CN120459125A - 肠道止血组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了肠道止血组合物及其制备方法和应用，涉及止血药物领域，组合物由黄酮和生物碱类化合物组成，其中儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素‑3‑O‑葡萄糖醛酸苷、没食子儿茶素、杨梅素‑3‑O‑半乳糖苷、原花青素B1、原花青素B3、丁香亭‑3‑O‑葡萄糖苷、紫云英苷为黄酮类化合物；荷叶碱、去甲乌药碱、N‑甲基衡州乌药碱、N‑反式阿魏酰基酪胺为生物碱类化合物；这些组合物协同发挥止血功效，具有制备工艺简单、止血疗效佳等优势，为肠道出血治疗药物的开发提供新的原料选择。

Description

肠道止血组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及肠道止血药物领域，具体涉及肠道止血组合物及其制备方法和应用。

背景技术

肠道出血是临床常见的急症之一，具有较高的发病率和死亡率。它由肠道本身的炎症、机械性损伤、血管病变、肿瘤等因素引起，也可因邻近器官的病变和全身性疾病累及肠道所致。肠道出血具有多种危害，主要包括急性失血性休克、贫血、心脏功能受损、感染风险增加以及其他并发症。急性失血性休克是肠道出血最严重的并发症之一，可能导致循环衰竭，表现为头晕、心悸、乏力、口渴、出汗、烦躁、面色苍白、心率加快、血压下降，甚至昏厥和休克大量出血还可能导致贫血，长期慢性失血可引发缺铁性贫血，表现为乏力、头晕、面色苍白等。肠道出血不仅对患者的身体健康造成严重影响，还可能危及生命。

现有治疗肠道出血的传统药物如凝血酶、氨甲环酸等，虽然在一定程度上有效，但存在作用时间短、需要频繁给药、对某些类型的出血效果不佳等问题。此外，长期使用这些药物可能会引起不良反应，如血栓形成等。近年来，随着对肠道出血机制的深入研究和新材料技术的发展，一些新型止血药物如重组凝血因子、止血粉末等被开发出来，但这些药物通常价格昂贵，且在某些情况下效果仍不理想。因此，开发一种高效、安全、制备简单的肠道止血药物具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供肠道止血组合物及其制备方法和应用。

本发明的技术解决方案如下：

肠道止血组合物，包括以下重量份原料：

儿茶素30-40份、金丝桃苷50-60份、异槲皮苷10-20份、荷叶碱20-30份、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷50-60份、没食子儿茶素5-10份。

优选地，还包括以下重量份原料：

杨梅素-3-O-半乳糖苷1-5份、原花青素B1 5-10份、原花青素B3 5-10份、丁香亭-3-O-葡萄糖苷5-10份。

优选地，还包括以下重量份原料：

紫云英苷1-5份、去甲乌药碱5-10份、N-甲基衡州乌药碱1-5份、N-反式阿魏酰基酪胺1-5份。

本发明还公开了肠道止血组合物的制备方法，包括以下步骤：称取各原料，分别溶解于体积百分比50% DMSO中，得到各组分母液，然后移取各组分母液，混合均匀，再用体积百分比50% DMSO溶解，定容即得。

本发明还公开了一种如肠道止血组合物在制备治疗肠道出血药物上的应用。

优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体。

优选地，所述药物的剂型为片剂、颗粒、胶囊以及注射剂中的一种。

本发明的有益效果是：本发明提供肠道止血药物组合物及其制备方法，通过调控组合物的配方及比例，提高止血效果，降低再出血率，为肠道出血的治疗提供新的选择。

附图说明

图1为三种不同化合物组合处理后斑马鱼肠道出血发生率；

图2为三种不同化合物组合处理后肠道内血小板数量，其中，与正常对照组相比，### 表示该组具有p < 0.001的显著性差异；与模型组相比：表示该组具有p <0.001的显著性差异；

图3为三种不同化合物组合处理后斑马鱼体内5-羟色胺含量，其中，与正常对照组相比，###表示该组具有 p < 0.001的显著性差异；与模型组相比：表示该组具有p <0.01的显著性差异，表示该组具有p < 0.001的显著性差异。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

以下实施例中用的原料如下：

儿茶素（CAS: 154-23-4）、金丝桃苷（CAS: 482-36-0）、异槲皮苷（CAS: 482-35-9）、荷叶碱（CAS: 475-83-2）、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（CAS: 22688-79-5）、没食子儿茶素（CAS: 970-73-0）、杨梅素-3-O-半乳糖苷（CAS: 15648-86-9）、原花青素B1（CAS: 20315-25-7）、原花青素B3（CAS: 23567-23-9）、丁香亭-3-O-葡萄糖苷（CAS: 40039-49-4）、紫云英苷（CAS: 480-10-4）、去甲乌药碱（CAS: 5843-65-2）、N-甲基衡州乌药碱（CAS: 5096-70-8）、N-反式阿魏酰基酪胺（CAS: 66648-43-9）。

实施例1

本实施例提供一种治疗肠道出血的化合物组合，由6种单体化合物组成，包括：儿茶素35份、金丝桃苷54份、异槲皮苷19份、荷叶碱29份、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷54份、没食子儿茶素7份（每份相当于5 μg）。制备方法为：精密称取上述6种对照品各10 mg，分别以10 mL 50% DMSO溶解，制备成浓度为1 mg/mL各对照品母液。从母液中分别移取儿茶素174.0 μL、金丝桃苷270.5 μL、异槲皮苷94.0 μL、荷叶碱146.0 μL、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷273.5 μL及没食子儿茶素36.5 μL，混合均匀，用50% DMSO溶解并定容至50 mL，即得化合物组合1。

实施例2

本实施例提供一种治疗肠道出血的化合物组合，由10种单体化合物组成，包括：儿茶素35份、金丝桃苷54份、异槲皮苷19份、荷叶碱29份、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷54份、没食子儿茶素7份、杨梅素-3-O-半乳糖苷3份、原花青素B1 10份、原花青素B3 6份、丁香亭-3-O-葡萄糖苷5份（每份相当于5 μg）。制备方法为：精密称取上述10种对照品各10 mg，分别以10 mL 50% DMSO溶解，制备成浓度为1 mg/mL各对照品母液。从母液中移取儿茶素174.0 μL、金丝桃苷270.5 μL、异槲皮苷94.0 μL、荷叶碱146.0 μL、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷273.5 μL、没食子儿茶素36.5 μL、杨梅素-3-O-半乳糖苷14.5 μL、原花青素B1 49.5 μL、原花青素B3 27.5 μL及丁香亭-3-O-葡萄糖苷25.0 μL，混合均匀，用50% DMSO溶解并定容至50 mL，即得化合物组合2。

实施例3

本实施例提供一种治疗肠道出血的化合物组合，由10种单体化合物组成，包括：儿茶素35份、金丝桃苷54份、异槲皮苷19份、荷叶碱29份、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷54份、没食子儿茶素7份、紫云英苷4份、去甲乌药碱10份、N-甲基衡州乌药碱2份、N-反式阿魏酰基酪胺2份（每份相当于5 μg）。制备方法为：精密称取上述10种对照品各10 mg，分别以10 mL50% DMSO溶解，制备成浓度为1 mg/mL各对照品母液。从母液中移取儿茶素174.0 μL、金丝桃苷270.5 μL、异槲皮苷94.0 μL、荷叶碱146.0 μL、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷273.5 μL、没食子儿茶素36.5 μL、紫云英苷21.0 μL、去甲乌药碱48.0 μL、N-甲基衡州乌药碱10.0 μL及N-反式阿魏酰基酪胺11.5 μL，混合均匀，用50% DMSO溶解并定容至50 mL，即得化合物组合3。

采用斑马鱼实验模型，对本实施例1-3中制得的化合物组合治疗肠道出血的效果进行评价。

1.实验材料

实验组药物：实施例1、实施例2、实施例3制备所得的化合物组合，即化合物组合1、化合物组合2以及化合物组合3。

对照阳性药物：淫羊藿苷。

斑马鱼肠道出血模型诱导剂：辛伐他汀。

实验动物：野生型AB品系斑马鱼以自然成对交配方式进行繁殖得到。

2.实验方法及结果

（1）毒性实验

随机选取受精后4天的斑马鱼，置于6孔板（孔容积为3 mL）中，每孔（实验组）30尾。分别以体积比0.781%（药物溶液/养殖液，V/V）加入各化合物组合。设置阳性药对照组，阳性对照药的终浓度为20.0 μg/mL，同时设置正常对照组和模型组。除正常对照组外，其余各组同时加入辛伐他汀溶液，使其终浓度为7 μM，以建立斑马鱼肠道出血模型。在28℃下继续培养1天后，统计斑马鱼存活数量，以存活率为指标评价各化合物组合的毒性。结果如表1所示，各组斑马鱼的存活率均为100%，表明三种化合物组合在斑马鱼肠道出血模型上均未显现毒性。

表1 毒性评价实验结果

（2）肠道出血发生率

随机选取受精后4天的斑马鱼，置于6孔板（孔容积为3 mL）中，每孔（实验组）30尾。分别以体积比0.781%（药物溶液/养殖液，V/V）加入化合物组合。设置阳性药对照组，阳性对照药的终浓度为20.0 μg/mL，同时设置正常对照组和模型组。除正常对照组外，其余各实验组同时加入辛伐他汀溶液，使其终浓度为7 μM，以建立斑马鱼肠道出血模型。在28℃下继续培养1天后，取各组斑马鱼在显微镜下拍照，以肠道出血发生率为指标来评价各化合物组合抑制肠道出血的效果。结果见图1，模型组斑马鱼肠道出血发生率为67%，表明模型建立成功。与模型组比较，实验组经化合物组合1、2、3干预后，斑马鱼肠道出血发生率分别降低至37%、30%和37%，与阳性药对照组相当，表明三种化合物组合均具有明显的抑制肠道出血的效果。

（3）肠道血小板数量

随机选取受精后4天的转基因血小板绿色荧光斑马鱼，置于6孔板（孔容积为3 mL）中，每孔（实验组）30尾。分别以体积比0.781%（药物溶液/养殖液，V/V）加入化合物组合。设置阳性药对照组，阳性对照药的终浓度为20.0 μg/mL，同时设置正常对照组和模型组。除正常对照组外，其余各组同时加入辛伐他汀溶液，使其终浓度为7μM，以建立斑马鱼肠道出血模型。在28℃下继续培养1天后，取各组斑马鱼在在荧光显微镜下拍照，用NIS-Elements Dv3.20高级图像处理软件采集并分析数据，统计斑马鱼肠道血小板的数量，以该指标来评价样品抑制肠道出血效果。结果采用“平均值±标准误差”表示，采用t检验进行差异分析。结果如图2所示，模型组斑马鱼肠道内血小板平均数量为10.80个，与正常对照组相比，具有显著性差异（p < 0.001），表明模型建立成功。与模型组比较，实验组经化合物组合1、2、3干预后，斑马鱼肠道内血小板计数相比于模型组分别平均降至6.90、7.13和7.67个（p <0.001），与阳性药组相当，表明三种化合物组合均具有明显的抑制肠道出血的效果。

（4）5-羟色胺含量

随机选取受精后4天的转基因血小板绿色荧光斑马鱼，置于6孔板（孔容积为3 mL）中，每孔（实验组）30尾。分别以体积比0.781%（药物溶液/养殖液，V/V）加入化合物组合。设置阳性药对照组，阳性对照药的终浓度为20.0 μg/mL，同时设置正常对照组和模型组。除正常对照组外，其余各组同时加入辛伐他汀溶液，使其终浓度为7μM，以建立斑马鱼肠道出血模型。在28℃下继续培养1天后，取斑马鱼，按斑马鱼5-羟色胺定量检测试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）说明书提取，并使用酶标仪测定，比较各组斑马鱼体内5-羟色胺的含量，以该指标来评价样品抑制肠道出血效果。结果采用“平均值±标准误差”表示，采用t检验进行差异分析。结果如图3所示，模型组5-羟色胺的含量为1.04 ng/mg蛋白，与正常对照组1.39 ng/mg蛋白相比显著降低（p < 0.01），表明模型建立成功。与模型组比较，实验组经化合物组合1、2、3干预后，斑马鱼体内5-羟色胺的含量升高至1.28、1.22和1.27 ng/mg蛋白（p< 0.01），与阳性药组相当，表明三种化合物组合均具有明显的抑制肠道出血的效果。

综上，儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、没食子儿茶素、杨梅素-3-O-半乳糖苷、原花青素B1、原花青素B3、丁香亭-3-O-葡萄糖苷、紫云英苷为黄酮类化合物：其中，儿茶素与异槲皮苷可激活血小板表面受体（如GP IIb/IIIa）促进血小板聚集，促进凝血因子活化/表达而激活凝血途径，通过抗氧化和清除自由基保护血管内皮，抑制炎症因子释放维持凝血平衡发挥止血作用。荷叶碱 、去甲乌药碱、N-甲基衡州乌药碱、N-反式阿魏酰基酪胺为生物碱类化合物：其中，荷叶碱为5-羟色胺受体5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C拮抗剂发挥抗血小板/抗凝血作用，兼具抗氧化和抗炎特性有助于维持血管内皮稳态和凝血平衡辅助止血，与黄酮类成分联合使用以达成止血且不留瘀效果。

因此，本发明提供的三种具有止血功能的化合物组合由黄酮和生物碱类化合物组成，协同发挥止血功效，具有制备工艺简单、止血疗效佳等优势，为肠道出血治疗药物的开发提供新的原料选择。

以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，还可以做出其他各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (7)

1.肠道止血组合物，其特征在于，包括以下重量份原料：

儿茶素30-40份、金丝桃苷50-60份、异槲皮苷10-20份、荷叶碱20-30份、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷50-60份、没食子儿茶素5-10份。

2.根据权利要求1所述的肠道止血组合物，其特征在于，还包括以下重量份原料：

杨梅素-3-O-半乳糖苷1-5份、原花青素B1 5-10份、原花青素B3 5-10份、丁香亭-3-O-葡萄糖苷5-10份。

3.根据权利要求1所述的肠道止血组合物，其特征在于，还包括以下重量份原料：

紫云英苷1-5份、去甲乌药碱5-10份、N-甲基衡州乌药碱1-5份、N-反式阿魏酰基酪胺1-5份。

4.如权利要求1-3任一所述的肠道止血组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：称取各原料，分别溶解于体积百分比50% DMSO中，得到各组分母液，然后移取各组分母液，混合均匀，再用体积百分比50% DMSO溶解，定容即得。

5.一种如权利要求1-3任一所述的肠道止血组合物在制备治疗肠道出血药物上的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、颗粒、胶囊以及注射剂中的一种。