

Leu

635

640

645

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

ATC

2321

Met

Glu

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp

Val

Arg

Val

Ala

Phe

Ser

Gly

Asn

Ile

650

655

660

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

GAG

2369

Lys

His

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu

Asp

Ser

Glu

Asp

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu

665

670

675

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

GCA

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

TCA

2417

Leu

Phe

Val

Leu

Arg

Met

Lys

Glu

Ala

Tyr

Thr

His

Ala

Gin

Ile

Ser

680

685

690

695

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

TTG

ATT

CTT

ACA

ACA

GGG

GAT

ATT

2465

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp

Ile

700

705

710

GGA

AGG

GCC

GCA

AAA

GGA

GAT

TTG

GTA

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

TTA

2513

Gly

Arg

Ala

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu

Val

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu

His

Leu

715

720

725

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

GCA

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

TAC

2561

Leu

His

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Ser

Val

Ser

Gly

Ala

Ala

Tyr

730

735

740

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

GCT

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

AGT

2609

Thr

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

Ala

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

Ser

745

750

755

TTT

TTC

AGC

CAG

TAT

AAG

ΑΛΛ

CCC

ATC

TGT

CAG

TTT

TTG

GTA

GAA

TCC

2657

Phe 760

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys 765

Lys

Pro

Ile

Cys

Gin 770

Phe

Leu

Val

Glu

Ser 775

CTT

CAC

TCT

AGT

CAG

ATG

ACA

GCA

CTT

CCG

AAT

ACT

CCA

TGC

CAG

AAT

2705

Leu

His

Ser

Ser

Gin 780

Met

Thr

Ala

Leu

Pro 785

Asn

Thr

Pro

Cys

Gin 790

Asn

GCT

GAC

GTG

CGA

AAA

CAA

GAT

GTG

GCT

CAC

CAG

AGA

GAA

ATG

GCT

TTA

2753

Ala

Asp

Val

Arg 795

Lys

Gin

Asp

Val

Ala 800

His

Gin

Arg

Glu

Met 805

Ala

Leu

AAT

ACG

TTG

TCT

GAA

ATT

GCC

AAC

GTT

TTC

GAC

TTT

CCT

GAT

CTT

AAT

2801

Asn

Thr

Leu 810

Ser

Glu

Ile

Ala

Asn 815

Val

Phe

Asp

Phe

Pro 820

Asp

Leu

Asn

CGT

TTT

CTT

ACT

AGG

ACA

TTA

CAA

GTT

CTA

CTA

CCT

GAT

CTT

GCT

GCC

2849

Arg

Phe 825

Leu

Thr

Arg

Thr

Leu 830

Gin

Val

Leu

Leu

Pro 835

Asp

Leu

Ala

Ala

AAA

GCA

AGC

CCT

GCA

GCT

TCT

GCT

CTC

ATT

CGA

ACT

TTA

GGA

AAA

CAA

2897

Lys 840

Ala

Ser

Pro

Ala

Ala 845

Ser

Ala

Leu

Ile

Arg 850

Thr

Leu

Gly

Lys

Gin 855

TTA

AAT

GTC

AAT

CGT

AGA

GAG

ATT

TTA

ATA

AAC

AAC

TTC

AAA

TAT

ATT

2945

Leu

Asn

Val

Asn

Arg 660

Arg

Glu

Ile

Leu

Ile 865

Asn

Asn

Phe

Lys

Tyr 870

Ile

TTT

TCT

CAT

TTG

GTC

TGT

TCT

TGT

TCC

AAA

GAT

GAA

TTA

GAA

CGT

GCC

2993

Phe

Ser

His

Leu 875

Val

Cys

Ser

Cys

Ser 880

Lys

Asp

Glu

Leu

Glu 885

Arg

Ala

CTT

CAT

TAT

CTG

AAG

AAT

GAA

ACA

GAA

ATT

GAA

CTG

GGG

AGC

CTG

TTG

3041

Leu

His

Tyr 890

Leu

Lys

Asn

Glu

Thr 895

Glu

Ile

Glu

Leu

Gly 900

Ser

Leu

Leu

AGA

CAA

GAT

TTC

CAA

GGA

TTG

CAT

AAT

GAA

TTA

TTG

CTG

CGT

ATT

GGA

3089

Arg

Gin 905

Asp

Phe

Gin

Gly

Leu 910

His

Asn

Glu

Leu

Leu 915

Leu

Arg

Ile

Gly

GAA

CAC

TAT

CAA

CAG

GTT

TTT

AAT

GGT

TTG

TCA

ATA

CTT

GCC

TCA

TTT

3137

Glu 920

His

Tyr

Gin

Gin

Val 925

Phe

Asn

Gly

Leu

Ser 930

Ile

Leu

Ala

Ser

Phe 935

GCA

TCC

AGT

GAT

GAT

CCA

TAT

CAG

GGC

CCG

AGA

GAT

ATC

ATA

TCA

CCT

3185

Ala

Ser

Ser

Asp

Asp 940

Pro

Tyr

Gin

Gly

Pro 945

Arg

Asp

Ile

Ile

Ser 950

Pro

GAA

CTG

ATG

GCT

GAT

TAT

TTA

CAA

CCC

AAA

TTG

TTG

GGC

ATT

TTG

GCT

3233

Glu

Leu

Met

Ala 955

Asp

Tyr

Leu

Gin

Pro 960

Lys

Leu

Leu

Gly

Ile 965

Leu

Ala

TTT

TTT

AAC

ATG

CAG

TTA

CTG

AGC

TCT

AGT

GTT

GGC

ATT

GAA

GAT

AAG

3281

Phe

Phe

Asn 970

Met

Gin

Leu

Leu

Ser 975

Ser

Ser

Val

Gly

Ile 980

Glu

Asp

Lys

AAA

ATG

GCC

TTG

AAC

AGT

TTG

ATG

TCT

TTG

ATG

AAG

TTA

ATG

GGA

CCC

3329

Lys

Met 985

Ala

Leu

Asn

Ser

Leu 990

Met

Ser

Leu

Met

Lys 995

Leu

Met

Gly

Pro

AAA

CAT

GTC

AGT

TCT

GTG

AGG

GTG

AAG

ATG

ATG

ACC

ACA

CTG

AGA

ACT

3377

Lys 100C

His 1

Val

Ser

Ser

Val Arg 1005

Val

Lys

Met

Met Thr 1010

Thr

Leu

Arg

Thr 1015

GGC

CTT

CGA

TTC

AAG

GAT

GAT

TTT

CCT

GAA

TTG

TGT

TGC

AGA

GCT

TGG

3425

Gly

Leu

Arg

Phe

Lys Asp 1020

Asp

Phe

Pro

Glu Leu 1025

Cys

Cys

Arg

Ala Trp 1030

·· ···· * a

GAC Asp

TGC Cys

TTT Phe

GTT CGC Val Arg 1035

TGC Cys

CTG Leu

GAT CAT

GCT TGT

CTG Leu

GGC Gly

TCC CTT CTC Ser Leu Leu 1045

3473

Asp

His 104C

Ala )

Cys

AGT

CAT

GTA

ATA GTA

GCT

TTG

TTA

CCT

CTT

ATA

CAC

ATC

CAG CCT AAA

3521

Ser

His

Val Ile Val 1050

Ala

Leu

Leu 1055

Pro

Leu

Ile

His

Ile Gin Pro Lys 1060

GAA

ACT

GCA

GCT ATC

TTC

CAC

TAC

CTC

ATA

ATT

GAA

AAC

AGG GAT GCT

3569

Glu

Thr Ala 1065

Ala Ile

Phe

His Tyr 1070

Leu

Ile

Ile

Glu Asn 1075

Arg Asp Ala

GTG

CAA

GAT

TTT CTT

CAT

GAA

ATA

TAT

TTT

TTA

CCT

GAT

CAT CCA GAA

3617

Val Gin 1080

Asp

Phe Leu

His Glu 1085

Ile

Tyr

Phe

Leu Pro 1090

Asp

His Pro Glu 1095

TTA

AAA

AAG

ATA AAA

GCC

GTT

CTC

CAG

GAA

TAC

AGA

AAG

GAG ACC TCT

3665

Leu

Lys

Lys

Ile Lys Ala 1100

Val

Leu

Gin

Glu Tyr 1105

Arg

Lys

Glu Thr Ser 1110

GAG

AGC

ACT

GAT CTT

CAG

ACA

ACT

CTT

CAG

CTC

TCT

ATG

AAG GCC ATT

3713

Glu

Ser

Thr

Asp Leu 1115

Gin

Thr

Thr

Leu 112C

Gin 1

Leu

Ser

Met

Lys Ala Ile 1125

CAA

CAT

GAA

AAT GTC

GAT

GTT

CGT

ATT

CAT

GCT

CTT

ACA

AGC TTG AAG

3761

Gin

His

Glu Asn Val 1130

Asp

Val

Arg 1135

Ile

His

Ala

Leu

Thr Ser Leu Lys 1140

GAA

ACC

TTG

TAT AW<

AAT

CAG

GAA

AAA

CTG

ATA

AAG

TAT

GCA ACA GAC

3809

Glu

Thr Leu 1145

Tyr Lys

Asn

Gin Glu 1150

Lys

Leu

Ile

Lys Tyr 1155

Ala Thr Asp

AGT

GAA

ACA

GTA GAA

CCT

ATT

ATC

TCA

CAG

TTG

GTG

ACA

GTG CTT TTG

3857

Ser Glu 1160

Thr

Val Glu

Pro Ile 1165

Ile

Ser

Gin

Leu Val 1170

Thr

Val Leu Leu 1175

AAA

GGT

TGC

CAA GAT

GCA

AAC

TCT

CAA

GCT

CGG

TTG

CTC

TGT GGG GAA

3905

Lys

Gly

Cys

Gin Asp Ala 1180

Asn

Ser

Gin

Ala Arg 1185

Leu

Leu

Cys Gly Glu 1190

TGT

TTA

GGG

GAA TTG

GGG

GCG

ATA

GAT

CCA

GGT

CGA

TTA

GAT TTC TCA

3953

Cys

Leu

Gly

Glu Leu 1195

Gly

Ala

Ile

Asp Pro 1200

Gly

Arg

Leu

Asp Phe Ser 1205

ACA

ACT

GAA

ACT CAA

GGA

AAA

GAT

TTT

ACA

TTT

GTG

ACT

GGA GTA GAA

4001

Thr

Thr

Glu Thr Gin 1210

Gly

Lys

Asp Phe 1215

Thr

Phe

Val

Thr Gly Val Glu 1220

GAT

TCA

AGC

TTT GCC

TAT

GGA

TTA

TTG

ATG

GAG

CTA

ACA

AGA GCT TAC

4049

Asp

Ser Ser 1225

Phe Ala

Tyr

Gly Leu 1230

Leu

Met

Glu

Leu Thr 1235

Arg Ala Tyr

CTT

GCG

TAT

GCT GAT

AAT

AGC

CGA

GCT

CCA

GAT

TCA

GCT

GCC TAT GCC

4097

Leu 124(

Ala 3

Tyr

Ala Asp

Asn Ser 1245

Arg

Ala

Pro

Asp Ser 1250

Ala

Ala Tyr Ala 1255

ATT

CAG

GAG

TTG CTT

TCT

ATT

TAT

GAC

TGT

AGA

GAG

ATG

GAG ACC AAC

4145

Ile

Gin

Glu

Leu Leu Ser 1260

Ile

Tyr

Asp

Cys Arg 1265

Glu

Met

Glu Thr Asn 1270

GGC

CCA

GGT

CAC CAA

TTG

TGG

AGG

AGA

TTT

CCT

GAG

CAT

GTT CGG GAA

4193

Gly

Pro

Gly

His Gin 1275

Leu

Trp

Arg

Arg Phe 1280

Pro

Glu

His

Val Arg Glu 1285

ATA

CTA

GAA

CCT CAT

CTA

AAT

ACC

AGA

TAC

AAG

AGT

TCT

CAG AAG TCA

4241

Ile

Leu

Glu Pro His 1290

Leu

Asn

Thr Arg 1295

Tyr

Lys

Ser

Ser Gin Lys Ser 1300

• · · · · ·

ACC GAT TGG Thr Asp Trp

TCT Ser

GGA GTA

AAG AAG CCA ATT TAC TTA AGT AAA TTG GGT

4289

Gly

Val

Lys Lys 1310

Pro

Ile

Tyr

Leu Ser 1315

Lys

Leu

Gly

1305

AGT

AAC TTT

GCA

GAA

TGG

TCA GCA

TCT

TGG

GCA

GGT TAT

CTT

ATT

ACA

4337

Ser Asn Phe 1320

Ala

Glu

Trp Ser Ala 1325

Ser

Trp

Ala Gly Tyr 1330

Leu

Ile

Thr 1335

AAG

GTT CGA

CAT

GAT

CTT

GCC AGT

AAA

ATT

TTC

ACC TGC

TGT

AGC

ATT

4385

Lys

Val Arg

His

Asp Leu 1340

Ala Ser

Lys

Ile Phe 1345

Thr Cys

Cys

Ser Ile 1350

ATG

ATG AAG

CAT

GAT

TTC

AAA GTG

ACC

ATC

TAT

CTT CTT

CCA

CAT

ATT

4433

Met

Met Lys

His Asp 1355

Phe

Lys Val

Thr Ile 1360

Tyr

Leu Leu

Pro His 1365

Ile

CTG

GTG TAT

GTC

TTA

CTG

GGT TGT

AAT

CAA

GAA

GAT CAG

CAG

GAG

GTT

4481

Leu

Val Tyr Val 1370

Leu

Leu

Gly Cys Asn 1375

Gin

Glu

Asp Gin Gin 1380

Glu

Val

TAT

GCA GAA

ATT

ATG

GCA

GTT CTA

AAG

CAT

GAC

GAT CAG

CAT

ACC

ATA

4529

Tyr

Ala Glu 1385

Ile

Met

Ala

Val Leu 1390

Lys

His

Asp

Asp Gin 1395

His

Thr

Ile

AAT

ACC CAA

GAC

ATT

GCA

TCT GAT

CTG

TGT

CAA

CTC AGT

ACA

CAG

ACT

4577

Asn Thr Gin 1400

Asp

Ile

Ala 1405

Ser Asp

Leu

Cys

Gin Leu Ser 1410

Thr

Gin

Thr 1415

GTG

TTC TCC

ATG

CTT

GAC

CAT CTC

ACA

CAG

TGG

GCA AGG

CAC

AAA

TTT

4625

Val

Phe Ser

Met

Leu Asp 1420

His Leu

Thr

Gin Trp 1425

Ala Arg

His

Lys Phe 1430

CAG

GCA CTG

AAA

GCT

GAG

AAA TGT

CCA

CAC

AGC

AAA TCA

AAC

AGA

AAT

4673

Gin

Ala Leu

Lys Ala 1435

Glu

Lys Cys

Pro His 1440

Ser

Lys Ser

Asn Arg 1445

Asn

AAG

GTA GAC

TCA

ATG

GTA

TCT ACT

GTG

GAT

TAT

GAA GAC

TAT

CAG

AGT

4721

Lys

Val Asp Ser 1450

Met

Val

Ser Thr Val 1455

Asp

Tyr

Glu Asp Tyr 1460

Gin

Ser

GTA

ACC CGT

TTT

CTA

GAC

CTC ATA

CCC

CAG

GAT

ACT CTG

GCA

GTA

GCT

4769

Val

Thr Arg 1465

Phe

Leu

Asp

Leu Ile 1470

Pro

Gin

Asp

Thr Leu 1475

Ala

Val

Ala

TCC

TTT CGC

TCC

AAA

GCA

TAC ACA

CGA

GCT

GTA

ATG CAC

TTT

GAA

TCA

4817

Ser Phe Arg 14Θ0

Ser

Lys

Ala Tyr Thr 1485

Arg

Ala

Val Met His 1490

Phe

Glu

Ser 1495

TTT

ATT ACA

GAA

AAG

AAG

CAA AAT

ATT

CAG

GAA

CAT CTT

GGA

TTT

TTA

4865

Phe

Ile Thr

Glu

Lys Lys 1500

Gin Asn

Ile

Gin Glu 1505

His Leu

Gly

Phe Leu 1510

CAG

AAA TTG

TAT

GCT

GCT

ATG CAT

GAA

CCT

GAT

GGA GTG

TCC

GGA

GTC

4913

Gin

Lys Leu

Tyr Ala 1515

Ala

Met His

Glu Pro 1520

Asp

Gly Val

Ser Gly 1525

Val

AGT

GCA ATT

AGA

AAG

GCA

GAA CCA

TCT

CTA

AAA

GAA CAG

ATC

CTT

GAA

4961

Ser

Ala Ile Arg 1530

Lys

Ala

Glu Pro Ser 1535

Leu

Lys

Glu Gin Ile 1540

Leu

Glu

CAT

GAA AGC

CTT

GGC

TTG

CTG AGG

GAT

GCC

ACT

GCT TGT

TAT

GAC

AGG

5009

His

Glu Ser 1545

Leu

Gly

Leu

Leu Arg 1550

Asp

Ala

Thr

Ala Cys 1555

Tyr

Asp

Arg

GCT

ATT CAG

CTA

GAA

CCA

GAC CAG

ATC

ATT

CAT

TAC CAT

GGT

GTA

GTA

5057

Ala Ile Gin 1560

Leu

Glu

Pro 1565

Asp Gin

Ile

Ile

His Tyr His 1570

Gly

Val

Val 1575

»· ·· · · · · • · · · · • · · · • · · · · ·

	- 75 -	• · « · ·
AAG TCC ATG TTA GGT CTT GGT	CAG CTG TCT ACT GTT	ATC ACT CAG GTG	5105
Lys Ser Met Leu Gly Leu Gly 1500	Gin Leu Ser Thr Val 1505	Ile Thr Gin Val 1590
AAT GGA GTG CAT GCT AAC AGG	TCC GAG TGG ACA GAT	GAA TTA AAC ACG	5153
Asn Gly Val His Ala Asn Arg 1595	Ser Glu Trp Thr Asp 1600	Glu Leu Asn Thr 1605
TAC AGA GTG GAA GCA GCT TGG	AAA TTG TCA CAG TGG	GAT TTG GTG GAA	5201
Tyr Arg Val Glu Ala Ala Trp 1610	Lys Leu Ser Gin Trp 1615	Asp Leu Val Glu 1620
AAC TAT TTG GCA GCA GAT GGA	AAA TCT ACA ACA TGG	AGT GTC AGA CTG	5249
Asn Tyr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Ser Thr Thr Trp Ser Val Arg Leu 1625 1630 1635
GGA CAG CTA TTA TTA TCA GCC	AAA AAA AGA GAT ATC	ACA GCT TTT TAT	5297
Gly Gin Leu Leu Leu Ser Ala 1640 1645	Lys Lys Arg Asp Ile 1650	Thr Ala Phe Tyr 1655
GAC TCA CTG AAA CTA GTG AGA	GCA GAA CAA ATT GTA	CCT CTT TCA GCT	5345
Asp Ser Leu Lys Leu Val Arg 1660	Ala Glu Gin Ile Val 1665	Pro Leu Ser Ala 1670
GCA AGC TTT GAA AGA GGC TCC	TAC CAA CGA GGA TAT	GAA TAT ATT GTG	5393
Ala Ser Phe Glu Arg Gly Ser 1675	Tyr Gin Arg Gly Tyr 1600	Glu Tyr Ile Val 1605
AGA TTG CAC ATG TTA TGT GAG	TTG GAG CAT AGC ATC	AAA CCA CTT TTC	5441
Arg Leu His Met Leu Cys Glu 1690	Leu Glu His Ser Ile 1695	LyG Pro Leu Phe 1700
CAG CAT TCT CCA GGT GAC AGT	TCT CAA GAA GAT TCT	CTA AAC TGG GTA	5489
Gin His Ser Pro Gly Asp Ser Ser Gin Glu Asp Ser Leu Asn Trp Val 1705 1710 1715
GCT CGA CTA GAA ATG ACC CAG	AAT TCC TAC AGA GCC	AAG GAG CCT ATC	5537
Ala Arg Leu Glu Met Thr Gin 1720 1725	Asn Ser Tyr Arg Ala 1730	Lys Glu Pro Ile 1735
CTG GCT CTC CGG AGG GCT TTA	CTA AGC CTC AAC AAA	AGA CCA GAT TAC	5585
Leu Ala Leu Arg Arg Ala Leu 1740	Leu Ser Leu Asn Lys 1745	Arg Pro Asp Tyr 1750
AAT GAA ATG GTT GGA GAA TGC	TGG CTG CAG AGT GCC	AGG GTA GCT AGA	5633
Asn Glu Met Val Gly Glu Cys 1755	Trp Leu Gin Ser Ala 1760	Arg Val Ala Arg 1765
AAG GCT GGT CAC CAC CAG ACA	GCC TAC AAT GCT CTC	CTT AAT GCA GGG	5681
Lys Ala Gly His His Gin Thr 1770	Ala Tyr Asn Ala Leu 1775	Leu Asn Ala Gly 1780
GAA TCA CGA CTC GCT GAA CTG	TAC GTG GAA AGG GCA	AAG TGG CTC TGG	5729
Glu Ser Arg Leu Ala Glu Leu Tyr Val Glu Arg Ala Lys Trp Leu Trp 1785 1790 1795
TCC AAG GGT GAT GTT CAC CAG	GCA CTA ATT GTT CTT	CAA AAA GGT GTT	5777
Ser Lys Gly Asp Val His Gin 1800 1805	Ala Leu Ile Val Leu 1810	Gin Lys Gly Val 1815
GAA TTA TGT TTT CCT GAA AAT	GAA ACC CCA CCT GAG	GGT AAG AAC ATG	5825
Glu Leu Cys Phe Pro Glu Asn	Glu Thr Pro Pro Glu	Gly Lys Asn Met

1320 1825 1830

TTA ATC CAT GGT CGA GCT ATG CTA CTA GTG GGC CGA TTT ATG GAA GAA 5073

Leu Xle His Gly Arg Ala Met Leu Leu Val C-ly Arg Phe Met Glu Glu

1835 1840 1845 • · · · · 4

ACA Thr

GCT Al a

AA.C TTT Asn Phe 1850

GAA Glu

AGC Se r

AAT Asn

GCA ATT Ala Ile 1855

ATG Met

AAA Lys

AAA Lys

TAT AAG Tyr Lys 1860

GAT Asp

GTG Val

5921

ACC

GCG

TGC CTG

CCA

GAA

TGG

GAG GAT

GGG

CAT

TTT

TAC CTT

GCC

AAG

5969

Thr

Ala Cys Leu 1665

Pro

Glu

Trp Glu Asp 1870

Gly

His

Phe Tyr Leu 1875

Ala

Lys

TAC

TAT

GAC AAA

TTG

ATG

CCC

ATG GTC

ACA

GAC

AAC

AAA ATG

GAA

AAG

6017

Tyr Tyr 1ΘΘ0

Asp Lys

Leu

Met Pro 1885

Met Val

Thr

Asp Asn 1890

Lys Met

Glu

Lys 1095

CAA

GGT

GAT CTC

ATC

CGG

TAT

ATA GTT

CTT

CAT

TTT

GGC AGA

TCT

CTA

6065

Gin

Gly

Asp Leu

Ile Arg 1900

Tyr

Ile Val

Leu 1905

His

Phe

Gly Arg

Ser Leu 1910

CAA

TAT

GGA AAT

CAG

TTC

ATA

TAT CAG

TCA

ATG

CCA

CGA ATG

TTA

ACT

6113

Gin

Tyr

Gly Asn Gin 1915

Phe

Ile

Tyr Gin 192C

Ser )

Met

Pro

Arg Met 1925

Leu

Thr

CTA

TGG

CTT GAT

TAT

GGT

ACA

AAG GCA

TAT

GAA

TGG

GAA AAA

GCT

GGC

6161

Leu

Trp

Leu Asp 1930

Tyr

Gly

Thr

Lys Ala 1935

Tyr

Glu

Trp

Glu Lys 1940

Ala

Gly

CGC

TCC

GAT CGT

GTA

CAA

ATG

AGG AAT

GAT

TTG

GGT

AAA ATA

AAC

AAG

6209

Arg

Ser Asp Arg 1945

Val

Gin

Met Arg Asn 1950

Asp

Leu

Gly Lys Ile 1955

Asn

Lys

GTT

ATC

ACA GAG

CAT

ACA

AAC

TAT TTA

GCT

CCA

TAT

CAA TTT

TTG

ACT

6257

Val Ile 1960

Thr Glu

His

Thr Asn 1965

Tyr Leu

Ala

Pro Tyr 1970

Gin Phe

Leu

Thr 1975

GCT

TTT

TCA CAA

TTG

ATC

TCT

CGA ATT

TGT

CAT

TCT

CAC GAT

GAA

GTT

6305

Ala

Phe

Ser Gin

Leu Ile 1980

Ser

Arg Ile

Cys 1985

His

Ser

His Asp

Glu Val 1990

TTT

GTT

GTG CTT

GAT

GGA

AAT

AAT AGC

CAA

GTA

TTT

CTA GCC

TAT

CCT

6353

Phe

Val

Val Leu Asp 1995

Gly

Asn

Asn Ser Gin 2000

Val

Phe

Leu Ala 2005

Tyr

Pro

CAA

CAA

GCA ATG

TGG

ATG

ATG

ACA GCT

GTG

TCA

AAG

TCA TCT

TAT

CCC

6401

Gin

Gin

Ala Met 2010

Trp

Met

Met

Thr Ala 2015

Val

Ser

Lys

Ser Ser 2020

Tyr

Pro

ATG

CGT

GTG AAC

AGA

TGC

AAG

GAA ATC

CTC

AAT

AAA

GCT ATT

CAT

ATG

6449

Met

Arg Val Asn 2025

Arg

Cys

Lys Glu Ile 2030

Leu

Asn

Lys Ala Ile 2035

His

Met

AAA

AAA

TCC TTA

GAG

AAG

TTT

GTT GGA

GAT

GCA

ACT

CGC CTA

ACA

GAT

6497

Lys Lys 2040

Ser Leu

Glu

Lys Phe 2045

Val Gly

Asp

Ala Thr 2050

Arg Leu

Thr

Asp 2055

AAG

CTT

CTA GAA

TTG

TGC

AAT

AAA CCG

GTG

GAA

ATT

CTT GCT

TCT

CTT

6545

Lys

Leu

Leu Glu

Leu Cys 2060

Asn

Lys Pro

Val Glu 2065

Ile

Leu Ala

Ser Leu 2070

CAG

AAA

CCA AAG

AAG

ATT

TCT

TTA AAA

GGC

TCA

GAT

GGA AAG

TTC

TAC

6593

Gin

Lys

Pro Lys 2075

Lys

Ile

Ser

Leu Lys Gly 2080

Ser

Asp

Gly Lys Phe 2005

Tyr

ATC

ATG

ATG TGT

AAG

CCA

AAA

GAT GAC

CTG

AGA

AAG

GAT TGT

AGA

CTA

6641

Ile

Met

Met Cys 2090

Lys

Pro

Lys

Asp Asp 2095

Leu

Arg

Lys

Asp Cys 2100

Arg

Leu

ATG

GAA

TTC AAT

TCC

TTG

ATT

AAT AAG

TGC

TTA

AGA

AAA GAT

GCA

GAG

6689

Met

Glu 2105

Phe Asn

Ser

Leu

Ile Asn Lys 2110

Cys

Leu

Arg Lys Asp 2115

Ala

Glu

- 77 TCT CGT AGA AGA GAA CTT CAT ATT CGA ACA TAT GCA GTT ATT CCA

Ser Arg Arg Arg Glu Leu His Ile Arg Thr Tyr Ala Val Ile Pro

2120 2125 2130

ΖΛΤ GAT GAA TGT GGG ATT ATT GAA TGG GTG AAC AAC ACT GCT GGT

Asn Asp Glu Cys Gly Ile Ile Glu Trp Val Asn Asn Thr Ala Gly

2140 2145 2150

CTA

Leu

2135

6737

TTG

Leu

6785

AGA Arg

CCT Pro

ATT Ile

CTG ACC AAA

CTA TAT AAA GAA AAG GGA GTG TAT ATG ACA

6833

Leu Thr 2155

Lys

Leu

Tyr

Lys Glu 2160

Lys

Gly

Val

Tyr Met 2165

Thr

GGA

AAA

GAA

CTT CGC

CAG

TGT

ATG

CTA CCA

AAG

TCA

GCA

GCT TTA

TCT

6881

Gly

Lys

Glu Leu Arg 2170

Gin

Cys

Met Leu Pro 2175

Lys

Ser

Ala Ala Leu 2180·--

Ser

GAA

AAA

CTC

AAA GTA

TTC

CGA

GAA

TTT CTC

CTG

CCC

AGG

CAT CCT

CCT

6929

Glu

Lys Leu 2185

Lys Val

Phe

Arg Glu 2190

Phe Leu

Leu

Pro Arg 2195

His Pro

Pro

ATT

TTT

CAT

GAG TGG

TTT

CTG

AGA

ACA TTC

CCT

GAT

CCT

ACA TCA

TGG

6977

Ile Phe 2200

His

Glu Trp

Phe Leu 2205

Arg

Thr Phe

Pro Asp 2210

Pro

Thr Ser

Trp 2215

TAC

AGT

AGT

AGA TCA

GCT

TAC

TGC

CGT TCC

ACT

GCA

GTA

ATG TCA

ATG

7025

Tyr

Ser

Ser

Arg Ser Ala 2220

Tyr

Cys

Arg Ser Thr 2225

Ala

Val

Met Ser Met 2230

GTT

GGT

TAT

ATT CTG

GGG

CTT

GGA

GAC CGT

CAT

GGT

GAA

AAT ATT

CTC

7073

Val

Gly

Tyr

Ile Leu 2235

Gly

Leu

Gly

Asp Arg 2240

His

Gly

Glu

Asn Ile 224 5

Leu

TTT

GAT

TCT

TTG ACT

GGT

GAA

TGC

GTA CAT

GTA

GAT

TTC

AAT TGT

CTT

7121

Phe

Asp

Ser Leu Thr 2250

Gly

Glu

Cys Val His 2255

Val

Asp

Phe Asn Cys 2260

Leu

TTC

AAT

AAG

GGA GAA

ACC

TTT

GAA

GTT CCA

GAA

ATT

GTG

CCA TTT

CGC

7169

Phe

Asn Lys 2265

Gly Glu

Thr

Phe Glu 2270

Val Pro

Glu

Ile 2275

Val

Pro Phe

Arg

CTG

ACT

CAT

AAT ATG

GTT

AAT

GGA

ATG GGT

CCT

ATG

GGA

ACA GAG

GGT

7217

Leu Thr 2280

His

Asn Met

Val Asn 2285

Gly

Met Gly

Pro Met 2290

Gly

Thr Glu

Gly 2295

CTT

TTT

CGA

AGA GCA

TGT

GAA

GTT

ACA ATG

AGG

CTG

ATG

CGT GAT

CAG

7265

Leu

Phe

Arg

Arg Ala Cys 2300

Glu

Val

Thr Met Arg 2305

Leu

Met

Arg Asp Gin 2310

CGA

GAG

CCT

TTA ATG

AGT

GTC

TTA

AAG ACT

TTT

CTA

CAT

GAT CCT

CTT

7313

Arg

Glu

Pro

Leu Met 2315

Ser

Val

Leu

Lys Thr 2320

Phe

Leu

His

Asp Pro 2325

Leu

GTG

GAA

TGG

AGT AAA

CCA

GTG

AAA

GGG CAT

TCC

AAA

GCG

CCA CTG

AAT

7361

Val

Glu

Trp Ser Lys 2330

Pro

Val

Lys 233 =

Gly His

Ser

Lys

Ala Pro Leu 2340

Asn

GAA

ACT

GGA

GAA GTT

GTC

AAT

GAA

AAG GCC

AAG

ACC

CAT

GTT CTT

GAC

7409

Glu

Thr 2345

Gly

Glu Val

Val

Asn Glu 2350

Lys Ala

Lys

Thr His 2355

Val Leu

Asp

ATT GAG CAG CGA CTA CAA GGT GTA ATC AAG ACT CGA AAT AGA GTG ACA 7457

Ile Glu Gin Arg Leu Gin Gly Val Ile Lys Thr Arg Asn Arg Val Thr

2360 2365 2370 ) 2375

GGA CTG CCG TTA TCT ATT GAA GGA CAT GTG CAT TAC CTT ATA CAA GAA

Gly Leu Pro Leu Ser Ile Glu Gly His Val Hi6 Tyr Leu Ile Gin Glu

2380 2335 2390

7505 ·· • · • · · · ·

GCT ACT GAT GAA AAC TTA CTA TGC CAG ATG TAT CTT GGT TGG ACT CCA 7553

Ala Thr Asp Glu Asn Leu Leu Cys Gin Met Tyr Leu Gly Trp Thr Pro

2395 2400 2405

TAT ATG TGAAATGAAA TTATGTAAAA GAATATGTTA ATAATCTAAA AGTAAAAAAA 7 609

Tyr Met

AAAAAAAAAA AA 7621 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:2:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2409 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 2:

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

Met

Ser

Met 35

Gin

Lys

Leu

Glu

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Thr

Val

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

Tyr

Glu

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

Lys

Thr·

Leu

Phe

Pro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

Ala 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

Leu

Cys

Val

Met

Phe 165

Glu

Asp

Gly

Val

Leu 170

Met

Arg

Leu

Lys

Ser 175

Asp

Leu

Leu

Lys

Ala 180

Ala

Leu

Cys

His

Leu 185

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu 190

Lys

Phe

Val

Pro

Ala 195

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala 200

Leu

Gin

Val

Arg

Lys 205

Val

Tyr

Val

Arg

Asn 210

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu 215

Leu

Asp

Val

Leu

Gly 220

Ile

Glu

Val

Asp

Ala 225

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly 230

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala 235

Leu

Lys

Met

Glu

Ser 240

• ♦ ·· ·

Met

Glu

Ile

Ile

Glu 245

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin Thr Gin Gin 250

Glu

Asn 255

Leu

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

Arg

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Arg

Thr

Gly

Gly

Asn

Ile

Asp

Lys

385

390

395

400

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

Ser

405

410

415

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

Pro

420

425

430

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

Asp

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

Phe

435

440

445

Al a

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser

450

455

460

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg

465

470

475

•

480

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

Gin

485

490

495

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

Arg

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

Ile

500

505

510

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

Ile

515

520

525

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser

53 0

535

540

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr

545

550

555

560

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

Phe

565

570

575

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

Gin

580

585

590

·· ··<

• fl • · ·· ·

Leu

Lys

Ala 595

Ser

Val

Cys

Lys

Pro 600

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu 605

Lys

Lys

Lys

Ile

Pro 610

Ser

Pro

Val

Lys

Leu 615

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn 620

Leu

His

His

Leu

Cys 625

Lys

His

Leu

Asp

Phe 630

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr 635

Asp

Val

Lys

Ala

Val 640

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu 645

Asn

Leu

Mat

Glu

Asp 650

Pro

Asp

Lys

Asp

Val 655

Arg

Val

Ala

Phe

Ser 660

Gly

Asn

Ile

Lys

His 665

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu 670

Asp

Ser

Glu

Asp

Gly 675

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu 680

Phe

Val

Leu

Arg

Met 685

Lys

Glu

Ala

Tyr

Thr 690

His

Ala

Gin

Ile

Ser 695

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu 700

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile 705

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp 710

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala 715

Lys

Gly

Asp

Leu

Val 720

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu 725

His

Leu

Leu

His

Cys 730

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser 735

Ala

Ser

Val

Ser

Gly 740

Ala

Ala

Tyr

Thr

Glu 745

Ile

Arg

Ala

Leu

Val 750

Ala

Ala

Lys

Ser

Val 755

Lys

Leu

Gin

Ser

Phe 760

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys 765

Lys

Pro

Ile

Cys

Gin 770

Phe

Leu

Val

Glu

Ser 775

Leu

His

Ser

Ser

Gin 780

Met

Thr

Ala

Leu

Pro 785

Asn

Thr

Pro

Cys

Gin 790

Asn

Ala

Asp

Val

Arg 795

Lys

Gin

Asp

Val

Ala 800

His

Gin

Arg

Glu

Met 805

Al a

Leu

Asn

Thr

Leu 810

Ser

Glu

Ile

Ala

Asn 815

Val

Phe

Asp

Phe

Pro 820

Asp

Leu

Asn

Arg

Phe 825

Leu

Thr

Arg

Thr

Leu 830

Gin

Val

Leu

Leu

Pro 835

Asp

Leu

Ala

Ala

Lys 840

Ala

Ser

Pro

Ala

Ala 845

Ser

Ala

Leu

Ile

Arg 850

Thr

Leu

Gly

Lys

Gin 855

Leu

Asn

Val

Asn

Arg 860

Arg

Glu

Ile

Leu

Ile 865

Asn

Asn

Phe

Lys

Tyr 870

Ile

Phe

Ser

His

Leu 875

Val

Cys

Ser

Cys

Ser 880

Lys

Asp

Glu

Leu

Glu 885

Arg

Ala

Leu

His

Tyr 890

Leu

Lys

Asn

Glu

Thr 895

Glu

Ile

Glu

Leu

Gly 900

Ser

Leu

Leu

Arg

Gin 905

Asp

Phe

Gin

Gly

Leu 910

His

Asn

Glu

Leu

Leu 915

Leu

Arg

Ile

Gly

Glu 920

His

Tyr

Gin

Gin

Val 925

Phe

Asn

Gly

Leu

Ser 930

Ile

Leu

Ala

Ser

Phe 935

Ala

Ser

Ser

Asp

Asp 940

Pro

Tyr

Gin

Gly

• ·

9 ·

Pro 945

Arg

Asp

Ile

Ile

Ser 950

Pro

Glu

Leu Met Ala 955

Asp

Tyr

Leu Gin

Pro 960

Lys

Leu

Leu

Gly

Ile

Leu

Ala

Phe

Phe Asn Met

Gin

Leu

Leu Ser

Ser

965

970

975

Ser

Val

Gly

Ile

Glu

Asp

Lys

Lys

Met Ala Leu

Asn

Ser

Leu Met

Ser

980

985

990

Leu

Met

LVS

Leu

Met

Gly

Pro

Lys

His Val Ser

Ser

Val

Arg Val

Lys

995

1000

1005

Met

Met

Thr

Thr

Leu

Arg

Thr

Gly

Leu Arg Phe

Lys

Asp

Asp Phe

Pro

1010

1015

1020

Glu

Leu

Cys

Cys

Arg

Ala

Trp

Asp

Cys Phe Val

Arg

Cys

Leu Asp

His

102S

1030

1035

1040

Ala

Cys

Leu

Gly

Ser

Leu

Leu

Ser

His Val Ile

Val

Ala

Leu Leu

Pro

1045

1050

1055

Leu

Ile

His

Ile

Gin

Pro

Lys

Glu

Thr Ala Ala

Ile

Phe

His Tyr

Leu

1060

1065

1070

Ile

Ile

Glu

Asn

Arg

Asp

Ala

Val

Gin Asp Phe

Leu

His

Glu Ile

Tyr

1075

1080

1085

Phe

Leu

Pro

Asp

His

Pro

Glu

Leu

Lys Lys Ile

Lys

Ala

Val Leu

Gin

1090

1095

1100

Glu

Tyr

Arg

Lys

Glu

Thr

Ser

Glu

Ser Thr Asp

Leu

Gin

Thr Thr

Leu

1105

1110

1115

1120

Gin

Leu

Ser

Met

Lys

Ala

Ile

Gin

His Glu Asn

Val

Asp

Val Arg

Ile

1125

1130

1135

His

Ala

Leu

Thr

Ser

Leu

Lys

Glu

Thr Leu Tyr

Lys

Asn

Gin Glu

Lys

1140

1145

1150

Leu

Ile

Lys

Tyr

Ala

Thr

Asp

Ser

Glu Thr Val

Glu

Pro

Ile Ile

Ser

1155

1160

1165

Gin

Leu

Val

Thr

Val

Leu

Leu

Lys

Gly Cys Gin

Asp

Ala

Asn Ser

Gin

1170

1175

1180

Ala

Arg

Leu

Leu

Cys

Gly

Glu

Cys

Leu Gly Glu

Leu

Gly

Ala Ile

Asp

1185

1190

1195

1200

Pro

Gly

Arg

Leu

Asp

Phe

Ser

Thr

Thr Glu Thr

Gin

Gly

Lys Asp

Phe

1205

1210

1215

Thr

Phe

Val

Thr

Gly

Val

Glu

Asp

Ser Ser Phe

Ala

Tyr

Gly Leu

Leu

1220

1225

1230

Met

Glu

Leu

Thr

Arg

Ala

Tyr

Leu

Ala Tyr Ala

Asp

Asn

Ser Arg

Ala

1235

1240

1245

Pro

Asp

Ser

Ala

Ala

Tyr

Ala

Ile

Gin Glu Leu

Leu

Ser

Ile Tyr

Asp

1250

1255

1260

Cys

Arg

Glu

Met

Glu

Thr

Asn

Gly

Pro Gly His

Gin

Leu

Trp Arg

Arg

1265

1270

1275

1280

Phe

Pro

Glu

His

Val

Arg

Glu

Ile

Leu Glu Pro

His

Leu

Asn Thr

Arg

1285

1290

1295

Tyr	Lys Ser Ser Gin Lys Ser Thr Asp Trp Ser Gly Val LyG Lys Pro 1300 1305 1310
Ile	Tyr Leu Ser 1315	Lys Leu Gly Ser Asn 1320	Phe Ala Glu Trp Ser 1325	Ala Ser
Trp	Ala Gly Tyr 1330	Leu Ile Thr Lys Val 1335	Arg His Asp Leu Ala 1340	Ser Lys
Ile	Phe Thr Cys	Cys Ser Ile Met Met	Lys His Asp Phe Lys	Val Thr
1345	1350	1355	1360
Ile	Tyr Leu Leu	Pro His Ile Leu Val 1365	Tyr Val Leu Leu Gly 1370	Cys Asn 1375
Gin	Glu Asp Gin Gin Glu Val Tyr Ala 1380 1386	Glu Ile Met Ala Val Leu Lys i 1390
His	Asp Asp Gin 1395	His Thr Ile Asn Thr 1400	Gin Asp Ile Ala Ser 1405	Asp Leu
Cys	Gin Leu Ser 1410	Thr Gin Thr Val Phe 1415	Ser Met Leu Asp His 1420	Leu Thr
Gin	Trp Ala Arg	His Lys Phe Gin Ala	Leu Lys Ala Glu Lys	Cys Pro
1425	1430	1435	1440
His	Ser Lys Ser	Asn Arg Asn Lys Val 1445	Asp Ser Met Val Ser 1450	Thr Val 1455
Asp	Tyr Glu Asp Tyr Gin Ser Val Thr 1460 1465	Arg Phe Leu Asp Leu , 147C	Ile Pro 1
Gin	Asp Thr Leu 1475	Ala Val Ala Ser Phe 1480	Arg Ser Lys Ala Tyr 1485	Thr Arg
Ala	Va1 Met His 1490	Phe Glu Ser Phe Ile 1495	Thr Glu Lvs Lys Gin 1500	Asn Ile
Gin	Glu His Leu	Gly Phe Leu Gin Lys	Leu Tyr Ala Ala Met	His Glu
1505	1510	1515	1520
Pro	Asp Gly Val	Ser Gly Val Ser Ala 1525	Ile Arg Lys Ala Glu 1530	Pro Ser 1535
Leu	Ly s Glu Gin 1540	Ile Leu Glu His Glu ' 1545	Ser Leu Gly Leu Leu • 1550	Arg Asp 1
Ala	Thr Ala Cys 1555	Tyr Asp Arg Ala Ile 1560	Gin Leu Glu Pro Asp 1565	Gin Ile
Ile	His Tyr His 1570	Gly Val Val Lys Ser 1575	Met Leu Gly Leu Gly 1580	Gin Leu
Ser 1565	Thr Val Ile	Thr Gin Val Asn Gly 1590	Val His Ala Asn Arg 1595	Ser Glu 1600
Trp	Thr Asp Glu	Leu Asn Thr Tyr Arg 1605	Val Glu Ala Ala Trp 1610	Lys Leu 1615
Ser	Gin Trp Asp 1620	Leu Val Glu Asn Tyr 1625	Leu Ala Ala Asp Gly 1630	Lys Ser (

Thr Thr Trp Ser Val Arg Leu Gly Gin Leu Leu Leu Ser Ala Lys Lys 1635 1640 1645 • · · • · 1 ····· ·· <

Arg	Asp 165C	Ile 1	Thr	Ala	Phe	Tyr Asp 1655	Ser Leu	Lys	Leu Val Arg Ala Glu 1660
Gin	Ile	Val	Pro	Leu	Ser	Ala Ala	Ser Phe	Glu	Arg Gly Ser Tyr Gin
1665				1670		1675 1680
Arg	Gly	Tyr	Glu	Tyr	Ile	Val Arg	Leu His	Met	Leu Cys Glu Leu Glu
				1685		1690	1695
His	Ser	Ile	Lys	Pro	Leu	Phe Gin	His Ser	Pro	Gly Asp Ser Ser Gin
			1700			1705		1710
Glu	Asp	Ser	Leu	Asn	Trp	Val Ala	Arg Leu	Glu	Met Thr Gin Asn Ser
		1715			1720		1725
Tyr	Arg	Ala	Lys	Glu	Pro	Ile Leu	Ala Leu	Arg	Arg Ala Leu Leu Ser
	1730				1735			1740
Leu	Asn	Lys	Arg	Pro	Asp	Tyr Asn	Glu Met	Val	Gly Glu Cys Trp Leu
1745				1750		1755	; 1760
Gin	Ser	Ala	Arg	Val	Ala	Arg Lys	Ala Gly	His	His Gin Thr Ala Tyr
				1765		1770	1775
Asn	Ala	Leu	Leu	Asn	Ala	Gly Glu	Ser Arg	Leu	Ala Glu Leu Tyr Val
			1780			1785		1790
Glu	Arg	Ala	Lys	Trp	Leu	Trp Ser	Lys Gly	Asp	Val His Gin Ala Leu
		1795			1800		1805
Ile	Val	Leu	Gin	Lys	Gly	Val Glu	Leu Cys	Phe	Pro Glu Asn Glu Thr
	1810				1815			1820
Pro	Pro	Glu	Gly	Lys	Asn	Met Leu	Ile His	Gly	Arg Ala Met Leu Leu
1825				1830		1835	' 1840
Val	Gly	Arg	Phe	Met	Glu	Glu Tnr	Ala Asn	Phe	Glu Ser Asn Ala Ile
				1845		1850	1855
Met	Lys	Lys	Tyr	Lys	Asp	Val Thr	Ala Cys	Leu	Pro Glu Trp Glu Asp
			1860			1865		1870
Gly	His	Phe	Tyr	Leu	Ala	Lys Tyr	Tyr Asp	Lys	Leu Met Pro Met Val
		1875			1880		1885
Thr	Asp	Asn	Lys	Met	Glu	Lys Gin	Gly Asp	Leu	Ile Arg Tyr Ile Val
	1890				1895			1900
Leu	His	Phe	Gly	Arg	Ser	Leu Gin	Tyr Gly	Asn	Gin Phe Ile Tyr Gin
1905				1910		1915	i 1920
Ser	Met	Pro	Arg	Met	Leu	Thr Leu	Trp Leu	Asp	Tyr Gly Thr Lys Ala
				1925		1930	1935
Tyr	Glu	Trp	Glu	Lys	Ala	Gly Arg	Ser Asp	Arg	Val Gin Met Arg Asn
			1940			1945		1950
Asp	Leu	Gly	Lys	Ile	Asn	Lys Val	Ile Thr	Glu	His Thr Asn Tyr Leu
		1955			1960		1965
Ala	Pro	Tyr	Gin	Phe	Leu	Thr Ala	Phe Ser	Gin	Leu Ile Ser Arg Ile
	1970					1975			1980
Cys	His	Ser	His	Asp	Glu	Val Phe	Val Val	Leu	Asp Gly Asn Asn Ser
1985					1990		1995 2000

·· ···<

Gin Val Phe Leu Ala	Tyr Pro Gin Gin Ala	Met Trp Met Met Thr	Ala
2005	i 201C	) 2015
Val Ser Lys Ser Ser 2020	Tyr Pro Met Arg Val 2025	Asn Arg Cys Lys Glu 2030	Ile
Leu Asn Lys Ala Ile 2035	His Met Lys Lys Ser 2040	Leu Glu Lys Phe Val 2045	Gly
Asp Ala Thr Arg Leu 2050	Thr Asp Lys Leu Leu 2055	Glu Leu Cys Asn Lys 2060	Pro
Val Glu Ile Leu Ala	Ser Leu Gin Lys Pro	Lys Lys Ile Ser Leu	Lys
2065	2070	2075	2080
Gly Ser Asp Gly Lys	Phe Tyr Ile Met Met	Cys Lys Pro Lys Asp	Asp
2085	- 209C	1 2095
Leu Arg Lys Asp Cys 2100	Arg Leu Met Glu Phe 2105	Asn Ser Leu Ile Asn 2110	Lys
Cys Leu Arg Lys Asp 2115	Ala Glu Ser Arg Arg 1 o q	Arg Glu Leu His Ile 2125	Arg
Thr Tyr Ala Val Ile 2130	Pro Leu Asn Asp Glu 2135	Cys Gly Ile Ile Glu 2140	Trp
Val Asn Asn Thr Ala	Gly Leu Arg Pro Ile	Leu Thr Lys Leu Tyr	Lys
2145	2150	2155	2160
Glu Lys Gly Val Tyr	Met Thr Gly Lys Glu	Leu Arg Gin Cys Met	Leu
2165	- 217C	i 2175
Pro Lys Ser Ala Ala 2180	Leu Ser Glu Lys Leu 2185	Lys Val Phe Arg Glu 2190	Phe
Leu Leu Pro Arq His 2195	Pro Pro Ile Phe His 2200	Glu Trp Phe Leu Arg 2205	Thr
Phe Pro Asp Pro Thr 2210	Ser Trp Tyr Ser Ser 2215	Arg Ser Ala Tyr Cys 2220	Arg
Ser Thr Ala Val Met	Ser Met Val Gly Tyr	Ile Leu Gly Leu Gly	Asp
2225	2230	2235	2240
Arg His Gly Glu Asn	Ile Leu Phe Asp Ser	Leu Thr Gly Glu Cys	Val
2245	225C	l 2255
His Val Asp Phe Asn 2260	Cys Leu Phe Asn Lys 2265	Gly Glu Thr Phe Glu 2270	Val
Pro Glu Ile Val Pro 2275	Phe Arg Leu Thr His 2280	Asn Met Val Asn Gly 2285	Met
Gly Pro Met Gly Thr 2290	Glu Gly Leu Phe Arg 2295	Arg Ala Cys Glu Val 2300	Thr
Met Arg Leu Met Arg	Asp Gin Arg Glu Pro	Leu Met Ser Val Leu	Lys
2305	2310	2315	2320
Thr Phe Leu His Asp	Pro Leu Val Glu Trp	Ser Lys Pro Val Lys	Gly 1
2325	233C	i .2335

His Ser Lys Ala Pro Leu Asn Glu Thr Gly Glu Val Val Asn Glu Lys 2340 2345 2350 ·· 999

·· β · · · • · ♦ · • · 999 · • · · ·»·· ·· ·

Ala

Lys

Thr His 2355

Val

Leu

Asp

Ile 236C

Glu l

Gin

Arg

Leu

Gin 2365

Gly

Val

Ile

Lys

Thr 237C

Arg Asn 1

Arg

Val

Thr 2375

Gly

Leu

Pro

Leu

Ser 2380

Ile

Glu

Gly

His

Val 2385

His

Tyr Leu

Ile

Gin 2390

Glu 1

Ala

Thr

Asp

Glu 2395

Asn

Leu

Leu

Cys

Gin 2400

Met

Tyr

Leu Gly

Trp 2405

Thr

Pro

Tyr

Met

(2) INFORMACE Ο SEQ ID NO:3:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2835 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: 517 (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1..2610 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 3:

GTG

GAA

GCA

GCT

TGG

AAA

TTG

TCA

CAG

TGG

GAT

TTG

GTG

GAA

AAC

TAT

Val 1

Glu

Ala

Ala

Trp 5

Lys

Leu

Ser

Gin

Trp 10

Asp

Leu

Val

Glu

Asn 15

Tyr

TTG

GCA

GCA

GAT

GGA

AAA

TCT

ACA

ACA

TGG

AGT

GTC

AGA

CTG

GGA

CAG

Leu

Ala

Ala

Asp 20

Gly

Lys

Ser

Thr

Thr 25

Trp

Ser

Val

Arg

Leu 30

Gly

Gin

CTA

TTA

TTA

TCA

GCC

AAA

AAA

AGA

GAT

ATC

ACA

GCT

TTT

TAT

GAC

TCA

Leu

Leu

Leu 35

Ser

Ala

Lys

Lys

Arg 40

Asp

Ile

Thr

Ala

Phe 45

Tyr

Asp

Ser

CTG

AAA

CTA

GTG

AGA

GCA

GAA

CAA

ATT

GTA

CCT

CTT

TCA

GCT

GCA

AGC

Leu

Lys 50

Leu

Val

Arg

Ala

Glu 55

Gin

Ile

Val

Pro

Leu 60

Ser

Ala

Ala

Ser

TTT

GAA

AGA

GGC

TCC

TAC

CAA

CGA

GGA

TAT

GAA

TAT

ATT

GTG

AGA

TTG

Phe 65

Glu

Arg

Gly

Ser

Tyr 70

Gin

Arg

Gly

Tyr

Glu 75

Tyr

Ile

Val

Arg

Leu 80

CAC

ATG

TTA

TGT

GAG

TTG

GAG

CAT

AGC

ATC

AAA

CCA

CTT

TTC

CAG

CAT

His

Met

Leu

Cys

Glu 65

Leu

Glu

His

Ser

Ile 90

Lys

Pro

Leu

Phe

Gin 95

His

TCT

CCA

GGT

GAC

AGT

TCT

CAA

GAA

GAT

TCT

CTA

AAC

TGG

GTA

GCT

CGA

Ser

Pro

Gly

Asp 100

Ser

Ser

Gin

Glu

Asp 105

Ser

Leu

Asn

Trp

Val 110

Ala

Arg

CTA

GAA

ATG

ACC

CAG

AAT

TCC

TAC

AGA

GCC

AAG

GAG

CCT

ATC

CTG

GCT

Leu

Glu

Met 115

Thr

Gin

Asn

Ser

Tyr 120

Arg

Ala

Lys

Glu

Pro 125

Ile

Leu

Ala

144

192

240

288

336

384 ·· 999 • ··

9 ·

9«

9 · ·

9 ·

999 ··

9 9

9

9

9

999 9999

9

9 9

999 9

9

9

CTC

CGG

AGG

GCT

TTA

CTA

AGC

CTC AAC

AAA AGA CCA GAT

TAC

AAT

GAA

432

Leu

Arg

Arg

Ala

Leu

Leu

Ser

Leu Asn

Lys Arg Pro Asp

Tyr

Asn

Glu

130

135

140

ATG Met 145

GTT Val

GGA GAA Gly Glu

TGC TGG

CTG CAG AGT GCC AGG GTA

GCT AGA AAG

GCT Ala 160

480

Cys

Trp 150

Leu

Gin

Ser

Ala Arg 155

Val

Ala

Arg

Lys

GGT

CAC

CAC

CAG

ACA

GCC

TAC

AAT

GCT

CTC

CTT

AAT

GCA

GGG

GAA

TCA

528

Gly

His

His

Gin

Thr

Ala

Tyr

Asn

Ala

Leu

Leu

Asn

Ala

Gly

Glu

Ser

165

170

175

CGA

CTC

GCT

GAA

CTG

TAC

GTG

GAA

AGG

GCA

AAG

TGG

CTC

TGG

TCC

AAG

576

Arg

Leu

Ala

Glu

Leu

Tyr

Val

Glu

Arg

Ala

Lys

Trp

Leu

Trp

Ser

Lys

180

185

190

GGT

GAT

GTT

CAC

CAG

GCA

CTA

ATT

GTT

CTT

CAA

AAA

GGT

GTT

GAA

TTA

624

Gly

Asp

Val

His

Gin

Ala

Leu

Ile

Val

Leu

Gin

Lys

Gly

Val

Glu

Leu

195

200

205

TGT

TTT

CCT

GAA

AAT

GAA

ACC

CCA

CCT

GAG

GGT

AAG

AAC

ATG

TTA

ATC

672

Cys

Phe

Pro

Glu

Asn

Glu

Thr

Pro

Pro

Glu

Gly

Lys

Asn

Met

Leu

Ile

210

215

220

CAT

GGT

CGA

GCT

ATG

CTA

CTA

GTG

GGC

CGA

TTT

ATG

GAA

GAA

ACA

GCT

720

His

Gly

Arg

Ala

Met

Leu

Leu

Val

Gly

Arg

Phe

Met

Glu

Glu

Thr

Ala

225

230

235

240

AAC

TTT

GAA

AGC

AAT

GCA

ATT

ATG

AAA

AAA

TAT

AAG

GAT

GTG

ACC

GCG

768

Asn

Phe

Glu

Ser

Asn

Ala

Ile

Met

Lys

Lys

Tyr

Lys

Asp

Val

Thr

Ala

245

250

255

TGC

CTG

CCA

GAA

TGG

GAG

GAT

GGG

CAT

TTT

TAC

CTT

GCC

AAG

TAC

TAT

816

Cys

Leu

Pro

Glu

Trp

Glu

Asp

Gly

His

Phe

Tyr

Leu

Ala

Lys

Tyr

Tyr

260

265

270

GAC

AAA

TTG

ATG

CCC

ATG

GTC

ACA

GAC

AAC

AAA

ATG

GAA

AAG

CAA

GGT

864

Asp'

Lys

Leu

Met

Pro

Met

Val

Thr

Asp

Asn

Lys

Met

Glu

Lys

Gin

Gly

275

280

285

GAT

CTC

ATC

CGG

TAT

ATA

GTT

CTT

CAT

TTT

GGC

AGA

TCT

CTA

CAA

TAT

912

Asp

Leu

Ile

Arg

Tyr

Ile

Val

Leu

His

Phe

Gly

Arg

Ser

Leu

Gin

Tyr

290

295

300

GGA

AAT

CAG

TTC

ATA

TAT

CAG

TCA

ATG

CCA

CGA

ATG

TTA

ACT

CTA

TGG

960

Gly

Asn

Gin

Phe

Ile

Tyr

Gin

Ser

Met

Pro

Arg

Met

Leu

Thr

Leu

Trp

305

310

315

320

CTT

GAT

TAT

GGT

ACA

AAG

TCA

TAT

GAA

TGG

GAA

AAA

GCT

GGC

CGC

TCC

1008

Leu

Asp

Tyr

Gly

Thr

Lys

Ser

Tyr

Glu

Trp

Glu

Lys

Ala

Gly

Arg

Ser

325

330

335

GAT

CGT

GTA

CAA

ATG

AGG

AAT

GAT

TTG

GGT

AAA

ATA

AAC

AAG

GTT

ATC

1056

Asp

Arg

Val

Gin

Met

Arg

Asn

Asp

Leu

Gly

Lys

Ile

Asn

Lys

Val

Ile

340

345

350

ACA

GAG

CAT

ACA

AAC

TAT

TTA

GCT

CCA

TAT

CAA

TTT

TTG

ACT

GCT

TTT

1104

Thr

Glu

His

Thr

Asn

Tyr

Leu

Ala

Pro

Tyr

Gin

Phe

Leu

Thr

Ala

Phe

355

360

365

TCA

CAA

TTG

ATC

TCT

CGA

ATT

TGT

CAT

TCT

CAC

GAT

GAA

GTT

TTT

GTT

1152

Ser

Gin

Leu

Ile

Ser

Arg

Ile

Cys

His

Ser

His

Asp

Glu

Val

Phe

Val

370

375

380

• 9 • * · · · ·♦ ··· ···· «· ·

GTC Val 385

TTG ATG

GAA Glu

ATA ATA GCC AAA

GTA TTT

CTA Leu 395

GCC TAT CCT CAA CAA

1200

Leu

Met

Ile

Ile 390

Ala

Lys

Val

Phe

Ala

Tyr

Pro

Gin

Gin 400

GCA

ATG

TGG

ATG

ATG

ACA

GCT

GTG

TCA

AAG

TCA

TCT

TAT

CCC

ATG

CGT

1248

Ala

Met

Trp

Met

Met 405

Thr

Ala

Val

Ser

Lys 410

Ser

Ser

Tyr

Pro

Met 415

Arg

GTG

AAC

AGA

TGC

AAG

GAA

ATC

CTC

AAT

AAA

GCT

ATT

CAT

ATG

AAA

AAA

1296

Val

Asn

Arg

Cys 420

Lys

Glu

Ile

Leu

Asn 425

Lys

Ala

Ile

His

Met 430

Lýs

Lys

TCC

TTA

GAG

AAG

TTT

GTT

GGA

GAT

GCA

ACT

CGC

CTA

ACA

GAT

AAG

CTT

1344

Ser

Leu

Glu 435

Lys

Phe

Val

Gly

Asp 440

Ala

Thr

Arg

Leu

Thr 445

Asp

Lys

Leu

CTA

GAA

TTG

TGC

AAT

AAA

CCG

GTT

GAT

GGA

AGT

AGT

TCC

ACA

TTA

AGC

1392

Leu

Glu 450

Leu

Cys

Asn

Lys

Pro 455

Val

Asp

Gly

Ser

Ser 460

Ser

Thr

Leu

Ser

ATG

AGC

ACT

CAT

TTT

AAA

ATG

CTT

AAA

AAG

CTG

GTA

GAA

GAA

GCA

ACA

1440

Met 465

Ser

Thr

His

Phe

Lys 470

Met

Leu

Lys

Lys

Leu 475

Val

Glu

Glu

Ala

Thr 480

·£·ρ»ρ

AGT

GAA

ATC

CTC

ATT

CCT

CTA

CAA

TCA

GTC

ATG

ATA

CCT

ACA

CTT

1488

Phe

Ser

Glu

Ile

Leu 485

Ile

Pro

Leu

Gin

Ser 490

Val

Met

Ile

Pro

Thr 495

Leu

CCA

TCA

ATT

CTG

GGT

ACC

CAT

GCT

AAC

CAT

GCT

AGC

CAT

GAA

CCA

TTT

1536

Pro

Ser

Ile

Leu 500

Gly

Thr

His

Ala

Asn 505

His

Ala

Ser

His

Glu 510

Pro

Phe

CCT

GGA

CAT

TGG

GCC

TAT

ATT

GCA

GGG

TTT

GAT

GAT

ATG

GTG

GAA

ATT

1584

Pro

Gly

His 515

Trp

Ala

Tyr

Ile

Ala 520

Gly

Phe

Asp

Asp

Met 525

Val

Glu

Ile

CTT

GCT

TCT

CTT

CAG

AAA

CCA

AAG

AAG

ATT

TCT

TTA

AAA

GGC

TCA

GAT

1632

Leu

Ala 530

Ser

Leu

Gin

Lys

Pro 535

Lys

Lys

Ile

Se i

Leu 540

Lys

Gly

Ser

Asp

GGA

AAG

TTC

TAC

ATC

ATG

ATG

TGT

AAG

CCA

AAA

GAT

GAC

CTG

AGA

AAG

1680

Gly 545

Lys

Phe

Tyr

Ile

Met 550

Met

Cys

Lys

Pro

Lys 555

Asp

Asp

Leu

Arg

Lys 560

GAT

TGT

AGA

CTA

ATG

GAA

TTC

AAT

TCC

TTG

ATT

AAT

AAG

TGC

TTA

AGA

1728

Asp

Cys

Arg

Leu

Met 565

Glu

Phe

Asn

Ser

Leu 570

Ile

Asn

Lys

Cys

Leu 575

Arg

AAA

GAT

GCA

GAG

TCT

CGT

AGA

AGA

GAA

CTT

CAT

ATT

CGA

ACA

TAT

GCA

1776

Lys

Asp

Ala

Glu 580

Ser

Arg

Arg

Arg

Glu 585

Leu

His

Ile

Arg

Thr 590

Tyr

Ala

GTT

ATT

CCA

CTA

AAT

GAT

GAA

TGT

GGG

ATT

ATT

GAA

TGG

GTG

AAC

AAC

1824

Val

Ile

Pro 595

Leu

Asn

Asp

Glu

Cys 600

Gly

Ile

Ile

Glu

Trp 605

Val

Asn

Asn

ACT

GCT

GGT

TTG

AGA

CCT

ATT

CTG

ACC

AAA

CTA

TAT

AAA

GAA

AAG

GGA

1872

Thr

Ala 610

Gly

Leu

Arg

Pro

Ile 615

Leu

Thr

Lys

Leu

Tyr 620

Lys

Glu

Lys

Gly

GTG

TAT

ATG

ACA

GGA

AAA

GAA

CTT

CGC

CAG

TGT

ATG

CTA

CCA

AAG

TCA

1920

Val 625

Tyr

Met

Thr

Gly

Lys 630

Glu

Leu

Arg

Gin

CVS 635

Met

Leu

Pro

Lys

Ser 640

GCA

GCT

TTA

TCT

GAA

AAA

CTC

AAA

GTA

TTC

CGA

GAA

TTT

CTC

CTG

CCC

1968

Ala

Ala

Leu

Ser

Glu

Lys

Leu

Lys

Val

Phe

Arg

Glu

Phe

Leu

Leu

Pro

645 650 655 » · » · · · · · • · • · > · · »

AGG	CAT	CCT	CCT	ATT	TTT
Arg	His	Pro	Pro 660	Ile	Phe
CCT	ACA	TCA	TGG	TAC	AGT
Pro	Thr	Ser 675	Trp	Tyr	Ser
GTA	ATG	TCA	ATG	GTT	GGT
Val	Met 690	Ser	Met	Val	Gly
GAA	AAT	ATT	CTC	TTT	GAT
Glu 705	Asn	Ile	Leu	Phe	Asp 710
TTC	AAT	TGT	CTT	TTC	AAT
Phe	Asn	Cys	Leu	Phe 725	Asn
GTG	CCA	TTT	CGC	CTG	ACT
Val	Pro	Phe	Arg 740	Leu	Thr
GGA	ACA	GAG	GGT	CTT	TTT
Gly	Thr	Glu 755	Gly	Leu	Phe
ATG	CGT	GAT	CAG	CGA	GAG
Met	Arg 770	Asp	Gin	Arg	Glu
CAT	GAT	CCT	CTT	GTG	GAA
Kis 785	Asp	Pro	Leu	Val	Glu 790
GCG	CCA	CTG	AAT	GAA	ACT
Ala	Pro	Leu	Asn	Glu 805	Thr
CAT	GTT	CTT	GAC	ATT	GAG
His	Val	Leu	Asp 820	Ile	Glu
AAT	AGA	GTG	ACA	GGA	CTG
Asn	Arg	Val 835	Thr	Gly	Leu
CTT	ATA	CAA	GAA	GCT	ACT
Leu	Ile 850	Gin	Glu	Ala	Thr
GGT	TGG	ACT	CCA	TAT	ATG
Gly 865	Trp	Thr	Pro	Tyr	Met 870

CAT	GAG	TGG	TTT	CTG	AGA	ACA	TTC	CCT	GAT
His	Glu	Tro 6 65	Phe	Leu	Arg	Thr	Phe 670	Pro	Asp
AGT	AGA	TCA	GCT	TAC	TGC	CGT	TCC	ACT	GCA
Ser	Arg 680	Ser	Ala	Tyr	Cys	Arg 685	Ser	Thr	Ala
TAT	ATT	CTG	GGG	CTT	GGA	GAC	CGT	CAT	GGT
Tyr 695	Ile	Leu	Gly	Leu	Gly 700	Asp	Arg	His	Gly
TCT	TTG	ACT	GGT	GAA	TGC	GTA	CAT	GTA	GAT
Ser	Leu	Thr	Gly	Glu 715	Cys	Val	His	Val	Asp 720
AAG	GGA	GAA	ACC	TTT	GAA	GTT	CCA	GAA	ATT
Lys	Gly	Glu	Thr 730	Phe	Glu	Val	Pro	Glu 735	Ile
CAT	AAT	ATG	GTT	AAT	GGA	ATG	GGT	CCT	ATG
His	Asn	Met 745	Val	Asn	Gly	Met	Gly 750	Pro	Met
CGA	AGA	GCA	TGT	GAA	GTT	ACA	ATG	AGG	CTG
Arg	Arg 760	Ala	Cys	Glu	Val	Thr 765	Met	Arg	Leu
CCT	TTA	ATG	AGT	GTC	TTA	AAG	ACT	TTT	CTA
Pro 775	Leu	Mec	Ser	Val	Leu 780	Lys	Thr	Phe	Leu
TGG	AGT	AAA	CCA	GTG	AAA	GGG	CAT	TCC	AAA
Trp	Ser	Lys	Pro	Val 795	Lys	Gly	His	Ser	Lys 800
GGA	GAA	GTT	GTC	AAT	GAA	AAG	GCC	AAG	ACC
Gly	Glu	Val	Val 810	Asn	Glu	Lys	Ala	Lys 815	Thr
CAG	CGA	CTA	CAA	GGT	GTA	ATC	AAG	ACT	CGA
Gin	Arg	Leu 825	Gin	Gly	Val	Ile	Lys 830	Thr	Arg
CCG	TTA	TCT	ATT	GAA	GGA	CAT	GTG	CAT	TAC
Pro	Leu 840	Ser	Ile	Glu	Gly	His 845	Val	His	Tyr
GAT	GAA	AAC	TTA	CTA	TGC	CAG	ATG	TAT	CTT
Asp 855	Glu	Asn	Leu	Leu	Cys 860	Gin	Met	Tyr	Leu

TGAAATGAAA TTATGTAAAA GAATATGTTA

ATAATCTAAA

ACAACATAAA

AATAATATAC

AGTAATGCAT

TTTACGTTCT

ATTCAGTTAT

TTGGTATGAA

CAGCAACTGT

TAAGAAATAA

TCTGTGGTTG

TATTTCTCTC actgctttct

TATCTGTTCA

TGATCATTAA

TAATAAAAAA

ATTCTAAAGT

TTATATGTAA

AAAAAAAAAA

2016

2064

2112

2160

2208

2256

2304

2352

2400

2448

2496

2544

2592

2640

2700

2760

2820

AAAAAAAAAA AAAAA

2835 • · ··· · (2) INFORMACE O SEQ ID NO:4:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 870 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 4:

Val 1

Glu

Ala

Ala

Trp 5

Lys

Leu

Ser

Gin

Trp 10

Asp

Leu

Val

Glu

Asn 15

Tyr

Leu

Ala

Ala

Asp 20

Gly

Lys

Ser

Thr

Thr 25

Trp

Ser

Val

Arg

Leu 30

Gly

Gin

Leu

Leu

Leu 35

Ser

Ala

Lys

Lys

Arg 40

Asp

Ile

Thr

Ala

Phe 45

Tyr

Asp

Ser

Leu

Lys 50

Leu

Val

Arg

Ala

Glu 55

Gin

Ile

Val

Pro

Leu 60

Ser

Ala

Ala

Ser

Phe 65

Glu

Arg

Gly

Ser

Tyr 70

Gin

Arg

Gly

Tyr

Glu 75

Tyr

Ile

Val

Arg

Leu 80

His

Met

Leu

Cys

Glu 85

Leu

Glu

His

Ser

Ile 90

Lys

Pro

Leu

Phe

Gin 95

His

Ser

Pro

Gly

Asp 100

Ser

Ser

Gin

Glu

Asp 105

Ser

Leu

Asn

Trp

Val 110

Ala

Arg

Leu

Glu

Met 115

Thr

Gin

Asn

Ser

Tyr 120

Arg

Ala

Lys

Glu

Pro 125

Ile

Leu

Ala

Leu

Arg 130

Arg

Ala

Leu

Leu

Ser 135

Leu

Asn

Lys

Arg

Pro 140

Asp

Tyr

Asn

Glu

Met 145

Val

Gly

Glu

Cys

Trp 150

Leu

Gin

Ser

Ala

Arg 155

Val

Ala

Arg

Lys

Ala 160

Gly

His

His

Gin

Thr 165

Ala

Tyr

Asn

Ala

Leu 170

Leu

Asn

Ala

Gly

Glu 175

Ser

Arg

Leu

Ala

Glu 1Θ0

Leu

Tyr

Val

Glu

Arg 185

Ala

Lys

Trp

Leu

Trp 190

Ser

Lys

Gly

Asp

Val 195

His

Gin

Ala

Leu

Ile 200

Val

Leu

Gin

Lys

Gly 205

Val

Glu

Leu

Cys

Phe 210

Pro

Glu

Asn

Glu

Thr 215

Pro

Pro

Glu

Gly

Lys 220

Asn

Met

Leu

Ile

His 225

Gly

Arg

Ala

Met

Leu 230

Leu

Val

Gly

Arg

Phe 235

Met

Glu

Glu

Thr

Ala 240

Asn

Phe

Glu

Ser

Asn 245

Ala

Ile

Met

Lys

Lys 250

Tyr

Lys

Asp

Val

Thr 255

Ala

Cys

Leu

Pro

Glu 260

Trp

Glu

Asp

Gly

His 265

Phe

Tyr

Leu

Ala

Lys 270

Tyr

Tyr

Asp

Lys

Leu 275

Met

Pro

Met

Val

Thr 280

Asp

Asn

Lys

Met

Glu 285

Lys

Gin

Gly

• · · ·

Asp

Leu

Ile

Arg

Tyr

Ile

Val

Leu

His

Phe

Gly

Arg

Ser

Leu

Gin

Tyr

290

295

300

Gly

Asn

Gin

Phe

Ile

Tyr

Gin

Ser

Met

Pro

Arg

Met

Leu

Thr

Leu

Trp

305

310

315

320

Leu

Asp

Tyr

Gly

Thr

Lys

Ser

Tyr

Glu

Trp

Glu

Lys

Ala

Gly

Arg

Ser

325

330

335

Asp

Arg

Val

Gin

Met

Arg

Asn

Asp

Leu

Gly

Lys

Ile

Asn

Lys

Val

Ile

340

345

350

Thr

Glu

His

Thr

Asn

Tyr

Leu

Ala

Pro

Tyr

Gin

Phe

Leu

Thr

Ala

Phe

355

360

365

Ser-

Gin

Leu

Ile

Ser

Arg

Ile

Cys

His

Ser

His

Asp

Glu

Val

Phe

Val

370

375

380

val

Leu

Met

Glu

Ile

Ile

Ala

Lys

Val

Phe

Leu

Ala

Tyr

Pro

Gin

Gin

385

390

395

400

Ala

Met

Trp

Met

Met

Thr

Ala

Val

Ser

Lys

Ser

Ser

Tyr

Pro

Met

Arg

405

410

415

Val

Asn

Arg

Cys

Lys

Glu

Ile

Leu

Asn

Lys

Ala

Ile

His

Met

Lys

Lys

420

425

430

Ser

Leu

Glu

Lys

Phe

Val

Gly

Asp

Ala

Thr

Arg

Leu

Thr

Asp

Lys

Leu

435

44 0

445

Leu

Glu

Leu

Cys

Asn

Lys

Pro

Val

Asp

Gly

Ser

Ser

Ser

Thr

Leu

Ser

450

455

460

Met

Ser

Thr

His

Phe

Lys

Met

Leu

Lys

Lys

Leu

Val

Glu

Glu

Ala

Thr

465

470

475

480

Phe

Ser

Glu

Ile

Leu

Ile

Pro

Leu

Gin

Ser

Val

Met

Ile

Pro

Thr

Leu

485

490

495

Pro

Ser

Ile

Leu

Gly

Thr

His

Ala

Asn

His

Ala

Ser

His

Glu

Pro

Phe

500

505

510

Pro

Gly

His

Trp

Ala

Tyr

Ile

Ala

Gly

Phe

Asp

Asp

Met

Val

Glu

Ile

515

520

525

Leu

Ala

Ser

Leu

Gin

Lys

Pro

Lys

Lys

Ile

Ser

Leu

Lys

Gly

Ser

Asp

530

535

540

Gly

Lys

Phe

Tyr

Ile

Met

Met

Cys

Lys

Pro

Lys

Asp

Asp

Leu

Arg

Lys

545

550

555

560

Asp

Cys

Arg

Leu

Met

Glu

Phe

Asn

Ser

Leu

Ile

Asn

Lys

Cys

Leu

Arg

565

570

575

Lys

Asp

Ala

Glu

Ser

Arg

Arg

Arg

Glu

Leu

His

Ile

Arg

Thr

Tyr

Ala

580

585

590

Val

Ile

Pro

Leu

Asn

Asp

Glu

Cys

Gly

Ile

Ile

Glu

Trp

Val

Asn

Asn

595

600

605

Thr

Ala

Gly

Leu

Arg

Pro

Ile

Leu

Tlir

Lys

Leu

Tyr

Lys

Glu

Lys

Gly

610

615

620

Val

Tyr

Met

Thr

Gly

Lys

Glu

Leu

Arg

Gin

Cys

Met

Leu

Pro

Lys

Ser

625

630

635

640

Ala

Ala

Leu

Ser

Glu 645

Lys

Leu

Lys

Val

Phe 650

Arg

Glu

Phe

Leu

Leu 655

Pro

Arg

His

Pro

Pro

Ile

Phe

His

Glu

Trp

Phe

Leu

Arg

Thr

Phe

Pro

Asp

660

665

670

Pro

Thr

Ser

Trp

Tyr

Ser

Ser

Arg

Ser

Ala

Tyr

Cys

Arg

Ser

Thr

Ala

675

680

685

Val

Met

Ser

Met

Val

Gly

Tyr

Ile

Leu

Gly

Leu

Gly

Asp

Arg

His

Gly

690

695

700

Glu

Asn

Ile

Leu

Phe

Asp

Ser

Leu

Thr

Gly

Glu

Cys

Val

His

Val

Asp

705

710

715

720

Phe

Asn

Cys

Leu

Phe

Asn

Lys

Gly

Glu

Thr

Phe

Glu

Val

Pro

Glu

Ile

725

730

735

Val

Pro

Phe

Arg

Leu

Thr

His

Asn

Met

Val

Asn

Gly

Met

Gly

Pro

Met

740

745

750

Gly

Thr

Glu

Gly

Leu

Phe

Arg

Arg

Ala

Cys

Glu

Val

Thr

Met

Arg

Leu

755

760

765

Met

Arg

Asp

Gin

Arg

Glu

Pro

Leu

Met

Ser

Val

Leu

Lys

Thr

Phe

Leu

770

775

780

His

Asp

Pro

Leu

Val

Glu

Trp

Ser

Lys

Pro

Val

Lys

Gly

His

Ser

Lys

785

790

795

800

Ala

Pro

Leu

Asn

Glu

Thr

Gly

Glu

Val

Val

Asn

Glu

Lys

Ala

Lys

Thr

805

810

815

His

Val

Leu

Asp

Ile

Glu

Gin

Arg

Leu

Gin

Gly

Val

Ile

Lys

Thr

Arg

820

825

830

Asn

Arg

Val

Thr

Gly

Leu

Pro

Leu

Ser

Ile

Glu

Gly

His

Val

His

Tyr

835

840

845

Leu

Ile

Gin

Glu

Ala

Thr

Asp

Glu

Asn

Leu

Leu

Cys

Gin

Met

Tyr

Leu

850

855

860

Gly

Trp

Thr

Pro

Tyr

Met

865 870 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:5:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 33 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH15a (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (15, 18, 24, 30) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny

..... ::

_ 92 - * ” ··· ···· ·· ί (Xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 5:

GCAGACGGAT CCGGNWCNGA YGGNAAYHTN TAY 33 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:6:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 27 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (15, 18, 24) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 6:

GCAGACGGAT CCGGNWCNGA YGGNAAY 27 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:7:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 30 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer 0DHI6 (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: 24 (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 7:

GCAGACGAAT TCRCARTYRA ARTCNACRTG 30 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:8:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 41 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH17a • · · · · · (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (21, 24, 27, 30) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 8:

GCAGACGGAT CCAARTTYCC NCCNRTNYTN TAYSARTGGT T 41 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:9:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 41 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH17b (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (24, 27, 30, 33) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 9:

GCAGACGAAT CCAACCAYTS RTANARNAYN GGNGGRAAYT T 41 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:10:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 32 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH18a (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (15, 18, 21, 24, 30) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 10:

GCAGACGGAT CCYTNGGNYT NGGNGAYCGN CA • · · · · ·

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:11:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE (A) DÉLKA: 32 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH18b (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: modifikovaná báze (B) UMÍSTĚNÍ: skupina (15, 18, 21) (D) JINÉ INFORMACE: Nukleotidy v těchto polohách jsou inosiny (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 11:

GCAGACGGAT CCYTNGGNYT NGGNGAYAGR CA 32 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:12:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 33 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH23 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 12:

GACGCAGAAT TCACCAGTCA AAGAATCAAA GAG 33 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:13:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 16 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer mo3 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 13:

CTACAGAGCC AAGGAG

• ·· (2) INFORMACE O SEQ ID NO:14:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 22 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (Vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer mo6 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 14:

TCGAGCTATG CTACTAGTGTG GC 22 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:15:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 17 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oHT9-l (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 15:

CCAGTAAACT TGCTTTC 17 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:16:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 20 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer OHT9-4 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 16:

TTTGCGGCCC TTCCAATATC 20 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:17:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7440 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární

- 96 « · • · · · · ·

(ii) TYP MOLEKULY: CDNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: MCCSlbeta (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1..7437

(Xi)

POPIS

SEKVENCE:

SEQ

ID

NO:

17:

ATG

GGT

CAT

GCT

GTG

GAA

TGG

CCA

GTG

GTC

ATG

AGC

CGA

TTT

TTA

AGT

48

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

CCT

TTG

CAG

TTG

96

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

ATG

AGT

ATG

CAA

AAA

TTA

GAA

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

TTA

TTA

ACG

GTT

144

Met

Ser

Met 35

Gin

Lys

Leu

Glu

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Thr

Val

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

CTC

TTA

192

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Al a

Ile 55

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

240

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

288

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

336

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

384

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

Tyr

Glu

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

AAG

ACA

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

432

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

Lys

Thr

Leu

Phe

t-ro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

480

Ala 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

CTT

AAG

TCT

GAT

528

Leu

Cys

Val

Met

Phe 165

Glu

Asp

Gly

Val

Leu 170

Met

Arg

Leu

Lys

Ser 175

Asp

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

576

Leu

Leu

Lys

Ala 180

Ala

Leu

Cys

His

Leu 185

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu 190

Lys

Phe

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

TAT

GTG

624

Val

Pro

Ala 195

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala 200

Leu

Gin

Val

Arg

Lys 205

Val

Tyr

Val

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

ATT

GAG.

GTA

GAT

672

Arg

Asn 210

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu 215

Leu

Asp

Val

Leu

Gly 220

Ile

Glu

Val

Asp

GCA GAG TAC

TTG Leu

TTG GGC

CCA CTT TAT GCA GCT TTG

AAA Lys

ATG Met

GAA Glu

AGT Ser 240

720

Ala 225

Glu

Tyr

Leu

Gly 230

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala 235

Leu

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

768

Met

Glu

Ile

Ile

Glu 245

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin 250

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn 255

Leu

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

816

Ser

Ser

Asn

Ser 260

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro 265

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu 270

Ser

Ser

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

864

Ser

Leu

Asn 275

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala 280

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu 285

Glu

Ile

Lys

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

912

His

Val 290

Asp

Met

Asn

Gin

Lys 295

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser 300

Ala

Leu

Lys

Gin

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

960

Lys 305

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin 310

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr 315

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn 320

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

1008

Pro

Val

Ile

Glu

Met 325

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala 330

Val

Val

Leu

Gin

Leu 335

Thr

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

1056

Ala

Leu

Cys

Thr 340

Val

His

Cys

Ser

His 345

Gin

Asn

Met

Asn

Cys 350

Arg

Thr

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

1104

Phe

Lys

Asp 355

Cys

Gin

His

Lys

Ser 360

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser 365

Val

Val

Ile

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

TAC

ACA

ACA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

1152

Thr

Trp 370

Met

Ser

Leu

Asp

Phe 375

Tyr

Thr

Thr

Val

Leu 380

Lys

Ser

Cys

Arg

AGG

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

AAA

CGG

ACT

GGA

GGC

AAC

ATT

GAT

AAG

1200

Arg 385

Leu

Leu

Glu

Ser

Val 390

Gin

Lys

Arg

Thr

Gly 395

Gly

Asn

Ile

Asp

Lys 400

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

TCA

1248

Val

Val

Lys

Ile

Tyr 405

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr 410

Met

Gin

Val

Asn

Ser 415

Ser

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

GAA

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

CCA

1296

Phe

Glu

Asp

His 420

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu 425

Cys

Gly

Met

Leu

Ser 430

Leu

Pro

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

TTT

1344

Trp

Ile

Tyr 435

Ser

His

Ser

Asp

Asp 440

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu 445

Thr

Thr

Phe

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

TCA

1392

Ala

Ala 450

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu 455

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser 460

Asp

Ser

Tyr

Ser

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

AGA

1440

Pro 465

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg 470

Cys

Val

Phe

Leu

Leu 475

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg 480

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

AAC

TGG

GCC

CTG

CAG

1488

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu 485

Trp

Arg

Thr

Ala

Val 490

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu 495

Gin

• » · · · ···»·» • · · · · · · • ·· ·· ··· ···· *· ·

AGC TCC

CAT His

GAA GTA

ATC Ile

CGG GCT Arg Ala

AGT TGT GTT AGT GGA

TTT Phe 510

TTT Phe

ATC Ile

1536

Ser

Ser

Glu 500

Val

Ser 505

Cys

Val

Ser

Gly

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

ATA

1584

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

Ile

515

520

525

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

TCT

1632

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser

530

535

540

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

ACA

1680

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr

545

550

555

560

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

TTC

1728

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

Phe

565

570

575

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

CAA

1776

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

Gin

560

585

590

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

AAA

1824

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

Cys

Lys

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

Lys

595

600

605

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

CTT

1872

Ile

Pro

Ser

Pro

Val

Lys

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn

Leu

His

His

Leu

610

615

620

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

GTT

1920

Cys

Lys

His

Leu

Asp

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr

Asp

Val

Lys

Ala

Val

625

630

635

640

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

AGA

1968

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu

Asn

Leu

Met

Glu

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp

Val

Arg

645

650

655

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

TCT

2016

Val

Ala

Phe

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys

His

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu

Asp

Ser

660

665

670

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

GCA

2064

Glu

Asp

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu

Phe

Val

Leu

Arg

Met

Lys

Glu

Ala

675

680

685

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

TCA

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

TTG

2112

Tyr

Thr

His

Ala

Gin

Ile

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu

Lys

Asp

Thr

Leu

690

695

700

ATT

CTT

ACA

ACA

GGG

GAT

ATT

GGA

AGG

GCC

GCA

AAA

GGA

GAT

TTG

GTA

2160

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu

Val

705

710

715

720

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

TTA

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

GCA

2208

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu

His

Leu

Leu

His

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

725

730

735

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

TAC

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

GCT

2256

Ser

Val

Ser

Gly

Ala

Ala

Tyr

Thr

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

Ala

740

745

750

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

AGT

TTT

TTC

AGC

CAG

TAT

AAG

AAA

CCC

ATC

2304

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

Ser

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys

Lys

Pro

Ile

755 760 765 • ·

99

«

> · ·

·'

• · · · ·

TGT

CAG

TTT

TTG

GTA

GAA

TCC

CTT

CAC

TCT

AGT

CAG

ATG

ACA

GCA

CTT

2352

Cys

Gin 770

Phe

Leu

Val

Glu

Ser 775

Leu

His

Ser

Ser

Gin 780

Met

Thr

Ala

Leu

CCG

AAT

ACT

CCA

TGC

CAG

AAT

GCT

GAC

GTG

CGA

AAA

CAA

GAT

GTG

GCT

2400

Pro 785

Asn

Thr

Pro

Cys

Gin 790

Asn

Ala

Asp

Val

Arg 795

Lys

Gin

Asp

Val

Ala 800

CAC

CAG

AGA

GAA

ATG

GCT

TTA

AAT

ACG

TTG

TCT

GAA

ATT

GCC

AAC

GTT

2448

His

Gin

Arg

Glu

Met 805

Ala

Leu

Asn

Thr

Leu 810

Ser

Glu

Ile

Ala

Asn 815

Val

TTC

GAC

TTT

CCT

GAT

CTT

AAT

CGT

TTT

CTT

ACT

AGG

ACA

TTA

CAA

GTT

2496

Phe

Asp

Phe

Pro 820

Asp

Leu

Asn

Arg

Phe 825

Leu

Thr

Arg

Thr

Leu 830

Gin

Val

CTA

CTA

CCT

GAT

CTT

GCT

GCC

AAA

GCA

AGC

CCT

GCA

GCT

TCT

GCT

CTC

2544

Leu

Leu

Pro 835

Asp

Leu

Ala

Ala

Lys 840

Ala

Ser

Pro

Ala

Ala 845

Ser

Ala

Leu

ATT

CGA

ACT

TTA

GGA

AAA

CAA

TTA

AAT

GTC

AAT

CGT

AGA

GAG

ATT

TTA

2592

Ile

Arg 850

Thr

Leu

Gly

Lys

Gin 855

Leu

Asn

Val

Asn

Arg 860

Arg

Glu

Ile

Leu

ATA

AAC

AAC

TTC

AAA

TAT

ATT

TTT

TCT

CAT

TTG

GTC

TGT

TCT

TGT

TCC

2640

Ile 665

Asn

Asn

Phe

Lys

Tyr 870

Ile

Phe

Ser

His

Leu 875

Val

Cys

Ser

Cys

Ser 880

AAA

GAT

GAA

TTA

GAA

CGT

GCC

CTT

CAT

TAT

CTG

AAG

AAT

GAA

ACA

GAA

2688

Lys

Asp

Glu

Leu

Glu 885

Arg

Ala

Leu

His

Tyr 890

Leu

Lys

Asn

Glu

Thr 895

Glu

ATT

GAA

CTG

GGG

AGC

CTG

TTG

AGA

CAA

GAT

TTC

CAA

GGA

TTG

CAT

AAT

2736

Ile

Glu

Leu

Gly 900

Ser

Leu

Leu

Arg

Gin 905

Asp

Phe

Gin

Gly

Leu 910

His

Asn

GAA

TTA

TTG

CTG

CGT

ATT

GGA

GAA

CAC

TAT

CAA

CAG

GTT

TTT

AAT

GGT

2784

Glu

Leu

Leu 915

Leu

Arg

Ile

Gly

Glu 920

His

Tyr

Gin

Gin

Val 925

Phe

Asn

Gly

TTG

TCA

ATA

CTT

GCC

TCA

TTT

GCA

TCC

AGT

GAT

GAT

CCA

TAT

CAG

GGC

2832

Leu

Ser 930

Ile

Leu

Ala

Ser

Phe 935

Ala

Ser

Ser

Asp

Asp 940

Pro

Tyr

Gin

Gly

CCG

AGA

GAT

ATC

ATA

TCA

CCT

GAA

CTG

ATG

GCT

GAT

TAT

TTA

CAA

CCC

2880

Pro 945

Arg

Asp

Ile

Ile

Ser 950

Pro

Glu

Leu

Met

Ala 955

Asp

Tyr

Leu

Gin

Pro 960

AAA

TTG

TTG

GGC

ATT

TTG

GCT

TTT

TTT

AAC

ATG

CAG

TTA

CTG

AGC

TCT

2928

Lys

Leu

Leu

Gly

Ile 965

Leu

Ala

Phe

Phe

Asn 970

Met

Gin

Leu

Leu

Ser 975

Ser

AGT

GTT

GGC

ATT

GAA

GAT

AAG

AAA

ATG

GCC

TTG

AAC

AGT

TTG

ATG

TCT

2976

Ser

Val

Gly

Ile 980

Glu

Asp

Lys

Lys

Met 985

Ala

Leu

Asn

Ser

Leu 990

Met

Ser

TTG

ATG

AAG

TTA

ATG

GGA

CCC

AAA

CAT

GTC

AGT

TCT

GTG

AGG

GTG

AAG

3024

Leu

Met

Lys 995

Leu

Met

Gly

Pro

Lys His 1000

Val

Ser

Ser

Val Arg 1005

Val

Lys

ATG

ATG

ACC

ACA

CTG

AGA

ACT

GGC

CTT

CGA

TTC

AAG

GAT

GAT

TTT

CCT

3072

Met

Met Thr 1010

Thr

Leu

Arg

Thr Gly 1015

Leu

Arg

Phe

Lys Asp 1020

Asp

Phe

Pro

GAA

TTG

TGT

TGC

AGA

GCT

TGG

GAC

TGC

TTT

GTT

CGC

TGC

CTG

GAT

CAT

3120

Glu Leu 1025

Cys

Cys

Arg

Ala Trp 1030

Asp

Cys

Phe

Val Arg 1035

Cys

Leu

Asp

His 1040

100 ····· · · *

GCT TGT CTG GGC TCC CTT CTC AGT CAT GTA ATA GTA GCT TTG

Ala Cys Leu Gly Ser Leu Leu Ser His Val Ile Val Ala Leu

1045 1050

CTT ATA CAC ATC CAG CCT AAA GAA ACT GCA GCT ATC TTC CAC

Leu Ile His Ile Gin Pro Lys Glu Thr Ala Ala Ile Phe His

1060 1065 1070

ATA ATT GAA AAC AGG GAT GCT GTG CAA GAT TTT CTT CAT GAA ATA TAT 3264

Ile Ile Glu Asn Arg Asp Ala Val Gin Asp Phe Leu His Glu Ile Tyr

1075 1080 1085

TTA CCT Leu Pro 1055

TAC CTC Tvr Leu

3168

3216

TTT Phe

TTA CCT Leu Pro 1090

GAT Asp

CAT His

CCA GAA TTA

AAA Lys

AAG Lys

ATA Ile

AAA GCC GTT Lys Ala Val 1100

CTC Leu

CAG Gin

3312

Pro

Glu Leu 1095

GAA

TAC AGA

AAG

GAG

ACC

TCT GAG

AGC

ACT

GAT

CTT CAG ACA

ACT

CTT

3360

Glu 110:

Tyr Arg )

Lys

Glu

Thr Ser Glu 1110

Ser

Thr

Asp 1115

Leu Gin Thr

Thr

Leu 1120

CAG

CTC TCT

ATG

AAG

GCC

ATT CAA

CAT

GAA

AAT

GTC GAT GTT

CGT

ATT

3408

Gin

Leu Sex-

Met

Lys Ala 1125

Ile Gin

His

Glu Asn 1130

Val Asp Val

Arg 1135

Ile

CAT

GCT CTT

ACA

AGC

TTG

AAG GAA

ACC

TTG

TAT

AAA AAT CAG

GAA

AAA

3456

His

Ala Leu

Thr Ser 1140

Leu

Lys Glu

Thr 1145

Leu

Tyr

Lys Asn Gin Glu 1150

Lys

CTG

ATA AAG

TAT

GCA

ACA

GAC AGT

GAA

ACA

GTA

GAA CCT ATT

ATC

TCA

3504

Leu

Ile Lys Tyr 1155

Ala

Thr

Asp Ser Glu 1160

Thr

Val

Glu Pro Ile 1165

Ile

Ser

CAG

TTG GTG

ACA

GTG

CTT

TTG AAA

GGT

TGC

CAA

GAT GCA AAC

TCT

CAA

3552

Gin

Leu Val 1170

Thr

Val

Leu

Leu Lys 1175

Gly

Cys

Gin

Asp Ala Asn 1180

Ser

Gin

GCT

CGG TTG

CTC

TGT

GGG

GAA TGT

TTA

GGG

GAA

TTG GGG GCG

ATA

GAT

3600

Ala Arg Leu 1185

Leu

Cys

Gly Glu Cys 1190

Leu

Gly

Glu Leu Gly Ala 1195

Ile

Asp 1200

CCA

GGT CGA

TTA

GAT

TTC

TCA ACA

ACT

GAA

ACT

CAA GGA AAA

GAT

TTT

3648

Pro

Gly Arg

Leu

Asp Phe 1205

Ser Thr

Thr

Glu Thr 1210

Gin Gly Lys

Asp Phe 1215

ACA

TTT GTG

ACT

GGA

GTA

GAA GAT

TCA

AGC

TTT

GCC TAT GGA

TTA

TTG

3696

Thr

Phe Val

Thr Gly 1220

Val

Glu Asp

Ser Ser 1225

Phe

Ala Tyr Gly Leu 1230

Leu

ATG

GAG CTA

ACA

AGA

GCT

TAC CTT

GCG

TAT

GCT

GAT AAT AGC

CGA

GCT

3744

Met

Glu Leu Thr 1235

Arg

Ala

Tyr Leu Ala 1240

Tyr

Ala

Asp Asn Ser 1245

Arg

Ala

CCA

GAT TCA

GCT

GCC

TAT

GCC ATT

CAG

GAG

TTG

CTT TCT ATT

TAT

GAC

3792

Pro

Asp Ser 1250

Ala

Ala

Tyr

Ala Ile 1255

Gin

Glu

Leu

Leu Ser Ile 1260

Tyr

Asp

TGT

AGA GAG

ATG

GAG

ACC

AAC GGC

CCA

GGT

CAC

CAA TTG TGG

AGG

AGA

3840

Cys Arg Glu 1265

Met

Glu

Thr Asn Gly 1270

Pro

Gly

His Gin Leu Trp 1275

Arg

Arg 1280

TTT

CCT GAG

CAT

GTT

CGG

GAA ATA

CTA

GAA

CCT

CAT CTA AAT

ACC

AGA

3888

Phe

Pro Glu

His

Val 1285

Arg

Glu Ile

Leu

Glu Pro 1290

His Leu Asn

Thr Arg 1295

TAC

AAG AGT

TCT

CAG

AAG

TCA ACC

GAT

TGG

TCT

GGA GTA AAG

AAG

CCA

3936

Tyr

Lys Ser

Ser 130C

Gin 1

Lys

Ser Thr

Asp Trp 1305

Ser

Gly Val Lys Lys 1310

Pro

- 101 -

ATT Ile

TAC Tyr

TTA AGT Leu Ser 1315

AAA Lys

TTG Leu

GGT Gly

AGT AAC Ser Asn 1320

TTT Phe

GCA Ala

GAA Glu

TGG TCA Trp Ser 1325

GCA Ala

TCT Ser

3984

TGG

GCA

GGT TAT

CTT

ATT

ACA

AAG GTT

CGA

CAT

GAT

CTT GCC

AGT

AAA

4032

Trp

Ala Gly Tyr 1330

Leu

Ile

Thr Lys Val 1335

Arg

His

Asp Leu Ala 1340

Ser

Lys

ATT

TTC

ACC TGC

TGT

AGC

ATT

ATG ATG

AAG

CAT

GAT

TTC AAA

GTG

ACC

4080

Ile Phe 1345

Thr Cys

Cys

Ser Ile 1350

Met Met

Lys

His Asp 1355

Phe Lys

Val

Thr 1360

ATC

TAT

CTT CTT

CCA

CAT

ATT

CTG GTG

TAT

GTC

TTA

CTG GGT

TGT

AAT

4128

Ile

Tyr

Leu Leu

Pro His 1365

Ile

Leu Val

Tyr Val 1370

Leu

Leu Gly

Cys 1375

Asn

CAA

GAA

GAT CAG

CAG

GAG

GTT

TAT GCA

GAA

ATT

ATG

GCA GTT

CTA

AAG

4176

Gin

Glu

Asp Gin Gin 1380

Glu

Val

Tyi’ Ala 1385

Glu

Ile

Met

Ala Val Leu 1390

Lys

CAT

GAC

GAT CAG

CAT

ACC

ATA

AAT ACC

CAA

GAC

ATT

GCA TCT

GAT

CTG

4224

His

Asp

Asp Gin 1395

His

Thr

Ile

Asn Thr 1400

Gin

Asp

Ile

Ala Ser 1405

Asp

Leu

TGT

CAA

CTC AGT

ACA

CAG

ACT

GTG TTC

TCC

ATG

CTT

GAC CAT

CTC

ACA

4272

Cys

Gin 141C

Leu Ser )

Thr

Gin

Thr 1415

Val Phe

Ser

Met

Leu Asp His 1420

Leu

Thr

CAG

TGG

GCA AGG

CAC

AAA

TTT

CAG GCA

CTG

AAA

GCT

GAG AAA

TGT

CCA

4320

Gin Trp 1425

Ala Arg

His

Lys Phe 1430

Gin Ala

Leu

Lys Ala 1435

Glu Lys

Cys

Pro 1440

CAC

AGC

AAA TCA

AAC

AGA

AAT

AAG GTA

GAC

TCA

ATG

GTA TCT

ACT

GTG

4368

His

Ser

Lys Ser

Asn Arg 1445

Asn

Lys Val

Asp Ser 1450

Met

Val Ser

Thr 1455

Val

GAT

TAT

GAA GAC

TAT

CAG

AGT

GTA ACC

CGT

TTT

CTA

GAC CTC

ATA

CCC

4416

Asp

Tyr

Glu Asp Tyr 1460

Gin

Ser

Val Thr Arg 1465

Phe

Leu

Asp Leu Ile 1470

Pro

CAG

GAT

ACT CTG

GCA

GTA

GCT

TCC TTT

CGC

TCC

AAA

GCA TAC

ACA

CGA

4464

Gin

Asp

Thr Leu 1475

Ala

Val

Ala

Ser Phe 1480

Arg

Ser

Lys

Ala Tyr 1485

Thr

Arg

GCT

GTA

ATG CAC

TTT

GAA

TCA

TTT ATT

ACA

GAA

AAG

AAG CAA

AAT

ATT

4512

Ala

Val Met His 1490

Phe

Glu

Ser Phe Ile 1495

Thr

Glu

Lys Lys Gin 1500

Asn

Ile

CAG

GAA

CAT CTT

GGA

TTT

TTA

CAG AAA

TTG

TAT

GCT

GCT ATG

CAT

GAA

4560

Gin Glu 1505

His Leu

Gly

Phe Leu 1510

Gin Lys

Leu

Tyr Ala 1515

Ala Met

His

Glu 1520

CCT

GAT

GGA GTG

TCC

GGA

GTC

AGT GCA

ATT

AGA

AAG

GCA GAA

CCA

TCT

4608

Pro

Asp

Gly Val

Ser Gly 1525

Val

Ser Ala

Ile Arg 1530

Lys

Ala Glu

Pro Ser 1535

CTA

AAA

GAA CAG

ATC

CTT

GAA

CAT GAA

AGC

CTT

GGC

TTG CTG

AGG

GAT

4656

Leu

Lys

Glu Gin Ile 1540

Leu

Glu

His Glu Ser 1545

Leu

Gly

Leu Leu Arg 1550

Asp

GCC

ACT

GCT TGT

TAT

GAC

AGG

GCT ATT

CAG

CTA

GAA

CCA GAC

CAG

ATC

4704

Ala

Thr

Ala Cys 1555

Tyr

Asp

Arg

Ala Ile 1560

Gin

Leu

Glu

Pro Asp 1565

Gin

Ile

ATT

CAT

TAC CAT

GGT

GTA

GTA

AAG TCC

ATG

TTA

GGT

CTT GGT

CAG

CTG

4752

Ile

His 157C

Tyr His 1

Gly

Val

Val Lys Ser 1575

Met

Leu

Gly Leu Gly 1580

Gin

Leu

- 102 ·· · ·· ··· ···· • · ····

TCT ACT Ser Thr 1585

GTT Val

ATC Ile

ACT Thr

CAG GTG Gin Val 1590

AAT Asn

GGA Gly

GTG Val

CAT GCT His Ala 1595

AAC Asn

AGG Arg

TCC Ser

GAG Glu 1600

4800

TGG ACA

GAT

GAA

TTA

AAC ACG

TAC

AGA

GTG

GAA GCA

GCT

TGG

AAA

TTG

4848

Trp Thr

Asp

Glu

Leu

Asn Thr

Tyr

Arg

Val

Glu Ala

Ala

Trp

Lys

Leu

1605

1610

1615

TCA CAG

TGG

GAT

TTG

GTG GAA

AAC

TAT

TTG

GCA GCA

GAT

GGA

AAA

TCT

4896

Ser Gin

Trp

Asp

Leu

Val Glu

Asn

Tyr

Leu

Ala Ala

Asp

Gly

Lve

Ser

1620

1625

1630

ACA ACA

TGG

AGT

GTC

AGA CTG

GGA

CAG

CTA

TTA TTA

TCA

GCC

AAA

AAA

4944

Thr Thr

Trp

Ser

Val

Arg Leu

Gly

Gin

Leu

Leu Leu

Ser

Ala

Lys

Lys

1635

1 64 C

)

1645

AGA GAT

ATC

ACA

GCT

TTT TAT

GAC

TCA

CTG

AAA CTA

GTG

AGA

GCA

GAA

4992

Arg Asp

Ile

Thr

Ala

Phe Tyr

Asp

Ser

Leu

Lys Leu

Val

Arg

Ala

Glu

1650

1655

1660

CAA ATT

GTA

CCT

CTT

TCA GCT

GCA

AGC

TTT

GAA AGA

GGC

TCC

TAC

CAA

5040

Gin Ile

Val

Pro

Leu

Ser Ala

Ala

Ser

Phe

Glu Arg

Gly

Ser

Tyr

Gin

1665

1670

1675

1660

CGA GGA

TAT

GAA

TAT

ATT GTG

AGA

TTG

CAC

ATG TTA

TGT

GAG

TTG

GAG

5088

Arg Gly

Tyr

Glu

Tyr

Ile Val

Arg

Leu

His

Met Leu

Cys

Glu

Leu

Glu

1685

1690

1695

CAT AGC

ATC

AAA

CCA

CTT TTC

CAG

CAT

TCT

CCA GGT

GAC

AGT

TCT

CAA

5136

His Ser

Ile

Lys

Pro

Leu Phe

Gin

His

Ser

Pro Gly

Asp

Ser

Ser

Gin

1700

1705

1710

GAA GAT

TCT

CTA

AAC

TGG GTA

GCT

CGA

CTA

GAA ATG

ACC

CAG

AAT

TCC

5184

Glu Asp

Ser

Leu

Asn

Trp Val

Ala

Arg

Leu

Glu Met

Thr

Gin

Asn

Ser

1715

1720

1725

TAC AGA

GCC

AAG

GAG

CCT ATC

CTG

GCT

CTC

CGG AGG

GCT

TTA

CTA

AGC

5232

Tyr Arg

Ala

Lys

Glu

Pro Ile

Leu

Ala

Leu

Arg Arg

Ala

Leu

Leu

Ser

1730

1735

1740

CTC AAC

AAA

AGA

CCA

GAT TAC

AAT

GAA

ATG

GTT GGA

GAA

TGC

TGG

CTG

5280

Leu Asn

Lys

Arg

Pro

Asp Tyr

Asn

Glu

Met

Val Gly

Glu

Cys

Trp

Leu

1745

1750

1755

1760

CAG AGT

GCC

AGG

GTA

GCT AGA

AAG

GCT

GGT

CAC CAC

CAG

ACA

GCC

TAC

5328

Gin S e i'

Ala

Arg

Val

Ala Arg

Lys

Ala

Gly

His His

Gin

Thr

Ala

Tyr

1765

1770

1775

AAT GCT

CTC

CTT

AAT

GCA GGG

GAA

TCA

CGA

CTC GCT

GAA

CTG

TAC

GTG

5376

Asn Ala

Leu

Leu

Asn

Ala Gly

Glu

Ser

Arg

Leu Ala

Glu

Leu

Tyr

Val

1780

1785

1790

GAA AGG

GCA

AAG

TGG

CTC TGG

TCC

AAG

GGT

GAT GTT

CAC

CAG

GCA

CTA

5424

Glu Arg

Ala

Lys

Trp

Leu Trp

Ser

Lys

Gly

Asp Val

His

Gin

Ala

Leu

1795

1800

1805

ATT GTT

CTT

CAA

AAA

GGT GTT

GAA

TTA

TGT

TTT CCT

GAA

AAT

GAA

ACC

5472

Ile Val

Leu

Gin

Lys

Gly Val

Glu

Leu

Cys

Phe Pro

Glu

Asn

Glu

Thr

1810

1615

1820

CCA CCT

GAG

GGT

AAG

AAC ATG

TTA

ATC

CAT

GGT CGA

GCT

ATG

CTA

CTA

5520

Pro Pro

Glu

Gly

Lys

Asn Met

Leu

Ile

His

Gly Arg

Ala

Met

Leu

Leu

1825

1830

1835

1840

GTG GGC

CGA

TTT

ATG

GAA GAA

ACA

GCT

AAC

TTT GAA

AGC

AAT

GCA

ATT

5568

Val Gly

Arg

Phe

Met

Glu Glu

Thr

Ala

Asn

Phe Glu

Ser

Asn

Ala

Ile

1845

1850

1855

- 103 ····

ATG Met

AAA Lys

AAA Lys

TAT AAG Tyr Lys 1860

GAT Ásp

GTG Val

ACC Thr

GCG TGC Ala Cys 1865

CTG Leu

CCA Pro

GAA Glu

TGG GAG Trp Glu 1870

GAT Asp

5616

GGG

CAT

TTT

TAC CTT

GCC

AAG

TAC

TAT GAC

AAA

TTG

ATG

CCC ATG

GTC

5664

Gly

HiS

Phe 1875

Tyr Leu

Ala

Lys

Tyr Tyr Asp 1880

Lys

Leu

Met Pro Met 1885

Val

ACA

GAC

AAC

AAA ATG

GAA

AAG

CAA

GGT GAT

CTC

ATC

CGG

TAT ATA

GTT

5712

Thr

Asp 189C

Asn 1

Lys Met

Glu

Lys 1895

Gin

Gly Asp

Leu

Ile Arg 1900

Tyr Ile

Val

CTT

CAT

TTT

GGC AGA

TCT

CTA

CAA

TAT GGA

AAT

CAG

TTC

ATA TAT

CAG

5760

Leu His 1905

Phe

Gly Arg

Ser Leu 1910

Gin

Tyr Gly

Asn Gin 1915

Phe

Ile Tyr

Gin 1920

TCA

ATG

CCA

CGA ATG

TTA

ACT

CTA

TGG CTT

GAT

TAT

GGT

ACA AAG

GCA

5808

Ser

Met

Pro

Arg Met 1925

Leu

Thr

Leu

Trp Leu Asp 1930

Tyr

Gly

Thr Lys Ala 1935

TAT

GAA

TGG

GAA AAA

GCT

GGC

CGC

TCC GAT

CGT

GTA

CAA

ATG AGG

AAT

5856

Tyr

Glu

Trp

Glu Lys 1940

Ala

Gly

Arg

Ser Asp 1945

Arg

Val

Gin

Met Arg 1950

Asn

GAT

TTG

GGT

AAA ATA

AAC

AAG

GTT

ATC ACA

GAG

CAT

ACA

AAC TAT

TTA

5904

Asp

Leu

Gly Lys Ile 1955

Asn

Lys

Val Ile Thr 1960

Glu

His

Thr 1965

Asn Tyr

Leu

GCT

CCA

TAT

CAA TTT

TTG

ACT

GCT

TTT TCA

CAA

TTG

ATC

TCT CGA

ATT

5952

Ala

Pro Tyr 1970

Gin Phe

Leu

Thr 1975

Ala

Phe Ser

Gin

Leu Ile 1980

Ser Arg

Ile

TGT

CAT

TCT

CAC GAT

GAA

GTT

TTT

GTT GTG

CTT

GAT

GGA

AAT AAT

AGC

6000

Cys His 19E5

Ser

His Asp

Glu Val 1990

Phe

Val Val

Leu Asp 1995

Gly

Asn Asn

Ser 2000

CAA

GTA

TTT

CTA GCC

TAT

CCT

CAA

CAA GCA

ATG

TGG

ATG

ATG ACA

GCT

6048

Gin

Val

Phe

Leu Ala Tyr 2005

Pro

Gin

Gin Ala Met 2010

Trp

Met

Met Thr Ala 2015

GTG

TCA

AAG

TCA TCT

TAT

CCC

ATG

CGT GTG

AAC

AGA

TGC

AAG GAA

ATC

6096

Val

Ser

Lys

Ser Ser 2020

Tyr

Pro

Met

Arg Val 2025

Asn

Arg

Cys

Lys Glu 2030

Ile

CTC

AAT

AAA

GCT ATT

CAT

ATG

AAA

AAA TCC

TTA

GAG

AAG

TTT GTT

GGA

6144

Leu

Asn

Lys Ala Ile 2035

His

Met

Lys Lys Ser 2040

Leu

Glu

Lys Phe Val 2045

Gly

GAT

GCA

ACT

CGC CTA

ACA

GAT

AAG

CIT CTA

GAA

TTG

TGC

AAT AAA

CCG

6192

Asp

Ala Thr 2050

Arg Leu

Thr

Asp Lys 2055

Leu Leu

Glu

Leu Cys 2060

Asn Lys

Pro

GTT

GAT

GGA

AGT AGT

TCC

ACA

TTA

AGC ATG

AGC

ACT

CAT

TTT AAA

ATG

6240

Val Asp 2065

Gly

Ser Ser

Ser Thr 2070

Leu

Sex Met

Ser Thr 2075

His

Phe Lys

Met 2080

CTT

AAA

AAG

CTG GTA

GAA

GAA

GCA

ACA TTT

AGT

GAA

ATC

CTC ATT

CCT

6288

Leu

Lys

Lys

Leu Val Glu 2085

Glu

Ala

Thr Phe Ser 2090

Glu

Ile

Leu Ile Pro 2095

CTA

CAA

TCA

GTC ATG

ATA

CCT

ACA

CTT CCA

TCA

ATT

CTG

GGT ACC

CAT

6336

Leu

Gin

Ser

Val Met 2100

Ile

Pro

Thr

Leu Pro 2105

Ser

Ile

Leu

Gly Thr 2110

His

GCT

AAC

CAT

GCT AGC

CAT

GAA

CCA

TTT CCT

GGA

CAT

.TGG

GCC TAT

ATT

6384

Ala

Asn

His

Ala Ser

His

Glu

Pro

Phe Pro

Gly

His

Trp

Ala Tyr

Ile

2115 2120 2125

	- 104 -	• • · · • · • · • · ·· ·	·· • • • · • • ·	• · · ·· · · • · 9 · · • · ··· 9999
GCA	GGG TTT GAT GAT ATG GTG GAA ATT CTT GCT TCT CTT	CAG AAA	CCA	6432
Ala	Gly Phe Asp Asp Met Val Glu Ile Leu Ala Ser Leu 2130 2135 2140	Gin Lys	Pro
AAG	AAG ATT TCT TTA AAA GGC TCA GAT GGA AAG TTC TAC	ATC ATG	ATG	6480
Lys 2145	Lys Ile Ser Leu Lys Gly Ser Asp Gly Lys Phe Tyr 2150 2155	Ile Met	Met 2160
TGT	AAG CCA AAA GAT GAC CTG AGA AAG GAT TGT AGA CTA	ATG GAA	TTC	6528
Cys	Lys Pro Lys Asp Asp Leu Arg Lys Asp Cys Arg Leu 2165 2170	Met Glu Phe 2175
AAT	TCC TTG ATT AAT AAG TGC TTA AGA AAA GAT GCA GAG	TCT CGT	AGA	6576
Asn	Ser Leu Ile Asn Lys Cys Leu Arg Lys Asp Ala Glu 2180 2185	Ser Arg 2190	Arg
AGA	GAA CTT CAT ATT CGA ACA TAT GCA GTT ATT CCA CTA	AAT GAT	GAA	6624
Arg	Glu Leu His Ile Arg Thr Tyr Ala Val Ile Pro Leu Asn Asp 2195 2200 2205	Glu
TGT	GGG ATT ATT GAA TGG GTG AAC AAC ACT GCT GGT TTG	AGA CCT	ATT	6672
Cys	Gly Ile Ile Glu Trp Val Asn Asn Thr Ala Gly Leu 2210 2215 2220	Arg Pro	Ile
CTG	ACC AAA CTA TAT AAA GAA AAG GGA GTG TAT ATG ACA	GGA AAA	GAA	6720
Leu Thr Lys Leu Tyr Lys Glu Lys Gly Val Tyr Met Thr 2225 2230 2235	Gly Lys	Glu 2240
CTT	CGC CAG TGT ATG CTA CCA AAG TCA GCA GCT TTA TCT	GAA AAA	CTC	6768
Leu	Arg Gin Cys Met Leu Pro Lys Ser Ala Ala Leu Ser 2245 2250	Glu Lys Leu 2255
AAA	GTA TTC CGA GAA TTT CTC CTG CCC AGG CAT CCT CCT	ATT TTT	CAT	6816
Lys	Val Phe Arg Glu Phe Leu Leu Pro Arg His Pro Pro 2260 2265	Ile Phe 2270	His
GAG	TGG TTT CTG AGA ACA TTC CCT GAT CCT ACA TCA TGG	TAC AGT	AGT	6864
Glu	Trp Phe Leu Arg Thr Phe Pro Asp Pro Thr Ser Trp Tyr Ser 2275 2280 2285	Ser
AGA	TCA GCT TAC TGC CGT TCC ACT GCA GTA ATG TCA ATG	GTT GGT	TAT	6912
Arg	Ser Ala Tyr Cys Arg Ser Thr Ala Val Met Ser Met 2290 2295 2300	Val Gly	Tyr
ATT	CTG GGG CTT GGA GAC CGT CAT GGT GAA AAT ATT CTC	TTT GAT	TCT	6960
Ile Leu Gly Leu Gly Asp Arg His Gly Glu Asn Ile Leu 2305 2310 2315	Phe Asp	Ser 2320
TTG	ACT GGT GAA TGC GTA CAT GTA GAT TTC AAT TGT CTT	TTC AAT	AAG	7008
Leu	Thr Gly Glu Cys Val His Val Asp Phe Asn Cys Leu 2325 2330	Phe Asn Lys 2335
GGA	GAA ACC TTT GAA GTT CCA GAA ATT GTG CCA TTT CGC	CTG ACT	CAT	7056
Gly	Glu Thr Phe Glu Val Pro Glu Ile Val Pro Phe Arg 2340 2345	Leu Thr 2350	His
AAT	ATG GTT AAT GGA ATG GGT CCT ATG GGA ACA GAG GGT	CTT TTT	CGA	7104
Asn	Met Val Asn Gly Met Gly Pro Met Gly Thr Glu Gly 2355 2360 236	Leu Phe j	Arg
AGA	GCA TGT GAA GTT ACA ATG AGG CTG ATG CGT GAT CAG	CGA GAG	CCT	7152
Arg	Ala Cys Glu Val Thr Met Arg Leu Met Arg Asp Gin 2370 2375 2380	Arg Glu	Pro
TTA	ATG AGT GTC TTA AAG ACT TTT CTA CAT GAT CCT CTT	GTG GAA	TGG	7200
Leu Met Ser Val Leu Lys Thr Phe Leu His Asp Pro Leu 2305 2390 2395	Val Glu	Trp 2400

	- 105 -	• · ·· · · ·	• •	• • · * · ·
AGT AAA CCA GTG AAA GGG CAT	TCC AAA GCG CCA CTG AAT	GAA ACT	GGA	7248
Ser Lys Pro Val Lys Gly His	Ser Lys Ala Pro Leu Asn	Glu Thr	Gly
2405	2410	2415
GAA GTT GTC AAT GAA AAG GCC	AAG ACC CAT GTT CTT GAC	ATT GAG	CAG	7296
Glu Val Val Asn Glu Lys Ala	Lys Thr His Val Leu Asp	Ile Glu	Gin
2420	2425	2430
CGA CTA CAA GGT GTA ATC AAG	ACT CGA AAT AGA GTG ACA	GGA CTG	CCG	7344
Arg Leu Gin Gly Val Ile Lys	Thr Arg Asn Arg Val Thr	Gly Leu	Pro
2435	2440 2445
TTA TCT ATT GAA GGA CAT GTG	CAT TAC CTT ATA CAA GAA	GCT ACT	GAT	7392
Leu Ser Ile Glu Gly His Val	His Tyr Leu Ile Gin Glu	Ala Thr	Asp
2450 2455 2460
GAA AAC TTA CTA TGC CAG ATG	TAT CTT GGT TGG ACT CCA	TAT ATG		7437
Glu Asn Leu Leu Cys Gin Met	Tyr Leu Gly Trp Thr Pro	Tyr Met
2465 2470	2475
TGA				7440
(2) INFORMACE 0 SEQ ID	NO:18:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 2479 aminokyselin
(B) TYP: aminokyselina
(D) TOPOLOGIE	: lineární
(ii) TYP MOLEKULY:	protein
(xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 18:
Met Gly His Ala Val Glu Trp	Pro Val Val Met Ser Arg	Phe Leu	Ser
1 5	10	15
Gin Leu Asp Glu His Met Gly	Tyr Leu Gin Ser Ala Pro	Leu Gin	Leu
20	25	30
Met Ser Met Gin Lys Leu Glu	Phe Ile Glu Val Thr Leu	Leu Thr	Val
35	40 45
Leu Thr Arg Ile Ile Ala Ile	Val Phe Phe Arg Arg Gin	Glu Leu	Leu
50 55	60
Leu Trp Gin Ile Gly Cys Val	Leu Leu Glu Tyr Gly Ser	Pro Lys	Ile
65 70	75		80
Lys Ser Leu Ala Ile Ser Phe	Leu Thr Glu Leu Phe Gin	Leu Gly	Gly
85	90	95
Leu Pro Ala Gin Pro Ala Ser	Thr Phe Phe Ser Ser Phe	Leu Glu	Leu
100	105	110
Leu Lys His Leu Val Glu Met	Asp Thr Asp Gin Leu Lys	Leu Tyr	Glu
115	120 125
Glu Pro Leu Ser Lys Leu Ile	Lys Thr Leu Phe Pro Phe	Glu Ala	Glu
130 135	140
Ala Tyr Arg Asn Ile Glu Pro	Val Tyr Leu Asn Met Leu	Leu Glu	Lys
145 150	155		160
Leu Cys Val Met Phe Glu Asp	Gly Val Leu Met Arg Leu	Lys Ser	Asp
165	170	175

• · · 1

- 106 -

• · • · · ·

• •

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

Val

Pro

Ala

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

Ala

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu

Lys

Met

Glu

Ser

225

230

235

240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

245

250

255

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Thr

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

Arg

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Arg

Thr

Gly

Gly

Asn

Ile

Asp

Lys

385

390

395

400

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

Ser

405

410

415

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

Pro

420

425

430

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

Asp

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

Phe

435

440

445

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser

450

455

460

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg

465

470

475

480

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

Gin

485

490

495

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

Arg

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

Ile

500

505

510

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

Ile

515

520

525

107 • · · · ·

Asp

Lys 530

Val

Lys

Asp

Asp

Ser 535

Asp

Ile

Val

Lys

Lys 540

Glu

Phe

Ala

Ser

Ile 545

Leu

Gly

Gin

Leu

Val 550

Cys

Thr

Leu

His

Gly 555

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr 560

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu 565

Pro

Phe

Ser

Glu

His 570

Gly

His

Val

Asp

Leu 575

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu 580

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin 585

His

Glu

Cys

Ser

Ser 590

Ser

Gin

Leu

Lys

Ala 5S5

Ser

Val

Cys

Lys

Pro 600

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu 605

Lys

Lys

Lys

Ile

Pro 610

Ser

Pro

Val

Lys

Leu 615

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn 620

Leu

His

His

Leu

Cys 625

Lys

His

Leu

Asp

Phe 630

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr 635

Asp

Val

Lys

Ala

Val 640

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu 645

Asn

Leu

Met

Glu

Asp 650

Pro

Asp

Lys

Asp

Val 655

Arg

Val

Ala

Phe

Ser 660

Gly

Asn

Ile

Lys

His 665

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu 670

Asp

Ser

Glu

Asp

Gly 675

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu 680

Phe

Val

Leu

Arg

Met 685

Lys

Glu

Ala

Tyr

Thr 690

His

Ala

Gin

Ile

Ser 695

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu 700

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile 705

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp 710

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala 715

Lys

Gly

Asp

Leu

Val 720

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu 725

His

Leu

Leu

His

Cys 730

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser 735

Ala

Ser

Val

Ser

Gly 740

Ala

Ala

Tyr

Thr

Glu 745

Ile

Arg

Ala

Leu

Val 750

Ala

Ala

Lys

Ser

Val 755

Lys

Leu

Gin

Ser

Phe 760

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys 765

Lys

Pro

Ile

Cys

Gin 770

Phe

Leu

Val

Glu

Ser 775

Leu

His

Ser

Ser

Gin 780

Met

Thr

Ala

Leu

Pro 7Θ5

Asn

Thr

Pro

Cys

Gin 790

Asn

Ala

Asp

Val

Arg 795

Lys

Gin

Asp

Val

Ala 800

His

Gin

Arg

Glu

Met 805

Ala

Leu

Asn

Thr

Leu 810

Ser

Glu

Ile

Ala

Asn 815

Val

Phe

Asp

Phe

Pro 820

Asp

Leu

Asn

Arg

Phe 825

Leu

Thr

Arg

Thr

Leu 830

Gin

Val

Leu

Leu

Pro 835

Asp

Leu

Ala

Ala

Lys 840

Ala

Ser

Pro

Ala

Ala 845

Ser

Ala

Leu

Ile

Arg 850

Thr

Leu

Gly

Lys

Gin 855

Leu

Asn

Val

Asn

Arg 860

Arg

Glu

Ile

Leu

Ile 865

Asn

Asn

Phe

Lys

Tyr 870

Ile

Phe

Ser

His

Leu 875

Val

Cys

Ser

Cys

Ser 880

	- 108 -	• · ·· · · ·	•
Lys Asp Glu Leu Glu	Arg Ala Leu His Tyr Leu Ly6 Asn	Glu Thr	Glu
885	890	895
Ile Glu Leu Gly Ser	Leu Leu Arg Gin Asp Phe Gin Gly	Leu His	Asn
900	905	910
Glu Leu Leu Leu Arg	Ile Gly Glu His Tyr Gin Gin Val	Phe Asn	Gly
915	920 925
Leu Ser Ile Leu Ala	Ser Phe Ala Ser Ser Asp Asp Pro	Tyr Gin	Gly
930	935 940
Pro Arg Asp Ile Ile	Ser Pro Glu Leu Met Ala Asp Tyr	Leu Gin	Pro
945	950 955		960
Lys Leu Leu Gly Ile	Leu Ala Phe Phe Asn Met Gin Leu	Leu Ser	Ser
965	970	975
Ser Val Gly Ile Glu	Asp Lys Lys Met Ala Leu Asn Ser	Leu Met	Ser
980	985	990
Leu Met Lys Leu Met	Gly Pro Lys His Val Ser Ser Val	Arg Val	Lys
995	1000 1005
Met Met Thr Thr Leu	Arg Thr Gly Leu Arg Phe Lys Asp	Asp Phe	Pro
1010	1015 1020
Glu Leu Cys Cys Arg	Ala Trp Asp Cys Phe Val Arg Cys	Leu Asp	His
1025	1030 1035		1040
Ala Cys Leu Gly Ser	Leu Leu Ser His Val Ile Val Ala	Leu Leu	Pro
1045	1050	1055
Leu Ile His Ile Gin	Pro Lys Glu Thr Ala Ala Ile Phe	His Tyr	Leu
1060	1065	1070
Ile Ile Glu Asn Arg	Asp Ala Val Gin Asp Phe Leu His	Glu Ile	Tyr
1075	1080 1085
Phe Leu Pro Asp His	Pro Glu Leu Lys Lys Ile Lys Ala	Val Leu	Gin
1090	1095 1100
Glu Tyr Arg Lys Glu	Thr Ser Glu Ser Thr Asp Leu Gin	Thr Thr	Leu
1105	1110 1115		1120
Gin Leu Ser Met Lys	Ala Ile Gin His Glu Asn Val Asp	Val Arg	Ile
1125	1130	1135
His Ala Leu Thr Ser	Leu Lys Glu Thr Leu Tyr Lys Asn	Gin Glu	Lys
1140	1145	1150
Leu Ile Lys Tyr Ala	Thr Asp Ser Glu Thr Val Glu Pro	Ile Ile	Ser
1155	1160 1165
Gin Leu Val Thr Val	Leu Leu Lys Gly Cys Gin Asp Ala	Asn Ser	Gin
1170	1175 1180
Ala Arg Leu Leu Cys	Gly Glu Cys Leu Gly Glu Leu Gly	Ala Ile	Asp
1185	1190 1195		1200
Pro Gly Arg Leu Asp	Phe Ser Thr Thr Glu Thr Gin Gly	Lys Asp	Phe
1205	1210	1215

Thr Phe Val Thr Gly Val Glu Asp Ser Ser Phe Ala Tyr Gly Leu Leu 1220 1225 1230

- 109 • · · ·· ·»·· ·« · · • · ·* ·

Met

Glu

Leu Thr 1235

Arg

Ala

Tyr

Leu Ala 124 0

Tyr

Ala

Asp

Asn Ser 1245

Arg

Ala

Pro

Asp

Ser Ala

Ala

Tyr

Ala

Ile Gin

Glu

Leu

Leu

Ser Ile

Tyr

Asp

1250

1255

1260

Cys

Arg

Glu Met

Glu

Thr

Asn

Gly Pro

Gly

His

Gin

Leu Trp

Arg

Arg

1265

1270

1275

1280

Phe

Pro

Glu His

Val

Arg

Glu

Ile Leu

Glu

Pro

His

Leu Asn

Thr

Arg

1285

1290

1295

Tyr

Lys

Ser Ser

Gin

Lys

Ser

Thr Asp

Trp

Ser

Gly

Val Lys

Lys

Pro

1300

1305

1310

Ile

Tyr

Leu Ser

Lys

Leu

Gly

Ser Asn

Phe

Ala

Glu

Trp Ser

Ala

Ser

1315

1320

1325

Trp

Ala

Gly Tyr

Leu

Ile

Thr

Lys Val

Arg

His

Asp

Leu Ala

Ser

Lys

1330

i

1335

1340

Ile

Phe

Thr Cys

Cys

Ser

Ile

Me t Me c

Lys

His

Asp

Phe Lys

Val

Thr

1345

1350

1355

1360

Ile

Tyr

Leu Leu

Pro

His

Ile

Leu Val

Tyr

Val

Leu

Leu Gly

Cys

Asn

1365

1370

1375

Gin

Glu

Asp Gin

Gin

Glu

Val

Tyr Ala

Glu

Ile

Met

Ala Val

Leu

Lys

1380

1385

1390

Hi s

Asp

Asp Gin

His

Thr

Ile

Asn Thr

Gin

Asp

Ile

Ala Ser

Asp

Leu

1395

1400

1405

Cys

Gin

Leu Ser

Thr

Gin

Thr

Val Phe

Ser

Met

Leu

Asp His

Leu

Thr

1410

1415

1420

Gin

Trp

Ala Arg

His

Lys

Phe

Gin Ala

Leu

Lys

Ala

Glu Lys

Cys

Pro

1425

1430

1435

1440

His

Ser

Lys Ser

Asn

Arg

Asn

Lys Val

Asp

Ser

Met

Val Ser

Thr

Val

1445

1450

1455

Asp

Tyr

Glu Asp

Tyr

Gin

Ser

Val Thr

Arg

Phe

Leu

Asp Leu

Ile

Pro

1460

1465

1470

Gin

Asp

Thr Leu

Ala

Val

Ala

Ser Phe

Arg

Ser

Lys

Ala Tyr

Thr

Arg

1475

1480

1485

Ala

Val

Met His

Phe

Glu

Ser

Phe Ile

Thr

Glu

Lys

Lys Gin

Asn

Ile

1490

1495

1500

Gin

Glu

His Leu

Gly

Phe

Leu

Gin Lys

Leu

Tyr

Ala

Ala Met

His

Glu

1505

1510

1515

1520

Pro

Asp

Gly Val

Ser

Gly

Val

Ser Ala

Ile

Arg

Lys

Ala Glu

Pro

Ser

1525

1530

1535

Leu

Lys

Glu Gin

Ile

Leu

Glu

His Glu

Ser

Leu

Gly

Leu Leu

Arg

Asp

1540

1545

1550

Ala

Thr

Ala Cys

Tyr

Asp

Arg

Ala Ile

Gin

Leu

Glu

Pro Asp

Gin

Ile

1555

1560

1565

Ile

His

Tyr His

Gly

Val

Val

Lys Ser

Met

Leu

Gly

Leu Gly

Gin

Leu

1570

1575

1580

- 110 • ·* ·· · · • · · • · · * · · ·· · ·· ·· • · • ···· ·· ···· • · • · ··· ··

Ser Thr 1585	Val	Ile	Thr	Gin Val 1590	Asn	Gly	Val His Ala Asn Arg Ser Glu
1595	1600
Trp Thr	Asp	Glu	Leu	Asn Thr	Tyr	Arg	Val Glu Ala Ala Trp	Lys Leu
			1605			1610	1615
Ser Gin	Trp	Asp	Leu	Val Glu	Asn	Tyr	Leu Ala Ala Asp Gly	Lys Ser
		1620			1625 1630
Thr Thr	Trp	Ser	Val	Arg Leu	Gly	Gin	Leu Leu Leu Ser Ala	Lys Lys
	1635			1640	1645
Arg Asp	Ile	Thr	Ala	Phe Tyr	Asp	Ser	Leu Lys Leu Val Arg	Ala Glu
1650			1655		1660
Gin Ile	Val	Pro	Leu	Ser Ala	Ala	Ser	Phe Glu Arg Gly Ser	Tyr Gin
1665				1670			1675	1680
Arg Gly	Tyr	Glu	Tyr	Ile Val	Arg	Leu	His Met Leu Cys Glu	Leu Glu
			1685			1690	1695
His Ser	Ile	Lys	Pro	Leu Phe	Gin	His	Ser Pro Gly Asp Ser	Ser Gin
		1700			1705	, 1710
Glu Asp	Ser	Leu	Asn	Trp Val	Ala	Arg	Leu Glu Met Thr Gin	Asn Ser
	1715			1720	1725
Tyr Arg	Ala	Lys	Glu	Pro Ile	Leu	Ala	Leu Arg Arg Ala Leu	Leu Ser
1730			1735		1740
Leu Asn	Lys	Arg	Pro	Asp Tyr	Asn	Glu	Met Val Gly Glu Cys	Trp Leu
1745				1750			1755	1760
Gin Ser	Ala	Arg	Val	Ala Arg	Lys	Ala	Gly His His Gin Thr	Ala Tyr
			1765			1770	1775
Asn Ala	Leu	Leu	Asn	Ala Gly	Glu	Ser	Arg Leu Ala Glu Leu	Tyr Val
		1780			1785	i 1790
Glu Arg	Ala	Lys	Trp	Leu Trp	Ser	Lys	Gly Asp Val His Gin	Ala Leu
	1795			1800	1805
Ile Val	Leu	Gin	Lys	Gly Val	Glu	Leu	Cys Phe Pro Glu Asn	Glu Thr
1810			1815		1820
Pro Pro	Glu	Gly	Lys	Asn Met	Leu	Ile	His Gly Arg Ala Met	Leu Leu
1825				1830			1835	1840
Val Gly	Arg	Phe	Met	Glu Glu	Thr	Ala	Asn Phe Glu Ser Asn	Ala Ile
			1845			1850	1855
Met Lys	Lys	Tyr	Lys	Asp Val	Thr	Ala	Cys Leu Pro Glu Trp	Glu Asp
		1860			1865	i 1870
Gly His	Phe	Tyr	Leu	Ala Lys	Tyr	Tyr	Asp Lys Leu Met Pro	Met Val
	1875			1880	1885
Thr Asp	Asn	Lys	Met	Glu Lys	Gin	Gly	Asp Leu Ile Arg Tyr	Ile Val
1890	1			1895		1900
Leu His	Phe	Gly	Arg	Ser Leu	Gin	Tyr	Gly Asn Gin Phe Ile	Tyr Gin
1905				1910			1915	1920
Ser Met	Pro	Arg	Met	Leu Thr	Leu	Trp	Leu Asp Tyr Gly Thr	Lys Ala
			1925			1930	1935

- 111

Tyr	Glu	Trp Glu Lys Ala 1940	Gly	Arg	Ser Asp Arg Val 1945	Gin Met Arg 1950	Asn
Asp	Leu	Gly Lys Ile Asn	Lys	Val	Ile Thr Glu His	Thr Asn Tyr	Leu
		1955		1960	1965
Ala	Pro	Tyr Gin Phe Leu	Thr	Ala	Phe Ser Gin Leu	Ile Ser Arg	Ile
	1970	1975	1980
Cys	His	Ser His Asp Glu	Val	Phe	Val Val Leu Asp	Gly Asn Asn	Ser
1985	1990		1995		2000
Gin	Val	Phe Leu Ala Tyr	Pro	Gin	Gin Ala Met Trp	Met Met Thr	Ala
		2005			2010	2015
Val	Ser'	Lys Ser Ser Tyr	Pro	Met	Arg Val Asn Arg	Cys Lys Glu	Ile
		2020			2025	2030
Leu	Asn	Lys Ala Ile His	Met	Lys	Lys Ser Leu Glu	Lys Phe Val	Gly
		2035		2040	2045
Asp	Ala	Thr Arg Leu Thr	Asp	Lys	Leu Leu Glu Leu	Cys Asn Lys	Pro
	2050	2055	2060
Val	Asp	Gly Ser Ser Ser	Thr	Leu	Ser Met Ser Thr	His Phe Lys	Met
2065	2070		2075		2080
Leu	Lys	Lys Leu Val Glu	Glu	Ala	Thr Phe Ser Glu	Ile Leu Ile	Pro
		2085			2090	2095
Leu	Gin	Ser Val Met Ile	Pro	Thr	Leu Pro Ser Ile	Leu Gly Thr	His
		2100			2105	2110
Ala	Asn	His Ala Ser His	Glu	Pro	Phe Pro Gly His	Trp Ala Tyr	Ile
		2115		2120	2125
Ala	Gly	Phe Asp Asp Met	Val	Glu	Ile Leu Ala Ser	Leu Gin Lys	Pro
	2130	2135	2140
Lys	Lys	Ile Ser Leu Lys	Gly	Ser	Asp Gly Lys Phe	Tyr Ile Met	Met
2145	2150		2155		2160
Cys	Lys	Pro Lys Asp Asp	Leu	Arg	Lys Asp Cys Arg	Leu Met Glu	Phe
		2165			2170	2175
Asn	Ser	Leu Ile Asn Lys	Cys	Leu	Arg Lys Asp Ala	Glu Ser Arg	Arg
		2180			2185	2190
Arg	Glu	Leu His Ile Arg	Thr	Tyr	Ala Val Ile Pro	Leu Asn Asp	Glu
		2195		2200	2205
Cys	Gly	Ile Ile Glu Trp	Val	Asn	Asn Thr Ala Gly	Leu Arg Pro	Ile
	2210	2215	2220
Leu	Thr	Lys Leu Tyr Lys	Glu	Lys	Gly Val Tyr Met	Thr Gly Lys	Glu
2225	2230		2235		2240
Leu	Arg	Gin Cys Met Leu	Pro	Lys	Ser Ala Ala Leu	Ser Glu Lys	Leu
		2245			2250	2255
Lys	Val	Phe Arg Glu Phe	Leu	Leu	Pro Arg His Pro	Pro Ile Phe	His
		2260			2265	2270

Glu Trp Phe Leu Arg Thr Phe Pro Asp Pro Thr Ser Trp Tyr Ser Ser 2275 2280 2285 • ·· ·

Arg	Ser Ala Tyr Cys Arg Ser Thr Ala Val Met	Ser Met 2300	Val	Gly	Tyr
2290	2295
Ile Leu Gly 2305	Leu Gly Asp Arg His Gly Glu Asn Ile Leu 2310 2315	Phe	Asp	Ser 2320
Leu	Thr Gly	Glu Cys Val His Val Asp Phe Asn 2325 2330	Cys Leu	Phe	Asn Lys 2335
Gly	Glu Thr	Phe Glu Val Pro Glu Ile Val Pro 2340 2345	Phe Arg	Leu Thr 2350	His
Asn	Met Val 2355	Asn Gly Met Gly Pro Met Gly Thr i 2360	Glu Gly Leu 2365	Phe	Arg
Arg	Ala Cys 2370	Glu Val Thr Met Arg Leu Met Arg 2375	Asp Gin 2380	Arg	Glu	Pro
Leu 2385	Met Ser	Val Leu Lys Thr Phe Leu His Asp 2390 2395	Pro Leu	Val	Glu	Trp 2400
Ser	Lys Pro	Val Lys Gly His Ser Lys Ala Pro 2405 2410	Leu Asn	Glu	Thr 2415	Gly
Glu	Val Val	Asn Glu Lys Ala Lys Thr His Val 2420 ' 2425	Leu Asp	Ile 243C	Glu 1	Gin
Arg	Leu Gin 2435	Gly Val Ile Lys Thr Arg Asn Arg 2440	Val Thr 2445	Gly	Leu	Pro
Leu	Ser Ile 2450	Glu Gly His Val His Tyr Leu Ile 2455	Gin Glu 2460	Ala	Thr	Asp
Glu 2465	Asn Leu	Leu Cys Gin Met Tyr Leu Gly Trp 2470 2475	Thr Pro	Tyr	Met

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:19:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 23 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer oDH26 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 19:

TGGTTTCTGA GAACATTCCC TGA 23 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:20:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 9 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: FLAG tag

113 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 20:

Met Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

5 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:21:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 20 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (Vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer 279-3 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 21:

TGGATGATGA CAGCTGTGTC 20 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:22:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 20 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (vii) BEZPROSTŘEDNÍ ZDROJ:

(B) KLON: primer 279-6 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 22:

TGTAGTCGCT GCTCAATGTC 20 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:23:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7624 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 333..7562 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 23:

CTTGTGAAGA GAATGTTTTA CACTCTTGTT AGTGAAGTTT ATTCTTTAAA AGTCAATCGT

CAAGGATTTA GCAAATGAAT TAGCACTTCG GATATACTTG TTTATTTAAT ATCTTTTTTG

120

114

TTTATTTCAA

CCTCCTGTCA

AGAATTCAGT

TTTGTTACAC

AATTGGATCA

AAGAAAATCT

TAACGAGACT

GTGAAGTCAT

TCTGCGGATT

CTGTTCATTA

GCAGCAACTC

TTATTTCTTT

180

240

TTAAAAGCAA

GAGTCCTGCT

ATTTTTGGGG

TACTCACAAA

AGAATTATTA

CAACTTTTTG

300

353

AAGACTTGGT TTACCTCCAT AGAAGAAATG TG ATG GGT CAT GCT GTG GAA TGG

Met T

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

CCA

GTG

GTC

ATG

AGC

CGA

TTT

TTA

AGT

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

CCT

TTG

CAG

TTG

ATG

AGT

ATG

CAA

AAT

TTA

GAA

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

Met

Ser

Met 35

Gin

Asn

Leu

Glu

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

TTA

TTA

ATG

GTT

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Met

Val

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

CTC

TTA

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

T>'r

Glu

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

AAG

ACA

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

Ala 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

Leu

Cys

Val

Met

Phe 165

Glu

Asp

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

CTT

AAG

TCT

GAT

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

Gly

Val

Leu 170

Met

Arg

Leu

Lys

Ser 175

Asp

Leu

Leu

Lys

Ala 180

Ala

Leu

Cys

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

His

Leu 185

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu 190

Lys

Phe

Val

Pro

Ala 195

Gly

Tyr

Glu

Ser

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

TAT

GTG

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

Ala 200

Leu

Gin

Val

Arg

Lys 205

Val

Tyr

Val

Arg

Asn 210

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu 215

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

ATT

GAG

GTA

GAT

GCA

GAG

TAC

TTG

TTG

GGC

CCA

Leu

Asp

Val

Leu

Gly 220

Ile

Glu

Val

Asp

Ala 225

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly 230

Pro

401

449

497

545

593

641

689

737

785

833

881

929

977

1025

115 • . · · · · · ···· • · · · · · ·

,.* .. ······· ·· »

CTT TAT GCA GCT

TTG Leu

AAA ' Lys

ATG Met

GAA Glu

AGT ATG

GAA ATC

ATT Ile

GAG Glu 245

GAG Glu

ATT Ile

1073

Leu

Tyr Ala

Ala 235

Ser 240

Met

Glu

Ile

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

1121

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

250

255

260

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

1169

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

265

270

275

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

1217

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

280

285

290

295

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

1265

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

300

305

310

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

1313

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

315

320

325

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

1361

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

330

335

340

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

1409

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

345

350

355

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

1457

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

360

365

370

375

TAC

ACA

AAA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

AGT

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

1505

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

380

385

390

AAA

CTG

GAC

CTG

GAG

C-CA

ACC

ATT

GAT

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

1553

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

395

400

405

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

TCA

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

1601

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

410

415

420

GAA

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

1649

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

Pro

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

425

430

435

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

1697

Asp

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

440

445

450

455

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

1745

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

460

465

470

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

1793

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

475

480

485

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

AAC

TGG

GCC

CTG

CAG

AGC

tcc

CAT

GAA

GTA

ATC

1841

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

Gin

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

490

495

500

116 • · w · ···· • · · · · · · ··· · • · · · -· · · ··· ·· ··· ···» *· ·

CGG GCT AGT

TGT GTT

AGT Ser

GGA TTT

TTT Phe

ATC Ile

TTA Leu

TTG Leu 515

CAG Gin

CAG Gin

CAG Gin

AAT Asn

1889

Arg Ala

Ser

Cys

Val

Gly 510

Phe

505

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

1937

Ser 520

Cys

Asn

Arg

Val

Pro 525

Lys

Ile

Leu

Ile

Asp 530

Lys

Val

Lys

Asp

Asp 535

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

TCT

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

1985

Ser

Asp

Ile

Val

Lys 540

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser 545

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu 550

Val

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

2033

Cys

Thr

Leu

His 555

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu 560

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr 565

Glu

Pro

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

2081

Phe

Ser

Glu 570

His

Gly

Hi s

Val

Asp 575

Leu

Phe

Cys

Arg

Asn 580

Leu

Lys

Ala

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

2129

Thr

Ser 585

Gin

His

Glu

Cys

Ser 590

Ser

Ser

Gin

Leu

Lys 595

Ala

Ser

Val

Cys

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

2177

Lys 600

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu 605

Leu

Lys

Lys

Lys

Ile 610

Pro

Ser

Pro

Val

Lys 615

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

2225

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp 620

Asn

Leu

His

His

Leu 625

Cys

Lys

His

Leu

Asp 630

Phe

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

2273

Arg

Glu

Asp

Glu 635

Thr

Asp

Val

Lys

Ala 640

Val

Leu

Gly

Thr

Leu 645

Leu

Asn

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

2321

Leu

Met

Glu 650

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp 655

Val

Arg

Val

Ala

Phe 660

Ser

Gly

Asn

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

2369

Ile

Lys 665

His

Ile

Leu

Glu

Ser 670

Leu

Asp

Ser

Glu

Asp 675

Gly

Phe

Ile

Lys

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

GCA

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

2417

Glu 680

Leu

Phe

Val

Leu

Arg 685

Met

Lys

Glu

Ala

Tyr 690

Thr

His

Ala

Gin

Ile 695

TCA

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

TTG

ATT

CTT

ACA

ACA

GGG

GAT

2465

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu 700

Leu

Lys

Asp

Thr

Leu 705

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly 710

Asp

ATT

GGA

AGG

GCC

GCA

AAA

GGA

GAT

TTG

GTA

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

2513

Ile

Gly

Arg

Ala 715

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu 720

Val

Pro

Phe

Ala

Leu 725

Leu

His

TTA

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

GCA

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

2561

Leu

Leu

His 730

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys 735

Ser

Ala

Ser

Val

Ser 740

Gly

Ala

Ala

TAC

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

GCT

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

2609

Tyr

Thr

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

Ala

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

745 750 755

AGT TTT TTC AGC CAG TAT AAG AAA CCC ATC TGT CAG TTT TTG GTA GAA 2657

Ser Phe Phe Ser Gin Tyr Lys Lys Pro Ile Cys Gin Phe Leu Val Glu

760 765 770 775

TCC	CTT	CAC	TCT	AGT	CAG	ATG	ACA	GCA
Ser	Leu	His	Ser	Ser 780	Gin	Met	Thr	Ala
AAT	GCT	GAC	GTG	CGA	AAA	CAA	GAT	GTG
Asn	Ala	Asp	Val 795	Arg	Lys	Gin	Asp	Val 800
TTA	AAT	ACG	TTG	TCT	GAA	ATT	GCC	AAC
Leu	Asn	Thr 810	Leu	Ser	Glu	Ile	Ala 815	Asn
AAT	CGT	TTT	CTT	ACT	AGG	ACA	TTA	CAA
Asn	Arg 825	Phe	Leu	Thr	Arg	Thr 830	Leu	Gin
GCC	AAA	GCA	AGC	CCT	GCA	GCT	TCT	GCT
Ala 84 0	Lys	Ala	Ser	Pro	Ala 845	Ala	Ser	Ala
CAA	TTA	AAT	GTC	AAT	CGT	AGA	GAG	ATT
Gin	Leu	Asn	Val	Asn 860	Arg	Arg	Glu	Ile
ATT	TTT	TCT	CAT	TTG	GTC	TGT	TCT	TGT
Ile	Phe	Ser	His 875	Leu	Val	Cys	Ser	Cys 880
GCC	CTT	CAT	TAT	CTG	AAG	AAT	GAA	ACA
Ala	Leu	Hi s 890	Tyr	Leu	Lys	Asn	Glu 895	Thr
TTG	AGA	CAA	GAT	TTC	CAA	GGA	TTG	CAT
Leu	Arg 905	Gin	Asp	Phe	Gin	Gly 910	Leu	His
GGA	GAA	CAC	TAT	CAA	CAG	GTT	TTT	AAT
Gly 920	Glu	His	Tyr	Gin	Gin 925	Val	Phe	Asn
TTT	GCA	TCC	AGT	GAT	GAT	CCA	TAT	CAG
Phe	Ala	Ser	Ser	Asp 940	Asp	Pro	Tyr	Gin
CCT	GAA	CTG	ATG	GCT	GAT	TAT	TTA	CAA
Pro	Glu	Leu	Met 955	Ala	Asp	Tyr	Leu	Gin 960
GCT	TTT	TTT	AAC	ATG	CAG	TTA	CTG	AGC
Ala	Phe	Phe 970	Asn	Met	Gin	Leu	Leu 975	Ser
AAG	AAA	ATG	GCC	TTG	AAC	AGT	TTG	ATG
Lys	Lys 985	Met	Ala	Leu	Asn	Ser 990	Leu	Met
CCC	AAA	CAT	GTC	AGT	TCT	GTG	AGG	GTG
Pro Lys 1000	His	Val	Ser	Ser Val 1005	Arg	Val
ACT	GGC	CTT	CGA	TTC	AAG	GAT	GAT	TTT
Thr	Gly	Leu	Arg	Phe	Lys	Asp	Asp	Phe

1020

_ 117	AAT Asn	ACT Thr	* CCA Pro	• » · * TGC Cys 790	• · CAG Gin	•
CTT Leu 785	CCG Pro	2705
GCT	CAC	CAG	AGA	GAA	ATG	GCT	2753
Ala	His	Gin	Arg	Glu 805	Met	Ala
GTT	TTC	GAC	TTT	CCT	GAT	CTT	2801
Val	Phe	Asp	Phe 820	Pro	Asp	Leu
GTT	CTA	CTA	CCT	GAT	CTT	GCT	2849
Val	Leu	Leu 835	Pro	Asp	Leu	Ala
CTC	ATT	CGA	ACT	TTA	GGA	AAA	2 89 7
Leu	Ile 850	Arg	Thr	Leu	Gly	Lys 855
TTA	ATA	AAC	AAC	TTC	AAA	TAT	2945
Leu 865	Ile	Asn	Asn	Phe	Lys 870	Tyr
TCC	AAA	GAT	GAA	TTA	GAA	CGT	2993
Ser	Lys	Asp	Glu	Leu 885	Glu	Arg
GAA	ATT	GAA	CTG	GGG	AGC	CTG	3041
Glu	Ile	Glu	Leu 900	Gly	Ser	Leu
AAT	GAA	TTA	TTG	CTG	CGT	ATT	3089
Asn	Glu	Leu 915	Leu	Leu	Arg	Ile
GGT	TTG	TCA	ATA	CTT	GCC	TCA	3137
Gly	Leu 930	Ser	Ile	Leu	Ala	Ser 935
GGC	CCG	AGA	GAT	ATC	ATA	TCA	3185
Gly 945	Pro	Arg	Asp	Ile	Ile 950	Ser
CCC	AAA	TTG	TTG	GGC	ATT	TTG	3233
Pro	Lys	Leu	Leu	Gly 965	Ile	Leu
TCT	AGT	GTT	GGC	ATT	GAA	GAT	3281
Ser	Ser	Val	Gly 980	Ile	Glu	Asp
TCT	TTG	ATG	AAG	TTA	ATG	GGA	3329
Ser	Leu	Met 995	Lys	Leu	Met	Gly
AAG	ATG	ATG	ACC	ACA	CTG	AGA	3377
Lys	Met Met 1010	Thr	Thr	Leu	Arg 1015
CCT	GAA	TTG	TGT	TGC	AGA	GCT	3425
Pro	Glu	Leu	Cys	Cys	Arg	Ala

TGG GAC TGC TTT GTT CGC TGC CTG GAT Trp Asp Cys Phe Val Arg Cys Leu Asp

1035 104

1025 10.30

CAT GCT TGT CTG GGC TCC CTT 3473

His Ala Cys Leu Gly Ser Leu

1045

118

CTC Leu

AGT Ser

CAT GTA His Val 1050

ATA Ile

GTÁ Val

GCT Ala

TTG TTA Leu Leu 1055

CCT Pro

CTT Leu

ATA Ile

CAC ATC His Ile 1060

CAG Gin

CCT Pro

3521

AAA

GAA

ACT GCA

GCT

ATC

TTC

CAC TAC

CTC

ATA

ATT

GAA AAC

AGG

GAT

3569

Lys

Glu 1065

Thr Ala

Ala

Ile

Phe His Tyr 1070

Leu

Ile

Ile Glu Asn 1075

Arg

Asp

GCT

GTG

CAA GAT

TTT

CTT

CAT

GAA ATA

TAT

TTT

TTA

CCT GAT

CAT

CCA

3617

Ala Val 1080

Gin Asp

Phe

Leu 1085

His

Glu Ile

Tyr

Phe Leu 1090

Pro Asp

His

Pro 1095

GAA

TTA

AAA AAG

ATA

AAA

GCC

GTT CTC

CAG

GAA

TAC

AGA AAG

GAG

ACC

3665

Glu

Leu

Lys Lys

Ile Lys 1100

Ala

Val Leu

Gin Glu 1105

Tyr

Arg Lys

Glu Thr 1110

TCT

GAG

AGC ACT

GAT

CTT

CAG

ACA ACT

CTT

CAG

CTC

TCT ATG

AAG

GCC

3713

Ser

Glu

Ser Thr Asp 1115

Leu

Gin

Thr Thr Leu 1120

Gin

Leu

Ser Met Lys 1125

Ala

ATT

CAA

CAT GAA

AAT

GTC

GAT

GTT CGT

ATT

CAT

GCT

CTT ACA

AGC

TTG

3761

Ile

Gin

His Glu 1130

Asn

Val

Asp

Val Arg 1135

Ile

His

Ala

Leu Thr 1140

Ser

Leu

ZaAG

GAA

ACC TTG

TAT

AAA

AAT

CAG GAA

AAA

CTG

ATA

AAG TAT

GCA

ACA

3809

Lys

Glu 1145

Thr Leu

Tyr

Lys

Asn Gin Glu 1150

Lys

Leu

Ile 1155

Lys Tyr

Ala

Thr

GAC

AGT

GAA ACA

GTA

GAA

CCT

ATT ATC

TCA

CAG

TTG

GTG ACA

GTG

CTT

3857

Asp Ser 1160

Glu Thr

Val

Glu 1165

Pro

Ile Ile

Ser

Gin Leu 1170

Val Thr

Val

Leu 1175

TTG

AAA

GGT TGC

CAA

GAT

GCA

AAC TCT

CAA

GCT

CGG

TTG CTC

TGT

GGG

3905

Leu

Lys

Gly Cys

Gin Asp 1180

Ala

Asn Ser

Gin 1185

Ala

Arg

Leu Leu

Cys 119C

Gly 1

GAA

TGT

TTA GGG

GAA

TTG

GGG

GCG ATA

GAT

CCA

GGT

CGA TTA

GAT

TTC

3953

Glu

Cys

Leu Gly Glu 1195

Leu

Gly

Ala Ile Asp 1200

Pro

Gly

Arg Leu Asp 1205

Phe

TCA

ACA

ACT GAA

ACT

CAA

GGA

AZA GAT

TTT

ACA

TTT

GTG ACT

GGA

GTA

4001

Ser

Thr

Thr Glu 1210

Thr

Gin

Gly

Lys Asp 1215

Phe

Thr

Phe

Val Thr 1220

Gly

Val

GAA

GAT

TCA AGC

TTT

GCC

TAT

GGA TTA

TTG

ATG

GAG

CTA ACA

AGA

GCT

4049

Glu

Asp 1225

Ser Ser

Phe

Ala

Tyr Gly Leu 1230

Leu

Met

Glu Leu Thr 1235

Arg

Ala

TAC

CTT

GCG TAT

GCT

GAT

AAT

AGC CGA

GCT

CAA

GAT

TCA GCT

GCC

TAT

4097

Tyr Leu 1240

Ala Tyr

Ala

Asp Asn 1245

Ser Arg

Ala

Gin Asp 1250

Ser Ala

Ala

Tyr 1255

GCC

ATT

CAG GAG

TTG

CTT

TCT

ATT TAT

GAC

TGT

AGA

GAG ATG

GAG

ACC

4145

Ala

Ile

Gin Glu

Leu Leu 1260

Ser

Ile Tyr

Asp Cys 1265

Arg

Glu Met

Glu Thr 1270

AAC

GGC

CCA GGT

CAC

CAA

TTG

TGG AGG

AGA

TTT

CCT

GAG CAT

GTT

CGG

4193

Asn

Gly

Pro Gly His 1275

Gin

Leu

Trp Arg Arg 1280

Phe

Pro

Glu His Val 1285

Arg

GZkA

ATA

CTA GAA

CCT

CAT

CTA

AAT ACC

AGA

TAC

AAG

AGT TCT

CAG

AAG

4241

Glu

Ile

Leu Glu 1290

Pro

His

Leu

Asn Thr 1295

Arg

Tyr

Lys

Ser Ser 1300

Gin

Lys

TCA

ACC

GAT TGG

TCT

GGA

GTA

AAG AAG

CCA

ATT

TAC

TTA AGT

AAA

TTG

4289

Ser

Thr Asp Trp 1305

Ser

Gly

Val Lys Lys 1310

Pro

Ile

Tyr Leu Ser 1315

Lys

Leu

GGT AGT Gly Ser 1320

AAC Asn

TTT GCA GAA TGG TCA GCA

TCT TGG GCA GGT TAT

CTT Leu

ATT Ile 1335

4337

Phe

Ala

Glu Trp 1325

Ser

Ala

Ser

Trp Ala 1330

Gly

Tyr

ACA AAG

GTT

CGA

CAT

GAT CTT

GCC

AGT

AAA

ATT TTC

ACC

TGC

TGT

AGC

4385

Thr Lys

Val

Arg

His Asp Leu 1340

Ala

Ser

Lys Ile Phe 1345

Thr

Cys

Cys Ser 1350

ATT ATG

ATG

AAG

CAT

GAT TTC

AAA

GTG

ACC

ATC TAT

CTT

CTT

CCA

CAT

4433

Ile Met

Met

Lys His 1355

Asp Phe

Lys

Val Thr 1360

Ile Tyr

Leu

Leu Pro 1365

His

ATT CTG

GTG

TAT

GTC

TTA CTG

GGT

TGT

AAT

CAA GAA

GAT

CAG

CAG

GAG

4481

Ile Leu

Val Tyr 1370

Val

Leu Leu

Gly Cys 1375

Asn

Gin Glu

Asp Gin 1380

Gin

Glu

GTT TAT

GCA

GAA

ATT

ATG GCA

GTT

CTA

AAG

CAT GAC

GAT

CAG

CAT

ACC

4529

Val Tyr 13 85

Ala

Glu

Ile

Met Ala Val 1390

Leu

Lys

His Asp 1395

Asp

Gin

His

Thr

ATA AAT

ACC

CAA

GAC

ATT GCA

TCT

GAT

CTG

TGT CAA

CTC

AGT

ACA

CAG

4577

Ile Asn 1400

Thr

Gin

Asp

Ile Ala 1405

Ser

Asp

Leu

Cys Gin 1410

Leu

Ser

Thr

Gin 1415

ACT GTG

TTC

TCC

ATG

CTT GAC

CAT

CTC

ACA

CAG TGG

GCA

AGG

CAC

AAA

4625

Thr Val

Phe

Ser

Met Leu Asp 1420

His

Leu

Thr 1425

Gin Trp

Ala

Arg

His Lys 1430

TTT CAG

GCA

CTG

AAA

GCT GAG

AAA

TGT

CCA

CAC AGC

AAA

TCA

AAC

AGA

4673

Phe Gin

Ala

Leu Lys 1435

Ala Glu

Lys

Cys 144C

Pro 1

His Ser

Lys

Ser Asn 1445

Arg

AAT AAG

GTA

GAC

TCA

ATG GTA

TCT

ACT

GTG

GAT TAT

GAA

GAC

TAT

CAG

4721

Asn Lys

Val Asp 1450

Ser

Met Val

Ser 1455

Thr 1

Val

Asp Tyr

Glu 146C

Asp 1

Tyr

Gin

AGT GTA

ACC

CGT

TTT

CTA GAC

CTC

ATA

CCC

CAG GAT

ACT

CTG

GCA

GTA

4769

Ser Val 1465

Thr

Arg

Phe

Leu Asp Leu 1470

Ile

Pro

Gin Asp 1475

Thr

Leu

Ala

Val

GCT TCC

TTT

CGC

TCC

AAA GCA

TAC

ACA

CGA

GCT GTA

ATG

CAC

TTT

GAA

4817

Ala Ser 1480

Phe

Arg

Ser

Lys Ala 1485

Tyr

Thr

Arg

Ala Val 1490

Met

His

Phe

Glu 1495

TCA TTT

ATT

ACA

GAA

AAG AAG

CAA

AAT

ATT

CAG GAA

CAT

CTT

GGA

TTT

4865

Ser Phe

Ile

Thr

Glu Lys Lys 1500

Gin

Asn

Ile 1505

Gin Glu

His

Leu

Gly Phe 1510

TTA CAG

AAA

TTG

TAT

GCT GCT

ATG

CAT

GAA

CCT GAT

GGA

GTG

GCC

GGA

4913

Leu Gin

Lys

Leu Tyr 1515

Ala Ala

Met

His Glu 1520

Pro Asp

Gly

Val Ala 1525

Gly

GTC AGT

GCA

ATT

AGA

AAG GCA

GAA

CCA

TCT

CTA AAA

GAA

CAG

ATC

CTT

4961

Val Ser

Ala Ile 1530

Arg

Lys Ala

Glu 1535

Pro

Ser

Leu Lys

Glu Gin 1540

Ile

Leu

GAA CAT

GAA

AGC

CTT

GGC TTG

CTG

AGG

GAT

GCC ACT

GCT

TGT

TAT

GAC

5009

Glu His 1545

Glu

Ser

Leu

Gly Leu Leu 1550

Arg

Asp

Ala Thr Ala 1555

Cys

Tyr

Asp

AGG GCT

ATT

CAG

CTA

GAA CCA

GAC

CAG

ATC

ATT CAT

TAC

CAT

GGT

GTA

5057

Arg Ala 1560

Ile

Gin

Leu

Glu Pro 1565

Asp

Gin

Ile

Ile His 1570

Tyr

His

Gly

Val 1575

GTA AAG

TCC

ATG

TTA

GGT CTT

GGT

CAG

CTG

TCT ACT

GTT

ATC

ACT

CAG

5105

Val Lys

Ser

Met

Leu 158C

Gly Leu 1

Gly

Gin

Leu Ser Thr 1585

Val

Ile

Thr Gin 1590

120

GTG Val

AAT Asn

GGA Gly

GTG CAT Val His 1595

GCT Ala

AAC Asn

AGG Arg

TCC GAG Ser Glu 1600

TGG Trp

ACA Thr

GAT Asp

GAA TTA Glu Leu 1605

AAC Asn

5153

ACG

TAC

AGA

GTG GAA

GCA

GCT

TGG

AAA TTG

TCA

CAG

TGG

GAT TTG

GTG

5201

Thr

Tyr

Arg Val Glu 1610

Ala

Ala

Trp Lys Leu 1615

Ser

Gin

Trp I62i

Asp Leu 0

Val

GAA

AAC

TAT

TTG GCA

GCA

GAT

GGA

AAA TCT

ACA

ACA

TGG

AGT GTC

AGA

5249

Glu

Asn 1625

Tyr

Leu Ala

Ala

Asp Gly 1630

Lys Ser

Thr

Thr Trp 1635

Ser Val

Arg

CTG

GGA

CAG

CTA TTA

TTA

TCA

GCC

AAA AAA

AGA

GAT

ATC

ACA GCT

TTT

5297

Leu Gly 1640

Gin

Leu Leu

Leu Ser 1645

Ala

Lys Lys

Arg Asp 1650

Ile

Thr Ala

Phe 1655

TAT

GAC

TCA

CTG AAA

CTA

GTG

AGA

GCA GAA

CAA

ATT

GTA

CCT CTT

TCA

5345

Tyr

Asp

Ser

Leu Lys Leu 1660

Val

Arg

Ala Glu 1665

Gin

Ile

Val

Pro Leu Ser 1670

GCT

GCA

AGC

TTT GAA

AGA

GGC

TCC

TAC CAA

CGA

GGA

TAT

GAA TAT

ATT

5393

Ala

Ala

Ser

Phe Glu 1675

Arg

Gly

Ser

Tyr Gin 1680

Arg

Gly

Tyr

Glu Tyr 1685

Ile

GTG

AGA

TTG

CAC ATG

TTA

TGT

GAG

TTG GAG

CAT

AGC

ATC

AAA CCA

CTT

5441

Val

Arg

Leu His Met 1690

Leu

Cys

Glu 1695

Leu Glu

His

Ser

Ile Lys Pro 1700

Leu

TTC

CAG

CAT

TCT CCA

GGT

GAC

AGT

TCT CAA

GAA

GAT

TCT

CTA AAC

TGG

5489

Phe

Gin His 1705

Ser Pro

Gly

Asp Ser 1710

Ser Gin

Glu

Asp Ser 1715

Leu Asn

Trp

GTA

GCT

CGA

CTA GAA

ATG

ACC

CAG

AAT TCC

TAC

AGA

GCC

AAG GAG

CCT

5537

Val Ala 1720

Arg

Leu Glu

Met Thr 1725

Gin

Asn Ser

Tyr Arg 1730

Ala

Lys Glu

Pro 1735

ATC

CTG

GCT

CTC CGG

AGG

GCT

TTA

CTA AGC

CTC

AAC

AAA

AGA CCA

GAT

5585

Ile

Leu

Ala

Leu Arg Arg 1740

Ala

Leu

Leu Ser Leu 1745

Asn

Lys

Arg Pro Asp 1750

TAC

AAT

GAA

ATG GTT

GGA

GAA

TGC

TGG CTG

CAG

AGT

GCC

AGG GTA

GCT

5633

Tyr

Asn

Glu

Met Val 1755

Gly

Glu

Cys

Trp Leu 1760

Gin

Ser

Ala

Arg Val 1765

Ala

AGA

AAG

GCT

GGT CAC

CAC

CAG

ACA

GCC TAC

AAT

GCT

CTC

CTT AAT

GCA

5681

Arg

Lys

Ala Gly His 1770

His

Gin

Thr 1775

Ala Tyr >

Asn

Ala

Leu Leu Asn 1780

Ala

GGG

GAA

TCA

CGA CTC

GCT

GAA

CTG

TAC GTG

GAA

AGG

GCA

AAG TGG

CTC

5729

Gly

Glu Ser 1785

Arg Leu

Ala

Glu Leu 1790

Tyr Val

Glu

Arg Ala 1795

Lys Trp

Leu

TGG

TCC

AAG

GGT GAT

GTT

CAC

CAG

GCA CTA

ATT

GTT

CTT

CAA AAA

GGT

5777

Trp Ser 1800

Lys

Gly Asp

Val His 1805

Gin

Ala Leu

Ile Val 1810

Leu

Gin Lys

Gly 1815

GTT

GAA

TTA

TGT TTT

CCT

GAA

AAT

GAA ACC

CCA

CCT

GAG

GGT AAG

AAC

5825

Val

Glu

Leu

Cys Phe Pro 1820

Glu

Asn

Glu Thr Pro 1825

Pro

Glu

Gly Lys Asn 1830

ATG

TTA

ATC

CAT GGT

CGA

GCT

ATG

CTA CTA

GTG

GGC

CGA

TTT ATG

GAA

5873

Met

Leu

Ile

His Gly 1835

Arg

Ala

Met

Leu Leu 1840

Val

Gly

Arg

Phe Met 1845 .

Glu

GAA

ACA

GCT

AAC TTT

GAA

AGC

AAT

GCA ATT

ATG

AAA

AAA

TAT AAG

GAT

5921

Glu

Thr

Ala 185C

Asn Phe 1

Glu

Ser

Asn 1855

Ala Ile

Met

Lys

Lys Tyr Lys 1860

Asp

- 121 -

GTG ACC GCG TGC

CTG Leu

CCA GAA TGG GAG GAT

GGG Gly

CAT His 1875

TTT Phe

TAC Tyr

CTT Leu

GCC Ala

5969

Val

Thr Ala 1865

Cys

Pro Glu Trp 1870

Glu

Asp

AAG

TAC TAT

GAC

AAA

TTG ATG CCC

ATG

GTC

ACA

GAC

AAC

AAA

ATG

GAA

6017

Lys Tyr Tyr 1880

Asp

Lys

Leu Met Pro 1885

Met

Val

Thr Asp 1890

Asn

Lys

Met

Glu 1895

AAG

CAA GGT

GAT

CTC

ATC CGG TAT

ATA

GTT

CTT

CAT

TTT

GGC

AGA

TCT

6065

Lys

Gin Gly

Asp

Leu Ile Arg Tyr 19 0 0

Ile

Val 1905

Leu

His

Phe

Gly

Arg Ser 1910

CTA

CAA TAT

GGA

AAT

CAG TTC ATA

TAT

CAG

TCA

ATG

CCA

CGA

ATG

TTA

6113

Leu

Gin Tyr

Gly Asn 1915

Gin Phe Ile

Tyr Gin 1920

Ser

Met

Pro

Arg 1925

Met

Leu

ACT

CTA TGG

CTT

GAT

TAT GGT ACA

AAG

GCA

TAT

GAA

TGG

GAA

AAA

GCT

6161

Thr

Leu Trp Leu 1930

Asp

Tyr Gly Thr 1935

Lys

Ala

Tyr

Glu

Trp Glu 1940

Lys

Ala

GGC

CGC TCC

GAT

CGT

GTA CAA ATG

AGG

AAT

GAT

TTG

GGT

AAA

ATA

AAC

6209

Gly

Arg Ser 1945

Asp

Arg

Val Gin Met 1950

Arg

Asn

Asp

Leu 1955

Gly

Lys

Ile

Asn

AAG

GTT ATC

ACA

GAG

CAT ACA AAC

TAT

TTA

GCT

CCA

TAT

CAA

TTT

TTG

6257

Lys Val Ile 1960

Thr

Glu

His Thr Asn 1965

Tyr

Leu

Ala Pro 1970

Tyr

Gin

Phe

Leu 1975

ACT

GCT TTT

TCA

CAA

TTG ATC TCT

CGA

ATT

TGT

CAT

TCT

CAC

GAT

GAA

6305

Thr

Ala Phe

Ser

Gin Leu Ile Ser 1980

Arg

Ile Cys 1985

His

Ser

His

Asp Glu 1990

GTT

TTT GTT

GTG

CTT

GAT GGA AAT

AAT

AGC

CAA

GTA

TTT

CTA

GCC

TAT

6353

Val

Phe Val

Val Leu 1995

Asp Gly Asn

Asn Ser 2000

Gin

Val

Phe

Leu Ala 2005

Tyr

CCT

CAA CAA

GCA

ATG

TGG ATG ATG

ACA

GCT

GTG

TCA

AAG

TCA

TCT

TAT

6401

Pro

Gin Gin Ala 2010

Met

Trp Met Met Thr 2015

Ala

Val

Ser

Lys Ser 2020

Ser

Tyr

CCC

ATG CGT

GTG

AAC

AGA TGC AAG

GAA

ATC

CTC

AAT

AAA

GCT

ATT

CAT

6449

Pro

Met Arg 2025

Val

Asn

Arg Cys Lys 2030

Glu

Ile

Leu

Asn Lys 2035

Ala

Ile

His

ATG

AAA AAA

TCC

TTA

GAG AAG TTT

GTT

GGA

GAT

GCA

ACT

CGC

CTA

ACA

6497

Met Lys Lys 2040

Ser

Leu

Glu Lys Phe 2045

Val

Gly

Asp Ala 2050

Thr

Arg

Leu

Thr 2055

GAT

AAG CTT

CTA

GAA

TTG TGC AAT

AAA

CCG

GTG

GAA

ATT

CTT

GCT

TCT

6545

Asp

Lys Leu

Leu

Glu Leu Cys Asn 2060

Lys

Pro Val 2065

Glu

Ile

Leu

Ala Ser 2070

CTT

CAG AAA

CCA

AAG

AAG ATT TCT

TTA

AAA

GGC

TCA

GAT

GGA

AAG

TTC

6593

Leu

Gin Lys

Pro Lys 2075

Lys Ile Ser

Leu Lys 2080

Gly

Ser

Asp

Gly Lys 2085

Phe

TAC

ATC ATG

ATG

TGT

AAG CCA AAA

GAT

GAC

CTG

AGA

AAG

GAT

TGT

AGA

6641

Tyr

Ile Met Met 2090

Cys

Lys Pro Lys Asp 2095

Asp

Leu

Arg

Lys Asp 2100

Cys

Arg

CTA

ATG GAA

TTC

AAT

TCC TTG ATT

AAT

AAG

TGC

TTA

AGA

AAA

GAT

GCA

6689

Leu

Met Glu 2105

Phe

Asn

Ser Leu Ile 2110

Asn

Lys

Cys

Leu Arg 2115

Lys

Asp

Ala

GAG

TCT CGT

AGA

AGA

GAA CTT CAT

ATT

CGA

ACA

TAT

GCA

GTT

ATT

CCA

6737

Glu Ser Arg 2120

Arg

Arg

Glu Leu His 2125

Ile

Arg

Thr Tyr 2130

Ala

Val

Ile

Pro 2135

··

- 122 -

CTA Leu

AAT Asn

GAT Asp

GAA Glu

TGT GGG Cys Gly 2140

ATT Ile

ATT Ile

GAA Glu

TGG GTG Trp Val 2145

AAC Asn

AAC Asn

ACT Thr

GCT GGT Ala Gly 2150

6785

TTG

AGA

CCT

ATT

CTG ACC

AAA

CTA

TAT

AAA GAA

AAG

GGA

GTG

TAT ATG

6833

Leu

Arg

Pro

Ile Leu Thr 2155

Lys

Leu

Tyr Lys Glu 2160

Lys

Gly

Val Tyr Met 2165

ACA

GGA

AAA

GAA

CTT CGC

CAG

TGT

ATG

CTA CCA

AAG

TCA

GCA

GCT TTA

6881

Thr

Gly

Lys Glu 2170

Leu Arg

Gin

Cys Met 2175

Leu Pro

Lys

Ser Ala 2180

Ala Leu

TCT

GAA

AAA

CTC

AAA GTA

TTC

CGA

GAA

TTT CTC

CTG

CCC

AGG

CAT CCT

6929

Ser

Glu Lys 2185

Leu

Lys Val

Phe Arg 2190

Glu

Phe Leu

Leu Pro 2195

Arg

His Pro

CCT

ATT

TTT

CAT

GAG TGG

TTT

CTG

AGA

ACA TTC

CCT

GAT

CCT

ACA TCA

6977

Pro Ile 2200

Phe

His

Glu Trp Phe 2205

Leu

Arg

Thr Phe Pro 2210

Asp

Pro

Thr Ser 2215

TGG

TAC

AGT

AGT

AGA TCA

GCT

TAC

TGC

CGT TCC

ACT

GCA

GTA

ATG TCA

7025

Trp

Tyr

Ser

Ser

Arg Ser 2220

Ala

Tyr

Cys

Arg Ser 2225

Thr

Ala

Val

Met Ser 2230

ATG

GTT

GGT

TAT

ATT CTG

GGG

CTT

GGA

GAC CGT

CAT

GGT

GAA

AAT ATT

7073

Met

Val

Gly

Tyr Ile Leu 2235

Gly

Leu

Gly Asp Arg 2240

His

Gly

Glu Asn Ile 2245

CTC

TTT

GAT

TCT

TTG ACT

GGT

GAA

TGC

GTA CAT

GTA

GAT

TTC

AAT TGT

7121

Leu

Phe

Asp Ser 2250

Leu Thr

Gly

Glu 2255

Cys

Val His

Val

Asp Phe 2260

Asn Cys

CTT

TTC

AAT

AAG

GGA GAA

ACC

TTT

GAA

GTT CCA

GAA

ATT

GTG

CCA TTT

7169

Leu

Phe 2265

Asn

Lys

Gly Glu

Thr Phe 2270

Glu

Val Pro

Glu Ile 2275

Val

Pro Phe

CGC

CTG

ACT

CAT

AAT ATG

GTT

AAT

GGA

ATG GGT

CCT

ATG

GGA

ACA GAG

7217

Arg Leu 2280

Thr

His

Asn Met Val 2285

Asn

Gly

Met Gly Pro 2290

Met

Gly

Thr Glu 2295

GGT

CTT

TTT

CGA

AGA GCA

TGT

GAA

GTT

ACA ATG

AGG

CTG

ATG

CGT GAT

7265

Gly

Leu

Phe

Arg

Arg Ala 2300

Cys

Glu

Val

Thr Met 2305

Arg

Leu

Met

Arg Asp 2310

CAG

CGA

GAG

CCT

TTA ATG

AGT

GTC

TTA

AAG ACT

TTT

CTA

CAT

GAT CCT

7313

Gin

Arg

Glu

Pro 2315

Leu Met

Ser

Val

Leu Lys Thr 2320

Phe

Leu

His Asp Pro 2325

CTT

GTG

GAA

TGG

AGT AAA

CCA

GTG

AAA

GGG CAT

TCC

AAA

GCG

CCA CTG

7361

Leu

Val

Glu Trp 2330

Ser Lys

Pro

Val Lys 2335

Gly His

Ser

Lys Ala 2340

Pro Leu

AAT

GAA

ACT

GGA

GAA GTT

GTC

AAT

GAA

AAG GCC

AAG

ACC

CAT

GTT CTT

7409

Asn

Glu Thr 2345

Gly

Glu Val

Val Asn 2350

Glu

Lys Ala

Lys Thr 2355

His

Val Leu

GAC

ATT

GAG

CAG

CGA CTA

CAA

GGT

GTA

ATC AAG

ACT

CGA

AAT

AGA GTG

7457

Asp Ile 2360

Glu

Gin

Arg Leu Gin 2365

Gly

Val

Ile Lys Thr 2370

Arg

Asn

Arg Val 2375

ACA

GGA

CTG

CCG

TTA TCT

ATT

GAA

GGA

CAT GTG

CAT

TAC

CTT

ATA CAA

7505

Thr

Gly

Leu

Pro

Leu Ser 2380

Ile

Glu

Gly

His Val 2385

His

Tyr

Leu

Ile Gin 2390

GAA

GCT

ACT

GAT

GAA AAC

TTA

CTA

TGC

CAG ATG

TAT

CTT

GGT

TGG ACT

7553

Glu

Ala

Thr

Asp 2395

Glu Asn

Leu

Leu

Cys Gin Met 2400

Tyr

Leu

Gly Trp Thr 2405

123

CCA TAT ATG TGAAATGAAA. TTATGTAAAA GAATATGTTA ATAATCTAAA 7 602

Pro Tyr Met

2410

AGTAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 7 624 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:24:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2410 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (Xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 24:

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu

His

Met

Gly

Tyr

Leu

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu

Gin

Leu

20

25

30

Met

Ser

Met

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe

Ile

Glu

Val

Thr

Leu

Leu

Met

Val

35

40

45

Leu

Thr

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile

Val

Phe

Phe

Arg

Arg

Gin

Glu

Leu

Leu

50

55

60

Leu

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile

65

70

75

80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu

Glu

Leu

100

105

110

Leu

Lys

His

Leu

Val

Glu

Met

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys

Leu

Tyr

Glu

115

120

125

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro

Phe

Glu

Ala

Glu

130

135

140

Ala

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn

Met

Leu

Leu

Glu

Lys

145

150

155

160

Leu

Cys

Val

Met

Phe

Glu

Asp

Gly

Val

Leu

Met

Arg

Leu

Lys

Ser

Asp

165

170

175

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

Val

Pro

Ala

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

Ala

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu

Lys

Met

Glu

Ser

225

230

235

240

Met Glu Ile Ile Glu Glu Ile Gin Cys Gin Thr Gin Gin Glu Asn Leu 245 250 255 • ·

- 124

Ser

Ser

Asn

Ser Asp Gly 260

Ile

Ser

Pro 265

Lys

Arg Arg Arg

Leu 270

Ser

Ser

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

385

390

395

400

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

405

410

415

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

420

425

430

Pro

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

Asp

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

435

440

445

Phe

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Sei'

Asp

Ser

Tyr

450

455

460

Ser

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

465

470

475

480

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

485

490

495

Gin

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

Arg

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

500

505

510

Ile

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

515

520

525

Ile

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

530

535

540

Ser

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

545

550

555

560

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

565

570

575

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

580

585

590

Gin

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

Cys

Lys

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

595

600

605

Lys	Ile 610	Pro	Ser	Pro	Val	Lys 615	Leu
Leu 625	Cys	Lys	His	Leu	Asp 630	Phe	Arg
Val	Leu	Gly	Thr	Leu 645	Leu	Asn	Leu
Arg	Val	Ala	Phe 660	Ser	Gly	Asn	Ile
Ser	Glu	Asp 675	Gly	Phe	Ile	Lys	Glu 680
Ala	Tyr 690	Thr	His	Ala	Gin	Ile 695	Ser
Leu 705	Ile	Leu	Thr	Thr	Gly 710	Asp	Ile
Val	Pro	Phe	Ala	Leu 725	Leu	His	Leu
Ala	Ser	Val	Ser 740	Gly	Ala	Ala	Tyr
Ala	Lys	Ser 755	Val	Lys	Leu	Gin	Ser 760
Ile	cys 770	Gin	Phe	Leu	Val	Glu 775	Ser
Leu 785	Pro	Asn	Thr	Pro	Cys 790	Gin	Asn
Ala	His	Gin	Arg	Glu 805	Met	Ala	Leu
Va 1	Phe	Asp	Phe 820	Pro	Asp	Leu	Asn
Val	Leu	Leu 835	Pro	Asp	Leu	Ala	Ala 840
Leu	Ile 850	Arg	Thr	Leu	Gly	Lys 855	Gin
Leu 865	Ile	Asn	Asn	Phe	Lys 870	Tyr	Ile
Ser	Lys	Asp	Glu	Leu 885	Glu	Arg	Ala
Glu	Ile	Glu	Leu 900	Gly	Ser	Leu	Leu
Asn	Glu	Leu 915	Leu	Leu	Arg	Ile	Gly 920
Gly	Leu 930	Ser	Ile	Leu	Ala	Ser 935	Phe
Gly 945	Pro	Arg	Asp	Ile	Ile 950	Ser	Pro

		125			•	• • ·«	•
Ala	Phe	Ile	Asp 620	Asn	Leu	His	His
Glu	Asp	Glu 635	Thr	Asp	Val	Lys	Ala 640
Met	Glu 650	Asp	Pro	Asp	Lys	Asp 655	Val
Lys 665	His	Ile	Leu	Glu	Ser 670	Leu	Asp
Leu	Phe	Val	Leu	Arg 685	Met	Lys	Glu
Arg	Asn	Asn	Glu 700	Leu	Lys	Asp	Thr
Gly	Arg	Ala 715	Ala	Lys	Gly	Asp	Leu 720
Leu	His 730	Cys	Leu	Leu	Ser	Lys 735	Ser
Thr 745	Glu	Ile	Arg	Ala	Leu 750	Val	Ala
Phe	Phe	Ser	Gin	Tyr 765	Lys	Lys	Pro
Leu	His	Ser	Ser 780	Gin	Met	Thr	Ala
Ala	Asp	Val 795	Arg	Lys	Gin	Asp	Val 800
Asn	Thr 810	Leu	Ser	Glu	Ile	Ala 815	Asn
Arg 825	Phe	Leu	Thr	Arg	Thr 830	Leu	Gin
Lys	Ala	Ser	Pro	Ala 845	Ala	Ser	Ala
Leu	Asn	Val	Asn 860	Arg	Arg	Glu	Ile
Phe	Ser	His 875	Leu	Val	Cys	Ser	Cys 880
Leu	His 890	Tyr	Leu	Lys	Asn	Glu 895	Thr
Arg 905	Gin	Asp	Phe	Gin	Gly 910	Leu	His
Glu	His	Tyr	Gin	Gin 925	Val	Phe	Asn
Ala	Ser	Ser	Asp 940	Asp	Pro	Tyr	Gin
Glu	Leu	Met 955	Ala	Asp	Tyr	Leu	Gin 960

126 • · · · · · · ··· *· ··· ···· ·· ·

Pro

Ly6

Leu

Leu

Gly 9 65

Ile

Leu

Ala

Phe

Phe 970

Asn

Met

Gin

Leu

Leu 975

Ser

Ser

Ser

Val

Gly

Ile

Glu

Asp

Lys

Lys

Met

Ala

Leu

Asn

Ser

Leu

Met

980

985

990

Ser

Leu

Met

Lys

Leu

Me t

Gly

Pro

Lys

His

Val

Ser

Ser

Val

Arg

Val

995

1000

1005

Lys

Met

Met

Thr

Thr

Leu

Arg

Thr

Gly

Leu

Arg

Phe

Lys

Asp

Asp

Phe

1010

1015

1020

Pro

Glu

Leu

Cys

Cys

Arg

Ala

Trp

Asp

Cys

Phe

Val

Arg

Cys

Leu

Asp

1025

1030

1035

1040

His

Ala

Cys

Leu

Gly

Ser

Leu

Leu

Ser

His

Val

Ile

Val

Ala

Leu

Leu

1045

1050

1055

Pro

Leu

Ile

His

Ile

Gin

Pro

Lys

Glu

Thr

Ala

Ala

Ile

Phe

His

Tyr

1060

1065

1070

Leu

Ile

Ile

Glu

Asn

Arg

Asp

Ala

Val

Gin

Asp

Phe

Leu

Hi s

Glu

Ile

1075

1080

1085

Tyr

Phe

Leu

Pro

Asp

His

Pro

Glu

Leu

Lys

Lys

Ile

Lys

Ala

Val

Leu

1090

1095

1100

Gin

Glu

Tyr

Arg

Lys

Glu

Thr

Ser

Glu

Ser

Thr

Asp

Leu

Gin

Thr

Thr

1105

1110

1115

1120

Leu

Gin

Leu

Ser

Met

Lys

Ala

Ile

Gin

His

Glu

Asn

Val

Asp

Val

Arg

1125

1130

1135

Ile

His

Ala

Leu

Thr

Ser

Leu

Lys

Glu

Thr

Leu

Tyr

Lys

Asn

Gin

Glu

1140

1145

1150

Lys

Leu

Ile

Lys

Tyr

Ala

Thr

Asp

Ser

Glu

Thr

Val

Glu

Pro

Ile

Ile

1155

1160

1165

Ser

Gin

Leu

Val

Thr

Val

Leu

Leu

Lys

Gly

Cys

Gin

Asp

Ala

Asn

Ser

1170

1175

1180

Gin

Ala

Arg

Leu

Leu

Cys

Gly

Glu

Cys

Leu

Gly

Glu

Leu

Gly

Ala

Ile

1185

1190

1195

1200

Asp

Pro

Gly

Arg

Leu

Asp

Phe

Ser

Thr

Thr

Glu

Thr

Gin

Gly

Lys

Asp

1205

1210

1215

Phe

Thr

Phe

Val

Thr

Gly

Val

Glu

Asp

Ser

Ser

Phe

Ala

Tyr

Glv

Leu

1220

1225

1230

Leu

Met

Glu

Leu

Thr

Arg

Ala

Tyr

Leu

Ala

Tyr

Ala

Asp

Asn

Ser

Arg

1235

1240

1245

Ala

Gin

Asp

Ser

Ala

Ala

Tyr

Ala

Ile

Gin

Glu

Leu

Leu

Ser

Ile

Tyr

1250

1255

1260

Asp

Cys

Arg

Glu

Met

Glu

Thr

Asn

Gly

Pro

Gly

His

Gin

Leu

Trp

Arg

12 65

1270

1275

1280

Arg

Phe

Pro

Glu

His

Val

Arg

Glu

Ile

Leu

Glu

Pro

His

Leu

Asn

Thr

1265

1290

1295

Arg Tyr Lys Ser Ser Gin Lys Ser Thr Asp Trp Ser Gly Val Lys Lys 1300 1305 ‘ 1310 • ·

Pro

Ile

Tyr Leu 1315

Ser

Lys

Leu

Gly Ser 1320

Asn

Phe

Ala

Glu Trp 1325

Ser

Ala

Ser

Trp

Ala Gly

Tyr

Leu

Ile

Thr Lys

Val

Arg

His

Asp Leu

Ala

Ser

1330

1335

1340

Lys

Ile

Phe Thr

Cys

Cys

Ser

Ile Met

Met

Lys

His

Asp Phe

Lys

Val

1345

1350

1355

1360

Thr

Ile

Tyr Leu

Leu

Pro

His

Ile Leu

Val

Tyr

Val

Leu Leu

Gly

Cys

1365

1370

1375

Asn

Gin

Glu Asp

Gin

Gin

Glu

Val Tyr

Ala

Glu

Ile

Met Ala

Val

Leu

1380

1385

1390

Lys

His

Asp Asp

Gin

His

Thr

Ile Asn

Thr

Gin

Asp

Ile Ala

Ser

Asp

1395

1400

1405

Leu

Cys

Gin Leu

Ser

Thr

Gin

Thr Val

Phe

Ser

Met

Leu Asp

His

Leu

1410

1415

1420

Thr

Gin

Trp Ala

Arg

His

Lys

Phe Gin

Ala

Leu

Lys

Ala Glu

Lys

Cys

1425

1430

1435

1440

Pro

His

Ser Lys

Ser

Asn

Arg

Asn Lys

Val

Asp

Ser

Met Val

Ser

Thr

1445

1450

1455

Val

Asp

Tyr Glu

Asp

Tyr

Gin

Ser Val

Thr

Arg

Phe

Leu Asp

Leu

Ile

1460

1465

1470

Pro

Gin

Asp Thr

Leu

Ala

Val

Ala Ser

Phe

Arg

Ser

Lys Ala

Tyr

Thr

1475

1480

1485

Arg

Ala

Val Met

His

Phe

Glu

Ser Phe

Ile

Thr

Glu

Lys Lys

Gin

Asn

1490

1495

1500

Ile

Gin

Glu His

Leu

Gly

Phe

Leu Gin

Lys

Leu

Tyr

Ala Ala

Met

His

1505

1510

1515

1520

Glu

Pro

Asp Gly

Val

Ala

Gly

Val Ser

Ala

Ile

Arg

Lys Ala

Glu

Pro

1525

1530

1535

Ser

Leu

Lys Glu

Gin

Ile

Leu

Glu His

Glu

Ser

Leu

Gly Leu

Leu

Arg

1540

1545

1550

Asp

Ala

Thr Ala

Cys

Tyr

Asp

Arg Ala

Ile

Gin

Leu

Glu Pro

Asp

Gin

1555

1560

1565

Ile

Ile

His Tyr

His

Gly

Val

Val Lys

Ser

Met

Leu

Gly Leu

Gly

Gin

1570

1575

1580

Leu

Ser

Thr Val

Ile

Thr

Gin

Val Asn

Gly

Val

His

Ala Asn

Arg

Ser

1585

1590

1595

1600

Glu

Trp

Thr Asp

Glu

Leu

Asn

Thr Tyr

Arg

Val

Glu

Ala Ala

Trn

Lys

1605

1610

1615

Leu

Ser

Gin Trp

Asp

Leu

Val

Glu Asn

Tyr

Leu

Ala

Ala Asp

Gly

Lys

1620

1625

1630

Ser

Thr

Thr Trp

Ser

Val

Arg

Leu Gly Gin

Leu

Leu

Leu Ser

Ala

Lys

1635

1640

1645

Lys

Arg

Asp Ile

Thr

Ala

Phe

Tyr Asp

Ser

Leu

Lys

Leu Val

Arg

Ala

1650

1655

1660

128

Glu	Gin Ile Val Pro Leu	Ser Ala Ala Ser Phe	Glu Arg Gly Ser Tyr
1665	167C	1 1675	i 1680
Gin	Arg Gly Tyr Glu Tyr 1685	Ile Val Arg Leu His 1690	Met Leu Cys Glu Leu 1695
Glu	His Ser Ile Lys Pro 1700	Leu Phe Gin His Ser 1705	Pro Gly Asp Ser Ser 1710
Gin	Glu Asp Ser Leu Asn 1715	Trp Val Ala Arg Leu 1720	Glu Met Thr Gin Asn 1725
Ser	Tyr Arg Ala Lys Glu 1730	Pro Ile Leu Ala Leu 1735	Arg Arg Ala Leu Leu 1740
Sex-	Leu Asn Lys Arg Pro	Asp Tyr Asn Glu Met	Val Gly Glu Cys Trp
1745	, 175C	i 1755	; 1760
Leu	Gin Sei Ala Arg Val 1765	Ala Arg Lys Ala Gly 1770	His His Gin Thr Ala 1775
Tyr	Asn Ala Leu Leu Asn 1780	Ala Gly Glu Ser Arg 1785	Leu Ala Glu Leu Tyr 1790
Val	Glu Arg Ala Lys Trp 1795	Leu Trp Ser Lys Gly 1800	Asp Val His Gin Ala 1805
Leu	Ile Val Leu Gin Lys 1810	Gly Val Glu Leu Cys 1815	Phe Pro Glu Asn Glu 1820
Thr	Pro Pro Glu Gly Lys	Asn Met Leu Ile His	Gly Arg Ala Met Leu
1825	, 183C	i 1835	1840
Leu	Val Gly Arg Phe Met 1845	Glu Glu Thr Ala Asn 1850	Phe Glu Ser Asn Ala 1855
Ile	Met Lys Lys Tyr Lys 1860	Asp Val Thr Ala Cys 1865	Leu Pro Glu Trp Glu 1870
Asp	Gly His Phe Tyr Leu 1875	Ala Lys Tyr Tyr Asp 1880	Lys Leu Met Pro Met 1885
Val	Thr Asp Asn Lys Met 1890	Glu Lys Gin Gly Asp 1895	Leu Ile Arq Tyr Ile 1900
Val	Leu His Phe Gly Arg	Ser Leu Gin Tyr Gly	Asn Gin Phe Ile Tyr
1905	’ 191C	i 1915	1920
Gin	Ser Met Pro Arg Met 1925	Leu Thr Leu Trp Leu 1930	Asp Tyr Gly Thr Lys 1935
Ala	Tyr Glu Trp Glu Lys 1940	Ala Gly Arg Ser Asp 1945	Arg Val Gin Met Arg 1950
Asn	Asp Leu Gly Lys Ile 1955	Asn Lys Val Ile Thr 1960	Glu His Thr Asn Tyr 1965
Leu	Ala Pro Tyr Gin Phe 1970	Leu Thr Ala Phe Ser 1975	Gin Leu Ile Ser Arg 1980
Ile	Cys His Ser His Asp	Glu Val Phe Val Val	Leu Asp Gly Asn Asn
1985	19*9 0	i 1995	, 2000

Ser Gin Val Phe Leu Ala Tyr Pro Gin Gin Ala Met Trp Met Met Thr 2005 2010 2015 • · ftftft · • ftft • ftftftft ftft ·

- 129 • ft • · • · • ft ftftftft

Ala	Val	Ser	Lys Ser 2020	Ser	Tyr	Pro	Met Arg Val Asn Arg Cys Lys	Glu
2025	2030
Ile	Leu	Asn	Lys Ala	Ile	His	Met	Lys Lys Ser	Leu Glu Lys Phe	Val
		2035			2040	2045
Gly	Asp	Ala	Thr Arg	Leu	Thr	Asp	Lys Leu Leu	Glu Leu Cys Asn	Lys
	2050			2055		2060
Pro	Val	Glu	Ile Leu	Ala	Ser	Leu	Gin Lys Pro	Lys Lys Ile Ser	Leu
2065			2070		2075	2080
Lys	Gly	Ser	Asp Gly	Lys	Phe	Tyr	Ile Met Met	Cys Lys Pro Lvs	Asp
			2085			2090	2095
Asp	Leu	Arg	Lys Asp	Cys	Arg	Leu	Met Glu Phe	Asn Ser Leu Ile	Asn
			2100				2105	2110
Lys	Cys	Leu	Arg Lys	Asp	Ala	Glu	Ser Arg Arg	Arg Glu Leu His	Ile
		2115			2120	2125
Arg	Thr	T>'r	Ala Val	Ile	Pro	Leu	Asn Asp Glu	Cys Gly Ile Ile	Glu
	2130			2135		2140
Trp	Val	Asn	Asn Thr	Ala	Gly	Leu	Arg Pro Ile	Leu Thr Lys Leu	Tyr
2145			2150		2155	2160
Lys	Glu	Lys	Gly Val	Tyr	Met	Thr	Gly Lys Glu	Leu Arg Gin Cys	Met
			2165			2170	2175
Leu	Pro	Lys	Ser Ala	Ala	Leu	Ser	Glu Lys Leu	Lys Val Phe Arg	Glu
			2180				2185	2190
Phe	Leu	Leu	Pro Arg	His	Pro	Pro	Ile Phe His	Glu Trp Phe Leu	Arg
		2195			2200	2205
Thr	Phe	Pro	Asp Pro	Thr	Ser	Trp	Tyr Ser Ser	Arg Ser Ala Tyr	Cys
	2210			2215		2220
Arg	Ser	Thr	Ala Val	Met	Ser	Met	Val Gly Tyr	Ile Leu Gly Leu	Gly
2225			2230		2235	2240
Asp	Arg	His	Gly Glu	Asn	Ile	Leu	Phe Asp Ser	Leu Thr Gly Glu	Cys
			2245			2250	2255
Val	His	Val	Asp Phe	Asn	Cys	Leu	Phe Asn Lys	Gly Glu Thr Phe	Glu
			2260				2265	2270
Val	Pro	Glu	Ile Val	Pro	Phe	Arg	Leu Thr His	Asn Met Val Asn	Gly
		2275			2280	2285
Met	Gly	Pro	Met Gly	Thr	Glu	Gly	Leu Phe Arg	Arg Ala Cys Glu	Val
	2290			2295		2300
Thr	Met	Arg	Leu Met	Arg	Asp	Gin	Arg Glu Pro	Leu Met Ser Val	Leu
2305				2310		2315	2320
Lys	Thr	Phe	Leu His	Asp	Pro	Leu	Val Glu Trp	Ser Lys Pro Val	Lys
			2325			2330	2335
Gly	His	Ser	Lys Ala	Pro	Leu	Asn	Glu Thr Gly	Glu Val Val Asn	Glu
			2340				2345	2350

Lys Ala Lys Thr His Val Leu Asp Ile Glu Gin Arg Leu Gin Gly Val 2355 2360 2365

- 130

Ile

Lys Thr 2370

Arg

Asn

Arg

Val 2375

Thr

Gly

Leu

Pro

Leu Ser 2380

Ile

Glu

Gly

His

Val His

Tyr

Leu

Ile

Gin

Glu

Ala

Thr

Asp

Glu Asn

Leu

Leu

Cys

2385

2390

2395

2400

Gin

Met Tyr

Leu

Gly

Trp

Thr

Pro

Tyr

Met

2405

2410

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:25:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7502 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1..7440 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 25:

ATG Met 1

GGT Gly

CAT His

GCT Ala

GTG Val 5

GAA TGG

CCA GTG

GTC Val 10

ATG Met

AGC Ser

CGA TTT

TTA Leu 15

AGT Ser

48

Glu

Trp

Pro

Val

Arg

Phe

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

CCT

TTG

CAG

TTG

96

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

ATG

AGT

ATG

CAA

AAT

TTA

GAA

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

TTA

TTA

ATG

GTT

144

Me t

Ser

Met 35

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Met

Val

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

CTC

TTA

192

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

240

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

288

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

336

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

384

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

Tyr

Glu

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

AAG

ACA

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

432

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

480

Ala 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

- 131 ·· ··· <· ··

CTC TGT GTC

ATG Met

TTT GAA

GAC GGT GTG

CTC Leu 170

ATG Met

CGG CTT AAG

TCT Ser 175

GAT Asp

528

Leu

Cys

Val

Phe 165

Glu

Asp Gly

Val

Arg

Leu

Lys

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

576

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

TAT

GTG

624

Val

Pro

Al a

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

ATT

GAG

GTA

GAT

672

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

GCA

GAG

TAC

TTG

TTG

GGC

CCA

CTT

TAT

GCA

GCT

TTG

AAA

ATG

GAA

AGT

720

Ala

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu

Lys

Met

Glu

Ser

2 2 5

230

235

240

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

768

Met

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

245

250

255

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

816

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

864

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

912

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

960

Ly s

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

1008

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

1056

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

1104

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

TAC

ACA

AAA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

1152

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

AGT

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

AAA

CTG

GAC

CTG

GAG

GCA

ACC

ATT

GAT

1200

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

3Θ5

390

395

400

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

1248

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

405

410

41.5

TCA

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

GAA

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

1296

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

420

425

430

-

132

-

• ’·

• ·· « · · • · · • · · · • · · ·· ·

·· « · « • · • • • ····

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

1344

Pro

Trp

Ile 435

Tyr

Ser

His

Ser

Asp 440

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys 445

Leu

Thr

Thr

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

1392

Phe

Ala 450

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr 455

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile 460

Ser

Asp

Ser

Tyr

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

1440

Ser 465

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser 470

Arg

Cys

Val

Phe

Leu 475

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro 480

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

AAC

TGG

GCC

CTG

1488

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu 485

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala 490

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala 495

Leu

CAG

AGC

TCC

CAT

GAA

GTA

ATC

CGG

GCT

AGT

TGT

GTT

AGT

GGA

TTT

TTT

1536

Gin

Ser

Ser

His 500

Glu

Val

Ile

Arg

Ala 505

Ser

Cys

Val

Ser

Gly 510

Phe

Phe

ATC

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

1584

Ile

Leu

Leu 515

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser 520

Cys

Asn

Arg

Val

Pro 525

Lys

Ile

Leu

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

1632

Ile

Asp 530

Lys

Val

Lys

Asp

Asp 535

Ser

Asp

Ile

Val

Lys 540

Lys

Glu

Phe

Ala

•p

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

1680

Ser 545

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu 550

Val

Cys

Thr

Leu

His 555

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu 560

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

1728

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr 565

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu 570

His

Gly

His

Val

Asp 575

Leu

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

1776

Phe

Cys

Arg

Asn 580

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser 585

Gin

His

Glu

Cys

Ser 590

Ser

Ser

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

1824

Gin

Leu

Lys 595

Ala

Ser

Val

Cys

Lvs 600

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu 605

Leu

Lys

Lys

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

1872

Lys

Ile 610

Pro

Ser

Pro

Val

Lys 615

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp 620

Asn

Leu

His

His

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

1920

Leu 625

Cys

Lys

His

Leu

Asp 630

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu 635

Thr

Asp

Val

Lys

Ala 640

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

1968

Val

Leu

Gly

Thr

Leu 645

Leu

Asn

Leu

Met

Glu 650

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp 655

Val

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

2016

Arg

Val

Al a

Phe 660

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys 665

His

Ile

Leu

Glu

Ser 670

Leu

Asp

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

2064

Ser

Glu

Asp 675

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu 680

Leu

Phe

Val

Leu

Arg 685

Met

Lys

Glu

GCA

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

TCA

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

2112

Ala

Tyr 690

Thr

His

Ala

Gin

Ile 695

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu 700

Leu

Lys

Asp

Thr

·· ····

- 133 ·· ···· • ·· · ·· ·· · · ·· · · · · • · · · · · · • · · · · · · ··· • · · · · · ·· ··· ···· ··

TTG ATT

CTT ACA ACA GGG

GAT ATT GGA AGG

GCC GCA AAA GGA GAT TTG

2160

Leu 705

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly 710

Asp

Ile

Gly

Arg

Ala 715

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu 720

GTA

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

TTA

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

2208

Val

Pro

Phe

Ala

Leu 725

Leu

His

Leu

Leu

His 730

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys 735

Ser

GCA

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

TAC

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

2256

Ala

Ser

Val

Ser 740

Gly

Ala

Ala

Tyr

Thr 745

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu 750

Val

Ala

GCT

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

AGT

TTT

TTC

AGC

CAG

TAT

AAG

AAA

CCC

2304

Ala

Lys

Ser 755

Val

Lys

Leu

Gin

Ser 760

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr 765

Lys

Lys

Pro

ATC

TGT

CAG

TTT

TTG

GTA

GAA

TCC

CTT

CAC

TCT

AGT

CAG

ATG

ACA

GCA

2352

Ile

Cys 770

Gin

Phe

Leu

Val

Glu 775

Ser

Leu

His

Ser

Ser 780

Gin

Met

Thr

Ala

CTT

CCG

AAT

ACT

CCA

TGC

CAG

AAT

GCT

GAC

GTG

CGA

AAA

CAA

GAT

GTG

2400

Leu 785

Pro

Asn

Thr

Pro

Cys 790

Gin

Asn

Ala

Asp

Val 795

Arg

Lys

Gin

Asp

Val 800

GCT

CAC

CAG

AGA

GAA

ATG

GCT

TTA

AAT

ACG

TTG

TCT

GAA

ATT

GCC

AAC

2448

Ala

His

Gin

Arg

Glu 805

Met

Ala

Leu

Asn

Thr 810

Leu

Ser

Glu

Ile

Ala 815

Asn

GTT

TTC

GAC

TTT

CCT

GAT

CTT

AAT

CGT

TTT

CTT

ACT

AGG

ACA

TTA

CAA

2496

Val

Phe

Asp

Phe 820

Pro

Asp

Leu

Asn

Arg 825

Phe

Leu

Thr

Arg

Thr 830

Leu

Gin

GTT

CTA

CTA

CCT

GAT

CTT

GCT

GCC

AAA

GCA

AGC

CCT

GCA

GCT

TCT

GCT

2544

Val

Leu

Leu 835

Pro

Asp

Leu

Ala

Ala 840

Lys

Ala

Ser

Pro

Ala 845

Ala

Ser

Ala

CTC

ATT

CGA

ACT

TTA

GGA

AAA

CAA

TTA

AAT

GTC

AAT

CGT

AGA

GAG

ATT

2592

Leu

Ile 850

Arg

Thr

Leu

Gly

Lys 855

Gin

Leu

Asn

Val

Asn 860

Arg

Arg

Glu

Ile

TTA

ATA

AAC

AAC

TTC

AAA

TAT

ATT

TTT

TCT

CAT

TTG

GTC

TGT

TCT

TGT

2640

Leu 865

Ile

Asn

Asn

Phe

Lys 870

Tyr

Ile

Phe

Ser

Hi s 875

Leu

Val

Cys

Ser

Cys 880

TCC

AAA

GAT

GAA

TTA

GAA

CGT

GCC

CTT

CAT

TAT

CTG

AAG

AAT

GAA

ACA

2688

Ser

Lys

Asp

Glu

Leu 885

Glu

Arg

Ala

Leu

His 890

Tyr

Leu

Lys

Asn

Glu 895

Thr

GAA

ATT

GAA

CTG

GGG

AGC

CTG

TTG

AGA

CAA

GAT

TTC

CAA

GGA

TTG

CAT

2736

Glu

Ile

Glu

Leu 900

Gly

Ser

Leu

Leu

Arg 905

Gin

Asp

Phe

Gin

Gly 910

Leu

His

AAT

GAA

TTA

TTG

CTG

CGT

ATT

GGA

GAA

CAC

TAT

CAA

CAG

GTT

TTT

AAT

2784

Asn

Glu

Leu 915

Leu

Leu

Arg

Ile

Gly 920

Glu

His

Tyr

Gin

Gin 925

Val

Phe

Asn

GGT

TTG

TCA

ATA

CTT

GCC

TCA

TTT

GCA

TCC

AGT

GAT

GAT

CCA

TAT

CAG

2832

Gly

Leu 930

Ser

Ile

Leu

Ala

Ser 935

Phe

Ala

Ser

Ser

Asp 940

Asp

Pro

Tyr

Gin

GGC

CCG

AGA

GAT

ATC

ATA

TCA

CCT

GAA

CTG

ATG

GCT

GAT

TAT

TTA

CAA

2880

Gly 945.

Pro

Arg

Asp

Ile

Ile 950

Ser

Pro

Glu

Leu

Met 955

Ala

Asp

Tyr

Leu

Gin 960

CCC

AAA

TTG

TTG

GGC

ATT

TTG

GCT

TTT

TTT

AAC

ATG

CAG

TTA

CTG

AGC

2928

Pro

Lys

Leu

Leu

Gly 965

Ile

Leu

Ala

Phe

Phe 970

Asn

Met

Gin

Leu

Leu 975

Ser

- 134 -

TCT Ser

AGT GTT GGC ATT GAA

GAT AAG AAA ATG

GCC Ala

TTG AAC AGT

TTG Leu

ATG Met

2976

Ser

Val

Gly 980

Ile

Glu

Asp

Lys

Lys 985

Met

Leu

Asn

Ser 990

TCT

TTG

ATG

AAG

TTA

ATG

GGA

CCC

AAA

CAT

GTC

AGT

TCT

GTG

AGG

GTG

3024

Ser

Leu

Met 995

Lys

Leu

Met

Gly

Pro Lys 1000

His

Val

Ser

Ser Val 1005

Arg

Val

AAG

ATG

ATG

ACC

ACA

CTG

AGA

ACT

GGC

CTT

CGA

TTC

AAG

GAT

GAT

TTT

3072

Lys

Met Met 1010

Thr

Thr

Leu

Arg Thr 1015

Gly

Leu

Arg

Phe Lys 1020

Asp

Asp

Phe

CCT

GAA

TTG

TGT

TGC

AGA

GCT

TGG

GAC

TGC

TTT

GTT

CGC

TGC

CTG

GAT

3120

Pro Glu 1025

Leu

Cys

Cys

Arg Ala 1030

Trp

Asp

Cys

Phe Val 1035

Arg

Cys

Leu

Asp 1040

CAT

GCT

TGT

CTG

GGC

TCC

CTT

CTC

AGT

CAT

GTA

ATA

GTA

GCT

TTG

TTA

3168

His

Ala

Cys

Leu

Gly Ser 1045

Leu

Leu

Ser

His Val 1050

Ile

Val

Ala

Leu 1055

Leu

CCT

^'Τ’ψ

ATA

CAC

ATC

CAG

CCT

AAA

GAA

ACT

GCA

GCT

ATC

TTC

CAC

TAC

3216

Pro

Leu

Ile

His Ile 1060

Gin

Pro

Lys

Glu Thr 1065

Ala

Ala

Ile

Phe His 1070

Tyr

CTC

ATA

ATT

GAA

AAC

AGG

GAT

GCT

GTG

CAA

GAT

TTT

CTT

CAT

GAA

ATA

3264

Leu

Ile

Ile 1075

Glu

Asn

Arg

Asp

Ala Val 1080

Gin

Asp

Phe

Leu 1085

His

Glu

Ile

TAT

TTT

TTA

CCT

GAT

CAT

CCA

GAA

TTA

AAA

AAG

ATA

AAA

GCC

GTT

CTC

3312

Tyr

Phe Leu 1090

Pro

Asp

His

Pro Glu 1095

Leu

Lys

Lys

Ile Lys 1100

Ala

Val

Leu

CAG

GAA

TAC

AGA

AAG

GAG

ACC

TCT

GAG

AGC

ACT

GAT

CTT

CAG

ACA

ACT

3360

Gin Glu 1105

Tyr

Arg

Lys

Glu Thr 1110

Ser

Glu

Ser

Thr Asp 1115

Leu

Gin

Thr

Thr 1120

CTT

CAG

CTC

TCT

ATG

AAG

GCC

ATT

CAA

CAT

GAA

AAT

GTC

GAT

GTT

CGT

3408

Leu

Gin

Leu

Ser

Met Lys 1125

Ala

Ile

Gin

His Glu 1130

Asn

Val

Asp

Val Arg 1135

ATT

CAT

GCT

CTT

ACA

AGC

TTG

AAG

GAA

ACC

TTG

TAT

AAA

AAT

CAG

GAA

3456

Ile

His

Ala

Leu Tnr 1140

Ser

Leu

Lys

Glu Thr 1145

Leu

Tyr

Lys

Asn Gin 1150

Glu

AAA

CTG

ATA

AAG

TAT

GCA

ACA

GAC

AGT

GAA

ACA

GTA

GAA

CCT

ATT

ATC

3504

Lys

Leu

Ile Lys 1155

Tyr

Ala

Thr

Asp Ser 1160

Glu

Thr

Val

Glu Pro 1165

Ile

Ile

TCA

CAG

TTG

GTG

ACA

GTG

CTT

TTG

AAA

GGT

TGC

CAA

GAT

GCA

AAC

TCT

3552

Ser

Gin Leu 1170

Val

Thr

Val

Leu Leu 1175

Lys

Gly

Cys

Gin Asp 1180

Ala

Asn

Ser

CAA

GCT

CGG

TTG

CTC

TGT

GGG

GAA

TGT

TTA

GGG

GAA

TTG

GGG

GCG

ATA

3600

Gin Ala 1185

Arg

Leu

Leu

Cys Gly 1190

Glu

Cys

Leu

Gly Glu 1195

Leu

Gly

Ala

Ile 1200

GAT

CCA

GGT

CGA

TTA

GAT

TTC

TCA

ACA

ACT

GAA

ACT

CAA

GGA

AAA

GAT

3648

Asp

Pro

Gly

Arg

Leu Asp 1205

Phe

Ser

Thr

Thr Glu 1210

Thr

Gin

Gly

Lys Asp 1215

TTT

ACA

TTT

GTG

ACT

GGA

GTA

GAA

GAT

TCA

AGC

TTT

GCC

TAT

GGA

TTA

3696

Phe

Thr

Phe

Val Thr 1220

Gly

Val

Glu

Asp Ser 1225

Ser

Phe

Ala

Tyr Gly 1230

Leu

TTG

ATG

GAG

CTA

ACA

AGA

GCT

TAC

CTT

GCG

TAT

GCT

GAT

AAT

AGC

CGA

3744

Leu

Met

Glu 1235

Leu

Thr

Arg

Ala

Tyr Leu 1240

Ala

Tyr

Ala

Asp Asn 1245

Ser

Arg

• ·

	- 135 -	• · • • • • · ·	• · • · • · • · • 9	• · • • · • • · ·	• · · • · • · · · • • · · · · ·
GCT CAA GAT TCA GCT GCC	TAT GCC ATT CAG GAG TTG CTT	TCT	ATT	TAT	3792
Ala Gin Asp Ser Ala Ala	Tyr Ala Ile Gin Glu Leu Leu	Ser	Ile	Tyr
1250	1255 1260
GAC TGT AGA GAG ATG GAG	ACC AAC GGC CCA GGT CAC CAA	TTG	TGG	AGG	3840
Asp Cys Arg Glu Met Glu	Thr Asn Gly Pro Gly His Gin	Leu	Trp	Arg
1265 1270 1275			1280
AGA TTT CCT GAG CAT GTT	CGG GAA ATA CTA GAA CCT CAT	CTA	AAT	ACC	3888
Arg Phe Pro Glu His Val	Arg Glu Ile Leu Glu Pro His	Leu	Asn	Thr
1285	1290		1295
AGA TAC AAG AGT TCT CAG	AAG TCA ACC GAT TGG TCT GGA	GTA	AAG	AAG	3936
Arg Tyr Lys Ser Ser Gin	Lys Ser Thr Asp Trp Ser Gly	Val	Lys	Lys
1300	1305	1310
CCA ATT TAC TTA AGT AAA	TTG GGT AGT AAC TTT GCA GAA	TGG	TCA	GCA	3984
Pro Ile Tyr Leu Ser Lys	Leu Gly Ser Asn Phe Ala Glu	Trp	Ser	Ala
1315	1320 1325
TCT TGG GCA GGT TAT CTT	ATT ACA AAG GTT CGA CAT GAT	CTT	GCC	AGT	4032
Ser Trp Ala Gly Tyr Leu	Ile Thr Lys Val Arg His Asp	Leu	Ala	Ser
1330	1335 1340
AAA ATT TTC ACC TGC TGT	AGC ATT ATG ATG AAG CAT GAT	TTC	AAA	GTG	4080
Lys Ile Phe Thr Cys Cys	Ser Ile Met Met Lys His Asp	Phe	Lys	Val
1345 1350 1355			1360
ACC ATC TAT CTT CTT CCA	CAT ATT CTG GTG TAT GTC TTA	CTG	GGT	TGT	4128
Thr Ile Tyr Leu Leu Pro	His Ile Leu Val Tyr Val Leu	Leu	Gly	Cys
1365	1370		1375
AAT CAA GAA GAT CAG CAG	GAG GTT TAT GCA GAA ATT ATG	GCA	GTT	CTA	4176
Asn Gin Glu Asp Gin Gin	Glu Val Tyr Ala Glu Ile Met	Ala	Val	Leu
1380	1385	1390
AAG CAT GAC GAT CAG CAT	ACC ATA AAT ACC CAA GAC ATT	GCA	TCT	GAT	4224
Lys His Asp Asp Gin His	Thr Ile Asn Thr Gin Asp Ile	Ala	Ser	Asp
1395	1400 1405
CTG TGT CAA CTC AGT ACA	CAG ACT GTG TTC TCC ATG CTT	GAC	CAT	CTC	4272
Leu Cys Gin Leu Ser Thr	Gin Thr Val Phe Ser Met Leu	Asp	His	Leu
1410	1415 1420
ACA CAG TGG GCA AGG CAC	AAA TTT CAG GCA CTG AAA GCT	GAG	AAA	TGT	4320
Thr Gin Trp Ala Arg His	Lys Phe Gin Ala Leu Lys Ala	Glu	Lys	Cys
1425 1430 1435			1440
CCA CAC AGC AAA TCA AAC	AGA AAT AAG GTA GAC TCA ATG	GTA	TCT	ACT	4368
Pro His Ser Lys Ser Asn	Arg Asn Lys Val Asp Ser Met	Val	Ser	Thr
1445	1450		1455
GTG GAT TAT GAA GAC TAT	CAG AGT GTA ACC CGT TTT CTA	GAC	CTC	ATA	4416
Val Asp Tyr Glu Asp Tyr	Gin Ser Val Thr Arg Phe Leu	Asp	Leu	Ile
1460	1465	1470
CCC CAG GAT ACT CTG GCA	GTA GCT TCC TTT CGC TCC AAA	GCA	TAC	ACA	4464
Pro Gin Asp Thr Leu Ala	Val Ala Ser Phe Arg Ser Lys	Ala	Tyr	Thr
1475	1480 1485
CGA GCT GTA ATG CAC TTT	GAA TCA TTT ATT ACA GAA AAG	AAG	CAA	AAT	4512
Arg Ala Val Met His Phe	Glu Ser Phe Ile Thr Glu Lys	Lys	Gin	Asn
1490	1495 1500
ATT CAG GAA CAT CTT GGA	TTT TTA CAG AAA TTG TAT GCT	GCT	ATG	CAT	4560
Ile Gin Glu His Leu Gly	Phe Leu Gin Lys Leu Tyr Ala	Ala	Met	His
1505 151C	1515			1520

- 136 • · · · · c · ·

GAA Glu

CCT Pro

GAT Asp

GGA Gly

GTG GCC Val Ala 1525

GGA Gly

GTC Val

AGT Ser

GCA ATT Ala Ile 1530

AGA Arg

AAG Lys

GCA Ala

GAA CCA Glu Pro 1535

4608

TCT

CTA

AAA

GAA

CAG ATC

CTT

GAA

CAT

GAA AGC

CTT

GGC

TTG

CTG AGG

4656

Ser

Leu

Lys

Glu 154C

Gin Ile )

Leu

Glu

His Glu Ser 1545

Leu

Gly

Leu Leu Arg 1550

GAT

C-CC

ACT

GCT

TGT TAT

GAC

AGG

GCT

ATT CAG

CTA

GAA

CCA

GAC CAG

4704

Asp

Ala

Thr Ala 1555

Cys Tyr

Asp

Arg Ala 1560

Ile Gin

Leu

Glu Pro 1565

Asp Gin

ATC

ATT

CAT

TAC

CAT GGT

GTA

GTA

AAG

TCC ATG

TTA

GGT

CTT

GGT CAG

4752

Ile

Ile His 1570

Tyr

His Gly

Val Val 1575

Lys

Ser Met

Leu Gly 1580

Leu

Gly Gin

CTG

TCT

ACT

GTT

ATC ACT

CAG

GTG

AAT

GGA GTG

CAT

GCT

AAC

AGG TCC

4800

Leu 1585

Ser

Thr

Val

Ile Thr Gin 1590

Val

Asn

Gly Val His 1595

Ala

Asn

Arg Ser 1600

GAG

TGG

ACA

GAT

GAA TTA

AAC

ACG

TAC

AGA GTG

GAA

GCA

GCT

TGG AAA

4848

Glu

Trp

Thr

Asp

Glu Leu 1605

Asn

Thr

Tyr

Arg Val 1610

Glu

Ala

Ala

Trp Lys 1615

TTG

TCA

CAG

TGG

GAT TTG

GTG

GAA

AAC

TAT TTG

GCA

GCA

GAT

GGA AAA

4896

Leu

Ser

Gin

Trp Asp Leu 1620

Val

Glu

Asn 1625

Tyr Leu

Ala

Ala

Asp Gly Lys 1630

TCT

ACA

ACA

TGG

AGT GTC

AGA

CTG

GGA

CAG CTA

TTA

TTA

TCA

GCC AAA

4944

Ser

Thr

Thr Trp 1635

Ser Val

Arg

Leu Gly 1640

Gin Leu

Leu

Leu Ser 1645

Ala Lys

AAA

AGA

GAT

ATC

ACA GCT

TTT

TAT

GAC

TCA CTG

AAA

CTA

GTG

AGA GCA

4992

Lys

Arg Asp 1650

Ile

Thr Ala

Phe Tyr 1655

Asp

Ser Leu

Lys Leu 1660

Val

Arg Ala

GAA

CAA

ATT

GTA

CCT CTT

TCA

GCT

GCA

AGC TTT

GAA

AGA

GGC

TCC TAC

5040

Glu Gin 1565

Ile

Val

Pro Leu Ser 1670

Ala

Ala

Ser Phe Glu 1675

Arg

Gly

Ser Tyr 1680

CAA

CGA

GGA

TAT

GAA TAT

ATT

GTG

AGA

TTG CAC

ATG

TTA

TGT

GAG TTG

5088

Glr.

Arg

Gly

Tyr

Glu Tyr 1685

Ile

Val

Arg

Leu His 1690

Met

Leu

Cys

Glu Leu 1695

GAG

CAT

AGC

ATC

AAA CCA

CTT

TTC

CAG

CAT TCT

CCA

GGT

GAC

AGT TCT

5136

Glu

His

Ser

Ile Lys Pro 1700

Leu

Phe

Gin 1705

His Ser

Pro

Gly

Asp Ser Ser 1710

CAA

GAA

GAT

TCT

CTA AAC

TGG

GTA

GCT

CGA CTA

GAA

ATG

ACC

CAG AAT

5184

Gin

Glu

Asp Ser 1715

Leu Asn

Trp

Val Ala 1720

Arg Leu

Glu

Met Thr 1725

Gin Asn

TCC

TAC

AGA

GCC

AAG GAG

CCT

ATC

CTG

GCT CTC

CGG

AGG

GCT

TTA CTA

5232

Ser

Tyr Arg 1730

Ala

Lys Glu

Pro Ile 1735

Leu

Ala Leu

Arg Arg 1740

Ala

Leu Leu

AGC

CTC

AAC

AAA

AGA CCA

GAT

TAC

AAT

GAA ATG

GTT

GGA

GAA

TGC TGG

5280

Ser 1745

Leu

Asn

Lys

Arg Pro Asp 1750

Tyr

Asn

Glu Met 1755

Val

Gly

Glu

Cys Trp 1760

CTG

CAG

AGT

GCC

AGG GTA

GCT

AGA

AAG

GCT GGT

CAC

CAC

CAG

ACA GCC

5328

Leu

Gin

Ser

Ala

Arg Val 1765

Ala

Arg

Lys

Ala Gly 1770

His

His

Gin

Thr Ala 177 5

TAC

AAT

GCT

CTC

CTT AAT

GCA

GGG

GAA

TCA CGA

CTC

GCT

GAA

CTG TAC

5376

Tyr

Asn

Ala

Leu 178C

Leu Asn 1

Ala

Gly

Glu 1785

Ser Arg

Leu

Ala

Glu 179C

Leu Tyr 1

• · · ·

	- 137 -	• · • 9	• · • · • · • · • · • · ·	• • · • • 9 9 99 9	• · · 9 9 9 9 · • · · • • · · · ·
GTG GAA AGG GCA AAG	TGG CTC TGG TCC AAG GGT GAT	GTT CAC	CAG	GCA	5424
Val Glu Arg Ala Lys 1795	Trp Leu Trp Ser Lys Gly Asp 1800	Val His 1805	Gin	Ala
CTA ATT GTT CTT CAA	AAA GGT GTT GAA TTA TGT TTT	CCT GAA	AAT	GAA	5472
Leu Ile Val Leu Gin 1810	Lys Gly Val Glu Leu Cys Phe Pro Glu 1815 1820	Asn	Glu
ACC CCA CCT GAG GGT	AAG AAC ATG TTA ATC CAT GGT	CGA GCT	ATG	CTA	5520
Thr Pro Pro Glu Gly 1825	Lys Asn Met Leu Ile His Gly 1830 1835	Arg Ala	Met	Leu 1840
CTA GTG GGC CGA TTT	ATG GAA GAA ACA GCT AAC TTT	GAA AGC	AAT	GCA	5568
Leu Val Gly Arg Phe Met Glu Glu Thr Ala Asn Phe 1845 1850	Glu Ser	Asn 1855	Ala
ATT ATG AAA AAA TAT	AAG GAT GTG ACC GCG TGC CTG	CCA GAA	TGG	GAG	5616
Ile Met Lys Lys Tyr 1860	Lys Asp Val Thr Ala Cys Leu 1865	Pro Glu Trp 1870	Glu
GAT GGG CAT TTT TAC	CTT GCC AAG TAC TAT GAC AAA	TTG ATG	CCC	ATG	5664
Asp Gly His Phe Tyr 1875	Leu Ala Lys Tyr Tyr Asp Lys 1880	Leu Met 1885	Pro	Met
GTC ACA GAC AAC AAA	ATG GAA AAG CAA GGT GAT CTC	ATC CGG	TAT	ATA	5712
Val Thr Asp Asn Lys 1890	Met Glu Lys Gin Gly Asp Leu Ile Arg 1895 1900	Tyr	Ile
GTT CTT CAT TTT GGC	AGA TCT CTA CAA TAT GGA AAT	CAG TTC	ATA	TAT	5760
Val Leu His Phe Gly 1905	Arg Ser Leu Gin Tyr Gly Asn 1910 1915	Gin Phe	Ile	Tyr 1920
CAG TCA ATG CCA CGA	ATG TTA ACT CTA TGG CTT GAT	TAT GGT	ACA	AAG	5808
Gin Ser Met Pro Arg Met Leu Thr Leu Tx*p Leu Asp 1925 1930	Tyr Gly	Thr 1935	Lys
GCA TAT GAA TGG GAA	AAA GCT GGC CGC TCC GAT CGT	GTA CAA	ATG	AGG	5856
Ala Tyr Glu Trp Glu 1940	Lys Ala Gly Arg Ser Asp Arg 1945	Val Gin Met 1950	Arg
AAT GAT TTG GGT AAA	ATA AAC AAG GTT ATC ACA GAG	CAT ACA	AAC	TAT	5904
Asn Asp Leu Gly Lys 1955	Ile Asn Lys Val Ile Thr Glu 19 60	His Thr 1965	Asn	Tyr
TTA GCT CCA TAT CAA	TTT TTG ACT GCT TTT TCA CAA	TTG ATC	TCT	CGA	5952
Leu Ala Pro Tyr Gin 1970	Phe Leu Thr Ala Phe Ser Gin Leu Ile 1975 1980	Ser	Arg
ATT TGT CAT TCT CAC	GAT GAA GTT TTT GTT GTG CTT	GAT GGA	AAT	AAT	6000
Ile Cys His Ser His 1985	Asp Glu Val Phe Val Val Leu 1990 1995	Asp Gly	Asn	Asn 2000
AGC CAA GTA TTT CTA	GCC TAT CCT CAA CAA GCA ATG	TGG ATG	ATG	ACA	6048
Ser Gin Val Phe Leu Ala Tyr Pro Gin Gin Ala Met 2005 2010	Trp Met	Met Thr 2015
GCT GTG TCA AAG TCA	TCT TAT CCC ATG CGT GTG AAC	AGA TGC	AAG	GAA	6096
Ala Val Ser Lys Ser 2020	Ser Tyr Pro Met Arg Val Asn 2025	Arg Cys Lys 2030	Glu
ATC CTC AAT AAA GCT	ATT CAT ATG AAA AAA TCC TTA	GAG AAG	TTT	GTT	6144
Ile Leu Asn Lys Ala 2035	Ile His Met Lys Lys Ser Leu 2040	Glu Lys 2045	Phe	Val
GGA GAT GCA ACT CGC	CTA ACA GAT AAG CTT CTA GAA	TTG TGC	AAT	AAA	6192
Gly Aso Ala Thr Arg 2050	Leu Thr Asp Lys Leu Leu Glu Leu Cys 2055 2060	Asn	Lys

• · • · · ·

- 138

CCG GTT Pro Val 2065

GAT Asp

GGA Gly

AGT Ser

AGT TCC Ser Ser 2070

ACA Thr

TTA Leu

AGC Ser

ATG AGC Met Ser 2075

ACT Thr

CAT His

TTT Phe

AAA Lys 2080

6240

ATG CTT

AAA

AAG

CTG

GTA GAA

GAA

GCA

ACA

TTT AGT

GAA

ATC

CTC

ATT

6288

Met Leu

Lys

Lys

Leu Val Glu 2085

Glu

Ala

Thr Phe Ser 2090

Glu

Ile

Leu Ile 2095

CCT CTA

CAA

TCA

GTC

ATG ATA

CCT

ACA

CTT

CCA TCA

ATT

CTG

GGT

ACC

6336

Pro Leu

Gin

Ser Val 2100

Met Ile

Pro

Thr Leu 2105

Pro Ser

Ile

Leu Gly 2110

Thr

CAT GCT

AAC

CAT

GCT

AGC CAT

GAA

CCA

TTT

CCT GGA

CAT

TGG

GCC

TAT

6384

His Ala

Asn His 2115

Ala

Ser His

Glu Pro 2120

Phe

Pro Gly

His Trp 2125

Ala

Tyr

ATT GCA

GGG

TTT

GAT

GAT ATG

GTG

GAA

ATT

CTT GCT

TCT

CTT

CAG

AAA

6432

Ile Ala Gly 2130

Phe

Asp

Asp Met Val 2135

Glu

Ile

Leu Ala Ser 2140

Leu

Gin

Lys

CCA AAG

AAG

ATT

TCT

TTA AAA

GGG

TCA

GAT

GGA AAG

TTC

TAC

ATC

ATG

6480

Pro Lys 2145

Lys

Ile

Ser

Leu Lys 2150

Gly

Ser

Asp

Gly Lys 2155

Phe

Tyr

Ile

Met 2160

ATG TGT

AAG

CCA

AAA

GAT GAC

CTG

AGA

AAG

GAT TGT

AGA

CTA

ATG

GAA

6528

Met Cys

Lys

Pro

Lys Asp Asp 2165

Leu

Arg

Lys 217C

Asp Cys I

Arg

Leu

Met Glu 2175

TTC AAT

TCC

TTG

ATT

AAT AAG

TGG

TTA

AGA

AAA GAT

GCA

GAG

TCT

CGT

6576

Phe Asn

Ser

Leu Ile 21Θ0

Asn Lys

Cys

Leu 2185

Arg

Lys Asp

Ala

Glu Ser 2190

Arg

AGA AGA

GAA

CTT

CAT

ATT CGA

ACA

TAT

GCA

GTT ATT

CCA

CTA

AAT

GAT

6624

Arg Arg

Glu 2195

Leu

His

Ile Arg

Thr 220C

Tyr )

Ala

Val Ile

Pro 2205

Leu

Asn

Asp

GAA TGT

GGG

ATT

ATT

GAA TGG

GTG

AAC

AAC

ACT GCT

GGT

TTG

AGA

CCT

6672

Glu Cys Gly 2210

Ile

Ile

Glu Trp Val 2215

Asn

Asn

Thr Ala Gly 2220

Leu

Arg

Pro

ATT CTG

ACC

AAA

CTA

TAT AAA

GAA

AAG

GGA

GTG TAT

ATG

ACA

GGA

AAA '

6720

Ile Leu 2 2 2 5

Thr

Lys

Leu

Tyr Lys 2230

Glu

Lys

Gly

Val Tyr 2235

Met

Thr

Gly

Lys 2240

GAA CTT

CGC

CAG

TGT

ATG CTA

CCA

AAG

TCA

GCA GCT

TTA

TCT

GAA

AAA

6768

Glu Leu

Arg

Gin

Cys Met Leu 2245

Pro

Lys

Ser Ala Ala 2250

Leu

Ser

Glu Lys 2255

CTC AAA

GTA

TTC

CGA

GAA TTT

CTG

CTG

CCC

AGG CAT

CCT

CCT

ATT

TTT

6816

Leu Lys

Val

Phe Arg 2260

Glu Phe

Leu

Leu Pro 2265

Arg His

Pro

Pro Ile 2270

Phe

CAT GAG

TGG

TTT

CTG

AGA ACA

TTC

CCT

GAT

CCT ACA

TCA

TGG

TAC

AGT

6864

His Glu

Trp 2275

Phe

Leu

Arg Thr

Phe 226C

Pro 1

Asp

Pro Thr

Ser 2285

Trp

Tyr

Ser

AGT AGA

TCA

GCT

TAC

TGC CGT

TCC

ACT

GCA

GTA ATG

TCA

ATG

GTT

GGT

6912

Ser Ara Ser 2290

Ala

Tyr

Cys Arg 2295

Ser

Thr

Ala

Val Met Ser 2300

Met

Val

Gly

TAT ATT

CTG

GGG

CTT

GGA GAC

CGT

CAT

GGT

GAA AAT

ATT

CTC

TTT

GAT

6960

Tyr Ile 2305

Leu

Gly

Leu

Gly Asp 2310

Arg

His

Gly

Glu Asn 2315

Ile

Leu

Phe

Asp 2320

TCT TTG

ACT

GGT

GAA

TGC GTA

CAT

GTA

GAT

TTC AAT

TGT

CTT

TTC

AAT

7008

Ser Leu

Thr

Gly

Glu

Cys Val

Hi s

Val

Asp

Phe Asn

Cys

Leu

Phe

Asn

2325 2330 2335

	- 139 -	• · · · »	······· a
AAG GGA GAA ACC	TTT GAA GTT CCA GAA ATT GTG CCA	rrr cgc ctg	ACT 7056
Lys Gly Glu Thr	Phe Glu Val Pro Glu Ile Val Pro	Phe Arg Leu	Thr
2340 2345	2350
CAT AAT ATG GTT	AAT GGA ATG GGT CCT ATG GGA ACA	GAG GGT CTT	TTT 7104
His Asn Met Val	Asn Gly Met Gly Pro Met Gly Thr	Glu Gly Leu	Phe
2355	2360	2365
CGA AGA GCA TGT	GAA GTT ACA ATG AGG CTG ATG CGT	GAT CAG CGA	GAG 7152
Arg Arg Ala Cys	Glu Val Thr Met Arg Leu Met Arg	Asp Gin Arg	Glu
2370	2375 2380
CCT TTA ATG AGT	GTC TTA AAG ACT TTT CTA CAT GAT	CCT CTT GTG	GAA 7200
Pro Leu Met Ser	Val Leu Lys Thr Phe Leu His Asp	Pro Leu Val	Glu
2385	2390 2395		2400
TGG AGT AAA CCA	GTG AAA GGG CAT TCC AAA GCG CCA	CTG AAT GAA	ACT 7248
Trp Ser Lys Pro	Val Lys Gly His Ser Lys Ala Pro	Leu Asn Glu	Thr
	2405 2410	2415
GGA GAA GTT GTC	AAT GAA AAG GCC AAG ACC CAT GTT	CTT GAC ATT	GAG 7296
Gly Glu Val Val	Asn Glu Lys Ala Lys Thr His Val	Leu Asp Ile	Glu
2420 2425	2430
CAG CGA CTA CAA	GGT GTA ATC AAG ACT CGA AAT AGA	GTG ACA GGA	CTG 7344
Gin Arg Leu Gin	Gly Val Ile Lys Thr Arg Asn Arg	Val Thr Gly	Leu
2435	2440	2445
CCG TTA TCT ATT	GAA GGA CAT GTG CAT TAC CTT ATA	CAA GAA GCT	ACT 7392
Pro Leu Ser Ile	Glu Gly His Val His Tyr Leu Ile	Gin Glu Ala	Thr
2450	2455 2460
GAT GAA AAC TTA	CTA TGC CAG ATG TAT CTT GGT TGG	ACT CCA TAT	ATG 7440
Asp Glu Asn Leu	Leu Cys Gin Met Tyr Leu Gly Trp	Thr Pro Tyr	Met
24 65	2470 2475		2480

TGAAATGAAA TTATGTAAAA GAATATGTTA ATAATCTAAA AGTAAAAAAA AAAAAAAAAA 7500 AA 7502 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:26:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2480 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 26:

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

Met

Ser

Met 35

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Met

Val

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu Trp Gin Ile Gly Cys Val Leu Leu Glu Tyr Gly Ser Pro Lys Ile 65 70 75 80

140

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

Leu Thr

Glu Leu 90

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu

Glu

Leu

100

105

110

Leu

Lys

Hi s

Leu

Val

Glu

Met

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys

Leu

Tyr

Glu

115

120

125

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro

Phe

Glu

Ala

Glu

130

135

140

Ala

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn

Met

Leu

Leu

Glu

Lys

145

150

155

160

Leu

Cys

Val

Met

Phe

Glu

Asp

Gly

Val

Leu

Met

Arg

Leu

Lys

Ser

Asp

165

170

175

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

Val

Pro

Ala

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

Ala

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu

Lys

Met

Glu

Ser

225

230

235

240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

245

250

255

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

260

285

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

Lvs

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

Hi s

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

385

390

395

400

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

405

410

415

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

420

425

430

• ·

- 141 -

Pro Trp

Ile Tyr 435

Ser His

Ser

Asp 440

Asp Gly

Cys

Leu

Lys 445

Leu

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

450

455

460

Ser

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

465

470

475

480

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

485

490

495

Gin

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

Arg

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

500

505

510

Ile

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

515

520

525

Ile

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

530

535

540

Ser

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

545

550

555

560

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

565

570

575

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

580

585

590

Gin

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

Cys

Lys

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

595

600

605

Lys

Ile

Pro

Ser

Pro

Val

Lys

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn

Leu

His

His

610

615

620

Leu

Cys

Lys

His

Leu

Asp

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr

Asp

Val

Lys

Ala

625

630

635

640

Val

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu

Asn

Leu

Met

Glu

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp

Val

645

650

655

Arg

Val

Ala

Phe

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys

His

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu

Asp

660

665

670

Ser

Glu

Asp

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu

Phe

Val

Leu

Arg

Met

Lys

Glu

675

680

685

Ala

Tyr

Thr

His

Ala

Gin

Ile

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu

Lys

Asp

Thr

690

695

700

Leu

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu

705

710

715

720

Val

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu

His

Leu

Leu

His

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser

725

730

735

Ala

Ser

Val

Ser

Gly

Ala

Ala

Tyr

Thr

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

740

745

750

Ala

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

Ser

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys

Lys

Pro

755

760

765

Ile

Cys

Gin

Phe

Leu

Val

Glu

Ser

Leu

His

Ser

Ser

Gin

Met

Thr

Ala

770

775

780

• · · ·

	- 142 -	• ♦ · · ·	··
Leu Pro Asn Thr Pro	Cys Gin Asn Ala Asp Val Arg	Lys Gin Asp	Val
765	790 795		800
Ala His Gin Arg Glu	Met Ala Leu Asn Thr Leu Ser	Glu Ile Ala	Asn
805	810	815
Val Phe Asp Phe Pro	Asp Leu Asn Arg Phe Leu Thr	Arg Thr Leu	Gin
820	825	830
Val Leu Leu Pro Asp	Leu Ala Ala Lys Ala Ser Pro	Ala Ala Ser	Ala
835	840	845
Leu Ile Arg Thr Leu	Gly Lys Gin Leu Asn Val Asn	Arg Arg Glu	Ile
850	855 860
Leu Ile Asn Asn Phe	Lys Tyr Ile Phe Ser His Leu	Val Cys Ser	Cys
865	870 875		880
Ser Lys Asp Glu Leu	Glu Arg Ala Leu His Tyr Leu	Lys Asn Glu	Thr
885	890	895
Glu Ile Glu Leu Gly	Ser Leu Leu Arg Gin Asp Phe	Gin Gly Leu	His
900	905	910
Asn Glu Leu Leu Leu	Arg Ile Gly Glu His Tyr Gin	Gin Val Phe	Asn
915	920	925
Gly Leu Ser Ile Leu	Ala Ser Phe Ala Ser Ser Asp	Asp Pro Tyr	Gin
930	935 940
Gly Pro Arg Asp Ile	Ile Ser Pro Glu Leu Met Ala	Asp Tyr Leu	Gin
945	950 955		960
Pro Lys Leu Leu Gly	Ile Leu Ala Phe Phe Asn Met	Gin Leu Leu	Ser
965	970	975
Ser Ser Val Gly Ile	Glu Asp Lys Lys Met Ala Leu	Asn Ser Leu	Met
980	985	990
Ser Leu Met Lys Leu	Met Gly Pro Lys His Val Ser	Ser Val Arg	Val
995	1000	1005
Lys Met Met Thr Thr	Leu Arg Thr Gly Leu Arg Phe	Lys Asp Asp	Phe
1010	1015 1020
Pro Glu Leu Cys Cys	Arg Ala Trp Asp Cys Phe Val	Arg Cys Leu	Asp
1025	1030 1035		1040
His Ala Cys Leu Gly	Ser Leu Leu Ser His Val Ile	Val Ala Leu	Leu
1045 1050	1055
Pro Leu Ile His Ile	Gin Pro Lys Glu Thr Ala Ala	Ile Phe His	Tyr
1050	1065	1070
Leu Ile Ile Glu Asn	Arg Asp Ala Val Gin Asp Phe	Leu His Glu	Ile
1075	1080	1085
Tyr Phe Leu Pro Asp	His Pro Glu Leu Lys Lys Ile	Lys Ala Val	Leu
1090	1095 1100
Gin Glu Tyr Arg Lys	Glu Thr Ser Glu Ser Thr Asp Leu Gin Thr	Thr
1105	1110 1115		1120

Leu Gin Leu Ser Met Lys Ala Ile Gin His Glu Asn Val Asp Val Arg 1125 1130 1135 • ·

- 143

Ile	His	Ala	Leu Thr 1140	Ser	Leu	Lys	Glu Thr Leu Tyr Lys Asn Gin Glu
1145	1150
Lys	Leu	Ile	Lys Tyr	Al a	Thr	Asp	Ser Glu Thr Val	Glu Pro Ile Ile
		1155			1160	1165
Ser	Gin	Leu	Val Thr	Val	Leu	Leu	Lys Gly Cys Gin	Asp Ala Asn Ser
	1170			1175	1180
Gin	Ala	Arg	Leu Leu	Cys	Gly	Glu	Cys Leu Gly Glu	Leu Gly Ala Ile
1185			1190		1195	1200
Asp	Pro	Gly	Arg Leu	Asp	Phe	Ser	Thr Thr Glu Thr	Gin Gly Lys Asp
			1205			1210	1215
Phe	Thr	Phe	Val Thr	Gly	Val	Glu	Asp Ser Ser Phe	Ala Tyr Gly Leu
			1220				1225	1230
Leu	Met	Glu	Leu Thr	Arg	Ala	Tyr	Leu Ala Tyr Ala	Asp Asn Ser Arg
		1235			124C	1	1245
Ala	Gin	Asp	Ser Ala	Ala	Tyr	Ala	Ile Gin Glu Leu	Leu Ser Ile Tyr
	1250			1255	1260
Asp	Cys	Arg	Glu Met	Glu	Thr	Asn	Gly Pro Gly His	Gin Leu Trp Arg
1265			1270		1275	1280
Arg	Phe	Pro	Glu His	Val	Arg	Glu	Ile Leu Glu Pro	His Leu Asn Thr
			1285			1290	1295
Arg	Tyr	Lys	Ser Ser	Gin	Lys	Ser	Thr Asp Trp Ser	Gly Val Lys Lys
			1300				1305	1310
Pro	Ile	Tyr	Leu Ser	Lys	Leu	Gly	Ser Asn Phe Ala	Glu Trp Ser Ala
		1315			132C	1	1325
Ser	Trp	Ala	Gly Tyr	Leu	Ile	Thr	Lys Val Arg His	Asp Leu Ala Ser
	1330			1335	1340
Lys	Ile	Phe	Thr Cys	Cys	Ser	Ile	Met Met Lys His	Asp Phe Lys Val
1345			1350		1355	1360
Thr	Ile	Tyr	Leu Leu	Pro	His	Ile	Leu Val Tyr Val	Leu Leu Gly Cys
			1365			1370	1375
Asn	Gin	Glu	Asp Gin	Gin	Glu	Val	Tyr Ala Glu Ile	Met Ala Val Leu
			1380				1385	1390
Lys	His	Asp	Asp Gin	His	Thr	Ile	Asn Thr Gin Asp	Ile Ala Ser Asp
		1395			1400	1405
Leu	Cys	Gin	Leu Ser	Thr	Gin	Thr	Val Phe Ser Met	Leu Asp His Leu
	1410			1415	1420
Thr	Gin	Trp	Ala Arg	His	Lys	Phe	Gin Ala Leu Lys	Ala Glu Lys Cys
1425			1430		1435	1440
Pro	His	Ser	Lys Ser	Asn	Arg	Asn	Lys Val Asp Ser	Met Val Ser Thr
			1445			1450	1455
Val	Asp	Tyr	Glu Asp	Tyr	Gin	Ser	Val Thr Arg Phe	Leu Asp Leu Ile
			1460				1465	1470 .
Pro	Gin	Asp	Thr Leu	Ala	Val	Ala	Ser Phe Arg Ser	Lys Ala Tyr Thr
		1475			1480	1485

• · • · · ·

Arg	Ala Val 1490	Met	His	Phe Glu Ser 1495	Phe	Ile	Thr	Glu Lys 1500	Lys	Gin	Asn
Ile	Gin Glu	His	Leu	Gly Phe Leu	Gin	Lys	Leu	Tyr Ala	Ala	Met	His
1505			1510			1515			1520
Glu	Pro Asp	Gly	Val	Ala Gly Val	Ser	Ala	Ile	Arg Lys	Ala	Glu	Pro
			1525		1530			1535
Ser	Leu Lys	Glu	Gin	Ile Leu Glu	His	Glu	Ser	Leu Gly	Leu	Leu	Arg
		1540		1545			1550
Asp	Ala Thr	Ala	Cys	Tyr Asp Arg	Ala	Ile	Gin	Leu Glu	Pro	Asp	Gin
	1555		1560			1565
Ile	Ile His	Tyr	His	Gly Val Val	Lys	Ser	Met	Leu Gly	Leu	Gly	Gin
	1570			1575				1580
Leu	Ser Thr	Val	Ile	Thr Gin Val	Asn	Gly	Val	His Ala	Asn	Arg	Ser
1585			1590			1595			1600
Glu	Trp Thr	Asp	Glu	Leu Asn Thr	Tyr	Arg	Val	Glu Ala	Ala	Tro	Lys
			1605		1610			1615
Leu	Ser Gin	Trp	Asp	Leu Val Glu	Asn	Tyr	Leu	Ala Ala	Asp	Gly	Lys
		1620		1625	1			1630
Ser	Thr Thr	Trp	Ser	Val Arg Leu	Gly	Gin	Leu	Leu Leu	Ser	Ala	Lys
	1635		1640			1645
Lys	Arg Asp	Ile	Thr	Ala Phe Tyr	Asp	Ser	Leu	Lys Leu	Val	Arg	Ala
	1650			1655				1660
Glu	Gin Ile	Val	Pro	Leu Ser Ala	Ala	Ser	Phe	Glu Arg	Gly	Ser	Tyr
1665			1670			1675			1680
Gin	Arg Gly	Tyr	Glu	Tyr Ile Val	Arg	Leu	His	Met Leu	Cys	Glu	Leu
			1685		1690			1695
Glu	His Ser	Ile	Lys	Pro Leu Phe	Gin	His	Ser	Pro Gly	Asp	Ser	Ser
		1700		1705			1710
Gin	Glu Asp	Ser	Leu	Asn Trp Val	Ala	Arg	Leu	Glu Met	Thr	Gin	Asn
	1715		1720			1725
Ser	Tyr Arg	Ala	Lys	Glu Pro Ile	Leu	Ala	Leu	Arg Arg	Ala	Leu	Leu
	1730			1735				1740
Ser	Leu Asn	Lys	Arg	Pro Asp Tyr	Asn	Glu	Me t	Val Gly	Glu	Cys	Trp
1745			1750			1755			1760
Leu	Gin Ser	Ala	Arg	Val Ala Arg	Lys	Ala	Gly	His His	Gin	Thr	Ala
			1765		1770			1775
Tyr	Asn Ala	Leu	Leu	Asn Ala Gly	Glu	Ser	Arg	Leu Ala	Glu	Leu	Tyr
		1780		1785			1790
Val	Glu Arg	Ala	Lys	Trp Leu Trp	Ser	Lys	Gly	Asp Val	His	Gin	Ala
	1795		1800			1805
Leu	Ile Val	Leu	Gin	Lys Gly Val	Glu	Leu	Cys	Phe Pro	Glu	Asn	Glu
	1810			1815				1820
Thr	Pro Pro	Glu	Gly	Lys Asn Met	Leu	Ile	His	Gly Arg Ala	Met	Leu
1825				1830			1835				1840

145

Leu

Val

Gly

Arg

Phe Met 1845

Glu

Glu

Thr

Ala Asn 1850

Phe

Glu

Ser

Asn Ala 1855

Ile

Met

Lys

Lys

Tyr Lys

Asp

Val

Thr

Ala Cys

Leu

Pro

Glu

Trp Glu

1860

1865

1870

Asp

Gly

His

Phe

Tyr Leu

Ala

Lys

Tyr

Tyr Asp

Lys

Leu

Met

Pro Met

1875

1880

1885

Val

Thr

Asp

Asn

Lys Met

Glu

Lys

Gin

Gly Asp

Leu

Ile

Arg

Tyr Ile

1890

1895

1900

Val

Leu

His

Phe

Gly Arg

Ser

Leu

Gin

Tyr Gly

Asn

Gin

Phe

Ile Tyr

1905

1910

1915

1920

Gin

Ser

Met

Pro

Arg Met

Leu

Thr

Leu

Trp Leu

Asp

Tyr

Gly

Thr Lys

1925

1930

1935

Ala

Tyr

Glu

Trp

Glu Lys

Ala

Gly

Arg

Ser Asp

Arg

Val

Gin

Met Arg

1940

1945

1950

Asn

Asp

Leu

Gly

Lys Ile

Asn

Lys

Val

Ile Thr

Glu

His

Thr

Asn Tyr

1955

1960

1965

Leu

Ala

Pro

Tyr

Gin Phe

Leu

Thr

Ala

Phe Ser

Gin

Leu

Ile

Ser Arg

1970

1975

1980

Ile

Cys

His

Ser

His Asp

Glu

Val

Phe

Val Val

Leu

Asp

Gly

Asn Asn

1985

1990

1995

2000

Ser

Gin

Val

Phe

Leu Ala

Tyr

Pro

Gin

Gin Ala

Met

Trp

Met

Met Thr

2005

2010

2015

Ala

Val

Ser

Lys

Ser Ser

Tyr

Pro

Met

Arg Val

Asn

Arg

Cys

Lys Glu

2020

2025

2030

Ile

Leu

Asn

Lys

Ala Ile

His

Met

Lys

Lys Ser

Leu

Glu

Lys

Phe Val

2035

2040

2045

Gly

Asp

Al 3

Thr

Arg Leu

Thr

Asp

Lys

Leu Leu

Glu

Leu

Cys

Asn Lys

2050

2055

2060

Pro

Val

Asp

Gly

Ser Ser

Ser

Thr

Leu

Ser Met

Ser

Thr

His

Phe Lys

2065

2070

2075

2080

Met

Leu

Lys

Lys

Leu Val

Glu

Glu

Ala

Thr Phe

Ser

Glu

Ile

Leu Ile

2085

2090

2095

Pro

Leu

Gin

Ser

Val Met

Ile

Pro

Thr

Leu Pro

Ser

Ile

Leu

Gly Thr

2100

2105

2110

His

Ala

Asn

His

Ala Ser

His

Glu

Pro

Phe Pro

Gly

His

Trp

Ala Tyr

2115

2120

2125

Ile

Ala

Gly

Phe

Asp Asp

Met

Val

Glu

Ile Leu

Ala

Ser

Leu

Gin Lys

2130

2135

2140

Pro

Lys

Lys

Ile

Ser Leu

Lys

Gly

Ser

Asp Gly

Lys

Phe

Tyr

Ile Met

2145

2150

2155

2160

Met

Cys

Lys

Pro

Lys Asp

Asp

Leu

Arg

Lys Asp

Cys

Arg

Leu

Met Glu

2165

2170

2175

Phe

Asn

Ser

Leu

Ile Asn

Lys

Cys

Leu

Arg Lys

Asp

Ala

Glu

Ser Arg

2180

2185

2190

• · • · · · ·

146

Arg	Arg	Glu Leu His 2195	Ile	Arg	Thr Tyr Ala 2200	Val	Ile	Pro Leu Asn Asp 2205
Glu	Cys	Gly Ile Ile	Glu	Trp	Val Asn Asn	Thr	Ala	Gly Leu Arg Pro
	2210		2215		2220
Ile	Leu	Thr Lys Leu	Tyr	Lys	Glu Lys Gly	Val	Tyr	Met Thr Gly Lys
2225		2230		2235	2240
Glu	Leu	Arg Gin Cys	Met	Leu	Pro Lys Ser	Ala	Ala	Leu Ser Glu Lys
		2245		2250		2255
Leu	Lys	Val Phe Arg	Glu	Phe	Leu Leu Pro	Arg	His	Pro Pro Ile Phe
		2260			2265			2270
His	Glu	Trp Phe Leu	Arg	Thr	Phe Pro Asp	Pro	Thr	Ser Trp Tyr Ser
		2275			2280			2285
Ser	Arg	Ser Ala Tyr	Cys	Arg	Ser Thr Ala	Val	Met	Ser Met Val Gly
	2290		2295		2300
Tyr	Ile	Leu Gly Leu	Gly	Asp	Arg His Gly	Glu	Asn	Ile Leu Phe Asp
2305		2310		2315	2320
Ser	Leu	Thr Gly Glu	Cys	Val	His Val Asp	Phe	Asn	Cys Leu Phe Asn
		2325		2330		2335
Lys	Gly	Glu Thr Phe	Glu	Val	Pro Glu Ile	Val	Pro	Phe Arg Leu Thr
		2340			2345			2350
His	Asn	Met Val Asn	Gly	Met	Gly Pro Met	Gly	Thr	Glu Gly Leu Phe
		2355			2360			2365
Arg	Arg	Ala Cys Glu	Val	Thr	Met Arg Leu	Met	Arg	Asp Gin Arg Glu
	2370		2375		2380
Pro	Leu	Met Ser Val	Leu	Lys	Thr Phe Leu	His	Asp	Pro Leu Val Glu
2385		2390		2395	2400
Trp	Ser	Lys Pro Val	Lys	Gly	His Ser Lys	Ala	Pro	Leu Asn Glu Thr
		2405		2410		2415
Gly	Glu	Val Val Asn	Glu	Lys	Ala Lys Thr	His	Val	Leu Asp Ile Glu
		2420			2425			2430
Gin	Arg	Leu Gin Gly	Val	Ile	Lys Thr Arg	Asn	Arg	Val Thr Gly Leu
		2435			2440			2445
Pro	Leu	Ser Ile Glu	Gly	His	Val His Tyr	Leu	Ile	Gin Glu Ala Thr
	2450		2455		2460
Asp	Glu	Asn Leu Leu	Cys	Gin	Met Tyr Leu	Gly	Trp Thr Pro Tyr Met
2465		2470		2475	2480

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:27:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 878 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (Xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 27:

• · · ·

				- · ·	• ·· ·······
			- 147
ATCCATTGTG	TTGGAAAGGA	ATGATGAATG	TGGGATTATT	GAATGGGTGA	ACAATACTGC	60
TGGCTTGAGA	CCTATTCTGA	CCAAAATATA	TAAAGAAAAG	GGAGTGTATA	TGACAGGAAA	120
GGAGCTTCGC	CAGTGTATGC	TACCAAAGTC	AGCAGCTTTA	TCTGAAAAAC	TCAAAGTATT	180
CCAAGAATTA	CTCCTGCCCA	GGCATCCTCC	TGTTTTTCAT	GAGTGGTTTC	TGAGAACATT	240
CCCTGATCCT	ACATCATGGT	ACAGTAGCAG	ATCTGCATAT	TGCCGCTCTA	CTGCAGTCAT	300
GTCAATGGTT	GGCTACATCC	TGGGGCTTGG	AGACCGTCAT	GGTGAAAACA	TTCTTTTTGA	360
CTCTTTCACT	GGTGAATGTG	TACATGTAGA	TTTCAACTGT	CTTTTTAATA	AGGGAGAAAC	420
GTTTGAAGTT	CCGGAAATTG	TACCATTTCG	ACTGACTCAT	AATATGGTTA	ATGGAATGGG	480
TCCTATGGGA	ACAGAGGGTC	TATTTCGAAG	AGCATGTGAA	GTTACACTGA	GACTGATGAG	540
GGATCAGAGA	GAACCTTTAA	TGAGTGTCTT	AAAGACTTTT	CTACACGATC	CTCTAGTGGA	600
GTGGAGTAAA	CCAGTGAAAG	GACACTCCAA	AGCACCACTG	AATGAAACCG	GGGAAGTTGT	660
CAATGAGAAG	GCCAAGACCC	ATGTTCTTGA	CATTGAACAA	CGACTACAAG	GTGTGATCAA	720
AACCCGAAAT	AGAGTAACAG	GGCTGCCATT	ATCTATTGAA	GGACATGTGC	ATTACCTCAT	780
ACAAGAAGCT	ACTGATGAAA	ACTTACTCTG	TCAGATGTAC	CTTGGTTGGA	CCCCATATAT	840
GTAAAATAAA	ATTATTTCAA	AGAAAAAAAA	AAAAAAAA			878

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:28:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7935 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETÉZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1..7932 (Xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 28:

ATG GGG

GAA CAT

GGC CTG GAG CTG GCT TCC

ATG ATC CCC GCC CTG CGG

Met 1

Gly

Glu

His

Gly 5

Leu Glu

Leu Ala

Ser 10

Met

Ile

Pro

Ala

Leu 15

Arg

GAG

CTG

GGC

AGT

GCC

ACA

CCA

GAG

GAA

TAT

AAT

ACA

GTT

GTA

CAG

AAG

Glu

Leu

Gly

Ser

Ala

Thr

Pro

Glu

Glu

Tyr

Asn

Thr

Val

Val

Gin

Lys

20

25

30

• · • ·· * • · ♦ ··· ·· ·

- 148 -

CCA AGA Pro Arg

CAA Gin 35

ATT CTG TGT CAA

TTC ATT GAC

CGG ATA CTT ACA

GAT Asp

GTA Val

144

Ile

Leu

Cys

Gin

Phe 40

Ile

Asp

Arg

Ile

Leu 45

Thr

AAT

GTT

GTT

GCT

GTA

GAA

CTT

GTA

AAG

AAA

ACT

GAC

TCT

CAG

CCA

ACC

192

Asn

Val

Val

Ala

Val

Glu

Leu

Val

Lys

Lys

Thr

Asp

Ser

Gin

Pro

Thr

50

55

60

TCC

GTG

ATG

TTG

CTT

GAT

TTC

ATC

CAG

CAT

ATC

ATG

AAA

TCC

TCC

CCA

240

Ser

Val

Met

Leu

Leu

Asp

Phe

Ile

Gin

His

Ile

Met

Lys

Ser

Ser

Pro

65

70

75

80

CTT

ATG

TTT

GTA

AAT

GTG

AGT

GGA

AGC

CAT

GAG

CGC

AAA

GGC

AGT

TGT

288

Leu

Me t

Phe

Val

Asn

Val

Ser

Gly

Ser

His

Glu

Arg

Lys

Gly

Ser

Cys

85

90

95

ATT

GAA

TTC

AGT

AAT

TGG

ATC

ATA

ACG

AGA

CTT

CTG

CGG

ATT

GCA

GCA

336

Ile

Glu

Phe

Ser

Asn

Trp

Ile

Ile

Thr

Arg

Leu

Leu

Arg

Ile

Ala

Ala

100

105

110

ACT

CCC

TCC

TGT

CAT

TTG

TTA

CAC

AAG

AAA

ATC

TGT

GAA

GTC

ATC

TGT

384

Thr

Pro

Ser

Cys

His

Leu

Leu

His

Lys

Lys

Ile

Cys

Glu

Val

Ile

Cys

115

120

125

TCA

TTA

TTA

TTT

CTT

TTT

AAA

AGC

AAG

AGT

CCT

GCT

ATT

TTT

GGG

GTA

432

Ser

Leu

Leu

Phe

Leu

Phe

Lys

Ser

Lys

Ser

Pro

Ala

Ile

Phe

Gly

Val

130

135

140

CTC

ACA

AAA

GAA

TTA

TTA

CAA

CTT

TTT

GAA

GAC

TTG

GTT

TAC

CTC

CAT

480

Leu

Thr

Lys

Glu

Leu

Leu

Gin

Leu

Phe

Glu

Asp

Leu

Val

Tyr

Leu

His

145

150

155

160

AGA

AGA

AAT

GTG

ATG

GGT

CAT

GCT

GTG

GAA

TGG

CCA

GTG

GTC

ATG

AGC

528

Arg

Arg

Asn

Val

Met

Gly

His

Ala

Val

Glu

Trp

Pro

Val

Val

Met

Ser

165

170

175

CGA

TTT

TTA

AGT

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

576

Arg

Phe

Leu

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu

His

Me t

Gly

Tyr

Leu

Gin

Ser

Ala

180

185

190

CCT

TTG

CAG

TTG

ATG

AGT

ATG

CAA

AAT

TTA

GAA

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

624

Pro

Leu

Gin

Leu

Met

Ser

Met

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe

Ile

Glu

Val

Thr

195

200

205

TTA

TTA

ATG

GTT

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

672

Leu

Leu

Met

Val

Leu

Thr

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile

Val

Phe

Phe

Arg

Arg

210

215

220

CAA

GAA

CTC

TTA

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

720

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr

Gly

225

230

235

240

AGT

CCA

AAA

ATT

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

768

Ser

Pro

Lys

Ile

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu

Leu

Phe

245

250

255

CAG

CTT

GGA

GGA

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

816

Gin

Leu

Gly

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

260

265

270

TTT

TTG

GAA

TTA

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

864

Phe

Leu

Glu

Leu

Leu

Lys

His

Leu

Val

Glu

Met

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

275

280

285

AAA

CTC

TAT

GAA

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

AAG

ACA

CTA

TTT

CCC

912

Lys

Leu

Tyr

Glu

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro

290

295

300

• · · · » • ·· « «· • · · · t · · · ·· · • · · · ···· • · ·· · · · · · · ·

- 149 -

»· ·

« ·

«·····» · ·

TTT

GAA

GCA

GAA

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

960

Phe 305

Glu

Ala

Glu

Ala

Tyr 310

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro 315

Val

Tyr

Leu

Asn

Met 320

CTG

CTG

GAA

AAA

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

1008

Leu

Leu

Glu

Lys

Leu 325

Cys

Val

Met

Phe

Glu 330

Asp

Gly

Val

Leu

Met 335

Arg

CTT

AAG

TCT

GAT

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

1056

Leu

Lys

Ser

Asp 340

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala 345

Leu

Cys

His

Leu

Leu 350

Gin

Tyr

TTC

CTT

AAA

TTT

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

1104

Phe

Leu

Lys 355

Phe

Val

Pro

Ala

Gly 360

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu 365

Gin

Val

Arg

AAG

GTC

TAT

GTG

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

1152

Lys

Val 370

Tyr

Val

Arg

Asn

Ile 375

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu 380

Asp

Val

Leu

Gly

ATT

GAG

GTA

GAT

GCA

GAG

TAC

TTG

TTG

GGC

CCA

CTT

TAT

GCA

GCT

TTG

1200

Ile 385

Glu

Val

Asp

Ala

Glu 390

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro 395

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu 400

AAA

ATG

GAA

AGT

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

1248

Lys

Met

Glu

Ser

Met 405

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu 410

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr 415

Gin

CAG

GAA

AAC

CTC

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

1296

Glr.

Glu

Asn

Leu 420

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp 425

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys 430

Arg

Arg

CGT

CTC

AGC

TCG

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

1344

Arg

Leu

Ser 435

Ser

Ser

Leu

Asn

Pro 440

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro 445

Lys

Gin

Thr

GAG

GAA

ATT

AAA

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

1392

Glu

Glu 450

Ile

Lys

His

Val

Asp 455

Met

Asn

Gin

Lys

Ser 460

Ile

Leu

Trp

Ser

GCA

CTG

AAA

CAG

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

1440

Ala 465

Leu

Lys

Gin

Lys

Ala 470

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile 475

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser 480

GGC

CTA

AAG

AAT

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

1488

Gly

Leu

Lys

Asn

Pro 485

Val

Ile

Glu

Met

Leu 490

Glu

Gly

Ile

Ala

Val 495

Val

TTA

CAA

CTG

ACT

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

1536

Leu

Gin

Leu

Thr 500

Ala

Leu

Cys

Thr

Val 505

His

Cys

Ser

His

Gin 510

Asn

Met

AAC

TGC

CGT

ACT

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

1584

Asn

Cys

Arg 515

Thr

Phe

Lys

Asp

Cys 520

Gin

His

Lys

Ser

Lys 525

Lys

Lys

Pro

TCT

GTA

GTG

ATA

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

TAC

ACA

AAA

GTG

CTT

1632

Ser

Val 530

Val

Ile

Thr

Trp

Met 535

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr 540

Thr

Lys

Val

Leu

AAG

AGC

TGT

AGA

AGT

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

AAA

CTG

GAC

CTG

GAG

1680

Lys 545

Ser

Cys

Arg

Ser

Leu 550

Leu

Glu

Ser

Val

Gin 555

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu 560

GCA

ACC

ATT

GAT

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

1728

Ala

Thr

Ile

Asp

Lys 565

Val

Val

Lys

Ile

Tyr 570

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr 575

Met

·· · · • · · a · · a • « i

999 99 • ·· ·· ···· «····* · • · · · · • · » ··· · • · · · »·· ···· «· ·

CAA Gin

GTA AAC AGT

TCA Ser

TTT Phe

GAA Glu

GAT CAT

ATC Ile

CTG Leu

GAA Glu

GAT Asp

TTA Leu 590

TGT Cys

GGT Gly

1776

Val

Asn

Ser 580

Asp

His 565

ATG

CTC

TCA

CTT

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

1824

Met

Leu

Ser 595

Leu

Pro

Trp

Ile

Tyr 600

Ser

His

Ser

Asp

Asp 605

Gly

Cys

Leu

AAG

TTG

ACC

ACA

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

1872

Lys

Leu 610

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala 615

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu 620

Ser

Cys

Arg

Ile

TCA

GAT

AGC

TAT

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

1920

Ser 625

Asp

Ser

Tyr

Ser

Pro 630

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg 635

Cys

Val

Phe

Leu

Leu 640

ACT

CTG

TTT

CCA

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

1968

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg 645

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu 650

Trp

Arg

Thr

Ala

Val 655

Tyr

AAC

TGG

GCC

CTG

CAG

AGC

TCC

CAT

GAA

GTA

ATC

CGG

GCT

AGT

TGT

GTT

2016

Asr.

Tip

Ala

Leu 660

Gin

Ser

Ser

His

Glu 665

Val

Ile

Arg

Ala

Ser 670

Cys

Val

AGT

GGA

TTT

TTT

ATC

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

2064

Ser

Gly

Phe 675

Phe

Ile

Leu

Leu

Gin 680

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys 685

Asn

Arg

Val

CCC

AAG

ATT

CTT

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

2112

Pro

Lys 690

Ile

Leu

Ile

Asp

Lys 695

Val

Lys

Asp

Asp

Ser 700

Asp

Ile

Val

Lys

AAA

GAA

TTT

GCT

TCT

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

2160

Lys 705

Glu

Phe

Ala

Ser

Ile 710

Leu

Gly

Gin

Leu

Val 715

Cys

Thr

Leu

His

Gly 720

ATG

TTT

TAT

CTG

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

2208

Me t

Phe

Tyr

Leu

Thr 725

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu 730

Pro

Phe

Ser

Glu

His 735

Gly

CAT

GTG

GAC

CTC

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

2256

His

Val

Asp

Leu 740

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu 745

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin 750

His

Glu

TGT

TCA

TCT

TCT

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

2304

Cys

Ser

Ser 755

Ser

Gin

Leu

Lys

Ala 760

Ser

Val

Cys

Lys

Pro 765

Phe

Leu

Phe

CTA

CTG

AAA

AAA

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

2352

Leu

Leu 770

Lys

Lys

Lys

Ile

Pro 775

Ser

Pro

Val

Lys

Leu 780

Ala

Phe

Ile

Asp

AAT

CTA

CAT

CAT

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

2400

Asn 785

Leu

His

His

Leu

Cys 790

Lys

His

Leu

Asp

Phe 795

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr 800

GAT

GTA

AAA

GCA

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

2448

Asp

Val

Lys

Ala

Val 805

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu BIO

Asn

Leu

Met

Glu

Asp 815

Pro

GAC

AAA

GAT

GTT

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

2496

Asp

Lys

Asp

Val 820

Arg

Val

Ala

Phe

Ser 825

Gly

Asn

Ile

Lys

His 830

ií.e

Leu

GAA

TCC

TTG

GAC

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

2544

Glu

Ser

Leu 835

Asp

Ser

Glu

Asp

Gly 840

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu 845

Phe

Val

Leu

• · · ·

	- 151 -	• · ·	• 9	• · · · · · ·
AGA ATG AAG GAA GCA	TAT ACA CAT GCC CAA ATA TCA AGA AAT	AAT	GAG	2592
Arg Met Lys Glu Ala	Tyr Thr His Ala Gin Ile Ser Arg Asn	Asn	Glu
850	855 860
CTG AAG GAT ACC TTG	ATT CTT ACA ACA GGG GAT ATT GGA AGG	GCC	GCA	2640
Leu Lys Asp Thr Leu	Ile Leu Thr Thr Gly Asp Ile Gly Arg	Ala	Ala
865	870 875		880
AAA GGA GAT TTG GTA	CCA TTT GCA CTC TTA CAC TTA TTG CAT	TGT	TTG	2688
Lys Gly Asp Leu Val	Pro Phe Ala Leu Leu His Leu Leu His	Cys	Leu
885	890	895
TTA TCC AAG TCA GCA	TCT GTC TCT GGA GCA GCA TAC ACA GAA	ATT	AGA	2736
Leu Ser Lys Ser Ala	Ser Val Ser Gly Ala Ala Tyr Thr Glu	Ile	Arg
900	905 910
GCT CTG GTT GCA GCT	AAA AGT GTT AAA CTG CAA AGT TTT TTC	AGC	CAG	2784
Ala Leu Val Ala Ala	Lys Ser Val Lys Leu Gin Ser Phe Phe	Ser	Gin
915	920 925
TAT AAG AAA CCC ATC	TGT CAG TTT TTG GTA GAA TCC CTT CAC	TCT	AGT	2832
Tyr Lys Lys Pro Ile	Cys Gin Phe Leu Val Glu Ser Leu His	Ser	Ser
930	935 940
CAG ATG ACA GCA CTT	CCG AAT ACT CCA TGC CAG AAT GCT GAC	GTG	CGA	2880
Gin Met Thr Ala Leu	Pro Asn Thr Pro Cys Gin Asn Ala Asp	Val	Arg
945	950 955		960
AAA CAA GAT GTG GCT	CAC CAG AGA GAA ATG GCT TTA AAT ACG	TTG	TCT	2928
Lys Gin Asp Val Ala	His Gin Arg Glu Met Ala Leu Asn Thr	Leu	Ser
965	970	975
GAA ATT GCC AAC GTT	TTC GAC TTT CCT GAT CTT AAT CGT TTT	CTT	ACT	2976
Glu Ile Ala Asn Val	Phe Asd Phe Pro Asp Leu Asn Arg Phe	Leu	Thr
980	985 990
AGG ACA TTA CAA GTT	CTA CTA CCT GAT CTT GCT GCC AAA GCA	AGC	CCT	3024
Arg Thr Leu Gin Val	Leu Leu Pro Asp Leu Ala Ala Lys Ala	Ser	Pro
995	1000 1005
GCA GCT TCT GCT CTC	ATT CGA ACT TTA GGA AAA CAA TTA AAT	GTC	AAT	3072
Ala Ala Ser Ala Leu	Ile Arg Thr Leu Gly Lys Gin Leu Asn	Val	Asn
1010	1015 1020
CGT AGA GAG ATT TTA	ATA AAC AAC TTC AAA TAT ATT TTT TCT	CAT	TTG	3120
Arg Arg Glu Ile Leu	Ile Asn Asn Phe Lys Tyr Ile Phe Ser	His	Leu
1025	1030 1035		1040
GTC TGT TCT TGT TCC	AAA GAT GAA TTA GAA CGT GCC CTT CAT	TAT	CTG	3168
Val Cys Ser Cys Ser	Lys Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu His	Tyr	Leu
1045 1050	1055
AAG AAT GAA ACA GAA	ATT GAA CTG GGG AGC CTG TTG AGA CAA	GAT	TTC	3216
Lys Asn Glu Thr Glu	Ile Glu Leu Gly Ser Leu Leu Arg Gin	Asp	Phe
1060	1065 1070
CAA GGA TTG CAT AAT	GAA TTA TTG CTG CGT ATT GGA GAA CAC	TAT	CAA	3264
Glr. Gly Leu His Asn	Glu Leu Leu Leu Arg Ile Gly Glu His	Tyr	Gin
1075	1080 1085
CAG GTT TTT AAT GGT	TTG TCA ATA CTT GCC TCA TTT GCA TCC	AGT	GAT	3312
Gin Val Phe Asn Gly	Leu Ser Ile Leu Ala Ser Phe Ala Ser	Ser	Asp
1090	1095 1100
GAT CCA TAT CAG GGC	CCG AGA GAT ATC ATA TCA CCT GAA CTG	ATG	GCT	3360
Asp Pro Tyr Gin Gly	Pro Arg Asp Ile Ile Ser Pro Glu Leu	Met	Ala
1105	1110 1115		1120

- 152 -

GAT Asp

TAT Tyr

TTA Leu

CAA Gin

CCC AAA Pro Lys 1125

TTG Leu

TTG Leu

GGC Gly

ATT TTG Ile Leu 1130

GCT Ala

TTT Phe

TTT Phe

AAC ATG Asn Met 1135

CAG

TTA

CTG

AGC

TCT AGT

GTT

GGC

ATT

GAA GAT

AAG

AAA

ATG

GCC TTG

Gin

Leu

Leu

Ser 1140

Ser Ser 1

Val

Gly

Ile Glu Asp 1145

Lys

Lys

Met Ala Leu 1150

AAC

AGT

TTG

ATG

TCT TTG

ATG

AAG

TTA

ATG GGA

CCC

AAA

CAT

GTC AGT

Asn

Ser

Leu 1155

Met

Ser Leu

Met

Lys 116C

Leu 1

Met Gly

Pro

Lys His 1165

Val Ser

TCT

GTG

AGG

GTG

AAG ATG

ATG

ACC

ACA

CTG AGA

ACT

GGC

CTT

CGA TTC

Ser

Val Arg 1170

Val

Lys Me t

Met 1175

Thr

Thr

Leu Arg

Thr Gly 1180

Leu

Arg Phe

AAG

GAT

GAT

TTT

CCT GAA

TTG

TGT

TGC

AGA GCT

TGG

GAC

TGC

TTT GTT

Lys Asp 1185

Asp

Phe

Pro Glu Leu 1190

Cys

Cys

Arg Ala Trp 1195

Asp

Cys

Phe Val 1200

CGC

TGC

CTG

GAT

CAT GCT

TGT

CTG

GGC

TCC CTT

CTC

AGT

CAT

GTA ATA

Arg

Cys

Leu

Asp

His Ala 1205

Cys

Leu

Gly

Ser Leu 1210

Leu

Ser

His

Val Ile 1215

GTA

GCT

TTG

TTA

CCT CTT

ATA

CAC

ATC

CAG CCT

AAA

GAA

ACT

GCA GCT

Val

Ala

Leu

Leu 122C

Pro Leu 1

Ile

His

Ile Gin Pro 1225

Lys

Glu

Thr Ala Ala 1230

ATC

TTC

CAC

TAC

CTC ATA

ATT

GAA

AAC

AGG GAT

GCT

GTG

CAA

GAT TTT

Ile

Phe

His 1235

Tyr

Leu Ile

Ile

Glu Asn 1240

Arg Asp

Ala

Val Gin 124 5

Asp Phe

CTT

CAT

GAA

ATA

TAT TTT

TTA

CCT

GAT

CAT CCA

GAA

TTA

AAA

AAG ATA

Leu

His Glu 1250

Ile

Tyr Phe

Leu Pro 1255

Asp

His Pro

Glu Leu 1260

Lys

Lys Ile

AAA

GCC

GTT

CTC

CAG GAA

TAC

AGA

AAG

GAG ACC

TCT

GAG

AGC

ACT GAT

Lys Ala 1265

Val

Leu

Gin Glu Tyr 1270

Arg

Lys

Glu Thr Ser 1275

Glu

Ser

Thr Asp 1280

CTT

CAG

ACA

ACT

CTT CAG

CTC

TCT

ATG

AAG GCC

ATT

CAA

CAT

GAA AAT

Leu

Gin

Thr

Thr

Leu Gin 1285

Leu

Ser

Met

Lys Ala 1290

Ile

Gin

His

Glu Asn 1295

GTC

GAT

GTT

CGT

ATT CAT

GCT

CTT

ACA

AGC TTG

AAG

GAA

ACC

TTG TAT

Val

Asp

Val

Arg Ile His 1300

Ala

Leu

Thr Ser Leu 1305

Lys

Glu

Thr Leu Tyr 1310

AAA

AAT

CAG

GAA

AAA CTG

ATA

AAG

TAT

GCA ACA

GAC

AGT

GAA

ACA GTA

Lys

Asn

Gin Glu 1315

Lys Leu

Ile

Lys Tyr 1320

Ala Thr

Asp

Ser Glu 1325

Thr Val

GAA

CCT

ATT

ATC

TCA CAG

TTG

GTG

ACA

GTG CTT

TTG

AAA

GGT

TGC CAA

Glu

Pro Ile 1330

Ile

Ser Gin

Leu Val 1335

Thr

Val Leu

Leu Lys 1340

Gly

Cys Gin

GAT

GCA

AAC

TCT

CAA GCT

CGG

TTG

CTC

TGT GGG

GAA

TGT

TTA

GGG GAA

Asp Ala 1345

Asn

Ser

Gin Ala Arg 1350

Leu

Leu

Cys Gly Glu 1355

Cys

Leu

Gly Glu 1360

TTG

GGG

GCG

ATA

GAT CCA

GGT

CGA

TTA

GAT TTC

TCA

ACA

ACT

GAA ACT

Leu

Gly

Ala

Ile

Asp Pro 1365

Gly

Arg

Leu

Asp Phe 1370

Ser

Thr

Thr

Glu Thr 1375

CAA

GGA

AAA

GAT

TTT ACA

TTT

GTG

ACT

GGA GTA

GAA

GAT

TCA

AGC TTT

Gin

Gly

Lys

Asp

Phe Thr

Phe

Val

Thr

Gly Val

Glu

Asp

Ser

Ser Phe

3408

3456

3504

3552

3600

3648

3696

3744

3792

3840

3888

3936

3984

4032

4080

4128

4176

1380 1385 1390 • · ····

- 153 -

GCC Ala

TAT Tyr

GGA TTA Gly Leu 1395

TTG Leu

ATG Met

GAG Glu

CTA ACA Leu Thr 1400

AGA Arg

GCT Ala

TAC Tyr

CTT GCG Leu Ala 1405

TAT Tyr

GCT Ala

4224

GAT

AAT

AGC CGA

GCT

CAA

GAT

TCA GCT

GCC

TAT

GCC

ATT CAG

GAG

TTG

4272

Asp

Asn

Ser Arg

Ala

Gin

Asp

Ser Ala

Ala

Tyr

Ala

Ile Gin

Glu

Leu

1410

1415

1420

CTT

TCT

ATT TAT

GAC

TGT

AGA

GAG ATG

GAG

ACC

AAC

GGC CCA

GGT

CAC

4320

Leu

Ser

Ile Tyr

Asp

Cys

Arg

Glu Met

Glu

Thr

Asn

Gly Pro

Gly

His

1425

1430

1435

1440

CAA

TTG

TGG AGG

AGA

TTT

CCT

GAG CAT

GTT

CGG

GAA

ATA CTA

GAA

CCT

4368

Gin

Leu

Trp Arg

Arg

Phe

Pro

Glu His

Val

Arg

Glu

Ile Leu

Glu

Pro

1445

1450

1455

CAT

CTA

AAT ACC

AGA

TAC

AAG

AGT TCT

CAG

AAG

TCA

ACC GAT

TGG

TCT

4416

Hi s

Leu

Asn Thr

Arg

Tyr

Lys

Ser Ser

Gin

Lys

Ser

Thr Asp

Trp

Ser

1460

1465

1470

GGA

GTA

AAG AAG

CCA

ATT

TAC

TTA AGT

AAA

TTG

GGT

AGT AAC

TTT

GCA

4464

Gly

Val

Lys Lys

Pro

Ile

Tyr

Leu Ser

Lys

Leu

Gly

Ser Asn

Phe

Ala

1475

1480

1485

GAA

TGG

TCA GCA

TCT

TGG

GCA

GGT TAT

CTT

ATT

ACA

AAG GTT

CGA

CAT

4512

Glu

Trp

Ser Ala

Ser

Trp

Ala

Gly Tyr

Leu

Ile

Thr

Lys Val

Arg

His

1490

1495

1500

GAT

CTT

GCC AGT

AAA

ATT

TTC

ACC TGC

TGT

AGC

ATT

ATG ATG

AAG

CAT

4560

Asp

Leu

Ala Ser

Lys

Ile

Phe

Thr Cys

Cys

Ser

Ile

Met Met

Lys

His

1505

1510

1515

1520

GAT

TTC

AAA GTG

ACC

ATC

TAT

CTT CTT

CCA

CAT

ATT

CTG GTG

TAT

GTC

4608

Asp

Phe

Lys Val

Thr

Ile

Tyr

Leu Leu

Pro

His

Ile

Leu Val

Tyr

Val

1525

1530

1535

TTA

CTG

GGT TGT

AAT

CAA

GAA

GAT CAG

CAG

GAG

GTT

TAT GCA

GAA

ATT

4656

Leu

Leu

Gly Cys

Asn

Gin

Glu

Asp Gin

Gin

Glu

Val

Tyr Ala

Glu

Ile

1540

1545

1550

ATG

GCA

GTT CTA

AAG

CAT

GAC

GAT CAG

CAT

ACC

ATA

AAT ACC

CAA

GAC

4704

Met

Ala

Val Leu

Lys

His

Asp

Asp Gin

His

Thr

Ile

Asn Thr

Gin

Asp

1555

1560

1565

ATT

GCA

TCT GAT

CTG

TGT

CAA

CTC AGT

ACA

CAG

ACT

GTG TTC

TCC

ATG

4752

Ile

Ala

Ser Asp

Leu

Cys

Gin

Leu Ser

Thr

Gin

Thr

Val Phe

Ser

Met

1570

1575

1580

CTT

GAC

CAT CTC

ACA

CAG

TGG

GCA AGG

CAC

AAA

TTT

CAG GCA

CTG

AAA

4800

Leu

Asp

His Leu

Thr

Gin

Trp

Ala Arg

His

Lys

Phe

Gin Ala

Leu

Ly6

158;

1590

1595

1600

GCT

GAG

AAA TGT

CCA

CAC

AGC

AAA TCA

AAC

AGA

AAT

AAG GTA

GAC

TCA

4848

Ala

Glu

Lys Cys

Pro

His

Ser

Lys Ser

Asn

Arg

Asn

Lys Val

Asp

Ser

1605

1610

1615

ATG

GTA

TCT ACT

GTG

GAT

TAT

GAA GAC

TAT

CAG

AGT

GTA ACC

CGT

TTT

4896

Met

Val

Ser Thr

Val

Asp

Tyr

Glu Asp

Tyr

Gin

Ser

Val Thr

Arg

Phe

1620

1625

1630

CTA

GAC

CTC ATA

CCC

CAG

GAT

ACT CTG

GCA

GTA

GCT

TCC TTT

CGC

TCC

4944

Leu

Asp

Leu Ile

Pro

Gin

Asp

Thr Leu

Ala

Val

Ala

Ser Phe

Arg

Ser

1635

1640

1645

AAA

GCA

TAC ACA

CGA

GCT

GTA

ATG CAC

TTT

GAA

TCA

TTT ATT

ACA

GAA

4992

Lys

Ala

Tyr Thr

Arg

Ala

Val

Met His

Phe

Glu

Ser

Phe Ile

Thr

Glu

1655

1660

1650 • · · · · ·

	- 154 -	• · • ·	» · • · • · · • · • »·	«· · · • · • · • · • · · · · ··
AAG AAG CAA AAT ATT CAG GAA CAT	CTT GGA TTT TTA CAG	AAA TTG	TAT	5040
Lys Lys Gin Asn Xle Gin Glu His	Leu Gly Phe Leu Gin	Lys Leu	Tyr
1665 1670	1675		1680
GCT GCT ATG CAT GAA CCT GAT GGA	GTG GCC GGA GTC AGT	GCA ATT	AGA	5088
Ala Ala Met His Glu Pro Asp Gly	Val Ala Gly Val Ser	Ala Ile	Arg
1685	1690	1695
AAG GCA GAA CCA TCT CTA AAA GAA	CAG ATC CTT GAA CAT	GAA AGC	CTT	5136
Lys Ala Glu Pro Ser Leu Lys Glu	Gin Ile Leu Glu His	Glu Ser	Leu
1700	1705	1710
GGC TTG CTG AGG GAT GCC ACT GCT	TGT TAT GAC AGG GCT	ATT CAG	CTA	5184
Gly Leu Leu Arg Asp Ala Thr Ala	Cys Tyr Asp Arg Ala	Ile Gin	Leu
1715 1720 1725
GAA CCA GAC CAG ATC ATT CAT TAT	CAT GGT GTA GTA AAG	TCC ATG	TTA	5232
Glu Pro Asp Gin Ile Ile His Tyr	His Gly Val Val Lys	Ser Met	Leu
1730 1735	1740
GGT CTT GGT CAG CTG TCT ACT GTT	ATC ACT CAG GTG AAT	GGA GTG	CAT	5280
Gly Leu Gly Gin Leu Ser Thr Val	Ile Thr Gin Val Asn	Gly Val	His
1745 1750	1755		1760
GCT AAC AGG TCC GAG TGG ACA GAT	GAA TTA AAC ACG TAC	AGA GTG	GAA	5328
Ala Asn Arg Ser Glu Trp Thr Asp	Glu Leu Asn Thr Tyr	Arg Val	Glu
1765	1770	1775
GCA GCT TGG AAA TTG TCA CAG TGG	GAT TTG GTG GAA AAC	TAT TTG	GCA	5376
Ala Ala Trp Lys Leu Ser Gin Trp	Asp Leu Val Glu Asn	Tyr Leu	Ala
1780	1785	1790
GCA GAT GGA AAA TCT ACA ACA TGG	AGT GTC AGA CTG GGA	CAG CTA	TTA	5424
Ala Asp Gly Lys Ser Thr Thr Trp	Ser Val Arg Leu Gly	Gin Leu	Leu
1795 1800 1805
TTA TCA GCC AAA AAA AGA GAT ATC	ACA GCT TTT TAT GAC	TCA CTG	AAA	5472
Leu Ser Ala Lys Lys Arg Asp Ile	Thr Ala Phe Tyr Asp	Ser Leu	Lys
1810 1815	1820
CTA GTG AGA GCA GAA CAA ATT GTA	CCT CTT TCA GCT GCA	AGC TTT	GAA	5520
Leu Val Arg Ala Glu Gin Ile Val	Pro Leu Ser Ala Ala	Ser Phe	Glu
1825 1830	1835		1840
AGA GGC TCC TAC CAA CGA GGA TAT	GAA TAT ATT GTG AGA	TTG CAC	ATG	5568
Arg Gly Ser Tyr Gin Arg Gly Tyr	Glu Tyr Ile Val Arg	Leu His	Met
1845	1850	1855
TTA TGT GAG TTG GAG CAT AGC ATC	AAA CCA CTT TTC CAG	CAT TCT	CCA	5616
Leu Cys Glu Leu Glu His Ser Ile	Lys Pro Leu Phe Gin	His Ser	Pro
1860	1865	1870
GGT GAC AGT TCT CAA GAA GAT TCT	CTA AAC TGG GTA GCT	CGA CTA	GAA	5664
Gly Asp Ser Ser Gin Glu Asp Ser	Leu Asn Trp Val Ala	Arg Leu	Glu
1875 1880 1885
ATG ACC CAG AAT TCC TAC AGA GCC	AAG GAG CCT ATC CTG	GCT CTC	CGG	5712
Met Thr Gin Asn Ser Tyr Arg Ala	Lys Glu Pro Ile Leu	Ala Leu	Arg
1890 1895	1900
AGG GCT TTA CTA AGC CTC AAC AAA	AGA CCA GAT TAC AAT	GAA ATG	GTT	5760
Arg Ala Leu Leu Ser Leu Asn Lys	Arg Pro Asp Tyr Asn	Glu Met	Val
1905 1910	1915		1920
GGA GAA TGC TGG CTG CAG AGT GCC	AGG GTA GCT AGA AAG	GCT GGT	CAC	5808
Gly Glu Cys Trp Leu Gin Ser Ala	Arg Val Ala Arg Lys	Ala Gly	His
1925	1930	1935

• *

- 155 -

CAC His

CAG Gin

ACA Thr

GCC TAC Ala Tyr 1940

AAT Asn

GCT Ala

CTC Leu

CTT AAT Leu Asn 1945

GCA Ala

GGG Gly

GAA Glu

TCA CGA Ser Arg 1950

CTC Leu

5856

GCT

GAA

CTG

TAC GTG

GAA

AGG

GCA

AAG TGG

CTC

TGG

TCC

AAG GGT

GAT

5904

Ala

Glu

Leu

Tyr Val

Glu

Arg

Ala

Lys Trp

Leu

Trp

Ser

Lys Gly

Asp

1955

1960

1965

GTT

CAC

CAG

GCA CTA

ATT

GTT

CTT

CAA AAA

GGT

GTT

GAA

TTA TGT

TTT

5952

Val

Hi s

Gin

Ala Leu

Ile

Val

Leu

Gin Lys

Gly

Val

Glu

Leu Cys

Phe

1970

1975

1980

CCT

GAA

AAT

GAA ACC

CCA

CCT

GAG

GGT AAG

AAC

ATG

TTA

ATC CAT

GGT

6000

Pro

Glu

Asn

Glu Thr

Pro

Pro

Glu

Gly Lys

Asn

Met

Leu

Ile His

Gly

1985

1990

1995

2000

CGA

GCT

ATG

CTA CTA

GTG

GGC

CGA

TTT ATG

GAA

GAA

ACA

GCT AAC

TTT

6048

Arg

Ala

Met

Leu Leu

Val

Gly

Arg

Phe Met

Glu

Glu

Thr

Ala Asn

Phe

2005

2010

2015

GAA

AGC

AAT

GCA ATT

ATG

AAA

AAA

TAT AAG

GAT

GTG

ACC

GCG TGC

CTG

6096

Glu

Ser

Asn

Ala Ile

Met

Lys

Lys

Tyr Lys

Asp

Val

Thr

Ala Cys

Leu

2020

2025

2030

CCA

GAA

TGG

GAG GAT

GGG

CAT

TTT

TAC CTT

GCC

AAG

TAC

TAT GAC

AAA

6144

Pro

Glu

Trp

Glu Asp

Gly

His

Phe

Tyr Leu

Ala

Lys

Tyr

Tyr Asp

Lys

2035

2040

2045

TTG

ATG

CCC

ATG GTC

ACA

GAC

AAC

AAA ATG

GAA

AAG

CAA

GGT GAT

CTC

6192

Leu

Met

Pro

Met Val

Thr

Asp

Asn

Lys Met

Glu

Lys

Gin

Gly Asp

Leu

2050

2055

2060

ATC

CGG

TAT

ATA GTT

CTT

CAT

TTT

GGC AGA

TCT

CTA

CAA

TAT GGA

AAT

6240

Ile

Arg

Tyr

Ile Val

Leu

His

Phe

Gly Arg

Ser

Leu

Gin

Tyr Gly

Asn

2065

2070

2075

2080

CAG

TTC

ATA

TAT CAG

TCA

ATG

CCA

CGA ATG

TTA

ACT

CTA

TGG CTT

GAT

6288

Gin

Phe

Ile

Tyr Gin

Ser

Met

Pro

Arg Met

Leu

Thr

Leu

Trp Leu

Asp

2085

2090

2095

TAT

GGT

ACA

AAG GCA

TAT

GAA

TGG

GAA AAA

GCT

GGC

CGC

TCC GAT

CGT

6336

Tyr

Gly

Thr

Lys Ala

Tyr

Glu

Trp

Glu Lys

Ala

Gly

Arg

Ser Asp

Arg

2100

2105

2110

GTA

CAA

ATG

AGG AAT

GAT

TTG

GGT

AAA ATA

AAC

AAG

GTT

ATC ACA

GAG

6384

Val

Gin

Met

Arg Asn

Asp

Leu

Gly

Lys Ile

Asn

Lys

Val

Ile Thr

Glu

2115

2120

2125

CAT

ACA

AAC

TAT TTA

GCT

CCA

TAT

CAA TTT

TTG

ACT

GCT

TTT TCA

CAA

6432

His

Thr

Asn

Tyr Leu

Ala

Pro

Tyr

Gin Phe

Leu

Thr

Ala

Phe Ser

Gin

2130

2135

2140

TTG

ATC

TCT

CGA ATT

TGT

CAT

TCT

CAC GAT

GAA

GTT

TTT

GTT GTC

TTG

6480

Leu

Ile

Ser

Arg Ile

Cys

His

Ser

His Asp

Glu

Val

Phe

Val Val

Leu

2145

2150

2155

2160

ATG

GAA

ATA

ATA GCC

AAA

GTA

TTT

CTA GCC

TAT

CCT

CAA

CAA GCA

ATG

6528

Met

Glu

Ile

Ile Ala

Lys

Val

Phe

Leu Ala

Tyr

Pro

Gin

Gin Ala

Met

2165

2170

2175

TGG

ATG

ATG

ACA GCT

GTG

TCA

AAG

TCA TCT

TAT

CCC

ATG

CGT GTG

AAC

6576

Trp

Met

Met

Thr Ala

Val

Ser

Lys

Ser Ser

Tyr

Pro

Met

Arg Val

Asn

2180

2185

2190 ·

AGA

TGC

AAG

GAA ATC

CTC

AAT

AAA

GCT ATT

CAT

ATG

AAA

AAA TCC

TTA

6624

Arg

Cys

Lys

Glu Ile

Leu

Asn

Lys

Ala Ile

His

Met

Lys

Lys Ser

Leu

2200

2205

2195 » · · · · ·

156

GAG Glu

AAG TTT Lys Phe 2210

GTT Val

GGA Gly

GAT Asp

GCA ACT Ala Thr 2215

CGC Arg

CTA Leu

ACA Thr

GAT AAG Asp Lys 2220

CTT Leu

CTA Leu

GAA Glu

6672

TTG

TGC AAT

AAA

CCG

GTT

GAT GGA

AGT

AGT

TCC

ACA TTA

AGC

ATG

AGC

6720

Leu

Cys Asn

Lys

Pro

Val

Asp Gly

Ser

Ser

Ser

Thr Leu

Ser

Met

Ser

2 22 5

2230

2235

2240

ACT

CAT TTT

AAA

ATG

CTT

AAA AAG

CTG

GTA

GAA

GAA GCA

ACA

TTT

AGT

6768

Thr

His Phe

Lys

Met

Leu

Lys Lys

Leu

Val

Glu

Glu Ala

Thr

Phe

Ser

2245

2250

2255

GAA

ATC CTC

ATT

CCT

CTA

CAA TCA

GTC

ATG

ATA

CCT ACA

CTT

CCA

TCA

6816

Glu

Ile Leu

Ile

Pro

Leu

Gin Ser

Val

Met

Ile

Pro Thr

Leu

Pro

Ser

2260

2265

2270

ATT

CTG GGT

ACC

CAT

GCT

AAC CAT

GCT

AGC

CAT

GAA CCA

TTT

CCT

GGA

6864

Ile

Leu Gly

Thr

His

Ala

Asn His

Ala

Ser

His

Glu Pro

Phe

Pro

Gly

2275

2280

2285

CAT

TGG GCC

TAT

ATT

GCA

GGG TTT

GAT

GAT

ATG

GTG GAA

ATT

CTT

GCT

6912

His

Trp Ala

Tyr

Ile

Ala

Gly Phe

Asp

Asp

Met

Val Glu

Ile

Leu

Ala

2290

2295

2300

TCT

CTT CAG

AAA

CCA

AAG

AAG ATT

TCT

TTA

AAA

GGC TCA

GAT

GGA

AAG

6960

Ser

Leu Gin

Lys

Pro

Lys

Lys Ile

Ser

Leu

Lys

Gly Ser

Asp

Gly

Lys

2305

2310

2315

2320

TTC

TAC ATC

ATG

ATG

TGT

AAG CCA

AAA

GAT

GAC

CTG AGA

AAG

GAT

TGT

7008

Phe

Tyr Ile

Met

Met

cys

Lys Pro

Lys

Asp

Asp

Leu Arg

Lys

Asp

Cys

2325

2330

2335

AGA

CTA ATG

GAA

TTC

AAT

TCC TTG

ATT

AAT

AAG

TGC TTA

AGA

AAA

GAT

7056

Arg

Leu Met

Glu

Phe

Asn

Ser Leu

Ile

Asn

Lys

Cys Leu

Arg

Lys

Asp

2340

2345

2350

GCA

GAG TCT

CGT

AGA

AGA

GAA CTT

CAT

ATT

CGA

ACA TAT

GCA

GTT

ATT

7104

Ala

Glu Ser

Arg

Arg

Arg

Glu Leu

His

Ile

Arg

Thr Tyr

Ala

Val

Ile

2355

2360

2365

CCA

CTA AAT

GAT

GAA

TGT

GGG ATT

ATT

GAA

TGG

GTG AAC

AAC

ACT

GCT

7152

Pro

Leu Asn

Asp

Glu

Cys

Gly Ile

Ile

Glu

Trp

Val Asn

Asn

Thr

Ala

2370

2375

2380

GGT

TTG AGA

CCT

ATT

CTG

ACC AAA

CTA

TAT

AAA

GAA AAG

GGA

GTG

TAT

7200

Gly

Leu Arg

Pro

Ile

Leu

Thr Lys

Leu

Tyr

Lys

Glu Lys

Gly

Val

Tyr

2385

2390

2395

2400

ATG

ACA GGA

AAA

GAA

CTT

CGC CAG

TGT

ATG

CTA

CCA AAG

TCA

GCA

GCT

7248

Met

Thr Gly

Lys

Glu

Leu

Arg Gin

Cys

Met

Leu

Pro Lys

Ser

Ala

Ala

2405

2410

2415

TTA

TCT GAA

AAA

CTC

AAA

GTA TTC

CGA

GAA

TTT

CTC CTG

CCC

AGG

CAT

7296

Leu

Ser Glu

Lys

Leu

Lys

Val Phe

Arg

Glu

Phe

Leu Leu

Pro

Arg

His

2420

2425

2430

CCT

CCT ATT

TTT

CAT

GAG

TGG TTT

CTG

AGA

ACA

TTC CCT

GAT

CCT

ACA

7344

Pro

Pro Ile

Phe

His

Glu

Trp Phe

Leu

Arg

Thr

Phe Pro

Asp

Pro

Thr

2435

2440

2445

TCA

TGG TAC

AGT

AGT

AGA

TCA GCT

TAC

TGC

CGT

TCC ACT

GCA

GTA

ATG

7392

Ser

Trp Tyr

Ser

Ser

Arg

Ser Ala

Tyr

Cys

Arg

Ser Thr

Ala

Val

Met

2450

2455

2460

TCA

ATG GTT

GGT

TAT

ATT

CTG GGG

CTT

GGA

GAC

CGT CAT

GGT

GAA

AAT

7440

Ser Met Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Gly Asp Arg His Gly Glu Asn 2465 2470 2475 2480 • · ·

- 157 • · · · ·

ATT Ile

CTC Leu

TTT Phe

GAT Asp

TCT TTG Ser Leu 2485

ACT Thr

GGT Gly

GAA Glu

TGC GTA Cys Val 2490

CAT His

GTA Val

GAT Asp

TTC AAT Phe Asn 2495

7488

TGT

CTT

TTC

AAT

AAG GGA

GAA

ACC

TTT

GAA GTT

CCA

GAA

ATT

GTG CCA

7536

Cys

Leu

Phe

Asn

Lys Gly

Glu

Thr

Phe

Glu Val

Pro

Glu

Ile

Val Pro

2500

2505

2510

TTT

CGC

CTG

ACT

CAT AAT

ATG

GTT

AAT

GGA ATG

GGT

CCT

ATG

GGA ACA

7584

Phe

Arg

Leu

Thr

His Asn

Met

Val

Asn

Gly Met

Gly

Pro

Met

Gly Thr

2515

2520

2525

GAG

GGT

CTT

TTT

CGA AGA

GCA

TGT

GAA

GTT ACA

ATG

AGG

CTG

ATG CGT

7632

Glu

Gly

Leu

Phe

Arg Arg

Ala

Cys

Glu

Val Thr

Met

Arg

Leu

Met Arg

2530

2535

2540

GAT

CAG

CGA

GAG

CCT TTA

ATG

AGT

GTC

TTA AAG

ACT

TTT

CTA

CAT GAT

7680

Asp

Gin

Arg

Glu

Pro Leu

Met

Ser

Val

Leu Lys

Thr

Phe

Leu

His Asp

2545

2550

2555

2560

CCT

CTT

GTG

GAA

TGG AGT

AAA

CCA

GTG

AAA GGG

CAT

TCC

AAA

GCG CCA

7728

Pro

Leu

Val

Glu

Trp Ser

Lys

Pro

Val

Lys Gly

His

Ser

Lys

Ala Pro

2565

2570

2575

CTG

AAT

GAA

ACT

GGA GAA

GTT

GTC

AAT

GAA AAG

GCC

AAG

ACC

CAT GTT

7776

Leu

Asn

Glu

Thr

Gly Glu

Val

Val

Asn

Glu Lys

Ala

Lys

Thr

His Val

2580

2585

2590

CTT

GAC

ATT

GAG

CAG CGA

CTA

CAA

GGT

GTA ATC

AAG

ACT

CGA

AAT AGA

7824

Leu

Asp

Ile

Glu

Gin Arg

Leu

Gin

Gly

Val Ile

Lys

Thr

Arg

Asn Arg

2595

2600

2605

GTG

ACA

GGA

CTG

CCG TTA

TCT

ATT

GAA

GGA CAT

GTG

CAT

TAC

CTT ATA

7872

Val

Thr

Gly

Leu

Pro Leu

Ser

Ile

Glu

Gly His

Val

His

Tyr

Leu Ile

2610

2615

2620

CAA

GAA

GCT

ACT

GAT GAA

AAC

TTA

CTA

TGC CAG

ATG

TAT

CTT

GGT TGG

7920

Gin

Glu

Ala

Thr

Asp Glu

Asn

Leu

Leu

Cys Gin

Met

Tyr

Leu

Gly Trp

2625

2630

2635

2640

ACT

CCA

TAT

ATG

TGA

7935

Thr

Pro

Tyr

Met

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:29:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2644 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 29:

Met 1

Gly

Glu

His

Gly 5

Leu

Glu

Leu

Ala

Ser 10

Met

Ile

Pro

Ala

Leu 15

Arg

Glu

Leu

Gly

Ser 20

Ala

Thr

Pro

Glu

Glu 25

Tyr

Asn

Thr

Val

Val 30

Gin

Lys

Pro

Arg

Gin 35

Ile

Leu

Cys

Gin

Phe 40

Ile

Asp

Arg

Ile

Leu 45

Thr

Asp

Val

• · · ·

Lys

Met

Glu

Ser

Met 405

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu 410

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr 415

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu 420

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp 425

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys 430

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser 435

Ser

Ser

Leu

Asn

Pro 440

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro 445

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu 450

Ile

Lys

His

Val

Asp 455

Met

Asn

Gin

Lys

Ser 460

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala 465

Leu

Lys

Gin

Lys

Ala 470

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile 475

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser 480

Gly

Leu

Lys

Asn

Pro 485

Val

Ile

Glu

Met

Leu 490

Glu

Gly

Ile

Ala

Val 495

Val

Leu

Gin

Leu

Thr 500

Ala

Leu

Cys

Thr

Val 505

His

Cys

Ser

His

Gin 510

Asn

Met

Asn

Cys

Arg 515

Thr

Phe

Lys

Asp

Cys 520

Gin

His

Lys

Ser

Lys 525

Lys

Lys

Pro

Ser

Val 530

Val

Ile

Thr

Trp

Met 535

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr 540

Thr

Lys

Val

Leu

Lys 545

Ser

Cys

Arg

Ser

Leu 550

Leu

Glu

Ser

Val

Gin 555

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu 560

Ala

Thr

Ile

Asp

Lys 565

Val

Val

Lys

Ile

Tyr 570

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr 575

Met

Gin

Val

Asn

Ser 580

Ser

Phe

Glu

Asp

His 585

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu 590

Cys

Gly

Met

Leu

Ser 595

Leu

Pro

Trp

Ile

Tyr 600

Ser

His

Ser

Asp

Asp 605

Gly

Cye

Leu

Lys

Leu 610

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala 615

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu 620

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser 625

Asp

Ser

Tyr

Ser

Pro 630

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg 635

Cys

Val

Phe

Leu

Leu 640

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg 645

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu 650

Trp

Arg

Thr

Ala

Val 655

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu 660

Gin

Ser

Ser

His

Glu 665

Val

Ile

Arg

Ala

Ser 670

Cys

Val

Ser

Gly

Phe 675

Phe

Ile

Leu

Leu

Gin 680

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys 685

Asn

Arg

Val

Pro

Lys 690

Ile

Leu

Ile

Asp

Lys 695

Val

Lys

Asp

Asp

Ser 700

Asp

Ile

Val

Lys

Lys 705

Glu

Phe

Ala

Ser

Ile 710

Leu

Gly

Gin

Leu

Val 715

Cys

Thr

Leu

His

Gly 720

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

725 730 735

His Val Asp Leu Phe Cys Arg Asn Leu Lys Ala Thr Ser Gin His Glu 740 745 750 • ·

	- 160 -	• · ·	• ·
Cys Ser Sex 755	Sex’ Gin Leu Lys Ala Ser Val Cys Lys Pro Phe 760 765	Leu	Phe
Leu Leu Lys 770	Lys Lys Ile Pro Ser Pro Val Lys Leu Ala Phe 775 780	Ile	Asp
Asn Leu His 765	His Leu Cys Lys His Leu Asp Phe Arg Glu Asp 790 795	Glu	Thr 800
Asp Val Lys	Ala Val Leu Gly Thr Leu Leu Asn Leu Met Glu 805 810	Asp 815	Pro
Asp Lys Asp	Val Arg Val Ala Phe Ser Gly Asn Ile Lys His 620 625 Θ30	Ile	Leu
Glu Ser Leu 635	Asp Ser Glu Asp Gly Phe Ile Lys Glu Leu Phe 840 845	Val	Leu
Arg Met Lys 650	Glu Ala Tyr Thr His Ala Gin Ile Ser Arg Asn 855 860	Asn	Glu
Leu Lys Asp 865	Thr Leu Ile Leu Thr Thr Gly Asp Ile Gly Arg 870 875	Ala	Ala 880
Lys Gly Asp	Leu Val Pro Phe Ala Leu Leu His Leu Leu His 885 890	Cys 895	Leu
Leu Ser Lys	Ser Ala Ser Val Ser Gly Ala Ala Tyr Thr Glu 900 905 910	Ile	Arg
Ala Leu Val 915	Ala Ala Lys Ser Val Lys Leu Gin Ser Phe Phe 920 925	Ser	Gin
Tyr Lys Lys 930	Pro Ile Cys Gin Phe Leu Val Glu Ser Leu His 935 940	Ser	Ser
Gin Met Thr 945	Ala Leu Pro Asn Thr Pro Cvs Gin Asn Ala Asp 950 ' 955	Val	Arg 960
Lys Gin Asp	Val Ala His Gin Arg Glu Met Ala Leu Asn Thr 965 970	Leu 975	Ser
Glu Ile Ala	Asn Val Phe Asp Phe Pro Asp Leu Asn Arg Phe 980 985 990	Leu	Thr
Arg Thr Leu 995	Gin Val Leu Leu Pro Asp Leu Ala Ala Lys Ala 1000 1005	Ser	Pro
Ala Ala Ser 1010	Ala Leu Ile Arg Thr Leu Gly Lys Gin Leu Asn 1015 1020	Val	Asn
Arg Arg Glu 1025	Ile Leu Ile Asn Asn Phe Lys Tyr Ile Phe Ser 1030 1035	His	Leu 1040
Val Cys Ser	Cys Ser Lys Asp Glu Leu Glu Arg Ala Leu His 1045 1050	Tyr Leu 1055
Lys Asn Glu	Thr Glu Ile Glu Leu Gly Ser Leu Leu Arg Gin Asp 1060 1065 1070	Phe
Gin Gly Leu His Asn Glu Leu Leu Leu Arg Ile Gly Glu His 1075 1080 1085	Tyr	Gin

Gin Val Phe Asn Gly Leu Ser Xle Leu Ala Ser Phe Ala Ser Ser Asp 1090 1095 1100

161 -

Asp Pro Tyr Gin Gly Pro Arg Asp Ile	Ile	Ser Pro Glu Leu Met Ala
1105	1110	1115	1120
Asp Tyr Leu Gin Pro	Lys Leu Leu Gly	Ile	Leu Ala Phe Phe Asn	Met
1125	1130 H35
Gin Leu Leu Ser Ser	Ser Val Gly Ile	Glu	Asp Lys Lys Met Ala	Leu
1140	1145	1150
Asn Ser Leu Met Ser	Leu Met Lys Leu	Met	Gly Pro Lys His Val	Ser
1155	1160		1165
Ser Val Arg Val Lys	Met Met Thr Thr	Leu	Arg Thr Gly Leu Arq	Phe
1170	1175		1180
Lys Asp Asp Phe Pro	Glu Leu Cys Cys	Arg	Ala Trp Asp Cys Phe	Val
1185	1190		1195	1200
Arg Cys Leu Asp His	Ala Cys Leu Gly	Ser	Leu Leu Ser His Val	Ile
1205	1210 1215
Val Ala Leu Leu Pro	Leu Ile His Ile	Gin	Pro Lys Glu Thr Ala	Ala
1220	1225	1230
Ile Phe His Tyr Leu	Ile Ile Glu Asn	Arg	Asp Ala Val Gin Asp	Phe
1235	1240		1245
Leu His Glu Ile Tyi-	Phe Leu Pro Asp	His	Pro Glu Leu Lys Lys	Ile
1250	1255		1260
Lys Ala Val Leu Gin	Glu Tyr Arg Lys	Glu	Thr Ser Glu Ser Thr	Asp
1265	1270		1275	1280
Leu Gin Thr Thr Leu	Gin Leu Ser Met	Lys	Ala Ile Gin His Glu	Asn
1285	1290 1295
Val Asp Val Arg Ile	His Ala Leu Thr	Ser	Leu Lys Glu Thr Leu	Tyr
1300	1305	1310
Lys Asn Gin Glu Lys	Leu Ile Lys Tyr	Ala	Thr Asp Ser Glu Thr	Val
1315	1320		1325
Glu Pro Ile Ile Ser	Gin Leu Val Thr	Val	Leu Leu Lys Gly Cys	Gin
1330	1335		1340
Asp Ala Asn Ser Gin	Ala Arg Leu Leu	Cys	Gly Glu Cys Leu Gly	Glu
1345	1350		1355	1360
Leu Gly Ala Ile Asp	Pro Gly Arg Leu	Asp	Phe Ser Thr Thr Glu	Thr
1365	1370 1375
Gin Gly Lys Asp Phe	Thr Phe Val Thr	Gly	Val Glu Asp Ser Ser	Phe
1380	1385	1390
Ala Tyr Gly Leu Leu	Met Glu Leu Thr	Arg	Ala Tyr Leu Ala Tyr	Ala
1395	1400		1405
Asp Asn Ser Arg Ala	Gin Asp Ser Ala	Ala	Tyr Ala Ile Gin Glu	Leu
1410	1415		1420
Leu Ser Ile Tyr Asp	Cys Arg Glu Met	Glu	Thr Asn Gly Pro Gly	His
1425	1430		1435	1440

Gin Leu Trp Arg Arg Phe Pro Glu His Val Arg Glu Ile Leu Glu Pro 1445 1450 1455 • ·

162

His	Leu	Asn	Thr Arg 1460	Tyr Lys	Ser	Ser Gin 1465	Lys	Ser Thr Asp Trp Ser 1470
Gly	Val	Lys	Lys Pro	Ile Tyr	Leu	Ser Lys	Leu	Gly Ser Asn Phe Ala
		1475		1480		1485
Glu	Trp	Ser	Ala Ser	Trp Ala	Gly	Tyr Leu	Ile	Thr Lys Val Arg His
	1490		1495			1500
Asp	Leu	Ala	Ser Lys	Ile Phe	Thr	Cys Cys	Ser	Ile Met Met Lys His
1505			1510			1515 1520
Asp	Phe	Lys	Val Thr	Ile Tyr	Leu	Leu Pro	His	Ile Leu Val Tyr Val
			1525		1530	1535
Leu	Leu	Gly	Cys Asn	Gin Glu	Asp	Gin Gin	Glu	Val Tyr Ala Glu Ile
			1540			1545		1550
Met	Al a	Val	Leu Lys	His Asp	Asp	Gin His	Thr	Ile Asn Thr Gin Asp
		1555		1560		1565
Ile	Ala	Ser	Asp Leu	Cys Gin	Leu	Ser Thr	Gin	Thr Val Phe Ser Met
	1570		1575			1580
Leu	Asp	His	Leu Thr	Gin Trp	Ala	Arg His	Lys	Phe Gin Ala Leu Lys
1585			1590			1595	, 1600
Ala	Glu	Lys	Cys Pro	His Ser	Lys	Ser Asn	Arg	Asn Lys Val Asp Ser
			1605		1610	1615
Met	Val	Ser	Thr Val	Asp Tyr	Glu	Asp Tyr	Gin	Ser Val Thr Arg Phe
			1620			1625		1630
Leu	Asp	Leu	Ile Pro	Gin Asp	Thr	Leu Ala	Val	Ala Ser Phe Arg Ser
		1635		1640		1645
Lys	Ala	Tyr	Thr Arg	Ala Val	Met	His Phe	Glu	Ser Phe Ile Thr Glu
	1650		1655			1660
Lys	Lys	Gin	Asn Ile	Gin Glu	His	Leu Gly	Phe	Leu Gin Lys Leu Tyr
1665			1670			1675	' 1680
Ala	Ala	Met	His Glu	Pro Asp	Gly	Val Ala	Gly	Val Ser Ala Ile Arg
			1685		1690	1695
Lys	Ala	Glu	Pro Ser	Leu Lys	Glu	Gin Ile	Leu	Glu His Glu Ser Leu
			1700			1705		1710
Gly	Leu	Leu	Arg Asp	Ala Thr	Ala	Cys Tyr	Asp	Arg Ala Ile Gin Leu
		1715		1720		1725
Glu	Pro	Asp	Gin Ile	Ile His	Tyr	His Gly	Val	Val Lys Ser Met Leu
	1730		1735			1740
Gly	Leu	Gly	Gin Leu	Ser Thr	Val	Ile Thr	Gin	Val Asn Gly Val His
1745			1750			1755	i 1760
Ala	Asn	Arg	Ser Glu	Trp Thr	Asp	Glu Leu	Asn	Thr Tyr Arg Val Glu
			1765		1770	1775
Ala	Ala	Trp	Lys Leu	Ser Gin	Trp	Asp Leu	Val	Glu Asn Tyr Leu Ala
			1780			1785		1790
Ala	Asp	Gly	Lys Ser	Thr Thr	Trp	Ser Val	Arg	Leu Gly Gin Leu Leu
		1795		1800		1805

• · · · · ι

- 163 -

Leu

Ser Ala 1810

Lys

Lys

Arg

Asp Ile 1815

Thr

Ala

Phe

Tyr Asp 1820

Ser

Leu

Lys

Leu

Val Arg

Ala

Glu

Gin

Ile Val

Pro

Leu

Ser

Ala Ala

Ser

Phe

Glu

1825

1830

1835

1840

Arg

Gly Ser

Tyr

Gin

Arg

Gly Tyr

Glu

Tyr

Ile

Val Arg

Leu

His

Met

1845

1850

1855

Leu

Cys Glu

Leu

Glu

His

Ser Ile

Lys

Pro

Leu

Phe Gin

His

Ser

Pro

1860

1865

1870

Gly

Asp Ser

Ser

Gin

Glu

Asp Ser

Leu

Asn

Trp

Val Ala

Arg

Leu

Glu

1875

1880

1885

Met

Thr Gin

Asn

Ser

Tyr

Arg Ala

Lys

Glu

Pro

Ile Leu

Ala

Leu

Arg

1890

1895

1900

Arg

Ala Leu

Leu

Ser

Leu

Asn Lys

Arg

Pro

Asp

Tyr Asn

Glu

Met

Val

1905

1910

1915

1920

Gly

Glu Cys

Trp

Leu

Gin

Ser Ala

Arg

Val

Ala

Arg Lys

Ala

Gly

His

1925

1930

1935

His

Gin Thr

Ala

Tyr

Asn

Ala Leu

Leu

Asn

Ala

Gly Glu

Ser

Arg

Leu

1940

1945

1950

Ala

Glu Leu

Tyr

Val

Glu

Arg Ala

Lys

Trp

Leu

Trp Ser

Lys

Gly

Asp

1955

1960

1965

Val

His Gin

Ala

Leu

Ile

Val Leu

Gin

Lys

Gly

Val Glu

Leu

Cys

Phe

1970

1975

1980

Pro

Glu Asn

Glu

Thr

Pro

Pro Glu

Gly

Lys

Asn

Met Leu

Ile

His

Gly

1985

1990

1995

2000

Arg

Ala Met

Leu

Leu

Val

Gly Arg

Phe

Met

Glu

Glu Thr

Ala

Asn

Phe

2005

2010

2015

Glu

Ser Asn

Ala

Ile

Met

Lys Lys

Tyr

Lys

Asp

Val Thr

Ala

Cys

Leu

2020

2025

2030

Pro

Glu Trp

Glu

Asp

Gly

His Phe

Tyr

Leu

Ala

Lys Tyr

Tyr

Asp

Lys

2035

2040

2045

Leu

Met Pro

Met

Val

Thr

Asp Asn

Lys

Met

Glu

Lys Gin

Gly

Asp

Leu

2050

2055

2060

Ile

Arg Tyr

Ile

Val

Leu

His Phe

Gly

Arg

Ser

Leu Gin

Tyr

Gly

Asn

2065

2070

2075

2080

Gin

Phe Ile

Tyr

Gin

Ser

Met Pro

Arg

Met

Leu

Thr Leu

Trp

Leu

Asp

2085

2090

2095

Tyr

Gly Thr

Lys

Ala

Tyr

Glu Trp

Glu

Lys

Ala

Gly Arg

Ser

Asp

Arg

2100

2105

2110

Val

Gin Met

Arg

Asn

Asp

Leu Gly

Lys

He

Asn

Lys Val

Ile

Thr

Glu

2115

2120

2125

His

Thr Asn

Tyr

Leu

Ala

Pro Tyr

Gin

Phe

Leu

Thr Ala

Phe

Ser

Gin

2130

2135

2140

Leu

Ile Ser

Arg

Ile

Cys

His Ser

His

Asp

Glu

Val Phe

Val

Val

Leu

2145

2150

2155

2160

164 • · · ··

Met	Glu	Ile	Ile	Ala Lys 2165	Val	Phe	Leu Ala Tyr Pro Gin Gin Ala Met
2170	2175
Trp	Met	Met	Thr	Ala Val	Ser	Lys	Ser Ser Tyr Pro	Met Arg Val Asn
			2180			2185	2190
Arg	Cys	Lys	Glu	Ile Leu	Asn	Lys	Ala Ile His Met	Lys Lys Ser Leu
		2195			2200	2205
Glu	Lys	Phe	Val	Gly Asp	Ala	Thr	Arg Leu Thr Asp	Lys Leu Leu Glu
	2210			2215	2220
Leu	Cys	Asn	Lys	Pro Val	Asp	Gly	Ser Ser Ser Thr	Leu Ser Met Ser
2225			2230		2235	2240
Thr	His	Phe	Lys	Met Leu	Lys	Lys	Leu Val Glu Glu	Ala Thr Phe Ser
				2245			2250	2255
Glu	Ile	Leu	Ile	Pro Leu	Gin	Ser	Val Met Ile Pro	Thr Leu Pro Ser
			2260			2265	2270
Ile	Leu	Gly	Thr	His Ala	Asn	His	Ala Ser His Glu	Pro Phe Pro Gly
		2275			2280	2285
His	Trp	Ala	Tyr	Ile Ala	Gly	Phe	Asp Asp Met Val	Glu Ile Leu Ala
	2290			2295	2300
Ser	Leu	Gin	Lys	Pro Lys	Lys	Ile	Ser Leu Lys Gly	Ser Asp Gly Lys
2305				2310		2315	2320
Phe	Tyr	Ile	Met	Met Cys	Lys	Pro	Lys Asp Asp Leu	Arg Lys Asp Cys
				2325			2330	2335
Arg	Leu	Met	Glu	Phe Asn	Ser	Leu	Ile Asn Lys Cys	Leu Arg Lys Asp
			2340			2345	2350
Ala	Glu	Ser	Arg	Arg Arg	Glu	Leu	His Ile Arg Thr	Tyr Ala Val Ile
		2355			2360	2365
Pro	Leu	Asn	Asp	Glu Cys	Gly	Ile	Ile Glu Trp Val	Asn Asn Thr Ala
	2370			2375	2380
Gly	Leu	Arg	Pro	Ile Leu	Thr	Lys	Leu Tyr Lys Glu	Lys Gly Val Tyr
2385			2390		2395	2400
Met	Thr	Gly	Lys	Glu Leu	Arg	Gin	Cys Met Leu Pro	Lys Ser Ala Ala
				2405			2410	2415
Leu	Ser	Glu	Lys	Leu Lys	Val	Phe	Arg Glu Phe Leu	Leu Pro Arg His
			2420			2425	2430
Pro	Pro	Ile	Phe	His Glu	Trp	Phe	Leu Arg Thr Phe	Pro Asp Pro Thr
		2435			2440	2445
Ser	Trp	Tyr	Ser	Ser Arg	Ser	Ala	Tyr Cys Arg Ser	Thr Ala Val Met
	2450			2455	2460
Ser	Met	Val	Gly	Tyr Ile	Leu	Gly	Leu Gly Asp Arg	His Gly Glu Asn
2465			2470		2475	2480
Ile	Leu	Phe	Asp	Ser Leu	Thr	Gly	Glu Cys Val His	Val Asp Phe Asn
				2485			2490	2495

Cys Leu Phe Asn Lys Gly Glu Thr Phe Glu Val Pro Glu Ile Val Pro 2500 2505 2510

165

Phe	Arg	Leu Thr His Asn Met Val Asn Gly Met	Gly	Pro Met 2525	Gly	Thr
2515	2520
Glu	Gly	Leu Phe Arg	Arg Ala Cys Glu Val Thr	Met	Arg Leu	Met	Arg
	2530	2535	2540
Asp	Gin	Arg Glu Pro	Leu Met Ser Val Leu Lys	Thr	Phe Leu	His	Asp
2545		2550 2555			2560
Pro	Leu	Val Glu Trp	Ser Lys Pro Val Lys Gly	His	Ser Lys	Ala	Pro
		2565 2570			2575
Leu	Asn	Glu Thr Gly	Glu Val Val Asn Glu Lys	Ala	Lys Thr	His	Val
		2580	2585		2590
Leu	Asp	Ile Glu Gin	Arg Leu Gin Gly Val Ile	Lys	Thr Arg	Asn	Arg
		2595	2600		2605
Val	Thr	Gly Leu Pro	Leu Ser Ile Glu Gly His	Val	His Tyr	Leu	Ile
	2610	2615	2620
Gin	Glu	Ala Thr Asp	Glu Asn Leu Leu Cys Gin	Met	Tyr Leu	Gly	Trp
2625		2630 2635			2640

Thr Pro Tyr Met (2) INFORMACE O SEQ ID NO:30:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7624 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 333..7562 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 30:

(xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO.-30:

CTTGTGAAGA GAATGTTTTA CACTCTTGTT AGTGAAGTTT ATTCTTTAAA AGTCAATCGT 60

CAAGGATTTA GCAAATGAAT TAGCACTTCG GATATACTTG ΤΤΤΑΤΊΤΑΑΤ ATCTTTTTTG 120

TTTATTTCAA AGAATTCAGT AATTGGATCA TAACGAGACT TCTGCGGATT GCAGCAACTC 180

CCTCCTGTCA TTTGTTACAC AAGAAAATCT GTGAAGTCAT CTGTTCATTA TTATTTCTTT 24 0

TTAAAAGCAA GAGTCCTGCT ATTTTTGGGG TACTCACAAA AGAATTATTA CAACTTTTTG 300

AAGACTTGGT TTACCTCCAT AGAAGAAATG TG ATG GGT CAT GCT GTG GAA TGG 353

Met Gly His Ala Val Glu Trp

5

CCA GTG GTC ATG AGC CGA TTT TTA AGT CAA TTA GAT GAA CAC ATG GGA 401

Pro Val Val Met Ser Arg Phe Leu Ser Gin Leu Asp Glu His Met Gly

15 20

TAT TTA CAA TCA GCT CCT TTG CAG TTG ATG AGT ATG CAA AAT TTA GAA 449

Tyr Leu Gin Ser Ala Pro Leu Gin Leu Met Ser Met Gin Asn Leu Glu

30 35

166

TTT ATT GAA

GTC Val

ACT TTA

TTA ATG GTT

CTT Leu

ACT CGT ATT ATT GCA ATT

497

Phe 40

Ile

Glu

Thr

Leu 45

Leu

Met

Val

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

CTC

TTA

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

545

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

AAA

TCC

CTA

GCA

ATT

AGC

TTT

593

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

641

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

689

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

737

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

Ty i-

Glu

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

ZvAG

ACA

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

785

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

Ala 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

833

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

Leu

Cys

Val

Met

Phe 165

Glu

Asp

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

CTT

AAG

TCT

GAT

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

881

Gly

Val

Leu 170

Met

Arg

Leu

Lys

Ser 175

Asp

Leu

Leu

Lys

Ala 180

Ala

Leu

Cys

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

929

His

Leu 185

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu 190

Lys

Phe

Val

Pro

Ala 195

Gly

Tyr

Glu

Ser

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

TAT

GTG

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

977

Ala 200

Leu

Gin

Val

Arg

Lys 205

Val

Tyr

Val

Arg

Asn 210

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu 215

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

ATT

GAG

GTA

GAT

GCA

GAG

TAC

TTG

TTG

GGC

CCA

1025

Leu

Asp

Val

Leu

Gly 220

Ile

Glu

Val

Asp

Ala 225

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly 230

Pro

CTT

TAT

GCA

GCT

TTG

AAA

ATG

GAA

AGT

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

1073

Leu

Tyr

Ala

Ala 235

Leu

Lys

Met

Glu

Ser 240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu 245

Glu

Ile

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

1121

Gin

Cys

Gin 250

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn 255

Leu

Ser

Ser

Asn

Ser 260

Asp

Gly

Ile

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

1169

Ser

Pro 265

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu 270

Ser

Ser

Ser

Leu

Asn 275

Pro

Ser

Lys

Arg

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

1217

Ala 280

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu 285

Glu

Ile

Lys

His

Val 290

Asp

Met

Asn

Gin

Lys 295

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

1265

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

300 305 310 » · · I

- 167 -

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

1313

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

315

320

325

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

1361

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

330

335

340

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

1409

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

345

350

355

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

1457

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

360

365

370

375

TAC

ACA

AAA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

AGT

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

1505

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

380

385

390

AAA

CTG

GAC

CTG

GAG

GCA

ACC

ATT

GAT

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

1553

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

395

400

405

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

TCA

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

1601

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

410

415

420

GAA

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

1649

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

Pro

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

425

430

435

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

1697

Asp

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

Phe

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

440

445

450

455

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

1745

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

460

465

470

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

1793

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

475

480

485

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

AAC

TGG

GCC

CTG

CAG

AGC

TCC

CAT

GAA

GTA

ATC

1841

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

Gin

Ser

Ser

His

Glu

Val

Ile

490

495

500

CGG

GCT

AGT

TGT

GTT

AGT

GGA

TTT

TTT

ATC

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

1889

Arg

Ala

Ser

Cys

Val

Ser

Gly

Phe

Phe

Ile

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

505

510

515

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

1937

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

Ile

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

520

525

530

535

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

TCT

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

1985

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

540

545

550

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

2033

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

555

560

565

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

2081

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu

Ly6

Ala

570

575

560

168 »· · · · ·

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

2129

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

Gin

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

Cys

585

590

595

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

2177

Lys

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

Lys

Ile

Pro

Ser

Pro

Val

Lys

600

605

610

615

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

2225

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn

Leu

His

His

Leu

Cys

Lys

His

Leu

Asp

Phe

620

625

630

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

2273

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr

Asp

Val

Lys

Ala

Val

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu

Asn

635

640

645

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

2321

Leu

Met

Glu

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp

Val

Arg

Val

Ala

Phe

Ser

Gly

Asn

650

655

660

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

2369

Ile

Lvs

His

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu

Asp

Ser

Glu

Asp

Gly

Phe

Ile

Lys

665

670

675

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

GCA

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

2417

Glu

Leu

Phe

Val

Leu

Arg

Met

Lys

Glu

Ala

Tyr

Thr

His

Ala

Gin

Ile

680

685

690

695

TCA

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

TTG

ATT

CTT

ACA

ACA

GGG

GAT

2465

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu

Lys

Asp

Thr

Leu

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp

700

705

710

ATT

GGA

AGG

GCC

GCA

AAA

GGA

GAT

TTG

GTA

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

2513

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu

Val

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu

His

715

720

725

TTA

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

GCA

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

2561

Leu

Leu

His

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser

Ala

Sex'

Val

Ser

Gly

Ala

Ala

730

735

740

TAC

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

GCT

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

2609

Tyr

Thr

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

Ala

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

745

750

755

AGT

TTT

TTC

AGC

CAG

TAT

AAG

AAA

CCC

ATC

TGT

CAG

TTT

TTG

GTA

GAA

2657

Ser

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys

Lys

Pro

Ile

Cys

Gin

Phe

Leu

Val

Glu

760

765

770

775

TCC

CTT

CAC

TCT

AGT

CAG

ATG

ACA

GCA

CTT

CCG

AAT

ACT

CCA

TGC

CAG

2705

Ser

Leu

His

Ser

Ser

Gin

Met

Thr

Ala

Leu

Pro

Asn

Thr

Pro

Cys

Gin

780

785

790

AAT

GCT

GAC

GTG

CGA

AAA

CAA

GAT

GTG

GCT

CAC

CAG

AGA

GAA

ATG

GCT

2753

Asn

Ala

Asp

Val

Arg

Lys

Gin

Asp

Val

Ala

His

Gin

Arg

Glu

Met

Ala

795

800

805

TTA

AAT

ACG

TTG

TCT

GAA

ATT

GCC

AAC

GTT

TTC

GAC

TTT

CCT

GAT

CTT

2801

Leu

Asn

Thr

Leu

Ser

Glu

Ile

Ala

Asn

Val

Phe

Asp

Phe

Pro

Asp

Leu

810

815

820

AAT

CGT

TTT

CTT

ACT

AGG

ACA

TTA

CAA

GTT

CTA

CTA

CCT

GAT

CTT

GCT

2849

Asn

Arg

Phe

Leu

Thr

Arg

Thr

Leu

Gin

Val

Leu

Leu

Pro

Asp

LeU

Ala

825

830

835

GCC

AAA

GCA

AGC

CCT

GCA

GCT

TCT

GCT

CTC

ATT

CGA

ACT

TTA

GGA

AAA

2897

Ala

Lys

Ala

Ser

Pro

Ala

Ala

Ser

Ala

Leu

Ile

Arg

Thr

Leu

Gly

Lys

840

845

850

855

• · 9···

CAA TTA AAT

GTC Val

AAT Asn 860

CGT Arg

AGA GAG ATT

TTA Leu 865

ATA AAC AAC TTC

AAA Lys 870

TAT Tyr

2945

Gin

Leu Asn

Arg

Glu

Ile

Ile

Asn

Asn

Phe

ATT

TTT

TCT

CAT

TTG

GTC

TGT

TCT

TGT

TCC

AAA

GAT

GAA

TTA

GAA

CGT

2993

Ile

Phe

Ser

His

Leu

Val

Cys

Ser

Cys

Ser

Lys

Asp

Glu

Leu

Glu

Arg

875

880

885

GCC

CTT

CAT

TAT

CTG

AAG

AAT

GAA

ACA

GAA

ATT

GAA

CTG

GGG

AGC

CTG

3041

Ala

Leu

His

Tyr

Leu

Lys

Asn

Glu

Thr

Glu

Ile

Glu

Leu

Gly

Ser

Leu

890

895

900

TTG

AGA

CAA

GAT

TTC

CAA

GGA

TTG

CAT

AAT

GAA

TTA

TTG

CTG

CGT

ATT

3089

Leu

Arg

Gin

Asp

Phe

Gin

Gly

Leu

His

Asn

Glu

Leu

Leu

Leu

Arg

Ile

905

910

915

GGA

GAA

CAC

TAT

CAA

CAG

GTT

TTT

AAT

GGT

TTG

TCA

ATA

CTT

GCC

TCA

3137

Gly

Glu

His

Tyr

Gin

Gin

Val

Phe

Asn

Gly

Leu

Ser

Ile

Leu

Ala

Ser

920

925

930

935

TTT

GCA

TCC

AGT

GAT

GAT

CCA

TAT

CAG

GGC

CCG

AGA

GAT

ATC

ATA

TCA

3185

Phe

Ala

Ser

Ser

Asp

Asp

Pro

Tyr

Gin

Gly

Pro

Arg

Asp

Ile

Ile

Ser

940

945

950

CCT

GAA

CTG

ATG

GCT

GAT

TAT

TTA

CAA

CCC

AAA

TTG

TTG

GGC

ATT

TTG

3233

Pro

Glu

Leu

Met

Ala

Asp

Tyr

Leu

Gin

Pro

Lys

Leu

Leu

Gly

Ile

Leu

955

960

965

GCT

TTT

TTT

AAC

ATG

CAG

TTA

CTG

AGC

TCT

AGT

GTT

GGC

ATT

GAA

GAT

3281

Ala

Phe

Phe

Asn

Met

Gin

Leu

Leu

Ser

Ser

Ser

Val

Gly

Ile

Glu

Asp

970

975

980

AAG

AAA

ATG

GCC

TTG

AAC

AGT

TTG

ATG

TCT

TTG

ATG

AAG

TTA

ATG

GGA

3329

Lys

Lys

Met

Ala

Leu

Asn

Ser

Leu

Met

Ser

Leu

Met

Lys

Leu

Met

Gly

985

990

995

CCC

AAA

CAT

GTC

AGT

TCT

GTG

AGG

GTG

AAG

ATG

ATG

ACC

ACA

CTG

AGA

3377

Pro

Lys

His

Val

Ser

Ser

Val

Arg

Val

Lys

Met

Met

Thr

Thr

Leu

Arg

1000

1005

1010

1015

ACT

GGC

CTT

CGA

TTC

AAG

GAT

GAT

TTT

CCT

GAA

TTG

TGT

TGC

AGA

GCT

3425

Thr

Gly

Leu

Arg

Phe

Lys

Asp

Asp

Phe

Pro

Glu

Leu

Cys

Cys

Arg

Ala

1020

102!

1030

TGG

GAC

TGC

TTT

GTT

CGC

TGC

CTG

GAT

CAT

GCT

TGT

CTG

GGC

TCC

CTT

3473

Trp

Asp

Cys

Phe

Val

Arg

Cys

Leu

Asp

His

Ala

Cys

Leu

Gly

Ser

Leu

1035

1040

1045

CTC

AGT

CAT

GTA

ATA

GTA

GCT

TTG

TTA

CCT

CTT

ATA

CAC

ATC

CAG

CCT

3521

Leu

Ser

His

Val

Ile

Val

Ala

Leu

Leu

Pro

Leu

Ile

His

Ile

Gin

Pro

1050

1055

1060

AAA

GAA

ACT

GCA

GCT

ATC

TTC

CAC

TAC

CTC

ATA

ATT

GAA

AAC

AGG

GAT

3569

Lys

Glu

Thr

Ala

Ala

Ile

Phe

His

Tyr

Leu

ile

Ile

Glu

Asn

Arg

Asp

106!

1070

1075

GCT

GTG

CAA

GAT

TTT

CTT

CAT

GAA

ATA

TAT

TTT

TTA

CCT

GAT

CAT

CCA

3617

Ala

Val

Gin

Asp

Phe

Leu

His

Glu

Ile

Tyr

Phe

Leu

Pro

Asp

His

Pro

1080

1085

1090

1095

GAA

TTA

AAA

AAG

ATA

AAA

GCC

GTT

CTC

CAG

GAA

TAC

AGA

AAG

GAG

ACC

3665

Glu

Leu

Lys

Lys

Ile

Lys

Ala

Val

Leu

Gin

Glu

Tyr

Arg

Lys

Glu

Thr

1100

1105

1Ϊ10

TCT

GAG

AGC

ACT

GAT

CTT

CAG

ACA

ACT

CTT

CAG

CTC

TCT

ATG

AAG

GCC

3713

Ser

Glu

Ser

Thr

Asp

Leu

Gin

Thr

Thr

Leu

Gin

Leu

Ser

Met

Lys

Ala

1115

1120

1125

·· ··»· • ·· ·· » · • · · • · · · • · · ··· ··

- 170

ATT Ile

CAA Gin

CAT His 113C

GAA Glu )

AAT Asn

GTC Val

GAT Asp

GTT CGT Val Arg 1135

ATT Ile

CAT His

GCT Ala

CTT ACA Leu Thr 1140

AGC Ser

TTG Leu

3761

AAG

GAA

ACC

TTG

TAT

AAA

AAT

CAG GAA

AAA

CTG

ATA

AAG TAT

GCA

ACA

3809

Lys

Glu 1145

Thr

Leu

Tyr

Lys

Asn Gin Glu 1150

Lys

Leu

Ile Lys Tyr 1155

Ala

Thr

GAC

AGT

GAA

ACA

GTA

GAA

CCT

ATT ATC

TCA

CAG

TTG

GTG ACA

GTG

CTT

3857

Asp Ser 1160

Glu

Thr

Val

Glu Pro 1165

Ile Ile

Ser

Gin Leu 1170

Val Thr

Val

Leu 1175

TTG

AAA

GGT

TGC

CAA

GAT

GCA

AAC TCT

CAA

GCT

CGG

TTG CTC

TGT

GGG

3905

Leu

Lys

Gly

Cys

Gin Asp 11B0

Ala

Asn Ser

Gin Ala 1185

Arg

Leu Leu

Cys Gly 1190

GAA

TGT

TTA

GGG

GAA

TTG

GGG

GCG ATA

GAT

CCA

GGT

CGA TTA

GAT

TTC

3953

Glu

Cys

Leu

Gly Glu 1195

Leu

Gly

Ala Ile Asp 1200

Pro

Gly

Arg Leu Asp 1205

Phe

TCA

ACA

ACT

GAA

ACT

CAA

GGA

AAA GAT

TTT

ACA

TTT

GTG ACT

GGA

GTA

4001

Ser

Thr

Thr Glu 1210

Thr

Gin

Gly

Lvs Asp 1215

Phe

Thr

Phe

Val Thr 1220

Gly

Val

GAA

GAT

TCA

AGC

TTT

GCC

TAT

GGA TTA

TTG

ATG

GAG

CTA ACA

AGA

GCT

4049

Glu

Asp 1225

Ser

Ser

Phe

Ala

Tyr Gly Leu 1230

Leu

Met

Glu Leu Thr 1235

Arg

Ala

TAC

CTT

GCG

TAT

GCT

GAT

AAT

AGC CGA

GCT

CAA

GAT

TCA GCT

GCC

TAT

4097

Tyr Leu 1240

Ala

Tyr

Ala

Asp Asn 1245

Ser Arg

Ala

Gin Asp 1250

Ser Ala

Ala

Tyr 1255

GCC

ATT

CAG

GAG

TTG

CTT

TCT

ATT TAT

GAC

TGT

AGA

GAG ATG

GAG

ACC

4145

Ala

Ile

Gin

Glu

Leu Leu 1260

Ser

Ile Tyr

Asp Cys 1265

Arg

Glu Met

Glu Thr 1270

AAC

GGC

CCA

GGT

CAC

CAA

TTG

TGG AGG

AGA

TTT

CCT

GAG CAT

GTT

CGG

4193

Asn

Gly

Pro

Gly His 1275

Gin

Leu

Trp Arg Arg 1280

Phe

Pro

Glu His Val 1285

Arg

GAA

ATA

CTA

GAA

CCT

CAT

CTA

AAT ACC

AGA

TAC

AAG

AGT TCT

CAG

AAG

4241

Glu

Ile

Leu Glu 1290

Pro

His

Leu

Asn Thr 1295

Arg

Tyr

Lys

Ser Ser 1300

Gin

Lys

TCA

ACC

GAT

TGG

TCT

GGA

GTA

AAG AAG

CCA

ATT

TAC

TTA AGT

AAA

TTG

4289

Ser

Thr Asp 1305

Trp

Ser

Gly

Val Lys Lys 1310

Pro

Ile

Tyr Leu Ser 1315

Lys

Leu

GGT

AGT

AAC

TTT

GCA

GAA

TGG

TCA GCA

TCT

TGG

GCA

GGT TAT

CTT

ATT

4337

Gly Ser 1320

Asn

Phe

Ala

Glu Trp 1325

Ser Ala

Ser

Trp Ala 1330

Gly Tyr

Leu

Ile 1335

ACA

AAG

GTT

CGA

CAT

GAT

CTT

GCC AGT

AAA

ATT

TTC

ACC TGC

TGT

AGC

4385

Thr

Lys

Val

Arg

His Asp 1340

Leu

Ala Ser

Lys Ile 1345

Phe

Thr Cys

Cys Ser 1350

ATT

ATG

ATG

AAG

CAT

GAT

TTC

AAA GTG

ACC

ATC

TAT

CTT CTT

CCA

CAT

4433

Ile

Met

Met

Lys His 1355

Asp

Phe

Lys Val Thr 1360

Ile

Tyr

Leu Leu Pro 1365

His

ATT

CTG

GTG

TAT

GTC

TTA

CTG

GGT TGT

AAT

CAA

GAA

GAT CAG

CAG

GAG

4481

Ile

Leu

Val Tyr 1370

Val

Leu

Leu

Gly Cys 1375

Asn

Gin

Glu

Asp Gin 1380

Gin

Glu

GTT

TAT

GCA

GAA

ATT

ATG

GCA

GTT CTA

AAG

CAT

GAC

GAT CAG

CAT

ACC

4529

Val

Tyr

Ala

Glu

Ile

Met

Ala

Val Leu

Lys

His

Asp

Asp Gin

His

Thr

1385 1390 1395

171

ATA AAT Ile Asn 1400

ACC Thr

CAA Gin

GAC Asp

ATT GCA Ile Ala 1405

TCT Ser

GAT Asp

CTG Leu

TGT CAA Cys Gin 1410

CTC Leu

AGT Ser

ACA Thr

CAG Gin 1415

4577

ACT GTG

TTC

TCC

ATG

CTT GAC

CAT

CTC

ACA

CAG TGG

GCA

AGG

CAC

AAA

4625

Thr Val

Phe

Ser

Met 142C

Leu Asp 1

His

Leu

Thr 1425

Gin Trp

Ala

Arg

His Lys 1430

TTT CAG

GCA

CTG

AAA

GCT GAG

AAA

TGT

CCA

CAC AGC

AAA

TCA

AAC

AGA

4673

Phe Gin

Ala

Leu Lys 1435

Ala Glu

Lys

Cys 144C

Pro 1

His Ser

Lys

Ser Asn 1445

Arg

AAT AAG

GTA

GAC

TCA

ATG GTA

TCT

ACT

GTG

GAT TAT

GAA

GAC

TAT

CAG

4721

Asn Lys

Val Asp 1450

Ser

Met Val

Ser Thr 1455

Val

Asp Tyr

Glu Asp 1460

Tyr

Gin

AGT GTA

ACC

CGT

TTT

CTA GAC

CTC

ATA

CCC

CAG GAT

ACT

CTG

GCA

GTA

4769

Ser Val Thr 1465

Arg

Phe

Leu Asp Leu 1470

Ile

Pro

Gin Asp Thr 1475

Leu

Ala

Val

GCT TCC

TTT

CGC

TCC

AAA GCA

TAC

ACA

CGA

GCT GTA

ATG

CAC

TTT

GAA

4817

Ala Ser 1480

Phe

Arg

Ser

Lys Ala 1485

Tyr

Thr

Ala Val 1490

Met

His

Phe

Glu 1495

TCA TTT

ATT

ACA

GAA

AAG AAG

CAA

AAT

ATT

CAG GAA

CAT

CTT

GGA

TTT

4865

Ser Phe

Ile

Thr

Glu Lys Lys 1500

Gin

Asn

Ile Gin Glu 1505

His

Leu

Gly Phe 1510

TTA CAG

AAA

TTG

TAT

GCT GCT

ATG

CAT

GAA

CCT GAT

GGA

GTG

GCC

GGA

4913

Leu Gin

Lys

Leu Tyr 1515

Ala Ala

Met

His Glu 1520

Pro Asp

Gly

Val Ala 1525

Gly

GTC AGT

GCA

ATT

AGA

AAG GCA

GAA

CCA

TCT

CTA AAA

GAA

CAG

ATC

CTT

4961

Val Ser

Ala Ile 1530

Arg

Lys Ala

Glu Pro 1535

Ser

Leu Lys

Glu Gin 1540

Ile

Leu

GAA CAT

GAA

AGC

CTT

GGC TTG

CTG

AGG

GAT

GCC ACT

GCT

TGT

TAT

GAC

5009

Glu His Glu 1545

Ser

Leu

Gly Leu Leu 1550

Arg

Asp

Ala Thr Ala 1555

Cys

Tyr

Asp

AC-G GCT

ATT

CAG

CTA

GAA CCA

GAC

CAG

ATC

ATT CAT

TAC

CAT

GGT

GTA

5057

Arg Ala 1560

Ile

Gin

Leu

Glu Pro 1565

Asp

Gin

Ile

Ile His 1570

Tyr

His

Gly

Val 1575

GTA AAG

TCC

ATG

TTA

GGT CTT

GGT

CAG

CTG

TCT ACT

GTT

ATC

ACT

CAG

5105

Val Lys

Ser

Met

Leu Gly Leu 1580

Gly

Gin

Leu Ser Thr 1585

Val

Ile

Thr Gin 1590

GTG AAT

GGA

GTG

CAT

GCT AAC

AGG

TCC

GAG

TGG ACA

GAT

GAA

TTA

AAC

5153

Val Asn

Gly

Val His 1595

Ala Asn

Arg

Ser Glu 1600

Trp Thr

Asp

Glu Leu 1605

Asn

ACG TAC

AGA

GTG

GAA

GCA GCT

TGG

AAA

TTG

TCA CAG

TGG

GAT

TTG

GTG

5201

Thr Tyr

Arg Val 1610

Glu

Ala Ala

Trp Lys 1615

Leu

Ser Gin

Trp Asp 1620

Leu

Val

GAA AAC

TAT

TTG

GCA

GCA GAT

GGA

AAA

TCT

ACA ACA

TGG

AGT

GTC

AGA

5249

Glu Asn Tyr 1625

Leu

Ala

Ala Asp Gly 1630

Lys

Ser

Thr Thr Trp 1635

Ser

Val

Arg .

CTG GGA

CAG

CTA

TTA

TTA TCA

GCC

AAA

AAA

AGA GAT

ATC

ACA

GCT

TTT

5297

Leu Gly 1640

Gin

Leu

Leu

Leu Ser 1645

Ala

Lys

Lys

Arg Asp 1650

Ile

Thr

Ala

Phe 1655

TAT GAC

TCA

CTG

AAA

CTA GTG

AGA

GCA

GAA

CAA ATT

GTA

CCT

CTT

TCA

5345

Tyr Asp

Ser

Leu

Lys

Leu Val

Arg

Ala

Glu

Gin Ile

Val

Pro

Leu

Ser

1660 1665 1670 • · · ·

GCT Ala	GCA AGC	TTT GAA AGA GGC TCC TAC CAA CGA GGA TAT GAA TAT Phe Glu Arg Gly Ser Tyr Gin Arg Gly Tyr Glu Tyr	ATT Ile	5393
Ala	Ser
1675	1680	1685
GTG	AGA	TTG	CAC ATG TTA TGT	GAG TTG GAG CAT AGC	ATC AAA CCA	CTT	5441
Val	Arg	Leu His Met Leu Cys 1690	Glu Leu Glu His Ser 1695	Ile Lys Pro 1700	Leu
TTC	CAG	CAT	TCT CCA GGT GAC	AGT TCT CAA GAA GAT	TCT CTA AAC	TGG	5489
Phe	Gin 1709	His	Ser Pro Gly Asp Ser Ser Gin Glu Asp Ser Leu Asn 1710 1715	Trp
GTA	GCT	CGA	CTA GAA ATG ACC	CAG AAT TCC TAC AGA	GCC AAG GAG	CCT	5537
Val Ala 1720	Arg	Leu Glu Met Thr 1725	Gin Asn Ser Tyr Arg 1730	Ala Lys Glu	Pro 1735
ATC	CTG	GCT	CTC CGG AGG GCT	TTA CTA AGC CTC AAC	AAA AGA CCA	GAT	5585
Ile	Leu	Ala	Leu Arg Arg Ala 1740	Leu Leu Ser Leu Asn 1745	Lys Arg Pro Asp 1750
TAC	AAT	GAA	ATG GTT GGA GAA	TGC TGG CTG CAG AGT	GCC AGG GTA	GCT	5633
Tyr	Asn	Glu	Met Val Gly Glu 1755	Cys Trp Leu Gin Ser 1760	Ala Arg Val 1765	Ala
AGA	AAG	GCT	GGT CAC CAC CAG	ACA GCC TAC AAT GCT	CTC CTT AAT	GCA	5681
Arg	Lys	Ala Gly His His Gin 1770	Thr Ala Tyr Asn Ala 1775	Leu Leu Asn 1780	Ala
GGG	GAA	TCA	CGA CTC GCT GAA	CTG TAC GTG GAA AGG	GCA AAG TGG	CTC	5729
Gly	Glu Ser 1785	Arg Leu Ala Glu Leu Tyr Val Glu Arg Ala Lys Trp 1790 1795	Leu
TGG	TCC	AAG	GGT GAT GTT CAC	CAG GCA CTA ATT GTT	CTT CAA AAA	GGT	57-77
Trp Ser 1800	Lys	Gly Asp Val His 1805	Gin Ala Leu Ile Val 1810	Leu Gin Lys	Gly 1815
GTT	GAA	TTA	TGT TTT CCT GAA	AAT GAA ACC CCA CCT	GAG GGT AAG	AAC	5825
Val	Glu	Leu	Cys Phe Pro Glu 1820	Asn Glu Thr Pro Pro 1825	Glu Gly Lys Asn 1830
ATG	TTA	ATC	CAT GGT CGA GCT	ATG CTA CTA GTG GGC	CGA TTT ATG	GAA	5873
Met	Leu	Ile	His Gly Arg Ala 1835	Met Leu Leu Val Gly 1840	Arg Phe Met 1845	Glu
GAA	ACA	GCT	AAC TTT GAA AGC	AAT GCA. ATT ATG AAA	AAA TAT AAG	GAT	5921
Glu	Thr	Ala Asn Phe Glu Ser 1850	Asn Ala Ile Met Lys 1855	Lys Tyr Lys 1860	Asp
GTG	ACC	GCG	TGC CTG CCA GAA	TGG GAG GAT GGG CAT	TTT TAC CTT	GCC	5969
Val	Thr Ala 1865	Cys Leu Pro Glu Trp Glu Asp Gly His Phe Tyr Leu 1870 1875	Ala
AAG	TAC	TAT	GAC AAA TTG ATG	CCC ATG GTC ACA GAC	AAC AAA ATG	GAA	6017
Lys Tyr 1880	Tyr	Asp Lys Leu Met 1885	Pro Met Val Thr Asp 1890	Asn Lys Met	Glu 1895
AAG	CAA	GGT	GAT CTC ATC CGG	TAT ATA GTT CTT CAT	TTT GGC AGA	TCT	6065
Lys	Gin	Gly	Asp Leu Ile Arg 1900	Tyr Ile Val Leu His 1905	Phe Gly Arg Ser 1910
CTA	CAA	TAT	GGA AAT CAG TTC	ATA TAT CAG TCA ATG	CCA CGA ATG	TTA	6113
Leu	Gin	Tyr	Gly Asn Gin Phe 1915	Ile Tyr Gin Ser Met 1920	Pro Arg Mat 1925	Leu
ACT	CTA	TGG	CTT GAT TAT GGT	ACA AAG GCA TAT GAA	TGG GAA AAA	GCT	6161
Thr	Leu	Trp	Leu Asp Tyr Gly	Thr Lys Ala Tyr Glu	Trp Glu Lys	Ala

1930 1935 1940 «· ·

173

GGC Gly	CGC TCC GAT CGT GTA CAA ATG AGG AAT GAT TTG GGT	AAA Lys	ATA Ile	AAC Asn
Arg 1945	Ser Asp Arg	Val	Gin Met 1950	Arg	Asn Asp	Leu Gly 1955
AAG	GTT	ATC ACA GAG	CAT	ACA AAC	TAT	TTA GCT	CCA TAT	CAA	TTT	TTG
Lys 196C	Val 1	Ile Thr Glu	His Thr Asn 1965	Tyr	Leu Ala Pro Tyr 1970	Gin	Phe	Leu 1975
ACT	GCT	TTT TCA CAA	TTG	ATC TCT	CGA	ATT TGT	CAT TCT	CAC	GAT	GAA
Thr	Ala	Phe Ser Gin Leu 1980	Ile Ser	Arg	Ile Cys 1985	His Ser	His	Asp Glu 1990
GTT	TTT	GTT GTC TTG	ATG	GAA ATA	ATA	GCC AAA	GTA TTT	CTA	GCC	TAT
Val	Phe	Val Val Leu 1995	Met	Glu Ile	Ile Ala Lys 2000	Val Phe	Leu Ala 2005	Tyr
CCT	CAA	CAA GCA ATG	TGG	ATG ATG	ACA	GCT GTG	TCA AAG	TCA	TCT	TAT
Pro	Gin	Gin Ala Met 2010	Trp	Met Met Thr 2015	Ala Val	Ser Lys Ser 2020	Ser	Tyr
CCC	ATG	CGT GTG AAC	AGA	TGC AAG	GAA	ATC CTC	AAT AAA	GCT	ATT	CAT
Pro	Met 2025	Arg Val Asn	Arg	Cys Lys 2030	Glu	Ile Leu	Asn Lys 2035	Ala	Ile	His
ATG	AAA	AAA TCC TTA	GAG	AAG TTT	GTT	GGA GAT	GCA ACT	CGC	CTA	ACA
Met Lys 2040	Lys Ser Leu	Glu 2045	Lys Phe	Val	Gly Asp Ala Thr 2050	Arg	Leu	Thr 2055
GAT	AAG	CTT CTA GAA	TTG	TGC AAT	AAA	CCG GTG	GAA ATT	CTT	GCT	TCT
Asp	Lys	Leu Leu Glu Leu 2060	Cys Asn	Lys	Pro Val 2065	Glu Ile	Leu	Ala Ser 2070
CTT	CAG	AAA CCA AAG	AAG	ATT TCT	TTA	AAA GGC	TCA GAT	GGA	AAG	TTC
Leu	Gin	Lys Pro Lys 2075	Lys	Ile Ser	Leu Lys Gly 2080	Ser Asp	Gly Lys 2085	Phe
TAC	ATC	ATG ATG TGT	AAG	CCA AAA	GAT	GAC CTG	AGA AAG	GAT	TGT	AGA
Tyr	Ile	Met Met Cys 2090	Lys	Pro Lys Asp 2095	Asp Leu	Arg Lys Asp 2100	Cys	Arg
CTA	ATG	GAA TTC AAT	TCC	TTG ATT	AAT	AAG TGC	TTA AGA	AAA	GAT	GCA
Leu	Met Glu Phe Asn 2105	Ser	Leu Ile 2110	Asn	Lys Cys	Leu Arg 2115	Lys	Asp	Ala
GAG	TCT	CGT AGA AGA	GAA	CTT CAT	ATT	CGA ACA	TAT GCA	GTT	ATT	CCA
Glu Ser 2120	Arg Arg Arg	Glu Leu His 2125	Ile	Arg Thr Tyr Ala 2130	Val	Ile	Pro 2135
CTA	AAT	GAT GAA TGT	GGG	ATT ATT	GAA	TGG GTG	AAC AAC	ACT	GCT	GGT
Leu	Asn	Asp Glu Cys Gly 2140	Ile Ile	Glu	Trp Val 2145	Asn Asn	Thr	Ala Gly 2150
TTG	AGA	CCT ATT CTG	ACC	AAA CTA	TAT	AAA GAA	AAG GGA	GTG	TAT	ATG
Leu	Arg	Pro Ile Leu 2155	Thr	Lys Leu	Tyr Lys Glu 2160	Lys Gly	Val Tyr 2165	Met
ACA	GGA	AAA GAA CTT	CGC	CAG TGT	ATG	CTA CCA	AAG TCA	GCA	GCT	TTA
Thr	Gly	Lys Glu Leu 2170	Arg	Gin Cys Met 2175	Leu Pro	Lys Ser Ala 2180	Ala	Leu
TCT	GAA	AAA CTC AAA	GTA	TTC CGA	GAA	TTT CTC	CTG CCC	AGG	CAT	CCT
Ser	Glu Lys Leu Lys 2185	Val	Phe Arg 2190	Glu	Phe Leu	Leu Pro 2195	Arg	His.	Pro
CCT	ATT	TTT CAT GAG	TGG	TTT CTG	AGA	ACA TTC	CCT GAT	CCT	ACA	TCA
Pro Ile 2200	Phe His Glu	Trp Phe Leu 2205	Arg	Thr Phe Pro Asp 2210	Pro	Thr	Ser 2215

< · · ····· »* ·

6209

6257

6305

6353

6401

6449

6497

6545

6593

6641

6689

6737

6785

6833

6881

6929

6977

TGG Trp

TAC Tyr

AGT Ser

AGT Ser

AGA TCA Arg Ser 2220

GCT Ala

TAC Tyr

TGC Cys

CGT TCC Arg Ser 2225

ACT Thr

GCA Ala

GTA Val

ATG TCA Met Ser 2230

7025

ATG

GTT

GGT

TAT

ATT CTG

GGG

CTT

GGA

GAC CGT

CAT

GGT

GAA

AAT ATT

7073

Met

Val

Gly

Tyr Ile Leu 2235

Gly

Leu

Gly Asp Arg 2240

His

Gly

Glu Asn Ile 2245

CTC

TTT

GAT

TCT

TTG ACT

GGT

GAA

TGC

GTA CAT

GTA

GAT

TTC

AAT TGT

7121

Leu

Phe

Asp Ser 2250

Leu Thr

Gly

Glu 225S

Cys

Val His

Val

Asp Phe 2260

Asn Cys

CTT

TTC

AAT

AAG

GGA GAA

ACC

TTT

GAA

GTT CCA

GAA

ATT

GTG

CCA TTT

7169

Leu

Phe Asn 2265

Lys

Gly Glu

Thr Phe 2270

Glu

Val Pro

Glu Ile 2275

Val

Pro Phe

CGC

CTG

ACT

CAT

AAT ATG

GTT

AAT

GGA

ATG GGT

CCT

ATG

GGA

ACA GAG

7217

Arg Leu 2280

Thr

His

Asn Met Val 2285

Asn

Gly

Met Gly Pro 2290

Met

Gly

Thr Glu 2295

GGT

CTT

TTT

CGA

AGA GCA

TGT

GAA

GTT

ACA ATG

AGG

CTG

ATG

CGT GAT

7265

Gly

Leu

Phe

Arg

Arg Ala 2300

Cys

Glu

Val

Thr Met 2305

Arg

Leu

Met

Arg Asp 2310

CAG

CGA

GAG

CCT

TTA ATG

AGT

GTC

TTA

AAG ACT

TTT

CTA

CAT

GAT CCT

7313

Gin

Arg

Glu

Pro Leu Met 2315

Ser

Val

Leu Lys Thr 2320

Phe

Leu

His Asp Pro 2325

CTT

GTG

GAA

TGG

AGT AAA

CCA

GTG

AAA

GGG CAT

TCC

AAA

GCG

CCA CTG

7361

Leu

Val

Glu Trp 2330

Ser Lys

Pro

Val Lys 2335

Gly His

Ser

Lys Ala 2340

Pro Leu

AAT

GAA

ACT

GGA

GAA GTT

GTC

AAT

GAA

AAG GCC

AAG

ACC

CAT

GTT CTT

7409

Asn

Glu Thr 2345

Gly

Glu Val

Val Asn 2350

Glu

Lys Ala

Lys Thr 2355

His

Val Leu

GAC

ATT

GAG

CAG

CGA CTA

CAA

GGT

GTA

ATC AAG

ACT

CGA

AAT

AGA GTG

7457

Asp Ile 2360

Glu

Gin

Arg Leu Gin 2365

Gly

Val

Ile Lys Thr 2370

Arg

Asn

Arg Val 2375

ACA

GGA

CTG

CCG

TTA TCT

ATT

GAA

GGA

CAT GTG

CAT

TAC

CTT

ATA CAA

7505

Tnr

Gly

Leu

Pro

Leu Ser 2380

Ile

Glu

Gly

His Val 2385

His

Tyr

Leu

Ile Gin 2390

GAA

GCT

ACT

GAT

GAA AAC

TTA

CTA

TGC

CAG ATG

TAT

CTT

GGT

TGG ACT

7553

Glu CCA Pro

Ala TAT Tyr

Thr Asp Glu Asn Leu Leu Cys Gin Met Tyr Leu Gly Trp Thr 2395 2400 2405 ATG TGAAATGAAA TTATGTAAAA GAATATGTTA ATAATCTAAA Met 2410

7602

AGTAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 7 624 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:31:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2410 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 31:

• · · · · • · · · « · · · · · • · · ····· ·· ·

175

Met

Gly

His

Ala

Val

Glu

Trp

Pro

Val

Val

Met

Ser

Arg

Phe

Leu

Ser

1

5

10

15

Gin

Leu

Asp

Glu

His

Met

Gly

Tyr

Leu

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu

Gin

Leu

20

25

30

Met

Ser

Met

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe

Ile

Glu

Val

Thr

Leu

Leu

Met

Val

35

40

45

Leu

Thr

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile

Val

Phe

Phe

Arg

Arg

Gin

Glu

Leu

Leu

50

55

60

Leu

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile

65

70

75

80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly

Gly

85

90

95

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu

Glu

Leu

100

105

110

Leu

Lys

His

Leu

Val

Glu

Met

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys

Leu

Tyr

Glu

115

120

125

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro

Phe

Glu

Ala

Glu

130

135

140

Ala

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn

Met

Leu

Leu

Glu

Lys

145

150

155

160

Leu

cys

Val

Met

Phe

Glu

Asp

Gly

Val

Leu

Met

Arg

Leu

Lys

Ser

Asp

165

170

175

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

Val

Pro

Ala

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

Ala

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala

Leu

Lys

Met

Glu

Ser

225

230

235

240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

245

250

255

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

Lys

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

305

310

315

320

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335'

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

« ·

- 176 • · · · · · ·

Phe

Lys

Asp 355

Cys

Gin

His

Lys

Ser 360

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser 365

Val

Val

Ile

Thr

Trp 370

Met

Ser

Leu

Asp

Phe 375

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu 380

Lys

Ser

Cys

Arg

Ser 385

Leu

Leu

Glu

Ser

Val 390

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu 395

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp 400

Lys

Val

Val

Lys

Ile 405

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile 410

Tyr

Met

Gin

Val

Asn 415

Ser

Ser

Phe

Glu

Asp 420

His

Ile

Leu

Glu

Asp 425

Leu

Cys

Gly

Met

Leu 430

Ser

Leu

Pro

Trp

Ile 435

Tyr

Ser

His

Ser

Asp 440

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys 445

Leu

Thr

Thr

Phe

Ala 450

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr 455

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile 460

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser 465

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser 470

Arg

Cys

Val

Phe

Leu 475

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro 480

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu 485

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala 490

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala 495

Leu

Gin

Ser

Ser

His 500

Glu

Val

Ile

Arg

Ala 505

Ser

Cys

Val

Ser

Gly 510

Phe

Phe

Ile

Leu

Leu 515

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser 520

Cys

Asn

Arg

Val

Pro 525

Lys

Ile

Leu

Ile

Asp 530

Lys

Val

Lys

Asp

Asp 535

Ser

Asp

Ile

Val

Lys 540

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser 545

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu 550

Val

Cys

Thr

Leu

His 555

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu 560

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr 565

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu 570

His

Gly

His

Val

Asp 575

Leu

Phe

Cys

Arg

Asn 580

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser 585

Gin

His

Glu

Cys

Ser 590

Ser

Ser

Gin

Leu

Lys 595

Ala

Ser

Val

Cys

Lys 600

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu 605

Leu

Lys

Lys

Lys

Ile 610

Pro

Ser

Pro

Val

Lys 615

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp 620

Asn

Leu

His

His

Leu 625

Cys

Lys

His

Leu

Asp 630

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu 635

Thr

Asp

Val

Lys

Ala 640

Val

Leu

Gly

Thr

Leu 645

Leu

Asn

Leu

Met

Glu 650

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp 655

Val

Arg

Val

Ala

Phe 660

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys 665

His

Ile

Leu

Glu

Ser 670

Leu

Asp

Ser

Glu

Asp 675

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu 680

Leu

Phe

Val

Leu

Arg 685

Met

Lys

Glu

Ala

Tyr 690

Thr

His

Ala

Gin

Ile 695

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu 700

Leu

Lys

Asp

Thr

• · · ·

- 177 -

Leu 705	Ile	Leu	Thr Thr Gly Asp 710	Ile	Gly	Arg Ala Ala 715	Lys	Gly	Asp	Leu 720
Val	Pro	Phe	Ala Leu Leu His 725	Leu	Leu	His Cys Leu 730	Leu	Ser	Lys 735	Ser
Ala	Ser	Val	Ser Gly Ala Ala 740	Tyr	Thr 745	Glu Ile Arg	Ala	Leu 750	Val	Ala
Ala	Lys	Ser 755	Val Lys Leu Gin	Ser 760	Phe	Phe Ser Gin	Tyr 765	Lys	Lys	Pro
Ile	Cys 770	Gin	Phe Leu Val Glu 775	Ser	Leu	His Ser Ser 780	Gin	Met	Thr	Ala
Leu 785	Pro	Asn	Thr Pro Cys Gin 790	Asn	Ala	Asp Val Arg 795	Lys	Gin	Asp	Val 800
Al a	His	Gin	Arg Glu Met Ala 805	Leu	Asn	Thr Leu Ser 810	Glu	Ile	Ala 815	Asn
Val	Phe	Asp	Phe Pro Asp Leu 820	Asn	Arg 825	Phe Leu Thr	Arg	Thr 830	Leu	Gin
Val	Leu	Leu 835	Pro Asp Leu Ala	Ala 840	Lys	Ala Ser Pro	Ala 845	Ala	Ser	Ala
Leu	Ile 850	Arg	Thr Leu Gly Lys 855	Gin	Leu	Asn Val Asn 860	Arg	Arg	Glu	Ile
Leu 865	Ile	Asn	Asn Phe Lys Tyr 870	Ile	Phe	Ser His Leu 875	Val	Cys	Ser	Cys 880
Ser	Lys	Asp	Glu Leu Glu Arg 885	Ala	Leu	His Tyr Leu 890	Lys	Asn	Glu 895	Thr
Glu	Ile	Glu	Leu Gly Ser Leu 900	Leu	Arg 905	Gin Asp Phe	Gin	Gly 910	Leu	His
Asn	Glu	Leu 915	Leu Leu Arg Ile	Gly 920	Glu	His Tyr Gin	Gin 925	Val	Phe	Asn
Gly	Leu 930	Ser	Ile Leu Ala Ser 935	Phe	Ala	Ser Ser Asp 940	Asp	Pro	Tyr	Gin
Gly 945	Pro	Arg	Asp Ile Ile Ser 950	Pro	Glu	Leu Met Ala 955	Asp	Tyr	Leu	Gin 960
Pro	Lys	Leu	Leu Gly Ile Leu 965	Ala	Phe	Phe Asn Met 970	Gin	Leu	Leu 975	Ser
Ser	Ser	Val	Gly Ile Glu Asp 980	Lys	Lys 985	Met Ala Leu	Asn	Ser 990	Leu	Met
Ser	Leu	Met 995	Lys Leu Met Gly	Pro Lys 1000	His Val Ser	Ser Val 1005	Arg	Val
Lys	Met Met 1010	Thr Thr Leu Arg Thr 1015	Gly	Leu Arg Phe Lys 1020	Asp	Asp	Phe
Pro 1025	Glu	Leu	Cys Cys Arg Ala 1030	Trp	Asp	Cys Phe Val 1035	Arg	Cys	Léu	Asp 1040
His	Ala	Cys	Leu Gly Ser Leu 1045	Leu	Ser	His Val Ile 1050	Val	Ala	Leu Leu 1055

• · · ·

- 178 -

Ρΐ'ο	Leu	Ile	His Ile 1060	Gin	Pro	Lys	Glu Thr Ala Ala 1065	Ile	Phe His 1070	Tyr
Leu	Ile	Ile	Glu Asn	Arg	Asp	Ala	Val Gin Asp Phe	Leu	His Glu	Ile
		1075			1080	1085
Tyr	Phe	Leu	Pro Asp	His	Pro	Glu	Leu Lys Lys Ile	Lys	Ala Val	Leu
	1090			1095	1100
Gin	Glu	Tyr	Arg Lys	Glu	Thr	Ser	Glu Ser Thr Asp	Leu	Gin Thr	Thr
1105			1110		1115			1120
Leu	Gin	Leu	Ser Met	Lys	Ala	Ile	Gin His Glu Asn	Val	Asp Val	Arg
			1125			1130		1135
Ile	His	Ala	Leu Thr	Ser	Leu	Lys	Glu Thr Leu Tyr	Lys	Asn Gin	Glu
			1140				1145		1150
Lys	Leu	Ile	Lys Tyr	Ala	Thr	Asp	Ser Glu Thr Val	Glu	Pro Ile	Ile
		1155			1160	1165
Ser	Gin	Leu	Val Thr	Val	Leu	Leu	Lys Gly Cys Gin	Asp	Ala Asn	Ser
	1170			1175	1180
Gin	Ala	Arg	Leu Leu	Cys	Gly	Glu	Cys Leu Gly Glu	Leu	Gly Ala	Ile
1185			1190		1195			1200
Asp	Pro	Gly	Arg Leu	Asp	Phe	Ser	Thr Thr Glu Thr	Gin	Gly Lys	Asp
			120 =	>			1210		1215
Phe	Thr	Phe	Val Thr	Gly	Val	Glu	Asp Ser Ser Phe	Ala	Tyr Gly	Leu
			1220				1225		1230
Leu	Met	Glu	Leu Thr	Arg	Ala	Tyr	Leu Ala Tyr Ala	Asp	Asn Ser	Arg
		1235			1240	1245
Ala	Gin	Asp	Ser Ala	Ala	Tyr	Ala	Ile Gin Glu Leu	Leu	Ser Ile	Tyr
	1250			1255	1260
Asp	Cys	Arg	Glu Met	Glu	Thr	Asn	Gly Pro Gly His	Gin	Leu Trp	Arg
1265			1270		1275			1280
Arg	Phe	Pro	Glu His	Val	Arg	Glu	Ile Leu Glu Pro	His	Leu Asn	Thr
			1285			1290		1295
Arg	Tyr	Lys	Ser Ser	Gin	Lys	Ser	Thr Asp Trp Ser	Gly	Val Lys	Lys
			1300				1305		1310
Pro	Ile	Tyr	Leu Ser	Lys	Leu	Gly	Ser Asn Phe Ala	Glu	Trp Ser	Ala
		1315			1320	1325
Ser	Trp	Ala	Gly Tyr	Leu	Ile	Thr	Lys Val Arg His	Asp	Leu Ala	Ser
	1330			1335	1340
Lys	Ile	Phe	Thr Cys	Cys	Ser	Ile	Met Met Lys His	Asp	Phe Lys	Val
1345				1350		1355			13G0
Thr	Ile	Tyr	Leu Leu	Pro	His	Ile	Leu Val Tyr Val	Leu	Leu Gly	Cys
			1365			1370		1375
Asn	Gin	Glu	Asp Gin	Gin	Glu	Val	Tyr Ala Glu Ile	Met	Ala Val	Leu
			1380				1385		1390
Lys	His	Asp	Asp Gin	His	Thr	Ile	Asn Thr Gin Asp	Ile	Ala Ser Asp
		1395			1400	1405

179 • · · · ·

Lreu	Cys Gin 1410	Leu	Ser	Thr	Gin Thr Val 1415	Phe	Ser Met Leu 1420	Asp	His	Leu
Thr	Gin Trp	Ala	Arg	His	Lys Phe Gin	Ala	Leu Lys Ala	Glu	Lys	Cys
1425			1430		1435			1440
Pro	His Ser	Lys	Ser	Asn	Arg Asn Lys	Val	Asp Ser Met	Val	Ser	Thr
			1445		1450		1455
Val	Asp Tyr	Glu	Asp	Tyr	Gin Ser Val	Thr	Arg Phe Leu	Asp	Leu	Ile
		1460		1465		1470
Pro	Gin Asp	Thr	Leu	Ala	Val Ala Ser	Phe	Arg Ser Lys	Ala	Tyr	Thr
	1475			1480		1485
Arg	Ala Val	Met	His	Phe	Glu Ser Phe	Ile	Thr Glu Lys	Lys	Gin	Asn
	1490				1495		1500
Ile	Gin Glu	His	Leu	Gly	Phe Leu Gin	Lys	Leu Tyr Ala	Ala	Met	His
1505			1510		1515			1520
C-lu	Pro Asp	Gly	Val	Ala	Gly Val Ser	Ala	Ile Arg Lys	Ala	Glu	Pro
			1525		1530		1535
Ser	Leu Lys	Glu	Gin	Ile	Leu Glu His	Glu	Ser Leu Gly	Leu	Leu	Arg
		1540		1545		1550
Asp	Ala Thr	Ala	Cys	Tyr	Asp Arg Ala	Ile	Gin Leu Glu	Pro	Asp	Gin
	1555			1560		1565
Ile	Ile His	Tyr	His	Gly	Val Val Lys	Ser	Met Leu Gly	Leu	Gly	Gin
	1570				1575		1580
Leu	Ser Thr	Val	Ile	Thr	Gin Val Asn	Gly	Val His Ala	Asn	Arg	Ser
1585			1590		1595			1600
Glu	Trp Thr	Asp	Glu	Leu	Asn Thr Tyr	Arg	Val Glu Ala	Ala	Trp	Lys
			1605		1610		1615
Leu	Ser Gin	Trp	Asp	Leu	Val Glu Asn	Tyr	Leu Ala Ala	Asp	Gly	Lys
		162C	)		1625		1630
Ser	Thr Thr	Trp	Ser	Val	Arg Leu Gly	Gin	Leu Leu Leu	Ser	Ala	Lys
	1635			1640		1645
Lys	Arg Asp	Ile	Thr	Ala	Phe Tyr Asp	Ser	Leu Lys Leu	Val	Arg	Ala
	1650				1655		1660
Glu	Gin Ile	Val	Pro	Leu	Ser Ala Ala	Ser	Phe Glu Arg	Gly	Ser	Tyr
1665			1670		1675			1680
Gin	Arg Gly	Tyr	Glu	Tyr	Ile Val Arg	Leu	His Met Leu	Cys	Glu	Leu
			1685		1690		1695
Glu	His Ser	Ile	Lys	Pro	Leu Phe Gin	His	Ser Pro Gly	Asp	Ser	Ser
		1700		1705		1710
Gin	Glu Asp	Ser	Leu	Asn	Trp Val Ala	Arg	Leu Glu Met	Thr	Gin	Asn
	1715			1720		1725
Ser	Tyr Arg Ala	Lys	Glu	Pro Ile Leu	Ala	Leu Arg Arg Ala	L.eu	Leu
	1730				1735		1740
Ser	Leu Asn	Lys	Arg	Pro	Asp Tyr Asn	Glu	Met Val Gly Glu	Cys	Trp
1745				1750		1755			1760

180 • · · • · · · ·

Leu Gin Ser Ala Arg	Val Ala Arg Lys Ala	Gly His His Gin Thr	Ala
1765	i 177C	) 1775
Tyr Asn Ala Leu Leu 1780	Asn Ala Gly Glu Ser 1785	Arg Leu Ala Glu Leu 1790	Tyr
Val Glu Arg Ala Lys 1795	Trp Leu Trp Ser Lys 1800	Gly Asp Val His Gin 1805	Ala
Leu Ile Val Leu Gin 1810	Lys Gly Val Glu Leu 1815	Cys Phe Pro Glu Asn 1820	Glu
Thr Pro Pro Glu Gly	Lys Asn Met Leu Ile	His Gly Arg Ala Met	Leu
1825	1830	1835	1840
Leu Val Gly Arg Phe	Met Glu Glu Thr Ala	Asn Phe Glu Ser Asn	Ala
1845	, 185C	1 1855
Ile Met Lys Lys Tyr 1860	Lys Asp Val Thr Ala 1865	Cys Leu Pro Glu Trp 1870	Glu
Asp Gly His Phe Tyr 1875	Leu Ala Lys Tyr Tyr 1880	Asp Lys Leu Met Pro 1885	Met
Val Thr Asp Asn Lys 1890	Met Glu Lys Gin Gly 1895	Asp Leu Ile Arg Tyr 1900	Ile
Val Leu His Phe Gly	Arg Ser Leu Gin Tyr	Gly Asn Gin Phe Ile	Tyr
1905	1910	1915	1920
Gin Ser Met Pro Arg	Met Leu Thr Leu Trp	Leu Asp Tyr Gly Thr	Lys
1925	193C	' 1935
Ala Tyr Glu Trp Glu 1940	Lys Ala Gly Arg Ser 1945	Asp Arg Val Gin Met 1950	Arg
Asn Asp Leu Gly Lys 1955	Ile Asn Lys Val Ile 1960	Thr Glu His Thr Asn 1965	Tyr
Leu Ala Pro Tyr Gin 1970	Phe Leu Thr Ala Phe 1975	Ser Gin Leu Ile Ser 1980	Arg
Ile Cys His Ser His	Asp Glu Val Phe Val	Val Leu Met Glu Ile	Ile
1985	1990	1995	2000
Ala Lys Val Phe Leu	Ala Tyr Pro Gin Gin	Ala Met Trp Met Met	Thr
2005	201C	i 2015
Ala Val Ser Lys Ser 2020	Ser Tyr Pro Met Arg 2025	Val Asn Arg Cys Lys 2030	Glu
Ile Leu Asn Lys Ala 2035	Ile His Met Lys Lys 2040	Ser Leu Glu Lys Phe 2045	Val
Gly Asp Ala Thr Arg 2050	Leu Thr Asp Lys Leu 2055	Leu Glu Leu Cys Asn 2060	Lys
Pro Val Glu Ile Leu	Ala Ser Leu Gin Lys	Pro Lys Lys Ile Ser	Leu
2065	2070	2075	2080
Lys Gly Ser Asp Gly	Lys Phe Tyr Ile Met	Met Cys Lys Pro Lys	Asp
2085	209C	' 2095

Asp Leu Arg Lys Asp Cys Arg Leu Met Glu Phe Asn Ser Leu Ile Asn 2100 2105 2110

181 * · · • · · · ·

Lys	Cys	Leu Arg Lys Asp Ala Glu Ser Arg Arg Arg Glu Leu His	Ile
2115	2120	2125
Arg	Thr	Tyr Ala Val Ile Pro	Leu Asn Asp Glu Cys	Gly Ile Ile	Glu
	213C	I 2135 2140
Trp	Val	Asn Asn Thr Ala Gly	Leu Arg Pro Ile Leu	Thr Lys Leu	Tyr
2145	2150	2155		2160
Lys	Glu	Lys Gly Val Tyr Met	Thr Gly Lys Glu Leu	Arg Gin Cys	Met
		2165	2170	2175
Leu	Pro	Lys Ser Ala Ala Leu	Ser Glu Lys Leu Lys	Val Phe Arg	Glu
		2180	2185	2190
Phe	Leu	Leu Pro Arg His Pro	Pro Ile Phe His Glu	Trp Phe Leu	Arg
		2195	2200	2205
Thr	Phe	Pro Asp Pro Thr Ser	Trp Tyr Ser Ser Arg	Ser Ala Tyr	Cys
	221C	» 2215	i 2220
Arg	Ser	Thr Ala Val Met Ser	Met Val Gly Tyr Ile	Leu Gly Leu	Gly
2225	2230	2235		2240
Asp	Arg	His Gly Glu Asn Ile	Leu Phe Asp Ser Leu	Thr Gly Glu	Cys
		2245	2250	2255
Val	His	Val Asp Phe Asn Cys	Leu Phe Asn Lys Gly	Glu Thr Phe	Glu
		2260	2265	2270
Val	Pro	Glu Ile Val Pro Phe	Arg Leu Thr His Asn	Met Val Asn	Gly
		2275	2280	2285
Met	Gly	Pro Met Gly Thr Glu	Gly Leu Phe Arg Arg	Ala Cys Glu	Val
	229C	i 2295	, 2300
Thr	Met	Arg Leu Met Arg Asp	Gin Arg Glu Pro Leu	Met Ser Val	Leu
2305	2310	2315		2320
Lys	Thr	Phe Leu His Asp Pro	Leu Val Glu Trp Ser	Lys Pro Val	Lys
		2325	2330	2335
Gly	His	Ser Lys Ala Pro Leu	Asn Glu Thr Gly Glu	Val Val Asn	Glu
		2340	2345	2350
Lys	Ala	Lys Thr His Val Leu	Asp Ile Glu Gin Arg	Leu Gin Gly	Val
		2355	2360	2365
Ile	Lys	Thr Arg Asn Arg Val	Thr Gly Leu Pro Leu	Ser Ile Glu	Gly
	237C	i 2375	2380
His	Val	His Tyr Leu Ile Gin	Glu Ala Thr Asp Glu	Asn Leu Leu	Cys
23Θ5	2390	2395		2400
Gin	Met	Tyr Leu Gly Trp Thr	Pro Tyr Met
		2405	2410

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:32:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 7502 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární • 9

9

9 9 9

- 182 (ii) TYP MOLEKULY: CDNA (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 1..7440 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 32:

ATG GGT CAT GCT GTG

GAA Glu

TGG Trp

CCA GTG GTC ATG

AGC CGA TTT TTA AGT

48

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Pro Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

CAA

TTA

GAT

GAA

CAC

ATG

GGA

TAT

TTA

CAA

TCA

GCT

CCT

TTG

GAG

TTG

96

Gin

Leu

Asp

Glu

His

Met

Gly

Tyr

Leu

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu

Gin

Leu

20

25

30

ATG

AGT

ATG

CAA

AAT

TTA

GAA

TTT

ATT

GAA

GTC

ACT

TTA

TTA

ATG

GTT

144

Met

Ser

Met

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe

Ile

Glu

Val

Thr

Leu

Leu

Met

Val

35

40

45

CTT

ACT

CGT

ATT

ATT

GCA

ATT

GTG

TTT

TTT

AGA

AGG

CAA

GAA

CTC

TTA

192

Leu

Thr

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile

Val

Phe

Phe

Arg

Arg

Gin

Glu

Leu

Leu

50

55

60

CTT

TGG

CAG

ATA

GGT

TGT

GTT

CTG

CTA

GAG

TAT

GGT

AGT

CCA

AAA

ATT

240

Leu

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile

65

70

75

80

AAA

TCC

CTA

GCÁ

ATT

AGC

TTT

TTA

ACA

GAA

CTT

TTT

CAG

CTT

GGA

GGA

288

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly

Gly

85

90

95

CTA

CCA

GCA

CAA

CCA

GCT

AGC

ACT

TTT

TTC

AGC

TCA

TTT

TTG

GAA

TTA

336

Leu

Pro

Ala

Gin

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu

Glu

Leu

. ·

100

105

110

*—- ·

-----

-

TTA

AAA

CAC

CTT

GTA

GAA

ATG

GAT

ACT

GAC

CAA

TTG

AAA

CTC

TAT

GAA

384

Leu

Lys

His

Leu

Val

Glu

Met

Asp

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys

Leu

Tyr

Glu

115

120

125

GAG

CCA

TTA

TCA

AAG

CTG

ATA

AAG

ACA.

CTA

TTT

CCC

TTT

GAA

GCA

GAA

432

Glu

Pro

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile

Lys

Thr

Leu

Phe

ťro

Phe

Glu

Ala

Glu

130

135

140

GCT

TAT

AGA

AAT

ATT

GAA

CCT

GTC

TAT

TTA

AAT

ATG

CTG

CTG

GAA

AAA

480

Ala

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn

Met

Leu

Leu

Glu

Lys

145

150

155

160

CTC

TGT

GTC

ATG

TTT

GAA

GAC

GGT

GTG

CTC

ATG

CGG

CTT

AAG

TCT

GAT

528

Leu

Cys

Val

Met

Phe

Glu

Asp

Gly

Val

Leu

Met

Arg

Leu

Lys

Ser

Asp

165

170

175

TTG

CTA

AAA

GCA

GCT

TTG

TGC

CAT

TTA

CTG

CAG

TAT

TTC

CTT

AAA

TTT

576

Leu

Leu

Lys

Ala

Ala

Leu

Cys

His

Leu

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu

Lys

Phe

180

185

190

·- -.

-

GTG

CCA

GCT

GGG

TAT

GAA

TCT

GCT

TTA

CAA

GTC

AGG

AAG

GTC

ŤÁT

GTG

624

Val

Pro

Al 3

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala

Leu

Gin

Val

Arg

Lys

Val

Tyr

Val

195

200

205

AGA

AAT

ATT

TGT

AAA

GCT

CTT

TTG

GAT

GTG

CTT

GGA

ATT

GAG

GTA

GAT

672

Arg

Asn

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu

Leu

Asp

Val

Leu

Gly

Ile

Glu

Val

Asp

210

215

220

• · · ·

183

GCA GAG

TAC Tyr

TTG TTG GGC

CCA CTT TAT GCA GCT TTG

AAA Lys

ATG Met

GAA Glu

AGT Ser 240

720

Ala 225

Glu

Leu Leu

Gly 230

Pro

Leu Tyr

Ala

Ala 235

Leu

ATG

GAA

ATC

ATT

GAG

GAG

ATT

CAA

TGC

CAA

ACT

CAA

CAG

GAA

AAC

CTC

768

Met

Glu

Ile

Ile

Glu

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn

Leu

245

250

255

AGC

AGT

AAT

AGT

GAT

GGA

ATA

TCA

CCC

AAA

AGG

CGT

CGT

CTC

AGC

TCG

816

Ser

Ser

Asn

Ser

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro

Lys

Arg

Arg Arg

Leu

Ser

Ser

260

265

270

TCT

CTA

AAC

CCT

TCT

AAA

AGA

GCA

CCA

AAA

CAG

ACT

GAG

GAA

ATT

AAA

864

Ser

Leu

Asn

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu

Glu

Ile

Lys

275

280

285

CAT

GTG

GAC

ATG

AAC

CAA

AAG

AGC

ATA

TTA

TGG

AGT

GCA

CTG

AAA

CAG

912

His

Val

Asp

Met

Asn

Gin

Lys

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser

Ala

Leu

Lys

Gin

290

295

300

AAA

GCT

GAA

TCC

CTT

CAG

ATT

TCC

CTT

GAA

TAC

AGT

GGC

CTA

AAG

AAT

960

Lvs

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn

3 05

310

315

320

CCT

GTT

ATT

GAG

ATG

TTA

GAA

GGA

ATT

GCT

GTT

GTC

TTA

CAA

CTG

ACT

1008

Pro

Val

Ile

Glu

Met

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala

Val

Val

Leu

Gin

Leu

Thr

325

330

335

GCT

CTG

TGT

ACT

GTT

CAT

TGT

TCT

CAT

CAA

AAC

ATG

AAC

TGC

CGT

ACT

1056

Ala

Leu

Cys

Thr

Val

His

Cys

Ser

His

Gin

Asn

Met

Asn

Cys

Arg

Thr

340

345

350

TTC

AAG

GAC

TGT

CAA

CAT

AAA

TCC

AAG

AAG

AAA

CCT

TCT

GTA

GTG

ATA

1104

Phe

Lys

Asp

Cys

Gin

His

Lys

Ser

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser

Val

Val

Ile

355

360

365

ACT

TGG

ATG

TCA

TTG

GAT

TTT

TAC

ACA

AAA

GTG

CTT

AAG

AGC

TGT

AGA

1152

Thr

Trp

Met

Ser

Leu

Asp

Phe

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu

Lys

Ser

Cys

Arg

370

375

380

AGT

TTG

TTA

GAA

TCT

GTT

CAG

AAA

CTG

GAC

CTG

GAG

GCA

ACC

ATT

GAT

1200

Ser

Leu

Leu

Glu

Ser

Val

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp

385

390

395

400

AAG

GTG

GTG

AAA

ATT

TAT

GAT

GCT

TTG

ATT

TAT

ATG

CAA

GTA

AAC

AGT

1248

Lys

Val

Val

Lys

Ile

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile

Tyr

Met

Gin

Val

Asn

Ser

405

410

415

TCA

TTT

GAA

GAT

CAT

ATC

CTG

GAA

GAT

TTA

TGT

GGA

ATG

CTC

TCA

CTT

1296

Ser

Phe

Glu

Asp

His

Ile

Leu

Glu

Asp

Leu

Cys

Gly

Met

Leu

Ser

Leu

420

425

430

CCA

TGG

ATT

TAT

TCC

CAT

TCT

GAT

GAT

GGC

TGT

TTA

AAG

TTG

ACC

ACA

1344

Pro

Trp

Ile

Tyr

Ser

His

Ser

As o

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys

Leu

Thr

Thr

435

440

445

TTT

GCC

GCT

AAT

CTT

CTA

ACA

TTA

AGC

TGT

AGG

ATT

TCA

GAT

AGC

TAT

1392

Phe

Ala

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile

Ser

Asp

Ser

Tyr

450

455

460

TCA

CCA

CAG

GCA

CAA

TCA

CGA

TGT

GTG

TTT

CTT

CTG

ACT

CTG

TTT

CCA

1440

Ser

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser

Arg

Cys

Val

Phe

Leu

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro

465

470

475

480

AGA

AGA

ATA

TTC

CTT

GAG

TGG

AGA

ACA

GCA

GTT

TAC

AAC

TGG

GCC

CTG

1488

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala

Leu

485

490

495

184 • · · ·

CAG Gin

AGC TCC CAT GAA GTA ATC

CGG GCT AGT

TGT GTT AGT GGA TTT

TTT Phe

1536

Ser

Ser

His 500

Glu

Val

Ile

Arg

Ala 505

Ser

Cys Val

Ser

Gly 510

Phe

ATC

TTA

TTG

CAG

CAG

CAG

AAT

TCT

TGT

AAC

AGA

GTT

CCC

AAG

ATT

CTT

1584

Ile

Leu

Leu

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser

Cys

Asn

Arg

Val

Pro

Lys

Ile

Leu

515

520

525

ATA

GAT

AAA

GTC

AAA

GAT

GAT

TCT

GAC

ATT

GTC

AAG

AAA

GAA

TTT

GCT

1632

Ile

Asp

Lys

Val

Lys

Asp

Asp

Ser

Asp

Ile

Val

Lys

Lys

Glu

Phe

Ala

530

535

540

TCT

ATA

CTT

GGT

CAA

CTT

GTC

TGT

ACT

CTT

CAC

GGC

ATG

TTT

TAT

CTG

1680

Ser

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu

Val

Cys

Thr

Leu

His

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu

545

550

555

560

ACA

AGT

TCT

TTA

ACA

GAA

CCT

TTC

TCT

GAA

CAC

GGA

CAT

GTG

GAC

CTC

1728

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu

His

Gly

His

Val

Asp

Leu

565

570

575

TTC

TGT

AGG

AAC

TTG

AAA

GCC

ACT

TCT

CAA

CAT

GAA

TGT

TCA

TCT

TCT

1776

Phe

Cys

Arg

Asn

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser

Gin

His

Glu

Cys

Ser

Ser

Ser

580

585

590

CAA

CTA

AAA

GCT

TCT

GTC

TGC

AAG

CCA

TTC

CTT

TTC

CTA

CTG

AAA

AAA

1824

Gin

Leu

Lys

Ala

Ser

Val

cys

Lys

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu

Leu

Lys

Lys

595

600

605

AAA

ATA

CCT

AGT

CCA

GTA

AAA

CTT

GCT

TTC

ATA

GAT

AAT

CTA

CAT

CAT

1872

Lys

Ile

Pro

Ser

Pro

Val

Lys

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp

Asn

Leu

His

His

610

615

620

CTT

TGT

AAG

CAT

CTT

GAT

TTT

AGA

GAA

GAT

GAA

ACA

GAT

GTA

AAA

GCA

1920

Leu

Cys

Lys

His

Leu

Asp

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu

Thr

Asp

Val

Lys

Ala

G25

630

635

640

GTT

CTT

GGA

ACT

TTA

TTA

AAT

TTA

ATG

GAA

GAT

CCA

GAC

AAA

GAT

GTT

1968

Val

Leu

Gly

Thr

Leu

Leu

Asn

Leu

Met

Glu

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp

Val

645

650

655

AGA

GTG

GCT

TTT

AGT

GGA

AAT

ATC

AAG

CAC

ATA

TTG

GAA

TCC

TTG

GAC

2016

Arg

Val

Ala

Phe

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys

His

Ile

Leu

Glu

Ser

Leu

Asp

660

665

670

TCT

GAA

GAT

GGA

TTT

ATA

AAG

GAG

CTT

TTT

GTC

TTA

AGA

ATG

AAG

GAA

2064

Ser

Glu

Asp

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu

Leu

Phe

Val

Leu

Arg

Met

Lys

Glu

675

680

665

GCA

TAT

ACA

CAT

GCC

CAA

ATA

TCA

AGA

AAT

AAT

GAG

CTG

AAG

GAT

ACC

2112

Ala

Tyr

Thr

His

Ala

Gin

Ile

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu

Leu

Lys

Asp

Thr

690

695

700

TTG

ATT

CTT

ACA

ACA

GGG

GAT

ATT

GGA

AGG

GCC

GCA

AAA

GGA

GAT

TTG

2160

Leu

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly

Asp

Ile

Gly

Arg

Ala

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu

705

710

715

720

GTA

CCA

TTT

GCA

CTC

TTA

CAC

TTA

TTG

CAT

TGT

TTG

TTA

TCC

AAG

TCA

2208

Val

Pro

Phe

Ala

Leu

Leu

His

Leu

Leu

His

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys

Ser

725

730

735

GCA

TCT

GTC

TCT

GGA

GCA

GCA

TAC

ACA

GAA

ATT

AGA

GCT

CTG

GTT

GCA

2256

Ala

Ser

Val

Ser

Gly

Ala

Ala

Tyr

Thr

Glu

He

Arg

Ala

Leu

Val

Ala

740

745

750

GCT

AAA

AGT

GTT

AAA

CTG

CAA

AGT

TTT

TTC

AGC

CAG

TAT

AAG

AAA

CCC

2304

Ala

Lys

Ser

Val

Lys

Leu

Gin

Ser

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr

Lys

Lys

Pro

755

760

765

• ·

	- 185 -	·'· ·	··	• · · · · · ·
ATC TGT CAG	TTT TTG GTA GAA TCC CTT CAC TCT AGT CAG ATG	ACA	GCA	2352
Ile Cys Gin 770	Phe Leu Val Glu Ser Leu His Ser Ser Gin Met 775 780	Thr	Ala
CTT CCG AAT	ACT CCA TGC CAG AAT GCT GAC GTG CGA AAA CAA	GAT	GTG	2400
Leu Pro Asn 7Θ5	Thr Pro Cys Gin Asn Ala Asp Val Arg Lys Gin 790 795	Asp	Val 800
GCT CAC CAG	AGA GAA ATG GCT TTA AAT ACG TTG TCT GAA ATT	GCC	AAC	2448
Ala His Gin	Arg Glu Met Ala Leu Asn Thr Leu Ser Glu Ile 805 810	Ala 815	Asn
GTT TTC GAC	TTT CCT GAT CTT AAT CGT TTT CTT ACT AGG ACA	TTA	CAA	2496
Val Phe Asp	Phe Pro Asp Leu Asn Arg Phe Leu Thr Arg Thr 820 825 830	Leu	Gin
GTT CTA CTA	CCT GAT CTT GCT GCC AAA GCA AGC CCT GCA GCT	TCT	GCT	2544
Val Leu Leu 835	Pro Asp Leu Ala Ala Lys Ala Ser Pro Ala Ala 840 845	Ser	Ala
CTC ATT CGA	ACT TTA GGA AAA CAA TTA AAT GTC AAT CGT AGA	GAG	ATT	2592
Leu Ile Arg 650	Thr Leu Gly Lys Gin Leu Asn Val Asn Arg Arg 855 860	Glu	Ile
TTA ATA AAC	AAC TTC AAA TAT ATT TTT TCT CAT TTG GTC TGT	TCT	TGT	2640
Leu Ile Asn 865	Asn Phe Lys Tyr Ile Phe Ser His Leu Val Cys 870 875	Ser	Cys 880
TCC AAA GAT	GAA TTA GAA CGT GCC CTT CAT TAT CTG AAG AAT	GAA	ACA	2688
Ser Lys Asp	Glu Leu Glu Arg Ala Leu His Tyr Leu Lys Asn 885 890	Glu 895	Thr
GAA ATT GAA	CTG GGG AGC CTG TTG AGA CAA GAT TTC CAA GGA	TTG	CAT	2736
Glu Ile Glu	Leu Gly Ser Leu Leu Arg Gin Asp Phe Gin Gly 900 905 910	Leu	His
AAT GAA TTA	TTG CTG CGT ATT GGA GAA CAC TAT CAA CAG GTT	TTT	AAT	2784
Asn Glu Leu 915	Leu Leu Arg Xle Gly Glu His Tyr Gin Gin Val 920 925	Phe	Asn
GGT TTG TCA	ATA CTT GCC TCA TTT GCA TCC AGT GAT GAT CCA	TAT	CAG	2832
Gly Leu Ser 930	Ile Leu Ala Ser Phe Ala Ser Ser Asp Asp Pro 935 940	Tyr	Gin
GGC CCG AGA	GAT ATC ATA TCA CCT GAA CTG ATG GCT GAT TAT	TTA	CAA	2880
Gly Pro Arg 945	Asp Ile Ile Ser Pro Glu Leu Met Ala Asp Tyr 950 955	Leu	Gin 960
CCC AAA TTG	TTG GGC ATT TTG GCT TTT TTT AAC ATG CAG TTA	CTG	AGC	2928
Pro Lys Leu	Leu Gly Ile Leu Ala Phe Phe Asn Met Gin Leu 965 970	Leu 975	Ser
TCT AGT GTT	GGC ATT GAA GAT AAG AAA ATG GCC TTG AAC AGT	TTG	ATG	2976
Ser Ser Val	Gly Ile Glu Asp Lys Lys Met Ala Leu Asn Ser 980 985 990	Leu	Met
TCT TTG ATG	AAG TTA ATG GGA CCC AAA CAT GTC AGT TCT GTG	AGG	GTG	3024
Ser Leu Met 995	Lys Leu Met Gly Pro Lys His Val Ser Ser Val 1000 1005	Arg	Val
AAG ATG ATG	ACC ACA CTG AGA ACT GGC CTT CGA TTC AAG GAT	GAT	TTT	3072
Lys Met Met 1010	Thr Thr Leu Arg Thr Gly Leu Arg Phe Lys Asp 1015 1020	ASp	Phe
CCT GAA TTG	TGT TGC AGA GCT TGG GAC TGC TTT GTT CGC TGC	CTG	GAT	3120
Pro Glu Leu 1025	Cys Cys Arg Ala Trp Asp Cys Phe Val Arg Cys 1030 1035	Leu	Asp 1040

	- 186 -	• ·· · • · • « • « • · «	·· • • • · • • ·	• · · • · · · « · • · · • · • · · · · · ·
CAT GCT TGT CTG	GGC TCC CTT CTC AGT CAT GTA ATA GTA	GCT TTG	TTA	3168
His Ala Cys Leu	Gly Ser Leu Leu Ser His Val Ile Val 1045 1050	Ala Leu Leu 1055
CCT CTT ATA CAC	ATC CAG CCT AAA GAA ACT GCA GCT ATC	TTC CAC	TAC	3216
Pro Leu Ile His Ile Gin Pro Lys Glu Thr Ala Ala Ile 1060 1065	Phe His 1070	Tyr
CTC ATA ATT GAA	AAC AGG GAT GCT GTG CAA GAT TTT CTT	CAT GAA	ATA	3264
Leu Ile Ile Glu 1075	Asn Arg Asp Ala Val Gin Asp Phe Leu His Glu 1080 1085	Ile
TAT TTT TTA CCT	GAT CAT CCA GAA TTA AAA AAG ATA AAA	GCC GTT	CTC	3312
Tyr Phe Leu Pro 1090	Asp His Pro Glu Leu Lys Lys Ile Lys 1095 1100	Ala Val	Leu
CAG GAA TAC AGA	AAG GAG ACC TCT GAG AGC ACT GAT CTT	CAG ACA	ACT	3360
Gin Glu Tyr Arg 1105	Lys Glu Thr Ser Glu Ser Thr Asp Leu 1110 1115	Gin Thr	Thr 1120
CTT CAG CTC TCT	ATG AAG GCC ATT CAA CAT GAA AAT GTC	GAT GTT	CGT	3408
Leu Gin Leu Ser	Met Lys Ala Ile Gin His Glu Asn Val 1125 1130	Asp Val 1135	Arg
ATT CAT GCT CTT	ACA AGC TTG AAG GAA ACC TTG TAT AAA	AAT CAG	GAA	3456
Ile His Ala Leu Thr Ser Leu Lys Glu Thr Leu Tyr Lys 1140 1145	Asn Gin 1150	Glu
AAA CTG ATA AAG	TAT GCA ACA GAC AGT GAA ACA GTA GAA	CCT ATT	ATC	3504
Lys Leu Ile Lys 1155	Tyr Ala Thr Asp Ser Glu Thr Val Glu Pro Ile 1160 1165	Ile
TCA CAG TTG GTG	ACA GTG CTT TTG AAA GGT TGC CAA GAT	GCA AAC	TCT	3552
Ser Gin Leu Val 1170	Thr Val Leu Leu Lys Gly Cys Gin Asp 1175 1180	Ala Asn	Ser
CAA GCT CGG TTG	CTC TGT GGG GAA TGT TTA GGG GAA TTG	GGG GCG	ATA	3600
Gin Ala Arg Leu 1185	Leu Cys Gly Glu Cys Leu Gly Glu Leu 1190 1195	Gly Ala	Ile 1200
GAT CCA GGT CGA	TTA GAT TTC TCA ACA ACT GAA ACT CAA	GGA AAA	GAT	3648
Asp Pro Gly Arg	Leu Asp Phe Ser Thr Thr Glu Thr Gin 1205 1210	Gly Lys Asp 1215
TTT ACA TTT GTG	ACT GGA GTA GAA GAT TCA AGC TTT GCC	TAT GGA	TTA	3696
Phe Thr Phe Val Thr Gly Val Glu Asp Ser Ser Phe Ala 1220 1225	Tyr Gly 1230	Leu
TTG ATG GAG CTA	ACA AGA GCT TAC CTT GCG TAT GCT GAT	AAT AGC	CGA	3744
Leu Met Glu Leu 1235	Thr Arg Ala Tyr Leu Ala Tyr Ala Asp Asn Ser 1240 1245	Arg
GCT 'CAA GAT TCA	GCT GCC TAT GCC ATT CAG GAG TTG CTT	TCT ATT	TAT	3792
Ala Gin Asp Ser 1250	Ala Ala Tyr Ala Ile Gin Glu Leu Leu 1255 1260	Ser Ile	Tyr
GAC TGT AGA GAG	ATG GAG ACC AAC GGC CCA GGT CAC CAA	TTG TGG	AGG	3840
Asp Cys Arg Glu 1265	Met Glu Thr Asn Gly Pro Gly His Gin 1270 1275	Leu Trp	Arg 1280
AGA TTT CCT GAG	CAT GTT CGG GAA ATA CTA GAA CCT CAT	CTA AAT	ACC	3888
Arg Phe Pro Glu	His Val Arg Glu Ile Leu Glu Pro His 1285 1290	Leu Asn Thr 1295
AGA TAC AAG AGT	TCT CAG AAG TCA ACC GAT TGG TCT GGA	GTA AAG	AAG	3936
Arg Tyr Lys Ser Ser Gin Lys Ser Thr Asp Trp Ser Gly 1300 1305	Val Lys 1310	Lys

··

• ·

- 187 • · · • · • · • · «·· *·

CCA ATT TAC TTA AGT

AAA Lys

TTG Leu

GGT AGT AAC Gly Ser Asn 1320

TTT GCA GAA TGG TCA GCA

3984

Pro

Ile

Tyr Leu 1315

Ser

Phe

Ala

Glu Trp 1325

Ser

Ala

TCT

TGG

GCA GGT

TAT

CTT

ATT

ACA AAG GTT

CGA

CAT

GAT CTT

GCC

AGT

4032

Ser

Trp Ala Gly 1330

Tyr

Leu

Ile Thr Lys Val 1335

Arg

His Asp Leu 1340

Ala

Ser

AAA

ATT

TTC ACC

TGC

TGT

AGC

ATT ATG ATG

AAG

CAT

GAT TTC

AAA

GTG

4080

Lys Ile 1345

Phe Thr

Cys

Cys Ser 1350

Ile Met Met

Lys His 1355

Asp Phe

Lys

Val 1360

ACC

ATC

TAT CTT

CTT

CCA

CAT

ATT CTG GTG

TAT

GTC

TTA CTG

GGT

TGT

4128

Thr

Ile

Tyr Leu

Leu Pro 1365

His

Ile Leu Val Tyr 1370

Val

Leu Leu

Gly Cys 1375

AAT

CAA

GAA GAT

CAG

CAG

GAG

GTT TAT GCA

GAA

ATT

ATG GCA

GTT

CTA

4176

Asn

Gin

Glu Asp Gin 1380

Gin

Glu

Val Tyr Ala 1385

Glu

Ile

Met Ala Val 1390

Leu

AAG

CAT

GAC GAT

CAG

CAT

ACC

ATA AAT ACC

CAA

GAC

ATT GCA

TCT

GAT

4224

Lys

His

Asp Asp 1395

Gin

His

Thr

Ile Asn Thr 1400

Gin

Asp

Ile Ala 1405

Ser

Asp

CTG

TGT

CAA CTC

AGT

ACA

CAG

ACT GTG TTC

TCC

ATG

CTT GAC

CAT

CTC

4272

Leu

Cys Gin Leu 1410

Ser

Thr

Gin Thr Val Phe 1415

Ser

Met Leu Asp 1420

His

Leu

ACA

CAG

TGG GCA

AGG

CAC

AAA

TTT CAG GCA

CTG

AAA

GCT GAG

AAA

TGT

4320

Thr Gin 1425

Trp Ala

Arg

His Lys 1430

Phe Gin Ala

Leu Lys 1435

Ala Glu

Lys

Cys 1440

CCA

CAC

AGC AAA

TCA

AAC

AGA

AAT AAG GTA

GAC

TCA

ATG GTA

TCT

ACT

4368

Pro

His

Ser Lys

Ser Asn 1445

Arg

Asn Lys Val Asp 1450

Ser

Met Val

Ser Thr 1455

GTG

GAT

TAT GAA

GAC

TAT

CAG

AGT GTA ACC

CGT

TTT

CTA GAC

CTC

ATA

4416

Val

Asp

Tyr Glu Asp 1460

Tyr

Gin

Ser Val Thr 1465

Arg

Phe

Leu Asp Leu 1470

Ile

CCC

CAG

GAT ACT

CTG

GCA

GTA

GCT TCC TTT

CGC

TCC

AAA GCA

TAC

ACA

4464

Pro

Gin

Asp Thr 1475

Leu

Ala

Val

Ala Ser Phe 1400

Arg

Ser

Lys Ala 1485

Tyr

Thr

CGA

GCT

GTA ATG

CAC

TTT

GAA

TCA TTT ATT

ACA

GAA

AAG AAG

CAA

AAT

4512

Arg

Ala Val Met 1490

His

Phe

Glu Ser Phe Ile 1495

Thr

Glu Lys Lys 1500

Gin

Asn

ATT

CAG

GAA CAT

CTT

GGA

TTT

TTA CAG AAA

TTG

TAT

GCT GCT

ATG

CAT

4560

Ile Gin 1505

Glu His

Leu

Gly Phe 1510

Leu Gin Lys

Leu Tyr 1515

Ala Ala

Met

His 1520

GAA

CCT

GAT GGA

GTG

GCC

GGA

GTC AGT GCA

ATT

AGA

AAG GCA

GAA

CCA

4608

Glu

Pro

Asp Gly

Val Ala 1525

Gly

Val Ser Ala Ile 1530

Arg

Lys Ala

Glu Pro 1535

TCT

CTA

AAA GAA

CAG

ATC

CTT

GAA CAT GAA

AGC

CTT

GGC TTG

CTG

AGG

4656

Ser

Leu

Lys Glu Gin 1540

Ile

Leu

Glu His Glu 1545

Ser

Leu

Gly Leu Leu 1550

Arg

GAT

GCC

ACT GCT

TGT

TAT

GAC

AGG GCT ATT

CAG

CTA

GAA CCA

GAC

CAG

4704

Asp

Ala

Thr Ala 1555

Cys

Tyr

Asp

Arg Ala Ile 1560

Gin

Leu

Glu Pro 1565

Asp

Gin

ATC

ATT

CAT TAC

CAT

GGT

GTA

GTA AAG TCC

ATG

TTA

GGT CTT

GGT

CAG

4752

Ile

Ile 157C

His Tyr 1

His

Gly

Val 1575

Val Lys Ser

Met

Leu Gly Leu 1580

Gly

Gin

·· ···· • ·· ·· · · · • · · • · · * • · · ··· ♦ · ·

- 188 • « • · · · · 11·· ι lil · • · · ··»· ·· ·

CTG TCT ACT GTT ATC ACT CAG GTG AAT GGA GTG CAT GCT AAC AGG TCC 4 800

Leu Ser Thr Val Ile Thr Gin Val Asn Gly Val His Ala Asn Arg Ser

1585 1590 1595 1600

GAG TGG ACA GAT GAA TTA AAC ACG TAC AGA GTG GAA GCA GCT TGG AAA 4 84 8

Glu Trp Thr Asp Glu Leu Asn Thr Tyr Arg Val Glu Ala Ala Trp Lys

1605 1610 1615

TTG TCA CAG TGG GAT TTG GTG GAA AAC TAT TTG GCA GCA GAT GGA AAA 4 89 6

Leu Ser Gin Trp Asp Leu Val Glu Asn Tyr Leu Ala Ala Asp Gly Lys

1620 1625 1630

TCT ACA ACA TGG AGT GTC AGA CTG GGA CAG CTA TTA TTA TCA GCC AAA 4944

Ser Thr Thr Trp Ser Val Arg Leu Gly Gin Leu Leu Leu Ser Ala Lys

1635 1640 1645

AAA AGA GAT ATC ACA GCT TTT TAT GAC TCA CTG AAA CTA GTG AGA GCA 4992

Lys Arg Asp Ile Thr Ala Phe Tyr Asp Ser Leu Lys Leu Val Arq Ala

1650 1655 1660

GAA CAA ATT GTA CCT CTT TCA GCT GCA AGC TTT GAA AGA GGC TCC TAC 504 0

Glu Gin Ile Val Pro Leu Ser Ala Ala Ser Phe Glu Arg Gly Ser Tyr

1665 1670 1675 1680

CAA CGA GGA TAT GAA TAT ATT GTG AGA TTG CAC ATG TTA TGT GAG TTG 5088

Gin Arg Gly Tyr Glu Tyr Ile Val Arg Leu His Met Leu Cys Glu Leu

1685 1690 1695

GAG CAT AGC ATC AAA CCA CTT TTC CAG CAT TCT CCA GGT GAC AGT TCT 5136

Glu His Ser Ile Lys Pro Leu Phe Gin His Ser Pro Gly Asp Ser Ser

1700 1705 1710

CAA Gin	GAA GAT TCT Glu Asp Ser 1715	CTA Leu	AAC Asn	TGG Trp	GTA GCT Val Ala 1720
TCC	TAC AGA GCC	AAG	GAG	CCT	ATC CTG
Ser	Tyr Arg Ala 1730	Lys	Glu	Pro Ile Leu 1735
AGC	CTC AAC AAA	AGA	CCA	GAT	TAC AAT
Ser 1745	Leu Asn Lys	Arg	Pro Asp 1750	Tyr Asn
CTG	CAG AGT GCC	AGG	GTA	GCT	AGA AAG
Leu	Gin Ser Ala	Arg	Val	Ala	Arg Lys

1765

TAC AAT GCT CTC CTT AAT	GCA Ala	GGG Gly	GAA Glu 178!
Tyr Asn Ala	Leu Leu 1780	Asn
GTG GAA AGG	GCA AAG	TGG	CTC	TGG	TCC
Val Glu Arg	Ala Lys	Trp	Leu	Trp	Ser
1795			1800
CTA ATT GTT	CTT CAA	AAA	GGT	GTT	GAA
Leu Ile Val	Leu Gin	Lys	Gly	Val	Glu
1810			1815
ACC CCA CCT	GAG GGT	AAG	AAC	ATG	TTA
Thr Pro Pro	Glu Gly	Lys	Asn	Met	Leu
1825		1830
CTA GTG GGC	CGA TTT	ATG	GAA	GAA	ACA
Leu Val Gly	Arg Phe	Met	Glu	Glu	Thr

1845

CGA Arg	CTA Leu	GAA Glu	ATG ACC CAG AAT Met Thr Gin Asn 1725	5184
GCT	CTC	CGG	AGG GCT TTA CTA	5232
Ala	Leu	Arg Arg Ala Leu Leu 1740
GAA	ATG	GTT	GGA GAA TGC TGG	5280
Glu	Met Val 1755	Gly Glu Cys Trp 1760
GCT	GGT	CAC	CAC CAG ACA GCC	5328
Ala Gly 1770	His	His Gin Thr Ala 1775
TCA	CGA	CTC	GCT GAA CTG TAC	5376
Ser	Arg	Leu	Ala Glu Leu Tyr

1790

AAG GGT GAT GTT CAC CAG GCA	5424
Lys Gly Asp Val His	Gin	Ala
	1805
TTA TGT	TTT CCT GAA	AAT	GAA	5472
Leu Cys	Phe Pro Glu 1820	Asn	Glu
ATC CAT	GGT CGA GCT	ATG	CTA	5520
Ile His Gly Arg Ala 1835	Met	Leu 1840
GCT AAC	TTT GAA AGC	AAT	GCA	5568
Ala Asn 1850	Phe Glu Ser	Asn Ala 1855

189

ATT Ile	ATG AAA AAA TAT AAG	GAT GTG ACC GCG TGC CTG CCA	GAA TGG GAG Glu Trp Glu 1870	5616
Met	Lys	Lys Tyr Lys 1860	Asp	Val	Thr Ala 1865	Cys	Leu	Pro
GAT	GGG	CAT	TTT TAC CTT	GCC	AAG	TAC TAT	GAC	AAA	TTG	ATG CCC ATG	5664
Asp	Gly	His Phe Tyr Leu 1875	Ala	Lys Tyr Tyr 1880	Asp	Lys	Leu Met Pro Met 1885
GTC	ACA	GAC	AAC AAA ATG	GAA	AAG	CAA GGT	GAT	CTC	ATC	CGG TAT ATA	5712
Val	Thr Asp 1890	Asn Lys Met	Glu Lys 1895	Gin Gly	Asp	Leu Ile 1900	Arg Tyr Ile
GTT	CTT	CAT	TTT GGC AGA	TCT	CTA	CAA TAT	GGA	AAT	CAG	TTC ATA TAT	5760
Val Leu 1905	His	Phe Gly Arg Ser 1910	Leu	Gin Tyr	Gly Asn 1915	Gin	Phe Ile Tyr 1920
CAG	TCA	ATG	CCA CGA ATG	TTA	ACT	CTA TGG	CTT	GAT	TAT	GGT ACA AAG	5808
Gin	Ser	Met	Pro Arg Mec 1925	Leu	Thr	Leu Trp Leu 1930	Asp	Tyr	Gly Thr Lys 1935
GCA	TAT	GAA	TGG GAA AAA	GCT	GGC	CGC TCC	GAT	CGT	GTA	CAA ATG AGG	5856
Ala	Tyr	Glu	Trp Glu Lys 1940	Ala	Gly	Arg Ser 1945	Asp	Arg	Val	Gin Met Arg 1950
AAT	GAT	TTG	GGT AAA ATA	AAC	AAG	GTT ATC	ACA	GAG	CAT	ACA AAC TAT	5904
Asn	Asp	Leu Gly Lys Ile 1955	Asn	Lys Val Ile 1960	Thr	Glu	His Thr Asn Tyr 1965
TTA	GCT	CCA	TAT CAA TTT	TTG	ACT	GCT TTT	TCA	CAA	TTG	ATC TCT CGA	5952
Leu	Ala Pro 1970	Tyr Gin Phe	Leu Thr 1975	Ala Phe	Ser	Gin Leu 1980	Ile Ser Arg
ATT	TGT	CAT	TCT CAC GAT	GAA	GTT	TTT GTT	GTC	TTG	ATG	GAA ATA ATA	6000
Ile Cys 1985	His	Ser His Asp Glu 1990	Val	Phe Val	Val Leu 1995	Met	Glu Ile Ile 2000
GCC	AAA	GTA	TTT CTA GCC	TAT	CCT	CAA CAA	GCA	ATG	TGG	ATG ATG ACA	6048
Ala	Lys	Val	Phe Leu Ala 2005	Tyr	Pro	Gin Gin Ala 2010	Met	Trp	Met Met Thr 2015
GCT	GTG	TCA	AAG TCA TCT	TAT	CCC	ATG CGT	GTG	AAC	AGA	TGC AAG GAA	6096
Ala	Val	Ser	Lys Ser Ser 2020	Tyr	Pro	Met Arg 2025	Val	Asn	Arg	Cys Lys Glu 2030
ATC	CTC	AAT	AAA GCT ATT	CAT	ATG	AAA AAA	TCC	TTA	GAG	AAG TTT GTT	6144
Ile	Leu	Asn 2035	Lys Ala Ile	His	Met Lys Lys 2040	Ser	Leu	Glu Lys Phe Val 2045
GGA	GAT	GCA	ACT CGC CTA	ACA	GAT	AAG CTT	CTA	GAA	TTG	TGC AAT AAA	6192
Gly	Asp Ala 2050	Thr Arg Leu	Thr Asp 2055	Lys Leu	Leu	Glu Leu 2060	Cys Asn Lys
CCG	GTT	GAT	GGA AGT AGT	TCC	ACA	TTA AGC	ATG	AGC	ACT	CAT TTT AAA	6240
Pro Val 2065	Asp	Gly Ser Ser Ser 2070	Thr	Leu Ser	Met Ser 2075	Thr	His Phe Lys 2080
ATG	CTT	AAA	AAG CTG GTA	GAA	GAA	GCA ACA	TTT	AGT	GAA	ATC CTC ATT	6288
Met	Leu	Lys	Lys Leu Val 2085	Glu	Glu	Ala Thr Phe 2090	Ser	Glu	Ile Leu Ile 2095
CCT	CTA	CAA	TCA GTC ATG	ATA	CCT	ACA CTT	CCA	TCA	ATT	CTG GGT ACC	6336
Pro	Leu	Gin	Ser Val Met 2100	Ile	Pro	Thr Leu 2105	Pro	Ser	Ile	Leu Gly Thr 2110 '
CAT	GCT	AAC	CAT GCT AGC	CAT	GAA	CCA TTT	CCT	GGA	CAT	TGG GCC TAT	6384
His	Ala	Asn 2115	His Ala Ser	Hie	Glu Pro Phe 2120	Pro	Gly	His Trp Ala Tyr 2125

·· ····

- 190

ATT GCA GGG Ile Ala Gly	TTT GAT GAT ATG GTG GAA ATT CTT GCT TCT CTT CAG AAA	6432
Phe Asp	Asp Met Val 2135	Glu	Ile	Leu	Ala Ser 2140	Leu	Gin	Lys
	2130
CCA	AAG AAG	ATT TCT	TTA AAA GGC	TCA	GAT	GGA	AAG TTC	TAC	ATC	ATG	6480
Pro Lys Lys 2145	Ile Ser	Leu Lys Gly 2150	Ser	Asp	Gly Lys Phe 2155	Tyr	Ile	Met 2160
ATG	TGT AAG	CCA AAA	GAT GAC CTG	AGA	AAG	GAT	TGT AGA	CTA	ATG	GAA	6528
Met	Cys Lys	Pro Lys Asp Asp Leu 2165	Arg	Lys Asp 2170	Cys Arg	Leu	Met Glu 2175
TTC	AAT TCC	TTG ATT	AAT AAG TGC	TTA	AGA	AAA	GAT GCA	GAG	TCT	CGT	6576
Phe	Asn Ser	Leu Ile 2180	Asn Lys Cys	Leu Arg 2185	Lys	Asp Ala	Glu Ser 2190	Arg
AGA	AGA GAA	CTT CAT	ATT CGA ACA	TAT	GCA	GTT	ATT CCA	CTA	AAT	GAT	6624
Arg	Arg Glu 2195	Leu His	Ile Arg Thr Tyr 2200	Ala	Val	Ile Pro 2205	Leu	Asn	Asp
GAA	TGT GGG	ATT ATT	GAA TGG GTG	AAC	AAC	ACT	GCT GGT	TTG	AGA	CCT	6672
Glu	Cys Gly 2210	Ile Ile	Glu Trp Val 2215	Αεη	Asn	Thr	Ala Gly 2220	Leu	Arg	Pro
ATT	CTG ACC	AAA CTA	TAT AAA GAA	AAG	GGA	GTG	TAT ATG	ACA	GGA	AAA	6720
Ile Leu Thr 2225	Lys Leu	Tyr Lys Glu 2230	Lys	Gly	Val Tyr Met 2235	Thr	Gly	Lys 2240
GAA	CTT CGC	CAG TGT	ATG CTA CCA	AAG	TCA	GCA	GCT TTA	TCT	GAA	AAA	6768
Glu	Leu Arg	Gin Cys Met Leu Pro 2245	Lys	Ser Ala 2250	Ala Leu	Ser	Glu Lys 2255
CTC	AAA GTA	TTC CGA	GAA TTT CTC	CTG	CCC	AGG	CAT CCT	CCT	ATT	TTT	6816
Leu	Lys Val	Phe Arg 2260	Glu Phe Leu	Leu Pro 2265	Arg	His Pro	Pro Ile 2270	Phe
CAT	GAG TGG	TTT CTG	AGA ACA TTC	CCT	GAT	CCT	ACA TCA	TGG	TAC	AGT	6864
His	Glu Trp Phe Leu 2275	Arg Thr Phe Pro 2260	Asp	Pro	Thr Ser Trp 2285	Tyr	Ser
AGT	AGA TCA	GCT TAC	TGC CGT TCC	ACT	GCA	GTA	ATG TCA	ATG	GTT	GGT	6912
Ser	Arg Ser 2290	Ala Tyr	Cys Ara Ser 2295	Thr	Ala	Val	Met Ser 2300	Met	Val	Gly
TAT	ATT CTG	GGG CTT	GGA GAC CGT	CAT	GGT	GAA	AAT ATT	CTC	TTT	GAT	6960
Tyr Ile Leu 2305	Gly Leu	Gly Asp Arg 2310	His	Gly	Glu Asn Ile 2315	Leu	Phe	Asp 2320
TCT	TTG ACT	GGT GAA	TGC GTA CAT	GTA	GAT	TTC	AAT TGT	CTT	TTC	AAT	7008
Ser	Leu Thr	Gly Glu Cys Val His 2325	Val	Asp Phe 2330	Asn Cys	Leu	Phe Asn 2335
AAG	GGA GAA	ACC TTT	GAA GTT CCA	GAA	ATT	GTG	CCA TTT	CGC	CTG	ACT	7056
Lys	Gly Glu	Thr Phe 2340	Glu Val Pro	Glu Ile 2345	Val	Pro Phe	Arg Leu 2350	Thr
CAT	AAT ATG	GTT AAT	GGA ATG GGT	CCT	ATG	GGA	ACA GAG	GGT	CTT	TTT	7104
His	Asn Met 2355	Val Asn	Gly Met Gly Pro 2360	Met	Gly	Thr Glu Gly 2365	Leu	Phe
CGA	AGA GCA	TGT GAA	GTT ACA ATG	AGG	CTG	ATG	CGT GAT	CAG	CGA	GAG	7152
Arg	Arg Ala 2370	Cys Glu	Val Thr Met 2375	Arg	Leu	Met	Arg Asp 2380	Gin	Arg	Glu
CCT	TTA ATG	AGT GTC	TTA AAG ACT	TTT	CTA	CAT	GAT CCT	CTT	GTG	GAA	7200
Pro 2385	Leu Met	Ser Val	Leu Lys Thr 2390	Phe	Leu	His Asp Pro 2395	Leu	Val	Glu 2400

191

TGG Trp	AGT Ser	AAA CCA GTG AAA GGG	CAT His	TCC AAA GCG Ser Lys Ala 2410	CCA CTG AAT GAA ACT	7248
Lye	Pro Val Lye 2405	Gly	Pro	Leu	Asn	Glu Thr 2415
GGA	GAA	GTT	GTC AAT GAA	AAG	GCC	AAG ACC CAT	GTT	CTT	GAC	ATT GAG	7296
Gly	Glu	Val	Val Asn Glu 2420	Lys	Ala	Lys Thr His 2425	Val	Leu	Asp Ile Glu 2430
CAG	CGA	CTA	CAA GGT GTA	ATC	AAG	ACT CGA AAT	AGA	GTG	ACA	GGA CTG	7344
Gin	Arg	Leu Gin Gly Val 2435	Ile	Lys Thr Arg Asn 2440	Arg	Val Thr 2445	Gly Leu
CCG	TTA	TCT	ATT GAA GGA	CAT	GTG	CAT TAC CTT	ATA	CAA	GAA	GCT ACT	7392
Pro	Leu Ser 2450	Ile Glu Gly	His Val 2455	His Tyr Leu	Ile Gin 2460	Glu	Ala Thr
GAT	GAA	AAC	TTA CTA TGC	CAG	ATG	TAT CTT GGT	TGG	ACT	CCA	TAT ATG	7440
Asp	Glu	Asn	Leu Leu Cys	Gin	Met	Tyr Leu Gly	Trp	Thr	Pro	Tyr Met

2465 2470 2475 24B0

TGAAATGAAA TTATGTAAAA GAATATGTTA ATAATCTAAA AGTAAAAAAA AAAAAAAAAA 7500

AA 7502 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:33:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 2480 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 33:

Met 1

Gly

His

Ala

Val 5

Glu

Trp

Pro

Val

Val 10

Met

Ser

Arg

Phe

Leu 15

Ser

Gin

Leu

Asp

Glu 20

His

Met

Gly

Tyr

Leu 25

Gin

Ser

Ala

Pro

Leu 30

Gin

Leu

Met

Ser

Met 35

Gin

Asn

Leu

Glu

Phe 40

Ile

Glu

Val

Thr

Leu 45

Leu

Met

Val

Leu

Thr 50

Arg

Ile

Ile

Ala

Ile 55

Val

Phe

Phe

Arg

Arg 60

Gin

Glu

Leu

Leu

Leu 65

Trp

Gin

Ile

Gly

Cys 70

Val

Leu

Leu

Glu

Tyr 75

Gly

Ser

Pro

Lys

Ile 80

Lys

Ser

Leu

Ala

Ile 85

Ser

Phe

Leu

Thr

Glu 90

Leu

Phe

Gin

Leu

Gly 95

Gly

Leu

Pro

Ala

Gin 100

Pro

Ala

Ser

Thr

Phe 105

Phe

Ser

Ser

Phe

Leu 110

Glu

Leu

Leu

Lys

His 115

Leu

Val

Glu

Met

Asp 120

Thr

Asp

Gin

Leu

Lys 125

Leu

Tyr

Glu

Glu

Pro 130

Leu

Ser

Lys

Leu

Ile 135

Lys

Thr

Leu

Phe

Pro 140

Phe

Glu

Ala

Glu

Al a 145

Tyr

Arg

Asn

Ile

Glu 150

Pro

Val

Tyr

Leu

Asn 155

Met

Leu

Leu

Glu

Lys 160

• · • ·· ·

- 192 -

Leu

Cys

Val

Met

Phe 165

Glu

Asp

Gly

Val

Leu 170

Met

Arg

Leu

Lys

Ser 175

Asp

Leu

Leu

Lys

Ala 180

Ala

Leu

Cys

His

Leu 185

Leu

Gin

Tyr

Phe

Leu 190

Lys

Phe

Val

Pro

Ala 195

Gly

Tyr

Glu

Ser

Ala 200

Leu

Gin

Val

Arg

Lys 205

Val

Tyr

Val

Arg

Asn 210

Ile

Cys

Lys

Ala

Leu 215

Leu

Asp

Val

Leu

Gly 220

Ile

Glu

Val

Asp

Ala 225

Glu

Tyr

Leu

Leu

Gly 230

Pro

Leu

Tyr

Ala

Ala 235

Leu

Lys

Met

Glu

Ser 240

Met

Glu

Ile

Ile

Glu 245

Glu

Ile

Gin

Cys

Gin 250

Thr

Gin

Gin

Glu

Asn 255

Leu

Ser

Ser

Asn

Ser 260

Asp

Gly

Ile

Ser

Pro 265

Lys

Arg

Arg

Arg

Leu 270

Ser

Ser

Ser

Leu

Asn 275

Pro

Ser

Lys

Arg

Ala 280

Pro

Lys

Gin

Thr

Glu 285

Glu

Ile

Lys

His

Val 290

Asp

Met

Asn

Gin

Lys 295

Ser

Ile

Leu

Trp

Ser 300

Ala

Leu

Lys

Gin

Lys 305

Ala

Glu

Ser

Leu

Gin 310

Ile

Ser

Leu

Glu

Tyr 315

Ser

Gly

Leu

Lys

Asn 320

Pro

Val

Ile

Glu

Met 325

Leu

Glu

Gly

Ile

Ala 330

Val

Val

Leu

Gin

Leu 335

Thr

Ala

Leu

Cys

Thr 340

Val

Hi s

Cys

Ser

His 345

Gin

Asn

Met

Asn

Cys 350

Arg

Thr

Phe

Lys

Asp 355

Cys

Gin

His

Lys

Ser 360

Lys

Lys

Lys

Pro

Ser 365

Val

Val

Ile

Thr

Trp 370

Met

Ser

Leu

Asp

Phe 375

Tyr

Thr

Lys

Val

Leu 380

Lys

Ser

Cys

Arg

Ser 365

Leu

Leu

Glu

Ser

Val 390

Gin

Lys

Leu

Asp

Leu 395

Glu

Ala

Thr

Ile

Asp 400

Lys

Val

Val

Lys

Ile 405

Tyr

Asp

Ala

Leu

Ile 410

Tyr

Met

Gin

Val

Asn 415

Ser

Ser

Phe

Glu

Asp 420

His

Ile

Leu

Glu

Asp 425

Leu

Cys

Gly

Met

Leu 430

Ser

Leu

Pro

Trp

Ile 435

Tyr

Ser

His

Ser

Asp 440

Asp

Gly

Cys

Leu

Lys 445

Leu

Thr

Thr

Phe

Ala 450

Ala

Asn

Leu

Leu

Thr 455

Leu

Ser

Cys

Arg

Ile 460

Ser

Asp

Ser

Tyr

Ser 465

Pro

Gin

Ala

Gin

Ser 470

Arg

Cys

Val

Phe

Leu 475

Leu

Thr

Leu

Phe

Pro 480

Arg

Arg

Ile

Phe

Leu 485

Glu

Trp

Arg

Thr

Ala 490

Val

Tyr

Asn

Trp

Ala 495

Leu

Gin

Ser

Ser

His 500

Glu

Val

Ile

Arg

Ala 505

Ser

Cys

Val

Ser

Gly 510

Phe

Phe

• ·

- 193 -

Ile

Leu

Leu 515

Gin

Gin

Gin

Asn

Ser 520

Cys

Asn

Arg

Val

Pro 525

Lys

Ile

Leu

Ile

Asp 530

Lys

Val

Lys

Asp

Asp 535

Ser

Asp

Ile

Val

Lys 540

Lys

Glu

Phe

Ala

Ser 545

Ile

Leu

Gly

Gin

Leu 550

Val

Cys

Thr

Leu

His 555

Gly

Met

Phe

Tyr

Leu 560

Thr

Ser

Ser

Leu

Thr 565

Glu

Pro

Phe

Ser

Glu 570

His

Gly

His

Val

Asp 575

Leu

Phe

Cys

Arg

Asn 580

Leu

Lys

Ala

Thr

Ser 585

Gin

His

Glu

Cys

Ser 590

Ser

Ser

Gin

Leu

Lys 555

Ala

Ser

Val

Cys

Lys 600

Pro

Phe

Leu

Phe

Leu 605

Leu

Lys

Lys

Lys

Ile 610

Pro

Ser

Pro

Val

Lys 615

Leu

Ala

Phe

Ile

Asp 620

Asn

Leu

His

His

Leu 625

Cys

Lys

His

Leu

Asp 630

Phe

Arg

Glu

Asp

Glu 635

Thr

Asp

Val

Lys

Ala 640

Val

Leu

Gly

Thr

Leu 645

Leu

Asn

Leu

Met

Glu 650

Asp

Pro

Asp

Lys

Asp 655

Val

Arg

Val

Ala

Phe 660

Ser

Gly

Asn

Ile

Lys 665

His

Ile

Leu

Glu

Ser 670

Leu

Asp

Ser

Glu

Asp 675

Gly

Phe

Ile

Lys

Glu 680

Leu

Phe

Val

Leu

Arg 685

Met

Ly6

Glu

Ala

Tyr 690

Thr

His

Ala

Gin

Ile 695

Ser

Arg

Asn

Asn

Glu 700

Leu

Lys

Asp

Thr

Leu 705

Ile

Leu

Thr

Thr

Gly 710

Asp

Ile

Gly

Arg

Ala 715

Ala

Lys

Gly

Asp

Leu 720

Val

Pro

Phe

Ala

Leu 725

Leu

His

Leu

Leu

His 730

Cys

Leu

Leu

Ser

Lys 735

Ser

Ala

Ser

Val

Ser 740

Gly

Ala

Ala

Tyr

Thr 745

Glu

Ile

Arg

Ala

Leu 750

Val

Ala

Ala

Lys

Ser 755

Val

Lys

Leu

Gin

Ser 760

Phe

Phe

Ser

Gin

Tyr 765

Lys

Lys

Pro

Ile

Cys 770

Gin

Phe

Leu

Val

Glu 775

Ser

Leu

His

Ser

Ser 780

Gin

Met

Thr

Ala

Leu 785

Pro

Asn

Thr

Pro

Cys 790

Gin

Asn

Ala

Asp

Val 795

Arg

Lys

Gin

Asp

Val 800

Ala

His

Gin

Arg

Glu 805

Met

Ala

Leu

Asn

Thr 810

Leu

Ser

Glu

Ile

Ala 815

Asn

Val

Phe

Asp

Phe 820

Pro

Asp

Leu

Asn

Arg 825

Phe

Leu

Thr

Arg

Thr 830

Leu

Gin

Val

Leu

Leu 835

Pro

Asp

Leu

Ala

Ala 640

Lys

Ala

Ser

Pro

Ala 845

Ala

Ser

Ala

Leu

Ile 850

Arg

Thr

Leu

Gly

Lys 855

Gin

Leu

Asn

Val

Asn 860

Arg

Arg

Glu

Ile

• · · ·

	- 194 -	• · • · ·	« « · '
Leu Ile Asn Asn Phe Lys	Tyr Ile Phe Ser His Leu	Val Cys Ser	Cys
665 870	875		880
Ser Lys Asp Glu Leu Glu	Arg Ala Leu His Tyr Leu	Lys Asn Glu	Thr
885	890	895
Glu Ile Glu Leu Gly Ser	Leu Leu Arg Gin Asp Phe	Gin Gly Leu	His
900	905	910
Asn Glu Leu Leu Leu Arg	Ile Gly Glu His Tyr Gin	Gin Val Phe	Asn
915	920	925
Gly Leu Ser Ile Leu Ala	Ser Phe Ala Ser Ser Asp	Asp Pro Tyr	Gin
930	935 940
Gly Pro Arg Asp Ile Ile	Ser Pro Glu Leu Met Ala	Asp Tyr Leu	Gin
945 950	955		960
Pro Lys Leu Leu Gly Ile	Leu Ala Phe Phe Asn Met	Gin Leu Leu	Ser
965	970	975
Ser Ser Val Gly Ile Glu	Asp Lys Lys Met Ala Leu	Asn Ser Leu	Met
980	985	990
Ser Leu Met Lys Leu Met	Gly Pro Lys His Val Ser	Ser Val Arg	Val
995	1000	1005
Lys Met Met Thr Thr Leu	Arg Thr Gly Leu Arg Phe	Lys Asp Asp	Phe
1010	1015 1020
Pro Glu Leu Cys Cys Arg	Ala Trp Asp Cys Phe Val	Arg Cys Leu	Asp
1025 1030 1035		1040
His Ala Cys Leu Gly Ser	Leu Leu Ser His Val Ile	Val Ala Leu	Leu
1045	1050	1055
Pro Leu Ile His Ile Gin	Pro Lys Glu Thr Ala Ala	Ile Phe His	Tyr
1060	1065	1070
Leu Ile Ile Glu Asn Arg	Asp Ala Val Gin Asp Phe	Leu His Glu	Ile
1075	1080	1085
Tyr Phe Leu Pro Asp His	Pro Glu Leu Lys Lys Ile	Lys Ala Val	Leu
1090	1095 1100
Gin Glu Tyr Arg Lys Glu	Thr Ser Glu Ser Thr Asp	Leu Gin Thr	Thr
1105 HIC	1115		1120
Leu Gin Leu Ser Met Lys	Ala Ile Gin His Glu Asn	Val Asp Val	Arg
1125	1130	1135
Ile His Ala Leu Thr Ser	Leu Lys Glu Thr Leu Tyr	Lys Asn Gin	Glu
1140	1145	1150
Lys Leu Ile Lys Tyr Ala	Thr Asp Ser Glu Thr Val	Glu Pro Ile	Ile
1155	1160	1165
Ser Gin Leu Val Thr Val	Leu Leu Lys Gly Cys Gin	Asp Ala Asn	Ser
1170	1175 1180
Gin Ala Arg Leu Leu Cys	Gly Glu Cys Leu Gly Glu	Leu Gly Ala	Ile
1185 1190	1195		1200
Asp Pro Gly Arg Leu Asp	Phe Ser Thr Thr Glu Thr	Gin Gly Lys	Asp
1205	1210	1215

• · · ·

Phe	Thr Phe	Val Thr Gly 1220	Val	Glu Asp Ser Ser Phe Ala Tyr Gly Leu
1225	1230
Leu	Met Glu	Leu Thr Arg	Ala	Tyr Leu Ala Tyr Ala	Asp Asn Ser Arg
	1235		1240	1245
Ala	Gin Asp	Ser Ala Ala	Tyr	Ala Ile Gin Glu Leu	Leu Ser Ile Tyr
	1250		1255 1260
Asp	Cys Arg	Glu Met Glu	Thr	Asn Gly Pro Gly His	Gin Leu Trp Arg
1265	1270	1275	1280
Arg	Phe Pro	Glu His Val	Arg	Glu Ile Leu Glu Pro	His Leu Asn Thr
		1285		1290	1295
Arg	Tyr Lys	Ser Ser Gin	Lys	Ser Thr Asp Trp Ser	Gly Val Lys Lys
		1300		1305	1310
Pro	Ile Tyr	Leu Ser Lys	Leu	Gly Ser Asn Phe Ala	Glu Trp Ser Ala
	1315		1320	1325
Ser	Trp Ala	Gly Tyr Leu	Ile	Thi Lys Val Arg His	Asp Leu Ala Ser
	1330		1335	i 1340
Lys	Ile Phe	Thr Cys Cys	Ser	Ile Met Met Lys His	Asp Phe Lys Val
1345	1350	1355	1360
Thr	Ile Tyr	Leu Leu Pro	His	Ile Leu Val Tyr Val	Leu Leu Gly Cys
		1365		1370	1375
Asn	Gin Glu	Asp Gin Gin	Glu	Val Tyr Ala Glu Ile	Met Ala Val Leu
		1380		1385	1390
Lys	His Asp	Asp Gin His	Thr	Ile Asn Thr Gin Asp	Ile Ala Ser Asp
	1395			1400	1405
Leu	Cys Gin	Leu Ser Thr	Gin	Thr Val Phe Ser Met	Leu Asp His Leu
	1410		1415	i 1420
Thr	Gin Trp	Ala Arg His	Lys	Phe Gin Ala Leu Lys	Ala Glu Lys Cys
1425	1430	1435	1440
Pro	His Ser	Lys Ser Asn	Arg	Asn Ly6 Val Asp Ser	Met Val Ser Thr
		1445		1450	1455
Val	Asp Tyr	Glu Asp Tyr	Gin	Ser Val Thr Arg Phe	Leu Asp Leu Ile
		1460		1465	1470
Pro	Gin Asp	Thr Leu Ala	Val	Ala Ser Phe Arg Ser	Lys Ala Tyr Thr
	1475		1480	1485
Arg	Ala Val	Met His Phe	Glu	Ser Phe Ile Thr Glu	Lys Lys Gin Asn
	1490		1495	i 1500
Ile	Gin Glu	His Leu Gly	Phe	Leu Gin Lys Leu Tyr	Ala Ala Met His
1505	1510	1515	1520
Glu	Pro Asp.	Gly Val Ala	Gly	Val Ser Ala Ile Arg	Lys Ala Glu Pro
		1525		1530	1535
Ser	Leu Lys	Glu Gin Ile	Leu	Glu His Glu Ser Leu	Gly Leu Leu Arg
		1540		1545	1550 .
Asp	Ala Thr	Ala Cys Tyr	Asp	Arg Ala Ile Gin Leu	Glu Pro Asp Gin
	1555		1560	1565

• · ♦ · • · · • · · • · ·

- 196 - .....

Ile	Ile His 1570	Tyr	His	Gly Val Val 1575	Lys	Ser Met Leu Gly Leu Gly 1580	Gin
Leu	Ser Thr	Val	Ile	Thr Gin Val	Asn	Gly Val His Ala Asn Arg	Ser
1565			1590		1595	1600
Glu	Trp Thr	Asp	Glu	Leu Asn Thr	Tyr	Arg Val Glu Ala Ala Trp	Lys
			1605		1610 1615
Leu	Ser Gin	Trp	Asp	Leu Val Glu	Asn	Tyr Leu Ala Ala Asp Gly	Lys
		1620		1625 1630
Ser	Thr Thr	Trp	Ser	Val Arg Leu	Gly	Gin Leu Leu Leu Ser Ala	Lys
	1635		1640	1645
Lys	Arg Asp	Ile	Thr	Ala Phe Tyr	Asp	Ser Leu Lys Leu Val Arg	Ala
	1650			1655		1660
Glu	Gin Ile	Val	Pro	Leu Ser Ala	Ala	Ser Phe Glu Arg Gly Ser	Tyr
1665			1670		1675	1680
Gin	Arg Gly	Tyr	Glu	Tyr Ile Val	Arg	Leu His Met Leu Cys Glu	Leu
			1685		1690 1695
Glu	His Ser	Ile	Lys	Pro Leu Phe	Gin	His Ser Pro Gly Asp Ser	Ser
		1700		1705	i 1710
Gin	Glu Asp	Ser	Leu	Asn Trp Val	Ala	Arg Leu Glu Met Thr Gin	Asn
	1715		1720	1725
Ser	Tyr Arg	Ala	Lys	Glu Pro Ile	Leu	Ala Leu Arg Arg Ala Leu	Leu
	1730			1735		1740
Ser	Leu Asn	Lys	Arg	Pro Asp Tyr	Asn	Glu Met Val Gly Glu Cys	Trp
1745			1750		1755	1760
Leu	Gin Ser	Ala	Arg	Val Ala Arg	Lys	Ala Gly His His Gin Thr	Ala
			1765		1770 177S
Tyr	Asn Ala	Leu	Leu	Asn Ala Gly	Glu	Ser Arg Leu Ala Glu Leu	Tyr
		1780		1785	i 1790
Val	Glu Arg	Ala	Lys	Trp Leu Trp	Ser	Lys Gly Asp Val His Gin	Ala
	1795		1800	1805
Leu	Ile Val	Leu	Gin	Lys Gly Val	Glu	Leu Cys Phe Pro Glu Asn	Glu
	1810			1815		1820
Thr	Pro Pro	Glu	Gly	Lys Asn Met	Leu	Ile His Gly Arg Ala Met	Leu
1825			1830		1835	1840
Leu	Val Gly	Arg	Phe	Met Glu Glu	Thr	Ala Asn Phe Glu Ser Asn	Ala
			1845		1850 1855
Ile	Met Lys	Lys	Tyr	Lys Asp Val	Thr	Ala Cys Leu Pro Glu Trp	Glu
		1860		1865	ί 1870
Asp	Gly His	Phe	Tyr	Leu Ala Lys	Tyr	Tyr Asp Lys Leu Met Pro	Met
	1875			1880	1885
Val	Thr Asp Asn	Lys	Met Glu Lys	Gin	Gly Asp Leu Ile Arg Tyr	Ile
	1890			1895		1900

Val Leu His Phe Gly Arg Ser Leu Gin Tyr Gly Asn Gin Phe Ile Tyr 1905 1910 1915 1920 • ·

Gin	Ser	Met	Pro	Arg Met 1925	Leu	Thr	Leu Trp Leu Asp Tyr Gly Thr Lys
1930	1935
Ala	Tyr	Glu	Trp	Glu Lys	Ala	Gly	Arg Ser Asp Arg	Val Gin Met Arg
			1940			1945	1950
Asn	Asp	Leu	Gly	Lys Ile	Asn	Lys	Val Ile Thr Glu	His Thr Asn Tyr
		1955			1960	1965
Leu	Ala	Pro	Tyr	Gin Phe	Leu	Thr	Ala Phe Ser Gin	Leu Ile Ser Arg
	1970			1975	1980
Ile	Cys	His	Ser	His Asp	Glu	Val	Phe Val Val Leu	Met Glu Ile Ile
1985			1990		1995	2000
Ala	Lys	Val	Phe	Leu Ala	Tyr	Pro	Gin Gin Ala Met	Trp Met Met Thr
				2005			2010	2015
Ala	Val	Ser	Lys	Ser Ser	Tyr	Pro	Met Arg Val Asn	Arg Cys Lys Glu
			2020			2025	2030
Ile	Leu	Asn	Lys	Ala Ile	His	Met	Lys Lys Ser Leu	Glu Lys Phe Val
		2035			2040	2045
Gly	Asp	Ala	Thr	Arg Leu	Thr	Asp	Lys Leu Leu Glu	Leu Cys Asn Lys
	2050			2055	2060
Pro	Val	Asp	Gly	Ser Ser	Ser	Thr	Leu Ser Met Ser	Thr His Phe Lys
2065			2070		2075	2080
Met	Leu	Lys	Lys	Leu Val	Glu	Glu	Ala Thr Phe Ser	Glu Ile Leu Ile
				2085			2090	2095
Pro	Leu	Gin	Ser	Val Met	Ile	Pro	Thr Leu Pro Ser	Ile Leu Gly Thr
			2100			2105	2110
His	Ala	Asn	His	Ala Ser	His	Glu	Pro Phe Pro Gly	His Trp Ala Tyr
		2115			2120	2125
Ile	Ala	Gly	Phe	Asp Asp	Met	Val	Glu Ile Leu Ala	Ser Leu Gin Lys
	2130			2135	2140
Pro	Lys	Lys	Ile	Ser Leu	Lys	Gly	Ser Asp Gly Lys	Phe Tyr Ile Met
2145			2150		2155	2160
Met	Cys	Lys	Pro	Lys Asp	Asp	Leu	Arg Lys Asp Cys	Arg Leu Met Glu
				2165			2170	2175
Phe	Asn	Ser	Leu	Ile Asn	Lys	Cys	Leu Arg Lys Asp	Ala Glu Ser Arg
			2180			2185	2190
Arg	Arg	Glu	Leu	His Ile	Arg	Thr	Tyr Ala Val Ile	Pro Leu Asn Asp
		2195	1			2200	2205
Glu	Cys	Gly	Ile	Ile Glu	Trp	Val	Asn Asn Thr Ala	Gly Leu Arg Pro
	221C	)			2215	2220
Ile	Leu	Thr	Lys	Leu Tyr	Lys	Glu	Lys Gly Val Tyr	Met Thr Gly Lys
2225			2230		2235	2240
Glu	Leu	Arg	Gin	Cys Met	Leu	Pro	Lys Ser Ala Ala	Leu Ser Glu Lys
				2245			2250	2255
Leu	Lys	Val	Phe	Arg Glu	Phe	Leu	Leu Pro Arg His	Pro Pro Ile Phe
			2260			2265	2270

198

His	Glu	Trp Phe 2275	Leu	Arg Thr Phe Pro Asp 2280	Pro Thr Ser Trp Tyr 2285	Ser
Ser	Arg	Ser Ala	Tyr	Cys Arg Ser Thr Ala	Val Met Ser Met Val	Gly
	2290		2295	2300
Tyr	Ile	Leu Gly	Leu	Gly Asp Arg His Gly	Glu Asn Ile Leu Phe	Asp
2305			2310	2315	2320
Ser	Leu	Thr Gly	Glu	Cys Val His Val Asp	Phe Asn Cys Leu Phe	Asn
			2325 2330 2335
Lys	Gly	Glu Thr	Phe	Glu Val Pro Glu Ile	Val Pro Phe Arg Leu	Thr
		2340	2345	2350
His	Asn	Met Val	Asn	Gly Met Gly Pro Met	Gly Thr Glu Gly Leu	Phe
		2355		2360	2365
Arg	Arg	Ala Cys	Glu	Val Thr Met Arg Leu	Met Arg Asp Gin Arg	Glu
	2370		2375	2380
Pro	Leu	Met Ser	Val	Leu Lys Thr Phe Leu	His Asp Pro Leu Val	Glu
2385			2390	2395	2400
Trp	Ser	Lys Pro	Val	Lys Gly His Ser Lys	Ala Pro Leu Asn Glu	Thr
			2405	i 2410 2415
Gly	Glu	Val Val	Asn	Glu Lys Ala Lys Thr	His Val Leu Asp Ile	Glu
		2420	2425	2430
Gin	Arg	Leu Gin	Gly	Val Ile Lys Thr Arg	Asn Arg Val Thr Gly	Leu
		2435		2440	2445
Pro	Leu	Ser Ile	Glu	Gly His Val His Tyr	Leu Ile Gin Glu Ala	Thr
	2450		2455	2460
Asp	Glu	Asn Leu	Leu	Cys Gin Met Tyr Leu	Gly Trp Thr Pro Tyr	Met
2465			2470	2475	2480

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:34:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 9385 bázových párů (B) TYP: nukleová kyselina (C) ŘETĚZCOVOST: jeden řetězec (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (v) TYP FRAGMENTU: lineární (ix) CHARAKTERISTICKÝ ZNAK:

(A) JMÉNO/KLÍČ: CDS (B) UMÍSTĚNÍ: 190..9357 (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 34:

GCGAGAGGAG TCGGGATCTG CGCTGCAGCC ACCGCCGCGG TTGATACTAC TTTGACCTTC 60

CGAGTGCAGT GAGGCATACA TCACAATTrG GAATTATGCA TTGGTTTATC AATTTACTTG 120

TTTATTGTCA CCCTGCTGCC CAGATATGAC TTCATGAGGA CAGTGATGTG TGTTCTGAAA 180

• · · • ·

- 199

TTGTGAACC ATG AGT CTA GTA CTT AAT GAT CTG CTT ATC TGC TGC CGT 22 8

Met Ser Leu Val Leu Asn Asp Leu Leu Ile Cys Cys Arg

10

-JOZ-

CAA Gin

CTA Leu 15

GAA Glu

CAT GAT AGA

GCT ACA GAA CGA AAG AAA GAA GTT GAG AAA

276

His

Asp Arg

Ala 20

Thr

Glu

Arg

Lys

Lys 25

Glu

Val

Glu

Lys

TTT

AAG

CGC

CTG

ATT

CGA

GAT

CCT

GAA

ACA

ATT

AAA

CAT

CTA

GAT

CGG

324

Phe

Lys

Arg

Leu

Ile

Arg

Asp

Pro

Glu

Thr

Ile

Lys

His

Leu

Asp

Arg

30

35

40

45

CAT

TCA

GAT

TCC

AAA

CAA

GGA

AAA

TAT

TTG

AAT

TGG

GAT

GCT

GTT

TTT

372

His

Ser

Asp

Ser

Lys

Gin

Gly

Lys

Tyr

Leu

Asn

Trp

Asp

Ala

Val

Phe

50

55

60

AGA

TTT

TTA

CAG

AAA

TAT

ATT

CAG

AAA

GAA

ACA

GAA

TGT

CTG

AGA

ATA

420

Arg

Phe

Leu

Gin

Lys

Tyr

Ile

Gin

Lys

Glu

Thr

Glu

Cys

Leu

Arg

Ile

65

70

75

GCA

AAA

CCA

AAT

GTA

TCA

GCC

TCA

ACA

CAA

GCC

TCC

AGG

CAG

AAA

AAG

468

Ala

Lys

Pro

Asn

Val

Ser

Ala

Ser

Thr

Gin

Ala

Ser

Arg

Gin

Lys

Lys

80

85

90

ATG

CAG

GAA

ATC

AGT

AGT

TTG

GTC

AAA

TAC

TTC

ATC

AAA

TGT

GCA

AAC

516

Met

Gin

Glu

Ile

Ser

Ser

Leu

Val

Lys

Tyr

Phe

Ile

Lys

Cys

Ala

Asn

95

100

105

AGA

AGA

GCA

CCT

AGG

CTA

AAA

TGT

CAA

GAA

CTC

TTA

AAT

TAT

ATC

ATG

564

Arg

Arg

Ala

Pro

Arg

Leu

Lys

Cys

Gin

Glu

Leu

Leu

Asn

Tyr

Ile

Met

110

115

120

125

GAT

ACA

GTG

AAA

GAT

TCA

TCT

AAT

GGT

GCT

ATT

TAC

GGA

GCT

GAT

TGT

612

Asp

Thr

Val

Lys

Asp

Ser

Ser

Asn

Gly

Ala

Ile

Tyr

Gly

Ala

Asp

Cys

130

135

140

AGC

AAC

ATA

CTA

CTC

AAA

GAC

ATT

CTT

TCT

GTG

AGA

AAA

TAC

TGG

TGT

660

Ser

Asn

Ile

Leu

Leu

Lys

Asp

Ile

Leu

Ser

Val

Arg

Lys

Tyr

Trp

Cys

145

150

155

GAA

ATA

TCT

CAG

CAA

CAG

TGG

TTA

GAA

TTG

TTC

TCT

GTG

TAC

TTC

AGG

708

Glu

Ile

Ser

Gin

Gin

Gin

Trp

Leu

Glu

Leu

Phe

Ser

Val

Tyr

Phe

Arg

160

165

170

CTC

TAT

CTG

AAA

CCT

TCA

CAA

GAT

GTT

CAT

AGA

GTT

TTA

GTG

GCT

AGA

756

Leu

Tyr

Leu

Lys

Pro

Ser

Gin

Asp

Val

His

Arg

Val

Leu

Val

Ala

Arg

175

180

185

ATA

ATT

CAT

GCT

GTT

ACC

AAA

GGA

TGC

TGT

TCT

CAG

ACT

GAC

GGA

TTA

804

Ile

Ile

His

Ala

Val

Thr

Lys

Gly

Cys

Cys

Ser

Gin

Thr

Asp

Gly

Leu

190

195

200

205

AAT

TCC

AAA

TTT

TTG

GAC

TTT

TTT

TCC

AAG

GCT

ATT

CAG

TGT

GCG

AGA

852

Asn

Ser

Lys

Phe

Leu

Asp

Phe

Phe

Ser

Lys

Ala

Ile

Gin

Cys

Ala

Arg

210

215

220

CAA

GAA

AAG

AGC

TCT

TCA

GGT

CTA

AAT

CAT

ATC

TTA

GCA

GCT

CTT

ACT

900

Gin

Glu

Lys

Ser

Ser

Ser

Gly

Leu

Asn

His

Ile

Leu

Ala

Ala

Leu

Thr

225

230

235

ATC

TTC

CTC

AAG

ACT

TTG

GCT

GTC

AAC

TTT

CGA

ATT

CGA

GTG

TGT

GAA

940

Ile

Phe

Leu

Lys

Thr

Leu

Ala

Val

Asn

Phe

Arg

Ile

Arg

Val

Cys

Glu

240

245

2S0

TTA

GGA

GAT

GAA

ATT

CTT

CCC

ACT

TTG

CTT

TAT

ATT

TGG

ACT

CAA

CAT

996

Leu

Gly

Asp

Glu

Ile

Leu

Pro

Thr

Leu

Leu

Tyr

Ile

Trp

Thr

Gin

His

255

260

265

• · · · · ·

200

• • · ·

• · • ·

• · ··· ····

AGG

CTT

AAT

GAT

TCT

TTA

AAA

GAA

GTC

ATT

ATT

GAA

TTA

TTT

CAA

CTG

1044

Arg 270

Leu

Asn

Asp

Ser

Leu 275

Lys

Glu

Val

Ile

Ile 280

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu 285

CAA

ATT

TAT

ATC

CAT

CAT

CCG

AAA

GGA

GCC

AAA

ACC

CAA

GAA

AAA

GGT

1092

Gin

Ile

Tyr

Ile

His 290

His

Pro

Lys

Gly

Ala 295

Lys

Thr

Gin

Glu

Lys 300

Gly

GCT

TAT

GAA

TCA

ACA

AAA

TGG

AGA

AGT

ATT

TTA

TAC

AAC

TTA

TAT

GAT

1140

Ala

Tyr

Glu

Ser 305

Thr

Lys

Trp

Arg

Ser 310

Ile

Leu

Tyr

Asn

Leu 315

Tyr

Asp

CTG

CTA

GTG

AAT

GAG

ATA

AGT

CAT

ATA

GGA

AGT

AGA

GGA

AAG

TAT

TCT

1188

Leu

Leu

Val 320

Asn

Glu

Ile

Ser

His 325

Ile

Gly

Ser

Arg

Gly 330

Lys

Tyr

Ser

TCA

GGA

TTT

CGT

AAT

ATT

GCC

GTC

AAA

GAA.

AAT

TTG

ATT

GAA

TTG

ATG

1236

Ser

Gly 33S

Phe

Arg

Asn

Ile

Ala 340

Val

Lys

Glu

Asn

Leu 345

Ile

Glu

Leu

Met

GCA

GAT

ATC

TGT

CAC

CAG

GTT

TTT

AAT

GAA

GAT

ACC

AGA

TCC

TTG

GAG

1284

Ala 350

Asp

Ile

Cys

His

Gin 355

Val

Phe

Asn

Glu

Asp 360

Thr

Arg

Ser

Leu

Glu 365

ATT

TCT

CAA

TCT

TAC

ACT

ACT

ACA

CAA

AGA

GAA

TCT

AGT

GAT

TAC

AGT

1332

Ile

Ser

Gin

Ser

Tyr 370

Thr

Thr

Thr

Gin

Arg 375

Glu

Ser

Ser

Asp

Tyr 380

Ser

GTC

CCT

TGC

AAA

AGG

AAG

AAA

ATA

GAA

CTA

GGC

TGG

GAA

GTA

ATA

AAA

1380

Val

Pro

Cys

Lys 385

Arg

Lys

Lys

Ile

Glu 390

Leu

Gly

Trp

Glu

Val 395

Ile

Lys

GAT

CAC

CTT

CAG

AAG

TCA

CAG

AAT

GAT

TTT

GAT

CTT

GTG

CCT

TGG

CTA

1428

Αερ

His

Leu 400

Gin

Lys

Ser

Gin

Asn 405

Asp

Phe

Asp

Leu

Val 410

Pro

Trp

Leu

CAG

ATT

GCA

ACC

CAA

TTA

ATA

TCA

AAG

TAT

CCT

GCA

AGT

TTA

CCT

AAC

1476

Gin

Ile 415

Ala

Thr

Gin

Leu

Ile 420

Ser

Lys

Tyr

Pro

Ala 425

Ser

Leu

Pro

Asn

TGT

GAG

CTG

TCT

CCA

TTA

CTG

ATG

ATA

CTA

TCT

CAG

CTT

CTA

CCC

CAA

1524

Cys 430

Glu

Leu

Ser

Pro

Leu 435

Leu

Met

Ile

Leu

Ser 440

Gin

Leu

Leu

Pro

Gin 445

CAG

CGA

CAT

GGG

GAA

CGT

ACA

CCA

TAT

GTG

TTA

CGA

TGC

CTT

ACG

GAA

1572

Gin

Arg

His

Gly

Glu 450

Arg

Thr

Pro

Tyr

Val 455

Leu

Arg

Cys

Leu

Thr 460

Glu

GTT

GCA

TTG

TGT

CAA

GAC

AAG

AGG

TCA

AAC

CTA

GAA

AGC

TCA

CAA

AAG

1620

Val

Ala

Leu

Cys 465

Gin

Asp

Lys

Arg

Ser 470

Asn

Leu

Glu

Ser

Ser 475

Gin

Lys

TCA

GAT

TTA

TTA

AAA

CTC

TGG

AAT

AAA

ATT

TGG

TGT

ATT

ACC

TTT

CGT

1668

Ser

Asp

Leu 4Θ0

Leu

Lys

Leu

Trp

Asn 485

Lys

Ile

Trp

Cys

Ile 490

Thr

Phe

Arg

GGT

ATA

AGT

TCT

GAG

CAA

ATA

CAA

GCT

GAA

AAC

TTT

GGC

TTA

CTT

GGA

1716

Gly

Ile 495

Ser

Ser

Glu

Gin

Ile 500

Gin

Ala

Glu

Asn

Phe 505

Gly

Leu

Leu

Gly

GCC

ATA

ATT

CAG

GGT

AGT

TTA

GTT

GAG

GTT

GAC

AGA

GAA

TTC

TGG

AAG

1764

Ala 510

Ile

Ile

Gin

Gly

Ser 515

Leu

Val

Glu

Val

Asp 520

Arg

Glu

Phe

Trp

Lys 525

TTA

TTT

ACT

GGG

TCA

GCC

TGC

AGA

CCT

TCA

TGT

CCT

GCA

GTA

TGC

TGT

1812

Leu

Phe

Thr

Gly

Ser 530

Ala

Cys

Arg

Pro

Ser 535

Cys

Pro

Ala

Val

Cys 540

Cys

201 • · · · ·

TTG Leu

ACT Thr

TTG GCA CTG ACC ACC AGT ATA GTT CCA GGA GCG GTA AAA

ATG Met

1860

Leu Ala 545

Leu Thr

Thr

Ser

Ile 550

Val

Pro

Gly

Ala

Val 555

Lys

GGA

ATA

GAG

CAA

AAT

ATG

TGT

GAA

GTA

AAT

AGA

AGC

TTT

TCT

TTA

AAG

1908

Gly

Ile

Glu

Gin

Asn

Met

Cys

Glu

Val

Asn

Arg

Ser

Phe

Ser

Leu

Lys

560

565

570

GAA

TCA

ATA

ATG

AAA

TGG

CTC

TTA

TTC

TAT

CAG

TTA

GAG

GGT

GAC

TTA

1956

Glu

Ser

Ile

Met

Lys

Trp

Leu

Leu

Phe

Tyr

Gin

Leu

Glu

Gly

Asp

Leu

575

560

585

GAA

AAT

AGC

ACA

GAA

GTG

CCT

CCA

ATT

CTT

CAC

AGT

AAT

TTT

CCT

CAT

2004

Glu

Asn

Ser

Thr

Glu

Val

Pro

Pro

Ile

Leu

His

Ser

Asn

Phe

Pro

His

590

595

600

605

CTT

GTA

CTG

GAG

AAA

ATT

CTT

GTG

AGT

CTC

ACT

ATG

AAA

AAC

TGT

AAA

2052

Leu

Val

Leu

Glu

Lys

Ile

Leu

Val

Ser

Leu

Thr

Met

Lys

Asn

Cys

Lys

610

615

620

GCT

GCA

ATG

AAT

TTT

TTC

CAA

AGC

GTG

CCA

GAA

TGT

GAA

CAC

CAC

CAA

2100

Ala

Ala

Met

Asn

Phe

Phe

Gin

Ser

Val

Pro

Glu

Cys

Glu

His

His

Gin

625

630

635

AAA

GAT

AAA

GAA

GAA

CTT

TCA

TTC

TCA

GAA

GTA

GAA

GAA

CTA

TTT

CTT

2148

Lys

Asp

Lys

Glu

Glu

Leu

Ser

Phe

Ser

Glu

Val

Glu

Glu

Leu

Phe

Leu

640

645

650

CAG

ACA

ACT

TTT

GAC

AAG

ATG

GAC

TTT

TTA

ACC

ATT

GTG

AGA

GAA

TGT

2196

Gin

Thr

Thr

Phe

Asp

Lys

Met

Asp

Phe

Leu

Thr

Ile

Val

Arg

Glu

Cys

655

660

665

GGT

ATA

GAA

AAG

CAC

CAG

TCC

AGT

ATT

GGC

TTC

TCT

GTC

CAC

CAG

AAT

2244

Gly

Ile

Glu

Lys

His

Gin

Ser

Ser

Ile

Gly

Phe

Ser

Val

His

Gin

Asn

670

675

680

685

CTC

AAG

GAA

TCA

CTG

GAT

CGC

TGT

CTT

CTG

GGA

TTA

TCA

GAA

CAG

CTT

2292

Leu

Lys

Glu

Ser

Leu

Asp

Arg

Cys

Leu

Leu

Gly

Leu

Ser

Glu

Gin

Leu

690

695

700

CTG

AAT

AAT

TAC

TCA

TCT

GAG

ATT

ACA

AAT

TCA

GAA

ACT

CTT

GTC

CGG

2340

Leu

Asn

Asn

Tyr

Ser

Ser

Glu

Ile

Thr

Asn

Ser

Glu

Thr

Leu

Val

Arg

705

710

715

TGT

TCA

CGT

CTT

TTG

GTG

GGT

GTC

CTT

GGC

TGC

TAC

TGT

TAC

ATG

GGT

2388

Cys

Ser

Arg

Leu

Leu

Val

Gly

Val

Leu

Gly

Cy6

Tyr

Cys

Tyr

Met

Gly

720

725

730

GTA

ATA

GCT

GAA

GAG

GAA

GCA

TAT

AAG

TCA

GAA

TTA

TTC

CAG

AAA

GCC

2436

Val

Ile

Ala

Glu

Glu

Glu

Ala

Tyr

Lys

Ser

Glu

Leu

Phe

Gin

Lys

Ala

735

740

745

AAC

TCT

CTA

ATG

CAA

TGT

GCA

GGA

GAA

AGT

ATC

ACT

CTG

TTT

AAA

AAT

2484

Asn

Ser

Leu

Met

Gin

Cys

Ala

Gly

Glu

Ser

Ile

Thr

Leu

Phe

Lys

Asn

750

755

760

765

AAG

ACA

AAT

GAG

GAA

TTC

AGA

ATT

GGT

TCC

TTG

AGA

AAT

ATG

ATG

CAG

2532

Lys

Thr

Asn

Glu

Glu

Phe

Arg

Ile

Gly

Ser

Leu

Arg

Asn

Met

Met

Gin

770

775

780

CTA

TGT

ACA

CGT

TGC

TTG

AGC

AAC

TGT

ACC

AAG

AAG

AGT

CCA

AAT

AAG

2580

Leu

Cys

Thr

Arg

Cys

Leu

Ser

Asn

Cys

Thr

Lys

Lys

Ser

Pro

Asn

Lys

765

790

795

ATT

GCA

TCT

GGC

TTT

TTC

CTG

CGA

TTG

TTA

ACA

TCA

AAG

CTA

ATG

AAT

2628

Ile

Ala

Ser

Gly

Phe

Phe

Leu

Arg

Leu

Leu

Thr

Ser

Lys

Leu

Met

Asn

800 805 810 • · · · · ·

- 202 -

GAC ATT

GCA Ala

GAT ATT TGT AAA

AGT Ser

TTA GCA TCC TTC ATC

AAA Lys

AAG Lys

CCA Pro

2676

Asp

Ile 815

Asp

Ile

Cys

Lys 820

Leu

Ala

Ser

Phe 825

ile

TTT

GAC

CGT

GGA

GAA

GTA

GAA

TCA

ATG

GAA

GAT

GAT

ACT

AAT

GGA

AAT

2724

Phe 830

Asp

Arg

Gly

Glu

Val 835

Glu

Ser

Met

Glu

Asp 840

Asp

Thr

Asn

Gly

Asn 845

CTA

ATG

GAG

GTG

GAG

GAT

CAG

TCA

TCC

ATG

AAT

CTA

TTT

AAC

GAT

TAC

2772

Leu

Met

Glu

Val

Glu 850

Asp

Gin

Ser

Ser

Met 855

Asn

Leu

Phe

Asn

Asp 860

Tyr

CCT

GAT

AGT

AGT

GTT

AGT

GAT

GCA

AAC

GAA

CCT

GGA

GAG

AGC

CAA

AGT

2820

Pro

Asp

Ser

Sex- 865

Val

Ser

Asp

Ala

Asn 870

Glu

Pro

Gly

Glu

Ser 875

Gin

Ser

ACC

ATA

GGT

GCC

ATT

AAT

CCT

TTA

GCT

GAA

GAA

TAT

CTG

TCA

AAG

CAA

2868

Thr

Ile

Gly 880

Ala

Ile

Asn

Pro

Leu 885

Ala

Glu

Glu

Tyr

Leu 890

Ser

Lys

Gin

GAT

CTA

CTT

TTC

TTA

GAC

ATG

CTC

AAG

TTC

TTG

TGT

TTG

TGT

GTA

ACT

2916

Asp

Leu 895

Leu

Phe

Leu

Asp

Met 900

Leu

Lys

Phe

Leu

Cys 905

Leu

Cys

Val

Thr

ACT

GCT

CAG

ACC

AAT

ACT

GTG

TCC

TTT

AGG

GCA

GCT

GAT

ATT

CGG

AGG

2964

Thr 910

Ala

Gin

Thr

Asn

Thr 915

Val

Ser

Phe

Arg

Ala 920

Ala

Asp

Ile

Arg

Arg 925

AAA

TTG

TTA

ATG

TTA

ATT

GAT

TCT

AGC

ACG

CTA

GAA

CCT

ACC

AAA

TCC

3012

Lys

Leu

Leu

Met

Leu 930

Ile

Asp

Ser

Ser

Thr 935

Leu

Glu

Pro

Thr

Lys 940

Ser

CTC

CAC

CTG

CAT

ATG

TAT

CTA

ATG

CTT

TTA

AAG

GAG

CTT

CCT

GGA

GAA

3060

Leu

His

Leu

His 945

Met

Tyr

Leu

Met

Leu 950

Leu

Lys

Glu

Leu

Pro 955

Gly

Glu

GAG

TAC

CCC

TTG

CCA

ATG

GAA

GAT

GTT

CTT

GAA

CTT

CTG

AAA

CCA

CTA

3108

Glu

Tyr

Pro 960

Leu

Pro

Met

Glu

Asp 965

Val

Leu

Glu

Leu

Leu 970

Lys

Pro

Leu

TCC

AAT

GTG

TGT

TCT

TTG

TAT

CGT

CGT

GAC

CAA

GAT

GTT

TGT

AAA

ACT

3156

Ser

Asn 975

Val

Cys

Ser

Leu

Tyr 980

Arg

Arg

Asp

Gin

Asp 985

Val

Cys

Lys

Thr

ATT

TTA

AAC

CAT

GTC

CTT

CAT

GTA

GTG

AAA

AAC

CTA

GGT

CAA

AGC

AAT

3204

Ile 990

Leu

Asn

His

Val

Leu 995

His

Val

Val

Lys

Asn Leu 1000

Gly

Gin

Ser

Asn 1005

ATG

GAC

TCT

GAG

AAC

ACA

AGG

GAT

GCT

CAA

GGA

CAG

TTT

CTT

ACA

GTA

3252

Met

Asp

Ser

Glu

Asn Thr 1010

Arg

Asp

Ala

Gin Gly 1015

Gin

Phe

Leu

Thr Val 1020

ATT

GGA

GCA

TTT

TGG

CAT

CTA

ACA

AAG

GAG

AGG

AAA

TAT

ATA

TTC

TCT

3300

Ile

Gly

Ala

Phe Trp 1025

His

Leu

Thr

Lys Glu 1030

Arg

Lys

Tyr

Ile Phe 1035

Ser

GTA

AGA

ATG

GCC

CTA

GTA

AAT

TGC

CTT

AAA

ACT

TTG

CTT

GAG

GCT

GAT

3348

Val

Arg

Met Ala 1040

Leu

Val

Asn

Cys Leu 1045

Lys

Thr

Leu

Leu Glu 1050

Ala

Asp

CCT

TAT

TCA

AAA

TGG

GCC

ATT

CTT

AAT

GTA

ATG

GGA

AAA

GAC

TTT

CCT

3396

Pro

Tyr Ser 1055

Lys

Trp

Ala

Ile Leu 1050

Asn

Val

Met

Gly Lys 1065

Asp

Phe

Pro

GTA

AAT

GAA

GTA

TTT

ACA

CAA

TTT

CTT

GCT

GAC

AAT

CAT

CAC

CAA

GTT

3444

Val Asn 1070

Glu

Val

Phe

Thr Gin 1075

Phe

Leu

Ala

Asp Asn 1080

His

His

Gin

val 1085

- 203 -

CGC Arg

ATG Met

TTG Leu

GCT Ala

GCA GAG Ala Glu 1090

TCA Ser

ATC Ile

AAT Asn

AGA TTG Arg Leu 1095

TTC Phe

CAG Gin

GAC Asp

ACG AAG Thr Lys 1100

3492

GGA

GAT

TCT

TCC

AGG TTA

CTG

AAA

GCA

CTT CCT

TTG

AAG

CTT

CAG CAA

3540

Gly

Asp

Ser

Ser

Arg Leu

Leu

Lys

Ala

Leu Pro

Leu

Lys

Leu

Gin Gin

1105

1110

1115

ACA

GCT

TTT

GAA

AAT GCA

TAC

TTG

AAA

GCT CAG

GAA

GGA

ATG

AGA GAA

3588

Thr

Ala

Phe

Glu

Asn Ala

Tyr

Leu

Lys

Ala Gin

Glu

Gly

Met

Arg Glu

1120

1125

1130

ATG

TCC

CAT

AGT

GCT GAG

AAC

CCT

GAA

ACT TTG

GAT

GAA

ATT

TAT AAT

3636

Met

Ser

His

Ser

Ala Glu

Asn

Pro

Glu

Thr Leu

Asp

Glu

Ile

Tyr Asn

1135

1140

1145

AGA

AAA

TCT

GTT

TTA CTG

ACG

TTG

ATA

GCT GTG

GTT

TTA

TCC

TGT AGC

3684

Arg

Lys

Ser

Val

Leu Leu

Thr

Leu

Ile

Ala Val

Val

Leu

Ser

Cys Ser

115C

1155

1160

1165

CCT

ATC

TGC

GAA

AAA CAG

GCT

TTG

TTT

GCC CTG

TGT

AAA

TCT

GTG AAA

3732

Pro

Ile

Cys

Glu

Lys Gin

Ala

Leu

Phe

Ala Leu

Cys

Lys

Ser

Val Lys

1170

1175

1180

GAG

AAT

GGA

TTA

GAA CCT

CAC

CTT

GTG

AAA AAG

GTT

TTA

GAG

AAA GTT

3780

Glu

Asn

Gly

Leu

Glu Pro

His

Leu

Val

Lys Lys

Val

Leu

Glu

Lys Val

1185

1190

1195

TCT

GAA

ACT

TTT

GGA TAT

AGA

CGT

TTA

GAA GAC

TTT

ATG

GCA

TCT CAT

3828

Ser

Glu

Thr

Phe

Gly Tyr

Arg

Arg

Leu

Glu Asp

Phe

Met

Ala

Ser His

1200

1205

1210

TTA

GAT

TAT

CTG

GTT TTG

GAA

TGG

CTA

AAT CTT

CAA

GAT

ACT

GAA TAC

3876

Leu

Asp

Tyr

Leu

Val Leu

Glu

Trp

Leu

Asn Leu

Gin

Asp

Thr

Glu Tyr

1215

1220

1225

AAC

TTA

TCT

TCT

TTT CCT

TTT

ATT

TTA

TTA AAC

TAC

ACA

AAT

ATT GAG

3924

Asn

Leu

Ser

Ser

Phe Pro

Phe

Ile

Leu

Leu Asn

Tyr

Thr

Asn

Ile Glu

1230

1235

1240

1245

GAT

TTC

TAT

AGA

TCT TGT

TAT

AAG

GTT

TTG ATT

CCA

CAT

CTG

GTG ATT

3972

Asp

Phe

Tyr

Arg

Ser Cys

Tyr

Lys

Val

Leu Ile

Pro

His

Leu

Val Ile

1250

1255

1260

AGA

AGT

CAT

TTT

GAT GAG

GTG

AAG

TCC

ATT GCT

AAT

CAG

ATT

CAA GAG

4020

Arg

Ser

His

Phe

Asp Glu

Val

Lys

Ser

Ile Ala

Asn

Gin

Ile

Gin Glu

1265

1270

1275

GAC

TGG

AAA

AGT

CTT CTA

ACA

GAC

TGC

TTT CCA

AAG

ATT

CTT

GTA AAT

4068

Αερ

Trp

Lys

Ser

Leu Leu

Thr

Asp

Cys

Phe Pro

Lys

Ile

Leu

Val Asn

1280

1285

1290

ATT

CTT

CCT

TAT

TTT GCC

TAT

GAG

GGT

ACC AGA

GAC

AGT

GGG

ATG GCA

4116

Ile

Leu

Pro

Tyr

Phe Ala

Tyr

Glu

Gly

Thr Arg

Asp

Ser

Gly

Met Ala

1295

1300

1305

CAG

CAA

AGA

GAG

ACT GCT

ACC

AAG

GTC

TAT GAT

ATG

CTT

AAA

AGT GAA

4164

Gin

Gin

Arg

Glu

Thr Ala

Thr

Lys

Val

Tyr Asp

Met

Leu

Lys

Ser Glu

1310

1315

1320

1325

AAC

TTA

TTG

GGA

AAA CAG

ATT

GAT

CAC

TTA TTC

ATT

AGT

AAT

TTA CCA

4212

Asn

Leu

Leu

Gly

Lys Gin

Ile

Asp

His

Leu Phe

Ile

Ser

Asn

Leu Pro

1330

1335

1340

GAG

ATT

GTG

GTG

GAG TTA

TTG

ATG

ACG

TTA CAT

GAG

CCA

GCA

AAT TCT

4260

Glu

Ile

Val

Val

Glu Leu

Leu

Met

Thr

Leu His

Glu

Pro

Ala

Asn Ser

1345

1350

1355

• · · · · · • · · · · • · · • · · ·

- 204 -1 υ /

AGT Ser	GCC Ala	AGT CAG Ser Gin 1360	AGC ACT GAC Ser Thr Asp	CTC TGT GAC	TTT TCA GGG GAT	TTG Leu	GAT Asp	4308
Leu Cys 1365	Asp	Phe	Ser Gly Asp 1370
CCT	GCT	CCT AAT	CCA CCT CAT	TTT CCA	TCG	CAT	GTG ATT AAA	GCA	ACA	4356
Pro	Ala Pro Asn 1375	Pro Pro His Phe Pro 1380	Ser	His	Val Ile Lys 1385	Ala	Thr
TTT	GCC	TAT ATC	AGC AAT TGT	CAT AAA	ACC	AAG	TTA AAA AGC	ATT	TTA	4404
Phe Ala 1390	Tyr Ile	Ser Asn Cys 1395	His Lys	Thr	Lys Leu Lys Ser 1400	Ile	Leu 1405
GAA	ATT	CTT TCC	AAA AGC CCT	GAT TCC	TAT	CAG	AAA ATT CTT	CTT	GCC	4452
Glu	Ile	Leu Ser	Lys Ser Pro 1410	Asp Ser	Tyr Gin 1415	Lys Ile Leu	Leu Ala 1420
ATA	TGT	GAG CAA	GCA GCT GAA	ACA AAT	AAT	GTT	TAT AAG AAG	CAC	AGA	4500
Ile	Cys	Glu Gin Ala Ala Glu 1425	Thr Asn Asn 1430	Val	Tyr Lys Lys His 1435	Arg
ATT	CTT	AAA ATA	TAT CAC CTG	TTT GTT	AGT	TTA	TTA CTG AAA	GAT	ATA	4548
Ile	Leu	Lys Ile 1440	Tyr His Leu	Phe Val 1445	Ser	Leu	Leu Leu Lys 1450	Asp	Ile
AAA	AGT	GGC TTA	GGA GGA GCT	TGG GCC	TTT	GTT	CTT CGA GAC	GTT	ATT	4596
Lys	Ser Gly Leu 1455	Gly Gly Ala Trp Ala 1460	Phe	Val	Leu Arg Asp 1465	Val	Ile
TAT	ACT	TTG ATT	CAC TAT ATC	AAC CAA	AGG	CCT	TCT TGT ATC	ATG	GAT	4644
Tyr Thr 1470	Leu Ile	His Tyr Ile 1475	Asn Gin	Arg	Pro Ser Cys Ile 1480	Met	Asp 1485
GTG	TCA	TTA CGT	AGC TTC TCC	CTT TGT	TGT	GAC	TTA TTA AGT	CAG	GTT	4692
Val	Ser	Leu Arg	Ser Phe Ser 1490	Leu Cys	Cys Asp 1495	Leu Leu Ser	Gin Val 1500
TGC	CAG	ACA GCC	GTG ACT TAC	TGT AAG	GAT	GCT	CTA GAA AAC	CAT	CTT	4740
Cys	Gin	Thr Ala Val Thr Tyr 1505	Cys Lys Asp 1510	Ala	Leu Glu Asn His 1515	Leu
CAT	GTT	ATT GTT	GGT ACA CTT	ATA CCC	CTT	GTG	TAT GAG CAG	GTG	GAG	4788
His	Val	Ile Val 1520	Gly Thr Leu	Ile Pro 1525	Leu	Val	Tyr Glu Gin 1530	Val	Glu
GTT	CAG	AAA CAG	GTA TTG GAC	TTG TTG	AAA	TAC	TTA GTG ATA	GAT	AAC	4836
Val	Gin Lys Gin 1535	Val Leu Asp Leu Leu 1540	Lys	Tyr	Leu Val Ile 1545	Asp	Asn
AAG	GAT	AAT GAA	AAC CTC TAT	ATC ACG	ATT	AAG	CTT TTA GAT	CCT	TTT	4884
Lys Asp 1550	Asn Glu	Asn Leu Tyr 1555	Ile Thr	Ile	Lys Leu Leu Asp 1560	Pro	Phe 1565
CCT	GAC	CAT GTT	GTT TTT AAG	GAT TTG	CGT	ATT	ACT CAG CAA	AAA	ATC	4932
Pro	Asp	His Val	Val Phe Lys 1570	Asp Leu	Arg Ile 1575	Thr Gin Gin	Lys Ile 1580
AAA	TAC	AGT AGA	GGA CCC TTT	TCA CTC	TTG	GAG	GAA ATT AAC	CAT	TTT	4980
Lys	Tyr	Ser Arg Gly Pro Phe 1585	Ser Leu Leu 1590	Glu	Glu Ile Asn His 1595	Phe
CTC	TCA	GTA AGT	GTT TAT GAT	GCA CTT	CCA	TTG	ACA AGA CTT	GAA	GGA	5028
Leu	Ser	Val Ser 1600	Val Tyr Asp	Ala Leu 1605	Pro	Leu	Thr Arg Leu 1610	Glu	Gly
CTA	AAG	GAT CTT	CGA AGA CAA	CTG GAA	CTA	CAT	AAA GAT CAG	ATG	GTG	5076
Leu	Lys	Asp Leu	Arg Arg Gin	Leu Glu	Leu	His	Lys Asp Gin	Met	Val

1615 1620 1625 • · · ·

- 205 -

GAC ATT ATG

AGA GCT TCT CAG

GAT AAT

CCG Pro

CAA GAT GGG ATT ATG GTG

5124

Asp Ile 1630

Met

Arg

Ala

Ser Gin 1635

Asp

Asn

Gin Asp 1640

Gly

Ile

Met

Val 1645

AAA CTA

GTT

GTC

AAT

TTG TTG

CAG

TTA

TCC

AAG ATG

GCA

ATA

AAC

CAC

5172

Lys Leu

Val

Val

Asn Leu Leu 1650

Gin

Leu

Ser Lys Met 1655

Ala

Ile

Asn His 1660

ACT GGT

GAA

AAA

GAA

GTT CTA

GAG

GCT

GTT

GGA AGC

TGC

TTG

GGA

GAA

5220

Thr Gly

Glu

Lys Glu 1665

Val Leu

Glu

Ala Val 1670

Gly Ser

Cys

Leu Gly 1675

Glu

GTG GGT

CCT

ATA

GAT

TTC TCT

ACC

ATA

GCT

ATA CAA

CAT

AGT

AAA

GAT

5268

Val Gly

Pro Ile 1680

Asp

Phe Ser

Thr Ile 1685

Ala

Ile Gin

His Ser 1690

Lys

Asp

GCA TCT

TAT

ACC

AAG

GCC CTT

AAG

TTA

TTT

GAA GAT

AAA

GAA

CTT

CAG

5316

Ala Ser Tyr 1695

Thr

Lys

Ala Leu Lys 1700

Leu

Phe

Glu Asp Lys 1705

Glu

Leu

Gin

TGG ACC

TTC

ATA

ATG

CTG ACC

TAC

CTG

AAT

AAC ACA

CTG

GTA

GAA

GAT

5364

Trp Thr 1710

Phe

Ile

Met

Leu Thr 1715

Tyr

Leu

Asn

Asn Thr 1720

Leu

Val

Glu

Asp 1725

TGT GTC

AAA

GTT

CGA

TCA GCA

GCT

GTT

ACC

TGT TTG

AAA

AAC

ATT

TTA

5412

Cys Val

Lys

Val

Arg Ser Ala 1730

Ala

Val

Thr Cys Leu 1735

Lys

Asn

Ile Leu 1740

GCC ACA

AAG

ACT

GGA

CAT AGT

TTC

TGG

GAG

ATT TAT

AAG

ATG

ACA

ACA

5460

Ala Thr

Lys

Thr Gly 1745

His Ser

Phe

Trp Glu 1750

Ile Tyr

Lys

Met Thr 1755

Thr

GAT CCA

ATG

CTG

GCC

TAT CTA

CAG

CCT

TTT

AGA ACA

TCA

AGA

AAA

AAG

5508

Asp Pro

Met Leu 1760

Ala

Tyr Leu

Gin Pro 1765

Phe

Arg Thr

Ser Arg 1770

Lys

Lys

TTT TTA

GAA

GTA

CCC

AGA TTT

GAC

AAA

GAA

AAC CCT

TTT

GAA

GGC

CTG

5556

Phe Leu Glu 1775

Val

Pro

Arg Phe Asp 1780

Lys

Glu

Asn Pro Phe 1785

Glu

Gly

Leu

GAT GAT

ATA

AAT

CTG

TGG ATT

CCT

CTA

AGT

GAA AAT

CAT

GAC

ATT

TGG

5604

Asp Asp 1790

Ile

Asn

Leu

Trp Ile 1795

Pro

Leu

Ser

Glu Asn 1800

His

Asp

Ile

Trp 1805

ATA AAG

ACA

CTG

ACT

TGT GCT

TTT

TTG

GAC

AGT GGA

GGC

ACA

AAA

TGT

5652

Ile Lys

Thr

Leu

Thr Cys Ala 1810

Phe

Leu

Asp Ser Gly 1815

Gly

Thr

Lys Cys 1820

GAA ATT

CTT

CAA

TTA

TTA AAG

CCA

ATG

TGT

GAA GTG

AAA

ACT

GAC

TTT

5700

Glu Ile

Leu

Gin Leu 1825

Leu Lys

Pro

Met Cys 1830

Glu Val

Lys

Thr Asp 1835

Phe

TGT CAG

ACT

GTA

CTT

CCA TAC

TTG

ATT

CAT

GAT ATT

TTA

CTC

CAA

GAT

5748

Cys Gin

Thr Val 1840

Leu

Pro Tyr

Leu Ile 1845

His

Asp Ile

Leu Leu 1850

Gin

Asp

ACA AAT

GAA

TCA

TGG

AGA AAT

CTG

CTT

TCT

ACA CAT

GTT

CAG

GGA

TTT

5796

Thr Asn Glu 1Θ55

Ser

Trp

Arg Asn Leu 1860

Leu

Ser

Thr His Val 1865

Gin

Gly

Phe

TTC ACC

AGC

TGT

CTT

CGA CAC

TTC

TCG

CAA

ACG AGC

CGA

TCC

ACA

ACC

5844

Phe Thr 1870

Ser

Cys

Leu

Arg His 1875

Phe

Ser

Gin

Thr Ser 1880

Arg

Ser

Thr

Thr 1885

CCT GCA

AAC

TTG

GAT

TCA GAG

TCA

GAG

CAC

TTT TTC

CGA

TGC

TGT

TTG

5892

Pro Ala

Asn

Leu

Asp 1890

Ser Glu 1

Ser

Glu

His Phe Phe 1895

Arg

Cys

Cys Leu 1900

·· ···« ·· • · • · · • · · · • · · ··· ··

- 206 • ·· ·· · · • · • · • · t ·· » ·· «4 · ···· '107'

GAT Asp	AAA AAA TCA CAA AGA	ACA Thr	ATG Met	CTT GCT GTT	GTG GAC TAC ATG AGA Val Asp Tyr Met Arg 1915	5940
Lys	Lys	Ser Gin Arg 1905	Leu Ala 1910	Val
AGA	CAA	AAG	AGA CCT TCT	TCA	GGA	ACA ATT	TTT	AAT GAT GCT TTC TGG	5988
Arg	Gin	Lys Arg Pro Ser 1920	Ser	Gly Thr Ile 1925	Phe	Asn Asp Ala Phe Trp 1930
CTG	GAT	TTA	AAT TAT CTA	GAA	GTT	GCC AAG	GTA	GCT CAG TCT TGT GCT	6036
Leu	Asp Leu 1935	Asn Tyr Leu	Glu 1941	Val 3	Ala Lys	Val	Ala Gin Ser Cys Ala 1945
GCT	CAC	TTT	ACA GCT TTA	CTC	TAT	GCA GAA	ATC	TAT GCA GAT AAG AAA	6084
Ala His 1950	Phe	Thr Ala Leu Leu 1955	Tyr	Ala Glu	Ile Tyr Ala Asp Lys Lys 1960 1965
AGT	ATG	GAT	GAT CAA GAG	AAA	AGA	AGT CTT	GCA	TTT GAA GAA GGA AGC	6132
Ser	Met	Asp	Aso Gin Glu 1970	Lys	Arg	Ser Leu Ala 1975	Phe Glu Glu Gly Ser 1980
CAG	AGT	ACA	ACT ATT TCT	AGC	TTG	AGT GAA	AAA	AGT AAA GAA GAA ACT	6180
Gin	Ser	Thr	Thr Ile Ser 1985	Ser	Leu	Ser Glu 1990	Lys	Ser Lys Glu Glu Thr 1995
GGA	ATA	AGT	TTA CAG GAT	CTT	CTC	TTA GAA	ATC	TAC AGA AGT ATA GGG	6228
Gly	Ile	Ser Leu Gin Asp 2000	Leu	Leu Leu Glu 2005	Ile	Tyr Arg Ser Ile Gly 2010
GAG	CCA	GAT	AGT TTG TAT	GGC	TGT	GGT GGA	GGG	AAG ATG TTA CAA CCC	6276
Glu	Pro Asp 2015	Ser Leu Tyr	Gly Cys 2020	Gly Gly	Gly	Lys Met Leu Gin Pro 2025
ATT	ACT	AGA	CTA CGA ACA	TAT	GAA	CAC GAA	GCA	ATG TGG GGC AAA GCC	6324
Ile Thr 2030	Arg	Leu Arg Thr Tyr 2035	Glu	His Glu	Ala Met Trp Gly Lys Ala 2040 2045
CTA	GTA	ACA	TAT GAC CTC	GAA	ACA	GCA ATC	CCC	TCA TCA ACA CGC CAG	6372
Leu	Val	Thr	Tyr Asp Leu 2050	Glu	Thr	Ala Ile Pro 2055	Ser Ser Thr Arg Gin 2060
GCA	GGA	ATC	ATT CAG GCC	TTG	CAG	AAT TTG	GGA	CTC TGC CAT ATT CTT	6420
Ala	Gly	Ile	Ile Gin Ala 2065	Leu	Gin	Asn Leu 2070	Gly	Leu Cys His Ile Leu 2075
TCC	GTC	TAT	TTA AAA GGA	TTG	GAT	TAT GAA	AAT	AAA GAC TGG TGT CCT	6468
Ser	val	Tyr Leu Lys Gly 2080	Leu	Asp Tyr Glu 2085	Asn	Lys Asp Trp Cys Pro 2090
GAA	CTA	GAA	GAA CTT CAT	TAC	CAA	GCA GCA	TGG	AGG AAT ATG CAG TGG	6516
Glu	Leu Glu 2095	Glu Leu His	Tyr Gin 2100	Ala Ala	Trp	Arg Asn Met Gin Trp 2105
GAC	CAT	TGC	ACT TCC GTC	AGC	AAA	GAA GTA	GAA	GGA ACC AGT TAC CAT	6564
Asp His 2110	Cys	Thr Ser Val Ser 2115	Lys	Glu Val	Glu Gly Thr Ser Tyr His 2120 2125
GAA	TCA	TTG	TAC AAT GCT	CTA	CAA	TCT CTA	AGA	GAC AGA GAA TTC TCT	6612
Glu	Ser	Leu	Tyr Asn Ala 2130	Leu	Gin	Ser Leu Arg 2135	Asp Arg Glu Phe Ser 2140
ACA	TTT	TAT	GAA AGT CTC	AAA	TAT	GCC AGA	GTA	AAA GAA GTG GAA GAG	6660
Thr	Phe	Tyr	Glu Ser Leu 2145	Lys	Tyr	Ala Arg 2150	Val	Lys Glu Vál Glu Glu 2155
ATG·	TGT	AAG	CGC AGC CTT	GAG	TCT	GTG TAT	TCG	CTC TAT CCC ACA CTT	6708
Met	Cys	Lys	Arg Ser Leu	Glu	Ser	Val Tyr	Ser	Leu Tyr Pro Thr Leu

2160 2165 2170

207

AGC Ser

AGG TTG Arg Leu 2175

CAG Gin

GCC Ala

ATT Ile

GGA GAG Gly Glu 2180

CTG Leu

GAA Glu

AGC Ser

ATT GGG Ile Gly 2185

GAG Glu

CTT Leu

TTC Phe

6756

TCA

AGA TCA

GTC

ACA

CAT

AGA CAA

CTC

TCT

GAA

GTA TAT

ATT

AAG

TGG

6804

Ser

Arg Ser

Val

Thr

His

Arg Gin

Leu

Ser

Glu

Val Tyr

Ile

Lys

Trp

2190

2195

2200

2205

CAG

AAA CAC

TCC

CAG

CTT

CTC AAG

GAC

AGT

GAT

TTT AGT

TTT

CAG

GAG

6852

Gin

Lys His

Ser

Gin

Leu

Leu Lys

Asp

Ser

Asp

Phe Ser

Phe

Gin

Glu

2210

2215

2220

CCT

ATC ATG

GCT

CTA

CGC

ACA GTC

ATT

TTG

GAG

ATC CTG

ATG

GAA

AAG

6900

Pro

Ile Met

Ala

Leu

Arg

Thr Val

Ile

Leu

Glu

Ile Leu

Met

Glu

Lys

2225

2230

2235

GAA

ATG GAC

AAC

TCA

CAA

AGA GAA

TGT

ATT

AAG

GAC ATT

CTC

ACC

AAA

6948

Glu

Met Asp

Asn

Ser

Gin

Arg Glu

Cys

Ile

Lys

Asp Ile

Leu

Thr

Lys

2240

2245

2250

CAC

CTT GTA

GAA

CTC

TCT

ATA CTG

GCC

AGA

ACT

TTC AAG

AAC

ACT

CAG

6996

His

Leu Val

Glu

Leu

Ser

Ile Leu

Ala

Arg

Thr

Phe Lys

Asn

Thr

Gin

2255

2260

2265

CTC

CCT GAA

AGG

GCA

ATA

TTT CAA

ATT

AAA

CAG

TAC AAT

TCA

GTT

AGC

7044

Leu

Pro Glu

Arg

Ala

Ile

Phe Gin

Ile

Lys

Gin

Tyr Asn

Ser

Val

Ser

2270

2275

2280

2285

TGT

GGA GTC

TCT

GAG

TGG

CAG CTG

GAA

GAA

GCA

CAA GTA

TTC

TGG

GCA

7092

Cys

Gly Val

Ser

Glu

Trp

Gin Leu

Glu

Glu

Ala

Gin Val

Phe

Trp

Ala

2290

2295

2300

AAA

AAG GAG

CAG

AGT

CTT

GCC CTG

AGT

ATT

CTC

AAG CAA

ATG

ATC

AAG

7140

Lys

Lys Glu

Gin

Ser

Leu

Ala Leu

Ser

Ile

Leu

Lys Gin

Met

Ile

Lys

2305

2310

2315

AAG

TTG GAT

GCC

AGC

TGT

GCA GCG

AAC

AAT

CCC

AGC CTA

AAA

CTT

ACA

7188

Lys

Leu Asp

Ala

Ser

Cys

Ala Ala

Asn

Asn

Pro

Ser Leu

Lys

Leu

Thr

2320

2325

2330

TAC

ACA GAA

TGT

CTG

AGG

GTT TGT

GGC

AAC

TGG

TTA GCA

GAA

ACG

TGC

7236

Tyr

Thr Glu

Cys

Leu

Arg

Val Cys

Gly

Asn

Trp

Leu Ala

Glu

Thr

Cys

2335

2340

2345

TTA

GAA AAT

CCT

GCG

GTC

ATC ATG

CAG

ACC

TAT

CTA GAA

AAG

GCA

GTA

7284

Leu

Glu Asn

Pro

Ala

Val

Ile Met

Gin

Thr

Tyr

Leu Glu

Lys

Ala

Val

2350

2355

2360

2365

GAA

GTT GCT

GGA

AAT

TAT

GAT GGA

GAA

AGT

AGT

GAT GAG

CTA

AGA

AAT

7332

Glu

Val Ala

Gly

Asn

Tyr

Asp Gly

Glu

Ser

Ser

Asp Glu

Leu

Arg

Asn

2370

2375

2380

GGA

AAA ATG

AAG

GCA

TTT

CTC TCA

TTA

GCC

CGG

TTT TCA

GAT

ACT

CAA

7380

Gly

Lys Met

Lys

Ala

Phe

Leu Ser

Leu

Ala

Arg

Phe Ser

Asp

Thr

Gin

2385

2390

2395

TAC

CAA AGA

ATT

GAA

AAC

TAC ATG

AAA

TCA

TCG

GAA TTT

GAA

AAC

AAG

7428

Tyr

Gin Arg

Ile

Glu

Asn

Tyr Met

Lys

Ser

Ser

Glu Phe

Glu

Asn

Lys

2400

2405

2410

CAA

GCT CTC

CTG

AAA

AGA

GCC AAA

GAG

GAA

GTA

GGT CTC

CTT

AGG

GAA

7476

Gin

Ala Leu

Leu

Lys

Arg

Ala Lys

Glu

Glu

Val

Gly Leu

Leu

Arg

Glu

2415

2420

2425

CAT

AAA ATT

CAG

ACA

AAC

AGA TAC

ACA

GTA

AAG

GTT CAG

CGA

GAG

CTG

7524

His

Lys Xle

Gin

Thr

Asn

Arg Tyr

Thr

Val

Lys

Val Gin

Arg

Glu

Leu

2430

2435

2440

2445

• · β · • · · ·

GAG Glu

TTG Leu

GAT Asp

GAA Glu

TTA GCC Leu Ala 2450

CTG Leu

CGT Arg

GCA Ala

CTG AAA Leu Lys 2455

GAG Glu

GAT Asp

CGT Arg

AAA CGC Lys Arg 2460

7572

TTC

TTA

TGT

AAA

GCA GTT

GAA

AAT

TAT

ATC AAC

TGC

TTA

TTA

AGT GGA

7620

Phe

Leu

Cys

Lys Ala Val 2465

Glu

Asn

Tyr Ile Asn 2470

Cys

Leu

Leu Ser Gly 2475

GAA

GAA

CAT

GAT

ATG TGG

GTA

TTC

CGG

CTT TGT

TCC

CTC

TGG

CTT GAA

7668

Glu

Glu

Hie Asp 2480

Met Trp

Val

Phe Arg 2485

Leu Cys

Ser

Leu Trp 2490

Leu Glu

AAT

TCT

GGA

GTT

TCT GAA

GTC

AAT

GGC

ATG ATG

AAG

AGA

GAC

GGA ATG

7716

Asn

Ser Gly 2495

Val

Ser Glu

Val Asn 2500

Gly

Met Met

Lys Arg 2505

Asp

Gly Met

AAG

ATT

CCA

ACA

TAT AAA

TTT

TTG

CCT

CTT ATG

TAC

CAA

TTG

GCT GCT

7764

Lys Ile 2510

Pro

Thr

Tyr Lys Phe 2515

Leu

Pro

Leu Met Tyr 2520

Gin

Leu

Ala Ala 2525

AGA

ATG

GGG

ACC

AAG ATG

ATG

GGA

GGC

CTA GGA

TTT

CAT

GAA

GTC CTC

7812

Arg

Met

Gly

Thr

Lys Met 2530

Met

Gly

Gly

Leu Gly 2535

Phe

His

Glu

Val Leu 2540

AAT

AAT

CTA

ATC

TCT AGA

ATT

TCA

ATG

GAT CAC

CCC

CAT

CAC

ACT TTG

7860

Asn

Asn

Leu

Ile Ser Arg 2545

Ile

Ser

Met Asp His 2550

Pro

His

His Thr Leu 2555

TTT

ATT

ATA

CTG

GCC TTA

GCA

AAT

GCA

AAC AGA

GAT

GAA

TTT

CTG ACT

7908

Phe

Ile

Ile Leu 2560

Ala Leu

Ala

Asn Ala 2565

Asn Arg

Asp

Glu Phe 2570

Leu Thr

AAA

CCA

GAG

GTA

GCC AGA

AGA

AGC

AGA

ATA ACT

AAA

AAT

GTG

CCT AAA

7956

Lys

Pro Glu 2575

Val

Ala Arg

Arg Ser 2580

Arg

Ile Thr

Lys Asn 2585

Val

Pro Lys

CAA

AGC

TCT

CAG

CTT GAT

GAG

GAT

CGA

ACA GAG

GCT

GCA

AAT

AGA ATA

8004

Gin Ser 2590

Ser

Gin

Leu Asp Glu 2595

Asp

Arg

Thr Glu Ala 2600

Ala

Asn

Arg Ile 2605

ATA

TGT

ACT

ATC

AGA AGT

AGG

AGA

CCT

CAG ATG

GTC

AGA

AGT

GTT GAG

8052

Ile

Cys

Thr

Ile

Arg Ser 2610

Arg

Arg

Pro

Gin Met 2615

Val

Arg

Ser

Val Glu 2620

GCA

CTT

TGT

GAT

GCT TAT

ATT

ATA

TTA

GCA AAC

TTA

GAT

GCC

ACT CAG

8100

Ala

Leu

Cys

Asp Ala Tyr 2625

Ile

Ile

Leu Ala Asn 2630

Leu

Asp

Ala Thr Gin 2635

TGG

AAG

ACT

CAG

AGA AAA

GGC

ATA

AAT

ATT CCA

GCA

GAC

CAG

CCA ATT

8148

Trp

Lys

Thr Gin 2640

Arg Lys

Gly

Ile Asn 2645

Ile Pro

Ala

Asp Gin 2650

Pro Ile

ACT

AAA

CTT

AAG

AAT TTA

GAA

GAT

GTT

GTT GTC

CCT

ACT

ATG

GAA ATT

8196

Thr

Lys Leu 2655

Lys

Asn Leu

Glu Asp 2660

Val

Val Val

Pro Thr 2665

Met

Glu Ile

AAG

GTG .

GAC

CAC

ACA GGA

GAA

TAT

GGA

AAT CTG

GTG

ACT

ATA

CAG TCA

8244

Lys Val 2670

Asp

His

Thr Gly Glu 2675

Tyr

Gly

Asn Leu Val 2680

Thr

Ile

Gin Ser 2685

TTT

AAA

GCA

GAA

TTT CGC

TTA

GCA

GGA

GGT GTA

AAT

TTA

CCA

AAA ATA

8292

Phe

Lys

Ala

Glu

Phe Arg 2690

Leu

Ala

Gly

Gly Val 2695

Asn

Leu

Pro

Lys Ile 2700

ATA

GAT

TGT

GTA

GGT TCC

GAT

GGC

AAG

GAG AGG

AGA

CAG

CTT

GTT AAG

8340

Ile

Asp

Cys

Val 2705

Gly Ser

Asp

Gly

Lys Glu Arg 2710

Arg

Gin

Leu Val Lys 2715

• · · ·

- 209 -

GGC Gly	CGT Arg	GAT GAC CTG Asp Asp Leu 2720	AGA CAA GAT GCT GTC ATG	CAA Gin	CAG GTC Gin Val 2730	TTC Phe	CAG Gin	8388
Arg	Gin Asp Ala Val 2725	Met
ATG	TGT	AAT ACA TTA	CTG	CAG AGA AAC ACG	GAA	ACT	AGG AAG	AGG	AAA	8436
Met	Cys Asn Thr Leu 2735	Leu	Gin Arg Asn Thr 2740	Glu	Thr Arg Lys 2745	Arg	Lys
TTA	ACT	ATC TGT ACT	TAT	AAG GTG GTT CCC	CTC	TCT	CAG CGA	AGT	GGT	8484
Leu Thr 2750	Ile Cys Thr	Tyr Lys Val Val Pro 2755	Leu Ser 2760	Gin Arg	Ser	Gly 2765
GTT	CTT	GAA TGG TGC	ACA	GGA ACT GTC CCC	ATT	GGT	GAA TTT	CTT	GTT	8532
Val	Leu	Glu Trp Cys Thr 2770	Gly Thr Val Pro Ile 2775	Gly	Glu Phe	Leu Val 2780
AAC	AAT	GAA GAT GGT	GCT	CAT AAA AGA TAC	AGG	CCA	AAT GAT	TTC	AGT	8580
Asn	Asn	Glu Asp Gly 2785	Ala	His Lys Arg Tyr 2790	Arg	Pro	Asn Asp Phe 2795	Ser
GCC	TTT	CAG TGC CAA	AAG	AAA ATG ATG GAG	GTG	CAA	AAA AAG	TCT	TTT	8628
Ala	Phe	Gin Cys Gin 2800	Lys	Lys Met Mec Glu 2805	Val	Gin	Lys Lys 2810	Ser	Phe
GAA	GAG	AAA TAT GAA	GTC	TTC ATG GAT GTT	TGC	CAA	AAT TTT	CAA	CCA	8676
Glu	Glu Lys Tyr Glu 2815	Val	Phe Met Asp Val 2820	Cys	Gin Asn Phe 2825	Gin	Pro
GTT	TTC	CGT TAC TTC	TGC	ATG GAA AAA TTC	TTG	GAT	CCA GCT	ATT	TGG	8724
Val Phe 2830	Arg Tyr Phe	Cys Met Glu Lys Phe 2835	Leu Asp 2B40	Pro Ala	Ile	Trp 2845
TTT	GAG	AAG CGA TTG	GCT	TAT ACG CGC AGT	GTA	GCT	ACT TCT	TCT	ATT	8772
Phe	Glu	Lys Arg Leu Ala 2850	Tyr Thr Arg Ser Val 2855	Ala	Thr Ser	Ser Ile 2860
GTT	GGT	TAC ATA CTT	GGA	CTT GGT GAT AGA	CAT	GTA	CAG AAT	ATC	TTG	- 8820
Val	Gly	Tyr Ile Leu 2865	Gly	Leu Gly Asp Arg 2870	His	Val	Gin Asn Ile 2875	Leu
ATA	AAT	GAG CAG TCA	GCA	GAA CTT GTA CAT	ATA	GAT	CTA GGT	GTT	GCT	8868
Ile	Asn	Glu Gin Ser 2880	Ala	Glu Leu Val His 2885	Ile	Asp	Leu Gly 2890	Val	Ala
TTT	GAA	CAG GGC AAA	ATC	CTT CCT ACT CCT	GAG	ACA	GTT CCT	TTT	AGA	8916
Phe	Glu Gin Gly Lys 2895	Ile	Leu Pro Thr Pro 2900	Glu	Thr Val Pro 2905	Phe	Arg
CTC	ACC	AGA GAT ATT	GTG	GAT GGC ATG GGC	ATT	ACG	GGT GTT	GAA	GGT	8964
Leu Thr 2910	Arg Asp Ile	Val Asp Gly Met Gly 2915	Ile Thr 2920	Gly Val	Glu	Gly 2925
GTC	TTC	AGA AGA TGC	TGT	GAG AAA ACC ATG	GAA	GTG	ATG AGA	AAC	TCT	9012
Val	Phe	Arg Arg Cys Cys 2930	Glu Lys Thr Met Glu 2935	Val	Met Arg	Asn Ser 2940
CAG	GAA	ACT CTG TTA	ACC	ATT GTA GAG GTC	CTT	CTA	TAT GAT	CCA	CTC	9060
Gin	Glu	Thr Leu Leu 2945	Thr	Ile Val Glu Val 2950	Leu	Leu	Tyr Asp Pro 2955	Leu
TTT	GAC	TGG ACC ATG	AAT	CCT TTG AAA GCT	TTG	TAT	TTA CAG	CAG	AGG	9108
Phe	Asp	Trp Thr Met 2960	Asn	Pro Leu Lys Ala 2965	Leu	Tyr	Leu Gin 2970	Gin	Arg	4
CCG	GAA	GAT GAA ACT	GAG	CTT CAC CCT ACT	CTG	AAT	GCA GAT	GAC	CAA	9156
Pro	Glu	Asp Glu Thr	Glu	Leu His Pro Thr	Leu	Asn	Ala Asp	Asp	Gin

2975 2980 2985

- 210

- i

GAA TGC Glu Cys 2990

AAA Lys

CGA Arg

AAT Asn

CTC AGT Leu Ser 2995

GAT Asp

ATT Ile

GAC Asp

CAG AGT Gin Ser 3000

TTC Phe

GAC Asp

AAA Lys

GTA Val 3005

9204

GCT GAA

CGT

GTC

TTA

ATG AGA

CTA

CAA

GAG

AAA CTG

AAA

GGA

GTG

GAA

9252

Ala Glu

Arg

Val

Leu Met Arg 3010

Leu

Gin

Glu Lys Leu 3015

Lys

Gly

Val Glu 3020

GAA GGC

ACT

GTG

CTC

AGT GTT

GGT

GGA

CAG

GTG AAT

TTG

CTC

ATA

CAG

9300

Glu Gly

Thr

Val 3025

Leu

Ser Val

Gly

Gly Gin 3030

Val Asn

Leu

Leu Ile 3035

Gin

CAG GCC

ATA

GAC

CCC

AAA AAT

CTC

AGC

CGA

CTT TTC

CCA

GGA

TGG

AAA

9348

Gin Ala

Ile Asp 3040

Pro

Lys Asn

Leu 3045

Ser 1

Arg

Leu Phe

Pro 3050

Gly 1

Trp

Lys

GCT TGG GTG TGATCTTCAG TATATGAATT ACCCTTTC 93 85

Ala Trp Val

3055 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:35:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 3056 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein

	(	xi)	POPIS	SEKVENCE:	SEQ	ID	NO:	35:
Met 1	Ser	Leu	Val Leu 5	Asn Asp Leu	Leu	Ile 10	Cys	Cys Arg Gin Leu Glu 15
His	Asp	Arg	Ala Thr 20	Glu Arg Lys	Lys 25	Glu	Val	Glu Lys Phe Lys Arg 30
Leu	Ile	Arg 35	Asp Pro	Glu Thr Ile 40	Lys	His	Leu	Asp Arg His Ser Asp 45
Ser	Lys 50	Gin	Gly Lys	Tyr Leu Asn 55	Trp	Asp	Ala	Val Phe Arg Phe Leu 60
Gin 65	Lys	Tyr	Ile Gin	Lys Glu Thr 70	Glu	Cys	Leu 75	Arg Ile Ala Lys Pro 80
Asn	Val	Ser	Ala Ser 85	Thr Gin Ala	Ser	Arg 90	Gin	Lys Lys Met Gin Glu 95
Ile	Ser	Ser	Leu Val 100	Lys Tyr Phe	Ile 105	Lys	Cys	Ala Asn Arg Arg Ala 110
Pro	Arg	Leu 115	Lys Cys	Gin Glu Leu 120	Leu	Asn	Tyr	Ile Met Asp Thr Val 125
Lys	Asp 13*0	Ser	Ser Asn	Gly Ala Ile 135	Tyr	Gly	Ala	Asp Cys Ser Asn Ile 140
Leu 145	Leu	Lys	Asp Ile	Leu Ser Val 150	Arg	Lys	Tyr 155	Trp Cys Glu Ile Ser 160
Gin	Gin	Gin	Trp Leu 165	Glu Leu Phe	Ser	Val 170	Tyr	Phe Arg Leu Tyr Leu 175
Lys	Pro	Ser	Gin Asp 180	Val His Arg	Val 185	Leu	Val	Ala Arg Ile Ile His 190

• · · ·

- 2

11

9 · • · ·

• 9 9

• 9 9 9

Ala

Val

Thr

Lys

Gly

Cys

Cys

Ser

Gin

Thr

Asp

Gly

Leu

Asn

Ser

Lys

195

200

205

Phe

Leu

Asp

Phe

Phe

Ser

Lys

Ala

Ile

Gin

Cys

Ala

Arg

Gin

Glu

Lys

210

215

220

Ser

Ser

Ser

Gly

Leu

Asn

His

Ile

Leu

Ala

Ala

Leu

Thr

Ile

Phe

Leu

2 2 5

230

235

240

Lys

Thr

Leu

Ala

Val

Asn

Phe

Arg

Ile

Arg

Val

Cys

Glu

Leu

Gly

Asp

245

250

255

Glu

Ile

Leu

Pro

Thr

Leu

Leu

Tyr

Ile

Trp

Thr

Gin

His

Arg

Leu

Asn

260

265

270

Asp

Ser

Leu

Lys

Glu

Val

Ile

Ile

Glu

Leu

Phe

Gin

Leu

Gin

Ile

Tyr

275

280

285

Ile

His

His

Pro

Lys

Gly

Ala

Lys

Thr

Gin

Glu

Lys

Gly

Ala

Tyr

Glu

290

295

300

Ser

Thr

Lys

Trp

Arg

Ser

Ile

Leu

Tyr

Asn

Leu

Tyr

Asp

Leu

Leu

Val

305

310

315

320

Asn

Glu

Ile

Ser

His

Ile

Gly

Ser

Arg

Gly

Lys

Tyr

Ser

Ser

Gly

Phe

325

330

335

Arg

Asn

Ile

Ala

Val

Lys

Glu

Asn

Leu

Ile

Glu

Leu

Met

Ala

Asp

Ile

340

345

350

Cys

His

Gin

Val

Phe

Asn

Glu

Asp

Thr

Arg

Ser

Leu

Glu

Ile

Ser

Gin

355

360

365

Ser

Tyr

Thr

Thr

Thr

Gin

Arg

Glu

Ser

Ser

Asp

Tyr

Ser

Val

Pro

Cys

370

375

300

Lys

Arg

Lys

Lys

Ile

Glu

Leu

Gly

Trp

Glu

Val

Ile

Lys

Asp

His

Leu

385

390

395

400

Gin

Lys

Ser

Gin

Asn

Asp

Phe

Asp

Leu

Val

Pro

Trp

Leu

Gin

Ile

Ala

405

410

415

Thr

Gin

Leu

Ile

Ser

Lys

Tyr

Pro

Ala

Ser

Leu

Pro

Asn

Cys

Glu

Leu

420

425

430

Ser

Pro

Leu

Leu

Met

Ile

Leu

Ser

Gin

Leu

Leu

Pro

Gin

Gin

Arg

His

435

440

445

Gly

Glu

Arg

Thr

Pro

Tyr

Val

Leu

Arg

Cys

Leu

Thr

Glu

Val

Ala

Leu

450

455

460

Cys

Gin

Asp

Lys

Arg

Ser

Asn

Leu

Glu

Ser

Ser

Gin

Lys

Ser

Asp

Leu

465

470

475

480

Leu

Lys

Leu

Trp

Asn

Lys

Ile

Trp

Cys

Ile

Thr

Phe

Arg

Gly

Ile

Ser

485

490

495

Ser

Glu

Gin

Ile

Gin

Ala

Glu

Asn

Phe

Gly

Leu

Leu

Gly

Ala

Ile

Ile

500

505

510

Gin

Gly

Ser

Leu

Val

Glu

Val

Asp

Arg

Glu

Phe

Trp

Lys

Leu

Phe

Thr

515

520

525

Gly

Ser

Ala

Cys

Arg

Pro

Ser

Cys

Pro

Ala

Val

Cys

Cys

Leu

Thr

Leu

530

535

540

• · • · · ·

- 212 -

Ala

Leu

Thr

Thr

Ser

Ile

Val

Pro

Gly

Ala

Val

Lys

Met

Gly

Ile

Glu

545

550

555

560

Gin

Asn

Met

Cys

Glu

Val

Asn

Arg

Ser

Phe

Ser

Leu

Lys

Glu

Ser

Ile

565

570

575

Met

Lys

Trp

Leu

Leu

Phe

Tyr

Gin

Leu

Glu

Gly

Asp

Leu

Glu

Asn

Ser

580

585

590

Thr

Glu

Val

Pro

Pro

Ile

Leu

His

Ser

Asn

Phe

Pro

His

Leu

Val

Leu

595

600

605

Glu

Lys

Ile

Leu

Val

Ser

Leu

Thr

Met

Lys

Asn

Cys

Lys

Ala

Ala

Met

610

615

620

Asn

Phe

Phe

Gin

Ser

Val

Pro

Glu

Cys

Glu

His

His

Gin

Lys

Asp

Lys

625

630

635

640

Glu

Glu

Leu

Ser

Phe

Ser

Glu

Val

Glu

Glu

Leu

Phe

Leu

Gin

Thr

Thr

645

650

655

Phe

Asp

Lys

Met

Asp

Phe

Leu

Thr

Ile

Val

Arg

Glu

Cys

Gly

Ile

Glu

660

665

670

Lys

His

Gin

Ser

Ser

Ile

Gly

Phe

Ser

Val

His

Gin

Asn

Leu

Lys

Glu

675

680

685

Ser

Leu

Asp

Arg

Cys

Leu

Leu

Gly

Leu

Ser

Glu

Gin

Leu

Leu

Asn

Asn

690

695

700

Tyr

Ser

Ser

Glu

Ile

Thr

Asn

Ser

Glu

Thr

Leu

Val

Arg

Cys

Ser

Arg

705

710

715

720

Leu

Leu

Val

Gly

Val

Leu

Gly

Cys

Tyr

Cys

Tyr

Met

Gly

Val

Ile

Ala

725

730

735

Glu

Glu

Glu

Ala

Tyr

Lys

Ser

Glu

Leu

Phe

Gin

Lys

Ala

Asn

Ser

Leu

740

745

750

Met

Gin

Cys

Ala

Gly

Glu

Ser

Ile

Thr

Leu

Phe

Lys

Asn

Lys

Thr

Asn

755

760

765

Glu

Glu

Phe

Arg

Ile

Gly

Ser

Leu

Arg

Asn

Met

Met

Gin

Leu

Cys

Thr

770

775

780

Arg

Cys

Leu

Ser

Asn

Cys

Thr

Lys

Lys

Ser

Pro

Asn

Lys

Ile

Ala

Ser

785

790

795

800

Gly

Phe

Phe

Leu

Arg

Leu

Leu

Thr

Ser

Lys

Leu

Met

Asn

Asp

Ile

Ala

805

810

815

Asp

Ile

Cys

Lys

Ser

Leu

Ala

Ser

Phe

Ile

Lys

Lys

Pro

Phe

Asp

Arg

820

825

830

Gly

Glu

Val

Glu

Ser

Met

Glu

Asp

Asp

Thr

Asn

Gly

Asn

Leu

Met

Glu

835

840

845

Val

Glu

Asp

Gin

Ser

Ser

Met

Asn

Leu

Phe

Asn

Asp

Tyr

Pro

Asp

Ser

850

855

860

Ser

Val

Ser

Asp

Ala

Asn

Glu

Pro

Gly

Glu

Ser

Gin

Ser

Thr

Ile

Gly

865

870

875

880

Ala Ile Asn Pro Leu Ala Glu Glu Tyr Leu Ser Lys Gin Asp Leu Leu 885 890 895 • · • · · · • ·

	- 213 -	• · • · · «	• •	• · · ·
Phe Leu Asp Met Leu Lys Phe Leu 900	Cys Leu Cys Val 905	Thr Thr 910	Ala	Gin
Thr Asn Thr Val Ser Phe Arg Ala 915 920	Ala Asp Ile Arg	Arg Lys 925	Leu	Leu
Met Leu Ile Asp Ser Ser Thr Leu 930 935	Glu Pro Thr Lys 940	Ser Leu	His	Leu
His Met Tyr Leu Met Leu Leu Lys 945 950	Glu Leu Pro Gly 955	Glu Glu	Tyr	Pro 960
Leu Pro Met Glu Asp Val Leu Glu 965	Leu Leu Lys Pro 970	Leu Ser	Asn 975	Val
Cys Ser Leu Tyr Arg Arg Asp Gin 980	Asp Val Cys Lys 985	Thr Ile 990	Leu	Asn
His Val Leu His Val Val Lys Asn Leu Gly Gin Ser 995 1000	Asn Met 1005	Asp	Ser
Glu Asn Thr Arg Asp Ala Gin Gly 1010 1015	Gin Phe Leu Thr Val Ile 1020	Gly	Ala
Phe Trp His Leu Thr Lys Glu Arg 1025 1030	Lys Tyr Ile Phe 1035	Ser Val	Arg	Met 1040
Ala Leu Val Asn Cys Leu Lys Thr 1045	Leu Leu Glu Ala 1050	Asp Pro	Tyr Ser 1055
Lys Trp Ala Ile Leu Asn Val Met 1060	Gly Lys Asp Phe 1065	Pro Val Asn 1070	Glu
Val Phe Thr Gin Phe Leu Ala Asp Asn His His Gin 1075 1080	Val Arg 1085	Met	Leu
Ala Ala Glu Ser Ile Asn Arg Leu 1090 1095	Phe Gin Asp Thr Lys Gly 1100	Asp	Ser
Ser Arg Leu Leu Lys Ala Leu Pro 1105 1110	Leu Lys Leu Gin 1115	Gin Thr	Ala	Phe 1120
Glu Asn Ala Tyr Leu Lys Ala Gin 1125	Glu Gly Met Arg 1130	Glu Met	Ser His 1135
Ser Ala Glu Asn Pro Glu Thr Leu 1140	Asp Glu Ile Tyr 1145	Asn Arg Lys 1150	Ser
Val Leu Leu Thr Leu Ile Ala Val Val Leu Ser Cys 1155 1160	Ser Pro 1165	Ile	Cys
Glu Lys Gin Ala Leu Phe Ala Leu 1170 1175	Cys Lys Ser Val Lys Glu 1180	Asn	Gly
Leu Glu Pro His Leu Val Lys Lys 1185 1190	Val Leu Glu Lys 1195	Val Ser	Glu	Thr 1200
Phe Gly Tyr Arg Arg Leu Glu Asp 1205	Phe Met Ala Ser 1210	His Leu	Asp 1215	Tyr
Leu Val Leu Glu Trp Leu Asn Leu 1220	Gin Asp Thr Glu 122 5	Tyr Asn 123C	Leu	Ser
Ser Phe Pro Phe Ile Leu Leu Asn 1235 1240	Tyr Thr Asn Ile	Glu Asp 1245	Phe	Tyr

• ·

- 214 -

Arg Ser	Cys Tyr Lys Val Leu	Ile Pro His Leu Val Ile Arg Ser His
12 51	3 125	5 1260
Phe Asp	Glu Val Lys Ser Ile	Ala Asn Gin Ile Gin Glu Asp Trp Lye
1265	1270	1275 1280
Ser Leu	Leu Thr Asp Cys Phe 1285	Pro Lys Ile Leu Val Asn Ile Leu Pro 1290 1295
Tyr Phe	Ala Tyr Glu Gly Thr 1300	Arg Asp Ser Gly Met Ala Gin Gin Arg 1305 1310
Glu Thr	Ala Thr Lys Val Tyr 1315	Asp Met Leu Lys Ser Glu Asn Leu Leu 1320 1325
Gly Lys	Gin Ile Asp His Leu	Phe Ile Ser Asn Leu Pro Glu Ile Val
1330 1335 1340
Val Glu	Leu Leu Met Thr Leu	His Glu Pro Ala Asn Ser Ser Ala Ser
1345	1350	1355 1360
Gin Ser	Thr Asp Leu Cys Asp 1365	Phe Ser Gly Asp Leu Asp Pro Ala Pro 1370 1375
Asn Pro	Pro His Phe Pro Ser 1380	His Val Ile Lys Ala Thr Phe Ala Tyr 1385 1390
Ile Ser	Asn Cys His Lys Thr 1395	Lys Leu Lys Ser Ile Leu Glu Ile Leu 1400 1405
Ser Lys	Ser Pro Asp Ser Tyr	Gin Lys Ile Leu Leu Ala Ile Cys Glu
1410 1415 1420
Gin Ala	Ala Glu Thr Asn Asn	Val Tyr Lys Lys His Arg Ile Leu Lys
1425	1430	1435 1440
Ile Tyr	His Leu Phe Val Ser 1445	Leu Leu Leu Lys Asp Ile Lys Ser Gly 1450 1455
Leu Gly	Gly Ala Trp Ala Phe 1460	Val Leu Arg Asp Val Ile Tyr Thr Leu 1465 1470
Ile His	Tyr Ile Asn Gin Arg 1475	Pro Ser Cys Ile Met Asp Val Ser Leu 1480 1485
Arg Ser	Phe Ser Leu Cys Cys	Asp Leu Leu Ser Gin Val Cys Gin Thr
149C	l 149Ξ	i 1500
Ala Val	Thr Tyr Cys Lys Asp	Ala Leu Glu Asn His Leu His Val Ile
1505	1510	1515 1520
Val Gly	Thr Leu Ile Pro Leu 1525	Val Tyr Glu Gin Val Glu Val Gin Lys 1530 1535
Gin Val	Leu Asp Leu Leu Lys 1540	Tyr Leu Val Ile Asp Asn Lys Asp Asn 1545 1550
Glu Asn	Leu Tyr Ile Thr Ile 1555	Lys Leu Leu Asp Pro Phe Pro Asp His 1560 1565
Val Val	Phe Lys Asp Leu Arg	Ile Thr Gin Gin Lys Ile Lys Tyr Ser
1570	1575	1580
Arg Gly	Pro Phe Ser Leu Leu	Glu Glu Ile Asn His Phe Leu Ser Val
1585	1590	1595 1600

Ser	Val	Tyr Asp	Ala Leu 1605	Pro	Leu	Thr Arg Leu Glu Gly Leu Lys Asp
1610	1615
Leu	Arg	Arg Gin	Leu Glu	Leu	His	Lys Asp Gin Met	Val Asp Ile Met
		1620			1625	1630
Arg	Ala	Ser Gin	Asp Asn	Pro	Gin	Asp Gly Ile Met	Val Lys Leu Val
		1635			1640	1645
Val	Asn	Leu Leu	Gin Leu	Ser	Lys	Met Ala Ile Asn	His Thr Gly Glu
	1650		1655	1660
Lys	Glu	Val Leu	Glu Ala	Val	Gly	Ser Cys Leu Gly	Glu Val Gly Pro
1665		1670		1675	1680
Ile	Asp	Phe Sei'	Thr Ile	Ala	Ile	Gin His Ser Lys	Asp Ala Ser Tyr
			1685			1690	1695
Thr	Lys	Ala Leu	Lys Leu	Phe	Glu	Asp Lys Glu Leu	Gin Trp Thr Phe
		1700			1705	1710
Ile	Met	Leu Thr	Tyr Leu	Asn	Asn	Thr Leu Val Glu	Asp Cys Val Lys
		1715			1720	1725
Val	Arg	Ser Ala	Ala Val	Thr	Cys	Leu Lys Asn Ile	Leu Ala Thr Lys
	1730		1735	1740
Thr	Gly	His Ser	Phe Trp	Glu	Ile	Tyr Lys Met Thr	Thr Asp Pro Met
1745		1750		1755	1760
Leu	Ala	Tyr Leu	Gin Pro	Phe	Arg	Thr Ser Arg Lys	Lys Phe Leu Glu
			1765			1770	1775
Val	Pro	Arg Phe	Asp Lys	Glu	Asn	Pro Phe Glu Gly	Leu Asp Asp Ile
		1780			1785	1790
Asn	Leu	Trp Ile	Pro Leu	Ser	Glu	Asn His Asp Ile	Trp Ile Lys Thr
		1795			1800	1805
Leu	Thr	Cys Ala	Phe Leu	Asp	Ser	Gly Gly Thr Lys	Cys Glu Ile Leu
	1810		1815	1820
Gin	Leu	Leu Lys	Pro Met	Cys	Glu	Val Lys Thr Asp	Phe Cys Gin Thr
1Θ25		1830		1835	1840
Val	Leu	Pro Tyr	Leu Ile	His	Asp	Ile Leu Leu Gin	Asp Thr Asn Glu
			1845			1850	1855
Ser	Trp	Arg Asn	Leu Leu	Ser	Thr	His Val Gin Gly	Phe Phe Thr Ser
		1860			1865	1870
Cys	Leu	Arg His	Phe Ser	Gin	Thr	Ser Arg Ser Thr	Thr Pro Ala Asn
		1875			1880	1885
Leu	Asp	Ser Glu	Ser Glu	His	Phe	Phe Arg Cys Cys	Leu Asp Lys Lys
	1890		1895	1900
Ser	Gin	Arg Thr	Met Leu	Ala	Val	Val Asp Tyr Met	Arg Arg Gin Lys
1905			1910		1915	1920
Arg	Pro	Ser Ser	Gly Thr	Ile	Phe	Asn Asp Ala Phe	Trp Leu Asp Leu
			1925			1930	1935
Asn Tyr	Leu Glu	Val Ala	Lys	Val	Ala Gin Ser Cys	Ala Ala His Phe
		1940			1945	1950

• ·

	- 216 -	• • • · ·	• « • » « ·	• · • • · ·
	-- -
Thr Ala Leu	Leu Tyr Ala Glu Ile Tyr Ala Asp Lys	Lys Ser	Met	Asp
1955 1960	1965
Asp Gin Glu	Lys Arg Ser Leu Ala Phe Glu Glu Gly	Ser Gin	Ser	Thr
1970	1975 1980
Thr Ile Ser	Ser Leu Ser Glu Lys Ser Lys Glu Glu	Thr Gly	Ile	Ser
19Θ5	1990 1995			2000
Leu Gin Asp	Leu Leu Leu Glu Ile Tyr Arg Ser Ile	Gly Glu	Pro	Asp
	2005 2010		2015
Ser Leu Tyr	Gly Cys Gly Gly Gly Lys Met Leu Gin	Pro Ile	Thr	Arg
	2020 2025	2030
Leu Arg Thr	Tyr Glu His Glu Ala Met Trp Gly Lys	Ala Leu	Val	Thr
2035 2040	2045
Tyr Asp Leu	Glu Thr Ala Ile Pro Ser Ser Thr Arg	Gin Ala	Gly	Ile
2050	2055 2060
Ile Gin Ala	Leu Gin Asn Leu Gly Leu Cys His Ile	Leu Ser	Val	Tyr
2065	2070 2075			2080
Leu Lys Gly	Leu Asp Tyr Glu Asn Lys Aso Trp Cys	Pro Glu	Leu	Glu
	2085 2090		2095
Glu Leu His	Tyr Gin Ala Ala Trp Arg Asn Met Gin	Trp Asp	His	Cys
	2100 2105	2110
Thr Ser Val	Ser Lys Glu Val Glu Gly Thr Ser Tyr	His Glu	Ser	Leu
2115 2120	2125
Tyr Asn Ala	Leu Gin Ser Leu Arg Asp Arg Glu Phe	Ser Thr	Phe	Tyr
2130	2135 2140
Glu Ser Leu	Lys Tyr Ala Arg Val Lys Glu Val Glu	Glu Met	Cys	Lys
2145	2150 2155			2160
Arg Ser Leu	Glu Ser Val Tyr Ser Leu Tyr Pro Thr	Leu Ser	Arg	Leu
	2165 2170		2175
Gin Ala Ile	Gly Glu Leu Glu Ser Ile Gly Glu Leu	Phe Ser	Arg	Ser
	2180 2185	2190
Val Thr His	Arg Gin Leu Ser Glu Val Tyr Ile Lys	Trp Gin	Lys	His
2195	2200	2205
Ser Gin Leu	Leu Lys Asp Ser Asp Phe Ser Phe Gin	Glu Pro	Ile	Met
2210	2215 2220
Ala Leu Arg	Thr Val Ile Leu Glu Ile Leu Met Glu	Lys Glu	Met	Asp
2225	2230 2235			2240
Asn Ser Gin	Arg Glu Cys Ile Lys Asp Ile Leu Thr	Lys His	Leu	Val
	2245 2250		2255
Glu Leu Ser	Ile Leu Ala Arg Thr Phe Lys Asn Thr	Gin Leu	Pro	Glu
	2260 2265	2270
Arg Ala Ile	Phe Gin Ile Lys Gin Tyr Asn Ser Val	Ser Cys	Gly	Val
2275	2280	2285
Ser Glu Trp	Gin Leu Glu Glu Ala Gin Val Phe Trp	Ala Lys	LyB	Glu
2290	2295 2300

• · · · · ·

- 217 -

Gin Ser Leu Ala Leu 2305	Ser Ue Leu Lys Gin Met Ile	Lys	Lys	Leu	Asp 2320
2310	2315
Ala Ser Cys Ala Ala	Asn Asn Pro	Ser Leu Lys Leu	Thr	Tyr	Thr	Glu
2325	2330			2335
Cys Leu Arg Val Cys	Gly Asn Trp	Leu Ala Glu Thr	Cys	Leu	Glu	Asn
2340		2345		2350
Pro Ala Val Ile Met	Gin Thr Tyr	Leu Glu Lys Ala	Val	Glu	Val	Ala
2355	2360	2365
Gly Asn Tyr Asp Gly	Glu Ser Ser	Asp Glu Leu Arg	Asn	Gly	Lys	Met
2370	2375	2380
Lys Ala Phe Leu Ser	Leu Ala Arg	Phe Ser Asp Thr	Gin	Tyr	Gin	Arg
2385	2390	2395				2400
Ile Glu Asn Tyr Met	Lys Ser Ser	Glu Phe Glu Asn	Lys	Gin	Ala	Leu
2405	2410			2415
Leu Lys Arg Ala Lys	Glu Glu Val	Gly Leu Leu Arg	Glu	His	Lys	Ile
2420		2425		2430
Gin Thr Asn Arg Tyr	Thr Val Lys	Val Gin Arg Glu	Leu	Glu	Leu	Asp
2435	2440	2445
Glu Leu Ala Leu Arg	Ala Leu Lys	Glu Asp Arg Lys	Arg	Phe	Leu	Cys
2450	2455	2460
Lys Ala Val Glu Asn	Tyr Ile Asn	Cys Leu Leu Ser	Gly	Glu	Glu	His
2465	2470	2475				2480
Asp Met Trp Val Phe	Arg Leu Cys	Ser Leu Trp Leu	Glu	Asn	Ser	Gly
2485	2490			2495
Val Ser Glu Val Asn	Gly Met Met	Lys Arg Asp Gly	Met	Lys	Ile	Pro
2500		2505		2510
Thr Tyr Lys Phe Leu	Pro Leu Met	Tyr Gin Leu Ala	Ala	Arg	Met	Gly
2515	2520	2525
Thr Lys Met Met Gly	Gly Leu Gly	Phe His Glu Val	Leu	Asn	Asn	Leu
2530	2535	2540
Ile Ser Arg Ile Ser	Met Asp His	Pro His His Thr	Leu	Phe	Ue	Ile
2545	2550	2555				2560
Leu Ala Leu Ala Asn	Ala Asn Arg	Asp Glu Phe Leu	Thr	Lys	Pro	Glu
2565	2570			2575
Val Ala Arg Arg Ser	Arg Ue Thr	Lys Asn Val Pro	Lys	Gin	Ser	Ser
2580		2585		2590
Gin Leu Asp Glu Asp	Arg Thr Glu	Ala Ala Asn Arg	Ile	Ue	Cys	Thr
2595	2600	2605
Ile Arg Ser Arg Arg	Pro Gin Met	Val Arg Ser Val	Glu	Ala	Leu	Cys
2610	2615	2620
Asp Ala Tyr Ue Ue	Leu Ala Asn	Leu Asp Ala Thr	Gin	Trp	Lys	Thr
2625	2630	2635				2640

Gin Arg Lys Gly Ile Asn Ile Pro Ala Asp Gin Pro Ile Thr Lys Leu 2645 2650 2655

218 • · · · ·

Lys Asn Leu Glu Asp Val	Val	Val	Pro Thr 2665	Met	Glu Ile	Lys Val Asp 2670
	2660
His	Thr Gly Glu Tyr Gly	Asn	Leu	Val Thr	Ile	Gin Ser	Phe Lys Ala
	2675		2680		2685
Glu	Phe Arg Leu Ala Gly	Gly	Val	Asn Leu	Pro	Lys Ile	Ile Asp Cys
	2690	2695			2700
Val	Gly Ser Asp Gly Lys	Glu	Arg	Arg Gin	Leu	Val Lys	Gly Arg Asp
2705 2710			2715	2720
Asp	Leu Arg Gin Asp Ala	Val	Met	Gin Gin	Val	Phe Gin	Met Cys Asn
	2725			2730		2735
Thr	Leu Leu Gin Arg Asn	Thr	Glu	Thr Arg	Lys	Arg Lys	Leu Thr Ile
	2740			2745			2750
Cys	Thr Tyr Lys Val Val	Pro	Leu	Ser Gin	Arg	Ser Gly	Val Leu Glu
	2755		2760		2765
Trp	Cys Thr Gly Thr Val	Pro	Ile	Gly Glu	Phe	Leu Val	Asn Asn Glu
	2770	2775			2780
Asp	Gly Ala His Lys Arg	Tyr	Arg	Pro Asn	Asp	Phe Ser	Ala Phe Gin
2785 2790			2795	2800
Cys	Gin Lys Lys Met Mec	Glu	Val	Gin Lys	Lys	Ser Phe	Glu Glu Lys
	2805			2810		2815
Tyr	Glu Val Phe Met Asp	Val	Cys	Gin Asn	Phe	Gin Pro	Val Phe Arg
	2820			2825			2830
Tyr	Phe Cys Met Glu Lys	Phe	Leu	Asp Pro	Ala	Ile Trp	Phe Glu Lys
	2835		2840		2845
Arg	Leu Ala Tyr Thr Arg	Ser	Val	Ala Thr	Ser	Ser Ile	Val Gly Tyr
	2850	2855			2860
Ile	Leu Gly Leu Gly Asp	Arg	His	Val Gin	Asn	Ile Leu	Ile Asn Glu
2865 2870			2875	2880
Gin	Ser Ala Glu Leu Val	His	Ile	Asp Leu	Gly	Val Ala	Phe Glu Gin
	2885			2890		2895
Gly	Lys Ile Leu Pro Thr	Pro	Glu	Thr Val	Pro	Phe Arg	Leu Thr Arg
	2900			2905			2910
Asp	Ile Val Asp Gly Met	Gly	Ile	Thr Gly	Val	Glu Gly	Val Phe Arg
	2915		2920		2925
Arg	Cys Cys Glu Lys Thr	Met	Glu	Val Met	Arg	Asn Ser	Gin Glu Thr
	2930	2935			2940
Leu	Leu Thr Ile Val Glu	Val	Leu	Leu Tyr	Asp	Pro Leu	Phe Asp Trp
2945	i 2950			2955	2960
Thr	Met Asn Pro Leu Lys	Ala	Leu	Tyr Leu	Gin	Gin Arg	Pro Glu Asp
	2965			2970		2975
Glu	Thr Glu Leu His Pro	Thr	Leu	Asn Ala Asp	Asp Gin	Glu Cys Lys
	2980			2985			2990
Arg	Asn Leu Ser Asp Ile	Asp	Gin	Ser Phe	Asp	Lys Val	Ala Glu Arg
	2995		3000		3005

219 • · · « · ······ • · · · · · · • · · · · ······· ·· ·

Val Leu	Met	Arg	Leu Gin Glu	Lys	Leu	Lys	Gly Val	Glu	Glu	Gly	Thr
3010		3015			3020
Val Leu	Ser	Val	Gly Gly Gin	Val	Asn	Leu	Leu Xle	Gin	Gin	Ala	Xle
3025			3030				3035				3040
Asp Pro	Lys	Asn	Leu Ser Arg	Leu	Phe	Pro	Gly Trp	Lys	Ala	Trp	Val
			3045			3050			3055

(2) INFORMACE O SEQ ID NO:36:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 19 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 36:

Met Ser Gly Gly Ser Ser Cys Gin Thr Pro Ser Arg Ala Ile Pro 15 10 15

Ala Thr Arg Arg (2) INFORMACE O SEQ ID NO:37:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 21 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 37:

Gly Asp Tyr Ser Thr Thr Pro Gly Gly Thr Leu Phe Ser Thr Thr 15 10 15

Pro Gly Gly Thr Arg Arg (2) INFORMACE O SEQ ID NO:38:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 12 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 38:

Glu Cys Arg Asn Ser Pro Val Thr Lys Thr Arg Arg

10 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:39:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 12 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární

220 (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 39:

Gly Val Thr Ser Pro Ser Ser Asp Glu Pro Arg Arg 15 10 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:40:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 10 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 40:

Met Glu Ala Ser Gin Ser His Leu Arg Arg

10 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:41:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 12 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 41:

Arg Arg Asn Ser Pro Glu Asp Lys Arg Ala Gly Gly 15 10 (2) INFORMACE O SEQ ID NO:42:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:

(A) DÉLKA: 12 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID NO: 42:

Gly Glu Glu Ser Gin Phe Glu Met Asp Ile Arg Arg 15 10

- 221 INDICATIONS RELAT1NG TO A DEPOSITED MICROORGANISM (PCT Rule 13b,j)

A. The indications made below rclale lo lhe micTOOrgamsm referred lo in lhe description on page θ .lineš 2— 6

B. IDENTIFICATION OF DEPOSIT Further deposiu are identified on an additional sbeet [ [

Name of depositary instiruiion

American Type Culture Collection

Address of depositary ins ti lu l ion (ineluding poital codc and country) 12301 Parklawn Drive Rockville, MD 20852 US

Dále of deposit

November 1996

Acccssion Number s

HB 12233 and HB 12234

C. ADDITIONAL INDICATIONS (Icave blani if not applicable)

This information is conlinued on an additionaI sbeet

In respect of those designations in vhich a European patent is sought, a sarople of the deposited nícroorganism vili be made available until the publication of the mention of the grant of the European patent or until the dáte on vhich the application has been refused or vithdravn or ís deemed to be vithdravn, only by the issue of such a sample to an expert norainated by the person requesting the sample (Rule 28(4) EPC).

D. DESIGNATED STATES FOR WHICFI INDICATIONS ARE MADE (if the indicotionj are not for all dcjigtialcd States)

EP

E. SEPARATE FURNISHING OF INDICATIONS (Icave blani if no< applicable)

Tbe indications listed below will be submitled to lhe Intcmaiional Bureau later (specifythcgenerálnaiureofihcindicattonse.g. 'Acccssion Humbcr of Deposit)

For receiving Office use only | Cj^Tbis sbeet was received witb tbe interna tional application ^3^7'For International Bureau use only | This sheet was received by lhe International Bureau on:

Authorized officer

Claims (26)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Purifikovaný a izolovaný polynukleotid zahrnující polynukleotid kódující aminokyselinovou sekvenci kinasy příbuzné PIK MCCSla uvedenou v SEQ ID NO: 31.
2. 2. Purifikovaný a izolovaný polynukleotid zahrnující polynukleotid kódující aminokyselinovou sekvenci kinasy příbuzné PIK MCCSip uvedenou v SEQ ID NO: 33.
3. 3. Polynukleotid podle nároku 1 nebo 2, kterým je

   DNA.
4. 4. DNA podle nároku 3, kterou je cDNA.
5. 5. cDNA MCCSla skládající se ze sekvence DNA uvedené V SEQ ID NO: 30.
6. 6. DNA MCCSip skládající se ze sekvence DNA uvedené v SEQ ID NO: 32.
7. 7. DNA podle nároku 3, kterou je genomová DNA.
8. 8. RNA transkript DNA podle nároku 3.
9. 9. DNA podle nároku 3, kterou je zcela nebo zčásti chemicky syntetizovaná DNA.
10. 10. DNA zahrnující DNA kódující úplnou délku savčí kinasy MCCS1 zvolená ze souboru zahrnujícího

    a) DNA, která za stringentních podmínek hybridizuje k nekódujícímu řetězci DNA o sekvenci uvedené v SEQ ID NO: 30;

    9 99 9

    b) DNA, která za stringentních podmínek hybridizuje k nekódujícímu řetězci DNA o sekvenci uvedené v SEQ ID NO: 3 a

    c) DNA, která za stringentních podmínek hybridizuje k nekódujícímu řetězci DNA o sekvenci uvedené v SEQ ID NO: 32.
11. 11. Vektor zahrnující DNA podle nároku 3 nebo 10.
12. 12. Vektor podle nároku 11, v němž je DNA operativně připojena k sekvenci DNA řídící expresi.
13. 13. Hostitelská buňka stabilně transformovaná nebo transfekovaná DNA podle nároku 3 nebo 10 způsobem umožňujícím expresi kinasy MCCS1 v této hostitelské buňce.
14. 14. Způsob produkce kinasy příbuzné PIK MCCS1, vyznačující se tím, že se hostitelská buňka podle nároku 11 pěstuje ve vhodném živném médiu a z buněk nebo růstového média se izoluje kinasa MCCS1.
15. 15. Purifikovaný a izolovaný polypeptid zahrnující aminokyselinovou sekvenci kinasy příbuzné PIK MCCSla, která je uvedena v SEQ ID NO: 31.
16. 16. Purifikovaný a izolovaný polypeptid zahrnující aminokyselinovou sekvenci kinasy příbuzné PIK MCCSlp, která je uvedena v SEQ ID NO: 33.
17. 17. Polypeptid nebo peptid, který je schopen specificky vázat kinasu příbuznou PIK MCCS1.
18. 18. Protilátkový produkt podle nároku 17.
19. 19. Monoklonální protilátka podle nároku 18.

    - 224 ·· · • · • · ····
20. 20. Hybridomální buněčná linie produkující monoklonální protilátku podle nároku 19.
21. 21. Způsob identifikace modulátorů aktivity kinasy MCCSl, vyznačující se tím, že se

    a) přípravek obsahující kinasu MCCSl v kinasovém pufru inkubuje s gamma-³²P-ATP a exogenním substrátem pro kinasu za přítomnosti a za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny a

    b) měří se počet molů fosfátu přeneseného na substrát; přičemž zvýšení počtu molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je aktivátorem této kinasy MCCSl a snížení počtu molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je inhibitorem této kinasy MCCSl.
22. 22. Hybridomální buněčná linie 224C.
23. 23. Hybridomální buněčná linie 224F.
24. 24. Způsob identifikace sloučeniny inhibující MCCSl, vyznačující se tím, že se (a) exprimuje MCCSl v geneticky pozměněné buňce, čímž se sníží citlivost této buňky vůči poškození DNA, kterážto citlivost je spojena s genetickým pozměněním;

    - 225 (b) geneticky pozměněná buňka ze stupně (a) se exponuje škodlivému působení za přítomnosti a nepřítomnosti zkoušené modulační sloučeniny;

    • · ·· · · · · ♦ · · · · · · • ·· · · · · · · · • · · · · · • ·· ···»·· ·· · (c) měří se citlivost buňky vůči poškození DNA; a (d) jako inhibitor aktivity MCCS1 se identifikuje zkoušená sloučenina, která buňce navrací citlivost vůči poškození DNA.
25. 25. Způsob identifikace sloučeniny inhibující ATM, vyznačující se tím, že se (a) exprimuje ATM v geneticky pozměněné buňce, čímž se sníží citlivost této buňky vůči poškození DNA, kterážto citlivost je spojena s genetickým pozměněním;

    (b) geneticky pozměněná buňka ze stupně (a) se exponuje škodlivému působení za přítomnosti a nepřítomnosti zkoušené modulační sloučeniny;

    (c) měří se citlivost buňky vůči poškození DNA; a (d) jako inhibitor aktivity ATM se identifikuje zkoušená sloučenina, která buňce navrací citlivost vůči poškození DNA.
26. 26. Způsob identifikace modulátorů aktivity kinasy ATM, vyznačující se tím, že se

    a) přípravek obsahující kinasu ATM v kinasovém pufru inkubuje s gamma-³²P-ATP a exogenním substrátem pro kinasu za přítomnosti a za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny a ····

    - 226

    b) měří se počet molů fosfátu přeneseného na substrát; přičemž zvýšení počtu molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je aktivátorem této kinasy ATM a snížení počtu molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za přítomnosti zkoušené sloučeniny ve srovnání s počtem molů ³²P-fosfátu přeneseného na substrát za nepřítomnosti zkoušené sloučeniny ukazuje, že zkoušená sloučenina je inhibitorem této kinasy ATM.

    01-1656-97-Če