CN1953759A - 巴西蘑菇在制造治疗感染和过敏的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及巴西蘑菇Araricus blazei Murill在制造治疗或预防哺乳动物细菌性和非细菌性(如寄生菌或病毒)感染，以及治疗或预防哺乳动物过敏的药物中的用途。例如由肺炎球菌引起的感染，其中所述的哺乳动物更明确是指人。

Description

巴西蘑菇在制造治疗感染和过敏的药物中的用途

发明领域

本发明涉及巴西蘑菇(Araricus blazei Murill(AbM))菌种在制造治疗或预防哺乳动物细菌性和非细菌性(例如，寄生菌或病毒)感染以及治疗或预防哺乳动物过敏的药物中的用途。这种感染可以是例如由肺炎球菌引起的感染，并且所述的哺乳动物更明确是指人。

引言

将蘑菇用于医疗，在传统的亚洲文化中，已有三千多年的历史。

已证实蘑菇中许多物质可影响免疫系统，并可用于治疗多种疾病(Wasser等人，1999)。在日本，进行了许多有关蘑菇保健功能的研究(Ikekawa池川，2001)。担子菌纲(family Basidomycetes)的巴西蘑菇(AbM)就是这样一种在日本很受欢迎的药用菌种，并且它已进行人工栽培(Chen，2000)供应保健品市场。该菌种的自然产地是巴西圣保罗郊外的一个名叫碧野达德(Pietade)的小村庄，那里每天的天气变化很大。当地人将AbM作为一种食物，而当地人群中癌症及其它疾病的发病率较低(Huang，1997)。1965年，Takatoshi Furomoto博士将AbM的孢子寄回日本，日本国家癌症中心研究学会的科学家们在日本药理学会的协助下，适时发表了研究结果，证明AbM具有抗癌特性。AbM富含具有免疫刺激和抗癌作用的糖分子(多糖类)，如β(1，3)和(1，6)葡聚糖(Kawagishi等人，1989；Iwade和Mizuno，1997；Huang，1997；Stamets，2000；Ohno等人，2001；Sorimachi等人，2001)。

在日本，近一，二十年中，利用从可食用的巴西蘑菇(AbM)菌种中的提取物作为保健食品治疗多种疾病，如癌症，糖尿病，动脉硬化和慢性肝炎。

但是，所有的这些疾病均由患者的细胞衰弱或异常引起的，而不是由于外部有机体如细菌的侵入引起的。

AbM成份的抗癌作用在小鼠模型和癌细胞试验中得到了科学验证(Itoh等人，1994；Fujiya等人，1998；Ebina和Fujiya，1998；Takaku等人，2001；Menoli等人，2001；Bellini等人，2003)。还证实AbM菌丝体能抑制WEE(西文马脑炎)病毒对培养中的细胞的破坏作用(引起细胞病变)(Sorimachi等人，2001)。注意：本文本身未对AbM菌丝体对病毒性感染的作用进行研究。此外，在公共数据库中，尚未有英文报道过，有关AbM的其他保健作用以及抗感染作用。

发明内容

原产巴西圣保罗郊外的可食用的巴西蘑菇(AbM)菌种，近十年来在日本进行了人工栽培，并用于保健食品，预防多种前述的疾病，其中包括癌症。尽管已知这个菌种具有上述作用，但还不能证明其对细菌性感染的活性。许多保健食品认为对疾病有治疗或预防作用，但都未经试验证实。而且，即使已知一种产品可提高免疫系统的功能，也不可能立即得出该产品对细菌性感染具有活性的结论。同样，不能由β-葡聚糖类的一般作用，就得出巴西蘑菇提取物对细菌性感染具有活性的结论；也不可得出AbM确实比该领域中的其他天然药物活性更高的结论。

本发明用肺炎球菌(肺炎链球菌，血清6B型)致死剂量感染的小鼠作为模型，研究AbM提取物抗细菌性感染作用。从小鼠腹腔注射肺炎球菌前24小时至立刻注射前，用管饲法给予AbM提取物。每天从小鼠股静脉抽取血样，作细菌培养，并记录小鼠存活率。结果发现细菌感染前24小时，2小时或0小时，用管饲法给予AbM提取物，与管饲法给予生理盐水的对照组相比，降低了血中细菌数，并提高了存活率。感染前24小时给予AbM提取物的小鼠，在第10天的存活率为50％，而对照组在第7天的动物存活率为13％。这证明AbM提取物可用于预防或者选作治疗肺炎球菌感染。

当今时代，抗生素耐药性不断增多，AbM可作为抗生素或其他抗感染药物的天然替代药或补充药物，而且其不仅有害副作用少，而且还有防癌的有益的副作用。

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)为一革兰氏阳性双球菌，可引起致命性疾病，如败血症(脓血症)，脑膜炎(流脑)，也可引起严重性较低的感染，如肺炎，中耳炎和鼻窦炎等。肺炎球菌有90个亚种(血清型)，其中尤其是血清6B型(Herichsen，1979)具有中度感染作用(致病力)，因此引起的小鼠疾病进行期较长，但也可能致命(Aabserge等人，1995)。由于对抗生素耐药的细菌(如多重耐药性肺炎链球菌)的频发，威胁着公众健康。在未来几十年中，抗生素的作用可能有所降低，或者不起作用了，故人们试图寻找具有良好预防和治疗作用的替代药物。

已知β-葡聚糖类是免疫调节物(Riggi和Diluzio，1961；Boegwald等人，1984)，并且是真菌和酵母菌细胞壁的主要成份。β-葡聚糖在动物模型中具有抗感染(Reynmolds等人，1980；Franek等人，1992)和抗癌作用(Tagucho等人，1983；Ohno等人，1987)。AbM的子实体中的1，3-β葡聚糖可能是该蘑菇的抗癌成份(Ohno等人，2001)。

先前研究发现β-葡聚糖(其中尤其是真菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和酵母菌的单链葡萄糖(SSG))，以及从常见的车前草(大车前属)提取的糖分子，对小鼠模型的卡介菌(BCG)和肺炎球菌感染具有保护作用(Hetland等人，1998；Hetland等人，2000a，b；Hetland，2003)。这些作用均在小鼠腹腔(腹膜内注射)注射了这些物质后观察到，但尚未得到管饲法给予条件下的证实。试验证明该保护作用是由于对巨噬细胞是主要的免疫细胞的遗传免疫系统的刺激而产生的。还证明从酵母菌提取的SSG和MacroGar可抑制巨噬细胞培养物中结核菌和结核分支杆菌的生长(Hetland和Sanven，2002)。

本发明的一个方面是，利用AbM提取物制造预防细菌性感染的药物，以用血清6B型致命性肺炎链球菌感染小鼠举例说明。通过管饲法给小鼠提供肺炎链球菌。根据小鼠静脉血的细菌计数和其存活率，评价AbM提取物的作用。

本发明的另一方面是，利用巴西蘑菇菌种的提取物制造可治疗或减弱哺乳动物，尤其是人体过敏反应的药物。

过敏反应在西方国家(包括挪威)是一日益严重的问题。如上所述，在日本用巴西蘑菇(AbM)菌种的提取物治疗多种疾病有一定的历史，其中包括治疗癌症，并且AbM对抗某类癌症的作用有文献可证。AbM含有免疫刺激作用的多糖类，如β-葡聚糖，而且先前已证实这些物质具有免疫调节作用，并且具有上述保护作用。

有关巴西蘑菇菌种提取物的惊人发现，下面将简要总结一些背景材料：免疫系统分为遗传性免疫系统(AbM对此产生明显作用，但其机理不清楚)及适应性免疫系统。又分为辅助性T细胞-1，-2，和-3应答(Th1，Th2，和Th3)，其中Th1应答对于抗感染和抗肿瘤的防御机制特别重要；Th2应答对于抗寄生虫和抗排异反应的防御机制特别重要，但促进过敏反应；Th3则具有抗炎作用(炎症抑制作用)和促进新组织的生成。另外，目前对于这些具有调节功能的辅助性T细胞极为关注。根据辅助性T细胞-1(如Th1/Th2)这些应答具有反比关系，因为Th1会抑制Th2，反之亦然，因此Th1应答增强，则Th2应答相应会降低。

如上所述，通过肺炎链球菌感染的小鼠模型的例子已经发现AbM提取物对感染有效。但是，针对这种情况有迹象表明，AbM中存在其他物质，这些物质与已经发现的具有抗感染作用的葡聚糖同样重要。由于抗感染的效果是由高Th1应答产生的，那么基于上述免疫系统的作用机制，可预测同时抑制Th2应答。由于过敏反应是由高Th2应答的结果，基于AbM提取物具有抗感染的保护作用，并基于所预测的低Th2应答，因此其中有些事情是令人惊奇和意外的，AbM提取物也具有令人惊讶的刺激Th2应答的作用。

为了研究AbM具有抑制过敏反应发展的作用，用卵白蛋白(OVA)过敏原模型免疫小鼠模型进行下列试验。在试验结束时，对小鼠血清中IgE和IgG1(Th2-过敏应答)和IgG2(抗感染/抗肿瘤应答)抗卵白蛋白(OVA)抗体水平进行了检测。同时研究了受激免疫细胞分泌到血中的信号物质(细胞因子)水平，它可指示相关的Th1(IFNγ，IL-12)，Th2(IL-5，IL-10，IL-13)或Th3(TGFβ)应答。先前研究表明，AbM刺激的巨噬细胞(对遗传性免疫防御有重要作用的白细胞)可产生促进炎症的细胞因子(TNF-α和IL-8)和NO^-(有毒的氮化合物)(Sorimachi，2001)。

“材料和方法I”项给出了证明AbM提取物的抗感染作用的相关试验；”材料和方法II”项给出了证明AbM提取物抗过敏作用的相关试验。

证明AbM提取物抗感染作用的试验：

材料和方法I：

小鼠。

所有动物试验已经国家动物试验伦理委员会的当地代表机构批准，并符合农业部国家标准。试验采用英国哈兰奥莱克公司的NIH/OlaHsd种，无微生物感染的纯系雌性小鼠。小鼠运到时的鼠龄为6周龄，试验前静养1周。

试剂

AbM菌丝体的提取物A，B，C，D和E来自不同的日本保健食品生产厂家。提取物A(金色标签型)是纯度最高的产品，提取物B(Katsu型)纯度次之，均由日本岐阜县(Gifku-ken)ACE公司提供。AbM提取物C，D，和E的生产厂家未被告知本次研究的情况，因而在此不披露其名称。

磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)作为对照。

细菌

采用来自荷兰RIVM公司的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)血清6B型菌种。菌种冷冻保存，并按前述方法进行感染试验(Aaberge等人，1995)。

血样

从小鼠后腿外股静脉(隐静脉)采取血样。然后按已知方法进行血样培养(Aaberge等人，1995)。

测定血中菌落形成单位(CFU)

将静脉血(25μl)稀释10倍，置于托德-赫威特琼脂中，并取25μl已稀释血样均布在琼脂平板上，在5％二氧化碳中，在37℃下培养，培养18小时后进行菌落计数。

试验步骤

两组试验中各处理组均采用7-9只动物(表1，图例)。用管饲法饲喂200μl PBS或AbM提取物。所有动物按图中所示时间采集血样，并将血样均布在琼脂平板上。每天对动物进行观察，并将病情严重的小鼠割颈处死。

测定

用肺炎链球菌CFU计数法测定外周血中细菌含量和动物存活率。

统计

参数检验系用于正态分布数据，其他为非参数检验。单向重复测定安诺瓦/特凯氏检验(ANOVA/Turkey′s test)用于多重比较，而配对t-检验用于单一性比较。P值小于0.05认为有统计学意义。

结果

小鼠肺炎链球菌血清6B型感染前2小时产生AbM提取物的作用

在小鼠腹腔(i..p.)注射肺炎链球菌血清6B型前2小时，用管饲法饲喂PBS或5种不同厂家的AbM提取物(A-E)的其中一种。每天从小鼠股静脉采集血样进行细菌培养，并检查小鼠病情。仅AbM提取物A相对于PBS对照组示有明显的CFU值的下降(P＜0.05)(图1)。AbM提取物A饲喂小鼠的存活率也高于PBS组小鼠(P＜0.05)(图2)。尽管对照动物在感染后第5天全部死亡，而饲喂提取物A组中的动物在6天后仍有38％的动物存活。其中25％在第7天仍然存活，但有神经性并发症而被处死。AbM提取物D示有较低血中细菌数和提高存活率的趋势，但与PBS组相比，无统计学意义(图1，2)。

用肺炎链球菌血清6B型感染前24小时或0小时产生AbM提取物的作用。

在以下试验中，感染前24小时，2小时或0小时给予AbM提取物或PBS。尽管上述试验中，发现感染前2小时给予AbM提取物A，是没有统计学意义，试验2示有同样的趋势(图3，4)。从血中细菌计数(P＜0.05)(图3)和存活率(P＜0.05)(图4)统计学来看，都证实感染前24小时给予AbM提取物，AbM提取物A具有积极的预防作用。当感染前0小时给予提取物A时，也有相似的明显效果。事实上在本试验中，感染前2小时或0小时给予AbM提取物A，在第10天动物存活率为38％，而对照组动物在第7天仅为10-20％。最佳结果是当感染前24小时给予提取物A时得到的，因为其10天后存活率为50％(图4)，而PBS对照组7天后存活率仅为13％。

讨论

与先前的从具有疗伤作用的大车前属植物(常见的车前草)提取的β-葡聚糖和糖通过腹腔注射给已提到的小鼠感染模型的试验相比，AbM提取物在管饲法饲喂条件下，同样有效。当β-葡聚糖用管饲法对小鼠肺炎球菌感染模型给药时，通过腹腔注射给药后最有效的β-葡聚糖就无任何作用。这就使得AbM提取物比β-葡聚糖更为有用，因为它不需要作静脉注射，所以它不必是无菌产品，因此也不需要更严格的药品生产管理规范(GMP)的要求，也可将该产品带出医院去服用。我们先前已指明β--葡聚糖SSG和MacroGard^在小鼠模型中还强化过敏反应的发生(Ormstad等人，2000；Hetland等人，2000)。在相同模型中用管饲法给予AbM提取物未显任何类似副作用。恰恰相反，过敏反应模型的结果显示AbM提取物可预防过敏反应的发生。

试验1中的血液细菌量I的曲线图与试验2相比，曲线上升速率快，这是由于试验1中肺炎链球菌CFU注射量(1.92×10⁶CFU)为试验2中的2倍(0.97×10⁶CFU)。目的是用肺炎链球菌血清6B型100×LD₅₀(半数致死量)(＝100×1.2×10⁴CFU)(Aaberge等人，1995)对动物进行感染。但是，由于所得到的CFU的数量是从培养后经过冷冻的细菌CFU的数目计算而来的，因此在对细菌样本进行平行试验，结果出来之前，不能得知确切的活的细菌注射量，即CFU。试验2中较低的细菌注射量导致对照组动物存活率(7天后10-20％)高于试验1(3天后0％)，这可能是感染前2小时给予AbM提取物A和PBS组之间缺少统计学显著差异的原因。

感染同时给予AbM提取物A也示有积极的疗效。但由于在该感染模型中，对照组中试验动物的早期死亡率较高，此后未给出该结果。这将在另一较低死亡率的感染模型中进行试验。由于免疫系统抗癌细胞和抗病毒感染细胞采用相似的作用机制，即天然杀手(NK)细菌和细胞毒素T-淋巴细胞，并且由于AbM对癌症有效，因此AbM可能对病毒感染也有积极的作用。

AbM可作为疫苗补充剂用于感染人群，如切除脾脏的患者，以及因此而易患肺炎球菌性肺炎和毒血症的人。其他相关的目标人群包括到卫生条件较差国家的旅游者，以及可在术前服用，作为预防的抗生素的手术患者。可以想象，如广泛的使用如AbM这样的免疫调节剂，则可减少抗生素的用量，又可避免过度的接种疫苗，从而使免疫系统获得更好的机会以”适于”对抗微生物，还具有减少过敏反应发生的效果。根据一项卫生假说，西方国家过敏反应频发，正是由于为避免致病性微生物感染，人群受到过度保护造成的。由于已证明AbM在小鼠模型上有防癌作用，并且上百万日本保健品消费者使用AbM提取物而未发现副作用，这些都极大的增加了AbM作为防治药物的使用价值。

结论

本试验结果证明，当用管饲法饲喂AbM提取物时，AbM提取物能保护感染致命性肺炎球菌的小鼠。仅高纯度提取物(金色标签)具有明显效果。细菌感染前24小时至0小时给予提取物，可见积极的效果。通过与给予生理盐水的动物组相比，给予AbM提取物的动物组中血中细菌数较低，存活率较高，这一结果已被证实。实际上AbM提取物经消化系统摄入后仍具有活性，这使得AbM成为非常令人感兴趣的一种抗菌药物。AbM提取物可预防或治疗感染，尤其是细菌性感染，但对其他致病微生物感染可能也有效果。当今时代抗生素耐药性不断增多，AbM可作为抗生素，或者其他抗感染药物的一种天然补充剂或替代物，而且其副作用较少，并且其具有抑制癌细胞这一积极的副作用。

下述图表与前述试验有关

表1

为经肺炎球菌(肺炎链球菌)血清6B型感染的NIH/OlaHsd种小鼠，管饲法饲喂AbM提取物的试验方案。

A)试验1：感染前2小时用不同的AbM提取物进行处理。

组别	0天，-2小时	0天，0小时	10天
				AbM A	提取物A	Pn6B1.9×106CFU	结束
AbM B	提取物B	Pn6B1.9×106CFU	结束
				AbM C	提取物C	Pn6B1.9×106CFU	结束
AbM D	提取物D	Pn6B1.9×106CFU	结束
				AbM D	提取物E	Pn6B1.9×106CFU	结束
PBS	PBS	Pn6B1.9×106CFU	结束

B)试验2：在感染前不同时间，用AbMA提取物进行处理。

组别	1天前	0天，-2小时	0天，0小时	0天，0小时	10天
						AbM -24小时	提取物A			Pn6B1.9×106CFU	结束
PBS -24小时	PBS			Pn6B1.9×106CFU	结束
						AbM -2小时		提取物A		Pn6B1.9×106CFU	结束
PBS -2小时		PBS		Pn6B1.9×106CFU	结束
						AbM 0小时			提取物A	Pn6B1.9×106CFU	结束
PBS 0小时			PBS	Pn6B1.9×106CFU	结束

缩略语：AbM(巴西蘑菇)，Pn(肺炎球菌)。

图例

图1

在用1.92×10⁶CFU肺炎球菌血清6B型腹腔注射前2小时，通过管饲法预先用AbM提取物A-E或PBS(体积为200μl)饲喂NIH/Ola Hsd种雌性小鼠，其外周血中的肺炎球菌血清6B型CFF I的菌数(见表1)。动物在规定时间间隔取血样，血样均布在琼脂平板上，并作CFU计数。死亡动物确定其血中有1×10⁹CFU的动物。数据点代表8只动物的中值数，并表明用AbM提取物A处理的动物示有较低的CFU值。

图2

用肺炎球菌血清6B型作腹腔注射感染前2小时，预先给予AbM提取物或PBS的小鼠的存活率(中值)。数据点代表8只动物的中间值，表明用AbM提取物A处理的动物示有较高的存活率。

图3

在用0.97×10⁶CFU肺炎球菌血清6B型腹腔注射前24小时或2小时或0小时，通过管饲法预先用AbM提取物A或PBS(体积为200μl)饲喂NIH/Ola Hsd种雌性小鼠，其外周血中的肺炎球菌血清6B型CFF I的菌数(见表1)。在规定时间间隔采取血样，血样均布在琼脂平板上，并作CFU计数。死亡动物确定为血中有1×10⁹CFU的动物。数据点代表8只动物的中间值，表明AbM提取物A处理的动物示有较低的CFU值。注：Y轴为对数值。

图4

图3中小鼠用肺炎球菌血清6B型作腹腔注射感染前24-0小时，预先喂饲AbM提取物A或PBS的存活率(中间值)。数据点代表8只动物的中间值，并表明感染前24小时喂饲AbM提取物A的动物示有较高的存活率。

图5

口服的AbM对卵白蛋白(OVA)免疫的小鼠的IgE抗OVA水平的作用。

图6

口服的AbM对OVA免疫小鼠的Ig2a抗OVA水平的作用。

图7

AbM对Balb/c种小鼠腹膜炎的作用，其中所述的小鼠在第0天经腹腔注射1/8粪稀释液(faeces-dilution)，并在此前1天口服AbM，。本图显示存活率(开普兰-迈耶存活曲线)。

图8

以AbM及内毒素刺激的THP-1-细胞。

图9

本图显示F365平均-B635对F532平均-B532的散点图(scatter-plot)-

在AbM提取物的影响下上调基因与下调基因的显微分布。

图10

以卵白蛋白(OVA)致敏，再以巴西蘑菇(AbM)或PBS经口喂饲处理，然后再以OVA加强剂量给药的NIH/Ola种小鼠中IgE特定水平。

根据本发明，具有抗细菌作用的AbM提取物优选与至少一种其他药物联合用药，其中更优选的是所述的其他药物最好也是一种抗菌素。

AbM提取物优选为口服制剂。此时所述提取物可单独做成制剂，也可加入常见的载体或赋形剂，制成液体制剂，如酏剂，合剂，酊剂等。AbM提取物还可替代的制成固体药物形式，如丸剂，片剂，胶囊，锭剂等。此时该药物可加入常见的添加剂，如调味剂(糖，甜味剂等)和色素。

AbM提取物对Balb/c小鼠经腹腔注射粪稀释液引起的腹膜炎也有预防效果，进一步证明AbM提取物的抗感染作用。腹膜接种前24小时管饲法口服给予AbM提取物，并测定体温(扫描植入小鼠颈部皮肤内的体温芯片)，研究外周血中细菌数及存活率。与口服给予生理盐水而不是AbM的对照组小鼠相比，所有的这些参数都具有显著差异。图7所示为AbM对粪感染小鼠存活率的积极作用。

AbM活性成分作用于遗传性免疫系统中的主要免疫细胞是血液单核细胞及其衍生的组织巨噬细胞。为了研究AbM对这些细胞的刺激作用，将人体前单核细胞系THP-1在存在或不存在10％无菌过滤AbM提取物的情况下培养24小时。测定细胞分泌到细胞培养上清液中的信号物质(细胞因子)水平，以及编码细胞因子的基因上调或下调作用。使用ELISA法测定被分泌的细胞因子，结果显示所述细胞受到AbM刺激增加了主要的炎症促进(前炎症)细胞因子白介素(IL)-6和IL-8(尤其是T-淋巴细胞和嗜中性粒细胞的化学吸引剂)的分泌，而一种主要的减轻炎症(T-细胞调节)细胞因子，如TGFβ分泌则减少(图8)。以外周血中主要单核细胞进行试验中，也示有对IL-6的类似作用(未给出结果)。另一方面，细胞未分泌IL-4(促进过敏)或IL-10(减轻/减缓炎症)细胞因子。

然而更为重要的是，借助显微分布技术进行的研究发现，从受到某物质刺激或未刺激的细胞中分离出的mRNA(单基因的遗传信号物质)为了与芯片上探针结合而进行竞争，其中所述芯片上有与待研究的基因的进行互补的mRNA核苷酸碱基。当特定的基因表达受某物质刺激时，则会产生较多mRNA分子以取代(竞争掉)未受刺激细胞基因对mRNA探针的结合。受刺激细胞的mRNA和对照细胞的mRNA以红，绿荧光色作标记，且借助一台仪器得到结合结果的读数，该仪器按相关红绿光的波长对光信号进行定量。AbM提取物刺激THP-1-细胞24小时的显微分布技术研究显示，前炎症细胞因子如IL-1，IL-8和TNFa的基因上调显著提高，以及新发现的促进抗感染和抗肿瘤防御(Th1)细胞因子，即IL-12家族(Th1细胞因子家族)内IL-23a亚组p19的基因也显著上调。在另一方面，IL-4或IL-10的基因未上调。

图9显示了用AbM提取物刺激的细胞及对照细胞的基因产物之间的竞争结合后的显微分布。

这些细胞试验的结果表明AbM提取物刺激抗感染防御(提高Th1应答)而不增加主要的诱发过敏的细胞因子，如IL-4(引起Th2应答)。目前文献说明Th1和Th2应答之间存在着平衡，以使一应答的提高导致另一应答的降低，这说明提高Th1应答会引起降低Th2应答，这可从小鼠过敏反应模型的结果得到验证(如下)。AbM提取物刺激的抗感染作用的防御，说明机体抗感染防御作用得到了强化，无论是细菌的，病毒的或寄生虫的感染。因此根据AbM提取物对感染(细菌性和非细菌性)和过敏反应的作用，再结合现有的免疫学原理的知识，可证实AbM提取物具有本专利权利要求所要求的全部构想。

AbM提取物抗过敏作用的试验：

为证实AbM提取物具有预防过敏的作用，作以下试验：

材料和方法II

小鼠：Balb/c种雌性，运达时为6周龄，试验前静养1周。

试剂：酶发酵的AbM菌丝体提取物A(金色标签)，日本ACE有限公司产品；PBS和OVA。

血样：试验结束时，动物用二氧化碳麻醉后采集血样，血清在-20℃冷冻。

试验步骤：小鼠(n＝8只/组)在致敏前1天管饲法饲喂200μlAbM提取物或PBS。然后在第0天在小鼠尾根部用OVA+Al₂(OH)₃(佐剂)通过皮下注射进行免疫，在第20天(加强剂量增强过敏反应)进行免疫。第26天首次OVA免疫后，当本模型免疫球蛋白E(IgE)和抗卵白蛋白应答达峰点，心脏穿刺采集用二氧化碳麻醉的动物血样(制成血清)，试验结束。在第26天采集血样，动物血清被用来分析IgE，IgG1和IgG2a抗OVA和细胞因子水平。

测定：用酶联免疫吸附(ELISA)技术测定血清中抗OVA的IgE，IgG1和IgG2a抗体水平。从动物腹部的巨噬细胞和脾细胞培养的上清液和血清中测定典型的TH1-，Th2-和Th3应答的细胞因子(IFN γ，IL-5，IL-10，IL-12，IL-13，TGFβ)水平。没有进行细胞因子的测定。

按前述方法对结果进行统计评价。

从实验中发现，经口服饲喂AbM的小鼠的血清中IgE抗OVA水平(P＝0.17)低于PBS处理组(图5)。这表明由于Th2应答受到抑制，AbM提取物抑制OVA过敏反应的发展。此外，该结果显示，与对照组(PBS组)相比，AbM处理组IgG2a抗OVA水平较高(图6)。这表明AbM使得Th1应答增强，这与IgE分析所示Th2应答减弱是相符的。相反显示IgG1水平增强。不可否认，IgG1抗OVA测定不支持这一事实，但是该试验也正在发展完善中，也并非要100％可靠，才认为该结果是有意义的。与此相对，先前发现腹腔给予β葡聚糖如硬多糖(Ormestad等人提出的)，可增加相应的小鼠模型过敏反应。这证明AbM提取物中除了β-葡聚糖外，还有其它因素在动物体中起作用，这就构成了本发明的目的成立的基础，因为本领域专业人士认为促进某一特定免疫应答的物质不会对相反的免疫应答起作用(参看前述Th1，Th2和Th3的作用)。

AbM的抗过敏作用

NIH/Ola种小鼠用卵白蛋白(OVA)通过皮下注射进行免疫，20天后即OVA加强剂量给药前1天，用管饲法给予AbM提取物或PBS(每次200μl)进行处理。5天后将动物(每一处理组有8只)处死，并抽取血样，用酶朕免疫吸附(ELISA)测定血清中IgE(Th2应答)或IgG2a(Th1应答)抗OVA抗体。

进行两次该试验，发现AbM处理小鼠IgE抗OVA抗体水平显著低于PBS处理的对照组(P＝0.04)(图10)。

另一方面，二组之间的IgG2a抗OVA抗体水平并无差异(未给出数据)。这表明巴西蘑菇除了如上所述的对过敏反应的发展有预防作用外，还可用作已对过敏原发生过敏反应的个体的治疗性抗过敏物质。

因此本发明的第二方面涉及AbM提取物在制造预防或治疗哺乳动物的过敏反应，尤其是人体过敏的药剂中的用途。根据本发明，含有AbM提取物成分的组合物可预防、治疗有关过敏性反应，其包括粉尘过敏(花粉过敏，干草热，室内灰尘过敏等)，食物过敏(蛋白质过敏，如鱼过敏，牛奶过敏，贝类过敏等)和接触性过敏(如接触动物如，狗，猫等的过敏)。

Claims (10)

1.巴西蘑菇Agaricus blazei Muril(AbM)在制备治疗或预防哺乳动物细菌性和非细菌性感染和/或过敏的药剂中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的有关非细菌性感染由寄生菌或病毒引起。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述的细菌性感染由肺炎球菌引起。

4.根据权利要求3所述的用途，其中所述的肺炎球菌为肺炎链球菌。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述的过敏反应选自包括下列的组：粉尘过敏(花粉过敏，干草热，室内灰尘过敏等)，食物过敏(蛋白质过敏，如鱼过敏，牛奶过敏，贝类过敏等)和接触性过敏(如接触动物如，狗，猫等的过敏)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述的药剂为口服药剂。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述的药剂为静脉制剂。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的用途，其中所述的药剂包括至少一种其他药物物质。

9.根据权利要求8中所述的用途，其中所述的其他药物物质是一种抗菌物质。

10.根据前述权利要求中的任一项所述的用途，其中所述的哺乳动物是人。

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