CN113754625B - 倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113754625B CN113754625B CN202010483912.4A CN202010483912A CN113754625B CN 113754625 B CN113754625 B CN 113754625B CN 202010483912 A CN202010483912 A CN 202010483912A CN 113754625 B CN113754625 B CN 113754625B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mixed solvent
- sesquiterpene
- coumarin
- methanol
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 title claims abstract description 100
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 93
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 title claims abstract description 55
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 title claims abstract description 48
- -1 Sesquiterpene coumarin compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims abstract description 5
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 claims description 102
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 99
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 65
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 19
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 16
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- AFYCEAFSNDLKSX-UHFFFAOYSA-N coumarin 460 Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C21 AFYCEAFSNDLKSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethyl acetate Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCOC(C)=O SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.ClC(Cl)Cl OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FDSGHYHRLSWSLQ-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;propan-2-one Chemical compound ClCCl.CC(C)=O FDSGHYHRLSWSLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 2
- KFEMFNPVIAXCGO-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methane;propan-2-one Chemical compound C.ClCCl.CC(C)=O KFEMFNPVIAXCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 38
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 68
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 51
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 39
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 18
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 10
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 10
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 10
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 9
- 125000000332 coumarinyl group Chemical group O1C(=O)C(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 9
- 125000005704 oxymethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])O[*:1] 0.000 description 9
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 4-methylumbelliferone Chemical compound C1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZXGMMHMAGOAFGQ-UHFFFAOYSA-N 6-methyl-3-oxa-13-azatetracyclo[7.7.1.02,7.013,17]heptadeca-1(17),2(7),8-trien-4-one Chemical compound C1CCN2CCCC3=C2C1=C1OC(=O)CC(C)C1=C3 ZXGMMHMAGOAFGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 7
- VBVAVBCYMYWNOU-UHFFFAOYSA-N coumarin 6 Chemical compound C1=CC=C2SC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 VBVAVBCYMYWNOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 7
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 7
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- QZXAEJGHNXJTSE-UHFFFAOYSA-N 7-(ethylamino)-4,6-dimethylchromen-2-one Chemical compound O1C(=O)C=C(C)C2=C1C=C(NCC)C(C)=C2 QZXAEJGHNXJTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 5
- 238000013332 literature search Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 235000007162 Ferula assa foetida Nutrition 0.000 description 4
- 244000228957 Ferula foetida Species 0.000 description 4
- 235000012850 Ferula foetida Nutrition 0.000 description 4
- 235000019507 asafoetida Nutrition 0.000 description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 4
- FHYNZKLNCPUNEU-UHFFFAOYSA-N 4-[(3,4-dihydroxyphenyl)methyl]-3-[(4-hydroxyphenyl)methyl]oxolan-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1C(=O)OCC1CC1=CC=C(O)C(O)=C1 FHYNZKLNCPUNEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OBOXTJCIIVUZEN-UHFFFAOYSA-N [C].[O] Chemical group [C].[O] OBOXTJCIIVUZEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 3
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical group [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- WSNKEJIFARPOSQ-UHFFFAOYSA-N 3-[4-(aminomethyl)-6-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy-N-(1-benzothiophen-2-ylmethyl)benzamide Chemical compound NCC1=CC(=NC(=C1)C(F)(F)F)OC=1C=C(C(=O)NCC2=CC3=C(S2)C=CC=C3)C=CC=1 WSNKEJIFARPOSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZSAMHOCTRNOIZ-UHFFFAOYSA-N 3-[4-(aminomethyl)-6-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy-N-phenylaniline Chemical compound NCC1=CC(=NC(=C1)C(F)(F)F)OC=1C=C(NC2=CC=CC=C2)C=CC=1 MZSAMHOCTRNOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- LVZWSLJZHVFIQJ-UHFFFAOYSA-N Cyclopropane Chemical compound C1CC1 LVZWSLJZHVFIQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000510609 Ferula Species 0.000 description 1
- 241000134102 Ferula fukanensis Species 0.000 description 1
- 241000134109 Ferula sinkiangensis Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000001295 Levene's test Methods 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000004378 air conditioning Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003215 anti-neuroinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002113 chemopreventative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012627 chemopreventive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124443 chemopreventive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006720 chronic neuroinflammation Effects 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- UBXIYMICGONZBE-UHFFFAOYSA-N fekrynol Natural products CC1CCC(=C(C)C)C(CCCO)C1(C)COc2ccc3C=CC(=O)Oc3c2 UBXIYMICGONZBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000003592 new natural product Substances 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002436 one-dimensional nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- XKZKQTCECFWKBN-UHFFFAOYSA-N trans-4-decenoic acid Natural products CCCCCC=CCCC(O)=O XKZKQTCECFWKBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
- C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
- C07D311/16—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 7
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
- C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
- C07D407/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明属于医药技术领域，涉及倍半萜香豆素类化合物制备方法和用途，具体涉及所述的倍半萜香豆素类化合物结构及其制备方法和在制备预防和治疗神经退行性疾病药物领域中的应用，所述化合物的结构通式如下，其中R1–R7如权利要求和说明书所述。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
阿魏是伞形科(Umbelliferae)阿魏属(Ferula)植物新疆阿魏(Ferulasinkiangensis K.M.Shen)或阜康阿魏的(Ferula fukanensis K.M.Shen)的树脂。阿魏属植物在全球有150余种，主要分布在欧洲南部地中海地区和非洲北部，伊朗、阿富汗、苏联的中亚部分和西伯利亚地区以及印度、巴基斯坦等地也有分布。国产阿魏主要分布于新疆地区。
阿魏具有消积，化癥，散痞，杀虫的功效，用于治疗肉食积滞，瘀血癥瘕，腹中痞块，虫积腹痛。临床上，含阿魏的复方多用来治疗一些与肠胃相关的疾病：如阿魏丸，用来治疗肉积；阿魏良姜丸久服用于治疗中焦积寒、翻胃吐食、饮食减少；阿魏理中丸用于治疗一切冷气攻刺疼痛，心腹胀满，胃冷吐逆，脐腹撮痛。现代药理学研究表明，阿魏具有抗肿瘤、抗炎等广泛的药理活性。据文献报道，其具有香豆素类、倍半萜类、含硫化合物以及芳香族类等多种化学成分，其中倍半萜香豆素类化合物是其特征性成分。
发明内容
本发明的目的在于提供一系列倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和医药用途。
本发明所提供的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐、异构体，其具有以下结构通式：
其中，
R1为氢，羟基，C1-C4酰氧基，片段A或片段B；
R2为氢或羟基；
R3为羟基，C1-C4酰氧基或片段B；
R4为氢、C1-C4烷基或羟基；
R5为氢、C1-C4烷基或羟基；
R6为氢或羟基；
R7为氢或羟基。
本发明优选如下结构的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐、异构体，
其中，
R1为氢，羟基，乙酰氧基，丙酰氧基，片段A或片段B；
R2为氢或羟基；
R3为羟基，乙酰氧基，丙酰氧基或片段B；
R4为氢、甲基或羟基；
R5为氢、甲基或羟基；
R6为氢或羟基；
R7为氢或羟基。
本发明具体公开了如下十个具体化合物：
本发明还提供了所述倍半萜香豆素类化合物1～10的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)阿魏用甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等溶剂进行提取，回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得粗提物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚-丙酮混合溶剂，或二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂，或二氯甲烷-丙酮混合溶剂，或氯仿-乙酸乙酯混合溶剂，或氯仿-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，得到不同极性的洗脱物；
(3)上述步骤(2)所得不同极性洗脱物，经ODS柱色谱，以甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂为流动相梯度洗脱；
(4)上述步骤(3)所得甲醇-水或乙腈-水洗脱物经HPLC进一步分离，以甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂为流动相梯度洗脱，得到倍半萜香豆素1～10。
本发明提供的所述倍半萜香豆素类化合物1～10的制备方法，步骤(1)中所述的提取方法为加热回流提取或加热超声提取2～5次。所用甲醇的体积浓度为60％～100％，优选80％～90％。所用乙醇的体积浓度为60％～100％，优选80％～95％。料液比为1:5～1:30g/mL，优选1:10～1:15。
本发明提供的所述倍半萜香豆素类化合物1～10的制备方法，步骤(2)中所述的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚-丙酮混合溶剂的体积比例为100:0～0:1，优选100:5～2:1；二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂，或二氯甲烷-丙酮混合溶剂，或氯仿-乙酸乙酯混合溶剂，或氯仿-丙酮混合溶剂的体积比例为100:0～1:1，优选100:2～5:1。
本发明提供的所述倍半萜香豆素类化合物1～10的制备方法，步骤(3)中所述甲醇-水混合溶剂的体积比例为50:50～100:0，优选60:40～90:10；乙腈-水混合溶剂的体积比例为30:70～90:10，优选40:60～80:20。
本发明提供的所述倍半萜香豆素类化合物1～10的制备方法，步骤(4)中所述甲醇-水混合溶剂的体积比例为60:40～90:10，优选70:30～90:10；乙腈-水混合溶剂的体积比例为50:50～80:20，优选60:40～80:20。
本发明以体外BV-2细胞为模型进行了抗炎活性测试，对制备得到的倍半萜香豆素类化合物1～10的神经炎症抑制活性进行了评价。结果显示，这些倍半萜香豆素类化合物具有显著的抗神经炎症活性，可用于开发神经炎症化学预防剂或治疗药物。
本发明首次提供了以阿魏为原料，制备、鉴定10个倍半萜香豆素的方法，并且系统评价了其抗神经炎症的活性，阐述了其在开发神经炎症相关的化学预防、治疗药物方面的应用。
具体实施方式
下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此限制本发明。
实施例1
(1)阿魏1000g用95％乙醇加热回流提取3次(用量为10L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得95％乙醇粗提物经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:5，10:1，2:1，0:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:0，100:1，100:2，100:3，100:5，100:8，10:1，8:1，6:1，4:1，2:1，1:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚：乙酸乙酯100:5～2:1流分经ODS色谱，用50:50，60:40，70:30，80:20，90:10甲醇-水的混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝90:10，得到倍半萜香豆素3(tR＝102min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素4(tR＝80min)(收率为0.0031％)，倍半萜香豆素5(tR＝9min)(收率为0.0010％)，倍半萜香豆素6(tR＝24min)(收率为0.0010％)，得到倍半萜香豆素7(tR＝69min)(收率为0.0016％)，倍半萜香豆素9(tR＝13min)(收率为0.0004％)。
(6)上述步骤(4)中所得甲醇-水90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝82:18，得到倍半萜香豆素2(tR＝23min)(收率为0.0002％)。
(7)上述步骤(4)中所得甲醇-水90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝79:21，得到倍半萜香豆素1(tR＝44min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素10(tR＝39min)(收率为0.0012％)。
(8)上述步骤(4)中所得甲醇-水60:40～70:30流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝70:30，得到倍半萜香豆素8(tR＝24min)(收率为0.0005％)。
根据化合物1～10的理化性质和波谱数据鉴定了其结构。
倍半萜香豆素1的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 449.2307[M+Na]+:(calcd.449.2304 for C26H34O5Na)，推测其分子式为C26H34O5，不饱和度为10。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中低场区给出了7-O-取代的香豆素母核特征氢信号：7.63(1H,d,J＝9.4Hz,H-4),7.37(1H,d,J＝8.5Hz,H-5),6.86(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz,H-6),6.83(1H,d,J＝2.2Hz,H-8)和δH 6.25(1H,d,J＝9.4Hz,H-3)；高场区给出了5个甲基氢信号：δH 2.04(3H,s,Me-2”),1.79(3H,s,Me-11'),1.68(3H,s,Me-15'),1.66(3H,s,Me-14')和0.97(3H,d,J＝6.9Hz,Me-12')。此外，氢谱中还观察到一个烯氢信号：δH 5.49(1H,t,J＝6.5Hz,H-2')；两组连氧亚甲基信号：δH 4.60(2H,d,J＝6.5Hz,H-1')和4.06(2H,m,H-10')。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱中共给出26个信号，除了9个7-O-取代的香豆素母核特征碳信号：δC 162.3(C-7),161.5(C-2),156.0(C-9),143.6(C-4),128.8(C-5),113.4(C-6),113.1(C-3),112.6(C-10)和101.7(C-8)；一组乙酰基碳信号：δC 171.4(C-1″),21.2(C-2″)，仍然存在15个碳信号，为倍半萜骨架碳信号，其中包含两组烯碳信号：δC 143.2(C-3′),118.0(C-2′),和δC 134.9(C-6′),126.2(C-13′)；2个连氧碳信号：δC 65.6(C-1'),65.0(C-10')。结合氢谱、碳谱数据，推测该化合物可能为倍半萜香豆素。由于该化合物结构中1个香豆素单元(7个不饱和度)、1个羰基和两个烯烃键构成了化合物的10个不饱和度，所以推测化合物的倍半萜部分是一个链状结构。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和2)。
1H-1H COSY显示该化合物存在3个自旋耦合系统，分别是H2-1′/H-2′,H2-4′/H2-5′,和H3-12′/H-7′/H2-8′/H2-9′/H2-10′，提示C-1′/C-2′,C-4′/C-5′,和C-7′(C-′12′)/C-8′/C-9′/C-10′三个片段的存在。HMBC谱中，δH 4.60(H2-1′)与δC 118.0(C-2′),143.2(C-3′)相关，δH 5.49(H-2′)与δC 143.2(C-3′),40.2(C-4′),17.0(C-11′)相关，δH 2.08(Ha-5′)和2.02(Hb-5′)与δC 143.2(C-3′),134.9(C-6′),35.6(C-7′),126.2(C-13′)相关，δH 1.34(H2-8′)与δC 134.9(C-6′)相关，δH 1.66(H3-14′)和1.68(H3-15′)与δC 126.2(C-13′),134.9(C-6′)相关。综合以上HMBC相关信号，建立了倍半萜单元的平面结构。此外，δH 4.06(H2-10′)与δC 171.4(C-1″)相关，提示乙酰基连接在C-10′位。δH 4.60(H2-1′)与δC 162.3(C-7)远程相关，提示倍半萜片段连接在香豆素母核的C-7位。NOESY谱中，H3-14′与H-7′相关，提示Me-14′与H-7′在同侧；H3-15′与Ha,b-5′相关，提示Me-15′与Ha,b-5′在同侧。通过比较实测电子圆二色性光谱(ECD)和计算ECD数据，确定了化合物1的绝对构型。经文献检索为一未见报道的新化合物，命名为(7R)-ferusingensine A。
倍半萜香豆素2的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 407.2200[M+Na]+:(calcd.407.2198for C24H32O4Na)，推测其分子式为C24H32O4。其氢谱、碳谱数据与化合物1相似，区别在于C-10′上的取代基不同，结合数据推测化合物1的-OAc可能替换成了-OH。1HNMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区给出了5个7-O-取代的香豆素母核特征质子信号：δH 7.64(1H,d,J＝9.5Hz,H-4),7.37(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.86(1H,dd,J＝8.6,2.4Hz,H-6),6.83(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),6.25(1H,d,J＝9.5Hz,H-3)；高场区提供了4个甲基氢信号：δH 1.79(3H,s,Me-11'),1.68(3H,s,Me-15'),1.66(3H,s,Me-14')和0.97(3H,d,J＝6.9Hz,Me-12')。从外，氢谱中还有一个双键氢信号：δH 5.49(1H,t,J＝6.5Hz,H-2')；两组连氧亚甲基信号：δH 4.60(2H,d,J＝6.5Hz,H-1')和δH 3.61(2H,t,J＝6.6Hz,H-10')。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱中共有24个信号，低场区给出9个7-O-取代的香豆素母核特征碳信号：δC 162.3(C-7),161.5(C-2),156.0(C-9),143.6(C-4),128.8(C-5),113.4(C-6),113.1(C-3),112.6(C-10)和101.7(C-8),剩余15个碳信号为倍半萜骨架碳信号，其中包含两组双键碳信号：δC143.3(C-3′),118.0(C-2′)和δC 135.1(C-6′),125.9(C-13′)；2个连氧碳信号：δC 65.7(C-1'),63.5(C-10')。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和2)。
HMBC谱中，δH 4.60(H2-1′)与δC 118.0(C-2′),143.3(C-3′)相关，δH 5.49(H-2′)与δC 143.3(C-3′),40.2(C-4′),17.0(C-11′)相关，δH 2.08(Ha-5′)和2.02(Hb-5′)与δC143.3(C-3′),135.1(C-6′),35.7(C-7′),125.9(C-13′)相关，δH 1.34(H2-8′)与δC 135.1(C-6′)相关，δH 1.66(H3-14′)和1.68(H3-15′)与δC 125.9(C-13′),135.1(C-6′)相关。综合以上HMBC相关信号，确定了倍半萜部分的平面结构。由δH 4.60(H2-1′)与δC162.3(C-7)远程相关，确定倍半萜片段通过醚键与香豆素母核的C-7位相连接。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物2的绝对构型。经文献检索为一未见报道的新化合物，命名为(7R)-ferusingensine B。
倍半萜香豆素3的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 573.3553[M+Na]+:(calcd.573.3556for C35H50O5Na)，推测其分子式为C35H50O5。其氢谱、碳谱数据与化合物1相似，区别在于C-10′上的取代基不同。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区提示7-O-取代的香豆素母核的5个特征质子信号：δH 7.64(1H,d,J＝9.4Hz,H-4),7.36(1H,d,J＝8.5Hz,H-5),6.86(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz,H-6),6.83(1H,d,J＝2.2Hz,H-8)和6.25(1H,d,J＝9.4Hz,H-3)；高场区提供5个甲基氢信号δH 1.79(3H,s,Me-11'),1.68(3H,s,Me-15'),1.66(3H,s,Me-14'),0.97(3H,d,J＝6.8Hz,Me-12')和0.87(3H,t,J＝6.8Hz,Me-10”)。此外，氢谱中还有一个双键氢信号δH 5.49(1H,t,J＝6.5Hz,H-2'),两组连氧亚甲基信号δH 4.60(2H,d,J＝6.5Hz,H-1')和4.05(2H,t,J＝6.7Hz,H-10')。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱中共给出35个信号，低场区给出9个7-O-取代的香豆素母核特征碳信号：δC 162.3(C-7),161.4(C-2),156.1(C-9),143.6(C-4),128.8(C-5),113.4(C-6),113.2(C-3),112.6(C-10)和101.7(C-8)。剩余26个碳信号，通过与化合物1碳谱数据作比对，15个碳信号推测为倍半萜单元碳信号，其中包含两组双键碳信号：δC 143.2(C-3′),118.1(C-2′),和δC 135.0(C-6′),126.1(C-13′)；2个连氧碳信号：δC 65.7(C-1'),64.8(C-10')。剩余11个碳信号为C-10′位取代基碳信号。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和2)。
1H-1H COSY谱中，给出C-10′位取代基的自旋耦合系统：H-2″/H-3″(H-11″)/H-4″/H-5″/H-6″/H-7″/H-8″/H-9″/H-10″。HMBC谱中，δH 0.70(Ha-11″)和-0.15(Hb-11″)与δC34.2(C-2″),11.7(C-3″),15.7(C-4″),29.0(C-5″)信号相关，提示环丙烷片段的存在。此外，由δH 0.87(H-10″)与δC 22.8(C-9″),32.0(C-8″)相关，δH 1.30(H-7″)与δC 32.0(C-8″)相关，δH 1.37(Ha-6″)和1.26(Hb-6″)与δC 29.4(C-7″)相关，δH 1.36(Ha-5″)和1.16(Hb-5″)与δC 11.7(C-3″),15.7(C-4″),30.0(C-6″)相关，以及δH 2.35(Ha-2″)和2.24(Hb-2″)与δC174.0(C-1″),11.7(C-3″),15.7(C-4″)相关，确定了C-10′位取代基的平面构型。根据1HNMR谱中高场区信号δH 0.79(1H,m,H-4”),0.70(1H,dt,J＝8.4,4.7Hz,Ha-11”),-0.15(1H,q,J＝4.7Hz,Hb-11”)确定了环丙烷的相对构型；通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物3的绝对构型。经文献检索为一未见报道的新化合物，命名为(7'S,3”R,4”R)-ferusingensine C。
倍半萜香豆素4的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 559.3396[M+Na]+:(calcd.559.3399for C34H48O5Na)，推测其分子式为C34H48O5，氢谱和碳谱数据与化合物1相似，区别在于C-10′位上的取代基不同。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区给出7-O-取代的香豆素母核的5个特征质子信号：δH 7.63(1H,d,J＝9.5Hz,H-4),7.36(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.86(1H,dd,J＝8.6,2.2Hz,H-6),6.82(1H,d,J＝2.2Hz,H-8)和6.24(1H,d,J＝9.5Hz,H-3)；高场区提供5个甲基质子信号：δH 1.79(3H,s,Me-11'),1.68(3H,s,Me-15'),1.65(3H,s,Me-14'),0.96(3H,d,J＝6.8Hz,Me-12')和0.87(3H,t,J＝6.6Hz,Me-10”)。此外，氢谱中还有3个双键氢信号：δH 5.49(1H,t,J＝6.5Hz,H-2'),5.40(1H,m,H-5”)和5.31(1H,m,H-4”)；两组连氧亚甲基氢信号：δH4.59(2H,d,J＝6.5Hz,H-1')和4.02(2H,t,J＝6.7Hz,H-10')。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱中共给出34个信号，低场区给出9个7-O-取代的香豆素母核特征碳信号：δC 162.3(C-7),161.4(C-2),156.0(C-9),143.6(C-4),128.8(C-5),113.3(C-6),113.1(C-3),112.6(C-10),101.7(C-8)。通过与化合物1碳谱数据作比对，15个碳信号推测为倍半萜单元碳信号，其中包含两组双键碳信号：δC 143.2(C-3'),118.1(C-2')和δC135.0(C-6'),126.1(C-13')；2个连氧碳信号：δC 65.6(C-1'),64.8(C-10')。剩余10个碳信号为C-10′位取代基碳信号，包含一组双键碳信号：δC 131.7(C-5'),127.5(C-4')。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和2)。
1H-1H COSY谱中，给出C-10′位上取代基的1个自旋耦合系统H-3″/H-4″/H-5″/H-6″/H-7″/H-8″/H-9″/H-10″，提示烯酸酯片段的存在。结合HMBC谱中的信号，δH 2.35(Ha-2″)和2.27(Hb-2″)与δC 173.5(C-1″),22.7(C-3″)相关，δH 2.33(H-3″)与δC 127.5(C-4″),131.7(C-5″)相关，δH 2.04(H-6″)与δC 127.5(C-4″),131.7(C-5″),29.4(C-7″),31.6(C-8″)相关，以及δH 0.87(H-10″)与δC 23.0(C-9″),31.6(C-8″)相关，确定了C-10′位上取代基4-癸烯酸酯的平面结构。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物4的绝对构型。经文献检索为一未见报道的新化合物，命名为(7R)-ferusingensine D。
倍半萜香豆素5的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 405.2045[M+Na]+:(calcd.405.2042 for C24H30O4Na)，推测其分子式为C24H30O4，含有10个不饱和度。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH 7.63(1H,d,J＝9.5Hz,H-4),7.36(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.85(1H,dd,J＝8.6,2.3Hz,H-6),6.82(1H,d,J＝2.3Hz,H-8)和6.24(1H,d,J＝9.5Hz,H-3)；高场区给出4组甲基质子信号：δH1.76(3H,s,Me-13'),1.60(3H,s,Me-14'),1.08(3H,d,J＝6.9Hz,Me-15')和1.08(3H,d,J＝6.9Hz,Me-12')。此外，氢谱中还有2个双键质子信号：δH 5.46(1H,t,J＝6.5Hz,H-2′)和5.09(1H,t,J＝6.9Hz,H-6′)；以及1组连氧亚甲基质子信号：δH 4.60(2H,d,J＝6.5Hz,H-1′)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有24个碳信号，低场区给出9个7-O-取代的香豆素母核碳信号：δC 162.3(C-7),161.5(C-2),156.0(C-9),143.6(C-4),128.8(C-5),113.4(C-6),113.1(C-3),112.6(C-10),101.7(C-8)。剩余15个碳信号为倍半萜单元的碳信号，包含2组双键碳信号：δC 142.3(C-3'),118.7(C-2')和δC 134.6(C-7'),124.1(C-6')；1个羰基碳信号：δC 214.6(C-10')；1个连氧碳信号：δC 65.6(C-1')。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和2)。
1H-1H COSY谱，给出倍半萜片段的4个偶合系统：H-1′/H-2′,H-4′/H-5′/H-6′,H-8′/H-9′,和H-13′/H-11′/H-14′。HMBC谱中，δH 2.09(H2-4′)与δC 118.7(C-2′),142.3(C-3′),26.3(C-5′),124.1(C-6′)相关，δH 2.22(H2-8′)与δC 124.1(C-6′),134.6(C-7′),39.2(C-9′),214.6(C-10′)相关，δH 1.08(H3-12′)和1.08(H3-15′)与δC 41.0(C-11′),214.6(C-10′)相关，确定了倍半萜片段的平面结构。δH 4.60(H2-1′)与δC 162.3(C-7)相关，提示倍半萜单元通过醚键与香豆素母核的C-7位相连。经文献检索为一新天然产物，命名为ferusingensine E。
倍半萜香豆素6的结构鉴定数据如下：
白色针晶(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 463.2459[M+Na]+:(calcd.463.2460for C27H36O5Na)，推测其分子式为C27H36O5，提示结构中存在10个不饱和度。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH 7.63(1H,d,J＝9.4Hz,H-4),7.34(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.81(1H,dd,J＝8.6,2.3Hz,H-6),6.75(1H,d,J＝2.3Hz,H-8)和6.23(1H,d,J＝9.4Hz,H-3)；2组连氧亚甲基质子信号：δH 4.06(2H,m,H-3′),3.88(1H,d,J＝8.3Hz,Ha-11′)和3.69(1H,d,J＝8.3Hz,Hb-11′)。高场区给出5个甲基质子信号：δH 1.62(3H,s,Me-14′),1.45(3H,d,J＝1.7Hz,Me-13′),1.16(1H,t,J＝7.6Hz,Me-3″),1.12(3H,s,Me-15′)和0.91(3H,d,J＝7.0Hz,Me-12′)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有27个碳信号，9个为7-O-取代的香豆素母核特征碳信号δC 163.1(C-7),161.5(C-2),156.1(C-9),143.7(C-4),128.7(C-5),113.3(C-6),112.9(C-3),112.4(C-10),101.3(C-8)。15个为倍半萜单元的碳信号，包含1组双键碳信号：δC 130.3(C-5'),125.4(C-4')；2个连氧碳信号：δC 71.8(C-11'),65.0(C-3')。3个为丙酰基信号：δC 174.8(C-1”),27.8(C-2”)和9.4(C-3”)。由于香豆素母核、1个羰基和1个双键共提供9个不饱和度，所以推测化合物的倍半萜部分是一个单环结构。之后，根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和3)。
HMBC谱中，δH 1.45(H3-13')和1.62(H3-14')与δC 125.4(C-4′),130.3(C-5′)相关，与δC 65.0(C-3′)无关，提示倍半萜单元的A环开裂。δH 0.91(H3-12')与δC 32.2(C-7′),35.0(C-8′),40.9(C-9′)相关，提示Me-12'连接在C-8'位；δH 1.12(H3-15')与δC 35.0(C-8′),40.9(C-9′),43.1(C-10′),71.8(C-11′)相关，提示Me-15'连接在C-9'位；δH 1.16(H3-3”)与δC 27.8(C-2″),174.8(C-1″)相关，δH 4.06(H-3')与δC 174.8(C-1″)相关，提示丙酰基连接在C-3'位。此外，δH 3.88(Ha-11′)和3.69(Hb-11′)与δC 163.1(C-7)的远程相关提示倍半萜片段通过醚键连接在香豆素母核的C-7位。
NOESY谱中，H3-12′与Hb-11′相关,H-10′与Ha-11′相关,H3-15′与H2-1′相关，提示Me-12′和Ha,b-11′为β-取向，H-1′和Me-15′为α-取向，推测手性中心的相对构型为8'S*,9'S*,10'S*。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物6的绝对构型为8'S,9'S,10'S。经检索为一未见文献报道的新化合物，命名为(8'S,9'S,10'S)-propionyl fekrynol。
倍半萜香豆素7的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 559.3387[M+Na]+:(calcd.559.3399 for C34H48O5Na)，推测其分子式为C34H48O5，氢谱和碳谱数据与化合物6相似，区别在于C-3′位上的取代基不同。通过比较化合物7与化合物4的1D NMR谱数据(见表1-3)，发现化合物7的C-3′位上取代基与化合物4的C-10′位的取代基的氢谱碳谱数据相同。1HNMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH7.62(1H,d,J＝9.5Hz,H-4),7.34(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.81(1H,dd,J＝8.6,2.2Hz,H-6),6.75(1H,d,J＝2.2Hz,H-8)和6.22(1H,d,J＝9.5Hz,H-3)；1组烯氢信号：δH 5.42(1H,m,H-5″)和δH 5.34(1H,m,H-4″)；2组连氧亚甲基质子信号：δH 4.06(2H,m,H-3′),3.88(1H,d,J＝8.3Hz,Ha-11′)和3.69(1H,d,J＝8.3Hz,Hb-11′)。高场区给出5个甲基质子信号：δH 1.62(3H,s,Me-14′),1.45(3H,d,J＝1.5Hz,Me-13′),1.11(3H,s,Me-15′),0.90(3H,d,J＝7.0Hz,Me-12′)和0.88(1H,t,J＝7.1Hz,Me-10″)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有34个碳信号，9个为7-O-取代的香豆素母核特征碳信号δC 163.1(C-7),161.4(C-2),156.1(C-9),143.6(C-4),128.7(C-5),113.3(C-6),112.9(C-3),112.4(C-10),101.3(C-8)。15个为倍半萜单元的碳信号，包含1组双键碳信号：δC 130.3(C-5'),125.3(C-4')；2个连氧碳信号：δC71.9(C-11'),65.1(C-3')。10个为癸烯酸酯片段：包含1组双键碳信号：δC 131.7(C-5”),127.5(C-4”)。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和3)。
HMBC谱中，δH 4.06(H-3')与δC 173.5(C-1″)相关，提示癸烯酸酯片段连接在倍半萜单元的C-3'位。δH 3.88(Ha-11′)和3.69(Hb-11′)与δC 163.1(C-7)的远程相关提示倍半萜片段通过醚键与香豆素母核的C-7位相连接。NOESY谱中，H3-12′与Hb-11′相关,H-8′与H3-15′相关,H3-15′与Ha,b-1′相关，提示Me-12′和Ha,b-11′为β-取向，Ha,b-1′和Me-15′为α-取向，推测手性中心的相对构型为8'S*,9'S*,10'S*。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物7的绝对构型为8'S,9'S,10'S。经检索为一未见文献报道的新化合物，命名为(8'S,9'S,10'S)-ferusingensine F。
倍半萜香豆素8的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 419.1832[M+Na]+:(calcd.419.1834 for C24H28O5Na)，推测其分子式为C24H28O5，提示结构中存在11个不饱和度。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH 7.64(1H,d,J＝9.5Hz,H-4),7.35(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.84(1H,dd,J＝8.6,2.3Hz,H-6),6.81(1H,d,J＝2.3Hz,H-8)和6.25(1H,d,J＝9.5Hz,H-3)；3个双键氢信号：δH 6.64(1H,d,J＝10.2Hz,H-1′),5.82(1H,d,J＝10.2Hz,H-2′)和5.51(1H,t,J＝6.6Hz,H-9′)；1组连氧亚甲基质子信号：δH 4.60(2H,m,H-11′)。高场区给出4个甲基质子信号：δH 1.80(3H,s,Me-12′),1.37(3H,s,Me-15′),1.18(3H,s,Me-13′)和1.04(3H,s,Me-14′)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有24个碳信号，9个为7-O-取代的香豆素母核特征碳信号δC 162.1(C-7),161.4(C-2),156.0(C-9),143.6(C-4),128.9(C-5),113.4(C-6),113.2(C-3),112.7(C-10),101.7(C-8)；剩余15个为倍半萜单元的碳信号，包含2组双键碳信号：δC 154.8(C-1'),125.1(C-2')和δC 142.9(C-8'),119.3(C-9')；1个羰基碳信号：δC 204.2(C-3')；2个连氧碳信号：δC 72.1(C-10'),65.4(C-11')。由于香豆素母核(7个不饱和度)、1个羰基和2个双键共提供10个不饱和度，所以推测化合物倍半萜部分为单环结构。之后，根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和3)。
HMBC谱中，δH 6.64(H-1')与δC 204.2(C-3′)相关，δH 5.82(H-2')与δC 46.2(C-4′)相关，提示α,β-不饱和酮片段的存在；δH 1.18(H3-13')和1.04(H3-14')与δC 204.2(C-3′),46.2(C-4′),53.2(C-5′)相关，提示Me-13',Me-14'连接在C-4'位；δH 1.37(H3-15')与δC 154.8(C-1′),72.1(C-10′),53.2(C-5′)相关，与δC 65.4(C-11′)无关，提示Me-15'连接在C-10'位，倍半萜单元的B环开裂；δH 1.80(H3-12')与δC 40.5(C-7′),142.9(C-8′),119.3(C-9′)相关，提示Me-12'连接在C-8'位；δH 4.60(H2-11′)与δC 142.9(C-8′),119.3(C-9′)相关，提示另一个双键位于C-8′/C-9′。此外，δH 4.60(H2-11′)与δC 162.1(C-7)的远程相关提示倍半萜片段通过醚键连接在香豆素母核的C-7位。
NOESY谱中，H3-14′与H3-15′,H-5′相关,H2-6′与H-1′,H3-13′相关，提示Me-14′,Me-15′和H-5′为α-取向，Me-13′和-OH为β-取向，推测手性中心的相对构型为5'S*,10'R*。通过比较实测和计算ECD数据，确定了化合物8的绝对构型为5'S,10'R。经检索为一未见文献报道的新化合物，命名为(5'S,10'R)-ferusingensine G。
倍半萜香豆素9的结构鉴定数据如下：
黄色油状(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 383.2216[M+H]+:(calcd.383.2222for C24H31O4)，推测其分子式为C24H30O4，提示结构中存在10个不饱和度。1HNMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH7.61(1H,d,J＝9.4Hz,H-4),7.32(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.83(1H,dd,J＝8.6,2.3Hz,H-6),6.75(1H,d,J＝2.3Hz,H-8)和6.22(1H,d,J＝9.4Hz,H-3)；1个双键氢信号：δH 5.43(1H,t,J＝3.8Hz,H-6′)；2组连氧亚甲基氢信号：δH 3.66(1H,dt,J＝12.5,3.2Hz,Ha-3′),3.32(1H,m,Hb-3′),3.81(1H,d,J＝8.3Hz,Ha-11′)和3.76(1H,d,J＝8.3Hz,Hb-11′)；高场区给出4个甲基质子信号：δH 1.31(3H,s,Me-14′),1.19(3H,s,Me-15′),0.98(3H,J＝7.9Hz,Me-12′)和0.97(3H,s,Me-13′)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有24个碳信号，9个为7-O-取代的香豆素母核特征碳信号δC 163.0(C-7),161.5(C-2),156.1(C-9),143.6(C-4),128.7(C-5),113.5(C-6),112.9(C-3),112.4(C-10),100.9(C-8)；15个为倍半萜单元的碳信号，包含1组双键碳信号：δC 148.7(C-5'),120.3(C-6')；3个连氧碳信号δC 78.0(C-4'),71.6(C-11'),64.3(C-3')，结合氢谱提示除了C-3′和C-11′，倍半萜片段中C-4'为1个连氧季碳信号。由于香豆素母核和1个双键共提供8个不饱和度，结构剩余2个不饱和度，推测化合物的倍半萜部分是一个双环结构。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和3)。
HMBC谱中，δH 1.31(H3-14')和0.97(H3-13')与δC 78.0(C-4′)相关，与δC 64.3(C-3′)无关，而δH 3.66(Hα-3′)和δH 3.32(Hβ-3′)与δC 78.0(C-4′)有相关，提示C-3′/C-4′通过醚键相连，同时Me-13'、Me-14'连接在C-4'位；δH 1.19(H3-15')与δC 30.8(C-8′),38.7(C-9′),41.2(C-10′),71.6(C-11′)相关，提示Me-15'连接在C-9'位；δH 0.98(H3-12')与δC33.0(C-7′),30.8(C-8′),48.7(C-9′)相关，提示Me-12'连接在C-8'位；δH 3.81(Ha-11′)和3.76(Hb-11′)与δC 163.0(C-7)的远程相关提示倍半萜片段通过醚键连接在香豆素母核的C-7位。
NOESY谱中，H3-12′与Hb-11′相关,H-10′与Ha-11′,H3-12′相关,同时H3-15′与H-8′相关，提示Me-12′,H2-11′,H-10′为β-取向，H-8′,Me-15′为α-取向；H-10′与H3-13′相关，提示Me-13′为β-取向，Me-14′为α-取向，推测手性中心的相对构型为8'S*,9'S*,10'R*。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物9的绝对构型为8'S,9'S,10'R。经检索为一未见文献报道的新化合物，命名为(8'S,9'S,10'R)-ferusingensine H。
倍半萜香豆素10的结构鉴定数据如下：
白色无定形粉末(MeOH)，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 449.2301[M+Na]+:(calcd.449.2226 for C26H34O5Na)，推测其分子式为C26H34O5，提示结构中存在10个不饱和度。1H NMR(600MHz,CDCl3)谱中，低场区表现出7-O-取代的香豆素母核特征的5个质子信号：δH 7.62(1H,d,J＝9.4Hz,H-4),7.35(1H,d,J＝8.6Hz,H-5),6.83(1H,dd,J＝8.6,2.3Hz,H-6),6.79(1H,d,J＝2.3Hz,H-8)和6.23(1H,d,J＝9.4Hz,H-3)；1组连氧亚甲基质子信号：3.72(1H,d,J＝8.7Hz,Ha-11′)和3.65(1H,d,J＝8.7Hz,Hb-11′)；1个连氧次甲基氢信号：δH4.67(1H,td,J＝11.1,5.1Hz,H-3′)；高场区给出5个甲基质子信号：δH 2.04(3H,s,Me-2″)1.06(3H,s,Me-15′),0.94(3H,d,J＝7.1Hz,Me-12′),0.91(3H,s,Me-14′)和0.80(3H,d,J＝6.6Hz,Me-13′)。13C NMR(150MHz,CDCl3)谱显示有26个碳信号，9个为7-O-取代的香豆素母核特征碳信号δC 162.6(C-7),161.4(C-2),156.0(C-9),143.5(C-4),128.8(C-5),113.1(C-6),113.1(C-3),112.6(C-10),101.6(C-8)。15个为倍半萜单元的碳信号，包含2个连氧碳信号：δC 76.1(C-11'),74.7(C-3')。2个碳信号为乙酰基信号：δC 171.1(C-1”),21.5(C-2”)。由于香豆素母核和1个羰基提供8个不饱和度，提示化合物的倍半萜部分为双环结构。根据HSQC对所有氢碳数据进行归属(表1和3)。
HMBC谱中，δH 0.80(H3-13')与δC 74.7(C-3′),49.9(C-4′),38.3(C-5′)相关，提示Me-13'连接在C-4'位；δH 0.91(H3-14')与δC 49.9(C-4′),38.3(C-5′),32.5(C-6′),44.5(C-10′)相关，提示Me-14'连接在C-5'位；δC 0.94(H3-12')与δC 25.3(C-7′),35.5(C-8′),39.2(C-9′)相关，提示Me-12'连接在C-8'位；δH 1.12(H3-15')与δC 35.5(C-8′),39.2(C-9′),44.5(C-10′),76.1(C-11′)相关，提示Me-15'连接在C-9'位；δH 2.04(H3-2”)和4.67(H-3')与δC 171.1(C-1″)相关，提示乙酰基连接在C-3'位。此外，δH 3.72(Ha-11′)和3.65(Hb-11′)与δC 162.6(C-7)的远程相关提示倍半萜片段通过醚键连接在香豆素母核的C-7位。
NOESY谱中，H3-14′与H-3′,Hβ-7′,H3-15′相关，H-10′与H-4′,Ha,b-11′,H3-12′相关，提示Me-13′,Me-14′和Me-15′和H-3′为β-取向，H-10′和Me-12′为α-取向，推测手性中心的相对构型为3'R*,4'R*,5'S*,8'R*,9'R*,10'R*。通过比较实测ECD和计算ECD数据，确定了化合物10的绝对构型为3'R,4'R,5'S,8'R,9'R,10'R。经检索为一未见文献报道的新化合物，命名为(3'R,4'R,5'S,8'R,9'R,10'R)-kamolol acetate。
倍半萜香豆素1～10的NMR数据归属见表1-3。
表1化合物1-10的碳谱数据(150MHz,CDCl3)
表2化合物1-5的氢谱数据(600MHz,CDCl3)
a Overlapped resonances.
表3化合物6-10的氢谱数据(600MHz,CDCl3)
a Overlapped resonances.
实施例2
(1)阿魏1500g用95％乙醇加热回流提取3次(用量为30L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得95％乙醇粗提物经硅胶柱色谱，用氯仿-丙酮混合溶剂100:0，100:5，10:1，5:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中氯仿-丙酮混合溶剂100:0～100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:4，100:6，100:8，10:1，7:1，5:1，2:1，1:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚-乙酸乙酯100:6～2:1流分经ODS色谱，用50:50，65:35，80:20，90:10甲醇-水的混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝90:10，得到倍半萜香豆素3(tR＝90min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素4(tR＝68min)(收率为0.0033％)，倍半萜香豆素5(tR＝6min)(收率为0.0009％)，倍半萜香豆素6(tR＝18min)(收率为0.0010％)，倍半萜香豆素7(tR＝53min)(收率为0.0015％)，倍半萜香豆素9(tR＝15min)(收率为0.0004％)。
(6)上述步骤(4)中所得甲醇-水90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝80:20，得到倍半萜香豆素2(tR＝28min)(收率为0.0002％)。
(7)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝80:20，得到倍半萜香豆素1(tR＝34min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素10(tR＝30min)(收率为0.0013％)。
(8)上述步骤(4)中所得甲醇-水65:35～80:20流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝70:30，得到倍半萜香豆素8(tR＝26min)(收率为0.0005％)。
倍半萜香豆素1-10的结构鉴定方法见实施例1。
实施例3
(1)阿魏2000g用二氯甲烷加热超声提取4次(用量为30L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得二氯甲烷粗提物经硅胶柱色谱，用石油醚-丙酮混合溶剂100:5，10:1，5:1，2:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中石油醚-丙酮混合溶剂100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:3，100:5，100:8，10:1，6:1，2:1，0:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚-乙酸乙酯100:5～2:1流分经ODS色谱，用40:60，60:40，70:30，80:20，90:10的乙腈-水混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得乙腈-水80:20～90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为4mL/min，流动相为甲醇：水＝90:10，得到倍半萜香豆素3(tR＝91min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素4(tR＝67min)(收率为0.0031％)，倍半萜香豆素5(tR＝5min)(收率为0.0008％)，倍半萜香豆素6(tR＝15min)(收率为0.0008％)，倍半萜香豆素7(tR＝49min)(收率为0.0013％)，倍半萜香豆素9(tR＝8min)(收率为0.0003％)。
(6)上述步骤(4)中所得乙腈-水70:30～80:20流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝80:20，得到倍半萜香豆素1(tR＝36min)(收率为0.0002％)，倍半萜香豆素2(tR＝23min)(收率为0.0002％)，倍半萜香豆素10(tR＝30min)(收率为0.0011％)。
(7)上述步骤(4)中所得乙腈-水40:60～60:40流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝70:30，得到倍半萜香豆素8(tR＝20min)(收率为0.0004％)。
倍半萜香豆素1-10的结构鉴定方法见实施例1。
实施例4
(1)阿魏500g用氯仿加热回流提取3次(用量为10L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得氯仿粗提物经硅胶柱色谱，用二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂100:0，100:5，10:1，5:1，2:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂100:0～100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:3，100:5，100:8，10:1，8:1，6:1，4:1，2:1，0:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚-乙酸乙酯100:5～2:1流分经ODS色谱，用50:50，60:40，80:20，90:10甲醇-水的混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝90:10，得到倍半萜香豆素3(tR＝97min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素4(tR＝74min)(收率为0.0027％)，倍半萜香豆素5(tR＝4min)(收率为0.0009％)，倍半萜香豆素6(tR＝19min)(收率为0.0009％)，倍半萜香豆素7(tR＝53min)(收率为0.0015％)，倍半萜香豆素9(tR＝9min)(收率为0.0004％)。
(6)上述步骤(4)中所得甲醇-水90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为4mL/min，流动相为甲醇：水＝80:20，得到倍半萜香豆素1(tR＝34min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素2(tR＝18min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素10(tR＝27min(收率为0.0012％)。
(7)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为甲醇：水＝70:30，得到倍半萜香豆素8(tR＝19min)(收率为0.0005％)。
倍半萜香豆素1-10的结构鉴定方法见实施例1。
实施例5
(1)阿魏2500g用90％甲醇加热回流提取4次(用量为25L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得90％甲醇粗提物经硅胶柱色谱，用氯仿-乙酸乙酯混合溶剂100:0，100:5，10:1，5:1，2:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中氯仿-乙酸乙酯混合溶剂100:0～100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-丙酮混合溶剂100:2，100:4，100:6，100:8，10:1，8:1，5:1，2:1，0:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚-丙酮100:6～2:1流分经ODS色谱，用50:50，60:40，70:30，80:20，90:10甲醇-水的混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为4mL/min，流动相为乙腈：水＝80:20，得到倍半萜香豆素3(tR＝93min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素4(tR＝70min)(收率为0.0030％)，倍半萜香豆素5(tR＝4min)(收率为0.0009％)，倍半萜香豆素6(tR＝16min)(收率为0.0008％)，倍半萜香豆素7(tR＝57min)(收率为0.0016％)，倍半萜香豆素9(tR＝8min)(收率为0.0005％)。
(6)上述步骤(4)中所得甲醇-水90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为乙腈：水＝70:30，得到倍半萜香豆素2(tR＝20min)(收率为0.0002％)。
(7)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为3.5mL/min，流动相为乙腈：水＝65:35，得到倍半萜香豆素1(tR＝38min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素10(tR＝30min)(收率为0.0011％)。
(8)上述步骤(4)中所得甲醇-水70:30～80:20流分经HPLC RID-10A色谱分离制备，流速为4mL/min，流动相为乙腈：水＝55:45，得到倍半萜香豆素8(tR＝16min)(收率为0.0005％)。
倍半萜香豆素1-10的结构鉴定方法见实施例1。
实施例6
(1)阿魏1000g用90％乙醇加热回流提取4次(用量为15L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)上述步骤(1)所得90％乙醇粗提物经硅胶柱色谱，用二氯甲烷-丙酮混合溶剂100:0，100:5，10:1，5:1，2:1进行梯度洗脱，得到不同极性部位的洗脱物；
(3)步骤(2)中二氯甲烷-丙酮混合溶剂100:0～100:5的洗脱物，经硅胶柱色谱分离，依次以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂100:0，100:3，100:5，100:8，10:1，8:1，5:1，2:1，1:1洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚-乙酸乙酯100:5～1:1流分经ODS色谱，用50:50，60:40，70:30，80:20，90:10甲醇-水的混合溶剂梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝90:10，得到倍半萜香豆素3(tR＝105min)(收率为0.0002％)，倍半萜香豆素4(tR＝83min)(收率为0.0031％)，倍半萜香豆素5(tR＝11min)(收率为0.0009％)，倍半萜香豆素6(tR＝27min)(收率为0.0008％)，倍半萜香豆素7(tR＝71min)(收率为0.0013％)，倍半萜香豆素9(tR＝15min)(收率为0.0003％)。
(6)上述步骤(4)中所得甲醇-水80:20～90:10流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝80:20，得到倍半萜香豆素1(tR＝43min)(收率为0.0003％)，倍半萜香豆素2(tR＝25min)(收率为0.0002％)，倍半萜香豆素10(tR＝37min)(收率为0.0011％)。
(7)上述步骤(4)中所得甲醇-水70:30流分经HPLC-UV色谱分离制备，流速为3mL/min，流动相为甲醇：水＝70:30，得到倍半萜香豆素8(tR＝25min)(收率为0.0004％)。
倍半萜香豆素1-10的结构鉴定方法见实施例1。
实施例7实施例1-6中制备得到的新倍半萜香豆素类1-10的抗神经炎症活性测试
(1)实验原理：
小胶质细胞过度活化所介导的慢性神经炎症在神经退行性疾病的发生和发展过程中起到了关键作用。静息状态下，小胶质细胞能够清除脑内的代谢产物，维护大脑组织稳态。当中枢神经系统受到损伤(如炎症)时，小胶质细胞被激活并且过度活化，产生大量的炎症因子损伤神经元。同时，这些炎症因子会进一步激活小胶质细胞，在脑内形成恶性循环，最终导致神经退行性疾病的发生并进一步加深。因此，抑制小胶质细胞活度活化介导的神经炎症激活是预防和治疗神经退行性疾病的一种有效策略。本发明通过构建体外LPS激活BV2小胶质细胞异常活化的筛选模型，以激活小胶质细胞释放NO为指标，评价新倍半萜香豆素类1-10的抗炎活性。
(2)实验方法：
①小鼠小胶质细胞系BV-2的培养
细胞培养和模型建立中使用的所有玻璃器皿及金属器械(培养瓶，移液管，溶液瓶等)，均经过121℃高压灭菌30min，以彻底去除污染的LPS。以DMEM培养基作为基础配制成内含10％胎牛血清的细胞培养液。小胶质细胞以约2.0×105cells/mL的浓度在5％CO2，37℃培养瓶中传代培养，至第三天贴壁细胞约占培养瓶底面积70-80％，以胰酶消化贴壁细胞，传代至另一培养瓶。以-80℃超低温冰箱冻存复苏后的BV2作为第一代，选择第3-8代BV2细胞进行实验。
②药物配制方法
测试化合物均为固体状，用DMSO溶解。配成母液，浓度为100mM，储存于-20℃。临用时用DMDM培养液将其进行稀释，依次稀释为100μM、30μM、10μM、1μM。DMSO终浓度<1‰。
③Griess法检测化合物对LPS激活小胶质细胞的抑制作用
取对数生长期的BV2小胶质细胞，用含10％胎牛血清的新鲜DMDM培养基将细胞密度调至2.0×105cells/mL，接种于96孔板内，100μL/well，于37℃，5％CO2的培养箱内培养。细胞贴壁培养24h后换成无血清的新鲜培养液，同时进行加药处理。每种化合物设剂量100μM、30μM、10μM、1μM与LPS共同作用。同时设空白对照。各给药组中LPS终浓度为100ng/mL。细胞加药后继续培养24h后，收集上清液，Griess比色法检测上清液中NO2 -含量。
④MTT法检测化合物对小胶质细胞细胞成活率的影响
取对数生长期培养的BV2小胶质细胞，用含10％胎牛血清的新鲜DMDM培养基将细胞密度调至2.0×105cells/mL，接种于96孔板内，100μL/well，于37℃，5％CO2的培养箱内培养。细胞贴壁培养24h后换成新鲜培养液，同时进行加药处理。每种化合物设剂量100μM、30μM、10μM、1μM与LPS共同作用。同时设空白对照。各给药组中LPS终浓度为100ng/mL。细胞加药后继续培养24h，然后向细胞液中加入MTT溶液，10μL/well，将细胞与0.25mg/mL MTT于37℃下共同孵育3h，吸除培养液，然后加入150μL的DMSO溶液，测定其光密度OD值。数据处理，利用酶标仪相应软件进行数据处理，计算每一种样品3个孔OD值的平均值，利用平均值按如下公式计算细胞成活率(Cell viability，CV％)。
细胞成活率％＝样品组OD值的平均值/空白对照组OD值的平均值×100％
⑤统计方法
全部资料采用SPSS统计软件包进行检验分析。结果用平均值±标准误表示，评价整体性差异，组间均数采用One-Way ANOVA分析法进行方差齐性分析，并结合Dunnett’stest分析方法进行组间比较。多样本方差齐性检验采用Levene检验，当p>0.05，方差是齐的，采用Dunnett’s双侧T检验多组间均数的差异，当p<0.05，方差不齐，采用Dunnett T3检验多组间均数的差异。
⑥IC50的计算方法
将各剂量和抑制率等参数用非线性回归拟合计算IC50。
(3)实验结果：见表4
表4倍半萜香豆素类1-10抑制小胶质细胞活化作用实验结果
Significance:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001与LPS诱导组相比；###P<0.001与对照组相比.
结果可知，实施例1-6中制备得到的新倍半萜香豆素化合物1(30μM,100μM)、3(100μM)、4(100μM)、5(100μM)、6(30μM,100μM)、7(10μM,30μM,100μM)、8(1μM,10μM,30μM,100μM)、9(30μM,100μM)、10(100μM)能够显著的抑制LPS诱导的过度活化的BV2小胶质细胞NO的释放。
Claims (5)
1.如下的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐：
。
2.倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）阿魏用甲醇或乙醇溶剂进行提取，回收提取液得粗提物，所述甲醇或乙醇的体积浓度为60%~100%；
（2）步骤（1）所得粗提物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚-丙酮混合溶剂，或二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂，或二氯甲烷-丙酮混合溶剂，或氯仿-乙酸乙酯混合溶剂，或氯仿-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，得到不同极性的洗脱物；
（3）上述步骤（2）所得不同极性洗脱物，经ODS柱色谱，以甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂为流动相梯度洗脱；
（4）上述步骤（3）所得甲醇-水或乙腈-水洗脱物经HPLC进一步分离，以甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂为流动相梯度洗脱，得到倍半萜香豆素1~10；
步骤（2）中所述石油醚-乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚-丙酮混合溶剂的体积比例为100:0~0:1；二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂，或二氯甲烷-丙酮混合溶剂，或氯仿-乙酸乙酯混合溶剂，或氯仿-丙酮混合溶剂的体积比例为100:0~1:1；
步骤（3）中所述甲醇-水混合溶剂的体积比例为50:50~100:0，乙腈-水混合溶剂的体积比例为30:70~90:10；
步骤（4）中所述甲醇-水混合溶剂的体积比例为60:40~90:10，乙腈-水混合溶剂体积比例为50:50 ~ 80:20；
。
3.按照权利要求2所述的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的提取方法为加热回流提取或加热超声提取2~5次，料液比为1:5~1:30 g/mL。
4.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料、稀释剂或载体。
5.权利要求1所述的倍半萜香豆素类化合物及其药学上可接受的盐或权利要求4所述的药物组合物在制备预防或治疗神经退行性疾病药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010483912.4A CN113754625B (zh) | 2020-06-01 | 2020-06-01 | 倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010483912.4A CN113754625B (zh) | 2020-06-01 | 2020-06-01 | 倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113754625A CN113754625A (zh) | 2021-12-07 |
| CN113754625B true CN113754625B (zh) | 2023-04-18 |
Family
ID=78782496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010483912.4A Active CN113754625B (zh) | 2020-06-01 | 2020-06-01 | 倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113754625B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116514757B (zh) * | 2023-02-22 | 2024-10-22 | 沈阳药科大学 | 新疆阿魏中倍半萜香豆素化合物及其制备方法和应用 |
| WO2024246935A1 (en) * | 2023-06-02 | 2024-12-05 | Council Of Scientific & Industrial Research | A composition for treating parkinson's disease |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101437510A (zh) * | 2006-03-20 | 2009-05-20 | 科学与工业研究会 | 用作乙酰胆碱酯酶抑制剂的药物组合物 |
| CN104447655A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 沈阳药科大学 | 阿魏中的新倍半萜香豆素及其制备方法和医疗用途 |
| CN109134486A (zh) * | 2018-07-16 | 2019-01-04 | 广西师范大学 | 香豆素并木脂素及其制备方法和用途 |
| CN109206392A (zh) * | 2017-06-30 | 2019-01-15 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种香豆素类化合物及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011019393A2 (en) * | 2009-08-11 | 2011-02-17 | President And Fellows Of Harvard College | Class- and isoform-specific hdac inhibitors and uses thereof |
-
2020
- 2020-06-01 CN CN202010483912.4A patent/CN113754625B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101437510A (zh) * | 2006-03-20 | 2009-05-20 | 科学与工业研究会 | 用作乙酰胆碱酯酶抑制剂的药物组合物 |
| CN104447655A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 沈阳药科大学 | 阿魏中的新倍半萜香豆素及其制备方法和医疗用途 |
| CN109206392A (zh) * | 2017-06-30 | 2019-01-15 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种香豆素类化合物及其制备方法与应用 |
| CN109134486A (zh) * | 2018-07-16 | 2019-01-04 | 广西师范大学 | 香豆素并木脂素及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Biogenetic-type total synthesis of (±)-farnesiferol A and (±)-farnesiferol C;Van Tamelen, E. E，et al.;《Bioorganic Chemistry》;19821231;第11卷(第2期);第171-196页 * |
| Methyl galbanate, a novel inhibitor of nitric oxide production in mouse macrophage RAW264.7 cells;Susumu Kohno，et al.;《J Nat Med》;20110119;第65卷;第353-359页 * |
| Structure of karatavikin;Kiryalov, N. P.，et al.;《Khimiya Prirodnykh Soedinenii》;19671231;第3卷(第4期);第223-226页 * |
| Suppression of Human Platelet Activation via Integrin αIIbβ3 Outside-In Independent Signal and Reduction of the Mortality in Pulmonary Thrombosis by Auraptene;Chih-Wei Hsia,et al.;《Int. J. Mol. Sci.》;20191108;第20卷;第5585-（1-17） * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113754625A (zh) | 2021-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lee et al. | In vitro and in vivo antitumoral phenanthrenes from the aerial parts of Dendrobium nobile | |
| Yan et al. | Homoisoflavonoids from the medicinal plant Portulaca oleracea | |
| Pereda-Miranda et al. | Structure and stereochemistry of pectinolides AC, novel antimicrobial and cytotoxic 5, 6-dihydro-α-pyrones from Hyptis pectinata | |
| Hirata et al. | Structure of aloenin, a new biologically-active bitter glucoside from Aloe arborescens var. natalensis. | |
| Ciminiello et al. | Incisterols, a new class of highly degraded sterols from the marine sponge Dictyonella incisa | |
| CN113754625B (zh) | 倍半萜香豆素类化合物及其制备方法和应用 | |
| Zhang et al. | Nine sesquiterpenoid dimers with four unprecedented types of carbon skeleton from Chloranthus henryi var. hupehensis | |
| Li et al. | Neogenkwanines A–H: daphnane-type diterpenes containing 4, 7 or 4, 6-ether groups from the flower bud of Daphne genkwa | |
| Li et al. | Isocartormin, a novel quinochalcone C-glycoside from Carthamus tinctorius | |
| Ma et al. | Study of antimalarial activity of chemical constituents from Diospyros quaesita | |
| Dong et al. | Fermentation of Illigera aromatica with Clonostachys rogersoniana producing novel cytotoxic menthane-type monoterpenoid dimers | |
| Yang et al. | Bioactive terpenoids from Euonymus verrucosus var. pauciflorus showing NO inhibitory activities | |
| Wang et al. | Garcinol and its analogues: Synthesis, cytotoxic activity and mechanistic investigation | |
| Maxwell et al. | 3β-Aminospirosolane steroidal alkaloids from Solanum triste | |
| CN113861114A (zh) | 吗啡烷类和双苄基异喹啉类生物碱化合物及其制备方法和用途 | |
| Knipmeyer et al. | Analgesics of the 6, 14-ethenomorphinan type. 6-Deoxy-7. alpha.-orvinol and 6-deoxy-8. alpha.-orvinol | |
| TAKAYAMA et al. | Two new dimeric indole alkaloids from Tabernaemontana subglobosa Merr. from Taiwan | |
| CN116514757B (zh) | 新疆阿魏中倍半萜香豆素化合物及其制备方法和应用 | |
| CN112824383A (zh) | 联苄类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN114478224A (zh) | 萜类化合物及其制备方法和应用 | |
| Xie et al. | Xyloplains A–F, six new guaiane-type sesquiterpenoid dimers from Xylopia vielana | |
| CN107522594A (zh) | 一种倍半萜化合物及其制备方法与应用 | |
| CN115677814A (zh) | 五环三萜类化合物及其制备方法和应用 | |
| Cohen et al. | Synthesis of novel spiro heterocycles. 2-Amino-7-oxa-3-thia-1-azaspiro [5.5] undec-1-enes | |
| Wang et al. | Lycopodium alkaloids from Huperzia serrata |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |