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CN120965855A - 一种t细胞抗原受体及其制备方法和其应用 - Google Patents

一种t细胞抗原受体及其制备方法和其应用

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CN120965855A
CN120965855A CN202511030835.6A CN202511030835A CN120965855A CN 120965855 A CN120965855 A CN 120965855A CN 202511030835 A CN202511030835 A CN 202511030835A CN 120965855 A CN120965855 A CN 120965855A
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CN
China
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seq
cell
acid sequence
amino acid
cells
Prior art date
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Application number
CN202511030835.6A
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English (en)
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孔晓雨
王平
王歈
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Beijing Yongtai Rec Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Beijing Yongtai Rec Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Yongtai Rec Biotechnology Co ltd filed Critical Beijing Yongtai Rec Biotechnology Co ltd
Publication of CN120965855A publication Critical patent/CN120965855A/zh
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Abstract

本发明涉及一种T细胞抗原受体，所述的T细胞抗原受体包括α链和/或β链，所述的α链包含(a)‑(b)中的任一种或其组合，(a)恒定区中含有如SEQ ID NO：1(LVIVL)所示的氨基酸区段；(b)恒定区包含一个或多个能够与β链形成非天然二硫键的半胱氨酸残基；所述β链的恒定区包含一个或多个能够与α链形成非天然二硫键的半胱氨酸残基。本发明的T细胞抗原受体能够显著降低TCR分子的错配率，确保TCR的正确表达，从而提高T细胞对肿瘤细胞或病原体的特异性识别能力，同时显著降低免疫原性，提高生物活性。

Description

一种T细胞抗原受体及其制备方法和其应用
本申请为申请号2024108934427、申请日为2024-07-04的“一种T细胞抗原受体及其制备方法和其应用”发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种T细胞抗原受体及其制备方法和其应用。
背景技术
T细胞受体(T cel l receptor,TCR)是T淋巴细胞特异性识别抗原、启动免疫应答的分子，为免疫球蛋白超家族的异二聚体细胞表面蛋白，其与参与调节信号转导的CD3复合物的无变异蛋白相关联。TCR是呈递在主要组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，对免疫系统的细胞免疫功能至关重要，抗原特异性TCR与MHC复合物结合引发T细胞与抗原呈递细胞直接的物理接触和相互作用，导致后续细胞信号传递和其他生理反应，使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。
TCR的正确组装是TCR-T细胞生成的关键。TCR错配会导致交叉反应性毒性等问题并成为TCR-T细胞治疗的技术难点。为降低错配率而引入鼠源氨基酸，由此可能导致免疫原性过高而影响成药性。为此，需要开发具有良好的生物活性功能的TCR改造方案，有效降低TCR错配率及免疫原性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种T细胞抗原受体，所述的T细胞抗原受体包括α链和/或β链，其中，所述的α链包含(a)-(b)中的任一种或其组合，
(a)恒定区中含有如SEQ ID NO：1(LVIVL)所示的氨基酸区段；
(b)恒定区包含一个或多个能够与β链形成非天然二硫键的半胱氨酸残基；
所述β链的恒定区包含一个或多个能够与α链形成非天然二硫键的半胱氨酸残基；
优选地，所述T细胞抗原受体的恒定区氨基酸序列完全被鼠源氨基酸取代；
优选地，所述T细胞抗原受体的恒定区氨基酸序列至少在一个位点上被鼠源氨基酸取代，更优选T细胞抗原受体的恒定区的氨基酸序列被1个或9个鼠源氨基酸取代。
本发明的优选技术方案中，所述恒定区的跨膜疏水区中含有如SEQ ID NO：1(LVIVL)所示的氨基酸区段。
本发明的优选技术方案中，所述α链和β链的恒定区还包括至少一个亮氨酸拉链。
本发明的优选技术方案中，所述亮氨酸拉链选自SEQ ID NO：2(PGGRIARLEEKVKTLKAQNSELASTANMLREQVAQLKQKVMNY)、SEQ ID NO：3(PGGLTDTLQAETDQLEDKKSALQTEIANLLKEKEKLEFILAAY)、SEQ ID NO：4(AQCEKELQALEKENAQLEWELQALEKELAQ)、SEQ ID NO：5(AQCEKELQALEKENAQLEWELQALEKELAQ)的任一种。
本发明的优选技术方案中，含有SEQ ID NO：2序列的亮氨酸拉链和含有SEQ IDNO：3序列的亮氨酸拉链配对使用，含有SEQ ID NO：4序列的亮氨酸拉链和含有SEQ ID NO：5序列的亮氨酸拉链配对使用。
本发明的优选技术方案中，所述α链的恒定区氨基酸序列包含如下序列：，其中，X1选自S，P的任一种，X2选自D，E的任一种，X3选自V，S的任一种，X4选自P，S的任一种，或与上述序列具有至少85％以上同源性的氨基酸序列；
所述β链的恒定区氨基酸序列如下序列：
DLNKVFPPEVAVFEPSX5AEIX6HTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGX7TSX8SYX9QGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF，其中，X5选自E，K的任一种，X6选自A，S的任一种，X7选自I，F的任一种，X8选自A，V的任一种，X9选自H，Q的任一种；或与上述序列具有至少85％以上同源性的氨基酸序列。
本发明的优选技术方案中，所述的T细胞抗原受体包含选自(1)-(7)任一所述的氨基酸序列：
(1)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：6，或包含与SEQ ID NO：6具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：6为：
其β链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：7，或包含与SEQ ID NO：7具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：7为：
(2)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：8，或包含与SEQ ID NO：8具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：8为：
其β链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：9，或包含与SEQ ID NO：9具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：9为：
(3)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：10，或包含与SEQ ID NO：10具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：10为：
其β链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：11，或包含与SEQ ID NO：11具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：11为：
(4)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：12，或包含与SEQ ID NO：12具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：12为：
其β链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：13，或包含与SEQ ID NO：13具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：13为：
(5)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：14，或包含与SEQ ID NO：14具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：14为：
其β链的恒定区的序列包含如SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO：15具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，所述的SEQ ID NO：15为：
(6)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：16，或包含与SEQ ID NO：16具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：16为：
其β链的恒定区的序列包含如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO：17具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，所述的SEQ ID NO：17为：
本发明的优选技术方案中，所述α链的可变区包含α-CDR3，所述β链的可变区包括β-CDR3，其中，所述α-CDR3的氨基酸序列为AVRGGADGLT(SEQ ID NO：18)，所述β-CDR3的氨基酸序列为ASSPPNEKLF(SEQ ID NO：19)，
本发明的优选技术方案中，所述α链的可变区包含α-CDR1、α-CDR2的任一种或其组合，其中，所述的α-CDR1的氨基酸序列为DSVNN(SEQ ID NO：20)，所述α-CDR2的氨基酸序列为IPSGT(SEQ ID NO：21)。
本发明的优选技术方案中，所述β链的可变区包含β-CDR1、β-CDR2的任一种或其组合，其中，所述的β-CDR1的氨基酸序列为MGHRA(SEQ ID NO：22)，所述的β-CDR2的氨基酸序列为YSYEKL(SEQ ID NO：23)。
本发明的优选技术方案中，所述α链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述的SEQ ID NO：24为：
所述β链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述的SEQ ID NO：25为：
本发明的优选技术方案中，所述α链的可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO：26，或包含与SEQ ID NO：26具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，所述的SEQ ID NO：26为：
本发明的优选技术方案中，所述β链的可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO：27，或包含与SEQ ID NO：27具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其中，所述的SEQ ID NO：27为：
优选地，所述的同源性选自86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％、100％的任一种。
本发明的优选技术方案中，其α链与β链的氨基酸通过如SEQ ID NO：28所示的连接序列链接，其中，所述的SEQ ID NO：28为GSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP。
本发明的优选技术方案中，所述的T细胞抗原受体包含的氨基酸序列选自SEQ IDNO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：35的任一种或其组合，或包含与SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35的任一种具有至少85％以上同源性的氨基酸序列。
本发明的另一目的在于提供一种核酸，所述核酸包含编码本发明所述TCR的核苷酸序列或其互补序列。
本发明优选的技术方案中，所述的核苷酸序列或其互补序列选自单链、双链、DNA、RNA的任一种或其组合。
本发明优选的技术方案中，所述的核苷酸序列或其互补序列经密码子优化。
本发明优选的技术方案中，所述的密码子优化包括将病毒使用的大量稀有密码子变为对应的哺乳动物密码子、移除mRNA不稳定基序、隐藏的剪接位点的任一种或其组合。
本发明优选的技术方案中，所述核酸序列选自包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42的任一种或其组合，或包含与SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42的任一种或其组合具有至少85％以上同源性的核苷酸序列。
本发明的另一目的在于一种表达载体，所述的表达载体包含本发明所述的核酸。
本发明优选的技术方案中，所述的表达载体能够在体内、体外、离体的任一条件下表达。
本发明优选的技术方案中，所述的表达载体在体内细胞中持续高水平表达。
本发明优选的技术方案中，所述的表达载体选自原核表达载体、逆转录病毒载体的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述的表达载体选自劳氏肉瘤病毒(RSV)、慢病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、鼠科白血病病毒(MLV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、小鼠乳腺癌病毒(MMTV)、Fujinami肉瘤病毒(FuSV)、FBR鼠骨肉瘤病毒(FBR MSV)、莫洛尼氏鼠白血病病毒(Mo-MLV)、莫洛尼氏鼠肉瘤病毒(Mo-MSV)、Abelson鼠白血病病毒(A-MLV)、禽髓细胞增生病毒29(MC29)、禽骨髓成红细胞增多症病毒(AEV)的任一种或其组合。
本发明的另一目的在于提供一种宿主细胞，所述的宿主细胞包含本发明任一所述的核酸或表达载体。
本发明优选的技术方案中，所述的宿主细胞选自真核细胞、原核细胞的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述的真核细胞选自酵母细胞、293细胞、CHO细胞的任一种或其组合。
本发明的另一目的在于提供了一种免疫细胞，所述的免疫细胞表达本发明所述的T细胞抗原受体。
本发明优选的技术方案中，所述的免疫细胞包含一个或多个本发明任一所述的核酸序列。
本发明优选的技术方案中，所述的免疫细胞选自干细胞、淋巴细胞、T细胞、B细胞、NK细胞的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述T细胞的T细胞抗原受体结构如上所限定。
本发明优选的技术方案中，所述的T细胞选自CD4+T、CD8+T的任一种或其组合。
本发明优选的技术方案中，所述的免疫细胞分离自自体T细胞或异体T细胞。
本发明的另一目的在于提供一种免疫细胞的制备方法，包括将编码上述T细胞抗原受体的核酸序列转导至免疫细胞中表达获得。
本发明优选的技术方案中，所述的免疫细胞选自干细胞、淋巴细胞、T细胞、B细胞、NK细胞的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述T细胞的T细胞抗原受体结构如上所限定。
本发明优选的技术方案中，所述的T细胞选自CD4+T、CD8+T的任一种或其组合。
本发明优选的技术方案中，所述的免疫细胞分离自自体T细胞或异体T细胞。
本发明优选的技术方案中，所述方法还包括敲除细胞内源性TCR的步骤。
本发明优选的技术方案中，所述敲除细胞内源性TCR的步骤是将靶向内源TCR的向导RNA(guide RNA，gRNA)构建至慢病毒载体，再与包装质粒、转染试剂共转至T细胞。
本发明的另一目的在于提供了一种重组T细胞的制备方法，包括如下步骤：
1)从阳性T细胞克隆得到本发明任一所述的核酸；
2)分离、培养T细胞；
3)将步骤1)得到的核酸递送至步骤2)所述的原代T细胞中，获得表达本发明任一所述T细胞抗原受体的重组T细胞，
本发明优选的技术方案中，所述的T细胞选自造血干细胞或外周血淋巴细胞(PBL)源T细胞的任一种。
本发明的另一目的在于提供了一种T细胞抗原受体的制备方法，包括如下步骤：
(1)从阳性T细胞克隆得到本发明任一所述的核酸；
(2)将步骤(1)得到的核酸连接至载体骨架，获得表达载体；
(3)将步骤(2)获得的表达载体转化至宿主细胞，再诱导其表达；
(4)获得抗体或其抗原结合片段或者T细胞抗原受体。
本发明优选的技术方案中，所述的阳性T细胞与抗原肽特异性结合。
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，所述组合物包含1)-5)的任一项或其组合，
1)本发明所述的T细胞抗原受体；
2)本发明所述的核酸；
3)本发明所述的表达载体；
4)本发明所述的宿主细胞；或
5)本发明所述的免疫细胞。
本发明优选的技术方案中，所述组合物还含有药学上可接受的载体。
本发明优选的技术方案中，所述组合物任选地与其他治疗剂联合使用。
本发明优选的技术方案中，所述的其他治疗剂为免疫调节剂。
本发明的另一目的在于提供本发明的T细胞抗原受体或其核酸、表达载体、宿主细胞、免疫细胞、药物组合物的任一种用于制备诊断或防治肿瘤的制品中的应用。
本发明优选的技术方案中，所述的肿瘤选自胰腺癌、肝癌、口腔鳞状上皮癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌、直肠癌、淋巴瘤、基底细胞癌、非小细胞肺癌、白血病、鼻咽癌、乳腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、支气管癌、骨癌、前列腺癌、胆管癌、食管癌、肾癌、肉瘤、甲状腺癌、头颈部癌、睾丸癌、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生异常综合征的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述的白血病选自急性淋巴细胞性(成淋巴细胞性)白血病、急性骨髓性白血病、髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、慢性骨髓性白血病的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肉瘤选自骨肉瘤、尤文肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肾癌选自透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌、肾集合管癌、肾髓质癌、MiT家族易位性肾细胞癌、琥珀酸脱氢酶缺陷型肾细胞癌、黏液性管状和梭形细胞癌、未分类的肾细胞癌、嗜酸细胞瘤、低度恶性潜能多房囊性肾肿瘤的任一种或其组合。
本发明的另一目的在于提供一种试剂盒，所述的试剂盒包含1)-5)的任一种或其组合：
1)本发明所述的T细胞抗原受体；
2)本发明所述的核酸；
3)本发明所述的表达载体；
4)本发明所述的宿主细胞；
5)本发明所述的免疫细胞。
本发明的另一目的在于提供一种检测方法，所述方法包括将待检测样品与本发明所述的T细胞抗原受体接触。
本发明的另一目的在于提供了一种防治肿瘤的方法，所述的方法包括给予个体有效量的本发明的T细胞抗原受体或其核酸、表达载体、宿主细胞、免疫细胞、药物组合物的任一种。
本发明优选的技术方案中，所述的方法包括将表达本发明T细胞抗原受体的T细胞过继性转移至受试者的步骤。
本发明优选的技术方案中，所述的表达本发明T细胞抗原受体的T细胞衍生自受试者。
本发明优选的技术方案中，所述的表达本发明所述T细胞抗原受体的T细胞与造血干细胞、器官、组织、细胞或干细胞衍生自相同的供体。
本发明优选的技术方案中，所述的肿瘤选自胰腺癌、肝癌、口腔鳞状上皮癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌、直肠癌、淋巴瘤、基底细胞癌、非小细胞肺癌、白血病、鼻咽癌、乳腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、支气管癌、骨癌、前列腺癌、胆管癌、食管癌、肾癌、肉瘤、甲状腺癌、头颈部癌、睾丸癌、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生异常综合征的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述的白血病选自急性淋巴细胞性(成淋巴细胞性)白血病、急性骨髓性白血病、髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、慢性骨髓性白血病的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肉瘤选自骨肉瘤、尤文肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肾癌选自透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌、肾集合管癌、肾髓质癌、MiT家族易位性肾细胞癌、琥珀酸脱氢酶缺陷型肾细胞癌、黏液性管状和梭形细胞癌、未分类的肾细胞癌、嗜酸细胞瘤、低度恶性潜能多房囊性肾肿瘤的任一种或其组合。
本发明的另一目的在于提供了一种诊断肿瘤的方法，包括下述步骤，将患者的肿瘤组织样本与本发明所述的T细胞抗原受体相接触。
本发明优选的技术方案中，所述的T细胞抗原受体包括可检测的标记物。
本发明优选的技术方案中，所述的肿瘤选自胰腺癌、肝癌、口腔鳞状上皮癌、结肠癌、卵巢癌、胃癌、直肠癌、淋巴瘤、基底细胞癌、非小细胞肺癌、白血病、鼻咽癌、乳腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、支气管癌、骨癌、前列腺癌、胆管癌、食管癌、肾癌、肉瘤、甲状腺癌、头颈部癌、睾丸癌、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、骨髓增生异常综合征的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述的白血病选自急性淋巴细胞性(成淋巴细胞性)白血病、急性骨髓性白血病、髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、慢性骨髓性白血病的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肉瘤选自骨肉瘤、尤文肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤的任一种或其并发症。
本发明优选的技术方案中，所述肾癌选自透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌、肾集合管癌、肾髓质癌、MiT家族易位性肾细胞癌、琥珀酸脱氢酶缺陷型肾细胞癌、黏液性管状和梭形细胞癌、未分类的肾细胞癌、嗜酸细胞瘤、低度恶性潜能多房囊性肾肿瘤的任一种或其组合。
除非另有说明，本发明的序列编号及名称见表1。
表1
除非另有说明，本发明的术语均为本领域的通常含义。如Sambrook etal.,“MolecularCloning:A Laboratory Manual”、Lewin,“Genes VIII”、Roitt et al.,“Immunology”(第8版)等。
本发明所述的“T细胞抗原受体”能够识别当由MHC分子或其四聚体递呈时的肽的分子，通常与CD3分子呈复合物形式存在于T细胞表面。大多数T细胞的TCR由α和β肽链组成，少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。
本发明所述的“包含”用于描述蛋白质或核酸的序列时，所述蛋白质或核酸可以是由所述序列组成，或者在所述蛋白质或核酸的一端或两端可以具有额外的氨基酸或核苷酸，但仍然具有本发明所述的活性。
本发明所述的“预防”是指通过施用本发明所述的产品来抑制症状或者延缓特定症状紧张的所有行为。
本发明所述的“诊断”是指以查明患者是否患有疾病或其进展，或者评估患者对治疗的反应。
本发明所述的“治疗”表示减缓、中断、阻止、控制、停止、减轻、逆转一种体征、症状、失调、病症、疾病的进展或严重性，但不一定涉及所有疾病相关体征、症状、病症、失调的完全消除，且是指在疾病已开始发展后改善疾病或病理状态的体征、症状等等的治疗干预。
本发明所述的“有效量”是指以单剂量或多剂量给予至患者或器官之后提供所希望的治疗或预防效果的剂量。
本发明所述的“产品”包括但不限于本发明所述的T细胞抗原受体、所述的核酸、所述的表达载体、所述的宿主细胞、所述的免疫细胞，以及其他辅助或与上述产品协同的试剂、试剂盒、芯片、抗体偶联物或多功能抗体等药物组合物。
本发明所述的“受试者”选自人或其他哺乳动物的任一种。
本发明所述的“同源性”是指本领域技术人员在不改变氨基酸序列或核苷酸序列的主要结构或功能的前提下，根据需要调整序列，使其同源性选自86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％、100％的任一种。
本发明所述的"配对使用"是指蛋白质通过其亮氨酸拉链结构域相互作用形成稳定的二聚体。
本发明的实时无标记动态细胞分析技术，将微电子细胞传感器芯片整合到细胞检测板的底部，构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时，则改变与细胞的实时功能状态呈相关性，通过实时动态的电极阻抗检测，即可获得细胞生理功能相关的生物信息，包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。
与现有技术相比，本发明具有下述有益技术效果：本发明通过改造TCR恒定区获得的T细胞抗原受体，显著降低TCR分子的错配率，确保TCR的正确表达，从而提高T细胞对肿瘤细胞或病原体的特异性识别能力，提升了治疗效果；显著降低其免疫原性，同时提高其生物活性。本发明的TCR-T细胞在降低错配率的同时保持了有效的抗肿瘤活性，能够特异性识别并杀伤表达相应抗原的靶细胞，在免疫治疗中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1本发明的T细胞抗原受体错配率检测结果；
图2本发明的T细胞抗原受体对靶细胞杀伤效果；
图3本发明的T细胞抗原受体对实验动物的肿瘤体积变化影响；
图4本发明的T细胞抗原受体对实验动物的体重变化影响。
具体实施方式
本发明未详述的方法、步骤、技术及操作均为本领域的常规操作。以下参照实施例说明本发明，但本发明不局限于实施例。
本发明的质粒和慢病毒均购自Pharosvaccine Inc.，Gyeonggi，Republic ofKorea。DMEM培养基购自Gibco Life Sciences；PEI MAX聚醚酰亚胺(Polyetherimide)购自Polysciences,Inc；F108购自Sigma-Aldrich Fine Chemicals Biosciences；IL-2:购自北京四环生物制药有限公司；X-VIVO15购自Lonza Group AG；Dextramer试剂购自Immudex ApS；CD8抗体购自BD；Vβ7.1购自美天旎；Dextramer购自immudex；HLA亚型为A*1101的HERV-E阳性靶细胞购自T-CURE BIOSCIENCE,INC。
实施例1本发明重组慢病毒质粒的构建
根据《分子克隆实验指南》相关内容，将第1组至第7组的TCR和对照组1-3的TCR的核酸序列，通过酶切位点XbaI和酶切位点XhoI构建到pPVLV4质粒,获得用于慢病毒包装的pPVLV4穿梭质粒。
使用XbaI和XhoI从合成的克隆载体pUC57(购于江苏金斯瑞生物科技有限公司)上切下第1组-第7组、对照组1-2的TCR核酸序列，切胶回收目的片段，再将其与XbaI和XhoI酶切过的慢病毒质粒用T4 DNA连接酶进行连接，转化感受态细胞。第二天，挑取单克隆于含抗生素的LB液体培养基中培养12-16h,质粒的提取，检测质粒的浓度和纯度，酶切鉴定正确的克隆，经DNA测序鉴定正确的质粒，得到分别包含有第1-7组和对照组1-2的TCR核酸序列穿梭质粒pPVLV4_HERV-E。
实施例2本发明慢病毒载体的生产
慢病毒载体的制备，包括下述步骤：
(1)将复苏的293T细胞培养在含有10％FBS的DMEM培养基中，待细胞融合度为85％时，使用重组胰酶消化293T细胞，将消化后的细胞铺板，再将其置于37℃、5％CO2条件下培养；
(2)将实施例1制得的穿梭质粒pPVLV4_HERV-E：pMDLg/pRRE(K)：pRSV-Rev(K)：pMD.G(K)按照质量比为4:2:2:1混合后，将其加入到3ml DMEM培养基中，室温静置5min，按每个225cm2细胞培养瓶加入175.5μl 1mg/ml PEI MAX溶液和3ml DMEM培养基，室温静置5min。将PEI MAX混合液与质粒混合液1﹕1充分混匀，形成PEI-DNA混合液，室温静置20min。将6ml PEI-DNA混合液加入到60ml含有10％FBS的DMEM培养基中，混合均匀，形成质粒转染液。去掉293T细胞的培养上清，更换为66ml质粒转染液，将其置于37℃、5％CO2条件下孵育18±2h；弃去培养上清，再加入60ml DMEM培养基，将其置于37℃、5％CO2条件下培养24h；
(3)将收集的培养上清液置于离心500g*4min(室温)，弃沉淀物，将收集的上清液高速离心35000g*4h(4℃)，弃上清，将收获的慢病毒载体用适量的DMEM培养基重悬离心后，收集的病毒沉淀，吹打混合均匀后，分装至EP管中，置于-80℃保存，得到分别包含有第1-7组和对照组1-2的TCR核酸序列的慢病毒载体。
实施例3本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化
(1)PBMC的分离：收集HLA*A1101志愿者的50ml血液，将其置于250ml离心管中，按照体积比为1:1加入氯化钠注射液稀释血液，离心400g*30min(18～20℃)；收集中间层细胞，将其置于250ml离心管中，用氯化钠注射液定容至
200ml，离心400g*10min，吸去上清，用氯化钠注射液200ml重悬细胞，离心
400g*10min，吸去上清，分散细胞后，用X-VIVO15无血清培养基(Lonza)定容至50ml，混匀；细胞计数后，PBMC细胞悬液离心(1500rpm*5min)；吸去上清，用细胞冻存液重悬细胞，转移至4℃预冷后，-80℃冻存。
(2)PBMC的复苏：将冻存的PBMC于复苏后，将其置于30mL X-VIVO15培养基中，离心526g*5min，弃上清，用12mL X-VIVO15培养基重悬细胞，调整细胞密度为5×106个/ml，按照说明书加入主要成分为CD3和CD28抗体的TransAct(T细胞激活试剂，来源于MiltenyiBiotec)后，置于37℃，5％ CO2孵育24h。
2.慢病毒转导T细胞
取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第1组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心
526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第1组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例4本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第2组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第2组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例5本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第3组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第3组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例6本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第4组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第4组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例7本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第5组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第5组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例8本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第6组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第6组的TCR核酸序列的T细胞。
实施例9本发明含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有第7组的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有第7组的TCR核酸序列的T细胞。
对比例1含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有对照组1的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有对照组1的TCR核酸序列的T细胞。
对比例2含有TCR核酸序列的T细胞的制备
1.PBMC的复苏及T细胞的分选、活化(同实施例3)
2.慢病毒转导T细胞：取出活化细胞，将其置于细胞培养板中，并将其分为非转导T细胞组(NC，不加慢病毒)和转导T细胞组(加入实施例2制得的含有对照组2的TCR核酸序列的慢病毒载体)，置于37℃，5％ CO2条件下培养24h，得慢病毒转导T细胞，离心526g*5min，用1ml含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基重悬，调整细胞密度至5×105个/mL，将其置于37℃，5％ CO2孵育48h，洗脱后，得到含有对照组2的TCR核酸序列的T细胞。
试验例1本发明的T细胞抗原受体降低TCR错配率作用研究
取实施例3-5、7-9制得的T细胞和对比例1-2制得的T细胞，检测其Dextramer阳性率和Vβ阳性率后，每组设置两个平行(一份加入CD8抗体和Dextramer试剂；另一份加入CD8抗体与Vβ7.1抗体)，用含有200IU/mL IL-2的X-VIVO15培养基调整细胞密度至5×105个/mL后，将其置于37℃，5％ CO2培养6-10d。
混匀样品，取细胞悬液加入到已标记的流式管中，每管加入2mL PBS(1X)，混匀，离心526g*3min，弃上清，震荡分散细胞，常温孵育15min后，每管加入2mL PBS(1X)，混匀，离心526g*3min，弃上清，震荡分散细胞，每管加入50μL PBS重悬细胞，新建实验，上机检测，细胞门内收集20000个细胞；分别统计CD8门内的Dextramer阳性率(D％)和Vβ7.1阳性率(V％)，计算错配率＝1-D％/V％，其中，V％为在CD8阳性细胞群体中表达Vβ的细胞占比(Vβ抗体检测TCR基因的转导效率，数值越高代表TCR基因的转导效率越高)；D％为CD8阳性细胞群体中表达正确配对的TCR细胞占比(Dextramer检测正确配对的TCR，数值越高代表正确配对的TCR比例越高)。结果见图1。
试验例2本发明的T细胞抗原受体的细胞杀伤率考察
靶细胞：采用HLA*1101的HERV-E阳性细胞为靶细胞，用于评价TCR-T细胞的功能。效应细胞：选取实施例3-4、实施例6-7、实施例9中制得的TCR-T细胞。
NC组为PBMC，提取方法为：转移志愿者(志愿者的HLA限制型为HLA*A1101)的血液于250ml离心管中，氯化钠注射液与血液至少按1：1的比例混合，按15ml/支于50ml离心管中，每管加30ml稀释血；400g离心30min(18～20℃)；收集中间层细胞于250ml离心管中，氯化钠注射液定容至200ml，混匀；400g离心10min，吸去上清，氯化钠注射液200ml重悬细胞，混匀；400g离心10min，吸去上清，分散细胞后X-VIVO15无血清培养基(Lonza)定容至50ml，混匀；取0.5ml进行细胞数量计算，剩余的PBMC细胞悬液，1500rpm离心5min；吸去上清，用细胞冻存液重悬细胞；迅速将冻存管转移至4℃预冷的程序降温盒中；程序降温盒于-80℃冰箱中过夜；次日将程序降温盒中细胞取出，转移至液氮中储存。
体外杀伤实验：将靶细胞按照每孔6×103个铺板，按照效应细胞：靶细胞为1:1混合，37℃共孵育4h，采用实时无标记细胞功能分析仪(Real Time CellAnalyzer，RTCA，Agilent)获得杀伤效率。
使用HLA亚型为A*1101的HERV-E阳性靶细胞(来源于T-CURE BIOSCIENCE,INC)进行铺板，每孔6000细胞。第二天按照CD8+DEX+阳性细胞数目与靶细胞数目1:1，加入效应细胞，进行检测，采集效应细胞铺板后47h数据进行杀伤效率评价，各组的具体杀伤结果如图2所示。
试验例3本发明的特异性T细胞在小鼠体内的药效评价
1、实验材料
OS-RC-2-A11肿瘤细胞，复苏细胞后用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基，在37℃含有5％ CO2的培养箱中进行扩增培养，待细胞密度到达80％以上时进行传代，共传代3次，细胞总数量达到6×107时重悬为5×106cells/ml浓度的细胞悬液使用，活率为97％。
OS-RC-2-A11肿瘤细胞为过表达人类组织相容性复合体HLA*A1101蛋白的肿瘤细胞，是通过在肿瘤细胞OS-RC-2(人肾癌细胞，购自协和细胞库)中引入编码HLA*A1101蛋白的基因的方式构建：使用含有编码HLA*A1101蛋白的基因的慢病毒转导肿瘤细胞OS-RC-2，1天后换液使用完全培养基培养1-2天，更换成含嘌呤霉素的完全培养基继续培养，并对转导组肿瘤细胞的HLA*A1101蛋白的表达情况进行检测。具体包括以下步骤：
1)慢病毒转导编码HLA*A1101蛋白的基因：使用完全培养基(含10％FBS的RPMI1640培养基(Gibco))调整肿瘤细胞OS-RC-2的密度至4-6×105cells/ml，1ml/孔加入6孔板，每孔添加8μl Polybrene(1mg/ml)至终浓度为8μg/ml，每孔添加10-30μl含编码HLA*A1101蛋白的基因的慢病毒载体，设置细胞对照孔(未转导组)，对照孔添加组分为上述的1ml肿瘤细胞OS-RC-2及8μl Polybrene，混匀，置于CO2培养箱(37℃，5％ CO2)内孵育1天；弃上清，每孔添加2ml完全培养基，置于CO2培养箱内孵育2天；
2)转导肿瘤细胞嘌呤霉素筛选：弃上清，每孔添加2ml含有1μg/ml嘌呤霉素(Solarbio)的完全培养基，置于CO2培养箱内孵育；每2天观察一次细胞，并更换一次含有1μg/ml嘌呤霉素的完全培养基，贴壁细胞长满时传代；使用含有1μg/ml嘌呤霉素的完全培养基筛选培养7天，若对照组仍有活细胞，需要提高嘌呤霉素浓度继续培养直至对照组细胞全部死亡；
3)含编码HLA*A1101蛋白的基因的细胞单克隆化培养：转导并筛选培养7天以上的转导编码HLA*A1101蛋白的基因的肿瘤细胞按照有限稀释法进行铺板，1个细胞/孔、3个细胞/孔，使用含有嘌呤霉素的完全培养基进行培养并观察细胞孔中细胞的情况，标记出单克隆孔，持续进行培养至细胞数量达到至少6×107cells以上时冻存，既获得过表达靶细胞OS-RC-2-A11。
取25只雌性6-8周龄小鼠(18-20g)，每笼5只，20-26℃，30-70％，12h照明12h黑暗，玉米芯垫料，每周更换一次，自由取食饮水。接种:剔除接种部位体毛后，用碘伏棉球消毒小鼠接种部位，用1mL注射器在小鼠右侧肩部皮下接种0.2mL OS-RC-2-A11肿瘤细胞悬液(含1×106个OS-RC-2-A11肿瘤细胞/只)。
接种后，每周1次测量肿瘤体积及体重，当肿瘤体积达到70-100mm3，依据肿瘤体积和体重将25只动物随机分为5组，每组5只，按表2开始尾静脉回输药物，回输后当天、24h、48h分别腹腔注射I L2，I L2注射量为20万I U/200μl/只/次。
给药开始日期视为PG-Day0。给药开始后，小鼠每周2次测量体重及肿瘤体积。给药结束后，继续观察肿瘤生长趋势及小鼠体重，不进行组织采集，直接安乐死实验动物。
表2分组及给药信息
接种后，每日观察动物发病及死亡情况，包括肿瘤生长及药物对实验动物造成的影响，如活动变化、摄食饮水变化、消瘦情况、毛发、眼的外观变化、死亡及其他临床症状。接种后至分组前，每周一次测量实验动物体重。分组后每周2次测量实验动物体重或根据客户要求变更测量小鼠体重频率。接种后至分组前，当肿瘤可见时，每周1次测量实验动物肿瘤体积，接种分组后每周2次测量实验动物肿瘤体积。肿瘤体积测量采用双向测量法，再计算肿瘤体积(TV)＝0.5*a*b2，其中，a是肿瘤的长径，b是肿瘤的短径。所有的数据统计使用SPSS24.0软件，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法进行分析。采用LSD方法进行分析，p值小于0.05被认为是有显著性差异，p值小于0.01被认为是有极显著性差异。
观察小鼠出现不良状态、体重(体重下降大于10％)及死亡情况。于PG-Day13时G1和G3先观察到小鼠弓背，于PG-Day17时G2也出现弓背，在PG-Day20时G1、G2和G3几乎全部呈现弓背并伴有竖毛症状，陆续出现死亡，各组样本量逐渐减少，故以PG-Day20为药效统计节点。
观察小鼠肿瘤体积变化，结果见图3。给药至实验PG-Day20，G2组与对照组G1相比无显著性差异(p>0.05)，G3组与对照组G1相比存在极显著性差异(p<0.01)，至PG-Day59，G3组5只小鼠全部出现肿瘤复发。G4、G5组与对照组G1相比均存在极显著性差异(p<0.01)；至PG-Day59，肿瘤体积为0mm3。且体重未出现明显下降，安全性好(图4)。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求保护的范围。

Claims (13)

1.一种T细胞抗原受体，所述的T细胞抗原受体包含选自(4)或(5)任一所述的氨基酸序列：
(4)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：12，或包含与SEQ ID NO：12具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，其β链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：13，或包含与SEQ ID NO：13具有至少85％以上同源性的氨基酸序列；
(5)其α链的恒定区的氨基酸序列包含SEQ ID NO：14，或包含与SEQ ID NO：14具有至少85％以上同源性的氨基酸序列；其β链的恒定区的序列包含如SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO：15具有至少85％以上同源性的氨基酸序列；
优选地，所述的同源性选自86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％、100％的任一种。
2.根据权利要求1所述的T细胞抗原受体，所述α链的可变区包含α-CDR3，所述β链的可变区包括β-CDR3，其中，所述α-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示，所述β-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示，
所述α链的可变区包含α-CDR1、α-CDR2的任一种或其组合，其中，所述的α-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示，所述α-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：21所示，
所述β链的可变区包含β-CDR1、β-CDR2的任一种或其组合，其中，所述的β-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示，所述的β-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示；
优选地，所述α链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述β链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示；
优选地，所述α链的可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO：26，或包含与SEQ ID NO：26具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，所述β链的可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO：27，或包含与SEQ ID NO：27具有至少85％以上同源性的氨基酸序列，优选地，所述的同源性选自86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％、100％的任一种；
优选地，其α链与β链的氨基酸通过如SEQ ID NO：28所示的连接序列链接；优选地，所述的T细胞抗原受体包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35的任一种或其组合，或包含与SEQID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQID NO：35的任一种具有至少85％以上同源性的氨基酸序列。
3.一种编码权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体的核酸；
优选地，其核苷酸序列选自包含SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42的任一种，或包含与SEQ ID NO：36、SEQID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42的任一种具有至少85％以上同源性的核苷酸序列，优选地，所述的同源性选自86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％、100％的任一种。
4.一种表达载体，所述的表达载体包含权利要求3所述的核酸。
5.一种宿主细胞，所述的宿主细胞包含权利要求3所述的核酸或权利要求4所述的表达载体。
6.一种免疫细胞，所述的免疫细胞表达权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体。
7.一种免疫细胞的制备方法，包括将权利要求3所述的核酸序列转导至免疫细胞中表达获得。
8.一种重组T细胞的制备方法，包括如下步骤：
1)制备权利要求3所述的核酸；
2)分离、培养T细胞；
3)将步骤1)的核酸递送至步骤2)所述的T细胞中，获得表达权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体的重组T细胞。
9.一种T细胞抗原受体的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备权利要求3所述的核酸；
(2)将步骤1)制得的核酸连接至载体，获得表达载体；
(3)将步骤2)制得的表达载体转导至宿主细胞，再诱导其表达；
(4)获得T细胞抗原受体。
10.如权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体、权利要求3所述的核酸、权利要求4所述的表达载体、权利要求5所述的宿主细胞、权利要求6所述的免疫细胞用于制备诊断、预防和/或治疗肿瘤的制品中的应用。
11.一种药物组合物，所述组合物包含1)-5)的任一项或其组合，
1)权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体；
2)权利要求3所述的核酸；
3)权利要求4所述的表达载体；
4)权利要求5所述的宿主细胞；或
5)权利要求6所述的免疫细胞。
12.一种试剂盒，所述的试剂盒包含1)-5)的任一种或其组合：
1)权利要求1-2任一所述的T细胞抗原受体；
2)权利要求3任一所述的核酸；
3)权利要求4所述的表达载体；
4)权利要求5所述的宿主细胞；
5)权利要求6所述的免疫细胞。
13.一种检测方法，所述方法包括将待检测样品与权利要求1-2任一项所述的T细胞抗原受体接触。
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