CN120757505B - 一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用Info
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Abstract
本发明涉及一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用，二烃基咪唑仿生型脂质化合物结构仿天然磷脂设计，在咪唑的4位与5位上修饰不少于10个碳原子的烃基，且在2位上修饰不同烷基链长的伯胺；二烃基咪唑仿生型脂质化合物与治疗性药物以及其他辅料混合，能够制备得到治疗性药物被装载在内的脂质纳米颗粒，能够作为药物递送系统用于脑靶向药物的制备。二烃基咪唑仿生型脂质具备动态调控血脑屏障的功能，可以实现血脑屏障的可逆开放；形成的载药脂质组合物能够穿越血脑屏障并较好的实现所装载治疗性药物的脑靶向递送；由二烃基咪唑仿生型脂质组成的载药脂质组合物属于新一代仿生纳米药物载体，为实现不同种类药物的脑靶向递送提供了新策略。
Description
技术领域
本发明属于药物递送技术领域，尤其是涉及一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用。
背景技术
血脑屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）是中枢神经系统内介于脑组织与脑毛细血管之间高度特化的生理屏障系统，主要由脑毛细血管内皮细胞及其紧密连接、星形胶质细胞、周细胞以及基底膜构成。BBB是选择透过性动态界面，即能够选择性地允许氧气、葡萄糖等必需物质进入大脑，同时阻碍循环系统中有害物质的进入，从而维持大脑内环境的稳定。然而98%的小分子药物和近乎100%的大分子药物也被BBB严格限制进入脑部，导致大部分治疗脑部疾病的药物疗效差，副作用显著。当前，临床上用于调控BBB的理化方法主要有甘露醇高渗介导、超声空化介导以及电流穿孔介导等。然而这些方法均对BBB的结构和功能造成不可逆的破坏，普遍存在严重的安全性风险。
脂质纳米颗粒（Lipid nanoparticles, LNPs）是一类基于脂质的非病毒类纳米级药物递送系统，通过脂双层结构包裹药物分子（如小分子药物、多肽、核酸）实现药物免受酶解和免疫清除以及药物的高效递送。LNPs一般由永久性阳离子或可电离阳离子脂质化合物、辅助性磷脂、胆固醇以及PEG脂质在水环境中通过自组装形成，直径通常在20-200 nm范围。LNPs的核心优势在于保护药物免受降解，并促进细胞摄取及胞内释放。近年来LNPs因在mRNA疫苗中的成功应用而备受关注。此外，因其优异的生物相容性、生物可降解性、低免疫原性、结构可灵活定制以及易于大规模制备等特点，LNPs已经成为各种纳米药物递送系统中最具临床转化潜力和应用前景的载体。
目前，经临床验证可跨越BBB的LNPs递送系统尚未见报道。因此，亟需一种非侵入式且安全的BBB调控方法以及能够跨越BBB实现药物高效递送入脑的药物递送系统，有效治疗脑肿瘤、阿尔茨海默症、帕金森病等脑部疾病。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用。
本发明采用的技术方案是：一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物，结构如式7所示；
式7；
其中，R’为C9~C18的直链饱和或直链不饱和烃基，R’’为C9~C18的直链饱和或直链不饱和烃基，R’和R’’为相同基团或不同基团；
n取自3~9的整数；
X-为阴离子基团，具体为I-、Br-、Cl-、BF4 -或PF6 -。
优选地，R’和R’’为C14~C18的直链烷基、单烯基或炔基。
优选地，R’和R’’为以下结构中的一种或两种：
优选地，n为3、4或5。
优选地，X-为I-、Br-或Cl-。
制备二烃基咪唑仿生型脂质化合物的方法，包括如下步骤：
步骤S01，将式1所示化合物与式2所示化合物反应，得到式3所示中间体；
步骤S02，将式3所示中间体经氧化得到式4所示中间体；
步骤S03，将式4所示中间体与式5所示化合物、醋酸铵和HX共同反应，得到式6所示中间体，其中PG为氨基保护基，X为I、Br或Cl；
步骤S04，将式6所示中间体的保护基PG脱除，得到式7所示二烃基咪唑仿生型脂质化合物；
。
一种脂质纳米颗粒，包括二烃基咪唑仿生型脂质化合物。
制备上述脂质纳米颗粒的方法，将二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂、胆固醇按摩尔比（50~75）:（5~30）:（35~45）混合，通过薄膜水化法制备得到上述脂质纳米颗粒。
一种载药脂质纳米颗粒，包括二烃基咪唑仿生型脂质化合物和治疗性药物。
优选地，治疗性药物为合成类小分子化学药物、天然产物药物、多肽、蛋白和小核酸中的一种或多种。
优选地，合成类小分子化学药物为含有游离羧基、含有游离羟基和含有游离羰基的小分子化学药物中的一种或多种；
优选地，合成类小分子化学药物为甲氨蝶呤、阿昔洛韦或多柔比星；
优选地，天然产物药物为生物碱、萜类、黄酮类、糖苷类和苯丙素类天然产物中的一种或多种；
优选地，小核酸为siRNA、snRNA、shRNA、saRNA和miRNA中的一种或多种。
制备载药脂质纳米颗粒的方法，将二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂、胆固醇和治疗性药物混合，通过薄膜水化法制备得到治疗性药物被装载在内的脂质纳米颗粒。
优选地，二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂、胆固醇和治疗性药物的摩尔比为（50~75）:（5~30）:（35~45）:（1~15）。
其中，天然磷脂选自二硬酯酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）、二油酰磷脂酰胆碱（DOPC）、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱（SOPC）、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱（POPC）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE）、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺（DPPE）、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺（DMPE）、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）、二硬脂酰磷脂酸（DSPA）、二棕榈酰磷脂酸（DPPA）、二肉豆蔻酰磷脂酸（DMPA）、二油酰磷脂酸（DOPA）、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG）、二棕榈酰磷脂酰甘油（DPPG）、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG）、二油酰磷脂酰甘油（DOPG）、二硬酯酰磷脂酰丝氨酸（DSPS）、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸（DPPS）、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸（DMPS）、二油酰磷脂酰丝氨酸（DOPS）中的一种或多种。
载药脂质纳米颗粒在制备脑靶向药物中的应用。
优选地，载药脂质纳米颗粒作为药物递送系统用于脑靶向药物的制备；
优选地，载药脂质纳米颗粒递送系统能够穿越血脑屏障。
本发明具有的优点和积极效果是：二烃基咪唑仿生型脂质具备动态调控血脑屏障的功能，可以实现血脑屏障的可逆开放；同时由二烃基咪唑仿生型脂质组成的仿生脂质组合物能够穿越血脑屏障并且较好的实现所装载药物的脑靶向递送；由二烃基咪唑仿生型脂质组成的仿生脂质组合物能够安全有效地穿越血脑屏障，脑靶向递送效率显著优于具有代表性的可电离阳离子脂质如ALC-0315、Dlin-MC3-DMA与SM-102所构成的LNPs递送系统。
二烃基咪唑仿生型脂质代表能够调控血脑屏障开放程度的新型仿生材料，由二烃基咪唑仿生型脂质组成的载药脂质组合物属于新一代仿生纳米药物载体，为实现不同种类药物的脑靶向递送提供了新策略。
附图说明
图1为基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的载药脂质纳米颗粒递送系统的结构示意图；
图2为实施例1的高分辨质谱（HRMS）图；
图3为实施例4中LNPs-1与对照例1-3中的脂质纳米颗粒的透射电镜图片；其中，A：LNPs-1；B：对照例2；C：对照例3；D：对照例1；
图4为实施例8中基于部分二烃基咪唑仿生型脂质化合物的脂质纳米颗粒递送系统与对照例1~3中的递送系统介导下的体外血脑屏障模型跨膜电阻的实时动态变化趋势；其中，A：ALC-0315（对照例1）与A4Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-1）、A5Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-5）、A4Zij 215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-18）递送系统介导下TEER变化情况；B：ALC-0315（对照例1）与A4Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-1）、A4Z15Zij15-JI/DPPC/Chol.（LNPs-16）、A4Z15Z18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-43）、A4Z15Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-45）递送系统介导下TEER变化情况；C：SM-102（对照例3）与A4Z218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-6）、A5Z218-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-8）、A4Z18Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-31）、A4Zij 218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-36）递送系统介导下TEER变化情况；D：D-Lin-MC3-DMA（对照例2）与A5Z216-JI/DPPC/Chol.（LNPs-14）、A4Z16Zij16-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-21）、A4Zij 216-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-23）、A4Z17Zij17-JI/DPPC/Chol.（LNPs-26）递送系统介导下TEER变化情况；
图5为实施例9中由二烃基咪唑仿生型脂质化合物组成的载药脂质纳米颗粒递送系统与对照例4~6中的递送系统跨越体外血脑屏障模型的递送效果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施例做出说明。
本发明涉及一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物及其制备方法和应用。在咪唑的4位与5位上修饰不少于10个碳原子的烃基，且在2位上修饰不同烷基链长的伯胺，形成2-伯胺取代的4,5-二烃基咪唑；二烃基咪唑仿生型脂质化合物具有高仿生性结构特征且低细胞毒性，能够构建仿生型LNPs递送系统，可用于递送多种类型的小分子化学药物和小核酸药物等。
二烃基咪唑仿生型脂质化合物结构如式7所示，
式7；
其中，X-为阴离子基团，具体为I-、Br-、Cl-、BF4 -或PF6 -；R’和R’’各自独立选自链长为C9~C18的直链饱和或不饱和烃基，R’和R’’为相同基团或不同基团；n取自3~9的整数。本发明某些实施例中，R’和R’’各自独立选自链长为C14~C18的直链烷基、单烯基或炔基。
如式7所示二烃基咪唑仿生型脂质化合物制备方法如下：
步骤S01：将式1所示化合物与式2所示化合物反应，得到式3所示中间体；
将式1所示化合物与式2所示化合物在溶剂A中按摩尔比1:1混合并充分溶解，再依次加入有机碱B与有机催化剂C，进行回流反应，完成后经分离得到式3所示中间体；其中，溶剂A可为无水乙醇、水或四氢呋喃(THF)等；有机碱B可为三乙胺(TEA)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)或二异丙基乙胺(DIPEA)等；有机催化剂C可为3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基氯化噻唑(BMTC)、硫胺素(VB1)或1-甲基-3-苄基氯化咪唑([Bzmin]Cl)等。
步骤S02：将式3所示中间体经氧化得到式4所示中间体；
向包含式3所示中间体的有机溶剂B中加入氧化剂A，并在氧气环境中氧化，反应完成后经分离得式4所示中间体；其中，有机溶剂B可为乙腈(ACN)、四氢呋喃(THF)或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)等；氧化剂A可为三氯氧钒(VOCl3)、五氧化二钒(V2O5)或氯铬酸吡啶盐(PCC)等。
步骤S03：将式4所示中间体与式5所示化合物、醋酸铵和HX共同反应，得到式6所示中间体，其中PG为氨基保护基，X为I、Br或Cl；
向包含式4所示中间体的有机溶剂C中，依次加入式5所示化合物、醋酸铵和氢卤酸，进行回流反应，完成后经分离得式6所示中间体；其中，有机溶剂C可为无水乙醇、乙腈(ACN)或四氢呋喃(THF)；氢卤酸可为氢碘酸(HI)、盐酸(HCl)或氢溴酸(HBr)等。
步骤S04：将式6所示中间体的保护基PG脱除，得到式7所示二烃基咪唑仿生型脂质化合物；
向包含式6所示中间体的有机溶剂D中，加入脱保护剂A，反应完成后经分离得式7所示化合物；其中，有机溶剂D可为二氯甲烷(DCM)、二氧六环(Diox)或乙醇等；脱保护剂A可为三氟乙酸(TFA)或盐酸等。
此外，除非另外定义，在本发明中所使用的所有术语（包括技术和科学术语）均为本领域技术人员所理解的通常含义。本发明中出现的“A、B、C、D、E”等英文字母均为试剂或溶剂的代号，仅用于区别类似试剂或溶剂，并非指示或暗示所代表的试剂或溶剂的相对重要性、先后次序等。此外，本发明中使用“A、B、C、D、E”等英文字母代表的试剂或溶剂所包含的品种在适当情况下可以互换。应注意，在本发明中所使用的所有术语仅仅是为了描述具体实施例，而并非意在限制本发明。
本发明某些实施例中，式7结构中，R’和R’’为相同基团或不同基团，R’和R’’为不同基团时，可为碳链长度相同的基团也可以为碳链长度不同的基团；优选地，R’和R’’各自独立选自链长为C14~C18的直链烷基、单烯基或炔基；具体可如下列结构式中的一种或两种：
R’和R’’的碳链长度可调节二烃基咪唑仿生型脂质化合物的仿生性，从而影响其生物相容性及所组成的脂质组合物的稳定性，由此改善其载药和递送效率。
本发明某些实施例中二烃基咪唑仿生型脂质化合物可为下式中的一种：
烷基咪唑盐（Alkylated imidazolium salts, AISs）是一类具有生物活性的烷基氮杂环唑类阳离子。单烷基咪唑盐具有一定的表面活性，可有效破坏细菌的细胞膜，体现出显著的杀菌效果。咪唑环作为组氨酸的侧链，普遍存在于多肽与蛋白质中，其pKa约为6.0，具有显著的缓冲作用，并且在细胞内体中的pH响应性优于商业化可电离氨基阳离子脂质（如ALC-0315），体现出良好的内体逃逸功能及药物递送潜力。此外，咪唑环的化学可修饰性，为药物递送载体材料设计提供了广大空间，有望改善药物的装载率及靶向递送效率。咪唑环的π-π堆积效应也有助于增强疏水性药物分子（如芳香族天然产物药物）的包封率。本发明将AISs母体结构与天然磷脂的脂质双尾链结构相融合，形成具有仿生结构特征的AISs，即二烃基咪唑仿生型脂质化合物。由于具备仿生性，使其对细胞膜的生物相容性明显优于单烷基咪唑盐，因此二烃基咪唑仿生型脂质化合物体现出良好的生物安全性，可将其制备形成新型LNPs仿生递送系统。
进一步地，本发明还涉及一种载药脂质组合物，包含式7所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物或其在药学上可接受的溶剂合物；还包括治疗性药物以及其他辅助组分。治疗性药物为合成类小分子化学药物、天然产物药物、多肽、蛋白和小核酸中的一种或多种；其中，合成小分子化学药物为甲氨蝶呤等含有游离羧基类、阿昔洛韦等含有游离羟基类和多柔比星等含有游离羰基类小分子中的一种或多种；天然产物药物选自生物碱、萜类、黄酮类、糖苷类及苯丙素类天然产物中的一种或多种；小核酸选自siRNA、snRNA、shRNA、saRNA及miRNA中的一种或多种。辅助组分可为天然磷脂与胆固醇。其中，天然磷脂选自二硬酯酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）、二油酰磷脂酰胆碱（DOPC）、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱（SOPC）、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱（POPC）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE）、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺（DPPE）、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺（DMPE）、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）、二硬脂酰磷脂酸（DSPA）、二棕榈酰磷脂酸（DPPA）、二肉豆蔻酰磷脂酸（DMPA）、二油酰磷脂酸（DOPA）、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG）、二棕榈酰磷脂酰甘油（DPPG）、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG）、二油酰磷脂酰甘油（DOPG）、二硬酯酰磷脂酰丝氨酸（DSPS）、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸（DPPS）、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸（DMPS）、二油酰磷脂酰丝氨酸（DOPS）中的一种或多种。
在本发明中，术语“溶剂合物”是指通过通式7中所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物和溶剂（例如乙醇或水）而形成的复合物。比如术语“水合物”指的是上述术语“溶剂合物”中溶剂为水的情形。进一步地，通式7中所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物可以溶剂合物形式分离，并且任何溶剂合物均包括在本发明的保护范围内。
将此二烃基咪唑仿生型脂质与天然磷脂和胆固醇按不同的摩尔比组合，在缓冲液中自组装形成直径在50-500 nm的仿生脂质组合物。可将式7所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂和胆固醇混合，采用薄膜水化法制备脂质纳米颗粒（LNPs）。二烃基咪唑仿生型脂质化合物、天然磷脂和胆固醇的摩尔比为（50~75）:（5~30）:（35~45）。
进一步地，该LNPs可用作递送系统，将药物装载在递送系统中，用于靶向传输药物。本发明同样采用薄膜水化法制备载药的LNPs。将二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂、胆固醇和治疗性药物按照摩尔比为（50~75）:（5~30）:（35~45）:（1~15）混合，制备基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的载药LNPs递送系统。
将二烃基咪唑仿生型脂质化合物、天然磷脂和胆固醇按比例加入MeOH/CHCl3（1:1, v/v）的混合溶剂中充分溶解，去除有机溶剂后在容器内壁上形成混合脂质半透明薄膜。在容器中加入与有机混合溶剂等体积的含有治疗性药物的PBS缓冲液，在50℃孵育5-10min并涡旋振荡1~3 min，重复3-10次，使脂质薄膜充分水化，得到浑浊的混合脂质胶体溶液。超声处理后将胶体溶液使用100 nm孔径的PC滤膜反复挤出30~40次，经分离纯化后获得的载药脂质组合物即为基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的LNPs载药递送系统，如图1所示。
二烃基咪唑仿生型脂质化合物中，在咪唑环的2位上引入一定烷基链长的伯胺，可有效的调控血脑屏障的开放程度，实现血脑屏障的可逆开放。二烃基咪唑仿生型脂质化合物组成的载药脂质组合物能够装载合成类小分子化学药物、天然产物药物、多肽、蛋白或小核酸，并且能够穿越血脑屏障，实现脑靶向递送药物。用于制备脑靶向的载药脂质组合物时，式7化合物结构中，n优选为3、4或5。
式7所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，相比于相关递送技术中具有代表性的可电离阳离子脂质如ALC-0315、Dlin-MC3-DMA与SM-102等，结构上存在较大差异，并且具有高仿生性的结构特征，表现为良好的生物安全性和低细胞毒性。此外，式7所示的二烃基咪唑仿生型脂质化合物具有动态调控血脑屏障的功能，可实现血脑屏障的可逆开放。通过具有高仿生性结构特征且低细胞毒性的二烃基咪唑仿生型脂质构建仿生型LNPs递送系统，能够用于制备穿越血脑屏障的药物递送系统及其制剂，实现安全且有效穿越血脑屏障的药物脑靶向递送。
由二烃基咪唑仿生型脂质组成的仿生脂质组合物能够安全有效地穿越血脑屏障，脑靶向递送效率显著优于具有代表性的可电离阳离子脂质如ALC-0315、Dlin-MC3-DMA与SM-102所构成的LNPs递送系统。由其构建的仿生载药脂质组合物属于新一代仿生纳米药物载体，有利于改善小分子化学药物和小核酸药物等药物的跨越血脑屏障的递送效率。
下面结合附图对本发明方案做出说明，其中，未具体说明操作步骤的实验方法，均按照相应商品说明书进行，实施例中所用到的仪器、试剂、耗材如无特殊说明，均可从商业公司购买得到。需要说明的是，除非另外定义，本发明使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内技术人员所理解的通常意义。
实施例1：二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI的合成
A4Z215-JI的合成过程如下式所示：
具体合成过程如下：
（1）制备17-羟基三十二烷-16-酮（I-1）
将2.0 g(8.32 mmol, 1.0 eq.)十六醛（I-0）加入20 mL无水乙醇中充分溶解，再依次加入0.35 mL三乙胺(2.50 mmol, 0.3 eq.)，0.11 g 3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基氯化噻唑(0.42 mmol, 0.05 eq.)，80℃下回流搅拌3 h，TLC监控反应完成后，将反应液倒入冰水中，过滤收集析出的白色固体，并用乙醇重结晶得到白色固体I-1(900 mg, 1.87mmol)，收率为45.0%。
（2）制备三十二烷-16,17-二酮（I-2）
将200 mg(0.42 mmol, 1.0 eq.)17-羟基三十二烷-16-酮（I-1）加入2.0 mL乙腈中，溶解后加入0.72 mg VOCl3(4.2 μmol, 0.01 eq.)在氧气环境下室温搅拌过夜，此后在60℃下继续反应3 h, TLC监控反应完成后，反应液用饱和NaHCO3淬灭，有机相用PE/EA(1:1)溶剂萃取3次，再用饱和氯化铵和饱和氯化钠溶液分别洗涤一次，洗涤后用无水硫酸钠干燥，旋蒸后得粗产品，最后用乙醇重结晶得到160 mg(0.33 mmol)三十二烷-16,17-二酮（I-2），收率为80.3%。
（3）制备碘化2-[5-(叔丁氧羰基氨基)戊基]-4,5-双十五烷基-1H-咪唑-3-鎓盐（I-3）
将70 mg(0.15 mmol, 1.0 eq.)三十二烷-16,17-二酮（I-2）溶于2 mL无水乙醇中，然后依次加入38 mg 叔丁氧羰酰基6-氨基己醛(0.18 mmol, 1.2 eq.)，27 mg NH4OAc(0.35 mmol, 2.4 eq.)和19 mg氢碘酸(0.15 mmol, 1.0 eq.)，在90℃下回流搅拌3 h，TLC监控反应完成后，反应液用饱和NaHCO3淬灭(pH＞12)，有机相用DCM萃取3次，再用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂后，粗产物经柱层析(DCM:MeOH=90:10)分离纯化得到淡黄色固体I-3(30mg, 0.04 mmol)，收率为30.4%。
（4）制备碘化2-(5-氨基戊基)-4,5-双十五烷基-1H-咪唑-3-鎓盐（A4Z215-JI）
将30 mg(0.04 mmol) 中间体I-3全部加入2 mL DCM中充分溶解，再加入0.4 mLTFA，在室温条件下搅拌3 h，TLC监控反应完成后，用10 mL DCM和10 mL水稀释反应液，再用1 M NaOH溶液和饱和氯化钠溶液分别洗涤有机相3次，并用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到黄色固体产物A4Z215-JI(8 mg, 0.01 mmol)，收率为25%。
对制备得到的二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI（化合物1）进行表征，如图2所示为A4Z215-JI高分辨质谱（HRMS）[M-I]+: C38H76N3 +，m/z理论计算值：574.60 ，测试值：574.6034。氢谱结果如下：
1H NMR（400 MHz, CDCl3）δ 8.90-9.20（s, 1H），7.45-7.50（s, 1H），3.95-4.00（t,J = 7.2, 2H），2.72（t, J = 7.0, 2H），1.70-1.75（m, 4H），1.55-1.62（m, 4H），1.22-1.27（m, 88H），0.85-0.89（t, J = 6.8, 6H）。
实施例2：二烃基咪唑仿生型脂质化合物2~45的合成
按照实施例1方法分别合成得到二烃基咪唑仿生型脂质化合物A3Z215-JI、A4Z215-JCl、A4Z215-JBr、A5Z215-JI、A4Z218-JI、A3Z218-JBr、A5Z218-JCl、A4Z217-JI、A5Z217-JCl、A4Z214-JI、A5Z214-JI、A4Z216-JI、A5Z216-JI、A5Z14Zij14-JI、A4Z15Zij15-JI、A5Z15Zij15-JI、A4Zij 215-JI、A5Z15Zde15-JI、A5Zde 215-JI、A4Z16Zij16-JCl、A5Z16Zij16-JI、A4Zij 216-JCl、A5Z16Zde16-JI、A5Zde 216-JI、A4Z17Zij17-JI、A5Z17Zij17-JI、A4Z17Zde17-JI、A5Z17Zde17-JI、A4Z18Zbc'18-JI、A4Z18Zij18-JI、A5Z18Zij18-JI、A4Z18Zde18-JI、A5Z18Zde18-JI、A4Z18Zij'18-JI、A4Zij 218-JI、A5Zij 218-JI、A4Zde 218-JI、A5Zde 218-JI、A4Z15Zde15-JI、A4Zde 215-JI、A5Zij 215-JI、A4Z15Z18-JI、A4Z15Zde18-JI、A4Z15Zij18-JI（化合物2~45）。
上述化合物合成方法与A4Z215-JI（化合物1）相似，区别在于步骤（1）中十六醛（I-0）可替换为不同链长的饱和脂肪醛和/或不饱和脂肪醛；步骤（3）中叔丁氧羰酰基6-氨基己醛可替换为叔丁氧羰酰基5-氨基戊醛或叔丁氧羰酰基7-氨基庚醛，氢碘酸可替换为盐酸或氢溴酸。上述各二烃基咪唑仿生型脂质化合物所用的原料（I-0）及各步骤的反应条件如表1所示。
表1
实施例3：基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的LNPs的制备
通过薄膜水化法将实施例1制备得到的A4Z215-JI（化合物1）进一步制备形成LNPs。
将A4Z215-JI、天然磷脂DPPC和胆固醇按摩尔比70:15:36加入MeOH/CHCl3（1:1, v/v）的混合溶剂中充分溶解，通过50℃氮吹或旋蒸去除有机溶剂后，在容器内壁上形成混合脂质半透明薄膜。此后在容器中加入与有机混合溶剂等体积的PBS缓冲液，在50℃孵育5min后涡旋振荡1~3 min，使脂质薄膜充分水化，上述水化过程重复5次，得到浑浊的混合脂质胶体溶液。再经超声处理30 min后将胶体溶液使用100 nm孔径的PC滤膜反复挤出30~40次，获得基于A4Z215-JI的脂质纳米颗粒（LNPs-1）递送系统。
按照上述方法分别以化合物2~45为原料，制备得到相应的LNPs。将二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI分别替换为表1中相应二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其他条件不变，制备得到LNPs-2~LNPs-45。
对比例1：
将实施例3中的二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI分别替换为用于药物递送的阳离子脂质化合物ALC-0315（CAS:2036272-55-4）、D-Lin-MC3-DMA（CAS:1224606-06-7）与SM-102（CAS:2089251-47-6），其他条件不变，即可获得对照例1~3的LNPs。
实施例4：LNPs的理化表征和细胞毒性表征
分别对实施例3制备得到的LNPs-1~LNPs-45和对比例1制备得到的对照例1~3的LNPs的理化性质和细胞毒性进行表征。
通过透射电镜(TEM)对制备得到的LNPs-1~LNPs-45以及对照例1~3的LNPs的形态学进行表征。如图3所示为LNPs-1和三个对照例的LNPs的形态学比较，各组LNPs均呈现较为完整的球状囊泡结构，未见显著变化。LNPs-2~LNPs-45结构与LNPs-1相似，同样具有完整的球状囊泡结构。
另外，通过纳米流式检测技术(NanoFCM)以及Zeta电位分析仪(ZetaPALS)分别对LNPs-1~LNPs-45与对照例1~3的LNPs的平均粒径和Zeta电位进行表征，表征结果如表2所示。
表2
由表2可知，LNPs-1~LNPs-45的粒径较为均一，平均粒径介于118.9~141.2 nm，Zeta电位中位数介于32.1~41.4 mV。相比之下，对照例1~3中LNPs平均粒径分别为187.4nm、171.0 nm和182.1 nm，Zeta电位中位数分别为12.1 mV、10.8 mV和14.8 mV，相较于基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的LNPs，对照例LNPs粒径较大，Zeta电位中位数较低。
应用MTT法通过人脑胶质瘤细胞U-118MG进一步评价LNPs-1~LNPs-45及对照例1~3中LNPs的细胞毒性。将U-118MG细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，按3000细胞/孔的密度接种于96孔板中，在5% CO2和37℃的环境下孵育24 h。然后，向每孔中加入不同浓度的各类LNPs，使其终浓度依次为1×107 LNPs/mL、5×107 LNPs/mL、1×108 LNPs/mL、5×108 LNPs/mL、1×109 LNPs/mL、2×109 LNPs/mL和5×109 LNPs/mL，继续孵育24 h。此后，向每孔中加入5 mg/mL的MTT试剂，孵育4 h后弃去培养基，向每孔加入150 μL的DMSO，摇振10min后通过酶标仪在570 nm下测定每孔的吸光度。以未加入LNPs的U-118MG细胞作为阴性参比，计算细胞生存率。若细胞生存率大于80%，则认为该类LNPs无细胞毒性。
测试结果如表2所示，LNPs-1~LNPs-45以及对照例1~3中LNPs均未见显著细胞毒性。
实施例5：基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的载药LNPs递送系统的构建——装载小分子化学药物
实施例3制备得到的LNPs-1~LNPs-45能够用作递送系统，装载小分子化学药物并实现递送功能。本实施例以甲氨蝶呤（MTX）为目标药物，通过LNPs-1~LNPs-45对MTX进行装载，构建相应的载药LNPs递送系统。
将MTX与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）按摩尔比1:1:1溶于DMSO，并在25℃下反应30 min，形成MTX活化剂，使用PBS缓冲液稀释。
将实施例1中合成的A4Z215-JI与天然磷脂DPPC和胆固醇按摩尔比70:15:36加入MeOH/CHCl3（1:1, v/v）的混合溶剂中充分溶解，通过50℃氮吹或旋蒸去除有机溶剂后，在容器内壁上形成混合脂质半透明薄膜。此后在容器中加入与有机混合溶剂等体积的上述PBS缓冲液稀释后的MTX活化剂（A4Z215-JI与MTX的摩尔比为14:1），并在50℃孵育5 min后涡旋振荡1~3 min，使脂质薄膜充分水化，上述水化过程重复10次，得到浑浊的混合脂质胶体溶液。再经超声处理30 min后将胶体溶液使用100 nm孔径的PC滤膜反复挤出30~40次。最后加入0.1 M的NaOH，在37℃下孵育30 min，通过离心柱层析法纯化，获得基于A4Z215-JI的装载MTX的载药LNPs：MTX@A4Z215-JI·LNPs（MTX@ LNPs-1）。
将A4Z215-JI分别替换为表1中的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其他条件不变，即可获得装载MTX的载药LNPs：MTX@ LNPs-2~MTX@ LNPs-45。
对比例2：
将实施例5中的二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI分别替换为阳离子脂质化合物ALC-0315、D-Lin-MC3-DMA与SM-102，其他条件不变，即可获得对照例4~6的装载MTX的载药LNPs。
实施例6：基于二烃基咪唑仿生型脂质化合物的载药LNPs递送系统的构建——装载小核酸药物
实施例3制备得到的LNPs-1~LNPs-45能够用作递送系统，装载小核酸药物并实现递送功能。本实施例以小核酸药物miR-206为目标药物，通过LNPs-1~LNPs-45对miR-206进行装载，构建相应的载药LNPs递送系统。
将实施例1中合成的A4Z215-JI与天然磷脂DPPC和胆固醇按摩尔比70:15:36加入MeOH/CHCl3（1:1, v/v）的混合溶剂中充分溶解，通过50℃氮吹或旋蒸去除有机溶剂后，在容器内壁上形成混合脂质半透明薄膜。此后在容器中加入与有机混合溶剂等体积的含有小核酸miR-206的PBS缓冲液（A4Z215-JI与miR-206的质量比为9:1），在50℃孵育5 min后涡旋振荡1~3 min，使脂质薄膜充分水化，上述水化过程重复5次，得到浑浊的混合脂质胶体溶液。再经超声处理30 min后将胶体溶液使用100 nm孔径的PC滤膜反复挤出30~40次，最后通过离心柱层析法纯化，获得基于A4Z215-JI的装载miR-206的载药LNPs：miR-206@A4Z215-JI·LNPs（miR-206@ LNPs-1）。
将A4Z215-JI分别替换为表1中的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其他条件不变，即可获得装载miR-206的载药LNPs：miR-206@ LNPs-2~miR-206@ LNPs-45。
对比例3：
将实施例6中的二烃基咪唑仿生型脂质化合物A4Z215-JI分别替换为阳离子脂质化合物ALC-0315、D-Lin-MC3-DMA与SM-102，其他条件不变，即可获得对照例7~9的装载miR-206的载药LNPs。
实施例7：载药LNPs递送系统的包封率表征
通过HPLC测定MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45以及对照例4~6的载药LNPs中残存的MTX含量，计算各组LNPs对MTX的包封率，结果如表3所示。
使用5-FAM标记miR-206，通过荧光分光光度法推算miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45以及对照例7~9的载药LNPs中残存的miR-206含量，计算各组LNPs对miR-206的包封率，结果如表3所示。
表3
由表3可知，MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45小分子化学药物递送系统中MTX的包封率介于81.6%~98.1%。相比之下，对照例4~6中制备的装载MTX的载药LNPs，MTX的包封率分别为64.2%、57.3%和40.8%，远低于MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45。miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45小核酸药物递送系统中miR-206的包封率介于91.8%~99.1%。相比之下，对照例7~9中制备的装载miR-206的载药LNPs，miR-206的包封率分别为78.4%、79.9%和84.5%，远低于miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45。
表3证明，实施例1和实施例2制备得到的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，基于其结构上的特性和优势，能够制备得到具有更佳载药性能的LNPs递送系统，能够显著提升药物包封率；该特性具有普适性，针对其他类型小分子化学药物和小核酸药物均表现出较佳载药性能。
实施例8：LNPs递送系统对体外血脑屏障模型的调控
本实施例表征实施例3制备得到的LNPs-1~LNPs-45和对比例1制备得到的对照例1~3的LNPs作为递送系统对体外血脑屏障模型的动态调控作用。
将HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞在含有5%胎牛血清的ECM培养基中培养，按50000细胞/孔的密度接种于Transwell小室（TranswellTM No. 3413 Costar）中有胶原蛋白包被的聚碳酸酯膜（孔径0.4 µm且膜生长面积0.33 cm2）上，更换新的含有5%胎牛血清的ECM培养基，继续培养2-3天。将培养基换为含有550 nM氢化可的松的DMEM/F12无血清培养基，并在5% CO2和37℃的环境下继续培养两天，直至HCMEC/D3细胞单层融合形成屏障模型。
应用CellZscope II实时细胞动态分析仪（德国nanoAnalytic公司）测定上述形成的HCMEC/D3细胞屏障的跨膜电阻TEER。先将测试模块和含有550 nM氢化可的松的DMEM/F12无血清培养基在5% CO2和37℃环境下预热1 h，向测试模块各金属小室中加入1.2 mL的DMEM/F12无血清培养基。将上述Transwell小室转移至测试模块各金属小室后，在5% CO2和37℃环境下以单室/min的速率测定各Transwell小室中的TEER。结果发现各室的TEER均大于300 Ω·cm2，说明融合的HCMEC/D3细胞单层具备屏障功能，体外血脑屏障模型构建完成，可用于血脑屏障动态调控实验。
将实施例3制备得到的LNPs-1~LNPs-45和对比例1制备得到的对照例1~3的LNPs分别加入各Transwell小室，按上述方法测定各室的TEER，观察其在24 h内的实时变化。记录各组下调TEER的最大幅度和相应时间，结果如表4所示。其中，A4Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-1）、A5Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-5）、A4Z218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-6）、A5Z218-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-8）、A5Z216-JI/DPPC/Chol.（LNPs-14）、A4Z15Zij15-JI/DPPC/Chol.（LNPs-16）、A4Zij 215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-18）、A4Z16Zij16-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-21）、A4Zij 216-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-23）、A4Z17Zij17-JI/DPPC/Chol.（LNPs-26）、A4Z18Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-31）、A4Zij 218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-36）、A4Z15Z18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-43）、A4Z15Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-45）以及对照例1~3的TEER实时动态变化如图4所示。
表4
由表4可知，LNPs-1~LNPs-45递送系统均能介导由HCMEC/D3细胞构建的体外血脑屏障模型的TEER下调，TEER降幅介于33.8%~87.2%。相比之下，对照例1~3中制备的LNPs递送系统介导后均未见TEER显著下调。表4结果证明，由实施例1和实施例2制备得到的二烃基咪唑仿生型脂质化合物组成的LNPs-1~LNPs-45递送系统具备动态调控血脑屏障的开放程度的潜能。
如图4所示，为A4Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-1）、A5Z215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-5）、A4Z218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-6）、A5Z218-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-8）、A5Z216-JI/DPPC/Chol.（LNPs-14）、A4Z15Zij15-JI/DPPC/Chol.（LNPs-16）、A4Zij 215-JI/DPPC/Chol.（LNPs-18）、A4Z16Zij16-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-21）、A4Zij 216-JCl/DPPC/Chol.（LNPs-23）、A4Z17Zij17-JI/DPPC/Chol.（LNPs-26）、A4Z18Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-31）、A4Zij 218-JI/DPPC/Chol.（LNPs-36）、A4Z15Z18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-43）、A4Z15Zij18-JI/DPPC/Chol.（LNPs-45）递送系统介导下TEER变化情况。如各图所示，构建的各实验组LNPs均能介导由HCMEC/D3细胞构建的体外血脑屏障模型的TEER下调，并且在24 h内实现TEER水平几乎完全恢复，LNPs-1~LNPs-45递送系统中的其他组别均存在类似结果。这说明，实施例1和2中合成的二烃基咪唑仿生型脂质化合物（化合物1~45）具备介导血脑屏障可逆开放的潜能。
实施例9：载药LNPs递送系统跨越体外血脑屏障模型的递送效果
构建由HCMEC/D3细胞与U-118MG细胞组成的体外血脑屏障-脑胶质瘤共培养模型（体外血瘤屏障模型）。选取MTX@ LNPs-1、MTX@ LNPs-5、MTX@ LNPs-6、MTX@ LNPs-8、MTX@LNPs-14、MTX@ LNPs-16、MTX@ LNPs-18、MTX@ LNPs-21、MTX@ LNPs-23、MTX@ LNPs-26、MTX@LNPs-31、MTX@ LNPs-36、MTX@ LNPs-43、MTX@ LNPs-45以及对照例4~6中制备的装载MTX的载药LNPs。检测选取的各组载药LNPs在体外血脑屏障-脑胶质瘤共培养模型中跨越体外血脑屏障模型的递送效果。
将U-118MG细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，按15000细胞/孔的密度接种于24孔板中，继续培养24 h。将实施例8构建得到的包含有由HCMEC/D3细胞构建的体外血脑屏障模型的Transwell小室转移到24孔板各孔中，将选取的各组载药LNPs加入各Transwell小室中，另设置加入同等MTX药量（10 nmol）的参比组，在5% CO2和37℃环境下继续培养24 h。以未处理的U-118MG细胞作为阴性参比，通过MTT法计算各实施例和对比例的细胞生存率，结果如图5所示。
如图5所示，装载MTX（10 nmol）的MTX@ LNPs-1、MTX@ LNPs-5、MTX@ LNPs-6、MTX@LNPs-8、MTX@ LNPs-14、MTX@ LNPs-16、MTX@ LNPs-18、MTX@ LNPs-21、MTX@ LNPs-23、MTX@LNPs-26、MTX@ LNPs-31、MTX@ LNPs-36、MTX@ LNPs-43、MTX@ LNPs-45作用于体外血瘤屏障模型后，U-118MG细胞的生存率介于18%~66%。相比之下，对照例4~6作用下U-118MG细胞的生存率分别为98%、95%与93%。这说明，上述由二烃基咪唑仿生型脂质化合物制备得到的装载MTX的载药LNPs能有效穿越体外血脑屏障模型，MTX的递送效率显著优于对照例4~6。
实施例10：载药LNPs递送系统在活体水平的脑部递送效果
分别检测实施例5和实施例6制备得到的MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45以及miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45递送系统在活体水平的脑部递送效果。
在4-8周平均质量约为25 g的免疫缺陷雌性裸鼠的脑部植入U-118MG细胞悬液(1×106个细胞)，经过1-2周的生长后，获得肿瘤体积约100-150 mm3的免疫缺陷小鼠模型。将这些小鼠随机分为三组，分别将MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45递送系统以及对照例4~6中制备的装载MTX（18 nM）的LNPs通过尾静脉注射，参比组注射等体积PBS缓冲液，注射体积为200μL，注射时间间隔为24 h，共注射3次。每天记录肿瘤的最长径(a)和最短径(b)以及小鼠体重，通过公式V＝1/2×a×b×b计算肿瘤体积，比较实验组和参比组的肿瘤体积，结果如表5所示。
将平均质量约为200 g的Wistar大鼠的脑部植入C6胶质瘤细胞悬液(2×106个细胞)，经过1周的生长后，获得肿瘤体积约100-200 mm3的荷瘤大鼠模型。将这些大鼠随机分为三组，分别将miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45递送系统以及对照例7~9中制备的装载miR-206（50 nM）的LNPs通过尾静脉注射，参比组注射等体积PBS缓冲液，注射时间间隔为72h，共注射3次。每天记录肿瘤的最长径(a)和最短径(b)以及大鼠体重，通过公式V＝1/2×a×b×b计算肿瘤体积，比较实验组和参比组的肿瘤体积，结果如表5所示。
表5
如表5可知，MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45递送系统经尾静脉注射后，小鼠脑胶质瘤体积显著缩小，与参比组的肿瘤体积比介于10.8%~39.7%。相比之下，对照例4~6与参比组的肿瘤体积比分别为79.1%、73.2%和67.9%，脑靶向递送效果均劣于MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45递送系统。
此外，miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45递送系统经尾静脉注射后，大鼠脑胶质瘤体积显著缩小，与参比组的肿瘤体积比介于18.0%~63.5%。相比之下，对照例7~9与参比组的肿瘤体积比分别为69.7%、72.8%和75.8%，脑靶向递送效果均劣于miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45递送系统。结合上述结果可知，MTX@LNPs-1~MTX@LNPs-45以及miR-206@LNPs-1~miR-206@LNPs-45递送系统均具有更强的脑靶向递送效果。
这说明，由二烃基咪唑仿生型脂质化合物（化合物1~45）制备的载药脂质组合物在活体水平能够有效穿越血脑屏障，并较好地将所装载的小分子化学药物MTX，或小核酸药物miR-206递送至脑部病灶，显著抑制脑胶质瘤的生长。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (8)
1.一种二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其特征在于：结构如式7所示；
式7；
其中，R’为C14~C18的直链烷基或单烯基，R’’为C14~C18的直链烷基或单烯基，R’和R’’为相同基团或不同基团；
n取自3~9的整数；
X-为阴离子基团，具体为I-、Br-、Cl-、BF4 -或PF6 -。
2.根据权利要求1所述的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其特征在于：R’和R’’为以下结构中的一种或两种：
。
3.根据权利要求1所述的二烃基咪唑仿生型脂质化合物，其特征在于：n为3、4或5。
4.制备权利要求1-3中任一所述二烃基咪唑仿生型脂质化合物的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤S01，将式1所示化合物与式2所示化合物反应，得到式3所示中间体；
；
步骤S02，将式3所示中间体经氧化得到式4所示中间体；
；
步骤S03，将式4所示中间体与式5所示化合物、醋酸铵和HX共同反应，得到式6所示中间体，其中PG为氨基保护基，X为I、Br或Cl；
；
步骤S04，将式6所示中间体的保护基PG脱除，得到式7所示二烃基咪唑仿生型脂质化合物；
。
5.一种脂质纳米颗粒，其特征在于：包括权利要求1-3中任一所述的二烃基咪唑仿生型脂质化合物。
6.一种载药脂质纳米颗粒，其特征在于：包括权利要求1-3中任一所述的二烃基咪唑仿生型脂质化合物、治疗性药物、天然磷脂和胆固醇；
治疗性药物为合成类小分子化学药物或小核酸；合成类小分子化学药物为含有游离羧基、含有游离羟基和含有游离羰基的小分子化学药物中的一种或多种；小核酸为siRNA、snRNA、shRNA、saRNA和miRNA中的一种或多种。
7.制备权利要求6所述的载药脂质纳米颗粒的方法，其特征在于：将二烃基咪唑仿生型脂质化合物与天然磷脂、胆固醇和治疗性药物混合，制备得到治疗性药物被装载在内的脂质纳米颗粒。
8.权利要求6所述的载药脂质纳米颗粒在制备脑靶向药物中的应用。
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| CN (1) | CN120757505B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118108671A (zh) * | 2023-07-14 | 2024-05-31 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基于咪唑可电离脂质的脂质纳米粒及其制备方法和应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HRP20130972T1 (hr) * | 2009-05-18 | 2013-11-22 | Actelion Pharmaceuticals Ltd. | Premošteni derivati spiro [2,4] heptana kao alx-receptori i/ili fprl2-agonisti |
| CA3247039A1 (en) * | 2022-03-28 | 2025-03-10 | Tohoku University | LIPID NANOPARTICLES FOR THE ADMINISTRATION OF A NUCLEIC ACID TO SPLENIC TISSUE AND RELATED METHOD OF ADMINISTRATION |
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2025
- 2025-09-08 CN CN202511272233.1A patent/CN120757505B/zh active Active
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118108671A (zh) * | 2023-07-14 | 2024-05-31 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基于咪唑可电离脂质的脂质纳米粒及其制备方法和应用 |
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| CN120757505A (zh) | 2025-10-10 |
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