CN113999272A

CN113999272A - 香蜂草苷的制备方法及其应用

Info

Publication number: CN113999272A
Application number: CN202111274490.0A
Authority: CN
Inventors: 方斌; 林兴; 黄权芳; 熊钰华
Original assignee: Guangxi Medical University
Current assignee: Guangxi Medical University
Priority date: 2021-10-29
Filing date: 2021-10-29
Publication date: 2022-02-01

Abstract

本发明公开了一种香蜂草苷的制备方法及其应用。该方法包括以下步骤：1)取风轮菜药材，用9‑11倍体积量的水煎煮1.5‑2.5小时，煎煮1‑3次，浓缩提取液后加入95％乙醇搅拌，静置过夜，过滤后上大孔树脂，用6‑10倍柱体积的水洗柱，然后用50％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇后得到浸膏；2)取浸膏用硅胶柱色谱分离，氯仿‑甲醇梯度洗脱，依次使用Sephadex LH‑20层析柱、MCI大孔树脂进行2‑4次的分离纯化，即可。所述应用为香蜂草苷在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的用途；具体表现为对肝脏病理损伤有保护作用，能够减轻脂滴形成，缓解脂质的堆积。本发明为非酒精性脂肪肝病的治疗提供了结构明确和高效的新型化合物，开发了新的用药途径。

Description

香蜂草苷的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及植物提取物的医药用途，具体是一种香蜂草苷的制备方法及其应用。

背景技术

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease)是全球最常见的慢性肝脏疾病之一，是一种由多种因素引起的脂肪堆积性疾病。非酒精性脂肪肝病的发病机制极为复杂,仍处于假说阶段。目前，二次打击假说是当前被广泛接受的理论，第一次的打击是由脂质异常堆积造成，而第二次的打击主要是由于炎症反应、脂质过氧化应激引起的。

风轮菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)为风轮菜属植物风轮菜的干燥地上部分，主要含有化学成分黄酮类，三萜及其皂苷、挥发油、苯丙素、甾体等化合物，香蜂草苷(Didymin)属于其中的非挥发性物质。香蜂草苷是一种典型的膳食糖苷，广泛存在于柑橘类水果和风铃草中，除了风轮菜，还包括柑桔、佛手柑、橘子和牛至等，被认为是一种性价比较高的、安全有效的口服药物，不会对正常组织产生毒性。香蜂草苷具备抗氧化、抗肿瘤、抗炎、细胞保护和心血管保护特性等，已被证明是肺癌、乳腺癌和脑瘤等肿瘤，以及神经退行性疾病、失眠、心血管并发症等疾病的潜在治疗药物；而且，已有文献记载据其有保护肝脏的作用。但是，目前尚未发现香蜂草苷应用于治疗非酒精性脂肪肝病的报告。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种香蜂草苷的制备方法及其应用，提供了一种制备香蜂草苷的新方法，并提供了香蜂草苷新的医药用途。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种香蜂草苷的制备方法，包括以下步骤：

1)取风轮菜药材，用9-11倍体积量的水煎煮1.5-2.5小时，煎煮1-3次，浓缩提取液后加入95％乙醇搅拌，静置过夜，过滤后上大孔树脂，用6-10倍柱体积的水洗柱，然后用50％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇之后得到浸膏；

2)取浸膏用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，氯仿和甲醇的体积比变化为100:0-0:100，依次使用Sephadex LH-20层析柱、MCI大孔树脂进行2-4次的分离纯化，即可得到产品。

另一方面，本发明还提供了香蜂草苷在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的应用。

具体的，所述药物在治疗非酒精性脂肪肝病过程中的表现包括：

a、减轻肝脏损伤；

b、减少脂滴形成；

c、缓解脂质累积；

d、降低ALT、AST、TC、TG和LDL含量，提高HDL含量。

所述香蜂草苷在治疗非酒精性脂肪肝病时，可以单独使用，也可以与其他药物配合同时使用，或者与其他药物一起制成复方制剂使用。单独使用时，所述药物为包含有香蜂草苷及药学上可接受的辅料的药物。所述药学上可接受的辅料，是指制备不同剂型时加入所需的各种常规辅料，例如稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等。所述药物的剂型可以是颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂等。

本发明的有益效果是：

本发明提供了一种以风轮菜为原料、收率高和纯度高的香蜂草苷的制备方法，并通过进一步的实验明确其作用机制，提供了香蜂草苷在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的用途，为治疗非酒精性脂肪肝病的治疗提供了化学结构明确、高效的新型化合物，开发了新的治疗治疗非酒精性脂肪肝病的药物。

附图说明

图1为香蜂草苷对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织病理学的影响(油红O，200x)。

图中：A1为正常对照组，A2为模型组，A3为水飞蓟宾组，A4为香蜂草苷低剂量组，A5为香蜂草苷中剂量组，A6为香蜂草苷高剂量组。

具体实施方式

下面结合附图对本发明进行说明，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

一、香蜂草苷的制备

取风轮菜药材10kg，用10倍体积量的水煎煮2小时，重复一次，浓缩提取液后加入95％乙醇搅拌，静置过夜，过滤后上大孔树脂，用6-10倍柱体积水洗，50％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇之后得到浸膏。取浸膏用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，，氯仿和甲醇的体积比变化为100:0-0:100，依次使用Sephadex LH-20层析柱、MCI大孔树脂进行3次分离纯化，得到白色针晶化合物(50mg)。

将所得白色针晶化合物进行光谱检测，光谱检测数据为：

ESI-MS m/z：581[M+H]⁺。¹H-NMR(600MHZ,DMSO-d₆)δ：12.01(1H,s,5-OH),7.46(2H,d,J＝9.0Hz,H-2＇,6＇),6.98(2H,d,J＝9.0Hz,H-3＇,5＇),6.14(1H,d,J＝1.8Hz,H-8),6.13(1H,d,J＝1.8Hz,H-6),5.57(1H,dd,J＝12.6,2.4Hz,H-2),3.10(1H,dd,J＝17.4,12.6Hz,H-3b),2.78(1H,dd,17.4,2.4Hz,H-3a),3.77(3H,s,OMe),4.98(1H,t,J＝7.8Hz,H-1″),4.52(1H,br s,H-1″),1.09(3H,m,rha-Me)。¹³C-NMR(125MHz,DMSO-d₆)δ:78.3(C-2)、41.8(C-3)、197.01(C-4)、163.0(C-5)、96.4(C-6)、165.1(C-7)、95.4(C-8)、162.5(C-9)、103.3(C-10)、130.4(C-1＇)、128.3(C-2＇)、113.9(C-3＇)、159.4(C-4＇)、113.9(C-5＇)、128.3(C-6＇)、55.2(OMe)、100.6(C-1″)、72.9(C-2″)、75.5(C-3″)、70.7(C-4″)、76.2(C-5″)、66.0(C-6″)、99.3(C-1″″)、69.6(C-2″″)、70.2(C-3″″)、68.3(C-5″″)、17.8(C-6″″)。以上数据表明该化合物为香蜂草苷。

二、香蜂草苷对非酒精性脂肪肝的保护作用

1.动物模型的制备、分组和处理

大鼠模型:76只雄性SPF级大鼠(120±20g)，适应性喂养1周后，随机分为2组，Ⅰ组14只和Ⅱ组62只，Ⅰ组大鼠给予基础饲料喂养，Ⅱ组给予高脂饲料喂养以制备非酒精性脂肪肝病模型，喂养8周。第8周末，随机从Ⅰ组和Ⅱ组中各随机选择2只用作油红O病理染色，观察是否造模成功。确定造模成功后，将Ⅰ组大鼠12只分成正常组，Ⅱ组大鼠60只分成模型组、阳性对照组(水飞蓟宾组)、香蜂草苷治疗组(低、中、高剂量组)。从造模成功开始给药，除正常组给以基础饮食外，其余对照组继续高脂饮食防止逆转，持续8周后，处死大鼠，取血，4000r/min离心5min后，收集血清；取出肝脏，清洗干净。血清及肝组织均贮存在-80℃冰箱待用。

2.检测指标

①油红染色观察脂滴形成情况；

②检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平。

3.实验结果

(1)香蜂草苷减轻肝脏病理学改变

结果如图1所示，正常组大鼠肝脏病理只有少量红色脂滴形成，而模型组大鼠肝脏细胞内出现了大量的红色脂滴，这说明模型组大鼠肝脏中脂质水平明显高于正常对照组。经过给予香蜂草苷治疗干预后，各给药组肝细胞内脂滴形成明显减少，脂质水平明显降低。

(2)香蜂草苷明显降低ALT、AST、TC、TG和LDL含量，提高HDL含量

实验结果显示，与正常组相比，模型组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG和LDL含量显著降低，而HDL的含量降高(P<0.05)。香蜂草苷干预后能显著减轻高脂饲料刺激引起的ALT、AST、TC、TG和LDL含量异常升高，并改善HDL的异常降低。结果见表1。

表1香蜂草苷对非酒精性脂肪肝大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL和HDL含量的影响

注：与正常对照组相比，^#P<0.05；与模型对照组比较，^*P<0.05。

4.结论

香蜂草苷能够显著改善高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝，减轻肝脏损伤，减少脂滴的形成，缓解脂质的累积，对非酒精性脂肪肝有明显的保护作用。

Claims

1.香蜂草苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.香蜂草苷在制备治疗非酒精性脂肪肝病的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物在治疗非酒精性脂肪肝病过程中的表现包括：

a、减轻肝脏损伤；

b、减少脂滴形成；

c、缓解脂质累积；

d、降低ALT、AST、TC、TG和LDL含量，提高HDL含量。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述药物为包含有香蜂草苷及药学上可接受的辅料的药物。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述药物的剂型包括颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液或注射剂。