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CN1311793A - 抗小rna病毒化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

抗小rna病毒化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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CN1311793A
CN1311793A CN99805627A CN99805627A CN1311793A CN 1311793 A CN1311793 A CN 1311793A CN 99805627 A CN99805627 A CN 99805627A CN 99805627 A CN99805627 A CN 99805627A CN 1311793 A CN1311793 A CN 1311793A
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Abstract

式(Ⅰ)的肽和肽模拟化合物,结构式中的各变量在说明书中定义,这些化合物有效地抑制或阻断小RNA病毒3C蛋白酶的生物活性。这些化合物以及含有这些化合物的药物组合物被用于治疗被一种或多种小RNA病毒如RVP感染的患者或宿主。本发明还提供了制备这些化合物的中间体和合成方法。

Description

抗小RNA病毒化合物及其制备方法和用途 相关申请的交叉引用
本申请与由Dragovich等人递交的美国临时申请60/083,828(申请日为1998年4月30日)有关，该申请公开的内容在此一并引作参考。
              发明领域和工业实用性
本发明涉及肽和肽模拟化合物，这些化合物可以有效地抑制小RNA病毒3C蛋白酶，特别是鼻病毒3C蛋白酶(RVPs)的酶活性，并阻止病毒在细胞培养物中的生长。本发明还涉及这些化合物在制备药物组合物和治疗鼻病毒感染中的用途。本发明还涉及这些化合物的合成方法和用于这些合成中的化合物。
                    发明背景
小RNA病毒是一类感染人和其它动物的含微小无被膜正链RNA的病毒。这些病毒包括人鼻病毒，人脊髓灰质炎病毒，人柯萨奇病毒，人艾柯病毒，人和牛肠病毒，脑心肌炎病毒，脑膜炎病毒，口蹄疫病毒，甲肝病毒等。人鼻病毒是普通感冒的主要病因。至今为止，市场上出售的药物还不能有效治疗普通感冒，而只能减轻症状。
小RNA病毒感染可以通过抑制3C蛋白水解酶来治疗。这些酶是小RNA病毒自然成熟所需要的。它们负责将基因组大的多元蛋白自动催化裂解成基本病毒蛋白。3C蛋白酶家族成员有半胱氨酸蛋白酶，其中巯基总是常常切割谷氨酰胺-甘氨酸的酰胺键。抑制3C蛋白酶被认为可以阻断多元蛋白的蛋白水解，然后通过干扰病毒颗粒的产生能阻止病毒的成熟和复制。因此，用可被特异性识别的选择性小分子抑制这种半胱氨酸蛋白酶的加工过程应该是治疗和治愈这种性质的病毒感染，特别是普通感冒的重要和有用的方法。
最近已经发现了一些小RNA病毒3C蛋白酶的酶活性的小分子抑制剂(即，抗小RNA病毒化合物)。例如，参见Webber等人提交的美国专利申请08/850,398(申请日1997年5月2日)；Dragovich等人提交的美国专利申请08/991,282(申请日1997年12月16日)；Webber等人提交的美国专利申请08/991,739(申请日1997年12月16日)，这些文献在此一并引作参考。这些美国专利申请描述了一些抗小RNA病毒化合物。但仍需要发现作为特别有效的抗小RNA病毒剂的小分子化合物。
                    发明概述
因此，本发明一个目的是要发现抗小RNA病毒特别有效的小分子量化合物。本发明另一目的是要提供用于所说蛋白酶抑制化合物合成的中间体和用于这些合成的合成方法。本发明还一个目的是要得到高效治疗由小RNA病毒3C蛋白酶抑制介导的疾病如普通感冒的药物组合物。
由于本发明化合物的发现这些目的都已经达到。本发明化合物是小RNA病毒3C蛋白酶抑制剂，表现出特别强的抗病毒活性。我们惊喜地发现，这些含有5员杂环基的肽和肽模拟化合物具有很高的鼻病毒蛋白酶抑制活性。我们还惊喜地发现，通过用包括γ-或δ-内酰胺的侧链取代在一些已知鼻病毒蛋白酶抑制化合物中发现的谷氨酰胺类部分可以显著地提高这些肽和肽模拟化合物的鼻病毒蛋白酶抑制活性。
本发明抑制剂可用通式(Ⅰ)表示：
Figure A9980562700221
其中
Y是-N(Ry)-,-C(Ry)(Ry)-或-O-，其中每个Ry分别是-H或低级烷基；
R1是-H,-F,-烷基，-OH,-SH或O-烷基；
R2和R3分别是-H；
Figure A9980562700222
其中n是整数0-5,A1是CH或N,A2和各A3分别选自C(R41)(R41)，N(R41),S,S(O),S(O)2和O,A4是NH或NR41，其中各R41分别是H或低级烷基，条件是在上述A1,A2,(A3)n,A4和C=O构成的环中不能有两个以上杂原子连续出现，而且至少R2和R3之一是
R5和R6分别是H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-OR17,-SR17,-NR17R18,-NR19NR17R18或-NR17OR18其中R17,R18和R19分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基或酰基，条件是至少R7和R8之一是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-OR17,-SR17,-NR17R18-NR19NR17R18或-NR17OR18；
R9是合适的有机部分；以及
Z和Z1分别是H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-C(O)R21,-CO2R21,-CN,-C(O)NR21R22,-C(O)NR21OR22,-C(S)R21,-C(S)NR21R22,-NO2,-SOR21,-SO2R21,-SO2NR21R22,-SO(NR21)(OR22),-SONR21,-SO3R21,-PO(OR21)2,-PO(R21)(R22),-PO(NR21R22)(OR23),-PO(NR21R22)(NR23R24),-C(O)NR21NR22R23或-C(S)NR21NR22R23，其中R21,R22,R23和R24分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21,R22,R23和R24中的任意两个与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基，其中除了不能形成环烷基或杂环烷基的基团之外Z1和R1的定义如上；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基，其中除了不能形成环烷基或杂环烷基的基团之外Z和Z1的定义如上。
本发明还涉及式Ⅰ化合物的前药，可药用盐，有药物活性的代谢物和可药用溶剂化物。
在式Ⅰ化合物的优选的实施方案中，R2和R3分别是-H；
Figure A9980562700241
n是整数0-5，各R41是H或低级烷基，在用*表示的碳原子位置的立体化学结构可以是R或S；条件是至少R2和R3之一是
Figure A9980562700242
R9优选是具有1-3个选自O,N和S杂原子的5员杂环。
在另一优选的实施方案中，式Ⅰ中的各变量如下：Z和Z1分别是H，F，低级烷基，-CO2R21和-C(O)NR21R22，条件是Z和Z1不能二者均为H；其中R21和R22各自分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基。至少R2和R3之一是另一个是H。R5和R6各自分别选自H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，更优选R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基(例如，未取代或取代的苯基甲基)。R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；更优选R7和R8之一是H，另一个是烷基(例如，2-丙基，2-甲基-2-丙基或2-甲基-1-丙基)或芳基甲基(例如，未取代或取代的苯基甲基或萘基甲基)。R9是具有1-3个选自O,N和S杂原子的5员杂环，更优选有至少一个N杂原子和至少一个O杂原子的5员杂环[例如，未取代或取代的1,2-噁唑基(即，异噁唑基)，1,3-噁唑基(即，噁唑基)或噁二唑基(即，1,2,3-噁二唑基，1,2,4-噁二唑基或1,2,5-噁二唑基)]。当R9是噁二唑基时，优选是未取代或一甲基取代的1,2,4-噁二唑基。在特别优选的实施方案中，R9是3-异噁唑基或5-异噁唑基，既可以是未取代的，也可以是被一或两个甲基和/或卤素取代的，氯和氟是优选的卤素取代基。
在一个优选的实施方案中，本发明化合物，前药，可药用盐，有药物活性的代谢物和溶剂化物在H1-HeLa细胞培养测定中具有EC50小于或等于100μM的抗小RNA病毒活性。更优选地，在H1-HeLa细胞培养测定中具有EC50小于或等于10μM的抗小RNA病毒活性。
另一方面，本发明涉及式Ⅱ中间体，优选式Ⅱ’，它们可用于某些化合物的合成过程，
Figure A9980562700251
其中
p是整数0-5；
A11是CH或N,A12和每个A13分别选自C(R61)(R61),N(R61),S,S(O)，S(O)2和O,A14是NH或NR61，其中各R61分别是H，烷基，酰基或芳基，条件是在上述A11,A12,(A13)n,A14和C=O构成的式Ⅱ中的环中不能有两个以上杂原子连续出现；
每个R141分别是H或低级烷基；
R51是H，烷基，酰基或芳基；
R52,R53和R54分别选自H，羟基，烷基，酰基和芳基；或R52,R53和R54其中任意两个一起构成=O或=C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分别选自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，CO2N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及
R55和R56各自分别是H或氮的适当保护基。
本发明还涉及式Ⅱ和Ⅱ’化合物的可药用盐。
本发明还涉及药物组合物，其中含有至少一种治疗有效量的式Ⅰ化合物，或其前药，可药用盐，有药物活性的代谢物或溶剂化物。此外，本发明还涉及抑制小RNA病毒3C蛋白酶的方法，包括施用至少一种治疗有效量的式Ⅰ化合物，或其前药，可药用盐，有药物活性的代谢物或溶剂化物。
             发明详述和优选的实施方案
本发明涉及通式Ⅰ化合物，其中Y,R1,R2,R3,R5,R6,R7,R8,R9,Z和Z1定义如上，涉及其可药用盐，前药，活性代谢物和溶剂化物。
优选地，这些化合物，可药用盐，前药，活性代谢物和溶剂化物具有抗小RNA病毒活性，更优选具有抗鼻病毒活性，在H1-HeLa细胞培养测定中相应于EC50小于或等于100μM，更优选相应于在H1-HeLa细胞培养测定中EC50小于或等于10μM。
本发明还涉及式Ⅰ-A,Ⅰ-B和Ⅰ-C优选化合物，及其可药用盐，前药，活性代谢物和溶剂化物，
Figure A9980562700262
Figure A9980562700264
其中，式Ⅰ-A中的Ry是H或低级烷基，R1,R2,R3,R5,R6,R7,R8,R9，Z和Z1定义如上。
本发明式Ⅰ-A化合物，以下称为“类肽”化合物；Ⅰ-B化合物，以下称为“酮基亚甲基型”化合物；及Ⅰ-C化合物，以下称为“拟肽”化合物；它们之间的区别在于主链，这会影响具体的生物分布或其它物理特性；然而，它们都具有很强的鼻病毒蛋白酶抑制活性。
在上述式Ⅰ-A,Ⅰ-B和Ⅰ-C化合物的优选的实施方案中，
R1是H,F或烷基；
Ry(在式Ⅰ-A中)是H或甲基；
R3,R5和R8各为H；
R2为下列基团之一；
Figure A9980562700271
R6是烷基，优选有一个任选的芳基取代基；
R7是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R9是具有1-3个选自O,N和S杂原子的5员杂环，优选至少一个杂原子是N杂原子，该杂环是未取代或取代的，其中任选的取代基优选是卤素或低级烷基，更优选单-氯或-氟或甲基；及
Z和Z1分别是H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-C(O)R21,-CO2R21,-CN,-C(O)NR21R22,-C(O)NR21OR22,-C(S)R21,-C(S)NR21R22,-NO2,-SOR21,-SO2R21,-SO2NR21R22,-SO(NR21)(OR22),-SONR21,-SO3R21,-PO(OR21)2,-PO(R21)(R22),-PO(NR21R22)(OR23),-PO(NR21R22)(NR23R24),-C(O)NR21NR22R23或-C(S)NR21NR22R23，其中Z和Z1不能二者均为H，而R21,R22,R23和R24分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21,R22,R23和R24中的任意两个与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，或
Z和Z1(二者定义如上)与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基。
在优选的实施方案中，本发明化合物是式Ⅰ-A’,Ⅰ-B’和Ⅰ-C’化合物，其中
R1,Z和Z1定义如上；
n是1或2；
Ry(在式Ⅰ-A’中)是H或低级烷基；
R6是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R7是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-OR17,-SR17,-NR17R18，-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17,R18和R19分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基或酰基；
R9是具有1-3个选自O,N和S杂原子的5员杂环，该杂环是未取代或取代的，其中任选的取代基优选是一或两个低级烷基和/或卤素。
本发明还涉及这些化合物的前药，可药用盐，有药物活性的代谢物和溶剂化物。
在优选的实施方案中，本发明RVP抑制剂选自式Ⅰ-A”,Ⅰ-B”和Ⅰ-C”立体有择化合物之一，及其可药用盐，前药，活性代谢物和溶剂化物，
Figure A9980562700291
其中
Ry,R1,R2,R6,R7,R9,Z和Z1定义如上。
在优选的式Ⅰ-A”,Ⅰ-B”和Ⅰ-C”化合物中，
R1是H,F或甲基；
Ry(在式Ⅰ-A’中)是H或低级烷基；
R2为下列基团之一；
Figure A9980562700292
R6是芳基甲基或芳硫基甲基，其中芳基优选是任选地取代的苯基；
R7是烷基，更优选2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，以及芳基甲基，其中芳基优选苯基或萘基；
R9是异噁唑基，噁唑基或噁二唑基，任选地被一或两个低级烷基和/或卤素取代；及
Z是H,Z1是-CO2R21,-CN或-C(O)NR21R22，其中R21和R22定义如上，或Z和Z1一起形成一个环形酯或酰胺。
更优选地，本发明RVP抑制剂是式Ⅰ-A’”,Ⅰ-B’”和Ⅰ-C’”化合物之一，及其可药用盐，前药，活性代谢物和溶剂化物，
Figure A9980562700301
其中n,Ry,R1,R20,R6,R7,R9,Z和Z1定义如上。
在优选的式(Ⅰ-A”’),(Ⅰ-B”’)和(Ⅰ-C”’)化合物中，
R1是H,F或甲基；
Ry(在式Ⅰ-A’中)是H或低级烷基；
R20是氢；
R6是芳基甲基或芳硫基甲基，其中芳基优选未取代的苯基，或被卤素，低级烷基和/或低级烷氧基取代的苯基；
R7是烷基，更优选的是选自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，以及芳基甲基，其中芳基优选苯基或萘基；
R9是异噁唑基，噁唑基或噁二唑基，任选地被一或两个低级烷基和/或卤素取代；及
Z是H,Z1是-CO2R21,-CN或-C(O)NR21R22，其中R21和R22定义如上，或Z和Z1一起形成一个环形酯或酰胺。
在本发明特别优选的通式(Ⅰ)(及其子结构式)化合物中，R1是H或F。
另一方面，本发明涉及式Ⅱ和Ⅱ’中间体化合物，其中各变量(p,A11,A12,A13,A14,R51,R52,R53,R54,R55,R56和R141)定义如上。这些化合物被用于合成药物上有用的式Ⅰ化合物。
优选的R55和R56基团是H和适当的氮保护基，例如，BOC(叔丁氧羰基)，CBZ(苄氧羰基)，FMOC(芴-9-甲氧羰基)，其它烷氧羰基(例如，甲氧羰基)，及三苯甲基。其它合适的氮保护基可由技术人员很容易地选择(例如，参见Greene和Wutz的《化学合成中的保护基》，第2版，John Wiley & Sons,NY(1991))。优选的R52,R53和R54基团是H，烷氧基，羟基和羰基。
优选的式Ⅱ化合物如下：其中PN是合适的氮保护基，q是1或2。
其它优选的中间体如下：其中BOC是叔丁氧羰基。
当然，优选的立体异构体是
Figure A9980562700322
特别优选的中间体包括下列化合物：
根据本领域使用的习惯，这里结构式中所用的
Figure A9980562700331
表示化学键，是基团或取代基与核心结构或骨架结构连接点。
化学结构中包括手性碳；除非表示出具体方位，否则包括全部两种立体异构体形式。
本文所用术语“烷基”是要代表有饱和和/或不饱和碳原子和氢原子的直链或支链单价基团，如甲基(Me)，乙基(Et)，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，乙烯基，戊烯基，丁烯基，丙烯基，乙炔基，丁炔基，丙炔基，戊炔基，己炔基等，它们可以是未取代的(即，具有碳原子和氢原子)，或被一或多个合适的下面定义的取代基取代(例如，一或多个卤素，如F,Cl,Br或I，其中优选F和Cl)。“低级烷基”是指链上有1-4个碳原子的烷基。
“环烷基”指含有3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13或14个环碳原子的饱和或不饱和的非芳香族单价单环、双环或三环基团，它可以是未取代的或者被一个或多个适当的下面定义的取代基取代，而且，它可以与一个或多个未取代的或者被一个或多个取代基取代的杂环烷基，芳基或杂芳基稠合。环烷基的说明性实例包括下列结构：
“杂环烷基”指含有3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17或18个环原子的饱和或不饱和的非芳香族单价单环、双环或三环基团，它可以是未取代的或者被一个或多个适当的下面定义的取代基取代，环原子中包括1,2,3,4或5个选自氮，氧和硫的杂原子，而且，它可以与一个或多个未取代的或者被一个或多个适当的取代基取代的杂环烷基，芳基或杂芳基稠合。环烷基的说明性实例包括下列结构：
Figure A9980562700334
Figure A9980562700341
“芳基”指含有6,10,14或18个碳原子的芳香族单价单环、双环或三环基团，它可以是未取代的或者被一个或多个适当的下面定义的取代基取代，而且，它可以与一个或多个未取代的或者被一个或多个适当的取代基取代的环烷基，杂环烷基或杂芳基稠合。环烷基的说明性实例包括下列结构：
Figure A9980562700342
“杂芳基”指含有4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17或18个环原子，其中包括1,2,3,4或5个选自氮，氧和硫的杂原子，的饱和或不饱和的非芳香族单价单环、双环或三环基团，它可以是未取代的或者被一个或多个适当的下列取代基取代，环原子中而且，它可以与一个或多个未取代的或者被一个或多个取代基取代的环烷基，杂环烷基或芳基稠合。环烷基的说明性实例包括下列结构：
Figure A9980562700343
Figure A9980562700351
“杂环”指杂芳基或杂环烷基(它们定义如上，可以任选地被取代)。
“酰基”指-C(O)-R，其中R是如下定义的取代基。
“硫代酰基”指-C(S)-R，其中R是如下定义的取代基。
“磺酰基”指-SO2-R，其中R是如下定义的取代基。
“羟基”指-OH。
“氨基”指-NH2。
“烷基氨基”指-NHRa，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基”指-NRaRb，其中Ra和Rb分别为烷基。
“烷氧基”指-ORa，其中Ra是烷基。烷氧基的实例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基等。
“烷氧羰基”指-C(O)ORa，其中Ra是烷基。
“烷基磺酰基”指-SO2Ra，其中Ra是烷基。
“烷基氨基羰基”指-C(O)NHRa，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基羰基”指-C(O)NRaRb，其中Ra和Rb分别为烷基。
“巯基”指-SH。
“烷硫基”指-SRa，其中Ra是烷基。
“羧基”指-C(O)OH。
“氨基甲酰基”指-C(O)NH2。
“芳氧基”指-ORc，其中Rc是芳基。
“杂芳氧基”指-ORd，其中Rd是杂芳基。
“芳硫基”指-SRc，其中Rc是芳基。
“杂芳硫基”指-SRd，其中Rd是杂芳基。
“合适的有机基团”指本领域技术人员可识别的，如通过常规试验，且对本发明化合物的抑制活性没有反作用的任何有机基团。合适的有机基团的说明性实例包括，但不限于，羟基，烷基，氧基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基，磺酰基，巯基，烷硫基，烷氧基，羧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，氨基甲酰基，芳硫基，杂芳硫基等。
术语“取代基”或“适当的取代基”指本领域技术人员可识别或可选择，如通过常规试验，的任何合适的取代基。合适的有机基团的说明性实例包括，但不限于，羟基，卤素，氧基，烷基，酰基，磺酰基，巯基，烷硫基，烷氧基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，羧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，氨基甲酰基，芳氧基，杂芳氧基，芳硫基，杂芳硫基等。
术语“任选地取代的”是要表示未取代的或被一或多个适当取代基取代的特定基团，除非任选的取代基是被明确规定的，在这种情况下该术语表示未取代的或被特定取代基取代的基团。正如上面所定义的，各种基团可以是未取代的或取代的(即，它们任选地被取代)，除非另外指明(例如，通过指出特定基团是未取代的)。
“前药”指在生理条件下或通过溶剂分解被转化成或代谢成具有药物活性的特定化合物的化合物。
“有药物活性的代谢物”指通过特定化合物在体内的代谢生成的药理学活性产物。
“溶剂化物”指仍保留特定化合物生物有效性的可药用溶剂化物形式。溶剂化物的实例包括本发明化合物与水，异丙醇，乙醇，甲醇，DMSO，乙酸乙酯，乙酸或乙醇胺的结合物。
“可药用盐”指保留特定化合物的游离酸和碱生物有效性并且没有不良的生物或其它作用的盐。可药用盐的实例包括硫酸盐，焦硫酸盐，硫酸氢盐，亚硫酸盐，亚硫酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，磷酸二氢盐，偏磷酸盐，焦磷酸盐，氯化物，溴化物，碘化物，乙酸盐，丙酸盐，癸酸盐，辛酸盐，丙烯酸盐，甲酸盐，异丁酸盐，己酸盐，庚酸盐，丙炔酸盐，草酸盐，丙二酸盐，琥珀酸盐，辛二酸盐，癸二酸盐，延胡索酸盐，马来酸盐，丁炔-1,4-二酸盐，己炔-1,6-二酸盐，苯甲酸盐，氯苯甲酸盐，甲基苯甲酸盐，二硝基苯甲酸盐，羟基苯甲酸盐，甲氧基苯甲酸盐，邻苯二甲酸盐，磺酸盐，二甲苯磺酸盐，苯基乙酸盐，苯基丙酸盐，苯基丁酸盐，柠檬酸盐，乳酸盐，γ-羟基丁酸盐，乙醇酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，丙磺酸盐，萘-1-磺酸盐，萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。
如果本发明化合物是碱，所需的盐可以用本领域已知的任何适当方法制备，包括用下列各种酸处理游离碱获得：无机酸，如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；或有机酸，如乙酸，马来酸，琥珀酸，扁桃酸，富马酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，乙醇酸，水杨酸；吡喃糖苷酸，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸；α-羟基酸，如柠檬酸或酒石酸；氨基酸，如天冬氨酸或谷氨酸；芳香酸，如苯甲酸或肉桂酸；磺酸，如对甲苯磺酸或乙磺酸；等等。
如果本发明化合物是酸，所需的盐可以用本领域已知的任何适当方法制备，包括用下列无机碱或有机碱处理游离酸获得：胺(伯、仲或叔胺)；碱金属或碱土金属氢氧化物；等等。合适盐的说明性实例包括从下列物质衍生的有机盐：氨基酸，如甘氨酸和精氨酸；伯、仲和叔胺；及环胺，如哌啶，吗啉和哌嗪；以及从下列物质衍生的无机盐：钠，钙，钾，镁，锰，铁，铜，锌，铝和锂。
如果本发明化合物或其盐或溶剂化物是固体形式，则本领域技术人员应该理解，本发明化合物或其盐或溶剂化物可以不同的晶体形式存在，所有这些形式都属于本发明范围和指定的结构式。
本发明化合物可以单个立体异构体和外消旋体形式存在，也可以对映体和/或非对映体混合物形式存在。所有这些单个的立体异构体，外消旋体以及它们的混合物都属于本发明范围。但是，优选使用光学纯形式的本发明化合物。
正如本领域技术人员所理解的那样，光学纯化合物是一种对映体结构纯的化合物。本文所用术语“光学纯”指至少是活性充足的化合物。优选地，能产生具有所要药理性能的纯本发明化合物的光学量的单个对映体至少要含有90％单一异构体(80％对映体过量(e.e.))，更优选至少95％(90％e.e.)，更加优选至少97.5％(95％e.e.)，最优选至少99％(98％e.e.)。
式Ⅰ化合物或其任一子结构式中的R1优选为H或F。
在式Ⅰ化合物中，优选R9是未取代的或是取代的异噁唑基，其中任选的取代基优选是一个或两个甲基和/或卤素。
特别优选的本发明的实施方案是下述式Ⅰ-A”相关化合物：
Figure A9980562700381
优选的本发明化合物包括上述式Ⅰ-A”中的肽(类肽)化合物(A-1)至(A-8)，其中R1是H,Z是H,Ry是H，且R2,R6,R7,Z1和R9分别定义如下：(A-1),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是    
Figure A9980562700382
(A-2),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是    
Figure A9980562700383
(A-3),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是  
Figure A9980562700384
              R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是   (A-4),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是                ，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是  
Figure A9980562700387
(A-5),R2是     
Figure A9980562700388
                  ，R6是 
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-6),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是  
Figure A99805627003811
             ，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-7),R2是    
Figure A99805627003813
                    ，R6是
Figure A99805627003814
，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A99805627003815
(A-8),R2是   
Figure A9980562700391
                    ，R6是
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A9980562700393
优选的式Ⅰ-A’”类肽化合物还包括下列化合物(A-9)至(A-13)，其中R1是H,Z是H,Z1是CO2CH2CH3,Ry是CH3，及R2,R6,R7和R9分别定义如下：(A-9),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是            ，R7是
Figure A9980562700395
                       和R9是 (A-10),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2和R9是
Figure A9980562700397
(A-11),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是   R7是               和R9是 (A-12),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是   R7是CH2CH(CH3)2和R9是
Figure A99805627003912
(A-13),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是 R7是                和R9是 其它优选的类肽化合物包括下列化合物(A-14)至(A-28)：
Figure A9980562700401
Figure A9980562700411
下述优选的本发明酮基亚甲基型化合物(B-1)至(B-4)与式Ⅰ-B”化合物相关：(B-1),R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是       ，R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3和R9是  
Figure A9980562700424
(B-2),R2是                     ，R6是
Figure A9980562700426
，R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3和R9是 (B-3),R2是                      ，R6是 ，R7是CH(CH3)2,Z和Z1一起形成               
Figure A99805627004210
其中羰基是顺着对应于式Ⅰ中R1的氢的，及R9是
Figure A99805627004211
(B-4),R2是    
Figure A9980562700431
                 R6是
Figure A9980562700432
R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3和R9是
下述优选的本发明拟肽型化合物(C-1)至(C-2)与式Ⅰ-C”化合物相关，其中R1是H：(C-1),Z是H,R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是
Figure A9980562700435
R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A9980562700436
(C-2),Z是H,R2是
Figure A9980562700437
           R6是
Figure A9980562700438
R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
通过从下列取代基中选取不同的变量可以制备与式Ⅰ化合物相关的其它化合物：Ry=H或CH3；R1=H或CH3；R2=
Figure A99805627004310
R6=
Figure A99805627004311
         或苯基甲基(即，苄基)，其中的芳基是任选地被一个、两个或三个分别选自卤素、甲氧基和甲基的取代基取代的芳基；R7=2-甲基-1-丙基，2-丙基，2-甲基-2-丙基，苄基或；及
Figure A99805627004313
本发明还涉及抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性的方法，包括将该蛋白酶与有效量式Ⅰ化合物或其可药用盐，前药，有药物活性的代谢物或溶剂化物接触。例如，可以通过施用式Ⅰ化合物或其可药用盐，前药，有药物活性的代谢物或溶剂化物抑制哺乳动物组织中的小RNA病毒3C蛋白酶活性。更优选地，本方法涉及到抑制鼻病毒蛋白酶活性。
“治疗”指至少减轻包括人在内的哺乳动物的病情，如通过抑制一种或多种小RNA病毒3C蛋白酶的活性缓解病情。所说小RNA病毒3C蛋白酶包括人鼻病毒，人脊髓灰质炎病毒，人柯萨奇病毒，脑心肌炎病毒，脑膜炎病毒和甲肝病毒。“治疗”还包括：(a)预防性地治疗哺乳动物，特别是当发现哺乳动物已经具有疾病症状但还没有确诊已经患有这种疾病时所进行的预先处置；(b)抑制病情发展；和/或(c)整个或部分缓解病情。
作为小RNA病毒3C蛋白酶活性抑制剂的本发明化合物的活性可以用本领域技术人员已知的任何合适方法测量，包括体内和体外测定。测量活性的合适测定法的实例包括本文所述的抗病毒H1-HeLa细胞培养测定法。
式Ⅰ化合物及其可药用盐，前药，有药物活性的代谢物和溶剂化物的给药方法可以根据本领域技术人员认可的给药方式进行。合适的给药方式的说明性实例包括口服，经鼻，胃肠外，局部，透皮和直肠给药。优选鼻内给药。
本发明式Ⅰ化合物或其可药用盐，前药，有药物活性的代谢物和溶剂化物可以药物组合物形式以本领域技术人员可以识别的任何适合的药物剂型给药。合适的药物剂型包括固体，半固体，液体或冻干制剂，例如，片剂，粉剂，胶囊剂，栓剂，悬浮剂，脂质体和气溶胶。本发明药物组合物中还可含有适当赋形剂，稀释剂，媒介物和载体，以及根据所要实现的用途而含有的其它有药物活性的药剂。在优选的实施方案中，本发明药物组合物是以栓剂形式鼻内给药。
制备药物组合物适当剂型的可接受方法是已知的或可以由本领域技术人员按常规确定。例如，药物制剂可以由药剂师用常规技术制备，包括混合，制粒，在制作片剂时，如果需要，还要进行挤压，或者进行混合，填充及适当地将所需成分溶解，制成所要的用于口服，胃肠外，局部，阴道内，鼻内，支气管内，眼内，耳内和/或直肠给药的产品。
固体或液体的可药用载体，稀释剂，媒介物或赋形剂可以用于药物组合物。说明性固体载体包括淀粉，乳糖，硫酸钙二水合物，白土，蔗糖，滑石，明胶，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁和硬脂酸。说明性液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，盐水溶液和水。载体或稀释剂中可以含有适当的缓释材料，例如，独自使用或与蜡一起使用的一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。当使用液体载体时，制剂可以是糖浆，酏剂，乳液，软明胶胶囊，无菌注射液(如溶液)，非水性或水性液体悬浮液形式。
药物组合物的剂量至少含有治疗有效量的活性化合物(即，含有式Ⅰ化合物或其可药用盐，前药，有药物活性的代谢物和溶剂化物)，而且优选制成一个或多个药物剂量单位。将所选剂量以已知的或适当的给药方式给需要治疗的哺乳动物如人类患者施用以抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性。所用剂型包括局部给药剂型如软膏或乳膏；口服剂型；直肠剂型如栓剂；通过注射的胃肠外剂型；或阴道内，鼻内，支气管内，耳内或眼内的连续滴注剂型。
“治疗有效量”指当给需要的哺乳动物施用本发明化合物时其用量足以有效治疗需要通过抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性缓解的病情。所说小RNA病毒3C蛋白酶包括人鼻病毒，人脊髓灰质炎病毒，人柯萨奇病毒，脑心肌炎病毒，脑膜炎病毒和甲肝病毒。要达到治疗有效目的的本发明给定化合物的用量依赖于多种因素，如具体所用的化合物，病情和及其严重程度，需要治疗的哺乳动物的特性，该用量可由医生按常规确定。
为了说明起见，用于治疗鼻病毒感染的本发明化合物的经鼻给药制剂可以制备如下，其中所有百分比均为重量/重量百分比(w/w％)，悬浮液均在纯水中制成。将式Ⅰ化合物微化使粒径减小到D90＜10μm。制成所含活性化合物的最终浓度约为0.01-2％的悬浮液，优选约0.2-2％。可以加入适当防腐剂，从本领域已知的防腐剂中选取，例如，苯扎氯铵/EDTA，合适的最终浓度约为，例如，0.02％/0.01％。还可以含有悬浮剂，如微晶纤维素(最终浓度约为1-1.5％，优选约1.2％)和羧甲基纤维素钠纤维素(最终浓度约为0.1-0.2％，优选约0.13％)的混合物。所含表面活性剂如聚山梨糖酯80的最终浓度约为0.05-0.2％，优选约0.1％。所含强力调节剂如葡萄糖的最终浓度约为4-6％，优选约5％。用无毒酸和/或碱，如HCl和/或NaOH，将溶液的最终pH值适当调节到生理范围，如pH 4-6。
实施例17所列的本发明化合物用于鼻内给药的示例性制剂具有下列组成，其中所有百分比均为重量/重量百分比(w/w％)，悬浮液均在纯水中制成。
  活性化合物        (B-2)        0.2-2％
    防腐剂     苯扎氯铵/EDTA     0.02％/0.01％
    悬浮剂 微晶纤维素/羧甲基纤维素钠     1.2％/0.13％
  表面活性剂     聚山梨糖酯80         0.1％
  张力调节剂        葡萄糖          5％
    pH调节     HCl/NaOH        pH 4-6
一般合成方法
本发明式Ⅰ化合物可以用本发明方法有效地制备，包括采用下述一般方法。这些一般方法中的R1,R2,R3,R5,R6,R7,R8,R9,Ry,Z和Z1定义如上，而所用R4(作为速记符)意指
Figure A9980562700471
其中R7,R8和R9定义如上。
在用来合成式Ⅰ-A类肽化合物的一般方法Ⅰ中，氨基酸A(其中P1是合适的氮的保护基)被用来与氨基醇(或其盐)B进行形成酰胺的反应，生成酰胺C。然后将化合物C脱保护，得到游离胺(或其盐)D。将胺D与氨基酸E(E既可以与R4基团合并，也可以与氮的保护基(P2)合并)进行形成键的反应，生成化合物F。将化合物F氧化成中间体G，然后将其转变成不饱和产物H。如果保护基已经用在氨基酸E或任意一个R基团(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，则要将产物H脱保护和/或进一步修饰，生成脱保护的或修饰的H。
Figure A9980562700472
制备中间体F的另一种方法如下所述。将氨基酸E与氨基酸(或其盐)I(其中P3是合适的氮的保护基)进行键形成反应，生成中间体J。将分子J进行脱保护，得到游离羧酸K，接着将其与氨基醇(或其盐)B进行酰胺形成反应，得到中间体F。
Figure A9980562700473
在用来合成式Ⅰ-A类肽化合物的一般方法Ⅱ中，氨基酸L(其中P1是合适的氮的保护基)被转化成羰基衍生物M，其中“Lv”代表离去基团。进行化合物M的反应，使Lv被R1置换，得到衍生物N。将衍生物N转变成不饱和产物O。将不饱和化合物O脱保护后得到游离胺(或其盐)P，或者先对Z或Z1进行修饰得到O’，然后脱保护得到P。接着将中间体P与羧酸K进行酰胺形成反应，得到终产物H。如果保护基已经用在任意一个R基团(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，则要将产物H脱保护和/或进一步修饰，生成脱保护的或修饰的H。
制备中间体N的另一种方法如下所述。将化合物M进行反应，其中“Lv”被还原成保护的氨基醇Q。接着将中间体Q氧化成衍生物N。
在用来合成式Ⅰ-A类肽化合物的一般方法Ⅲ中，氨基酸L(其中P1是合适的氮的保护基)被转化成羰基衍生物M，其中“Lv”代表离去基团。将化合物M脱保护，得到游离胺(或其盐)R，然后与羧酸K进行酰胺形成反应，得到中间体S。既可以将化合物S直接转化成羰基中间体G，也可以先将化合物S还原成醇F，然后将其氧化成G。进行化合物G的反应，得到不饱和终产物H。如果保护基已经用在任意一个R基团(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，则要将产物H脱保护和/或进一步修饰，生成脱保护的或修饰的H。
Figure A9980562700491
在用来合成式Ⅰ-A类肽化合物的一般方法Ⅳ中，通过与氨基酸A(其中P1是合适的氮的保护基)反应游离胺(或其盐)P(按上述一般方法Ⅱ所述从中间体O制备)被转化成酰胺T。将化合物T进一步脱保护，得到游离胺(或其盐)U，接着用氨基酸E将其转化成H。如果保护基已经用在任意一个R基团(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，则要将产物H脱保护和/或进一步修饰，生成脱保护的或修饰的H。
Figure A9980562700492
在用来合成式Ⅰ-B酮基亚甲基化合物的一般方法Ⅴ中，经过两步反应(碱性水解和随后的氧化反应)光学活性内酯AA(其中P4是合适的氮的保护基，R5和R8分别是H)(可用下述方法或多个文献中所述方法制备，包括：(a)Herold等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)，54:1178(1989)；(b)Bradbury等人，《四面体通讯》(TetrahedronLett.),30:3845(1989)；(c)Bradbury等人，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),33:2335(1990)；(d)Wuts等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),57:6696(1992)；(e)Jones等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),58:2286(1993)；(f)Pegorier等人，《四面体通讯》(Tetrahedron Lett.),36:2753(1995)；及(g)Dondoni等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),60:7927(1995))被转变成羧酸BB。产物不用分离，但要与胺(或其盐)P进行酰胺形成反应，生成终产物CC。接着，将P4保护基及已经用在任一R基团(包括R1,R2,R3,R6和/或R7)和/或Z和/或Z1上的任何其它保护基一起进行脱保护和/或进一步修饰，得到脱保护或修饰的CC。
可以用下面一般方法Ⅵ(见Herold等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),54:1178(1989)；Bradbury等人，《四面体通讯》(Tetrahedron Lett.),30:3845(1989)及Bradbury等人，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),33:2335(1990))将内酯AA制成光学活性形式。将与R7合并的γ,δ-不饱和羧酸DD转变成相应的酰氯(未示出)。将酰氯与手性胺或手性噁唑烷酮进行酰胺形成反应，得到衍生物EE(其中X1是手性胺或手性噁唑烷酮)。接着，将化合物EE脱质子化，并将所得烯醇化物用对应于R6的亲电体进行非对映体选择性烷基化反应，得到其中R5是H的化合物FF。将FF进行卤代内酯化反应，得到卤代内酯GG，其中R5和R8是H，“hal”代表Br或I。先将卤代内酯GG转变成叠氮化物HH，然后将其转化成内酯AA(其中P4是合适的氮的保护基)。
Figure A9980562700511
γ,δ-不饱和羧酸DD可以用下面一般方法Ⅶ(见Herold等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),54:1178(1989))制备。将与R7合并的醛II与乙烯基溴化镁偶合，得到醇JJ，然后用以下三步过程将醇JJ转变成γ,δ-不饱和羧酸DD：(ⅰ)在160℃用丙二酸二酯和催化剂Ti(OEt)4处理1小时；(ⅱ)在190℃加热4小时；及(ⅲ)用乙醇的KOH在回流温度进行水解反应。
羧酸BB还可以用下面一般方法Ⅷ(见Haffman等人，《四面体》(Tetrahedron),53:7119(1997))制备。将与R7合并的氨基酸KK(其中P4是合适的氮的保护基)转变成β-酮酯LL。将化合物LL脱质子化，并将所得阴离子与合并了R6的三氟甲磺酸酯MM缩合。将所得偶合产物用三氟乙酸处理，得到酮酯NN，然后将其水解，得到羧酸BB。如果碱性水解导致差向异构作用，则可以先将酮酯NN进行酯交换(丙烯醇，Ti(Oi-Pr)4)，然后在中性条件下(Pd(PPh3)4，吗啉)进行脱保护，得到羧酸BB。用三氟甲磺酸酐和2,6-二甲基吡啶处理相应的醇可以依次制得三氟甲磺酸酯MM。
可以用一般方法Ⅸ(见Askin等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),57:2771(1992)和McWilliams等人，《美国化学会会志》(J.Am.Chem.Soc.),118:11970(1996))制备内酯AA。将合并了R7且其中P4是合适的氮的保护基的氨基酸KK用Luly等人(《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),52:1487(1987))所述方法转变成环氧化物OO(单个非对映体)。将环氧化物OO与从化合物PP(合并了R6且其中X2是手性辅助剂，包括(1S,2R)-1-氨基-2,3-二氢化茚-2-醇丙酮化物)衍生的阴离子进行缩合，得到偶合产物QQ。然后在酸性条件下进行环化，得到内酯AA。可以用Askin等人(《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),57:2771(1992))所述方法从相应的羧酸(未示出)制备化合物PP。用于制备式Ⅰ-C拟肽化合物的一般方法Ⅹ解释了制备中间体TT的方法。将氨基酸E与醇RR(其中P5是合适的氧的保护基)进行酯键形成反应，生成中间体SS。将分子SS脱保护得到游离的羧酸TT，可以用它代替上述所有一般方法中的羧酸K。
Figure A9980562700531
具体合成方法
下列具体方法也可以被用来制备多种本发明化合物。
具体方法Ⅰ描述了具体中间体O1的制备过程，它可以被用来制备上述一般方法中的中间体O。因此，酯A1(按Chida等人，《化学会会志，化学通讯》(J.Chem.Soc.,Chem.Commun.),1064(1992),所述方法制备)经水解得到酸B1，然后将其转变成噁唑烷酮C1。将化合物C1脱质子化，并将所得烯醇化物进行非对映体选择性烷基化反应，得到烯丙基中间体D1。将所得产物通过臭氧分解进行氧化，并将所得的醛(未示出)进行还原性胺化反应，生成内酰胺E1。E1经过酸催化的甲醇分解反应得到醇F1。将此中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，得到醛(未示出)，接着将其进行烯烃形成反应，得到具体的中间体O1。
Figure A9980562700532
具体方法Ⅱ描述了具体中间体O2的制备过程，它可以被用来制备上述一般方法中的中间体O。将烯丙基中间体D1进行氢硼化反应/氧化反应，得到伯醇(未示出)。将所得产物用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将得到的醛(未示出)进行还原性胺化反应，生成内酰胺G1。G1经过酸催化的甲醇分解反应得到醇H1。该中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将得到的醛(未示出)进行烯烃形成反应，得到具体的中间体O2。下列中间体P1,P2和P3可用于上述一般方法，代替中间体O，改变R2位置上的取代基。
Figure A9980562700542
中间体P1的合成方法如下所述。将上述中间体C1脱质子化，然后用适当二硫化物(对称的或混合的)捕获所得烯醇化物，得到硫化物p1(P是氧的适当保护基)。除去氧保护基得到醇p2。将此中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将所得的醛(未示出)进行还原性胺化反应，得到内酰胺p3。p3经过酸催化的甲醇分解反应得到醇p4。将此中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将所得的醛(未示出)进行烯烃形成反应，得到中间体p5。可用该中间体代替上述一般合成方法中的中间体O；或者除去内酰胺保护基，得到中间体P1。
为了合成中间体P2，中间体C1被脱质子化，然后用适当的亲电子氧(如氧氮杂环丁烷(oxaziridine))源捕获所得烯醇化物，得到醇p6。将此中间体用适当功能化的烷基卤化物或三氟甲磺酸盐烷基化，得到醚p7(P是氮的适当保护基)。除去氮保护基，将所得的胺(未示出)进行环化反应，得到内酰胺p8。p8经过酸催化的甲醇分解反应得到醇p9。将此中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将所得的醛(未示出)进行烯烃形成反应，得到中间体P2。
Figure A9980562700552
具体中间体P3的合成方法如下所述。将中间体D1(如上所述)臭氧化，然后将所得醛(未示出)还原成相应的醇(也未示出)。对所得中间体进行保护，得到化合物p10(P1是氧的适当保护基)。将p10上的亚酰胺官能团水解成羧酸p11，并将该中间体与适当保护的羟胺衍生物偶合，得到酰胺p12(P2是氧的适当保护基，它对于除去P1的条件是稳定的)。除去P1保护基，并将所得醇(p13)转变成适当的离去基团(卤化物或三氟甲磺酸盐，未示出)。除去P2保护基，并将所得异羟肟酸环化，得到中间体p14。p14经过酸催化的甲醇分解反应得到醇p15。将此中间体用Swern方法(或其它合适的氧化反应条件)进行氧化，并将所得的醛(未示出)进行烯烃形成反应，得到中间体P3。
Figure A9980562700562
具体方法Ⅲ描述了中间体Q1,Q2和Q3的制备方法，它们可用于上述一般方法。用公开发表方法(Ikuta等人，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),30:1995(1987))的改进方法将已知的化合物I1转变成文献中的分子J1。另外，将氨基酸酯K1进行保护反应，得到甲硅烷基醚L1。用DIBAL(或用其它合适的还原反应条件)还原该醚，然后将所得醛(未示出)与中间体J1一起进行烯烃形成反应，生成M1。M1经过甲硅烷基的脱保护反应得到醇N1。将此中间体进行多种氢化反应，得到中间体Q1,Q2和Q3。然后相继通过氧化反应和烯化反应将这些中间体转变成类似于中间体O1(见上述具体方法Ⅰ)的中间体。
Figure A9980562700571
本领域技术人员将会认识到，本发明多种化合物可以按照上述一般和具体方法以及现有技术制备，包括本文引作参考的文献，它们都一并公开在此作为参考。另外，本领域技术人员可以根据下述实施例或通过本文所述合成方法的改进方法制备各种本发明化合物。实施例
下面给出各种优选式Ⅰ化合物的实例。下列实例中化合物的结构用以下一种或多种方法确定：质子核磁共振谱仪，红外光谱仪，元素微量分析，质谱分析，薄层色谱，熔点测定和沸点测定。如果给出的表示化合物的结构式与其化学命名不符，以结构式为准。
质子核磁共振(1H NMR)谱是用Varian UNITY+300谱仪在300MHz场强下测定的。化学位移用相对于内标四甲基甲硅烷标准下移多少百万分之一(ppm,δ)表示。或者，1H NMR谱以残余质子溶剂信号形式表示如下：CHCl3=7.26ppm；DMSO=2.49ppm；C6HD5=7.15ppm。峰的多重性标示如下：s=单峰；d=双重峰；dd=双重双重峰；t=三重峰；q=四重峰；br=宽共振峰；及m=多重峰。偶合常数用赫兹表示。红外吸收(IR)光谱用Perkin-Elmer 1600系列的FTIR光谱仪获得。元素微量分析由Atlantic Microlab Inc.(Norcross,GA)完成，给出的元素分析结果在理论值±0.4％范围之内。用硅胶60(Merck Art 9385)进行快速柱色谱。分析薄层色谱(TLC)用预包层Silica 60F254(Merck Art 5719)进行。熔点(缩写为mp)用Mel-Temp仪测得且不加修正。除非另有说明，否则，所有反应都在隔膜密封的烧瓶中在稍微正压的氩气下进行。所用的商品化试剂都是分别从它们各自的供应商那里得到，只有下列这些除外：四氢呋喃(THF)是在使用前从钠-二苯甲酮羰游基蒸馏而得；二氯甲烷(CH2Cl2)是在使用前从氢化钙蒸馏而得；无水氯化锂是在真空条件下在110℃加热过夜后制得的。
本文用到下列缩写：Et2O代表乙醚；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；及MTBE代表叔丁基甲醚。其它缩写包括：CH3OH(甲醇)，EtOH(乙醇)，EtOAc(乙酸乙酯)，DME(乙二醇二甲醚)，Ac(乙酰基)，Me(甲基)，Ph(苯基)，Tr(三苯甲基)，Cbz(苄氧羰基)，Boc(叔丁氧羰基)，TFA(三氟乙酸)，DIEA(N,N-二异丙基乙胺)，DBU(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯)，HOBt(1-羟基苯并三唑水合物)，PyBOP(苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸鏻)，HATU[0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基六氟磷酸脲鎓]，EDC[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐]，DCC(二环己基碳化二亚胺)，DDQ(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯并醌)，DMAP(4-二甲氨基吡啶)，Gln(谷氨酰胺)，Leu(亮氨酸)，Phe(苯丙氨酸)，Val(缬氨酸)，His(组氨酸)，1-Naphth(1-萘基丙氨酸)，2-Naphth(2-萘基丙氨酸)，α-t-Butyl-Gly(α-叔丁基甘氨酸)，(S)-Pyrrol-Ala[(2S,3’S)-2-氨基-3-(2-氧吡咯烷-3’-基)丙酸]，及(S)-Piper-Ala[(2S,3’S)-2-氨基-3-(2’-氧-哌啶-3’-基)丙酸]。另外，“L”代表天然存在的氨基酸。
用于氨基酸缩写的简化命名系统被用来鉴定一些中间体和终产物。当命名化合物时，斜体的氨基酸缩写表示在残基的C端进行了修饰，其应用如下：(1)丙烯酸酯被表示为“E”(反)丙烯酸酯；(2)取代的3-亚甲基-二氢呋喃-2-酮被表示为“E”(反)2-(α-乙烯基-γ-丁内酯)；及(3)5-乙烯基异噁唑被表示为“E”(反)丙烯异噁唑。此外，对于所有肽序列，术语“AA1ψ[COCH2]-AA2”表明通常由酰胺键连接的两个氨基酸(AA1和AA2)被酮基亚甲基二肽等排物部分替代。对于所有肽序列，术语“AA1-NCH3-AA2”表明通常连接两个氨基酸(AA1和AA2)的酰胺键被N-甲基酰胺键替代。对于所有肽序列，术语“AA1-O-AA2”表明通常连接两个氨基酸(AA1和AA2)的酰胺键被酯键替代。
本发明实施方案的实施例如下所述：实施例15-(3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯)-异噁唑(对比化合物1)的制备(对比化合物#1)中间体Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe的制备
将Cbz-L-(Tr-Gln)(0.26g,0.50mmol,1当量)加到乙酰氯(0.25ml,3.52mmol,7.0当量)的CH3OH(5ml)溶液中，并在23℃搅拌1小时。减压除去溶剂，剩余物溶解于CH2Cl2(100ml)，然后相继用水(100ml)，饱和NaHCO3(100ml)和盐水(100ml)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩。剩余物经快速柱色谱(20％EtOAc于己烷)纯化，得到Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe(0.23g，产率84％)为白色固体：
mp=139-140℃；IR(cm-1)1742,1207；1H NMR(DMSO-d6)δ1.16(t,1H,J=7.0),1.77(m,1H),1.97(m,1H),3.61(s,3H),4.99(m,1H),5.03(s,2H),7.02-7.55(m,20H),7.69(d,1H,J= 7.7),8.59(s,1H)；Anal.(C33H32N2O5)C,H,N.中间体Cbz-L-(Tr-谷氨醇)的制备
将氯化锂(0.24g,5.66mmol,2.0当量)加到Cbz-L-(Tr-Gln)-Ome(1.50g,2.79mmol,1当量)的2∶1 THF∶EtOH(30ml)溶液中，并将混合物在23℃搅拌直到固体全部溶解(约10分钟)。加入硼氢化钠(0.21g,5.55mmol,2.0当量)，并将混合物在23℃搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物溶解于水(50ml)中，并用10％HCl将pH值调至2-3。用EtOAc(50ml)萃取产物，在用MgSO4干燥之前相继用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机相，剩余物经快速柱色谱(梯度洗脱：20→50％EtOAc于苯)纯化，得到Cbz-L-(Tr-谷氨醇)(1.02g,产率72％)为白色玻璃状固体：mp=66-70℃；IR(cm-1)3318,1699,1510,1240；1HNMR(DMSO-d6)δ1.40(m,1H),1.72(m,1H),2.26(m,2H),3.17-3.50(m,3H),4.64(t,1H,J=5.0),5.00(s,2H),7.00-7.40(m,20H),6.96(d,1H,J=8.5),8.54(s,1H)；Anal.(C32H32N2O4)C,H,N.中间体L-(Tr-谷氨醇)的制备
将Cbz-L-(Tr-谷氨醇)(1.93g,3.79mmol)的CH3OH(25ml)悬浮液和Pd/C(10％,0.19g)在氢气罐中搅拌4小时，然后用一层Celite过滤。将滤液减压浓缩后得到L-(Tr-谷氨醇)(1.38g，产率98％)为白色非晶状固体：mp=191-193C；IR(cm- 1)3255(br),1642,1527；1H NMR(DMSO-d6)δ1.29(m,1H),1.53(m,1H),2.29(m,2H),3.08(m,1H),3.18(m,2H),3.38(s,br,2H),4.43(s,br,1H),7.14-7.28(m,15H),8.62(s,1H).中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)的制备
将羰基二咪唑(0.17g,1.05mmol,1.0当量)加到Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.41g,1.0mmol,0.95当量)的THF(10ml)溶液中，并将反应混合物在23℃搅拌1小时。加入L-(Tr-谷氨醇)(0.39g,1.05mmol,1当量)，然后将所得溶液搅拌过夜。减压除去挥发性物质，剩余物经快速柱色谱(梯度洗脱：2→4％CH3OH于CHCl3)纯化，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)(0.47g，产率62％)为白色非晶状固体：mp=92-95℃；IR(cm-1)3302,1657,1520,1238；1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(t,6H,J=7.0),1.30(m,2H),1.44(m,2H),1.75(m,1H),2.22(m,2H),2.82(m,1H),2.97(m,1H),3.14(m,1H),3.25(m,1H),3.63(m,1H),3.95(m,1H),4.48(m,1H),4.65(t,1H,J=5.0),4.96(d,1H,J=13.0),5.02(d,1H,J=13.0),7.07-7.33(m,25H),7.42(d,1H,J=8.0),7.66(d,1H,J=8.5),7.86(d,1H,J=8.0),8.52(s,1H)；Anal.(C47H52N4O6·0.5H2O)C,H,N.中间体Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H的制备
将邻碘酰苯甲酸(0.63g,2.25mmol,3.0当量)加到23℃的Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)(0.58g,0.75mmol,1当量)的DMSO(7.5ml)溶液中。搅拌2小时后减压除去DMSO。剩余物用CH2Cl2稀释两次，蒸发溶剂除去剩余的DMSO。用EtOAc(30ml)稀释剩余物并过滤，滤液依次用5％Na2SO3/5％NaHCO3溶液(30ml)，水(30ml)和盐水(30ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。减压除去溶剂，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H(0.53g，产率92％)为白色玻璃状固体，无需进一步纯化即可直接使用：
1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(m,6H),1.00-1.98(m,5H),2.27(m,2H),2.84(m,1H),3.02(m,1H),3.98(m,2H),4.58(m,1H),4.99(s,2H),7.14-7.32(m,25H),7.39(d,1H,J=8.1),7.97(d,1H,J=8.5),8.38(d,1H,J=8.0),8.60(s,1H),9.20(s,1H).中间体5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-异噁唑的制备
将KN((CH3)3Si)2(0.95ml 0.5M的THF溶液，0.477mmol,1.0当量)加到0℃的异噁唑-5-基甲基-三苯基溴化鏻(0.222g,0.525mmol,1.1当量)的THF(20ml)悬浮液中，然后将反应混合物在0℃搅拌30分钟。加入Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H(0.366g,0.477mmol,1当量)的THF(10ml)溶液，然后将反应混合物在23℃搅拌过夜。真空除去溶剂，用MgSO4干燥。减压除去溶剂，剩余物经快速硅胶色谱(梯度洗脱：0→1％CH3OH于CHCl3)纯化，得到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-异噁唑(0.307g，产率70％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)3423,1678,1568,1265,1043,711；1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.81(m,6H),1.21-1.36(m,2H),1.40-1.55(m,1H),1.60-1.80(m,2H),2.34-2.45(m,2H),2.82-2.87(m,1H),2.91-3.04(m,1H),3.95-4.00(m,1H),4.41-4.50(m,1H),4.53-4.60(m,1H), 4.99 (q,2H,J=6.0),6.19(d,1H,J=15.0),6.36(dd,1H,J=15.0,6.0),6.46(s,1H),7.15-7.33(m,20H),7.42(d,1H,J=9.0),7.56-7.63(m,5H),7.96(d,1H,J= 9.0),8.08(d,1H,J=9.0),8.51(s,1H),8.58(s,1H)；HRMS calcd.for C51H53N5O6+Cs964.3050(M+Cs),found 964.3018.产物5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯}-异噁唑的制备
将三氟乙酸(1ml)加到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-异噁唑(0.214g,0.257mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中，然后将反应混合物在23℃搅拌过夜。真空除去溶剂，剩余物经快速硅胶色谱(梯度洗脱：0→1％CH3OH于CHCl3)纯化，得到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯}-异噁唑(0.054g，产率36％)为白色固体：
1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.83(m,6H),1.26-1.46(m,2H),1.47-1.62(m,1H),1.69-1.79(m,2H),2.04-2.29(m,2H),2.83-2.88(m,1H),2.97-3.10(m,1H),3.99-4.12(m,1H),4.37-4.43(m,1H),4.48-4.57(m,1H),5.01(q,2H,J=6.0),6.20(d,1H,J=15.0),6.36(dd,1H,J=15.0,6.0),6.45(d,1H,J=3.0),6.75(s,1H),7.14-7.29(m,6H),7.31-7.40(m,5H),7.45(d,1H,J=9.0),8.04(d,1H,J=9.0),8.07(d,1H,J=9.0),8.51(d,1H,J=3.0)；Anal.(C32H39N5O6)C,H,N.实施例23-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-1)的制备
Figure A9980562700631
中间体Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me的制备
将氯甲酸异丁酯(4.77ml,36.8mmol,1.0当量)加到0℃的Boc-L-(Tr-Gln)-OH(18.7g,36.7mmol,1当量)和4-甲基吗啉(8.08ml,73.5mmol,2.0当量)的CH2Cl2(250ml)溶液中。将反应混合物在0℃搅拌20分钟，然后加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.60g,36.7mmol,1.0当量)。将所得溶液在0℃搅拌20分钟，然后在23℃搅拌2小时，之后，在水(150ml)和CH2Cl2(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩。剩余物经快速柱色谱(梯度洗脱：40→20％己烷于EtOAc)纯化，得到Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me(16.1g，产率82％)为白色泡沫：IR(cm-1)3411，3329,3062,1701,1659；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s,9H),1.63-1.77(m,1H),2.06-2.17(m,1H),2.29-2.43(m,2H),3.17(s,3H),3.64(s,3H),4.73(s,br,1H),5.38-5.41(m,1H),7.20-7.31(m,15H)；Anal.(C31H37N3O5)C,H,N.中间体Boc-L-(Tr-Gln)-H的制备
将二异丁基氢化铝(50.5ml 1.5M的甲苯溶液，75.8mmol,2.5当量)加到-78℃的Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me(16.1g,30.3mmol,1当量)的THF溶液中，并将反应混合物在-78℃搅拌4小时。连续加入甲醇(4ml)和1.0M HCl(10ml)，并将混合物升温至23℃。用Et2O(150ml)稀释所得悬浮液，再依次用1.0M HCl(3×100ml)，半饱和NaHCO3(100ml)和水(100ml)洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，然后浓缩，得到粗Boc-L-(Tr-Gln)-H(13.8g，产率97％)为白色固体：
mp=114-116℃；IR(cm-1)3313,1697,1494；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s,9H),1.65-1.75(m,1H),2.17-2.23(m,1H),2.31-2.54(m,2H),4.11(s,br,1H),5.38-5.40(m,1H),7.11(s,1H),7.16-7.36(m,15H),9.45(s,1H).中间体3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(22.9ml 1.0M的THF溶液，22.9mmol,1.0当量)加到-78℃的膦酰基乙酸三乙酯(5.59g,22.9mmol,1.0当量)的THF(200ml)溶液中，并将所得溶液在此温度搅拌20分钟。通过插管加入粗Boc-L-(Tr-Gln)-H(10.8g,22.9mmol,1当量)的THF(50ml)，然后将反应混合物在-78℃搅拌2小时。升温至0℃10分钟，然后在0.5M HCl(150ml)和1∶1 EtOAc∶己烷(2×150ml)的混合物之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩，剩余物经快速柱色谱(40％EtOAc于己烷)纯化，得到3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(10.9g，产率88％)为白色泡沫：
IR(cm-1)3321,1710；1H NMR(CDCl3)δ1.27(t,3H,J=7.2),1.42(s,9H),1.70-1.78,(m,1H),1.80-1.96(m,1H),2.35(t,2H,J=7.0),4.18(q,2H,J=7.2),4.29(s,br,1H),4.82-4.84(m,1H),5.88(dd,1H,J=15.7,1.6),6.79(dd,1H,J= 5.7,5.3),6.92(s,1H),7.19-7.34(m,15H)；Anal.(C33H38N2O5)C,H,N.中间体3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷(4.0M,15ml)加到23℃的3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(3.26g,6.0lmmol,1当量)的相同溶剂(15ml)的溶液中。2小时后减压除去挥发性物质，得到3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl。将其溶解于CH2Cl2(60mml)，然后依次加入Boc-L-Phe-OH(1.59g,6.01mmol,1.0当量)，HOBt(1.22g,9.02mmol,1.5当量)，4-甲基吗啉(1.98ml,18.03mmol,3当量)和EDC(1.73g,9.02mmol,1.5当量)。将反应混合物在23℃搅拌过夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩，剩余物经快速柱色谱(40％EtOAc于己烷)纯化，得到3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(3.55g，产率85％)为白色泡沫：        IR(cm-1)3306,1706,1661；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t,3H,J=7.2),1.38(s,9H),1.65-1.76(m,1H),1.87-1.99(m,1H),2.25-2.27(m,2H),2.94-3.01(m,2H),4.14-4.26(m,3H),4.48-4.53(m,1H),4.95(s,br,1H),5.64(d,1H,J=15.8),6.29(d,1H,J=8.1),6.64(dd,1H,J=15.8,5.4),6.80(s,br,1H),7.14-7.32 (m,20H)；Anal.(C42H47N3O6)C,H,N.中间体3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷(4.0M,15ml)加到23℃的3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(6.40g,9.28mmol,1当量)的相同溶剂(15ml)的溶液中。2小时后减压除去挥发性物质。将剩余物溶解于CH2Cl2(100ml)，然后依次加入Boc-L-Leu-OH(2.58g,11.1mmol,1.2当量)，HOBt(1.88g,13.9mmol,1.5当量)，4-甲基吗啉(3.06ml,27.8mmol,3当量)和EDC(2.67g,13.92mmol,1.5当量)。将反应混合物在23℃搅拌过夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩，剩余物经快速柱色谱(2％CH3OH于CH2Cl2)纯化，得到3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(6.46g，产率87％)为白色泡沫：IR(cm-1)3284,1651,1515；1H NMR(CDCl3)δ0.86(d,3H,J=6.0),0.89(d,3H,J=6.0),1.29(t,3H,J=7.2),1.34(s,9H),1.38-1.60(m,3H),1.62-1.89(m,1H),1.95-1.97(m,1H),2.28-2.30(m,2H),3.06-3.08(m,2H)3.92-3.94(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.48-4.51(m,2H),4.67(m,1H),5.66(d,1H,J=15.9),6.51-6.57(m,2H),6.69(dd,1H,J=15.6,5.1),7.10-7.33(m,21H)；Anal.(C48H58N4O7·33H2O)C,H,N.中间体3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷(4.0M,3ml)加到23℃的3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.216g,0.27mmol,1当量)的相同溶剂(3ml)的溶液中。2小时后减压除去挥发性物质。将剩余物溶解于CH2Cl2(15ml)，冷却到0℃，然后依次加入三乙胺(0.112ml,0.81mmol,3.0当量)和5-甲基异噁唑-3-酰氯(0.058g,0.40mmol,1.5当量)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在水(50ml)和CH2Cl2(2×50ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后浓缩，剩余物经快速柱色谱(2％CH3OH于CH2Cl2)纯化，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.199g，产率91％)为白色泡沫：IR(cm-1)3286,1650,1541；1H NMR(CDCl3)δ0.86(d,3H,J=5.4),0.89(d,3H,J=5.7),1.28(t,3H,J=7.2),1.43-1.59(m,2H),1.67-1.75(m,1H),1.95-1.99(m,2H),2.28(t,2H,J=7.2),2.41(s,3H),2.97-3.04(m,1H),3.06-3.13(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.31-4.33(m,1H),4.48-4.52(m,2H),5.72(d,1H,J=15.9),6.19(s,1H),6.41(d,1H,J=7.5),6.59(d,1H,J=8.1),6.71(dd,1H,J=15.3,6.0),6.95(d,1H,J=6.6),7.09-7.21(m,21H)；Anal.(C48H53N5O7·H2O)C,H,N.产物3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制备
将三并丙基甲硅烷(0.077ml,0.376mmol,1.8当量)和三氟乙酸(3ml)依次加到23℃的3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.185g,0.21mmol,1当量)的CH2Cl2(3ml)溶液中，得到亮黄色溶液。将反应混合物在23℃搅拌30分钟，其间它逐渐变得无色。减压除去挥发性物质，所得白色固体用Et2O(10ml)研制，过滤并风干，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(0.87g，产率81％)为白色固体：mp=223-225℃；IR(cm-1)3298,1662,1544,1457,1278；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d,3H,J=6.0),0.85(d,3H,J=6.3),1.23(t,3H,J=6.9),1.38-1.42(m,1H),1.48-1.77(m,4H),2.04(t,2H,J=7.2),2.46(s,3H),2.78-2.86 (m,1H),2.93-3.00(m,1H),4.11(q,2H,J=7.2),4.36-4.54(m,3H),5.63(d,1H,J=15.6),6.56(s,1H),6.68(dd,1H,J=15.9,5.4),6.76(s,br,1H),7.19(m,6H),8.09(d,1H,J=8.1),8.14(d,1H,J=7.8),8.58(d,1H,J=7.5)；Anal.(C29H39N5O7)C,H,N.实施例33-((异噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯
Figure A9980562700661
中间体3-((异噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
采用上述(实施例2)制备3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法，由3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯和异噁唑-5-酰氯制得该化合物：
IR(cm-1)3282,1643,1530；1H NMR(CDCl3)δ0.87(t,6H,J=6.6),1.29(t,3H,J=7.2),1.49-1.64(m,3H),1.69-1.80(m,1H),1.90-1.96(m,1H),2.30(t,2H,J=7.2),2.92-2.96(m,1H),3.02-3.09(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.42-4.48(m,3H),5.69(d,1H,J=15.3),6.65(s,br,1H),6.66(dd,1H,J=15.9,5.4),6.76-6.79(m,2H),7.00-7.31(m,22H),8.24(s,1H)；Anal.(C47H51N5O7·0.75H2O)C,H,N.3-((异噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制备
采用类似于上述(实施例2)制备3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的方法，由3-((异噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯制得标题化合物：
mp=217-220℃；IR(cm-1)3302,1655,1541；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d,3H,J=6.0),0.86(d,3H,J=6.0),1.21(t,3H,J=7.2),1.42-1.75(m,5H),2.04(t,2H,J=7.2),2.78-2.87(m,1H),2.94-3.01(m,1H),4.11(q,2H,J=7.2),4.37(m,1H),4.41-4.52(m,2H),5.64(d,1H,J=15.6),6.68(dd,1H,J=15.9,5.4),6.76(s,br,1H),7.12-7.19(m,7H),8.02(d,1H,J=8.1),8.20(d,1H,J=8.1),8.74(d,1H,J=1.8),8.94(d,1H,J=7.8)；Anal.(C28H37N5O7)C,H,N.实施例43-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-3)的制备
Figure A9980562700671
中间体3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl(按上面实施例2所述制备，1.37g,3.10mmol)溶解于23℃的DMF(10ml)。相继加入二异丙基乙胺(1.08ml,6.20mmol)和Boc-L-(4-Me-Phe)-OH(0.87g,3.10mmol)。将反应物冷却到0℃。加入HATU(1.18g,3.10mmol),允许反应升温至室温。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。有机相依次用10％HCl溶液(25ml)，饱和NaHCO3溶液(25ml),H2O(25ml)和盐水(25ml)洗涤。干燥(MgSO4)溶剂，过滤，剩余物经快速柱色谱(梯度洗脱：0→0.75％CH3OH于CHCl3)纯化，得到3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.48g，产率68％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1713,1655,1491,1175；1H NMR(DMSO-d6)δ1.20(t,3H,J=7.0),1.30(s,9H),1.62-1.66(m,2H),2.23(s,3H),2.32(m,2H),2.72(m,1H),2.84(m,1H),4.07-4.09(m,1H),4.10(q,2H,J=7.0),4.38(m,1H),5.64(d,1H,J=15.5),6.72(dd,1H,J=15.5,5.5),6.88(d,1H,J=8.0),7.04(d,2H,J=7.7),7.10(d,2H,J=7.7),7.14-7.28(m,15H),8.02(d,1H,J=8.0),8.53(s,1H)；Anal.(C43H49N3O6)C,H,N.中间体3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.45g,2.06mmol)溶解于1,4-二噁烷(27ml)，并加入HCl的1,4-二噁烷(4.0M,14ml)溶液。将反应物在室温搅拌4小时。蒸除溶剂，将剩余物溶于EtOAc(50ml)。有机相依次用饱和NaHCO3溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，减压除去溶剂，得到1.23g米白色非晶状固体。用上述合成3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法将所得固体与Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH偶合，得到3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(产率49％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1655,1507,1248,1171；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(s,9H),1.21(t,3H,J=7.0),1.37(s,9H),1.52-1.70(m,2H),2.22(s,3H),2.26-2.28(m,2H),2.73-2.91(m,2H),3.86(d,1H,J=9.6),4.05-4.14(m,2H),4.31-4.36(m,1H),4.47-4.55(m,1H),5.54(d,1H,J=15.4),6.37(d,1H,J=9.6),6.65(dd,1H,J=15.8,5.5),7.01(d,2H,J=8.1),7.07(d,2H,J=7.7),7.11-7.32(m,15H),8.03(d,1H,J=8.1),8.10(d,1H,J=7.7),8.49(s,1H)；Anal.(C49H60N4O7·0.4H2O)C,H,N.中间体3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脱保护方法将3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脱保护，然后将所得胺(0.22g,0.30mmol)溶解于CH2Cl2(3ml)。加入吡啶(0.025ml,0.32mmol)，然后冷却到0℃。加入5-甲基异噁唑-3-酰氯(0.046g,0.32mmol)。允许反应物升至室温，并搅拌1小时。真空除去溶剂，对剩余物进行快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→1％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.19g，产率77％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1651,1518；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s,9H),1.20(t,3H,J=7.0),1.55-1.67(m,2H),2.14(s,3H),2.18-2.28(m,2H),2.45(s,3H) 2.70-2.77(m,1H),2.86-2.93(m,1H),4.07-4.14(m,2H),4.46(d,1H,J=9.6),4.50-4.55(m,1H),5.54(d,1H,J=15.8), 6.59(s,1H),6.65(dd,1H,J=15.8,5.5,15.8),6.95(d,2H,J=8.1),7.05(d,2H,J=8.1),7.13-7.28(m,15H),7.60(d,1H,J=9.6),8.13(d,1H,J=8.1),8.41(d,1H,J=8.1),8.51(s,1H)；Anal.(C49H55N5O7)C,H,N.产物3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-We-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.17g,0.20mmol)溶解于的CH2Cl2(4ml)。加入三氟乙酸(0.4ml)，然后将反应物在室温搅拌6小时。真空除去溶剂，对剩余物进行快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→2％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(0.085g，产率73％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1661,1541,1206；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s,9H),1.21(t,3H,J=7.0),1.60-1.73(m,2H),2.01-2.06(m,2H),2.14(s,3H),2.50(s,3H),2.70-2.77(m,1H),2.86-2.93(m,1H),4.07-4.14(m,2H),4.34-4.37(m,1H),4.45(d,1H,J=9.6),4.50-4.55(m,1H),5.57(d,1H,J=15.8),6.60(s,1H),6.66(dd,1H,J=15.8,5.5),6.75(s,br,1H),6.96(d,2H,J=8.1),7.06(d,2H,J=7.7),7.17(s,br,1H),7.65(d,1H,J=9.6),8.14(d,1H,J=8.1),8.40(d,1H,J=7.7)；Anal.(C30H41N5O7·0.5TFA·0.5H2O)C,H,N.实施例53-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-4)的制备中间体3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
将BoC--L-(4-F-Phe)-OH(1.41g,5.0mmol)溶解于THF(50ml)。先后加入3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl(按上面实施例2所述制备，1.0g,5.0mmol)和Et3N(0.70ml,5.0mmol)。加入羰基二咪唑(0.81g,5.0mmol)，将反应物在室温搅拌20小时。真空除去溶剂，剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→1％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.13g,产率32％)为白色非晶状固体：     IR(cm-1)1712,1666,1510,1169；1H NMR(DMSO-d6)δ1.20(t,3H,J=7.0),1.29(s,9H),1.61-1.70(m,2H),2.27-2.34(m,2H),2.74-2.78(m,1H),2.86-2.90(m,1H),4.06-4.13(m,3H),4.36-4.40(m,1H),5.58(d,1H,J=15.6),6.71(dd,1H,J=15.6,5.5),6.98(d,1H,J=8.1),7.03-7.09(m,2H),7.14-7.28(m,17H),8.06(d,1H,J=8.1),8.53(s,1H)；LRMS(M+Na)730.中间体3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述制备3-(Boc-L-α-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法先将3-(Boc-L-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脱保护，然后与Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH偶合，得到3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(产率54％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1720,1651,1506,1168；1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(s,9H),1.20(t,3H,J=7.0),1.36(s,9H),1.53-1.67(m,2H),2.23-2.28(m,2H),2.79-2.94(m,2H),3.85(d,1H,J=9.9),4.09(q,2H,J=7.0),4.31-4.35(m,1H),4.53-4.55(m,1H),5.46(d,1H,J=15.8),6.36(d,1H,J=9.2),6.64(dd,1H,J=15.8,5.5),6.97-7.03(m,2H),7.13-7.28(m,17H),8.08(d,1H,J=8.1),8.14(d,1H,J=8.1),8.49(s,1H)；Anal.(C48H57N4O7F)C,H,N.中间体3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Glv)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述制备3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法先将3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脱保护，然后与5-甲基异噁唑-3-酰氯偶合，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(产率74％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1659,1535,1510；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s,9H),1.20(t,3H,J=7.4),1.52-1.67(m,2H),2.23-2.28(m,2H),2.45(s,3H),2.75-2.82(m,1H),2.89-2.96(m,1H),4.09(q,2H,J=7.0),4.32-4.36(m,1H),4.45(d,1H,J=9.6),4.50-4.55(m,1H),5.44(d,1H,J=15.6),6.58(s,1H),6.63(dd,1H,J=15.6,5.5,15.6),6.93-6.99(m,2H),7.13-7.28(m,17H),7.64(d,1H,J=9.6),8.16(d,1H,J=8.5),8.46(d,1H,J=8.1),8.51(s,1H)；Anal.(C48H52N5O7F)C,H,N.产物3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述制备3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的方法将3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脱保护，得到3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(产率80％)为白色非晶状固体：IR(cm-1)1653,1543,1223；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s,9H),1.21(t,3H,J=7.0),1.59-1.75(m,2H),2.01-2.06(m,2H),2.46(s,3H),2.75-2.82(m,1H),2.89-2.96(m,1H),4.09(q,2H,J=7.0),4.33-4.36(m,1H),4.44(d,1H,J=9.6),4.50-4.58(m,1H),5.47(d,1H,J=15.8),6.59(s,1H),6.64(dd,1H,J=15.8,5.5),6.75(s,br,1H),6.94-7.00(m,2H),7.16(s,br,1H),7.18-7.23(m,2H),7.69(d,1H,J=9.6),8.16(d,1H,J=8.1),8.44(d,1H,J=8.1)；Anal.(C29H38N5O7F)C,H,N.实施例63-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-5)的制备中间体(4S)-4-(2’-羧乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
将氢氧化钠(27ml 4.0M的H2O溶液，108mmol,3当量)加到(4S)-4-(2-甲氧羰基乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯[按Chida等人所述方法制备(《化学学会杂志，化学通讯》(J.Chem.Soc.,Chem.Commun.),1064(1992)),10.5g,36.5mmol,1当量]的CH3OH(150ml)溶液中，然后将所得浑浊的反应混合物在23℃搅拌3.5小时。减压浓缩混合物至约30ml，然后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并的有机相用MgSO4干燥，然后重力过滤。减压浓缩滤液，真空干燥剩余物，得到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(10.0g，粗产率为100％)。该产物无需纯化即可使用。1HNMR(CDCl3，旋转异构体的混合物)δ1.49(s),1.57(s),1.60(s),1.84-2.05(m),2.39-2.41(m),3.71-3.74(m),3.91-4.05(m).中间体(4S,4”S)-4-{3’-(4”-苄基-2 ”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
在0℃将三乙胺(8.87ml,63.6mmol,3.0当量)和新戊酰氯(2.61ml,21.2mmol,1.0当量)依次加到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(5.80g,21.2mmol,1当量)的THF(450ml)溶液中。将浑浊的反应混合物在0℃搅拌3.5小时，然后依次加入氯化锂(0.988g,23.3mmol,1.1当量)和(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮(3.57g,20.1mmol,0.95当量)。升温至23℃并搅拌19小时后将反应混合物在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并的有机相用半饱和Na2CO3(150ml)洗涤，MgSO4干燥，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物经快速柱色谱纯化(30％EtOAc于己烷)，得到(4S,4”S)-4-{3’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(7.17g，产率83％)为无色油：IR(cm- 1)2978,1783,1694；1H NMR(CDCl3，旋转异构体的混合物δ1.49(s),1.59(s),1.63(s),2.01-2.10(m),2.76(dd,J=13.5,9.8),2.82-3.13(m),3.30-3.41(m),3.76-3.82(rn),3.90(s,br),3.97(dd,J=9.0,5.6),4.10-4.19(m),4.63-4.71(m),7.22-7.36(m)；Anal.(C23H32N2O6)C,H,N.中间体(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
在-78℃将(4S,4”S)-4-{3’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(7.17g,16.6mmol,1当量)的THF(50ml)溶液加到在相同溶剂(150ml)中的双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠(16.6ml 1.0M的THF溶液，16.6mmol,1当量)溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌20分钟，然后加入烯丙基碘(4.55ml，49.8mmol,3.0当量)。在-78℃又搅拌3小时后将反应混合物保持在-45℃2小时，然后在半饱和NH4Cl和5％Na2S2O3(300ml)的2∶1混合物与EtOAc和己烷的1∶1混合物(2×200ml)之间分配。合并的有机相用H2O(200ml)洗涤，MgSO4干燥，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物经快速柱色谱纯化(15％EtOAc于己烷)，得到(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.29g，产率55％)为无色油：IR(cm-1)2978,1780,1695；1H NMR(CDCl3，旋转异构体的混合物)δ1.45(s),1.49(s),1.68-1.80(m),2.13-2.47(m),2.49-2.67(m),3.32(dd,J=13.4,3.1),3.69-3.97(m),4.11-4.21(m),4.66-4.74(m),5.06-5.13(m),5.74-5.88(m),7.20-7.36(m)；Anal.(C26H36N2O6)C,H,N.中间体(1S,3S)-{3-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基丙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
在-78℃将臭氧鼓入(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.29g,9.08mmol,1当量)的CH2Cl2(200ml)和CH3OH(0.735ml,18.1mmol,2.0当量)溶液直到蓝色不再变化。用氩气净化反应混合物直到它变得无色。加入二甲硫醚(6.67ml,90.8mmol,10当量)，将混合物在-78℃搅拌3.5小时，然后在0℃保持1小时。将反应混合物在H2O(200ml)与EtOAc和己烷的1∶1混合物(2×200ml)之间分配后用MgSO4干燥合并的有机相，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物无需进一步纯化即可使用。
在23℃将上述产物溶解于THF和EtOH(240ml)的2∶1混合物，依次加入2,4-二甲氧基苄胺盐酸盐(7.40g,36.3mmol,4.0当量)，乙酸钠(2.98g,36.2mmol,4.0当量)和氰基硼氢化钠(1.14g,18.1mmol,2.0当量)。将所得悬浮液在23℃搅拌18小时，然后在0.5MHCl(400ml)和EtOAc(2×200ml)之间分配。用半饱和NaHCO3(300ml)洗涤合并的有机相，Na2SO4干燥，然后减压浓缩。让剩余物通过短硅胶柱(用50％EtOAc的己烷洗脱)，得到(3’S,4S)-{1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基甲基}-2,2-二甲基-噁唑烷-3-羧酸叔丁酯及杂质(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮。
将产物溶解于CH3OH(100ml)，加入TsOH-H2O(0.345g,1.81mmol,0.20当量)。将反应混合物加热到50℃，保持在此温度2.5小时。冷却到23℃后减压浓缩反应混合物至约20ml，然后在半饱和NaHCO3(150ml)与GH2Cl2和CH3OH(2×150ml)的9∶1混合物之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后减压浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.62g,44％)为泡沫：IR(cm-1)3328,1669；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s,9H),1.50-1.75(m,2H),1.90-2.00(m,1H),2.17-2.27(m,1H),2.52-2.62(m,1H),3.14-3.24(m,2H),3.51-3.65(m,3H),3.70-3.78(m,1H),3.80(s,6H),4.35(d,1H,J=14.3),4.48(d,1H,J=14.3),5.51-5.54(m,1H),6.42-6.46(m,2H),7.09-7.12(m,1H)；Anal.(C21H32N2O6)C,H,N.
中间体3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pvrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
将DMSO(0.270ml,3.80mmol,3当量)滴加到-78℃的草酰氯(0.66ml,1.90mmol,1.5当量)的CH2Cl2(14ml)溶液中。将反应混合物搅拌20分钟，用插管沿着反应容器壁加入(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.518g,1.27mmol,1当量)。搅拌20分钟后滴加三乙胺(1.06ml,7.60mmol,6当量)，然后将反应混合物搅拌1.5小时。加入乙酸(0.479ml,8.37mmol,6.6当量)，将反应混合物升至0℃5分钟，然后用MTBE(200ml)稀释，依次用水，饱和NaHCO3和盐水(各25ml)洗涤。有机相经Na2SO4干燥和浓缩后得到粗产物醛(0.516g，定量(quant.))，无需进一步纯化即可使用。
在-78℃将双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠(1.23ml 1.0M的THF溶液，1.23mmol,1当量)加到膦酰基乙酸三乙酯(0.244ml,1.23mmol,1当量)的THF(15ml)溶液中，并将所得溶液在此温度搅拌20分钟。将上面制备的粗醛(0.500g,1.23mmol,1当量)的THF(13ml)用插管沿着反应容器壁加到反应容器中，然后将反应混合物在-78℃搅拌45分钟。升温至0℃7分钟，在0.5M HCl(20ml)和MTBE(2×50ml)之间分配。合并的有机相在MgSO4上干燥，然后浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(60％EtOAc于己烷)，得到3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.356g,61％)为白色泡沫：Rf=0.43(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307,1708,1678；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t,3H,J=7.2),1.43(s,9H),1.52-1.70(m,2H),1.98-2.09(m,1H),2.21-2.34(m,1H),2.48-2.59(m,1H),3.16-3.24(m,2H),3.80(s,6H),4.18(q,2H,J=7.2),4.27-4.40(m,1H),4.41(s,2H),5.40(d,1H,J=8.1),5.95(dd,1H,J=15.6,1.6),6.41-6.48(m,2H),6.86(dd,1H,J=15.6,5.3),7.08-7.13(m,1H)；Anal.(C25H36N2O7·0.25H2O)C,H,N.中间体3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯方法(实施例4)，由3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-(4-F-Phe)-OH制备此中间体。Rf=0.34(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3258,1705,1666；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t,3H,J=7.2),1.45(s,9H),1.51-1.66(m,2H),1.78-1.90(m,1H),2.06-2.23(m,2H),2.99(dd,1H,J=13.7,6.2),3.11(dd,1H,J=13.7,5.3),3.17-3.23(m,2H),3.80(s,3H),3.81(s,3H),4.18(q,2H,J=7.2),4.35(s,2H),4.38-4.51(m,2H),5.29-5.37(m,1H),5.76(d,1H,J=15.8),6.43-6.47(m,2H),6.72(dd,1H,J=15.8,5.3),6.83-6.91(m,2H),7.09-7.17(m,3H),7.92(br,1H)；Anal.(C34H44FN3O8)C,H,N.中间体3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，由3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-Val-OH制备本化合物。Rf=0.24(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3284,1713,1678br,1643；1H NMR(CDCl3)δ0.91(d,3H,J=6.8),0.97(d,3H,J=6.8),1.28(t,3H,J=7.2),1.45(s,9H),1.50-1.62(m,2H),1.66-1.82(m,1H),1.90-2.02(m,1H),2.08-2.21(m,2H),2.94(dd,1H,J=13.5,5.8),3.17-3.27(m,3H),3.80(s,3H),3.82(s,3H),3.97-4.05(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.27(d,1H,J=14.3),4.29-4.38(m,1H),4.40(d,1H,J=14.3),4.86-4.93(m,1H),5.10(d,1H,J=8.7),5.76(dd,1H,J=15.6,1.2),6.45-6.52(m,2H),6.70(dd,1H,J=15.6,5.4),6.79-6.88(m,3H),7.12-7.22(m,3H),8.30(d,1H,J=5.9)；Anal.(C39H53FN4O9)C,H,N.中间体3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pvrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述制备3-((5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例4)，由3-{Boc-L-Val-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和异噁唑-5-酰氯制备本化合物。Rf=0.36(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3284,1717,1650；1H NMR(CDCl3)δ0.97(d,3H,J=6.8),1.01(d,3H,J=6.8),1.28(t,3H,J=7.2),1.51-1.64(m,2H),1.72-1.84(m,1H),1.95-2.05(m,1H),2.11-2.33(m,2H),2.48(s,3H),2.98(dd,1H,J=13.7,5.6),3.16-3.24(m,3H),3.80(s,3H),3.81(s,3H),4.17(q,2H,J=7.2),4.23(d,1H,J=14.3),4.31-4.42(m,1H),4.40(d,1H,J=14.3),4.44-4.50(m,1H),4.88-4.96(m,1H),5.79(dd,1H,J=15.6,1.4),6.43-6.49(m,3H),6.71(dd,1H,J=15.6,5.3),6.80-6.88(m,2H),6.94(d,1H,J=9.3),7.11-7.17(m,3H),7.29(d,1H,J=8.7),8.33(d,1H,J=6.2)；Anal.(C39H48FN5O9·0.5H2O)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(S)-pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.263g,0.351mmol,1当量)，水(2滴)和DDQ(0.104g,0.458mmol,1.3当量)的悬浮液回流9小时，然后用8小时冷却到室温。用CH2Cl2(200ml)稀释反应混合物，用饱和NaHCO3和1N NaOH的2∶1混合物(20ml)洗涤。干燥(MgSO4)有机相，然后蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：2→3％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.117g,56％)为白色固体：
mp=219-220℃；Rf=0.23(5％ CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3401br,3295,1655 br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(d,3H,J=6.8),0.97(d,3H,J=6.5),1.29(t,3H,J=7.2),1.54-1.65(m,1H),1.72-1.91(m,2H),2.07-2.26(m,2H),2.28-2.39(m,1H),2.49(d,3H,J=0.9),3.01(dd,1H,J=13.8,6.1),3.12(dd,1H,J=13.8,6.4),3.26-3.38(m,2H),4.18(q,2H,J=7.2),4.34(dd,1H,J=8.7,7.2),4.43-4.54(m,1H),4.90(dt,1H,J=9.0,6.2),5.76(dd,1H,J=15.6,1.6),6.00(s,1H),6.42(q,1H,J=0.9),6.72(dd,1H,J=15.6,5.4),6.86-6.94(m,2H),7.01(d,1H,J=9.0),7.11-7.18(m,2H),7.21(d,1H,J=8.7),7.76(d,1H,J=7.2)；Anal.(C30H38FN5O7)C,H,N.实施例73-[(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-Gln]-E-丙烯酸乙酯(化合物A-6)的制备
Figure A9980562700781
中间体3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，由3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-(4-F)-Phe-OH制备本化合物：IR(cm-1)3328,1707,1506,1168；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t,3H,J=7.2),1.37(s,9H),1.66-1.78(m,1H),1.88-1.98(m,1H),2.32(t,2H,J=6.6),2.85-2.92(m,1H),2.97-3.04(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.52(m,1H),4.96(m,1H),5.60(d,1H,J=15.6),6.56(d,1H,J=8.1),6.66(dd,1H,J=15.6,5.1),6.80(s,br,1H),6.92-6.98(m,2H),7.08-7.12(m,2H),7.17-7.23(m,6H),7.24-7.33(m,10H)；Anal.(C42H46FN3O6)C,H,N.中间体3-{Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，由3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-Val-OH制备本化合物：IR(cm-1)3319,1657,1511,1172；1H NMR(CDCl3)δ0.78(d,3H,J=6.9),0.87(d,3H,J=6.9),1.29(t,3H,J=7.2),1.37(s,9H),1.69-1.79(m,1H),1.93-2.06(m,2H),2.33(t,2H,J=7.2),2.97-3.04(m,1H),3.73-3.77(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.42-4.54(m,2H),4.80(d,1H,J=6.9),5.61(dd,1H,J=15.6,1.5),6.44(d,1H,J=7.8),6.69(dd,1H,J=15.9,5.4),6.71(s,br,1H),6.92-6.98(m,2H),7.07-7.13(m,2H),7.18-7.31(m,16H),8.02(s,1H)；Anal.(C47H55FN4O7)C,H,N.中间体3(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，由3-{BoC-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯和5-甲基异噁唑-3-酰氯制备本化合物：
IR(cm-1)3319,1657,1511,1172；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d,3H,J=6.9),0.89(d,3H,J=6.9),1.30(t,3H,J=7.2),1.68-1.80(m,1H),1.95-2.06(m,1H),2.08-2.17(m,1H),2.34(t,2H,J=7.2),2.44(s,3H),2.87-2.94(m,1H),3.01-3.08(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.48-4.56(m,2H),5.68(dd,1H,J=15.6,1.8),6.23(s,1H),6.39(d,1H,J=7.8),6.70(dd,1H,J=15.9,5.4),6.84-6.90(m,3H),7.04-7.08(m,4H),7.17-7.30(m,16H)；Anal.(C47H50N5O7)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似于上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，将3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯脱保护，得到标颗化合物：IR(cm-1)3284,1652,1542；1H NMR(DMSO-d6)δ0.76(d,3H,J=6.9),0.79(d,3H,J=6.9),1.20(t,3H,J=7.2),1.57-1.76(m,2H),1.96-2.06(3H),2.46(s,3H),2.75-2.83(m,1H),2.89-2.96(m,1H),4.09(q,2H,J=7.2),4.13-4.25(m,1H),4.35(m,1H),4.49-4.56(m,1H),5.53(d,1H,J=15.6),6.57(s,1H),6.66(dd,1H,J=15.6,5.4),6.75(s,br,1H),6.97-7.03(m,2H),7.17-7.24(m,3H),8.15(d,1H,J=7.8),8.24(d,1H,J=8.7),8.32(d,1H,J=8.1)；Anal.(C28H36N5O7)C,H,N.实施例83-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-7)的制备中间体 Boc-L-(4-F-Phe)-OBn的制备
将DCC(0.765g,3.71mmol,1.05当量)，苄醇(0.347ml,3.35mmol,0.95当量)和DMAP(0.022g,0.18mmol,0.05当量)依次加到Boc-L-(4-F-Phe)-OH(1.0g,3.53mmol,1当量)的CH2Cl2(15ml)溶液中。搅拌18小时后滤除沉淀，滤液用MTBE(75ml)稀释，先后用10％KHSO4和盐水(各10ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥和蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(12％EtOAc于己烷)，得到Boc-L-(4-F-Phe)-Obn(0.992g,79％)为白色固体。1H NMR谱数据与文献上记载的相符(见Jackson等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),57:3397(1992))。中间体Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn的制备
将Boc-L-(4-F-Phe)-Obn(2.0g,5.36mmol,1当量)在CH2Cl2(20ml)和TFA(10ml)的混合物中搅拌1小时，然后再加入TFA(10ml)，并将反应溶液再搅拌1小时。蒸发掉挥发性物质，将剩余物溶解于DMF(30ml)。加入Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH(1.24g,5.36mmol,1当量)，然后将溶液冷却到0℃。依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.80ml,16.1mmol,3当量)和HATU(2.04g,5.37mmol,1当量)。搅拌20分钟后经1小时让反应混合物升至室温，然后用MTBE(500ml)稀释，先后用5％KHSO4(100ml)，饱和NaHCO3(50ml)和盐水(50ml)洗涤。干燥有机相并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(20％EtOAc于己烷)，得到Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-Obn(2.04g,78％)为白色泡沫：Rf=0.49(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307,1737,1655 br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(s,9H),1.45(s,9H),3.04(dd,1H,J=14.2,5.8),3.11(dd,1H,J=14.2,6.1),3.79(d,1H,J=9.3),4.88(dr,1H,J=7.8,5.8),5.08(d,1H,J=12.0),5.16-5.23(m,1H),5.19(d,1H,J=12.0),6.08(d,1H,J=7.8),6.83-6.97(m,4H),7.28-7.40(m,5H)；Anal.(C27H35FN2O5)C,H,N.中间体3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pvrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷(4.0M,8ml)溶液加到3-{Boc-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.309g,0.648mmol,1当量)的1,4-二噁烷(8ml)溶液中。搅拌1.5小时后蒸发掉挥发性物质，得到粗胺盐为泡沫。
将钯炭(10％,200mg)加到Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-Obn(2.04g,4.19mmol)的EtOAc(200ml)溶液中。用氢气罐改变反应氛围。搅拌3小时后将气氛改为氩气，并用#3和#5 Whatman滤纸过滤反应混合物。蒸发滤液，得到白色泡沫。
将所得泡沫与上步制备的粗胺盐在DMF(5ml)中合并，然后冷却到0℃。相继加入N,N-二异丙基乙胺(0.339ml,1.95mmol,3当量)和HATU(0.247g,0.650mmol,1当量)。搅拌20分钟后经1小时让反应混合物升至室温，然后用MTBE(100ml)稀释，先后用5％KHSO4,饱和NaHCO3和盐水(各15ml)洗涤。干燥有机相并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(60％EtOAc于己烷)，得到3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.364g,74％)为白色泡沫：Rf=0.34(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3284,1713,1655；1H NMR(CDCl3)δ1.01(s,9H),1.28(t,3H,J=7.2),1.46(s,9H),1.50-1.63(m,2H),1.68-1.81(m,1H),1.85-1.99(m,1H),2.09-2.20(m,1H),2.94(dd,1H,J=13.5,5.4),3.15-3.26(m,3H),3.80(s,3H),3.82(s,3H),3.97(d,1H,J=9.3),4.17(q,2H,J=7.2),4.27-4.38(m,1H),4.29(d,1H,J=14.3),4.42(d,1H,J=14.3),4.84-4.92(m,1H),5.22(d,1H,J=9.6),5.74(dd,1H,J=15.6,1.6),6.45-6.53(m,2H),6.69(dd,1H,J=15.6,5.4),6.76-6.87(m,3H),7.10-7.28(m,3H),8.26(d,1H,J=5.9)；Anal.(C40H55FN4O9)C,H,N.中间体3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，由3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯和异噁唑-5-酰氯制备本化合物：Rf=0.60(10％CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)3295,1713,1666,1643；1H NMR(CDCl3)δ1.07(s,9H),1.29(t,3H,J=7.2),1.51-1.64(m,2H),1.71-1.83(m,1H),1.96-2.07(m,1H),2.11-2.21(m,1H),2.49(s,3H),2.99(dd,1H,J=13.7,5.9),3.13-3.26(m,3H),3.80(s,3H),3.81(s,3H),4.18(q,2H,J=7.2),4.23-4.48(m,4H),4.85-4.93(m,1H),5.76(dd,1H,J=15.6,1.4),6.40-6.52(m,3H),6.71(dd,1H,J=15.6,5.3),6.79-6.88(m,2H),6.92(d,1H,J=9.0),7.09-7.22(m,3H),7.37(d,1H,J=9.0),8.27(d,1H,J=6.2)；Anal.(C40H50FN5O9·0.25H2O)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Glv)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3'-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例6)，由3-{(5’-甲基异噁唑-3'-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯制备本化合物：               Rf=0.30(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3307 br,1684,1660；1H NMR(CDCl3)δ1.02(s,9H),1.29(t,3H,J=7.2),1.51-1.61(m,1H),1.75-1.97(m,2H),2.14-2.25(m,1H),2.28-2.40(m,1H),2.50(s,3H),3.03(d,2H,J=6.5),3.27-3.42(m,2H),4.18(q,2H,J=7.2),4.36(d,1H,J=9.8),4.52-4.63(m,1H),4.86-4.95(m,1H),5.71(dd,1H,J=15.6,1.4),6.44(s,1H),6.57-6.64(m,1H),6.73(dd,1H,J=15.6,5.3),6.83-6.91(m,2H),7.09-7.15(m,2H),7.28-7.36(m,2H),7.59(d,1H,J=8.1)；Anal.(C31H40FN5O7)C,H,N.实施例93-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-8)的制备中间体(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-5’-羟戊基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
将硼烷-四氢呋喃复合物(0.96ml 1.0M的THF溶液，0.96mmol,1当量)溶液加到0℃的(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2 ”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(按实施例6所述制备，0.455g,0.963mmol,1当量)的THF(3ml)溶液中。搅拌30分钟后加水(3ml)和过硼酸钠四水合物(0.148g,0.962mmol,1当量)，并除去冰浴。1小时后用MTBE(125ml)稀释，然后用水(15ml)和盐水(2×15ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(50％EtOAc于己烷)，得到(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-5’-羟戊基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(0.339g,72％)为无色玻璃：Rf=0.41(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3486,1780,1693；1H NMR(CDCl3)δ1.42-1.85(m,21H),2.13-2.24(m,1H),2.70(dd,1H,J=13.1,10.0),3.29-3.38(m,1H),3.61-4.22(m,8H),4.63-4.76(m,1H),7.19-7.38(m,5H)；Anal.(C26H38N2O7·0.5H2O)C,H,N.中间体(1S,3'S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
将(2’S,4S,4”S)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-5’-羟戊基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.88g,7.92mmol,1当量)溶解于Et3N(3.97ml,28.5lmmol,3.6当量)。将混合物冷却到-12℃，然后以保持温度在8-17℃之间的速度加入三氧化硫-吡啶复合物(5.04g,31.67mmol,4当量)的DMSO(150ml)溶液。将溶液在23℃搅拌3小时，然后在冰水浴中冷却，并加入H2O(150ml)淬灭反应。所得溶液用EtOAc萃取(2×150ml)。合并的有机相先后用5％柠檬酸(100ml)和盐水(100ml)洗涤，Na2SO4干燥，然后过滤。减压除去溶剂，真空干燥剩余物，得到白色泡沫(3.53g)。
在所得产物(3.53g,7.22mmol,1当量)于THF和EtOH(120ml)的2∶1混合物溶液中加入2,4-二甲氧基苄胺盐酸盐(5.88g,28.89mmol,4.0当量)，NaOAc(2.37g,28.89mmol,4当量)和NaBH3CN(0.908g,14.45mmol,2当量)。将反应混合物搅拌过夜(20小时)，用MTBE(200ml)稀释。有机相依次用10％KHSO4(100ml)，饱和NaCO3(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到浅黄色泡沫。
在该泡沫(3.34g,7.22mmol,1当量)的CH3OH(50ml)溶液中加入对甲苯磺酸(0.275g,1.44mmol,0.2当量)。将反应混合物在50℃搅拌2.5小时，然后用CH2Cl2(100ml)稀释。有机相用饱和NaHCO3(100ml)洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.33g，三步的总产率44％)为白色泡沫：                           1H NMR(CDCl3):δ1.44(s,9H),1.71-1.85(m,2H),1.92-1.98(m,2H),2.40-2.48(m,1H),2.71-2.78(m,1H),3.19-3.32(m,2H),3.45-3.69(m,4H),4.11-4.20(m,2H),4.68(m,1H),5.47(m,1H),6.44(s,1H),7.20-7.33(m,2H).产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯转化成产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例6)，将(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯转化成产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯。
Rf=0.24(5％ CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3284 br,1713,1655,1637 br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(d,3H,J=6.8),0.98(d,3H,J=6.8),1.29(t,3H,J=7.2),1.43-1.56(m,2H),1.66-1.78(m,1H),1.83-2.05(m,4H),2.16-2.28(m,1H),2.49(s,3H),3.00(dd,1H,J=13.7,6.2),3.13(dd,1H,J=13.7,5.9),3.21-3.37(m,2H),4.18(q,2H,J=7.2),4.36-4.45(m,2H),4.80-4.88(m,1H),5.76(dd,1H,J=15.6,1.6),5.96(s,1H),6.43(s,1H),6.70(dd,1H,J=15.6,5.3),6.81(d,1H,J=8.7),6.86-6.98(m,2H),7.09-7.19(m,2H),7.22-7.29(m,1H),8.07(d,1H,J=6.5).实施例103-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-1)的制备
Figure A9980562700841
中间体反-6-甲基-庚-4-烯酸的制备
将异丁醛(9.59g,133mmol,1当量)的THF(50ml)溶液用添加漏斗滴加到0℃乙烯基溴化镁(133ml 1.0M的THF溶液，133mmol,1.0当量)的THF(300ml)溶液中。添加完毕后将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后加入乙基丙二酰氯(17.0ml,133mmol,1.0当量)。在0℃搅拌1小时后将反应混合物在饱和NH4Cl(150ml)与EtOAc和己烷(2×200ml)的1∶1混合物之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩。剩余物经硅胶过滤纯化(用5％EtOAc的己烷洗脱)，得到中间体丙二酸酯(11.5g,40％)。无法描绘该酯的特性，但可以将其与Ti(OEt)4(1.13ml,5.39mmol,0.10当量)(净)混合，在190℃加热4小时，然后冷却到60℃。依次加入EtOH(50ml)和6.0M KOH(50ml)，将所得棕色混合物回流4小时。冷却到23℃后用中等玻璃料过滤反应混合物，滤液在水(150ml)和Et2O(2×150ml)之间分配。水相用浓盐酸酸化至pH=2(用pH试纸测定)，然后用EtOAc和己烷(2×150ml)1∶1混合物萃取。剩余物经减压蒸馏得到反-6-甲基-庚-4-烯酸(3.58g,47％)，为无色液体：bp 107-112℃(1 Torr)；IR(cm- 1)2960,1711；1H NMR(CDCl3)δ0.96(d,6H,J=6.5),2.18-2.45(m,5H),5.31-5.50(m,2H)；Anal.(C8H14O2)C,H.中间体反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺的制备
在23℃将草酰氯(2.25ml,25.8mmol,1.05当量)加到反-6-甲基-庚-4-烯酸(3.50g,24.6mmol,1当量)和N,N-二甲基甲酰胺(0.03ml,0.39mmol,0.016当量)的苯(60m1)溶液中。将反应混合物在23℃搅拌2小时，然后减压浓缩。将所得油溶解于THF(20ml)，然后通过插管加到0℃的(1R,2R)-(-)-假麻黄素(3.87g,23.4mmol,1当量)和三乙胺(3.92ml,28.1mmol,1.2当量)的THF(150ml)溶液中。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在半饱和NH4Cl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：40→50％EtOAc的己烷)，得到反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.31g,93％)为粘稠的油：Rf=0.35(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3382,1622；1H NMR(CDCl3，旋转异构体的混合物)δ0.96(d,J=6.8),0.97(d,J=6.5),1.11(d,J=6.9),2.18-2.59(m),2.82(s),2.92(s),3.99-4.04(m),4.32-4.42(m),4.44-4.49(m),4.55-4.62(m),5.32-5.49(m),7.24-7.42(m)；Anal.(C18H27NO2)C,H,N.中间体反-6-甲基-2S-(4-氟苄基)-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺的制备
在-78℃将正丁基锂(32.5ml 1.6M己烷溶液，52.0mmol,3.1当量)加到无水氯化锂(7.18g,169mmol,10当量)和二异丙胺(7.80ml,55.7mmol,3.3当量)的THF(250ml)悬浮液中。将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，在0℃保持5分钟后再冷却到-78℃。通过插管加入反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(4.91g,17.0mmol,1当量)的THF(50ml)，然后将所得溶液在-78℃搅拌1.75小时，在0℃保持20分钟后在23℃搅拌5分钟，然后再冷却到0℃。加入4-氟苄基溴(6.34ml,50.9mmol,3当量)的THF(15ml)溶液，然后在半饱和NH4Cl(230ml)与EtOAc和己烷(200ml,2×150ml)的1∶1混合物之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：20→40％EtOAc的己烷)，得到反-6-甲基-2S-(4-氟苄基)-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.33g,94％)为粘稠的油：
Rf=0.38(40％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3378,1614；1H NMR(CDCl3，旋转异构体的混合物δ0.85-0.95(m),0.96(d,J=6.8),2.10-2.32(m),2.34-2.46(m),2.58(s),2.67-2.79(m),2.82-2.94(m),3.00-3.18(m),3.94(br),4.37-4.52(m),5.24-5.42(m),5.44-5.56(m),6.89-7.01(m),7.08-7.14(m),7.19-7.38(m)；Anal.(C25H32FNO2)C,H,N.中间体5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮的制备
在0℃用10分钟将N-溴琥珀酰亚胺(2.93g,16.5mmol,1.05当量)分成数小批加到反-6-甲基-2S-(4-氟苄基)-庚-4-烯酸(2R-羟基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.24g,15.7mmol,1当量)和冰醋酸(4.49ml,78.4mmol,5当量)的THF和H2O的4∶1混合物(165ml)的溶液中。将所得黄色溶液在0℃搅拌15分钟，然后升温至23℃，接着在回流温度加热45分钟。冷却到23℃后将反应混合物在半饱和NaHCO3(200ml)与EtOAc和己烷(2×200ml,100ml)的1∶1混合物之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩。剩余物经快速色谱纯化(梯度洗脱：4→10％EtOAc的己烷)，得到5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮(4.14g,80％)为浅黄色油(1H NMR测定其中含有约5-10％不确定的杂质)：Rf=0.56(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)1772；1H NMR(CDCl3，主要异构体，δ0.94(d,3H,J=6.5),1.00(d,3H,J=6.8),2.05-2.35(m,3H),2.83(dd,1H,J=13.6,8.4),2.92-3.03(m,1H),3.11(dd,1H,J=13.6,4.7),3.90(dd,1H,J=9.0,3.7),4.33-4.40(m,1H),6.98-7.06(m,2H),7.14-7.20(m,2H)；Anal.(C15H18BrFO2)C,H.中间体5S-(1S-叠氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮的制备
将叠氮化钠(1.90g,29.2mmol,2.5当量)和5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮(3.85g,11.7mmol,1当量)的N,N-二甲基甲酰胺(40ml)悬浮液在50℃加热67小时。将反应混合物冷却到23℃，并在半饱和NaCl(200ml)和EtOAc/己烷/丙酮(1∶1∶1,2×200ml,100ml)混合物之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩。剩余物经快速色谱纯化(梯度洗脱：9→17％EtOAc的己烷)，得到5S-(1S-叠氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮(2.10g,62％)为白色固体(1H NMR测定其中含有约5-10％不确定的杂质)：      mp 91-96C；Rf=0.44(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)2097,1772；1H NMR(CDCl3，主要异构体)δ0.99(d,3H,J=6.5),1.02(d,3H,J=6.8),1.95-2.20(m,3H),2.78-2.88(m,1H),2.94(dd,1H,J=7.0,4.2),3.03-3.17(m,2H),4.37-4.43(m,1H),6.97-7.09(m,2H),7.14-7.21(m,2H).中间体{2-甲基-1S-[4R-(4-氟苄基)-5-氧四氢呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
将5S-(1S-叠氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟苄基)二氢呋喃-2-酮(2.02g,6.93mmol,1当量)，二碳酸二叔丁酯(2.12g,9.71mmol,1.4当量)和Pd/C(10％,0.20g)的CH3OH(100ml)悬浮液在氢气罐中搅拌16小时。用Whatman#3滤纸抽真空过滤反应混合物，然后浓缩。剩余物经快速色谱纯化(15％EtOAc的己烷)，得到{2-甲基-1S-[4R-(4-氟苄基)-5-氧四氢呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.58g,62％)为白色泡沫：Rf=0.80(5％MeOH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3331,1766,1702；1H NMR(CDCl3)δ0.93(d,3H,J=6.8),0.95(d,3H,J=6.5),1.41(s,9H),1.71-1.83(m,1H),1.95-2.06(m,1H),2.16-2.27(m,1H),2.80(dd,1H,J=13.5,8.6),2.88-2.99(m,1H),3.09(dd,1H,J=13.5,4.4),3.32-3.40(m,1H),4.42-4.48(m,2H),6.95-7.03(m,2H),7.11-7.18(m,2H)；Anal.(C20H28FNO4)C,H,N.中间体3-{Boc-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将氢氧化锂(9.62ml 1M水溶液，9.62mmol,5当量)加到{2-甲基-1S-[4R-(4-氟苄基)-5-氧四氢呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.703g,1.92mmol,1当量)的DME(25ml)溶液中。将所得悬浮液在23℃搅拌30分钟，然后在10％KHSO4(50ml)和CH2Cl2(3×100ml)之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩，剩余物溶解于CH2Cl2(30ml)。依次加入粉状4埃分子筛(0.70g),4-甲基吗啉N-氧化物(0.451g,3.85mmol,2当量)和四丙基过钌酸铵(0.068g,0.19mmol,0.10当量)。将所得深色反应混合物在23℃搅拌1.33小时，先后用Whatman#3和Whatman#5滤纸抽真空过滤。减压浓缩滤液，将所得深色剩余物溶解于CH2Cl2(30ml)。依次加入粗3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl[2.30mmol,1.2当量，用上面实施例2所述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法制备]，4-甲基吗啉(0.846ml,7.69mmol,4当量)，HOBt(0.390g,2.89mmol,1.5当量)和EDC(0.553g,2.88mmol,1.5当量)，并将反应混合物在23℃搅拌19小时，然后在盐水(100ml)和CH2Cl2(3×100ml)之间分配。合并有机相，Na2SO4干燥，浓缩，剩余物经快速色谱纯化(梯度洗脱：35→40％EtOAc的己烷)，得至 3-{Boc-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.820g,53％)为酱色泡沫：                         Rf=0.50(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307,1708,1666；1H NMR(CDCl3)δ0.67(d,3H,J=6.8),0.92(d,3H,J=6.8),1.28(t,3H,J=7.2),1.40(s,9H),1.53-1.67(m,1H),1.91-2.04(m,2H),2.32-2.41(m,2H),2.46-2.55(m,1H),2.63(dd,1H,J=12.1,5.9),2.69-2.80(m,1H),2.83(dd,1H,J=12.1,8.2),3.03(dd,1H,J=17.7,10.0),4.05-4.11(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.40-4.50(m,1H),4.84(d,1H,J=8.4),5.38(d,1H,J=15.7),6.01(d,1H,J=8.4),6.60(dd,1H,J=15.7,5.0),6.92-6.99(m,2H),7.03-7.12(m,3H),7.17-7.30(m,15H)；Anal.(C48H56FN3O7)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，将3-{Boc-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：mp=220(分解)，Rf=0.35(10％ CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3277,1715,1643；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d,3H,J=6.2),0.87(d,3H,J=6.9),1.21(t,3H,J=6.5),1.59-1.67(m,2H),2.03(s,br,2H),2.21-2.24(m,1H),2.46(s,3H),2.57-2.68(m,3H),2.80-2.95(m,2H),4.09(q,2H,J=6.5),4.30-4.34(m,2H),5.41(d,1H,J=15.5),6.55(s,1H),6.61(dd,1H,J=15.5,5.5),6.73(s,1H),6.99-7.16(m,5H),8.01(d,1H,J=7.8),8.69(d,1H,J=8.7)；Anal.(C29H37FN4O7)C,H,N.实施例113-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-10)的制备
Figure A9980562700901
中间体Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3的制备
将NCH3-L-Phe-OCH3·HCl(1.4g)溶解于CH2Cl2(50ml)，然后将其倒入1N NaOH水溶液(7ml)和NaHCO3饱和水溶液(25ml)的混合物。混合后分离有机相，水相用CH2Cl2(3×50ml)。合并有机相，Na2SO4干燥并蒸发，得到游离胺为清澈无色油(1.14g,5.90mmol)。将此胺和(iPr)2NEt(1.13ml,6.49mmol)的DMF(10ml)溶液滴加到Boc-L-Leu-OH(1.50g,6.49mmol)和HOBt(0.877g,6.49mmol)的DMF(10ml)溶液中。加入DCC(1.47g,7.12mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后在23℃搅拌48小时。过滤混合物，除去沉淀(ppt)并蒸发滤液。剩余物溶解于CH2Cl2(200ml)，用饱和NaHCO3水溶液(40ml)洗涤，Na2SO4干燥并蒸发。剩余物经快速色谱纯化(25％EtOAc的己烷)，得到Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3(2.04g,85％)为白色固体：                              mp=126-127℃；IR(cm-1)3401,3319,1743,1708,1649；1H NMR(CDCl3)主要异构体)δ0.92(d,3H,J=6.8),0.95(d,3H,J=6.5),1.32-1.48(m,2H),1.41(s,9H),1.61-1.77(m,1H),2.90(s,3H),3.04(dd,1H,J=14.5,10.5),3.37(dd,1H,J=14.5,5.5),3.72(s,3H),4.48-4.57(m,1H),4.98-5.04(m,1H),5.20(dd,1H,J=10.5,5.5),7.16-7.32(m 5H)；Anal.(C22H34N2O5)C,H,N.中间体Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH的制备
将Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3(0.625g,1.54mmol)溶解于CH3OH(20ml)，并冷却到0℃。滴加NaOH(6.15ml 2N水溶液，12.3mmol)。将反应混合物在23℃搅拌3小时，然后倒入KHSO4(150ml)中。用CH2Cl2萃取混合物(3×100ml)，合并的有机相用Na2SO4干燥并蒸发，得到Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH(0.617g，定量)为白色泡沫，无需纯化即可使用。中间体3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述制备3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)由Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH和3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如实施例2所述制备)制备本中间体：IR(cm-1)3295,1713,1672,1649；1H NMR(CDCl3)(异构体的混合物)δ0.65(d,J=6.2),0.66(d,J=6.5),0.84(d,J=6.5),0.88(d,J=6.5),1.02-1.22(m),1.23-1.38(m),1.33(s),1.41(s),1.55-1.82(m),1.89-2.07(m),2.23-2.30(m),2.90(s),2.94(s),3.01(dd,J=14.6,10.9),3.03-3.13(m),3.26-3.37(m),3.27(dd,J=14.6,3.4),3.42-3.54(m),4.00-4.22(m),4.37-4.73(m),4.82-4.89(m),5.63-5.70(m),5.95(dd,J=15.9,1.2),6.23-6.28(m),6.66-6.75(m),6.79-6.89(m),7.09-7.34(m),8.14(d,J=8.7)；Anal.(C49H60N4O7)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，将3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：
             Rf=0.23(5％ CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3295,1713,1666,1637；1H NMR(CDCl3)(异构体的混合物)δ0.65(d,J=6.5),0.71(d,J=6.5),0.93(d,J=6.5),0.94(d,J=6.5),1.30(t,J=7.2),1.24-1.73(m),1.81-2.22(m),2.45(s),2.48(s),2.86-2.93(m),2.96(s),2.97(s),3.03-3.14(m),3.21-3.31(m),3.48(dd,J=14.0,5.9),4.19(q,J=7.2),4.20(q,J=7.2),4.38-4.45(m),4.52-4.70(m),4.74-4.81(m),5.62-5.67(m),5.73-5.79(m),5.81(dd,J=15.6,1.6),5.99(dd,J=15.6,1.6),6.03-6.09(m),6.35(s),6.39(s),6.40-6.45(m),6.77-6.94(m),7.42(d,J=7.2),8.13(d,J=7.8).实施例123-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物C-1)的制备
Figure A9980562700921
中间体(S)-1-羟基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯的制备
在-个装有温度计和回流冷凝器的烧瓶中将(S)-1-羟基-3-(4-氟苯基)丙酸烯甲酯(用Hoffman等人所述方法制备，《四面体》(Tetrahedron),48:3007(1992))(0.99g,5.0mmol)溶解于烯丙醇(50ml)。加入四异丙醇钛(1.53ml,5.0mmol)，并将反应物在90℃加热3.5小时。将反应物冷却至室温，倒在250ml EtOAc/饱和NH4Cl溶液的1∶1混合物中。分离有机相，用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤，MgSO4干燥，除去溶剂。剩余物经快速色谱纯化，5-10％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到(S)-1-羟基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯(0.77g,68％)为清澈液体：
        Rf=0.21(15％EtoAc/己烷)；IR(净)3470(宽峰)，1734,1510,1221cm- 1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.24-1.27(m,1H),2.92-2.99(m,1H),3.09-3.15(m,1H),4.43-4.47(m,1H),4.65(d,2H,J=5.9),5.28-5.37(m,2H),5.86-5.95(m,1H),6.95-7.01(m,2H),7.16-7.21(m,2H).中间体Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2的制备
将(S)-1-羟基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯(0.070g,0.31mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)。先后加入Boc-L-Val-OH(0.068g,0.31mmol),DMAP(0.004g,0.03mmol)和DCC(0.067g,0.33mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后真空除去溶剂。剩余物经快速色谱纯化，3-5％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2(0.12g,90％)为清澈油：Rf=0.18(10％EtOAc/己烷)；IR(净)1752,1717 1510cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.80-0.85(m,6H),1.36(s,9H),1.97-2.04(m,1H),3.07-3.15(m,2H),3.89-3.94(m,1H),4.51-4.55(m,2H),5.17-5.30(m,3H),5.75-5.84(m,1H),7.06-7.17(m,3H),7.27-7.32(m,2H)；Anal.(C22H30NO6F)C,H,N.中间体 3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2(0.65g,1.52mmol)溶解于THF(15ml)。加入四(三苯膦)钯(O)(0.035g,0.03mmol)，然后在23℃搅拌5分钟。滴加吗啉(0.16ml,1.83mmol)，然后在室温搅拌2小时。真空除去溶剂，将剩余物溶于50ml己烷/Et2O的4∶1混合物。用饱和NaHCO3溶液(50ml)萃取，然后倒掉有机相。水相用固体KHSO4酸化至pH=1-2，然后再用EtOAc(50ml)萃取。有机相用盐水(50ml)洗涤，MgSO4干燥及浓缩，得到0.50g(86％)游离酸为清澈油。将所得油溶解于DMF(6ml)，先后加入二异丙基乙胺(0.43ml,2.50mmol)和3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如上面实施例2所述制备，0.55g,1.25mmol)。将反应物冷却到0℃，加入HATU(0.48g,1.25mmol)，允许反应升至室温。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。依次用10％HCl溶液(25ml)，饱和NaHCO3溶液(25ml),H2O(25ml)和盐水(25ml)洗涤有机相，MgSO4干燥，过滤并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→0.1％MeOH/CH2Cl2)，得到0.40g(39％)3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯为白色非晶状固体：Rf=0.25(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1691,1512,1159 cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.78-0.83(m,6H),1.20(t,3H,J=7.0),1.35(s,9H),1.58-1.66(m,2H),1.96-2.02(m,1H),2.19-2.33(m,2H),2.99-3.02(m,2H),3.82-3.87(m,1H),4.09(q,2H,J=7.0),4.33-4.37(m,1H), 5.03-5.08 (m,1H),5.60(d,1H,J=15.8),6.67(dd,1H,J=15.8,5.5),7.02-7.08(m,2H),7.14-7.28(m,18H),8.12(d,1H,J=8.1),8.59(s,1H)；Anal.(C47H54N3O8F)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，将3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：
                         Rf=0.05(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1746,1719,1661,1549cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.87(d,3H,J=6.6),0.92(d,3H,J=6.6),1.20(t,3H,J=7.0),1.61-1.74(m,2H),1.96-2.01(m,2H),2.15-2.22(m,1H),2.46(s,3H),3.00-3.03(m,2H),4.10(q,2H,J=7.0),4.27-4.32(m,1H),4.33-4.38(m,1H),5.06-5.11(m,1H),5.63(d,1H,J=15.6),6.54(s,1H),6.68(dd,1H,J=15.6,5.5),6.78(s,br,1H),6.95-7.00(m,2H),7.20-7.24(m,3H),8.06(d,1H,J=8.1),8.87(d,1H,J=7.7)；Anal.(C28H35N4O8F)C,H,N.实施例133-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-11)的制备
Figure A9980562700941
中间体3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将Boc-(4-F-Phe)-OH(4.46g,15.75mmol,1当量)和CH3I(7.84ml,126mmol,8当量)溶解于THF(100ml)并冷却到0℃。在溶液中加入NaH(1.89g,47.25mmol,3当量)，同时剧烈搅拌。在23℃搅拌24小时后小心地在混合物中加入EtOAc(3ml)和H2O(3ml)，然后将所得悬浮液蒸发至干。将其溶解于H2O(100ml)，用Et2O洗涤(2×100ml)。水相用10％柠檬酸溶液酸化至pH=3，然后用EtOAc萃取(2×100ml)。合并的有机萃取液依次用半饱和NaHCO3(150ml),5％Na2S2O3(150ml)和H2O(150ml)洗涤，Na2SO4干燥并浓缩后得到Boc-NCH3-(4-F-Phe)-OH(4.37g,80％)，为浅黄色泡沫，无需进-步纯化即可使用。1HNMR(CDCl3,异构体的混合物)δ1.35(s),1.40(s),2.69(s),2.75(s),2.96-3.13(m),3.23-3.33(m),4.54-4.58(m),4.76-4.81(m),6.96-7.01(m),7.15-7.17(m).
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,15ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(如上面实施例2所述制备，3.57g,6.73mmol,1当量)的相同溶剂的溶液(15ml)中。2小时后减压除去挥发性物质。剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入上步制备的Boc-NCH3-(4-F-Phe)-OH(2.0g,6.73mmol,1.0当量)，HOBt(1.23g,9.09mmol,1.5当量)，4-甲基吗啉(2.0ml,18.19mmol,3当量)和EDC(1.74g,9.09mmol,1.5当量)。将反应混合物在23℃搅拌过夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩，剩余物经快速柱色谱纯化(30％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(4.07g,84％)为白色泡沫：                  IR(cm-1)1666,1510,1167；1H NMR(CDCl3,异构体的混合物)δ1.29(t,J=7.2),1.37(s),1.65-1.75(m),1.95-2.06(m),2.29-2.33(m),2.66(s),2.91-2.99(m),3.22-3.29(m),4.18(q,J=7.2),4.52-4.58(m),5.68(d,J=15.9),6.45(d,J=8.4),6.74(dd,J=15.6,5.4),6.91-6.99(m),7.11-7.33(m)；Anal.(C43H48FN3O6)C,H,N.中间体3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,3ml)加到3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.388g,0.54mmol,1当量)的相同溶剂的溶液(3ml)中。2小时后减压除去挥发性物质。剩余物溶解于DMF(10ml)，冷却到0℃。然后依次加入DIEA(0.188ml,1.08mmol,2当量)，Boc-L-(2-萘)-OH(0.170g,0.54mmol,1.0当量)和HATU(0.205g,0.54mmol,1当量)。将反应混合物在23℃搅拌1小时。减压除去挥发性物质，剩余物溶解于EtOAc(50ml)，并先后用0.5N Hcl(50ml)，饱和NaHCO3(50ml)和盐水(50ml)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，浓缩，剩余物经快速柱色谱纯化(40％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.437g,88％)为白色泡沫：IR(cm-1)1656,1509,1162；1H NMR(CDCl3异构体的混合物)δ0.88(t,J=7.2),1.27(s),1.30(s),1.48-1.58(m),1.64-1.67(m),1.97-2.11(m),2.23-2.28(m),2.42-2.50(m),2.62-2.69(m),2.80(s),2.90(s),3.00-3.07(m),3.15-3.20(m),3.25-3.32(m),4.18(q,J=7.2),4.42-4.46(m),4.53-4.56(m),4.61-4.66(m),4.72-4.82(m),5.94-5.00(m),5.63(d,J=15.6),6.12(d,J=15.6),6.60(dd,J=15.6,5.4),6.75-6.89(m),6.70-7.08(m),7.19-7.30(m),7.41-7.50(m),7.70-7.82(m),8.80(d,J=8.4)；Anal.(C56H59FN4O7)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例2)，将3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：IR(cm-1)3296,1654,1510；1H NMR(DMSO-d6,异构体的混合物)δ1.17-1.24(m),1.62-1.78(m),2.04-2.15(m),2.38(s),2.42(s),2.71-2.79(m),2.84(s),2.87-2.92(m),3.03(s),3.15(d,J=7.5),3.98-4.06(m),4.08-4.12(m),4.38-4.42(m),4.94(m),5.03-5.07(m),5.09-5.18(m),5.66-5.82(m),6.42(s),6.43(s),6.66-6.81(m),6.88-6.94(m),7.01-7.06(m),7.13-7.17(m),7.24-7.34(m),7.43-7.46(m),7.56(s),7.76-7.84(m),8.08(d,J=7.8),8.60(d,J=8.4),9.01(d,J=7.2)；Anal.(C37H40FN5O7·0.75H2O)C,H,N.实施例143-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-His-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-9)的制备
Figure A9980562700961
用类似上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例13)(用Boc-L-(Tr-His)-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，将3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述实施例13制备)转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-His-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：
IR(cm-1)3302,1665,1202；1H NMR(DMSO-d6,异构体的混合物)δ1.21(t,J=7.2),1.70-1.78(m),2.05-2.09(m),2.41(s),2.44(s),2.69-3.26(m),4.11(q,J=7.2),4.38-4.53(m),5.07-5.19(m),6.51-5.84(m),6.44(s),6.48(s),6.63-6.86(m),6.89-7.01(m),7.09-7.19(m),7.23-7.42(m),8.02(d,J=8.7),8.15(d,J=8.1),8.59(d,J=8.7),8.94(s),9.04(s),9.14(d,J=6.9)；Anal.(C30H36FN7O7·TFA·H2O)C,H,N.实施例153-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-12)的制备
用类似上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例13)(用Boc-L-Leu-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，将3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述实施例13制备)转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：IR(cm-1)3325,1663,1171；1H NMR(DMSO-d6,异构体的混合物)δ0.64-0.67(m),0.86-0.88(m),1.17-1.23(m),1.32-1.40(m),1.59-1.75(m),1.98-2.07(m),2.42(s),2.45(s),2.08(s),2.86-2.93(m),2.99(s),3.12-3.20(m),4.05-4.15(m),4.41-4.50(m),4.82-5.07(m),5.62(d,J=15.9),5.86(d,J=15.9),6.51(s),6.53(s),6.68-6.73(m),6.93-6.99(m),7.09-7.21(m),7.26-7.31(m),8.03(d,J=7.8),8.08(d,J=7.8),8.41(d,J=8.1),8.94(d,J=7.2)；Anal.(C30H40FN5O7·1.25CH2Cl2)C,H,N.实施例163-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(1-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-13)的制备
用类似上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例13)(用Boc-L-(1-萘)-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，将3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述实施例13制备)转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-(1-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯：
            IR(cm-1)3308,1659,1169；1H NMR(DMSO-d6,异构体的混合物)δ1.16-1.23(m),1.61-1.78(m),1.98-2.02(m),2.07-2.12(m),2.41(s),2.43(s),2.77(s),2.78(s),2.84-2.87(m),2.93-3.03(m),3.08-3.14(m),3.31-3.38(m),4.00-4.15(m),4.27-4.32(m),4.40-4.46(m),4.58-4.64(m),5.07-5.17(m),5.57-5.73(m),6.45(s),6.57-6.61(m),6.71-6.88(m),6.89-6.91(m),7.11-7.19(m),7.31-7.38(m),7.50-7.58(m),7.73-7.78(m),7.83-7.94(m),8.08(d,J=8.1),8.13(d,J=8.7),8.62(d,J=8.1),9.14(d,J=8.1)；Anal.(C37H40FN5O7)C,H,N.实施例173-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-2)的制备中间体3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述制备3-{Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例4)，由{2-甲基-1S-[4R-(4-氟苄基)-5-氧四氢呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(按实施例10所述制备)和3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(按实施例6所述制备)制备本中间体：         Rf=0.24(60％ EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3293,1717,1668；1H NMR(CDCl3)δ0.82(d,3H,J=6.8),1.01(d,3H,J=6.8),1.30(t,3H,J=7.2),1.51-1.65(m,2H),1.84-1.96(m,1H),2.16-2.37(m,2H),2.47(s,3H),2.49-2.55(m,3H),2.85-3.01(m,2H),3.12-3.25(m,3H),3.77(s,3H),3.78(s,3H),4.18(q,2H,J=7.2),4.31-4.49(m,3H),4.65-4.70(m,1H),5.53(dd,1H,J=15.7,1.4),6.39-6.44(m,3H),6.63(dd,1H,J=15.7,5.4),6.93-7.01(m,2H),7.05-7.10(m,1H),7.12-7.18(m,2H),7.24(d,1H,J=8.7),7.47(d,1H,J=6.5)；Anal.(C40H49FN4O9·0.5H2O)C,H,N.产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例6)，将3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯：mp=178-181℃；Rf=0.49(10％CH3OH in CHCl3)；IR(cm-1)3295,1678 br；1H NMR(CDCl3)δ0.85(d,3H,J=6.8),1.03(d,3H,J=6.5),1.30(t,3H,J=7.2),1.51-1.62(m,1H),1.71-1.93(m,2H),2.27-2.40(m,2H),2.47(s,3H),2.51-2.75(m,3H),2.82-2.98(m,2H),3.11-3.24(m,1H),3.26-3.42(m,2H),4.18(q,2H,J=7.2),4.41-4.53(m,1H),4.63-4.72(m,1H),5.50(d,1H,J=15.4),5.88(s,1H),6.39(s,1H),6.63(dd,1H,J=15.4,5.3),6.92-7.03(m,2H),7.08-7.31(m,4H)；Anal.(C31H39FN4O7)C,H,N.实施例183-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物C-2)的制备
Figure A9980562700991
中间体(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2的制备
将Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2(按上述实施例12制备，0.91g,2.15mmol)溶解于1,4-二噁烷(28ml)，然后加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,14ml)。将反应物在室温搅拌14小时。蒸除溶剂，将剩余物溶于EtOAc(50ml)。有机相先后用饱和NaHCO3溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，MgSO4干燥并除去溶剂，得到0.66g(定量)清澈油。
将该油溶解于CH2Cl2(20ml)，加入吡啶(0.17ml,2.08mmol)，然后将反应物冷却到0℃。加入5-甲基异噁唑-3-酰氯(0.33g,2.27mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液，然后将反应物升至室温1小时。真空除去溶剂，剩余物经快速色谱纯化，5→10％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2(0.70g,82％)为白色晶状固体：
                  Rf=0.20(30％ EtOAc/己烷)；IR(KBr)1745,1661,1553,1186cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.85-0.92(m,6H),2.14-2.21(m,1H),2.46(s,3H),3.05-3.19(m,2H),4.32-4.37(m,1H),4.53-4.60(m,2H),5.16-5.28(m,3H),5.74-5.85(m,1H),6.56(s,1H),7.01-7.07(m,2H),7.26-7.29(m,2H),8.76(d,1H,J=8.1)；Anal.(C22H25N2O6F)C,H,N.中间体3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH=CH2(0.67g,1.55mmol)溶解于THF(15ml)。加入四(三苯膦)钯(O)(0.036g,0.03mmol)，然后将反应混合物搅拌5分钟。滴加吗啉(0.16ml,1.86mmol)，并在室温搅拌6小时。真空除去溶剂，剩余物溶于50ml Et2O。用饱和NaHCO3溶液(50ml)萃取两次，然后倒掉有机相。水相用10％HCl酸化至pH=1-2，然后再用EtOAc(40ml)萃取两次。有机相用盐水(50ml)洗涤，MgSO4干燥及浓缩，得到0.57g(95％)油，放置后变成晶体。
将一部分产物(0.19g,0.50mmol)溶解于DMF(3ml)。先后加入二异丙基乙胺(0.34ml,1.0mmol)和3-{H2N-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如上面实施例4和6所述制备，0.19g,0.50mmol)。将反应物冷却到0℃，加入HATU(0.19g,0.50mmol)，允许反应升至室温。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。依次用10％HCl溶液(25ml)，饱和NaHCO3溶液(25ml),H2O(25ml)和盐水(25ml)洗涤有机相，MgSO4干燥溶剂，过滤。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→1.0％MeOH/CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.27g,72％)为白色非晶状固体：                                 Rf=0.18(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1671,1547,1510,1209cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(d,3H,J=7.0),0.93(d,3H,J=7.0),1.20(t,3H,J=7.0),1.41-1.58(m,2H),1.79-1.98(m,2H),2.07-2.24(m,2H),2.44(s,3H),3.01-3.13(m,4H),3.73(s,3H),3.76(s,3H),4.09(q,2H,J=7.0),4.24(s,2H),4.30(t,1H,J=7.4),4.45-4.48(m,1H),5.12(t,1H,J=6.3),5.59(d,1H,J=15.8),6.45(dd,1H,J=8.5,2.2),6.54-6.56(m,2H),6.73(dd,1H,J=15.5,4.8),6.89-6.95(m,3H),7.20(d,1H,J=8.5),7.22(d,1H,J=8.5),8.08(d,1H,J= 8.8),8.89(d,1H,J=7.4).产物3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.25g,0.33mmol)溶解于CHCl3(6ml)。加两滴水，然后加入DDQ(0.10g,0.43mmol)。将反应物在50-55℃加热8小时。冷却的同时将反应混合物倒入EtOAc(30ml)。有机相先后用30ml NaHCO3/1N NaOH(2∶1)溶液和盐水(30ml)洗涤，MgSO4干燥，浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→2％MeOH/CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.18g,90％)为白色非晶状固体：
                 Rf=0.09(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1680,1549cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(d,3H,J=6.6),0.95(d,3H,J=6.6),1.20(t,3H,J= 7.0),1.36-1.44(m,1H),1.56-1.61(m,1H),1.74-1.82(m,1H),1.94-1.99(m,2H),2.18-2.25(m,1H),2.45(s,3H),2.98-3.18(m,4H),4.09(q,2H,J=7.0),4.28-4.32(m,1H),4.43-4.46(m,1H),5.12(m,1H),5.58(d,1H,J=15.8),6.56(s,1H),6.72(dd,1H,J=15.8,4.8),6.91-6.97(m,2H),7.21(d,1H,J=5.9),7.23(d,1H,J=5.9),7.59(s,1H),8.06(d,1H,J=8.8),8.92(d,1H,J=7.4)；Anal.(C30H37N4O8F)C,H,N.实施例192-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pvrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)(化合物B-3)的制备
Figure A9980562701021
中间体Boc-L-{(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)的制备
用上面实施例6所述制备3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的方法将(1S,3'S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3'-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.360g,0.881mmol,1当量)氧化成相应的醛。将该醛与3-(三苯基-λ5-phoshanylidene)-二氢呋喃-2-酮(用类似Baldwin等人所述方法制备，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)，36∶1441(1971))在乙二醇乙醚(10ml)和DMF(2ml)的混合物中混合。将反应混合物在100℃油浴中加热1.5小时，然后冷却到23℃过夜。用MTBE(200ml)稀释，用水(20ml)和盐水(20ml)洗涤，Na2SO4干燥并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(先用2.5％CH3OH/CH2Cl2，再用67％EtOAc/CH2Cl2洗脱)，得到Boc-L-{(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)(0.250g,60％)为油：Rf=0.50(67％ EtOAc的CH2Cl2)；IR(cm-1)3307,1754,1678；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s,9H),1.46-1.68(m,2H),2.02-2.13(m,1H),2.18-2.30(m,1H),2.44-2.56(m,1H),2.91-3.04(m,1H),3.15-3.27(m,3H),3.80(s,6H),4.34-4.43(m,5H),5.63-5.69(m,1H),6.42-6.47(m,2H),6.48-6.53(m,1H),7.09-7.13(m,1H).产物2-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)的制备
用类似上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例17)将Boc-L-{(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)转化成2-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁内酯)：Rf=0.28(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3378 br,1749,1678 br；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d,3H,J=6.8),1.03(d,3H,J=6.8),1.45-1.55(m,1H),1.75-2.00(m,2H),2.25-2.43(m,2H),2.46-2.59(m,2H),2.48(s,3H),2.63-2.72(m,1H),2.77-2.90(m,3H),3.06-3.26(m,2H),3.29-3.44(m,2H),4.32-4.46(m,3H),4.65-4.71(m,1H),5.72(s,1H),6.14-6.20(m,1H),6.40(s,1H),6.94-7.02(m,2H),7.03-7.11(m,2H),7.24(d,1H,J=9.0),7.60(d,1H,J=6.2)；Anal.(C31H37FN4O7)C,H,N.实施例203-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-4)的制备
(第84页结构式2)
用类似上述制备3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(实施例9)和3-{(5’-甲基异噁唑-3’-羰基)-L-Valψ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例10)制备标题化合物：
                mp=161-162℃；Rf=0.30(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm- 1)3295,1713,1649；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d,3H,J=6.8),1.03(d,3H,J=6.8),1.30(t,3H,J=7.2),1.43-1.55(m,2H),1.77-1.90(m,2H),1.95-2.12(m,2H),2.27-2.38(m,1H),2.44-2.58(m,2H),2.48(s,3H),2.66-2.76(m,1H),2.80-2.93(m,2H),3.12-3.42(m,3H),4.18(q,2H,J=7.2),4.39-4.49(m,1H),4.65-4.72(m,1H),5.50(dd,1H,J=15.9,1.6),5.80(s,1H),6.38-6.41(m,1H),6.62(dd,1H,J=15.9,5.3),6.94-7.02(m,2H),7.08-7.28(m,4H).实施例21至30
用类似上述制备式Ⅰ-A的合成方法分别在实施例21-30中制备下列化合物(A-14)至(A-23)：
Figure A9980562701051
Figure A9980562701061
实施例313-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(对比化合物#2)的制备中间体[Boc-L-(Tr-Gln)]-N(OMe)Me的制备
在0℃将氯甲酸异丁酯(4.77ml,36.8mmol,1.0当量)加到N-α-Boc-γ-三苯甲基-L-谷氨酸盐(18.7g,36.7mmol,1当量)和4-甲基吗啉(8.08ml,73.5mmol,2.0当量)的CH2Cl2(250ml)溶液中。将反应混合物在0℃搅拌20分钟，然后加入N,O-二甲基羟胺盐酸盐(3.60g,36.7mmol,1.0当量)。将所得溶液在0℃搅拌20分钟，在23℃搅拌2小时，然后在水(150ml)和CH2Cl2(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：40→20％己烷的EtOAc)，得到[Boc-L-(Tr-Gln)]-N(OMe)Me(16.1g,82％)为白色泡沫：IR(cm-1)3411,3329,3062,1701,1659；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s,9H),1.63-1.77(m,1H),2.06-2.17(m,1H),2.29-2.43(m,2H),3.17(s,3H),3.64(s,3H),4.73(s,br,1H),5.38-5.41(m,1H),7.20-7.31(m,15H)；Anal.(C31H37N3O5)C,H,N.中间体{Boc-L-(Tr-Gln)}-H的制备
在-78℃将二异丁基氢化铝(50.5ml 1.5M甲苯溶液，75.8mmol,2.5当量)加至{Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me(16.1g,30.3mmol,1当量)的THF溶液中，并将反应混合物在-78℃搅拌4小时。相继加入甲醇(4ml)和1.0M HCl(10ml)，将混合物升至23℃。所得悬浮液用Et2O(150ml)小时，依次用1.0M HCl(3×100ml)，半饱和NaHCO3(100ml)和水(100ml)洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，浓缩后得到粗{Boc-L-(Tr-Gln)}-H(13.8g,97％)为白色固体：
       mp=114-116℃；IR(cm-1)3313,1697,1494；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s,9H),1.65-1.75(m,1H),2.17-2.23(m,1H),2.31-2.54(m,2H),4.11(s,br,1H),5.38-5.40(m,1H),7.11(s,1H),7.16-7.36(m,15H),9.45(s,1H).中间体3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在-78℃将双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠(22.9ml 1.0M的THF溶液，22.9mmol,1.0当量)加到膦酰基乙酸三乙酯(5.59g,22.9mmol,1.0当量)的THF(200ml)溶液中，并将反应混合物在此温度搅拌2小时。经插管加入粗{Boc-L-(Tr-Gln)}-H(10.8g,22.9mmol,1当量)的THF(50ml)溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2小时，升至0℃10分钟后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(40％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(10.9g,88％)为白色泡沫：IR(cm-1)3321,1710；1H NMR(CDCl3)δ1.27(t,3H,J=7.2),1.42(s,9H),1.70-1.78(m,1H),1.80-1.96(m,1H),2.35(t,2H,J=7.0),4.18(q,2H,J=7.2),4.29(s,br,1H),4.82-4.84(m,1H),5.88(dd,1H,J=15.7,1.6),6.79(dd,1H,J=15.7,5.3),6.92(s,1H),7.19-7.34(m,15H)；Anal.(C33H38N2O5)C,H,N.中间体3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,20ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.00g,1.84mmol,1当量)的相同溶剂(20ml)的溶液中。3小时后减压蒸发掉挥发性物质。将剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.759g,1.84mmol,1.0当量)，HOBt(0.373g,2.76mmol,1.5当量)，4-甲基吗啉(0.809ml,7.36mmol,4.0当量)和EDC(0.529g,2.76mmol,1.5当量)。将反应混合物在23℃搅拌18小时，然后在水(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.25g,83％)为白色固体：mp=192-194℃；IR(cm-1)3295,1696,1678,1655,1519；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d,3H,J=6.5),0.86(d,3H,J=6.5),1.24-1.32(m,1H),1.28(t,3H,J=7.2),1.43-1.75(m,3H),1.91-2.06(m,1H),2.20-2.38(m,2H),2.93-3.02(m,1H),3.07-3.18(m,1H),3.95-4.02(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.43-4.55(m,2H),4.82-4.95(m,2H),5.69(d,1H,J=15.7),6.46(d,1H,J=7.5),6.60(d,1H,J=8.1),6.69(dd,1H,J=15.7,5.1),7.09-7.38(m,27H)；Anal.(C51H56N4O7)C,H,N.产物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将三氟乙酸(20ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe--L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.25g,1.49mmol,1当量)和三异丙基甲硅烷(1.53ml,7.47mmol,5.0当量)的CH2Cl2(20ml)溶液中，得到亮黄色溶液。将反应混合物在23℃搅拌20分钟，在此期间溶液变成无色。加入四氯化碳(20ml)，减压蒸除挥发性物质。剩余物用Et2O(20ml)研磨，真空过滤收集所得白色固体，用Et2O(3×50ml)洗涤，风干后得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(0.717g,81％)：mp=219-221℃；IR(cm-1)3300,1672,1535；1H NMR(DMSO-d6)δ0.78(d,3H,J=6.8),0.82(d,3H,J=6.5),1.21(t,3H,J=7.0),1.25-1.37(m,2H),1.42-1.54(m,1H),1.58-1.80(m,2H),2.02-2.09(m,2H),2.84(dd,1H,J=13.2,8.9),2.97(dd,1H,J=13.2,5.8),3.93-4.01(m,1H),4.11(q,2H,J=7.0),4.33-4.52(m,2H),4.97(d,1H,J=12.3),5.04(d,1H,J=12.3),5.64(d,1H,J=15.9),6.69(dd,1H,J=15.9,5.4),6.76(s,1H),7.13-7.37(m,11H),7.43(d,1H,J=7.8),7.99(d,1H,J=8.1),8.04(d,1H,J=8.1)；Anal.(C32H42N4O7)C,H,N.实施例323-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(对比化合物#3)的制备中间体3-{Cbz-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,10ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按实施例31所述方法制备，3.05g,5.62mmol,1当量)的相同溶剂(20ml)的溶液中。3小时后减压除去挥发性物质。将剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入Boc-L-Phe-OH(1.49g,5.62mmol,1.0当量)，HOBt(0.911g,6.74mmol,1.2当量)，4-甲基吗啉(1.85ml,16.8mmol,3.0当量)和EDC(1.29g,6.73mmol,1.2当量)。将反应混合物在23℃搅拌18小时，然后在水(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：40→50％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(2.77g,71％)为白色泡沫：IR(cm-1)3306,1706,1661；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t,3H,J=7.2),1.38(s,9H),1.65-1.76(m,1H),1.87-1.99(m,1H),2.25-2.27(m,2H),2.94-3.01(m,2H),4.14-4.26(m,3H),4.48-4.53(m,1H),4.95(s,bt,1H),5.64(d,1H,J=15.8),6.29(d,1H,J=8.1),6.64(dd,1H,J=15.8,5.4),6.80(s,br,1H),7.14-7.32(m,20H)；Anal.(C42H47N3O6)C,H,N.中间体3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,8ml)加到3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.296g,0.429mmol,1当量)的相同溶剂(10ml)的溶液中。3小时后减压除去挥发性物质。将剩余物溶解于CH2Cl2(10ml)，然后依次加入Cbz-L-Val-OH(0.108g,0.430mmol,1.0当量)，HOBt(0.070g,0.518mmol,1.2当量)，4-甲基吗啉(0.142ml,1.29mmol,3.0当量)和EDC(0.099g,0.518mmol,1.2当量)。将反应混合物在23℃搅拌4小时，然后在水(100ml)和EtOAc(2×100ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(3％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.220g,62％)为白色固体：
mp=195-198℃；IR(cm-1)3284,1689,1646；1H NMR(CDCl3)δ0.69(d,3H,J=6.9),0.82(d,3H,J=6.5),1.28(t,3H,J=7.2),1.63-1.74(m,1H),1.96-2.02(m,2H),2.22-2.35(m,2H),2.93(dd,1H,J=14.0,7.6),3.10(dd,1H,J=14.0,6.7),3.81-3.85(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.48-4.58(m,2H),4.87(d,1H,J=12.0),4.94(d,1H,J=12.0),5.06(d,1H,J=6.9),5.67(d,1H,J=15.6),6.43(d,1H,J=7.5),6.63-6.72(m,2H),7.10-7.40(m,26H)；Anal.(C50H54N4O7)C,H,N.产物3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将三氟乙酸(5ml)加到3-{Cbz-L-Val-L-Phe--L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.188g,0.229mmol,1当量)和三异丙基甲硅烷(300ml,1.46mmol,6.4当量)的CH2Cl2(10ml)溶液中，得到亮黄色溶液。将反应混合物在23℃搅拌20分钟，在此期间溶液变成无色。加入四氯化碳(10ml)，减压蒸除挥发性物质。剩余物用Et2O(20ml)研磨，真空过滤收集所得白色固体，用Et2O(3×50ml)洗涤，风干后得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(0.094g,71％)：
                                  mp=240℃(分解)；IR(cm-1)3263,1686,1640；1H NMR(DMSO-d6)δ0.73(d,6H,J=6.9),1.21(t,3H,J=7.2),1.60-1.75(m,2H),1.83-1.90(m,1H),2.03-2.08(m,2H),2.83(dd,1H,J=13.6,8.6),2.96(dd,1H,J=13.6,6.2),3.79-3.84(m,1H),4.10(q,2H,J=7.2),4.37-4.49(m,1H),4.51-4.56(m,1H),4.99(d,1H,J=12.5),5.06(d,1H,J=12.5),5.61(d,1H,J=15.5),6.67(dd,1H,J=15.5,5.5),6.76(s,1H),7.13-7.36(m,12H),8.06(d,2H,J=8.1)；Anal.(C31H40N4O7)C,H,N.实施例333-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-24)的制备
Figure A9980562701101
中间体3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,4ml)加到3-{Boc-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(按实施例6所述方法制备，0.139g,0.292mmol,1当量)的1,4-二噁烷溶液(4ml)溶液中。搅拌1.5小时后蒸发掉挥发性物质，得到粗胺盐，无需纯化即可使用。
将胺盐溶解于CH2Cl2(7ml)，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.156g,0.378mmol,1.3当量)，4-甲基吗啉(0.128ml,1.16mmol,4当量)，HOBt(0.067g,0.50mmol,1.7当量)和EDC(0.095g,0.50mmol,1.7当量)。搅拌20小时后将反应混合物倒入盐水(15ml),然后用10％CH3OH的CH2Cl2萃取(3×25ml)。合并的有机相用Na2SO4干燥并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(60％EtOAc的己烷)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.158g,70％)为泡沫：1H NMR(CDCl3)δ0.87-0.92(m,
6H),1.28(t,3H,J=7.2),1.46-1.68(m,5H),1.74-1.86(m,1H),1.97-2.19(m,2H),3.02(dd,
1H,J=13.7,5.6),3.11-3.24(m,3H),3.78(s,3H),3.79(s,3H),4.17(q,2H,J=7.2),4.20-
4.30(m,2H),4.35-4.45(m,2H),4.82-4.90(m,1H),5.07(d,1H,J=12.3),5.13(d,1H,J=
12.3),5.36(d,1H,J=7.8),5.82(dd,1H,J=15.6,1.2),6.42-6.46(m,2H),6.72(dd,1H,J=
15.6,5.3),6.88(d,1H,J=8.7),7.09(d,1H,J=9.0),7.13-7.20(m,5H),7.29-7.37(m,5H),
8.09(d,1H,J=6.5).产物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pvrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.156g,0.202mmol,1当量)和硝酸铯(Ⅳ)铵(0.277g,0.505mmol,2.5当量)在THF/H2O(2∶1,3ml)混合物中混合并搅拌2小时。将反应混合物倒入盐水(15ml)，然后用10％CH3OH的CH2Cl2萃取(3×25ml)。合并的有机相用Na2SO4干燥并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：2→5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.059g,47％)为米白色固体：
               1HNMR(CDCl3)δ0.85-0.92(m,6H),1.28(t,3H,J=7.2),1.39-1.65(m,4H),1.68-1.93(m,2H),2.08-2.20(m,1H),2.27-2.38(m,1H),3.02-3.13(m,2H),3.24-3.32(m,2H),4.11-4.20(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.47-4.58(m,1H),4.81-4.89(m,1H),5.05(d,1H,J=12.1),5.12(d,1H,J=12.1),5.26(d,1H,J=8.1),5.78(dd,1H,J=15.71.2),6.23(s,1H),6.72(dd,1H,J=15.7,5.3),7.13-7.25(m,6H),7.30-7.37(m,5H),7.54(d,1H,J=7.2).实施例343-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-25)的制备中间体3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pvrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似上述将3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(实施例31)将{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(按实施例33所述制备)与Cbz-L-Val-L-Phe-L-OH偶合，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯：      IR(cm-1)3288,1699,1652；1HNMR(CDCl3)δ0.87(d,3H,J=6.8),0.95(d,3H,J= 6.5),1.28(t,3H,J=7.2),1.48-1.60(m,2H),1.70-1.84(m,1H),1.95-2.20(m,3H),3.01(dd,1H,J=13.4,5.6),3.09-3.25(m,3H),3.78(s,3H),3.80(s,3H),4.03-4.10(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.24(d,1H,J=14.2),4.33-4.44(m,1H),4.38(d,1H,J=14.2),4.85-4.94(m,1H),5.08(d,1H,J=12.1),5.14(d,1H,J=12.1),5.39(d,1H,J=8.1),5.80(dd,1H,J=15.6,1.2),6.42-6.47(m,2H),6.70(dd,1H,J=15.6,5.3),6.81(d,1H,J=9.0),7.11-7.20(m,6H),7.31-7.39(m,5H),8.11(d,1H,J=6.2)；Anal.(C42H52N4O9)C,H,N.产物3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
将3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.215g,0.284mmol,1当量)，DDQ(0.071g,0.31mmol,1.1当量)和水(3滴)的CHCl3(4ml)悬浮液在23℃搅拌1小时，然后加热回流6小时。冷却过夜后再加入DDQ(0.019g,0.084mmol,0.3当量)，将混合物在67℃加热1小时，然后蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：2→5％CH3OH的CH2Cl2)，得到有些许杂质的产物。将其溶解于CH2Cl2(70ml)，用饱和NaHCO3(2×30ml)和盐水(30ml)洗涤，Na2SO4干燥并蒸发。剩余物在Et2O(10ml)中搅拌20分钟，过滤收集固体，真空干燥，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.060g,35％)为米白色固体：mp=215-217℃；IR(cm-1)3413,3295,1696,1649；1HNMR(CDCl3)δ0.83(d,3H,J=6.5),0.91(d,3H,J=6.8),1.28(t,3H,J=7.2),1.50-1.59(m,1H),1.70-1.91(m,2H),2.03-2.17(m,2H),2.26-2.38(m,1H),3.03(dd,1H,J=13.5,6.4),3.12(dd,1H,J=13.5,6.4),3.21-3.34(m,2H),3.96(dd,1H,J=8.3,6.4),4.17(q,2H,J=7.2)4.45-4.56(m,1H),4.83-4.92(m,1H),5.07(d,1H,J=12.1),5.13(d,1H,J=12.1),5.29(d,1H,J=8.3),5.77(dd,1H,J=15.8,1.2),5.94 (s,1H),6.71(dd,1H,J=15.8,5.3),6.95(d,1H,J=9.0),7.14-7.27(m,5H),7.31-7.38(m,5H),7.57(d,1H,J=7.2)；Anal.(C33H42N4O7)C,H,N.实施例 353-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-26)的制备产物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似实施例34所述将(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡啶烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯转化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法，将(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(按实施例8所述制备)转化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯：IR(cm-1)3422,3307,1713,1649；1H NMR(CDCl3)δ0.86-0.92(m,6H),1.28(t,3H,J=7.2),1.38-1.75(m,6H),1.77-1.89(m,1H),1.96-2.11(m,2H),3.07(d,2H,J=6.2),3.20-3.27(m,2H),4.13-4.24(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.41-4.53(m,1H),4.76-4.85(m,1H),5.06(d,1H,J=12.1),5.12(d,1H,J=12.1),5.34(d,1H,J=7.8),5.78(dd,1H,J=15.6,5.4),6.17(s,1H),6.70(dd,1H,J=15.6,5.4),7.00(d,1H,J=8.4),7.13-7.27(m,6H),7.30-7.37(m,5H),7.83(d,1H,J=6.8)；Anal.(C35H46N4O7·0.5H2O)C,H,N.实施例363-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-27)的制备中间体(4S,4”R)-4-{3’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
在0℃将三乙胺(6.43ml,46.1mmol,3.0当量)和新戊酰氯(1.89ml,15.3mmol,1.0当量)依次加到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.20g,15.3mmol,1当量)的THF(300ml)溶液中。将浑浊的反应混合物在0℃搅拌3.5小时，然后依次加入氯化锂(0.716g,16.9mmol,1.1当量)和(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(2.59g,14.6mmol,0.95当量)。升温至23℃并搅拌19小时后将反应混合物在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。合并的有机相用半饱和Na2CO3(150ml)洗涤，MgSO4干燥，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物经快速柱色谱纯化(30％EtOAc于己烷)，得到(4S,4”R)-4-{3’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(6.15g，产率97％)为无色油：IR(cm- 1)2978,1783,1694；1H NMR(CDCl3,异构体的混合物)δ1.46(s),1.58(s),1.63(s),2.01-2.05(m),2.72-3.13(m),3.29-3.33(m),3.74-3.79(m),3.82-4.09(m),4.11-4.25(m),4.67-4.70(m),7.20-7.37(m)；Anal.(C23H32N2O6)C,H,N.中间体(2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制备
在-78℃将(4S,4”R)-4-{3’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(6.15g,14.2mmol,1当量)的THF(25ml)溶液加到在相同溶剂(50ml)中的双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠(14.2ml 1.0M的THF溶液，14.2mmol,1.0当量)溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌15分钟，然后加入烯丙基碘(3.90ml,42.6mmol,3.0当量)。在-78℃又搅拌2小时后将反应混合物保持在-45℃2小时，然后在半饱和NH4Cl/5％Na2S2O3(2∶1)混合物(200ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之间分配。合并的有机相用H2O(100ml)洗涤，MgSO4干燥，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物经快速柱色谱纯化(15％EtOAc于己烷)，得到(2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.12g，产率46％)为粘稠泡沫：IR(cm-1)2978,1782,1685；1H NMR(CDCl3,异构体的混合物)δ1.42(s),1.45(s),1.49(s),1.52(s),1.62-1.78(m),1.80-2.01(m),2.23-2.49(m),2.51-2.56(m),2.76(dd,J=13.3,9.7),3.26(dd,J=13.3,3.6),3.58-3.64(m),3.67(d,J=8.7),3.90-3.98(m),4.02-4.15(m),4.16-4.30(m),4.75-4.82(m),5.06-5.11(m),5.74-5.88(m),7.22-7.36(m)；Anal.(C26H36N2O6)C,H,N.中间体(1S,3’R)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
在-78℃将臭氧鼓入(2’R,4S,4”R)-4-{2’-(4”-苄基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-戊-4’-烯基}-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.1g,6.60mmol,1当量)的CH2Cl2(200ml)和CH3OH(0.535ml,13.2mmol,2.0当量)溶液直到蓝色不再变化。用氩气净化反应混合物直到它变得无色。加入二甲硫醚(4.85ml,66.0mmol,10当量)，将混合物在-78℃搅拌3.5小时，然后在0℃保持1小时。将反应混合物在H2O(150ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之间分配后用MgSO4干燥合并的有机相，然后重力过滤。减压浓缩滤液，剩余物无需进一步纯化即可使用。
在23℃将上述剩余物溶解于THF/EtOH(2∶1)混合物(240ml)，依次加入EtOH(180ml),2,4-二甲氧基苄胺盐酸盐(5.38g,26.4mmol,4.0当量)，乙酸钠(2.17g,26.4mmol,4.0当量)和氰基硼氢化钠(0.829g,13.2mmol,2.0当量)。将所得悬浮液在23℃搅拌19小时，然后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×100ml)之间分配。用半饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤合并的有机相，Na2SO4干燥，然后减压浓缩。剩余物经过短硅胶柱(用50％EtOAc的己烷洗脱)，得到(3’R,4S)-{1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基甲基}-2,2-二甲基-噁唑烷-3-羧酸叔丁酯及杂质(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮。
将产物溶解于CH3OH(80ml)，加入TsOH·H2O(0.251g,1.32mmol,0.20当量)。将反应混合物加热到50℃并保持在此温度4小时。冷却到23℃后减压浓缩反应混合物至约20ml，然后在半饱和NaHCO3(150ml)和CH2Cl2/CH3OH(9∶1)混合物(2×150ml)之间分配。合并的有机相用Na2SO4干燥，然后减压浓缩。剩余物经快速柱色谱纯化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S,3’R)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.92g,34％)为泡沫：      IR(cm-1)3347(br),2937,1669；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s,9H),1.62-1.77(m,2H),1.94-2.04(m,1H),2.15-2.26(m,1H),2.40-2.50(m,1H),3.13-3.24(m,2H),3.56-3.77(m,3H),3.80(s,6H),3.82-4.16(m,1H),4.37(d,1H,J=14.3),4.45(d,1H,J=14.3),5.49(d,1H,J=7.8),6.42-6.45(m,2H),7.08-7.11(m,1H)；Anal.(C21H32N2O6·0.25H2O)C,H,N.中间体3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似实施例33所述将(1S,3’S)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯转化成3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的方法将(1S,3’R)-{2-(1’-(2”,4”-二甲氧基苄基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羟甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯转化成3-{Boc-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯：IR(cm-1)
3307,1713,1674；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t,3H,J=7.2),1.45(s,9H),1.57-1.82(m,2H),2.02-2.19
(m,2H),2.42-2.55(m,1H),3.11-3.25(m,2H),3.79(s,3H),3.80(s,3H),4.19(q,2H,J=7.2),4.32-4.50
(m,3H),5.97(dd,1H,J=15.7,1.4),6.38(d,1H,J=7.8),6.42-6.47(m,2H),6.86(dd,1H,J=15.7,5.1),
7.08-7.13(m,1H)；Anal.(C25H36N2O7)C,H,N.中间体3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pvrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制备
将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,6ml)加到3-{Boc-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.233g,0.489mmol,1当量)的1,4-二噁烷溶液(6ml)溶液中。搅拌1.5小时后蒸发掉挥发性物质，得到粗胺盐，无需纯化即可使用。
将胺盐溶解于DMF(4ml)，然后冷却到0℃。依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.202g,0.490mmol,1当量)，DIEA(0.255ml,1.46mmol,3当量)和HATU(0.186g,0.489mmol,1当量)。搅拌1.5小时后用MTBE(100ml)稀释反应混合物，用5％KHSO4，饱和NaHCO3和盐水(各10ml)洗涤，MgSO4干燥并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：60→75％EtOAc的己烷)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.208g,55％)为白色固体：mp=174-176℃；IR(cm-1)3287,1713,1649；1H NMR
(CDCl3)δ0.84-0.91(m,6H),1.29(t,3H,J=7.2),1.42-1.66(m,4H),1.67-1.77(m,1H),1.84-
1.95(m,1H),2.20-2.12(m,1H),2.33-2.45(m,1H),3.04-3.23(m,4H),3.78(s,3H),3.79(s,3H),4.15-4.29(m,1H),4.17(q,2H,J=7.2),4.31(d,1H,J=14.5),4.40(d,1H,J=14.5),4.67-4.84(m,2H),5.05(d,1H,J=12.1),5.11(d,1H,J=12.1),5.35(d,1H,J=8.1),5.76(dd,1H,J=15.6,1.6),6.42-6.46(m,2H),6.74-6.81(m,1H),6.75(dd,1H,J=15.6,5.0),7.06-7.10(m,1H),7.15-7.24(m,5H),7.29-7.36(m,5H),8.79(d,1H,J=5.9)；Anal.(C43H54N4O9)C,H,N.产物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制备
用类似实施例34所述将3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法将3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-二甲氧基苄基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯转化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯：                            IR(cm-1)3290,1702,1642；1HNMR(CDCl3)δ0.85-0.92(m,6H),1.30(t,3H,J=7.2),1.35-1.49(m,1H),1.52-1.71(m,3H),1.73-1.94(m,2H),2.15-2.26(m,1H),2.32-2.43(m,1H),3.02-3.18(m,2H),3.19-3.29(m,2H),4.15-4.27(m,1H),4.18(q,2H,J=7.2),4.65-4.74(m,1H),4.76-4.85(m,1H),5.07(d,1H,J=12.3),5.12(d,1H,J=12.3),5.18-5.25(m,1H),5.76-5.84(m,2H),6.64-6.78(m,2H),7.15-7.40(m,10H),7.91-7.98(m,1H)；Anal.(C34H44N4O7)C,H,N.实施例373-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-28)的制备中间体3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Boc-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯的制备
将(乙氧羰基亚甲基)三苯基正膦(PH-5)(1.20g,3.28mmol,1.2当量)加到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-Boc-氨基丙氨酸(按Webber等人所述方法制备，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),41:2786(1998))(1.60g,2.73mmol,1当量)的THF(55ml)溶液中，然后将反应物在室温搅拌过夜。真空除去挥发性物质，剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→1.5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.968g，含有三苯膦氧化物杂质)，无需纯化即可使用。中间体3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯的制备
在23℃将HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,10ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.95g,1.46mmol,1当量)的相同溶剂(20ml)的溶液中。将反应混合物在此温度搅拌1.5小时后再加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4.0M,10ml)。搅拌过夜后真空除去挥发性物质，剩余物与Et2O(20ml)一起研磨。滤出所得固体并用Et2O(3×10ml)洗涤，得到粗胺盐(0.63g,73％)为白色固体。
将胺盐溶解于CH3OH(10ml)，然后先后加入N-Boc-2-氨基乙醛(按Bischofberger等人所述方法制备，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.),53:3457(1988))(0.19g,1.16mmol,1.1当量)和NaHB3CN(0.069g,1.05mmol,1.0当量)。将反应混合物在23℃搅拌过夜，然后减压除去挥发性物质。将剩余物溶解于EtOAc(25ml)，有机相分别用水(25ml)和盐水(25ml),MgSO4干燥并蒸发。剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→3％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.32g,44％)为白色非晶状固体：             Rf=0.20(5％CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)1712,1649,1537,1252,1175；1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d,3H,J=6.6),0.82(d,3H,J=6.6),1.21(t,3H,J=7.0),1.26-1.37(m,13H),1.46-1.54(m,1H),2.56-2.60(m,2H),2.82-2.97(m,4H),3.98-4.04(m,1H),4.10(q,2H,J=7.0),4.42-4.49(m,2H),4.98(d,1H,J=12.5),5.04(d,1H,J=12.9),5.59(d,1H,J=15.8),6.73-6.75(m,1H),6.77(dd,1H,J=15.8,4.8),7.20-7.34(m,10H),7.41(d,1H,J=8.1),7.97(d,1H,J=7.0),8.07(d,1H,J=7.0)；Anal.(C37H53N5O8·0.50H2O)C,H,N.产物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯的制备
将TFA(0.8ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.29g,0.42mmol,1当量)的CH2Cl2(8ml)溶液中，并将反应混合物在23℃搅拌2小时。真空除去挥发性物质，剩余物溶解于EtOAc(25ml)，并依次用饱和NaHCO3溶液(25ml)，水(25ml)和盐水(25ml)洗涤。有机相经MgSO4干燥，然后浓缩，得到粗二胺(0.23g,92％,0.39mmol)为酱色非晶状固体。
将此胺溶解于THF(4ml)，然后加入羰基二咪唑(0.06g,0.36mmol,0.92当量)，并将反应混合物在23℃搅拌3.5小时。真空除去溶剂，剩余物经快速柱色谱纯化(梯度洗脱：0→2％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.12g,54％)为白色非晶状固体：                                    mp=161-164℃；Rf=0.21(5％ CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)1701,1647,1535,1277。1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d,3H,J=6.6),0.82(d,3H,J=6.6),1.21(t,3H,J=7.0),1.27-1.35(m,2H),1.48-1.52(m,1H),2.79-2.86(m,1H),2.92-3.05(m,3H),3.14-3.19(m,2H),3.25-3.30(m,2H),3.98-4.03(m,1H),4.10(q,2H,J=7.0),4.47-4.49(m,1H),4.59-4.63(m,1H),4.97-5.02(m,2H),5.72(d,1H,J=15.8),6.37(s,1H),6.71(dd,1H,J=15.8,5.5),7.15-7.39(m,10H),7.42(d,1H,J=8.1),8.00(d,1H,J=8.1),8.18(d,1H,J=8.1)；Anal.(C33H43N5O7)C,H,N.实施例38中间体Q1,Q2和Q3的合成
Figure A9980562701201
中间体1-乙酰基-3-(三苯基膦亚基)-吡咯烷-2-酮的制备
将2,4-二溴丁酰胺(butyride)(根据Ikuta等人所述方法制备，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),30:1995(1987))(46.1g,188.2mmol)的THF(1L)冷却到0℃，并用双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(40.9g,244.6mmol)的THF(200ml)溶液处理。将溶液保持在0℃2.5小时，然后倒入盐水(800ml)中，用乙酸乙酯(2L)萃取，MgSO4干燥。蒸发得到25.5g 3-溴-吡咯烷-2-酮，为棕色油。用Ac2O(76ml)处理，回流5小时。蒸发之后进行纯化(硅胶过滤，EtOAc洗脱)，得到28g 1-乙酰基-3-溴-吡咯烷-2-酮为深色油。加入THF(272ml)和三苯膦(42.8g,163.3mmol)，并将所得溶液回流8小时。冷却到23℃后过冷收集形成的1-乙酰基-3-(三苯膦基)-吡咯烷-2-酮溴化物沉淀。浓缩母液，然后冷却到0℃，得到6.6g剩余物。将其在CH2Cl2(1L)中混合，先后用1N NaOH(100ml)和盐水(2×100ml)洗涤。蒸发有机相，得到26.9g(总产率37％)1-乙酰基-3-(三苯基膦亚基)-吡咯烷-2-酮为酱色油。1HNMR(CDCl3)δ7.76-7.32(15H,m),3.90-3.85(2H,m),2.50(3H,s),2.56-2.30(2H,m).中间体2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯的制备
先后用咪唑(18.6g,273.7mmol)和TBSCl(13.0g,86.7mmol)处理Boc-D-丝氨酸甲酯(20.0g,91.2mmol)的DMF(300ml)。将溶液在室温保持8小时，然后用饱和氯化铵水溶液(300ml)洗涤，乙酸乙酯(800ml)萃取。有机相用盐水(300ml)洗涤，MgSO4干燥，得到30.2g(100％)2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯为无色油。                           1H NMR(CDCl3)δ5.32(1H,d,J=8.3),4.33(1H,dt,J=8.8,2.7),4.02(1H,dd,J=10.1,2.6),3.80(1H,dd,J=9.8,3.1),3.72(3H,s),1.43(9H,s),0.85(9H,s),0.0(6H,s).中间体{1-(1-乙酰基-2-氧-吡咯烷-3-亚基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
将2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯(12.7g,38.0mmol)的甲苯(190ml)冷却到-78℃，并用二异丁基氢化铝(15.6ml,87.4mmol)的甲苯(175ml)溶液处理。将内部温度保持在-70℃以下。将溶液在-78℃再保持90分钟，然后加入甲醇(7.7ml,190mmol)。在-78℃加入1-乙酰基-3-(三苯基膦亚基)-吡咯烷-2-酮(11.1g,28.6mmol)的CH2Cl2(50ml)，允许将所得溶液升至室温并保持30分钟。加入酒石酸钾钠(150g)的水溶液(600ml)，剧烈搅拌30分钟。用乙酸乙酯萃取混合物(4×250ml)，干燥(MgSO4)并蒸发。经硅胶色谱纯化，得到7.04g(60％){l-(1-乙酰基-2-氧-吡咯烷-3-亚基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯为无色油。
           1H NMR(CDCl3)δ6.59(1H,dt,J=8.7,2.9),4.98(1H,d,J=6.8),4.37-4.25(1H,m),3.77 (2H,t,J=7.3),3.70-3.58(2H,m),2.90-2.80(1H,m),2.75-2.60(1H,m),5.53(3H,s),1.41(9H,s),0.87(9H,s),0.04(6H,s).中间体{2-羟基-1-(2-氧-吡咯烷-3-亚基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制备
将{1-(1-乙酰基-2-氧-吡咯烷-3-亚基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(9.18g,22.2mmol)的THF(150ml)在0℃用TBAF(22.2ml 1MTHF溶液，22.2mmol)处理，并保持1小时。加入饱和氯化铵水溶液并搅拌10分钟，然后用乙酸乙酯萃取(2×200ml)。有机相用MgSO4干燥后蒸发。经硅胶色谱纯化，得到4.82g(73％)的无色油。将该油溶于甲醇(160ml)，用碳酸钾(223mg,1.62mmol)处理，在室温保持1小时。用固体柠檬酸(311mg，1.62mmol)处理反应混合物，加入乙酸乙酯(800ml)。溶液经硅胶过滤，蒸发后得到4.30g(总产率73％){2-羟基-1-(2-氧-吡咯烷-3-亚基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯为无色油。1H NMR(CDCl3)δ7.03(1H,br s),6.35(1H,dt,J=8.6,2.6),5.37(1H,d,J=6.5),4.40-4.20(1H,m),3.66(br s,3H),3.4(2H,t,J=6.7),3.10-2.80(1H,m),2.80-2.70(1H,m),1.41(9H,s).中间体{2-羟基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(非对映体混合物，Q1)的制备
用5％钯炭(1.78g)处理{2-羟基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亚基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(4.30g,16.8mmol)的乙酸乙酯(168ml)，并在大气压下氢化1小时。过滤混合物，蒸发后得到3.92g(91％){2-羟基-1-(2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯为无色油(1.5∶1的非对映体混合物)。1HNMR(CDCl3)δ6.99(1H,s),5.49(1H,d,J=8.4),3.70-3.50(3H,m),3.38-3.20(2H,m),2.60-2.20(2H,m),2.00-1.70(2H,m),1.65-1.45(1H,m),1.37(9H,s).中间体{2-羟基-1-(R-2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(Q2)的制备
用(R)-BINAP-RuCl(19mg,0.02mmol)处理{2-羟基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亚基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(98mg,0.39mmol)的甲醇(5ml)，然后置于氢气下(1200 psi,50℃)48小时。蒸发溶液，硅胶过滤(10％MeOH-EtOAc洗脱)。蒸发后得到75mg(75％){2-羟基-1-(R-2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯为无色油(9∶1的非对映体混合物)。1H NMR(CDCl3)δ6.32(1H,brs),5.40(1H,d,J=7.5),3.82(1H,br s),3.71-3.63(2H,m),3.34-3.31(2H,m),2.45-2.30(2H,m),2.09-1.86(2H,m),1.70-1.63(1H,m),1.42(9H,s).中间体{2-羟基-1-(S-2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(Q3)的制备
用(S)-BINAP-RuCl(19mg,0.02mmol)处理{2-羟基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亚基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.10g,0.39mmol)的甲醇(5ml)，然后置于氢气下(1200 psi,50℃)48小时。蒸发溶液，硅胶过滤(10％MeOH-EtOAc洗脱)。蒸发后得到74mg(74％){2-羟基-1-(S-2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯为无色油(9∶1的非对映体混合物)。1H NMR(CDCl3)δ6.66(1H,brs),5.51(1H,d,J=8.2),3.72-3.57(3H,m),3.34-3.31(2H,m),2.52-2.33(2H,m),2.20-1.86(1H,m),1.86-1.70(1H,m),1.62-1.50(1H,m),1.40(9H,s).
用多种本发明化合物进行的生化和生物试验结果如下所述。生化和生物学评价鼻病毒3C蛋白酶的抑制
制备各种化合物的原种(50mM，在DMSO中)；用相同溶剂稀释。用下列标准色谱法从血清型14,16和2制备重组鼻病毒3C蛋白酶(见Birch等人的“在大肠杆菌中表达的重组人鼻病毒14 3C蛋白酶的纯化”，《蛋白质表达纯化》(Protein Expr.Pur.),6(5):609-618(1995)):(1)用得自Pharmacia的Q Sepharose Fast Flow进行离子交换；(2)用得自Biorad的Affi-Gel Blue进行亲和色谱；及(3)用得自Pharmacia的Sephadex G-100进行分级。每个测定样品含有2％DMSO,50 mM Tris pH 7.6,1 mM EDTA，指定浓度的试验化合物，约1μM的底物和50-100 nM蛋白酶。通过添加酶而非底物使反应开始，得到kobs/I值。用荧光共振能量转移测定法测量RVP的活性。底物是(N-末端)DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly)-EDANS。在未切割的肽中，EDANS荧光被邻近的DABCYL部分熄灭。当切割肽时，熄灭现象被减弱，以荧光信号的增强测量活性。数据用标准非线性拟合程序(Enzfit)分析，结果示于下面表1和2中。在表1中，所有数据都是针对得自HRV血清型-14的鼻病毒3C蛋白酶的(由Robert Rueckert博士(威斯康星大学，Madison,Wisconsin)构建的感染性cDNA克隆制成)。表2展示了本化合物对几种得自非HRV血清型-14血清型的鼻病毒的蛋白酶的蛋白酶抑制活性。标示为kobs/[I]栏中的数据是从酶起始实验进展曲线上测得的。抗鼻病毒H1-HeLa细胞培养测定法
在此细胞保护测定法中，本发明化合物保护细胞不受HRV感染的能力用XTT染色还原法测量，该方法详见Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.,81:577-586(1989)。
H1-HeLa细胞以0.13(病毒颗粒/细胞)的感染复数(m.o.i.)被HRV-14感染，或仅被培养基模拟感染。将感染或模拟感染的细胞以8×105细胞/ml的浓度重新悬浮，并与适当浓度的待试验化合物一起温育。两天后，在试验板中加入XTT/PMS，产生的甲腊产物的量用分光光度仪在450/650nm进行定量分析。计算EC50值，表示为化合物处理过的病毒感染细胞产生的甲腊产物与无化合物的模拟感染细胞产生的甲腊产物相比增加50％的化合物浓度。计算50％细胞毒性剂量(CC50)，表示为化合物处理过的模拟感染细胞产生的甲产物与无化合物的模拟感染细胞产生的甲腊产物相比降低50％的化合物浓度。治疗指数(TI)的计算方法是用EC50除以CC50值。
除HRV血清型-14(由Robert Ruekert博士(分子病毒学研究所，威斯康星大学，Madison,Wisconsin)构建的感染性cDNA克隆制成)外，所有用于本测定的人鼻病毒(RHV)菌株都购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。繁殖HRV原种，病毒测定用H1-HeLa细胞(ATCC)进行。细胞在含有10％胎牛血清(购自Life Technologies,Gaithersburg,MD)的最小基本培养基中进行培养。
本发明化合物的试验与对照化合物WIN 51711,WIN 52084和WIN54954(得自Sterling-Winthrop Pharmaceuticals),Pirodavir(得自Janssen Pharmaceuticals)和Pleconaril(根据Diana等人所述方法制备，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),38:1355(1995))的试验对比着进行。从试验化合物测得的抗病毒数据示于表1和3中，其中所有数据是用HRV血清型-14试验获得的，除非用括号另外注明。符号“ND”表示未测定该化合物的值。
                            表1对HRV血清型-14的抑制活性
化合物   蛋白酶抑制kobs/[I](M-1sec-1)  细胞保护EC50(μM)
实施例31(对比化合物  #2)     25,000    0.610
实施例35(A-26)     239,000    0.030
实施例33(A-24)     257,000    0.100
实施例36(A-27)     18,000    1.600
实施例32(对比化合物  #3)     62,500    0.380
实施例34(A-25)     500,000    0.030
实施例5(A-4)     270,000    0.100
实施例8(A-7)     980,000    0.004
实施例7(A-6)     248,000    0.420
实施例9(A-8)     900,000    ND
实施例6(A-5)     1,500,000    0.005
实施例12(C-1)     68,400    0.100
实施例18(C-2)     270,000    0.002
实施例10(B-1)     240,000    0.100
实施例20(B-4)     500,000    ＜0.030
实施例17(B-2)     1,090,000    0.005
实施例1(对比化合物  #1)     573    ＞320.000
实施例2(A-1)     260,000    0.250
实施例3(A-2)     46,900    1.600
实施例4(A-3)     310,000    0.050
实施例11(A-10)     108,000    0.14
实施例13(A-11)     108,000    0.03
实施例14(A-9)     66,000    1.80
                            表1对HRV血清型-14的抑制活性
化合物  蛋白酶抑制kobs/[I](M-1sec-1)   细胞保护EC50(μM)
实施例15(A-12)     59,300     0.40
实施例16(A-13)     95,800     0.20
实施例19(B-3)     465,000     0.18
实施例21(A-14)     54,500     0.48
实施例22(A-15)     237,100     0.22
实施例23(A-16)     172,800     0.45
实施例24(A-17)     167,000     0.06
实施例25(A-18)     292,000     1.50
实施例26(A-19)     27,750     25.10
实施例27(A-20)     1,020     12.60
实施例28(A-21)     17,800     2.50
实施例29(A-22)     2,400     ND
实施例30(A-23)     26,000     ND
                        表2对其它HRV血清型的抑制活性
           化合物 鼻病毒血清型 kobs/I(M-1sec-1)
对比化合物    #2     (16)     6,500
  “     (89)     3,400
  “     (2)     2,000
对比化合物    #3     (2)     8,000
  “     (16)     16,900
(A-24)     (2)     31,000
                                表3抗鼻病毒活性
      编号     HRV    EC50(μM)   CC50(μM)     TI
  对比化合物#1    ＞320.000     ＞320     -
    (A-1)    0.250     ＞100     ＞400
    “     (2)    0.410     ND     ＞243
    “     (1A)    1.000     ND     ＞100
    “     (89)    0.220     ND     ＞450
    (A-2)    1.600     ＞100     ＞63
    (A-3)    0.050     ＞10     ＞200
    (A-4)    0.100     ＞100     ＞1000
    (A-5)    0.005     ＞10     ＞2000
    “     (2)    0.010     ND     ＞1000
    “     (16)    0.020     ND     ＞500
    “     (39)    0.020     ND     ＞500
    “     (89)    0.020     ND     ＞500
    “     (10)    0.050     ND     ＞200
    “     (1A)    0.030     ND     ＞333
    “     (3)    0.050     ND     ＞200
    “     (9)    0.040     ND     ＞250
    “     (12)    0.060     ND     ＞166
    “     (13)    0.020     ND     ＞500
    “     (17)    0.020     ND     ＞500
    “     (25)    0.180     ND     ＞55
    “     (30)    0.060     ND     ＞166
    “     (38)    0.130     ND     ＞76
    “     (87)    0.210     ND     ＞47
    (A-6)    0.420     ＞100     ＞237
    (A-7)    0.004     ＞10     ＞2500
    “     (2)    0.020     ND     ＞500
                                表3抗鼻病毒活性
    编号     HRV   EC50(μM)  CC50(μM)      TI
    “     (16)     0.040     ND     ＞250
    “     (39)     0.020     ND     ＞500
    “     (89)     0.020     ND     ＞500
    “     (10)     0.060     ND     ＞166
    “     (1A)     0.030     ND     ＞333
    “     (3)     0.020     ND     ＞500
    “     (9)     0.040     ND     ＞250
    “     (12)     0.070     ND     ＞143
    “     (13)     0.030     ND     ＞333
    “     (17)     0.020     ND     ＞500
    “     (25)     0.200     ND     ＞50
    “     (30)     0.090     ND     ＞111
    “     (38)     0.170     ND     ＞58
    “     (87)     0.590     ND     ＞16
    (A-8)     ND     ND     ND
    (B-1)     0.100     ＞100     ＞1000
    “     (1A)     0.300     ND     ＞333
    “     (10)     0.400     ND     ＞250
    (A-10)     0.140     ＞100     ＞714
    (C-1)     0.100     ＞10     ＞100
    (A-11)     0.030     50     1667
    (A-9)     1.800     ＞100     ＞55
    (A-12)     0.400     ＞100     ＞250
    (A-13)     0.200     ＞10     ＞50
    (B-2)     0.005     ＞100     ＞20000
    “     (2)     0.020     ND     ＞5000
    “     (16)     0.010     ND     ＞10000
    “     (39)     0.050     ND     ＞2000
                                表3抗鼻病毒活性
    编号     HRV   EC50(μM)  CC50(μM)       TI
    “     (89)     0.009     ND     ＞11111
    “     (10)     0.020     ND     ＞5000
    “     (1A)     0.020     ND     ＞5000
    “     (3)     0.020     ND     ＞5000
    “     (9)     0.006     ND     ＞16666
    “     (12)     0.050     ND     ＞2000
    “     (13)     0.010     ND     ＞10000
    “     (17)     0.010     ND     ＞10000
    “     (25)     0.030     ND     ＞3333
    “     (30)     0.040     ND     ＞2500
    “     (38)     0.070     ND     ＞1428
    “     (87)     0.060     ND     ＞1666
    (C-2)     0.002     ＞10     ＞5000
    “     (2)     0.004     ND     ＞2500
    “     (16)     0.010     ND     ＞1000
    “     (39)     0.010     ND     ＞1000
    “     (89)     0.004     ND     ＞2500
    “     (10)     0.020     ND     ＞500
    “     (1A)     0.010     ND     ＞1000
    “     (3)     0.020     ND     ＞500
    “     (9)     0.010     ND     ＞1000
    “     (12)     0.040     ND     ＞250
    “     (13)     0.007     ND     ＞1428
    “     (17)     0.007     ND     ＞1428
    “     (25)     0.070     ND     ＞142
    “     (30)     0.030     ND     ＞333
    “     (38)     0.050     ND     ＞200
    “     (87)     0.020     ND     ＞500
                                表3抗鼻病毒活性
    编号     HRV   EC50(μM)   CC50(μM)       TI
    (B-3)     0.180     ＞100     ＞543
    (B-4)     ＜0.030     ＞100     ＞3333
    (A-14)     0.480     ＞100     ＞208
    (A-15)     0.220     ＞100     ＞454
    “     (1A)     7.100     ND     ＞14
    “     (10)     2.700     ND     ＞37
    (A-16)     0.45     ＞100     ＞222
    “     (1A)     4.80     ND     ＞21
    “     (10)     4.50     ND     ＞22
    (A-17)     0.06     ＞100     ＞1786
    “     (1A)     1.80     ND     ＞56
    “     (10)     3.30     ND     ＞30
    (A-18)     1.50     ＞100     ＞67
    (A-19)     25.10     ＞100     ＞4
    (A-20)     12.60     ＞100     ＞8
    (A-21)     2.50     ＞100     ＞40
    (A-22)     ND     ND     ND
    (A-23)     ND     ND     ND
  对比化合物#2     0.61     ＞320     ＞524
    “     (16)     2.30     ＞320     ＞139
    “     (89)     6.30     ＞320     ＞50
    “     (10)     0.60     ＞320     ＞533
  对比化合物#3     0.38     ＞320     ＞842
    (A-24)     0.10     ＞100     ＞1000
    (A-25)     0.03     ＞100     ＞3333
    (A-26)     0.03     ＞100     ＞3333
    (A-27)     1.60     ＞100     ＞62
    WIN 51711     0.78     ＞60     ＞77
    WIN 52084     0.07     ＞10     ＞143
    WIN 54954     2.13     ＞63     ＞30
    Pirodavir     0.03     ＞10     ＞300
    Pleconaril     0.01     ＞10     ＞1000
抗柯萨奇病毒细胞培养测定法
从美国典型培养物保藏中心(ATCC,Rockville,MD)购得A-21(CAV-21)和B3(CVB-3)型柯萨奇病毒。CAV-21或CVB-3细胞在含有10％胎牛血清(购自Life Technologies,Gaithersburg,MD)的最小基本培养基中生长。
本发明化合物保护细胞不受CAV-21或CVB-3感染的能力用XTT染色还原法测量。该方法详见Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.,81:577-586(1989)。H1-HeLa细胞分别以0.025或0.075的感染复数(m.o.i.)被CAV-21或CVB-3感染，或仅被培养基模拟感染。将H1-HeLa细胞以每孔4×104细胞的浓度植入96孔滴定板中，并与适当浓度的试验化合物一起温育。一天(CVB-3)或两天(CAV-21)后，在试验板中加入XTT/PMS，产生的甲腊产物的量用分光光度仪在450/650nm进行定量分析。计算EC50值，表示为化合物处理过的病毒感染细胞产生的甲产物与无化合物的未感染细胞产生的甲腊产物相比增加50％的化合物浓度。计算50％细胞毒性剂量(CC50)，表示为化合物处理过的未感染细胞产生的甲腊产物与无化合物的未感染细胞产生的甲腊产物相比降低50％的化合物浓度。治疗指数(TI)的计算方法是用EC50除以CC50。
本发明化合物的试验与对照化合物WIN 54954(得自Sterling-Winthrop Pharmaceuticals),Pirodavir(得自JanssenPharmaceuticals)和Pleconaril(根据Diana等人所述方法制备，《医药化学杂志》(J.Med.Chem.),38:1355(1995))的试验对比着进行。从针对CAV-21和CVB-3的试验化合物测得的抗病毒数据示于表4中。
                             表4抗科萨奇病毒的活性
 化合物     菌株   EC50(μM)   CC50(μM)      TI
 (A-5)     CAV-21     0.23     ＞10     ＞43
 “     CVB-3     1.00     ND     ＞10
 (B-2)     CAV-21     0.16     ＞100     ＞625
 “     CVB-3     0.18     ND     ＞555
 WIN 54954     CAV-21     ＞100.00     ＞100     ND
 “     CVB-3     ＞100.00     ND     ND
 Pirodavir     CAV-21     ＞100.00     ＞100     ND
 “     CVB-3     ＞100.00     ND     ND
 Pleconaril     CAV-21     0.09     ＞10     ＞107
 “     CVB-3     ＞10.00     ND     ND
抗艾柯病毒和肠病毒细胞培养测定法
从ATCC(Rockville,MD)购得11型艾柯病毒(EV11)和70型肠病毒(EV70)。繁殖病毒原种，用MRC-5细胞(ATCC)进行抗病毒测定。细胞在含有10％胎牛血清(购自Life Technologies,Gaithersburg,MD)的最小基本培养基中生长。
本发明化合物保护细胞不受EV 11或EV 70感染的能力用XTT染色还原法(Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.,81:577-586(1989)测量。MRC-5细胞分别以0.003或0.004的感染复数(m.o.i.)被EV11或EV70感染，或仅被培养基模拟感染。将感染或未感染的细胞以每孔1×104细胞的浓度植入试验板中，并与适当浓度的试验化合物一起温育。四天后，在试验板中加入XTT/PMS，产生的甲腊产物的量用分光光度仪在450/650nm进行定量分析。计算EC50值，表示为化合物处理过的病毒感染细胞产生的甲腊产物与无化合物的未感染细胞产生的甲腊产物相比增加50％的化合物浓度。计算50％细胞毒性剂量(CC50)，表示为化合物处理过的未感染细胞产生的甲腊产物与无化合物的未感染细胞产生的甲腊产物相比降低50％的化合物浓度。治疗指数(TI)的计算方法是用EC50除以CC50。
本发明化合物的试验与对照化合物Pirodavir(得自JanssenPharmaceuticals)和Pleconaril(根据Diana等人所述方法制备，《医药化学杂志》(J.Med.Chcm.),38:1355(1995))的试验对比着进行。从针对菌株EV 11和EV 70的试验化合物测得的抗病毒数据示于表5中。
                      表5抗艾柯病毒和抗肠病毒活性
 化合物     菌株   EC50(μM)   CC50(μM)     TI
 (A-5)     EV-11     0.080     ＞10    ＞125
 “     EV-70     0.040     ND    ＞250
 (B-2)     EV-11     0.010     ＞100    ＞10000
 “     EV-70     0.003     ND    ＞33333
 Pirodavir     EV-11     3.700     ＞10    ＞3
 “     EV-70     0.060     ND    ＞167
 Pleconaril     EV-11     0.160     ＞10    ＞62
 “     EV-70     ND     ND    ND
到此为止，本说明书已经描述了优选实施方案和具体实施例。本领域技术人员都会理解，不背离本发明精神和范围的各种改变和改进都是允许的。因此，应该理解，本发明不受上述详细描述的限制，但是要受到所附权利要求及其等价物的限定。

Claims (77)

1．式Ⅰ化合物或其前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物：
Figure A9980562700021
其中
Y是-N(Ry)-,-C(Ry)(Ry)-或-O-，其中每个Ry分别是H或低级烷基；
R1是H,F，烷基，OH,SH或O-烷基；
R2和R3分别是-H；
Figure A9980562700022
其中n是整数0-5,A1是CH或N,A2和各A3分别选自C(R41)(R41)，N(R41),S,S(O),S(O)2和O2,A4是NH或NR41，其中各R41分别是H或低级烷基，条件是在上述A1,A2,(A3)n,A4和C=O构成的环中不能有两个以上杂原子连续出现，而且至少R2和R3之一是
Figure A9980562700023
R5和R6分别是H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-OR17,-SR17,-NR17R18,-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17,R18和R19分别是H,烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基或酰基；
R9是具有1-3个选自O,N，和S的杂原子的五员杂环；
Z和Z1分别是H,F，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-C(O)R21,-CO2R21,-CN,-C(O)NR21R22,-C(O)NR21OR22,-C(S)R21,-C(S)NR21R22,-NO2,-SOR21,-SO2R21,-SO2NR21R22,-SO(NR21)(OR22),-SONR21,-SO3R21,-PO(OR21)2,-PO(R21)(R22),-PO(NR21R22)(OR23),-PO(NR21R22)(NR23R24),-C(O)NR21NR22R23或-C(S)NR21NR22R23，其中R21,R22,R23和R24分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21,R22,R23和R24中的任意两个与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基。
2．根据权利要求1的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R2和R3分别是H；
Figure A9980562700031
其中n是整数0-5，各R41分别是H或低级烷基，在用*表示碳原子位置的立体化学结构可以是R或S；条件是至少R2和R3之一是
Figure A9980562700032
3．根据权利要求1的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Y是-N(Ry)-，其中Ry是H或低级烷基。
4．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Z和Z1分别是H,F，低级烷基，-CO2R21和-C(O)NR21R22，其中R21和R22各自分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基。
5．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1是H,F或甲基。
6．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中至少R2和R3之一是
7．根据权利要求7的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
8．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
9．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是未取代的或取代的苯基甲基。
10．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基。
11．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是烷基或芳基。
12．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基或萘基甲基。
13．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是一个有至少一个氮杂原子和一个氧杂原子的5员杂环。
14．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9选自取代的或未取代的1,2-噁唑基，1,3-噁唑基和1,2,4-噁二唑基。
15．根据权利要求3的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
16．根据权利要求3的式Ⅰ-A”化合物、或其前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物：
Figure A9980562700051
其中R1,R2,R6,R7,R9,Ry,Z和Z1定义同权利要求3。
17．根据权利要求16的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R2是
18．根据权利要求16的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
Ry是H或甲基；
R1是H,F或甲基；
Z和Z1分别是H,F,-CO2R21,-CN和-C(O)NR21R22，其中R21和R22分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；R2是
R6是未取代或取代的苯基甲基；
R7是烷基或芳基；及
R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
19．根据权利要求18的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7选自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基和萘基甲基。
20．根据权利要求16的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Ry,R1和Z分别是H，且
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6                            ，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是                
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是                   
Figure A9980562700065
       ，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是                
Figure A9980562700066
R2是        
Figure A9980562700067
               ，R6是
Figure A9980562700068
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A9980562700069
R2是CH2CH2C(O)NH2,    R6是                        ，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
R2     是
Figure A99805627000612
                ，R6是
Figure A99805627000613
，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A99805627000614
R2     是
Figure A99805627000615
                ，R6是
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是
Figure A99805627000617
R2     是
Figure A99805627000618
                ，R6是
Figure A99805627000619
，R7是C(CH3)3,Z1是CO2CH2CH3和R9是
R2     是        ，R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是      
R2     是        ，R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是      
R2     是
Figure A9980562700075
       ，R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2，
Z1是CO2CH2CH3和R9是    或
R2     是        ，R6是CH2Ph,R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3和R9是  
Figure A9980562700078
21．根据权利要求16的化合物、前药、有药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Ry是CH3,R1和Z分别是H，且
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是      
Figure A9980562700079
         ，R7是                    ，Z1是CO2CH2CH3，及R9是
Figure A99805627000711
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是CH2Ph,R7是CH2CH(CH3)2，及R9是
Figure A99805627000712
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是
Figure A99805627000713
               ，R7是
Figure A99805627000714
             和R9是
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是
Figure A99805627000716
               ，R7是CH2CH(CH3)2和R9是           或
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是               ，R7是
Figure A99805627000719
                和R9是
Figure A99805627000720
22．根据权利要求16的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，选自：
Figure A9980562700081
23．根据权利要求1的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Y是-CH2-。
24．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Z和Z1分别是H,F，低级烷基，-CO2R21和-C(O)NR21R22，其中R21和R22各自分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基。
25．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1是H,F或甲基。
26．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中至少R2和R3之一是
Figure A9980562700091
27．根据权利要求26的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
28．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
29．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是未取代的或取代的苯基甲基。
30．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基。
31．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是烷基或芳基。
32．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基或萘基甲基。
33．根据权利要求23的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是一个有至少一个氮杂原子和一个氧杂原子的5员杂环。
34．根据权利要求33的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是未取代的或取代的1,2-噁唑基，1,3-噁唑基或1,2,4-噁二唑基。
35．根据权利要求34的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
36．根据权利要求23的式Ⅰ-B”化合物、或其前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1,R2,R6,R7,R9,Z和Z1定义同权利要求23。
37．根据权利要求36的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R2是
Figure A9980562700102
38．根据权利要求36的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
R1是H,F或甲基；
Z和Z1分别是H,F,-CO2R21,-CN和-C(O)NR21R22，其中R21和R22分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；R2选自
Figure A9980562700111
R6是未取代或取代的苯基甲基；
R7是烷基或芳基；及
R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
39．根据权利要求38的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7选自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基和萘基甲基。
40．根据权利要求36的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1是H，且
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是               ，R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
R2是   
Figure A9980562700114
                 ，R6是
，R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3，及R9
R2是                     ，R6是
，R7是CH(CH3)2,Z和Z1一起是               ，其中羰基相对于R1氢是顺构型，及R9是               或
R2是
Figure A99805627001111
，R6是
Figure A99805627001112
，R7是CH(CH3)2,Z是H,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
41．根据权利要求1的下式化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，
Figure A9980562700121
42．根据权利要求1的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Y是-O-。
43．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中Z和Z1分别是H,F，低级烷基，-CO2R21和-C(O)NR21R22，其中R21和R22各自分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基。
44．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1是H,F或甲基。
45．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中至少R2和R3之一是
46．根据权利要求45的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
47．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是烷基或芳基。
48．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R5和R6之一是H，另一个是未取代的或取代的苯基甲基。
49．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基。
50．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是烷基或芳基。
51．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7和R8之一是H，另一个是2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基或萘基甲基。
52．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是一个有至少一个氮杂原子和一个氧杂原子的5员杂环。
53．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9选自取代的和未取代的1,2-噁唑基，1,3-噁唑基和1,2,4-噁二唑基。
54．根据权利要求42的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
55．根据权利要求42的式Ⅰ-C”化合物、或其前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，
Figure A9980562700131
其中R1,R2,R6,R7,R9,Z和Z1定义同权利要求42。
56．根据权利要求55的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R2是
57．根据权利要求55的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
R1是H,F或甲基；
Z和Z1分别是H,F,-CO2R21,-CN和-C(O)NR21R22，其中R21和R22分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，条件是Z和Z1不能二者均为H；或
Z1和R1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；或
Z和Z1与它们相连的原子一起形成一个环烷基或杂环烷基；R2是
Figure A9980562700141
R6是未取代或取代的苯基甲基；
R7是烷基或芳基；及
R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基。
58．根据权利要求57的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R7选自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，苯基甲基和萘基甲基。
59．根据权利要求55的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R1是H,Z是H，且
R2是CH2CH2C(O)NH2,R6是
Figure A9980562700142
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
Figure A9980562700143
或
R2是 ，R6是
Figure A9980562700145
，R7是CH(CH3)2,Z1是CO2CH2CH3，及R9是
Figure A9980562700146
60．根据权利要求1的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，在H1-HeLa细胞培养测定中具有EC50小于或等于100μM的抗小RNA病毒活性。
61．根据权利要求1的化合物，前药，有药物活性的代谢物，可药用盐或溶剂化物，在H1-HeLa细胞培养测定中具有EC50小于或等于10μM的抗鼻病毒活性。
62．具有选自下列结构式的化合物或其前药，有药物活性的代谢物，可药用盐或溶剂化物，其中
R1,R2,Z和Z1定义同权利要求1；
n是1或2；
Ry是H或低级烷基；
R6是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R7是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，-OR17,-SR17,-NR17R18,-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17,R18和R19分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基或酰基；及
R9是具有1-3个选自O,N和S的杂原子的5员杂环。
63．根据权利要求62的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
R1是H,F或烷基；
Ry是H或甲基；
R6是任选地被一个或多个选自烷基和芳基的取代基取代的烷基；
R7是烷基，环烷基，杂环烷基，芳基或杂芳基；
R9是具有1-3个选自O,N和S的杂原子的5员杂环，其中至少一个杂原子是氮，该杂环是未取代的或被一或两个选自低级烷基和卤素的取代基取代的杂环。
64．根据权利要求62的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
R6是芳基甲基或芳硫基甲基；
R7是烷基；
R9是未取代的或被一或两个选自甲基和卤素的取代基取代的3-异噁唑基或5-异噁唑基；及
Z是H,Z1是-CO2R21,-CN或-C(O)NR21R22，其中R21和R22分别是H，烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，酰基或硫酰基，或R21和R22与它们相连的原子一起形成一个杂环烷基，或Z和Z1一起形成一个环形酯或酰胺。
65．根据权利要求64的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中：
R1是H或F；
R6是芳基甲基或芳硫基甲基；及
R7选自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，及芳基甲基。
66．根据权利要求65的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，其中R11是苯基甲基，其中苯基部分任选地带有1-3个选自卤素，低级烷基和低级烷氧基的取代基。
67．根据权利要求62的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物，选自：
Figure A9980562700161
68．含有下列成分的药物组合物：(a)治疗有效量的至少一种抗小RNA病毒药，即权利要求1定义的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物；及(b)可药用载体，稀释剂，媒介物或赋形剂。
69．治疗由小RNA病毒3C蛋白酶活性介导的哺乳动物病症的方法，包括给需要治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1定义的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物。
70．抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性的方法，包括使小RNA病毒3C蛋白酶与有效量的至少一种权利要求1定义的化合物、前药、药物活性的代谢物、可药用盐或溶剂化物接触。
71．权利要求70定义的方法，其中小RNA病毒3C蛋白酶是鼻病毒蛋白酶。
72．下式化合物或其可药用盐，
Figure A9980562700181
其中：
p是整数0-5；
A11是CH或N,A12和各A13分别选自C(R61)(R61),N(R61),S,S(O),S(O)2和O,A14是NH或NR61，其中各R61分别是H，烷基，酰基或芳基，条件是在上述A11,A12,(A13)n,A14和C=O构成的式Ⅱ中的环中不能有两个以上杂原子连续出现；
各R141分别是H或低级烷基；
R51是H，烷基，酰基或芳基；
R52,R53和R54分别选自H，羟基，烷基，酰基和芳基；或R52,R53和R54其中任意两个一起构成=O或=C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分别选自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，CO2N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及
R55和R56各自分别是H或氮的适当保护基。
73．下式化合物或其可药用盐，
Figure A9980562700182
其中
p是整数0-5；
R51是H，烷基，酰基或芳基；
R52,R53和R54分别选自H，羟基，烷基，酰基和芳基；或R52,R53和R54其中任意两个一起构成=O或=C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分别选自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，CO2N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及
R55和R56各自分别是H或氮的适当保护基。
74．根据权利要求73的化合物或其可药用盐，其中n是1或2。
75．根据权利要求74的化合物或其可药用盐，其中R52,R53和R54分别独立地选自H，烷氧基，羟基和羰基。
76．根据权利要求73的化合物或其可药用盐，选自：
Figure A9980562700191
其中
PN是氮的适当保护基，及q是1或2。
77．根据权利要求73的化合物或其可药用盐，选自：
Figure A9980562700201
其中
Boc是叔丁氧羰基。
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