CN1307422C - 一种质控品稀释液及其形成的质控品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抗原抗体稀释液，由作为溶剂的体积百分比为70～90%的pH7.2的PBS缓冲液，体积百分比为10～30%的小牛血清，及保护剂硫柳汞组成。本发明的第二方面是一种质控品，由含有HBsAg、抗-HCV、抗-HIV或梅毒抗体的血浆，或其组合配制而成，其中小牛血清的体积百分比为10～30%，溶剂为pH7.2的PBS缓冲液，并含有硫柳汞作为保护剂。本发明人的抗原抗体稀释液配制的质控品大大延长了质控样品的期限，使得质控样品能够在常温下运输，且用户收到后不加任何操作便可直接使用，并能保证质控品的质量。
Description
技本领域
本发明涉及化验室常规传染病检测的质量控制，尤其涉及一种抗原抗体稀释液及其形成的质控品。
背景技术
化验室的检测质量关系着病人的明确诊断和病情监测，在血液传染病筛查领域，检验结果的正确与否还与血液的安全性密切相关。对使用试剂进行质量考核，开展传染病检测的室内质控以及参加合适的室间质量评估体系是保障检测质量的一系列方法。然而，由于质控品制备工艺的不足，目前国内用来进行试剂考核、室内质控和室间质评的质控样品的稳定性不高，一个重要原因是由于质控样品的降解使考核、质控和质评的结果偏差较大，一方面影响了对化验室检测结果的正确判断，甚至会直接危及到化验结果的准确性，另一方面则使各医院临床检验化验室和血站化验室面临管理混乱和技术困难的危险。
目前国内常用的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒抗体质控品的稳定性均不高，通常只能在4℃条件下保存数天，-20℃条件下保存一到二年，因此邮寄或运输时往往将质控品抽成冻干粉，而用户在拿到冻干粉后，则需按规定加入一定量的溶剂，使冻干粉复溶后方可使用，由于整个操作过程复杂且影响因素太多，质控品中抗原或抗体的浓度变异很大，很大程度影响了质控样品的稳定性，有时会失去质控的作用。
研究表明，稀释液的配方对质控样品的稳定性起着关键的作用，其中抗原抗体稀释液是制备稳定的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒抗体质控品所必需的成分。本发明着眼于开发可提高质控品稳定性的抗原抗体稀释液，使配制出的质控品更为精确和适用。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗原抗体稀释液。
本发明的另一目的是提供一种由本发明抗原抗体稀释液形成的质控品。
本发明的第一方面是这样实现的：一种抗原抗体稀释液，由作为溶剂的体积百分比为70～90％的pH7.2的PBS缓冲液，体积百分比为10～30％的小牛血清，及保护剂硫柳汞组成。
更佳的，所述硫柳汞质量百分比为0.05～0.3％。
本发明的第二方面是这样实现的：一种质控品，由含有HBsAg、抗-HCV、抗-HIV或梅毒抗体的血浆，或其组合配制而成，其中小牛血清的体积百分比为10～30％，溶剂为pH7.2的PBS缓冲液，并含有硫柳汞作为保护剂。
本发明的抗原抗体稀释液，可以用常规的化学配制方法配制，即以pH7.2的PBS缓冲液作为溶剂，取体积百分比为10～30％的小牛血清加入，并加入保护剂硫柳汞数克，较好的情况是加入质量百分比为0.05～0.3％的硫柳汞，例如1～2克，混匀后4℃过夜保存，即形成本发明的抗原抗体稀释液。
本发明的质控品，由含有HBsAg、或抗-HCV、或抗-HIV、或梅毒抗体阳性血浆，或其组合配制而成，即先将收集来的抗原抗体阳性血浆进行定量及病毒灭活，再利用本发明的抗原抗体稀释液进行稀释，所稀释的浓度是该质控品商业使用的浓度的域值范围，例如对于HBsAg质控品而言，稀释的浓度分别为0.5±0.1ng、1±0.1ng、2±0.2ng和5±0.5ng，制备成HBsAg定值参考系列；在所述质控品中，小牛血清占该质控品的体积百分比为10～30％，所用溶剂为pH7.2的PBS缓冲液，并含有硫柳汞作为保护剂。为使效果良好，在抗原抗体稀释液中可以先不加入硫柳汞，而在稀释得到恰当浓度的质控品时再行加入。
具体作为抗原抗体稀释液使用时，可按配方取pH7.2的PBS缓冲液和小牛血清进行配制，所得混合物直接用于稀释抗原或抗体原液，用PBS缓冲液精确调整至所需浓度，然后加入保护剂硫柳汞数克，混匀后4℃过夜保存，分装形成所需的质控品。
有益效果：由于本发明人的抗原抗体稀释液配制的质控品大大延长了质控样品的室温保存、4℃保存、-20℃保存的期限，试验的效果是室温情况下可以保存一周以上、4℃可以保存一月、-20℃可以保存二到三年、-80℃可以长期保存。这样使得该类质控样品能够通过特快专递在常温下运输，且用户收到后不加任何操作便可直接使用，并能保证质控品的质量，大大地方便了各医院和血站检验科室。
具体实施方式
下面用实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。下列事实例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域的常规条件进行。
实验一：含有抗原抗体阳性血浆的制备
1、参照文献(吴昌烈，郑岚，冯恭文，等.全国血站检验的室间质量评价.中国输血杂志，1997；10(1)：51)，将收集来的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗体阳性血浆进行复检、阳性确认、定量、混合，并进行病毒灭活处理。
2、使用ELISA法检测混合阳性血浆中的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗体并加以定量。
实验二：抗原抗体质控品的配制及其效果测定
实施例1～10：HBsAg质控品的配制
具体步骤如下：
1、依照表1所示，取pH7.2的PBS缓冲液作为溶剂，分别取体积百分比为0％、10％、20％、30％的小牛血清加入，制成体积为1000毫升的混合物。
2、直接用所得混合物稀释实验一处理过的HBsAg血浆混合物，使用ELISA法反复检测稀释好的样品，确认其检测值S/Co在7.5～9.0范围内，制备1±0.1ng HBsAg定值质控品(1±0.1ng HBsAg定量标准：ABBOTT3.0试剂检测，S/Co在7.5～9.0范围内)。
3、在上述系列质控品中加入硫柳汞，使硫柳汞在质控品中的终浓度分别为0.05％、0.1％、0.3％，混匀后4℃过夜保存，即形成本发明的HBsAg质控品。
4、分装保存稀释好的样品，并于不同保存条件和保存时期内取出样品，ELISA法检测HBsAg浓度，结果见表1。
表1 1.0ng HBsAg定值质控血清的稳定性实验
| 实施例 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 小牛血清(体积百分比) | 0 | 10％ | 10％ | 10％ | 20％ | 20％ | 20％ | 30％ | 30％ | 30％ |
| 硫柳汞(质量百分比) | 0 | 0.05 | 0.1 | 0.3 | 0.05 | 0.1 | 0.3 | 0.05 | 0.1 | 0.3 |
| 0天(S/Co) | 7.8 | 8.3 | 8.0 | 8.0 | 8.1 | 7.8 | 8.0 | 8.5 | 8.7 | 8.8 |
| 室温一周(S/Co) | 0.9 | 7.9 | 8.3 | 8.0 | 8.0 | 8.0 | 8.2 | 8.3 | 8.8 | 8.5 |
| 室温二周(S/Co) | 0.05 | 7.8 | 8.1 | 8.0 | 7.8 | 7.7 | 7.9 | 8.0 | 8.0 | 8.3 |
| 4℃一月(S/Co) | 7.2 | 8.2 | 8.0 | 8.3 | 7.9 | 7.6 | 8.3 | 8.5 | 8.6 | 8.9 |
| 4℃二月(S/Co) | 1.3 | 8.0 | 7.8 | 7.9 | 7.6 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 8.7 | 8.9 |
| -20℃一年(S/co) | 3.2 | 8.0 | 7.6 | 8.5 | 8.0 | 7.2 | 7.9 | 8.3 | 9.2 | 9.0 |
| -20℃二年(S/Co) | 1.5 | 8.2 | 7.9 | 8.2 | 8.0 | 7.8 | 7.8 | 8.2 | 9.2 | 9.2 |
由上述结果可以看出，在小牛血清10～30％的浓度范围内1.0ng HBsAg质控血清的稳定性较高，室温情况下可以保存一周以上、4℃可以保存一月以上、-20℃可以保存二年以上。
实施例11～20：抗-HCV质控品的配制
具体步骤如下：
1、依照表2所示，取pH7.2的PBS缓冲液作为溶剂，分别取体积百分比为0％、10％、20％、30％的小牛血清加入，制成体积为1000毫升的混合物。
2、根据实验一处理过的抗-HCV混合阳性血浆中抗-HCV的S/Co，直接用所得混合物进行稀释，使S/Co稀释为2～3的范围内。使用ELISA法反复检测稀释好的样品，确认其S/Co在2～3的范围内。
3、在上述系列质控品中分别加入硫柳汞，使硫柳汞在质控品中的终浓度分别为0.05％、0.1％、0.3％，混匀后4℃过夜保存，即形成本发明的抗-HCV质控品。
4、分装保存稀释好的样品，并于不同保存条件和保存时期内取出样品，ELISA法检测抗-HCV浓度，结果见表2。
表2 抗-HCV质控血清的稳定性实验
| 实施例 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |
| 小牛血清(体积百分比) | 0 | 10％ | 10％ | 10％ | 20％ | 20％ | 20％ | 30％ | 30％ | 30％ |
| 硫柳汞(质量百分比) | 0 | 0.05 | 0.1 | 0.3 | 0.05 | 0.1 | 0.3 | 0.05 | 0.1 | 0.3 |
| 0天(S/Co) | 2.2 | 2.5 | 2.5 | 2.6 | 2.5 | 2.1 | 2.4 | 2.5 | 2.4 | 2.8 |
| 室温一周(S/Co) | 0.5 | 2.4 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.4 | 2.4 | 2.5 | 2.3 | 2.6 |
| 室温二周(S/Co) | 0.1 | 2.5 | 2.4 | 2.5 | 2.5 | 2.2 | 2.5 | 2.6 | 2.5 | 2.5 |
| 4℃一月(S/Co) | 1.0 | 2.5 | 2.5 | 2.6 | 2.6 | 2.3 | 2.5 | 2.6 | 2.4 | 2.7 |
| 4℃二月(S/Co) | 0.1 | 2.3 | 2.4 | 2.5 | 2.4 | 2.0 | 2.5 | 2.7 | 2.5 | 2.5 |
| -20℃一年(S/Co) | 1.2 | 2.5 | 2.6 | 2.5 | 2.3 | 2.5 | 2.7 | 2.6 | 2.7 | 2.7 |
| -20℃二年(S/Co) | 0.3 | 2.2 | 2.4 | 2.5 | 2.4 | 2.3 | 2.8 | 2.5 | 2.5 | 2.6 |
由上述结果可以看出，在小牛血清10～30％的浓度范围内抗-HCV质控血清的稳定性较高，室温情况下可以保存一周以上、4℃可以保存一月以上、-20℃可以保存二年以上。
在抗-HIV和梅毒抗体质控品的制备过程中，仅将抗-HCV阳性血浆置换为抗-HIV或梅毒抗体阳性血浆，其他操作步骤，如抗原抗体稀释液的配制及用法等与抗-HCV质控品一样。因此，抗-HIV和梅毒抗体质控品的稳定性实验结果不再重复列出。
Claims (2)
1.一种质控品稀释液，由作为溶剂的体积百分比为70～90％的pH7.2的PBS缓冲液，体积百分比为10～30％的小牛血清，及质量百分比为0.05～0.3％的硫柳汞组成。
2.一种质控品，由权利要求1所述的质控品稀释液及含有HBsAg、抗-HCV、抗-HIV或梅毒抗体的血浆中的一种或几种组成。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108562754A (zh) * | 2018-01-17 | 2018-09-21 | 河北睿达模生物科技有限公司 | 乙型肝炎e抗原单项质控品及其制备工艺 |
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| CN1664584A (zh) | 2005-09-07 |
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