CN120757561A - 一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物及其应用 - Google Patents
一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物及其应用Info
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Abstract
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用。拼合物为式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物。拼合物在制备和抗肿瘤领域的应用；或抗紫杉醇耐药肿瘤药物中的应用；或抗奥西替尼耐药肿瘤中的应用。本发明的拼合物在细胞内活性优于Psammaplin A和依托泊苷，与紫杉醇和奥西替尼无交叉耐药性。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用。
背景技术
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂通过提高染色质中组蛋白乙酰化程度，调控细胞凋亡、分化和抑制肿瘤细胞增值。Psammaplin A(PsA)是从海绵Psammaplysilla sp.中分离得到的天然产物。它是由二硫键连接，具有溴代酪氨酸和半胱氨酸片段的对称化合物，选择性抑制Class I HDAC酶活性。PsA其发挥活性需要在谷胱甘肽(GSH)催化下，断裂二硫键，变成2分子的rPsA，发挥酶抑制活性。PsA对血液肿瘤和实体瘤均有抑制活性。HDAC抑制剂通常与其他抗肿瘤药物联合，具有协同抗肿瘤疗效。
Topoisomerase因其在细胞增殖、分化、存活等过程中具有重要作用，是抗肿瘤药物的主要靶点之一。拓扑异构酶抑制剂从其催化功能、反应机制、氨基酸序列和结构等方面将其分为I类(Topo I)和II类(Topo II)。Topo II为抗肿瘤药物主要靶点之一，已经开发出安沙克林(Amscrine)、依托泊苷(Etoposide)、多柔比星(Doxorubicin)等，临床上应用于治疗血液肿瘤和实体瘤患者。鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是鬼臼属植物的一种活性成分，具有多种抗肿瘤活性，作为Topo II抑制剂被深入研究，但由于其毒性较强，限制了其应用。将鬼臼毒素的结构经结构修饰后的依托泊苷、替尼泊苷毒性较鬼臼毒素低，在多种肿瘤化疗过程中被用作一线药物。
发明内容
本发明旨在提供一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物及其在制备治疗肿瘤药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物，拼合物为式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物，
式中，
n为1-3整数
R选自H或C1-C6烷基；
X选自N、O或Y为-S-S-、-CONH-或-COS-。
优选，所述拼合物为式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物，式中，n为2或3；
R选自H、甲基、乙基或丙基；
X选自N、O或Y为-S-S-、-CONH-或-COS-。
进一步优选，所述拼合物为
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}二硫烷基)丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FA-1)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FB-1)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-(4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-2)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-3)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FB-4)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺]乙基}-4-(4-O-去甲基-4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-5)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-O-脱甲基-4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-6)；
(E)-N1-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-N4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}琥珀酰胺(FC-1)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}氨基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FC-2)。
一种所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的应用。
一种所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常表达相关的疾病药物中的应用。
一种所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗肺癌、乳腺癌或白血病药物中的应用。
所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗奥西替尼耐药非肺癌、紫杉醇耐药的肺癌药物中的应用。
本发明化合物可用于制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂，用于制备治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常表达相关的疾病，如各种癌症。
通过体外活性筛选及体内药效学研究，我们发现本发明化合物具有抗肿瘤活性，因此本发明化合物可以用于制备治疗和/或预防各种癌症的药物，如肺、乳腺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、胰腺、卵巢等癌症和白血病。
本发明活性化合物可作为唯一抗癌药物使用，或者与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
一种药物组合物，组合物含所述的式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物中的一种或几种。
一种所述的药物组合物的应用，所述组合物在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的应用。
上述化合物或组合物还可进一步与药学上可接受的赋形剂混合，获得相应剂型。所述药学上可接受的赋形剂是指任何可用于药物领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的化合物可以与其他活性成分组合使用，只要他们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
配制成若干种剂型，其中含有药物领域中常用的一些赋形剂，例如，口服制剂(如片剂，胶囊剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或者混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(例如软膏或溶液)。
载体是药物领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
本发明活性化合物可作为唯一抗癌药物使用，或者与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
本发明式(I)所示化合物按照如下路线的方法制备目标化合物FA-1：
按照本发明的式1的化合物，按照如下路线的方法制备目标化合物FB-1、FB-2、FB-3、FB-4、FB-5、FB-6、FC-1、FC-2，各取代基如发明内容部分所定义。
具体实施方式
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
下面的合成路线描述了本发明的式Ⅰ化合物的制备，所有的原料都是通过这些路线中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。
本发明的全部最终化合物都是通过这些路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。
本发明将rPsA与鬼臼毒素通过二硫键、硫酯键及酰胺键相连，合成一系列拼合物，同时发挥HDAC/Topo II双靶点抑制活性。利用耐药肿瘤细胞内表达更高水平GSH的特点，克服耐药，进而作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂或拓扑异构酶抑制剂在预防和/或治疗肿瘤及耐药肿瘤中的应用。
实施例1：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}二硫烷基)丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FA-1)的制备
步骤A：4-溴丁酸-4-鬼臼毒素酯(A1)的制备
将1.0g(2.4mmol)鬼臼毒素(化合物PPT)置于50mL茄形瓶中，加入25mL DCM，在0℃下，加入0.36g(2.7mmol)HOBt和0.48mL(2.9mmol)4-溴丁酸，搅拌5min，加入0.51g(2.7mmol)EDCI和0.89g(7.2mmol)DMAP，搅拌10min，转移至室温反应10h。反应完全后，将反应液倒入4倍量水中，用DCM萃取(20mL×3)，合并有机层，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(20mL×1)有机层，浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/50，V/V)，得0.61g化合物A1，白色固体，收率为44.9％。
步骤B：4-(乙酰硫基)丁酸-4-鬼臼毒素酯(A2)的制备
将0.5g(0.89mmol)化合物A1溶于25mL EtOH中，升温至60℃，加入硫代乙酸钾0.15g(1.3mmol)，反应5h，旋蒸除EtOH，残余物用20mL DCM溶解，水洗(10mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(10mL×1)有机相，浓缩后得0.42g目标化合物A2，白色固体，收率为84.2％，不经纯化直接用于下一步。
步骤C：4-(吡啶-2-基二硫烷基)丁酸-4-鬼臼毒素酯(A3)的制备
将0.5g(0.90mmol)化合物A2溶10mL DMF中，加入2,2'-二硫吡啶0.30g(1.3mmol)，N2保护，室温下缓慢滴加乙胺70％水溶液0.5mL，反应4h。反应完成后，将反应液倒入冰水中，抽滤，干燥后得0.50g目标化合物粗品A3，白色固体，收率为89.6％，不经纯化直接用于下一步。
步骤D：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}二硫烷基)丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FA-1)的制备
将0.5g(0.80mmol)化合物A3置于溶于20mL DCM中，室温滴加10mL无水乙醇溶解的rPsA0.29g(0.88mmol)，滴毕，反应6h。蒸干反应液，残余物用50mL DCM溶解，水洗(10mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(10mL×1)有机相，有机相浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/70，V/V)，得0.23g目标化合物FA-1，白色固体，收率为34.2％。M.p.：81.6-83.4℃；LC-MS：869.3[M+Na]+,845.0[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.08(1H,t,J＝6.0Hz),7.28(1H,d,J＝1.8Hz),7.01(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝8.4Hz),6.86(1H,s),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.58(1H,s),6.53(2H,s),5.99(2H,dd,J 1＝1.2Hz,J 2＝2.4Hz),5.69(1H,d,J＝8.4Hz),4.45-4.42(1H,m),4.30-4.27(2H,m),3.72(6H,s),3.68(2H,s),3.64(3H,s),3.61-3.59(1H,m),3.43-3.40(2H,m),3.03-2.99(1H,m),2.79(2H,t,J＝7.2Hz),2.67(2H,t,J＝7.2Hz),2.36-2.27(2H,m),1.84-1.79(2H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ:177.8,172.6,163.7,153.2,152.8,152.3,147.9,146.8,138.9,136.6,133.2,132.7,129.6,129.3,127.2,116.6,109.5,109.3,108.4,106.2,101.7,72.6,71.0,60.4,56.4,44.2,43.9,40.5,38.7,37.3,37.2,32.4,28.1,24.2。
实施例2：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FB-1)的制备
步骤A：4-鬼臼毒素-4-氧代丁酸(F3-1)的制备
将1.0g(2.4mmol)PPT溶10mL吡啶中，加入0.15g(1.2mmol)DMAP，0.29g(2.9mmol)丁二酸酐，110℃反应1.2h，然后将反应液倒入4倍量的水中，用2N HCl溶液调节pH至3-4，析出白色固体，抽滤，干燥后得1.18g粗品F3-1，白色固体，收率为94.8％。
步骤B：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FB-1)的制备
将0.5g(0.97mmol)F3-1溶于25mL THF，在0℃下，加入0.14g(1.1mmol)HOBt和0.36mL(1.1mmol)rPsA，搅拌5min，加入0.21g(1.1mmol)EDCI和0.36g(2.9mmol)DMAP，搅拌10min，转移至室温，反应10h。将反应液倒入4倍量水中，用DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(20mL×1)有机相，浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/70，V/V)，得0.30g目标化合物FB-1，白色固体，收率为37.4％。M.p.：94.6-96.5℃；LC-MS：851.2[M+Na]+,827.1[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.10(1H,t,J＝6.0Hz),7.28(1H,d,J＝2.4Hz),7.01(1H,dd,J 1＝2.4Hz,J 2＝8.4Hz),6.90(1H,s),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.60(1H,s),6.33(2H,s),6.01(2H,d,J＝9.0Hz),5.90(1H,d,J＝9.0Hz),4.56(1H,d,J＝4.8Hz),4.31(1H,t,J＝7.8Hz),4.17-4.13(1H,m),3.68(2H,s),3.65(6H,s),3.63(2H,s),3.62(3H,s),3.39-3.35(1H,m),3.30-3.27(2H,m),2.97(2H,t,J＝6.6Hz),2.92(2H,t,J＝6.6Hz),2.77-2.72(1H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：198.1,174.4,172.5,163.8,152.8,152.5,152.3,147.8,147.4,136.9,136.1,133.2,132.7,129.6,129.3,129.1,116.6,109.8,109.3,108.5,107.4,101.9,73.3,71.1,60.4,56.2,44.5,43.3,38.8,38.6,29.5,28.4,28.1。
实施例3：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-(4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-2)的制备
步骤A：2-氯-N-4-脱氧鬼臼毒素乙酰胺(F1-2)的制备
将1.0g(2.4mmol)化合物PPT溶于8mL氯乙腈中，滴加催化量的浓硫酸，室温搅拌3h后终止反应，将反应液蒸干，少量甲醇溶解，倒入水中析出白色固体，抽滤得1.1g粗产品F1-2，白色固体，收率为95.7％。
步骤B：4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素(F2-2)的制备
将1.0g(2.0mmol)化合物F1-2溶于20mL冰醋酸中，加0.23g(0.31mmol)硫脲，100℃反应8h，将反应液倒入4倍量的冷水中，用2N NaOH溶液调节pH至7-8，用AcOEt萃取(30mL×3)，合并有机相，水洗(30mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(30mL×1)有机相，浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/70，V/V)，得0.48g目标化合物F2-2，白色固体，收率为56.8％。
步骤C：4-(4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁酸(F3-2)的制备
将0.5g(1.2mmol)化合物F2-2溶于25mL DCM中，加入0.074g(0.61mmol)DMAP，0.18g(1.8mmol)丁二酸酐，室温反应3h。用0.5N HCl洗(20mL)，水洗(30mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(30mL×1)，浓缩后得0.57g目标化合物F3-2，白色固体，收率为91.3％。
步骤D：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-(4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-2)的制备
以F3-2为原料，按照FB-1的合成方法，得目标化合物FB-2，白色固体，收率为32.8％。M.p.：113.7-116.8℃；LC-MS：850.1[M+Na]+；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.36(1H,s),8.08(1H,t,J＝6.0Hz),7.28(1H,d,J＝1.8Hz),7.01(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝8.4Hz),6.83-6.82(2H,m),6.46(1H,s),6.33(2H,s),5.99-5.95(2H,m),4.23(1H,s),4.17(1H,s),4.09-4.06(1H,m),4.02-4.00(1H,m),3.69-3.62(12H,m),3.30-3.25(2H,m),2.96-2.93(2H,m),2.80-2.77(3H,m),2.56-2.53(2H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：197.7,177.0,171.8,163.8,153.2,152.8,152.2,147.2,145.7,140.7,136.7,135.8,133.2,129.6,129.3,128.8,116.6,111.6,109.3,107.4,106.4,101.4,64.0,60.4,56.4,55.4,50.3,45.9,41.9,38.6,38.6,29.1,28.4,28.1。
实施例4：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-3)的制备
步骤A：4-叠氮基-4-脱氧鬼臼毒素(F1-3)的制备
将1.0g(2.4mmol)鬼臼毒素溶于50mL CHCl3中，加入0.31g(4.8mmol)叠氮化钠，滴加0.5mL的CF3COOH，搅拌1h后再加入1.5mL的CF3COOH，反应3h，将反应液倒入四倍量的饱和碳酸氢钠溶液中，用CHCl3(20mL×2)萃取，合并有机相，水洗(10mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(10mL×1)有机相，蒸干得1.0g粗产品F1-3，白色固体，收率为94.3％。
步骤B：[1-(4-脱氧鬼臼毒素)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲胺(F2-3)的制备
将1.0g(2.3mmol)化合物F1-3溶于50mL THF/H2O/isopropanol(3:2:1)混合溶液中，然后加入0.28g(1.1mmol)硫酸铜，0.74g(2.5mmol)柠檬酸钠，0.18mL(2.7mmol)炔丙胺，45℃反应10h后，加入30mL水终止反应，用AcOEt萃取(30mL×3)，合并有机相，水洗(30mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(30mL×1)有机相，浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/70，V/V)，得0.53g目标化合物F2-3，白色固体，收率为47.1％。
步骤C：4-({[1-(4-脱氧鬼臼毒素)-1H-1,2,3-三唑-4-基]甲基}氨基)-4-氧代丁酸(F3-3)制备
以F2-3为原料，按照F3-2的合成方法，得目标化合物F3-3，白色固体，收率为93.2％。
步骤D：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-3)的制备
以F3-3为原料，按照FB-1的合成方法，得目标化合物FB-3，白色固体，收率为30.1％。M.p.：123.4-125.2℃；LC-MS：931.1[M+Na]+,906.8[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.30(1H,t,J＝6.6Hz),8.08(1H,t,J＝6.0Hz),7.82(1H,s),7.28(1H,d,J＝2.4Hz),7.01(1H,dd,J 1＝2.4Hz,J 2＝8.4Hz),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.75(1H,s),6.68(1H,s),6.32(2H,s),6.24(1H,d,J＝5.4Hz),6.01(1H,s),6.01(1H,s),4.74(1H,d,J＝5.4Hz),4.37(1H,t,J＝7.8Hz),4.29(2H,d,J＝5.4Hz),3.68(2H,s),3.67(6H,s),3.63(3H,s),3.47-3.44(1H,m),3.31-3.22(3H,m),2.97-2.93(3H,m),2.80(2H,t,J＝6.6Hz),2.41(2H,t,J＝6.6Hz)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：198.1,174.0,170.6,163.8,152.8,152.6,152.3,148.6,147.4,145.0,137.0,135.7,133.3,133.2,129.6,129.3,126.5,124.1,116.6,110.3,109.3,109.2,108.6,102.1,67.6,60.4,57.8,56.3,55.4,43.4,41.2,39.2,37.0,34.8,30.4,28.4,28.2。
实施例5：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FB-4)的制备
以脱甲基鬼臼毒素为原料，按实施例2的方法制备FB-4。
M.p.：94.6-97.3℃；LC-MS：837.0[M+Na]+,812.8[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.27(1H,s),8.09(1H,t,J＝6.0Hz),7.28(1H,d,J＝2.4Hz),7.01
(1H,dd,J 1＝2.4Hz,J 2＝8.4Hz),6.85(1H,s),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.60(1H,s),6.22(2H,s),6.04(1H,d,J＝3.6Hz),6.03(1H,s),5.99(1H,s),4.56(1H,d,J＝5.4Hz),4.28(1H,t,J＝7.8Hz),3.88(1H,dd,J 1＝8.4Hz,J 2＝10.8Hz),3.68(2H,s),3.63(6H,s),3.29-3.26(2H,m),3.22-3.19(1H,m),3.05-3.00(1H,m),2.95(2H,t,J＝6.6Hz),2.91-2.87(2H,m),2.73-2.68(1H,m),2.67-2.60(1H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：198.0,174.6,171.9,163.8,152.8,152.3,148.5,147.6,147.0,135.2,133.8,133.2,130.1,129.6,129.3,128.2,116.6,110.1,109.9,109.3,108.8,101.9,68.8,67.7,56.5,55.4,43.3,41.2,38.6,36.9,29.3,28.4,28.2。
实施例6：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺]乙基}-4-(4-O-去甲基-4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-5)的制备
以脱甲基鬼臼毒素为原料，按实施例3的方法制备FB-5。M.p.：113.7-115.3℃；LC-MS：836.0[M+Na]+；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.33(1H,d,J＝8.4Hz),8.25(1H,s),8.10(1H,t,J＝6.0Hz),7.29(1H,d,J＝1.8Hz),7.01(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝8.4Hz),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.76(1H,s),6.53(1H,s),6.25(2H,s),6.00(1H,d,J＝1.2Hz),5.97(1H,d,J＝1.2Hz),5.16(1H,dd,J 1＝4.8Hz,J 2＝8.4Hz),4.50(1H,d,J＝5.4Hz),4.25(1H,t,J＝8.4Hz),3.78(1H,dd,J 1＝8.4Hz,J 2＝10.8Hz),3.68(2H,s),3.63(6H,s),3.30-3.27(2H,m),3.18-3.13(1H,m),2.98-2.95(2H,m),2.92-2.82(3H,m),2.49-2.40(2H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：198.1,174.9,170.6,163.7,152.7,152.2,147.5,146.9,135.1,133.1,132.5,130.8,130.5,130.0,129.5,129.2,116.5,109.7,109.4,109.2,108.8,101.6,68.7,56.4,55.3,47.1,43.3,41.3,39.2,38.6,36.9,30.4,28.3。
实施例7：(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-O-脱甲基-4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-6)的制备
以脱甲基鬼臼毒素为原料，按照实施例4的合成方法，得目标化合物FB-6。M.p.：129.2-131.1℃；LC-MS：917.0[M+Na]+,892.8[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.03(1H,s),8.31(1H,s),8.29(1H,t,J＝5.4Hz),8.08(1H,t,J＝6.0Hz),7.81(1H,s),7.28(1H,d,J＝1.8Hz),7.01(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝7.8Hz),6.83(1H,d,J＝7.8Hz),6.73(1H,s),6.67(1H,s),6.28(2H,s),6.04(1H,s),6.00(1H,s),4.69(1H,d,J＝4.8Hz),4.36(1H,t,J＝7.8Hz),4.29(2H,d,J＝5.4Hz),4.10-4.07(1H,m),3.68(2H,s),3.65(6H,s),3.43-3.40(1H,m),3.30-3.28(2H,m),3.25-3.23(1H,m),2.97-2.93(3H,m),2.80(2H,t,J＝7.2Hz),2.41(2H,t,J＝6.6Hz)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：198.1,174.0,170.5,163.7,152.7,152.2,148.5,147.6,147.2,144.9,135.3,133.6,133.1,130.0,129.5,129.1,126.4,124.0,116.5,110.2,109.2,109.1,108.8,102.0,67.5,57.8,56.4,49.0,43.1,41.3,39.1,38.6,36.8,34.7,30.3,28.3。
实施例8：(E)-N1-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-N4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}琥珀酰胺(FC-1)的制备
将0.5g(0.84mmol)F3-3溶于25mL THF，在0℃下，加入0.13g(0.93mmol)HOBt和0.29g(0.93mmol)(E)-N-(2-氨基乙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺，搅拌5min，加入0.20g(0.93mmol)EDCI和0.43mL(2.5mmol)DIEA，搅拌十分钟，转移至室温，反应10h。将反应液倒入4倍量水中，用DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，水洗(20mL×2)，饱和氯化钠水溶液洗涤(20mL×1)有机相，浓缩后的粗品经柱层析分离纯化(200～300目硅胶，MeOH/DCM＝1/70，V/V)，得0.24g目标化合物FC-1，白色固体，收率为32.6％。M.p.：89.4-92.2℃；LC-MS：914.1[M+Na]+,890.0[M-H]-；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.84(1H,s),10.02(1H,s),8.23(1H,t,J＝5.4Hz),7.97(1H,t,J＝6.0Hz),7.91(1H,t,J＝5.4Hz),7.83(1H,s),7.30(1H,d,J＝1.8Hz),7.01(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝8.4Hz),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.75(1H,s),6.68(1H,s),6.32(2H,s),6.24(1H,d,J＝5.4Hz),6.04(1H,s),6.01(1H,s),4.56(1H,t,J＝5.4Hz),4.37(1H,t,J＝7.8Hz),4.29(2H,d,J＝5.4Hz),3.68(2H,s),3.67(6H,s),3.63(3H,s),3.48-3.45(1H,m),3.29-3.24(1H,m),3.23-3.17(2H,m),3.13-3.09(2H,m),2.96-2.93(1H,m),2.31(4H,t,J＝3.6Hz)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：173.9,172.0,171.7,163.7,152.7,152.5,152.1,148.5,147.3,145.2,136.9,135.6,133.2,133.2,129.5,129.2,126.4,123.9,116.5,110.2,109.2,109.1,108.5,102.0,60.3,57.7,56.2,55.3,43.3,41.1,40.4,39.1,38.7,36.9,34.6,31.0,28.1。
实施例9：(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}氨基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FC-2)的制备
以F3-4为原料，按照FC-1的合成方法，得目标化合物FC-2，白色固体，收率为30.1％。M.p.：95.1-97.4℃；LC-MS：820.20[M+Na]+；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.82(1H,s),10.02(1H,s),8.27(1H,s),7.96(2H,t,J＝6.0Hz),7.30(1H,d,J＝1.8Hz),7.02(1H,dd,J 1＝1.8Hz,J 2＝8.4Hz),6.86(1H,s),6.83(1H,d,J＝8.4Hz),6.55(1H,s),6.22(2H,s),6.03(2H,t,J＝1.8Hz),5.99(1H,d,J＝6.6Hz),4.56(1H,d,J＝5.4Hz),4.27-4.25(1H,m),3.93(1H,dd,J 1＝8.4Hz,J 2＝10.8Hz),3.68(2H,s),3.63(6H,s),3.20-3.15(3H,m),3.11-3.08(2H,m),3.04-2.98(1H,m),2.61-2.52(2H,m),2.38-2.36(2H,m)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ：174.5,172.6,171.4,163.7,152.7,152.1,148.4,147.5,146.9,135.1,133.7,133.2,130.0,129.5,129.2,128.3,116.5,110.0,109.8,109.2,108.7,101.8,68.3,67.7,56.4,43.2,41.1,39.0,38.7,36.8,30.1,28.1,22.8。
实施例10：发明产物的药理作用研究:
实验设阳性对照组(依托泊苷(Etoposide))、PsA和rPsA。HDAC1、HDAC2、HDAC3及HDAC6蛋白(BPS Bioscience,USA)为亚型酶源。所有反应均在96孔板中进行。反应缓冲液包含25mM Tris HCl(pH8.0)，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM MgCl2及0.1mg/mL BSA。FA-1+TCEP避光涡旋混匀20分钟后代用。其余梯度浓度的上述实施例以及对照化合物溶液(5μL)及各酶(5μL)室温预孵育15min，随后加入荧光底物Boc-Lys(Ac)-AMC(5μL)起始反应，于37℃孵育60min。最后向体系中加入含Trypsin及SAHA的终止缓冲液(25μL)，继续于37℃孵育10min。以激发波长355nm，发射波长460nm，测量荧光强度(Thermo Scientific VarioskanFlash Station)。以GraphPad计算IC50。目标化合物对HDAC的抑制活性见表1。
抗肿瘤细胞增殖的体外抑制活性实验，血液肿瘤细胞选用急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞，B细胞淋巴瘤Jeko-1和Raji细胞(Jurkat、Raji细胞均来源于西奈山医学院[2]赠与，Jeko-1细胞来源于中国科学院细胞库，目录号：TCHu194)。
采用台盼蓝染色法，对所得的目标化合物进行了白血病细胞Jurkat的抗肿瘤活性的测试。Jurkat培养于RPMI1640培养基，且培养基中添加10％FBS，添加双抗(100units/mL青霉素G及100ng/mL链霉素)，丙酮酸钠，葡萄糖。细胞培养于恒温培养箱(5％CO2,37℃,Thermo/Forma Scientific)。将10×104个白血病细胞Jurkat接种于24孔板中，然后加入各浓度受试药。培养72h后，用1ml枪头悬浮细胞，取50μl细胞悬液加入含有50μl 0.4％台盼蓝的EP管中，染色2分钟。取10μl细胞染色液打入血细胞计数板和盖玻片之间，在×10倍物镜下计数细胞。分别计数总细胞数和死细胞数。计算细胞生长抑制率，然后以GraphPad计算IC50。生长抑制率＝(1-药物组细胞数/对照组细胞数)×100％。
实体瘤选取肺癌细胞A549细胞，紫杉醇耐药A549/T细胞(来源于沈阳药科大学吴英良教授课题组赠与，相关细胞已发表文献[3])，PC-9细胞、奥西替尼耐药PC-9细胞(PC-9/AR)(来源于孙世勇教授赠与，见已发表论文[4])，结肠癌HCT116细胞(购于中国科学院细胞库，目录号：TCHu 99)，和乳腺癌MCF-7细胞(来源于美国西奈山医学院赠与，已发表相关论文[5])。
将上述实体瘤细胞以3500个细胞/孔的数量接种于96孔板中。过夜孵育后，加入50μL体积，终浓度为10mM NAC预处理4小时，向各孔中加入50μL不同浓度(0.15625-2.5μM)的PsA，孵育96h后，每孔加入50μL(2mg/mL)四甲基偶氮唑蓝(MTT)溶液，37℃孵育4h。吸出培养基，将细胞溶于200μL DMSO中。使用酶标仪测定570nm处的吸光度。用GraphPad Prism5计算生长抑制率IC50。
实验结果见表1、2、3。
表1目标化合物的体外HDAC1、2、3、6酶抑制活性结果
由表1可知，拼合物均保持了对HDAC1、HDAC 2、HDAC 3、或HDAC 6的抑制活性。TCEP为二硫键还原剂，可在体外断开二硫键，TCEP本身无HDAC抑制活性，将TCEP与FA-1按照1:1.5的摩尔比例混合，避光涡旋混匀20分钟(方法见已发表的文章[1])，TCEP可在体外将FA-1的二硫键断开，断开二硫键后FA-1显示出HDAC抑制活性，未断裂FA-1的二硫键则无HDAC抑制活性。通过其他化学键连接的拼合物则不需要TCEP预处理，则显示出HDAC抑制活性。
表2目标化合物对Jurkat细胞的抑制活性
表2结果显示拼合物对Jurkat细胞具有抑制活性，其中FA-1和FB-1抑制活性好于PsA和Etoposide。
表3FA-1对其他肿瘤细胞的抑制活性
表3显示拼合物FA-1对多种肿瘤细胞均具有抑制活性，对紫杉醇耐药细胞及奥西替尼耐药肿瘤细胞均敏感。
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[2]ZHU X H,SHEN Y L,JING Y K,et al.Apoptosis and growth inhibition inmalignant lymphocytes after treatment with arsenic trioxide at clinicallyachievable concentrations[J].Journal of the National Cancer Institute,1999,91(9):772-8.
[3]YANG J,SONG D,LI B,et al.Replacing the tropolonic methoxyl groupof colchicine with methylamino increases tubulin binding affinity withimproved therapeutic index and overcomes paclitaxel cross-resistance[J].DrugResist Updat,2023,68(100951.
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Claims (10)
1.一种Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物，其特征在于：拼合物为式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物，
式中，
n为1-3的整数；
R选自H或C1-C6烷基；
X选自N、O或
Y为-S-S-、-CONH-或-COS-。
2.根据权利要求1所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物，其特征在于：所述拼合物为式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物，式中，n为2或3；
R选自H、甲基、乙基或丙基；
X选自N、O或
Y为-S-S-、-CONH-或-COS-。
3.根据权利要求2所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物，其特征在于：所述拼合物为(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}二硫烷基)丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FA-1)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-鬼臼毒素)酯(FB-1)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-(4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-2)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-3)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}硫基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FB-4)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺]乙基}-4-(4-O-去甲基-4-氨基-4-脱氧鬼臼毒素)-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-5)；
(E)-S-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-4-{4-O-脱甲基-4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}-4-氧代丁烷硫酸酯(FB-6)；
(E)-N1-{2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}-N4-{4-[(4-氨基甲基)-1,2,3-三唑-1-基]-4-脱氧鬼臼毒素}琥珀酰胺(FC-1)；
(E)-4-({2-[3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基]乙基}氨基)-4-氧代丁酸-(4-O-脱甲基-4-鬼臼毒素)酯(FC-2)。
4.一种权利要求1所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，其特征在于：所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物以及药学上可接受的赋形剂在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的应用。
5.一种权利要求1所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，其特征在于：所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常表达相关的疾病药物中的应用。
6.一种权利要求1所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，其特征在于：所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，其特征在于：所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗肺癌、乳腺癌或白血病药物中的应用。
8.根据权利要求6所述的Psammaplin A类与鬼臼毒素拼合物的应用，其特征在于：所述式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物在制备治疗奥西替尼耐药非肺癌、紫杉醇耐药的肺癌药物中的应用。
9.一种药物组合物，其特征在于：组合物含权利要求1所述的式(I)所示化合物、衍生物、及其药学上可接受的盐或水合物中的一种或几种。
10.一种权利要求9所述的药物组合物的应用，其特征在于：所述组合物在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的应用。
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2025
- 2025-06-12 CN CN202510781774.0A patent/CN120757561A/zh active Pending
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