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CN120136869A - 三环稠杂环类pde3/4双重抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

三环稠杂环类pde3/4双重抑制剂及其制备方法与应用 Download PDF

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CN120136869A
CN120136869A CN202311717507.4A CN202311717507A CN120136869A CN 120136869 A CN120136869 A CN 120136869A CN 202311717507 A CN202311717507 A CN 202311717507A CN 120136869 A CN120136869 A CN 120136869A
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CN
China
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dimethoxy
amino
pharmaceutically acceptable
isoquinolin
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CN202311717507.4A
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贾振华
王宏涛
侯云龙
齐慧
秘尧
郝媛媛
童亚男
李发光
张朋飞
郝梦安
王晓航
许铎
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Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本发明提供了一种三环稠杂环类PDE3/4双重抑制剂及其制备方法与应用，具体地，本发明提供了一种具有结构式I的化合物或其药学上可接受的形式，其中各取代基分别如说明书所定义。本发明的化合物或其药学上可接受的形式可作为磷酸二酯酶抑制剂，具有较高活性。

Description

三环稠杂环类PDE3/4双重抑制剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明是关于一种三环稠杂环类磷酸二酯酶抑制剂(特别是PDE3/4双重抑制剂)及其制备方法与应用。
背景技术
磷酸二酯酶(PDE)属超家族酶系，至少包含11个家族、22个亚型，参与细胞内外信息传递和功能调控。PDE可催化细胞内的第二信使环腺苷单磷酸(cAMP)和环鸟苷单磷酸(cGMP)水解开环，分别生成AMP和GMP。
PDE3家族由2个基因组成，即PDE3A和PDE3B。PDE3的活性在呼吸系统中主要集中在肺泡巨噬细胞、内皮细胞、血小板中。PDE3参与体内多种生理活动的调节，如舒张血管平滑肌、抗血小板凝聚、抗血栓形成、强心以及抗细胞增殖等作用，PDE3抑制剂过量使用会造成低血压、心动过速等不良反应，极大地限制了其临床应用。
PDE4是一种特异性水解cAMP的酶，其家族由PDE4A、PDE4B、PDE4C和PDE4D四种亚型构成，每一种亚型都有对应的基因编码并分别具有不同的细胞分布及作用。PDE4主要分布在气道平滑肌细胞、炎症细胞和免疫细胞中，调节胞内的cAMP水平。目前临床上的PDE4抑制剂大多具有一定程度的副作用，如恶心、呕吐等胃肠道反应，甚至抑郁。
鉴于单独应用PDE3或者PDE4抑制剂的局限性以及PDE抑制剂的副作用，吸入性PDE3/4的双重抑制似乎是一种更有吸引力的方式来靶向治疗COPD和哮喘的关键病理特征。目前已有证据显示吸入给药的双靶点PDE3/4抑制剂具有协同抑制效应，包括协同抗炎和支气管扩张作用。
CN100415743C公开了一种嘧啶并[6,1a]异喹啉-4-酮衍生物：
该通式化合物作为PDE抑制剂用于治疗呼吸道疾病如哮喘，与曲喹新相比具有更长作用持续时间，并且不具有曲喹辛非常苦的味道。
CN112368281A公开了一类作为PDE3/PDE4双重抑制剂的三并环类化合物
该通式化合物可用于制备PDE3/PDE4相关疾病尤其是如慢性阻塞性肺病(COPD)方面的药物。
本领域仍然亟需新的PDE3/PDE4抑制剂，特别是具有高活性以及良好成药性的PDE3/PDE4抑制剂。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种新的化合物，以作为PDE抑制剂。
本发明的另一目的在于提供所述化合物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供所述化合物的应用。
本发明的另一目的在于提供包含所述化合物的药物组合物及其应用。
本发明的另一目的在于提供制备所述化合物的中间体。
本发明的另一目的在于提供所述中间体的制备方法。
<第一方面>
本发明提供了一种具有结构式I的化合物或其药学上可接受的形式，
其中：
R1、R2各自独立地选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和C3-6环烷基；所述直链烷基、支链烷基或环烷基任选进一步被0至4个选自D、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；
R3、R4、R5各自独立地选自H、卤素、CN、C1-6烷氧基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、和C3-6环烷基；所述烷氧基、直链烷基、支链烷基或环烷基任选进一步被0至4个选自D、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；
L选自和，n为0、1或2；k为0、1、2或3；所述L中的H任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；其中，R9、R10各自独立地选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基和COOCH3，且R9、R10不同时为H；所述杂芳基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；
R6选自其中，R11选自氨基、C1-6烷氧基、C3-12环烷基、C6-10芳基、C5-10杂环基，所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子，所述氨基、烷氧基、环烷基、芳基、杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代；
选择性地，R6与L形成
R7、R8各自独立地选自H、＝O、卤素、NH2、CN、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基和
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R1、R2各自独立地选自CH3、CHF2、CD3或C3-6环烷基。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R1、R2分别为CD3。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R1、R2之一为CH3，另一为CHF2。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R3、R4、R5各自独立地选自CH3、i-Pr、OMe、CD3或卤素。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R1、R2分别对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R5为CH3，所述CH3任选进一步被0至3个D所取代；R3、R4相同，选自CH3、i-Pr、OMe或卤素。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R3、R4、R5分别对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为0或1，优选为0。优选地，k为0、1或2。优选地，R9、R10其中之一为H，另一选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基和COOCH3；所述杂芳基含有1或2个杂原子N；所述L中的H任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为0或1，k为1。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为0或1，k为1。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为2，k为2。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为1，k为1或2。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L为n为2，k为2。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，L对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R6为其中，R11为氨基，所述氨基任选进一步被0、1或2个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R6为其中，R11为C6-10芳基或C5-10杂环基，所述杂环基含有1、2或3个杂原子N；所述芳基、杂芳基任选进一步被0、1、2或3个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R6对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R7为H或CH3，R8为H或F。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R7、R8对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、L分别对应表1中任一化合物所示的基团或取值。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，所述化合物选自表1所示化合物中的一种或多种：
表1
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的式I化合物或其药学上可接受的形式中，所述药学上可接受的形式选自药学上可接受的盐或共晶、立体异构体、互变异构体、氘代物、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物。
<第二方面>
本发明还提供了一种中间体化合物，其具有式II所示结构：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8如根据本发明<第一方面>式I化合物或其药学上可接受的形式中任一方案所定义；
L1选自R9、R10、n、k如根据本发明<第一方面>式I化合物或其药学上可接受的形式中任一方案所定义；R12、R13各自独立地为H、Boc、Cbz、SEM、Fmoc、Alloc、Pht、OTs、PMB、Bn、Trt。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的所述中间体化合物具有如下结构：
R12、R13其中之一为H，另一为Boc、Cbz、SEM、Fmoc、Alloc、Pht、OTs、PMB、Bn、Trt。
<第三方面>
本发明还提供了一种制备本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法。可根据所述式I化合物或其药学上可接受的形式的化学结构，参照本领域的已知方法设计合成路线以制备所述式I化合物或其药学上可接受的形式。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的制备本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法包括：
对本发明<第二方面>所述的中间体化合物式II中所示的羧基端进行修饰反应，制备具有结构式I的化合物。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的制备本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法还包括制备本发明<第二方面>所述的中间体化合物的过程。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的制备本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法包括如实施例1-实施例38中任一反应路线所示步骤。
根据本发明的一些具体实施方案，本发明的制备本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法包括：
<第四方面>
本发明还提供了一种药物组合物，其包括：本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式(优选药学上可接受的盐)，以及药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
<第五方面>
本发明还提供了本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式(优选药学上可接受的盐)或本发明<第四方面>所述的药物组合物在制备用于抑制磷酸二酯酶的制剂中的应用。优选地，所述磷酸二酯酶包括PDE3和/或PDE4。
<第六方面>
本发明还提供了本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式(优选药学上可接受的盐)或本发明<第四方面>所述的药物组合物在制备用于治疗磷酸二酯酶相关疾病的药物中的应用。
本发明还提供了一种治疗磷酸二酯酶相关疾病的方法，该方法包括给予受试者有效量的本发明<第一方面>所述的化合物或其药学上可接受的形式(优选药学上可接受的盐)或本发明<第四方面>所述的药物组合物。
根据本发明的一些具体实施方案，所述磷酸二酯酶包括PDE3和/或PDE4。
根据本发明的一些具体实施方案，所述磷酸二酯酶相关疾病包括呼吸道疾病如哮喘。
根据本发明的一些具体实施方案，所述的受试者为哺乳动物或人，优选地，所述的受试者为人。
本发明的具有结构式I的化合物或其药学上可接受的形式，可作为磷酸二酯酶抑制剂，对磷酸二酯酶特别是PDE3和/或PDE4具有高效的抑制活性，具有实用价值。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键或用波浪线表示直形实线键和直形虚线键
术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸－氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡萄糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
术语“共晶”是指结晶材料在室温下包含两种或多种独特固体，每种固体含有不同的物理特性，例如结构、熔点和熔化热。
术语“立体异构体”(或称“旋光异构体”)是指由于具有至少一个手性因素(包括手性中心、手性轴、手性面等)而导致具有垂直的不对称平面，从而能够使平面偏振光旋转的稳定异构体。由于本发明的化合物中存在可能导致立体异构的不对称中心以及其它化学结构，因此本发明也包括这些立体异构体及其混合物。由于本发明的化合物及其盐可包括不对称碳原子，因而能够以单一立体异构体形式、外消旋物、对映异构体和非对映异构体的混合物形式存在。通常，这些化合物能够以外消旋混合物的形式制备。然而，如果需要的话，可以将这类化合物制备或分离后得到纯的立体异构体，即单一对映异构体或非对映异构体，或者单一立体异构体富集化(纯度≥98％、纯度≥95％、≥93％、≥90％、≥88％、≥85％或≥80％)的混合物。化合物的单一立体异构体是由含有所需手性中心的旋光起始原料合成制备得到的，或者是通过制备得到对映异构体产物的混合物之后再分离或拆分制备得到的，例如转化为非对映异构体的混合物之后再进行分离或重结晶、色谱处理、使用手性拆分试剂，或者在手性色谱柱上将对映异构体进行直接分离。具有特定立体化学的起始化合物既可以商购得到，也可以按照本文中描述的方法制备再通过本领域熟知的方法拆分得到。除非另外指出，本发明的化合物的所有立体异构体形式都在本发明的化合物范围之内。
术语“互变异构体”(或称“互变异构形式”)是指具有不同能量的可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(或称质子转移互变异构体)包括(但不限于)通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化、酰胺-亚胺醇异构化等。除非另外指出，本发明的化合物的所有互变异构体形式都在本发明的化合物范围之内。
除非另外指出，本发明的结构式表示的化合物可以为纯化的单一的立体异构体或互变异构体形式，也可以是包含多个立体异构体或互变异构体的混合物的形式。
术语“溶剂化物”是指由本发明的化合物或其药学上可接受的盐与至少一种溶剂分子通过非共价分子间作用力结合而形成的物质。常见的溶剂化物包括(但不限于)水合物、乙醇合物、丙酮合物等。
术语“螯合物”是具有环状结构的配合物，是通过两个或多个配位体与同一金属离子形成螯合环的螯合作用而得到。
术语“非共价复合物”是通过化合物与另一分子的相互作用而形成的，其中该化合物与该分子之间不形成共价键。例如，可以通过范德华相互作用、氢键键合和静电相互作用(也称作离子键合)来发生复合。
术语“前体药物”是指在适用于患者后能够直接或间接地提供本发明的化合物的衍生化合物。特别优选的衍生化合物或前药是在施用于患者时可以提高本发明的化合物的生物利用度的化合物(例如，更易吸收入血)，或者促进母体化合物向作用位点(例如，淋巴系统)递送的化合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有前药形式都在本发明的范围之内，且各种前药形式是本领域熟知的。
术语“各自独立地”是指结构中存在的取值范围相同或相近的至少两个基团(或环系)可以在特定情形下具有相同或不同的含义。例如，取代基X和取代基Y各自独立地为氢、卤素、羟基、氰基、烷基或芳基，则当取代基X为氢时，取代基Y既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基；同理，当取代基Y为氢时，取代基X既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基。
术语“包含”和“包括”以其开放、非限制性意义使用。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当结构式中一个变量选自缺失时，表示其不存在，比如C-R中R选自缺失时表示该结构实际上是C。
当结构式中连接两个基团的一个变量选自键或不存在时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键或不存在时表示该结构实际上是A-Z。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，苯基作为取代基可以通过苯环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如－CH2F)或多取代的(如-CF3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。
除非另有规定，术语“亚烷基”是指二价的直链或支链的烷烃基团，其仅由碳原子和氢原子组成，不含有饱和度，并且通过两个单键分别与其它片段连接，包括(但不限于)亚甲基、1,1-亚乙基和1,2-亚乙基等。例如，“C1-3亚烷基”指从包含1至3个碳原子的饱和的二价直链或支链烷基。
除非另有规定，“环烷基”包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
除非另有规定，术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另有规定，C1-5烷氧基包括C1、C2、C3、C4和C5的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
除非另有规定，术语“3-6元环”表示含有或不含杂原子的饱和或不饱和的单环，其环上含有3、4、5或6个C、O、S、N原子；所述“3-6元环”可以通过任何一个碳原子，或，如果存在的话，氮原子，与结构式的其余部分相连接。
除非另有规定，术语“胺基(氨基)”是指是-NH2、-NH(烷基)或者-N(烷基)(烷基)。
除非另有规定，术语“芳环”表示多不饱和的芳香族烷烃单环，可以是单取代或多取代的。
除非另有规定，术语“4-6元杂环烷基”表示饱和的单价的单环烃环，其环上含有3、4或5个碳原子，以及一或多个选自O、NRa的杂原子基团，其中，Ra代表氢原子或C1-6烷基；所述“4-6元杂环烷基”可以通过任何一个碳原子，或，如果存在的话，氮原子，与分子的其余部分相连接。
除非另有规定，术语“杂芳环”表示含有一至四个杂原子的芳环，杂原子选自N、O和S中的一种或多种。
除非另有规定，术语“杂环基”是指饱和或部分饱和的、单环或多环(诸如双环，例如：并环、桥环或螺环)的非芳香族基团，其环原子由碳原子以及至少一个选自N、O和S的杂原子构成，其中S原子任选地被取代以形成S(＝O)、S(＝O)2或S(＝O)(＝NRx)，Rx独立地选自H或C1-4烷基。如果满足价键要求，杂环基可以通过任意一个环原子与分子的其余部分连接。例如，本发明中所使用的术语“3-8元杂环基”是指具有3至8个环原子的杂环基。例如，杂环基可以是环氧乙烷基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、二噻烷基或三噻烷基。
除非另有规定，术语“芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族烃基。例如，本发明中所使用的术语“C6-10芳基”是指具有6至10个碳原子的芳基。例如，芳基可以是苯基、萘基、蒽基、菲基、苊基、薁基、芴基、茚基、芘基等。
除非另有规定，术语“杂芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族基团，其环原子由碳原子以及至少一个选自N、O和S的杂原子构成。如果满足价键要求，杂芳基可以通过任意一个环原子与分子的其余部分连接。例如，本发明中所使用的术语“5-10元杂芳基”是指具有5至10个环原子的杂芳基。例如，杂芳基可以是噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基及其苯并衍生物、吡咯并吡啶基、吡咯并吡嗪基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、嘌呤基等。
除非另有规定，术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。术语“羟基”是指-OH。术语“氰基”是指-CN。术语“氨基”是指-NH2。
除非另有规定，术语“药物组合物”是指一种或多种本发明所述化合物或药学上可接受的形式与其它化学组分形成的混合物，其中，“其它化学组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
本发明化合物具有良好的PDE抑制活性，在治疗与PDE相关特别是与PDE3/PDE4相关的疾病中具有潜在的应用价值。
附图说明
图1为本发明化合物1-2单晶衍射图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
化合物的结构通过核磁共振或质谱来确定。核磁共振使用BRUKER 400M核磁仪测定，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)或氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移(δ)以10-6(ppm)作为单位给出。质谱使用Waters ACQUITY Arc/ACQUITY QDa或Thermo U3000-ISQ EC液质联用仪测定。
高效液相色谱法分析使用Thermo U3000高压液相色谱仪。高效液相制备使用汉邦DAC-50或岛津LC-20AP制备型色谱仪。
反应监测使用薄层色谱或液质联用。薄层色谱使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，或者加入少量三乙胺等进行调节。液质联用使用Waters ACQUITY Arc/ACQUITY QDa或ThermoU3000-ISQ EC液质联用仪。
柱层析一般使用200～300目硅胶为载体。洗脱剂的体系包括：二氯甲烷和甲醇体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，或者加入少量三乙胺等进行调节。
以下实施例及对比例中无特殊说明，反应的温度为室温(20℃～30℃)，溶剂均按照标准方法干燥纯化。
对比例化合物见表2。
表2、对比例化合物
对比例化合物D1的制备：
制备步骤：
1.
氮气保护室温下，向2，4，6-三甲基苯胺(2.0g，14.7mmol，1当量)和N-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(14.1g，59.1mmol，4当量)的DMF(20mL，258.4mmol)溶液中，分别加入K2CO3(6.1g，44.3mmol，3当量)和KI(2.5g，14.7mmol，1当量)。80℃下反应过夜。反应混合物用EA萃取(3×50ml)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2×30ml)，无水硫酸钠干燥。混合物过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，EA/PE(1/4)，得到N-(3-[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯(2.2g，收率50.86％)。
LCMS(ESI，m/z):[M+H]+＝293.2
2.
在氮气保护室温下，向N-(3-[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯(1.2g，4.1mmol，1当量)和2-氯-9，10-二甲氧基-6，7二氢嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(1.8g，6.1mmol，1.5当量)的dioxane(20mL)溶液中，分别加入Cs2CO3(2.7g，8.2mmol，2当量)，APhos Pd G3(0.3g，0.4mmol，0.1当量)和4-(二叔丁基膦酰基)-N，N-二甲基苯胺(0.1g，0.4mmol，0.1当量)。氮气保护，100℃下搅拌反应过夜。反应混合物用EA萃取(3×50mL)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2×30mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：C18层析柱，流动相，水和乙腈，10％到90％梯度30分钟，UV：254nm。得到N-[3-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，收率8.88％)。
LCMS(ESI，m/z):[M+H]+＝549.4
3.
在氮气保护下，0℃下，向N-[3-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(290mg，1当量)的DCM(5mL)溶液中，滴加TFA(5mL)。氮气保护，室温下，所得残余物搅拌反应2h。反应混合物用DCM萃取(3×20ml)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2×10mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。得到2-[(3-氨基丙基)(2，4，6-三甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(200mg，粗品)。
LCMS(ESI，m/z):[M+H]+＝449.3
4.
在氮气保护下，0℃下，向2-[(3-氨基丙基)(2，4，6-三甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(200mg，0.4mmol，1.0当量)和TEA(135mg，1.3mmol，3当量)的DCM(5mL)溶液中，滴加三甲基硅基异氰酸酯(128.4mg，1.1mmol，2.5当量)。氮气保护，50℃下，所得混合物搅拌反应2天。所得残余物减压浓缩。粗品通过高效液相纯化，得到3-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)丙脲(7.5mg，收率3.4％)，条件如下(柱型：Xbridge BEH Phenyl5μm，19*250mm；流动相A:水(0.1％FA)，流动相B:MeOH；流量:25mL/min，梯度:10分钟43％B到53％B；波长:254nm/220nm；RT1(分钟):9.6
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝492.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.22(broad,1H),7.26(s,1H),7.01(s,2H),6.94(s,1H),6.24(s,1H),4.05(t,J＝6.4Hz,2H),3.91(s,6H),3.61(t,J＝7.8Hz,2H),3.45(t,J＝6.6Hz,2H),3.01–2.89(m,2H),2.29(s,3H),2.24(s,6H),1.88(s,2H)。
对比例化合物D2的制备：
室温下，向50mL烧瓶中加入(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.0g,2.55mmol,1.0equiv)和二氯甲烷(20mL)搅拌，加入乙酸酐(0.29g,2.81mmol,1.1equiv)，氮气保护室温搅拌24h。反应完毕，体系降温至0℃，滴加水10ml，搅拌1h，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，干燥旋蒸，通过硅胶柱纯化得化合物N-(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)-N-间甲基乙酰胺(0.11g)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝434.21
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),7.18(s,1H),6.94(s,2H),6.74(s,1H),4.19(t,J＝6.4Hz,2H),3.92(s,6H),2.95(t,J＝6.4Hz,2H),2.31(s,3H),2.12(s,6H),2.05(s,3H)。
对比例化合物D3的制备：
将(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.00g，2.554mmol，1.0eq)、2-溴丙烷(0.47g，3.831mmol，1.5eq)、Pd2(dba)3(0.23g,0.255mmol，0.1eq)、Cs2CO3(2.50g，7.662mmol，3.0eq)溶于1,4-二氧六环(20ml)中，氮气保护下，在搅拌升温至回流反应12h，反应完毕，加水(50ml)和乙酸乙酯萃取(50ml×3)，饱和氯化钠(50ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到2-(异丙基(甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(7.8g，71.43％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝434.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.08(s,2H),6.89(s,1H),6.58(s,1H),5.35(s,1H),4.82–4.74(m,1H),4.06(t,J＝6.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.63(s,3H),2.93(t,J＝6.4Hz,2H),2.34(s,3H),2.14(s,3H),1.25(s,3H),1.23(s,3H)。
对比例化合物D4的制备：
9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(200mg,0.5mmol,1.0当量)，溶剂DMF(2mL)溶解，在0℃加入NaH(40mg,1.0mmol,2.0当量，60％纯度)，所得混合物在氮气保护下搅拌0.5h。在上述混合物中加入(2-溴乙基)氢溴化二乙胺(400mg,1.5mmol,3.0当量)，室温下搅拌1h。室温下加入水(10mL)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，有机层用饱和食盐水(3×100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。柱层析(EA/PE＝1/2)纯化得到2-{[2-(二乙基氨基)乙基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}-9,10-二甲氧基-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(37.2mg，产率14％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝491.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.95–6.85(m,3H),6.77(s,1H),5.50(s,1H),4.44–4.35(m,2H),4.06–3.99(m,2H),3.87(s,3H),3.69(s,3H),2.99–2.90(m,4H),2.74(q,J＝7.2Hz,4H),2.28(s,3H),2.05(s,6H),1.16(t,J＝7.2Hz,6H)。
对比例化合物D5的制备：
制备步骤：
1.
在氮气保护下，室温下，把9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(500mg，1.2mmol，1.0当量)和Cs2CO3(1248mg，3.8mmol，3.0当量)加入DMF(10mL)溶液中，分批加入N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(715mg，3.1mmol，2.5当量)和Pd2(dba)3(116mg，0.1mmol，0.1当量)。氮气保护，100摄氏度下，所得残余物搅拌反应过夜。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3X 50mL)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(2X30mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化，二氯甲烷/甲醇(20/1)，得到N-[2-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，29.29％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝535.2
2.
氮气保护，室温下，把N-[2-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.3mmol，1.0当量)加入到HCl的二氧六环溶液(4mL，4M)，搅拌反应1h。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化到pH＝8。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3X 20mL)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液反洗(2X10mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。得到2-[(2-氨基乙基)(2，4，6-三甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(160mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝435.2
3.
在氮气保护下，室温下，把2-[(2-氨基乙基)(2，4，6-三甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(100mg，0.2mmol，1.0当量)和TEA(69mg，0.6mmol，3.0当量)加入DCM(5mL)溶液中，滴加异氰基三甲基硅烷(53mg，0.4mmol，2.0当量)。氮气保护，室温下，所得残余物搅拌反应1.5h。反应混合物用二氯甲烷萃取(3X 20mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(2X 50mL)，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩。粗品通过高效液相纯化得到2-((9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基(2，4，6-三甲基苯基)氨基)乙基脲(26.4mg，24.02％)，条件如下(柱型:YMCTriart C18 ExRs 5m，19mm*250mm；流动相A:水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B:乙腈；流速:25mL/min；梯度:32％B to 55％B in 10min；波长:254nm/220nm；RT1(min):9.17)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝478.20
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.11(s,2H),6.94(s,1H),6.70(s,1H),5.51(s,1H),4.15–4.08(m,2H),3.99–3.92(m,2H),3.89(s,3H),3.67(s,3H),3.44(t,J＝6.4Hz,2H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.36(s,3H),2.18(s,6H)。
对比例化合物D6的制备：
将(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(500mg，1.28mmol，1.0eq)、1-溴丁烷(263mg，1.92mmol，1.5eq)、Pd2(dba)3(119mg,0.13mmol，0.1eq)、Cs2CO3(1.25g，3.84mmol，3.0eq)、Xantphos(150mg,26mmol,0.2eq)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，氮气保护下，在搅拌升温至回流反应12h，反应完毕，加水(50ml)和乙酸乙酯萃取(50ml×3)，饱和氯化钠(50ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，过硅胶柱纯化得到2-(丁基(间甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(121mg，21.1％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝448.26
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.01(s,2H),6.71(s,1H),6.64(s,1H),5.34(s,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.93–3.85(m,5H),3.73(s,3H),2.90(t,J＝6.4Hz,2H),2.35(s,3H),2.16(s,6H),1.62–1.51(m,2H),1.40–1.27(m,2H),0.89(t,J＝8.0Hz)。
实施例1、化合物1-1和化合物1-2
制备步骤：
1.
将N-(2-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(0.91g,3.8mmol，1.5当量)，碳酸铯(2.50g,，7.662mmol,3当量)，Pd2(dba)3(0.23g，0.26mmol，0.1当量)和(E)-2-(甲磺酰亚胺基)-9,10-二甲氧基-2,3,6,7-四氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(1g,2.54mmol,1.0当量)用20mL1，4-二氧六环溶解，氮气保护，110℃搅拌过夜。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:C18；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:30％B to 50％B in 20min；波长:254nm；)得到(E)-(2-(2-(甲磺酰亚胺基)-9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-2H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-3(4H)-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,产率35.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝549.06
2.
将(E)-(2-(2-(甲磺酰亚胺基)-9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-2H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-3(4H)-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,0.91mmol,1当量)用10ml盐酸的1，4二氧六环溶液(4M)溶解，室温下搅拌1小时。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到2-((1-氨基丙-2-基)(甲磺酰基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(300mg,产率73.3％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝449.16
3.
将2-((1-氨基丙-2-基)(甲磺酰基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(200mg,0.45mmol,1.0当量.),三乙胺(135mg,1.34mmol,3当量)和异氰酸三甲基硅烷(102.73mg,0.9mol,2当量.)，用10mL二氯甲烷溶解，在室温下搅拌2小时。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:Xselect CSH C185m,30mm X 150mm；流动相A:水(0.1％FA),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:28％B to38％B in 8分钟；波长:254nm/220nm nm；RT1(min):5.85/7.65)得到1-(2-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲磺酰胺基)丙基)脲(100mg,产率45.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝492.35
4.
消旋体(100mg)经Chiral-HPLC纯化，条件为色谱柱:CHIRALPAK IE-3,4.6*50mm,3um；流动相A:DCM--HPLC,流动相B:ETOH:DCM＝1:1；流速:18mL/min；Gradient:等度20；波长：220nm；RT1(min):17.4；RT2(min):21.8；样品溶剂:MeOH-HPLC；进样量:0.45mL；运行次数:5。得到产物。
化合物1-1(isomer 1,RT1(min):17.4,13.8mg,产率22.14％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝492.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.14–7.11(d,J＝10.1Hz,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.40(s,1H),4.49(broad,1H),4.20–4.04(m,2H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),2.97(t,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.10(s,3H),1.05(s,3H).
化合物1-2(isomer 2,RT2(min):21.8,13.0mg,产率22.0％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝492.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.12(d,J＝10.1Hz,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.40(s,1H),4.49(broad,1H),4.20–4.04(m,2H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),2.97(t,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.08(s,6H),1.05(s,3H)。
化合物1-2单晶衍射图如图1。
实施例2、化合物2
制备步骤：
1.
将9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(3.0g，7.7mmol，1.0当量)和3-溴吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.3g,9.2mmol,1.2当量)溶于1,4-二氧六环(100mL)，加入Xantphos(0.9g,1.5mmol,0.2当量)，碳酸铯(5.0g，15.3mmol，2.0当量)和Pd2(dba)3(0.7g，0.7mmol，0.1当量)。在100℃的氮气环境下搅拌18h后，减压浓缩得到的混合物。残留物经反相纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶柱；流动相，乙腈、水，0％-100％梯度，30分钟；检测器，紫外254纳米，得到3-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.4g，收率32.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝561.3
2.
将3-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.5mmol，1.0当量)与盐酸的1,4-二氧六环溶液(8mL)混合，所得混合物在室温下搅拌1h。所得混合物减压浓缩，得到9,10-二甲氧基-2-[吡咯烷-3-基(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(300mg，粗品)。粗产物无需进一步纯化，直接用于下一步骤。
LCMS(ESI):[M+H]+＝461.2
3.
在室温下，将9,10-二甲氧基-2-[吡咯烷-3-基(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(100mg，0.2mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(4mL)，加入三乙胺(109mg,1.1mmol,5.0当量)和异氰基三甲基硅烷(38mg,0.3mmol,1.5当量)。所得混合物在室温下搅拌2h。所得混合物在减压下浓缩。粗产物在以下条件下进行反相纯化(色谱柱：YMC-Triart C8 5.5mmol/L，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：7分钟内从32％B升至50％B；波长：254nm/220nm；RT1(min)：6.23)，得到3-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)吡咯烷-1-甲酰胺(30.5mg，产率27.4％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝504.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.13(s,2H),6.92(s,1H),6.64(s,1H),5.41(s,1H),5.08–4.99(m,1H),4.19–4.03(m,3H),3.88(s,3H),3.66(s,3H),3.58–3.52(m,1H),3.29(t,J＝7.3Hz,1H),3.25–3.18(m,1H),2.96(t,J＝6.5Hz,2H),2.38(s,3H),2.29–2.22(m,1H),2.17–2.15(m,6H),1.77(s,1H)。
实施例3、化合物3-1和化合物3-2
制备步骤：
1.
单口瓶中依次加入二甲氧基苯乙胺(50.0g,275.8mmol,1.0当量)和氰基乙酸乙酯，氮气保护，100℃下反应16h，然后降温至70℃，加入乙醇(80mL)。过滤，滤饼用乙醇(3x30mL)冲洗，缩干滤饼中残留的乙醇得到2-氰基-N-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]乙酰胺(50.0g,73.0％收率)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝249.2
2.
在单口瓶中依次加入2-氰基-N-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]乙酰胺(50.0g,201.3mmol,1.0当量)和三氯氧磷(500mL)，氮气保护，85℃下反应过夜。缩干溶剂，加入水(300mL)，用DCM(3x400mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，缩干有机相得到2-[(1E)-6,7-二甲氧基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-亚基]乙腈(45.0g,97.0％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝231.2
3.
在单口瓶中依次加入2-[(1E)-6,7-二甲氧基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-亚基]乙腈(45.0g,195.4mmol,1.0当量)和浓硫酸(320mL)，室温下反应3h。将反应液缓慢倒入冰水中(1L)，在0℃用氢氧化钠(4M)调碱至pH＝7，用EtOAc(3x600mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，缩干有机相得到2-[(1E)-6,7-二甲氧基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-亚基]乙酰胺(40.0g,82.4％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝249.2
4.
在单口瓶中依次加入2-[(1E)-6,7-二甲氧基-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-亚基]乙酰胺(40.0g,161.1mmol,1.0当量)、乙醇(600mL)和乙醇钠的乙醇溶液(127mL,21％)，80℃下反应0.5h，然后在该温度下加入碳酸二乙酯(57.1g,483.3mmol,3.0当量)，80℃下反应过夜。冷却至室温，加入水(500mL)，用稀盐酸调酸至pH＝7，过滤，滤饼用乙醇(3x100mL)冲洗，缩干滤饼中残留的乙醇得到9,10-二甲氧基-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2,4-二酮(40.0g,90.5％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝275.2
5.
在单口瓶中依次加入9,10-二甲氧基-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2,4-二酮(40.0g,145.8mmol,1.0当量)和三氯氧磷(240mL)，氮气保护，100℃下反应过夜。缩干溶剂，加水(500mL)溶解，用DCM(3x500mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，缩干有机相得到2-氯-9,10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(30.0g,70.2％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝293.2
6.
在单口瓶中依次加入2-氯-9,10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(2.0g,6.8mmol,1.0当量)、异丙醇(50mL)和三甲基苯胺(4.6g,34.1mmol,5.0当量)，氮气保护，90℃下反应过夜。缩干溶剂，加入EA(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)，过滤，滤饼用EA(3x50mL)冲洗，缩干滤饼中残留的EA得到(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(2.0g,74.8％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝392.2
7.
在单口瓶中依次加入(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H，6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(2.0g,5.1mmol,1.0当量)、4-溴戊酸乙酯(2.1g,10.2mmol,2.0当量)、1,4-二氧六环(100mL)、碳酸铯(5.0g,15.3mmol,3.0当量)、Xantphos(0.6g,1.0mmol,0.2当量)和Pd2(dba)3(0.5g,0.5mmol,0.1当量)，氮气保护，100℃下反应12h。用DCM/MeOH(10/1)为流动相进行正相纯化得到4-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)戊酸乙酯(500mg,18.8％yield)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝520.3
8.
在单口瓶中依次加入4-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)戊酸乙酯(500mg,1.0mmol,1.0当量)、甲醇(50mL)和氢氧化钠(77mg,2.0mmol,2.0当量)的水(10mL)溶液，室温下反应3h。缩干溶剂，加水(20mL)，用稀盐酸调酸至pH＝5，用EA(3x50mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，缩干有机相得到4-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)戊酸(450mg,95.1％yield)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝492.2
9.
在三口瓶中依次加入4-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)戊酸(300mg,0.6mmol,1.0当量)、1.4-二氧六环(100mL)、三乙胺(182mg,1.8mmol,3.0当量)和DPPA(336mg,1.2mmol,2.0当量)，氮气保护，室温反应1h，然后加热至100℃并反应1h，降温至80℃并加入氨的四氢呋喃溶液(1.4M)(100mL)，室温反应2h，缩干溶剂，进行反向(柱型:X-Bridge BEH C18 5μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/L NH4HCO3),流动相B:乙腈；流速:60mL/min mL/min；梯度:39％B to 48％B in9min；波长:254nm/220nm nm；RT1(min):8)纯化得到3-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丁脲(94mg,30.46％收率)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝506.3
10.
粗品3-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丁脲(50mg)经Chiral-HPLC拆分(柱型:CHIRAL ART Cellulose-SB,2*25cm,5μm；流动相A:MtBE(0.1％DEA)-HPLC,流动相B:MeOH:DCM＝1:1--HPLC；Flow rate:20mL/min；梯度:isocratic；波长:254nm；RT1(min):5.3；RT2(min):7.2；Sample Solvent:MeOH:DCM＝1:1--HPLC；注射量:1mL；Number Of Runs:5)得到产物。
化合物3-1(isomer 1,RT1(min):5.3,17.6mg,34.78％收率)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝506.50
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.16–7.08(m,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.41(s,1H),4.59–4.55(m,1H),4.19–4.02(m,2H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),3.38–3.34(m,1H),3.25–3.21(m,1H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.34–2.30(m,1H),2.23(s,3H),2.08(s,3H),1.80–1.76(m,1H),0.99(d,J＝6.9Hz,3H).
化合物3-2(isomer 2,RT2(min):7.2,17.8mg,34.78％收率)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝506.50
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.16–7.08(m,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.41(s,1H),4.59–4.45(m,1H),4.19–4.02(m,2H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),3.38–3.34(m,1H),3.25–3.21(m,1H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.34–2.30(m,1H),2.23(s,3H),2.08(s,3H),1.80–1.76(m,1H),0.99(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例4、化合物4-1和化合物4-2
制备步骤：
1.
在室温和空气环境下，把2,4,6-三甲基苯胺(3.0g，22.2mmol，1.0当量)溶解在MeOH(30mL)中，加入NaBH3CN(1.0g，44.3mmol，2.0当量.)和乙酸(1mL，17.4mmol，0.7当量.)。所得混合物在室温氮气环境下搅拌过夜。所得混合物在减压下浓缩。反应物在室温下用水淬灭。所得混合物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(3x200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压浓缩滤液，得到N-{3-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]环丁基}氨基甲酸叔丁酯(1.2g，收率16％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝305.1
2.
将N-{3-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]环丁基}氨基甲酸叔丁酯(1.2g，3.9mmol，1.0当量)和2-氯-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.3g，4.7mmol，1.2当量)在室温下加入异丙醇(15ml)中。将反应混合物加热至100℃，并在100℃的氮气环境下搅拌过夜。所得混合物在减压下浓缩。残留物经硅胶柱色谱纯化，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到2-[(3-氨基环丁基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(150mg，产率6％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝461.2
3.
室温下，在空气中把N1-(2,4,6-三甲基苯基)环丁烷-1,3-二胺(150mg，0.7mmol，1.0当量)用DCM(1ml)溶解，溶液中加入固体光气(193mg，0.6mmol，2.0当量)。所得混合物在室温氮气环境下搅拌1小时。室温下，向上述混合物中加入氨气的甲醇溶液(15mL,7M))。所得混合物在室温下再搅拌过夜。所得混合物在减压下浓缩。残留物经反相闪速色谱纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，乙腈水(10mmol/L NH4HCO3)，30％-47％梯度，7分钟；检测器，紫外254纳米。粗产物通过预高效液相色谱法纯化，条件如下(色谱柱：CHIRAL ARTCellulose-SB，2*25cm，5μm；流动相A：MtBE(0.1％DEA)-HPLC，流动相B：MeOH：DCM＝1：1-HPLC；流速：20mL/min；梯度：等度；波长：220nm；RT1(min)：6.5；RT2(min)：9.4；SampleSolvent：进样量：0.7mL；运行次数：3)，得到产物。
化合物4-1(isomer 1,RT1(min)：6.5,16.3mg，9％收率)
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.20(s,1H),7.05(s,2H),6.93(s,1H),6.11(s,1H),4.56–4.47(m,1H),4.28–4.15(m,1H),4.03(t,J＝6.2Hz,2H),3.90–3.88(m,6H),2.93(t,J＝6.2Hz,2H),2.78–2.66(m,2H),2.32(s,3H),2.23(s,6H),1.88–1.73(m,2H).
化合物4-2(isomer 2,RT2(min)：9.4,15.5mg,10％收率)
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.40
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.26(s,1H),7.05(s,2H),6.95(s,1H),6.25(s,1H),5.05–4.90(m,1H),4.28–4.15(m,1H),4.04(t,J＝6.4Hz,2H),3.92(s,6H),2.95(t,J＝6.4Hz,2H),2.34–2.32(m,7H),2.22(s,6H)。
实施例5、化合物5-1和化合物5-2
制备步骤：
1.
将2-氯-9,10-二甲氧基-6h,7h-嘧啶[4,3-A]异喹啉-4-1(200mg,0.7mmol,1.0当量)和2,4,6-三甲基苯胺(369mg,2.7mmol,4.0当量)溶于异丙醇(4mL)中，在90℃氮气保护下搅拌3小时。得到的混合物在减压下浓缩。柱层析纯化，用DCM/MeOH(10/1)，得到(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚胺]-3h,6H,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(100mg，产率37.39％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝392.1
2.
将叔丁基2-溴丙基氨基甲酸酯(304mg,1.3mmol,1.0当量)和Cs2CO3(1.0g,3.9mmol,3.0当量.)加入到(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚胺]-3h,6H,7H-pyrimido[4,3-a]异喹啉-1(500mg,1.3mmol,1.0当量.)和二氧六烷(10mL)的混合溶液中，氮气保护下加入Pd2(dba)3(117mg,0.1mmol,0.1当量.)、Xantphos(74mg,0.1mmol,0.1当量.)。所得混合物在80℃氮气保护下搅拌6小时。得到的混合物在减压下浓缩。反相柱层析纯化，条件为:色谱柱为C18硅胶；流动相，水，MeCN(0.1％FA)，梯度30％～70％，15min；紫外，254nm。得到叔丁基N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸酯(400mg，产率57.08％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝549.6
3.
在25mL圆底烧瓶中加入N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸酯(100mg,0.2mmol,1.0当量)和HCl的1,4-二氧六环(2mL，4M)溶液。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌1小时。得到的混合物在减压下浓缩。得到2-[(1-氨基丙烯-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(80mg，粗品)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝449.2
4.
2-[(1-氨基丙烷-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(100mg,0.2mmol,1.0当量)和异氰基三甲基硅烷(38mg,0.3mmol,1.5当量)在DCM(5mL)中搅拌，25℃氮气保护下滴加TEA(60mg,0.6mmol,3.0当量)。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌2小时。得到的混合物减压浓缩。柱层析纯化，色谱柱为C18硅胶；流动相:ACN水溶液(0.1％NH3.H2O)，梯度为25％～75％，20min；紫外，254nm。得到2-({9,10-二甲氧基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基脲(80mg，产率73.0％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝492.2
5.
在50mL圆底烧瓶中加入2-({9,10-二甲氧基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙脲(100mg,0.2mmol,1.0当量)和氢溴酸的水溶液(5mL)。所得混合物在120℃氮气保护下搅拌3小时。混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，有机层用饱和食盐水(3×100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到2-({9,10-二羟基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基脲(80mg，粗品)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝464.2
6.
2-({9,10-二羟基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基脲(100mg,0.2mmol,1.0当量)和K2CO3(149mg,1.0mmol,5.0当量)加入到DMF(1.5mL)中，室温下滴加2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(44mg,0.2mmol,1.0当量)。反应混合物在55℃氮气保护下搅拌1.5小时。得到的混合物在减压下浓缩。反相柱层析纯化，条件为:色谱柱为C18硅胶；流动相，水，ACN(0.1％FA)，梯度20％～70％，20min；紫外，254nm。得到2-{[9-(二氟甲氧基)-10-羟基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}丙基脲(10mg，产率9.03％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝514.2
7.
2-{[9-(二氟甲氧基)-10-羟基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}丙基脲(10mg,0.02mmol,1.0当量)和K2CO3(4mg,0.03mmol,1.5当量)，溶剂DMF(0.5mL)，室温下滴加碘甲烷(4mg,0.03mmol,1.5当量)。所得混合物在60℃氮气保护下搅拌1.5小时。得到的混合物在减压下浓缩。采用高效液相色谱纯化，柱型:XBridge BEHC18 5μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B:ACN；流量:60mL/min；梯度:40％B到50％B,8分钟；波长:254nm/220nm nm；RT1(min):7.3得到消旋产物。消旋产物采用手性高效液相色谱法(柱:手性ART Cellulose-SB,2*25cm,5μm；流动相A:MeOH:DCM＝1:1—HPLC，流动相B:MtBE(0.1％DEA)—HPLC；流量:20ml/min；梯度:等距50；波长:220nm；RT1(分钟):4.4；RT2(分钟):10.7；样品溶剂:MeOH—HPLC；注射量:1ml)得到产物。
化合物5-1(isomer 1,RT1(min):4.4,1.54mg，产率14.87％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝529.40.
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.20–7.05(m,3H),6.95–6.82(m,1H),6.80(s,1H),5.49(s,1H),4.49(s,1H),4.16–4.10(m,2H),3.72(s,3H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.37(s,3H),2.23(s,3H),2.10(s,3H),1.35–1.28(m,2H),1.06(s,3H).
化合物5-2(isomer 2,RT2(min):10.7,2.19mg，产率20.9％)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝529.45
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.20–7.05(m,3H),6.95–6.82(m,1H),6.80(s,1H),5.49(s,1H),4.49(s,1H),4.16–4.10(m,2H),3.72(s,3H),2.96(t,J＝6.4Hz,2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.11(s,3H),1.35–1.28(m,2H),1.06(s,3H)。
实施例6、化合物6
制备步骤：
1.
将三甲基苯胺(1.0g,7.4mmol,1.0当量),N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(3.4g,8.8mmol,1.2当量)和N,N-二异丙基乙胺(3.9mL,22.2mmol,3.0当量)用20mL二氯甲烷溶解，室温下搅拌2小时。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品用正相柱层析纯化，条件如下(流动相A:石油醚,流动相B:乙酸乙酯；流速:60mL/min；梯度:10％Bto 50％B in 20min；波长:254nm；)得到2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-甲磺酰乙酰胺(600mg,产率25.17％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝323.14
2.
将2-(1,3-二氧代异吲哚-2-基)-N-(2,4,6-三甲基苯基)乙酰胺(600mg,1.8mmol,1.0当量),2-氯-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶【6,1-A】异喹啉-4-酮(653mg,2.2mmol,1.2当量),O,O-(1-乙酰氧基-2,2,2-三氯乙基)膦酸二苯酯(118.40mg,0.186mmol,0.1当量),甲磺酸{[4-(N,N-(二甲氨)苯基]二叔丁基膦基}(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(49.39mg,0.186mmol,0.1当量)和碳酸铯(1.5g,4.6mmol,2.5当量)用10mL 1.4-二氧六环溶解，氮气保护，110℃搅拌过夜。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱：C18；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:30％B to 50％B in 20min；波长:254nm；)得到2-氨基-N-(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)-N-甲磺酰基乙酰胺(50mg,产率5.04％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝449.16
3.
将2-氨基-N-(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)-N-甲磺酰基乙酰胺(20mg,0.05mmol,1.0当量),三乙胺(14mg,0.15mmol,3.0当量)和N,N'-羰基二咪唑(10.9mg,0.07mmol,1.5当量)用2mL二氯甲烷溶解，氮气保护，0℃滴加2mL胺的1.4-二氧六环溶液，室温搅拌2小时。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:SunFireC18 5m,30mm X 150mm；流动相A:水(0.1％甲酸),流动相B:乙腈；流速:60mL/min mL/min；梯度:45％B to 59％B in 7分钟；波长:254nm/220nm；时间:5.92)得到N-(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)-N-甲磺酰基-2-脲基乙酰胺(2.9mg,产率13.10％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝475.20
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),7.71(s,1H),7.18(s,1H),7.08-7.01(m,3H),4.77(s,2H),4.08(t,J＝6.6Hz,2H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),2.97(t,J＝6.6Hz,2H),2.30(s,3H),2.12–2.10(s,6H)。
实施例7、化合物7-1、化合物7-2和化合物7-3
制备步骤：
1.
向在1,4-二氧六环(80mL)中的2-溴环丙烷-1-甲酸甲酯(200mg，1.1mmol，1.0当量)和(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H,6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(437mg，1.1mmol，1.0当量)中加入碳酸铯(1.1g,3.4mmol,3.0当量)，Xantphos(106mg,0.2mmol,0.2当量)和Pd2(dba)3(64mg,0.1mmol,0.1当量)。在氮气环境下于100℃搅拌12h后，将所得混合物减压浓缩。残留物经硅胶柱色谱纯化，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到粗产物。粗产物经色谱柱(YMC Triart C18ExRs 5m,30mm*150mm；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：39％B至62％B，10分钟；波长：254nm/220nm；RT1(min)：8.33)，得到2-[(2E)-9,10-二甲氧基-4-氧代-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-3-基]环丙烷-1-甲酸甲酯(100mg，产率18.3％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝490.2
2.
室温下，向在甲醇(20mL)中的2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙烷-1-甲酸甲酯(160mg，0.3mmol,1,0当量)加入氢氧化钠(65mg，1.6mmol，5.0当量)在水(5mL)中的水溶液。上述混合物在50℃下搅拌18h。反应完成后，反应液减压浓缩。所得混合物用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。水层用6M盐酸水溶液酸化至pH＝4。所得混合物用二氯甲烷(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙烷-1-羧酸(170mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝476.2
3.
向在二氯甲烷(10mL)中的2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙烷-1-羧酸(170mg，0.4mmol，1.0当量)滴加草酰氯(0.1mL，1.1mmol，3.0当量)。所得混合物在氮气环境下于0℃搅拌1h。所得混合物在减压下浓缩。粗产物直接使用，无需进一步纯化。将粗产物溶解在二氯甲烷(1mL)中，并在0℃下加入到氨的四氢呋喃溶液(60mL，1.3M)中。所得混合物在0℃下搅拌1h。所得混合物用乙酸乙酯(3x60mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙烷-1-甲酰胺(180mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝475.2
4.
将2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙烷-1-甲酰胺(180mg，0.4mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20mL)中的混合物冷却至0℃，并分批加入硼氢化钠(143mg，3.8mmol，10.0当量)。将碘粒(963mg，3.8mmol，10.0当量)溶解在四氢呋喃(3mL)中加入所得混合物中。所得混合物在70℃下搅拌18h。室温下加入水(30mL)淬灭反应。所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物经Prep-TLC纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到2-{[2-(氨基甲基)环丙基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(45mg，产率25.8％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝461.2
5.
将2-{[2-(氨基甲基)环丙基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(45mg，0.1mmol，1.0当量)、三乙胺(30mg，0.3mmol，3.0当量)和异氰酸三甲基硅烷(23mg，0.2mmol，2.0当量)在DCM(5mL)中的混合物在室温下搅拌3h。所得混合物减压浓缩。粗产物(45mg)经Prep-HPLC纯化，条件如下(色谱柱：XBridge BEH C18OBD Prep Column 130,5m,19mm*250mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)；流速:25mL/min；梯度:45％B to 67％B 10分钟；波长:254nm/220nm；RT1(min)：7.93)，得到[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)环丙基]甲基脲(20mg，产率40.65％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.3
6.
化合物7-1,isomer 1(色谱柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：甲醇：二氯甲烷＝1：1，流动相B：甲基叔丁基醚(0.1％二乙胺)流速：20mL/min；梯度：等度；波长：254nm；RT1(min)：6.7；样品溶剂：甲醇(0.1％二乙胺)；进样量：1mL；运行次数：3)得到产物(3.8mg，产率12.43％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.10(s,1H),7.07(s,1H),6.95(s,1H),6.72(s,1H),5.54(s,1H),4.25–4.06(m,2H),3.90(s,4H),3.68(s,3H),2.99(t,J＝6.6Hz,3H),2.48–2.40(m,1H),2.36(s,3H),2.23(s,3H),2.03(s,3H),1.43–1.31(m,2H).
化合物7-2,isomer 2(色谱柱：CHIRAL ART Amylose-SA，2*25cm，5μm；流动相A：甲醇：二氯甲烷＝1：1，流动相B：甲基叔丁基醚(0.1％二乙胺)流速：20mL/min；梯度：等度；波长：254nm；RT2(min)：10.9；样品溶剂：甲醇(0.1％二乙胺)；进样量：1mL；运行次数：3)得到产物(3.5mg，产率11.29％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.10(s,1H),7.07(s,1H),6.95(s,1H),6.72(s,1H),5.54(s,1H),4.25–4.06(m,2H),3.90(s,4H),3.68(s,3H),2.99(t,J＝6.6Hz,3H),2.48–2.40(m,1H),2.36(s,3H),2.23(s,3H),2.03(s,3H),1.43–1.31(m,2H).
化合物7-3,isomer 3(色谱柱：XBridge BEH C18 OBD Prep Column 130,5m,19mm*250mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)；流动相B：乙腈；流速:60mL/min；梯度:39％Bto 61％B 9分钟；波长:254nm/220nm；RT1(min)：5.45)，得产物(20mg，产率40.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝504.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.10(s,1H),7.07(s,1H),7.02–6.89(m,2H),6.70(s,1H),5.57(s,1H),4.61(s,6H),4.27–4.04(m,2H),4.05–3.91(m,2H),3.90(s,3H),3.85–3.72(m,1H),3.68(s,3H),3.05–2.95(m,2H),2.92–2.87(m,1H),2.36(s,3H),2.31–2.14(m,8H)。
实施例8、化合物8
制备步骤
1.
将N-(2-羟丙基)氨基甲酸酯叔丁酯(15.0g,85.6mmol,1.0当量)和TEA(26.0g,256.8mmol,1.5当量)在DCM(80mL)中搅拌后，在0℃下分批加入DMAP(1.1g,8.6mmol,0.1当量)和TsCl(21.2g,111.3mmol,1.3当量)。将所得混合物在室温下搅拌2h。所得混合物用二氯甲烷(3x200mL)提取。有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥。过滤后的滤液在减压下浓缩，经硅胶柱层析纯化，PE/EA(5/1)洗脱得到N-[2-[(4-甲基苯磺酰)氧]丙基]氨基甲酸酯(20.3g,产率71.9％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝330.1
2.
向9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6h,7h-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.6g,4.1mmol,1.0当量)的1,4-二氧六环(20mL)溶液中加入叔丁基N-[2-[(4-甲基苯磺酰)氧]丙基]氨基甲酸酯(2.0g,6.1mmol,1.5当量),碳酸铯(2.7g,8.2mmol,2.0当量),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.5g,0.8mmol,0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.4g,0.4mmol,0.1当量)，混合物用氮气换气后升温至100℃。氮气条件下，混合物在100℃下搅拌5h。反应体系用乙酸乙酯(3x200mL)和水(150mL)萃取。有机相加入无水硫酸钠干燥后，过滤旋蒸。所得残余物用反相柱层析纯化,条件如下：色谱柱:XBridge BEH C18，5μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:55％Bto 65％B in 7min；波长:254nm/220nm；RT1(min):5.67/6.05。得到叔丁基N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸酯(35.33mg,产率1.55％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝549.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.11(d,J＝10.2Hz,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.41(s,1H),4.57–4.39(m,1H),4.18–4.02(m,2H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),3.55–3.48(m,1H),3.40(t,J＝8.2Hz,1H),2.97(t,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.11(s,3H),1.46(s,9H),1.31(s,1H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例9、化合物9-1和化合物9-2
制备步骤：
1.
将2-((1-氨基丙-2-基)(甲磺酰基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol,1.0当量)，3H-1,2,3-三唑-4-羧酸(56mg,0.5mmol,1.5当量)，1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺(96mg,0.5mmol,1.5当量)，1-羟基苯并三唑(67mg,0.5mmol,1.5当量)用2ml DMF溶解，氮气保护，室温搅拌1小时，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:Xselect CSH C185m,30mmX 150mm；流动相A:水(0.1％FA),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:27％B to 55％B in 9min；波长:254nm/220nm；RT1(min):6.77/8.43)得N-(2-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲磺酰胺基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酰胺(30mg,产率16.5％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝544.25
2.
消旋体(30mg)经Chiral-SFC纯化，条件如下(色谱柱:CHIRALPAK IH 3*25cm,5um；流动相A:CO2,流动相B:甲醇(0.1％2M NH3-MEOH)；流速:85mL/min；梯度:等度35％B；柱温(℃):35；压力(bar):100；波长:220nm；RT1(min):2.92；RT2(min):4.42；样品溶剂:DCM(0.1％2M NH3-MeOH)--HPLC；进样量:1mL)得产物
化合物9-1(isomer 1,RT1(min):2.92,9.2mg,产率28.58％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝544.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.25(s,1H),7.15–7.11(m,2H),6.99–6.92(m,1H),6.65(s,1H),5.44(s,1H),4.74(s,1H),4.23–4.04(m,2H),3.95-3.88(m,4H),3.85–3.75(m,1H),3.67(s,3H),2.99(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.31(d,J＝4.0Hz,1H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H).
化合物9-2(isomer 2,RT2(min):4.42,8.8mg,收率24.5％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝544.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.25(s,1H),7.15–7.11(m,2H),6.99–6.92(m,1H),6.65(s,1H),5.44(s,1H),4.74(s,1H),4.23–4.04(m,2H),3.95-3.88(m,4H),3.85–3.75(m,1H),3.67(s,3H),2.99(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.31(d,J＝4.0Hz,1H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例10、化合物10-1和化合物10-2
制备步骤：
1.
将2-((1-氨基丙-2-基)(甲磺酰基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol,1.0当量)，咪唑-2-甲酸(56mg,0.5mmol,1.5当量)，1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺(96mg,0.5mmol,1.5当量)，1-羟基苯并三唑(67mg,0.5mmol,1.5当量)用2ml DMF溶解，氮气保护，室温搅拌1小时，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:Xselect CSH C185 m,30mmX 150mm；流动相A:水(0.1％FA),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:27％B to 55％B in9分钟；波长:254nm/220nm；RT1(min):6.77/8.43)得到N-(2-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲磺酰胺基)丙基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(70mg,产率44.0％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝544.25
2.
消旋体(70mg)经Chiral-SFC纯化，条件如下(色谱柱:CHIRAL ART Cellulose-SB,3*25cm,5μm；流动相A:CO2,流动相B:MeOH(0.1％2M NH3-MeOH)；流速:100mL/min；梯度:等度25％B；柱温(℃):35；压力(bar):100；波长:220nm；RT1(min):9.4；RT2(min):10.72；样品溶剂:MeOH(0.1％DEA)--HPLC；进样量:1mL)得到产物
化合物10-1(isomer 1,RT1(min):9.4,24.9mg,产率34.5％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.21(s,3H),7.16–7.08(m,2H),6.94(s,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.70(s,1H),4.21–4.02(m,2H),3.97–3.91(m,1H),3.89(s,4H),3.82–3.84(m,1H),3.67(s,3H),3.05–2.94(m,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.14(s,3H),1.31(s,1H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H).
化合物10-2(isomer 2,RT2(min):10.72,24.4mg,产率34.5％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.21(s,3H),7.16–7.08(m,2H),6.94(s,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.70(s,1H),4.21–4.02(m,2H),3.97–3.91(m,1H),3.89(s,4H),3.84–3.76(m,1H),3.67(s,3H),3.05–2.94(m,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.14(s,3H),1.31(s,1H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例11、化合物11-1和化合物11-2
制备步骤：
1.
2H-吡唑-3-羧酸(25mg，0.2mmol，1.0当量)溶于SOCl2(1mL)，在氮气保护下室温搅拌2h。所得混合物真空浓缩旋干。将上述混合物溶于DCM(1mL)，在0℃，氮气保护下滴加到2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(100mg，0.2mmol，1.0当量)和N，N-二异丙基乙胺(86mg，0.7mmol，3.0当量)的DCM(5mL)溶液中。反应液在氮气保护下室温搅拌2h。反应液在室温下用水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(3x10mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。采用反相纯化，条件为：色谱柱为C18硅胶；流动相，水中ACN(0.1％FA)，10％～50％梯度，10min；紫外检测器，254nm。纯化得到N-[2-({9，10-二甲氧基-4-氧-6h，7h-嘧啶[4，3-a]异喹啉-2-基}(2，4，6-三甲基苯基)氨基)丙基]-2H-吡唑-3-甲酰胺(40mg，产率32.0％)。
2.
粗产物(40mg)经色谱柱纯化：色谱柱：CHIRALPAK IH 3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MEOH(0.1％DEA)；流速：80mL/min；梯度：等度40％B；柱温(℃)：10℃；柱头温度(℃)：10℃：80mL/min；梯度：40％B等度；柱温(℃)：35；压(bar)：100；波长：220nm；RT1(min)：2.73；RT2(min)：4.17；样品溶剂：进样量：4.8mL，得到产物。
化合物11-1(isomer 1,RT1(min):2.73,12.1mg，产率9.6％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.55
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.71(d,J＝2.4Hz,1H),7.13(d,J＝13.6Hz,2H),6.93(s,1H),6.78(d,J＝2.4Hz,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.70(s,1H),4.16–4.10(m,2H),3.91–3.78(m,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H).
化合物11-2(isomer 2,RT2(min):4.17,10.9mg，产率26.6％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.71(d,J＝2.4Hz,1H),7.18–7.12(m,2H),6.93(s,1H),6.78(d,J＝2.4Hz,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.75–4.55(m,1H),4.16–4.10(m,2H),3.91–3.78(m,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例12、化合物12-1和化合物12-2
制备步骤：
1.
在高压反应釜中，向在150mL甲醇中的1-苄基-5-甲基-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯(850mg，3.5mmol，1.0当量)加入钯碳(10％，2.90g)。混合物在室温20bar氢气压力下搅拌18小时，用硅藻土过滤，减压浓缩滤液。残留物经硅胶柱色谱纯化，用PE/EA(1/1)洗脱，得到5-甲基-1氢-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯(260mg，产率48.4％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝156.1
2.
将5-甲基-1氢-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯(260mg，1.7mmol，1.0当量)和氢氧化钠(201mg，5.1mmol，3.0当量)在甲醇(10mL)和水(10mL)中的混合物在60℃下搅拌18小时。所得混合物在减压下浓缩。用2摩尔盐酸水溶液将混合物酸化至pH＝5。所得混合物在减压下浓缩。残留物经反相色谱纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，乙腈、水，0％-10％梯度，10分钟；检测器，紫外254纳米，得到5-甲基-3H-1,2,3-三唑-4-羧酸(200mg，产率93.9％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝128.0
3.
室温下，将2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.2mmol,1.0当量)和5-甲基-3H-1,2,3-三唑-4-羧酸(28.3mg,0.2mmol,1.0当量)溶解在DMF(3mL)中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(64mg，0.3mmol，1.5当量)和1-羟基苯并三唑(45mg，0.3mmol，1.5当量)。所得混合物在室温下搅拌2h。所得混合物减压浓缩，得到粗产物。粗产物在以下条件下进行反相纯化(色谱柱:XBridge BEH Shield RP18 5m，30mm*150mm；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈；流速：60ml/min；梯度：10分钟内从36％B到54％B；波长：254nm/220nm nm；RT1(min)：6.18)，得到N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]-5-甲基-3H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(30mg，产率24.1％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝558.3
4.
粗品(30mg)经Chiral-HPLC纯化，条件如下：CHIRALPAK IH 3*25cm,5μm；流动相A：CO2，流动相B：甲醇(0.1％二乙胺)；流速：85mL/min；梯度：等度35％B；柱温(℃)：25℃；背压(bar)：100；波长：254nm；RT1(min)：2.85；RT2(min):4.5样品溶剂：甲醇：二氯甲烷＝1：1--HPLC；进样量：1mL)得到产物。
化合物12-1(isomer 1,RT1(min):2.85,1.6mg，产率5.14％)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝558.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.17–7.10(m,2H),6.93(s,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.78–4.69(m,1H),4.20–4.04(m,2H),3.97–3.77(m,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),2.59–2.52(m,3H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.11(d,J＝6.9Hz,3H).
化合物12-2(isomer 2,RT2(min):4.5,3.2mg，收率9.86％)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝558.46
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.17–7.10(m,2H),6.93(s,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.78–4.69(m,1H),4.20–4.04(m,2H),3.97–3.77(m,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),2.59–2.52(m,3H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.11(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例13、化合物13-1和化合物13-2
制备步骤：
1.
2-[(1-氨基丙-2-基)(2，4，6-三甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(100mg，0.2mmol，1.0当量)、3H-咪唑-4-羧酸(25mg，0.2mmol，1.0当量)、HOBT(45mg，0.3mmol，1.5当量)、EDCI(64mg，0.3mmol，1.5当量)溶于DMF(5mL)，在室温氮气保护下搅拌2h。室温下用水(10mL)淬灭反应液。水层用乙酸乙酯(3x20mL)萃取，有机层用饱和食盐水(3×50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。用反相纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，乙腈水(0.1％FA)，10分钟内梯度从10％到50％；检测器，紫外254nm。纯化得到N-[2-({9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基}(2，4，6-三甲基苯基)氨基)丙基]-3H-咪唑-4-甲酰胺(20mg，产率15.7％)。
2.
粗产物(20mg)经Chiral-HPLC纯化：CHIRALPAKIH 3*25cm,5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH：DCM＝2：1(0.1％2M NH3-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度18％B；柱温(℃)：20℃；柱头温度(℃)：20℃：100mL/min；梯度：等度18％B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：14.2；RT2(min)：21.37；Sample Solvent：DCM--HPLC；进样量：2mL，得产物。
化合物13-1(isomer 1,RT1(min):14.2,2.04mg，产率1.6％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.20
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.75–7.70(m,2H),7.15–7.11(m,2H),6.98–6.92(m,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.75–4.55(m,1H),4.15–4.09(m,2H),3.90(s,3H),3.85–3.80(m,2H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.33–2.27(m,3H),2.15(s,3H),1.16(d,J＝6.9Hz,3H).
化合物13-2(isomer 2,RT2(min):21.37,2.72mg，产率13.0％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝543.20
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.75–7.70(m,2H),7.15–7.11(m,2H),6.98–6.92(m,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.75–4.55(m,1H),4.15–4.09(m,2H),3.90(s,3H),3.85–3.80(m,2H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.33–2.27(m,3H),2.15(s,3H),1.16(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例14、化合物14
制备步骤：
1.
在单口瓶中依次加入2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(250mg,0.6mmol,1.0当量)、DCM(5mL)、DIEA(216mg,1.7mmol,3.0当量)、氰基乙酸(57mg,0.7mmol,1.2当量)和HATU(318mg,0.8mmol,1.5当量)，室温下反应过夜，缩干溶剂，进行反相(柱型,C18 silica gel；流动相,乙腈水(10mmol/L NH4HCO3),梯度10％to 50％30分钟；检测波长254nm)纯化，得到2-氰基-N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]乙酰胺(200mg,69.6％收率)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝516.2
2.
在单口瓶中依次加入2-氰基-N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]乙酰胺(200mg,0.4mmol,1.0当量)、1.4-二氧六环(30mL)、醋酸钠(95mg,1.2mmol,3.0当量)和醋酸酐(48mg,0.5mmol,1.2当量)，100℃下反应过夜。缩干溶剂，进行反相(柱型:XBridge BEH Shield RP18 5m,30mm*150mm；流动相A:水(10mmol/L NH4HCO3),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:21％B to44％B 9分钟；波长:254nm/220nm；RT1(min):6.82)得到(2Z)-2-氰基-N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]-3-羟基-2-烯酰胺(13.27mg,6.1％收率)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝558.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.15–7.05(m,2H),7.07–6.88(m,2H),6.63(s,1H),5.40(s,1H),4.68–4.59(m,1H),4.21–4.12(m,2H),4.11–4.05(m,1H),3.89(s,3H),3.66(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H),2.33(s,1H),2.25–2.23(m,6H),2.14(s,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例15、化合物15-1和化合物15-2
制备步骤：
1.
在0℃的空气环境下，把N-(2-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.6mmol，1.0当量)和TEA(1.1mL，7.9mmol，3.0当量)溶解在DCM(5mL)溶液中，分别加入TsCl(1.2g，3.9mmol，1.5当量)和DMAP(32mg，0.3mmol，0.1当量)。所得混合物在室温氮气环境下搅拌1.5小时。反应在室温下用水淬灭。所得混合物用二氯甲烷(2x50mL)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(2x100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过反相纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，ACN水(10mmol/L NH4HCO3)，10分钟内梯度从10％到50％；检测器，紫外254nm，得到N-{2-[(4-甲基苯磺酰基)氧基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(700mg，产率69％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝361.2
2.
把9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.0g，2.5mmol，1.0当量)和N-{2-[(4-甲基苯磺酰)氧基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(1.3g，3.8mmol，1.5当量.)和碳酸铯(1.7g，5.108mmol，2.0当量.)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，在室温、空气气氛下加入XantPhos(295mg，0.5mmol，0.2当量.)和Pd2(dba)3(233.mg，0.3mmol，0.1当量.)。所得混合物在100℃的氮气环境下搅拌过夜。反应在室温下用水淬灭。所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(2x100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过反相纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，乙腈水(10mmol/L NH4HCO3)，50％-60％梯度，10分钟；检测器，紫外254nm。最终得到N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丁基]氨基甲酸叔丁酯(330mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝563.2
3.
在室温氮气环境下，把N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丁基]氨基甲酸叔丁酯(330mg，0.6mmol，1.0当量)溶解在1,4-二氧六环(2mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环(2mL，4M)溶液。所得混合物在室温氮气环境下搅拌1.5小时。反应在室温下用水淬灭。用饱和碳酸钠溶液将混合物中和至pH＝9。所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(2x100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物经Prep-TLC纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到2-[(1-氨基丁-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(150mg，产率49％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝463.2
4.
把2-[(1-氨基丁-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(100mg，0.2mmol，1当量)和三乙胺(65.mg，0.6mmol，3.0当量)溶解在DCM(1mL)中，在0℃的空气下加入异氰基三甲基硅烷(37mg,0.3mmol,1.5当量.)。所得混合物在室温氮气环境下搅拌2小时。所得混合物在减压下浓缩。粗产物(50mg)经预液相色谱纯化，条件(色谱柱：XBridge BEH C185，19*250mm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：10分钟内从41％B到48％B；波长：254nm/220nm；RT(min)：7.25/8.32)，得到产物。
化合物15-1(isomer 1,RT(min):7.25,4.02mg，收率4％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝506.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.15–7.06(m,2H),6.93(s,1H),6.63(s,1H),5.41(s,1H),4.21–4.02(m,3H),3.89(s,3H),3.66(s,4H),2.97(t,J＝8.0.Hz,2H),2.37(s,3H),2.21(s,3H),2.11(s,3H),1.66–1.52(m,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H).
化合物15-2(isomer 2,RT(min):8.32,4.02mg，收率4％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝506.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.15–7.06(m,2H),6.93(s,1H),6.63(s,1H),5.41(s,1H),4.21–4.02(m,3H),3.89(s,3H),3.66(s,4H),2.97(t,J＝8.0.Hz,2H),2.37(s,3H),2.21(s,3H),2.11(s,3H),1.66–1.52(m,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例16、化合物16
制备步骤
1.
室温下，向2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(200mg,0.4mmol,1.0当量)和三乙胺(135mg,1.3mmol,3.0当量)的二氯甲烷(5mL)溶液中，加入三甲基硅基异氰酸酯(77mg,0.7mmol,1.5当量)。室温下，所得反应液搅拌反应2小时。反应混合物用二氯甲烷萃取(3x20mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗，无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩得到2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙脲(200mg,粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝492.3
2.
在室温下，向8mL样品瓶内加入2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙脲(200mg,0.4mmol,1.0当量)，醋酸(1mL)，醋酸酐(1mL)和氢溴酸(1mL)。120℃下，所得反应液搅拌反应过夜。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化到pH＝6。反应混合物用二氯甲烷和甲醇萃取(3x50mL)。合并有机相，用饱和食盐水反洗(3x50mL),无水硫酸钠干燥。所得混合物过滤后，将滤液减压浓缩得到2-({9,10-二羟基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙脲(180mg,产率95.4％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝464.2
3.
室温下，向2-({9,10-二羟基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙脲(150mg,0.3mmol,1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(9mL)溶液中，加入碳酸钾(268mg,1.8mmol,6.0当量)和氘代碘甲烷(234mg,1.5mmol,5.0当量)。室温下，所得反应液搅拌反应过夜。所得粗品用反相柱层析纯化得到2-{[9,10-二(2H3)甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基](2,4,6-三甲基苯基)氨基}丙脲(25.92mg,产率15.52％)，条件如下：(Column:Xbridge BEH Shield RP185μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:35％B to45％B in 7min；波长:254nm/220nm；RT1(min):6.23。
LCMS(ESI):[M+H]+＝498.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.11(d,J＝10.6Hz,2H),6.93(s,1H),6.63(s,1H),5.40(s,1H),4.60(s,2H),4.49(s,1H),4.20–4.01(m,2H),2.97(t,J＝6.5Hz,2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.09(s,3H),1.04–0.96(m,3H)。
实施例17、化合物17
向2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(60mg,0.18mmol,1.0当量)的DCM(2mL)溶液中加入三乙胺(41mg,0.40mmol,3.0当量)和二碳酸二甲酯(36mg,0.27mmol,2.0当量).搅拌两小时后，混合物减压旋蒸浓缩。粗产物(80mg)经Prep-TLC正相纯化，EA/PE＝1/3，得到产物N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]氨基甲酸甲酯(23.01mg，产率32.94％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝507.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.09(m,2H),6.90(s,1H),6.61(s,1H),5.38(s,1H),4.48–4.42(m,1H),4.20–4.02(m,2H),3.86(s,3H),3.64(s,6H),3.60–3.53(m,1H),3.48–3.38(m,1H),2.94(t,J＝6.5Hz,2H),2.35(s,3H),2.19(s,3H),2.09(s,3H),1.06(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例18、化合物18
将苯甲酸(76mg，0.62mmol，3.5当量)的DMF(1mL)溶液中加入2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(80mg,0.18mmol,1.0当量),1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(103mg,0.53mmol,3.0当量),1-羟基苯并三唑(72mg,0.53mmol,3.0当量)。混合物搅拌2h。混合物减压浓缩，粗产物(100mg)经Prep-TLC纯化，EA/PE＝1/5得到N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]苯甲酰胺)(18.91mg，产率19.11％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝553.3
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.92–7.87(m,2H),7.59–7.45(m,3H),7.17–7.08(m,2H),6.91(s,1H),6.63(s,1H),5.42(s,1H),4.69–4.60(m,1H),4.19–4.02(m,2H),3.93–3.82(m,4H),3.79–3.72(m,1H),3.64(s,3H),2.96(t,J＝6.5Hz,2H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.11(s,3H),1.12(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例19、化合物19
将2-吡啶甲酸(41mg，0.34mmol，1.0当量)的DMF(1mL)溶液中加入2-[(1-氨基丙-2-基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol,1.0当量),1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(64mg,0.34mmol,1.5当量),1-羟基苯并三唑(45mg,0.34mmol,1.5当量)。混合物搅拌2h。混合物减压浓缩，粗产物(100mg)经Prep-HPLC纯化，得到N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]吡啶-2-甲酰胺(17.35mg，产率13.93％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝554.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.69–8.60(m,1H),8.06(d,J＝7.7Hz,1H),8.02–7.90(m,1H),7.58–7.50(m,1H),7.15–7.09(m,2H),6.91(s,1H),6.62(s,1H),5.40(s,1H),4.83–4.76(m,1H),4.18–4.04(m,2H),3.86(s,3H),3.85(d,J＝6.4Hz,2H),3.64(s,3H),2.95(t,J＝6.5Hz,2H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.12(s,3H),1.09(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例20、化合物20
9,10-二甲氧基-2-[(1-氨基-2-丙基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(70mg,0.2mmol,1.0当量)和嘧啶-4-甲酸(58mg,0.5mmol,3.0当量)，溶剂DMF(2mL)溶解。室温下在上述混合物中加入HOBT(63mg,0.5mmol,3.0当量)和EDCI(90mg,0.5mmol,3.0当量)，室温下搅拌2h。粗产物经Prep-HPLC纯化，条件如下(色谱柱:XBridgeBEH C18 5μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:7分钟内从40％B升至47％B；波长:254nm/220nm nm；RT1(min):6.45)，得到N-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]嘧啶-4-甲酰胺(19.00mg，产率21.34％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝555.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.32(s,1H),9.03(d,J＝4.8Hz,1H),8.16–8.02(m,1H),7.18–7.10(m,2H),6.94(s,1H),6.64(s,1H),5.43(s,1H),4.60(s,1H),4.23–4.08(m,2H),3.89(d,J＝6.5Hz,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.14(s,3H),1.23–0.98(m,3H)。
实施例21、化合物21
9,10-二甲氧基-2-[(1-氨基-2-丙基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(50mg,0.1mmol,1.0当量)，溶剂DCM(3mL)溶解。室温下在上述混合物中加入异氰酰基环丙烷(14mg,0.2mmol,1.5当量)和三乙胺(34mg,0.3mmol,3.0当量)，室温下搅拌2h。粗产物经Prep-HPLC纯化，条件如下(色谱柱Xbridge BEH Shield RP18，5μm，19*250mm；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：7分钟内从36％B升至50％B；波长：254nm/220nm；RT1(min):6.05/6.5)，得到3-环丙基-1-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]脲(17.19mg，产率28.92％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝532.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.15–7.05(m,2H),6.93(s,1H),6.63(s,1H),5.40(s,1H),4.57–4.49(m,1H),4.17–4.04(m,2H),3.88(s,3H),3.75–3.60(m,4H),3.55–3.45(m,1H),2.96(t,J＝6.5Hz,2H),2.57–2.48(m,1H),2.37(s,3H),2.23(s,3H),2.11(s,3H),1.09(d,J＝6.9Hz,3H),0.79–0.67(m,2H),0.57–0.46(m,2H)。
实施例22、化合物22
9,10-二甲氧基-2-[(1-氨基-2-丙基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-6h,7h-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(70mg,0.2mmol,1.0当量)和三乙胺(47mg,0.5mmol,3.0当量)，溶剂DCM(3mL)室温下溶解。在0℃下向上述混合物中加入N-甲基氨基甲酰氯(22mg,0.2mmol,1.5当量)，室温下搅拌2h。粗产物经Prep-HPLC纯化，条件如下(色谱柱:XBridge BEH C18 5μm,30*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:7分钟内从36％B升至48％B；波长:254nm/220nm；RT1(min):6.37)，得到1-[2-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,4,6-三甲基苯基)氨基)丙基]-3-甲基脲(16.82mg，产率21.25％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝506.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.16–7.07(m,2H),6.93(s,1H),6.63(s,1H),5.39(s,1H),4.60(s,1H),4.46(t,J＝7.6Hz,1H),4.21–4.00(m,2H),3.95–3.85(m,4H),3.66(s,3H),3.05–2.80(m,5H),2.37(s,3H),2.21(s,3H),2.08(s,3H),1.02(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例23、化合物23-1和化合物23-2
制备步骤：
1.
将4-溴-2，6-二异丙基苯胺(5g，20mmol，1.0当量)，碳酸铯(20.0g，60mmol，3当量)，[1，1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(1.6g，2mmol，0.1当量)，甲基硼酸(5.8g，98mmol，5当量)和2-二环己基膦-2'，6'-二甲氧基联苯(1.6g，4mmol，0.2当量)用1，4-二氧六环(90mL)和水(15mL)溶解，氮气保护，100℃搅拌过夜。冷却到室温，用100mL水溶解，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，有机层用饱和氯化钠100mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品用正相柱层析纯化，条件如下(流动相A:二氯甲烷，流动相B:甲醇；流速:100mL/min；梯度:0％B to 10％B in 30min；波长:254nm；)得2，6-二异丙基-4-甲基苯胺(2.1g，产率56.2％).
LCMS(ESI):[M+H]+＝192.17
2.
氮气保护，90℃下，2，6-二异丙基-4-甲基苯胺(1g，5.2mmol，1当量)和2-氯-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶6，1-A异喹啉-4-酮(1.68g，5.8mmol，1.1当量)的异丙醇(2mL)溶液搅拌反应过夜。所得反应液减压浓缩，过滤，收集滤饼并用乙酸乙酯(2x10毫升)洗涤，得2-[(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(1.0g，产率42.7％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝448.25
3.
将2-[(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)氨基]-9，10-二甲氧基-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-4-酮(700mg，1.6mmol，1当量)，碳酸铯(1.6g，4.8mmol，3当量)和N-(2-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(560mg，2.3mmol，1.5当量)用1，4二氧六环(10mL)溶解，氮气保护，100℃搅拌过夜。冷却到室温，用20mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:C18；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:50％B到80％B in20min；波长:254nm；)得N-{2-[(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)({9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基}氨基甲酸叔丁酯(600mg，产率63.4％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝605.35
4.
将N-{2-[(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)({9，10-二甲氧基-4-氧代-6H，7H-嘧啶并[4，3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基}氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.91mmol，1当量)用10mL盐酸的1，4二氧六环溶液(4M)溶解，室温下搅拌1小时。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得2-((1-氨基丙-2-基)(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)氨基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(300mg，产率73.3％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝505.30
5.
将2-((1-氨基丙-2-基)(2，6-二异丙基-4-甲基苯基)氨基)-9，10-二甲氧基-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(300mg，0.59mmol，1.0当量.)，三乙胺(180mg，1.8mmol，3当量)和异氰酸三甲基硅烷(103mg，1.2mmol，2当量)，用10mL DCM溶解，在室温下搅拌2小时。减压浓缩，用10mL水溶解，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，有机层用饱和氯化钠20mL洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。粗品用反相柱层析纯化，条件如下(色谱柱:XBridge BEH C18 5μm，30*150mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)流动相B:乙腈；流速:60mL/min；梯度:43％B to 55％B，8分钟；波长:254/220nm；RT1(min):5.77)得1-(2-((2，6-二异丙基-4-甲基苯基)(9，10-二甲氧基-4-氧代-6，7-二氢-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-2-基)氨基)丙基)脲(150mg，产率45.0％)。
6.
消旋体(150mg)经Chiral-SFC纯化，条件如下(色谱柱:CHIRALPAK IH，2*25cm，5μm；流动相A:甲醇:二氯甲烷＝1:1--HPLC，流动相B:甲叔醚(0.1％乙二胺)-HPLC；流速:20mL/min；梯度:等度；柱温(℃):35；压力(bar):100；波长:220nm；RT1(min):10；RT2(min):5；样品溶剂:甲醇--HPLC；进样量:1mL)得产物。
化合物23-1(isomer 1,RT1(min):10,16.5mg，产率6.4％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝548.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.25–7.18(m,2H),6.94(s,1H),6.61(s,1H),5.45(s,1H),4.48(s,1H),4.15–4.08(m,2H),3.89(s,3H),3.63(s,3H),3.11–2.93(m,4H),2.75(s,1H),2.44(s,3H),1.36–1.25(m,8H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝6.6Hz,4H).
化合物23-2(isomer 2,RT2(min):5,16.42mg,产率6.4％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝548.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.26–7.18(m,2H),6.94(s,1H),6.61(s,1H),5.45(s,1H),4.48(s,1H),4.16–4.08(m,2H),3.89(s,3H),3.63(s,3H),3.11–2.93(m,3H),2.75(s,1H),2.44(s,3H),1.35–1.28(m,7H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例24、化合物24-1和化合物24-2
制备步骤：
1.
室温下，在空气中把1,3-二氟-5-甲基-2-硝基苯(200mg，1.1mmol，1当量)溶解在MeOH(5mL)中，再加入甲醇钠的甲醇溶液(3ml，60％)。室温下反应过夜。减压蒸干，加入水50mL，乙酸乙酯萃取2x50mL，合并的有机层用饱和食盐水(2x100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩滤液，得到1,3-二甲氧基-5-甲基-2-硝基苯(200mg，粗品)。
2.
室温下，在空气中把1,3-二甲氧基-5-甲基-2-硝基苯(190mg，0.9mmol，1当量)和H2O(1mL)加入EtOH(5ml)溶液中，再加入NH4Cl(154.mg，3.mmol，3当量)和Fe(8.5mg，0.2mmol，3当量)。反应在80℃下反应两个小时，所得混合物经过滤，滤饼用乙酸乙酯(2x30mL)洗涤。室温下用水淬灭反应物。所得混合物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠(2x150mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到2,6-二甲氧基-4-甲基苯胺(150mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝168.2
3.
室温下，在空气中把2-氯-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(273.mg，0.9mmol，1.2当量)溶解在异丙醇(3ml)溶液中，加入2,6-二甲氧基-4-甲基苯胺(152.mg，0.9mmol，1.2当量)。将所得混合物减压浓缩，得到2-[(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(300mg，粗品)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝424.2
4.
把2-[(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(300mg，0.7mmol，1当量)和N-(2-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(168.mg，0.7mmol，1当量)和Cs2CO3(461mg，1.4mmol，2当量)溶解在1,4-二氧六环(5ml)溶液中，加入XantPhos(81.mg，0.1mmol，0.1当量)和Pd2(dba)3(64.mg,0.1mmol,0.1当量).将所得混合物在100℃的氮气环境下搅拌过夜。滤液经减压浓缩，残留物通过反相闪蒸色谱纯化，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，乙腈在水中(10mmol/L NH4HCO3)，10分钟内梯度从10％到50％；检测器，UV 254nm。最终得到N-{2-[(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基}氨基甲酸叔丁酯(270mg，59％收率)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝581.2
5.
在室温氮气环境下，把N-{2-[(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基}氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.6mmol，1.0当量)溶解在1,4-二氧六环(2mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环(2mL)溶液。所得混合物在室温氮气环境下搅拌1.5小时。反应在室温下用水淬灭。用饱和碳酸钠溶液将混合物中和至pH＝9。所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(2x100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物经Prep-TLC纯化(CH2Cl2/MeOH＝20/1)，得到2-[(1-氨基丙-2-基)(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(150mg，49％收率)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝481.2
6.
把2-[(1-氨基丙-2-基)(2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(400mg，0.8mmol，1当量)和TEA(0.4mL，2.5mmol，3当量)加入DCM(4mL)中溶液中加入异氰基三甲基硅烷(191mg,1.6mmol,2.0当量).所得混合物在氮气环境下于室温搅拌2小时，反应混合物低压浓缩。粗产物(420mg)通过高效液相色谱法纯化，条件如下(色谱柱：Sunfire C18 5m，30mm×4.5mm)：流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：乙腈；流速：60ml/分钟；梯度：10分钟内从51％B到74％B；波长：254纳米/220纳米；RT1(分钟)：6.03；6.62)，得到1-(2-((2,6-二甲氧基-4-甲基苯基)(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)氨基)丙基)脲(130mg)，再经过Chiral-HPLC纯化，条件如下(色谱柱：JW-CHIRALPAK IG-3,3.0*50mm；3um；流动相A:MeOH:DCM＝1:1--HPLC,流动相B:MtBE(0.1％DEA)-HPLC；流速:20mL/min；梯度:等度；波长:220nm；RT1(min)：12；RT2(min)：16.5；样品溶剂：样品溶剂：MeOH：DCM＝1：1--HPLC；进样量：0.7mL；运行次数：5次)得到产物。
化合物24-1(isomer 1,RT1(min):12,30.12mg,6.8％收率)
LCMS(ESI):[M+H]+＝524.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.92(s,1H),6.72–6.66(m,3H),5.53(s,1H),4.11–4.05(m,2H),3.89(s,3H),3.81(d,J＝10.1Hz,6H),3.69(s,3H),2.95(t,J＝6.5Hz,2H),2.47(s,3H).
化合物24-2(isomer 2,RT2(min)16.5,44.03mg,10％收率)
LCMS(ESI):[M+H]+＝524.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.92(s,1H),6.72–6.66(m,3H),5.53(s,1H),4.11–4.05(m,2H),3.89(s,3H),3.81(d,J＝10.1Hz,6H),3.69(s,3H),2.95(t,J＝6.5Hz,2H),2.47(s,3H)。
实施例25、化合物25-1和化合物25-2
制备步骤：
1.
将2,6-二氟-4-甲基苯胺(1.0g,6.9mmol,1当量)与2-氯-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(2.6g,9.0mmol,1.3当量)的IPA(40mL)混合物在90℃氮气气氛下搅拌过夜。得到的混合物在减压下浓缩。用饱和NaHCO3碱化至PH＝8。所得混合物用EtOEt(3x50mL)提取。结合有机层用盐水(2x100mL)洗涤，在无水Na2SO4上干燥。过滤后的滤液在减压下浓缩。用硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2/MeOH(80/1～60/1)洗脱得到2-[(2,6-二氟-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(2.0g,71.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝400.15
2.
将2-[(2,6-二氟-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-one(440mg,1.1mmol,1当量)和N-(2-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(288.5mg,1.2mmol,1.1当量)在DMF(15mL)中搅拌，在100℃氮气气氛下搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩。用硅胶柱层析纯化，用CH2Cl2/MeOH(10/1)洗脱得到N-{2-[(2,6-二氟-4-甲基苯基)({9,10-二甲氧基-4-氧-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基氨基甲酸酯叔丁基(200mg,32.6％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝557.25
3.
将N-{2-[(2,6-二氟-4-甲基苯基)({9,10-二甲氧基-4-氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-A]异喹啉-2-基})氨基]丙基}氨基甲酸酯(200mg,0.359mmol,1等量)在1,4-二恶烷(15mL)中室温氮气氛下搅拌3h。得到的混合物在减压下浓缩。结果得到2-[(1-氨基丙烯-2-基)(2,6-二氟-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(150毫克，91.45％)。粗产物直接用于下一步，无需进一步提纯。
LCMS(ESI):[M+H]+＝457.2
4.
2-[(1-氨基丙烯-2-基)(2,6-二氟-4-甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-1(50mg,0.11mmol,1.0当量)和异氰酸三甲基硅烷(12.6mg,0.11mmol,1.0当量)在DCM(5mL)中搅拌，室温，氮气气氛下过夜。得到的混合物在减压下浓缩。粗产物(60mg)采用Prep-HPLC纯化，条件如下(柱:XSelect CSH Fluoro Phenyl 5m,19mm*250mm；流动相A:水(0.1％FA)，流动相B:ACN；流量:25mL/min；梯度:42％B到65％B,10分钟；波长:254nm/220nm；RT1(min):5.67)得到(2R)-2-[(2,6-二氟-4-甲基苯基)({9,10-二甲氧基-4-氧-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基})氨基]丙基脲(50mg)。再经过Chiral-HPLC纯化，条件如下(色谱柱:CHIRALPAK IH 2*25cm,5μm；流动相A:MeOH:DCM＝1:1—HPLC，流动相B:MtBE(0.1％DEA)—HPLC；流量:-20mL/min；梯度:等距；波长:220nm；RT1(分钟):11.2；RT2(分钟):15.0；样品溶剂:MeOH:DCM＝1:1——HPLC；注射量:1.5mL；运行次数:5)得到产物。
化合物25-1(isomer 1,RT1(min):11.2,13.41mg,24.49％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝500.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.90(s,1H),6.87(s,1H),6.85(s,1H),6.83(s,1H),5.70(t,J＝1.7Hz,1H),5.63(s,1H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),3.96–3.90(m,1H),3.88(s,3H),3.73(s,3H),3.65–3.56(m,1H),2.95(t,J＝6.2Hz,2H),2.35(s,3H),1.54(d,J＝6.9Hz,3H).
化合物25-2(isomer 2,RT2(min):15.0,15.09mg，21.59％)
LCMS(ESI):[M+H]+＝500.25
1H-NMR(400MHz,Methanol-d4)δ6.89(s,1H),6.87(s,1H),6.86–6.84(m,1H),6.84–6.81(m,1H),5.70(t,J＝1.6Hz,1H),5.63(s,1H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),3.96–3.90(m,1H),3.88(s,3H),3.73(s,3H),2.97–2.93(m,2H),2.35(s,3H),1.54(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例26、化合物26
制备步骤
1.
在单口瓶中依次加入(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H,6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.0g,2.6mmol,1.0当量)、二氧六环(100mL)、碳酸铯(1.7g,5.1mmol,2.0当量)和(N-{4-[(4-甲基苯磺酰)氧基]环己基}氨基甲酸叔丁酯)(1.4g,3.8mmol,1.5当量)，100℃下反应过夜。过滤，缩干滤液，所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：层析柱规格C18，流动相，水和乙腈，10％到100％梯度30分钟，UV220纳米检测器。得到(4-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲砜基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(110mg,7.3％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝589.3
2.
在单口瓶中依次加入(4-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲砜基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.2mmol,1.0当量)和HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，15mL)，室温下反应2h。缩干溶剂的到2-[(4-氨基环己基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-酮(80mg,96.4％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝489.3
3.
2-[(4-氨基环己基)(2,4,6-三甲基苯基)氨基]-9,10-二甲氧基-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-4-酮(140mg,0.3mmol,1.0当量)，溶剂DCM(8mL)溶解。室温下在上述混合物中加入三乙胺(145mg,1.5mmol,5.0当量)和异氰酸三甲基硅脂(40mg,0.4mmol,1.2当量)，室温下搅拌3h。粗产物经Prep-HPLC纯化，条件如下(色谱柱:Xbridge BEH Shield RP18,5μm,19*250mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:25mL/min；梯度:10分钟内从39％B降至4％B；波长:254nm/220nm nm；RT1(min):9.4)，得到4-({9,10-二甲氧基-4-氧代-6H,7H-嘧啶[4,3-a]异喹啉-2-基}(2,6-二甲基苯基)氨基)环己基脲(35.71mg，产率22.81％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝532.25
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.10(s,2H),6.92(s,1H),6.62(s,1H),5.39(s,1H),4.18–4.03(m,3H),3.88(s,4H),3.66(s,3H),2.96(t,J＝6.4Hz,2H),2.36(s,3H),2.21(s,6H),2.05–1.92(m,4H),1.88–1.80(m,2H),1.75–1.62(m,2H)。
实施例27、化合物27
制备步骤
1.
在单口瓶中依次加入(2E)-9,10-二甲氧基-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-3H,6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-4-酮(1.0g,2.6mmol,1.0当量)、1.4-二氧六环(100mL)、碳酸铯(2.5g,7.7mmol,3.0当量)和4-[(4-甲基苯磺酰)氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g,2.8mmol,1.1当量)，100℃下反应过夜。过滤，浓缩滤液，所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：流动相，水和乙腈，10％到100％梯度30分钟，UV220纳米检测器，得到4-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲脒基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg,产率8.17％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝575.3
2.
在单口瓶中依次加入4-((9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)(甲脒基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg,0.2mmol,1.0当量)和氯化氢的1,4-二氧六环(17mL)，室温下反应2h。浓缩溶剂得到2-(甲磺酰基(哌啶-4-基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(80mg,产率96.9％)。
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝475.3
3.
向2-(甲磺酰基(哌啶-4-基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(1050mg,2.2mmol,1.0当量)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(640mg,6.3mmol,3.0当量)，三甲基硅基异氰酸酯(364mg,3.2mmol,1.5当量)。混合物室温下搅拌2h。混合物减压旋蒸浓缩后，所得残余物用反相柱层析纯化，条件如下：色谱柱:XBridgeBEH Shield RP18,5μm,19*250mm；流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵),流动相B:乙腈；流速:25mL/min；梯度:35％B to 40％B in 10min；波长:254nm/220nm；RT1(min):8.57，得4-[(2E)-9,10-二甲氧基-4-氧代-2-[(2,4,6-三甲基苯基)亚氨基]-6H,7H-嘧啶并[4,3-a]异喹啉-3-基]哌啶-1-甲酰胺)(39.74mg，产率3.63％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝518.40
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.10(s,2H),6.92(s,1H),6.62(s,1H),5.39(s,1H),4.73–4.62(m,1H),4.18–3.97(m,4H),3.88(s,3H),3.66(s,3H),3.02–2.90(m,4H),2.36(s,3H),2.17(s,8H),1.43–1.29(m,2H)。
实施例28、化合物28
粗品(150mg)经Chiral-SFC纯化，条件如下(色谱柱:CHIRALPAK IH,2*25cm,5μm；流动相A:甲醇:二氯甲烷＝1:1--HPLC,流动相B:甲叔醚(0.1％乙二胺)-HPLC；流速:20mL/min；梯度:等度；波长:220nm；RT1(min):8；RT2(min):13.0；样品溶剂:甲醇--HPLC；进样量:1mL)得1-(3-((2,6-二异丙基-4-甲基苯基)(9,10-二甲氧基-4-氧代-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-2-基)氨基)环丁基)脲(13.00mg,产率14.9％)。
LCMS(ESI):[M+H]+＝560.30
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.21(s,2H),6.93(s,1H),6.64(s,1H),5.46(s,1H),4.51–4.44(m,1H),4.14–4.06(m,2H),3.97–3.88(m,1H),3.89(s,3H),3.64(s,3H),2.94-2.90(m,4H),2.74-2.78(m,2H),2.44(s,3H),2.20–2.08(m,2H),1.30(d,J＝6.8Hz,7H),1.11(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例29、化合物29
粗品(30mg)经Chiral-HPLC纯化，条件如下：CHIRALPAK IH 3*25cm,5μm；流动相A：CO2，流动相B：甲醇(0.1％二乙胺)；流速：85mL/min；梯度：等度35％B；柱温(℃)：25℃；背压(bar)：100；波长：254nm；RT1(min)：2.85；RT2(min):4.5样品溶剂：甲醇：二氯甲烷＝1：1--HPLC；进样量：1mL)得到产物。
化合物29(isomer 1,RT1(min):2.85,3.2mg，产率10.3％)
LCMS(ESI,m/z):[M+H]+＝558.35
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.17–7.10(m,2H),6.93(s,1H),6.65(s,1H),5.43(s,1H),4.78–4.69(m,1H),4.20–4.04(m,2H),3.97–3.77(m,5H),3.67(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),2.59–2.52(m,3H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),2.13(s,3H),1.11(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例30、化合物30
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol),6-甲基吡啶-2-甲酸(45.3mg,0.33mmol),EDCI(63.3mg,0.33mmol),HOBT(44.6mg,0.33mmol)和DMF(2mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(19.2mg,10.3％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝568.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.76-8.74(m,1H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(t,J＝12.0Hz,1H),7.19-7.16(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),6.52(s,1H),5.22(s,1H),4.96-4.95(m,1H),4.16–4.10(m,2H),3.83(s,3H),3.82-3.75(m,2H),3.63(s,3H),2.84(t,J＝8.0Hz,2H),2.54(s,3H),2.26(s,3H),2.17(s,3H),2.05(s,3H),1.05(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例31、化合物31
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol),5-甲基-2-甲酸吡啶(68.6mg,0.50mmol),EDCI(95.9mg,0.50mmol),HOBT(67.6mg,0.50mmol)和DMF(3mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(37.5mg,19.7％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝568.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.81(s,1H),8.35(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.54-7.51(m,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),6.52(s,1H),5.21(s,1H),4.92-4.87(m,1H),4.17–4.07(m,1H),3.83(s,3H),3.82-3.75(m,2H),3.63(s,3H),2.84(t,J＝8.0Hz,2H),2.31(s,3H),2.25(s,3H),2.17(s,3H),2.05(s,3H),1.09(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例32、化合物32
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol),4-甲基-2-吡啶甲酸(68.6mg,0.50mmol),EDCI(95.9mg,0.50mmol),HOBT(67.6mg,0.50mmol)和DMF(3mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(32.3mg,17.3％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝568.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.87(s,1H),8.37(d,J＝8.0Hz,1H),8.21(s,1H),7.91(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.91(d,J＝12Hz,1H),6.62(s,1H),6.51(s,1H),5.23(s,1H),4.87-4.82(m,1H),4.19–4.07(m,2H),3.83(s,3H),3.82-3.75(m,2H),3.64(s,3H),2.85(t,J＝8.0Hz,2H),2.34(s,3H),2.26(s,3H),2.17(s,3H),1.98(s,3H),1.07(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例33、化合物33
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol),3-甲基-2-吡啶甲酸(68.6mg,0.50mmol),EDCI(95.9mg,0.50mmol),HOBT(67.6mg,0.50mmol)和DMF(3mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(12.8mg,6.8％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝568.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)8.86(s,1H),8.35(d,J＝4.0Hz,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.22-7.20(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),6.52(s,1H),5.22(s,1H),4.96-4.91(m,1H),4.19–4.03(m,2H),3.83(s,3H),3.82-3.75(m,2H),3.63(s,3H),2.84(t,J＝8.0Hz,2H),2.64(s,3H),2.26(s,3H),2.18(s,3H),2.02(s,3H),1.08(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例34、化合物34
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol),嘧啶-2-羧酸(40.9mg,0.33mmol),EDCI(63.3mg,0.33mmol),HOBT(44.6mg,0.33mmol)和DMF(2mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(20mg,10.9％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝555.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)9.56(t,J＝8.0Hz,1H),9.03-9.00(m,2H),8.16(s,1H),7.87(s,1H),7.74-7.71(m,1H),7.12-7.10(m,2H),7.02(s,1H),4.74–4.70(m,1H),4.16(s,3H),4.15-4.10(m,2H),3.98-3.95(m,2H),3.89(s,3H),3.05-3.00(m,2H),2.31(s,3H),2.19(s,3H),2.03(s,3H),0.83(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例35、化合物35
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol),5-甲基嘧啶-2-羧酸(45.6mg,0.33mmol),EDCI(63.3mg,0.33mmol),HOBT(44.6mg,0.33mmol)和DMF(2mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(27.6mg,14.7％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝569.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)9.28(s,1H),8.64(s,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),6.51(s,1H),5.22(s,1H),4.93-4.90(m,1H),4.13–4.10(m,2H),3.83(s,3H),3.82-3.75(m,2H),3.63(s,3H),2.85-2.83(m,2H),2.31(s,3H),2.26(s,3H),2.16(s,3H),2.04(s,3H),1.05(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例36、化合物36
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol),吡嗪-2-甲酸(40.9mg,0.33mmol),EDCI(63.3mg,0.33mmol),HOBT(44.6mg,0.33mmol)和DMF(2mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(9.5mg,5.2％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝555.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)9.51(t,J＝8.0Hz,1H),9.13-9.12(m,1H),8.92(d,J＝4.0Hz,1H),8.78-8.77(m,1H),7.98(s,1H),7.60(s,1H),7.10-7.08(m,1H),7.05(s,1H),7.02(s,1H),4.74–4.70(m,1H),4.08(s,3H),4.07-4.05(m,2H),3.98-3.95(m,2H),3.89(s,3H),3.05-3.00(m,2H),2.31(s,3H),2.19(s,3H),2.03(s,3H),0.83(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例37、化合物37
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(100mg,0.22mmol),6-甲基吡嗪-2-羧酸(45.6mg,0.33mmol),EDCI(63.3mg,0.33mmol),HOBT(44.6mg,0.33mmol)和DMF(2mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(29.3mg,15.6％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝569.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)9.17(s,1H),8.97(s,1H),8.59(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,2H),6.70(s,1H),6.60(s,1H),5.31(s,1H),5.08-5.07(m,1H),4.23–4.17(m,2H),3.92(s,3H),3.92-3.85(m,2H),3.72(s,3H),2.94-2.91(m,2H),2.68(s,3H),2.34(s,3H),2.25(s,3H),2.12(s,3H),1.11(d,J＝8.0Hz,3H)。
实施例38、化合物38
室温下，向25mL单口瓶中加入2-((1-氨基丙-2-基)(甲三甲基)氨基)-9,10-二甲氧基-6,7-二氢-4H-嘧啶并[6,1-a]异喹啉-4-酮(150mg,0.33mmol),5-甲基吡嗪-2-羧酸(69.1mg,0.50mmol),EDCI(95.8mg,0.50mmol),HOBT(67.6mg,0.50mmol)和DMF(3mL)搅拌，室温下搅拌24h。反应完毕，反应体系过滤，过反相Flash纯化(流动相A：0.5％FA水溶液，流动相B：乙腈；流速：40mL/min；梯度：20分钟内从0％B到55％B；50％B出产品，波长：254nm/220nm；)得产物(50.2mg,26.8％)。
LC-MS(ESI):[M+H]+＝569.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)9.23(s,1H),8.48(s,1H),8.59(s,1H),7.00(d,J＝12.0Hz,2H),6.70(s,1H),6.60(s,1H),5.31(s,1H),4.98-4.93(m,1H),4.23–4.17(m,2H),3.92(s,3H),3.92-3.85(m,2H),3.72(s,3H),2.94-2.91(m,2H),2.65(s,3H),2.35(s,3H),2.25(s,3H),2.12(s,3H),1.14(d,J＝8.0Hz,3H)。
PDE酶活性抑制实验
用FP方法测试各实施例的化合物对PDE酶活性抑制实验，并采用CN100415743C的实施例1化合物RPL-554作为阳性对照。
在反应缓冲液(添加1mM DTT的1×IMAP Reaction Buffer containing 0.1％BSA)中制备PDE酶和Substrate(FAM-环磷酸腺苷/环磷酸腺苷)溶液。阳性对照品在PDE的起始浓度为1/10μM，3倍稀释，10+0dose。通过声学液体输送技术(Echo 655)将100％DMSO中的化合物0.05μL输送到384孔板(Corning4514)中，1000rpm离心1分钟；转移2.5μL PDE酶溶液到384反应板中并1000rpm离心1分钟，于25℃孵育10min；转移2.5μL Sub溶液到384反应板中，1000rpm离心1分钟，25℃孵育60min；转移15μL结合剂混合物到384反应板中并1000rpm离心1分钟，于25℃孵育60min；最后用BMG(PHERAstar FSX)读取FP信号。使用GraphPadPrism软件获得IC50值和非线性回归曲线拟合。
表3展示了对比例和实施例各化合物的酶活实验IC50值。IC50数值越小说明对不同PDE酶的半数抑制所需化合物的量越少，表明其抑制活性越强。
表3
结论：本发明的的化合物，对PDE3/4具有高效的抑制活性，优于现有技术，具有良好的开发前景。
以上所述仅是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (13)

1.一种具有结构式I的化合物或其药学上可接受的形式，所述药学上可接受的形式选自药学上可接受的盐或共晶、立体异构体、互变异构体、氘代物、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物：
其中：
R1、R2各自独立地选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和C3-6环烷基；所述直链烷基、支链烷基或环烷基任选进一步被0至4个选自D、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；
R3、R4、R5各自独立地选自H、卤素、CN、C1-6烷氧基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、和C3-6环烷基；所述烷氧基、直链烷基、支链烷基或环烷基任选进一步被0至4个选自D、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；
L选自和，n为0、1或2；k为0、1、2或3；所述L中的H任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；其中，R9、R10各自独立地选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基和COOCH3，且R9、R10不同时为H；所述杂芳基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；
R6选自其中，R11选自氨基、C1-6烷氧基、C3-12环烷基、C6-10芳基、C5-10杂环基，所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子，所述氨基、烷氧基、环烷基、芳基、杂芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代；
选择性地，R6与L形成
R7、R8各自独立地选自H、＝O、卤素、NH2、CN、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基和
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中：
R1、R2各自独立地选自CH3、CHF2、CD3或C3-6环烷基；
优选地，R1、R2分别为CD3；
优选地，R1、R2之一为CH3，另一为CHF2。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中：
R3、R4、R5各自独立地选自CH3、i-Pr、OMe、CD3或卤素；
优选地，R5为CH3，所述CH3任选进一步被0至3个D所取代；R3、R4相同，选自CH3、i-Pr、OMe或卤素。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中，L选自以下方案之一：
L为n为0或1，优选为0；
优选地，k为0、1或2；
优选地，R9、R10其中之一为H，另一选自H、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C6-10芳基、C5-10杂芳基和COOCH3；所述杂芳基含有1或2个杂原子N；所述L中的H任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、C1-4烷基、C1-4烷氧基的取代基所取代；
L为
L为n为0或1，k为1；
L为n为0或1，k为1；
L为n为2，k为2；
L为n为1，k为1或2；或者
L为n为2，k为2。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中，R6选自以下方案之一：
R6为其中，R11为氨基，所述氨基任选进一步被0、1或2个选自F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代；
R6为其中，R11为C6-10芳基或C5-10杂环基，所述杂环基含有1、2或3个杂原子N；所述芳基、杂芳基任选进一步被0、1、2或3个选自H、F、Cl、Br、I、OH、＝O、NH2、CN、COOH、CF3、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基的取代基所取代。
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中，R7为H或CH3，R8为H或F。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的形式，其中，所述化合物选自表1所示化合物中的一种或多种。
8.一种中间体化合物，其具有式II所示结构：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8如权利要求1-7任一项所定义；
L1选自R9、R10、n、k如权利要求1-7任一项所定义；R12、R13各自独立地为H、Boc、Cbz、SEM、Fmoc、Alloc、Pht、OTs、PMB、Bn、Trt；
优选地，所述中间体化合物为
R12、R13其中之一为H，另一为Boc、Cbz、SEM、Fmoc、Alloc、Pht、OTs、PMB、Bn、Trt。
9.一种制备权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式的方法，该方法包括：
对权利要求8所述的中间体化合物式II中所示的R12、R13端进行修饰反应，制备具有结构式I的化合物。
10.根据权利要求9所述的方法，该方法还包括制备权利要求8所述的中间体化合物的过程。
11.一种药物组合物，其包括：权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式，以及药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
12.权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式或权利要求11所述的药物组合物在制备用于抑制磷酸二酯酶的制剂中的应用。
13.权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的形式或权利要求11所述的药物组合物在制备用于治疗磷酸二酯酶相关疾病的药物中的应用；
优选地，其中所述磷酸二酯酶相关疾病包括呼吸道疾病如哮喘。
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