[go: up one dir, main page]

CN120173109A - 抗sST2抗体及其用途 - Google Patents

抗sST2抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN120173109A
CN120173109A CN202411833772.3A CN202411833772A CN120173109A CN 120173109 A CN120173109 A CN 120173109A CN 202411833772 A CN202411833772 A CN 202411833772A CN 120173109 A CN120173109 A CN 120173109A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
optionally
amino acid
acid sequence
mutation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202411833772.3A
Other languages
English (en)
Inventor
王磊
胡志珍
许海燕
钟冬梅
孟媛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd filed Critical Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Publication of CN120173109A publication Critical patent/CN120173109A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B30/00—Methods of screening libraries
    • C40B30/04—Methods of screening libraries by measuring the ability to specifically bind a target molecule, e.g. antibody-antigen binding, receptor-ligand binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/10—Libraries containing peptides or polypeptides, or derivatives thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/715—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • G01N2333/7155—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗sST2的抗体及其应用，涉及抗体领域。本发明公开的抗sST2抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区，该抗体为sST2的检测提供了重要的原料来源，且具有优良的亲和力或活性。

Description

抗sST2抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本公开要求于2023年12月19日提交中国专利局的申请号为202311761833.5、名称为“抗sST2抗体及其用途”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本公开中。
技术领域
本发明属于抗体技术领域，具体地，本发明涉及一种sST2抗体及其用途，更具体地，本发明涉及一种sST2的抗体、核酸分子、载体、细胞或宿主、抗体的制备方法、偶联物、试剂或试剂盒及其用途、检测sST2的方法、筛选sST2抗体的方法和突变文库。
背景技术
生长刺激表达基因2蛋白(ST2)也被称为T1、IL1RL1或Fit1基因并且位于人的2q12号染色体上，约40KD，ST2基因的转录产物有4种亚型，其中有两种由于受到不同的启动子调控的亚型最为重要:第一种为跨膜ST2(ST2L)，由3个细胞外免疫球蛋白G结构域、一个跨膜结构域和一个细胞内结构域组成，是白细胞介素-1受体家族的膜受体成员；另外一种为可溶性ST2(sST2)，sST2由于缺乏跨膜和细胞内结构域，所以可以在血液中自由流动，使其可在血清中检测到。
心血管疾病(CVD)是世界范围内的主要死亡原因，脑钠肽(BNP)和脑钠肽前体NT-proBNP是心力衰竭(HF)最著名的标志物，肌钙蛋白标志物改善了急性和慢性冠状动脉疾病的诊断,然而，单一的生物标记物不仅只能反映心力衰竭病理机制的单方面，而且还受肾脏功能、年龄、BMI等所致肺动脉高压等影响，降低了这些生物标记的准确性。随着对sST2和ST2L作用于心血管系统的认识的增加，人们开始考虑将血浆sST2水平的评估作为心血管事件尤其是与心力衰竭和缺血性心脏病相关的指标和临床条件的一种新的标志物，且sST2不受肾脏功能、年龄、体重等指数的影响。sST2同样被认为是急性心力衰竭并且伴有哮喘患者的一种可能的生物标志物。研究还证实了sST2在预测死亡率方面的作用，sST2可以联合其他生物标记物作为预后生物标志物，sST2还可以用来监测心力衰竭的药物学反应，与心力衰竭的推荐治疗药物有相关关系，可以为临床对治疗药物以及方案的选择提供参考。
目前国内用于检测sST2的主要方法有酶联免疫吸附法(ELISA)、磁微粒化学发光法、金标法等；不同的检测方法都需要针对于sST2的特异性单克隆抗体。因此，本领域对于有效且结合sST2并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。
发明内容
本发明旨在提供了一种抗sST2的抗体、检测sST2的试剂或试剂盒。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种抗sST2抗体，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3为下述所示的氨基酸序列：
HCDR 1:SSWMN；
HCDR 2:RIYPGX1GNTNYDGNFKG，其中，X1为D、F、W或L；
HCDR 3:ERFLTTLVDAX2DY，其中，X2为M或Y；
LCDR 1:RASQDISNYLN；
LCDR 2:YTSRLHS；
LCDR 3:QQX3IEX4PX5T，其中，X3为S、K或R，X4为D、Y、F或H，X5为L、Y或R。
在本发明的第二个方面，本发明提出了一种抗sST2抗体，包括重链可变区和/或轻链可变区；所述重链可变区包括如SEQ ID NO:17或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:17的变体包括如下位点的突变：D55F/W/L、M109Y中的至少之一；所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:18或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:18的变体包括如下位点的突变：S91K/R、D94Y/F/H、L96Y/R中的至少之一。
在本发明的第三个方面，本发明提出了一种抗sST2抗体，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3为第二方面所述的抗体所限定的重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述LCDR1、LCDR2、LCDR3为第二方面所述的抗体所限定的轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
在本发明的第四方面，本发明提出了一种核酸分子，所述核酸分子编码第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。
在本发明的第五方面，本发明提出了一种载体，所述载体包括第四方面所述的核酸分子。
在本发明的第六方面，本发明提出了一种细胞或宿主，所述细胞或宿主包括：第四方面所述的核酸分子或第五方面所述的载体；或者表达第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。
在本发明的第七方面，本发明提出了一种制备第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体的方法，所述方法包括培养第六方面所述的细胞或宿主。
在本发明的第八方面，本发明提出了一种偶联物，所述偶联物包括：第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体以及与其偶联的偶联部分。
在本发明的第九方面，本发明提出了一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括：第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体或第七方面所述的偶联物。
在本发明的第十方面，本发明提出了一种第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体、第八方面所述的偶联物、第九方面所述的试剂或试剂盒在检测sST2、制备用于检测sST2的产品或制备用于诊断心血管疾病的产品中的用途。
在本发明的第十一方面，本发明提出了一种检测sST2的方法，所述方法包括：采用第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体、第八方面所述的偶联物或第九方面所述的试剂或试剂盒与待检测样本进行接触，形成免疫复合物。
在本发明的第十二方面，本发明提出了一种筛选sST2抗体的方法，所述方法包括：a)设计引物，用于对第一方面所述的抗体中所限定的X1、X2、X3、X4和X5中的位点、或者第二方面所述的抗体中所限定的突变位点进行氨基酸替换；b)以第四方面所述的核酸分子、第五方面所述的载体或第六方面所述的细胞为模板，用a)所述引物构建的突变文库；c)从所述突变文库中筛选sST2抗体。
在本发明的第十三方面，本发明提出了一种突变文库，所述突变文库包括第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文中使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。
在本文中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
在本文中，术语“可选地”、“可选的”、“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
在本文中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体、多特异性抗体、嵌合抗体或抗体的抗原结合片段，具体结构不受限制，只要它们展示所需的抗原结合能力。
在本文中，术语“全长抗体”、“全长单抗”或“全长单克隆抗体”均是由至少两条相同的轻链和至少两条相同的重链通过链间二硫键连接而成，如免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)或免疫球蛋白E(IgE)。
在本文中，术语“多抗”和“多特异性抗体”同义，均是指可识别多种抗原表位的抗体，例如可识别两种抗原表位的抗体(双特异性抗体，简称双抗)、三种抗原表位的抗体或者四种抗原表位的抗体，其为广义理解，具体结构不受限制，可识别多种抗原表位即可。在本发明中，多种抗原表位的其中至少之一来源于sST2。
在本文中，术语“抗原结合片段”是包含抗体的一部分或全部的片段，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合抗原的性能活性，例如，该片段可包含抗体CDR的一部分或全部。此类片段结合至抗原，且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。此类片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、Fv、scFv、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白、单域抗体、或最小识别单位。此类片段可通过重组核酸技术产生，或可通过抗原结合分子(包括完整抗体)的酶裂解或化学裂解产生。
在本文中，术语“Fab抗体”或“Fab片段”通常是指仅含Fab分子的抗体或片段，其由重链的VH和CH1以及完整的轻链构成，轻链和重链之间通过一个二硫键连接。
在本文中，术语“F(ab’)2抗体”或“F(ab’)2片段”具有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合F(ab’)部分。
在本文中，术语“Fv抗体”或“Fv片段”通常是指仅由轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)通过非共价键连接而成的抗体或片段，是抗体分了保留完整抗原结合部位的最小功能片段。
在本文中，术语“单链抗体”、“scFv片段”是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽连接而成的抗体或片段。
在本文中，术语“最小识别单位”和“MRU”均是指仅由一个CDR组成的抗体或片段，其分子量十分小仅占完全抗体的1％左右。
在本文中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。
在本文中，重链互补决定区(重链可变区CDR)用“HCDRs”或“HCDR”表示，其包括HCDR1(又称CDR-H1)、HCDR2(又称CDR-H2)和HCDR3(又称CDR-H3)；轻链互补决定区(轻链可变区CDR)用“LCDRs”或“LCDR”表示，其包括LCDR1(又称CDR-L1)、LCDR2(又称CDR-L2)和LCDR3(又称CDR-L3)。本领域常用的CDR定义系统包括：Kabat定义、Chothia定义、IMGT定义、Contact定义和AbM定义。如本文所述，“Kabat定义”是指Kabat等，U.S.Dept.of Health andHuman Services，“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的定义系统。“Chothia定义”参见Chothia等，J Mol Biol 196：901-917(1987)。示例性定义的CDR列于下表1中，不同文献中的定义略有不同，在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定CDR。需要说明的是，本发明定义的CDR包括不限于表1中的方法定义的CDR，基于本申请公开的重链可变区和轻链可变区采用本领域公开的其他方法定义的CDR也属于本公开的保护范围。
表1：CDR定义1
CDR Kabat AbM2 IMGT Chothia
HCDR1 H31～H353 H26～H353 H26～H33..355 H26～H32..344
HCDR2 H50～H65 H50～H58 H51～H57 H52～H56
HCDR3 H95～H102 H95～H102 H93～H102 H95～H102
LCDR1 L24～L34 L24～L34 L27～L32 L24～L34
LCDR2 L50～L56 L50～L56 L50～L51 L50～L56
LCDR3 L89～L97 L89～L97 L89～L97 L89～L97
1表1中所有CDR定义的编号是依据Kabat编号系统(参见下文)，重链上的氨基酸编号用“H+数字”表示，轻链上的氨基酸编号用“L+数字”表示。
2如表1中使用的“AbM”具有小写“b”，是指通过Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义的CDR。
3如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在35位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在35A位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在35B位。
4如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在32位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在33位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在34位。
5如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在33位；如果只有H35A存在时，那么CDR-H1结束在34位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在35位。
Kabat等还定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员可以明确地将该Kabat编号系统对应到任何可变区序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所述，“Kabat编号”是指采用《Kabat等，U.S.Dept.of Health andHumanServices，“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)》所述的编号系统进行编号的，采用上述编号系统对本申请的抗体的HCDRs和LCDRs进行编号，具体编号结果参见表1。需要说明的是，本发明的多肽序列未根据Kabat编号系统进行编号。然而，本领域普通技术人员完全能够将序列表的序列编号转换为Kabat编号。
在本文中，术语“框架区”或“FR”区包括重链框架区和轻链框架区，是指抗体重链可变区(可以表示为VH)和轻链可变区(可以表示为VL)中除CDR之外的区域；其中，重链框架区用“HFR”表示，并且可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区；轻链框架区用“LFR”表示，并且可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4框架区。
在本文中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。
在本文中，术语“同一性”、“同源性”或“相似性”均用于描述相对于参考序列的氨基酸序列或核酸序列时，采用通过常规的方法进行确定两个氨基酸序列或核酸序列之间的相同氨基酸或核苷酸的百分比，例如参见，Ausubel等，编著(1995)，Current Protocols inMolecular Biology，第19章(Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York)；和ALIGN程序(Dayhoff(1978)，Atlas of Protein Sequence and Structure 5：Suppl.3(National Biomedical Research Foundation，Washington，D.C.)。关于比对序列和测定序列同一性有很多算法，包括，Needleman等(1970)J.Mol.Biol.48：443的同源性比对算法；Smith等(1981)Adv.Appl.Math.2：482的局部同源性算法；Pearson等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444的相似性搜索方法；Smith-Waterman算法(Meth.Mol.Biol.70：173-187(1997)；和BLASTP，BLASTN，和BLASTX算法(参见Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410)。利用这些算法的计算机程序也是可获得的，并且包括但不限于：ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件，或者WU-BLAST-2(Altschul等，Meth.Enzym.，266：460-480(1996))；或者GAP，BESTFIT，BLAST Altschul等，上文，FASTA，和TFASTA，在Genetics Computing Group(GCG)包，8版，Madison，Wisconsin，USA中可获得；和Intelligenetics，Mountain View，California提供的PC/Gene程序中的CLUSTAL。
在不实质性影响抗体活性(保留至少90％的活性)的前提下，本领域技术人员可以对本发明的序列替换、添加和/或缺失一个或更多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个)氨基酸，以获得所述抗体序列的变体。它们都被视为包括在本发明保护的范围内。如在可变区将具有类似性质的氨基酸进行替换。本发明所述变体序列可以与参比序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性(或同源性)。本发明所述的序列一致性可以使用序列分析软件测量。例如使用缺省参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。本发明述及的氨基酸序列均按照N端至C端的方式示出。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求所限定的突变位点的位置或编号也需根据添加和/或缺失的氨基酸的个数和位置进行调整。
在本文中，术语“至少80％同源性”指与各参考序列至少为80％，可为80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％的同源性。术语“至少90％同源性”指与各参考序列至少为90％，可为90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％的同源性。
在本文中，术语“变体”或“突变体”可以指包含一个或多个核苷酸或氨基酸突变的任何天然存在的或工程化的分子。
在本文中，术语“载体”通常是指能够插入在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到细胞或宿主中和/或细胞或宿主之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的细胞或宿主时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的细胞或宿主，所述载体可以产生期望的表达产物。
在本文中，术语“细胞”通常是指采用基因工程技术或细胞融合技术对宿主细胞的遗传物质进行修饰改造或重组，获得具有稳定遗传的独特性状的细胞。其中，术语“宿主细胞”是指可导入重组载体的原核细胞或真核细胞。本文所用术语“转化的”或“转染的”是指通过本领域已知的各种技术将核酸(例如载体)引入细胞。合适的宿主细胞可以用本发明的DNA序列转化或转染，并且可以用于靶蛋白的表达和/或分泌。可用于本发明的合适宿主细胞的例子包括永生化杂交瘤细胞、NS/0骨髓瘤细胞、293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、Cap细胞(人羊水来源的细胞)和CoS细胞。
本发明提出了一种抗sST2抗体、核酸分子、载体、细胞或宿主、抗体的制备方法、偶联物、试剂或试剂盒及其用途、检测sST2的方法、筛选sST2抗体的方法和突变文库，下面将分别对其进行详细描述。
抗体
在本发明的第一方面，本发明提出了一种抗sST2抗体。根据本发明的实施例，所述抗体包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3为下述所示的氨基酸序列：
HCDR 1:SSWMN；
HCDR 2:RIYPGX1GNTNYDGNFKG，其中，X1为D、F、W或L；
HCDR 3:ERFLTTLVDAX2DY，其中，X2为M或Y；
LCDR 1:RASQDISNYLN；
LCDR 2:YTSRLHS；
LCDR 3:QQX3IEX4PX5T，其中，X3为S、K或R，X4为D、Y、F或H，X5为L、Y或R。
根据本发明的实施例，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2，和LCDR3由Kabat系统定义。
由前述CDR的定义原则可知，采用不同的系统进行定义，即使是相同的重链可变区或相同的轻链可变区，其获得的CDR也不同。本申请中的“HCDR 1:SSWMN”是指HCDR 1的氨基酸序列包括或为SSWMN，其还可以根据不同的系统进行调整，得到序列短或长于SSWMN的HCDR 1。
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X1为D；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X1为F；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X1为W；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X1为L；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X2为M；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X2为Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X3为S；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X3为K；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X3为R；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X4为D；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X4为Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X4为F；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X4为H；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X5为L；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X5为Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X5为R；
在本发明的一些可选的实施方式中，X1为D、X2为M、X3为S、X4为D和X5为L不同时成立；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述X1、X2、X3、X4和X5选自如下组合中的任意一种：
本发明第一方面所述的抗体具有优良的活性、亲和力、稳定性或特异性。
本发明第一方面所述抗体具有改善的活性、亲和力、稳定性或特异性。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种抗sST2抗体，包括重链可变区和/或轻链可变区；所述重链可变区包括如SEQ ID NO:17或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:17的变体包括如下位点的突变：D55F/W/L、M109Y中的至少之一；所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:18或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:18的变体包括如下位点的突变：S91K/R、D94Y/F/H、L96Y/R中的至少之一。
需要说明的是，上述重链可变区位点的编号是通过将SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列从N端到C端依次按顺序进行编号获得的。例如，第109位是指SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列从N端开始的第109位；所述“M109Y”是指SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列编号第109位的甲硫氨酸被酪氨酸替代。
上述轻链可变区位点的编号是通过将SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列从N端到C端依次按顺序进行编号获得的。例如，第91位是指SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列从N端开始的第91位；所述“S91K”是指SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列第91位的丝氨酸被赖氨酸替代；所述“S91K/R”是指SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列第91位的丝氨酸可被赖氨酸或精氨酸替代。
根据本发明的实施例，上述抗体还可以进一步包括下列附加技术特征中的至少之一：
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第55位的突变为D55F；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第55位的突变为D55W；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第55位的突变为D55L；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第109位的突变为M109Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第91位的突变为S91K；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第91位的突变为S91R；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第94位的突变为D94Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第94位的突变为D94F；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第94位的突变为D94H；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第96位的突变为L96Y；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述第96位的突变为L96R；
在本发明的一些可选的实施方式中，所述重链可变区和轻链可变区选自如下组合的任意一种：
需要说明的是，上表中的“，”表示“和”，即组合突变，例如“S91K,D94F,L96R”表示进行S91K、D94F和L96R三个突变的组合突变。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种抗sST2抗体。根据本发明的实施例，所述抗体包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3为第二方面所述的抗体所限定的重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述LCDR1、LCDR2、LCDR3为第二方面所述的抗体所限定的轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
需要说明的是，第三方面所述的抗体中的HCDR1、HCDR2和HCDR3为第二方面所述的抗体中所限定的同一条重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3，LCDR1、LCDR2和LCDR3为第二方面所述的抗体中所限定的同一条轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
例如当第二方面所述的抗体中所限定的重链可变区相比于SEQ ID NO:17无突变时，该重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3分别为HCDR 1:SSWMN；HCDR 2:RIYPGDGNTNYDGNFKG；HCDR 3:ERFLTTLVDAMDY；则第三方面所述抗体所含的HCDR1、HCDR2、HCDR3也分别为HCDR 1:SSWMN；HCDR 2:RIYPGDGNTNYDGNFKG；HCDR 3:ERFLTTLVDAMDY。
例如当第二方面所述的抗体中所限定的轻链可变区相比于SEQ ID NO:18仅存在S91K位点的突变时，该轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3分别为LCDR 1:RASQDISNYLN；LCDR2:YTSRLHS；LCDR 3:QQKIEDPLT；则第三方面所述抗体所含的LCDR1、LCDR2、LCDR3也分别为LCDR 1:RASQDISNYLN；LCDR 2:YTSRLHS；LCDR 3:QQKIEDPLT。
根据本发明的实施例，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2，和LCDR3由Kabat系统定义。
在本发明的一些可选实施例中，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2，或LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义。
根据本发明的实施例，第一方面或第三方面所述的抗体还包括HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一。
在本发明的一个可选实施例中，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体、牛源抗体、马源抗体、乳牛源抗体、猪源抗体、绵羊源抗体、山羊源抗体、狗源抗体、猫源抗体、兔源抗体、骆驼源抗体、驴源抗体、鹿源抗体、貂源抗体、鸡源抗体、鸭源抗体、鹅源抗体、火鸡源抗体、斗鸡源抗体或其突变体中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述HFR1包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述HFR2包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述HFR3包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述HFR4包括如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述LFR1包括如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述LFR2包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述LFR3包括如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；所述LFR4包括如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，上述第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述抗体的亲和力KD＜10-9M。
根据本发明的实施例，所述抗体的亲和力KD＜10-10M。
根据本发明的实施例，所述抗体的亲和力KD＜10-11M。
根据本发明的实施例，所述抗体的亲和力KD＜10-12M。
根据本发明的实施例，所述抗体的亲和力KD＜10-13M。
根据本发明的实施例，所述抗体进一步包括恒定区；其中，所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体、牛源抗体、马源抗体、乳牛源抗体、猪源抗体、绵羊源抗体、山羊源抗体、狗源抗体、猫源抗体、兔源抗体、骆驼源抗体、驴源抗体、鹿源抗体、貂源抗体、鸡源抗体、鸭源抗体、鹅源抗体、火鸡源抗体、斗鸡源抗体或其突变体中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述重链恒定区选自IgG、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的重链恒定区或多种恒定区区段的组合。
在本发明的一个可选实施例中，所述重链恒定区包括IgG的CH1、IgG的铰链区、IgM的CH2、IgM的CH3和/或IgM的CH4。
在本发明的一个可选实施例中，所述IgG选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。
根据本发明的实施例，所述轻链恒定区包括选自κ型或λ型轻链恒定区。
在本发明的一个可选实施例中，所述重链恒定区包括或为如SEQ ID NO:15或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的重链恒定区；或者所述轻链恒定区包括或为如SEQ ID NO:16或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的轻链恒定区。
根据本发明的实施例，所述重链恒定区的N端与所述重链可变区的C端相连，所述轻链恒定区的N端与所述轻链可变区的C端相连。
在本文中，可变区和恒定区序列的划分参照IMGT划分法，参见Lefranc,the international ImMunoGeneTics database.Nucl.Acids Res.,29(1):207-209(2001).DOI:10.1093/nar/29.1.207.PMID:11125093.及Martinez-Jean C.andBosc N.或Franois Ehrenmann,Patrice Duroux,Chantal Ginestoux,Gene table:housemouse(Mus musculus)IGHC,IMGT Repertoire.the internationalImMunoGenetics informationhttp://www.imgt.org.Created:16/03/2011.Version:17/01/2020.或Ehrenmann,Patrice Duroux,Chantal Ginestoux,Gene table:house mouse(Mus musculus)IGLC,IMGT Repertoire.theinternational ImMunoGenetics informationhttp://www.imgt.org.Created:16/03/2011.Version:17/01/2020.。不同方法划分的可变区与IMGT划分的可变区C端或恒定区N端会有部分氨基酸的差异，本领域公知的其他方法划分的可变区或恒定区也在本发明的保护范围内。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对第一方面所述的抗体所描述的特征和优点，同样适用于该第二方面或第三方面所述的抗体，在此不再赘述。
核酸分子、载体、细胞或宿主、制备抗体的方法
在制备或者获取第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体的过程中，可以利用表达这些抗体的核酸分子，与不同的载体连接，然后在不同细胞中表达，来获得相应抗体。
在本发明的第四方面，本发明提出了一种核酸分子。根据本发明的实施例，所述核酸分子编码第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。根据本发明实施例的核酸分子可编码获得上述的抗体。
根据本发明的实施例，所述核酸分子包括DNA或RNA。
需要说明的是，对于本文中所提及的核酸分子，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本文中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。另外，本发明中的分子序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。
在本发明的第五方面，本发明提出了一种载体。根据本发明的实施例，所述载体包括第四方面所述的核酸分子。在将上述核酸分子连接到载体上时，可以将所述核酸分子与载体上的控制元件直接或者间接相连，只要这些控制元件能够控制所述核酸分子的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。当然，所述核酸分子与控制元件进行可操作地连接即可。本文中“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上，使得载体内的控制元件，例如转录控制序列和翻译控制序列等等，能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。常用的载体例如可以为质粒、噬菌体等等。根据本发明的一些具体实施例的载体导入合适的受体细胞后，可在调控系统的介导下，有效实现前述的抗体的表达，进而实现抗体的体外大量获得。
在本发明的一些具体实施例中，所述载体为真核表达载体、原核表达载体、病毒或噬菌体。
在本发明的一个可选实施例中，所述表达载体为质粒表达载体。
在本发明的第六方面，本发明提出了一种细胞或宿主。根据本发明的实施例，所述细胞或宿主包括：第四方面所述的核酸分子或第五方面所述的载体；或者表达第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。利用该细胞在适合条件下，能够在细胞内有效地表达前述的抗体。
根据本发明的实施例，所述细胞是通过将第五方面所述的载体引入至细胞中而获得的。
需要说明的是，本发明的细胞不受特别限制，可以为原核细胞、真核细胞或噬菌体。所述原核细胞可以为大肠杆菌、枯草杆菌、链霉菌或奇异变形菌等。所述真核细胞包括巴斯德毕赤酵母、酿酒酵母、裂殖酵母、木霉等真菌，草地粘虫等昆虫细胞，烟草等植物细胞，BHK细胞、CHO细胞、COS细胞、骨髓瘤细胞等哺乳动物细胞。
在本发明的一个可选实施例中，所述细胞为哺乳动物细胞，包括BHK细胞、CHO细胞、NSO细胞或COS细胞，且不包括动物生殖细胞、受精卵或胚胎干细胞。
需要说明的是，本发明中所述的“适合条件”，是指适合本发明所述抗体表达的条件。本领域技术人员容易理解的是，适合所述抗体表达的条件包括但不限于合适的转化或转染方式、合适的转化或转染条件、健康的细胞状态、合适的细胞密度、适宜的细胞培养环境、适宜的细胞培养时间。“适合条件”不受特别限制，本领域技术人员可根据实验室的具体环境，优化最适的所述抗体表达的条件。
在本发明的第七方面，本发明提出了一种制备第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括培养第六方面所述的细胞或宿主。根据本发明一些具体实施例的方法能够有效大量获得所述抗体。
在本公开的抗体的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、重组表达)制备得到该抗体，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本公开的抗体，其均属于本公开的保护范围。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体所描述的特征和优点，同样适用于该核酸分子、载体、细胞或宿主、制备抗体的方法，在此不再赘述。
偶联物、试剂或试剂盒及其用途
在本发明的第八方面，本发明提出了一种偶联物。根据本发明的实施例，所述偶联物包括：第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体以及与其偶联的偶联部分。根据本发明实施例的偶联物可特异性结合sST2，可用于sST2的定性或定量检测，或者用于指示sST2相关疾病。
根据本发明的实施例，上述偶联物还可以进一步包括下列附加技术特征中的至少之一：
根据本发明的实施例，所述偶联部分包括纯化标签、亲和性物质、标记物和固相载体中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述纯化标签包括His标签、Flag标签、GST标签、MBP标签、SUMO标签和C-Myc标签中的至少之一。
在本文中，所述亲和性物质可以是例如，生物素、生物素衍生物或链霉亲和素，相互互补的正义链和反义链的核酸中的一者。
在本发明的一些可选实施例中，所述亲和性物质包括选自生物素、生物素衍生物或链霉亲和素中的至少之一。
在本文中，“标记物”是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。
根据本发明的实施例，所述标记物包括选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物中的至少之一。
在实际的使用过程中，本领域技术人员可以根据检测条件或实际需要选择合适的标记物，无论使用何种标记物，其均属于本发明的保护范围。
根据本发明的实施例，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物(例如包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)羟基光素(FAM)、四氯光素(TET)等或其类似物)、罗丹明类染料及其衍生物(例如包括但不限于红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等或其类似物)、Cy系列染料及其衍生物(例如包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy3等或其类似物)、Alexa系列染料及其衍生物(例如包括但不限于AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、33、647、680、700、750等或其类似物)和蛋白类染料及其衍生物(例如包括但不限于藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等)。
根据本发明的实施例，所述酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。
根据本发明的实施例，所述放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F。
根据本发明的实施例，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。
根据本发明的实施例，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。
根据本发明的实施例，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。
根据本发明的实施例，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
在本文中，所述固相载体可以为能够在液相中悬浊或分散的物质(例如，粒子、磁珠等固相载体)，或者为能够收容或搭载液相的固相(例如，板、膜、试管等支持体，以及孔板、微流路、玻璃毛细管、纳米柱、整体柱等的容器)。
根据本发明的实施例，所述固相载体包括选自微球、板和膜中的至少之一。
在本发明的第九方面，本发明提出了一种试剂或试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂或试剂盒包括：第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体或第八方面所述的偶联物。如前所述，本发明一些具体实施方式或实施例中的抗体能够与sST2进行结合，因此，包含所述抗体的试剂或试剂盒能够有效的对sST2进行定性或定量检测。应用本发明提供的试剂或试剂盒，例如可以用于免疫印迹、免疫沉淀等涉及到利用sST2和其抗体特异性结合性能的检测。如前所述，本发明的突变抗体具有改善的sST2结合活性、亲和力、稳定性或特异性，因此包含所述抗体的试剂或试剂盒具有改善的检测灵敏度或特异性。
上述试剂盒可包含下列中的任意一种或多种：处理液、抗sST2抗体、sST2质控品、抗IgG抗体、说明书或者文献等。抗sST2抗体可被用于不同类型的诊断测试，例如可以在体外或者体内检测各种各样的疾病或者药物、或者其他蛋白等的存在。例如可以通过对受试者的血清或者血液进行检测，用来测试相关疾病。
在本发明的第十方面，本发明提出了一种第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体、第八方面所述的偶联物、第九方面所述的试剂或试剂盒在检测sST2、诊断心血管疾病、制备用于检测sST2的产品或制备用于诊断心血管疾病的产品中的用途。
根据本发明的实施例，心血管疾病选自心力衰竭和缺血性心脏病中的一种或几种。
根据本发明的实施例，所述“产品”包括但不限于试剂、试纸条、试剂大板或试剂盒。
在本发明的第十一方面，本发明提出了一种检测sST2的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：采用第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体、第八方面所述的偶联物或第九方面所述的试剂或试剂盒与待检测样本进行接触，形成免疫复合物。
根据本发明的实施例，基于所述免疫复合物的信号，确定所述待检测样本中是否含有sST2或所述sST2的含量。
根据本发明的实施例，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体结合。
根据本发明的实施例，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述sST2结合。
根据本发明的实施例，所述信号包括荧光信号。
方法、突变文库
在本发明的第十二方面，本发明提出了一种筛选sST2抗体的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：a)设计引物，用于对第一方面所述的抗体中所限定的X1、X2、X3、X4和X5中的1、2、3、4或5个位点、或者第二方面所述的抗体中所限定的突变位点进行氨基酸替换；b)以第四方面所述的核酸分子、第五方面所述的载体或第六方面所述的细胞或宿主为模板，用a)所述引物构建的突变文库；
c)从所述突变文库中筛选sST2抗体。
根据本发明的实施例，所述突变文库为单点饱和突变文库。
根据本发明的实施例，所述sST2抗体包括或为第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。
在本发明的第十三方面，本发明提出了一种突变文库，所述突变文库包括第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体。
根据本发明的实施例，所述突变文库是通过第十二方面所述方法得到的。
在本发明的第十四方面，本发明提出了一种诊断心血管疾病的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：采用第一方面、第二方面或第三方面所述的抗体、第八方面所述的偶联物或第九方面所述的试剂或试剂盒与来自受试者的待检测样本进行接触，形成免疫复合物。
根据本发明的实施例，心血管疾病选自心力衰竭和缺血性心脏病中的一种或几种。
根据本发明的实施例，上述第十四方面所述的方法还可以进一步包括如下技术特征的至少之一：
根据本发明的实施例，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体结合；
根据本发明的实施例，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述sST2结合。
根据本发明的实施例，所述信号包括荧光信号。
如本文所用，术语“受试者”是指脊椎动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人类。哺乳动物包括但不限于鼠类、猿类、人类、家畜、竞技动物和宠物。在体内获得的或在体外培养的生物实体的组织、细胞及其子代也包括在内。
本文中涉及的氨基酸序列如表2所示：
表2：氨基酸序列
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。
除非另外指明，否则实践本公开将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，2011)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
本实施例中限制性内切酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶购自New England Biolabs公司，Taq DNA聚合酶来购自TaKaRa，凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒市售，引物合成和基因测序由外包公司完成。sST2单克隆抗体(以下简称WT抗体)序列来源于小鼠杂交瘤细胞测序。
实施例1：突变文库的构建和筛选
1、野生型(WT)sST2抗体(简称WT抗体)模板质粒的构建
(1)WT抗体基因合成：
将WT抗体的VH和VL的核苷酸序列进行大肠杆菌密码子优化，然后将抗体基因序列进行基因合成。WT抗体的VH和VL氨基酸序列分别如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示，重链和轻链氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示。
(2)WT抗体基因片段扩增：
将步骤(1)合成好的抗体VH和VL的核苷酸序列，运用DNA聚合酶进行PCR扩增，然后通过琼脂糖凝胶电泳分离抗体条带，接着用凝胶回收试剂盒纯化得到抗体基因片段。
(3)WT抗体基因片段酶切和连接：
将步骤(2)获得的抗体基因片段和V01载体质粒(包括恒定区的核苷酸序列)同时用限制性内切酶进行双酶切，然后用凝胶回收试剂盒纯化得到带有粘性末端的抗体基因片段和V01载体，接着用T4DNA连接酶将抗体基因片段和V01载体在22℃连接4小时后，取连接反应产物进行回收纯化，并测定DNA浓度，最后取100ng的质粒转化到100μl TG1大肠杆菌感受态细胞中，得到菌液。然后将菌液全部涂于含氨苄青霉素抗性的平板上，37℃培养过夜。
(4)WT模板质粒的提取和测序验证
挑选步骤(3)过夜培养的10个单克隆菌落，采用Taq DNA聚合酶进行菌落PCR和凝胶电泳检测，选择正确插入抗体基因序列的菌进行培养扩增，用质粒提取试剂盒等到WT模板质粒，并送测序公司进行基因测序验证。
2、单点突变文库的构建
该部分实验对步骤1获得的WT抗体的VH和VL全CDR区进行单点饱和突变，以构建单点突变文库。
(1)引物设计和合成
利用简并碱基密码子，设计VH和VL全CDR区氨基酸位点(62个氨基酸位点)的单点饱和突变上下游引物62对，并交给外包公司进行引物合成。
(2)单点饱和突变质粒PCR扩增
利用步骤(1)获得的引物，采用PCR方法对单点饱和突变质粒进行PCR扩增。按照表3配置反应体系，然后采用表4的PCR反应条件进行单点饱和突变文库质粒的扩增制备，最后用限制性内切酶在37℃条件下消化步骤1获得的WT模板质粒1小时，得到62个突变文库的质粒。
表3：PCR扩增的反应体系
WT模板质粒 50ng
DNA聚合酶 1μl
DNA聚合酶buffer 10μl
dNTP(2.5mM) 4μl
上游引物(10μM) 1μl
下游引物(10μM) 1μl
ddH2O 定容至50μl
表4：PCR反应条件
Step1 Step2 Step3 Step4 Step5 Step6
温度 95℃ 95℃ 55-60℃ 72℃ 72℃ 4℃
时间 5min 30s 30s 2min 5min ∞
注：Step2～Step4进行22循环。
(3)单点饱和突变质粒转化：
取步骤(2)获得的全CDR区氨基酸位点的突变文库的质粒，各取10μl反应产物转化到100μl TG1大肠杆菌感受态细胞中，获得菌液，然后将菌液全部涂于含氨苄青霉素抗性的平板上，37℃培养过夜。
3、单点突变文库的筛选
(1)突变文库抗体表达
在96孔培养板中事先加入500μl的培养基，每个单点突变文库，挑选92个单克隆菌落，并设置WT、阴性对照(即不插入含有VH\VL基因的菌落)、空白对照(即为只有培养基，不含菌落)菌落，在37℃进行培养5-6小时后，将菌液转接到一块新的96孔培养板中，然后，在37℃进行培养1-2小时后，最后加入诱导培养基，37℃过夜培养表达抗体，得到62个突变文库的抗体表达上清。
(2)突变文库筛选和测序
将市售的sST2按照0.12μg/ml、100μl/孔的量，加入到62块ELISA板中，4℃过夜反应包被，次日，用1-2％脱脂奶粉进行封闭，将该步骤(1)获得的62个突变文库的抗体表达上清，按照100μl/孔的量加入ELISA板孔中，并设置WT、阴性对照(即不插入含有VH\VL基因的菌落)和空白对照(即为只有培养基，不含菌落)，室温孵育2小时，采用常规ELISA的检测方法，进行后续的洗板、显色、读数；最后，对数据结果进行整理分析，结果显示，突变体的活性优于WT，将有活性提升的克隆送测序，最后对测序结果进行分析，选出11个唯一突变候选克隆的突变位点(见表5)进行组合突变文库构建。(表5中的Ratio值代表了亲和力提升的程度，当Ratio值等于1时，表示突变克隆的亲和力和WT一样)。
表5：候选克隆的筛选结果和突变位点
注：在本文中的WT均代表相对于野生型序列无突变(同表6和表7)；在本文中的突变氨基酸的位置是通过将WT的VH或VL的氨基酸序列从N端到C端依次按顺序进行编号获得的。
4、组合突变文库的构建
(1)文库引物设计和合成：
根据步骤3-(2)获得的sST2抗体的VH和VL上的突变位点，设计组合突变文库的扩增引物，并进行引物合成。
(2)片段扩增和连接
根据表3的PCR体系和表4的PCR反应条件，进行抗体突变片段的扩增，然后将抗体突变片段进行胶回收。采用Overlap PCR的方法，将抗体突变片段拼接成完整的抗体片段(重链可变区或轻链可变区)。
最后，采用酶切连接的方法将抗体片段插入V01载体中，形成完整的抗体表达质粒(具体步骤参见步骤1-(3)“WT抗体基因片段酶切和连接”的步骤)。取100ng的质粒转化到100μl TG1大肠杆菌感受态细胞中，将菌液全部涂于含氨苄青霉素抗性的平板上，37℃培养过夜。
5、组合突变文库的筛选
随机挑选55个组合突变抗体进行上清的表达、ELISA筛选检测、阳性克隆测序分析。突变位点信息和Ratio值测定如表6所示。结果显示，突变体1～55的活性是WT的活性的2～6倍，结合活性明显优于WT。
表6：组合突变候选克隆信息
。
实施例2：突变sST2抗体表达
本实施例对于实施例1筛选获得的突变sST2抗体进行表达，具体实验操作如下：
1、真核重组表达质粒构建
pcDNATM3.4vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据实施例1筛选得到的66个候选克隆中可变区基因序列，设计相应抗体序列的VL和VH基因特异性扩增引物及恒定区overlap引物，两端引物分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.73KB的轻链(Light Chain)基因片段和1.40kb的重链(Heavy Chain)基因片段。
重链和轻链基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将酶切后的抗体轻、重链基因片段和载体进行纯化回收，然后将编码抗体轻、重链基因片段分别连接3.4A表达载体中并转化至DH5α大肠杆菌感受态细胞中，生长出菌落后分别挑取单菌落进行PCR鉴定阳性克隆子，挑取阳性克隆子进行测序，确定序列的正确性。挑选测序正确克隆进行质粒提取备用。
2、重组抗体的样品制备
提前复苏HEK293细胞，传代培养到200ml体系，使细胞密度达到(3～5)×106cells/ml，细胞活力>95％；离心清洗细胞，用培养基复溶，同时将细胞密度调整到2.9×106cells/ml，作为细胞稀释液。用培养基分别配制质粒DNA和转染试剂稀释液。将转染试剂稀释液加入到质粒DNA稀释液中，混匀后室温静置放置15min；将该混合物在1min内缓慢加入细胞稀释液中，混匀后取样计数，记录并观察细胞转染后的活力，并将其放置于35℃恒温培养箱中培养，转速120rmp、CO2含量8％，13天后离心收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化得到抗体。
实施例3：亲和力分析
将上述获得的66个突变抗体进行亲和力检测分析，具体步骤为：在Biacore8K+设备上测试抗原抗体的结合解离曲线，仪器自动拟合获得亲和力常数、结合速率、解离速率。在亲和力检测结果中，KD表示平衡解离常数，即亲和力常数，KD值越小，亲和力越高；ka表示结合速率；kd表示解离速率。结果显示，突变抗体与sST2的亲和力明显优于野生型抗体与sST2的亲和力。
表7：亲和力检测数据
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (11)

1.一种抗sST2抗体，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，其特征在于，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3为下述所示的氨基酸序列：
HCDR 1:SSWMN；
HCDR 2:RIYPGX1GNTNYDGNFKG，其中，X1为D、F、W或L；
HCDR 3:ERFLTTLVDAX2DY，其中，X2为M或Y；
LCDR 1:RASQDISNYLN；
LCDR 2:YTSRLHS；
LCDR 3:QQX3IEX4PX5T，其中，X3为S、K或R，X4为D、Y、F或H，X5为L、Y或R；
可选地，所述X1为D；
可选地，所述X1为F；
可选地，所述X1为W；
可选地，所述X1为L；
可选地，所述X2为M；
可选地，所述X2为Y；
可选地，所述X3为S；
可选地，所述X3为K；
可选地，所述X3为R；
可选地，所述X4为D；
可选地，所述X4为Y；
可选地，所述X4为F；
可选地，所述X4为H；
可选地，所述X5为L；
可选地，所述X5为Y；
可选地，所述X5为R；
可选地，X1为D、X2为M、X3为S、X4为D和X5为L不同时成立；
可选地，所述X1、X2、X3、X4和X5选自如下组合中的任意一种：
2.一种抗sST2抗体，其特征在于，包括：重链可变区和轻链可变区；
所述重链可变区包括如SEQ ID NO:17或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:17的变体包括如下位点的突变：D55F/W/L、M109Y中的至少之一；
所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:18或其变体所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列相比，所述SEQ ID NO:18的变体包括如下位点的突变：S91K/R、D94Y/F/H、L96Y/R中的至少之一；
可选地，所述第55位的突变为D55F；
可选地，所述第55位的突变为D55W；
可选地，所述第55位的突变为D55L；
可选地，所述第109位的突变为M109Y；
可选地，所述第91位的突变为S91K；
可选地，所述第91位的突变为S91R；
可选地，所述第94位的突变为D94Y；
可选地，所述第94位的突变为D94F；
可选地，所述第94位的突变为D94H；
可选地，所述第96位的突变为L96Y；
可选地，所述第96位的突变为L96R；
可选地，所述重链可变区和轻链可变区选自如下组合的任意一种：
3.一种抗sST2抗体，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，其特征在于，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3为权利要求2所述的抗体所限定的重链可变区的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述LCDR1、LCDR2、LCDR3为权利要求2所述的抗体所限定的轻链可变区的LCDR1、LCDR2、LCDR3；
可选地，所述HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2或LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义；
可选地，所述抗体包括HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一；
可选地，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体、牛源抗体、马源抗体、乳牛源抗体、猪源抗体、绵羊源抗体、山羊源抗体、狗源抗体、猫源抗体、兔源抗体、骆驼源抗体、驴源抗体、鹿源抗体、貂源抗体、鸡源抗体、鸭源抗体、鹅源抗体、火鸡源抗体、斗鸡源抗体或其突变体中的至少之一；
可选地，所述HFR1包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR2包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR3包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR4包括如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR1包括如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR2包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR3包括如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR4包括如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体进一步包括恒定区；
其中，所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区中的至少之一；
可选地，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体、牛源抗体、马源抗体、乳牛源抗体、猪源抗体、绵羊源抗体、山羊源抗体、狗源抗体、猫源抗体、兔源抗体、骆驼源抗体、驴源抗体、鹿源抗体、貂源抗体、鸡源抗体、鸭源抗体、鹅源抗体、火鸡源抗体、斗鸡源抗体或其突变体中的至少之一；
可选地，所述重链恒定区选自IgG、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的重链恒定区或多种恒定区区段的组合；
可选地，所述重链恒定区包括IgG的CH1、IgG的铰链区、IgM的CH2、IgM的CH3和/或IgM的CH4；
可选地，所述轻链恒定区包括选自κ型或λ型轻链恒定区；
可选地，所述重链恒定区包括或为如SEQ ID NO:15或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的重链恒定区；或者
所述轻链恒定区包括或为如SEQ ID NO:16或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列所示的轻链恒定区。
5.一种核酸、载体、细胞或制备权利要求1～4任一项所述抗体的方法，其特征在于，所述核酸编码权利要求1～4任一项所述的抗体；所述载体含有上述的核酸；所述细胞含有上述的核酸或载体；所述方法包括培养上述的细胞。
6.一种偶联物，其特征在于，包括：权利要求1～4任一项所述的抗体以及与其偶联的偶联部分；
可选地，所述偶联部分包括纯化标签、亲和性物质、标记物和固相载体中的至少之一；
可选地，所述纯化标签包括His标签、Flag标签、GST标签、MBP标签、SUMO标签和C-Myc标签中的至少之一；
可选地，所述固相载体包括选自微球、板和膜中的至少之一；
可选地，所述标记物包括选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物中的至少之一；
可选地，所述亲和性物质包括选自生物素、生物素衍生物或链霉亲和素的至少之一。
7.一种试剂或试剂盒，其特征在于，包括：
权利要求1～4任一项所述的抗体或权利要求6所述的偶联物。
8.权利要求1～4任一项所述的抗体、权利要求6所述的偶联物、权利要求7所述的试剂或试剂盒在检测sST2、制备用于检测sST2的产品或制备用于诊断心血管疾病的产品中的用途；
可选地，所述心血管疾病选自心力衰竭和缺血性心脏病中的一种或几种。
9.一种检测sST2的方法，其特征在于，包括：
a)采用权利要求1～4任一项所述的抗体、权利要求6所述的偶联物或权利要求7所述的试剂或试剂盒与待检测样本进行接触，形成免疫复合物；
b)基于所述免疫复合物的信号，确定所述待检测样本中是否含有sST2或所述sST2的含量；
可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体结合；
可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述sST2结合。
10.一种筛选sST2抗体的方法，其特征在于，包括：
a)设计引物，用于对权利要求1所述的抗体中所限定的X1、X2、X3、X4和X5中的位点、或者权利要求2所述的抗体中所限定的突变位点进行氨基酸替换；
b)以权利要求5所述的核酸、载体或细胞为模板，用a)所述引物构建突变文库；
c)从所述突变文库中筛选sST2抗体；
可选地，所述突变文库为单点饱和突变文库；
可选地，所述sST2抗体包括或为权利要求1～4任一项所述的抗体。
11.一种突变文库，其特征在于，所述突变文库包括权利要求1～4任一项所述的抗体；
可选地，所述突变文库是通过权利要求10所述的方法得到的。
CN202411833772.3A 2023-12-19 2024-12-12 抗sST2抗体及其用途 Pending CN120173109A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2023117618335 2023-12-19
CN202311761833 2023-12-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN120173109A true CN120173109A (zh) 2025-06-20

Family

ID=96039696

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202411833772.3A Pending CN120173109A (zh) 2023-12-19 2024-12-12 抗sST2抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN120173109A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112021005669A2 (pt) anticorpos contra bcma solúvel
JP2019509017A (ja) 組換えｐｉｃｐタンパク質及びこれに特異的に結合する抗体の製造方法
CN118255881B (zh) D-二聚体抗体及其用途
CN113004405B (zh) 一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白
CN118725101A (zh) cTnI抗体及其用途
CN119874904B (zh) 抗NT-proBNP抗体及其用途
CN119874896B (zh) 抗cTnI抗体及其用途
CN119899272B (zh) 抗ckmb抗体及其用途
CN118702815A (zh) 一种抗NT-proBNP的抗体及其应用
CN120173109A (zh) 抗sST2抗体及其用途
CN120173107A (zh) 抗sST2抗体及其用途
CN120137036A (zh) 抗sST2抗体及其用途
CN120192411A (zh) 抗bnp抗体及其用途
CN118255882B (zh) D-二聚体抗体及其用途
CN120209128A (zh) 抗cTnI抗体及其用途
CN120137026A (zh) 抗胃泌素释放肽前体抗体及其用途
CN120137043A (zh) 抗pivka-ii抗体及其用途
CN120137045A (zh) 抗25-羟基维生素d抗体及其用途
CN118255879B (zh) D-二聚体抗体及其用途
CN119569878B (zh) 一种抗sST2抗体及其应用
CN120137027A (zh) 抗胃泌素释放肽前体抗体及其用途
CN120137017A (zh) 抗p24抗体及其用途
CN118255889B (zh) 抗ca153抗体和检测试剂盒
CN119569877B (zh) 一种抗sST2抗体及其应用
CN118725102A (zh) cTnI抗体及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination