CN1846694B - 取代芳香基双胍类化合物及含它们的药物组合物在制备抗恶性肿瘤药物方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及取代芳香基双胍类化合物及含它们的药物组合物在制备抗恶性肿瘤药物方面的应用。本发明的取代芳香基双胍类化合物经体内外实验，显示出明显的抑制肿瘤细胞的作用，同时具有高效、低毒的特点，因此作为药物化合物有望应用在抑制肿瘤侵袭转移和血管新生以及治疗整合素α_vβ₃高表达的人黑色素瘤、神经胶质瘤、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤方面。

Description

取代芳香基双胍类化合物及含它们的药物组合物在制备抗恶性肿瘤药物方面的应用

技术领域

本发明涉及使用一系列取代芳香基双胍类化合物治疗恶性肿瘤的方法，更具体的说是一种具有抗肿瘤活性的取代芳香基双胍类化合物以及含治疗有效量的此类化合物的药物组合物在抑制肿瘤侵袭转移和血管新生以及治疗整合素αvβ3高表达的人黑色素瘤、神经胶质瘤、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤方面的应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的一大类疾病，其异常增生是细胞内异常的信息所控制的，与肿瘤细胞内相应基因的异常活跃与失活密切相关。传统的抗癌药物主要是细胞毒药物，它们依赖肿瘤细胞与正常细胞生长、修复、死亡的动力学之间的差异来杀伤肿瘤细胞，因此这类药物不可避免的会影响正常细胞，在临床上治疗窗窄，也限制了多药联合化疗的实施。近年来有许多针对分子靶点的抗癌药物出现，这类药物的针对性强，效果显著，就好像击靶一样，因此被称为“靶标药物”。早在100年前Paul Ehrlich就提出了靶向治疗(targeting therapy)的概念，随着分子生物学的发展及人们对肿瘤发生机制研究的深入，针对特定致癌机制的靶标药物在近些年得到了很快的发展，这些药物直接攻击致癌病因，选择性强，临床试验效果显著，且副作用轻，多药联合使用时常能增强传统化疗药物的作用。

整合素(integrin)是一类重要的细胞表面分子，属于细胞表面受体家族，由α和β两种亚基组成。整合素通过介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质的粘附与许多疾病的发生相关，其中整合素αvβ3(CD51/CD61)在肿瘤转移、血管新生、炎症、内膜增生等过程中起到了重要的作用。整合素αvβ3之所以成为一个有效的治疗靶点，是因为它并不在正常细胞中广泛表达，只是在新生血管的平滑肌细胞和内皮细胞以及多种恶性肿瘤尤其是侵袭性的肿瘤细胞中高表达，包括人黑色素瘤、神经胶质瘤、肺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌等。

很多肿瘤患者在治疗后难免出现复发和广泛转移，肿瘤侵袭转移的三个关键步骤为肿瘤细胞与基底膜的粘附，细胞外基质的降解，以及细胞移行。在这个过程中有许多阶段特异的粘附过程，其中一些细胞粘附分子的表达，尤其是整合素αvβ3与肿瘤细胞的转移潜力密切相关，它通过促进肿瘤的转移和侵润能力使肿瘤的恶性表型增加，可以作为许多侵袭的肿瘤细胞的一个标志。例如在转移性最强的肿瘤之一人类黑色素瘤中，肿瘤细胞对许多组织和细胞外基质的侵袭能力很大程度上归因于表面粘附受体介导的作用，其中，整合素αvβ3在黑色素瘤的转移和增殖中发挥了重要作用，它能通过与其配体的粘附，介导黑色素瘤细胞向许多组织转移。又如局部侵润是恶性胶质瘤的特点之一，这也与整合素αvβ3的异常表达密切相关，侵润的胶质瘤细胞可以通过αvβ3的作用，沿着含有基质蛋白的某些结构(如血管壁基底膜的内侧面)进行播散。

新生血管的形成能够促使肿瘤迅速增长，并增加肿瘤转移的风险。整合素αvβ3被确认为血管新生的一个标志，它在静止期的正常血管很少表达，但是在肿瘤或者一定的生长因子诱导下，整合素αvβ3在新生血管内皮细胞的表达明显增高，能够通过促进新生血管内皮细胞迁移，抑制其凋亡，并促进原发和转移肿瘤的小血管的生长以及增加其侵润能力，使其恶性表型增加。对整合素αvβ3的抑制能够调节肿瘤诱导的血管新生，增加与肿瘤相关的小血管内皮细胞的凋亡，血管生成减少，还能调节破骨细胞的活性，并控制恶性肿瘤伴发的高钙血症。

目前针对整合素αvβ3的抑制剂主要有37种，其中有两种在进行II期临床实验，一种在进行I期临床实验。这些抑制剂主要分为三类：第一类是单克隆抗体，其中包括整合素αvβ3的人源化单克隆抗体Vitaxin和其第二代抗体Vitaxin II，在其II期临床实验中，用来研究对前列腺癌、转移的黑色素瘤和晚期的结肠癌以及平滑肌肉瘤患者的治疗活性。另外还有Johnson & Johnson公司的人源化抗体CTNO-95，临床前实验表明它能够抑制裸鼠人黑色素移植瘤的生长，目前正在进行多中心I期临床实验；第二类是多肽及多肽模拟物，包括由Merck公司开发小的分子环肽类似物EMD121974，能够拮抗整合素αvβ3介导的血管内皮细胞与细胞外基质的相互作用，正在进行II期临床试验，用于治疗头颈部肿瘤、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肾脏肿瘤以及结肠癌的研究；第三类是非肽类小分子抑制剂，目前正在研究的主要是苯并二氮杂卓类，包括SB223245等，能够显著抑制整合素αvβ3介导的细胞粘附。肽类在体内易受酶的降解，半衰期短，开发相应的非肽类小分子抑制剂的药物，不但在体内作用时间长，而且可以口服使用，是未来的发展方向之一。2002年4月Science上报道了整合素αvβ3胞外区与配体复合物的晶体结构，本研究正是基于这一研究成果，利用计算机高通量筛选与化学信息学相结合的手段，对整合素αvβ3的受体结合位点进行数据库搜索，筛选针对整合素αvβ3的小分子抑制剂，来寻找控制肿瘤侵袭转移及血管新生等疾病的新药。

我们首次发现，本发明的取代芳香基双胍类化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移和血管新生以及治疗整合素αvβ3高表达的人黑色素瘤、卵巢癌、神经胶质瘤、肺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的药物方面，显示出有效的药理活性，为寻找新的有效的抗肿瘤药物开辟了一条新的途径。

在本发明以前，取代芳香基双胍类化合物曾被做为5-羟色胺受体3激动剂，可以通过促进γ-氨基丁酸的释放，进一步阻止突触后伤害刺激的传导，曾用于非阿片类无成瘾性止痛药的研究等。Brain Res.2003 Jul 18；978(1-2)：250-5；Pain.1997Jul；71(3)：237-47；Gen Pharmacol.1991；22(2)：247-51中报道了5-羟色胺受体激动剂的这一药理作用。但是其在抗肿瘤方面，尤其是抑制肿瘤侵袭转移和血管新生方面的应用一直未被研究过。

本发明的取代芳基双胍类化合物的合成参见Cohn，J.Prakt.Chem.[2]84，396 Jacobs，Jolles，Brit，pat.587，907(1947 to ICI)。本发明的化合物可以从市场上买到或通过上述的方法或其它文献中报导的方法制得。

发明内容

本发明的第一个目的在于公开了取代芳香基双胍类化合物在制备抗恶性肿瘤药物方面的应用。

本发明进一步公开了取代芳香基双胍类化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移药物方面的应用。

本发明更进一步公开了取代芳香基双胍类化合物在制备抑制肿瘤血管新生药物方面的应用。

本发明再进一步公开了取代芳香基双胍类化合物在制备治疗人黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、神经胶质瘤等恶性肿瘤的药物方面的应用。

本发明的第二个目的在于提供了用于治疗恶性肿瘤的药物组合物，它包含作为活性成分的权利要求1或5或6的化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

本发明提供了如下式I的具有抗肿瘤活性的取代芳香基双胍类化合物在制备抗恶性肿瘤药物方面的应用：

其中：

R′为H、苯基、取代的苯基、苯烷基、苯烯基、苯烷氧基、苯氧基、苯硫基；

R为R₁取代的苯基、苯烷基、苯烯基、苯烷氧基、苯氧基、苯硫基；

R₁为含C₁-C₆的直链或支链烷基、C₁-C₄全氟烷基、C₁-C₄烷酰基、C₁-C₄酯基、芳基、卤素、NO₂、NH₂、-H、-OR₂、-SR₂；

R₂为C₁-C₆的直链或支链烷基、C₁-C₄全氟烷基、C₁-C₄烷酰基；

R或R′可以是单个或多个取代基，并分别处在芳环上的对位或邻位或间位。

本发明包括I类化合物的药学上可接受的无机酸和有机酸盐，包括盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、醋酸盐、马来酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、甲基苯磺酸盐、富马酸盐、酒石酸盐等。

本发明用计算机辅助药物设计的手段来寻找抑制肿瘤侵袭转移和血管新生的抗肿瘤药物，我们对含有9万个小分子化合物的三维结构数据库进行打分筛选，最终得到得分靠前的1000个化合物(能量值越低，得分越靠前)，其中取代芳香基双胍类化合物全部进入了前1000个化合物的范围，具有代表性的化合物有：

化合物	能量值
		N-苯甲基双胍对甲基苯磺酸盐(1)	-46.44
N-{4-[(三氟甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐(2)	-54.06
		N-(3-氯-苯氧基)双胍(3)	-34.19
3-双胍-苯甲酸乙酯盐酸盐(4)	-33.89
		N-(2-乙基苯基)双胍盐酸盐(5)	-36.9
N-苯甲基-N-苯基双胍对甲基苯磺酸盐(6)	-42.76
		N-(3，4-二氯苯基)双胍(7)	-47.07
N-{3-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐(8)	-43.35
		N-{2-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐(9)	-45.48
N-(2-氯-5-三氟甲基苯基)双胍(10)	-47.24
		N-(2-乙氧基苯基)双胍(11)	-46.96
N-(5-氯-2-甲基苯基)双胍(12)	-38.38
		N-{4-[(二氟甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐(13)	-46.77
N-(3-氯-4-乙氧基苄基)双胍盐酸盐(14)	-48.86
		N-(3-氯-4-甲氧基苄基)双胍盐酸盐(15)	-50.16
N-(4-氯-2-甲基苯基)双胍盐酸盐(16)	-42.43
		N-(3-氯-4-氟苯基)双胍盐酸盐(17)	-44.85
N-(4-三氟甲氧基苯基)双胍盐酸盐(18)	-38.95
		N-(3-硝基苯基)双胍(19)	-46.02
N-(3-氯-4-氟苯甲氧基)双胍(20)	-39.89

N-(2，4-二氯苯基)双胍盐酸盐(21)	-47.70
		N-(2，3-二氯苯基)双胍盐酸盐(22)	-46.73
N-(4-氟苯基)双胍盐酸盐(23)	-48.30

我们对这些取代芳香基双胍类化合物进一步进行了生物学活性测定，发现它们对肿瘤细胞粘附、侵袭转移和肿瘤血管新生都有不同程度的抑制作用。

附图说明：

图1为取代芳香基双胍类化合物结构式；

图2为肿瘤细胞粘附抑制实验图；

图3为细胞损伤愈合实验图；

图4为血管内皮细胞管腔形成实验图；其中，图4A为是无因子诱导的空白对照组，图4B为加入100ng/ml的bFGF的阳性对照组，图4C为同时加入100ng/mlbFGF和10μg/ml N-(3，4-二氯苯基)双胍的处理组。

图5为细胞凋亡实验图，其中，图5A、图5B、图5C中分别加入0、5μg/ml和10μg/ml的N-(3，4-二氯苯基)双胍。

在此，为了表明目标化合物的实用性，下面给出本发明典型实施例N-(3，4-二氯苯基)双胍的药理实验数据。

药理实验一肿瘤细胞粘附实验

原理：

肿瘤细胞通过整合素等膜表面受体与细胞外基质中相应的配体粘附，粘附是肿瘤细胞侵袭转移的始动步骤，有利于肿瘤细胞侵犯基底膜等正常组织。本方法用于测定化合物对肿瘤细胞与基底膜成分粘附能力的影响。选择整合素αvβ3高表达的人黑色素瘤细胞系作为受试细胞系，选择整合素αvβ3的特异性配体蛋白vitronectin包被96孔板，加入细胞的同时加入受试化合物，经过一段时间的孵育后，冲洗掉未粘附的细胞，粘附于板上的细胞数量用结晶紫方法测定的吸光值来反映。

实验方法：

实验分为两组：N-(3，4-二氯苯基)双胍组和阴性对照化合物组。共设50，25，12.5，6.25，3.13，1.56μg/ml六个剂量。另设空白对照中加入等体积的溶剂，作为细胞100％粘附对照，计算实验组中细胞粘附抑制率和半数抑制量(IC50)。

(1)96孔板中加入5μg/ml玻璃体粘连蛋白(vitronectin)每孔100μl，4℃过夜。对照孔用5μg/ml牛血清白蛋白(BSA)包被，每孔100μl，排除非特异性结合的影响。

(2)次日吸出包被液，加入1％BSA封闭，每孔100μl，室温孵育1小时，磷酸缓冲液(PBS)洗两次。

(3)以含有1％BSA、1mM CaCl₂、1mM MgCl₂、1mM MnCl₂的RPMI1640无血清培养液悬浮M21人黑色素瘤细胞，每孔加入8×10⁴细胞，实验组加入受试药物，空白对照组加入溶剂PBS作为对照，37℃5％CO₂孵箱内孵育1小时。

(4)吸出培养基，每孔加入200μl PBS，轻轻冲洗三遍，以去除未粘附的细胞。

(5)弃去PBS，每孔加入100μl 10％戊二醛固定30分钟。

(6)用去离子水洗涤至戊二醛彻底洗净，置37℃烘箱彻底干燥。

(7)加入0.1％的结晶紫对细胞进行染色，振摇30分钟。

(8)用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫冲洗干净，置37℃烘箱彻底干燥。

(9)加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。

(10)1小时后在酶标仪上进行测定，波长为595nm。

实验结果：

N-(3，4-二氯苯基)双胍对整合素αvβ3高表达的肿瘤细胞与特异性配体vitronectin的粘附实验结果表明，N-(3，4-二氯苯基)双胍能够明显抑制肿瘤细胞与vitronectin的粘附，并呈剂量依赖关系(见图2)，IC50值为10.61±1.04μg/ml。对照化合物对肿瘤细胞的粘附几乎没有抑制作用。

药理实验二细胞损伤愈合实验

原理：

损伤愈合实验用来研究多种不同类型细胞的迁移，并经常用在抗转移和血管新生药物的研究中。当单层培养的细胞被损伤或者刮除后，损伤区的细胞就会增加生长因子的分泌，通过细胞的增殖和迁移来愈合损伤。单层细胞的损伤愈合能在3-24小时内观察到。进行损伤愈合实验的时候，通常用枪头或注射器针头在单层生长的细胞上划出一个条带，损伤后细胞向损伤处突出和迁移，通过记录细胞在不同时间迁移的距离来对结果进行评价。

方法：

实验分为24孔板每孔在板底做三条纵向的标志线。取生长状态良好的人黑色素瘤细胞，调整细胞浓度为2×10⁴/ml，接种于24孔板中，每孔500μl，培养至90％细胞汇合，更换为无血清培养基，37℃ 5％CO2孵箱中过夜，使用直径约为2.5mm的小枪尖划一条横向的刮痕。用无菌的PBS洗涤三遍，去除划线过程中脱落的细胞。加入2.5、5、10μg/ml的N-(3，4-二氯苯基)双胍，并设未加药物的对照组，每组设三个平行孔。倒置相差显微镜下记录不同时间点后刮痕与标志线交叉处细胞的迁移距离。

实验结果：

如图3所示，划线损伤8小时后，对照组细胞迁移了0.31mm，而在2.5、5、10μg/ml的N-(3，4-二氯苯基)双胍作用下，0.21、0.083和0mm，迁移抑制率分别为32.3％、73.2％和100％。18小时后，对照组细胞迁移了1.19mm，而加了2.5、5、10μg/mlN-(3，4-二氯苯基)双胍的实验组细胞分别迁移了0.72、0.39和0.2mm，迁移抑制率分别为39.5％、67.2％和83.2％。因此，本化合物不但能够明显抑制肿瘤细胞迁移，还能够起到长效抑制作用。

药理实验三血管内皮细胞管腔形成实验

原理：

脐静脉血管内皮细胞能够在血管内皮生长因子的作用下，在人工基底膜胶形成的凝胶体系中形成毛细血管样结构：原本呈卵石样外形的细胞，胞体拉长并有芽生状管状结构伸出而使胞体不规则，相邻的变形细胞间常以管状结构相互连接，延细胞体纵轴或外伸管状结构中常可见有半透明的空泡或裂隙出现。目前研究认为内皮细胞在人工基底膜胶的这些改变类似于其在体内的血管新生过程，因而可以用于检测不同的药物对内皮细胞血管生成能力的综合影响。

方法：

将ECM人工基底膜胶铺入预冷的96孔板，每孔60μl，37℃固化1小时。每孔加入2×10⁴的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，阳性对照组中加入100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，阴性对照组以PBS作为对照，处理组中加入100ng/ml的bFGF和10μg/ml的受试化合物，每组设三个平行孔。37℃5％CO2条件下孵育6小时后观察结果

实验结果：

人脐静脉内皮细胞在bFGF的诱导下，能够在人工基底膜胶上形成类似于新生血管的管腔样结构，见图4，其中，图4A是没有因子诱导的内皮细胞，B为100ng/ml的bFGF诱导下形成的互相连接的管腔样结构，C为加了10μg/ml N-(3，4-二氯苯基)双胍的处理组，虽然这组中也加入了同样量的生长因子bFGF，但是由于化合物的抗血管新生作用，并不能形成管腔样结构。

药理实验四Annexin V/PI双染色法细胞凋亡实验

原理：

肿瘤细胞能够通过细胞与细胞外基质的粘附来促进肿瘤生存，如果这种粘附作用被抑制，则能迅速诱导细胞凋亡，被称为“失巢凋亡”(anoikis)。凋亡细胞对用于细胞活性鉴定的染料PI有抗染性，坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的坏死细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的凋亡细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为(FITC^-/PI^-)；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为(FITC⁺/PI⁺)；而右下象限为凋亡细胞，显现(FITC⁺/PI^-)

方法：

(1)取对数生长期的人黑色素瘤细胞，调整细胞浓度为5×10⁵/ml铺入6孔细胞培养板，分别加入不同0、5、10μg/ml的N-(3，4-二氯苯基)双胍，37℃ 5％CO2条件下孵育24小时。

(2)24小时后，收集细胞，1000rpm 4℃离心5分钟，弃上清。

(3)用无菌水按1∶4的比例稀释结合缓冲液(binding buffer)

(4)用binding buffer调整待测细胞的浓度为5×10⁵～1×10⁶/ml.，取1ml细胞，1000rpm 4℃离心5分钟，弃上清。

(5)用1ml PBS洗涤1次，1000rpm离心5分钟。

(6)用0.5ml binding buffer重悬细胞，取195μl细胞悬液，加入5μl AnnexinV和10μl PI，室温下避光孵育10~15min

(7)加入300μl Binding Buffer，立即上机(流式细胞仪)检测：流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光，另一波长大于560nm的滤器检测PI。

实验结果：

结果表明，与未处理的细胞见图5(图5A)相比，5μg/ml(图5B)和10μg/ml(图5C)的N-(3，4-二氯苯基)双胍处理24小时后，都能够通过抑制细胞粘附从而诱导细胞“失巢凋亡”，凋亡率分别增加27.7％和44.9％，呈剂量依赖性。

药理实验五体内初步研究

利用整合素高表达的人黑色素瘤细胞建立裸鼠实验性转移模型，用以评价化合物在体内的抗肿瘤作用。

(1)裸鼠实验性转移模型的建立

BALB/C nu/nu裸小鼠，4～6周龄，体重18～22克，购自中国药品生物制品检定所动物中心，在SPF(specific pathogen free)级合格环境下饲养。裸小鼠经150cGy的¹³⁷Cs-γ射线全身照射，随机分组，每组3只动物。12～72h内用

号注射针头经尾静脉缓缓注入2×10⁶M21细胞。

(2)体内抗肿瘤转移活性实验

实验分为阴性对照组和治疗组，阴性对照组给予生理盐水作为对照。治疗组给N-(3，4-二氯苯基)双胍，分为高低两个剂量。从接种后第2天起，每天给药1次，共20次。

(3)疗效观察

给药期间观察裸鼠的一般状况，每两天称量一次体重。于接种后第7周末断颈处死动物。称体重后解剖出裸鼠肺脏，用电子天平称重，再将其用Bouin氏液(饱和苦味酸75ml+40％甲醛25ml+冰醋酸5ml)固定，48h后肺组织呈黄色，肿瘤转移灶成白色隆起。用解剖显微镜观察并记录肺转移灶数目和大小，并按转移灶的大小分级。常规石蜡切片，HE染色，组织病理学观察。结果表明，N-(3，4-二氯苯基)双胍在体内能够明显抑制肺转移结节的形成。治疗后裸鼠体重的变化能够间接反映药物的毒性作用，治疗组的动物与未治疗组相比，不但没有减轻，反而有上升趋势，说明N-(3，4-二氯苯基)双胍对动物没有明显毒性，而且可以克服未治疗组由于转移而引起的体重减轻。初步结果提示，N-(3，4-二氯苯基)双胍能够高效、低毒的抑制肿瘤转移，由于N-(3，4-二氯苯基)双胍对整合素αVβ3的靶向作用，可以预计它对其它整合素αvβ3高表达的肿瘤也可能产生明显的抗转移活性。

综上所述，通过药理的体内体外实验可以进一步的证明：本发明的取代芳基双胍类衍生物显示出明显的抑制肿瘤细胞侵袭转移和血管新生的作用，同时具有高效、低毒的特点，因此有望在抑制肿瘤侵袭转移和血管新生以及治疗整合素αvβ3高表达的人黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、神经胶质瘤等多种恶性肿瘤药物方面应用。

本发明用于治疗恶性肿瘤的药物组合物，它包含作为活性成分的取代芳香基双胍类化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

在此，为了表明目标化合物(I)的实用性，下面给出含本发明典型实施例7有效成分所形成的药物组合物。

本发明的取代芳香基双胍类系列化合物通常是以药物组合物的形式服用的，可口服或非口服给药，或者以和药学上可接受的载体、赋形剂及其它添加剂形成的化合物(如片剂、缓释制剂、胶囊剂、注射剂、溶液剂)安全的口服或非口服给药。当口服给药时，组合物可配制成片剂、糖衣剂或胶囊。为制备口服药物组合物可采用乳糖或淀粉做载体，明胶，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等是合适的结合剂或成颗剂。作为崩解剂可选用淀粉或微晶纤维素，常以滑石粉，胶体硅胶，硬脂酸甘油酯，硬脂酸钙或镁等作为合适的抗粘合剂和润滑剂。例如，可通过压制湿颗粒来制备片剂。活性成分与载体以及选择性的与一份崩解添加剂组成混合物，该混合物与粘合剂的含水溶液，醇性或含水醇性溶液在合适的设备中进行颗粒化，干燥颗粒随后加入其它的崩解剂，润滑剂和抗粘剂将此混合物压片。

本发明的取代芳香基双胍类系列化合物可以注射剂形式给药，虽然剂量依治疗对象、给药方式、症状及其它因素而改变。当非肠道给药时，本发明的组合物被制成注射制剂。

本发明的化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如每天服用的剂量可在每公斤体重大约0.5mg-1200mg的范围内。在成人的治疗中，剂量范围最好是在1mg/kg--50mg/kg，一次或几次服用。实际服用的化合物的剂量应该由医生根据有关的情况来决定，这些情况包括被治疗者的身体状态，选者的给药途径、年龄、体重、患者对药物的个体反应，患者症状的严重程度等等，因此上述剂量范围并不是以任何方式限制本发明的范围。

具体实施方式

为了更充分的解释本发明的实施，提供下述制剂实施例。这些实施例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。制剂可以采用本发明中的任意一个化合物的活性成分。

制剂1

每片含10mg活性成分的片剂制备如下：

             用量/片    重量浓度(％)

化合物(2)    100mg      10.0

微晶纤维素       35mg    35.0

淀粉             45mg    45.0

聚乙烯吡咯烷酮   4mg     4.0

羧甲基淀粉钠盐   4.5mg   4.5

硬脂酸镁         0.5mg   0.5

滑石粉           1mg     1.0

总计             100     100.0

将活性成分，淀粉和纤维素过筛，并充分混合，将聚乙烯吡咯烷酮溶液与上述的粉混合，过筛，制得湿颗粒于50-60℃干燥，将羧甲基淀粉钠盐，硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中压片。

制剂2

注射剂的制备

化合物(5)   200mg

甘露醇      700mg

PEG3000     10mg

蒸馏水      100ml

使pH值为7.0-7.5过滤滤液浓度为3毫克/毫升，按每安瓶2毫升分装，冷冻干燥后即得注射剂。

制剂3

每囊含100mg活性成分的胶囊的制备如下：

                 用量/囊    重量浓度(％)

化合物(7)        100mg      30.0

聚氧乙烯脱水山梨 0.05mg     0.02

糖醇单油酸酯

淀粉             250mg      69.98

总计        350.05mg    100.00

Claims (8)

1.取代芳香基双胍类化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移药物方面的应用；其选自如下化合物中的一种或多种：

N-苯甲基双胍对甲基苯磺酸盐；

N-{4-[(三氟甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐；

N-(3-氯-苯氧基)双胍；

3-双胍-苯甲酸乙酯盐酸盐；

N-(2-乙基苯基)双胍盐酸盐；

N-苯甲基-N-苯基双胍对甲基苯磺酸盐；

N-(3，4-二氯苯基)双胍；

N-{3-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐；

N-{2-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐；

N-(2-氯-5-三氟甲基苯基)双胍；

N-(2-乙氧基苯基)双胍；

N-(5-氯-2-甲基苯基)双胍；

N-{4-[(二氟甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐；

N-(3-氯-4-乙氧基苄基)双胍盐酸盐；

N-(3-氯-4-甲氧基苄基)双胍盐酸盐；

N-(4-氯-2-甲基苯基)双胍盐酸盐；

N-(3-氯-4-氟苯基)双胍盐酸盐；

N-(4-三氟甲氧基苯基)双胍盐酸盐；

N-(3-硝基苯基)双胍；

N-(3-氯-4-氟苯甲氧基)双胍；

N-(2，4-二氯苯基)双胍盐酸盐；

N-(2，3-二氯苯基)双胍盐酸盐；

N-(4-氟苯基)双胍盐酸盐。

2.权利要求1所述的应用，其选自如下化合物：N-苯甲基双胍对甲基苯磺酸盐N-(2，4-二氯苯基)双胍盐酸盐N-(2，3-二氯苯基)双胍盐酸盐；N-(2-氯-5-三氟甲基苯基)双胍；N-(5-氯-2-甲基苯基)双胍；N-{3-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐N-{4-[(三氟甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐；N-(3-氯-苯氧基)双胍；3-双胍-苯甲酸乙酯盐酸盐；N-(2-乙基苯基)双胍盐酸盐；N-苯甲基-N-苯基双胍对甲基苯磺酸盐或N-(3，4-二氯苯基)双胍。

3.权利要求2所述的应用，其选自如下化合物：N-(2-乙基苯基)双胍盐酸盐N-(2，4-二氯苯基)双胍盐酸盐；N-(2，3-二氯苯基)双胍盐酸盐；N-(2-氯-5-三氟甲基苯基)双胍；N-(5-氯-2-甲基苯基)双胍N-{3-[(甲基)硫代]苯基}双胍盐酸盐或N-(3，4-二氯苯基)双胍。

4.权利要求1-3任一项所定义的应用，其化合物在制备治疗整合素αvβ3高表达的人黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、胃癌、前列腺癌、神经胶质瘤药物方面的应用。

5.权利要求1-3任一项所定义的应用，其化合物在制备治疗人黑色素瘤恶性肿瘤的药物方面的应用。

6.权利要求1-3任一项所定义的应用，其化合物在制备抑制肿瘤血管新生药物方面的应用。

7.权利要求1-3任一项所定义的应用，其N-(3，4-二氯苯基)双胍化合物在制备抑制肿瘤侵袭转移药物方面的应用。

8.权利要求1-3任一项所定义的应用，其N-(3，4-二氯苯基)双胍化合物在制备治疗人黑色素瘤恶性肿瘤的药物方面的应用。

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