CN1367018A - 溶葡萄球菌酶的复配制剂及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种溶葡萄球菌酶的复配制剂及制备方法和应用。本发明的产品为杀菌类生物酶制剂,该制剂是由溶葡萄球菌酶、溶菌酶、杀菌剂、离子化合物、氨基葡萄糖物质、麻黄素和保鲜剂组成。该产品不仅有效杀灭金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、淋球菌、链球菌、厌氧菌、绿脓杆菌、大肠杆菌,表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、嗜麦芽窄食单孢菌以及胃幽门螺旋杆菌,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐药性肺炎双球菌、等耐药性细菌也可以高效杀灭。本发明产品具有杀菌谱广、无毒副作用、无残留的特点。制备方法简单宜于规模型生产。

Description

溶葡萄球菌酶的复配制剂及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及杀菌类生物制剂，该系列制剂具体涉及溶葡萄球菌酶的复配技术及制备方法和应用。

背景技术

目前在临床上大量应用的化学类治疗剂，担负着治疗病原菌微生物所引起的许多疾病的任务。但随着化学类治疗剂的广泛使用，不断出现许多不利因素。从90年代初，国内外即开始寻求一种可替代抗生素，可起到杀菌效果，但不易产生耐药菌株的杀菌制剂。

1993年起，国内外有专利和文献提到应用溶葡萄球菌酶治疗各类金黄色葡萄球菌感染。溶葡萄球菌酶本身可杀灭金黄色葡萄球菌及耐药性金葡菌。

国内外专利：US6315996

Topical lysostaphin therapy for staphylococcus ocular infections

溶葡球菌素局部治疗葡萄球菌引起的眼部感染

2001年11月13日    O’Callaghan

Board of supervisors of Louisiana state university and agricultural

and(baton rouge，LA)WO0129201

EXPRESSION OF RECOMBINANT MATURE LYSOSTAPHIN

重组成熟溶葡球菌酶的表达

2001年4月26日     KHATRI GHAN SHYAM

BHARAT BIOTECH INTERNATIONAL L(IN印度)

AMBIUS6028051

Method for the treatment of staphylococcal disease

治疗由葡萄球菌引起的疾病的方法

2000年2月22日  Climo

AMBIWO9904809

PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING

LYSOSTAPHIN ALONE OR IN COMBINATION WITH AN

ANTIBIOTIC FOR THE TREATMENT OF STAPHYLOCOCCAL

INFECTIONS

治疗葡萄球菌感染的含溶葡球菌酶的药物成分(只含溶葡球菌酶

或与抗生素复合)

1999年2月4日    CLIMO    公司：AMBIUS5760026

Method for treating mastitis and other staphylococcal infections

治疗乳腺炎和其他葡萄球菌感染的方法

1998年6月2日(最早从1987年5月11日开始)    Blackburn

AMBIDE4425645

New lysostaphin gene with deletion in pro-segment repeat region德国专利

删除起始片段重复部分基因的新型溶葡球菌酶

HAMMES WALTER PROF DR(DE)；

MUELLER KARL GMBH&CO(DE)

到目前为止，世界各国对溶葡萄球菌酶大多停留于治疗金黄色葡萄球菌这一领域。而且由于其酶活性极不稳定，常温下难以保存，其应用范围也仅在实验室阶段。

目前，除了金黄色葡萄球菌，已有更多的细菌对抗生素产生耐药性，从而使得病原菌感染难以得到有效控制。尤其是抗生素使用不当，所造成的耐药菌株数量日益增多，这些微生物引起的感染，不仅在常规治疗情况下疗效欠佳或完全无效，同时由于杀灭了人体本身的有益菌群，还可以改变病人的正常菌群的生态状况。另外，从我国调查的情况来看，我国的医院内交叉感染相当严重，给病人造成了额外的痛苦，增加经济负担和不幸，严重的医院交叉感染使病人所患的原发疾病不能达到预期的治疗，甚至导致失败，产生难以治愈的后遗症或造成死亡。

因而需要一种可替代抗生素，可广谱杀菌，且不易产生耐药性菌株的杀菌剂来解决以上不利因素。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供了一种可分别添加于外用医药(包括皮肤、粘膜)、食品保鲜剂、保健食品、外用消毒剂、牙膏中的溶葡萄球菌酶复配制剂。该系列产品具有安全无毒副作用，不易产生耐药性，高效、广谱杀菌。

本发明提供了一种溶葡萄球菌酶复配制剂，该制剂是由0.1-20％溶葡萄球菌酶、50-85％溶菌酶、1-20％一种杀菌剂、0.5-20％离子化合物、0.2-30％氨基葡萄糖物质、0-20％麻黄素和0.1-20％保鲜剂以任意比例组成100％的组成。

本发明公开了溶葡萄球菌酶复配制剂，该制剂可添加于外用医药、食品保鲜剂、口服药物、耳药、鼻药、渔药、日化。

配方：

    组分                            比例溶葡萄球菌酶                            0.1-20％溶菌酶                                  50-85％一种杀菌剂                              1-20％一种离子化合物                          0.5-20％一种氨基葡萄糖物质                      0.2-30％麻黄素                                  0-20％一种保鲜剂                              0.1-20％

一种杀菌剂可以是洗必泰、抑菌肽中的一种；

一种离子化合物可以是K⁺、Na⁺、Mg²⁺、PO^4-、Cl^-中的2种的组合；

一种氨基葡萄糖物质可以是甲壳素、壳聚糖、N-乙酰-D-氨基中的一种；

一种保鲜剂可以是对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸钠中的一种。

溶葡萄球菌酶是一种革兰氏阳性菌的溶菌素。组成该类革兰氏阳性菌(例如金黄色葡萄球菌)细胞壁肽聚糖的四肽侧链的氨基酸，依次为L-丙氨酸，D-谷氨酸，L-赖氨酸，D-丙氨酸；而首位的L-丙氨酸通过一个酰胺键与胞壁酸相连，该聚糖链四肽侧链第3位的L-赖氨酸，通过五肽(五个甘氨酸)交联桥联结到相邻聚糖链四肽侧链D-丙氨酸羧基上。由此纵横交叉，左右联结构成十分坚韧的三维立体多孔结构，并聚合成较厚的肽聚糖层。溶葡萄球菌酶可切断肽聚糖中的Gly-Gly键。

为了增加溶葡球菌酶的稳定性，扩大杀菌谱，我们选择了溶菌酶，溶菌酶能裂解N-乙酰胞壁酸C-1与N-乙酰葡萄糖胺C-4之间的β-1，4糖苷键。从而使杀菌活性更强，达到溶解并杀死细菌的目的，并可避免细菌耐药性的产生。

此外我们选择了数十种小分子化合物，经过反复筛选，最终选定一种杀菌剂如洗必泰、抑菌肽，一种氨基葡萄糖物质如甲壳素、壳聚糖、N-乙酰-D-氨基；一种保鲜剂如对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸钠苯甲酸钠。将这些成份分别以不同的配比与上述2种酶复配，同时添加一些钾、钠、镁离子化合物，并鉴定所产生的复合物的杀菌效果。我们发现，所产生的各个复配物不仅杀菌效果较溶葡萄球菌酶高得多，且10-40倍于三者杀菌效果的简单叠加；各个复合物的杀菌谱也明显扩大，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均可达到很强的杀灭作用；

经试验验证各复合物对淋球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、溶血性链球菌均显现出很强的杀菌作用。

其中1％浓度溶葡萄球菌复合酶制剂溶液经上海市预防医学研究院检测，经检测作用皮肤表面2-10分钟可迅速杀灭淋球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、溶血性链球菌等，杀灭率达99.9％。具有杀菌效果好，无刺激等特点。

我公司委托上海市华山医院抗生素研究所、第二军医大学长海医院检验科、上海市第六人民医院检验科、上海市第九人民医院检验科等单位曾将临床各科收集到的400多株细菌进行了该制剂的抑杀菌实验。实验结果表明：1％浓度溶葡萄球菌复合酶制剂溶液对临床上常见的金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌以及胃幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等均有明显的抑杀作用。

纯溶葡萄球菌酶在常温下很不稳定，复配的溶葡萄球菌复合酶中含有多种我们筛选的稳定剂和增效剂，稳定性大为增强，使之可适用于工业化规模生产。

溶葡萄球菌酶和溶葡萄球菌复合酶酶活稳定性实验比较，经37℃保存3个月，见表1、表2。

表1溶葡萄球菌酶37℃3个月放置前后酶活性比较

	溶葡萄球菌酶放置前酶活性(U/mg)	溶葡萄球菌酶37℃3个月放置后酶活性(U/mg)	下降率(％)
				1	566	301	46.8
2	568	299	47.3
				3	560	290	48.2
平均值			47.4

表2溶葡萄球菌复合酶37℃3个月放置前后溶葡萄球菌酶活性比较

	溶葡萄球菌复合酶放置前酶活性(U/g)	溶葡萄球菌复合酶37℃3个月放置后酶活性(U/g)	下降率(％)
				1	1000	960	4.00
2	1020	967	5.20
				3	1015	967	4.73
平均值			4.64

由上表可见溶葡萄球菌复合酶中的溶葡萄球菌酶酶活稳定性较纯溶葡萄球菌酶高。

实验还证明溶葡萄球菌复合酶制剂对耐药性菌株，如目前医学临床上最感棘手的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，耐药性肺炎双球菌、嗜麦芽窄食单孢菌的效果更优于常用抗生素。

本发明的另一需要解决的技术问题是提供了上述溶葡萄球菌酶复合制剂的制备方法，该方法是在无菌室中，按上述各配方称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

本发明的主要成份—溶葡萄球菌酶、溶菌酶、少量的小分子化合物，包括苯甲酸钠、抑菌肽、麻黄素、洗必泰、乙醇及Mg²⁺、Ca²⁺、Na⁺等，可添加于所需的不同产品中。该制剂不会对皮肤和粘膜产生刺激，不对机体产生任何形式的毒副作用，并可通过代谢彻底降解，没有残留，不会富集。

其基本特点为：

1.杀菌谱较溶葡萄球菌酶广。不仅能有效杀灭金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌、厌氧菌、嗜麦芽窄食单孢菌等常见致病细菌，对淋球菌、胃幽门螺旋杆菌也有很强的杀灭作用。此外对一些耐药性细菌，如耐药性金黄色葡萄球菌、耐药性肺炎双球菌等也显示出极强的杀菌效果。

2.杀菌活性和稳定性大大高于溶葡萄球菌酶。由于溶葡萄球菌复合酶是以溶葡萄球菌酶为主要成分，配以溶菌酶、上述小分子化合物及稳定剂、增效剂等成分复合而成，比纯的溶葡萄球菌酶具有更大的稳定性，经测试证明，该产品在常温下可保存2年。

3.该系列溶葡球菌复合酶制剂易于制造本说明书所提及的各种产品，适用于各种剂型。

添加了本发明复合酶制剂的药物可用于治疗脓肿、皮癣、溃疡、褥疮、烧伤、烫伤、灼伤、疖、割伤、口腔溃疡、阴道炎、各类由细菌感染引起的口腔疾病、呼吸道疾病和急慢性胃炎，各类外耳道炎症、中耳炎、角膜炎、眼眶蜂窝织炎、结膜炎、麦粒肿、急慢性鼻炎、鼻窦炎、预防性病、水产的细菌性疾病、防治粉刺、各类由细菌、真菌引起的面部皮肤疾患等；还可用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术中术前术后的清创和伤口包扎；可用于去除隐形眼镜上粘附的细菌。

本发明复配制剂制备方法简单宜于规模化生产。

具体实施方式实施一：制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂配比：溶葡葡球菌酶               0.1g溶菌酶                      53g洗必泰                       1g磷酸钾                       8g氯化钠                      12g甲壳素                    25.9g

方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

该配比可用于制造皮肤粘膜杀菌药物，添加剂量为1-20％。添加该配比的皮肤粘膜杀菌药物，可在2-10分钟内杀灭皮肤、粘膜表面的淋球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等，杀灭率达99.9％。可治疗脓肿、皮癣、溃疡、褥疮、烧伤、烫伤、灼伤、疖、粉刺、割伤、口腔溃疡、咽喉炎、牙龈炎、阴道炎，预防性病，用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术，术前术后的清创和伤口包扎。实施二：制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂配比：溶葡葡球菌酶                    0.1g溶菌酶                           52g苯甲酸钠                          1g磷酸钾                            9g氯化钠                           12g葡萄糖                     25.9g

方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

该配比用于食品保鲜，添加剂量为1-20％。

添加该配比的食品，可延长生鲜食品的保质期，可延长牛奶、海鲜的保质期。实施三：制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂配比：溶葡葡球菌酶                     0.1g溶菌酶                            52g抑菌肽                             1g磷酸钾                             9g氯化钠                            12g葡萄糖                          25.9g

方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

该配比用于制造口服药物添加剂量为1-40％。添加该配比的口服药物，可治疗各类由细菌感染引起的口腔疾病、呼吸道疾病和急慢性胃炎。实施四：制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂配比：溶葡葡球菌酶                     0.1g溶菌酶                            58g抑菌肽                            15g磷酸钾                            14g氯化钠                          12.9g

方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

该配比用于制造耳炎症药物，添加剂量为1-20％；添加该配比的耳道药物，可治疗各类外耳道炎症、中耳炎。用于制造眼科用药，添加剂量为1-20％；添加配方四的眼科药物可用于治疗角膜炎、眼眶蜂窝织炎、结膜炎、麦粒肿；用于去除隐性眼镜上粘附的细菌。用于水产渔业药物，添加剂量为15-40％；可用于治疗水产的细菌性疾病。用于制造化妆品，添加剂量为1-20％，可用于防治粉刺，治疗各类由细菌、真菌引起的面部皮肤疾患。实施五：制造100克溶葡萄球菌复合酶制剂配比：溶葡葡球菌酶                    0.1g溶菌酶                           58g麻黄素                           15g磷酸钾                           14g氯化钠                         12.9g

方法：在无菌室中，按上表所述称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

该配方可用于制造鼻炎症药物，添加剂量为1-20％，可治疗急慢性鼻炎、鼻窦炎。

Claims (7)

1.一种溶葡萄球菌酶的复配制剂，其特征在于该制剂是由0.1-20％溶葡萄球菌酶、50-85％溶菌酶、1-20％一种杀菌剂、0.5-20％离子化合物、0.2-30％氨基葡萄糖物质、0-20％麻黄素和0.1-20％保鲜剂以任意比例组成100％的组成。

2.根据权利要求1所述的一种溶葡萄球菌酶复配制剂，其特征在于其中所述的杀菌剂为洗必泰或抑菌肽；离子化合物为K⁺、Na⁺、Mg²⁺、PO^4-、Cl^-中的2种的组合；氨基葡萄糖物质为甲壳素、壳聚糖或N-乙酰-D-氨基；保鲜剂为对羟基苯甲酸酯类或苯甲酸钠。

3.一种如权利要求1所述的溶葡萄球菌酶复配制剂的制备方法，其特征在于该方法是在无菌室中，按上述各配方称取每一组分，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，灌装于塑料或玻璃瓶中，入库，室温保存即可。

4、一种如权利要求1所述的溶葡球菌复合酶复配制剂在制备生物杀菌剂中的应用，其特征在于该制剂可添加于外用医药制剂、食品保鲜剂、口服药物制剂、耳药、鼻药、渔药和日化用品制剂。

5.一种如权利要求4所述的溶葡球菌复合酶复配制剂在制备生物杀菌剂中的应用，其特征在于该制剂对淋球菌、金黄色葡萄球菌、耐药性金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、耐药性肺炎双球菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌、厌氧菌、嗜麦芽窄食单孢菌以及胃幽门螺旋杆菌有杀灭作用。

6、一种如权利要求4所述的溶葡球菌复合酶复配制剂在制备生物杀菌剂中的应用，其特征在于该制剂可添加于治疗脓肿、皮癣、溃疡、褥疮、烧伤、烫伤、灼伤、疖、割伤、口腔溃疡、阴道炎、各类由细菌感染引起的口腔疾病、呼吸道疾病和急慢性胃炎，各类外耳道炎症、中耳炎、角膜炎、眼眶蜂窝织炎、结膜炎、麦粒肿、急慢性鼻炎、鼻窦炎、预防性病、水产的细菌性疾病，防治粉刺，各类由细菌、真菌引起的面部皮肤疾患等的药物中。

7、一种如权利要求4所述的溶葡球菌复合酶复配制剂在制备生物杀菌剂中的应用，其特征在于该制剂可用于外科、妇产科、泌尿科、口腔科等各种外科手术中术前术后的清创和伤口包扎，可用于去除隐形眼镜上粘附的细菌。