CN1726198A

CN1726198A - 化合物、组合物及方法

Info

Publication number: CN1726198A
Application number: CNA200380105737XA
Authority: CN
Inventors: 钱向平; 古斯塔夫·贝格内斯; 小戴维·J.·摩根斯; 史蒂文·戴维·科奈特; 达什扬特·达那克
Original assignee: Cytokinetics Inc; SmithKline Beecham Corp
Current assignee: Cytokinetics Inc; SmithKline Beecham Corp
Priority date: 2002-10-11
Filing date: 2003-10-02
Publication date: 2006-01-25
Also published as: AR044193A1; BR0315247A; TW200418818A; WO2004032840A2; US7476743B2; IS7798A; RU2005114491A; US20060189671A1; MXPA05003830A; KR20050075356A; CA2501938A1; AU2003282665A1; EP1558588A4; JP2006502219A; PL375889A1; NO20052267L; ZA200503733B; IL167936A0; WO2004032840A3; NZ539643A

Abstract

本发明公开了可用于通过调节KSP的活性来治疗细胞增殖性疾病的1，2，4－三唑－5－酮化合物。

Description

化合物、组合物及方法

相关专利申请的交叉参考

本申请要求于2002年10月11日递交的第60/417,889号美国临时专利申请的权益，其内容在此并入作为参考。

技术领域

本发明涉及作为有丝分裂驱动蛋白KSP之抑制剂的化合物，其可用于治疗细胞增殖性疾病，如癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌疾病以及炎症。

发明背景

用于治疗癌症的治疗剂包括作用在微管上的紫杉烷和长春花生物碱。微管是有丝分裂纺锤体的初级结构成分。有丝分裂纺锤体负责基因组的复制模板向细胞分裂所产生的两个子细胞之一中的分布。假设这些药物对有丝分裂纺锤体的破坏导致对癌细胞分裂的抑制，并诱发癌细胞死亡。然而，微管形成其他类型的细胞结构，包括用于神经过程的细胞内输送的轨道。因为这些药物不会特异性地靶向有丝分裂纺锤体，所以也产生一些副作用，限制了它们的应用。

提高癌症治疗药物的特异性是相当令人感兴趣的，这是因为如果能够降低与给药这些药物相关的副作用，可实现更高的治疗益处。传统上，癌症治疗中的巨大提高是与鉴别出通过新机理作用的治疗剂有关的。这其中的例子不仅包括紫杉烷，而且还包括作为拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类药物。由这两类药物来看，有丝分裂驱动蛋白对于新的抗癌药物是非常有吸引力的。

有丝分裂驱动蛋白是有丝分裂纺锤体形成及功能所必需的酶，但通常并不是其他微管结构的一部分，例如在神经过程中。有丝分裂驱动蛋白在有丝分裂的所有阶段都起到基本的作用。这些酶是将ATP水解所释放的能量转化为驱动细胞货位沿微管方向移动的机械力的“分子发动机”。足以完成该任务的催化域是一个约340个氨基酸的紧密结构。在有丝分裂期间，驱动蛋白将微管组装成有丝分裂纺锤体的双极结构。驱动蛋白介导染色体沿纺锤体微管的移动，以及有丝分裂纺锤体中与有丝分裂特殊阶段相关的结构变化。有丝分裂驱动蛋白功能的实验干扰导致有丝分裂纺锤体的畸形或者功能障碍，经常使细胞休止和细胞死亡。

KSP是已鉴别出的有丝分裂驱动蛋白中的一种。KSP属于进化保守型驱动蛋白亚族的正端方向(plus end-directed)的微管运动原，其组装成由反平行同型二聚体组成的双极同型四聚体。在有丝分裂期间，KSP与有丝分裂纺锤体的微管结合。在人细胞中微量注射针对KSP的抗体，可在细胞分裂的前中期期间防止纺锤极分开，产生单极纺锤体，而且导致有丝分裂停止，并诱发程序细胞死亡。KSP以及相关的驱动蛋白在其他非人类的生物中使反平行的微管成束，并使它们相互之间滑动，由此迫使两个纺锤极分开。KSP也可介导分裂后期B纺锤体的拉长以及纺锤极处微管的聚焦。

已有人描述了人KSP(也称为HsEg5)[Blangy等人，Cell，83：1159-69(1995)；Whitehead等人，Arthritis Rheum.，39：1635-42(1996)；Galgio等人，J.Cell Biol.，135：339-414(1996)；Blangy等人，J.Biol.Chem.，272：19418-24(1997)；Blangy等人，Cell Motil Cytoskeleton，40：174-82(1998)；Whitehead和Rattner，J.Cell Sci.，111：2551-61(1998)；Kaiser等人，JBC 274：18925-31(1999)；GenBank accession numbers：X85137，NM004523和U37426]，以及KSP基因的片段(TRIP5)[Lee等人，Mol Endocrinol.，9：243-54(1995)；GenBank accession number L40372]。已有人描述了非洲爪蟾属KSP同系物(Eg5)、以及果蝇属KLP61 F/KRPl 30。

有丝分裂驱动蛋白(包括KSP)是发现和研制新型有丝分裂化学治疗剂的有用目标。因此，本发明的目的是提供用于抑制KSP的化合物、组合物及方法。

发明内容

根据如上所述的目的，本发明提供可用于治疗细胞增殖性疾病的化合物。该化合物是KSP抑制剂、特别是人KSP抑制剂。本发明还提供包含所述化合物的组合物及使用所述化合物或组合物的方法，用于治疗细胞增殖性疾病。

在一个方面中，本发明涉及用于治疗细胞增殖性疾病、以及治疗通过抑制KSP的活性而被治疗的疾病的方法。该方法使用一种或多种以下式I所示的化合物：

其中：

T和T’独立地是共价键或者任选取代的低级亚烷基，

R₁选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；

R₂和R_2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；或者R₂和R_2′一起形成任选取代的3-7元环；

R₃选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、-C(O)-R₆和-S(O)₂-R_6a；

R₄独立地选自于氢、任选取代的烷基、羧基烷基、氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的杂环基和任选取代的杂芳基；

R₅选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基；

或者R₅和R₃以及它们所连接的氮原子一起形成任选取代的5-12元含氮杂环，该杂环还任选在杂环中包含1-2个选自N、O和S的额外杂原子；

或者R₅和R₂一起形成任选取代的5-12元含氮杂环，该杂环还任选在杂环中包含1-2个选自N、O和S的额外杂原子；

R₆选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、R₇O-和R₁₁-NH-；

R_6a选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、和R₁₁-NH-；

R₇选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；

R₁₁选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；以及

(式I包括单个立体异构体以及立体异构体的混合物)；

式I化合物的药物学可接受的盐；

式I化合物的药物学可接受的溶剂合物；或者

式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物。

在具体的实施方案中，当R₄是任选取代的苯基时，R₁不是任选取代的苯基。

在一个方面中，本发明涉及用于治疗细胞增殖性疾病或者通过抑制KSP可治疗的其他病症的方法，其包括给药治疗有效量的式I化合物、式I化合物的药物学可接受的盐、式I化合物的药物学可接受的溶剂合物、或者式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物。所述疾病和病症包括癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌性疾病和炎症。

在另一个方面中，本发明涉及用于抑制KSP驱动蛋白的化合物。该化合物具有如式I所示的结构，或者是式I化合物的药物学可接受的盐、式I化合物的药物学可接受的溶剂合物、或者式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物。本发明还涉及药物组合物，其包含治疗有效量的式I化合物、式I化合物的药物学可接受的盐、式I化合物的药物学可接受的溶剂合物、或者式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物，以及一种或者多种药物赋形剂。在另一个方面中，该组合物进一步包含除本发明化合物以外的化学治疗剂。

在另一个方面中，本发明还提供用于筛选结合KSP驱动蛋白的化合物的方法，例如替换本发明化合物的结合或者与本发明的化合物的结合进行竞争的化合物。该方法包括混合本发明经标记的化合物、KSP驱动蛋白、以及至少一种候选药物，然后测定候选生物活性药物对KSP驱动蛋白的结合。

在又一个方面中，本发明提供用于筛选KSP驱动蛋白活性调节剂的方法。该方法包括混合本发明的化合物、KSP驱动蛋白、以及至少一种候选药物，然后测定候选生物活性药物对KSP驱动蛋白活性的作用。

具体实施方式

定义

当在本发明专利申请的说明书中使用时，以下词和短语通常具有如下所述的定义，除非另有说明。以下缩写及术语的含意如下所示：

Ac	乙酰基
Ac	乙酰基	Boc	t-丁氧基羰基
Bu	丁基	Boc	t-丁氧基羰基
Bu	丁基	c-	环
CBZ或Z	苄氧基羰基	c-	环
CBZ或Z	苄氧基羰基	DCM	二氯甲烷CH₂Cl₂
DIEA	N，N-二异丙基乙基胺	DCM	二氯甲烷CH₂Cl₂
DIEA	N，N-二异丙基乙基胺	DMF	N，N-二甲基甲酰胺
DMSO	二甲基亚砜	DMF	N，N-二甲基甲酰胺
DMSO	二甲基亚砜	Et	乙基
Fmoc	9-芴基甲氧基羰基	Et	乙基
Fmoc	9-芴基甲氧基羰基	GC	气相色谱
HMDS	六甲基二硅氮烷	GC	气相色谱
HMDS	六甲基二硅氮烷	HOAc	乙酸
HOBt	羟基苯并三唑	HOAc	乙酸
HOBt	羟基苯并三唑	Me	甲基
mesyl	甲磺酰基	Me	甲基
mesyl	甲磺酰基	Ph	苯基
PhOH	苯酚	Ph	苯基
PhOH	苯酚	Py	吡啶
rt	室温	Py	吡啶
rt	室温	Sat’d	饱和
s-	二级	Sat’d	饱和
s-	二级	t-	三级
TES	三乙基硅烷	t-	三级
TES	三乙基硅烷	TFA	三氟乙酸
THF	四氢呋喃	TFA	三氟乙酸
THF	四氢呋喃	TMS	三甲基甲硅烷基
tosyl	对甲苯磺酰基	TMS	三甲基甲硅烷基
tosyl	对甲苯磺酰基	Tf	三氟甲磺酸(triflate)

烷基包括线性、分枝或者环状脂族烃结构以及它们的组合。低级烷基是指具有1-5个碳原子的烷基，优选具有1-4个碳原子。低级烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基和叔丁基等。优选的烷基是C₂₀或者更低级的烷基。更优选的烷基是C₁₃或者更低级的烷基。环烷基是烷基的下位概念，并包括具有3-13个碳原子的环状脂族烃基。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、降冰片基、金刚烷基等。环烷基-烷基是烷基的另一个下位概念，并指通过非环状烷基连接在母体结构上的环烷基。环烷基-烷基的例子包括环己基甲基、环丙基甲基、环己基丙基等。在本发明中，烷基包括链烷基、链烯基和链炔基，其包括乙烯基、烯丙基、异戊二烯基等。当烷基具有具体数目的碳原子时，也包括具有相同数目碳原子的所有几何异构体；因此，例如“丁基”就包括正丁基、仲丁基、异丁基、和叔丁基；“丙基”包括正丙基、异丙基和环丙基。

亚烷基、亚烯基和亚炔基是烷基的另外的下位概念，包括与烷基相同但有两个连接点的基团。亚烷基的例子包括亚乙基(-CH₂CH₂-)、1，3-亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、二甲基-1，3-亚丙基(-CH₂C(CH₃)₂CH₂-)、以及环己基-1，3-亚丙基(-CH₂CH₂CH(C₆H₁₃)-)。同样，亚烯基的例子包括亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚丙烯基(-CH＝CH-CH₂-)、和环己基亚丙烯基(-CH＝CHCH(C₆H₁₃)-)。亚炔基的例子包括亚乙炔基(-C≡C-)和亚丙炔基(-CH≡CH-CH₂-)。

环烯基是烷基的下位概念，并包括具有3-13个碳原子的不饱和环状烃基。环烯基的例子包括环己烯基和环戊烯基等。

烷氧基是指通过氧原子连接在母体结构上并优选具有1-8个碳原子的直链、支链、或者环状构型以及它们的组合的烷基(即、烷基-O-基团)。其例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基、环己基氧基等。低级烷氧基是指包含1-4个碳原子的烷氧基基团。

酰基是指通过羰基官能团连接在母体结构上并具有1-8个碳原子的直链、支链、或者环状构型以及它们的组合的基团，可以是饱和或不饱和的、及脂族或芳香性的。酰基中的一个或者多个碳原子可被氮(如酰胺基)、氧或硫置换，只要与母体结构的连接点是羰基即可。其例子包括乙酰基、苯甲酰基、丙酰基、异丁酰基、草酰基、叔丁氧基羰基、苄基氧基羰基、吗啉基羰基等。低级酰基是指包含1-4个碳原子的酰基。

氨基指基团-NH₂。术语“取代氨基”是指基团-NHR或-NRR，其中每个R独立地选自于以下基团：任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、酰基、烷氧基羰基、硫烷基(sulfanyl-)、亚硫酰基和磺酰基，如二乙基氨基、甲磺酰基氨基、呋喃基氧基磺酰氨基。取代的氨基包括基团-NR^cCOR^b、-NR^cCO₂R^a和-NR^cCONR^bR^c，其中

R^a是任选取代的C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基-C_1-4烷基、或杂芳基-C_1-4基；

R^b是H或任选取代的C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基-C_1-4烷基、或杂芳基-C_1-4烷基；以及

R^c是氢或C_1-4烷基；而且

每个任选取代的R^b基团独立地是未取代的或者被一个或多个选自于以下组中的取代基取代：C_1-4烷基、芳基、杂芳基、芳基-C_1-4烷基、杂芳基-C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OC_1-4烷基、-OC_1-4烷基苯基、-C_1-4烷基-OH、-OC_1-4卤代烷基、卤素、-OH、-NH₂、-C_1-4烷基-NH₂、-N(C_1-4烷基)(C_1-4烷基)、-NH(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)(C_1-4烷基苯基)、-NH(C_1-4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳基的取代基)、-CO₂H、-C(O)OC_1-4烷基、-CON(C_1-4烷基)(C_1-4烷基)、-CONH(C_1-4烷基)、-CONH₂、-NHC(O)(C_1-4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C_1-4烷基)C(O)(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C_1-4烷基、-C(O)C_1-4苯基、-C(O)C_1-4卤代烷基、-OC(O)C_1-4烷基、-SO₂(C_1-4烷基)、-SO₂(苯基)、-SO₂(C_1-4卤代烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(C_1-4烷基)、-SO₂NH(苯基)、-NHSO₂(C_1-4烷基)、-NHSO₂(苯基)、和-NHSO₂(C_1-4卤代烷基)。

抗有丝分裂药是指用于例如通过使有丝分裂中期停止而抑制或者防止有丝分裂的药物。一些抗肿瘤药阻断增殖作用，并被认为是抗有丝分裂药。

芳基和杂芳基是指包含0或1-4个分别选自于O、N或S的杂原子的5-6元芳香环或者杂芳香环；包含0或1-4(或更多)个分别选自于O、N或S的杂原子的9-10元二环芳香环系或者杂芳香环系；或者包含0或1-4(或更多)个分别选自于O、N或S的12-14元三环芳香环系或者杂芳香环系。6-14元芳香碳环环系包括苯基、萘基、茚满基、1，2，3，4-四氢化萘基、以及芴基等。5-10元芳香杂环包括例如咪唑基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、苯并吡喃酮基、噻唑基、呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基和吡唑基。

芳烷基是指其中芳基通过烷基连接在母体结构上的基团。其例子包括苄基、苯乙基、苯基乙烯基、苯基烯丙基等。杂芳烷基是指其中杂芳基通过烷基连接在母体结构上的基团。其例子包括呋喃基甲基、吡啶基甲基、嘧啶基甲基等。

芳烷氧基指基团-O-芳烷基。类似地，杂芳烷氧基指基团-O-杂芳烷基；芳基氧基指基团-O-芳基；酰基氧基指基团-O-酰基；杂芳基氧基指基团-O-杂芳基；以及杂环基氧基指基团-O-杂环基(即、通过氧连接在母体结构上的芳烷基、杂芳烷基、芳基、酰基、杂环基或杂芳基)。

羧基烷基指基团-烷基-COOH。

氨基羰基指基团-CONR^bR^c，其中

R^c是氢或C_1-4烷基；而且

每个任选取代的R^b基团独立地是未取代的或者被一个或多个选自于以下组中的取代基取代：C_1-4烷基、芳基、杂芳基、芳基-C_1-4烷基、杂芳基-C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OC_1-4烷基、-OC_1-4烷基苯基、-C_1-4烷基-OH、-OC_1-4卤代烷基、卤素、-OH、-NH₂、-C_1-4烷基-NH₂、-N(C_1-4烷基)(C_1-4烷基)、-NH(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)(C_1-4烷基苯基)、-NH(C_1-4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳基的取代基)、-CO₂H、-C(O)OC_1-4烷基、-CON(C_1-4烷基)(C_1-4烷基)、-CONH(C_1-4烷基)、-CONH₂、-NHC(O)(C_1-4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C_1-4烷基)C(O)(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C_1-4烷基、-C(O)C_1-4苯基、-C(O)C_1-4卤代烷基、-OC(O)C_1-4烷基、-SO₂(C_1-4烷基)、-SO₂(苯基)、-SO₂(C_1-4卤代烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(C_1-4烷基)、-SO₂NH(苯基)、-NHSO₂(C_1-4烷基)、-NHSO₂(苯基)、和-NHSO₂(C_1-4卤代烷基)。氨基羰基包括氨甲酰基、低级烷基氨甲酰基、苄基氨甲酰基、苯基氨甲酰基、甲氧基甲基-氨甲酰基等。

卤素或卤代是指氟、氯、溴或碘。优选氟、氯和溴。二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被多个卤素(在此分别是2、2和3个)取代的芳基和烷基，但不一定是多个相同的卤素。因此，4-氯-3-氟苯基也在二卤代芳基的范围内。

杂环基是指其中1-4个碳原子被诸如氧、氮或硫的杂原子置换的环烷基或者芳基。本发明范围中包括的杂环的例子是咪唑啉、吡咯烷、吡唑、吡咯、吲哚、喹啉、异喹啉、四氢异喹啉、苯并呋喃、苯并二噁烷、苯并间二氧杂环戊烯(当作为取代基时，通常称为亚甲二氧基苯基)、四唑、吗啉、噻唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噻吩、呋喃、噁唑、噁唑啉、异噁唑、二噁烷、四氢呋喃等。“N-杂环基”是指包含氮原子的杂环取代基。术语杂环基包括杂芳基，其是杂环基的下位概念。N-杂环基的例子包括4-吗啉基、4-硫代吗啉基、1-哌啶基、1-吡咯烷基、3-噻唑烷基、哌嗪基、和4-(3，4-二氢苯并噁嗪基)。取代杂环基的例子包括4-甲基-1-哌嗪基和4-苄基-1-哌啶基。

离去基团或原子是指在反应条件下可从起始物断裂并由此促进在特定部位处的反应的任意基团和原子。除非另有说明，此等基团的合适例子是卤原子、甲磺酰氧基、对硝基苯磺酰基氧基和对甲苯磺酰基氧基。

任选(的)或任选地是指随后描述的事件或情况有可能发生也有可能不发生，而且该描述包括以下所述事件或情况的例子以及不发生的例子。例如，“任选取代的烷基”包括在此所定义的“烷基”和“取代的烷基”。对于任意包含一个或者多个取代基的基团，本领域技术人员应认识到，此等基团不意味着引入任何在立体结构上不可行的和/或在合成上不可行的和/或本质上不稳定的取代或者取代构型。

取代的烷氧基是指其中烷基部分是被取代的烷氧基(即、-O-(取代的烷基))。一种合适的取代烷氧基是“多烷氧基”或者-O-(任选取代的亚烷基)-(任选取代的烷氧基)，而且包括诸如-OCH₂CH₂OCH₃的基团，以及二醇醚的基团如聚乙二醇，和-O(CH₂CH₂O)_xCH₃，其中x是约2-20的整数，优选为约2-10，并更优选为约2-5。另一个合适的取代烷氧基是羟基烷氧基或-OCH₂(CH₂)_yOH，其中y是约1-10的整数，优选为约1-4。

取代的烷基、芳基和杂芳基分别是指其中一个或多个(最多为约5个，优选最多约3个)氢原子独立地被以下基团取代的烷基、芳基或杂芳基：-R^a、-OR^b、-O(C_1-2烷基)O-(如亚乙二氧基或亚甲二氧基)、-SR^b、胍、其中胍中的一个或者多个氢原子被低级烷基取代的胍、-NR^bR^c、卤素、氰基、硝基、-COR^b、-CO₂R^b、-CONR^bR^c、-OCOR^b、-OCO₂R^a、-OCONR^bR^c、-NR^cCOR^b、-NR^cCO₂R^a、-NR^cCONR^bR^c、-CO₂R^b、-CONR^bR^c、-NR^cCOR^b、-SOR^a、-SO₂R^a、-SO₂NR^bR^c和-NR^cSO₂R^a，其中

R^a是任选取代的C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基-C_1-4烷基、或杂芳基-C_1-4烷基；

R^c是氢或C_1-4烷基；而且

烷硫基是指基团-S-(任选取代的烷基)、-S-(任选取代的芳基)、-S-(任选取代的杂芳基)、和-S-(任选取代的杂环基)。

亚硫酰基是指基团-S(O)-H、-S(O)-(任选取代的烷基)、-S(O)-(任选取代的芳基)、-S(O)-(任选取代的杂芳基)、-S(O)-(任选取代的杂环基)和-S(O)-(任选取代的氨基)。

磺酰基是指基团-S(O₂)-H、-S(O₂)-(任选取代的烷基)、-S(O₂)-(任选取代的芳基)、-S(O₂)-(任选取代的杂芳基)、-S(O₂)-(任选取代的杂环基)、-S(O₂)-(任选取代的烷氧基)、-S(O₂)-(任选取代的芳氧基)、-S(O₂)-(任选取代的杂芳氧基)、-S(O₂)-(任选取代的杂环基氧基)和-S(O₂)-(任选取代的氨基)。

药物学上可接受的酸加成盐是指仍保留游离碱的生物有效性、对于药物应用不是生物学上不合适的、与合适的酸或碱形成的那些盐，并包括药物学上可接受的酸加成盐和碱加成盐。药物学上可接受的酸加成盐包括那些衍生于无机酸和有机酸的盐，所述无机酸例如是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，而有机酸例如是醋酸、丙酸、甘醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

药物学上可接受的碱加成盐包括那些包括衍生于无机碱的盐，例如是钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。特别优选的是铵、钾、钠、钙和镁盐。碱加成盐还包括那些衍生于药物学上可接受的有机非毒性碱的盐，包括伯胺、仲胺、叔胺、取代胺(包括天然取代的胺)、环状胺、以及碱性离子交换树脂的盐，这些有机碱例如是异丙基胺、三甲基胺、二乙基胺、三乙基胺、三丙基胺、和乙醇胺。

保护基具有有机合成中通常所述的定义，即、在多官能化合物中选择性地阻断一个或者多个反应性位置的基团，使得化学反应选择性地在另一个未保护的反应性位置进行，而且该基团在选择性反应完成之后能够容易地被脱除。例如，在以下文献中已公开了各种保护基：T.H.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Third Edition，John Wiley& Sons，New York(1999)。该文献的内容在此并入作为参考。例如，羟基的保护形式是化合物中存在的至少一个羟基用羟基保护基进行保护。同样，胺和其他反应性基团也可类似地进行保护。

溶剂合物是指通过溶剂与式(I)的化合物或其盐的相互作用而形成的化合物。式(I)化合物或其盐的合适溶剂合物是药物学上可接受的溶剂合物，包括水合物。

本发明的化合物大多数都包含一个或者多个不对称中心(如连接在R₂和R_2’上的碳原子)，而且由此可产生对映体、非对映异构体、以及可根据绝对立体化学定义的其他立体异构体形式，如(R)-或(S)-。本发明包括所有可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式以及中间体混合物。旋光性(R)-和(S)-异构体可通过使用手性合成子或者手性试剂来制备，或者通过使用常规技术来拆分。当本发明的化合物包含烯属双键或者其他几何非对称性中心时，除非另有说明，本发明的化合物应包括E和Z几何异构体。同样，所有的互变异构体也包括在本发明的范围内。

当需要时，R-和S-异构体可通过本领域技术人员已知的方法来拆分，例如形成可例如通过结晶分离的非对映异构体盐或者可络合物；形成可例如通过结晶、气-液或者液相色谱法分离的非对映异构体衍生物；一种对映体与对映体特异性试剂的选择性反应，例如酶氧化或者还原反应，然后分离改性或者未改性的对映体；在手性环境如在手性载体(如与手性配体结合的硅胶)上或者在手性溶剂存在下用气-液或者液相色谱法。可以理解的是，当通过如上所述的分离方法之一将所需要的对映体转化为其他化学物质时，有可能需要其他的步骤以释放所希望的对映体形式。或者，通过使用旋光试剂、底物、催化剂或者溶剂的非对称性合成，或者通过非对称转化将一种对映体转化为另一种对映体，可合成特异性对映体。

本发明的化合物

本发明涉及一类新的化合物，其可被描述为1，2，4-三唑-5-酮衍生物，而且是一种或多种有丝分裂驱动蛋白的抑制剂。通过抑制有丝分裂驱动蛋白，但不是其他的驱动蛋白(如转运驱动蛋白)，可以实现对细胞增殖的特异性抑制作用。虽然不希望囿于任何理论的限制，但本发明利用了以下发现：干扰有丝分裂驱动蛋白的功能可导致有丝分裂纺锤体的畸形或者功能障碍，通常导致细胞周期休止和细胞死亡。根据本发明的一个实施方案，在此描述的化合物一种有丝分裂驱动蛋白KSP，特别是人KSP。在另一个实施方案中，本发明的化合物抑制有丝分裂驱动蛋白KSP，并且调节一种或者多种选自于以下组中的人有丝分裂驱动蛋白：HSET(参见第6,361,993号美国专利，其内容在此并入作为参考)、MCAK(参见第6,331,424号美国专利，其内容在此并入作为参考)、CENP-E(参见PCT公开WO 99/13061，其内容在此并入作为参考)、Kif4(参见第6,440,684号美国专利，其内容在此并入作为参考)、MKLP1(参见第6,448,025号美国专利，其内容在此并入作为参考)、Kifl5(参见第6,355,466号美国专利，其内容在此并入作为参考)、Kid(参见第6,387,644号美国专利，其内容在此并入作为参考)、Mppl、CMKrp、KinI-3(参见第6,461,855号美国专利，其内容在此并入作为参考)、Kip3a(参见PCT公开WO01/96593，其内容在此并入作为参考)、Kip3d(参见第6,492,151号美国专利，其内容在此并入作为参考)、以及RabK6。

抑制有丝分裂驱动蛋白的方法包括使本发明的抑制剂与驱动蛋白、特别是人驱动蛋白接触，尤其是KSP或其片段和变体。该抑制作用可以是KSP驱动蛋白的ATP水解活性和/或有丝分裂纺锤体形成活性中的一个，使得有丝分裂纺锤体被破坏。减数分裂纺锤体也可被破坏。

本发明提供有丝分裂驱动蛋白、特别是KSP、尤其是人KSP的抑制剂，用于专利与细胞增殖有关的疾病。在此描述的化合物、组合物及方法的区别在于它们的选择性，而且可用于治疗细胞增殖的疾病，包括但不限于癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌疾病以及炎症。

因此，本发明涉及使用以下式I之化合物的方法，

其中：

T和T’独立地是共价键或者任选取代的低级亚烷基，

R₅选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、

任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基；

R₆选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、

任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、R₇O-和R₁₁-NH-；

R₁₁选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；以及包括单个立体异构体以及立体异构体的混合物；

式I化合物的药物学可接受的盐；

式I化合物的药物学可接受的溶剂合物；或者式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物。

在具体的实施方案中，R₂和R_2′处的立体中心是R构型的。

命名法

式I的化合物可按照以下描述的方式进行命名和编号(例如使用AutoNom version 2.1 in ISIS-DRAW或ChemDraw)。例如，化合物：

即、其中T和T’不存在、R₁是苄基、R₂是丙基(具体为异丙基)、R_2’为氢、R₃与R₅一起为任选取代的咪唑啉基、以及R₄是甲基的式I化合物，可被命名为4-苄基-2-甲基-5-[2-甲基-1-(2-对甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)-丙基]-2，4-二氢-[1，2，4]三唑-3-酮。

同样地，化合物：

即、其中T和T’不存在、R₁是苄基、R₂是丙基(具体为异丙基)、R_2’为氢、R₃为-COR₆、R₄是苯基、R₆是对甲苯基、而R₅是3-氨基丙基的式I化合物，可被命名为N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺。

合成反应参数

式I的化合物可通过如下参考以下反应路线的所述方法来制备。

除非另有说明，术语“溶剂”、“惰性有机溶剂”或者“惰性溶剂”都意味着在所描述的相关反应条件下为惰性的溶剂(包括例如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇等)。除非另有说明，在本发明反应中所用的溶剂都是惰性有机溶剂。

术语“q.s.”是指添加足以实现所述功能的量，例如使溶液达到所需要的体积(如100％)。

通常情况下，羧酸的酯可通过常规的酯化方法来制备，例如烷基酯可通过用合适的醇处理所需要的羧酸来制备，通常是在酸性条件下。同样，酰胺类化合物可通过使用常规的酰胺化方法来制备，例如酰胺类化合物可通过用合适的胺处理经活化的羧酸来制备。或者，任选在三甲基铝存在下，按照Tetrahedron Lett.48，4171-4173，(1977)中描述的方法，可用胺处理所述酸的低级烷基酯如甲基酯，以制得所需的酰胺。羧基可以烷基酯的形式进行保护，例如甲基酯，这些酯可使用常规方法来制备并脱除，一种将羰基甲氧基转化为羧基的方便方法是使用含水的氢氧化锂。

在此所述化合物的盐和溶剂合物可根据需要通过本领域中的常规方法来制备。例如，如果本发明的化合物是酸，则可通过用无机碱或有机碱处理游离酸制得所希望的碱加成盐，所述碱例如是胺(伯胺、仲胺或叔胺)；碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等。合适盐例如包括衍生于以下物质的有机盐：氨基酸，如甘氨酸和精氨酸，氨，伯胺、仲胺或叔胺，如乙二胺，以及环胺，如环己基胺、吗啉和哌嗪；以及衍生于钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

如果化合物是碱，则通过本领域已知的任意合适的方法可制备所希望的酸加成盐，包括用无机酸处理游离碱，如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或者用有机酸处理，如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷基酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳香酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等。

如果需要，本发明化合物和中间体的分离及纯制可按照任意合适的分离或纯制方法来实现，例如过滤、萃取、结晶、柱色谱、薄层色谱或厚层色谱法、或者这些方法的组合。合适的分离方法的具体说明可参考以下实施例。但是，当然也可以使用其他等效的分离法。

式I化合物的合成

式I的化合物可通过以下反应路线中描述的方法来制备。

反应路线的简要描述

反应路线1A和1B显示了其中R₃为-C(O)R₆的式I化合物的合成。在反应路线1A中，取代基R₁是在引入R₄取代基之前加入的；而反应路线1B显示了相反顺序的合成。

反应路线2显示了其中R₃为-SO₂R_6a的式I化合物的合成。

反应路线3显示了式I化合物的合成.

反应路线4显示了其中R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑基的式I化合物的合成。

反应路线5显示了其中R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑基的式I化合物的另外合成。

反应路线6显示了其中R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑啉基的式I化合物的合成。

反应路线7显示了其中R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑啉基的式I化合物的第二种合成。

反应路线8显示了其中R₃为-C(O)R₆而R₆为-OR₇的式I化合物的合成。

反应路线9显示了其中R₃为-C(O)R₆而R₆为-NHR₁₁的式I化合物的合成。

反应路线10显示了其中R₃与R₅以及它们所连接的氮一起形成任选取代的二氮杂环庚酮(diazepinone)的式I化合物的合成。

反应路线11显示了其中R₃与R₅以及它们所连接的氮一起形成任选取代的二氮杂环庚酮的式I化合物的合成。

反应路线12显示了其中R₃与R₅以及它们所连接的氮一起形成任选取代的哌嗪环的式I化合物的合成。

起始物

任选取代的式101化合物以及其他的反应物是可市售得到的，例如由Aldrich Chemical Company(Milwaukee，WI)得到，或者可由本领域技术人员用常规的合成方法容易地制得。

反应路线1A

式103化合物的制备

参考反应路线1A的步骤1，在0℃下向优选其中胺保护PG为CBZ的式101化合物在非极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加过量、优选约1.2当量的氯甲酸乙酯、以及过量、优选约1.2当量的叔胺碱如三乙胺或DIEA。反应混合物在惰性气氛如氮气下搅拌。约1小时后，在约5分钟的时间内添加过量、优选约1.2当量的其中R₁为如上所述基团的式R₁NH₂的伯胺。添加完成后，使反应溶液温热至室温。分离出产物--式103的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式105化合物的制备

参考反应路线1A的步骤2，向式103的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量、优选约1.7当量的Meerwein盐(如六氟磷酸三乙基氧鎓)。所得的混合物搅拌约14小时。分离出产物--式105的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式107化合物的制备

参考反应路线1A的步骤3，向式105的化合物在非极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加过量、优选约1.85当量的肼(优选为在THF中的1.0M肼溶液)。所得的化合物搅拌约4小时。分离出产物--式107的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式109化合物的制备

参考反应路线1A的步骤4，向式107的化合物在非极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加约0.9当量的1，1′-羰基二咪唑。所得的溶液搅拌约14小时。分离产物--式109的化合物，并优选通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。

式111化合物的制备

参考反应路线1A的步骤5，向式109的化合物在极性、非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加过量、优选约1.8当量的式R₄-X的化合物，其中R₄如上所定义，而X为碘或溴，以及过量、优选约1.6当量的碱如碳酸钾。所得的化合物搅拌约18小时。分离产物--式111的化合物，并优选通过RP-HPLC进行纯制，其中使用乙腈和水的混合物作为洗脱剂。

式113化合物的制备

参考反应路线1A的步骤6，在10％Pd/C存在下使式111的化合物在极性、质子性溶剂如甲醇中的溶液在H₂气流(约30 psi)下搅拌约1小时。在PTFE(0.45um)过滤器中过滤，由此除去催化剂。分离出产物--式113的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式115化合物的制备

参考反应路线1A的步骤7，在0℃下向式113的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内顺序地添加过量、优选约1.2当量的含R₅的醛(即、式R_5’CHO的化合物，其中R_5’等于R₅，而R₅如上所定义，或者是此等取代基的保护前体，如(3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯)、以及过量、优选约1.2当量的还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠。所得的混合物在惰性气氛下搅拌约3小时。另外，优选添加约0.5当量的式114醛和约0.4当量的三乙酰氧基硼氢化钠。继续搅拌约2小时。分离出产物--式115的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式117化合物的制备

参考反应路线1A的步骤8，向式115的化合物以及碱如N，N-二异丙基乙基胺在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量、优选约1.2当量的式R₆COCl的酰氯，其中R₆如上所定义。分离产物--式117的化合物，并优选通过RP-HPLC进行纯制，其中使用乙腈和水的混合物作为洗脱剂。

任选地，接着脱除式117化合物上的任意保护基。例如，如果R₅包括经保护的胺，其中保护基是Boc基团，则该Boc基团可通过用酸如三氟乙酸在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中处理式117的化合物、同时使反应保持在约室温下而被脱除。反应例如通过TLC进行监测。完成时，分离并纯制产物。

在本发明的某些化合物中，特殊的立体构型对于R₂取代基是优选的，例如可得到的(R)异构体。将游离胺溶解在惰性有机溶剂(如IPA)中，然后温热至60℃。在单独的容器中，溶解拆分剂(如二苯甲酰基-D-酒石酸)，优选在相同的温热溶剂中，然后快速添加至(在搅拌下)温热的胺溶液中。在连续搅拌下在16小时的时间内冷却至室温，由此使反应混合物放置结晶。按照常规的方法分离并纯制所希望的异构体如(R)异构体。

为简明起见，在以下的式I化合物的合成描述中，应理解的是，单个异构体或者这些异构体的混合物都可使用，以产生相应的产物。

反应路线1B

式化合物的制备102

参考反应路线1B的步骤1，在约0℃下向式101的化合物、优选其中胺保护基PG是CBZ的化合物在非极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加过量、优选约1.1当量的氯甲酸乙酯、以及过量、优选约1.2当量的叔胺碱如三乙胺或DIEA。反应混合物在惰性气氛如氮气中搅拌。约1小时后，在约5分钟的时间内添加过量、优选约1.2当量的氨。添加完成后，使反应溶液温热至室温。分离出产物--式102的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式104化合物的制备

参考反应路线1B的步骤2，向式102的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的悬浮液内添加过量、优选约1.7当量的Meerwein盐(如六氟磷酸三乙基氧鎓)。所得的混合物搅拌约14小时。分离出产物--式104的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式106化合物的制备

参考反应路线1B的步骤3，向式104的化合物在非极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加过量的式R₄NHNH₂的肼。所得的混合物搅拌约14小时。分离出产物--式106的化合物，并且无需进一步纯制即可使用。

式108化合物的制备

参考反应路线1B的步骤4，向式106的化合物在方极性、非质子性溶剂如THF中的溶液内添加过量、优选约2当量的1，1′-羰基二咪唑(CDI)。所得的溶液搅拌约14-48小时。优选通过快速柱色谱，使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，分离并纯制产物--式108的化合物。

式111化合物的制备

参考反应路线1B的步骤5，向式108的化合物在极性、非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加过量、优选约1.8当量的式R₁-X的化合物，其中R₁如上所定义，而X是离去基团如氯、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、甲磺酸根、碘或溴，以及过量、优选约2当量的碱如碳酸钾。所得的化合物搅拌14-18小时。优选在RP-HPLC上使用乙腈和水的混合物作为洗脱剂，分离并纯制产物--式111的化合物。

反应路线2

参考反应路线2，向式115的化合物以及胺碱如二异丙基乙基胺在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加式Cl-S(O)₂-R_6a或O-(S(O)₂-R_6a)₂的化合物，其中R_6a如上所定义。在氮气和室温下搅拌所得的溶液数小时。分离并纯制产物--式203的化合物。

反应路线3

参考反应路线3，向式115的化合物以及胺碱如二异丙基乙基胺在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加式X-R₃的化合物，其中X是离去基团如甲苯磺酸根、甲磺酸根、Br或Cl。所得的溶液在氮气氛和室温下或者在加热下搅拌数小时。分离并纯制产物--式303的化合物。

反应路线4

式403的制备

参考反应路线4的步骤1，在碱(如碳酸钾)存在下，向任选取代的式113化合物在极性、非质子性溶剂(如DMF)中的溶液内添加1当量任选取代并经适当保护的醛，其中该醛进一步包含离去基团、优选为卤化物。在回流下加热溶液，并检测反应的完成(例如通过TLC)。冷却反应混合物，分离并纯制相应的任选取代的式403化合物。

式405的制备

参考反应路线4的步骤2，在约1.5摩尔当量的胺碱(如三乙胺)存在下，向任选取代的式403化合物在惰性溶剂(如二氯甲烷)中的溶液内添加约1.5摩尔当量的R₉酰氯，如Cl-C(O)-R₉，其中R₉如本说明书中所定义。反应在室温下进行4-24小时，同时进行搅拌。例如通过TLC检测反应的完成。分离并纯制相应的式405化合物。

式407的制备

参考反应路线4的步骤3，式405的化合物以及过量的乙酸铵在乙酸中的溶液加热回流1-4小时。例如通过TLC检测反应的完成。分离并纯制相应的式407化合物。

反应路线5

式503的制备

参考反应路线5的步骤1，在室温下搅拌式113的化合物、式R_13’(CO)CH₂X(其中X为卤化物，而R_13’如本说明书中所定义)的α-卤代酮试剂、以及约1当量的碱如碳酸钾在极性、非质子性溶剂如DMF中的溶液。反应溶液用水稀释，所得的固体--式503的化合物未经进一步纯制即用于随后的步骤中。

式505的制备

参考反应路线5的步骤2，式503的化合物、约1当量的胺碱如三乙胺、以及约1当量的酰氯(如式Cl-C(O)-R₉的化合物)在有机溶剂如二氯甲烷中的溶液于室温下搅拌数小时。例如通过TLC检测反应的完成。分离并纯制相应的式505化合物。

式507的制备

参考反应路线5的步骤3，使用Dean-Stark阱和冷凝器，使式505的化合物以及过量的乙酸铵在乙酸中的溶液加热回流。例如通过TLC检测反应的完成。分离并纯制相应的式507化合物。

当R_13’包括保护基苯邻二甲酰亚胺时，该保护基如下脱除。加热回流式507的化合物以及过量的无水肼在极性、质子性溶剂如乙醇中的溶液。将反应溶液冷却至约5℃，然后过滤出任何沉淀物。滤液真空浓缩并纯制，形成脱保护的胺。本领域技术人员将认识到，也可采用其他条件来脱除其他的保护基。

反应路线6

式603的制备

参考反应路线6的步骤1，用任选取代的含醛的氨基甲酸酯对式113的胺极性还原胺化，形成氨基甲酸酯中间体。脱除Boc保护基，得到式605的胺。

更具体而言，向式113的化合物以及1当量经适当保护的醛(Seki等人，Chem.Pharm.Bull.1996，44，2061)在二氯甲烷中的溶液内添加略微过量的还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠。所得的浑浊混合物保持在室温下。例如通过TLC监测反应的完成。分离相应的式603的化合物，且未经纯制即用于随后的步骤中。

式605的制备

参考反应路线6的步骤2，向式603的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加强酸如三氟乙酸。所得的溶液在室温下保持过夜，然后减压浓缩。分离残留物，得到式605的化合物，其未经纯制即用于随后的步骤中。

式607的制备

参考反应路线6的步骤3，向式605在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量、优选约2当量的胺碱如三乙胺，然后添加约1当量或略微过量的式R₉COCl的酰氯。所得的溶液在室温下搅拌约3小时。例如通过TLC监测反应的完成。分离并纯制相应的式607化合物。

式609的制备

参考反应路线6的步骤4，加热回流式607的化合物在过量的磷酰氯中的溶液。8小时后，使反应混合物冷却至室温，然后减压浓缩。分离并纯制相应的式609化合物。

反应路线7

式的制备609

作为反应路线6之步骤3和4的替代方案，可对式605的伯胺进行酰化，然后通过乙酸进行环化，其中不分离中间体酰胺，以形成式609的目标化合物。该路线示于反应路线7中。

更具体而言，向式605的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量、优选约2当量的胺碱如三乙胺，然后添加约1当量的式R₉COCl的酰氯。所得的溶液在室温下搅拌2小时，然后减压蒸发。所得的固体用冰乙酸处理，并对所得的悬浮液加热回流约48小时。将反应溶液冷却至室温，然后减压蒸发。分离并纯制相应的式609的化合物。

反应路线8

参考反应路线8，在碱如三乙胺存在下，使式115的化合物与略微过量的式R₇O(CO)Cl的化合物在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中反应。

分离并纯制产物--式803的化合物。

反应路线9

参考反应路线9，在碱如三乙胺存在下，使式115的化合物与略微过量的异氰酸酯R₁₁-N＝C＝O在非极性、非质子性溶剂如二氯甲烷中反应。分离并纯制产物--式903的化合物。

反应路线10

参考反应路线10，用(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁基酯对式113化合物中的伯氨基进行还原胺化，得到相应的仲胺。用丙烯酰氯进行酰化，然后脱除叔酰胺的保护，接着用碱进行环化，得到所希望的二氮杂环庚酮化合物。如果需要，在本领域技术人员已知的条件下可完成基础胺的其他功能化。

反应路线11

参考反应路线11，用(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁基酯对式113化合物中的伯氨基进行还原胺化，得到相应的仲胺。用氯代新戊酰氯进行酰化，然后脱除叔酰胺的保护，接着用碱进行环化，得到所希望的二氮杂环庚酮化合物。如果需要，在本领域技术人员已知的条件下可完成基础胺的其他功能化。

反应路线12

参考反应路线12，使式1201的化合物、1.5摩尔当量的任选取代的哌嗪或diazepam(如上所示，其中R₃₂如本发明中所定义)、以及过量的碳酸钾在有机溶剂(如乙腈)中混合。反应在氮气氛和升高的温度(如100℃)下进行8小时，然后在略微降低的温度(如60℃)下进行5天。

分离并纯制产物--式1203的化合物

任选地，如果R₃₂是胺保护基如Boc，其可例如通过用TFA/水的95/5混合物处理、然后在室温下搅拌1小时来脱除。分离并纯制其中其中R₃₂为氢的式1203化合物。如果需要，在本领域技术人员已知的条件下可完成基础胺的其他功能化。

具体的方法和最后的步骤

式I的化合物任选与药物学上可接受的酸或碱接触，形成相应的酸或碱加成盐。

式I化合物之药物学上可接受的酸加成盐任选与碱接触，形成相应的式I游离碱。

式I化合物之药物学上可接受的碱加成盐任选与酸接触，形成相应的式I游离酸。

本发明化合物的具体实施方案

T和T′

在考虑式I的化合物时，T是任选取代的亚烷基或者不存在；以及T′是任选取代的亚烷基或者不存在。在一个实施方案中，T和T′之一不存在，而另一个是任选取代的亚烷基(特别是任选取代的亚甲基)。在另一个实施方案中，两者都不存在。

R₁

在考虑式I的化合物时，在具体的实施方案中，R₁选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳烷基、以及任选取代的杂芳烷基。在一个具体的实施方案中，当R₄是任选取代的苯基时，R₁不是任选取代的苯基。

在一个更为具体的实施方案中，R₁选自于氢、任选取代的低级烷基、任选取代的苄基、任选取代的萘甲基、以及任选取代的苯基.

在一个最具体的实施方案中，R₁选自于氢、乙基、丙基、甲氧基乙基、萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、羟基苄基、四氢呋喃基甲基、二氯苄基、呋喃基甲基、二甲氧基苄基、萘基甲基、以及(乙氧基羰基)乙基。在更为具体的实施方案中，R₁选自于氢、乙基、丙基、甲氧基乙基、萘基、苯乙基、苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、羟基苄基、四氢呋喃基甲基、二氯苄基、呋喃基甲基、二甲氧基苄基、萘基甲基、和(乙氧基羰基)乙基。

最具体地，R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、或羟基苄基。最优选的，R₁是苄基。

R₂

在考虑式I的化合物时，而且本领域技术人员可以认识到，在此描述的化合物在R₂和R_2’所连接的碳原子处具有潜在的手性中心。R₂和R_2’基团可以相同或不同的；如果不同，化合物则是手性的(即具有立体中心)。如果R₂和R_2’是不同的，在具体的实施方案中，R_2’是氢，而R₂不是氢。本发明包括纯对映体的应用以及对映体混合物(包括外消旋混合物)的应用，但通常优选使用基本上光学纯的对映体。术语“基本上光学纯的”或者“对映体纯的”是指具有至少约95％的所述对映体，而单个杂质不超过约1％，尤其是至少约97.5％的对映体过量。在一个具体的实施方案中，R₂和R_2’所连接的立体中心为R构型的。

在一个实施方案中，R₂是任选取代的C₁-C₄烷基，而R_2’是氢或任选取代的C₁-C₄烷基。更具体而言，R_2’是氢，而R₂是任选取代的C₁-C₄烷基。在一个最为具体的实施方案中，在一个最具体的实施方案中，R₂选自于甲基、乙基、丙基(特别是c-丙基或i-丙基)、丁基(特别是t-丁基)、甲硫基乙基、甲硫基甲基、氨基丁基、(CBZ)氨基丁基、环己基甲基、苄氧基甲基、甲基亚硫酰基乙基、甲基亚硫酰基甲基、和羟基甲基，而R_2’为氢。特别优选的是，其中R_2’为氢，而R₂是乙基或丙基(特别是c-丙基或i-丙基)。更特别地，R₂是i-丙基。更优选的实施方案是，其中R₂和R_2’所连接的立体中心为R构型的。

在另一个实施方案中，R₂和R_2’都是氢。

R₂与R₅一起

在另一个实施方案中，R₂与R₅一起形成5-12元环，其在杂环中任选插有1-2个额外的选自N、O和S的杂原子，并且可任选被一个或者多个以下基团取代：羟基、卤素(特别是氯和氟)、任选取代的C₁-C₄烷基-(特别是甲基-)、C₁-C₄烷氧基(特别是甲氧基)、氰基、氨基、取代的氨基、氧代或氨甲酰基。

在一个具体的实施方案中，R₂与R₅一起形成下式之任选取代的环：

其中R₄₁和R_41’独立地选自于氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、取代烷基、取代芳基、取代芳烷基和取代杂芳基；m是0、1、2或3；而T、T′、R₄和R₂如上所定义。在一个更为具体的实施方案中，R₄₁是氢。在另一个具体的实施方案中，R₄₁和R_41’都是氢。在另一个实施方案中，R₄是任选取代的芳烷基(特别是苄基)或任选取代的酰基(特别是p-甲基-苯甲酰基)。参见例如USSN 60/414,756，其内容在此并入作为参考。

在另一个实施方案中，R₂与R₅一起形成下式之任选取代的环：

其中R₃、R₂、T和T’如上所定义；R₅₁和R_51’独立地选自于氢、烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、取代烷基、取代芳基、取代芳烷基和取代杂芳基；U是共价键、CR′R"或NR_；R′和R″独立地选自于氢、羟基、氨基、任选取代的芳基、任选取代的烷基氨基、任选取代的烷基和任选取代的烷氧基；而R_选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂芳烷基，条件是：U和T′不都是共价键。

在一个具体的实施方案中，R₅₁是氢或任选取代的低级烷基；更特别地，R₅₁是氢。在另一个实施方案中，R₅₁是氢或任选取代的低级烷基；更特别地，R₅₁是氢。

在一个实施方案中，R₃是任选取代的芳基或任选取代的芳烷基；更特别地，R₃是任选取代的苯基、苄基或甲基-苄基(尤其为苄基或甲基-苄基)。

在一个实施方案中，U是CR′R″，其中R′和/或R″是氢。在另一个实施方案中，U是NR_，其中R_是氢或任选取代的烷基。更特别地，R_是氢或任选取代的氨基-低级烷基。参见例如USSN 60/398,224，其内容在此并入作为参考。

R₄

在考虑式I的化合物时，在一个具体的实施方案中，R₄是氢、任选取代的烷基(特别是甲基、乙基或丙基)、任选取代的芳烷基(尤其是苄基)、任选取代的芳基(特别是苯基、任选取代的苯基)、氨甲酰基、杂芳基(特别是吡啶基)或任选取代的杂环基(特别是吗啉基或哌嗪基)。

更特别地，R₄为甲基、乙基、丙基、苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-、二卤代苯基-、吡啶基、或苄基。在一个最具体的实施方案中，R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-、或二卤代苯基-。

R₆基团，当R₃是-C(O)R₆

在考虑其中R₃为-C(O)R₆的式I化合物时，在具体的实施方案中，R₆选自于任选取代的C₁-C₈烷基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基-、任选取代的杂芳基-C₁-C₄-烷基-、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、R₇O-和R₁₁-NH-，R₇选自于任选取代的C₁-C₈烷基和任选取代的芳基，而R₁₁选自于氢、任选取代的C₁-C₈烷基和任选取代的芳基。

具体的R₆选自于任选取代的C₁-C₈烷基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基-、任选取代的杂芳基-C₁-C₄-烷基-、任选取代的杂芳基和任选取代的芳基。在更具体的实施方案中，R₆选自于：

苯基；

被一个或者多个以下基团取代的苯基：卤素，C₁-C₄烷基，被羟基取代的C₁-C₄烷基(如羟甲基)，C₁-C₄烷氧基，被C₁-C₄烷氧基、卤素、硝基、甲酰基、羧基、氰基、亚甲二氧基、亚乙二氧基、酰基(如乙酰基)、-N-酰基(如N-乙酰基)或三氟甲基取代的C₁-C₄烷基；

苄基；

苯氧基甲基-；

卤代苯氧基甲基-；

苯基乙烯基-；

杂芳基-；

被C₁-C₄烷基或被卤素取代的C₁-C₄烷基(如CF₃)取代的杂芳基；

被C₁-C₄烷氧基取代的C₁-C₄烷基；以及

苄氧基甲基-。

在一个最具体的实施方案中，当R₆不是R₁₁NH-或R₇O-时，R₆选自于苯基、卤代苯基、二卤代苯基、氰基苯基、卤代(三氟甲基)苯基、羟基甲基苯基、甲氧基甲基苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、羧基苯基、甲酰基苯基、乙基苯基、甲苯基、亚甲二氧基苯基、亚乙二氧基苯基、甲氧基氯苯基、二氢苯并二噁烯基(benzodioxinyl)、甲基卤代苯基、三氟甲基苯基、呋喃基、C₁-C₄烷基取代的呋喃基、三氟甲基呋喃基、C₁-C₄烷基取代的三氟甲基呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、C₁-C₄烷基取代的噻吩基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、吡啶基、吲哚基、甲基吡啶基、三氟甲基吡啶基、吡咯基、喹啉基、皮考啉基、吡唑基、C₁-C₄烷基取代的吡唑基、N-甲基吡唑基、C₁-C₄烷基取代的N-甲基吡唑基、C₁-C₄烷基取代的吡嗪基、C₁-C₄烷基取代的异噁唑基、苯并异噁唑基、吗啉代甲基、甲硫基甲基、甲氧基甲基、N-甲基咪唑基以及咪唑基。更特别地，R₆是任选取代的苯基(特别是甲苯基、卤代苯基、甲基卤代苯基、羟基甲基苯基、卤代(三氟甲基)苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基或氰基苯基)。

在更具体的实施方案中，当R₆为R₁₁NH-时，R₁₁选自于氢、C₁-C₄烷基；环己基；苯基；以及被卤素、三氟甲基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基或C₁-C₄烷硫基取代的苯基。

在一个最具体的实施方案中，当R₆为R₁₁NH-时，R₁₁是氢、异丙基、丁基、环己基、苯基、溴苯基、二氯苯基、甲氧基苯基、乙基苯基、甲苯基、三氟甲基苯基或甲硫基苯基。

在一个实施方案中，其中R₆是R₇O-，R₇选自于任选取代的C₁-C₈烷基和任选取代的芳基。

R_6a基团，当R₃是-SO₂R_6a

在一个实施方案中，当R₃为-SO₂R_6a时，R_6a选自于C₁-C₁₃烷基，苯基，萘基，被卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基，联苯基和杂芳基。更特别地，R_6a选自于被卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基，以及萘基。

R₃与R₅一起

在考虑式I的化合物时，在一个实施方案中，R₃与R₅以及它们所连接的氮原子一起形成任选取代的5-12元含氮杂环，其在杂环中任选地含有1-2个额外的选自于N、O和S的杂原子。

在一个具体的实施方案中，R₃与R₅以及它们所连接的氮原子一起形成以下式的任选取代的咪唑基环：

其中

R₉选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的芳烷氧基、任选取代的杂芳烷氧基和任选取代的杂芳基；以及

R₁₃和R_13’独立地是氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的芳烷基。

更特别地，当R₃与R₅以及它们所连接的氮原子一起形成任选取代的咪唑啉基环，R₉是芳基(尤其是苯基)、取代的芳基(尤其是低级烷基-、低级烷氧基-和/或卤素取代的苯基)、芳烷基(尤其是苄基和苯基乙烯基)、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳烷基、芳烷氧基(尤其是苯氧基低级烷基)、杂芳烷氧基、取代的芳烷基(尤其是取代的苄基和取代的苯乙烯基)、取代的苯乙烯基)、取代的杂芳烷基、取代的芳烷氧基(尤其是取代的苯氧基低级烷基)或取代的杂芳烷氧基。参见例如PCT/US03/14787，其内容在此并入作为参考。

在另一个具体的实施方案中，当R₃与R₅一起形成以下式的任选取代的咪唑啉基环：

其中

R₉选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的芳烷氧基或任选取代的杂芳烷氧基；以及

R₁₀、R_10’、R₁₄和R_14’独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的芳烷基。

当R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑啉基环，在一个具体的实施方案中，R₉是芳基(尤其是苯基)、取代的芳基(尤其是低级烷基-、低级烷氧基-和/或卤素取代的苯基)、芳烷基(尤其是苄基和苯基乙烯基)、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳烷基、芳烷氧基(尤其是苯氧基低级烷基)、杂芳烷氧基、取代的芳烷基(尤其是取代的苄基和取代的苯乙烯基)、取代的杂芳烷基、取代的芳烷氧基(尤其是取代的苯氧基低级烷基)或取代的杂芳烷氧基。

当R₃与R₅一起形成任选取代的咪唑啉基环时更特别地，R₁₀是氢或任选取代的低级烷基，而R_10’是氢或任选取代的低级烷基。

在另一个实施方案中，R₃与R₅一起形成以下式的任选取代的二氮杂环庚酮：

其中A和B独立地选自于C(R₂₀)(R₂₁)、N(R₂₂)、O或S，其中R₂₀和R₂₁分别独立地选自于H、任选取代的烷基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；而R₂₂是H、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的杂芳基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的杂芳烷基羰基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的芳氧基羰基、任选取代的杂芳氧基羰基、任选取代的芳烷氧基羰基、任选取代的杂芳烷氧基羰基。在更具体的实施方案中，该二氮杂环庚酮环进一步被1个或者多个以下基团取代：任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂芳烷基。

在式I化合物的另一个实施方案中，A或B之一是C(R₂₀)(R₂₁)，其中R₂₀和R₂₁分别独立地选自于H或C₁-C₄烷基，A或B中的另一个为N(R₂₂)，其中R₂₂是H、C₁-C₄烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、C₁-C₆烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的杂芳基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的杂芳烷基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、任选取代的芳氧基羰基、任选取代的杂芳氧基羰基、任选取代的芳烷氧基羰基、任选取代的杂芳烷氧基羰基，其中所述任选取代的芳基或杂芳基基团或者部分是未被取代的或被一个或多个选自于以下组中的基团取代：C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄卤代烷氧基、氨基、C₁-C₄烷基氨基、二C₁-C₄烷基氨基、羧基、C₁-C₄烷基羰基氧基、C₁-C₄烷氧基羰基、酰胺基(carboxamido)、C₁-C₄烷基酰胺基、氨基羰基、C₁-C₄烷基氨基羰基、二C₁-C₄烷基氨基羰基、氰基、C₁-C₄烷基羰基、卤素、羟基、巯基和硝基。在另一个实施方案中，A是C(R₂₀)(R₂₁)，其中R₂₀和R₂₁分别是H或C₁-C₄烷基，而B是N(R₂₂)，其中R₂₂是H、C₁-C₄烷基、芳烷基、杂芳烷基、C₁-C₆烷基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基。在式I化合物的具体实施方案中，A是CH₂，而B是N(R₂₂)，其中R₂₂是H、甲基、苄基或乙酰基(-C(O)甲基)。例如参见USSN 60/435,001，其内容在此并入作为参考。

在另一个实施方案中，R₃与R₅一起形成以下式的任选取代的哌嗪或二氮杂环庚酮：

其中：R₃₁和R₃₂独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳烷基和任选取代的杂芳烷基；以及n为1或2。更特别地，R₃₁是芳基(尤其是苯基)、取代的芳基(尤其是低级烷基-、低级烷氧基-和/或卤素取代的苯基)、芳烷基(尤其是苄基和苯基乙烯基)、杂芳烷基、取代的芳烷基(尤其是取代的苄基和取代的苯基乙烯基)或取代的杂芳烷基；R₃₂是氢；以及n是1。例如参见USSN60/404,864，其内容在此并入作为参考。

R₃

在另一个实施方案中，R₃选自于任选取代的C₁-C₁₃烷基(尤其是取代的C₁-C₄烷基)、任选取代的芳烷基(尤其是任选取代的苄基或萘甲基-)、以及选取代的杂芳烷基。更特别地，R₃是苄基或被一个或者多个以下基团取代的苄基：羧基、烷氧基羰基、氰基、卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基。

R₅

在一个实施方案中，R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基和任选取代的杂芳烷基。

在更具体的实施方案中，R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基。

在一个最具体的实施方案中，R₅选自于甲基、乙基、丙基、丁基、环己基、羧基乙基、羧基甲基、甲氧基乙基、羟基乙基、羟基丙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、氨基丙基、甲基氨基丙基、2、2-二甲基-3-(二甲基氨基)丙基、1-环己基-4-(二乙基氨基)丁基、氨基乙基、氨基丁基、氨基戊基、氨基己基、氨基乙氧基乙基、异丙基氨基丙基、二异丙基氨基乙基、1-甲基-4-(二乙基氨基)丁基、(t-Boc)氨基丙基、羟基苯基、苄基、甲氧基苯基、甲基甲氧基苯基、二甲基苯基、甲苯基、乙基苯基、(氧代吡咯烷基)丙基、(甲氧基羰基)乙基、吡啶基乙基、吡啶基甲基、吗啉基乙基、吗啉基丙基、氮杂环丁烷基甲基、氮杂环丁烷基乙基、氮杂环丁烷基丙基、吡咯烷基乙基、吡咯烷基丙基、吡咯烷基甲基、哌啶基乙基、咪唑基丙基、咪唑基乙基、(乙基吡咯烷基)甲基、(甲基吡咯烷基)乙基、(甲基吡咯烷基)丙基、(甲基哌嗪基)丙基、呋喃基甲基和吲哚基乙基。

更特别地，R₅是氨基丙基、吡咯烷基甲基或哌啶基甲基。

盐形式

本发明的化合物通常能够形成酸加成盐(即、包括与药物学可接受的酸反应以形成酸加成盐的部位)。本发明包括式I化合物之药物学上可接受的酸加成盐。本发明化合物的酸加成盐是通过常规方法在合适的溶剂中由母体化合物与过量的酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸制得的。

式I化合物之非药物学上可接受的盐和/或溶剂合物可用作制备式I化合物之药物学上可接受的盐和/或溶剂合物或者式I化合物本身的中间体，而且这也是本发明的一个方面。

式I化合物的具体下属

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；R₃是氢；以及R₅是氢。

在式I化合物的另一个具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₃是-C(O)R₆；R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基；以及R₆是甲苯基、卤代苯基、甲基卤代苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基、卤代(三氟甲基)苯基-或氰基苯基。

在式I化合物的另一个具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；R₃是-C(O)R_6a；R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基；以及R_6a选自于被卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基，以及萘基。

在式I化合物的另一个具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；R₃是任选取代的C₁-C₁₃烷基、任选取代的芳烷基或任选取代的杂芳烷基；以及R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基。

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₅与R₃一起是任选取代的咪唑啉基。

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₅与R₃一起是任选取代的咪唑基。

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₅与R₃一起是任选取代的咪唑烷基环。

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₅与R₃一起是任选取代的哌嗪基环。

在式I化合物的具体下属中，T和T′不存在；R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；R_2’是氢；R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及R₅与R₃一起是任选取代的二氮杂环庚酮基(diazepinoyl)环。

本发明的具体化合物包括：

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-1-甲基-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1，4-二苄基-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-吡啶-2-基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-1-乙基-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-氯-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-5-氧代-1-(2-氧代-丙基)-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-1-异丙基-5-氧代-4，5-二氢-IH-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(2-氯-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-氯-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-丙基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-m-甲苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-m-甲苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-{4-苄基-1-(3-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基}-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-氰基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-5-氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲氧基-苯甲酰胺；

苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(4-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-p-甲苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-p-甲苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-[4-苄基-1-(3-氰基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基]-2-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-三氟甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(2-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-(3-氟-苯基)-4-(3-甲氧基-苄基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-2-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[1-(3-氟-苯基)-4-(3-甲氧基-苄基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-(3-氟-苯基)-4-(3-甲氧基-苄基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-羟基甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-2-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-氟-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-三氟甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-羟基甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-4-氟-N-{1-[1-(3-氟-苯基)-4-(3-甲氧基-苄基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-3-氟-N-{1-[1-(3-氟-苯基)-4-(3-甲氧基-苄基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-三氟甲基-苯甲酰胺；

N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-2-甲基-N-吡咯烷-2-基甲基-苯甲酰胺；

N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-N-吡咯烷-2-基甲基-苯甲酰胺；

N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-2-甲基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺；

N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺；

5-(1-氨基-2-甲基-丙基)-4-苄基-2-(2-氯-苯基)-2，4-二氢-[1，2，4]三唑-3-酮；

5-(1-氨基-2-甲基-丙基)-4-苄基-2-苯基-2，4-二氢-[1，2，4]三唑-3-酮；

N-(2-氨基乙基)-N-{1-[1-(3，5-二氟苯基)-5-氧代-4-(苯基甲基)-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-3-基]-2-甲基丙基}-2-甲基苯甲酰胺；

N-(3-氨基丙基)-N-{1-[1-(3，5-二氟苯基)-5-氧代-4-(苯基甲基)-4，5-二氢-1H-1，2，4-三唑-3-基]-2-甲基丙基}-4-(羟基甲基)苯甲酰胺；以及

5-甲基-异噁唑-3-甲酸(3-氨基-丙基)-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-酰胺。

更特别地，本发明提供以下化合物：

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基)-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N[1-(4-苄基-5-氧代-1-m-甲苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-1-[4-苄基-1-(4-甲氧基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[4-苄基-1-(3-氰基-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-2-甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-[1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基]-3-氟-4-三氟甲基-苯甲酰胺；

N-(3-氨基-丙基)-N-1-[4-(3-氰基-苄基)-1-(3-氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基]-4-羟基甲基-苯甲酰胺；

N-{1-[4-苄基-1-(3，5-二氟-苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-丙基}-3-氟-4-甲基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺；以及

5-(1-氨基-2-甲基-丙基)-4-苄基-2-(2-氯-苯基)-2，4-二氢-[1，2，4]三唑-3-酮。

应用、测试和给药

应用

制备后，本发明的化合物可用于各种应用中。本领域技术人员可以理解的是，有丝分裂可通过多种方法来改变；也就是说，可通过增加或者降低有丝分裂途径中的组分的活性来改变。不同的是，有丝分裂可通过抑制或者活化某些组分干扰其平衡来影响(如被破坏)。类似的方法也可用于改变减数分裂。

在优选的实施方案中，本发明的化合物用于抑制有丝分裂纺锤体的形成，由此导致延长有丝分裂中细胞周期休止。在此所用术语“抑制”是指降低或者干扰有丝分裂纺锤体的形成，或者使有丝分裂纺锤体功能障碍。在此所用术语“有丝分裂纺锤体的形成”是指通过有丝分裂驱动蛋白将微管组合成双极结构。在此所用术语“有丝分裂纺锤体功能障碍”是指有丝分裂停止或者形成单极纺锤体。

本发明的化合物可用于与有丝分裂驱动蛋白--KSP结合和/或抑制其活性。在优选的实施方案中，KSP是人KSP，但也可使用来源于其他生物体的KSP驱动蛋白。在本发明中，“抑制”是指增加或者降低纺锤极分离，导致有丝分裂纺锤极的畸形(如张开)，或者对有丝分裂纺锤体产生形态干扰。为此目的，KSP的定义中还包括KSP的变体和/或片段。参见美国专利6,437,115，其内容在此并入作为参考。已证实本发明的化合物对于KSP具有特异性。然而，本发明包括使用这些化合物结合或者调节其他的有丝分裂驱动蛋白。

本发明的化合物用于治疗细胞增殖性疾病。可用本发明的化合物、组合物及方法治疗的疾病状态包括但不限于癌症(进一步如下所述)、自体免疫性疾病、真菌性疾病、关节炎、移植物排斥反应、炎性肠疾病、医疗过程(包括但不限于手术、血管成形术等)诱发的细胞增殖作用。治疗包括细胞增殖作用。可以理解的是，在某些情况下，细胞有可能不处于异常状态，但仍需要治疗。因此，在一个实施方案中，本发明包括应用于罹患这些疾病之一的细胞或者个体或者防止其罹患这些疾病之一。

本发明的化合物和方法对于治疗癌症被认为是特别有用的，包括实体瘤，如皮肤、乳腺、脑、子宫颈癌、睾丸癌等。更具体而言，可用本发明的组合物及方法治疗的癌症包括但不限于：

心：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂瘤和畸胎瘤；

肺：支气管癌(鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；

胃肠道：食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰(胰管腺癌、胰岛瘤、高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、胰腺瘤)，小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波济肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)，大肠(腺癌、管腺瘤、绒毛腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；

生殖泌尿道：肾(腺癌、维尔姆斯肿瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌、过渡细胞癌、腺癌)，前列腺(腺癌、肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂瘤)；

肝脏：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；

骨：成骨肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性脊髓瘤、恶性巨细胞肿瘤脊索瘤、软骨骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞肿瘤；

神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、畸形性骨炎)，脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)，脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管瘤、胚组织瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)，脊索(神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)：

妇科：子宫(子宫脑膜癌)，子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前子宫颈发育异常)，卵巢(卵巢癌[浆液囊腺癌、假粘液性囊腺癌、未分类的癌]、粒层-膜细胞肿瘤、塞尔托利-莱迪希细胞肿瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)，阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄簇状肉瘤[胚胎横纹肌肉瘤])，输卵管(癌)；

血液：血液(髓细胞样白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓及外骨髓增殖性疾病、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良综合症)，何杰金病、非何杰金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；

皮肤：恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波济肉瘤、痣发育不良痣、脂瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；以及

腺体：成神经细胞瘤。

在此所用术语癌症的治疗包括癌细胞的治疗，包括受上述病症之一影响的细胞。因此，在此所用术语“癌细胞”包括受到任何一种如上所述的病症影响的细胞。

本发明另一个有用的方面是包含式I化合物或其盐或溶剂合物、以及包装插入物或者其他标签的药盒，所述包装插入物或者标签包括通过给药有效量的所述化合物或其盐或溶剂合物来治疗细胞增殖性疾病的用法说明。在本发明之药盒中的式I化合物或其盐或溶剂合物具体地是以用于治疗细胞增殖性疾病的一个疗程的一个或者多个剂量，每个剂量为包括药物赋形剂以及式I化合物或其盐或溶剂合物的药物制剂。

测试

在KSP调节活性的测试中，KSP或者本发明的化合物非可扩散地结合在不溶性载体上，该载体具有分开的样品接受区域(如微量滴定板、阵列(array)等)。不溶性载体可由任何本发明的化合物可结合于其上的材料制成，易于与可溶性材料分离，或者与总的筛选方法相配适。此等载体的表面可以是固体或者多孔性的，而且可以是任何形状的。合适的不溶性载体的例子包括微量滴定板、阵列、膜和珠。这些材料通常是由玻璃、塑料(如聚苯乙烯)、多糖、尼龙或者硝基纤维素、Teflon^TM等制成。微量滴定板和阵列是特别方便的，因为使用少量的试剂和样品可同时进行大量的测试。本发明化合物的具体结合方式不是关键性的，只要其与试剂以及本发明的总方法相匹配，保持化合物的活性而且不可扩散即可。优选的结合方法包括使用抗体(当蛋白质结合于载体上时，其不会立体地阻断配体结合位点或者活化序列)，直接结合在“粘性”或者离子载体上，化学交联，在表面上合成蛋白质或药物等。在结合蛋白质或者药物后，通过洗涤除去过量的未结合材料。样品接受区域然后可通过与牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、或者其他接种蛋白或者其他物质温育而被阻断。

本发明的化合物可单独使用以抑制有丝分裂驱动蛋白、特别是KSP的活性。在一个实施方案中，本发明的化合物与KSP混合，然后分析KSP的活性。驱动蛋白(包括KSP)活性在本领域中是已知的，而且包括一种或者多种驱动蛋白活性。驱动蛋白活性包括影响ATP水解的能力；微管结合；滑行以及聚合/解聚(对微管动力学的影响)；与纺锤体其他蛋白质的结合；与细胞周期控制中涉及的蛋白质结合；作为其他酶的底物；如激酶或者蛋白酶；以及特异性的驱动蛋白细胞活性如纺锤极分离。

进行分析的方法对于本领域技术人员而言是众所周知的(例如参见：Hall等人(1996)，Biophys.J.，71：3467-3476；Tumer等人，1996，AnalBiochem.242(1)：20-5；Gittes等人，1996，Biophys.J.70(1)：418-29；Shirakawa等人，1995，J.Exp.Biol 198：1809-15；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.68：2444-53；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.68：72S)。

也可使用本领域中已知的测定ATP酶水解活性的方法。优选地，使用以溶液为基础的实验。第6,410,254号美国专利(其内容在此并入作为参考)描述了此等实验。或者，使用常规的方法。例如，可对驱动蛋白中的P_i释放进行定量。在一个优选的实施方案中，ATP酶水解活性实验使用0.3M的PCA(高氯酸)和孔雀绿试剂(8.27mM钼(II)酸钠、0.33mM的孔雀绿草酸盐、以及0.8mM的Triton X-100)。在进行该实验时，10μl的反应物在90μl的冷0.3M PCA中淬灭。使用磷酸盐标准物，所以可将数据转化为mM所释放的无机磷酸盐。当所有的反应物和标准物都已在PCA中淬灭时，在例如微量滴定板的相关孔中添加100μ1的孔雀绿试剂。使混合物显色10-15分钟，然后读取板在650nm处的吸光度。如果使用磷酸盐标准物，则可将吸光度读数转化为mM P_i，并相对时间作图。另外，本领域中已知的ATP酶实验包括荧光素酶实验。

驱动蛋白运动域的ATP酶活性也可用于监测抑制剂的作用，而且对于本领域技术人员是众所周知的。在一个实施方案中，在没有微管存在下进行驱动蛋白ATP酶实验。在另一个实施方案中，在有微管存在时进行ATP酶实验。在上述实验中可检测不同类型的药剂。在一个实施方案中药剂的作用不依赖于微管和ATP的浓度。在另一个实施方案中，通过增加ATP、微管或者这两者的浓度，可降低该药剂对驱动蛋白ATP酶的作用。在又一个实施方案中，通过增加ATP、微管或者这两者的浓度，可增加该药剂的作用。

体外抑制KSP的生化活性的化合物可接着在体内进行筛选。此等药物在体内的筛选方法包括有关细胞周期分布、细胞存活率、或者有丝分裂纺锤体之存在、形态、活性、分布或者量的实验。例如通过流动细胞计监测细胞数量在细胞周期中的分布的方法对于本领域技术人员是已知的，测量细胞存活率的方法也是如此。例如参见第6,437,115号美国专利，其内容在此并入作为参考。监测纺锤体的形成和畸形的显微镜法对于本领域技术人员也是已知的(例如参见：Whitehead和Rattner(1998)，J.Cell Sci.111：2551-61；Galgio等人，(1996)J.Cell Biol.，135：399-414)，上述文献的内容也分别并入作为参考。

本发明的化合物抑制KSP驱动蛋白。抑制作用的一个量度是IC₅₀，其定义为相对于对照化合物，KSP的活性被降低50％时的化合物浓度。化合物的IC₅₀优选低于约1mM，在优选实施方案中，IC₅₀低于约100μM，在更优选的实施方案中，IC₅₀低于约10μM，在特别优选的实施方案中，IC₅₀低于约1μM，在尤为优选的实施方案中，IC₅₀低于约100nM，而在最优选的实施方案中，IC₅₀低于约10nM。IC₅₀的测量是用在此所述的ATP酶实验进行的。

抑制作用的另一个量度是K_i。对于IC₅₀低于1μM的化合物，K_i或者K_d定义为喹唑啉酮与KSP相互作用的解离常数。优选的化合物具有低于约100μM的K_i，在优选实施方案中，K_i低于约10μM，在更优选的实施方案中，K_i低于约1μM，在特别优选的实施方案中，K_i低于约100nM，而在最优选的实施方案中，K_i低于约10nM。

化合物的K_i是根据三个假设和Michaelis-Menten等式由IC₅₀测定的。第一，仅一个化合物分子结合在酶上，而且没有合作性。第二，活性酶的浓度和测试化合物是已知的(例如，在制剂中没有显著量的杂质或者失活形式)。第三，酶-抑制剂复合物的酶促速率是零。速率(即化合物浓度)的数据拟合于以下等式中：

V = V_{\max} E_{0} [I - \frac{(E_{0} + I_{0} + Kd) - \sqrt{{(E_{0} + I_{0} + Kd)}^{2} - 4 E_{0} I_{0}}}{2 E_{0}}]

其中：V是观察速率，V_max是游离酶的速率，I₀是抑制剂浓度，E₀是酶浓度，而K_d是酶-抑制剂复合物的解离常数。

抑制作用的再一个量度是GI₅₀，其定义为细胞生长速率降低50％时的化合物浓度。优选的化合物具有低于约1mM的GI₅₀。化合物的优选度随着GI₅₀而变化：GI₅₀低于约20μM的化合物是更优选的，GI₅₀为约10μM的化合物是更优选的，GI₅₀低于约1μM的化合物是更优选的，GI₅₀为约100nM的化合物是更优选的，GI₅₀低于约10nM的化合物是更优选的。GI₅₀是通过使用细胞增殖实验来测定的。

小分子抑制剂的体外效力例如通过以下方法来测定：在与9点稀释系列的化合物接触72小时后，分析人卵巢癌细胞(SKOV3)的存活率。细胞存活率是通过测量formazon的吸收度来测定的，该formazon是一种通过还原MTS/MPS而形成的产物，而且是可市售得到的试剂。剂量-应答曲线上的每个点是72小时时未经处理的对照细胞减去背景吸收(完全细胞杀死)的百分数。

已成功地应用于临床治疗癌症的抗增殖性化合物(癌症化疗剂)具有很大范围内变化的GI₅₀值。例如，在A549细胞中，紫杉醇的GI₅₀是4nM，多柔比星为63nM，5-氟尿嘧啶为1μM，而羟基脲为500μM(这些数据是由Natinal Cancer Institute，Developmental Therapeutic Program提供的， http://dtp.nci.nih.gov/)。因此，无论表现出抑制作用的浓度如何，抑制细胞增殖的化合物都具有潜在的临床应用。

在用于筛选结合KSP驱动蛋白的化合物的方法中使用本发明的化合物时，将KSP结合在载体上，然后在实验中添加本发明的化合物。或者，将本发明的化合物结合在载体上，然后添加KSP。可在其中寻求新的结合剂的化合物包括特异性抗体、在化学文库的筛选中已鉴别的非天然结合剂、肽类似物等。筛选出对于人细胞具有低毒性的候选药物是筛选实验特别有用的一个方面。为此目的可使用多种实验，包括体外标记的蛋白-蛋白结合实验，电泳移动性位移实验，用于蛋白结合的免疫实验，官能团实验(磷酸化实验等)，等等。

可以多种方法测定本发明的化合物与KSP的结合。在一个实施方案中，本发明的化合物例如用荧光或者放射活性基团标记，然后直接测量结合。例如，这可如下进行：将所有或者部分的KSP连接在固体载体上，添加经标记的测试化合物(例如其中至少一个原子被可检测的同位素替换的本发明化合物)，洗涤掉过量的试剂，然后测定固体载体上存在的标记物的量。

术语“标记”是指化合物直接或者间接地用可提供检测信号的标记物标记，所述标记物例如是放射同位素、荧光标记、酶、抗体、颗粒(如磁性颗粒)、化学发光标记、或者特异性结合分子等。特异性结合分子包括一对物质，如生物素和抗生蛋白链菌素，地高辛和抗地高辛等。对于特异性结合物，根据如上所述的已知方法，互补一方通常与待检测的分子结合。标记物可直接或者间接提供可检测的信号。

在某些实施方案中，仅标记其中一个化合物。例如，可用¹²⁵I或者荧光团在酪氨酸位置处标记驱动蛋白。或者，用不同的标记物标记一个以上的组分，例如蛋白质用¹²⁵I，而抗有丝分裂剂用荧光团。

本发明的化合物也可用作筛选其他候选药物时的竞争剂。在此所用的术语“候选生物活性剂”或者“候选药物”或者语法上等同的词是指待检测其生物活性的任何分子，如蛋白质、寡肽、小的有机分子、多糖、多核苷酸等。它们能够直接或者间接改变细胞增殖表型或者细胞增殖序列的表达，所述细胞增殖序列包括核酸序列和蛋白序列。在其他情况下，筛选细胞增殖蛋白结合和/或活性的改变。该类型的筛选可在有或者没有微管存在时进行。在筛选蛋白结合或活性时，优选的实施方案不包括任何已知可以结合具体的蛋白的分子，例如聚合物结构(如微管)以及能量源(如ATP)。实验的优选实施方案包括在其内源天然状态下不结合分子增殖蛋白的候选药物(在此称为“外源性”药物)。在其他优选的实施方案中，外源性药物进一步排除KSP的抗体。

候选药物可包括多种类别的化学物质，但通常是有机分子，优选分子量为100-2500道尔顿的小有机分子。候选药物包括与蛋白的结构相互作用所必需的官能团，特别是氢键和亲脂性结合的官能团，其通常至少包括胺、羰基、羟基、醚、或者羧基，优选官能团中至少有两个。候选药物经常包括环状碳或者杂环结构和/或芳香或者多芳香结构，它们被一个或者多个上述官能团取代。候选药物还可在生物分子中选择，所述生物分子包括肽、糖、脂肪酸、甾体化合物、嘌呤、嘧啶、以及它们的衍生物、结构类似物或者组合。

候选药物是由包括合成或者天然化合物的文库的多种来源得到的。例如，随机可有多种方式，而且涉及多种有机化合物及生物分子的合成，包括随机寡核苷酸的表达。或者，细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物文库也是可以利用或者容易产生的。另外，天然或者合成的文库及化合物可容易地通过常规的化学、物理和生物化学方法进行改性。已知的药物可进行针对性或者随机的化学改性，如酰基化、烷基化、酯化和/或酰胺化，以产生结构类似物。

竞争性筛选实验可通过在第一个样品中混合KSP以及候选药物来进行。第二个样品包括本发明的化合物、KSP以及候选药物。这可在有或者没有微管存在时进行。测定这两个样品中的候选药物结合，而两个样品之间的结合变化或者不同表明存在能够结合KSP并潜在抑制其活性的药物。也就是说，如果第二个样品中候选药物的结合不同于第一个样品中的，则表明候选药物能够结合KSP。

在优选的实施方案中，候选药物与KSP的结合是通过使用竞争性结合实验来测定。在该实施方案中，竞争剂是已知与KSP结合的结合物质，如抗体、肽、结合配偶体、配体等。在某些情况下，例如在候选药物和结合物质之间，用结合物质置换候选药物，可存在竞争性结合。

在一个实施方案中，候选药物是经过标记的。候选药物或者竞争剂或者它们两个，首先添加至KSP中，其时间足以进行结合。可在任何有利于最佳活性的温度下进行温育，通常在4-40℃之间。

温育的时间根据最佳活性来选择，但也可进行最佳化，以有利于快速高输出筛选。通常0.1-1小时是足够的。过量的试剂通常被除去或者洗掉。接着添加第二组分，然后是有或者没有经过标记的组分，以表明结合。

在另一个实施方案中，首先添加竞争剂，然后添加候选药物。竞争剂的替换是候选药物与KSP结合并由此能够结合以及潜在抑制KSP活性的指标。在该实施方案中，组分可进行标记。因此，例如，如果竞争剂是经过标记的，则在洗涤溶液中存在标记物表明被药物替换。或者，如果候选药物被标记，在载体上存在标记物表明进行了替换。

在另一个实施方案中，候选药物首先添加，并进行温育和洗涤，然后是竞争剂。不存在竞争剂的结合表明候选药物以更高的亲和性与KSP结合。因此，如果候选药物是标记的，在载体上存在标记物，没有竞争剂的结合，有可能表明候选药物能够与KSP结合。

抑制作用是通过筛选能够抑制KSP活性的候选药物来测试的，其包括以下步骤：如上所述混合候选药物和KSP，然后测定KSP生物活性的变化。因此，在该实施方案中，候选药物应与KSP结合(虽然这不是必须的)，并改变其生物或者生化活性。如以上的总概况，该方法包括细胞的体外筛选法和体内筛选法，其中包括细胞周期分布、细胞存活率、有丝分裂纺锤体是否存在、形态、活性、分布或者量的变化。

或者，可使用不同的筛选，以鉴别出与天然KSP结合但不与改性KSP结合的候选药物。

可在实验中使用阳性对照和阴性对照。优选的是，所有的对照和测试样品都进行至少三次，以得到统计学显著的结果。所有样品的温育时间应足以使药物与蛋白质结合。在温育后，洗涤所有的样品，使得没有非特异性结合的材料，然后测定结合而且通常被标记的药物的量。例如，当使用放射性标记物时，样品可在闪烁计数器中计数，以测定结合化合物的量。

在筛选实验中可包括多种其他试剂。这些试剂包括例如盐、中性蛋白质(如白蛋白)、洗涤剂等，它们可有利于最佳的蛋白-蛋白结合和/或降低非特异性或者背景相互作用。还可使用可提高使用效率的试剂，如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、杀微生物剂等。可以任何顺序添加组分的混合物，以提高所需的结合。

给药

因此，本发明的组合物可给药于细胞。术语“给药”是指向细胞培养基以及患者中的细胞给药治疗有效量的本发明化合物。术语“治疗有效量”是指可对给药个体产生作用的剂量。精确的剂量取决于治疗目的，而且可由本领域技术人员通过已知的方法来确定。本领域众所周知的是，必需根据全身与局部给药、年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药时间、药物的相互作用以及疾病的严重程度，对给药剂量进行调整，而且可由本领域技术人员用常规的实验来确定。在此所用术语“细胞”是指可改变其中有丝分裂或者减数分裂的几乎大多数的任何细胞。

在本发明中，“患者”包括人和其他动物(特别是哺乳动物)以及其他生物体。因此，本发明的方法可应用于人的治疗和兽医领域中。在优选的实施方案中，患者是哺乳动物，而在最优选的实施方案中，患者是人。

具有所希望的药理活性的本发明化合物可与生理上可接受的载体一起给药于患者。根据引入的方式，本发明的化合物可以如下所述多种方法进行配制。治疗活性化合物在制剂中的浓度可为0.1-100重量％。

药物可单独或者与其他治疗(如放射疗法)或者其他化学治疗剂一起进行，例如似乎对微管形成起作用的紫杉烷类药物或者拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类药物。在使用时，其他化学治疗剂可在给药本发明化合物之前、之后或者与之同时给药。在本发明的一个方面中，本发明的化合物与一种或多种其他化学治疗剂共同给药。术语“共同给药”是指向患者给药本发明的化合物，使得本发明的化合物以及共同给药的化合物在相同的时间都存在于患者的血流中，无论这些化合物实际上是何时给药的，包括同时给药。

给药本发明的化合物以及组合物可通过各种方式进行，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、透皮、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠或者眼内给药。在某些情况下，例如，在治疗伤口和炎症时，本发明的化合物及组合物可直接以溶液或者喷雾剂的形式施用。

药物剂型包括式I的化合物或其药物学可接受的盐、溶剂合物或者盐的溶剂合物以及一种或者多种药物赋形剂。如本领域已知的，药物赋形剂是辅助成分，其作用是能够使药物在各种剂型(例如口服剂型如片剂、胶囊剂、和液体制剂；局部用剂型如皮肤用剂、眼用剂型和耳用剂型；栓剂；注射剂；呼吸剂型等)中的传递或者增强该传递。药物赋形剂包括惰性或者非活性成分、协同剂或者化学品，它们对化学成分的药物作用产生很大的帮助。例如，药物赋形剂的作用包括改善流动性质、产品的均匀性、稳定性、口味、或者外观，以给药剂量的处理和给药，方便使用，或者控制生物利用度。虽然药物赋形剂通常被描述为惰性或者非活性的，但在本领域中应认识到，在药物赋形剂的性质与包含该药物赋形剂的剂型之间是有关系的。

适合用作载体或稀释剂的药物赋形剂在本领域中是众所周知的，而且可用于各种制剂中。例如参见：Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro编辑，Mack Publishing Company(1990)；Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第20版，A.R.Gennaro编辑，Lippincott Williams & Wilkins(2000)；Handbook of PharmaceuticalExcipients，第3版，A.小时。Kibbe编辑，American PharmaceuticalAssociation，and Pharmaceutical Press (2000)；及Handbook ofPharmaceutical Additives，由Michael和Irene Ash汇编，Gower(1995)，这些文献的内容在此并入作为参考。

口服固体剂型如片剂通常包含一种或者多种药物赋形剂，它们例如可有助于形成令人满意的处理和压缩特性，或者给所述片剂提供另外所希望的物理性质。此等药物赋形剂可选自于稀释剂、粘合剂、助滑剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、聚合物、蜡或者其他延迟溶解性的材料。

用于静脉给药的组合物通常包含简单化学品的静脉流体，如无菌溶液，所述化学品例如是糖、氨基酸或电解质，它们可容易被循环系统携带并同化。此等流体是用USP注射用水制备的。

用于非胃肠道给药的剂型通常包含简单化学品的流体、特别是静脉流体，如无菌溶液，所述化学品例如是糖、氨基酸或电解质，它们可容易被循环系统携带并同化。此等流体是用USP注射用水制备的。Remington，TheScience and Practice of Pharmacy(以上提供了完整的引用)公开了通常用于静脉(IV)的立体，并包括：

·醇，如5％醇(如在葡萄糖和水中(“D/W”)或D/W在生理盐水溶液(“NSS”)，包括在5％葡萄糖和水中(“D5/W”)，或者D5/W在NSS中)；

·合成氨基酸，如氨基syn、Fre胺、Travasol，如分别是3.5或7；8.5；3.5、5.5或8.5％；

·氯化铵，如2.14％；

·右旋糖酐40，在NSS中如10％或者在D5/W中如10％；

·右旋糖酐70，在NSS中如6％或者在D5/W中如6％；

·右旋糖(葡萄糖，D5/W)，如2.5-50％；

·右旋糖和氯化钠，如5-20％右旋糖和0.22-0.9％氯化钠；

·乳酸化的Ringer(Hartmann)溶液，如氯化钠0.6％、氯化钾0.03％、氯化钙0.02％；

·乳酸盐0.3％；

·甘露醇，如5％，任选与右旋糖如10％或者氯化钠如15或20％组合；

·具有各种电解质、右旋糖、果糖、转化糖Ringer溶液组合的多电解质溶液，如氯化钠0.86％、氯化钾0.03％、氯化钙0.033％；

·碳酸氢钠，如5％；

·氯化钠，如0.45、0.9、3、或5％；

·乳酸钠，如1/6M；以及

·无菌注射用水。

所述IV流体的pH值是可变的，并且如本领域所知道的，通常在3.5-8的范围内。

本发明的化合物、其药物学可接受的盐和溶剂合物可单独给药或者与其他治疗(如放射疗法)或者其他化学治疗剂一起给药，例如似乎对微管形成起作用的紫杉烷类药物或者拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类药物。在共同使用时，其他化学治疗剂可在给药本发明化合物之前、之后或者与之同时(无论在单独的剂型中或者在组合剂型中)给药。

以下实施例用于更详细地描述实施本发明的方式。应理解的是，这些实施例绝不是对本发明真实范围的限制，而仅是用于说明目的。在此引用的所有参考文献都全文引入作为参考。

实施例

实施例1

合成化合物1A，N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-1-甲基-5-氧代-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺

在0℃下向Cbz-D-缬氨酸(2,50g，200mmol)在THF(700mL)中的溶液内添加氯甲酸乙酯(23mL，240mmol)和三乙胺(33.5mL，240mmol)。反应混合物在氮气下搅拌。1小时后，在5分钟的时间内添加苄基胺(26.2mL，240mmol)。添加完成后，使反应溶液温热至室温。1小时后，过滤反应混合物。沉淀物用THF洗涤，然后中空干燥，得到3(60g，88％)，其为白色固体。LRMS(M+H+)m/z 341.1。

向3(20g，59mmol)在二氯甲烷(500mL)中的悬浮液内添加六氟磷酸三乙基氧鎓(25g，100mmol)。所得混合物搅拌14小时。反应混合物用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到4(19g)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 369.1。

向上述粗产物4(4g，-10.85mmol)在THF(30mL)中的溶液内添加肼(1.0M的THF溶液，20mL)。所得混合物搅拌4小时。浓缩该溶液并真空干燥，得到5(3.8g)，其为淡黄色固体，而且未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 355.1。

向上述粗产物5(6g，约16.9mmol)在THF(200mL)中的溶液内添加1，1′-羰基二咪唑(2.5g，15.4mmol)。所得溶液搅拌14小时。反应混合物浓缩。所得侧链瓦通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，得到6(1.1g，17％由3计算)。LRMS(M+H+)m/z 388.1。

向6(400mg，1.05mmol)在DMF(5mL)中的溶液内添加碘甲烷(120L，1.89mmol)和K₂CO₃(332mg，1.68mmol)。所得混合物搅拌18小时。混合物进行过滤，而滤液在RP-HPLC上进行纯制，其中使用乙腈和水的混合物作为洗脱剂，得到7(110mg，27％)。LRMS(M+H+)m/z 395.2。

在氢气流(30psi)中在10％Pd/C(15mg)存在下搅拌7(110mg，0.28mmol)在MeOH(25mL)中的溶液1小时。由PTFE(0.45μm)过滤器中过滤，由此除去催化剂，然后蒸发溶剂，得到8(65mg)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 261.1。

在0℃下向上述粗产物8(65mg，约0.25mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液内顺序地添加醛9(52mg，0.3mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(63mg，0.3mmol)。所得的混合物在氮气下搅拌3小时。添加另外的醛9(20mg，0.12mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(20mg，0.094mmol)。继续搅拌2小时。混合物用二氯甲烷(50mL)稀释，然后用饱和NaHCO₃(20mL)洗涤。分离有机层，而含水层用二氯甲烷(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到10(110mg)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+HF)m/z 418.2。

向10(110mg，约0.26mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(55μL，0.32mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液内添加p-甲苯酰氯(42μL，0.32mmol)。浓缩所得的溶液。所得的残留物在RP-HPLC上进行纯制，其中使用乙腈和水的混合物作为洗脱剂，得到(60mg，41％由7计算)。LRMS(M+H)m/z 536.2。

向11(60mg，0.11mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液内添加三氟乙酸(1.5mL)。所得的溶液在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。残留物在高真空下干燥，然后溶解在二氯甲烷(25mL)中。其用饱和NaHCO₃(25mL)洗涤，而含水层用二氯甲烷(2×25mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到白色固体状的1(42mg，87％)，其用¹H-NMR和LC/MS分析进行完全表征(LRMS(M+H)m/z 436.4)。

实施例2

合成化合物1B，N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4-苄基-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺

在0℃下向500mL的三颈圆底烧瓶中添加CBZ-D-缬氨酸(2，50g，200mmol)、THF(700mL)、氯甲酸乙酯(21mL，220mmol)和三乙胺(33.5mL，240mmol)。反应混合物在氮气下进行搅拌。1小时后，在该烧瓶上装配干冰回流冷凝器，并连续通入氨气30分钟。反应混合物再搅拌1小时。反应混合物过滤。沉淀物用水和THF洗涤，然后真空干燥，得到12(38g，76％)，其为白色固体。LRMS(M+H+)m/z 251.2。

向12(20g，59mmol)在二氯甲烷(500mL)中的悬浮液内添加六氟磷酸三乙基氧鎓(25g，100mmol)。所得混合物搅拌3天。反应混合物用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到13(20g)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H)77m/z 279.1.

向上述粗产物13(5.7g，约20.5mmol)在THF(100mL)中的溶液内添加苯基肼(2.4mL，24.6mmol)。所得混合物搅拌14小时。溶液进行浓缩和真空干燥，得到14(3.8g)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 341.1。

向上述粗产物14(6.9g，约20.5mmol)在THF(200mL)中的溶液内添加1，1′-羰基二咪唑(6.6g，41mmol)。所得溶液搅拌2天。反应混合物浓缩。所得的残留物溶解在EtOAc(500mL)中，用饱和NaHCO₃(200mL)和盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩。所得残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，得到15(1.1g，15％由3计算)。LRMS(M+H+)m/z 367.1。

向15(400mg，1.09mmol)在DMF(3mL)中的溶液内添加苄基溴(195μl，1.64mmol)和K₂CO₃(380mg，2.74mmol)。所得混合物搅拌14小时。混合物过滤，而滤液通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，得到16(230mg，46％)。LRMS(M+H+)m/z457.1。

在氢气流(30psi)中在10％Pd/C(20mg)存在下搅拌16(200mg，0.43mmol)在MeOH(8mL)中的溶液1小时。由PTFE(0.45μm)过滤器中过滤，由此除去催化剂，然后蒸发溶剂，得到17(120mg)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 323.1。

在0℃下向上述粗产物17(120mg，约0.37mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液内顺序地添加醛18(35mg，0.2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(42mg，0.2mmol)。所得混合物在氮气下搅拌3小时。添加另外的醛18(104mg，0.6mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(85mg，0.4mmol)。继续搅拌2小时。混合物用二氯甲烷(25mL)稀释，然后用饱和NaHCO₃(20mL)洗涤。分离有机层，而含水层用二氯甲烷(2×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到19(300mg)，其未经进一步纯制即用于下一步中。LRMS(M+H+)m/z 480.2.

向19(300mg，约0.63mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(145μL，0.83mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液内添加p-甲苯酰氯(111μL，0.83mmol)。所得溶液搅拌2天。溶液进行浓缩。将所得残留物溶解在二氯甲烷(25mL)中。其用饱和NaHCO₃(20mL)洗涤，而含水层用二氯甲烷(2×20mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，然后浓缩。所得残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，得到20(150mg，58％由7计算)。LRMS(M+H)m/z 598.2。

向20(150mg，0.25mmol)在二氯甲烷(1.6mL)中的溶液内添加三氟乙酸(0.4mL)。所得的溶液在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。残留物在高真空下干燥，然后溶解在二氯甲烷(25mL)中。其用饱和NaHCO₃(20mL)洗涤，而含水层用二氯甲烷(2×25mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到白色固体状的1B(88mg，70％)，其用¹H-NMR和LC/MS分析进行完全表征(LRMS(M+H)m/z 498.2)。

实施例3

在用KSP抑制剂处理的肿瘤细胞系中抑制细胞的存活率

材料和溶液：

·细胞：Skov3，卵巢癌(人)

·培养基：不含酚红(Phenol Red)的RPMI+5％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺

·用于测量细胞存活率的比色剂：Promega MTS四唑化合物

·用于最大细胞杀死的对照化合物：Topotecan，1μM

程序：第1天-细胞铺板

粘附的SKOV3细胞用10ml的PBS洗涤，然后添加2ml的0.25％胰蛋白酶，并在37℃下温育5分钟。在烧瓶中用8ml的培养基(不含酚红的RPMI+5％FBS)淋洗细胞，然后转移至新的烧瓶中。使用Coulter计数器确定细胞浓度，并计算达到1000个细胞/100μL时合适的细胞体积。向96孔板的所有孔中添加100μL的培养基细胞悬浮液(调节至1000个细胞/100μL)，然后在37℃、100％湿度以及5％CO₂条件下温育18-24小时，以使细胞粘附在板上。

程序：第2天-化合物的添加

向压热分析板(autoclaved assay block)的一列孔中添加2.5μL的测试化合物，最高希望浓度为400倍。向其他孔中添加1.25μL的400×(400μM)Topotecan(这些孔的OD值用于减去死亡细胞和载体的背景吸收度)。向包含测试化合物的孔中添加500μL不含DMSO的培养基，而向Topotecan孔中则添加250μL。向所有剩余的孔中添加250μL的培养基+0.5％DMSO，这些孔中测试化合物被系列稀释。对于每一排，包含化合物的培养基重复由分析板铺板至相应的细胞板(2份)。细胞板在37℃、100％湿度和5％CO₂的条件下温育72小时。

程序：第4天-添加MTS和OD读去

从温育器中移出各板，并在各孔中添加40μL的MTS/PMS。各板接着在37℃、100％湿度和5％CO₂的条件下温育120分钟，接着在96孔分光光度计的5秒振摇循环后读去490nm处的OD值。

数据分析

计算归一化的对照％(吸收度-背景)，并使用Xlfit产生剂量-应答曲线，由该曲线可确定50％抑制存活率时所需要的化合物浓度。在用本方法测试时，本发明的化合物表现出活性。

实施例4

给药KSP抑制剂后的单极纺锤体形成

将人肿瘤细胞Skov-3(卵巢)以每孔4000个细胞的密度放入96孔板中，使它们粘附24小时，然后用各种浓度的测试化合物处理24小时。细胞固定在4％甲醛中，并用抗微管蛋白抗体(随后使用荧光标记的辅助抗体识别)和Hoechst染料(其染色DNA)进行染色。

肉眼检查表明这些化合物使细胞周期停止在有丝分裂的前中期。DNA缩合，并且开始形成纺锤体，但休止的细胞均匀地表现为单极纺锤体，这表明抑制了纺锤极体的分离。微量注射抗KSP抗体也使有丝分裂停止，而且休止的细胞也表现为单极纺锤体。

实施例5

在用KSP抑制剂处理的肿瘤细胞系中抑制细胞增殖

以1000-2500个细胞/孔(取决于细胞系)的密度将细胞放入96孔板的孔中，然后使它们粘附/生长24小时。它们接着用各种浓度的药物处理48小时。添加化合物时的时间作为T₀。使用试剂3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑(MTS)的四唑基实验(I.S.第5,185,450号美国专利)(参见Promega产品目录#G3580，CellTiter 96_AQ_ueous One Solution Cell ProliferationAssay)，被用于测定T₀时的细胞存活数量以及接触化合物48小时后存活细胞的数量。48小时后存活的细胞数量与添加药物时的存活细胞数量相比较，以计算生长抑制作用。

在仅用载体(0.25％DMSO)处理的对照孔中细胞在48小时后的生长被认为是100％的生长，而添加化合物的孔中的细胞生长与其进行比较。KSP抑制剂抑制人卵巢肿瘤细胞系(SKOV-3)。

GI₅₀是通过化合物的浓度(μM)对处理孔中细胞生长的百分比作图而计算的。对于化合物计算的GI₅₀是与对照组相比50％抑制生长时的估计浓度，即、以下等式表示的时间的浓度：

100×[(处理48小时-T₀)/(对照48小时-T₀)]＝50

所有的化合物浓度都测试双份，而对照是12个孔的平均值。NationalCancer Institute使用了非常类似的96孔板方案和GI₅₀计算方法(参见：Monks等人，J.Natl.Cancer Inst.83：757-766(1991))。但是，National CancerInstitute用于定量细胞数目的方法不是使用MTS，而是使用另外的方法。

实施例6

IC₅₀的计算

本发明化合物对KSP活性的IC₅₀值是使用ATP酶实验来测定的。使用以下的溶液：溶液1由3mM的磷烯酸醇丙酮酸钾盐(Sigma P-7127)、2mM的ATP(Sigma A-3377)、1mM的IDTT(Sigma D-9779)、5μM的紫杉醇(Sigma T-7402)、10ppm的消泡289(Sigma A-8436)、25mM的Pipes/KOH pH 6.8(Sigma P6757)、2mM的氯化镁(VWRJT400301)、以及1mM的EGTA(Sigma E3889)组成。溶液2由1mM的NADH(Sigma N8129)、0.2mg/ml的BSA(SigmaA7906)、丙酮酸激酶7U/ml、L-乳酸脱氢酶10U/ml(Sigma P0294)、100nM的KSP运动域、50μg/ml的微管、1mM的DTT(Sigma D9779)、5μM的紫杉醇(Sigma T-7402)、10ppm的消泡289(Sigma A-8436)、25mM的Pipes/KOH pH 6.8(Sigma P6757)、2mM的氯化镁(VWR JT4003-01)、以及1mM的EGTA(Sigma E3889)组成。使用溶液1在96孔板(ComingCostar3695)上制备化合物的系列稀释液(8-12个2倍稀释液)。在系列稀释后，每个孔有50μl的溶液1。在每个孔中添加50μl的溶液2，由此使反应开始。这可通过手工使用多通道移液管或者用自动液体处理装置来实现。微量滴定板转移至微板吸光度读数器中，并以动态读取每个孔在340nm处的多个吸光度读数。所观察到的变化速率与ATP酶成正比，并绘制其随化合物浓度变化的图。对于标准IC₅₀测定，所需要的数据是通过以下4个参数的等式使用非线性拟合程序(如Grafit 4)进行拟合：

其中y是观察到的速率，而x是化合物浓度。

所有的无水溶剂均购自Aldrich Chemical Company并放置在SureSeal^_容器内。大多数的试剂购自Aldrich Chemical Company。添加试剂，并用单或多通道移液管管理器进行含水萃取。使用Whatman/Polyfiltronics 24孔、10ml过滤段进行过滤。使用Labconco涡流蒸发器或者用4×6氮气歧管吹扫，由此从阵列中蒸发掉挥发性的材料。

Claims

1、一种选自于以下式I所代表的组中的化合物：

其中：

T和T’独立地是共价键或者任选取代的低级亚烷基，

R₂和R₂独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；或者R₂和R_2′一起形成任选取代的3-7元环；

R₁₁选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；

式I化合物的药物学可接受的盐；

式I化合物的药物学可接受的溶剂合物；或者

式I化合物的药物学可接受的盐的药物学可接受的溶剂合物；

条件是：当R₄为任选取代的苯基时，R₁不是任选取代的苯基。

2、如权利要求1所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

T和T’不存在；

R₁选自于氢、任选取代的低级烷基、任选取代的苄基、任选取代的萘基甲基、以及任选取代的苯基；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R₂是氢或任选取代的C_1-4烷基；

R₄是氢、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳基、氨甲酰基、杂芳基、或者任选取代的杂环基；

R₃是-C(O)-R₆或-S(O)₂-R_6a；

R₆选自于任选取代的C_1-8烷基、任选取代的芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、R₇O-和R₁₁-NH-；

R_6a选自于被卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基，以及萘基；

R₇选自于任选取代的C_1-8烷基和任选取代的芳基；

R₁₁选自于氢、任选取代的C_1-8烷基和任选取代的芳基；以及

R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、和任选取代的杂芳烷基。

3、如权利要求2所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

R₁选自于氢、乙基、丙基、甲氧基乙基、萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、羟基苄基、四氢呋喃基甲基、二氯苄基、呋喃基甲基、二甲氧基苄基、萘基甲基、以及(乙氧基羰基)乙基；

R_2’是氢；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R₄是甲基、乙基、丙基、苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-、二卤代苯基-、吡啶基、或苄基；

R₃是-C(O)-R₆；

R₆是C_1-8烷基、任选取代的芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的芳基；以及

R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基。

4、如权利要求3所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、或羟基苄基；

R₂选自于甲基、乙基、丙基、丁基、甲硫基乙基、甲硫基甲基、氨基丁基、(CBZ)氨基丁基、环己基甲基、苄氧基甲基、甲基亚硫酰基乙基、甲基亚硫酰基甲基、和羟基甲基；

R_2’是氢；

R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-、或二卤代苯基-；

R₆是甲苯基、卤代苯基、甲基卤代苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基、卤代(三氟甲基)苯基-或氰基苯基；以及

R₅是氨基丙基、吡咯烷基甲基或哌啶基甲基。

5、如权利要求1所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

R₁是苄基；

R_2’是氢；以及

R₂是乙基或丙基。

6、如权利要求5所述的化合物，其中R2是异丙基。

7、如权利要求1所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R_2′是氢或任选取代的C_1-4烷基；

R₇选自于任选取代的C_1-8烷基和任选取代的芳基；

R₃与R₅以及它们所连接的氮原子一起形成以下式的任选取代的咪唑基环：

其中

8、如权利要求7所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

R_2’是氢；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R₉是芳基、取代的芳基、芳烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳烷基、芳烷氧基、杂芳烷氧基、取代的芳烷基、取代的杂芳烷基、取代的芳烷氧基、或者取代的杂芳烷氧基。

9、如权利要求1所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R_2′是氢或任选取代的C_1-4烷基；

R₇选自于任选取代的C_1-8烷基和任选取代的芳基；

R₃与R₅以及它们所连接的氮原子一起形成以下式的任选取代的咪唑啉基环：

其中

10、如权利要求9所述的化合物，其包括以下中的一个或者多个：

R_2’是氢；

R₂是任选取代的C_1-4烷基；

R₆是C_1-8烷基、任选取代的芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基-C_1-4烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的芳基；

R₉是芳基、取代的芳基、芳烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳烷基、芳烷氧基、杂芳烷氧基、取代的芳烷基、取代的杂芳烷基、取代的芳烷氧基、或者取代的杂芳烷氧基；

R₁₀是氢或任选取代的低级烷基；以及

R_10’是氢或任选取代的低级烷基。

11、如权利要求1所述的化合物，其中R₂和R_2’所连接的立体中心为R构型的。

12、如权利要求1所述的化合物，其中

T和T’不存在；

R₁是苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基或羟基苄基；

R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；

R_2’是氢；

R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；

R₃是氢；以及

R₅是氢。

13、如权利要求1所述的化合物，其中

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；

R_2’是氢；

R₃是-C(O)R₆；

R₅选自于任选取代的烷基、任选取代的环己基，被羟基、卤素、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基，苄基，杂芳基甲基，杂芳基乙基和杂芳基丙基；以及

R₆是甲苯基、卤代苯基、甲基卤代苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基、卤代(三氟甲基)苯基-或氰基苯基。

14、如权利要求1所述的化合物，其中

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；

R_2’是氢；

R₃是-C(O)R_6a；

R_6a选自于被卤素、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基，以及萘基。

15、如权利要求1所述的化合物，其中

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；

R_2’是氢；

R₄是苯基、卤代苯基-、甲基苯基-、甲氧基苯基-、氰基苯基-、三氟甲基苯基-或二卤代苯基-；以及

R₅与R₃一起是任选取代的咪唑基。

16、如权利要求1所述的化合物，其中

T和T’不存在；

R₂是任选取代的C₁-C₄烷基；

R_2’是氢；

R₅与R₃一起是任选取代的咪唑啉基。

17、一种药物组合物，其包含药物赋形剂以及治疗有效量的如权利要求1-16之一所述的化合物。

18、一种治疗方法，其包括向罹患细胞增殖性疾病的患者给药治疗有效量的如权利要求1-16之一所述的化合物。

19、如权利要求18所述的方法，其中所述细胞增殖性疾病是癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病或炎症。

20、一种治疗细胞增殖性疾病的方法，其包括向罹患该细胞增殖性疾病的患者给药如权利要求1所述的化合物，该化合物的量足以调节受所述疾病影响的细胞内的KSP驱动蛋白活性。

21、一种药盒，其包括如权利要求1-16之一所述的化合物以及包装插入物或者其他标签，所述包装插入物或者标签包括通过给药有效量的所述化合物来治疗细胞增殖性疾病的说明。