CN1989149A

CN1989149A - 猕猴前列腺特异性抗原

Info

Publication number: CN1989149A
Application number: CNA2005800251117A
Authority: CN
Inventors: D·J·马沙尔; L·A·斯奈德
Original assignee: Centocor Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2004-05-27
Filing date: 2005-05-26
Publication date: 2007-06-27
Anticipated expiration: 2025-05-26
Also published as: JP2008518584A; CA2568642A1; US20050266530A1; US7666993B2; EP1773858A2; CN100549021C; WO2005117964A2; US7342107B2; AU2005249450A1; EP1773858B1; WO2005117964A3; EP1773858A4; US20090118468A1

Abstract

公开了分离的编码猕猴前列腺特异性抗原的多核苷酸和可从该多核苷酸获得的多肽及用途。

Description

猕猴前列腺特异性抗原

发明领域

本发明涉及猕猴前列腺特异性抗原及其用途。

发明背景

癌症是折磨四分之一的人的严重疾病。在过去的五十年中，癌症的早期检测以及治疗癌症的许多疗法的开发已得到显著改善。疗法包括外科手术去除原发肿瘤、以及治疗播散性疾病的亚致死的放射和化学疗法。尽管这些治疗引起许多患者明显痊愈，但该治疗可能也使人非常虚弱，并且对于防止死于该疾病仍然常常无效。

前列腺癌是男性中癌症相关死亡的第二主要原因。每年将有大约180000位男性被诊断为前列腺癌，且每年40000死于该病。前列腺肿瘤细胞具有低增殖速率，并且对标准化学疗法没有反应，所述化学疗法对体内大部分快速分裂的细胞毒性最强。然而，可以与放射疗法或激素疗法一起以外科手术治疗前列腺癌。外科手术和放射疗法可以导致不需要的副作用，例如失禁和阳萎。通常可以通过使肿瘤细胞缺乏所需生长因子的激素疗法成功地控制该疾病。然而，这样治疗的所有肿瘤最终会成为不依赖于雄激素的，而且在该时刻之后没有有效治疗。

以自动免疫疗法治疗癌症已经在许多临床前模型和一些临床试验中表现出作为外科手术、放射或化学疗法的替代或辅助的前景。自动免疫疗法的目的是产生抗肿瘤特异性抗原的治疗性免疫应答，所述免疫应答然后靶向肿瘤细胞以进行破坏。然而，大多数肿瘤抗原是患者耐受的自身抗原。实际上，预期中枢和外周耐受机制阻碍对表达自身抗原的肿瘤产生有效的免疫。

解决如何打破对给定自身抗原的耐受这个问题的一个方法是使用来自不同物种的密切相关基因或蛋白质作为免疫原。也将这种免疫称为异种免疫，其潜能在于在异种序列中随机产生与I类MHC抗原结合能力增强的构造畸形表位、和/或在异种序列中存在强的辅助表位。例如，注射编码异种分化抗原的质粒DNA是诱导对其他弱免疫原性自身抗原的抗体和T细胞应答的有力手段。使用小鼠或大鼠序列，通过诱导对几种不同类型基因(包括血管发生基因(Liu等人，Blood 102：1815-23，2003))、膜糖蛋白(Wolchok等人，Cancer Immun.1，9-18(2001)；Sioud和Sorensen D.，Eur.J.Immunol.33，38-45(2003))以及整合蛋白(Lou等人，Immunol.Invest.31，51-69(2002))的自动免疫，已经显示所述异种途径对于多种癌症模型有效。

前列腺肿瘤和一些乳腺恶性肿瘤在其表面表达前列腺特异性抗原(PSA)，也称为激肽释放酶3(KLK3)。PSA是众所周知的前列腺癌血清标记；增加的PSA血清水平一般与该疾病的严重性充分相关。PSA是否在前列腺癌病因学中起作用尚不清楚；多个报导指出，PSA不是增强就是抑制致瘤性。对于HLA A2和A3单元型已描述了PSA的几个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位；这些表位的鉴定支持通过接种疫苗产生治疗性体内CTL的可能性。

事实上，编码人和小鼠前列腺特异性膜抗原(PSMA)的DNA的用途已经在复发前列腺癌患者中进行了I期临床试验测试。见Wolchok等人，Semin.Oncol.30，659-66(2003)。这些作者也已在临床前研究中显示，使用异种DNA(例如将人PSMA DNA注射至小鼠)是克服免疫耐受的绝对必要条件。然而，改进通过异种免疫以更加密切相关的PSA抗原刺激抗PSA免疫而治疗人类疾病的现有疫苗策略的需要仍然存在。

附图简述

图1显示全长猕猴PSA的核苷酸和推导的氨基酸序列。

图2显示猕猴、人和恒河猴PSA的氨基酸序列比较。

发明概述

本发明的一个方面是分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：1中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

本发明另一方面是分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：2中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

本发明另一方面是分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：4中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

本发明另一方面是分离的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO：3中所示氨基酸序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

本发明另一方面是分离的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO：5中所示氨基酸序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

本发明另一方面是分离的多肽，其包含具有SEQ ID NO：3中所示序列的多肽。

本发明另一方面是分离的多肽，其包含具有SEQ ID NO：5中所示序列的多肽。

本发明另一方面是分离的全长人前列腺特异性抗原，其由SEQID NO：3中所示的氨基酸序列组成。

本发明另一方面是分离的成熟人PSA，其由SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列组成。

发明详述

在本说明书中引用的所有出版物(包括但是不限于专利和专利申请)都在此引用作为参考，如同完全陈述一样。

如此处所用的，术语“DNA疫苗”或“核酸疫苗”表示可用于将编码抗原的DNA直接体内引入受试者组织以用于由组织细胞表达所述抗原的组合物。DNA疫苗描述于例如国际专利公开号WO95/20660和WO 93/19183中。

如此处所用的，术语“核酸佐剂”指编码增强对抗原的免疫应答的蛋白质或蛋白质片段的核苷酸序列。

本发明提供分离的猕猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))PSA多肽和多核苷酸。本发明也提供了具有SEQ ID NO：3中所述氨基酸序列的全长猕猴PSA和编码其的多核苷酸，所述多核苷酸包括但不限于具有SEQ ID NO：1或2中所述序列的多核苷酸或其互补序列。预测全长猕猴PSA具有24个残基的N-末端前导序列(SEQ ID NO：6)。本发明也提供了缺少前导序列并具有SEQ ID NO：5中所述氨基酸序列的成熟猕猴PSA及编码其的多核苷酸，所述多核苷酸包括但不限于具有如SEQ ID NO：4中所述序列的多核苷酸或其互补序列。本发明另外提供了猕猴PSA的对等片段和变体，以及编码或互补核酸、包含猕猴PSA或片段或变体的载体、含有这类载体的宿主细胞、以及这类猕猴PSA、载体或宿主细胞的制备方法和使用方法。

“片段”是具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列是本发明的任何多肽的部分但非全部的任何氨基酸序列，其中片段含有全长形式的70和/或79位残基(等同于成熟形式的21和/或46位残基)。片段可以包括例如具有SEQ ID NO：3或5中所示氨基酸序列的部分氨基酸序列的截短多肽或其变体，例如包含异源氨基和/或羧基末端氨基酸序列的连续串的残基。也包括由宿主细胞或在宿主细胞内产生的本发明多肽的降解形式。其他示范性片段以结构或功能属性为特征，例如包含α-螺旋或α-螺旋形成区域、β-折叠或β-折叠形成区域、转角或转角形成区域、卷曲或卷曲形成区域、亲水区、疏水区、α-两亲性区、β-两亲性区、柔性区、表面形成区、底物结合区、细胞外区域以及高抗原性指数区的片段。

具体的示范性片段包括成熟形式的141至163位残基，所述成熟形式编码可以结合人I类分子的肽。见Correale等人，J.Natl.CancerInst.89，293-300(1997)和Xue等人，The Prostate 30，73-78(1997)。其他示范性片段包括残基16-25、42-50、48-56和75-83。其他示范性片段包括分离的多肽，所述多肽包含具有SEQ ID NO：3中所述氨基酸序列的至少10、15、20、30、40、50或100个邻接氨基酸的氨基酸序列(其中所述片段含有全长形式的45和/或70位残基)，或分离的多肽，所述多肽包含具有SEQ ID NO：5中所述氨基酸序列的至少10、15、20、30、40、50或100个邻接氨基酸的氨基酸序列(其中所述片段含有成熟形式的21和/或46位残基)。

“变体”多肽是其中已产生氨基酸置换、插入、删除或其组合的猕猴PSA多肽或片段。天然存在的、修饰的或非典型氨基酸可用于置换和插入。变体多核苷酸是编码变体多肽的多核苷酸。本发明的变体多肽在宿主内引起对PSA的免疫应答。

本发明的多核苷酸可用于制备组合物，所述组合物具有编码猕猴PSA抗原决定簇的分离的多核苷酸和控制该多核苷酸表达的启动子。该组合物可另外包含编码例如白细胞介素-18(IL-18)的核酸佐剂的分离的多核苷酸和控制IL-18表达的启动子多核苷酸。这些组合物可用于在哺乳动物内引起对癌症相关肿瘤蛋白质的免疫应答，并用作治疗和/或预防某些癌症或其他肿瘤相关病理学的核酸疫苗。

可用于本发明的抗原决定簇获得自或衍生自猕猴PSA。肿瘤抗原也可以经过突变以增强其免疫原性。如何能够修饰抗原基因以实现对抗原蛋白质更强的免疫应答的实例包括影响抗原基因表达水平的改变，例如添加内含子序列、改变或去除分泌所需的信号序列或为改善翻译最优化密码子。另外，可以修饰抗原基因以将改变引入基因翻译产物，例如添加用于降解的遍在蛋白化信号、添加亚细胞区室靶向序列、添加分子侣伴序列以及优化CTL表位序列。可以将抗原基因融合到一起以增加免疫原性。可以将CTL/辅助表位连接到一起，或作为另一个分子(例如免疫球蛋白分子)的部分插入。将编码上面公开的分子的至少一个抗原决定簇的核苷酸用于本发明。另外，与上面公开的任何多核苷酸互补的序列也可用于本发明的组合物。

包括这些抗原决定簇的本发明的组合物可用于治疗任何癌症，在所述癌症中，PSA被特有地表达、超表达或与存在由该癌症引起的肿瘤存在有关。这些癌症包括但是不限于前列腺癌(包括激素难治愈的前列腺癌(HRPC))和乳腺癌。

本发明也提供成熟多肽编码序列或其片段，其与另一个合成产生的或衍生自另一个物种的编码序列在读框内，例如编码前导序列或分泌序列、前蛋白质、蛋白质原或前蛋白质原序列的序列。本发明的多核苷酸也可以含有至少一个非编码序列，例如经过转录但是不被翻译的序列、终止信号、核糖体结合位点、mRNA稳定序列、内含子和多腺苷酸化信号。该多核苷酸序列也可以含有编码其他氨基酸的其他序列。这些其他的多核苷酸序列可以例如编码标记序列，例如Gentz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)86，821-824(1989)中所述的六组氨酸肽，或Wilson等人，Cell 37，767(1984)所述的HA肽标签，这促进融合的多肽的纯化。

本发明也涉及包含本发明的一种或多种多核苷酸的载体、以本发明的载体经基因工程改造的宿主细胞和通过重组技术产生本发明的多肽。也可以使用来自本发明的DNA构建体的RNA采用无细胞翻译系统来产生这类蛋白质。

对于重组产生本发明的多肽，可以将宿主细胞经过基因工程改造以整合本发明的表达体系或其部分以及多核苷酸。可以通过本领域技术人员所熟知的实验室手册方法将多核苷酸引入宿主细胞，所述实验室手册例如Davis等人，Basic Methods in Molecular Biology，第二版，Appleton&Lange，Norwalk，CT(1994)和Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第三版，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY(2001)。这些方法包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、显微注射、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、刮擦加载(scrape loading)、冲击引入(ballistic introduction)和感染。

宿主的代表性实例包括古菌(Archaea)细胞；细菌细胞，例如链球菌(streptococci)、葡萄球菌(staphylococci)、肠球菌(enterococci)、大肠杆菌(E.coli)、链霉菌(streptomyces)、蓝细菌(cyanobacteria)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)；真菌细胞，例如克鲁维氏酵母属(Kluveromyces)、糖酵母属(Saccharomyces)、担子菌纲(Basidomycetes)、白色假丝酵母(Candida albicans)或曲霉属(Aspergillus)；昆虫细胞，例如果蝇(Drosophila)S2和灰翅夜蛾(Spodoptera)Sf9；动物细胞，例如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、293、CV-1、Bowes黑素瘤和骨髓瘤；以及植物细胞，例如裸子植物或被子植物细胞。

许多表达系统可用于产生本发明的多肽。这些系统包括衍生自染色体的、附加型和病毒的载体，例如来自细菌质粒、噬菌体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、杆状病毒、乳多空病毒例如SV40、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病病毒、细小核糖核酸病毒(picronaviruses)和逆转录病毒的载体以及衍生自其组合的载体，例如粘粒和噬菌粒。表达系统构建体可以含有调节或引起表达的控制区。一般而言，可以将适于在宿主内保持或繁殖多核苷酸和/或表达多肽的任何系统或载体用于表达。可以通过本领域技术人员熟知的多种技术(例如在如上的Sambrook等人中所述的那些)将适当的DNA序列插入表达系统。

在真核表达系统中，可以通过包含适当的分泌信号(例如信号肽或前导序列)将本发明的多肽分泌到内质网腔内或细胞外环境中。这些信号对于猕猴PSA可以是异源的或内源性的，例如具有SEQ IDNO：6中所示氨基酸序列的信号序列(预测的)。

使用已知的氨基酸序列或衍生自本发明多核苷酸的DNA序列的氨基酸序列，也可以通过化学合成(例如在自动化肽合成仪上的固相肽合成)产生本发明的多肽。这类技术为本领域技术人员所熟知。

可以通过熟知的方法从重组细胞培养物回收并纯化本发明的多肽，所述方法包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、高效液相层析、阴离子或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羟磷灰石层析和凝集素层析。当蛋白质在分离和/或纯化期间变性时，可以采用熟知的蛋白质再折叠技术再生活性构象。

可以将包含至少一个猕猴PSA表位的本发明的多核苷酸和多肽用于产生多克隆或单克隆抗体。使用蛋白质或核酸免疫接种而制备鼠的、嵌合的、人源化的和完整人类单克隆抗体的技术为本领域技术人员所公知。

本发明的多核苷酸和多肽也可用于测定培养基中物质的存在，所述物质通过影响猕猴PSA蛋白质与血清蛋白质的结合而调节PSA蛋白质功能。调节物的实例包括多肽或小的有机分子。

对于用作DNA疫苗，本发明的多肽可以包含在一个或多个细胞送递载体(例如质粒)、哺乳动物病毒、细菌或哺乳动物细胞中，所述细胞送递载体、哺乳动物病毒、细菌或哺乳动物细胞具有本领域技术人员熟知的适当的调节和控制元件。例如，肿瘤抗原和核酸佐剂多核苷酸序列的表达可以在合适的启动子(例如人巨细胞病毒立即早期(HCMV IE)启动子或二氢叶酸还原酶启动子)和多腺苷酸化(polyA)信号(例如SV40晚期、SV40早期多腺苷酸化信号或合成的多腺苷酸化序列)的控制之下。为了增强表达，可以含有内含子，例如HCMV IE内含子A或来自抗原或佐剂基因的天然内含子。

可用于本发明的多肽的示范性质粒含有大肠杆菌复制起点、aph(3’)-1a卡那霉素抗性基因、具有内含子A的HCMV立即早期启动子、合成的多腺苷酸化序列和牛生长激素终止子。另一个示范性质粒含有大肠杆菌复制起点、ant(4’)-1a卡那霉素抗性基因、劳斯肉瘤病毒长末端重复序列、HCMV立即早期启动子和SV40晚期多腺苷酸化序列。

如本领域所知，可以作为本发明的多肽的重组病毒宿主的合适病毒的实例包括痘苗病毒、金丝雀痘病毒和腺病毒。也可以使用各种基因工程改造的病毒宿主(“重组病毒”)。含有本发明的组合物的病毒细胞送递载体可以促进合适的免疫应答，所述免疫应答靶向于激活B淋巴细胞、辅助T淋巴细胞和细胞毒性T淋巴细胞。

优选用于本发明的组合物的重组病毒是痘苗病毒(国际专利公开号WO 87/06262；Cooney等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90，1882-1886(1993)；Graham等人，J.Infect.Dis.166，244-252(1992)；McElrath等人，J.Infect.Dis.169，41-47(1994))。在另一个实施方案中，可以使用重组金丝雀痘病毒(Pialoux等人，AIDS Res.Hum.Retroviruses 11，373-381(1995)，AIDS Res.Hum.Retroviruses 11，875(1995)中的勘误；Andersson等人，J.Infect.Dis.174，977-985(1996)；Fries等人，Vaccine 14，428-434(1996)；Gonczol等人，Vaccine 13，1080-1085(1995))。另一个备选方案是缺陷腺病毒或腺伴随病毒或逆转录病毒(Gilardi-Hebenstreit等人，J.Gen.Virol.71，2425-2431(1990)；Prevec等人，J.Infect.Dis.161，27-30(1990)；Lubeck等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86，6763-6767(1 989)；Xiang等人，Virology219，220-227(1996))。其他合适的病毒载体包括减毒的或缺陷DNA病毒，例如但是不限于单纯疱疹病毒(HSV)(见，例如Kaplitt等人，Molec.Cell.Neurosci.2，320-330(1991))、乳头瘤病毒、EB病毒(EBV)，见例如美国专利号5,990,091；5,766,599；5,756,103；6,086,890；6,274,147；5,585,254；6,140,114；5,616,326；6,099,847；6,221,136；6,086,891；5,958,425；5,744,143；5,558,860；5,266,489；5,858,368；5,795,872；5,693,530；6,020,172。

本发明的多肽可以配制在可药用载体或稀释剂中。可以采用许多水性载体，例如0.4％盐水、0.3％甘氨酸等。这些溶液是无菌的并且通常不合微粒物质。这些溶液可以通过广为人知的常规灭菌方法(例如过滤)灭菌。该组合物可以根据需要含有可药用的辅助物质以接近生理学条件，例如pH调节剂和缓冲剂。本发明的多肽在这类药物制剂中的浓度可以变化很大，即，以重量计从低于约0.5％、通常在或至少在约1％至多达约15或20％，并且将根据所选的具体施用模式，主要基于流体体积、粘性和其他因素进行选择。另外，也可以将含有本发明多肽的质粒配制在微粒中，或与脂质、缓冲液或其他赋形剂一起配制。

也可以将本发明的多肽与能够帮助DNA送递、保持其体内完整性或增强疫苗免疫原性的佐剂一起配制。化学佐剂可以包括增强对抗原免疫应答的化合物或混合物。化学佐剂可以作为缓慢释放抗原的组织仓库(depot)，且也可以作为非特异性增强免疫应答的淋巴系统激活物(Hood等人，Immunology，第二版，(1984)，Benjamin/Cummings，Menlo Park，CA，第384页)。佐剂包括但不限于完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、皂苷、矿物凝胶例如氢氧化铝、表面活性物质例如溶血卵磷脂、多聚醇、聚阴离子、肽、油或烃乳状液、匙孔血蓝蛋白、二硝基苯酚以及有用的人佐剂例如BCG(卡介苗)和小棒杆菌(Corynebacterium parvum)。佐剂的选择依赖于将要接种疫苗的受试者。优选使用可药用佐剂。例如，用于人的疫苗应该避免油或烃乳状液佐剂，包括完全和不完全弗氏佐剂。适用于人的佐剂的一个实例是明矾(氧化铝凝胶)。在具体的实施方案中，将本发明的组合物在明矾中肌内施用。另外，可以皮下、皮内、腹膜内、肌内或通过其他可接受的疫苗施用途径施用本发明的组合物。

可以将本发明的多肽以不同的顺序按时间施用，或者同时施用于体内不同部位。也可以通过直接注射到肌肉、皮肤、淋巴结内或通过施用于粘膜表面而送递本发明的多肽。在具体的实施方案中，肌内提供本发明的多肽。其他可能的送递模式将包括注射DNA，继之为电穿孔以增强DNA的细胞摄取和表达、或通过基因枪或类似装置施用。为了从用本发明的多肽免疫的个体筛选血清或细胞的抗肿瘤活性，可以使用本领域公知的任何合适的筛选测定法。

在药物制剂中时，本发明的多肽可以以单位剂量形式存在。本领域技术人员易于确定合适的治疗有效剂量。如果需要，可以在治疗期间以医师选择的适当的时间间隔重复确定的剂量。

可以将本发明的多肽冻干储存，并于使用前重构于合适的载体中。已经显示该技术对于常规蛋白质制剂有效，并可采用本领域已知的冻干法和重构技术。

现在将参考下列具体的非限制性实施例对本发明进行描述。

实施例1

猕猴PSA基因的分离、克隆及测序

使用Trizol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)根据制造商说明从猕猴前列腺组织(Cambrex Bio Science Walkersville Inc，Walkersville，MD)纯化RNA。使用Superscript II逆转录酶试剂盒进行逆转录反应，并使用寡脱氧胸苷酸引物引发(primed)。对于聚合酶链反应(PCR)，把与翻译起始位点退火的基因特异性正向引物和与人和恒河猴PSA mRNA 3’非翻译区内保守区退火的反向引物(SEQ ID NO：11和12，表1，5’PSA和3’PSA)配对。第一个ATG位于表1中所示5’PSA引物的第19-21个残基。5’PSA引物以工程加工在5’末端的Bam HI位点(在表1中加下划线)与翻译起始位点退火，而3’PSA引物以工程加工在3’末端的Bam HI位点与3’非翻译区内保守区退火。在如下条件使用100ng各引物与100ng cDNA模板实施PCR：94℃30秒、60℃1分钟，68℃1分钟的30个循环，继之为68℃5分钟的一个循环。在琼脂糖凝胶上分析百分之十的PCR反应物，并发现约1000bp的条带(数据未显示)。使用Qiaquick PCR纯化(Qiagen，Valencia，CA)纯化PCR产物。使用Big Dye TerminatorCycle Sequencing Kit(PE Applied Biosystems，Foster City，CA)直接对约60ng各产物测序，随后在Prism ABI377自动化DNA测序仪上分析。使用分别相应于383-406和653-676位核苷酸的20ng 5’PSAseq和3’PSA seq引物(SEQ ID NO：13和14，表1)对PCR片段测序。另外，也将特异性PCR产物亚克隆并测序。从至少两只猕猴前列腺组织证实所有PSA基因结果。

使用Vector NTi软件(Invitrogen，Frederick，MD)将片段序列与Genbank数据库比较、并与人和恒河猴PSA序列(分别为Genbank登记号M21896和X73560)比对。也将猕猴PSA序列对可利用的embl和其他序列数据库进行BLAST搜索。实施BLASTP、TBLASTN和BLASTN搜索，且没有发现相同的记录。

为了获得猕猴PSA基因5’和3’非翻译区的完整序列，采用cDNA末端快速扩增(RACE)。从至少两只成年雄性猕猴前列腺提取总RNA，并使用表1中所示的分别对应于49-72和782-805位核苷酸的5’和3’RACE引物(SEQ ID NO：15和16)，通过连接酶介导的RACE反应扩增mRNA转录物的5’和3’非翻译区。

表1.猕猴PSA基因克隆以及测序的寡核苷酸

名称	序列
名称	序列	5′PSA3′PSA5′PSA seq3′PSA seq5′RACE3′RACE	5′-CT GGATCCCTGTGCCACCATGTGG-3′ (SEQ ID NO：11)5′-CC GGATCCTGCTGATTTCTTTTCC-3′ (SEQ ID NO：12)5′-CCAGCCACGACCTCATGCTGCTCC-3′ (SEQ ID NO：13)5′-CCCCAGAATCACCCGACAGGTGC-3′ (SEQ ID NO：14)5′-CGTCACGGACAGGGTGAGGAAGAC-3′ (SEQ ID NO：15)5′-GGAAGTGGAGCCAGGACACCATCA-3′ (SEQ ID NO：16)

将来自三只不同猴子的四个克隆测序和比对。全长猕猴PSAcDNA的核苷酸及推导的氨基酸序列示于图1及SEQ ID NO：1和2中。在图1中，对编码区的翻译的氨基酸序列编号并示于核苷酸序列上方。在左侧对核苷酸残基编号。推定的多腺苷酸化信号为粗体形式。

cDNA片段测序分析显示，猕猴PSA mRNA由约33个碱基的短5’非编码区(SEQ ID NO：1的1至33位残基)、783个碱基的可读框(SEQ ID NO：1的34至816位残基)(对应于261个氨基酸(SEQID NO：3))和660个碱基的3’非翻译区(SEQ ID NO：1的817至1476位残基)组成。期望猕猴PSA的前24个氨基酸包含信号序列(SEQ ID NO：6)。预测成熟PSA的氨基末端为异亮氨酸，其在图1中显示为残基1。猕猴PSA的成熟的237个氨基酸的形式的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO：4和5中。

实施例2

灵长类动物PSA基因的序列比较

猕猴PSA序列与人和恒河猴PSA cDNA的Genbank数据库的蛋白质序列比较显示于图2中。物种间不同的碱基以粗体和突出显示。各物种编码预测长度为237个氨基酸的成熟蛋白质。比较揭示，猕猴PSA氨基酸序列与人PSA为89.7％一致(27/261残基差异)(图2)。恒河猴氨基酸序列与人基因为90％一致(26/261残基差异)(图2)。猕猴和恒河猴氨基酸序列差别仅在于两个氨基酸，即成熟形式的21和46位残基，为99.2％的同一性。

也将三个基因的核苷酸序列对于编码区进行比较。人和猕猴和恒河猴序列之间约有93.5％的同一性(数据未显示)。两个灵长类动物cDNA之间在该区仅三个核苷酸残基不同，从而给出99.6％的同一性。与人和恒河猴蛋白质相似，猕猴PSA也在183位具有丝氨酸，该丝氨酸经显示负责丝氨酸蛋白酶在疏水性氨基酸的切割特异性(Lundwall，A.和Lilja，H.FEBS Letters 214，317-322(1987))。

5’非翻译区(UTR)在恒河猴和猕猴之间是一致的。猕猴5’UTR的序列比人序列长八个碱基(数据未显示)。

物种之间在3’UTR存在几个差异。首先，猕猴3’UTR比恒河猴3’UTR短75个碱基，具有位于从猕猴序列TGA终止密码子开始的405/406位碱基处的72碱基对的缺失。除了这些缺失，物种间3’UTR中仅有三个核苷酸差异。在人和猕猴3’UTR之间如所预期的具有更多差异。首先，在对应于猕猴序列bp 34-87的人序列中具有54碱基对的缺失。另外，与人序列相比，除了72碱基对的缺失之外，在猕猴序列中添加四个碱基对并缺失一个碱基对。在物种之间也有31个碱基对差异(数据未显示)。

实施例3

猕猴组织中的PSA表达分析

为了研究猕猴PSA在猕猴组织中的RNA表达模式，使用从不同组织纯化的RNA实施RT-PCR分析。分离肾、肺、睾丸、胸腺和前列腺的总RNA，并如实施例1中所述合成cDNA。使用没有DNA的模板作为非特异性扩增的阴性对照。使用Superscript II逆转录酶和寡脱氧胸苷酸引物，将分离的总RNA用作第一链cDNA合成的模板。如上所示将100ng cDNA进行PCR扩增。使用5’PSA(SEQ ID NO：11)和3’PSA(SEQ ID NO：12)引物扩增PSA基因，以产生1000bp的PSA特异性产物。使用猕猴特异性正向(SEQ ID NO：17)和反向(SEQ ID NO：18)引物扩增β-肌动蛋白作为加载对照；扩增了216bp的产物。结果说明，仅在前列腺组织检测到PSA mRNA，而在肾、肺、睾丸或胸腺未检测到(数据未显示)。

本发明现在经过充分描述，对本领域普通技术人员而言，显而易见的是，可以在不背离附加的权利要求书的精神或范围的情况下对本发明进行许多改变和修改。

序列表

<110>CENTOCOR，INC.

<120>猕猴前列腺特异性抗原

<130>CEN5056 PCT

<140>PCT/US2005/018582

<141>2005-05-26

<150>60/575,079

<151>2004-05-27

<160>18

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>1467

<212>DNA

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>1

gctcaccgcc tgcacctgga cagctgtgtc accatgtggg ttctggttgt cttcctcacc 60

ctgtccgtga cgtggattgg cgctgcaccc ctcatcctgt ctcggattgt gggaggctgg 120

gagtgcgaga agcattccca accctggcag gtgcttgtgg cctctcatgg cagggcagtc 180

tgcgggggtg ttctggtgca cccccagtgg gtgctcacag ctgcccactg catcaggagc 240

cacagcgtga tcttgctggg tcggcacaac ccgtattatc ctgaagacac gggccaggtg 300

tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacaaca tgagcctcct gaagaatcga 360

tacctcgggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgc tgctccgcct gtcagagcct 420

gccgagatca cagatgctgt gcaggtcctg gacctgccca cctgggagcc agagctgggg 480

accacgtgct acgcctcagg ctggggcagc atcgaaccgg aggaacactt gactccaaag 540

aaacttcagt gtgtggacct ccatattatt tccaatgatg tgtgtgcgca agttcactct 600

cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggaagctgga tgggcggcaa aagcacctgc 660

tcgggtgatt ctgggggccc actggtctgt gacggtgtgc ttcaaggtat cacgtcatgg 720

ggcagtcaac catgtgccct accccgaagg ccttccctgt acaccaaggt ggtgcgttac 780

cggaagtgga tccaggacac catcatggca aacccctgag caccccatca actccctact 840

tgtagcgaaa aaaaaaatcc acctcaagtt ctggcatcat ttggctattc tagacaccag 900

gcacttggaa ccttggaaat gaccgggcca aggctcaagc ctccccagtt ctattgacct 960

ttgtcctaag gtgtggggtc cagggttgct aggaaaagaa atcagcagac acaggtgtag 1020

accagagtgt ttcttaaatg ggtgtaattt tgtcctctcc gtgtcctggg ggacactggt 1080

catgcctgga gacatctcac tcagtttctt tgaggaccca gataggttgg gggtgtctgt 1140

gttgtttgtg gggtacagag atgaaggagg ggtggggtcc acactgagag agtagacagt 1200

gacacgtgct ggatgctgtc ctccactctg tcttggaggc actgggaagc ctagagaagg 1260

ctgcgaactg aggagggagg gtcttcctgt ggcatgggat ggggatgaag taaggagagg 1320

gactggactc cctggaagct gattcaccat ggggagaggt gtgtcaaggt cccccagaca 1380

accctcagat ttgatgattt cctagtagaa ctcacagaaa taaagagctg ttatactgtg 1440

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 1467

<210>2

<211>783

<212>DNA

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>2

atgtgggttc tggttgtctt cctcaccctg tccgtgacgt ggattggcgc tgcacccctc 60

atcctgtctc ggattgtggg aggctgggag tgcgagaagc attcccaacc ctggcaggtg 120

cttgtggcct ctcatggcag ggcagtctgc gggggtgttc tggtgcaccc ccagtgggtg 180

ctcacagctg cccactgcat caggagccac agcgtgatct tgctgggtcg gcacaacccg 240

tattatcctg aagacacggg ccaggtgttt caggtcagcc acagcttccc acacccgctc 300

tacaacatga gcctcctgaa gaatcgatac ctcgggccag gtgatgactc cagccacgac 360

ctcatgctgc tccgcctgtc agagcctgcc gagatcacag atgctgtgca ggtcctggac 420

ctgcccacct gggagccaga gctggggacc acgtgctacg cctcaggctg gggcagcatc 480

gaaccggagg aacacttgac tccaaagaaa cttcagtgtg tggacctcca tattatttcc 540

aatgatgtgt gtgcgcaagt tcactctcag aaggtgacca agttcatgct gtgtgctgga 600

agctggatgg gcggcaaaag cacctgctcg ggtgattctg ggggcccact ggtctgtgac 660

ggtgtgcttc aaggtatcac gtcatggggc agtcaaccat gtgccctacc ccgaaggcct 720

tccctgtaca ccaaggtggt gcgttaccgg aagtggatcc aggacaccat catggcaaac 780

ccc 783

<210>3

<211>261

<212>PRT

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>3

Met Trp Val Leu Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly

1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu

20 25 30

Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser His Gly Arg Ala

35 40 45

Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala

50 55 60

His Cys Ile Arg Ser His Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ash Pro

65 70 75 80

Tyr Tyr Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe

85 90 95

Pro His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Tyr Leu Gly

100 105 110

Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu

115 120 125

Pro Ala Glu Ile Thr Asp Ala Val Gln Val Leu Asp Leu Pro Thr Trp

130 135 140

Glu Pro Glu Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile

145 150 155 160

Glu Pro Glu Glu His Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu

165 170 175

His Ile Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Ser Gln Lys Val

180 185 190

Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Ser Trp Met Gly Gly Lys Ser Thr

195 200 205

Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asp Gly Val Leu Gln

210 215 220

Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Gln Pro Cys Ala Leu Pro Arg Arg Pro

225 230 235 240

Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val Arg Tyr Arg Lys Trp Ile Gln Asp Thr

245 250 255

Ile Met Ala Ash Pro

260

<210>4

<211>711

<212>DNA

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>4

attgtgggag gctgggagtg cgagaagcat tcccaaccct ggcaggtgct tgtggcctct 60

catggcaggg cagtctgcgg gggtgttctg gtgcaccccc agtgggtgct cacagctgcc 120

cactgcatca ggagccacag cgtgatcttg ctgggtcggc acaacccgta ttatcctgaa 180

gacacgggcc aggtgtttca ggtcagccac agcttcccac acccgctcta caacatgagc 240

ctcctgaaga atcgatacct cgggccaggt gatgactcca gccacgacct catgctgctc 300

cgcctgtcag agcctgccga gatcacagat gctgtgcagg tcctggacct gcccacctgg 360

gagccagagc tggggaccac gtgctacgcc tcaggctggg gcagcatcga accggaggaa 420

cacttgactc caaagaaact tcagtgtgtg gacctccata ttatttccaa tgatgtgtgt 480

gcgcaagttc actctcagaa ggtgaccaag ttcatgctgt gtgctggaag ctggatgggc 540

ggcaaaagca cctgctcggg tgattctggg ggcccactgg tctgtgacgg tgtgcttcaa 600

ggtatcacgt catggggcag tcaaccatgt gccctacccc gaaggccttc cctgtacacc 660

aaggtggtgc gttaccggaa gtggatccag gacaccatca tggcaaaccc c 711

<210>5

<211>237

<212>PRT

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>5

Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val

1 5 10 15

Leu Val Ala Ser His Gly Arg Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His

20 25 30

Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Ile Arg Ser His Ser Val

35 40 45

Ile Leu Leu Gly Arg His Asn Pro Tyr Tyr Pro Glu Asp Thr Gly Gln

50 55 60

Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Ash Met Ser

65 70 75 80

Leu Leu Lys Ash Arg Tyr Leu Gly Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp

85 90 95

Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro Ala Glu Ile Thr Asp Ala Val

100 105 110

Gln Val Leu Asp Leu Pro Thr Trp Glu Pro Glu Leu Gly Thr Thr Cys

115 120 125

Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu His Leu Thr Pro

130 135 140

Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Ile Ile Ser Asn Asp Val Cys

145 150 155 160

Ala Gln Val His Ser Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly

165 170 175

Ser Trp Met Gly Gly Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro

180 185 190

Leu Val Cys Asp Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Gln

195 200 205

Pro Cys Ala Leu Pro Arg Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val Arg

210 215 220

Tyr Arg Lys Trp Ile Gln Asp Thr Ile Met Ala Asn Pro

225 230 235

<210>6

<211>24

<212>PRT

<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)

<400>6

Met Trp Val Leu Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly

1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg

20

<210>7

<211>783

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>7

atgtgggtcc cggttgtctt cctcaccctg tccgtgacgt ggattggtgc tgcacccctc 60

atcctgtctc ggattgtggg aggctgggag tgcgagaagc attcccaacc ctggcaggtg 120

cttgtggcct ctcgtggcag ggcagtctgc ggcggtgttc tggtgcaccc ccagtgggtc 180

ctcacagctg cccactgcat caggaacaaa agcgtgatct tgctgggtcg gcacagcctg 240

tttcatcctg aagacacagg ccaggtattt caggtcagcc acagcttccc acacccgctc 300

tacgatatga gcctcctgaa gaatcgattc ctcaggccag gtgatgactc cagccacgac 360

ctcatgctgc tccgcctgtc agagcctgcc gagctcacgg atgctgtgaa ggtcatggac 420

ctgcccaccc aggagccagc actggggacc acctgctacg cctcaggctg gggcagcatt 480

gaaccagagg agttcttgac cccaaagaaa cttcagtgtg tggacctcca tgttatttcc 540

aatgacgtgt gtgcgcaagt tcaccctcag aaggtgacca agttcatgct gtgtgctgga 600

cgctggacag ggggcaaaag cacctgctcg ggtgattctg ggggcccact tgtctgtaat 660

ggtgtgcttc aaggtatcac gtcatggggc agtgaaccat gtgccctgcc cgaaaggcct 720

tccctgtaca ccaaggtggt gcattaccgg aagtggatca aggacaccat cgtggccaac 780

ccc 783

<210>8

<211>261

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>8

Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly

1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu

20 25 30

Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala

35 40 45

Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala

50 55 60

His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu

65 70 75 80

Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe

85 90 95

Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg

100 105 110

Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu

115 120 125

Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln

130 135 140

Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile

145 150 155 160

Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu

165 170 175

His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val

180 185 190

Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr

195 200 205

Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln

210 215 220

Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro

225 230 235 240

Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr

245 250 255

Ile Val Ala Asn Pro

260

<210>9

<211>783

<212>DNA

<213>恒河猴(Macaca mulatta)

<400>9

atgtgggttc tggttgtctt cctcaccctg tccgtgacgt ggattggcgc tgcacccctc 60

atcctgtctc ggattgtggg aggctgggag tgcgagaagc attcccaacc ctggcaggtg 120

cttgtggcct ctcgtggcag ggcagtctgc gggggtgttc tggtgcaccc ccagtgggtc 180

ctcacagctg cccactgcat caggagcaac agcgtgatct tgctgggtcg gcacaacccg 240

tattatcctg aagacacggg ccaggtgttt caggtcagcc acagcttccc acacccgctc 300

tacaacatga gcctcctgaa gaatcgatac ctcgggccag gtgatgactc cagccacgac 360

ctcatgctgc tccgcctgtc agagcctgcc gagatcacag atgctgtgca ggtcctggac 420

ctgcccacct gggagccaga gctggggacc acgtgctacg cctcaggctg gggcagcatc 480

gaaccggagg aacacttgac tccaaagaaa cttcagtgtg tggacctcca tattatttcc 540

aatgatgtgt gtgcgcaagt tcactctcag aaggtgacca agttcatgct gtgtgctgga 600

agctggatgg gcggcaaaag cacctgctcg ggtgattctg ggggcccact ggtctgtgac 660

ggtgtgcttc aaggtatcac gtcatggggc agtcaaccat gtgccctacc ccgaaggcct 720

tccctgtaca ccaaggtggt gcgttaccgg aagtggatcc aggacaccat catggcaaac 780

ccc 783

<210>10

<211>261

<212>PRT

<213>恒河猴(Macaca mulatta)

<400>10

Met Trp Val Leu Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly

1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu

20 25 30

Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala

35 40 45

Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala

50 55 60

His Cys Ile Arg Ser Asn Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Asn Pro

65 70 75 80

Tyr Tyr Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe

85 90 95

Pro His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Tyr Leu Gly

100 105 110

Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu

115 120 125

Pro Ala Glu Ile Thr Asp Ala Val Gln Val Leu Asp Leu Pro Thr Trp

130 135 140

Glu Pro Glu Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile

145 150 155 160

Glu Pro Glu Glu His Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu

165 170 175

His Ile Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Ser Gln Lys Val

180 185 190

Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Ser Trp Met Gly Gly Lys Ser Thr

195 200 205

Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asp Gly Val Leu Gln

210 215 220

Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Gln Pro Cys Ala Leu Pro Arg Arg Pro

225 230 235 240

Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val Arg Tyr Arg Lys Trp Ile Gln Asp Thr

245 250 255

Ile Met Ala Asn Pro

260

<210>11

<211>24

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>正向PCR引物，具有引入的BamHI位点，其与智人和恒河猴PSA cDNA的翻译起始位点退火。

<400>11

ctggatccct gtgccaccat gtgg 24

<210>12

<211>24

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>反向PCR引物，具有引入的BamHI位点，其与智人和恒河猴PSA cDNA的3’非翻译区中的保守区退火。

<400>12

ccggatcctg ctgatttctt ttcc 24

<210>13

<211>24

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的正向测序引物

<400>13

ccagccacga cctcatgctg ctcc 24

<210>14

<211>23

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的反向测序引物

<400>14

ccccagaatc acccgacagg tgc 23

<210>15

<211>24

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的5’RACE引物

<400>15

cgtcacggac agggtgagga agac 24

<210>16

<211>24

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的3’RACE 引物

<400>16

ggaagtggag ccaggacacc atca 24

<210>17

<211>20

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的正向引物

<400>17

ccatgtacgt ggccatccag 20

<210>18

<211>20

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>与食蟹猴PSA cDNA退火的反向引物

<400>18

tggtggtgaa gctgtagccg 20

Claims

1.分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：1中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

2.分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：2中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

3.分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：4中所示序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

4.分离的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO：3中所示氨基酸序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

5.分离的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO：5中所示氨基酸序列的多核苷酸或其互补序列、片段或变体。

6.分离的多肽，其包含具有SEQ ID NO：3中所示序列的多肽。

7.分离的多肽，其包含具有SEQ ID NO：5中所示序列的多肽。

8.分离的全长猕猴前列腺特异性抗原(PSA)，其由SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列组成。

9.分离的成熟猕猴PSA，其由SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列组成。

10.载体，其包含权利要求1、2、3、4或5的分离的多核苷酸。

11.分离的宿主细胞，其包含权利要求10的载体。

12.产生多肽的方法，其包括在足以产生多肽的条件下培养权利要求11的宿主细胞。