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CN120384086A - 甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用 - Google Patents

甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用

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CN120384086A
CN120384086A CN202510519560.6A CN202510519560A CN120384086A CN 120384086 A CN120384086 A CN 120384086A CN 202510519560 A CN202510519560 A CN 202510519560A CN 120384086 A CN120384086 A CN 120384086A
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CN
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bnaa03
gene
xth4
seq
brassica napus
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CN202510519560.6A
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徐宇
黄桃翠
黄镇
郭志停
韩梅
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Chongqing Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Chongqing Academy of Agricultural Sciences
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Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用，所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。其显著效果是：本发明中BnaA03.XHT4基因对植物高度具有负向调节作用，使油菜株高降低，增强了油菜的抗倒伏性和耐密植性，为油菜株型的遗传改良提供了新的种质。

Description

甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用
技术领域
本发明涉及到植物基因工程技术领域，具体涉及一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用。
背景技术
甘蓝型油菜（Brassica napus L.，AACC，2n=38）作为全球第三大油料作物，株高精准调控是实现高产抗倒伏与机械化生产的关键育种目标。尽管已有研究通过QTL定位在A02、A03、C05等多个染色体上鉴定出BnaA06.RGA(Zhao et al. 2017; Wang et al.2020)、BnaC05.IAA7(Zhao et al. 2019; Zheng et al. 2019; Ping et al. 2022)等赤霉素与生长素通路基因，并利用CRISPR/Cas9技术编辑BnaMAX1等基因获得半矮秆高产表型(Zheng et al. 2020; Fan et al. 2021)。但现有调控网络仍存在显著局限性：已克隆基因多集中于激素代谢途径，而细胞壁动态修饰相关基因的遗传位点与分子机制尚未明确(Tan et al. 2024; Bhujbal et al. 2025)。
植物细胞壁的延伸性是决定茎秆细胞伸长的核心力学基础，其中木葡聚糖内转葡糖苷酶/水解酶（XTH）通过重构细胞壁多糖网络介导松弛过程，其功能在拟南芥等模式植物中已被证实与下胚轴伸长有关(Kushwah et al. 2020; Ishida and Yokoyama 2022)。在甘蓝型油菜中，XTH家族基因的克隆与功能研究长期滞后：尽管BnXTH1等基因的cDNA序列已获克隆，但其在株高调控中的生物学功能仍缺乏实验证据(管荣展 et al. 2014)。值得注意的是，转录组分析发现油菜矮化突变体中木质素单体合成和果胶降解相关基因表达发生改变(罗京 et al. 2022)。然而，现有技术中尚未见利用XTH基因编辑或过表达技术调控油菜株高的报道，这一空白为开发新型株型改良策略提供了重要突破口。
上述内容中的各引用文献具体如下：
Bhujbal SK, Rai AN, Joshi-Saha A (2025) Dwarfs standing tall:breeding towards the 'Yellow revolution' through insights into plant heightregulation. Plant Mol Biol 115:34。
Fan S, Zhang L, Tang M, Cai Y, Liu J, Liu H, Liu J, Terzaghi W, WangH, Hua W, Zheng M (2021) CRISPR/Cas9-targeted mutagenesis of the BnaA03.BPgene confers semi-dwarf and compact architecture to rapeseed (Brassica napusL.). Plant Biotechnol J 19:2383-2385。
Gu J, Guan Z, Jiao Y, Liu K, Hong D (2024) The story of a decade:Genomics, functional genomics, and molecular breeding in Brassica napus.Plant Commun 5:100884。
Ishida K, Yokoyama R (2022) Reconsidering the function of thexyloglucan endotransglucosylase/hydrolase family. J Plant Res 135:145-156
Kushwah S, Banasiak A, Nishikubo N, Derba-Maceluch M, Majda M, EndoS, Kumar V, Gomez L, Gorzsas A, McQueen-Mason S, Braam J, Sundberg B,Mellerowicz EJ (2020) Arabidopsis XTH4 and XTH9 contribute to wood cellexpansion and secondary wall formation. Plant Physiol 182:1946-1965。
Ping X, Ye Q, Yan M, Zeng J, Yan X, Li H, Li J, Liu L (2022)Integrated genetic mapping and transcriptome analysis reveal the BnaA03.IAA7protein regulates plant architecture and gibberellin signaling in Brassica napus L. Theor Appl Genet 135:3497-3510。
Tan Z, Han X, Dai C, Lu S, He H, Yao X, Chen P, Yang C, Zhao L, YangQY, Zou J, Wen J, Hong D, Liu C, Ge X, Fan C, Yi B, Zhang C, Ma C, Liu K,Shen J, Tu J, Yang G, Fu T, Guo L, Zhao H (2024) Functional genomics ofBrassica napus: Progresses, challenges, and perspectives. J Integr Plant Biol66:484-509。
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Zhao B, Li H, Li J, Wang B, Dai C, Wang J, Liu K (2017) Brassica napus DS-3, encoding a DELLA protein, negatively regulates stem elongationthrough gibberellin signaling pathway. Theor Appl Genet 130:727-741。
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Zheng M, Hu M, Yang H, Tang M, Zhang L, Liu H, Li X, Liu J, Sun X,Fan S, Zhang J, Terzaghi W, Pu H, Hua W (2019) Three BnaIAA7 homologs areinvolved in auxin/brassinosteroid-mediated plant morphogenesis in rapeseed(Brassica napus L.). Plant Cell Rep 38:883-897。
Zheng M, Zhang L, Tang M, Liu J, Liu H, Yang H, Fan S, Terzaghi W,Wang H, Hua W (2020) Knockout of two BnaMAX1 homologs by CRISPR/Cas9-targetedmutagenesis improves plant architecture and increases yield in rapeseed(Brassica napus L.). Plant Biotechnol J 18:644-654。
管荣展，楚刘杨 (2014) 甘蓝型油菜BnXTH1基因的克隆与表达分析.分子植物育种。
罗京，李超，张瑞茂，赵德刚，高志宏，王芳，杨元雨, 王转转, 王敏 (2022) 转录组测序分析甘蓝型油菜DW871矮化性状. 中国油料作物学报 44:14-24。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因及其应用，以克服现有技术存在的缺点和不足。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
第一方面，本发明提供一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其关键在于：所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
进一步的，所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列。
进一步的，所述BnaA03.XTH4基因的氨基酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.3所示氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加由SEQ ID NO.3衍生的且保持SEQ ID NO.3所示氨基酸序列功能的蛋白。
进一步的，所述BnaA03.XTH4基因的连接引物对包括：
正向连接引物BnaA03.XTH4-BglII-F：
CAAGCTGACTCTAGCAGATCTATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG；
反向连接引物BnaA03.XTH4-XbaI-R：
TCCTTTGCCCATGGCTCTAGACACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC。
第二方面，本发明提出一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在油菜育种中的应用。
进一步的，所述油菜育种中的应用为矮杆油菜育种中的应用。
进一步的，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
第三方面，本发明提出一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在植物株型遗传改良中的应用。
进一步的，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
进一步的，所述植物为甘蓝型油菜、甘蓝或拟南芥。
本发明的显著效果是：
本发明首次从甘蓝型油菜中克隆出BnaA03.XTH4基因，并构建了过表达BnaA03.XTH4基因的转化载体，该载体转化拟南芥后株系的株高比野生型WT的株高显著降低，证明BnaA03.XHT4 基因对植物高度具有负向调节作用，具有矮秆油菜育种的价值。本发明过表达甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的方法可以应用于植物的基因工程育种，并能够应用于生产实践中，用于培育矮杆油菜新种质。
附图说明
图1是BnaA03.XTH4基因扩增的电泳图；
图2是pCAMBIA1300-BnaA03.XTH4过表达重组载体构建示意图及重组载体菌液PCR检测图；
图3是过表达转基因拟南芥鉴定图；
图4是转基因拟南芥的株高表型图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式以及工作原理作进一步详细说明。
本发明的目的在于提取对植物高度具有负向调节作用的基因，并获得株高显著降低的新种质。本发明通过从甘蓝型油菜中克隆出BnaA03.XTH4基因，并构建了过表达BnaA03.XTH4基因的转化载体，该载体转化拟南芥后株系的株高比野生型WT的株高显著降低，证明BnaA03.XHT4 基因对植物高度具有负向调节作用。
为此，本发明提供一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其关键在于：所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
进一步的，所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列。
进一步的，所述BnaA03.XTH4基因的氨基酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.3所示氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加由SEQ ID NO.3衍生的且保持SEQ ID NO.3所示氨基酸序列功能的蛋白。
本发明还提供了一种上述技术方案所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在油菜育种中的应用。
进一步的，所述油菜育种中的应用为矮杆油菜育种中的应用。
进一步的，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了一种上述技术方案所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在植物株型遗传改良中的应用。
进一步的，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
进一步的，所述植物为甘蓝型油菜、甘蓝或拟南芥。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、扩增获得BnaA03.XTH4基因的全长基因组序列：
取甘蓝型油菜自交系DZ的新鲜叶片中，利用天根植物基因组 DNA 提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司，货号DP302）提取基因组DNA。在BnIR网站下载BnaA03.XTH4基因参考序列，设计基因扩增引物，BnaA03.XTH4-F（SEQ ID NO.4：ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG）、BnaA03.XTH4-R（SEQ ID NO.5：CACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC），以上述提取的DNA为模板，扩增获得 BnaA03.XTH4 的全长基因组序列。
PCR反应使用 KOD-PLUS DNA聚合酶（TOYOBO，OSAKA JAPAN，货号KOD-401）进行。参照以下体系（50 μL）：在无菌PCR管中加入上述提取的DNA模板1 μL、BnaA03.XTH4-F/R引物对各0.5 μL、KOD-PLUS DNA聚合酶1 μL、10×KOD缓冲液5 μL、dNTP混合液1 μL及无菌超纯水补足至50 μL。反应程序为94 ℃预变性2 min，随后37次循环的98 ℃变性10秒、退火温度（55 ℃）维持30 s、68 ℃延伸（2 min），终以72 ℃延伸5 min。
取4µL反应产物，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测目标条带，目的条带正确（如图1所示），说明引物可用，能正确克隆出目的基因。图1中，N为未加DNA模板的阴性对照；中间泳道为BnaA03.XTH4基因扩增条带，大小为1751 bp；M为DNA Marker。
实施例2、BnaA03.XTH4基因过表达载体的构建及测序验证：
基于实施例1获得的BnaA03.XTH4基因扩增引物，以及入pCAMBIA1300骨架载体BglII和Xba I酶切位点同源臂序列，设计连接引物对用于重组载体的构建，具体如图2A和2B所示。所述连接引物对包括：
正向连接引物BnaA03.XTH4-BglII-F：
SEQ ID NO.6:
CAAGCTGACTCTAGCAGATCTATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG；
反向连接引物BnaA03.XTH4-XbaI-R：
SEQ ID NO.7:
TCCTTTGCCCATGGCTCTAGACACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC。
以这个连接引物对重新用DNA为模板，参照上述反应流程和程序进行目标基因的再次扩增。
取PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测目标条带，随后切下目标条带用Omega的胶回收试剂盒（货号D2500-01）回收目标产物，具体步骤如下：将含目标条带的凝胶块与XP2结合缓冲液等体积混合，60 ℃溶解后转移至HiBind® DNA纯化柱，依次经12,000 rpm离心去废液、SPW缓冲液双重洗涤及超净台干燥处理，最终以40 μL无菌水洗脱DNA，并通过NanoDrop One分光光度计检测纯化产物浓度及纯度，用于后续同源重组连接反应。
同时，采用BglII和XbaI限制性内切酶对pCAMBIA1300骨架载体进行线性化处理，反应体系包含10×缓冲液5 μL、载体质粒3 μg、限制性内切酶1 μL及无菌水补足至50 μL，37 ℃孵育3 h；经1%琼脂糖凝胶电泳验证酶切效率，若未完全线性化则延长酶切时间，完成后参照实施例1所述胶回收方法纯化线性化载体。将纯化后的线性化载体与目的基因片段按3:4体积比混合，加入ClonExpress II One Step Cloning Kit（Vazyme，货号：C112）的5× CEII缓冲液2μL及ExnaseII 1 μL，37 ℃连接30 min。
取10 μL连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，具体流程包括：冰浴结合30min、42 ℃热激1 min、冰浴复苏2 min，随后加入500 μL无抗性LB培养基37 ℃振荡培养1小时；取100 μL菌液涂布于含50 μg/mL卡那霉素的LB固体培养基，37 ℃培养12~16小时。筛选阳性克隆时，采用引物对（SEQ ID NO.8：35S，ACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTC；SEQ ID NO.9：eGFP-R，TTGTGCCCATTAACATCACCATCTA）进行菌落PCR初筛，选取5个扩增条带清晰的克隆进行测序验证，如图2C所示，一方面确定基因具体序列，另一方面确认重组载体序列正确性。
本实施例的图2中，图2A为过表达骨架载体pCAMBIA1300；图2B为酶切连接重组载体pCAMBIA1300-BnaA03.XTH4；图2C为重组载体单克隆的菌液PCR鉴定示意图，N为阴性对照，1~6为挑取的单克隆用检测引物（35S/eGRP-R）扩增条带，其中有目的条带（1900 bp）的为阳性克隆，无条带的为阴性克隆，M为DNA Marker。
经测序分析，BnaA03.XTH4核酸基因序列全长1754 bp，如SEQ ID NO.1所示；包括3个内含子，编码序列888 bp，SEQ ID NO.2所示；多肽氨基酸序列为295个，如SEQ ID NO.3所示。
将正确连接的阳性克隆，过夜摇菌，采用TIANGEN Plasmid Mini Kit（货号：DP103）提取重组质粒，改良的质粒大提具体步骤包括：12,000 rpm离心1 min收集10 mL菌液（OD600 = 0.8）的菌体，重悬于500 μL溶液P1，按步骤依次加入500 μL溶液P2裂解、750 μL溶液P3中和，离心去除沉淀后上清液经吸附柱CP3（预平衡处理）结合质粒DNA，依次以600 μL漂洗液PW双重洗涤、超净台干燥，最终以100 μL无菌水洗脱，经NanoDrop One检测质粒浓度（A260/A280=1.8~2.0）及纯度，质粒备用。
实施例3、拟南芥遗传转化：
将上述提取的重组纯化质粒通过热激法转化至GV3101农杆菌感受态细胞：取1 μg质粒DNA与100 μL冰浴融化的感受态细胞混合，液氮速冻5 min后37 ℃热激5 min，加入800μL无抗LB培养基28 ℃复苏2小时；离心后取300 μL菌液涂布于含50 μg/mL卡那霉素和25 μg/mL利福平的LB固体培养基，28 ℃培养48 h。挑取单克隆扩增后，以载体特异性引物（SEQID NO.8：35S，ACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTC；SEQ ID NO.9：eGFP-R，TTGTGCCCATTAACATCACCATCTA）进行PCR验证，阳性菌液经28 ℃、200 rpm扩大培养至OD600 =0.6，按1:1体积比与50%甘油混合后于-80 ℃长期保存，用于拟南芥侵染。
本发明采用改良的农杆菌介导的花序浸渍法，具体包括：将野生型拟南芥种子经75%乙醇三次表面灭菌后，无菌滤纸干燥并均匀播种于1/2 MS固体培养基，4 ℃暗培养3天实现种子同步化，随后转移至人工气候室（光周期16小时光照/8小时黑暗，温度22 ± 1℃，相对湿度60%）培育7天；幼苗移栽至蛭石-珍珠岩-营养土（3:1:1）基质中，待抽薹至3 cm时剪除主茎以诱导侧枝分化，连续培养25天后筛选发育旺盛的花序，转化前24小时去除已开放花器及成熟荚果，并进行基质饱和灌溉以优化侵染效率。同步制备农杆菌侵染液：取-80 ℃冻存菌液100 µL接种于含25 µg/mL利福平及50 µg/mL卡那霉素的LB液体培养基，28℃、200 rpm振荡培养至OD600 = 1.2~1.6，离心收集菌体后以5%蔗糖溶液（含0.02%的SilwetL-77）重悬至OD600 = 0.8；使用移液器吸取200 µL菌悬液浸润花序组织，通过反复吹打菌液增强转化效率，侵染后立即覆盖黑色遮光袋维持20小时高湿暗环境，解除覆盖后恢复标准培养条件，间隔7天重复实施二次转化以提升转化成功率。
实施例4、过表达拟南芥鉴定：
收获T1代种子后，采用含20 μg/mL潮霉素的1/2 MS固体培养基进行萌发筛选，移栽抗性植株至营养土中，于抽薹期单株采集叶片组织，进行单株DNA验证，具体流程包括：通过CTAB法提取基因组DNA，采用引物对（SEQ ID NO.8：35S，ACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTC；SEQ ID NO.9：eGFP-R，TTGTGCCCATTAACATCACCATCTA）进行PCR扩增，筛选阳性单株并收获T2代种子，如图3A所示；
对T2代重复抗性筛选及单株DNA验证，保留插入拷贝数符合孟德尔单基因显性遗传规律（抗性苗与非抗性苗比例≈3:1）的株系；
进一步扩繁T3代种子，利用潮霉素抗性培养基筛选纯合株系，抽薹期采集多株混合样本，基于TRIzol法提取总RNA并逆转录为cDNA，采用RT-qPCR体系（含2×FastFire qPCRPreMix 10 μL、引物SEQ ID NO.10、qBNXTH-F：ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATGG；引物引物SEQID NO.11、qBnXTH4-R：CCCTGTCCCAGTGTATTTGTCGAG）各0.6μL、cDNA模板1μL、ROX参比染料0.4μL及RNase-Free水补至20μL）进行表达量分析，以Actin7基因（引物SEQ ID NO.12：athACT7-F GGAACTGGAATGGTGAAGGCTGG；SEQ ID NO.13：athACT7-R GCTCCTCAGGGGCAACACG）为内参，通过2-ΔΔCT法计算目标基因相对表达量，筛选表达量≥野生型2倍的3个纯合株系用于表型解析，结果获得3个成功超表达的转基因株系，命名为OE1/2/3，如图3B所示。
在图3中，图3A为基因组水平PCR鉴定图。其中，WT指野生型拟南芥，M为DNAMarker，其它泳道为用检测引物（35S/eGRP-R）对T1代转基因拟南芥（1~10）扩增条带，其中有目的条带（1900 bp）的为阳性植株，无条带的为阴性。图3B为转基因拟南芥BnaA03.XTH4相关表达量。图中的值为平均值±标准差（n =3）。使用学生t检验揭示统计学上的显著差异，****P < 0.0001。
实施例5、拟南芥株高性状观察：
鉴于其它植物XTH同源基因家族参与细胞壁调控，细胞壁又与株高调控有关系，但是BnaA03.XTH4基因是否能参与株高调控还未可知，因此本发明利用创建的BnaA03.XTH4转基因遗传材料，对株高伸长进行了观察。
拟南芥种子（包括野生型拟南芥和BnaA03.XTH4过表达株系）在75%（体积比）乙醇中消毒30秒。在无菌工作台上晾干后，将这些种子均匀撒播在含1%（质量比）蔗糖的1/2MS培养基上。种子在4℃下放置两天，然后置于长日照条件下（光照16小时，光照强度100微米每平方秒，黑暗8小时，温度22℃）培养7天。随后，将幼苗移栽到土壤中，在温室中继续培养，相对湿度设定为65%。当幼苗成熟时，即种植约6周后，测量PH（从茎基部到花序顶端的垂直距离）。
调查结果表明，BnaA03.XHT4基因过表达株系的株高比野生型WT的株高显著降低，如图4所示，在图4中，图4A为在22°C长日照条件下生长42天的代表性植株照片，标尺为10厘米；图4B为成熟期株高测量统计结果，图中的值为平均值±标准差（n ≥ 20）。使用学生t检验揭示统计学上的显著差异，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。这些结果表明，BnaA03.XHT4基因对植物高度具有负向调节作用，这个基因具有矮秆油菜育种的价值。
综上所述，本发明首次从甘蓝型油菜中克隆出BnaA03.XTH4基因，并构建了过表达BnaA03.XTH4基因的油菜转化载体，该载体转化拟南芥后株系的株高比野生型WT的株高显著降低，证明BnaA03.XHT4 基因对植物高度具有负向调节作用，具有矮秆油菜育种的价值。本发明过表达甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的方法可以应用于植物的基因工程育种，并能够应用于生产实践中，用于培育矮杆油菜新种质。
序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2分别为本发明中BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列和编码序列，序列长度分别为1754 bp、888 bp；SEQ ID NO.3是本发明中BnaA03.XTH4基因编码的氨基酸序列，序列长度为295 aa。
SEQ ID NO.1：
ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATGGGCTCTCGTAGCTCTGTTTCTGATGGCCTCTTCTACTGTAATGGCAATTCCTCCACGGAAGGCCATTGATGTGCCATTCGGCCGAAACTACGTTCCAACTTGGGCTTTTGACCACCAGAAGCAACTCAATGGCGGTTCCGAACTCCAACTCATCCTCGACAAATACACTGGTACATTTACTACTGCAAGATATTTTGGATGGATTAGGTTCGGTCTGAAACATAGGCAAATAAAGATATATAGCTTTGTGTTTCCTATCTTTAGTTTCAGTTTTTGAAACAATATTATTTCACATTAACTTAAAAACCATACAAAAAGGTCTATATTTAGATTTTGCGCAAGATATCCAAAAACATTGGGACGGCCTGGAATGGTCACTATGTTTATTTATTTTTTGTTTGGGTTCAATATTCACTTTGTTTTTATTGGGGTGAATGATAACAGGGACAGGGTTTCAATCCAAAGGGTCATATTTGTTCGGACATTTCAGTATGCACATAAAGCTGCCAGCTGGTGATACCGCTGGGGTCGTCACTGCATTTTATGTGAGTCTCACCGCAAATCTCAAAAAAAATGTGACTAAAATAGAAATACTAATCCTTTATCAAACAAACAAGAAAAATGCTAATATGTTTGTATAATTGCCGTCACCAATACAAATCTAACTAATAATTGAAAAATTTAATGTGTGAAGCTGTCGTCGACTAACAACGAGCATGACGAGATAGATTTCGAGTTTCTCGGGAACAGGACAGGCCAGCCAGCAATATTGCAGACGAATGTGTTCACAGGAGGAAAGGGAAACAGAGAGCAACGCATCTATCTCTGGTTCGACCCTTCAAAGGCTTATCATACTTACTCCATCCTCTGGAACCTCTACCAAATTGTGTATGCACTCTATCCTCATTACTTACATTACACTTTCGTATATATTAGTATACGTTAAAAGTTGTCAGGTATAACATGGTCCTACCACCACCATTATTATTTCTTTTTTTCCCATCTTGTCGCAATTTTCAAATTATTATTATTATAGTTTTCTTAATAGTGTAATTTTAACCTCGGGCGTGACCCAATCTTGATCCTGTAAAAAGTAGTGGGGTCTTGCAAGATTTTTCAGAGAGACAATTGAGTCAAAAAGACAAAAAAGTTCAGCTTTTAATTTTTTTTCTAATATTCAAATGAGCTAGCATAGATGGATAGGCTAGTGACTCATTCAATCTGTCAATCATGTGCCCTAATACGGGGTTCAAATTTTAATTATAGAACGTCATATGTTCAAACCGCTGTGGTAAAACTAATACCGGTTAGTTTGATTTTTTTTATATCAGATTCTTTGTTGACAACATACCAATCCGTGTGTTCAAGAACGCTAAGGATCTAGGAGTACGTTTCCCATTCAACCAACCGATGAAGCTATACTCGAGCCTTTGGAACGCTGACGATTGGGCGACGAGAGGAGGGCTAGAGAAAACCAATTGGGCTAATGCACCCTTCATAGCTTCCTACAGAGGATTCCACATCGACGGCTGCCAAGCTTCTGTGGAGGCCAAGTACTGTGCTACCCAAGGCCGCATGTGGTGGGATCAGAATGAGTTCCGTGACCTTGATGCCGAACAATATCGTCGTCTCAAATGGGTCCGCATGAAATGGACCATCTACAACTACTGTACCGACCGTACTAGGTTCCCAGTTATGCCAGCCGAATGTAAAAGGGACAGAGACGTGTGA
SEQ ID NO.2：
ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATGGGCTCTCGTAGCTCTGTTTCTGATGGCCTCTTCTACTGTAATGGCAATTCCTCCACGGAAGGCCATTGATGTGCCATTCGGCCGAAACTACGTTCCAACTTGGGCTTTTGACCACCAGAAGCAACTCAATGGCGGTTCCGAACTCCAACTCATCCTCGACAAATACACTGGGACAGGGTTTCAATCCAAAGGGTCATATTTGTTCGGACATTTCAGTATGCACATAAAGCTGCCAGCTGGTGATACCGCTGGGGTCGTCACTGCATTTTATCTGTCGTCGACTAACAACGAGCATGACGAGATAGATTTCGAGTTTCTCGGGAACAGGACAGGCCAGCCAGCAATATTGCAGACGAATGTGTTCACAGGAGGAAAGGGAAACAGAGAGCAACGCATCTATCTCTGGTTCGACCCTTCAAAGGCTTATCATACTTACTCCATCCTCTGGAACCTCTACCAAATTGTATTCTTTGTTGACAACATACCAATCCGTGTGTTCAAGAACGCTAAGGATCTAGGAGTACGTTTCCCATTCAACCAACCGATGAAGCTATACTCGAGCCTTTGGAACGCTGACGATTGGGCGACGAGAGGAGGGCTAGAGAAAACCAATTGGGCTAATGCACCCTTCATAGCTTCCTACAGAGGATTCCACATCGACGGCTGCCAAGCTTCTGTGGAGGCCAAGTACTGTGCTACCCAAGGCCGCATGTGGTGGGATCAGAATGAGTTCCGTGACCTTGATGCCGAACAATATCGTCGTCTCAAATGGGTCCGCATGAAATGGACCATCTACAACTACTGTACCGACCGTACTAGGTTCCCAGTTATGCCAGCCGAATGTAAAAGGGACAGAGACGTGTGA
SEQ ID NO.3：
MAVSSAPWALVALFLMASSTVMAIPPRKAIDVPFGRNYVPTWAFDHQKQLNGGSELQLILDKYTGTGFQSKGSYLFGHFSMHIKLPAGDTAGVVTAFYLSSTNNEHDEIDFEFLGNRTGQPAILQTNVFTGGKGNREQRIYLWFDPSKAYHTYSILWNLYQIVFFVDNIPIRVFKNAKDLGVRFPFNQPMKLYSSLWNADDWATRGGLEKTNWANAPFIASYRGFHIDGCQASVEAKYCATQGRMWWDQNEFRDLDAEQYRRLKWVRMKWTIYNYCTDRTRFPVMPAECKRDRDV*
SEQ ID NO.4：
ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG
SEQ ID NO.5：
CACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC
SEQ ID NO.6：
CAAGCTGACTCTAGCAGATCTATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG
SEQ ID NO.7：
TCCTTTGCCCATGGCTCTAGACACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC
SEQ ID NO.8：
ACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTC
SEQ ID NO.9：
TTGTGCCCATTAACATCACCATCTA
SEQ ID NO.10：
ATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATGG
SEQ ID NO.11：
CCCTGTCCCAGTGTATTTGTCGAG
SEQ ID NO.12：
GGAACTGGAATGGTGAAGGCTGG
SEQ ID NO.13：
GCTCCTCAGGGGCAACACG
以上对本发明所提供的技术方案进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其特征在于：所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其特征在于：所述BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其特征在于：所述BnaA03.XTH4基因的氨基酸序列还可以为：
将SEQ ID NO.3所示氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加由SEQ ID NO.3衍生的且保持SEQ ID NO.3所示氨基酸序列功能的蛋白。
4.根据权利要求1所述的甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因，其特征在于：所述BnaA03.XTH4基因的连接引物对包括：
正向连接引物BnaA03.XTH4-BglII-F：
CAAGCTGACTCTAGCAGATCTATGGCTGTTTCTTCAGCTCCATG；
反向连接引物BnaA03.XTH4-XbaI-R：
TCCTTTGCCCATGGCTCTAGACACGTCTCTGTCCCTTTTACATTC。
5.一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在油菜育种中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述油菜育种中的应用为矮杆油菜育种中的应用。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
8.一种甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因、或其编码的蛋白、或含有该基因的生物材料在植物株型遗传改良中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述甘蓝型油菜BnaA03.XTH4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述植物为甘蓝型油菜、甘蓝或拟南芥。
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