CN120857945A - 用于在血压下降的危重病患者中保护心肌和预防心肌损伤的dpp3抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

Description

用于在血压下降的危重病患者中保护心肌和预防心肌损伤的 DPP3抑制剂

技术领域

本发明的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

背景技术

二肽基肽酶3（也被称为二肽基氨基肽酶III、二肽基芳基酰胺酶III、二肽基肽酶III、脑啡肽酶B或红细胞血管紧张肽酶；简称：DPP3、DPPIII）是一种金属肽酶，其从生理活性肽例如脑啡肽和血管紧张肽中去除二肽。Ellis和Nuenke于1967年在纯化的牛垂体前叶的提取物中鉴定到DPP3并测量了其活性。所述酶被列为EC 3.4.14.4，具有约83 kDa的分子质量，并在原核生物和真核生物中高度保守（Prajapati & Chauhan 2011）。人变体的氨基酸序列被描绘在SEQ ID NO. 1中。DPP3是一种遍在表达的主要在胞质溶胶中的肽酶。尽管缺乏信号序列，但几项研究报告了膜活性（Lee & Snyder 1982）。

DPP3是一种属于肽酶家族M49的锌依赖性外肽酶。它对各种组成的3/4个至10个氨基酸的寡肽具有广泛的底物特异性，并且也能够在脯氨酸之后切割。已知DPP3从其底物的N-端水解二肽，所述底物包括血管紧张肽II、III和IV、Leu-和Met-脑啡肽、内吗啡肽1和2。所述金属肽酶DPP3在pH 8.0-9.0下具有最佳活性，并且可以通过添加二价金属离子如Co²⁺和Mg²⁺来激活。

DPP3的结构分析揭示了催化基序HELLGH（人DPP3 [hDPP3] 450-455）和EECRAE（hDPP3 507-512），以及对底物结合和水解重要的下述氨基酸：Glu316、Tyr318、Asp366、Asn391、Asn394、His568、Arg572、Arg577、Lys666和Arg669（Prajapati & Chauhan 2011；Kumar等，2016；编号指称人DPP3的序列，参见SEQ ID NO. 1）。考虑到参与底物结合和水解的所有已知氨基酸或序列区域，人DPP3的活性位点可以被定义为第316位和第669位氨基酸之间的区域。

DPP3最突出的底物是血管紧张肽II（Ang II），它是肾素-血管紧张肽系统（RAS）的主要效应物。所述RAS在心血管疾病（Dostal等，1997. J Mol Cell Cardiol;29: 2893–902；Roks等，1997. Heart Vessels. Suppl 12:119–24）、脓毒症和脓毒性休克（Corrêa等，2015. Crit Care 19: 98）中被激活。特别是Ang II，已被显示调节许多心血管功能，包括血压控制和心脏重塑。

最近，产生、表征和验证了两种测定法，用于特异性检测人类体液（例如血液、血浆、血清）中的DPP3：检测DPP3蛋白浓度的发光免疫测定法（LIA）和检测特异性DPP3活性的酶捕获活性测定法（ECA）（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943-953）。在进行DPP3活性的实际检测之前，洗涤步骤去除所有干扰物质。这两种方法都是高度特异的，允许可重复地检测血液样品中的DPP3。

已显示，在脓毒性、心源性和血管扩张性休克患者中循环DPP3水平升高（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943-953）。此外，它与心源性休克患者中短期死亡和严重器官功能障碍的风险增加有关（Deaniau等，2020. Eur J Heart Fail. 22(2):290-299）。此外，在严重脓毒症或脓毒性休克患者中显示，初始cDPP3越高，入院后对器官支持和血管加压药的需求就越大，对血管加压药、机械通气或肾脏替代疗法（RRT）的需求时间越长，对液体加载的需求也就越高（Blet等，2021. Crit Care 25: 61）。

WO2017/182561描述了用于确定患者样品中活性DPP3的总量的方法，用于诊断与坏死过程相关的疾病。它进一步描述了一种通过针对DPP3的抗体治疗坏死相关疾病的方法。

WO2019/081595描述了针对并结合特定DPP3表位的DPP3结合剂及其在预防或治疗与氧化应激相关的疾病中的用途。

WO2021/185786描述了用于确定患者样品中的DPP3的方法，用于感染冠状病毒的患者的诊断、风险预测、预后和监测。它进一步描述了一种用于被感染患者的疗法或干预的DPP3活性抑制剂。

Procizumab是一种特异性结合循环DPP3的人源化单克隆IgG1抗体，靶向并调节DPP3活性这种心血管功能的重要调控物。它的作用方式与伴有大量细胞死亡和细胞内DPP3不受控制地释放到血液中的急性疾病有关。易位的DPP3在循环中保持活性，在那里它以不受控制的方式切割生物活性肽。Procizumab能够阻断循环DPP3，抑制血流中生物活性肽的降解。这种阻断导致心血管和肾功能的稳定，并降低短期死亡率。Procizumab在心血管衰竭动物模型中的临床前研究显示出令人印象深刻且即时的疗效。在几种临床前心血管衰竭模型中，已显示Procizumab使射血分数和肾功能正常化，并降低死亡率。

本发明说明书中的实例显示，在患有脓毒性休克的猪中注射Procizumab预防了心肌损伤（分别由心肌IL-6和肌钙蛋白的增加给出）。此外已经证明，在血压下降的患者中，特别是在休克（例如脓毒性休克、心源性休克）和急性冠状动脉综合征（ACS）中，DPP3显著升高。因此，有理由推断，无论适应症如何，DPP3抑制剂、尤其是Procizumab，都能够在血压下降的患者中预防心肌损伤。

因此，本发明的令人惊讶的发现是，DPP3活性抑制剂适用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

发明内容

本发明的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

DPP3水平

本发明的主题内容是一种用作血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述患者正具有高于预定阈值的DPP3水平。

在本发明的一个实施方式中，测定DPP3蛋白的水平和/或活性DPP3的水平，并将其与预定阈值水平进行比较。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中当通过不同方法（例如免疫测定法、活性测定法、质谱法等）测定时，所述患者在所述受试者的体液样品中具有高于预定阈值的DPP3水平。

DPP3活性可以通过检测DPP3特异性底物的切割产物来测量。已知的肽激素底物包括Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、内吗啡肽1和2、valorphin、β-酪啡肽、强啡肽、原肠肽、ACTH（促肾上腺皮质激素）和MSH（黑素细胞刺激激素；Abramić等，2000；Baršun等，2007；Dhanda等， 2008）。所述肽激素以及其他未标记寡肽（例如Ala-Ala-Ala-Ala，Dhanda等，2008）的切割可以通过检测相应的切割产物来监测。检测方法包括但不限于HPLC分析（例如Lee & Snyder 1982）、质谱术（例如Abramić等，2000）、H1-NMR分析（例如Vandenberg等，1985）、毛细管区带电泳（CE；例如Baršun等，2007）、薄层色谱法（例如Dhanda等，2008）或反相色谱法（例如Mazocco等，2006）。

检测由DPP3对产荧光底物的水解产生的荧光是监测DPP3活性的标准程序。这些底物是与荧光团偶联的特异性二肽或三肽（Arg-Arg、Ala-Ala、Ala-Arg、Ala-Phe、Asp-Arg、Gly-Ala、Gly-Arg、Gly-Phe、Leu-Ala、Leu-Gly、Lys-Ala、Phe-Arg、Suc-Ala-Ala-Phe）。荧光团包括但不限于β-萘酰胺（2-萘酰胺、βNA、2NA）、4-甲氧基-β-萘酰胺（4-甲氧基-2-萘酰胺）和7-酰胺基-4-甲基香豆素（AMC、MCA；Abramić等，2000；Ohkubo等，1999）。这些产荧光底物的切割分别导致荧光β-萘胺或7-氨基-4-甲基香豆素的释放。在液相测定法中，将ECA底物和DPP3在例如96孔板形式中温育，并使用荧光检测器测量荧光（Ellis & Nuenke 1967）。此外，可以将携带DPP3的样品通过电泳在凝胶上固定和分离，将凝胶用产荧光底物（例如Arg-Arg-βNA）和Fast Garnet GBC染色，并通过荧光读取器检测荧光蛋白条带（Ohkubo等， 1999）。可以将同样的肽（Arg-Arg、Ala-Ala、Ala-Arg、Ala-Phe、Asp-Arg、Gly-Ala、Gly-Arg、Gly-Phe、Leu-Ala、Leu-Gly、Lys-Ala、Phe-Arg、Suc-Ala-Ala-Phe）与发色团例如对硝基苯胺二乙酸酯偶联。检测由发色底物的水解引起的颜色变化可用于监测DPP3活性。

检测DPP3活性的另一种选项是Protease-Glo^TM测定法（可以从Promega商购）。在所述方法的这个实施方式中，将DPP3特异性二肽或三肽（Arg-Arg、Ala-Ala、Ala-Arg、Ala-Phe、Asp-Arg、Gly-Ala、Gly-Arg、Gly-Phe、Leu-Ala、Leu-Gly、Lys-Ala、Phe-Arg、Suc-Ala-Ala-Phe）与氨基萤光素偶联。在用DPP3切割后，氨基萤光素被释放出来，并用作偶联萤光素酶反应的底物，所述反应发出可检测的发光。

在一个优选实施方式中，DPP3活性通过添加产荧光底物Arg-Arg-βNA并实时监测荧光来测量。

在本发明的另一个实施方式中，所述DPP3水平通过将所述体液样品与特异性结合DPP3的捕获结合剂接触来确定。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述用于确定DPP3水平的捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。

在本发明的一个特定实施方式中，所述用于确定DPP3水平的捕获结合剂是抗体。

本发明的另一个特定实施方式包括使用特异性结合全长DPP3的捕获结合剂。

在本发明的另一个优选实施方式中，将所述捕获结合剂固定在固相上。

将测试样品通过固定的结合剂，并且DPP3（如果存在于所述样品中）与所述结合剂结合并自身被固定，以备检测。然后可以添加底物，并可以检测反应产物以指示测试样品中DPP3的存在或量。或者，用特异性结合DPP3的第二捕获分子检测结合到固相上的所述捕获分子的DPP3。

出于本说明书的目的，术语“固相”可用于包括可以在其中或其上进行测定的任何材料或容器，包括但不限于多孔材料、无孔材料、试管、孔、载玻片、琼脂糖树脂（例如来自GEHealthcare Life Sciences的Sepharose）、磁性粒子（例如来自Thermo FisherScientific的Dynabeads^TM或Pierce^TM磁珠）等。

在本发明的一个实施方式中，用于确定所述受试者体液样品中的DPP3活性的方法包括下述步骤：

● 将所述样品与特异性结合全长DPP3的捕获结合剂接触，

● 分离与所述捕获结合剂结合的DPP3，

● 向所述分离的DPP3添加DPP3底物，

● 通过测量和量化DPP3底物的转化来量化所述DPP3活性。

在本发明的另一个实施方式中，所述分离步骤是洗涤步骤，其从所述捕获的DPP3中去除所述样品的未与所述捕获结合剂结合的成分。

在本发明的另一个实施方式中，所述DPP3底物转化通过选自包含下述的组的方法检测：产荧光底物（例如Arg-Arg-βNA、Arg-Arg-AMC）的荧光、发色底物的颜色变化、与氨基萤光素偶联的底物的发光、质谱、HPLC/FPLC（反相色谱、尺寸排阻色谱）、薄层色谱、毛细管区带电泳、凝胶电泳和随后的活性染色（固定化、活性DPP3）或western印迹（切割产物）。

在本发明的另一个实施方式中，所述底物可以选自包含下述的组：血管紧张肽II、III和IV、Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、内吗啡肽1和2、valorphin、β-酪啡肽、强啡肽、原肠肽、ACTH和MSH，或与荧光团、发色团或氨基萤光素偶联的二肽，其中所述二肽是Arg-Arg。

在本发明的另一个特定实施方式中，所述底物可以选自包含下述的组：与荧光团、发色团或氨基萤光素偶联的二肽，其中所述二肽是Arg-Arg。

在一个特定实施方式中，所述结合剂对DPP3表现出至少10⁷ M^-1、优选地10⁸ M^-1的结合亲和力，更优选的亲和力大于10⁹ M^-1，最优选大于10¹⁰ M^-1。本领域技术人员知道，可以考虑通过应用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且这种措施不会超出本发明的范围。

为了确定抗体对DPP3的亲和力，使用Biacore 2000系统（GE Healthcare EuropeGmbH，Freiburg，Germany），利用无标记表面等离子体共振来测定DPP3与固定化抗体的结合动力学。抗体的可逆固定化根据制造商的说明（小鼠抗体捕获试剂盒；GE Healthcare），使用以高密度共价偶联到CM5传感器表面的抗小鼠Fc抗体来进行（Lorenz等，2011.Antimicrob Agents Chemother. 55(1): 165–173）。

在一个实施方式中，这种用于确定DPP3水平的测定法是使用任何类型的检测技术的夹心免疫测定法，所述检测技术包括但不限于酶标记、化学发光标记、电化学发光标记，优选为全自动测定法。在诊断方法的一个实施方式中，这种测定法是酶标记夹心测定法。自动或全自动测定法的实例包括可用于下述系统之一的测定法：Roche Elecsys®、AbbottArchitect®、Siemens Centauer®、Brahms Kryptor®、BiomerieuxVidas®、AlereTriage®。

各种免疫测定法是已知的，并可用于本发明的测定和方法，它们包括：质谱法（MS）、发光免疫测定法（LIA）、放射免疫测定法（“RIA”）、均相酶倍增免疫测定法（“EMIT”）、酶联免疫吸附测定法（“ELISA”）、脱辅基酶再激活免疫测定法（“ARIS”）、基于发光的珠子阵列、基于磁珠的阵列、蛋白质微阵列测定法、快速测试格式例如试纸条免疫测定法、免疫色谱条测试、稀土穴合物测定法和自动化系统/分析仪。

在本发明的一个实施方式中，它可以是所谓的POC（护理点）测试，这是一种测试技术，允许在患者附近在不到1小时内进行测试，而不需要全自动测定系统。该技术的一个实例是免疫层析测试技术，例如微流体装置。

在一个特定实施方式中，在所述夹心免疫测定法中标记所述两种结合剂中的至少一种，以便检测。

在另一个优选实施方式中，所述标记选自包含下述的组：化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。

所述测定法可以是均相或非均相测定法、竞争和非竞争测定法。在一个实施方式中，所述测定法采用夹心测定法的形式，这是一种非竞争免疫测定法，其中将待检测和/或定量的分子与第一抗体并与第二抗体结合。所述第一抗体可以被结合到固相，例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或条，并且所述第二抗体是例如用染料、放射性同位素或反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过适当的方法测量与分析物结合的标记抗体的量。涉及“夹心测定法”的一般组成和程序是确立已久的，并为专业技术人员所知（《免疫测定法手 册》（The Immunoassay Handbook），David Wild主编，Elsevier LTD, Oxford；第3版，（May 2005）, ISBN-13: 978-0080445267；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb;10 (1):4-10. PMID: 16376134）。

在另一个实施方式中，所述测定法包括均以分散体形式存在于液体反应混合物中的两种捕获分子，优选为抗体，其中第一标记组分被附连到所述第一捕获分子，其中所述第一标记组份是基于荧光或化学发光-淬灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组分被附连到所述第二捕获分子，使得在两种捕获分子与分析物结合后产生可测量的信号，允许检测在包含所述样品的溶液中形成的夹心复合物。

在另一个实施方式中，所述标记系统包括与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型染料相组合的稀土穴合物或稀土螯合物。

在本发明的背景下，基于荧光的测定法包括使用染料，所述染料可以例如选自包含下述的组：FAM（5-或6-羧基荧光素）、VIC、NED、荧光素、荧光素异硫氰酸酯（FITC）、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、呫吨、6-羧基-2’,4’,7’,4,7-六氯荧光素（HEX）、TET、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素（JOE）、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基罗丹明（TAMRA）、6-羧基-X-罗丹明（ROX）、5-羧基罗丹明-6G（R6G5）、6-羧基罗丹明-6G（RG6）、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素类例如伞形酮、苯甲酰亚胺类例如Hoechst 33258、菲啶类例如得克萨斯红、亚基马黄、Alexa Fluor、PET、溴化乙锭、吖啶染料、咔唑染料、吩𫫇嗪染料、卟啉染料、聚甲炔染料等。

在本发明的背景下，基于化学发光的测定法包括使用基于在下述文献中为化学发光材料描述的物理原理的染料（Kirk-Othmer，《化学技术百科全书》（Encyclopedia ofchemical technology），第4版，执行编辑J. I. Kroschwitz；编辑M. Howe-Grant，JohnWiley & Sons, 1993, vol.15, p. 518-562，通过引用并入本文，包括第551-562页上的引文）。优选的化学发光染料是吖啶酯。

本文所提到的“测定法”或“诊断测定法”可以是在诊断领域中应用的任何类型。这种测定法可以基于待检测的分析物与一种或多种具有一定亲和力的捕获探针的结合。关于捕获分子与靶分子或感兴趣的分子之间的相互作用，亲和力常数优选地大于10⁸ M^-1。

本发明的主题内容是一种用作血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述受试者体液样品中所述DPP3水平的预定阈值在20至120 ng/mL之间，更优选地在30至80 ng/mL之间，甚至更优选地在40至60 ng/mL之间，最优选地所述阈值为50 ng/mL。

在一个特定实施方式中，使用测定法来确定DPP3水平，其中所述测定法的测定灵敏度能够量化健康受试者的DPP3，并且< 20 ng/ml，优选地< 30 ng/ml，更优选地< 40 ng/ml。

在一个特定实施方式中，根据本发明的体液是血液样品。血液样品可以选自包含全血、血清和血浆的组。在所述方法的一个特定实施方式中，所述样品选自包含人柠檬酸盐血浆、肝素血浆和EDTA血浆的组。

在本发明的另一个特定实施方式中，在不同时间点从所述患者获取的不同样品中确定所述DPP3水平。

在本发明的另一个特定实施方式中，确定在不同时间点从所述患者获取的不同样品中所述DPP3水平之间的差异。所述差异可以被确定为绝对或相对差异。

在本发明的一个特定实施方式中，所述DPP3水平被确定至少两次。

在本发明的另一个特定实施方式中，当在不同时间点从所述患者获取的不同样品中所述DPP3水平之间的所述相对差异为100%或以上、更优选地75%或以上、甚至更优选地50%或以上、最优选地25%或以上时，开始疗法。

在本发明的另一个特定实施方式中，DPP3水平的所述至少第二次测定在2小时内、优选地4小时内、更优选地6小时内、甚至更优选地12小时内、甚至更优选地24小时内、最优选地48小时内进行。

所述受试者体液样品中作为DPP3蛋白的量和/或DPP3活性的DPP3水平，可以例如通过下述方法之一来确定：

1. 用于定量DPP3蛋白浓度的发光免疫测定法（LIA）（Rehfeld等，2019 JALM 3 (6): 943-953）。

所述LIA是一步化学发光夹心免疫测定法，使用白色高结合性聚苯乙烯微量滴定板作为固相。这些板用单克隆抗DPP3抗体AK2555（捕获抗体）包被。示踪剂抗DPP3抗体AK2553用MA70-吖啶-NHS-酯标记，并以每孔20 ng的浓度使用。将20微升样品（例如源自于患者血液的血清、肝素血浆、柠檬酸盐血浆或EDTA血浆）和校准物吸取到包被的白色微量滴定板中。在添加示踪剂抗体AK2553后，将所述微量滴定板在室温和600 rpm下温育3 h。然后通过4个清洗步骤（每孔350 μL）除去未结合的示踪剂。使用微量滴定板发光计测量每个孔的剩余化学发光1s。DPP3的浓度使用6点校准曲线来确定。校准物和样品优选地运行两份平行样。

2. 用于定量DPP3活性的酶捕获活性测定法（ECA）（Rehfeld等，2019 JALM 3(6): 943-953）。

所述ECA是一种DPP3特异性活性测定法，使用黑色高结合性聚苯乙烯微量滴定板作为固相。这些板用单克隆抗DPP3抗体AK2555（捕获抗体）包被。将20微升样品（例如血清、肝素血浆、柠檬酸盐血浆、脑脊液和尿液）和校准物吸取到包被的黑色微量滴定板中。在添加测定缓冲液（200 μL）后，将所述微量滴定板在22℃和600 rpm下温育2 h。样品中存在的DPP3通过结合到所述捕获抗体而被固定。通过4个清洗步骤（每孔350 μL）除去未结合的样品组分。固定的DPP3的比活性通过在反应缓冲液中添加产荧光底物Arg-Arg-β-萘酰胺（Arg2-βNA），然后在37℃下温育1 h来测量。DPP3将Arg2-βNA特异性切割成Arg-Arg二肽和发荧光的β-萘胺。荧光使用荧光计，使用340 nm的激发波长来测量，并在410 nm处检测发射。DPP3的活性使用6点校准曲线来确定。校准物和样品优选地运行两份平行样。

3. 用于定量DPP3活性的液相测定法（LAA）（从Jones等，Analytical Biochemistry, 1982修改）。

所述LAA是一种液相测定法，其使用黑色非结合性聚苯乙烯微量滴定板来测量DPP3活性。将20微升样品（例如血清、肝素血浆、柠檬酸盐血浆）和校准物吸取到非结合性黑色微量滴定板中。在添加测定缓冲液（200 μL）中的产荧光底物Arg2-βNA后，在荧光计中使用340 nm的激发波长测量初始βNA荧光（T=0），并在410 nm处检测发射。然后将板在37℃下温育1小时。测量最终荧光（T=60）。计算最终和初始荧光之间的差。DPP3的活性使用6点校准曲线来确定。校准物和样品优选地运行两份平行样。

正如实施例中概述的，本发明的DPP3水平已用所描述的DPP3测定法测定（Rehfeld 等，2019. JALM 3(6): 943-953）。上述阈值的值在其他测定法中可能不同，如果它们与本发明中使用的测定法系统不同地进行校准的话。因此，上述截止值应相应地将校准差异考虑在内，适用于此类不同校准的测定法。量化校准差异的一种可能性是通过使用两种方法测量样品中的相应生物标志物（例如DPP3），将所讨论的测定法与本发明中使用的相应生物标记物测定法进行方法比较分析（相关性）。另一种可能性是，使用所讨论的测定法（鉴于该测试具有足够的分析灵敏度）确定代表性正常群体的生物标志物中位数水平，将结果与文献中描述的生物标志物中位数水平进行比较，并基于通过该比较获得的差异重新计算校准。使用本发明中使用的校准，已测量了来自5400名正常（健康）受试者的样品（瑞典单中心前瞻性群体研究（MPP-RES））：血浆DPP3的中位数（四分位距）为14.5 ng/ml（11.3 ng/ml –19 ng/ml）。

阈值水平可以例如从Kaplan-Meier分析获得，其中疾病的发生与群体中所述生物标志物的四分位数相关。根据该分析，生物标志物水平高于第75百分位数的受试者患根据本发明的疾病的风险显著增加。通过Cox回归分析并对经典风险因素进行充分调整，进一步支持了这一结果：与所有其他受试者相比，最高四分位数与患根据本发明的疾病的风险增加高度显著地相关。

其他优选的截止值是例如正常群体的第90、95或99百分位数。通过使用比第75百分位数更高的百分位数，可以减少鉴定的假阳性受试者的数量，但可能错过鉴定风险为中度（尽管仍然增加）的受试者。因此，人们可以根据是否认为以也鉴定“假阳性”为代价来鉴定大多数有风险的受试者更加合适，或者是否认为以遗漏几个中等风险受试者为代价来主要鉴定高风险受试者更加合适，来采用截止值。

适应症

本文所使用的术语“患者”是指正在接受医疗护理或因疾病而应接受医疗护理的活的人类或非人类生物体。这包括正接受病理征象检查的没有明确疾病的人。因此，本文描述的方法和测定法适用于人类和兽医疾病两者。

心肌损伤由心肌肌钙蛋白值升高到高于参考上限的第99百分位数来定义。具体而言，心肌损伤是心肌细胞和组织（例如心肌细胞、心肌成纤维细胞、平滑肌细胞或内皮细胞）的结构性损伤。

它被认为是诊断心肌梗死的先决条件，但本身也是一个实体，并可能源于非缺血性或非心脏病症（Thygesen等，2018，心肌梗死的第四个通用定义（Fourth Universal Definition of Myocardial Infarction），(2018). Eur Heart J. 40(3): 237-69； Chapman等，2016，临床实践中心肌损伤和梗死患者的评估和分类（Assessment and Classification of Patients with Myocardial Injury and Infarction in Clinical Practice），Heart 103(1): 10-8）。术语“心肌损伤”可能用于直接心脏损伤例如心脏挫伤的背景中，但也可能发生在各种其他临床情况下，例如心肌梗死、心肌炎症、脓毒症和医源性损伤。

具体而言，心肌损伤可能有以下原因：

- 原发性心肌缺血/心肌梗死（动脉粥样硬化斑块破裂伴血栓形成），

- 心肌氧供需不匹配（冠状动脉血管痉挛、微血管功能障碍、冠状动脉栓塞/微栓塞/夹层、持续缓慢性心律失常/快速性心律失常、低血容量性休克、呼吸衰竭/严重贫血、左心室肥大/肥厚型心肌病、严重高血压），

- 非缺血性心肌损伤（心力衰竭、心肌炎症/心肌炎、心肌病/Tako-tsubo心肌病、心脏挫伤、医源性（血运重建、心脏手术、消融、起搏、复律、除颤）、横纹肌溶解症

- 多因素和全身性原因（脓毒症/危重病、心脏毒性（药物）、浸润性疾病（心脏淀粉样变性、心脏结节病）、肺栓塞/肺动脉高压、急性或慢性肾病、中风/蛛网膜下腔出血）。

心肌损伤的推测机制包括直接心脏损伤伴心肌细胞损伤、过度壁应力导致的心肌应变以及心肌氧供需不匹配导致的心肌缺血。心肌损伤可能是不可逆的，并通常伴有心肌坏死或凋亡（Park等，2017，心肌肌钙蛋白：从心肌梗死到慢性疾病（Cardiac Troponins: From Myocardial Infarction to Chronic Disease），Cardiovasc Res. 113(14): 1708- 18）。

在本发明的上下文中，“血压”意指平均动脉压（MAP），即整个心动周期、收缩期和舒张期的平均动脉压。MAP受心输出量和全身血管阻力的影响，其中每一项都受到几个变量的影响。MAP是体内器官所见灌注压力的主要决定因素。目前的指南建议将危重病患者的MAP目标定为65 mm Hg或更高（Dellinger等，2012，在脓毒症战役中存活：严重脓毒症和脓 毒性休克管理的国际指南（Surviving sepsis campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock），Crit Care Med. 2013;41(2): 580–637；Peberdy等，2010，心脏骤停后护理：2010年美国心脏协会心肺复苏和紧急心血管 护理指南（Post-cardiac arrest care: 2010 American Heart Association Guidelines for cardiopulmonary resuscitation and emergency cardiovascular care）， Circulation 122(18 Suppl 3): S768–786）。

在一个实施方式中，血压下降是MAP < 65 mmHg，更优选地< 60 mmHg，甚至更优选地< 55 mmHg，最优选地< 50 mmHg。

在另一个实施方式中，所述血压下降是MAP降低至少5 mmHg，更优选地至少10mmHg，甚至更优选地至少15 mmHg，最优选地至少20 mmHg。

白细胞介素-6（IL-6）是一种重要的炎症介导物，对急性期感染和组织损伤做出响应分泌到循环系统中。IL-6表达受到严格调控，在健康个体中表达水平低。心肌细胞在缺氧和缺血应激下产生IL-6（Fuchs等，2003. FASEB J. 17(14): 2118–2120）。这激活了这些细胞中的JAK/STAT级联，以发挥负性肌力和细胞毒性。所述炎症反应介导中性粒细胞浸润和激活，触发其他细胞因子释放到血液中，共同刺激血管内皮并诱导心肌细胞表达ICAM-1，导致心肌纤维化和缺血/再灌注损伤（Gwechenberger等，1999. Circulation 99(4): 546– 551），因此加速了心肌损伤和功能障碍（Halawa等，1999. Pol. Arch. Med. Wewn 101(3): 197–203）。

肌钙蛋白是在骨骼肌和心肌细丝内的肌钙蛋白复合物中发现的结构蛋白。肌钙蛋白复合物由三个亚基（I、T和C）组成，与钙离子一起在肌肉收缩的调节中发挥重要作用（Kozinski等，2017. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 54(3): 143–172）。每种分子在肌肉收缩过程中都具有特定作用：肌钙蛋白T将肌钙蛋白复合物附着到肌动蛋白丝，肌钙蛋白C充当钙结合位点，肌钙蛋白I在没有足够钙离子存在下抑制与肌球蛋白头部的相互作用（Garg等，2017. Internal and Emergency Medicine 12(2): 147– 155）。肌钙蛋白T和I主要位于心肌中，因此被称为心肌肌钙蛋白（cTnI和cTnT）。人们普遍认为，这些生物标志物在识别心肌损伤方面具有最大的特异性（Chaulin 2021. Vascular Health and Risk Management 17: 299–316）。如果发现可检测的心肌肌钙蛋白浓度高于参考上限（URL）的第99百分位数，则确定心肌损伤（Thygesen等，2019. Eur. Heart J. 40: 237–269）。

心肌保护意指预防心肌损伤。

预防心肌损伤被定义为预防循环中心肌肌钙蛋白的增加。具体而言，预防心肌损伤被定义为预防心肌细胞和组织（例如心肌细胞、心肌成纤维细胞、平滑肌细胞或内皮细胞）的结构性损伤，其被定义为循环中心肌肌钙蛋白的增加。

在一个特定实施方式中，心肌损伤的特征在于心肌肌钙蛋白的血液水平高于阈值，促炎性白细胞介素-6（IL-6）的心肌表达增加和/或需要血管加压药（以维持血压和心输出量）。

所述心肌肌钙蛋白选自包含心肌肌钙蛋白T（cTnT）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）的组。肌钙蛋白可以用高灵敏度肌钙蛋白（hs-Tn）测定法来测量。心肌肌钙蛋白浓度的阈值是例如高于参考上限（URL）的第99百分位数（Thygesen等，2019. Eur. Heart J. 40: 237– 269）。

心肌肌钙蛋白值的升高被进一步定义为心脏高灵敏性肌钙蛋白I（hs-cTnI）或cTnT值的升高，其中至少有一个值高于参考上限的第99百分位数。参考限值是性别依赖性的（男性中的值高于女性）。此外，参考值取决于所使用的测定法（Sandoval等，2022Circulation 146: 569–581）——参见下表1。

专业技术人员将基于本领域中公知的常规考虑和活动，根据具体的测定条件容易地确定合适的阈值。

血管加压药增加血管收缩，从而导致全身血管阻力（SVR）增加。增加SVR导致平均动脉压（MAP）增加和器官灌注增加。血管加压药选自包含下述的组：异丙肾上腺素、多巴酚丁胺、多巴胺、苯肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、血管加压素或特利加压素。

需要血管加压药被定义为平均动脉压（MAP）低于65 mmHg。

所述患者是患有选自严重传染病、脓毒症、肺栓塞、肺动脉高压、急性冠状动脉综合征（包括不稳定型心绞痛、ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI））、任何类型的休克（包括心源性休克、脓毒性休克或过敏性休克）、心脏骤停、急性肝衰竭和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的疾病的危重病患者。

“危重病”意味着所述患者患有危及生命的急性疾病或急性病症，可能或即将死亡。在一个特定实施方式中，所述危重病患者是ICU患者。

所述传染病可能是细菌、病毒、真菌或寄生虫起源的传染病。所述病毒感染可以选自由流感病毒或冠状病毒引起的感染。

所述冠状病毒选自包含SARS-CoV-1、SARS-CoV-2、MERS-CoV的组，特别是SARS-CoV-2。冠状病毒在哺乳动物和鸟类中引起疾病。在人类中，所述病毒引起呼吸道感染，包括通常是轻微的普通感冒直至可能致命的罕见形式例如SARS、MERS和COVID-19。SARS-CoV-1或-2感染可能表现为轻度、中度或重度疾病；后者包括重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、脓毒症和脓毒性休克。

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是一种以肺部迅速出现广泛炎症为特征的呼吸衰竭。症状包括呼吸短促、呼吸快速和皮肤呈蓝色。对于那些幸存下来的人而言，生活质量下降是常见的。病因可能包括脓毒症、胰腺炎、创伤、肺炎和误吸。潜在机制包括对形成肺部微观气囊屏障的细胞的弥漫性损伤、表面活性物质功能障碍、免疫系统激活和身体凝血调节功能障碍。实际上，ARDS损害了肺交换氧气和二氧化碳的能力。诊断是基于PaO₂/FiO₂比率（动脉氧分压与吸入氧分数之比）小于300 mmHg，尽管呼气末正压（PEEP）大于5 cm H₂O。主要治疗包括机械通气和针对潜在病因的治疗。通气策略包括使用低容量和低压力。如果氧合仍然不足，可以使用肺复张手法和神经肌肉阻断剂。如果这还不够，体外膜肺氧合（ECMO）可能是一种选项。所述综合征伴有35%至50%之间的死亡率。

脓毒症被定义为由宿主对感染的响应失调引起的危及生命的器官功能障碍（参见Singer等，2016. JAMA 315(8): 801-810）。器官功能障碍可以被鉴定为感染后总SOFA评分≥2分的急性变化。在已知不预先存在器官功能障碍的患者中，可以假设基线SOFA评分为零。SOFA评分≥2反映了在疑似感染的综合医院群体中约10%的总体死亡风险。即使是表现出轻度功能障碍的患者也可能进一步恶化，这强调了这种病症的严重性，以及及时和适当干预的必要性（如果还没有采取的话）。脓毒症是一种当身体对感染的响应损伤了自己的组织和器官时出现的危及生命的病症。可能在ICU长期住院或在医院死亡的疑似感染的患者，可以在床边通过qSOFA（即精神状态改变、收缩压≤100 mm Hg或呼吸频率≥22/min）及时鉴定。

休克的特征在于氧气输送减少和/或氧气消耗增加或氧气利用不足，导致细胞和组织缺氧。这是一种危及生命的循环衰竭，最常见的表现是低血压（收缩压低于90 mm Hg或MAP低于65 mmHg）。根据潜在病因，休克分为四种主要类型：低血容量休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克（Vincent和De Backer 2014. N. Engl. J. Med. 370(6): 583）。

脓毒性休克是一种潜在致命的医学病症，在脓毒症（其是对感染做出响应的器官损伤或损害）导致危险的低血压和细胞代谢异常时发生。脓毒症和脓毒性休克的第三次国际共识定义（Sepsis-3）将脓毒性休克定义为脓毒症的一个亚类，其中与单独的脓毒症相比特别严重的循环、细胞和代谢异常与更大的死亡风险相关。脓毒性休克患者在临床上可以通过在不存在低血容量的情况下需要血管加压药来维持65 mm Hg或更高的平均动脉压并且血清乳酸盐水平高于2 mmol/L（>18 mg/dL）来鉴定。这种组合与超过40%的医院死亡率相关（Singer等，2016. JAMA. 315(8)：801–10）。原发性感染最通常由细菌引起，但是也可能由真菌、病毒或寄生虫引起。它可以位于身体的任何部位，但最通常在肺、脑、泌尿道、皮肤或腹部器官中。它可以引起多器官功能障碍综合征（以前被称为多器官衰竭）和死亡。通常，患有脓毒性休克的人在重症监护室中看护。它最通常影响儿童、免疫受损个体和老年人，因为他们的免疫系统无法像健康成年人那样有效地应对感染。脓毒性休克的死亡率约为25-50%。

心源性休克（CS）被定义为由于心输出量减少而导致的关键终末器官灌注不足的状态。值得注意的是，CS形成了范围从轻度灌注不足到深度休克的疾病谱。诊断CS的既定标准是：（i）收缩压≤90 mmHg持续>30分钟，或需要血管加压药才能实现血压≥90 mmHg；（ii）肺充血或左心室充盈压升高；（iii）具有至少一个下述标准的器官灌注受损迹象：（a）精神状态改变；（b）皮肤湿冷；（c）少尿（< 0.5 mL/kg/h或<30 mL/h）；（d）血清乳酸盐升高（Reynolds和Hochman 2008. Circulation 117: 686–697）。急性心肌梗死（AMI）继发心室功能障碍是CS的最常见病因，约占病例的80%。机械性并发症例如室间隔（4%）或游离壁破裂（2%）以及急性重度二尖瓣反流（7%）是AMI后CS的较少见病因（Hochman等，2000. J Am Coll Cardiol 36: 1063–1070）。非AMI相关CS可能由失代偿性瓣膜心脏病、急性心肌炎、心律失常等引起，具有不同的治疗选项。这意味着美国每年有40000至50000名患者，而欧洲则有60000至70000名患者。尽管主要通过早期血管重建和后续死亡率降低取得了治疗进展，但根据最近的登记和随机试验，CS仍然是AMI死亡的主要原因，死亡率仍接近40-50%（Goldberg等，2009. Circulation 119: 1211–1219）。

急性冠状动脉综合征是指一组心脏血流减少的疾病，并包括ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）和不稳定型心绞痛。它是一种冠心病（CHD），造成35岁以上人群中三分之一的总死亡人数。某些形式的CHD可能是无症状的，但ACS总是有症状的。根据指南，急性心肌梗死被定义如下：当存在急性心肌损伤，有急性心肌缺血的临床证据，并检测到心肌肌钙蛋白（cTn）值的上升和/或下降，其中至少有一个值高于参考上限（URL）的第99百分位数，并且有至少一种心肌缺血症状、新的缺血性ECG变化、病理性Q波的发展、新的存活心肌丧失的影像学证据或新的局部室壁运动异常，其模式与缺血性病因一致，或通过血管造影或尸检鉴定到冠状动脉血栓时，应使用术语急性心肌梗死（Thygesen 等，2018，心肌梗死的第四个通用定义（Fourth Universal Definition of Myocardial Infarction）（2018），Eur Heart J. 40(3): 237-69）。此外，还存在与冠状动脉手术如经皮冠状动脉介入（PCI）或冠状动脉旁路移植（CABG）相关的心肌梗死。

DPP3抑制剂

抑制剂是优选显著抑制DPP3活性的分子。这些分子可以是肽和小分子、抗体、抗体片段或非Ig支架。

显著抑制意味着将DPP3活性抑制超过60%，优选地超过70%，更优选地超过80%，优选地超过90%，更优选地几乎或实际上100%的抑制。

DPP3活性可以被不同的通用蛋白酶抑制剂（例如PMSF、TPCK）、巯基试剂（例如pHMB、DTNB）和金属螯合剂（EDTA、邻菲咯啉）非特异性地抑制（Abramić等，2000. Biological Chemistry, 381: 1233–1243；EP 2949332）。

DPP3活性可以进一步被不同种类的化合物特异性抑制：内源性DPP3抑制剂是肽spinorphin。已经制备了spinorphin的几种合成衍生物例如tynorphin，它们显示出以不同程度抑制DPP3活性（Yamamoto等，2000. Life sciences 62(19): 1767–1773）。其他已发表的DPP3的肽抑制剂是propioxatin A和B（US 4804676）和propioxatin A类似物（Inaoka等， 1988. J. Biochem 104(5): 706–711）。

“衍生物或类似物”是指通过化学反应从母体化合物中衍生出来的化合物，其中一个原子或一组原子被官能团代替。母体和衍生化合物具有相似的化学结构。

DPP3也可以被小分子例如fluostatin和苯并咪唑衍生物抑制。Fluostatin A和B是在链霉菌（Streptomyces sp.）TA-3391中产生的抗生素，无毒并强烈抑制DPP3活性。到目前为止，已经合成并发表了20种不同的苯并咪唑衍生物（Agić等，2007. Bioorganic Chemistry 35(2): 153–169；Rastija等，2015. Acta Chimica Slovenica 62: 867–878），其中两种化合物1’和4’显示出最强的抑制作用（Agić等，2007. Bioorganic Chemistry 35 (2): 153–169）。几种二肽基异羟肟酸已被显示也抑制DPP3活性（Cvitešić等，2016. J Enzyme Inhib Med Chem 31(sup2):40-45）。

“小分子”具体而言是低分子量（更具体而言≤ 1000道尔顿）的有机化合物。具体而言，此类小分子可以调节生物过程，例如结合特定生物大分子，在本发明中具体而言是DPP3，并充当效应物、特别是抑制剂，改变生物大分子的活性或功能。小分子可以是天然来源的，也可以是人造的。

DPP3的小分子和肽抑制剂的具体实例示出在下面的表2中。化合物1’和4’显示出最强的抑制作用（Agic等，2007）。

表1：DPP3的肽和小分子抑制剂

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述DPP3活性抑制剂选自包含下述的组：小分子、抗DPP3抗体、抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述DPP3活性抑制剂是选自包含spinorphin、tynorphin、propioxatin A和B、fluostatin A和B、苯并咪唑或其衍生物或类似物的组的小分子。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抑制剂是对DPP3的最小结合亲和力等于或小于10^-7 M的抗DPP3抗体、抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。

在整个本说明书中，根据本发明的“抗体”或“抗体片段”或“非Ig支架”能够结合DPP3，因此针对DPP3，并因此可以被称为“抗DPP3抗体”、“抗DPP3抗体片段”或“抗DPP3非Ig支架”。

术语“抗体”通常包括单克隆和多克隆抗体及其结合片段、特别是Fc-片段，以及所谓的“单链抗体”（Bird等，1988）、嵌合、人源化特别是CDR移植抗体和双体或四体抗体（Holliger等，1993）。还包括通过包括例如噬菌体展示在内的技术选择的与样品中包含的感兴趣的分子特异性结合的免疫球蛋白样蛋白。在这种情形中，术语“特异性结合”是指针对感兴趣的分子或其片段产生的抗体。如果抗体对感兴趣的分子或其上述片段的亲和力比对含有所述感兴趣的分子的样品中包含的其他分子的亲和力至少高优选地50倍、更优选地100倍、最优选地至少1000倍，则所述抗体被认为是特异性的。如何制造抗体和选择具有给定特异性的抗体，在本领域中是公知的。

在本发明的一个实施方式中，所述抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架是单特异性的。

单特异性抗DPP3抗体或单特异性抗DPP3抗体片段或单特异性抗DPP3非Ig支架意味着所述抗体或抗体片段或非Ig支架结合到所述靶DPP3（SEQ ID No. 1）内一个涵盖至少5个氨基酸的特定区域。单特异性抗DPP3抗体或单特异性抗DPP3抗体片段或单特异性抗DPP3非Ig支架是都对同一抗原具有亲和力的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。单克隆抗体是单特异性的，但单特异性抗体也可以通过从共同胚细胞生产它们之外的其他手段来生产。

在一个特定实施方式中，所述抗DPP3抗体、抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架是抑制性抗体、片段或非Ig支架。所述抗DPP3抗体、抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架抑制DPP3活性超过50%，优选地超过60%，优选地超过70%，更优选地超过80%，优选地超过90%，甚至更优选地超过95%，优选地几乎或实际上100%。

根据本发明的抗体或片段是包括基本上由免疫球蛋白基因编码的一个或多个多肽，特异性结合抗原的蛋白质。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α（IgA）、γ（IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄）、δ（IgD）、ε（IgE）和μ（IgM）恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白轻链通常为约25 Kd或长度为214个氨基酸。

全长免疫球蛋白重链通常为约50 Kd或长度为446个氨基酸。轻链由位于NH₂端的可变区基因（长度约110个氨基酸）和位于COOH端的κ或λ恒定区基因编码。重链同样由可变区基因（长度约116个氨基酸）和其余恒定区基因之一编码。

抗体的基本结构单元通常是由同样的两对免疫球蛋白链构成的四聚体，每对具有一条轻链和一条重链。在每一对中，轻链和重链可变区结合到抗原，并且恒定区介导效应功能。免疫球蛋白也以各种不同的其他形式存在，包括例如Fv、Fab和(Fab')₂，以及双功能杂合抗体和单链（例如Lanzavecchia等，1987. Eur. J. Immunol. 17:105；Huston等，1988. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85:5879-5883；Bird等，1988. Science 242:423-426； Hood等，1984, Immunology, Benjamin, N.Y., 2nd ed.；Hunkapille和Hood 1986. Nature 323:15-16）。免疫球蛋白轻链或重链可变区包括被三个超变区、也被称为互补决定区（CDR）打断的构架区（参见有免疫学意义的蛋白质序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest）, E. Kabat等，1983, U.S. Department of Health and Human Services）。正如上面指出的，CDR主要负责结合到抗原的表位。免疫复合物是与所述抗原特异性结合的抗体例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或功能性抗体片段。

嵌合抗体是其轻链和重链基因通常通过遗传工程从属于不同物种的免疫球蛋白可变区和恒定区基因构建的抗体。例如，可以将来自小鼠单克隆抗体的基因的可变区段连接到人恒定区段例如κ和γ1或γ3。因此，在一个实例中，治疗性嵌合抗体是由来自小鼠抗体的可变或抗原结合结构域和来自人抗体的恒定或效应结构域构成的杂合蛋白质，尽管也可以使用其他哺乳动物物种，或者可变区可以通过分子技术产生。制造嵌合抗体的方法在本领域中是公知的，例如参见美国专利第5807715号。“人源化”免疫球蛋白是包含人构架区和来自非人（例如小鼠、大鼠或合成的）免疫球蛋白的一个或多个CDR的免疫球蛋白。所述提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”，所述提供构架的人免疫球蛋白被称为“受体”。在一个实施方式中，在人源化免疫球蛋白中，所有的CDR都来自供体免疫球蛋白。恒定区不一定存在，但是如果它们存在的话，它们必须与人免疫球蛋白恒定区基本上一致，即一致性为至少约85-90%，例如约95%或更高。因此，可能除了CDR之外，人源化免疫球蛋白的所有部分都与天然人免疫球蛋白序列的对应部分基本上一致。“人源化抗体”是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。人源化抗体与提供所述CDR的供体抗体结合到相同的抗原。人源化免疫球蛋白或抗体的受体构架可能具有从供体构架获取的有限数目的氨基酸替换。人源化或其他单克隆抗体可以具有基本上不影响抗原结合或其他免疫球蛋白功能的其他保守氨基酸替换。示例性的保守替换是例如：gly，ala；val，ile，leu；asp，glu；asn，gln；ser，thr；lys，arg；和phe，tyr。人源化免疫球蛋白可以利用遗传工程来构建（例如参见美国专利第5585089号）。人抗体是其中轻链和重链基因是人来源的抗体。人抗体可以使用本领域中已知的方法产生。人抗体可以通过对分泌目标抗体的人B细胞进行永生化来生产。永生化可以例如通过EBV感染或通过将人B细胞与骨髓瘤或杂交瘤细胞融合以产生三源杂交瘤细胞来实现。人抗体也可以通过噬菌体展示方法来生产（参见例如WO91/17271；WO92/001047； WO92/20791），或者从人组合单克隆抗体文库选择（参见Morphosys网站）。人抗体也可以使用带有人免疫球蛋白基因的转基因动物来制备（例如参见WO93/12227；WO 91/10741）。

因此，所述抗DPP3抗体可以具有本领域中已知的格式。实例是人抗体、单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体。在一个优选实施方式中，根据本发明的抗体是重组生产的抗体例如IgG、典型的全长免疫球蛋白或至少含有重链和/或轻链的F-可变结构域的抗体片段，例如化学偶联的抗体（抗原结合片段），包括但不限于Fab片段，包括Fab微抗体、单链Fab抗体、带有表位标签的单价Fab抗体例如Fab-V5Sx2；用CH3结构域二聚化的二价Fab（微抗体）；二价Fab或多价Fab，例如在异源结构域的帮助下通过多聚化、例如通过dHLX结构域的二聚化形成的，例如Fab-dHLX-FSx2；F(ab’)₂片段，scFv片段，多聚化的多价和/或多特异性scFv片段，二价和/或双特异性双体，BITE^®（双特异性T-细胞衔接物），三功能抗体，多价抗体，例如来自G之外的其他类别的；单结构域抗体，例如源自于骆驼或鱼类免疫球蛋白的纳米抗体，等等。

在一个优选实施方式中，所述抗DPP3抗体格式选自包含下述的组：Fv片段、scFv片段、Fab片段、scFab片段、F(ab)₂片段和scFv-Fc融合蛋白。在另一个优选实施方式中，所述抗体格式选自包含下述的组：scFab片段、Fab片段、scFv片段及其生物可利用性优化的偶联物，例如PEG化的片段。最优选的格式之一是scFab格式。

非Ig支架可以是蛋白质支架，并且可用作抗体模拟物，因为它们能够结合到配体或抗原。在一个实施方式中，非Ig支架可以选自包含下述的组：基于四连接素的非Ig支架（例如在US 2010/0028995中描述的）、纤连蛋白支架（例如在EP 1 266 025中描述的）、基于脂钙蛋白的支架（例如在WO 2011/154420中描述的）、遍在蛋白支架（例如在WO 2011/ 073214中描述的）、转铁蛋白支架（例如在US 2004/0023334中描述的）、蛋白A支架（例如在EP 2 231 860中描述的）、基于锚蛋白重复序列的支架（例如在WO 2010/060748中描述的）、微型蛋白（优选为形成半胱氨酸结的微型蛋白）支架（例如在EP 2314308中描述的）、基于Fyn SH3结构域的支架（例如在WO 2011/023685中描述的）、基于EGFR-A结构域的支架（例如在WO 2005/040229中描述的）和基于Kunitz结构域的支架（例如在EP 1 941 867中描述的）。

在本发明的一个实施方式中，根据本发明的抗DPP3抗体可以如实施例1中所概述的，通过合成作为抗原的DPP3片段或全长DPP3来生产。随后，使用下面描述的方法或本领域中已知的其他方法来鉴定所述片段的结合剂。

鼠抗体的人源化可以按照下述程序来进行：

为了将鼠源抗体人源化，分析所述抗体序列的构架区（FR）与互补决定区（CDR）和抗原的结构相互作用。在结构建模的基础上，选择适合的人来源的FR，并将鼠CDR序列移植到人FR中。可以在CDR或FR的氨基酸序列中引入变异，以重新获得被FR序列的物种切换废除的结构相互作用。这种结构相互作用的恢复可以使用噬菌体展示文库通过随机方法或通过由分子建模指导的定向方法来实现（Almagro和Fransson 2008. 抗体的人源化 （Humanization of antibodies），Front Biosci. 2008 Jan 1;13:1619-33）。

在另一个优选实施方式中，所述抗DPP3抗体、抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架是全长抗体、抗体片段或非Ig支架。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述重链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：7、SEQ ID NO.：8和/或SEQ ID NO.：9，

并且所述轻链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：10、KVS和/或SEQ ID NO.：11。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述重链包含序列SEQ ID NO.：12，并且其中所述轻链包含序列SEQ ID NO.：13。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心脏和/或预防心脏损伤，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。在一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少4个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。在另一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No.：2中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No.：2中包含的长度为至少4个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在另一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No.：2中包含的长度为至少5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No.：3中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在一个实施方式中，所述抑制剂结合SEQ ID No.：3中包含的长度为至少4个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在另一个实施方式中，所述抑制剂结合SEQ ID No.：3中包含的长度为至少5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ IDNO.：1中所描绘的DPP3中。

本申请的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No.：4中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No.：4中包含的长度为至少4个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。在另一个实施方式中，所述抑制剂是结合SEQ ID No.：4中包含的长度为至少5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架，并且其中所述表位被包含在如SEQ ID NO.：1中所描绘的DPP3中。

表位，也被称为抗原决定簇，是抗原的被免疫系统（特别是抗体）识别的部分。例如，表位是抗原的与抗体结合的特定区段。抗体的与表位结合的部分被称为补位。蛋白质抗原的表位根据其结构和与补位的相互作用分为构象表位和线性表位两类。构象和线性表位基于表位采用的3-D构象与补位相互作用，所述构象由所涉及的表位残基的表面特征和抗原的其他区段的形状或三级结构决定。构象表位由不连续氨基酸残基的相互作用所采用的3-D构象形成。线性表位或连续表位是通过其氨基酸的线性序列或一级结构被抗体识别的表位，并由连续氨基酸残基的相互作用所采用的3-D构象形成。

在本发明的一个特定实施方式中，所述抗体是单克隆抗体或其片段。在本发明的一个实施方式中，所述抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段是人或人源化抗体或从其衍生。在一个特定实施方式中，将一个或多个（鼠）CDR移植到人抗体或抗体片段中。

在一个方面，本发明的主题内容是一种结合DPP3的人或人源化CDR移植抗体或其抗体片段，其中所述人或人源化CDR移植抗体或其抗体片段包含抗体重链（H链），所述重链包含：

GFSLSTSGMS（SEQ ID NO.：7），

IWWNDNK（SEQ ID NO.：8），

ARNYSYDY（SEQ ID NO.：9），

和/或进一步包含抗体轻链（L链），所述轻链包含：

RSLVHSIGSTY（SEQ ID NO.：10），

KVS（不是序列表的一部分），

SQSTHVPWT（SEQ ID NO.：11）。

在本发明的一个特定实施方式中，本发明的主题内容是一种结合DPP3的人或人源化单克隆抗体或其结合DPP3的抗体片段，其中所述重链包含选自包含下述的组的至少一个CDR：

GFSLSTSGMS（SEQ ID NO.：7），

IWWNDNK（SEQ ID NO.：8），

ARNYSYDY（SEQ ID NO.：9），

并且其中所述轻链包含选自包含下述的组的至少一个CDR：

RSLVHSIGSTY（SEQ ID NO.：10），

KVS（不是序列表的一部分），

SQSTHVPWT（SEQ ID NO.：11）。

根据本发明的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架对人DPP3表现出亲和力，使得亲和常数大于10^-7 M、优选地大于10^-8 M，优选的亲和力大于10^-9 M，最优选地高于10^-10 M。本领域技术人员了解，可以考虑通过施用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且这种措施不将导致超出本发明的范围。所述亲和常数可以按照实施例1中描述的方法来确定。

本发明的主题内容是一种结合DPP3的单克隆抗体或片段或其用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的抗体片段，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抗体或片段包含下述序列作为可变重链：

SEQ ID NO.：5

QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMSVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWNDNKSYNPALKSRLTISRDTSNNQVFLKIASVVTADTGTYFCARNYSYDYWGQGTTLTVSS

并包含下述序列作为可变轻链：

SEQ ID NO.：6

DVVVTQTPLSLSVSLGDPASISCRSSRSLVHSIGSTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK

本发明的主题内容是一种结合DPP3的人或人源化单克隆抗体或片段或其用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的抗体片段，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述抗体或片段包含下述序列作为重链：

SEQ ID NO.：12

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLAHIWWNDNKSYNPALKSRLTITRDTSKNQVVLTMTNMDPVDTGTYYCARNYSYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

并包含下述序列作为轻链：

SEQ ID NO.：13

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSRSLVHSIGSTYLYWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

在本发明的一个特定实施方式中，所述抗体包含下述序列或与其同一性> 95%、优选地> 98%、优选地> 99%的序列作为重链：SEQ ID NO：12，

并包含下述序列或与其同一性> 95%、优选地> 98%、优选地> 99%的序列作为轻链：SEQ ID NO：13。

为了评估两个氨基酸序列之间的同一性，进行了成对比对。同一性定义了比对中直接匹配的氨基酸的百分率。

在一个优选实施方式中，使用DPP3活性抑制剂的治疗在提供指示样品中DPP3水平的样品分析结果后立即开始或改变。在进一步的实施方式中，所述治疗可以在收到所述样品分析结果后12小时内，优选地在6、4、2、1、0.5、0.25小时内或立即开始。

在一些实施方式中，所述方法包括在基本上相同的时间点获得的单个样品和/或多个样品中对来自患者的样品中的DPP3进行单次和/或多次测量，或由其组成，以便指导和/或监测和/或分层疗法，其中所述疗法是施用DPP3活性抑制剂。

术语“药物制剂”意指与至少一种药学上可接受的赋形剂组合的药物成分，其形式允许其中包含的药物成分的生物活性有效，并且不含对所述制剂将被施用到的受试者有不可接受的毒性的其他组分。术语“药物成分”意指可以任选地与药学上可接受的赋形剂组合以提供药物制剂或剂型的治疗组合物。

本发明的主题内容是一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其包含根据本发明的抗体或片段或支架。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂是溶液，优选为即用型溶液。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂处于冷冻干燥状态。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂被肌肉内施用。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂被血管内施用。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂通过输注施用。

本发明的主题内容是根据本发明的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的药物制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤，其中所述药物制剂将被全身施用。

在上述背景下，下述连续编号的实施方式提供了本发明的其他具体方面：

1. 一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

2. 根据实施方式1所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述血压下降是平均动脉压（MAP）< 65 mmHg，更优选地< 60 mmHg，甚至更优选地< 55 mmHg，最优选地< 50 mmHg。

3. 根据实施方式1和2所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述患者在所述患者的体液样品中正具有高于（预定）阈值的DPP3水平。

4. 根据实施方式3所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述受试者的体液样品中DPP3水平的所述预定阈值在20至120 ng/mL之间，更优选地在30至80 ng/mL之间，甚至更优选地在40至60 ng/mL之间，最优选地所述阈值为50 ng/mL。

5. 根据实施方式1至4中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述样品是选自包含全血、血浆或血清的组的体液样品。

6. 根据实施方式1至5中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述心肌损伤的特征在于血液心肌肌钙蛋白（cTn）水平高于阈值，促炎性白细胞介素-6（IL-6）的心肌表达增加，和/或需要血管加压药来维持血压和心输出量。

7. 根据实施方式6所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述心肌肌钙蛋白（cTn）是心肌肌钙蛋白T（cTnT）或心肌肌钙蛋白I（cTnI）。

8. 根据实施方式1-7中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述患者患有严重传染病、脓毒症、肺栓塞、肺动脉高压、急性冠状动脉综合征（包括不稳定型心绞痛、ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI））、任何类型的休克（包括心源性休克、脓毒性休克或过敏性休克）、心脏骤停、急性肝衰竭和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。

9. 根据实施方式1-8中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述DPP3活性抑制剂选自包含小分子、抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架的组。

10. 根据实施方式9所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

11. 根据实施方式9和10所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 2中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

12. 根据实施方式9至11中任一者所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。

13. 根据实施方式9至12中任一者所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：7、SEQ ID NO.：8和/或SEQ ID NO.：9

并且所述轻链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：10、KVS和/或SEQ ID NO.：11。

14. 根据实施方式9至13中任一者所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。

15. 根据实施方式9至14中任一者所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链包含序列SEQ ID NO.：12，并且其中所述轻链包含序列SEQ ID NO.：13。

16. 根据实施方式9所述的用于肺功能降低的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述小分子选自包含spinorphin、tynorphin、propioxatin A和B、fluostatin A和B、苯并咪唑或其衍生物或类似物的组。

为避免疑义，下述实施方式10a至16a对应于上述实施方式10至16，其中包括对实施方式9的正确引用，即“血压下降”。对实施例10至16中的一者或多者的指称同样应指称实施方式10a至16a中的一者或多者。

10a. 根据实施方式9所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

11a. 根据实施方式9和10所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 2中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

12a. 根据实施方式9至11中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。

13a. 根据实施方式9至12中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：7、SEQ ID NO.：8和/或SEQ ID NO.：9

并且所述轻链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：10、KVS和/或SEQ ID NO.：11。

14a. 根据实施方式9至13中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。

15a. 根据实施方式9至14中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链包含序列SEQ ID NO.：12，并且其中所述轻链包含序列SEQ ID NO.：13。

16a. 根据实施方式9所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述小分子选自包含spinorphin、tynorphin、propioxatin A和B、fluostatin A和B、苯并咪唑或其衍生物或类似物的组。

17. 根据前述实施方式中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中心肌损伤是心肌肌钙蛋白值升高到高于参考上限的第99百分位数，其中更具体而言，心肌损伤是心肌细胞和组织（例如心肌细胞、心肌成纤维细胞、平滑肌细胞或内皮细胞）的结构性损伤。

18. 根据前述实施方式中任一者所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中在从所述患者获得的样品中测定的cTn的血液水平和/或IL-6的心肌表达升高，特别是高于阈值，更具体而言cTn升高到高于实施方式17中所定义的阈值。

附图说明

图1：Kaplan Meyer生存图与低（< 68.6 ng/mL）和高（≥ 68.6 ng/ml）DPP3血浆浓度的关系。（A）脓毒症/脓毒性休克患者的7天生存率与DPP3血浆浓度（截止值68.6 ng/mL）的关系；（B）心源性休克患者的7天生存率与DPP3血浆浓度（截止值68.6 ng/mL）的关系；（C）急性心肌梗死患者的7天生存率与DPP3血浆浓度（截止值68.6 ng/mL）的关系；（D）呼吸困难患者的3个月生存率与DPP3血浆浓度的关系；（E）烧伤患者的4周生存率与DPP3血浆浓度的关系；（F）脓毒性休克患者的7天生存率与DPP3血浆浓度的关系。

图2：从人红细胞裂解物纯化的天然hDPP3在梯度凝胶（4-20%）上SDS-PAGE。分子量标记用箭头指示。

图3：实验设计——天然DPP3在动物模型中的作用。

图4：（A）DPP3注射导致缩短分数降低，从而导致心功能恶化。（B）通过肾阻力指数的增加，也观察到肾功能下降。

图5：使用Octet的AK1967-DPP3结合分析的结合和解离曲线。将装载有AK1967的生物传感器浸入带GST标签的重组人DPP3的连续稀释液（100、33.3、11.1、3.7 nM）中，并监测结合和解离。

图6：使用AK1967作为第一抗体进行的血细胞裂解物稀释液的Western印迹和DPP3检测。

图7：抑制性抗体AK1967对来自血细胞的天然DPP3的抑制曲线。特定抗体对DPP3的抑制是浓度依赖性的，当针对15 ng/ml DPP3分析时，IC₅₀为~15 ng/ml。

图8：实验设置——Procizumab在脓毒症诱导的心力衰竭中的作用。

图9：在脓毒症诱导的心力衰竭大鼠中，Procizumab显著改善缩短分数（A）和死亡率（B）。

图10：实验设计——在小鼠中异丙肾上腺素诱导心脏应激，随后进行Procizumab治疗（B）和对照（A）。

图11：在异丙肾上腺素诱导的心力衰竭小鼠中，Procizumab在施用后1小时和6小时内分别改善缩短分数（A）和降低肾阻力指数（B）。

图12：脓毒症患者入院后24小时高浓度的DPP3水平与最差的SOFA评分相关。

图13：在脓毒症患者中，高cDPP3血浆水平与器官功能障碍相关。根据ICU住院期间DPP3水平的演变，AdrenOSS-1中SOFA评分的柱状图。HH：在入院和24h时DPP3高于中位数；HL：在入院时高于中位数，但在24h时低于中位数；LL：在入院和24h时低于中位数；LH：在入院时低于中位数，但在24h时高于中位数。

图14：脓毒症患者入院后24小时高浓度的cDPP3水平与最差的按器官SOFA评分相关。（A）心脏、（B）肾脏、（C）呼吸系统、（D）肝脏、（E）凝血和（F）中枢神经系统SOFA评分值，根据入院至24h之间cDPP3的动态水平（HH：高/高，HL：高/低，LH：低/高，LL：低/低）。

图15：ICU入院时高水平的DPP3与随后48h内肾功能恶化相关。Y轴：在第1天（ICU入院）时测量的DPP3。X轴：KDIGO 0或1期或KDIGO 2或3期（p = 0.002）。

图16：在COVID-19患者中，ICU期间DPP3的连续测量值与疾病严重程度相关。A，在ICU入院第3天测量DPP3水平（p = 0.02）；B，在ICU入院第7天测量DPP3水平（p = 0.013）。X轴：假= P/F比率>150；真=P/F比率<150。

图17：在COVID-19患者中，ICU入住期间高的DPP3值与不良结果相关。A，在ICU入院第3天测量DPP3水平；B，在ICU入院第7天测量DPP3水平。X轴：0=活的；1=死亡。

图18：ICU入院时高的DPP3水平与ICU入住期间需要血管加压药疗法相关（第3天，p=0.05）。Y轴：第1天（ICU入院）测量的DPP3。X轴：无：在ICU入住期间无血管加压药治疗，或任何：有血管加压药治疗。

图19：ICU期间DPP3的连续测量值与需要器官支持疗法（特别是静脉-静脉ECMO）相关。A，在ICU入院第3天测量DPP3水平（p = 0.03）；B，在ICU入院第7天测量DPP3水平（p =0.04）。X轴：0=无ECMO；1= ECMO。

图20：Procizumab用于在脓毒性休克期间保护心脏的治疗方案。

图21：在脓毒症猪（n=16）中，在Procizumab输注期间不同时间点测量的DPP3活性（U/L）和Procizumab浓度（ng/ml）。

图22：与Procizumab治疗组相比，标准护理组中通过促炎性细胞因子IL-6的心肌mRNA表达评估的心脏炎症显著上调（p=0.0024）。

图23：与Procizumab动物相比，标准护理组中H12时通过高灵敏性心肌肌钙蛋白I释放评估的心肌损伤明显更高（p=0.0055）。两个组中的动物的肌钙蛋白水平没有显示出显著差异。

图24：基于从复苏开始（H1）到处死（H12）的每个时间点为了将平均动脉压（MAP）维持在65至75 mmHg之间而滴定的去甲肾上腺素输注剂量（µg/kg/min）评估了去甲肾上腺素需求。与Procizumab组相比，标准护理组中实现目标MAP所需的去甲肾上腺素明显更高（从H4至H9 p<0.05，从H10至H12 p<0.005）。

图25：在标准护理组和Procizumab组之间，通过肺动脉导管评估的心输出量在H4、H8和H12时间点存在显著差异（p<0.05）。

实施例

实施例1 – DPP3蛋白和DPP3活性的测量方法

抗体的产生和DPP3结合能力的测定：制备了几种鼠抗体，并在特异性结合测定中通过其结合人DPP3的能力进行了筛选（参见表3）。

用于免疫的肽/偶联物：

合成用于免疫的DPP3肽，参见表3（JPT Technologies，Berlin，Germany），其含有额外的N-端半胱氨酸（如果在所选的DPP3序列中不存在半胱氨酸的话）残基，用于将所述肽与牛血清白蛋白（BSA）偶联。使用Sulfolink偶联凝胶（Perbio-science，Bonn，Germany）将所述肽共价连接到BSA。按照Perbio的手册进行偶联程序。重组GST-hDPP3由USBio（UnitedStates Biological，Salem，MA，USA）生产。

小鼠的免疫、免疫细胞融合和筛选：

将Balb/c小鼠在第0天用84 µg GST-hDPP3或100 µg DPP3肽-BSA偶联物（在TiterMax Gold佐剂中乳化），在第14天用84 µg或100 µg（在完全弗氏佐剂中乳化），并在第21天和第28天用42 µg或50 µg（在不完全弗氏佐剂中）进行腹膜内（i.p.）注射。在第49天，所述动物接受溶解在盐水中的42 µg GST-hDPP3或50 µg DPP3肽-BSA偶联物的静脉内注射（i.v.）。三天后，将小鼠处死并进行免疫细胞融合。

将来自所述免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系SP2/0的细胞用1 ml 50%聚乙二醇在37℃下融合30 s。在清洗后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在HAT培养基[增补有20%胎牛血清和HAT补充剂的RPMI1640培养基]中生长来选择杂交克隆。一周后，用HT培养基替换HAT培养基，传代三次，然后返回到正常细胞培养基。

融合两周后，初步筛选细胞培养上清液中的重组DPP3结合性IgG抗体。因此，将带GST标签的重组hDPP3（USBiologicals，Salem，USA）固定在96孔板中（100 ng/孔），并在室温下与每孔50 µl细胞培养上清液温育2小时。洗板后，添加50 µl/孔的POD兔抗小鼠IgG抗体，并在RT下温育1 h。在下一个清洗步骤后，向每个孔添加50 µl生色团溶液（柠檬酸盐/磷酸氢缓冲液中的3.7 mM邻苯二胺，0.012% H₂O₂），在RT下温育15分钟，通过添加50 µl 4N硫酸停止生色反应。在490 mm处检测吸收。

将测试呈阳性的微量培养物转移到24孔板中进行繁殖。在重新测试后，使用有限稀释技术将所选培养物克隆和再克隆，并确定同种型。

小鼠单克隆抗体生产

通过标准的抗体生产方法（Marx等，1997）生产针对带GST标签的人DPP3或DPP3肽产生的抗体，并通过蛋白A纯化。根据SDS凝胶电泳分析，所述抗体的纯度≥ 90%。

抗体的表征 – 与hDPP3和/或免疫肽的结合

为了分析不同抗体和抗体克隆结合DPP3/免疫肽的能力，进行了结合测定：

a）固相

将带GST标签的重组hDPP3（SEQ ID NO. 1）或DPP3肽（免疫肽，SEQ ID NO. 2）固定在高结合性微量滴定板表面上（96孔聚苯乙烯微量滴定板，Greiner Bio-Oneinternational AG，Austria，1 µg/孔，在偶联缓冲液[50 mM Tris，100 mM NaCl，pH7.8]中，RT下1h）。在用5%牛血清白蛋白阻断后，将微量滴定板真空干燥。

b）标记程序（示踪剂）

将100 µg（100 µl）不同的抗DPP3抗体（检测抗体，1 mg/ml，在PBS中，pH 7.4）与10µl NHS-吖啶酯（1 mg/ml，在乙腈中，InVent GmbH，Germany；EP 0 353 971）混合，并在室温下温育30分钟。将标记的抗DPP3抗体在Shodex Protein 5 µm KW-803（Showa Denko,Japan）上通过凝胶过滤HPLC进行纯化。将纯化的标记抗体在测定缓冲液（50 mmol/l磷酸钾，100 mmol/l NaCl，10 mmol/l Na₂-EDTA，5 g/l牛血清白蛋白，1 g/l鼠IgG、1 g/l牛IgG，50 µmol/l抑氨肽酶肽，100 µmol/l亮抑酶肽，pH 7.4）中稀释。终浓度为每200 µl约5-7*10⁶个相对光单位（RLU）的标记化合物（约20 ng标记抗体）。使用Centro LB 960发光计（Berthold Technologies GmbH & Co. KG）测量吖啶酯化学发光。

c）hDPP3结合测定

在板中装入200 µl标记和稀释的检测抗体（示踪剂），并在2-8℃下温育2-4 h。通过用350 µl清洗溶液（20 mM PBS，pH 7.4，0.1% Triton X-100）清洗4次，除去未结合的示踪剂。使用Centro LB 960发光计（Berthold Technologies GmbH & Co. KG）测量孔结合的化学发光。

抗体的表征 – hDPP3抑制分析

为了分析不同抗体和抗体克隆抑制DPP3的能力，进行了采用已知程序的DPP3活性测定（Jones等，1982）。将带GST标签的重组hDPP3在测定缓冲液（25 ng/ml GST-DPP3在50mM Tris-HCl、pH7.5和100 µM ZnCl₂中）中稀释，并将200 µl该溶液与10 µg相应抗体在室温下温育。在预温育1小时后，向所述溶液添加产荧光底物Arg-Arg-βNA（20 µl，2mM），并使用Twinkle LB 970微孔板荧光计（Berthold Technologies GmbH & Co. KG）在37℃下监测游离βNA随时间的产生。通过在340 nm处激发和在410 nm处测量发射来检测βNA的荧光。计算不同样品荧光增加的斜率（单位为RFU/min）。使用缓冲液对照的GST-hDPP3的斜率被指定为100%活性。可能的捕获结合剂的抑制能力被定义为通过与所述捕获结合剂温育而导致的GST-hDPP3活性的降低，以百分数表示。

下面的表示出了所选的一组得到的抗体及其以相对光单位（RLU）表示的结合率及其相对抑制能力（%；表3）。针对下述DPP3区域产生的单克隆抗体通过其结合重组DPP3和/或免疫肽的能力及其抑制潜力来选择。

针对带GST标签的全长形式的重组hDPP3产生的所有抗体都显示出与固定化的带GST标签的hDPP3的强结合。针对SEQ ID NO.：2肽产生的抗体也结合GST-hDPP3。SEQ IDNO.：2抗体也与免疫肽强烈结合。

最近已描述了用于定量DPP3蛋白浓度的发光免疫测定法（DPP3-LIA）以及用于定量DPP3活性的酶捕获活性测定法（DPP3-ECA）的开发（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943- 953），其整体通过引用并入本文。

实施例2 - DPP3用于短期死亡率的预后

使用hDPP3免疫测定法（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943-953）测定了各种患病患者血浆中的DPP3浓度，其与所述患者的短期死亡率相关联。

研究队列 – 脓毒症和脓毒性休克

对来自重症脓毒症和脓毒性休克中的肾上腺髓质素和结果（AdrenOSS-1）研究的574名患者的血浆样品进行了DPP3筛查。AdrenOSS-1是一项前瞻性、观察性、跨国研究，包括583名因脓毒症或脓毒性休克而入住重症监护室的患者（Hollinger等，2018）。292名患者被诊断为脓毒性休克。

研究队列 – 心源性休克

对来自108名被诊断为心源性休克的患者的血浆样品进行了DPP3筛查。在从检测到心源性休克起6 h以内抽血 。死亡率被跟踪7天。

研究队列 – 急性冠状动脉综合征

对来自720名急性冠状动脉综合征患者的血浆样品进行了DPP3筛查。在胸痛发作后24小时抽血。死亡率被跟踪7天。

研究队列 – 呼吸困难

1440名表现出呼吸困难（呼吸急促）的患者在进入Skåne大学医院急诊科时立即从其收集血浆样品。除了其他疾病之外，呼吸困难的患者还可能患有急性冠状动脉综合征或充血性心力衰竭，并且器官衰竭和短期死亡的风险高。在急诊科就诊后，对死亡率进行了3个月的跟踪。

研究队列 – 烧伤患者

对来自107名严重烧伤（占体表总面积的15%以上）患者的血浆样品进行了DPP3筛查。在入院时抽血。死亡率被跟踪4周。

hDPP3免疫测定：

分别检测人DPP3的量（LIA）或人DPP3的活性（ECA）的免疫测定法（LIA）或活性测定法（ECA）被用于确定患者血浆中的DPP3水平。抗体固定、标记和温育如Rehfeld等（Rehfeld 等，2019. JALM 3(6): 943-953）中所述来进行。

结果

脓毒症/脓毒性休克中患者的短期生存率与入院时的DPP3血浆浓度有关。DPP3血浆浓度高于68.6 ng/mL（第3四分位数）的患者与DPP3血浆浓度低于该阈值的患者相比具有增加的死亡风险（图1A）。当仅分析该队列的脓毒性休克患者的短期结果与DPP3血浆浓度的关系时，也可以看到同样的关系（图1F）。与DPP3血浆浓度低的患者相比，DPP3血浆浓度升高的患者具有增加的死亡风险。当将相同的截止值应用于心源性休克患者时，在DPP3高的患者中也观察到7天内短期死亡的风险增加（图1B）。

此外，当DPP3水平高并且应用68.6 ng/mL的相应截止值时，与DPP3相关的急性冠状动脉综合征患者的7天生存率也增加（图1C）。

将该68.6 ng/mL的截止值应用于患有呼吸困难的患者，在3个月的随访中检测到DPP3水平高的患者的死亡风险显著增加（图1D）。

此外，在具有高于相应截止值68.6 ng/mL的高DPP3浓度的严重烧伤患者中，4周死亡率的风险增加（图1E）。

实施例3 - 人天然DPP3的纯化

将人红细胞裂解物施加到总共100 ml的Sepharose 4B树脂（Sigma-Aldrich）上，并收集穿流液。用总共370 mL pH 7.4的PBS缓冲液清洗树脂，并将清洗级分与收集的穿流液合并，得到2370 mL的总体积。

对于免疫亲和纯化步骤而言，根据制造商的方案（GlycoLink固定化试剂盒，Thermo Fisher Scientific），将110 mg单克隆抗hDPP3 mAb AK2552偶联到25.5 mLUltraLink酰肼树脂（Thermo Fisher Scientific）。通过经Bradford技术定量未偶联的抗体确定，偶联效率为98%。将所述树脂-抗体偶联物用10倍床体积的清洗-结合缓冲液（PBS，0.1% TritonX-100，pH 7.4）平衡，与2370 mL澄清的红细胞裂解物合并，并在4℃和连续搅拌下温育2h。随后，将100 mL温育混合物铺展在10个15 mL聚丙烯柱上，并通过以1000xg离心30秒收集穿流液。将该步骤重复几次，每个柱得到2.5 mL载有DPP3的树脂。使用重力辉光法，将每个柱用10 mL清洗-结合缓冲液清洗5次。通过将每个柱置于含有2 mL中和缓冲液（1M Tris-HCl，pH 8.0）的15 mL falcon管中，然后每个柱添加10 mL洗脱缓冲液（100 mM甘氨酸-HCl，0.1% TritonX-100，pH 3.5），并立即以1000xg离心30秒，来洗脱DPP3。所述洗脱步骤总共重复3次，得到360 mL合并的洗脱液。中和的洗脱液的pH为8.0。

使用Äkta Start系统（GE Healthcare）的样品泵，将所述合并的洗脱液装载在用IEX缓冲液A1（100 mM甘氨酸，150 mM Tris，pH 8.0）平衡的5 mL HiTrap Q-sephare HP柱（GE Healthcare）上。在样品加载后，用五倍柱体积的IEX缓冲液A2（12 mM NaH₂PO₄，pH 7.4）清洗柱，以除去未结合的蛋白质。使用IEX缓冲液B（12 mM NaH₂PO₄，1 M NaCl，pH 7.4），通过在10个柱体积（50 mL）内施加0-1 M NaCl范围内的氯化钠梯度，来实现DPP3的洗脱。洗脱液以2 mL的级分收集。使用0.22 µM瓶顶过滤器对用于离子交换色谱的缓冲液进行无菌过滤。

表4中给出了纯化表和每个纯化步骤的相应收率和活性。图2示出了从人红细胞裂解物纯化的天然hDPP3在梯度凝胶（4-20%）上的SDS-PAGE。

实施例4 – 天然DPP3在动物模型中的作用

通过监测缩短分数和肾阻力指数，研究了在健康小鼠中注射天然hDPP3的作用。

使野生型Black 6小鼠（8-12周，组大小参考表5）在2周内适应环境，并进行基线超声心动描记术。将小鼠随机分配到两个组之一，随后通过眶后注射静脉内注射天然DPP3蛋白或PBS，DPP3蛋白的剂量为600 µg/kg。

在注射DPP3或PBS后，在15、60和120分钟时通过超声心动描记术评估心功能（Gao 等，2011），并通过肾阻力指数评估肾功能（Lubas等，2014；Dewitte等，2012）（图3）。

结果

与注射PBS的对照组相比，用天然DPP3蛋白治疗的小鼠显示出缩短分数的显著降低（图4A）。WT+DPP3组也显示出肾功能恶化，正如通过肾阻力指数增加所观察到的（图4B）。

实施例5 – Procizumab的开发

对针对SEQ ID NO.：2产生的抗体进行了更详细的表征（表位作图、结合亲和力、特异性、抑制潜力）。这里示出了SEQ ID NO.：2的克隆1967（AK1967；“Procizumab”）的结果作为实例。

DPP3上AK1967表位的确定：

为了进行AK1967的表位作图，合成了许多N-或C-端生物素化的肽（peptides &elephants GmbH，Hennigsdorf，Germany）。这些肽包括全免疫肽（SEQ ID No. 2）或其从C-或N-端逐步去除一个氨基酸的片段的序列（肽的完整列表参见表7）。

将高结合性96孔板的每个孔用偶联缓冲液（500 mM Tris-HCl，pH 7.8，100 mMNaCl）中的2 µg亲和素（Greiner Bio-One international AG，Austria）包被。然后，将板清洗并装入生物素化肽的特定溶液（10 ng/孔；缓冲液——含0.5% BSA的1xPBS）。

按照实施例1，将抗DPP3抗体AK1967用化学发光标记物标记。

将板用200 µl标记且稀释的检测抗体（示踪剂）装填，并在室温下温育4 h。通过用350 µl清洗溶液（20 mM PBS，pH 7.4，0.1% Triton X-100）清洗4次，除去未结合的示踪剂。使用Centro LB 960发光计（Berthold Technologies GmbH & Co. KG）测量孔结合的化学发光。通过评估相对光单位（RLU）来确定AK1967与相应肽的结合。任何显示出比AK1967的非特异性结合明显更高的RLU信号的肽都被定义为AK1967结合剂。结合和非结合肽的组合分析揭示出AK1967的特定DPP3表位。

使用Octet测定结合亲和力：

实验使用Octet Red96（ForteBio）进行。将AK1967捕获在动力学级抗人Fc抗体（AHC）生物传感器上。然后将负载的生物传感器浸入带GST标签的重组人DPP3的连续稀释液（100、33.3、11.1、3.7 nM）中。观察120秒的结合，然后是180秒的解离。用于所述实验的缓冲液如表6中所描绘。使用1:1结合模型和全局拟合进行动力学分析。

AK1967的结合特异性的Western印迹分析：

将来自人EDTA血液的血细胞清洗（在PBS中3次），在PBS中稀释，并通过重复的冻融循环裂解。血细胞裂解物的总蛋白浓度为250 µg/ml，DPP3浓度为10 µg/ml。对血细胞裂解物的稀释液（1:40、1:80、1:160和1:320）和纯化的重组人His-DPP3的稀释液（31.25-500ng/ml）进行SDS-PAGE和Western印迹。将印迹在1.）阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉的1xPBS-T）、2.）第一抗体溶液（AK1967，1:2.000，在阻断缓冲液中）和3.）HRP标记的第二抗体（山羊抗小鼠IgG抗体，1:1.000，在阻断缓冲液中）中温育。使用Amersham ECL Western印迹检测试剂和Amersham Imager 600 UV（均来自GE Healthcare）检测结合的第二抗体。

DPP3抑制测定：

为了分析AK1967抑制DPP3的能力，如实施例1中所述使用已知程序（Jones等， 1982）进行DPP3活性测定。AK1967的抑制能力被定义为GST-hDPP3活性通过与所述抗体温育而降低的百分比。在图7中的抑制曲线中示出了得到的降低的DPP3活性。

表位作图：

对AK1967结合和不结合的肽的分析表明，DPP3序列INPETG（SEQ ID NO.：3）是AK1967结合的必需表位（参见表6）。

结合亲和力：

AK1967以2.2*10^-9 M的亲和力与重组GST-hDPP3结合（动力学曲线参见图5）。

特异性和抑制潜力：

使用AK1967作为第一抗体在血细胞裂解物中检测到的唯一蛋白质是80 kDa的DPP3（图6）。所述裂解物的总蛋白浓度为250 µg/ml，而估计的DPP3浓度为约10 µg/ml。尽管所述裂解物中存在的非特异性蛋白多25倍，但AK1967也特异性结合并检测DPP3，而不会发生其他非特异性结合。

AK1967在DPP3比活性测定中抑制15 ng/ml DPP3，IC₅₀为约15 ng/ml（图7）。

嵌合化/人源化：

单克隆抗体AK1967（“Procizumab”）具有将DPP3活性抑制70%的能力，被选为可能的治疗性抗体，并且也被用作嵌合化和人源化的模板。

鼠抗体的人源化可以按照下述程序进行：

为了将鼠源抗体人源化，分析所述抗体序列的构架区（FR）与互补决定区（CDR）和抗原的结构相互作用。在结构建模的基础上，选择适合的人来源的FR，并将鼠CDR序列移植到人FR中。可以在CDR或FR的氨基酸序列中引入变异，以重新获得被FR序列的物种切换废除的结构相互作用。这种结构相互作用的恢复可以使用噬菌体展示文库通过随机方法或通过由分子建模指导的定向方法来实现（Almagro和Fransson, 2008. 抗体的人源化 （Humanization of antibodies），Front Biosci. 13:1619-33）。

在上述背景下，可变区可以被连接到任何亚类的恒定区（IgG、IgM、IgE、IgA），或者被连接到仅仅支架、Fab片段、Fv、Fab和F(ab)2。在下面的实施例6和7中，使用了具有IgG2a骨架的鼠抗体变体。对于嵌合化和人源化而言，使用了人IgG1κ骨架。

对于表位结合而言，只有互补决定区（CDR）是重要的。鼠抗DPP3抗体（AK1967；“Procizumab”）的重链和轻链的CDR分别示出在SEQ ID No. 7、SEQ ID No. 8和SEQ ID No.9（对于重链而言）以及SEQ ID No. 10、序列KVS和SEQ ID No. 11（对于轻链而言）中。

抗DPP3抗体（AK1967；“Procizumab”）的测序揭示出根据SEQ ID NO.：12的抗体重链可变区（H链）和根据SEQ ID NO.：13的抗体轻链可变区（L链）。

实施例6 – Procizumab在脓毒症诱导的心力衰竭中的作用

在本实验中，通过监测缩短分数研究了Procizumab注射在脓毒症诱导的心力衰竭大鼠（Rittirsch等，2009）中的作用。

脓毒性休克的CLP模型：

将来自Centre d'élevage Janvier（法国）的雄性Wistar大鼠（2-3月龄，300至400g，组大小参考表8）随机分配到三个组之一。所有动物均腹膜内（i.p.）使用盐酸氯胺酮（90mg/kg）和甲苯噻嗪（9 mg/kg）麻醉。为了诱导多微生物脓毒症，使用稍作修改的Rittirsch方案进行盲肠结扎和穿刺（CLP）。制造腹侧中线切口（1.5 cm）以使盲肠外露。然后在回盲瓣正下方结扎盲肠，并用18号针头穿刺一次。然后将腹腔分两层封闭，然后进行液体复苏（皮下注射3ml/100g体重的生理盐水），并将动物放回笼子。假手术组动物接受了手术，但盲肠未被穿刺。将CLP动物在安慰剂组和治疗性抗体组之间随机分配。

研究设计：

研究流程被描绘在图8中。在CLP或假手术后，允许动物休息20小时，自由取用水和食物。之后，将它们麻醉，实施气管切开术，并铺设动脉和静脉线。在CLP手术后24小时，将AK1967或载体（生理盐水）以5 mg/kg的剂量推注施用，然后以7.5 mg/kg的剂量输注3h。作为安全措施，从t=0直至3 h，对血流动力学进行侵入性连续监测。

在t=0（基线）时，所有CLP动物都处于脓毒性休克状态，并发展出心功能下降（低血压、低缩短分数）。在这个时间点，注射（i.v.）Procizumab或载体（PBS），并开始盐水输注。下面的表（表8）中总结了1个对照组和2个CLP组。在实验结束时，对动物实施安乐死，并收获器官用于后续分析。

侵入性血压：

使用AcqKnowledge系统（BIOPAC Systems，Inc.，USA）获得血液动力学变量。它提供了一种全自动血压分析系统。将导管通过压力传感器连接到BIOPAC系统。

对于所述程序而言，将大鼠麻醉（氯胺酮和甲苯噻嗪）。将动物移至加热垫，使所需体温达到37-37.5℃。将温度反馈探头插入到直肠中。将大鼠以仰卧位放置在手术台上。打开气管，插入导管（16G）用于外部呼吸机，而不损伤颈动脉和迷走神经。将动脉导管插入到右颈动脉中。在结扎前将颈动脉与迷走神经分离开。

通过左颈静脉插入中心静脉导管，允许施用PCZ或PBS。

手术后，在进行血流动力学测量之前，允许动物休息至稳定状态。然后记录基线血压（BP）。在数据收集过程中，停止通过动脉线的盐水输注。

超声心动描记术：

将动物用盐酸氯胺酮麻醉。将胸部剃毛，并将大鼠以卧位放置。

对于经胸超声心动描记术（TTE）检查而言，使用了配备高频（14-MHz）线性探头和10-MHz心脏探头的商业GE Healthcare Vivid 7超声波系统。所有检查均以数字方式记录并存储，以供后续离线分析。

在2 cm的深度处记录灰度图像。在胸骨旁长轴视图中开始二维检查，以测量主动脉瓣环直径和肺动脉直径。M模式也被用于测量左心室（LV）尺寸和评估缩短分数（FS%）。LVFS被计算为LV舒张末期直径- LV收缩末期直径/LV舒张末期直径，并以%为单位表示。因此，舒张末期的时间被定义为在LV的最大直径时。因此，收缩末期被定义为在同一心动周期中的最小直径时。所有参数均手动测量。每次测量对三个心动周期进行平均。

从同一胸骨旁长轴视图，使用脉冲波多普勒记录肺动脉血流。测量肺动脉流出的速度时间积分。

从心尖五腔切面视图，使用脉冲多普勒在二尖瓣尖端水平处记录二尖瓣血流。

结果：

与假手术动物相比，用PBS治疗的脓毒症诱导的心力衰竭大鼠（CLP+PBS）显示出缩短分数减小（图9A）。CLP+PBS组还显示出高死亡率（图9B）。相比之下，向脓毒症诱导的心力衰竭大鼠施用Procizumab改善缩短分数（图9A）并大大降低死亡率（图9B）。

实施例7 – Procizumab对心肾功能的影响

通过监测缩短分数和肾阻力指数，研究了Procizumab在小鼠异丙肾上腺素诱导的心力衰竭中的作用。

小鼠中异丙肾上腺素诱导的心脏应激：

通过每天两次皮下注射300 mg/kg的异丙肾上腺素（一种非选择性β-肾上腺素能激动剂，DL-异丙肾上腺素盐酸盐，Sigma Chemical Co）（ISO）共两天，在3月龄雄性小鼠中诱导急性心力衰竭（Vergaro等，2016）。ISO稀释在0.9% NaCl中进行。将异丙肾上腺素治疗的小鼠随机分为两组（表9），并在第3天进行基线超声心动描记术（Gao等，2011）和肾阻力指数测量（Lubas等，2014；Dewitte等，2012）后，静脉内注射PBS或Procizumab（10 mg/kg）（图10A和B）。

在1小时、6小时和24小时时通过超声心动描记术（Gao等，2011）和肾阻力指数（Lubas等，2014；Dewitte等，2012）评估心功能（图10A和B）。注射载体（PBS）而不是异丙肾上腺素的小鼠组不进行进一步的药理治疗，并作为对照组（表9）。

结果：

向异丙肾上腺素诱导的心力衰竭小鼠应用Procizumab，在施用后的第一小时内恢复了心功能（图11A）。在PCZ注射后6小时，患病小鼠的肾功能显示出显著改善，并且在24小时时与假手术动物的肾功能相当（图11B）。

实施例8 – 脓毒症中的DPP3和器官功能障碍

使用与实施例2中所述相同的研究（AdrenOSS-1）来评估因脓毒症和脓毒性休克而入院的患者中循环DPP3（cDPP3）与器官（例如心血管和肾功能障碍）之间的关联。AdrenOSS-1是一项欧洲前瞻性、观察性、跨国研究（ClinicalTrials.gov NCT02393781），包括583名因脓毒症或脓毒性休克而入住ICU的患者。主要结局（如实施例2中所述）为28天死亡率。次要结局包括由SOFA评分定义的器官衰竭、以血管加压药使用为重点的器官支持以及对肾脏替代疗法的需求。在入住ICU后24小时内和第2天对用于中心实验室的血液进行采样。

为了定量DPP3蛋白浓度（DPP3-LIA），使用了一种最近描述的测定法（Rehfeld等， 2019. JALM 3(6): 943-953）。

所有AdrenOSS-1患者在入院时测得的cDPP3中位数为45.1 ng/mL（四分位距为27.5-68.6）。入院时测得的高DPP3水平与较差的代谢参数、肾功能和心功能以及SOFA评分有关：DPP3水平低于所述中位数的患者的SOFA评分中位数为6（IQR 4-9），与此相比，DPP3水平高于45.1 ng/mL的中位数的患者的SOFA评分中位数为8（IQR 5-11）（图12）。

无论入院时cDPP3的水平如何，24小时后高浓度的cDPP3水平与最差的SOFA评分相关，无论是总体（图13）还是按器官（图14 A-F）。

总之，这些数据表明，在一个大型国际队列脓毒症或脓毒性休克患者中，高水平的cDPP3与生存率和器官功能障碍程度有关。所述研究发现，在入院时cDPP3 < 45.1 ng/ml与短期生存率之间存在显著相关性，并且在脓毒症和脓毒性休克两者中预后截止值为45.1pg/ml。关于器官功能障碍，在cDPP3与ICU入院时的SOFA评分之间存在正相关。更重要的是，在恢复阶段中，cPDPP3水平与ICU入院时看到的器官功能障碍程度之间的关系也是如此。事实上，入院时cDPP3水平高且在第2天显示出向正常cDPP3值下降的患者，更有可能恢复包括心血管、肾脏、肺、肝脏在内的所有器官功能。

实施例9 – 感染冠状病毒（SARS-CoV-2）的患者中的DPP3

对来自12名被诊断为感染冠状病毒（SARS-CoV-2）的患者的血浆样品进行DPP3和其他生物标志物的筛查。如最近所述（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943-953），将分别检测人DPP3的量（LIA）或人DPP3的活性（ECA）的免疫测定法（LIA）或活性测定法（ECA）用于测定患者血浆中的DPP3水平。

表10中总结了各个样品中的DPP3浓度。

DPP3浓度在27至975 ng/ml之间，中位数（IQR）为156（59.5-322.3）ng/ml。与健康受试者相比，DPP3浓度显著升高。对来自5400名正常（健康）受试者（瑞典单中心前瞻性群体研究（MPP-RES））的样品进行了测量：血浆DPP3的中位数（四分位距）为14.5 ng/ml（11.3ng/ml – 19 ng/ml）。

实施例10 – COVID-19患者中的DPP3，用于预后、疗法分层和随访

队列描述：

本研究纳入了21名SARS-CoV-2 PCR结果为阳性并入住ICU的患者。患者特征包括年龄中位数为63岁，76%为男性，体重指数（BMI）中位数为28.6，入院序贯器官衰竭评估（SOFA）评分为5。排除标准为年龄<18岁和妊娠。分析使用实时反转录PCR（RT-PCR）进行。患者的治疗遵循我们ICU中的护理标准，包括机械通气、静脉-静脉ECMO和RRT（如果需要）。

在入院当天和每天采血，直至第7天，用于分析DPP3和标准实验室参数。如最近所述（Rehfeld等，2019. JALM 3(6): 943-953），使用一步发光夹心免疫测定法（LIA）测量EDTA血浆中的DPP3。

结果：

a）基线时的DPP3和系列测量值与疾病严重程度相关

在入住ICU时测得的DPP3与由KDIGO标准所定义的ICU住院期间肾功能恶化有关，0-1期表示肾功能无损伤至轻度损伤和低风险，2-3期表示肾损伤和肾衰竭，并且与0-1期相比，2-3期中的DPP3值明显更高（图15；p = 0.005）。基线时的高DPP3值可与其他临床参数结合使用，以指导肾脏替代疗法的开始。

由于COVID-19阳性患者倾向于在ICU中平均停留21天，因此在ICU住院期间（第3天和第7天）DPP3水平的测量值也与低PaO2/FiO2比率（<150）相关，并因此与严重急性呼吸窘迫综合征（ARDS）相关（假= P/F比率 >150；真= P/F比率 <150）。在COVID-19患者中，在ICU期间DPP3的系列测量值与疾病严重程度相关。在ICU入住第3天（p = 0.02）（图16A）和ICU入住第7天（p = 0.013）（图16B）测量了DPP3水平。

此外，在第3天（图17A，p=0.03）和第7天（图17B，p=0.01）测得的高DPP3值仍然与ICU入住期间的高死亡率有关

b）基线时的DPP3和系列测量值与对器官支持疗法的需求相关

入院时和入住ICU期间的高DPP3值与对器官支持疗法的需求显著相关，特别是血管加压药疗法（第3天；图18）和体外膜肺氧合（ECMO）（第3和第7天；分别参见图19A和B）。

实施例11 – Procizumab用于在脓毒症动物模型中保护心脏

为了评估在脓毒性休克期间抗DPP3抗体（Procizumab）对心脏保护的影响，我们在16头麻醉和机械通气的猪中进行了一项随机、开放标签、对照研究。脓毒性休克通过粪便性腹膜炎诱导。在脓毒性休克发作后一小时，开始进行液体复苏、抗微生物治疗和腹部引流。脓毒症猪被随机分配接受Procizumab（在标准护理的基础上）或标准护理（去甲肾上腺素和液体），以将平均动脉压维持在65至75 mmHg之间12 h（图20）。实验中使用了8头雌性猪和8头雄性猪，在治疗组和标准护理组之间性别得到了适当的平衡。

结果显示，在整个输注时间内Procizumab可以抑制血流中的DPP3活性（图21）。最后，与标准护理组相比，Procizumab具有心脏保护效应。

这种效应主要通过比较心脏炎症来观察，通过两个组之间促炎性细胞因子IL-6的心肌mRNA表达来评估（图22）。简而言之，使用RNeasy Mini试剂盒（QIAGEN，Germany），从在-80℃下储存在RNA later溶液（Invitrogen™，RNA later™稳定化溶液，ThermoFisherScientific，MA，USA）中的快速冷冻的左心室组织提取总RNA。按照制造商的说明，使用随机六聚体引物和Superscript II反转录酶（Invitrogen，Carlsbad，USA）进行反转录。对于RTq-PCR而言，使用Primer3程序设计用于检测野猪（sus scrofa）IL-6的正义和反义引物。对于每个样品，扩增反应使用iCycler系统（BioRad Laboratories），使用SYBRGreen PCR主混合物（Quanta Biosciences，Gaithersburg，MD）、特定引物和稀释的模板互补DNA进行一式三份。通过使用看家基因（β-肌动蛋白）进行归一化，使用比较2-ΔΔCt方法实现了相对定量。结果被表示为高于被任意固定为1的假手术组左心室相对mRNA表达的平均值的相对倍数增加。

尽管标准护理组显示出高的IL-6心肌表达水平，但Procizumab治疗的动物的IL-6表达水平正常，与没有脓毒性休克（仅麻醉、插管和通气）的假手术动物相当（图22）。此外，在基线和H12时评估了高敏感性肌钙蛋白I（hsTnI）血液水平，以评估心肌损伤（图23）。在治疗组和标准护理组之间，基线时的hsTnI水平相近，显示出两组之间没有差异。然而，在H12时间点，Procizumab组中的hsTnI水平仍与基线相近，并且与标准护理组相比明显更低（图23）。

通过去甲肾上腺素需求（图24）和心输出量指数（图25），在两个组中也观察到心脏 保护作用。从第1小时开始，每小时记录以g/kg/min为单位的去甲肾上腺素剂量。尽管标准 护理组具有明显高的去甲肾上腺素需求，但Procizumab治疗的动物被输注了所需的最小去 甲肾上腺素剂量以达到相同的65 mmHg的目标平均动脉压（图24）。H4时治疗组与标准护理 组之间的差异变得显著，H10后（去甲肾上腺素输注开始后10小时），两个组的分歧甚至更大 （图24）。

最后，我们还通过肺动脉导管评估了心输出量指数（图25）。与标准护理组相比，在Procizumab治疗的动物中心输出量指数在所有时间点（H4至H12）始终较低，并与基线水平相当（图25）。指数化心脏指数显示，去甲肾上腺素剂量越高，心输出量越高，反映了β1受体的激活和心肌组织耗氧量的增加，从而导致氧化应激和心肌损伤的增加。因此，Procizumab改善血流动力学稳定性，保护心肌免于炎症，并防止使用高剂量的去甲肾上腺素，从而减轻心脏应激。这些结果表明，Procizumab具有心肌保护作用，并在脓毒性休克演变过程中防止心肌损伤。

序列

SEQ ID No. 1 – hDPP3 aa 1-737

MADTQYILPNDIGVSSLDCREAFRLLSPTERLYAYHLSRAAWYGGLAVLLQTSPEAPYIYALLSRLFRAQDPDQLRQHALAEGLTEEEYQAFLVYAAGVYSNMGNYKSFGDTKFVPNLPKEKLERVILGSEAAQQHPEEVRGLWQTCGELMFSLEPRLRHLGLGKEGITTYFSGNCTMEDAKLAQDFLDSQNLSAYNTRLFKEVDGEGKPYYEVRLASVLGSEPSLDSEVTSKLKSYEFRGSPFQVTRGDYAPILQKVVEQLEKAKAYAANSHQGQMLAQYIESFTQGSIEAHKRGSRFWIQDKGPIVESYIGFIESYRDPFGSRGEFEGFVAVVNKAMSAKFERLVASAEQLLKELPWPPTFEKDKFLTPDFTSLDVLTFAGSGIPAGINIPNYDDLRQTEGFKNVSLGNVLAVAYATQREKLTFLEEDDKDLYILWKGPSFDVQVGLHELLGHGSGKLFVQDEKGAFNFDQETVINPETGEQIQSWYRSGETWDSKFSTIASSYEECRAESVGLYLCLHPQVLEIFGFEGADAEDVIYVNWLNMVRAGLLALEFYTPEAFNWRQAHMQARFVILRVLLEAGEGLVTITPTTGSDGRPDARVRLDRSKIRSVGKPALERFLRRLQVLKSTGDVAGGRALYEGYATVTDAPPECFLTLRDTVLLRKESRKLIVQPNTRLEGSDVQLLEYEASAAGLIRSFSERFPEDGPELEEILTQLATADARFWKGPSEAPSGQA

SEQ ID No. 2 – hDPP3 aa 474-493（N-Cys） – 带有额外的N-端半胱氨酸的免疫肽

CETVINPETGEQIQSWYRSGE

SEQ ID No. 3 – hDPP3 aa 477-482 – AK1967的表位

INPETG

SEQ ID No. 4 – hDPP3 aa 480-483

ETGE

SEQ ID No. 5 – 鼠AK1967重链中的可变区

QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMSVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWNDNKSYNPALKSRLTISRDTSNNQVFLKIASVVTADTGTYFCARNYSYDYWGQGTTLTVSS

SEQ ID No. 6 – 鼠AK1967轻链中的可变区

DVVVTQTPLSLSVSLGDPASISCRSSRSLVHSIGSTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK

SEQ ID No. 7 – 鼠AK1967重链中的CDR1

GFSLSTSGMS

SEQ ID No. 8 – 鼠AK1967重链中的CDR2

IWWNDNK

SEQ ID No. 9 – 鼠AK1967重链中的CDR3

ARNYSYDY

SEQ ID No. 10 – 鼠AK1967轻链中的CDR1

RSLVHSIGSTY

鼠AK1967轻链中的CDR2

KVS

SEQ ID No. 11 - 鼠AK1967轻链中的CDR3

SQSTHVPWT

SEQ ID No. 12 – 人源化AK1967 – 重链序列（IgG1κ骨架）

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLAHIWWNDNKSYNPALKSRLTITRDTSKNQVVLTMTNMDPVDTGTYYCARNYSYDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID No. 13 – 人源化AK1967 – 轻链序列（IgG1κ骨架）

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSRSLVHSIGSTYLYWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Claims (16)

1.一种用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，以保护心肌和/或预防心肌损伤。

2.根据权利要求1所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述血压下降是平均动脉压（MAP）< 65 mmHg，更优选地< 60 mmHg，甚至更优选地<55 mmHg，最优选地< 50 mmHg。

3.根据权利要求1和2所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述患者在所述患者的体液样品中正具有高于（预定）阈值的DPP3水平。

4.根据权利要求3所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述受试者的体液样品中DPP3水平的所述预定阈值在20至120 ng/mL之间，更优选地在30至80 ng/mL之间，甚至更优选地在40至60 ng/mL之间，最优选地所述阈值为50 ng/mL。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述样品是选自包含全血、血浆或血清的组的体液样品。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述心肌损伤的特征在于血液心肌肌钙蛋白（cTn）水平高于阈值，促炎性白细胞介素-6（IL-6）的心肌表达增加，和/或需要血管加压药来维持血压和心输出量。

7.根据权利要求6所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述心肌肌钙蛋白（cTn）是心肌肌钙蛋白T（cTnT）或心肌肌钙蛋白I（cTnI）。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述患者患有严重传染病、脓毒症、肺栓塞、肺动脉高压、急性冠状动脉综合征（包括不稳定型心绞痛、ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI））、任何类型的休克（包括心源性休克、脓毒性休克或过敏性休克）、心脏骤停、急性肝衰竭和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述DPP3活性抑制剂选自包含小分子、抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架的组。

10.根据权利要求9所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 1中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

11.根据权利要求9和10所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抑制剂是结合SEQ ID No. 2中包含的长度为至少4或5个氨基酸的表位的抗DPP3抗体或抗DPP3抗体片段或抗DPP3非Ig支架。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体是单克隆抗体或单克隆抗体片段。

13.根据权利要求9至12中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：7、SEQ ID NO.：8和/或SEQ ID NO.：9

并且所述轻链中的互补决定区（CDR）包含下述序列：

SEQ ID NO.：10、KVS和/或SEQ ID NO.：11。

14.根据权利要求9至13中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述单克隆抗体或抗体片段是人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体片段。

15.根据权利要求9至14中任一项所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述抗体或抗体片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述重链包含序列SEQ ID NO.：12，并且其中所述轻链包含序列SEQ ID NO.：13。

16.根据权利要求9所述的用于血压下降的危重病患者中的疗法或干预的DPP3活性抑制剂，其中所述小分子选自包含spinorphin、tynorphin、propioxatin A和B、fluostatin A和B、苯并咪唑或其衍生物或类似物的组。