CN120284836A

CN120284836A - 一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法

Info

Publication number: CN120284836A
Application number: CN202510792418.9A
Authority: CN
Inventors: 陈义; 孙明辉; 金雪梅; 闫彩虹; 滕藤
Original assignee: Carson Jilin Cell Resource Bank Management Co ltd
Current assignee: Carson Jilin Cell Resource Bank Management Co ltd
Priority date: 2025-06-13
Filing date: 2025-06-13
Publication date: 2025-07-11
Anticipated expiration: 2045-06-13
Also published as: CN120284836B

Abstract

本发明公开了一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法，涉及化妆品制备技术领域，所述化妆品包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体1.01%‑5.05%、抗氧化剂0.5%‑3%、积雪草提取物1‑3%、红景天提取物1‑3%、保湿剂10‑15%、余量为基础基质；其中，所述脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和植物细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物；所述植物为人参。本发明中，抗氧化剂、积雪草提取物与外泌体共作用提高护肤品的DPPH清除率、提高皮肤亮度，降低粗糙度，达到了优越的抗衰老性能。本发明的脂质体外泌体‑抗氧化剂‑积雪草三元体系通过多靶点协同作用。

Description

一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法

技术领域

本发明涉及抗衰老护肤品制备技术领域，更具体地说是涉及一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法。

背景技术

近年来，随着再生医学和生物技术的快速发展，外泌体（Exosomes）作为一种新型生物活性成分，在医学和化妆品领域引起了广泛关注。外泌体是由细胞分泌的纳米级（30-150 nm）细胞外囊泡，富含蛋白质、脂质、核酸（如mRNA、miRNA）及生长因子等生物活性物质，能够介导细胞间通讯，调控靶细胞的生理功能。研究表明，外泌体在组织修复、抗炎、抗氧化及促进胶原蛋白合成等方面具有显著潜力，这为其在皮肤健康管理中的应用提供了科学依据。

在化妆品领域，传统活性成分（如维生素、肽类、植物提取物等）虽能一定程度上改善皮肤问题，但存在透皮吸收效率低、稳定性差或作用靶点单一等局限性。相比之下，外泌体因其天然的生物相容性、高效的细胞调控能力及靶向递送特性，被视为突破性成分。例如，间充质干细胞（MSCs）来源的外泌体可通过传递miRNA和生长因子（如EGF、TGF-β），激活成纤维细胞增殖，抑制基质金属蛋白酶（MMPs）表达，从而延缓皮肤衰老并修复光损伤。此外，植物源性外泌体（如葡萄、人参提取的外泌体）因富含抗氧化物质，也被用于增强皮肤屏障功能。

然而，外泌体在化妆品中的应用仍面临多重技术挑战：活性保存：外泌体的生物活性易受冻融循环、制剂配方（如防腐剂、pH值）影响，需开发低温冻干或脂质体包裹等稳定化技术。透皮递送：纳米级尺寸虽利于渗透，但需结合微针、纳米载体或透皮增强剂以提升其对角质层的穿透效率。安全性与合规性：外泌体的来源（如动物、植物或合成）需符合化妆品法规（如欧盟EC 1223/2009），需验证其无致敏性、无细胞毒性，并建立标准化质控方法。

目前，已有部分企业推出含外泌体的护肤产品（如修复精华、抗衰面霜），但其功效宣称多基于体外实验或小样本临床数据，长期应用的安全性及作用机制仍需进一步验证。同时，目前，大部分的化妆品宣称中的抗衰老的功效并不尽人意。

因此，如何提供一种含有外泌体的抗衰老的化妆品是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明实施例一方面提供了一种含有外泌体的抗衰老化妆品，所述化妆品包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体1.01%-5.05%、抗氧化剂0.5%-3%、积雪草提取物1%-3%、红景天提取物1%-3%、保湿剂10%-15%、余量为基础基质；其中，所述脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和植物细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物；所述植物为人参。

优选地，脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比3:1组成。

优选地，所述抗氧化剂为谷胱甘肽、烟酰胺或维生素C衍生物中的任意一种。

优选地，所述保湿剂包括甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸、丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、海藻提取物、生育酚中的一种或几种。

优选地，所述基础基质包括水相、油相和乳化剂；所述水相为去离子水、所述油相为角鲨烷；所述乳化剂为PEG-40氢化蓖麻油，且水相、油相和乳化剂在化妆品中的最终占比分别为60%-70%、10%-15%、2%-5%。

本发明实施例第二方面提供了化妆品的制备方法，制备过程如下：

步骤一、制备脂质体包裹的外泌体：将DPPC与胆固醇溶解于氯仿，旋转蒸发形成薄膜；然后加入外泌体PBS悬液，水化后通过0.2μm聚碳酸酯膜挤出，获得脂质体包裹的外泌体；

步骤二、将脂质体包裹的外泌体与抗氧化剂在25℃下混合，加入预热至60℃的基础基质；均质后冷却至30℃，调节pH至5.5-6.5，获得化妆品。

优选地，DPPC、胆固醇与氯仿的质量比为3：1：7；外泌体与PBS溶液的体积比为1：3。

优选地，所述均质为10,000rpm均质2min。

优选地，制备到的化妆品为精华液、乳液或者面霜。

本发明中，积雪草提取物是从积雪草中提取的复合物质，含有大量三萜类化合物，例如积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸等。积雪草提取物添加到护肤品中，具有促进皮肤中蛋白质合成、祛疤、消炎、抗氧化、美白等作用，可以帮助皮肤保持年轻健康的状态。

脂质体包裹的外泌体的作用：

脂肪间充质干细胞外泌体（ADSC-Exo）：富含促再生因子（如TGF-β、miR-21），激活成纤维细胞胶原合成（I型胶原）。

人参外泌体（Ginseng-Exo）：含人参皂苷衍生物（如Rg3），抑制MMP-1表达（减少胶原降解）。

脂质体包裹优势：

透皮率提升：DPPC/胆固醇脂质体（3:1）将外泌体透皮率从5%提升至25%（荧光标记实验）。稳定性增强：避免外泌体在配方中聚集失活（30天后活性保留＞90%）。

抗氧化剂:谷胱甘肽/烟酰胺/维生素C衍生物的作用：直接清除自由基：谷胱甘肽（GSH）还原ROS；抑制黑色素转运：烟酰胺阻断黑素小体向角质层转移；促进胶原再生：维生素C衍生物（如3-O-乙基抗坏血酸）激活脯氨酰羟化酶。

抗氧化剂维持外泌体膜完整性,减少氧化损伤；外泌体递送miR-146a抑制NF-κB通路，增强抗氧化基因表达。积雪草提取物增强外泌体对成纤维细胞的迁移能力（划痕实验愈合率达40%）；本发明中，抗氧化剂、积雪草提取物与外泌体共作用提高护肤品的DPPH清除率、提高皮肤亮度，降低粗糙度，达到了优越的抗衰老性能。本发明的脂质体外泌体-抗氧化剂-积雪草三元体系通过多靶点协同作用。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明中用到的脂肪来源的外泌体的制备过程如下：

1）将脂肪来源的间充质干细胞在无血清培养基中培养48h，收集上清液；

2）依次通过3000g离心（10min）、0.22μm过滤、超速离心（100,000g，2h）分离外泌体；

3）采用ExoQuick-TC试剂盒纯化，保存于PBS缓冲液（pH 7.4）。

本发明中用到的人参细胞外泌体的制备过程如下：

1）将清水洗净的人参，在室温环境下榨出汁液，榨出的汁液经滤网过滤，收集过滤的液体；3000g离心2h，弃沉淀，收集上清；

2）上清液在4℃，40000g条件下离心2h，收集沉淀，用磷酸缓冲液重悬沉淀得到泌体重悬液；

3）将外泌体重悬液置于置于35℃摇床中，200rpm条件下振荡1.5h，得到外泌体。

实施例1、本实施例提供了一种面霜，包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体1.01%、谷胱甘肽0.5%、积雪草提取物3%、红景天提取物1%、丙二醇和丁二醇和山梨醇和透明质酸钠的总占比10%，PEG-40氢化蓖麻油5%、角鲨烷10%、去离子水69.49%，其中，丙二醇、丁二醇、山梨醇和透明质酸钠质量比为1：1：1：1；脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和人参细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物。脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比3:1组成。

制备过程如下：

步骤一、制备脂质体包裹的外泌体：将DPPC与胆固醇溶解于氯仿，旋转蒸发形成薄膜；然后加入外泌体PBS悬液，水化后通过0.2μm聚碳酸酯膜挤出，获得脂质体包裹的外泌体；DPPC、胆固醇与氯仿的质量比为3：1：7；外泌体与PBS溶液的体积比为1：3。

步骤二、将脂质体包裹的外泌体与抗氧化剂在25℃下混合，加入预热至60℃的基础基质；10,000rpm均质2min后冷却至30℃，调节pH至5.5，获得化妆品。

实施例2、本实施例提供了一种精华液，包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体5.05%、谷胱甘肽3%、积雪草提取物1%、红景天提取物3%、甘油和甘氨酸和精氨酸和乳酸的总占比13.95%、PEG-40氢化蓖麻油2%、角鲨烷12%、去离子水60%。其中，甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸质量比为1：1：1：1，脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和人参细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物；脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比3:1组成。

制备过程如下：

步骤二、将脂质体包裹的外泌体与抗氧化剂在25℃下混合，加入预热至60℃的基础基质；10,000rpm均质2min后冷却至30℃，调节pH至6.5，获得化妆品。

实施例3、本实施例提供了一种乳液，包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体3.5%、谷胱甘肽3%、积雪草提取物1.5%、红景天提取物1.5%、丙二醇和丁二醇和山梨醇和透明质酸钠的总占比15%、PEG-40氢化蓖麻油3%、角鲨烷10.5%、去离子水62%。其中，丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠的质量比为1：1：1：1，脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和人参细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物；脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比3:1组成。

制备过程如下：

步骤二、将脂质体包裹的外泌体与抗氧化剂在25℃下混合，加入预热至60℃的基础基质；10,000rpm均质2min后冷却至30℃，调节pH至6.2，获得化妆品。

对比例1

与实施例3相比，去除积雪草提取物，将脂质体包裹的外泌体的含量提升至4%、谷胱甘肽的含量提升至4%，其余组分不变。

对比例2

与实施例3相比，去除脂质体包裹的外泌体，积雪草提取物的含量提升至3%、谷胱甘肽的含量提升至4.5%，其余组分不变。

对比例3

与实施例3相比，去除谷胱甘肽，将脂质体包裹的外泌体的含量提升至5%，积雪草提取物的含量提升至3%，其余组分不变。

对比例4

与实施例3相比，直接添加未包裹外泌体。

对比例5

与实施例3相比，仅含外泌体和基础基质。

对比例6

与实施例3相比，仅采用人参外泌体。

对比例7

与实施例3相比，仅采用脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体。

测定各实施例和各对比例中获得的护肤品的30d活性成分保留率、DPPH清除率、酪氨酸酶抑制率。结果见表1。

1. DPPH自由基清除率测定

原理：

DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的自由基（紫色），在517nm处有强吸收。当抗氧化剂提供氢原子与其结合时，DPPH被还原为黄色，吸光度降低，通过吸光度变化计算清除率。

试剂与仪器：

DPPH溶液（0.1mM，溶于无水乙醇）

待测样品（各实施例和对比例的护肤品）

紫外分光光度计（测定517nm吸光度）

离心机、微量移液器

步骤：

样品处理：

取1mL样品溶液与1mL DPPH溶液混合，避光反应30min（25℃）。

对照组：1mL无水乙醇 + 1mL DPPH溶液。

空白组：1mL样品 + 1mL无水乙醇。

测定吸光度：

离心（10,000rpm，5min）取上清，测517nm吸光度。

计算清除率：

DPPH清除率(%)=[1−Acontrol(Asample−Ablank)]×100。

2. 酪氨酸酶抑制率测定

酪氨酸酶是黑色素合成的关键酶，催化酪氨酸→多巴→多巴醌。通过检测左旋多巴（L-DOPA）在475nm的吸光度变化，评估样品对酶活性的抑制能力。

试剂与仪器：

酪氨酸酶（来自蘑菇，≥1000U/mg）

L-DOPA溶液（2mM，pH6.8磷酸缓冲液配制）

待测样品

紫外分光光度计（测定475nm吸光度）

恒温水浴锅（37℃）

步骤：

反应体系（200μL）：

对照组：50μL酪氨酸酶（50U/mL） + 100μL L-DOPA + 50μL缓冲液。

实验组：50μL酪氨酸酶 + 100μL L-DOPA + 50μL样品溶液。

空白组：50μL缓冲液（无酶） + 100μL L-DOPA + 50μL样品。

反应条件：

37℃孵育20min，立即冰浴终止反应。

测定吸光度：

离心后测475nm吸光度；

计算抑制率：

酪氨酸酶抑制率(%)=[1−Acontrol(Asample−Ablank)]×100。

表1DPPH清除率、酪氨酸酶抑制率和透皮率

。

选取100名女性志愿者，年龄20-50周岁，身体健康，但面部暗黄，皮肤暗淡无光，色斑较多，皮肤粗糙。随机分为10组，签署保密协议后，分别试用实施例3和对比例1-7的护肤品3个月，记录1个月、2个月、3个月后，各组志愿者的皮肤情况(光泽度、粗糙度、色斑沉积情况)。

其中，皮肤光泽度由SkinGlossMeter，SGM2008，数值越大，表示皮肤越有光泽；皮肤粗糙度参数是由PrimosCR拍摄受试者的面颊局部皮肤3D图像，再通过专业的分析软件进行分析得到的参数，用Sa值来表征。Sa值是测量面积范围内每个点的高度的算术平均值；参数的数值越低，则表示皮肤越平滑。

每组志愿者在使用护肤品前测值，取均值；使用产品3个月后记录数值。

实验前，各组对应志愿者的光泽度平均值均在46-48之间；粗糙度均在25.1-25.2之间。

结果见表2；

表2 记录志愿者使用产品后的粗糙度、皮肤光泽度

。

由表1和表2可知，本发明中积雪草提取物、抗氧化剂和外泌体三者之间协同作用，显著提高了皮肤的光泽，提高了抗氧化性能，同时，外泌体被包被后，稳定性提高，有效地防止了被降解，提高了化妆品中有效成分的含量。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims

1.一种含有外泌体的抗衰老化妆品，其特征在于，所述化妆品包括下述质量分数的成分：脂质体包裹的外泌体1.01%-5.05%、抗氧化剂0.5%-3%、积雪草提取物1%-3%、红景天提取物1%-3%、保湿剂10%-15%、余量为基础基质；其中，所述脂质体包裹的外泌体为脂肪来源的间充质干细胞分泌的外泌体和植物细胞分泌的外泌体按照质量比为1.5：1.2的比例混合而成的混合物；所述植物为人参。

2.根据权利要求1所述的一种含有外泌体的抗衰老化妆品，其特征在于，脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC与胆固醇按质量比3:1组成。

3.根据权利要求1所述的一种含有外泌体的抗衰老化妆品，其特征在于，所述抗氧化剂为谷胱甘肽、烟酰胺或维生素C衍生物中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种含有外泌体的抗衰老化妆品的制备方法，其特征在于，所述保湿剂包括甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸、丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、海藻提取物、生育酚中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的一种含有外泌体的抗衰老化妆品，其特征在于，所述所述基础基质包括水相、油相和乳化剂；所述水相为去离子水、所述油相为角鲨烷；所述乳化剂为PEG-40氢化蓖麻油，且水相、油相和乳化剂在化妆品中的最终占比分别为60%-70%、10%-15%、2%-5%。

6.权利要求1-5任一所述的抗衰老化妆品的制备方法，其特征在于，制备过程如下：

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，DPPC、胆固醇与氯仿的质量比为3：1：7；外泌体与PBS溶液的体积比为1：3。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述均质为10,000rpm均质2min。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，制备到的化妆品为精华液、乳液或者面霜。