CZ20003772A3 - Farmaceutický prostředek s imunosupresivním účinkem a jeho použití - Google Patents

Abstract

Použití sloučeniny o vzorci (I), kde R! je na bázi o jednom ze vzorců (II), (III), (IV), (V) a Říje vodík, Ci-C4alkyl, brom, fluor, chlor nebo jód nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl, k výrobě léku pro imunosupresivní léčbu lidí nebo zvířat.

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká oblasti terapie léčivými prostředky a dává k dispozici nové použití 2',2'-difluornukleosidů pro výrobu kompozic či sestav k imunopresivní terapii a nové farmaceutické sestavy a produkty k léčbě lidí a zvířat.

Dosavadní stav techniky

Potlačování reaktivity imunitního systému imunopresivní terapií má velký lékařský význam při zabránění odpuzování či odmítání alogenních transplantátů u pacientů po transplantaci a při léčbě autoimunních onemocnění. V průběhu přecházejících let byl vyvinut omezený počet nových léků, které jsou vhodné k použití v ímunosupresivní terapii, jako jsou např. cyklosporin A, takrolimus, mykofenolatmofetil, daklizumab a rapamycin.

Jako dříve existuje naléhavá potřeba vyvíjet účinnější a lépe snášenlivé způsoby k léčbě autoimunních onemocnění a k zabránění odpuzování (nepřijetí) alogenních transplantátů u pacientů po transplantaci. Předložený vynález usiluje proto o přípravu nových farmaceutických kompozic či sestav a produktů pro použití v této léčebné oblasti.

Ukázalo se, že 2',2'-difluornukleosidy rozvíjejí in vitro antivirální účinky (U.S. Patent 4,808.614) a v Krebsových standardních hromadných (screening) testech onkologickou aktivitu (U.S. Patent 5,464.826). Z těchto sloučenin byl rozsáhle zkoumán ohledně své • · onkologické aktivity (Kaye, J. Ci*i*n'* OnCdÍ.***Ť2, *Í527 (1 994) 2'desoxy-2'.2'-difluorcytidin (gemcitabin, dFdC). Na základě výsledků těchto studií získal gemcitabinhydrochlorid ve více než 50 státech úřední souhlas k léčbě velkobuněčného bronchiálního (průduškového) karcinomu a/nebo karcinomu slinivky břišní. Další studie k léčbě puchýřového karcinomu prsu a karcinomu vaječníků gemcitabinem jsou v přítomné době prováděny.

Podstata vynálezu

Předložený vynález dává k dispozici použití sloučeniny o vzorci I

kde Ri je báze definovaná jedním ze vzorců

O ·· ·· · ·· ·· · · • · · · · · · · · · · · ··· · · · · · · • · · · · ··· · · · a R.2 je vodík, Ci-C4-alkyl, brom,*nuar, cfrřofTreboNÓď,* nebo jedna z jejích farmaceuticky přijatelných solí k výrobě léku pro imunopresivní terapii lidí a zvířat.

Tento vynález je dále směrován k použití sloučeniny o vzorci I pro výrobu léku k léčbě autoimunních onemocnění u lidí a zvířat.

Předložený vynález dává rovněž k dispozici použití sloučeniny o vzorci I pro výrobu léku k potlačování odpuzování či nepřijímání transplantátů u lidí a zvířat, přednostně k potlačování odpuzování (odmítání) transplantátů kostní dřeně, srdečních transplantátů, rohovkových transplantátů, transplantátů tenkého střeva, jaterních transplantátů, plicních transplantátů, transplantátů slinivky břišní, ledvinových transplantátů a kožních transplantátů.

U jiného aspektu vynálezu se používá sloučenina o vzorci I k výrobě léku k léčbě nemocí nebo stavů, které jsou uvedeny v následujícím seznamu: růžovka, akrodermititida, aktinický retikuloid, AIDS, holohlavost, Alportův syndrom, amyotrofická laterální skleróza, aftózní stomatitida, čistá aplazie červených krvinek (red cell), aplastická anemie (chudokrevnost), astma, atopická dermatitida, autoimunní enteropatie, Bechetova nemoc, bulózní multiformní erytém (s tvorbou výpotku), bulózní pemfigoid, biliární (žlučová) cirhóza, rohovkový tavící syndrom, Crohnova nemoc, herpetiformní dermatitida, dermatomyozitida, cukrovka, Duchenneova forma svalové atrofie, ekzém, epidermolytická bulóza, nodózní leprózní erytém, rodinná hemofagocytická lymfohi stiocytóza, Feltyho syndrom, kožní granulom, Graveho oftalmopatie, hemolytická anemie, hemofilie, hepatitida, ichtyóza, zánětlivé onemocnění střeva, intersticiální cystitida, intersticiální • · choroba plic, keratokonjunktivitidá*,* Klstio‘čýfb*ža L*ang*erhansových buněk, leukémie T-buněk, leukémie B-buněk, lymfomy, kožní onemocnění neznámého původu, aktivační syndrom markofágu, Moorenův vřed, morfa, roztroušená skleróza, těžká myastenie (svalová ochablost), nefropatie, nefrotický syndrom, dlaňová a chodidlová pustulóza (vředovitost), puchýřnaté onemocnění (pemphigus), přetrvávající fotosenzitivita, pityriasis rubra pilaris, polymyozitida (prudký zánět svalů), psoriáza (lupénka), psoriatická (lupénková) artritida (zánět kloubů), fibróza plic, snětivá pyodermie, retikulární erytematózní mucinóza, revmatická artritida, sarkoidóza (benigní lymfogranulom), skleritida (zánět bělimy), sklerodermie, plazivá chloroiditida, Sjogrenův syndrom, sprue (licí kanálek), Sweetův syndrom, systemický lupus erytematodus, systemická skleróza, trombocytopenie (nedostatek krevních destiček), akutní toxická epidermolýza, vředová kolitida (zánět tlustého střeva), uveitida, Weber-Christianova choroba, léky indukovaná Weber-Christianova panikulitida, Wegener-Klingerova granulomatóza.

Pro výše uvedená použití se přednostně použije 2 '-desoxy-2'. 2 ' difluorcytidin o vzorci II nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Přednostně je používanou, farmaceuticky přijatelnou solí hydrochlorid.

Předložený vynález je rovněž směrován na použití gemcitabinhydrochloridu v kombinaci s jedním nebo několika přípravky, jako jsou cyklosporin A, takrolimus, mykofenolatmofetil, daclizumab, rapamycin a jeden nebo více kortikosteroidů.

Farmaceutické kompozice či sestavy ve formě jednotkových dávek, které obsahují 1 až 10 mg gemcitabinhydrochloridu a farmaceuticky přijatelný nosič, plnidlo nebo jejich pojivo, jsou připraveny jako další aspekt vynálezu.

Vynález dává dále k dispozici farmaceutické sestavy, které obsahují sloučeninu o vzorci I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, jeden nebo několik léčivých prostředků, jako jsou cyklosporin A, takrolimus, mykofenolatmofetil, daclizumab, rapamycin a jeden nebo více kortikosteroidů, a jejich farmaceuticky přijatelný nosič, plnidlo nebo pojivo.

U · · · · · ·· 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 ·· ·

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

Farmaceutické produkty, jež obsapíruj*í··'slouě^iíinu *tr’v<zórci I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a jeden nebo několik z léků, jako jsou cyklosporin A, takrolimus, mykofenolatmofetil, daklizumab, rapamycin a jeden nebo více kortikosteroidů, v kombinaci se současným, odděleným nebo postupným používáním k léčení lidí nebo zvířat, jsou dány k dispozici ještě jako další aspekt tohoto vynálezu.

Jako sloučenina pro farmaceutické sestavy a farmaceutické produkty podle tohoto vynálezu je přednostně používán 2'-desoxy2',2'-difluorcytidin o vzorci II nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl. Přednostně je používanou, farmaceuticky přijatelnou solí hydrochlorid.

Příklady provedení vynálezu

Sloučeniny o vzorci I (2',2'-difluornukleosidy) použité u tohoto vynálezu jsou přednostně vyráběny reakcí D-glyceraldehydketonidu s Ci-C4-alkylbromdifluoracetátem za vzniku alkyl-3-dioxolanyl-2,2difluor-3-hydroxypropionátu. Hydroxypropionát je pak hydrolyzován na lakton, který je maskován a redukován, aby byl získán derivát 2-desoxy-2,2-difluorribózy nebo -xylózy. Hydroxyskupina této sloučeniny se substituuje nějakou se vyskytující skupinou a rezultující glycid (sacharid) se spojí s vhodnou bází. Vznikající maskovaný (chráněný) nukleosid je nakonec demaskován, aby mohla být získána sloučenina, již lze použít při tomto vynálezu. Podrobnosti způsobu výroby takových sloučenin pro použití u tohoto vynálezu jsou popsány v patentu U.S. 5,464.826, který je zde zaznamenán tímto odkazem.

·· ·» · ·· ·· ·· ···· ···· · · · ·

4 4 4 · · · 4 4

4· · 4 · 4 4 4 4

Cyklosporin A, takrolimus, flfýkófenolátWdfettl, ** daklizumab, rapamycin a kortikosteroidy lze získat komerčně.

Farmaceutickými sestavami a produkty tohoto vynálezu jsou farmaceutické kompozice, resp. formulace, jež obsahují účinnou látku (sloučeninu o vzorci I) a její farmaceutický nosič, plnidlo nebo pojivo. Formulování či složení daných kompozic a produktů je obvyklé a vyplývá z běžných praktik farmaceutických chemiků.

Účinná látka bude v dané formulaci (sestavě) obsažena v rozsahu od 1 do 90 hm.%. Účinná látka se smísí obvyklým způsobem s nosičem nebo se nějakým nosičem zředí nebo bude uzavřena v nějakém nosiči, který může existovat ve formě ampule, váčku či pytlíku, papíru nebo jiné nádobky. Jestliže nosič slouží jako plnidlo, může jít o pevný, polopevný nebo kapalný materiál, který funguje jako pojivo, nosič léku nebo médium pro účinnou látku. Dané kompozice a produkty mohou proto existovat ve formě tabletek, pilulek, prášků, pastilek, váčků či pytlíků, oplatek či tobolek, tinktur, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (jako pevná látka nebo v kapalném médiu), mastí, jež např. obsahují až 10 hm.% účinné látky, kapslí či ampulí z měkké a tvrdé želatiny, čípků, sterilních injikovatelných roztoků a sterilně zabalených prášků.

Některými příklady pro vhodné nosiče, pojivá a plnidla jsou např. laktóza, dextróza, sacbaróza, sorbit, mannit, škroby, arabská guma, fosforečnan vápenatý, algináty, tragant, želatina, křemičitan vápenatý, mikrokrystalická celulóza, polyvinylpyrrolidon, celulóza, voda, sirup, metyl celulóza, metyl- a propylhydroxybenzoát, talek (mastek), stearan hořečnatý a minerální olej. Dané sestavy či formulace mohou dále obsahovat kluzné (antiadhesivní) prostředky, • · · · · · · · · · · · • · · · · ···· • · · · · ······ • · · · · ···· smáčecí prostředky, emulgační**· á* súVp^tfdačlflí ·· prostředky, konzervační prostředky, sladící nebo aromatické látky. Kompozice a produkty vynálezu mohou být formulovány použitím známých způsobů tak, aby připravily rychlé nebo depotní uvolňování účinné látky po jejím podání pacientovi nebo zvířeti.

Kompozice a produkty jsou přednostně formulovány ve formě dávkovači jednotky, přičemž každá dávka obsahuje 0,1 až zhruba 100 mg účinné látky. Pojem „forma dávkovači jednotky“ se vztahuje na fyzikálně oddělené jednotky, jež jsou vhodné jako dávkovači jednotky pro člověka a jiné savce, přičemž každá jednotka obsahuje předem určené množství účinné látky, jež je vypočteno tak, aby ve spojení s vhodným farmaceutickým nosičem vyvolalo žádoucí léčebný účinek.

Je-li účinnou látkou gemcitabinhydrochlorid, představuje dávkovači jednotka přednostně zhruba od 0,5 do 25 mg a přednostněji zhruba 1 mg až 15 mg. Obzvlášť se preferuje, aby dávkovači jednotka gemcitabinhydrochloridu obsahovala zhruba od 1 do 10 mg a nejpreferovaněji zhruba od 2 mg do 5 mg této látky.

Následující příklady formulací či sestav představují specifické farmaceutické formulace, pro něž je jako účinná látka částečně použit gemcitabinhydrochlorid. Pro dané formulace může být jako účinná látka použita každá sloučenina o vzorci I. Příklady slouží jen pro znázornění a nemají v žádném případě omezit rozsah daného vynálezu.

44 ·· 44 44 • · · · · · · · · 4 · 4 ··· · 4 4444 • 444 · 444 44 4 ,,. 444444444

Formulace I .................

Tobolky, resp. kapsle z tvrdé želatiny jsou vyráběny s použitím následujících složek, přičemž „účinnou látkou“ je sloučenina o vzorci I:

Účinná látka Sušený škrob Stearan hořečnatý

Množství (mg/tobolku)

425

Výše uvedené složky jsou smíseny a plněny v množstvích kolem 460 mg do tobolek z tvrdé želatiny.

Formulace 2 iďabletková sestava (formulace) se vyrábí za použití níže uvedených složek:

Množství (mg/tabletku)

Účinná látka 2

Mikrokrystalická celulóza 500

Oxid křemičitý (odkouřený) 10

Kyselina stearová 8

Složky jsou smíchány a lisovány, aby vytvořily tabletky o hmotnosti vždy 520 mg.

Formulace 3

Vyrobí se aerosolový roztok, který obsahuje následující složky:

Hm. %

Účinná látka 0,10

Etanol 29,90

Pracovní látka 22(chlordifluormetan) 70,00 ·· Μ · 44 ·· ·· • · · · 4 · · · 4 44 «

444 4 4 4444

4444 4 444444

444 44 4444

4444 44 444 4444 44 44

Účinná látka se smíchá s etanolem a směs se přidá k části pracovní látky (kypřidla) 22, ochladí se na -30°C a převede se do plnicího zařízení. Potřebné množství se pak vnese do nádoby (nádržky) z ušlechtilé oceli a zředí se zbytkem pracovní látky 22. Pak se na nádržku či nádobu namontují ventilové jednotky.

Formulace 4

Tabletky, jež obsahují vždy 5 mg účinné látky, jsou složeny následovně:

Účinná látka 5 mg

Škrob 75 mg

Mikrokrystalická celulóza 58 mg

Pólyvinylpyrrolidon (jako 10%-ní roztok ve vodě) 5 mg

Natriumkarboxymetyl škrob (-derivát škrobu) 5,5 mg

Stearan hořečnatý 0,5 mg

Talek (mastek) 1 mg

Účinná látka, škrob a celulóza jsou protlačovány či pasírovány sítem č. 45 mesh U.S. a důkladně promíchány. Roztok pólyvinylpyrrolidonu se smíchá s výslednými prášky, jež jsou pak protlačovány (pasírovány) sítem č. 14 mesh U.S. Takto vyrobené granule jsou sušeny při 50-60°C a opět pasírovány (protlačovány) sítem č. 18 mesh U.S. Pak jsou natriumkarboxylmetylškrob, stearan hořečnatý a mastek, které byly protlačeny předem sítem č. 60 mesh U.S., přidány ke granulím, které jsou po smísení slisovány v

11···· · ·· ·· ·· • · · · ·· · · · · · · • · · · · · · · · • · · · · ······ • · · · · · · · · tabletovacím stroji, aby se získalý**fab*letký**d**Hmoťhoš*ti vždy 150 mg.

Formulace 5

Tobolky, jež obsahují vždy 0,5 mg účinné látky, jsou vyráběny následovně:

Účinná látka 0,5 mg

Škrob 98,5 mg

Mikrokrystalická celulóza 98,5 mg

Stearan hořečnatý 2,5 mg

Účinná látka, celulóza, škrob a stearan hořečnatý se smíchají, protlačí sítem č. 45 mesh U.S. a v množstvích po 200 mg plněny do tobolek ze tvrdé želatiny.

Formulace 6

Cípky, které obsahují vždy 0,1 mg účinné látky, jsou vyráběny následovně:

Účinná látka 0,1 mg

Glyceridy nasycených mastných kyselin 2 g

Účinná látka se protlačuje sítem č. 60 mesh U.S. a suspenduje v glyceridech nasycených mastných kyselin, jež jsou předem roztaveny za minimálně nutného zahřívání. Směs se pak nalije do čípkové formy se jmenovitým obsahem 2 g a nechá se ochladit.

Formulace 7 • · 99 • · <

• 9 I

9999 99 • 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 • 9999 99 99

Suspenze, které obsahují pokaždé 10 mg účinné látky v 5 ml dóze, jsou vyráběny následovně:

Účinná látka

Natriumkarboxymetylcelulóza

Sirup

Roztok kyseliny benzoové Aroma (vůně)

B arva

Vyčištěná voda

0 mg mg

1,25 ml

0,10 ml podle přání (q.v.) podle přání (q.v.) do 5 ml

Účinná látka se pasíruje (protlačuje) sítem č. 45 mesh U.S. a smíchá se s natriumkarboxymetylcelulózou a sirupem, aby se vytvořila hladká průhledná pasta. Roztok kyseliny benzoové, aromatu a barvy se zředí určitým dílem vody a přidá se za míchání. Potom se přidá dostatečné množství vody, aby se docílilo potřebného objemu.

Nitrožilní formulace (sestavy) jsou vyráběny následovně:

Formulace 8

Gemcitabin-HCl 0,1 mg

Izotonní roztok kuchyňské soli (NaCl) 1000 ml

Formulace 9

Gemcitabin-HCl 0,5 mg

Izotonní roztok kuchyňské soli (NaCl) 1000 ml

Formulace 10	13 ·· · ·· ·· ·· • 444 44 4 4 «4·· • 4 4 4 4 4444 • 444 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 * 4444 •444 44 444 4444 44 44
Gemcitabin-HCl Izotonní roztok	1,0 mg
kuchyňské soli (NaCl)	1000 ml
Formulace 11
Gemcitabin-HCl Izotonní roztok	5 mg
kuchyňské soli (NaCl)	1000 ml
Formulace 12
Gemcitabin-HCl Izotonní roztok	1 0 mg
kuchyňské soli (NaCl)	1000 ml
Formulace 13
Gemcitabin-HCl Izotonní roztok	15 mg
kuchyňské soli	1000 ml
Formulace 14
Gemcitabin-HCl Izotonní roztok	25 mg
kuchyňské soli (NaCl)	1000 ml
Roztok výše uvedených	složek se podává nitrožilně rychlostí např

ml/minutu.

·· 44 • · 4 · • 4 4 • 4 4 4

4 4

44 *4

4 4 4 4 4

4 4 4 4

4 4 4 4 4 • 4 4 4 4

Kompozice a produkty vynálezu rtřblidti být* jfftMáv^ny·*lidem nebo zvířatům různými způsoby, včetně orální (ústní), rektální (konečníkové), transdermální, subkutánní (podkožní), intravenózní (nitrožilní), intramuskulární (nitrosvalové) nebo intranazální cesty. Je-li účinnou látkou gemcitabinhydrochlorid, podává se přednostně podkožní (IV.) cestou.

Denní dávky budou normálně ležet v rozsahu od cca 0,01 do cca 10 mg/kg tělesné hmotnosti (KG) - jako jednotlivá dávka nebo dělené dávky. Přednostně dosahují denní dávky od cca 0,025 zhruba do 5 mg/kg a většinou se upřednostňují zhruba od 0,05 do cca 0,25 mg/kg. Rozumělo se však, že skutečně podané množství příslušné sloučeniny se určí lékařem ve světle relevantních vedlejších okolností, jež zahrnují léčený stav, zejména podávanou sloučeninu, zvolený způsob podávání, věk, hmotnost a reakci jednotlivého pacienta a stupeň potíží symptomů (příznaků) pacienta, a výše uvedené rozsahy dávkování nemají proto žádným způsobem omezit rozsah vynálezu.

Imunopresivní účinek reprezentativní sloučeniny o vzorci I, 2'desoxy-2', 2 '-difluorcytidinu (gemcitabinu, dFdC), byl prokázán níže popsanými zkouškami in vitro a in vivo. Použití dFdC představuje pouze upřednostněnou formu provedení vynálezu a nemá rozsah vynálezu v žádném ohledu omezit a také není tak vysvětlováno.

dFdC je antimetabolit pyrimidinu s antineoplastickou aktivitou vůči velkému počtu pevných nádorů (tumorů), včetně metastázováného karcinomu pankreatu (slinivky břišní), velkobuněčného bronchiálního (průduško vého) karcinomu, karcinomu vaječníků a • · karcinomu prsu (Kaye, J. Clin. Οηοο/·.··^ 119*94*)’},· Je to analog desoxycytidinu, který při vstupu do buňky působením desoxycytidinkinázy je postupně (krokovitě) fosforylován na odpovídající di- a trifosforečnan jako konečný produkt (Plunkett et al., Nucleosides Nucleotides 8, 775 (1 989)). Jako hlavní mechanizmus je předpokládáno zabudování dFdC-trifosforečnanu do DNA, jelikož způsobuje inhibici syntézy DNA a smrt buněk.

Více studií fáze I bylo provedeno s dFdC jako protinádorovým prostředkem a nejvíce zkušeností bylo získáno při studii fáze II při jeho týdenním podávání (Kaye, J. Clin. Oncol. 12, 1527 (1994)). Při tomto léčebném schématu je dFdC podáván nitrožilně během 30 minut jednou týdně po dobu 3 týdnů, načež následuje jednotýdenní odpočinek (klidová pauza). Uvádí se informace, že tento způsob podávání vyvolává potlačování kostní dřeně s těžkými infekcemi (WHO-Grad ΠΙ/IV) u méně než 1% pacientů. Ani po opakovaných podáváních dFdC nebyla zjištěna žádná význačná (signifikantní) redukce CD4 + - a CD8 + -lymfocytových podskupin, tzn. žádná význačná imunosuprese (potlačení imunity) (Dalkeler et al., Aníi~ Cancer Drugs 8, 643 (1997)). Naproti tomu je léčba maligních lymfomů o nízkém stupni spojena se schématem (5 x denně) s těžkým potlačováním CD4 + -lymfocytů po dobu více než 12 měsíců (Seymour et al., Blood 83, 2906 (1994)).

Studie fáze I, při nichž byl vyšetřován dFdC se schématem pětinásobného (5x denně) při dávkovači hladině 9 mg/m², způsobily signifikantní míru nehematologické toxicity, včetně sporadické horečky a těžké hypertonie (O'Rourke et al., Eur. J. Cancer 30A, 41 7 (1 994)). Na základě těchto výsledků nebylo toto schéma doporučeno pro další vyhodnocování. Měření nitrobuněčné • · · · • · · · ·* · · *·..·· · akumulace dFdC po denním podávání nňzbýeh dá*2ekí.a j éjitU.účinek na imunokompetentní buňky (odpovědné za imunitu) nebyly dosud provedeny.

Pro účel tohoto vynálezu byl vyhodnocován Ímunosupresivní účinek dFdC, když byl in vitro vyšetřován účinek dFdC na lymfocyty za použití testu růstu kolonie lymfocytů a účinek dFdC v modelu transplantace srdce u krys.

- Účinek dFdC na vznik kolonií u T-lymfocytů dFdC lze získat komerčně. Je známo, že interference léčivých prostředků se schopností tvorby kolonií aktivovaných T-lymfocytů je přijatelným nástrojem, aby se prokázaly lymfocytotoxické účinky (Aye, Blood 58, 1 043 (1981)). Proto byly mononukleární buňky z periferní krve (PBMC) kultivovány s fytohemaglutininem (PHA) a různými koncentracemi dFdC v systému mikroagarové kultury, který byl popsán v publikaci Petzer et al., Blood 78, 2583 (1991). PBMC byly suspendovány v Iscoveho médiu, který obsahoval 20% fetálního (plodového) telecího séra a 0,3% agaru. Pak byla dílčí množství po 250 μΐ této suspenze, která obsahovala 2 x 10⁵ PBMC, „vyplátována“ na destičkách s tkáňovými kulturami s mnohonásobnými propadlinami. Agar se nechal při teplotě místnosti ztuhnout a pak byl zakryt 250 μΐ média, které obsahovalo 0,5% PHA a 0,5% merkaptoetanolu (konečné koncentrace 1 x 10'⁴ mol/1). Dané kultury byly inkubovány při 37°C v plně zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2 a kolonie byly počítány s použitím obráceného mikroskopu po 7 dnech inkubace.

• · • · • · • ·

Jak je vidět na obr. 1, prostřednictvím· i5*tohafna&l.utf0.i’h*u.^,(PHA) indukovaná proliferace (bujení) lymfocytenů se účinkem dFdC v závislosti na velikosti dávky brzdí, přičemž 50%-ní brzdění nastává při koncentraci 3,25+0,9 nmol/1.

- Účinky dFdC v modelu transplantace srdce u krys

Chovem krys téhož plemene vyšlechtěné Lewisovy (LEW) krysy a Brownovy norské (BN-) krysy o hmotnosti 200-270 g byly získány Ústavem pro pokusný chov zvířat (Zentralinstitut fur Versuchstierzucht) v Hannoveru, SRN. Heterotopní srdeční transplantáty byly provedeny s použitím mikrochirurgických postupů, jak je pospáno Schmidem et al., Eur. Surg. Res. 30, 61 (1998). Po operaci byly podávány všem zvířatům voda a standardní výživa pro krysy podle libosti.

dFdC byl podáván podkožně (subkutánně) jednou denně po 50 za sebou následujících dní, přičemž toto podávání bylo zahájeno bezprostředně po chirurgickém zákroku. Denní dávky (v závorce počet zvířat ve skupině) činily 25 (n = 6), 50 (n = 5), 75 (n = 6), 100 (n = 6), 125 (n = 6), 150 (n = 6), 300 (n-6), 600 (n = 2) nebo 6000 (n=l) pg/kg tělesné hmotnosti (KG). Kontrolní skupina (n = 8) nedostávala nic.

Tepová frekvence srdečních transplantátů byla určována denním prohmatáváním (palpací). Jakmile tepová frekvence srdečních transplantátů ustávala, byla zvířata usmrcena nadměrnou dávkou éteru a všechny životně důležité orgány pro histologické účely byly odebrány. Vícenásobné řezy levým ventriklem (komorou) transplantátu a každého nativního orgánu byly fixovány 4%-ním • · • · • · · · · ···· pufrovaným formalinem. V parafiniT^žaíJudovanťr· vzorky byly nařezány na 5μ silné řezy (o tloušťce 5 pm) a byly zbarveny hematoxylinem a eosinem. Preparáty byly posuzovány patologem, nezúčastněným na této studii, a odpuzování či odmítání transplantátů bylo odstupňováno podle kritérií ISHT (Billingham et al., J. Hearí Transplant 9, 587 (1 990)).

Účinky dFdC v modelu srdečních transplantací krys jsou uvedeny v tab. 1. Výsledky jsou představeny jako doba přežití transplantátů ve dnech pro různé skupiny dávek dFdC a kontrolní skupinu, která nedostávala žádný dFdC.

Na dávkování závislá leukopenie se vyskytovala u všech zvířat všech skupin a u zvířat, jež dostala méně než 150 pg/kG dFdC, byla reverzibilní.

Tabulka 1

Dávka dFdC (pg/kg/den)	Doba přežití transplantátu (dny)	Odmítání transplantátu
Neléčená kontrola	7,1	Stupeň IV
25	7,3	Stupeň IV
50	9,2	Stupeň IV
75	15,7	Stupeň IV
100	152,8	Stupeň IV
125	144,2	Stupeň IV
150	41.5	Žádné
300	16,0	Žádné
600	10,5	Žádné
6000	4,0	v Žádné

• · · · · · · > · · · · · · · • · · · · · • ······ t ·

Výsledky výše představených studií··· u*kazujf· *·ν· ppvnó·* řadě pozoruhodnou imunosupresivní účinnost dFdC. Doba přežití transplantátů byla u všech zvířat, jimž bylo podáváno mezi 75 až 600 pg/kg KG léčivého prostředku, ve srovnání s neléčenými kontrolními zvířaty prodloužena. Nejdelší doba přežití byla docílena při dávkách 100 až 125 pg/kg KG. Více než 125 pg/kg KG způsobovalo nadměrný imunosupresivní účinek a nevratnou (irreverzibilní) toxicitu kostní dřeně..

Účinná imunosupresivní dávka dFdC ukázaná výše uvedenými výsledky je překvapivě mnohem nižší, než by se očekávalo s ohledem na dávky léčivého prostředku potřebné při léčbě maligních onemocnění.

Claims (15)

1. PATENTOVÉ • · · ·

   Kf**Á*R O ·Κ· Ύ· • · · · • · · · • · · · • · · ·

   1. Použití sloučeniny o vzorci I (I) kde Ri je báze definovaná jedním ze vzorců nh₂

   CT N

   H₂N

   HN

   N

   HN nh₂ vyznačující se tím, že R2 je vodík, Ci-C₄-alkyl, brom, fluor, chlor nebo jód, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl k výrobě léku pro imunosupresivní léčbu lidí nebo zvířat.
2. 2. Použití podle nároku 1 vyznačující se tím, že je určeno pro výrobu léku k léčbě autoimunních onemocnění u lidí a zvířat.
3. 3. Použití podle nároku 1 vyznačující se tím, že je určeno pro potlačení odpuzování či odmítání transplantátů u lidí a zvířat.

   • 9 • 9 • · • ·

   9999 99

   9 9 9 9 • · · 9 • 9 9 ·

   9 9 9 9

   9 9 9 9
4. 4. Použití podle nároku 1 vyznačuj ící se tím, že je určeno k výrobě léku k léčení nemoci nebo stavu, jež jsou vybrány z: růžovka, akrodermititida, aktinický retikuloid, AIDS, holohlavost, Alportův syndrom, amyotrofická laterální skleróza, aftózní stomatitida, čistá aplazie (červených krvinek), aplastická anemie (chudokrevnost), astma, atopická dermatitida, autoimunní enteropatie, Bechetova nemoc, bulózní multiformní erytém (s tvorbou výpotku), bulózní pemfígoid, biliární (žlučová) cirhóza, rohovkový taviči syndrom, Crohnova nemoc, herpetiformní dermatitida, dermatomyozitida, cukrovka, Duchenneova forma svalové atrofie, ekzém, epidermolytická bulóza, nodózní leprózní erytém, rodinná hemofagocytická lymfohistiocytóza, Feltyho syndrom, kožní granulom, Graveho oftalmopatie, hemolytická anemie, hemofilie, hepatitida, ichtyóza, zánětlivé onemocnění střeva, interstici ální cystitida, intersticiální choroba plic, keratokonjunktivitida, histiocytóza Langerhansových buněk, leukémie T-buněk, leukémie B-buněk, lymfomy, kožní onemocnění neznámého původu, aktivační syndrom markofágu, Moorenův vřed, morfa, roztroušená skleróza, těžká myastenie (svalová ochablost), nefropatie, nefrotický syndrom, dlaňová a chodidlová pustulóza (vředovitost), puchýřnaté onemocnění (pemphigus), přetrvávající fotosenzitivita, pityriasis rubra pilaris, polymyozitida (prudký zánět svalů), psoriáza (lupénka), psoriatická (lupénková) artritida (zánět kloubů), fibróza plic, snětivá pyodermie, retikulární erytematózní mucinóza, revmatická artritida, sarkoidóza (benigní lymfogranulom), skleritida (zánět bělimy), sklerodermie, plazivá chloroiditida, Sjogrenův syndrom, sprue (licí kanálek), Sweetův syndrom, systemický lupus erytemato du s, systemická skleróza, trombocytopenie (nedostatek krevních destiček), akutní toxická • · • · epidermolýza, vředová kolitida (zánět ”tfustéh*ó* ‘střeva), 'úveitida, Weber-Christianova choroba, léky indukovaná Weber-Christianova panikulitida, Wegener-Klingerova granulomatóza.
5. 5. Použití podle nároku 3, vyznačující se tím, že je určeno k potlačování odpuzování či odmítání transplantátů kostní dřeně, srdečních transplantátů, rohovkových transplantátů, transplantátů tenkého střeva, jaterních transplantátů, plicních transplantátů, transplantátů slinivky břišní, ledvinových transplantátů a kožních transplantátů.
6. 6. Použití podle jednoho nebo několika nároků 1 až 5 vyznačující se tím, že sloučeninou o vzorci I je 2'-d_eS0xy-2'_;2'difluorcytidín o vzorci II nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
7. 7. Použití podle nároku 6 vyznačující se tím, že farmaceuticky přijatelnou solí je hydrochlorid.
8. 8. Použití podle nároku 7 vyznačující se tím, že gem citabin hydro chlorid je kombinován s jednou nebo několika

   23 ·· ·· · ·· ·· ·· • · · · · · · « ···· • · · · · · · · · _φ· · · · · ······ látkami z cyklosporinu A, takrolllflu·,· m*ykwfenola*trwofetilu, daklizumabu, rapamycinu a jedním nebo více kortikosteroidy.
9. 9. Farmaceutická kompozice (sestava) ve formě jednotkových dávek, vyznačující se tím, že obsahuje od 1 do 10 mg gemcitabinhydrochloridu a farmaceuticky přijatelný nosič, plnidlo nebo pojivo.
10. 10. Farmaceutická kompozice (sestava) vyznačující se tím, že obsahuje:

    sloučeninu o vzorci I uvedeném v nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, jednu nebo několik látek vybraných z cyklosporinu A, takrolimu, mykofenolatmofetilu, daklizumabu, rapamycinu a jednoho nebo více kortikosteroidů a farmaceuticky přijatelný nosič, plnidlo nebo pojivo.
11. 11. Farmaceutická kompozice (sestava) podle nároku 10, vyznačující se tím, že sloučeninou o vzorci I je 2 '-desoxy-2',2'difluorcytidin o vzorci II, uvedeném v nároku 6, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
12. 12. Farmaceutická kompozice podle nároku 11 vyznačující se tím, že farmaceuticky přijatelnou solí je hydrochlorid.
13. 13. Farmaceutický produkt vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu o vzorci I uvedenou v nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a jednu nebo několik látek vybíraných ze skupiny cyklosporinu A, takrolimu, mykofenolatmofetilu, daklizumabu, rapamycinu a jednoho nebo více kortikosteroidů v kombinaci k

    24 ·· ·· · ·· ·· ..

    ···· ···. » · » « • · · · · ··.· ,· J J · · ······ současnému, oddělenému nebo postuprnv *ž?a seíb®«· ná«s»l*e*d4ijícímu použití při léčbě lidí nebo zvířat.
14. 14. Farmaceutický produkt podle nároku 13, vyznačující se tím, že sloučeninou o vzorci I je 2'-desoxy-2'.2'-fluorcytidin o vzorci II uvedeném v nároku 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
15. 15. Farmaceutický produkt podle nároku 14, kde farmaceuticky přijatelnou solí je hydrochlorid.