CN1650864A - 10－羟基喜树碱长循环脂质体及其冻干制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属药物制剂领域，涉及10－羟基喜树碱长循环脂质体，长循环脂质体的冻干制剂及其制备方法。本发明公开了该制剂的可工业化实施的方法，用卵磷脂\大豆磷脂或氢化卵磷脂和PEG修饰的脂质为膜材，用胆固醇作稳定剂，用海藻糖或蔗糖作冻干保护剂，用乙醇和二氯甲烷作溶剂。本发明10－羟基喜树碱长循环脂质体制剂具有良好抗癌作用，其毒性小、病人耐受性好、水溶性及稳定性提高、相对成本较低。

Description

10-羟基喜树碱长循环脂质体及其冻干制剂

技术领域

本发明属药物制剂领域，涉及10-羟基喜树碱长循环脂质体，长循环脂质体的冻干制剂及其制备方法。

背景技术

10-羟基喜树碱(Hydrocamptothecin，HCPT)是本世纪60-70年代从中国喜树中提取的同类抗肿瘤单体中抗癌作用最强的微量生物碱，为S-期特异性抗癌药物。系统的药理研究其抗癌机理为抑制Topo I，临床主要运用于腹水型肝癌、头颈部肿瘤、胃癌和膀胱癌及白血病，HCPT的毒性反应主要表现在泌尿系统、消化系统及造血功能的抑制等，但其毒性明显低于喜树碱，特别是泌尿系反应少，临床上易被接受。目前，该药存在的主要问题有：半衰期短(5min-1h)，需反复给药，故毒副作用较大；脂溶性强，而制成水溶性钠盐的抗癌活性降低90％；稳定性差，药物的内酯环对光、热敏感，内酯环开环后丧失药理活性。目前，国内临床用制剂即为以HCPT的开环的盐的形式(专利02138930.6和02114913.5)，该类制剂药效显著下降，且毒性增加，从而限制了临床应用。目前对10-羟基喜树碱新剂型研究为其研究的主要方向之一。

10-羟基喜树碱的半衰期短，仅为5min-1h左右，在治疗特点上，该类药物在影响疗效的浓度与时间因素中，时间为主要因素，属于时间依赖型药物，主要用于生长缓慢的肿瘤的治疗，故而这种作用机制要求其长期用药。许多研究表明，纳米给药系统具有良好的靶向性和缓释作用，特别有利于该类时间依赖性型药物和代谢快药物的抗癌治疗。国内张志荣等采用吸附—包裹法制备了聚乙烯吡啶烷酮包被的10-羟基喜树碱聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒，实验证明了该载药毫微粒具有明显的肝靶向和缓释作用。国内专利03152834.1公开了10-羟基喜树碱的乳剂及乳剂，增加了药物的稳定性，改变了药物在体内的分布，提高了药物的疗效。国内专利01138252.X制备了10-羟基喜树碱葡聚糖纳米粒，01133700.1制备了聚乳酸纳米粒，03113179.4制备了HCPT的脂质体，这些制剂显示具有对网状内皮系统(肝脏、脾脏等)较高的选择性，对治疗肝癌较好，但若病灶部位不在网状内皮系统的其他肿瘤，该类制剂不但无靶向作用，还增加了药物对网状内皮系统的毒性。

发明内容

本发明的目的在于提供10-羟基喜树碱的长循环脂质体及长循环脂质体的冷冻干燥制剂。本发明制剂可用生理盐水或葡萄糖注射液进行分散，用于静脉给药。

本发明的特点在于运用PEG化的脂质来修饰脂质体，一方面可以解决传统脂质体粒径较大，稳定性差，易泄漏、融合和冷冻干燥困难的问题；另一方面可以使脂质体表面被PEG所修饰，形成一种立体的“构象云”，阻止血液中调理素的识别和血浆蛋白的吸附，减少脂质体被网状内皮系统的吞噬，从而使脂质体的清除速度减慢，血液中驻留时间延长，有利于其进入肿瘤组织，并增进其对肿瘤组织的渗透和滞留作用(EPR效应)，从而达到肿瘤靶向和增效减毒作用。

本发明所涉及的PEG化的脂质包括PEG化的磷脂类如聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)；嵌段或交枝共聚物类如聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)，聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)等；表面活性剂类如伯洛沙姆188(Pluronic F68)，聚氧乙烯脂肪酸酯类(Mrij)，聚氧乙烯脂肪酸醚(Brij)，聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor)等。其共同特征是一端为亲水性的聚乙二醇，由于PEG具有较好的亲水性和柔韧性，目前被证实是最佳的表面修饰材料；另一端则为亲油的疏水端，可很好的嵌入到脂质体的脂质双层中与磷脂类共同形成脂质膜。

本发明围绕10-羟基喜树碱的制备进行，但也可用于其它水不溶性喜树碱如喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱等，根据本发明制备的治疗癌症的10-羟基喜树碱与现有临床剂型相比，毒性较小且更稳定，其抗肿瘤活性大大提高。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂，其特征是以下重量配比药物为原料：10-羟基喜树碱1-5份，磷脂10-100份，PEG修饰的脂质10-100份，胆固醇2-50份，海藻糖或蔗糖10-400份。

所述磷脂为卵磷脂、大豆磷脂或氢化大豆磷脂；

所述PEG化脂质为聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)，聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)，聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)，伯洛沙姆188(Pluronic F68)，聚氧乙烯脂肪酸酯类(Mrij)，聚氧乙烯脂肪酸醚(Brij)，聚氧乙烯蓖麻油醚(Cremophor)等其中之一或任何组合形式。

本发明技术方案还涉及所述的的10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂的制备方法，其特征是以下重量配比药物为原料：10-羟基喜树碱1-5份，磷脂10-100份，胆固醇2-50份，海藻糖或蔗糖10-400份。冷冻干燥制剂通过包括以下步骤的过程制备：将磷脂、胆固醇和HCPT溶于某种混合有机溶剂，除去有机溶剂，恒温除去溶剂，真空干燥，加入溶有上述比例的海藻糖或蔗糖水溶液中，水化溶解后，可用超声波或高压乳匀机处理，分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。封口或压盖时可用氮气、氦气、二氧化碳或氩气。

所述磷脂为卵磷脂、大豆磷脂或氢化大豆磷脂或其中任意两种混合物。

所述PEG化脂质为聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)，聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)，聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)，伯洛沙姆188(Pluronic F68)，聚氧乙烯脂肪酸酯类(Mrij)，聚氧乙烯脂肪酸醚(Brij)，聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor)等其中之一或任何组合形式。

所用恒温除去溶剂温度为40-60℃。

所用有机溶剂可为二氯甲烷、氯仿、乙醇、甲醇、四氢呋喃、二甲基亚砜及其混合物。

所用水化温度可为10-80℃。

所用冻干保护剂也可以是海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、甘露醇、F68(泊洛沙姆188)及其混合物。

本发明的有益效果表现在：可稳定10-羟基喜树碱的α-羟基内酯环，使其以闭环形式存在，增加了药物的稳定性；可增加10-羟基喜树碱的水溶性，提高注射剂的适针性；可增加10-羟基喜树碱的半衰期，增加其血液循环时间；可提高靶向肿瘤的效果，提高药物的疗效，降低毒性；本发明制备的冻干剂可重新水化形成脂质体溶液，增加制剂的稳定性；本发明采用薄膜法制备，工艺简单可行。

附图说明

图1.Brij-40修饰的脂质体的体外释放：释放百分率-时间曲线。

图2.脂质体的粒径分布图。

图3.用各种PEG化脂质修饰脂质体的血液浓度(cpm/0.5ml)时间曲线。

具体实施方式

实施例1.

将10-羟基喜树碱1g，磷脂50g，胆固醇15g，聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)5g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。

实施例2.

将10-羟基喜树碱2g，磷脂50g，胆固醇10g，聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)10g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖溶液中，水化30min，用高压乳匀机处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。

实施例3.

将10-羟基喜树碱4g，磷脂50g，胆固醇20g，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯(PEG-PLGA)8g，溶于二氯甲烷∶乙醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有70g的甘露糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用用高压乳匀机处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。

实施例4.

将10-羟基喜树碱1g，磷脂50g，胆固醇25g，聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)5g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的甘露糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。将脂质体分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。通氮气封口。

实施例5.

将10-羟基喜树碱4g，磷脂50g，胆固醇15g，伯洛沙姆188(Pluronic F68)10g，溶于二氯甲烷∶乙醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。将脂质体分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。通氮气封口。

实施例6.

将10-羟基喜树碱1g，磷脂50g，胆固醇15g，聚氧乙烯脂肪酸酯(Mrij-100)5g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。将脂质体分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。通氮气封口。

实施例7.

将10-羟基喜树碱1g，磷脂50g，胆固醇15g，聚氧乙烯脂肪酸醚(Brij-40)5g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。将脂质体分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。通氮气封口。用生理盐水重新分散后，悬于透析袋内，放置于溶出仪的转篮中。在37℃，60r·min-1条件下恒温振荡，不同时间点取样0.5ml，同时补加0.5ml释放介质(pH7.4的PBS缓冲液)，样品经0.1M的10ulHCL进行酸化，进样20ul进行HPLC测定，计算累积释药百分数(％)。见图1。

实施例8.

将10-羟基喜树碱1g，磷脂50g，胆固醇15g，聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor)5g，溶于氯仿∶甲醇(2∶1)中，旋转蒸发除去有机溶剂，真空干燥，加入溶有100g的海藻糖和蔗糖水(1∶1)溶液中，水化30min，用超声波处理，即得10-HCPT的长循环脂质体溶液。将脂质体分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。通氮气封口。用生理盐水重新分散后，用Nicomp TM 380ZLS粒度和zeta电位仪测定粒径，见图2。

实施例9.

HCPT的¹²⁵I标记采用Iodogen法。称取3.3mg的HPCT溶于1mL甲醇中，从中取100μL溶液置于Iodogen管中，加入1～2mCi Na¹²⁵I，轻微振荡反应5min后转移至小离心试管，Iodogen管用300μL重蒸水洗涤两次，合并至小试管中。

HPLC鉴定表明，¹²⁵I-HCPT的标记率约为97％。

取SD大鼠24只，随机分为8组。第一组按4.6875uCi/10g单剂量尾静脉注射HCPT水溶液，第二、三、四、五、六、七组分别按4.6875uCi/10g单剂量注入用Mrij-100、F68、Cremorphor RH 40、Mrij-40、F127、PEG-DSPE修饰的纳米脂质体，给药后分别于5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h于眼底取血0.5ml，γ计数器读取放射性计数。见图3。

Claims (8)

1.一种10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂，其特征是以下述重量配比成分为原料制成冻干制剂：10-羟基喜树碱1-5份，磷脂10-100份，PEG修饰的脂质10-100份，胆固醇2-50份，海藻糖或蔗糖10-400份。

2.根据权利要求1的10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂，其特征是所述磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂及其任何组合形式。

3.根据权利要求1的10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂，其特征是所述PEG化脂质为聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，聚乙二醇-聚己内酯，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯，聚乙二醇-聚乳酸，伯洛沙姆188，聚氧乙烯脂肪酸酯类，聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚其中之一或任何组合形式。

4.权利要求1的10-羟基喜树碱长循环脂质体制剂的制备方法，其特征是以下重量配比成分为原料：10-羟基喜树碱1-5份，磷脂10-100份，PEG修饰的脂质10-100份，胆固醇2-50份，海藻糖或蔗糖10-400份，

将10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇按上述比例溶于二氯甲烷∶甲醇2∶1中，恒温除去溶剂，加入溶有上述比例计算的海藻糖或蔗糖水溶液中，溶解后，超声或高压匀浆处理，分装入容器内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。

5.根据权利要求4的方法，其特征是所述磷脂为卵磷脂、大豆磷脂或氢化大豆磷脂。

6.根据权利要求4的方法，其特征是所述PEG化脂质为聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，聚乙二醇-聚己内酯，聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯，聚乙二醇-聚乳酸，聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯，伯洛沙姆188，聚氧乙烯脂肪酸酯类，聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚其中之一或任何组合形式。

7.根据权利要求4的方法，其特征是所述恒温除去溶剂的温度是40-60℃。

8.根据权利要求4的方法，其中冷冻后通入氮气、氦气或氩气，然后进行轧盖或封口。

Images