CZ20013714A3

CZ20013714A3 - Léčivo pro léčení nemocí spojených s receptorem - beta estrogenu

Info

Publication number: CZ20013714A3
Application number: CZ20013714A
Authority: CZ
Inventors: Bernard Christophe Barlaam; Timothy Martin Piser
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1999-04-16
Filing date: 2000-04-11
Publication date: 2002-08-14
Also published as: IL145839A0; HUP0200740A3; PL351314A1; NO20015015L; AU4128800A; AR043085A1; EE200100526A; MXPA01010423A; WO2000062765A2; SK14762001A3; IS6108A; TR200201762T2; WO2000062765A3; EP1173164A2; HUP0200740A2; US6518301B1; CN1358091A; CA2370126A1; TR200102992T2; JP2002542187A

Description

Léčivo pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu

Oblast techniky

Předložený vynález se týká použití určitých sloučenin pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

Dosavadní stav techniky

Léčba nahrazením estrogenu (ERT) snižuje výskyt Alzheimerovy nemoci a zlepšuje kognitivní funkce pacientů s Alzheimerovou nemocí (Nikolov a kol., Drugs of Today, 34 (11), 927 až 933 (1998)). ERT také vykazuje příznivé účinky na osteoporózu a kardiovaskulární nemoci a může mít anxiolytické a antidepresivní léčebné vlastnosti. Avšak ERT vykazuje škodlivé vedlejší účinky na dělohu a prsa, které limitují jeho použití.

Blahodárné účinky ERT na ženy po menopause se odráží jako příznivé účinky estrogenu v modelech týkajících se kognitivních funkcí, úzkosti, deprese, úbytku kostní hmoty a kardiovaskulárního poškození u krys s vyjmutým vaječníkem.

Estrogen také u zvířecích modelů způsobuje hypertrofii dělohy a prsou připomínající jeho mitogenní účinky na tyto tkáně u lidí.

• · · ·« ·· ···

Blahodárné účinky ERT na ženy po menopause se odráží jako příznivé účinky estrogenu v modelech vztahujících se ke kognitivní funkci, úzkosti, depresi, úbytku kostní hmoty a kardiovaskulárnímu poškození u krys s odstraněným vaječníkem. Zvláště, experimentální studie ukázaly, že účinky estrogenu na centrální nervovou soustavu (CNS) zvýšením cholinergní funkce, zvýšením exprese neutrofinu/exprese receptorů neutrofinu, změnou zpracování amyloidního prekurzoru proteinu, poskytují ochranu nervů proti řadě poškození a zvyšují kromě jiných účinků glutamatergní synaptický přenos. Celkový průřez účinků estrogenu na CNS při předklinických studiích je shodný s jeho klinickým použitím při zlepšení kognitivních funkcí a zpoždění postupu Alzheimerovy nemoci. Estrogen také mitogenně působí na tkáň dělohy a prsu, což naznačuje jeho škodlivé vedlejší účinky na tyto tkáně u lidí.

Receptor estrogenu (ER) u lidí, krys a myší existuje jako dva podtypy. ER-α a ER-β, které sdílejí asi 50 % identity v doméně vážící ligandy (Kuiper a kol., Endocrinology, 139 (10) , 4252 až 4263 (1998)). Rozdíly v identitě podtypů odpovídají za skutečnost, že některé malé sloučeniny přednostně vykazují vazbu k jednomu podtypu než k druhému (Kuiper a kol.).

U krys je ER-β silně rozšířen v mozku, kostech a cévním epitheliu, ale slabě ve vztahu k ER-α je rozšířen v děloze a prsou. Mimoto myši paralyzované ER-a (ERKO-α) jsou sterilní a vykazují malou nebo žádnou hormonální odezvu rozmnožovacích tkání. Naproti tomu myši paralyzované ER-β (ERKO-β) jsou plodné a vykazují normální vývoj a činnost tkáně prsou a dělohy. Tato pozorování naznačují, že selektivní zaměření ER-β převyšující ER-α může potvrzovat blahodárné účinky při • ·

• · · • · ·

• · · · · · několika důležitých nemocích lidí, jako jsou Alzheimerova nemoc, úzkostné poruchy, depresivní poruchy, osteoporóza a kardiovaskulární onemocnění bez náchylnosti k vedlejším účinkům na rozmnožovací systém. Selektivní účinky na tkáně, ve kterých dochází k expresi ER-β (CNS, kosti atd.) převyšující účinky na dělohu a prsa, mohou být dosaženy pomocí činidel, která na sebe více selektivně působí s ER-β než s ER-Cť.

Účelem tohoto vynálezu je identifikovat selektivní ligandy ER-β, které jsou užitečné při léčení nemocí při kterých má ERT léčebné přínosy.

Dalším účelem tohoto vynálezu je identifikovat selektivní ligandy ER-β, které kopírují blahodárné účinky ERT na mozek, kosti a činnost kardiovaskulárního systému.

Dalším účelem tohoto vynálezu je identifikovat selektivní ligandy ER-β, které zvyšují kognitivní funkci a zpožďují postup Alzheimerovy nemoci.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je použití sloučeniny, která vyhovuje vztahu:

( KiaA /Ki_PA) / ( KiaE /Ki_PE)>l, ve kterém

KiaA je hodnotou Ki pro agonistu v ER-a;

Kip_A je hodnotou Ki pro agonistu v ER-β;

• · · β · φ ·

Kice je hodnota Ki pro estrogen v ER-α; a ΚίβΕ je hodnotou Κχ pro estrogen v ER-β;

pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

Předmětem tohoto vynálezu je použití sloučenin, které mají

pro výrobu estrogenu. β, které účinky ERT léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-p Tyto sloučeniny působí jako selektivní ligandy ERkopírují ERT, ale postrádají nežádoucí vedlejší

Tyto sloučeniny zvláště vyhovují vztahu:

( KiaA /K_ipA) / (Κ_ϊαΕ/Κ_ίβΕ)>1, výhodně:

( Kíqa /KíPa) / (Kíce/Kípe) >30, výhodněj i:

( KiaA /Κίβή) / ( KiaE /ΚίβΕ) >100,

ve	kterém
KiaA	je hodnotou Ki pro ligand v ER-a;
ΚίβΑ	je hodnotou Ki pro ligand v ER-β;
ΚχαΕ	je hodnota Ki pro estrogen v ER-a;
ΚίβΕ	je hodnotou Ki pro estrogen v ER-β.

I · · · · » · <

I » <

• · · ··

4a

Podrobný popis vynálezu

Tento vynález umožňuje léčení nemoci spojené s receptorem-β estrogenu. Takový způsob léčení zahrnuje krok podávání účinného množství sloučeniny, která odpovídá vztahu ( K-ictA /KíPa) / (Kíqe/Kípe) >1, ve kterém

Ki«A je hodnotou Ki pro agonistu v ER-a; Κΐβ_Α je hodnotou Ki pro agonistu v ER-β; K_iaE je hodnota Ki pro estrogen v ER-α; a ΚίβΕ je hodnotou Ki pro estrogen v ER-β.

Výhodně sloučenina odpovídá vztahu (K_iC(A/K_ipA) / (K_iaE/K_ipE) >100 . Onemocnění spojená s receptorem-β estrogenu jsou především vybrána z Alzheimerovy nemoci, úzkostných poruch, depresivních • · · · poruch, osteoporózy, kardiovaskulární nemoci, revmatické artritidy a rakoviny prostaty. Výhodněji jsou nemocemi Alzheimerova nemoc nebo depresivní poruchy.

Sloučeniny podle současného vynálezu jsou selektivní ligandy ER-β obecného strukturálního vzorce:

V tomto obecném strukturálním vzorci L¹ j_e -c(=0)-, =C(R⁶)-, -CH(R⁶)-, O, S nebo NR^a, výhodně -C(=0)~, =C(R⁶)-, -CH(R⁶)- nebo 0;

L² je =C- nebo -CH-;

L³ je =C(R⁶)-, -CH (R⁶) - nebo -C(=0)-; a

L⁴ je -C(=0)-, CH₂, 0, S nebo ŇR^a, výhodně -C(=0)~, CH2 nebo 0, za předpokladu, že když L¹ je -C(=0)-, L⁴ je CH2, 0, S nebo NR^a; když L⁴ je -C(=0)-, L¹ je CH2, 0, S nebo NR^a; a když L³ je -C(=O)-, L¹ je =C (R⁶) - nebo -CH(R⁶)-, a L⁴ je 0 nebo NR^a. Navíc, když L¹ je =C(R⁶)-, L² je =C-; když L¹ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-; když L³ je =C(R⁶)-, L² je =C-; a když L³ je -CH(R⁶)-, L²je -CH-. Symbol —— představuje jednoduchou vazbu nebo dvojnou vazbu, závisící na hybridizaci L¹ až L⁴. Struktury pro L² vykazují pouze tři vazby, protože čtvrtá vazba je jednoduchá vazba k R¹.

9 999 9· ····

R¹ je přes jednoduchou vazbu připojen k L², a je to fenyl, substituovaný fenyl, Het nebo substituovaný Het, jak je popsán níže. R¹ je výhodně:

ve kterém

R⁷ je H, Cl nebo methyl;

R⁸ je Br, Cl, F, R^a, 0R^a nebo allyl;

R⁹ je H, OH, NH₂, Br, Cl; a

R¹⁰ je H nebo methyl; nebo

R⁸ a R⁹ mohou být spojeny do -OCH2O-, tvořící vnější sekundární 5-ti člennou kruhovou strukturu k fenylové skupině; nebo R¹ je substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklický substituent, který má následující strukturální vzorec:

; výhodněji nesubstituovaný

R², R³, R⁴ a R⁵ jsou každý, nezávisle, -R^a, -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R^a, -NS(=O)2R^a, halogen, kyanoskupina, -CF3, -CO₂R^a, -C(=O)R^a, -C(=O)NHR^a, nitroskupina, -S(=O)R^a nebo -S(=O)2R^a a výhodně je R^a, OR^a, NR^a2, NC(=O)R^a, CF₃nebo halogen, výhodně vodík, hydroxyskupina nebo methylová skupina.

R⁶ je R^a, fenyl nebo CF3.

R^a je nezávisle, na každém výskytu, H nebo (C1-C5) alkyl.

Když L¹ je -C(=O)- a R² je hydroxyskupina nebo vodík a R³je vodík a R⁴ je hydroxyskupina a R⁵ je vodík a R⁶ je vodík, pak R¹ není para-fenol.

Pro účely tohoto vynálezu, substituovaný, když je používaný k modifikaci fenylu nebo kruhu s heteroatomy tak znamená kruh nezávisle v jedné nebo více pozicích substituovaný skupinami -R^a, -0R^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R^a, -NS(=O)2R^a, halogenem, kyanoskupinou, -CF3, -CO2R^a, -C(=O)R^a, -C(=O)NHR^a, nitroskupinou, -S(=O)R^a nebo -S(=O)₂R^a.

Také pro účely tohoto vynálezu Het znamená substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklus s jedním nebo dvěma kruhy, vybraný z následujících:

• · ·4·4 4 4 4 4« 44 • 4 4 4 444 4 ·»

4444 4444 4

4 44 44 4 444 •4 «4 44 «44 4 4 444

ve kterém křížové vazby znamenají, že heterocyklus může být připojen k jakékoliv dostupné pozici na kruhu, který křižují.

Měření vázání receptoru estrogenu

Schopnost sloučeniny vázat se k ER se měří její schopností soutěžit o vázání s radioaktivně značeným estrogenem [¹²⁵I]-16a-jod-3,17p-estradiol (NEN, Katalogové číslo NEX-144). Na radioaktivně značený ligand je zde odkazováno jako na [ I]-estradiol.

Komplementární DNA ER-β (přírůstek genové banky č. X99101) nebo ER-oí (přírůstek genové banky č. M12674) byly klonovány do vektoru exprese pSG5 (Stratagen), transformovaného do E. coli řetězce DHoíF a čištěny za použití kolony obsahující aniontoměničovou pryskyřici (Oiagen katalogové č. 12125). Receptor proteinu byl připraven pomocí in vitro transkripce a translace těchto plasmidů za použití TNT T7 Quick-systému lýze spřažených retikulocytů (Promega katalogové č. L1170). Lyzát retikulocytů (12,5 ml) byl inkubován po 90 minut při 30 °C s 312,5 pg plasmidů ER-α a 625 • · · · · · · · · ·· · ·· · ·· ·· ··· pg ER-β. Programovaný lyzát byl pak rozdělen na díly a skladován zmrazený při -80 °C.

Sloučeniny byly testovány duplicitně při polovičním logaritmu koncentrací pohybujících se od 10 pM do 3 μΜ. Sloučeniny byly připraveny jako lmM výchozí materiály v DMSO, pak byly zředěny ve vazebném-testovacím pufru (v mM: 20 HEPES, 150 NaCl, 1 EDTA, 6 monothloglycerol a 10 Na2Mo04,* 10 % hmotnost/objem glycerolu a pH=7,9) v řadě trojnásobně koncentrovaných 20μ1 podílů v 96 jamkové plotně. Podíly receptoru byly rozmraženy na ledě a odpovídajícím způsobem zředěny (viz níže) ve vazebném testovacím pufru. Zředěný receptor (30 μΐ/každý) se přidal do každé jamky. Z výchozího ethanolového zásobního roztoku od výrobce se [ I]-estradiol zředil ve vazebném-testovacím pufru na pracovní roztok o koncentraci 900 pM. Konečný zkouškový objem byl 60 μΐ, který se skládal z 20 μΐ sloučeniny podle tohoto vynálezu, 30 μΐ programovaného lyzátu retikulocytu a 10 μΐ 900pM [ I]-estradiolu. Konečná koncentrace [ I]-estradiolu byla 150 pM. Plotny obsahující konečnou testovací směs se protřepávaly na třepačce po 2 minuty a inkubovaly se přes noc (asi 16 h) při 4 °C.

Receptorem vázaný a nevázaný radioaktivní ligand byl oddělen filtrací přes sloupce sefadexu. Sloupce (45 μΐ, objem vrstvy) byly připraveny přidáním suchého prostředí sloupce (Pharmacia katalogové č. G-25) do 96-ti jamkové matrice sloupců (Millipore MultiScreen Plates katalogové č. MAHVN4510). Sloupce pak byly nasyceny 300 μΐ vazebného-testovacího pufru a skladovány při 4 °C. Před použitím byly skladované sloupce odstřeďovány po 10 minut při frekvenci otáček 2000 za minutu, pak byly dvakrát promyty 200 μΐ • A AAAA AA A AAAA •A A AAAA AAA A • AA ·· · AAA • · AA AA A A · · A AAAA čerstvého vazebného pufru. Pak byla na sloupce aplikována vazebná-testovací směs (50 μί/každá) a okamžitě byl na sloupce aplikován dodatečný elučni objem 35 μί. Receptorem vázaný radioaktivní ligand byl vymýván ze sloupce pomocí odstřeďování po 10 minut při frekvenci otáček 2000 za minutu.

K vymytému komplexu radioaktivně značený ligand/receptor byla přidána scintilační směs a radioaktivní značení bylo měřeno v kapalné fázi pomocí scintilačního čítače.

Nespecifické vázání bylo stanoveno pomocí kompetice s 150 mM diethylstilbesterolem (DES). Vazebné afinity jsou vyjádřeny jako Ki, počítané za použití Cheng-Prushoffova vzorce podle hodnot IC50 vytvořených srovnáním vztahu koncentrace k procentům specifického vázání (SB) s následující rovnicí:

% SB = maximum - (maximum - minimum)/(1 + 10 Uogic^-iog[sloučenina])

Při této zkoušce, standardní ligandy receptoru estrogenu, estradiol· a DES jsou zjištěny jako neselektivní ligandy ER-β a ER-o; s vysokou afinitou (Kí<1 nM).

Objem receptor-lyzát programovaných retikulocytů, který má být přidán do vazebné zkoušky byl stanoven nezávisle ze dvou měření uskutečněných na každé šarži připraveného receptoru. Za prvé, byly pro standardní sloučeniny stanoveny hodnoty KiS za použití řady zředění receptorových přípravků. Scatchardova analýza vazebné afinity ligandů se provádí při zředěních receptoru, která pro tyto sloučeniny dávají uvedené Kis a přijatelný poměr signál:hluk (~10). Tyto pokusy

5 naznačují Kd pro [ I]-estradiol 0,1 až 1 nM a Bmax 5 až 30 pmol.

444444 44 · ·· 44

4 4 4 4 4 4 4 4 4

4 4 4 · · 4 444 • 4 44 44 ··· ·· 444

Podávání a použití

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu projevují vysokou selektivitu pro ER-β vyšší než k ER-oí a mohou vykazovat agonistické působení na ER-β bez nežádoucích účinků na dělohu. Tak mohou být tyto sloučeniny a prostředky, které je obsahují, použity jako léčiva při ošetření různých onemocnění CNS souvisejících s ER-β, jako je například Alzheimerova nemoc.

Předkládaný vynález také poskytuje prostředky obsahující účinné množství sloučenin podle předkládaného vynálezu, včetně jejich netoxických adičních solí, amidů a esterů, které mohou sloužit k zajištění výše uvedených léčebných přínosů. Takové prostředky mohou být také zpracovány společně s fyziologicky přijatelnou kapalinou, gelem nebo ředidly ve formě pevné látky, adjuvans a vehikuly. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být také kombinovány s jinými sloučeninami o nichž je známo, že jsou používány jako léčebná činidla pro výše uvedené nebo jiné indikace.

Tyto sloučeniny a prostředky mohou být lidem podávány kvalifikovanými odborníky v oblasti zdravotní péče způsobem podobným jako pro jiná léčebná činidla a navíc jiným savcům pro veterinární účely, jako pro domácí zvířata. Obecně jsou takové prostředky připravovány jako injektovatelné, buď roztoky kapalin nebo suspenze; mohou být také připraveny formy pevné látky vhodné pro rozpouštění v kapalinách nebo suspendování v kapalinách před inijekcí. Prostředek může být také emulgován. Aktivní složka je často míchána s ředidly nebo vehikuly, která jsou fyziologicky přijatelná a snášenlivá s aktivní složkou. Vhodná ředidla a vehikula jsou například voda, fyziologický roztok, dextróza, glycerol nebo podobné a ®··4 ·· 4 44 44

4 4444 4 44

4444 · 4 4 444

44 44 444 44 444 jejich kombinace. Navíc pokud je to žádoucí mohou prostředky obsahovat menší množství pomocných látek, jako jsou zvlhčovadla nebo emulgační činidla, stabilizační nebo pHpufrovací činidla a podobné.

Prostředky jsou běžně podávány parenterálně, inijekcemi, například buď podkožně nebo nitrožilně. Další prostředky, které jsou vhodné pro jiné způsoby podávání, zahrnují čípky, nitronosní aerosoly a v některých případech, orální formy. U čípků mohou být obsaženy tradiční pojivá a vehikula, například polyalkylenglykoly nebo triglyceridy; takové čípky mohou být vytvářeny ze směsí obsahujících aktivní složku. Orální přípravky obsahují taková běžně používaná vehikula, jako například farmaceuticky čistý mannitol, laktózu, škrob, stearát hořečnatý, sacharid sodný, celulózu, uhličitan hořečnatý a podobné. Tyto prostředky jsou ve formě roztoků, suspenzí, tablet, pilulek, kapslí, prostředků s udržovaným uvolňováním nebo prášků.

Předkládané sloučeniny mohou být utvářeny do prostředků jako formy neutrální nebo formy solí. Farmaceuticky přijatelné netoxické soli zahrnují adiční soli s kyselinami (vytvářené s volnými aminoskupinami) a které jsou tvořeny s anorganickými kyselinami, jako jsou například kyseliny chlorovodíková nebo fosforečná, nebo s organickými kyselinami jako jsou octová, oxalová, vinná, mandlová a podobné. Soli tvořené s volnými karboxylovými skupinami mohou být odvozené od anorganických bází, jako jsou například hydroxid sodný, draselný, amonný, vápenatý nebo železitý, a takových organických bází jako jsou isopropylamin, trimethylamin, 2-ethylaminoethanol, histidin, prokain a podobné.

·· ···· ·1 · ·· ·· • · · ···« · · « • · · · · · · · · · ·· ·· ·· ··· 4· ··«

Navíc k sloučeninám podle předkládaného vynálezu, které vykazují účinky jako ER-β, mohou být také sloučeniny podle předkládaného vynálezu použity jako meziprodukty při syntéze takových užitečných sloučenin.

Syntéza

Sloučeniny spadající do rozsahu předkládaného vynálezu mohou být syntetizovány chemicky způsoby dobře známými v oboru. Následující příklady mají v úmyslu ukázat obecná schémata syntézy, které mohou být použity k přípravě mnoha různých variací použitím různých průmyslově dostupných výchozích materiálů. Tyto příklady jsou zamýšleny pouze jako průvodci jak připravit některé sloučeniny z rozsahu tohoto vynálezu a nemají se vykládat jako omezení rozsahu tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 (způsob A)

-(3-Brom-4-hydroxyfenyl)-5,7-dihydroxy-4H-l-benzopyran-4-on

1,3,5-Trihydroxybenzaldehyd (1,01 g, 6,25 mmol) a 3-brom— -4-hydroxyfenyloctová kyselina (1,44 g, 6,25 mmol) se suspendují v POCI3 (4 ml) . Po 1 minutě se projeví exothermická reakce. Směs se nechá ochladit na teplotu místnosti. Přidá se chlorid zinečnatý (1M etherický roztok, 4,7 mmol) a směs se zahřívá při 75 °C po 1 h. Po ochlazení se směs rozdělí mezi ethylacetát a 1M vodnou HCl. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného a suší se pomocí MgSO4. Čištění na silikagelu (gradient MeOH/dichlormethan) umožňuje získat • 0 ♦ »·· *t 0 00 ·· • « · 0 · 0 0 0 4 00

0 * 000 ·0 0 • 00 00 0 0 0 0 ·· ·· 0· *<· 00 0000

1-(2,4,6-trihydroxyfenyl)-2-(3-brom-4-hydroxyfenyl)ethanon (390 mg) jako hnědočerveně zbarvenou pevnou látku.

K 1-(2,4,6-trihydroxyfenyl)-2-(3-brom-4-hydroxyfenyl)ethanonu (370 mg) v dimethylfuranu (DMF) (5 ml) se pod dusíkovou atmosférou po kapkách přidá BF₃-Et2O (0,83 ml, 6,55 mmol), následovaný methansulfonylchloridem (0,507 ml, 6,55 mmol) . Směs se míchá při teplotě místnosti po 10 minut a zahřívá se po 30 min při 55 °C. Po ochlazení se směs rozdělí mezi ethylacetát a IM vodnou HC1. Organická vrstva se promyje IM HC1 a roztokem chloridu sodného a čistí se Cis vysoce výkonnou chromatografií, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu (55 mg).

Příklad 2 (sloučenina č. 28; způsob B)

3-(4-Hydroxyfenyl)-7-hydroxy-4-methylkumarin

Roztok 2,4-dihydroxyacetofenonu (1,1 g, 7,24 mmol), 4-hydroxyfenyloctové kyseliny (1,45 g, 9,5 mmol) a octanu draselného (0,9 g, 9,2 mmol) v anhydridu kyseliny octové (10 ml) se zahřívá pod ref luxem po 18 h. Po ochlazení se směs nalije na led a vodu. Pevná látka se odfiltruje, promyje se etherem a suší se pod vakuem, čímž se získá 3-(4—acetoxy-fenyl)-7-acetoxy-4-methylkumarin (1,83 g).

Suspenze 3- (4-acetoxyfenyl)-7-acetoxy-4-methylkumarinu (500 mg) v tetrahydrofuranu (THF) (10 ml) a IN vodném roztoku hydroxidu sodného (10 ml) se míchá po 1 h. Směs se okyselí na pH=l koncentrovanou HC1 a extrahuje ethoxyacetátem (EtOAc) a vodou. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného a suší MgSO4. Odpaření rozpouštědla a rozetření odparku s etherem dává sloučeninu pojmenovanou v názvu (140 mg).

·· 1 « · A • *4

Podmínky vysoce výkonné kapalinové chromatografie (sloupec pro vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií 4,6 x 250 mm Cis 5pm Vydax 218TP54, rychlost toku: 1,5 ml/min, acetonitril/voda, 0,1 % TFA, lineární gradient od 10:90 do

50:50 více než 30 min, UV detekce: 254 nm) jsou označovány jako podmínky A.

Podmínky vysoce výkonné kapalinové chromatografie (sloupec pro vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií 2,1 x 30 mm Cis 3,5 pm Zorbax pro rychlé rozlišení, rychlost toku: 0,7 ml/min, voda-0,05 % TFA po 0,5 min, pak 90 % vodný acetonitril/voda 0,05 % TFA, lineární gradient od 0 : 100 do 80 : 20 přes 9,5 min, UV detekce) jsou označovány jako podmínky B.

Následující sloučeniny se připraví podle těchto způsobů, za použití odpovídajících výchozích materiálů.

Tabulka 1-1. část

č.	L^1-“	I?	L^J		R¹
1	C(=O)	=C- '	=CR^fa-	0	3,4-dihydroxyfenyl
2	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	2-Cl-4-hydroxyfenyl
3	C(=O)	=c-	II o Z) σ 1	0	2-methyl-4-hydroxyfenyl

• Β ΒΒΒΒ • Β Β Β · «Β ΒΒΒ

Β Β Β Β Β Β ΒΒΒΒ Β • ΒΒΒ ·· · ··· ·· ΒΒ ·Β ··· ·· ···

Tabulka 1-1. část - pokračování

č.	Ϊ7	I?	I?	L⁴	R¹
4	C(=O)	=c-	II Q σ' 1 i 1	0	3-F-4-hydroxyfenyl
5	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3-C1-4-hydroxyfenyl
6	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	3-Br-4-hydroxyfenyl
7	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3-allyl-4-hydroxyfenyl
8	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3-Pr-4-hydroxyfenyl
9	C (=0)	=c-	=CR^b-	0	3-methoxy-4-hydroxyfenyl
10	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3,5-diMe-4-hydroxyfenyl
11	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	4-fluorfenyl
12	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3,4-(OCH2O) fenyl
13	C(=0)	=C-	=CR^b-	0	4-aminofenyl
14	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	2-naftyl
15	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3-hydroxyfenyl
16	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	2-hydroxyfenyl
17	C (=0)	=c-	=CR^b-	0	2-thiofen
18	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	3-thiofen
19	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	2-chinolyl
20	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	4-bromfenyl
21	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	4-chlorfenyl
22	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	4-hydroxyfenyl
23	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	4-hydroxyfenyl
24	c (=0)	=c-	=CR^b-	0	3-F-4-hydroxyfenyl
25	C(=0)	=c-	=CR^fa-	0	4-hydroxyfenyl
26	C (=0)	-CH-	-CHR^b-	0	4-hydroxyfenyl
27	C(=0)	-CH-	-CHR^b-	CH₂	4-hydroxyfenyl
28	=CR^b-	=c-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
29	=CR^b-	=c-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
30	=CR^b-	=c-	c (=0)	0	4-hydroxyfenyl
31	=CR^b-	=c-	C(=0)	0	2-thiofen
32	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	4-hydroxyfenyl

·· ···· ·· · ·· · 9 • 9 9 · · * · f · · « j j ·, ,íi : .; : ♦·

9 9 9 9 9 · · » · • 9 «0 9 9 9 9 9 9 · 9 · 9 t>

Tabulka 1-1. část - pokračování

č.	L¹	L²	L^J	L⁴	R^x
33	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	2-fluorfenyl
34	C(=O)	=c-	=CR^fa-	0	fenyl
35	C(=O)	=c-	=CR^b-	0	fenyl
36	0	=c-	=CR^b-	C(=O)	4-hydroxyfenyl
37	ch₂	-CH-	-CHR^b-	C(=0)	4-hydroxyfenyl
38	=CR^b-	=c-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
39	=CR^b-	=c-	C(=O)	0	4-hydroxyfenyl
40	=CR^b-	=c-	C(=O)	0	4-hydroxyfenyl
41	=CR^fc-	=c-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
42	II o 73 σ 1	=c-	C(=0)	0	4-chlorfenyl
43	=CR^b-	=c-	c (=0)	0	4-hydroxyfenyl
44	C(=0)	=c-	=CR^b-	0	4-isopropoxyfenyl
45	c (=0)	-CH-	-CHR^b-	CH₂	3-bromfenyl
46	ch₂	-CH-	-CHR^b-	0	4-hydroxyfenyl

Tabulka 1-2. část - pokračování

Č.	R²	R^J	R⁴	R^b	R^b
1	OH	H	OH	H	H
2	OH	H	OH	H	H
3	OH	H	OH	H	H
4	OH	H	OH	H	H
5	OH	H	OH	Ή	H
6	OH	H	OH	H	H
7	OH	H	OH	H	H
Č.	R²	R³	R⁴	R^b	R^b
8	OH	H	OH	H	H
9	OH	H	OH	H	H
10	OH	H	OH	H	H

9·

9 9 • · *·· · » « ♦

Tabulka 1-2. část - pokračování

č.	R^z		R⁴	R^b	R^b
11	OH	H	OH	H	H
12	OH	H	OH	H	H
13	OH	H	OH	H	H
14	OH	H	OH	H	H
15	OH	H	OH	H	H
16	OH	H	OH	H	H
17	OH	H	OH	H	H
18	OH	H	OH	H	H
19	OH	H	OH	H	H
20	OH	H	OH	H	H
21	OH	H	OH	H	H
22	OH	H	O-methyl	H	H
23	methyl	H	OH	H	H
24	H	H	OH	H	H
25	H	H	OH	H	cf₃
26	OH	H	OH	H	H
27	OH	H	OH	H	H
28	H	H	OH	H	methyl
29	H	H	OH	H	ethyl
30	H	H	H	H	H
31	H	H	OH	H	H
32	OH	H	OH	OMe	H
33	OH	H	OH	H	H
34	OH	H	OH	H	fenyl
35	H	H	OH	H	fenyl
36	H	H	OH	H	H
37	H	H	OH	H	H
38	H	H	OH	H	H
39	OH	H	OH	H	H

Β Β Β Β β

Β δ Β Β Β Β β Β Β · Β ·

Β * Β Β I · ·

Tabulka 1 - část 2 - pokračování

č.	R²	R^J	R⁴	R⁵	R^b
40	H	H	H	OH	H
41	H	OH	H	H	H
42	H	H	OH	H	methyl
43	H	H	OH	methyl	methyl
44	H	H	OH	H	cf₃
45	H	H	OH	H	H
46	H	H	OH	H	H

Tabulka 2 - čištění, vlastnosti a způsob syntézy

Č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β KinM	ER-oí KinM	Způsob syntézy
1			2,15	605	*
2	5,76 (B)	305 (^JbCl)	0,55	56	A
3	5,41 (B)	285	1,2	61	A
4	5,62 (B)	289	0,5	74	A
5	6,11 (B)	305 (^3bCl)	1/2	1100	A
6	25,6 (A)	349 (⁷⁹Br)	1,25	439	A
7	6,72 (B)	311	3,2	>3000	A
8	7,08 (B)	313	0,75	>3000	A
9			143	>3000	*
10	25,4 (A)	299	25	>3000	A
11	6,93 (B)	273	100	>3000	A
12			22	>3000	*
13			6	>3000	*
14	7,86 (B)	305	150	>3000	A
15	5,39 (B)	271	15	900	A

• · · · · ·

Tabulka 2 - pokračování • · · < · · ···· · Φφφφ ·· φ ·«· •Φ φφ ·Φ φφφ ·· ···

č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β KmM	ER-a KinM	Způsob syntézy
13			6	>3000	*
14	7,86 (B)	305	150	>3000	A
15	5,39 (B)	271	15	900	A
16	5,68 (B)	271	110	>3000	A
17	¹H NMR (DMSO-de): 12,59 (singlet, 1H), 10,99 (singlet, 1H) , 8,88 (singlet, 1H), 7,63 (multiplet, 2H), 7,14 (multiplet, 1H), 6,44 (singlet, 1H), 6,27 (singlet, 1H).	3,3	>3000	A
18	^ΧΗ NMR (DMSO-de): 12,92 (singlet, 1H), 10,93 (singlet, 1H), 8,72 (singlet, 1H), 8,07 (singlet, 1H), 7,64 (multiplet, 1H), 7,53 (multiplet, 1H), 6,42 (singlet, 1H), 6,24 (singlet, 1H).	17	>3000	A
19	5,26 (B)	306	122	>3000	A
20	7,70 (B)	333 (^/yBr)	25	>3000	A
21	7,55 (B)	289 (^3t>Cl)	42	>3000	A
22			50	>3000	*
23	5,20 (B)	269	0,5	200	A
24	4,91 (B)	273	3,3	>3000	A
25	6,07 (B)	323	10	321	pozn. a)
26			3,7	1000
27	5,43 (B)	271	5,7	3000	pozn b)

Tabulka 2 - pokračování

444444 · · · 4 4 4 4 »4 4 » · *» 444

44 44 444 44 444

č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β KinM	ER-a KinM	Způsob syntézy
28	¹H NMR (DMSO-de) : 10,47 (multiplet, ÍH), 9,55 (multiplet, ÍH), 7,67 (dublet, ÍH), 7,1 až 6,7 (multiplet, 6H), 2,22 (multiplet, 3H); Hmotnostní spektroskopie: 269	12	322	B
29	5,57 (B)	283	4	80	B
30	6,01 (B)	239	140	>3000	B
31	³Η NMR (DMSO-dg) : 10,68 (singlet, ÍH), 8,44 (singlet, ÍH), 7,75 (multiplet, ÍH), 7,60 (multiplet, 2H), 7,16 (multiplet, 2H), 6,87 (dvojitý dublet, ÍH), 6,81 (multiplet, ÍH); Hmotnostní spektroskopie: 245	108	>3000	B
32			33	>3000	*
33	^XH NMR (DMSO-ds) : 12,66 (singlet, ÍH), 10,98 (singlet, ÍH), 8,42 (singlet, ÍH), 7,48 (multiplet, 2H) , 7,27 (multiplet, 2H), 6,44 (dublet, 1H, J = 2,1 Hz), 6,26 (dublet, ÍH, J = 2,1 Hz); Hmotnostní spektroskopie: 273	50	>3000	A
34			9,5	95	*
35			19	50	*
36			0,33	88	*

Tabulka 2 - pokračování

č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β KmM	ER-Cí KmM	Způsob syntézy
37	^ΧΗ NMR (DMSO-ds): 9,61 (singlet, 1H), 9,52 (singlet, 1H), 7,26 (dublet, 1H, J = 2,7 Hz), 7,21 až 7,13 ( multiplet, 3H) , 6,99 (dvojitý dublet, 1H, J = 8,1 Hz, j' = 2,7 Hz), 6,71 (dublet, 2H, J = 8,4 Hz), 3,26 (multiplet, 1H), 3,07 až 2,80 (multiplet, 3H), 2,64 (multiplet, 1H); Hmotnostní spektroskopie: 253 (M-H)	0,73	75	pozn. c)
38	¹H NMR (DMSO-ds): 10,52 (singlet, 1H), 9,64 (singlet, 1H), 8,03 (singlet, 1H), 7,55 (multiplet, 3H), 6,85 až 6,70 (multiplet, 4H); Hmotnostní spektroskopie: 255	4,9	220	B
39	^XH NMR (DMSO-ds): 10,63 (singlet, 1H), 10,33 (singlet, 1H) , 9,60 (singlet, 1H), 7,95 (singlet, 1H) , 7,50 (dublet, 2H, J = 8,4 Hz), 6,80 (dublet, 2H, J = 8,4 Hz), 6,28 (singlet, 1H), 6,22 (singlet, 1H); Hmotnostní spektroskopie: 271	79	>3000	B

4 · 4 4

Tabulka 2 - pokračování

444 4 · 444

40	ⁱH NMR (DMSO-de): 10,18 (singlet, 1H), 9,73 (singlet, 1H), 8,08 (singlet, 1H), 7,60 (dublet, 2H, J =8,4 Hz), 7,17 (multiplet, 2H), 7,06 (multiplet, 1H) , 6,85 (dublet, 2H, J = 8,4 Hz); Hmotnostní spektroskopie: 255	104	>3000	B
41	ⁱH NMR (DMSO-de): 9,72 (singlet, 2H), 8,05 (singlet, 1H), 7,58 (dublet, 2H, J = 8,7 Hz), 7,25 (dublet, 1H, J = 8,7 Hz), 7,07 (dublet, 1H), 7,00 (dvojitý dublet, 1H, J = 8,4 Hz, j' = 2,7 Hz), 6,84 (dublet, 2H, J = 8,4 Hz); Hmotnostní spektroskopie: 255	4,6	3000	B
42	ⁱHNMR (DMSO-de): 10,56 (singlet, 1H), 7,50 (dublet, 2H, J = 7,8 Hz), 7,42 (dublet, 1H, J = 8,7 Hz), 7,33 (dublet, 2H, J = 7,8 Hz), 6,84 (dvojitý dublet, 1H, J = 7,8 Hz, j' = 2,1 Hz), 6,75 (dublet, 1H, J = 2,1 Hz), 2,21 (singlet, 3H); Hmotnostní spektroskopie: 287 (³⁵C1)	51	>3000	B

Tabulka 2 - pokračování • 4 · ·· « 4 4 4 4 4 4 4

4 44·· 4 4 4 • 44 ·« 4 4 4 4

44 44 444 ·· ···

č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β K±nM	ER-oč KinM	Způsob syntézy
43	³H NMR (DMSO-de): 10,36 (singlet, 1H), 9,55 (singlet, 1H), 7,49 (dublet, 1H, J = 9 Hz), 7,08 (dublet, 2H, J = 8,7 Hz), 6,87 (dublet, 1H, J = 9 Hz), 6,81 (dublet, 2H, J = 8,7 Hz), 2,21 (singlet, 3H), 2,19 (singlet, 3H); Hmotnostní spektroskopie: 283	24	500	B
44	^XH NMR (DMSO-de): 11,11 (singlet, 1H), 7,93 (dublet, 1H, J = 8,7 Hz), 7,16 (dublet, 2H, J= 8,4 Hz), 7,03 až 6,93 (multiplet, 4H), 4,66 (multiplet, 1H) , 1,30 (dublet, 6H, J = 6 Hz); Hmotnostní spektroskopie: 365	118	3000	pozn. a)

Tabulka 2 - pokračování

č.	Vysoce výkonná kapalinová chromatografie min (způsob)	Hmotnostní spektroskopie (MH⁺)	ER-β ΚίΠΜ	ER-a K±nM	Způsob syntézy
45	Έ NMR (DMSO-dg) : 10,39 (singlet, 1H), 7,78 (dublet, 1H, J = 8,4 Hz), 7,42 ( multiplet, 2H) , 7,28 (triplet, 1H, J = 7,8 Hz), 7,19 (dublet, 1H, J = 7,8 Hz), 6,75 (dvojitý dublet, 1H, J = 8,4 Hz, j' = 2,4 Hz), 6,69 (dublet, 1H, J = 2,4 Hz), 3,86 (multiplet, 1H), 3,00 (multiplet, 1H), 2,85 (multiplet, 1H), 2,4 až 2,1 (multiplet, 2H); Hmotnostní spektroskopie: 317 ( Br)	116	3000	pozn. b)
46			2	155	*

* sloučenina je průmyslově dostupná

Poznámka a): Připraví se podle způsobu A; cyklizační krok se provádí za použití anhydridu kyseliny trifluoroctové podle J. Med. Chem., 35, 3519 (1992).

Poznámka b): Připraví se cyklizací odpovídající 2,4-diarylbutanové kyseliny s POCI3, a následnou dimethylací methoxyetherů podle způsobu vyvinutého v J. Org. Chem., 11, 34 (1946).

Poznámka c) : Připraví se podle Aust. J. Chem., 31, 1011 (1978).

Claims

1. Použití sloučeniny, která vyhovuje vztahu:

(K_iaA/K_ipA) / (K_iaE/K_ipE)>l, ve kterém

K_iO(A je hodnotou Κχ pro agonistu v ER-oč;

Κχρ_Α je hodnotou Κχ pro agonistu v ER-β;

Κχ_αΕ je hodnota Κχ pro estrogen v ER-α; a ΚχβΕ je hodnotou Κχ pro estrogen v ER-β;

2. Použití sloučeniny podle nároku 1, která vyhovuje vztahu (Κχ_αΑ/Κχρ_Α) / (Κχ_αΕ/Κ_ίβΕ) >100, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

3. Použití sloučeniny podle nároku 2, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu, kde nemoc, která má být léčena, je vybrána ze souboru skládajícího se z Alzheimerovy nemoci, úzkostných poruch, depresivních poruch, osteoporózy, kardiovaskulárních nemocí, revmatické artritidy a rakoviny prostaty.

4.

Použití sloučeniny podle nároku 3, obecného vzorce • · · • * · ·«· 9 · · ·

9 9 9 9 9 9 9 9 φ · 9

9999999 9 999 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9999 · ·· 999 99 9999

kterém L¹ je -C(=O)-, =C(R⁵)-, -CH(R⁵)-, 0, S nebo NR^a; L² je =C- nebo -CH-; L³ je =C(R⁶)-, -CH(R⁶) - nebo -C(=0)-; a L⁴ je -C(=O)-, ch₂, 0, S nebo NR^a;

ve kterém když L¹ je -C(=0)-, L⁴ je CH₂, O, S nebo NR^a;

když L⁴ je -C(=O)-, L¹ je CH₂, O, S nebo NR^a;

když L³ je -C(=O)-, L¹ je =C(R⁶)- nebo -CH(R⁶)-, a L⁴ je O nebo NR^a;

když L¹ je =C(R⁶)-, L² je =C-; když L¹ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-; když L³ je =C(R⁶) -, L² je =C-; a když L³ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-;

R^a je nezávisle, při každém výskytu, H nebo (Cx-Cs) alkyl;

R¹ je fenyl, substituovaný fenyl nebo Het;

R², R³, R⁴ a R⁵ jsou nezávisle vybrány ze souboru skládajícího se z -R^a, -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R^a, -NS(=O)2R^a, halogenu, kyanoskupiny, -CF3, -CO₂R^a, -C(=O)R^a, -C(=O)NHR^a, nit ros kupiny, -S(=O)R^a a -S(=O)₂R^a;

R⁶ je H, (Ci-C₅) alkyl, fenyl nebo CF₃; a ve kterém když L¹ je -C(=O)- a R² je hydroxyskupina nebo vodík a R³ je vodík a R⁴ je hydroxyskupina a R⁶ je vodík, pak R¹ není parafenol;

•« · • · · • · · ♦ · · · · «· ··«· ·· · · • · · · · 9 « • » · · · 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 9

9 99 9 9 nebo jakékoliv její farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

5. Použití sloučeniny podle nároku 4, kde R¹ je Het, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

6. Použití sloučeniny podle strukturní vzorec nároku 4, kde

R¹ má obecný ve kterém

R⁷ je H, Cl nebo methyl;

R⁸ je Br, Cl, F, R^a, 0R^a nebo allyl;

R⁹ je H, OH, NH₂, Br nebo Cl; a

R¹⁰ je H nebo methyl; nebo

R⁸ a R⁹ mohou být spojeny do -OCH₂O-; nebo

R¹ je substituovaná nebo nesubstituovaná verze jednoho z následujících heterocyklů:

τ

CH,

N nebo pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

7. Použití kterékoli sloučeniny podle nároku 6, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu, kde nemocí je Alzheimerova nemoc nebo depresivní poruchy.

8. Použití sloučeniny podle nároku 6, kde R², R³, R⁴ a R⁵ jsou nezávisle vybrané ze souboru skládajícího se z -R^a, -0R^a, NR^a2, -NC(=O)R^a, CF₃ a halogenu, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.

9. Použití sloučeniny podle nároku 8, kde

R² je hydroxyl nebo vodík;

R³ je vodík nebo methyl;

R⁴ je hydroxyl nebo vodík; a

R⁵ je vodík nebo hydroxyl, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β ··

4* 4

4 ♦ ·

4 4 4 ·

4 · · • 44 4 ·

4 4 4 4

44 4444 estrogenu.

10 . Použití sloučeniny podle nároku 8, kde L⁴ je -C(=O)-, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spoj ených s receptorem-β estrogenu. 11. Použití sloučeniny podle nároku 8, kde L³ je -C(=O)-, pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu. 12. Použití sloučeniny podle nároku 8, kde L¹ je -C(=O) pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β

estrogenu.

13. Použití sloučeniny podle nároku 9, kde R¹ je nesubstituovaná verze skupiny vzorce pro výrobu, léčiva pro léčení nemocí spojených s receptorem-β estrogenu.