CN120936371A - 用于使用肿瘤治疗电场和嵌合抗原受体(car)免疫细胞治疗癌症的组合物、系统和方法 - Google Patents

Abstract

公开了用于降低癌细胞存活力并且治疗癌症，以及预防活体受试者身体中存在的肿瘤体积增大的组合物、系统和方法。该系统和方法涉及施加交变电场，同时施用至少一种组合物，该至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

Description

用于使用肿瘤治疗电场和嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞治疗 癌症的组合物、系统和方法

相关申请的引用

本申请要求于2023年3月30日提交的美国临时申请第63/493,131号的权益。上述专利申请的全部内容据此通过引用的方式明确并入本文。

关于联邦资助的研究的声明

不适用。

背景技术

肿瘤治疗电场(TTFields)是通过破坏有丝分裂靶向实体瘤的中频范围(诸如但不限于100kHz至500kHz)内的低强度(例如1V/cm至3V/cm)交变电场。这种非侵入性治疗靶向实体瘤并且描述于例如美国专利第7,016,725号；第7,089,054号；第7,333,852号；第7,565,205号；第8,244,345号；第8,715,203号；第8,764,675号；第10,188,851号和第10,441,776号。TTFields通常通过两对换能器阵列来递送，该两对换能器阵列在治疗后的肿瘤内产生垂直电场；构成这些对中的每一对的电极阵列定位于正在进行治疗的身体部位的相对侧上。更具体地，对于系统，一对电极位于肿瘤的左右(LR)，并且另一对电极位于肿瘤的前后(AP)。TTFields被批准用于治疗多形性胶质母细胞瘤(GBM)，并且可以例如经由系统(泽西岛圣赫利尔，Novocure有限公司(NovocureLimited,St.Helier,Jersey))来递送，该系统包括放置在患者光头上的换能器阵列。

用于在装置中递送TTFields的每个换能器阵列包括一组陶瓷圆盘电极，该组陶瓷圆盘电极通过一层导电医用凝胶耦接到患者皮肤(诸如但不限于患者光头，用于治疗GBM)。医用凝胶的目的是进行变形以匹配身体的轮廓，并在阵列和皮肤之间提供良好的电接触；因此，凝胶界面桥接皮肤并减少干扰。该装置旨在由患者连续穿戴2至4天，然后移除，让患者进行卫生护理并重新剃头(如果需要的话)，随后重新施用一组新的阵列。因此，医用凝胶保持与患者皮肤区域基本上连续接触，每次接触时段为2至4天。此外，阵列可以在任一方向移动几厘米，以使皮肤能够在一个治疗期和下一个治疗期之间愈合。因此，当更换的电极稍微移动时，被电极/凝胶覆盖2至4天的时段的皮肤部分可以暴露2至4天；然后可以在接下来的2至4天的时段期间将装置重新应用于皮肤的原始部分。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)目前用作某些血液系统恶性肿瘤的常规癌症治疗，诸如B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；然而，由于免疫抑制性肿瘤微环境(TME)，在使用CAR-T细胞用于治疗实体瘤方面仍存在障碍(Kozani等人，免疫学前沿(2022)，第13卷：795164)。

为了将CAR-T疗法用于实体瘤，已经开展大量研究以了解哪些因素为CAR-T细胞带来更好的疗效。来自TME的CXCL9和CXCL10经由T细胞上的CXCR3表达募集T细胞进入肿瘤。诸如CXCL16、CXCL1和CCL19的其他趋化因子有助于T细胞募集(Tantalo等人，癌症免疫治疗杂志(2021)，第9卷：e002555；Seitz等人，英国癌症杂志(2022)，第126卷：1470-1480)。此外，先前已经表明在荷神经母细胞瘤小鼠中，RANTES(CCL5)和IL-15两者的瘤内表达吸引CAR-T细胞并且延长其生存期(Nishio等人，癌症研究(2014)，第74卷(第18期)：5195-205)。

附图说明

图1以图形方式描绘了从用TTFields处理的小鼠得到的血清与从用假热处理的小鼠得到的血清在与细胞因子阵列孵育后进行比较的分析结果。使用了多种小鼠癌症模型。

具体实施方式

在通过示例性语言和结果详细解释本发明构思的至少一个实施方案之前，应当理解，本发明构思的应用不限于以下描述中阐述的部件的构造和布置的细节。本发明构思能够是其他实施方案或能够以各种方式实践或执行。因此，本文所用的语言旨在给出最广泛的可能范围和含义；并且这些实施方案旨在是示例性的而非穷举的。此外，应当理解，本文使用的措辞和术语是为了描述的目的并且不应当被认为是限制性的。

除非本文另有定义，与本发明公开的发明构思结合使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法执行，如在本说明书全文中引用并讨论的各种一般和更具体的参考文献中所描述。与本文所述的分析化学、合成有机化学、医学和药物化学相关的术语以及实验室程序和技术是本领域众所周知和常用的。标准技术用于化学合成和化学分析。

本说明书中提及的所有专利，公开的专利申请和非专利出版物表示本公开的发明构思所属领域的技术人员的技能水平。在本申请的任何部分中引用的所有专利，公开的专利申请和非专利出版物在此明确地全文引入作为参考，其程度如同每个单独的专利或出版物被具体地和单独地指出引入作为参考。

根据所公开的所有组合物、组件、系统、试剂盒和/或方法可根据本公开内容在无需过度实验的情况下制备和执行。虽然本发明构思的组合物、组合件、系统、试剂盒和方法已根据特定实施方案加以描述，但所属领域的技术人员将明了，在不脱离本发明构思的概念、精神和范围的情况下，可以对本文所述的组合物和/或方法和方法的步骤或步骤顺序进行变化。对于本领域技术人员显而易见的所有这些类似的替换和修改被认为是在由所附权利要求限定的本发明构思的精神、范围和概念内。

如根据本公开所使用的，除非另外指明，否则以下术语应理解为具有以下含义：

当在权利要求和/或说明书中与术语“包括”结合使用时，术语“一个”的使用可以意指“一个”，但也与“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义一致。因此，除非上下文另外明确指出，否则术语“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种化合物”可以指一种或多种化合物、两种或更多种化合物、三种或更多种化合物、四种或更多种化合物、或更多数量的化合物。术语“多个”是指“两个或更多个”。

术语“至少一个”的使用应理解为包括一个以及多于一个的任何量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100等。术语“至少一个”可扩展至100或1000或更多，取决于其所连接的术语；此外，100/1000的量不被认为是限制性的，因为更高的限制也可以产生令人满意的结果。此外，术语“X，Y和Z中的至少一个”的使用将被理解为包括单独的X，单独的Y和单独的Z，以及X，Y和Z的任何组合。使用序数术语(例如，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)仅用于区分两个或更多个项目的目的，并不意味着暗示例如一个项目相对于另一个项目的任何顺序或次序或重要性或任何添加顺序。

根据权利要求中使用的术语“或”用于表示包括性的“和/或”，除非明确指出仅指备选方案，或者除非备选方案相互排斥。例如，条件“A或B”可以通过以下任一情况满足：A为真(或存在)且B为假(或不存在)；A为假(或不存在)且B为真(或存在)；以及A和B都为真(或存在)。

如本文所使用的，对“一个实施方案”，“实施方案”，“一些实施方案”，“一个示例”，“例如”或“示例”的任何引用意味着结合该实施方案描述的特定元件、特征、结构或特性被包括在至少一个实施方案中。例如，短语“在一些实施方案中”或“一个示例”在说明书中不同地方的出现不一定都指相同的实施方案。此外，对一个或多个实施方案或示例的所有引用应被解释为对根据权利要求的非限制。

在本申请全文中，术语“约”用于指示值包括组合物/设备/装置的固有误差变化、用于确定值的方法或在研究受试者中存在的变化。例如，但不作为限制，当使用术语“约”时，指定值可以从指定值加或减百分之二十，或百分之十五，或百分之十二，或百分之十一，或百分之十，或百分之九，或百分之八，或百分之七，或百分之六，或百分之五，或百分之四，或百分之三，或百分之二，或百分之一变化，因为此类变化适合于执行所公开的方法并且如本领域普通技术人员所理解的。

如本说明书和权利要求所用，词语“包括(comprising)”(以及任何形式的包括，诸如“包括(comprise)”和“包括(comprises)”)、“具有”(以及任何形式的具有，诸如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及任何形式的包括，诸如“包括(includes)”和“包括(include)”)，或“包含(containing)”(以及任何形式的包含，诸如“包含(contains)”和“包含(contain)”)是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未引用的元件或方法步骤。

如本文所用。术语“或其组合”是指该术语前面所列项的所有排列和组合。例如，“A、B、C或它们的组合”旨在包括以下各项中的至少一项：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果在特定上下文中顺序很重要，还包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续这个示例，明确包括的是含有一个或多个项或术语的重复的组合，诸如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等。本领域技术人员将理解，通常对任何组合中的项或术语的数量没有限制，除非从上下文中显而易见。

如本文所用，术语“基本上”是指随后描述的事件或情况完全发生，或者随后描述的事件或情况在很大程度上发生。例如，当与特定事件或情况相关时，术语“基本上”是指随后描述的事件或情况发生至少80％的时间、或至少85％的时间、或至少90％的时间、或至少95％的时间。例如，术语“基本上相邻”可以表示两个项目彼此100％相邻，或者两个项目彼此非常接近但彼此不100％相邻，或者两个项目之一的一部分与另一个项目不100％相邻但与另一个项目非常接近。

术语“药学上可接受的”是指适合施用于人和/或动物而没有过度不良副作用(诸如(但不限于)毒性，刺激和/或过敏反应)且该不良副作用与合理效益/风险比相当的化合物和组合物。

如本文所用，术语“患者”或“受试者”包括人和兽医学受试者。用于治疗目的的“哺乳动物”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括(但不限于)人类，家畜和农场动物，非人类灵长类动物和具有乳腺组织的任何其它动物。

术语“治疗”指治疗性处理以及防治性或预防性措施。需要治疗的人包括但不限于已经患有特定病症/疾病/感染的个体以及处于获得特定病症/疾病/感染的风险中的个体(例如，需要防治性/预防性措施的个体)。术语“治疗”是指出于治疗和/或防治/预防目的，对患者施用药剂/元素/方法。

如本文所用，术语“治疗组合物”或“药物组合物”是指可以在体内施用以产生治疗和/或防治/预防效果的试剂。

施用治疗有效量或预防有效量旨在在疾病、病症和/或感染的治疗、预防和/或管理中提供治疗益处。治疗有效的具体量可以由普通医师轻易地确定，并且可以取决于本领域已知的因素(诸如(但不限于)病症/疾病/感染的类型、患者的病史和年龄、病症/疾病/感染的阶段以及其他药剂的共同施用)而变化。

术语“有效量”是指生物活性分子或其缀合物或衍生物的量，或治疗方案(例如，交变电场)的量，其足以表现出可检测的治疗效果而没有不适当的不良副作用(诸如(但不限于)毒性、刺激和过敏反应)，当以本发明构思的方式使用时与合理的益处/风险比相称。治疗效果可以包括例如但不作为限制预防、抑制或减少至少一种病症、疾病和/或感染的发生。受试者的有效量将取决于受试者的类型、受试者的体型和健康状况、待治疗的病症/疾病/感染的性质和严重程度、施用方法、治疗历时、同时疗法的性质(如果有的话)、使用的具体制剂等。因此，不可能预先规定准确的有效量。然而，对于给定情况的有效量可以由本领域普通技术人员中的一个普通技术人员基于本文所提供的信息使用常规实验来确定。

如本文所用，术语“同时疗法”可与术语“联合疗法”和“辅助疗法”互换使用，并且将被理解为意指需要治疗的患者与本公开的治疗相结合，用针对病症/疾病/感染的另一种药物进行治疗或给予该另一种药物。这种同时疗法可以是顺序疗法，其中首先用一种治疗方案/药物组合物治疗患者，然后用另一种治疗方案/药物组合物进行治疗，或者同时给予两种治疗方案/药物组合物。此外，应当理解，一个施用步骤(诸如但不限于TTFields的施用)可能会比另一个施用步骤(即，物质的口服施用或注射施用)持续更长的一段时间。在不同施用时间段的这些情况下，术语“同时”将被理解为意指较短的施用步骤与较长的施用步骤全部重叠。然而，术语“同时”将包括在较长的施用步骤期间的任何时间点(例如，在较长的施用步骤的开始、中间或结束，或它们之间的任何其他时间段)处执行较短的施用步骤，以及完全在较长的施用步骤的时间段内一次或多次执行较短的施用步骤。因此，术语“同时”不要求两个施用步骤在完全相同的时间长度内执行。

如本文所用，术语“施用”将被理解为包括本领域已知的所有施用途径，包括但不限于口服、局部、透皮、肠胃外、皮下、鼻内、粘膜、肌内、腹膜内、玻璃体内和静脉内途径，并且包括局部和全身施加两者。此外，本公开的组合物(和/或其施用方法)可以被设计成使用本领域众所周知的制剂技术提供延迟、受控或持续的释放。

如本文所用，术语“目标区域”是指包含待治疗的癌症、癌细胞和/或肿瘤的全部或部分的区域。

现在转向本发明构思，本文公开了用于癌症的同时疗法。该同时疗法包括同时使用交变电场(例如，TTFields)与嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。交变电场(例如，TTFields)与CAR免疫细胞的联用提供癌症治疗中产生的改善且协同的效果。

本公开的某些非限制性实施方案涉及一种降低癌细胞存活力的方法。该方法包括以下步骤：(1)向该癌细胞施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该癌细胞施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。此类方法可以在体外或体内执行。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种治疗受试者中的癌症的方法。该方法包括以下步骤：(1)向该受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该受试者施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种减小活体受试者身体中存在的肿瘤体积的方法，其中该肿瘤包括多个癌细胞。该方法包括以下步骤：(1)向该受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该受试者施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种预防肿瘤体积增大的方法，其中该肿瘤存在于活体受试者身体中并且包括多个癌细胞。该方法包括以下步骤：(1)向该受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该受试者施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种方法，该方法包括以下步骤：(1)向受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该受试者施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞的组合物，该组合物用于在一种治疗受试者中的癌症的方法中使用，该方法包括以下步骤：(1)向该受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向该受试者施用该组合物。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种用于在一种治疗受试者中的癌症的方法中使用的趋化因子，该方法包括：(1)通过向该受试者的包含该受试者中的癌细胞的目标区域施加交变电场使该趋化因子由该癌细胞表达；(2)向该受试者施用至少一种组合物，其中该至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种用于降低癌细胞存活力的试剂盒，该试剂盒包括：至少一种组合物，该至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞；和电场产生装置，该电场产生装置被配置为向该癌细胞施加交变电场持续一段时间。

本公开的某些附加非限制性实施方案涉及一种用于降低癌细胞存活力的试剂盒，该试剂盒包括：用于通过以下方式制备包含嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞的组合物的部件：从受试者或同种异体供体中分离至少一种免疫细胞或其前体；修饰该至少一种免疫细胞以表达该嵌合抗原受体；以及培养该至少一种CAR免疫细胞，该试剂盒任选地进一步包括电场产生装置，该电场产生装置被配置为向该癌细胞施加交变电场持续一段时间。

在本发明的某些特定(但非限制性)实施方案中，该癌症或该癌细胞呈实体瘤的形式。

在上文所描述的或本文以其他方式设想的方法中的任何方法的某些特定(但非限制性)实施方案中，当与在未施加交变电场的情况下向该受试者施用至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞相比，该交变电场的施用提高该至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞对该受试者中的癌细胞的细胞毒性。

本公开的方法中的任何方法的步骤(1)和(2)可以联合或连续执行，并且特别是基本上同时执行或者全部或部分按顺序执行。当该步骤全部或部分按顺序执行时，可以在开始施加该交变电场之前或之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的该至少一种组合物。

本公开的方法可以用于治疗对利用交变电场(例如，TTFields)和/或CAR免疫细胞进行的治疗有反应的任何类型的癌细胞/癌症/肿瘤。可以根据本公开治疗的癌细胞/癌症/肿瘤的非限制性示例包括肝细胞癌/肝细胞癌细胞、胶质母细胞瘤/胶质母细胞瘤细胞、胸膜间皮瘤/胸膜间皮瘤细胞、分化型甲状腺癌/分化型甲状腺癌细胞、晚期肾细胞癌/晚期肾细胞癌细胞、卵巢癌/卵巢癌细胞、胰腺癌/胰腺癌细胞、肺癌/肺癌细胞、乳腺癌/乳腺癌细胞等，以及它们的任何组合。

本领域已知的或本文以其他方式设想的可以用于产生交变电场的任何类型的导电或非导电电极和/或换能器阵列可以用于根据本公开的方法来产生交变电场。根据本公开，可用于产生交变电场的电极和换能器阵列的非限制性示例包括那些作为TTFields系统的一部分发挥作用的电极和换能器阵列，例如但不限于以下专利申请所述的电极和换能器阵列：美国专利第7,016,725号、第7,089,054号、第7,333,852号、第7,565,205号、第8,244,345号、第8,715,203号、第8,764,675号、第10,188,851号和第10,441,776号；以及美国专利申请第US2018/0160933号、第US2019/0117956号、第US2019/0307781号；和第US 2019/0308016号。

根据本公开，可以以任何频率产生该交变电场。例如(但不作为限制)，交变电场的频率可以是约50kHz、约75kHz、约100kHz、约125kHz、约150kHz、约175kHz、约200kHz、约225kHz、约250kHz、约275kHz、约300kHz、约325kHz、约350kHz、约375kHz、约400kHz、约425kHz、约450kHz、约475kHz、约500kHz、约550kHz、约600kHz、约650kHz、约700kHz、约750kHz、约800kHz、约850kHz、约900kHz、约950kHz、约1MHz、约2MHz、约3MHz、约4MHz、约5MHz、约6MHz、约7MHz、约8MHz、约9MHz、约10MHz等，以及由任何上述值形成的范围(例如，约50kHz至约10MHz的范围、约50kHz至约1MHz的范围、约50kHz至约500kHz的范围、约100kHz至约500kHz的范围、约150kHz至约300kHz的范围等)，以及组合落入上述值的两个值之间的两个整数的范围(例如，约122kHz至约313kHz的范围、约78kHz至约298kHz的范围等)。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，可以在两个或两个以上不同频率下施加交变电场。当存在两个或更多个频率时，每个频率选自上述值中的任何值、或由上述值中的任何值形成的范围、或组合落入上述值中的两个值之间的两个整数的范围。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，以下频率可以用于特定癌症：GBM，约200kHz；NSCLC，约150kHz；乳腺癌，约200kHz；胰腺癌，约150kHz；来自NSCLC的脑转移，约150kHz；肝癌，约150kHz等。

交变电场可以在目标区域/受试者/癌细胞中具有任何电场强度，只要该交变电场能够根据本公开起作用即可。例如(但不作为限制)，交变电场可以在目标区域/受试者/癌细胞中具有的电场强度至少为：约1V/cm、约1.5V/cm、约2V/cm、约2.5V/cm、约3V/cm、约3.5V/cm、约4V/cm、约4.5V/cm、约5V/cm、约5.5V/cm、约6V/cm、约6.5V/cm、约7V/cm、约7.5V/cm、约8V/cm、约9V/cm、约9.5V/cm、约10V/cm、约10.5V/cm、约11V/cm、约11.5V/cm、约12V/cm、约12.5V/cm、约13V/cm、约13.5V/cm、约14V/cm、约14.5V/cm、约15V/cm、约15.5V/cm、约16V/cm、约16.5V/cm、约17V/cm、约17.5V/cm、约18V/cm、约18.5V/cm、约19V/cm、约19.5V/cm、约20V/cm等，以及由上述值中的任何值形成的范围(例如，约1V/cm至约20V/cm的范围、约1V/cm至约10V/cm的范围、约1V/cm至约4V/cm的范围等)，和组合落入上述值中的两个值之间的两个整数的范围(例如，约1.1V/cm至约18.6V/cm的范围、约1.2V/cm至约9.8V/cm的范围、约1.3V/cm至约4.7V/cm的范围等)。通常，期望在不引起过热的情况下使用尽可能高的电场强度，其中电场强度通常受到温度测量的限制。

在一些情况下，目标区域/受试者/癌细胞的至少一部分中的电场由施加电压诱导，该施加电压是通过该目标区域/受试者/癌细胞的计算机模拟确定的。在一些情况下，目标区域/受试者/癌细胞的至少一部分中的电场由至少50VRMS(均方根)或至少50Vp2p(峰-峰值)的施加电压诱导，并且任选地，该施加电压为至少100VRMS或至少100Vp2p。在一些实施方案中，至少50V的施加电压在目标区域/受试者/癌细胞的至少一部分中诱导具有至少1V/cm(例如，至少5V/cm)的电场强度的电场。

交变电场可以在一对阵列之间的单个方向上施加，或者可以在两对或更多对阵列之间的两个或更多个方向/通道(例如，前后和左右)上交替。例如，某些TTFields装置(诸如但不限于系统(泽西岛圣赫利尔，Novocure有限公司(Novocure Limited,St.Helier,Jersey)))在两个方向上操作，以便增加分裂细胞将与电场对准的机会，使得该电场可以具有所期望的抗有丝分裂效果。然而，应当理解，本公开的范围还包括在单个方向上施加交变电场。如本文所用，术语“交变电场”将被理解为包括在单个方向/通道上以及在两个或更多个方向/通道上的施加；此外，如本文所用，术语“交变电场”将被理解为包括单个交变电场的施加以及多个交变电场在时间历时内的连续施加两者。

交变电场可以施加足以实现癌细胞存活力的降低和/或肿瘤体积的减小(以及/或者预防肿瘤体积的增大)的任何连续或累积的一段时间。施加交变电场的该段时间包括连续的一段时间以及累积的一段时间。即，施加交变电场的该段时间包括单个疗程(即，连续施加)以及在疗程之间稍微休息的多个疗程(即，累积时段内的连续施加)。例如，允许受试者在利用交变电场装置进行的治疗期间休息，并且仅预期将装置定位于身体上并且在总治疗期的至少约60％、至少约70％或至少约80％内(例如，在一天、一周、两周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月等的过程内)操作。

例如，但不作为限制，交变电场可以施加的连续或累积的一段时间为至少：约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约21天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月等，以及由上述值中的任何值形成的范围(例如，约1小时至约6个月的范围，约24小时至约72小时的范围等)，和组合落入上述值中的两个值之间的两个整数的范围(例如，约14小时至约68小时的范围等)。

在特定(但非限制性)实施方案中，施加交变电场的该段时间为至少约24小时，其中装置定位于身体上并且在该时段的至少约80％内操作。

在特定(但非限制性)实施方案中，向受试者的癌细胞/目标区域施加交变电场持续一段时间，该段时间足以使得癌细胞中至少一种趋化因子的表达相较于未暴露于交变电场的对照癌细胞得以提高。趋化因子的非限制性示例包括CXCL9、CXCL10、CCL5、IL-15等，以及它们的任何组合。

可以根据本公开使用本领域已知的或本文以其他方式设想的任何CAR免疫细胞，只要该CAR免疫细胞能够如本文所描述那样起作用即可。其非限制性示例包括CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR巨噬细胞等，以及它们的组合。CAR免疫细胞可以是自体的(并且因此从待治疗的受试者获得)，或者CAR免疫细胞可以是同种异体的(并且因此从另一个受试者获得)。自体或同种异体CAR免疫细胞可以直接从受试者培养，然后被植入/注射到癌症患者体内。另选地(并且/或者除此之外)，多能干细胞可以从受试者获得并且在体外分化为CAR免疫细胞，该CAR免疫细胞随后被植入/注射到癌症患者体内。

可以根据本公开使用的各种其他类型的CAR免疫细胞是本领域已知的并且能够从多种来源通过市售获得；因此，认为不需要对其进行进一步描述。

包括至少一种CAR免疫细胞的组合物可以以本领域已知的或本文以其他方式设想的任何制剂提供。在某些特定(但非限制性)实施方案中，包括至少一种CAR免疫细胞的组合物包含一种或多种药学上可接受的载体(并且因此，该组合物也可以被称为“药物组合物”)。合适的药学上可接受的载体的非限制性示例包括：水；盐水；右旋糖溶液；果糖或甘露醇；碳酸钙；纤维素；乙醇；动物、植物或合成来源的油；碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；洗涤剂；脂质体载体；缓冲溶液，诸如氯化钠、盐水、磷酸盐缓冲盐水和/或生理上可接受和/或使用安全的其他物质；稀释剂；赋形剂，诸如聚乙二醇(PEG)；或它们的任何组合。适用于药物制剂的合适的药学上可接受的载体描述于例如Remington：药学科学与实践，第23版(2020)。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，包括至少一种CAR免疫细胞的组合物可以进一步包含一种或多种附加活性剂。可以与交变电场或CAR免疫细胞同时使用的各种活性剂是本领域已知的，并且某些联合疗法由FDA批准或目前在临床试验测试中。可以根据本公开与CAR免疫细胞同时使用的治疗剂的非限制性示例包括：免疫检查点抑制剂、类固醇(诸如但不限于地塞米松(dexamethasone))、托珠单抗(tocilizumab)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-1R、IL-2、IL-11、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21和多西他赛(Docetaxel)；抗PD-1治疗剂，诸如(但不限于)帕博利珠单抗(Pembrolizumab)(美国新泽西州拉威市，默沙东公司(Merck&Co.,Inc.,Rahway,NJ))、替雷利珠单抗(Tislelizumab)、纳武利尤单抗(Nivolumab)和西米普利单抗(Cemiplimab)；抗PD-L1治疗剂，诸如阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和度伐利尤单抗(durvalumab)；化疗剂，诸如(但不限于)仑伐替尼(lenvatinib)；紫杉醇(Paclitaxel)、多西他赛(Docetaxel)、异环磷酰胺(Ifosamide)、依托泊苷(Etoposide)(美国纽约州纽约市，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb Co,New York,NY))、吉西他滨(Gemcitabine)、洛莫司汀(Lomustine)、纳米白蛋白结合型紫杉醇(nabPaclitaxel)、替莫唑胺(temozolomide)和卡铂(Carboplatin)；TKI抑制剂，诸如(但不限于)依维莫司(Everolimus)；mTOR抑制剂；Akt抑制剂；PI3K抑制剂；PARP抑制剂；FGF抑制剂；抗LAB3药剂；抗CTLA-4治疗剂；芳香化酶抑制剂，诸如(但不限于)来曲唑(Letrozole)；生物制剂，诸如单克隆抗体(诸如但不限于地诺单抗(Denosumab)和帕博利珠单抗(pembrolizumab)、利利鲁单抗(lirilumab)、莫纳利珠单抗(monalizumab))等，以及它们的任何组合。

此外，本公开的组合物中的任何组合物可以含有允许经由特定施用途径施用组合物的其他药剂。例如，但不作为限制，组合物可以配制用于通过口服、局部、透皮、肠胃外、皮下、鼻内、粘膜、肌内、腹膜内、玻璃体内和/或静脉内途径施用。基于施用途径，组合物除了活性剂(例如，CAR免疫细胞和/或附加治疗剂)之外还可以包含一种或多种附加组分。可能存在的附加辅助化合物的示例包括但不限于填充剂、盐、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、增溶剂、润湿剂、乳化剂、分散剂和本领域众所周知的的其他材料。

在特定(但非限制性)实施方案中，包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物经由注射或植入到受试者体内施用。例如(但不作为限制)，在一些情况下，可能期望在局部/区域水平上施用CAR免疫细胞，以确保CAR免疫细胞靶向受试者身体中的特定位置并且抑制身体其他部位的非特异性相互作用；在其他情况下，可能需要更系统性的管理。

可以在开始施加交变电场之前或之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物。在某些特定(但非限制性)实施方案中，可以在开始施加交变电场之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物。特别地(但不作为限制)，可以在施加交变电场期间(例如，在施加交变电场的该段时间过去之前)和/或在施加交变电场过去之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物。

例如(但不作为限制)，可以在开始施加交变电场至少以下时段之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物：约3小时、约6小时、约9小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时、约5天、约6天、约7天等，以及由上述值中的任何值形成的范围(例如，约24小时至约96小时的范围等)，和组合落入上述值中的两个值之间的两个整数的范围(例如，约14小时至约94小时的范围等)。在特定(但非限制性)实施方案中，在开始施加交变电场之后至少约24小时施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物。

在其他非限制性示例中，可以在施加交变电场的该段时间过去之后施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物，其中在该段时间过去之后的以下时间内施用包括至少一种CAR免疫细胞的该至少一种组合物：约3小时、约6小时、约9小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时、约5天、约6天、约7天等。

在特定(但非限制性)实施方案中，在该段时间过去之后的约96小时内施用包括至少一种CAR免疫细胞的至少一种组合物。

可以以提供CAR免疫细胞治疗有效浓度的任何浓度向癌细胞/受试者施用包括至少一种CAR免疫细胞的组合物。在某些非限制性实施方案中，当与在不存在交变电场的情况下施用的正常治疗有效量相比，施加交变电场减少了使治疗有效所需的CAR免疫细胞的量。例如，但不作为限制，相对于已知在未施加交变电场的情况下治疗有效的CAR免疫细胞的剂量，CAR免疫细胞的治疗有效浓度可以降低至少约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或更多。在特定(但非限制性)实施方案中，当与已知在不存在交变电场的情况下治疗有效的CAR免疫细胞的剂量相比，CAR免疫细胞的治疗有效浓度降低至少约50％。

可以以能够诱导肿瘤或癌细胞炎症反应的任何浓度向受试者施用包含CAR免疫细胞的组合物。例如，但不作为限制，可以以下剂量施用CAR免疫细胞：约10个细胞/kg体重、约100个细胞/kg体重、约1000个细胞/kg体重、约104个细胞/kg体重、约105个细胞/kg体重、约106个细胞/kg体重、约107个细胞/kg体重、约108个细胞/kg体重、约109个细胞/kg体重、约1010个细胞/kg体重、约1011个细胞/kg体重、约1012个细胞/kg体重、约1013个细胞/kg体重、约1014个细胞/kg体重、约1015个细胞/kg体重或更高，以及由上述值中的任何值形成的范围(例如，约104个细胞/kg体重至约109个细胞/kg体重的范围等)。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，该方法包括一个或多个附加步骤。例如(但不作为限制)，该方法还可以包括以下步骤：(3)停止施加交变电场(诸如但不限于以允许细胞/组织恢复)。此外，步骤(1)和/或(2)中的任何步骤可以重复一次或多次。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，可以通过本领域已知的任何剂量方案施用包含CAR免疫细胞的组合物。例如，但不作为限制，可以在限定治疗期内以单次剂量或多次剂量施用包含CAR免疫细胞的组合物。例如(但不作为限制)，可以以下频率施用治疗有效浓度的包含CAR免疫细胞的组合物：约每4小时一次、约每8小时一次、约每12小时一次、约每天一次、约每隔一天一次、约每三天一次、约每周一次、约每周两次、约每周三次、约每两周一次、约每三周一次、约每月一次等，以及由上述值中的任何值形成的范围(约每4小时一次至约每8小时一次的范围、约每周一次至约每月一次的范围等)。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，该方法涉及使用两种或更多种组合物的同时疗法。因此，该方法可以包括附加步骤：(4)向癌细胞/受试者施用至少第二组合物。在特定(但非限制性)实施方案中，该至少第二组合物可以包含本文所公开的或以其他方式设想的用于与包含CAR免疫细胞的组合物一起使用的活性物质中的任何活性物质中的一种或多种活性物质。

与CAR免疫细胞同时使用的各种物质和疗法是本领域已知的，并且某些联合疗法由FDA批准或目前在临床试验测试中。可以根据本公开在使用CAR免疫细胞的同时(顺序)疗法中使用的治疗剂的非限制性示例包括：免疫检查点抑制剂、类固醇(诸如但不限于地塞米松(dexamethasone))、托珠单抗(tocilizumab)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-1R、IL-2、IL-11、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21和多西他赛(Docetaxel)；抗PD-1治疗剂，诸如(但不限于)帕博利珠单抗(Pembrolizumab)(美国新泽西州拉威市，默沙东公司(Merck&Co.,Inc.,Rahway,NJ))、替雷利珠单抗(Tislelizumab)、纳武利尤单抗(Nivolumab)和西米普利单抗(Cemiplimab)；抗PD-L1治疗剂，诸如阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和度伐利尤单抗(durvalumab)；化疗剂，诸如(但不限于)仑伐替尼(lenvatinib)；紫杉醇(Paclitaxel)、多西他赛(Docetaxel)、异环磷酰胺(Ifosamide)、依托泊苷(Etoposide)(美国纽约州纽约市，百时美施贵宝公司(Bristol-MyersSquibb Co,New York,NY))、吉西他滨(Gemcitabine)、洛莫司汀(Lomustine)、纳米白蛋白结合型紫杉醇(nabPaclitaxel)、替莫唑胺(temozolomide)和卡铂(Carboplatin)；TKI抑制剂，诸如(但不限于)依维莫司(Everolimus)；mTOR抑制剂；Akt抑制剂；PI3K抑制剂；PARP抑制剂；FGF抑制剂；抗LAB3药剂；抗CTLA-4治疗剂；芳香化酶抑制剂，诸如(但不限于)来曲唑(Letrozole)；生物制剂，诸如单克隆抗体(诸如但不限于地诺单抗(Denosumab)和帕博利珠单抗(pembrolizumab)、利利鲁单抗(lirilumab)、莫纳利珠单抗(monalizumab))等，以及它们的任何组合。

另选地，附加疗法可以包括一种或多种机制，以促进受试者体内的CAR免疫细胞的产生。以这种方式起作用的附加疗法的非限制性示例包括使用基因编辑技术(诸如但不限于TALON和CRISPR)来诱导供体免疫细胞产生CAR，以及允许在身体内产生CAR免疫细胞的纳米技术和基于mRNA的办法。

当存在时，步骤(4)可以与步骤(2)中第一组合物的施用基本上同时执行或者全部或部分按顺序执行，由此这两种单独的组合物同时施用或者全部或部分按顺序施用。此外，可以经由相同的途径施用步骤(2)和(4)中施用的这两种组合物(例如，两者均为静脉施用)，或者可以通过不同的途径施用这两种组合物(例如，口服施用一种组合物，并且静脉施用另一种组合物)。

当存在时，可以在开始施加交变电场之前或之后、在施加交变电场期间和/或在施加交变电场过去之后以与上文所描述的第一组合物的相同方式和时间范围执行任选的附加施用步骤(4)。

即，例如(但不作为限制)，可以在开始施加交变电场至少以下时段之后施用第二组合物：约3小时、约6小时、约9小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时、约5天、约6天、约7天等，以及由上述值中的任何值形成的范围(例如，约24小时至约96小时的范围等)，和组合落入上述值中的两个值之间的两个整数的范围(例如，约14小时至约94小时的范围等)。在特定(但非限制性)实施方案中，在开始施加交变电场之后至少约24小时施用第二组合物。

在其他非限制性示例中，可以在施加交变电场的该段时间过去之后施用第二组合物，其中在该段时间过去之后的以下时间内施用该第二组合物：约3小时、约6小时、约9小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时、约5天、约6天天、约7天等。在特定(但非限制性)实施方案中，第二组合物在经过的该段时间后约96小时内施用。

此外，例如(但不作为限制)，可以在施用第一物质至少以下时间之后施用第二组合物：约1分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约30分钟、约45分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约15小时、约18小时、约21小时、约24小时、约27小时、约30小时、约33小时、约36小时、约39小时、约42小时、约45小时、约48小时、约51小时、约54小时、约57小时、约60小时、约63小时、约66小时、约69小时、约72小时、约75小时、约78小时、约81小时、约84小时、约87小时、约90小时、约93小时、约96小时约5天、约6天、约7天等以及由任何上述值形成的范围(例如，约24小时至约96小时的范围等)，和组合落入上述值的两个值之间的两个整数的范围(例如，约14小时至约94小时的范围等)。在特定(但非限制性)实施方案中，第二组合物在第一物质施用之后至少约12小时施用。

在某些特定(但非限制性)实施方案中，该方法可以进一步包括以下步骤：(5)向细胞/受试者施用至少一种附加疗法。可以根据本公开的方法使用本领域已知的或本文以其他方式设想的用于与交变电场(例如，TTFields)和/或CAR免疫细胞疗法一起使用的任何疗法。可以使用的附加疗法的非限制性示例包括放射疗法、光动力疗法、经动脉化疗栓塞(TACE)或它们的组合。

步骤(1)和(2)以及任选的步骤(3)、(4)和(5)中的任一者可以重复一次或多次。该步骤中的每个步骤可以根据需要重复多次。当重复步骤(1)时，换能器阵列可以被放置在受试者上与其原始位置稍微不同的位置；以这种方式重新定位阵列可以进一步帮助治疗肿瘤/癌症。此外，施用组合物/附加疗法的步骤(2)和任选步骤(4)和(5)(当存在时)可以按不同间隔重复不同次数以遵循组合物/疗法的任何已知的和/或普遍接受的剂量/治疗方案。

对任选步骤的顺序参考的使用仅用于示例的目的；本公开的方法可以包括单独或彼此组合的任选步骤(3)、(4)和(5)中的一个或多个任选步骤。即，本公开的方法包括在不存在步骤(4)或(5)的情况下执行步骤(3)，在不存在步骤(3)或(5)的情况下执行步骤(4)，在不存在步骤(3)和(4)的情况下执行步骤(5)。换言之，本文公开的方法的范围包括执行步骤(1)至(2)(以及将每个步骤重复所需次数)，执行步骤(1)至(3)(以及将步骤(1)至(3)中的一个或多个步骤重复所需次数)，执行步骤(1)至(2)和(4)(以及将步骤(1)至(2)和(4)中的一个或多个步骤重复所需次数)，执行步骤(1)至(2)和(5)(以及将步骤(1)至(2)和(5)中的一个或多个步骤重复所需次数)；执行步骤(1)至(4)(以及将步骤(1)至(4)中的一个或多个步骤重复所需次数)，执行步骤(1)至(3)和(5)(以及将步骤(1)至(3)和(5)中的一个或多个步骤重复所需次数)，执行步骤(1)至(2)和(4)至(5)(以及将步骤(1)至(2)和(4)至(5)中的一个或多个步骤重复所需次数)；以及执行所有步骤(1)至(5)(以及将步骤(1)至(5)中的一个或多个步骤重复所需次数)。

虽然上文明确描述了使用两种物质的同时疗法，但应理解，本公开的范围还包括使用三种或更多种组合物的同时疗法。因此，该方法可以包括向受试者施用附加组合物的一个或多个附加步骤(类似于步骤(1)和(4))。在该方法中施用的任何附加物质可以选自本文所公开的或以其他方式设想的物质中的任何物质，以便与(如上文关于任选步骤(4)所公开的)至少一种CAR免疫细胞组合使用；此外，任何附加物质的施用可以与第一组合物/物质和/或第二组合物/物质的施用基本上同时执行或者全部或部分按顺序执行，并且以与上文所描述的第一组合物/物质和第二组合物/物质相同的方式和时间范围执行。

本公开的某些非限制性实施方案涉及试剂盒，该试剂盒包括本文所公开的或以其他方式设想的交变电场(例如，TTFields)产生系统的部件中的任何部件(诸如但不限于一个或多个换能器阵列和/或一种或多种水凝胶组合物，如以下各项中所公开：美国专利第7,016,725号；第7,089,054号；第7,333,852号；第7,565,205号；第8,244,345号；第8,715,203号；第8,764,675号；第10,188,851号；和第10,441,776号；以及美国专利申请第US2018/0160933号；第US2019/0117956号；第US2019/0307781号；和第US 2019/0308016号)，该任何部件与包括本文所公开的或以其他方式设想的至少一种CAR免疫细胞的组合物中的任何组合物中的至少一种组合物和/或用于从受试者或同种异体供体中分离、培养和/或在基因上修饰至少一种免疫细胞或其前体的部件进行组合。该试剂盒可以任选地进一步包括本文所公开的或以其他方式设想的任选组合物中的任何任选组合物中的一种或多种任选组合物(诸如但不限于包含至少一种附加活性剂的一种或多种任选组合物和/或用于培养/诱导分化/在基因上修饰至少一种免疫细胞或其前体的一种或多种任选组合物)。该试剂盒可以任选地进一步包括在一个或多个附加疗法步骤中使用的一个或多个装置(或装置的一个或多个部件)。

在特定(但非限制性)实施方案中，该试剂盒可以进一步包括用于实现本文所公开的或以其他方式设想的方法中的任何方法的说明书。例如(但不作为限制)，该试剂盒可以包括用于向患者皮肤应用交变电场(例如，TTFields)产生装置的一个或多个部件的说明书、用于向患者施加交变电场的说明书、用于从受试者或同种异体供体中分离免疫细胞或其前体的说明书、用于体外培养并且/或者分化免疫细胞或其前体的说明书、用于在基因上修饰免疫细胞的说明书、用于配制包括CAR免疫细胞的组合物的说明书、用于何时和如何施用包括至少一种CAR免疫细胞的组合物并且任选地如何施用一种或多种任选的附加组合物的说明书、以及/或者用于相对于施用包括至少一种CAR免疫细胞的组合物和/或施用一种或多种任选组合物和/或疗法步骤何时激活并关闭交变电场的说明书。

除了上文详细描述的部件之外，该试剂盒可以进一步包含用于执行本文所描述的或以其他方式设想的特定方法中的任何特定方法的其他部件/试剂。例如(但不作为限制)，该试剂盒可以另外包括：(i)用于在处置水凝胶组合物和/或其上的换能器阵列之前准备皮肤的部件(例如剃刀、清洁组合物或擦拭物/毛巾等)；(ii)用于移除凝胶/换能器阵列的部件；(iii)用于在移除凝胶/换能器阵列之后清洁皮肤的部件；和/或(iv)与该系统一起使用的其他部件(即，导电材料、非导电材料、润肤凝胶或乳膏、绷带等)。这些另外的部件/试剂的性质将取决于具体的治疗形式，并且其鉴定完全在本领域普通技术人员的技能范围内；因此，不需要对其进一步描述。此外，试剂盒中存在的部件/试剂可以各自位于单独的容器/隔室中，或者各种部件/试剂可以组合位于一个或多个容器/隔室中，这取决于部件/试剂的无菌性、交叉反应性和稳定性。

试剂盒可以放置在允许其中存在的部件根据本公开起作用的任何包装中。在某些非限制性实施方案中，试剂盒还包括密封包装，其中放置了部件。在某些特定(但非限制性)实施方案中，密封包装基本上不透气和/或基本上不透光。

此外，试剂盒可以进一步包括解释如何使用试剂盒的一个或多个部件的一套书面说明书。这种性质的试剂盒可以用于本文所描述的或以其他方式设想的方法中的任何方法中。

在某些非限制性实施方案中，该试剂盒具有至少约6个月，诸如(但不限于)至少约9个月或至少约12个月的保质期。

本公开的某些非限制性实施方案涉及系统，该系统包括本文所公开的或以其他方式设想的交变电场产生系统的部件中的任何部件(诸如但不限于一个或多个换能器阵列和/或一种或多种水凝胶组合物，如以下各项中所公开：美国专利第7,016,725号；第7,089,054号；第7,333,852号；第7,565,205号；第8,244,345号；第8,715,203号；第8,764,675号；第10,188,851号；第10,441,776号；以及美国专利申请第US 2018/0160933号、第US2019/0117956号、第US2019/0307781号和第US2019/0308016号)，该任何部件与包括本文所公开的或以其他方式设想的至少一种CAR免疫细胞的组合物中的任何组合物中的至少一种组合物进行组合。该系统可以任选地进一步包括本文所公开的或以其他方式设想的任选组合物中的任何任选组合物中的一种或多种任选组合物。该系统可以任选地进一步包括在一个或多个附加疗法步骤中使用的一个或多个装置(或装置的一个或多个部件)。

实施例

下文提供实施例。然而，本公开应理解为在其应用中不限于下文公开的具体实验、结果和实验室程序。相反，实施例仅作为各种实施方案之一提供，并且是示例性的，而非穷举性的。

实施例1

从用TTFields处理的小鼠得到的血清与从用假热处理的小鼠得到的血清与细胞因子阵列膜共同孵育并且相互比较。如图1所示，这些实验表明：(1)在乳腺癌小鼠模型中，TTFields治疗后CXCL9升高；(2)在卵巢癌小鼠模型中，TTFields治疗后CXCL9、CCL5和IL-15升高；以及(3)在小细胞肺癌小鼠模型中，TTFields治疗后CXCL9、CCL5和IL-15升高并且TTFields治疗后CXCL10部分升高。这些结果指示用TTFields处理的肿瘤有可能分泌更高水平的细胞因子，以吸引细胞毒性T细胞到肿瘤部位。

然后，(使用肿瘤裂解物、RNA样本和/或组织病理学)直接对肿瘤进行分析，以检测在血清中发现的且与T细胞吸引相关的趋化因子(即，CXCL9、CXCL10、CCL5、IL-15等)。确定TTFields治疗提高了这些趋化因子的表达。

此外，牢固粘附至肿瘤是实现外渗所必需的。内皮细胞上VCAM-1和ICAM-1表达的提高分别与T细胞上的VLA-4和LFA-1结合，以对该T细胞进入肿瘤的募集进行介导(Tantalo等人，癌症免疫治疗杂志(2021)，第9卷：e002555)。因此，对已经用TTFields处理的肿瘤组织使用针对黏附分子(支持T细胞在内皮细胞(CD31)上减速和黏附的P/E选择素和VCAM-1/ICAM-1)的抗体进行染色，并且将所得结果与热处理后的对照肿瘤样本进行比较。在经TTFields处理的肿瘤样本中观察到VCAM-1和ICAM-1表达提高，并且CD31染色指示内皮细胞上是否存在更多VCAM-1，而内皮细胞上VCAM-1增多则指示T细胞募集增强。

实施例2

本实施例涉及同时使用TTFields与过继转移的CAR免疫细胞，以提高这些癌症疗法的疗效并且提供与任一单一治疗相比改善且协同的效果。

通过将装置(泽西岛圣赫利尔的Novocure有限公司(NovocureLimited,St.Helier,Jersey))应用于受试者的皮肤，将一对阵列放置在肿瘤的左右(LR)和/或肿瘤的前后(AP)，从而用TTFields治疗人类受试者。然后，每名受试者用TTFields以150kHz至200kHz进行长期治疗；在至少约80％的时间佩戴该装置，其中在疗程之间稍微休息并且稍微调整阵列的放置，以允许细胞和皮肤恢复。

制备包含CAR免疫细胞(诸如但不限于CAR-T细胞)的组合物。在一种情况下，免疫细胞在TTFields暴露之前从受试者获得。另选地，免疫细胞从同种异体来源获得。在又一实施例，多能干细胞从自体或同种异体来源获得并且在体外分化为免疫细胞。然后，修饰该免疫细胞以表达CAR。然后，在过继性细胞转移疗法的植入/注射之前培养自体或同种异体CAR免疫细胞。

在开始施加TTFields后两周，约10亿至100亿个CAR免疫细胞按约每周1次至3次的频率被植入或注射到人类受试者体内，持续6周至8周。

在同时疗法治疗之后，评估所述同时疗法对肿瘤的效果。

TTFields与CAR免疫细胞疗法的组合提供改善且协同的抗肿瘤效果。

本发明构思的非限制性例示性实施方案

例示性实施方案1：一种降低癌细胞存活力的方法，所述方法包括以下步骤：(1)向所述癌细胞施加交变电场持续一段时间；以及(2)向所述癌细胞施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。所述方法可以是一种体外方法或一种体内方法。

例示性实施方案2：一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括以下步骤：(1)向所述受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

例示性实施方案3：一种减小肿瘤体积以及/或者预防所述肿瘤体积增大的方法，其中所述肿瘤存在于活体受试者身体中并且包括多个癌细胞，所述方法包括以下步骤：(1)向所述受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

例示性实施方案4：一种方法，所述方法包括以下步骤：(1)向所述受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞；并且其中当与在未施加交变电场的情况下向所述受试者施用至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞相比，所述交变电场的施用提高所述至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞对所述受试者中的癌细胞的细胞毒性。

例示性实施方案5：根据例示性实施方案1至4中任一项所述的方法，其中以下各项中的至少一项：所述交变电场以约50kHz至约1MHz的范围内的频率施加；所述交变电场在所述癌细胞/目标区域的至少一部分中具有至少约1V/cm的电场强度；所述交变电场由至少50VRMS或至少50Vp2p的施加电压诱导；以及施加所述交变电场的所述一段时间为至少约连续24小时的时间段的至少约50％。

例示性实施方案6：根据例示性实施方案1至5中任一项所述的方法，其中向所述癌细胞/目标区域施加所述交变电场持续一段时间，所述一段时间足以使得所述癌细胞中至少一种趋化因子的表达相较于未暴露于交变电场的对照癌细胞得以提高。

例示性实施方案7：根据例示性实施方案6所述的方法，其中所述趋化因子选自由以下各项组成的组：CXCL9、CXCL10、CCL5和IL-15。

例示性实施方案8：根据例示性实施方案1至7中任一项所述的方法，其中所述至少一种CAR免疫细胞选自由以下各项组成的组：CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR巨噬细胞和它们的组合。

例示性实施方案9：根据例示性实施方案1至8中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包括胞外抗原结合域、铰链区或间隔区、跨膜部分和包括至少一个信号传导域的胞内结构域。

例示性实施方案10：根据例示性实施方案1至9中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包括识别肿瘤相关抗原(TAA)的胞外抗原结合域。

例示性实施方案11：根据例示性实施方案10所述的方法，其中所述至少一种TAA选自由以下各项组成的组：癌胚抗原(CEA)、表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素(MSLN)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、黏蛋白1(MUC1)、酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、程序性死亡配体1(PD-L1)和CD80/CD86。

例示性实施方案12：根据例示性实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述CAR免疫细胞表达淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和极迟抗原-4(VLA-4)中的至少一者。

例示性实施方案13：根据例示性实施方案1至12中任一项所述的方法，其中所述组合物进一步包括至少一种物质，所述至少一种物质选自由以下各项组成的组：免疫检查点抑制剂、类固醇(诸如但不限于地塞米松(dexamethasone))、托珠单抗(tocilizumab)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-1R、IL-2、IL-11、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、多西他赛(Docetaxel)和它们的组合。

例示性实施方案14：根据例示性实施方案1至13中任一项所述的方法，其中所述组合物进一步包括至少一种物质，所述至少一种物质选自由以下各项组成的组：抗PD-1治疗剂、抗PD-L1治疗剂、化疗剂、紫杉醇(Paclitaxel)、异环磷酰胺(Ifosamide)、依托泊苷(Etoposide)、吉西他滨(Gemcitabine)、洛莫司汀(Lomustine)、纳米白蛋白结合型紫杉醇(nabPaclitaxel)、替莫唑胺(temozolomide)、卡铂(Carboplatin)、TKI抑制剂、mTOR抑制剂、Akt抑制剂、PI3K抑制剂、PARP抑制剂、FGF抑制剂、抗LAB3药剂、抗CTLA-4治疗剂、芳香化酶抑制剂、地诺单抗(Denosumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、利利鲁单抗(lirilumab)、莫纳利珠单抗(monalizumab))和它们的组合。

例示性实施方案15：根据例示性实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤：(3)向所述癌细胞/受试者施用至少一种附加组合物，其中所述至少一种附加组合物包括某种物质，所述物质选自由以下各项组成的组：免疫检查点抑制剂、类固醇(诸如但不限于地塞米松(dexamethasone))、托珠单抗(tocilizumab)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-1R、IL-2、IL-11、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、多西他赛(Docetaxel)和它们的组合。

例示性实施方案16：根据例示性实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤：(3)向所述癌细胞施用至少一种附加组合物，其中所述至少一种附加组合物包括某种物质，所述物质选自由以下各项组成的组：抗PD-1治疗剂、抗PD-L1治疗剂、化疗剂、紫杉醇(Paclitaxel)、多西他赛(Docetaxel)、异环磷酰胺(Ifosamide)、依托泊苷(Etoposide)、吉西他滨(Gemcitabine)、洛莫司汀(Lomustine)、纳米白蛋白结合型紫杉醇(nabPaclitaxel)、替莫唑胺(temozolomide)、卡铂(Carboplatin)、TKI抑制剂、mTOR抑制剂、Akt抑制剂、PI3K抑制剂、PARP抑制剂、FGF抑制剂、抗LAB3药剂、抗CTLA-4治疗剂、芳香化酶抑制剂、地诺单抗(Denosumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、利利鲁单抗(lirilumab)、莫纳利珠单抗(monalizumab))和它们的组合。

例示性实施方案17：根据例示性实施方案1至16中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)基本上同时执行。

例示性实施方案18：根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)全部或部分按顺序执行，并且其中在开始施加所述交变电场之后施用所述至少一种组合物。

例示性实施方案19：根据例示性实施方案18所述的方法，其中在施加所述交变电场的所述一段时间过去之前施用所述至少一种组合物。

例示性实施方案20：根据例示性实施方案18所述的方法，其中在所述一段时间过去之后施用所述至少一种组合物。

例示性实施方案21：根据例示性实施方案1至20中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)重复一次或多次。

例示性实施方案22：根据例示性实施方案1至21中任一项所述的方法，其中所述癌细胞呈至少一种实体瘤的形式。

例示性实施方案23：根据例示性实施方案1至22中任一项所述的方法，其中所述癌细胞选自由以下各项组成的组：肝细胞癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、胸膜间皮瘤细胞、分化型甲状腺癌细胞、晚期肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞和它们的组合。

例示性实施方案24：一种用于降低癌细胞存活力的试剂盒，所述试剂盒包括：用于通过以下方式制备包含嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞的组合物的部件：从受试者或同种异体供体中分离至少一种免疫细胞或其前体；修饰所述至少一种免疫细胞以表达所述嵌合抗原受体；以及培养所述至少一种CAR免疫细胞，所述试剂盒任选地进一步包括电场产生装置，所述电场产生装置被配置为向所述癌细胞施加交变电场持续一段时间。

虽然所附公开内容结合下文所阐述的具体实验、结果和语言描述了本发明构思，但显然许多替代方案、修改和变化对于本领域技术人员是显而易见的。因此，本公开旨在涵盖落入本公开的精神和广泛范围内的所有此类替代方案、修改和变化。

Claims (29)

1.一种包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞的组合物，所述组合物用于在一种治疗受试者中的癌症的方法中使用，所述方法包括以下步骤：

(1)向所述受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及

(2)向所述受试者施用所述组合物。

2.一种用于在一种治疗受试者中的癌症的方法中使用的趋化因子，所述方法包括：

(1)通过向所述受试者的包含所述受试者中的癌细胞的目标区域施加交变电场使所述趋化因子由所述癌细胞表达；

(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

3.一种治疗受试者中的癌症的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)向所述受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及

(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种CAR免疫细胞。

4.根据权利要求1所述的用于使用的组合物，根据权利要求2所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3所述的方法，其中以下各项中的至少一项：

所述交变电场以约50kHz至约1MHz的范围内的频率施加；

所述交变电场在所述受试者的所述目标区域的至少一部分中具有至少约1V/cm的电场强度；

所述交变电场由至少50Vp2p的施加电压诱导；以及

施加所述交变电场的所述一段时间为至少约连续24小时的时间段的至少约50％。

5.根据权利要求1或4所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3或4所述的方法，其中所述一段时间足以使得所述交变电场的所述施加令所述受试者中的癌细胞中至少一种趋化因子的表达相较于未暴露于交变电场的对照癌细胞得以提高。

6.根据权利要求1、4或5中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2、4或5中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种CAR免疫细胞选自由以下各项组成的组：CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR巨噬细胞和它们的组合。

7.根据权利要求1或4至6中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至6中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包括识别肿瘤相关抗原(TAA)的胞外抗原结合域。

8.根据权利要求7所述的用于使用的组合物、用于使用的趋化因子或方法，其中所述至少一种TAA选自由以下各项组成的组：癌胚抗原(CEA)、表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素(MSLN)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、黏蛋白1(MUC1)、酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、程序性死亡配体1(PD-L1)和CD80/CD86。

9.根据权利要求1或4至8中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至8中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)基本上同时执行。

10.根据权利要求1或4至8中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至8中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)全部或部分按顺序执行，并且其中在开始施加所述交变电场之后施用所述至少一种组合物。

11.根据权利要求1或4至10中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至10中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至10中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)重复一次或多次。

12.根据权利要求1或4至11中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至11中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至11中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。

13.根据权利要求1或4至12中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至12中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至12中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下各项组成的组：肝细胞癌、胶质母细胞瘤、胸膜间皮瘤、分化型甲状腺癌、晚期肾细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌和它们的组合。

14.根据权利要求1或4至13中任一项所述的用于使用的组合物，根据权利要求2或4至13中任一项所述的用于使用的趋化因子或者根据权利要求3至13中任一项所述的方法，其中所述方法被进一步定义为一种降低癌细胞存活力以及/或者减小肿瘤体积以及/或者预防所述肿瘤体积增大的方法，其中在所述方法涉及减小所述肿瘤体积时，所述肿瘤存在于所述受试者身体中并且包括多个癌细胞，其中在所述方法涉及预防所述肿瘤体积增大时，所述肿瘤存在于所述受试者身体中并且包括多个癌细胞。

15.一种用于降低癌细胞存活力的试剂盒，所述试剂盒包括：

至少一种组合物，所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞；和

电场产生装置，所述电场产生装置被配置为向所述癌细胞施加交变电场持续一段时间。

16.一种降低癌细胞存活力的体外方法，所述方法包括以下步骤：

(1)向所述癌细胞施加交变电场持续一段时间；以及

(2)向所述癌细胞施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

17.一种降低癌细胞存活力的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)向所述癌细胞施加交变电场持续一段时间；以及

(2)向所述癌细胞施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中以下各项中的至少一项：

所述交变电场以约50kHz至约1MHz的范围内的频率施加；

所述交变电场在所述癌细胞的至少一部分中具有至少约1V/cm的电场强度；

所述交变电场由至少50Vp2p的施加电压诱导；以及

施加所述交变电场的所述一段时间为至少约连续24小时的时间段的至少约50％。

19.根据权利要求15所述的试剂盒，其中以下各项中的至少一项：

所述电场产生装置被配置为以约50kHz至约1MHz的范围内的频率向所述癌细胞施加所述交变电场；

所述电场产生装置被配置为以所述癌细胞的至少一部分中的至少约1V/cm的电场强度向所述癌细胞施加所述交变电场；

所述电场产生装置被配置为通过向一个或多个电极施加至少50V p2p的施加电压以诱导所述交变电场来向所述癌细胞施加所述交变电场；以及

所述一段时间为至少约连续24小时的时间段的至少约50％。

20.根据权利要求15或19所述的试剂盒或者根据权利要求16至18中任一项所述的方法，其中所述一段时间足以使得所述交变电场的所述施加令所述癌细胞中至少一种趋化因子的表达相较于未暴露于交变电场的对照癌细胞得以提高。

21.根据权利要求15、19或20中任一项所述的试剂盒或者根据权利要求16至18或20中任一项所述的方法，其中所述至少一种CAR免疫细胞选自由以下各项组成的组：CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR巨噬细胞和它们的组合。

22.根据权利要求15或19至21中任一项所述的试剂盒或者根据权利要求16至18、20或21中任一项所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包括识别肿瘤相关抗原(TAA)的胞外抗原结合域。

23.根据权利要求22所述的试剂盒或方法，其中所述至少一种TAA选自由以下各项组成的组：癌胚抗原(CEA)、表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素(MSLN)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、黏蛋白1(MUC1)、酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、程序性死亡配体1(PD-L1)和CD80/CD86。

24.根据权利要求16至18或20至23中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)基本上同时执行。

25.根据权利要求16至18或20至23中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)全部或部分按顺序执行，并且其中在开始施加所述交变电场之后施用所述至少一种组合物。

26.根据权利要求16至18或20至25中任一项所述的方法，其中步骤(1)和(2)重复一次或多次。

27.根据权利要求15或19至23中任一项所述的试剂盒或者根据权利要求16至18或20至26中任一项所述的方法，其中所述癌细胞选自由以下各项组成的组：肝细胞癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、胸膜间皮瘤细胞、分化型甲状腺癌细胞、晚期肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞和它们的组合。

28.根据权利要求15、19至23或27中任一项所述的试剂盒或者根据权利要求16至18或20至27中任一项所述的方法，其中所述癌细胞是实体瘤的细胞。

29.一种方法，所述方法包括以下步骤：

(1)向受试者的目标区域施加交变电场持续一段时间；以及

(2)向所述受试者施用至少一种组合物，其中所述至少一种组合物包括至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞；以及

其中当与在未施加交变电场的情况下向所述受试者施用至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞相比，所述交变电场的施用提高所述至少一种嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞对所述受试者中的癌细胞的细胞毒性。