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CN113637038A - 一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚的方法 - Google Patents

一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚的方法 Download PDF

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CN113637038A CN202110974822.XA CN202110974822A CN113637038A CN 113637038 A CN113637038 A CN 113637038A CN 202110974822 A CN202110974822 A CN 202110974822A CN 113637038 A CN113637038 A CN 113637038A
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Abstract

本发明涉及一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脉冲电场与超声对甜茶叶协同前处理；(2)循环提取；(3)过滤澄清得澄清液；(4)将澄清液经过超滤膜，超滤膜透过液经过纳滤膜，收集纳滤膜截留液；(5)阴离子交换树脂分离；(6)阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液合并后进行处理得到甜茶苷；(7)步骤(5)所得解吸液用稀酸调节至弱酸性或中性，与步骤(6)的大孔吸附树脂柱流出液和初期水洗液合并，后处理得到甜茶多酚。本发明方法在实现有效成分富集的同时将含有其他成分的料液合并处理，在实现良好分离的同时，提高了产品收率，实现了原料的综合利用，具有工业实用性。

Description

一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚的方法
技术领域
本发明涉及植物提取分离技术领域，具体涉及一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚的方法。
背景技术
本申请所述甜茶为蔷薇科悬钩子属植物甜叶悬钩子的叶，学名：RubusSuatrssimus S.Lee，英文名：Sweet tea，又名广西甜茶、金秀野生甜茶、舜皇山甜茶等。
一、甜茶叶化学成分及生物活性
1、化学成分
甜茶叶中含有多种化学成分：主要含有4～6％甜茶苷，8～18％甜茶多酚，2.9～4.2％黄酮。另含18种氨基酸，每100克干品含氨基酸总量331.54毫克；含钙、锌、锗、硒，及钾、镁、磷、铁、钠、铜、铬、锶、锂等多种元素，不含砷铝等有毒物质；含维生素C、B1、B2、B3、超氧化物岐化酶；类胡萝卜素、纤维素等。
甜茶苷：又称甜茶素、甜叶悬钩子苷，是一种二萜皂苷，与甜叶菊苷具有相同的苷元-斯替维醇，不同点在13位糖基上，甜茶苷是单糖苷，而甜叶菊苷是双糖苷；具有高甜度、低热量的显著优点，甜度为蔗糖的200倍。
甜茶多酚：含特有的GOD型鞣花单宁，是治疗对花粉症等鼻炎过敏反应的活性物质；主要成分为没食子酸、鞣花酸、2-吡喃酮-4,6-二羧酸、云实酸、地榆皂酸二内酯、咖啡酸等。
黄酮：含金丝桃苷等，苷元为槲皮素和山奈酚。
2、生物活性
甜茶具有清热解毒、防癌抗癌、抗过敏、润肺化痰止咳、减肥降脂降压、降低血胆固醇、抑制和延缓血管硬化、防治冠心病和糖尿病等众多的保健功能。据《广西中药标准》记载，野生甜茶有“清热降火、润肺、祛痰、止咳的功效”，被誉为“神茶”。
甜茶苷：一定浓度的甜茶苷具有明显的降血脂作用；还能降低正常小鼠血糖水平，对小鼠糖异生具有明显的抑制作用；明显降低血清甘油三酯水平，对胆固醇含量也有降低作用。因其具有高甜度、低热量的显著优点，特别适用于糖尿病、高血压、肥胖以及不宜食糖人群作为代糖使用。
甜茶多酚有明显抗氧化、抗突变、防癌、降低胆固醇、降低血液中低密度脂蛋白、抑制血压上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物过敏、改善肠胃微生物环境、消臭的作用，是最理想的纯天然抗氧化剂，用途十分广泛。
二、提取分离技术
国内对甜茶的研究很多，涉及甜茶的种质资源、种植、化学成分研究、主要生物活性成分的提取分离、甜茶苷和甜茶多酚的药理毒理及终端应用等。对甜茶的综合利用也有一定的研究，比如从甜茶絮凝渣中提取甜茶多酚，但其依据甜茶苷的提取工艺而定，分离纯化过程中加入絮凝物质等而在后期回收处理，具有一定局限性，且絮凝对甜茶苷有较大的损失，絮凝沉淀中的甜茶多酚实际中也难以回收，技术有待进一步完善。现有关甜茶苷和甜茶多酚的提取分离技术的专利和文献报导，工艺过程主要涉及甜茶叶的粉碎、提取、酶解、絮凝、大孔吸附树脂精制、离子树脂脱色、超滤和纳滤、有机溶剂萃取、氧化铝层析、聚酰胺层析、活性炭脱色、结晶等技术；均存在将干燥的甜茶叶粉碎，然后进行提取。常温提取在实际中难以将甜茶苷提取出来；采用破碎及高温可以增加了各种成分的溶出，尤其是鞣质等，但是会因此而导致提取液具有一定粘稠度和粘性沉淀，离心难以去除，此类物质极易堵塞陶瓷膜孔，难以澄清，进而影响树脂吸附分离及脱色效果；若要将这些物质去除，就需要进行酶解、絮凝等处理，如前所述，此操作造成了较大的甜茶苷损失，且难以回收甜茶多酚。甜茶苷的目标均指向99％以上甜茶苷，但此高纯度甜茶苷仍具有明显的苦味，可以从国内主要甜茶苷企业的甜茶苷产品中得到证实；同时甜茶多酚的化学成分与现有的茶叶多酚完全不同，甜茶多酚不含儿茶素等茶多酚成分，也没有统一标准。因此，技术上的局限性，导致市场上甜茶苷和甜茶多酚产品的局限，需要进一步深度开发甜茶苷和甜茶多酚。
现有公开的有关甜茶苷和甜茶多酚提取分离的技术内容，分述如下：
1、同时提取甜茶苷和甜茶多酚
CN201910378261.X公开了一种高含量甜茶苷、甜茶多酚的环保生产方法，包括以下步骤：(1)粉碎、渗漉提取；(2)絮凝、离心；(3)脱盐、脱色；(4)大孔树脂吸附；(5)梯度洗脱；(6)甜茶多酚的分离。其中，大孔吸附树脂柱先后用乙醇Ⅰ和乙醇Ⅱ洗脱，将乙醇Ⅱ洗脱液减压浓缩，喷雾干燥，得甜茶苷；絮凝物加入酸搅拌，调节pH值至中性，加入乙酸乙酯萃取，分层，取乙酸乙酯层用无水硫酸钠脱水，过滤除去硫酸钠，浓缩，冷冻降温，搅拌析晶，过滤，将晶体真空干燥，得甜茶多酚。
该方法将甜茶叶粉碎后进行常温渗漉提取，粉碎后的提取液引入过多粘性杂质，无法直接经过滤与微滤得到澄清透明的料液，需借助絮凝沉淀以得到较澄清的料液，造成了较多的甜茶苷和甜茶多酚的损失；甜茶苷在常温状态下难以从粉碎后的甜茶叶中溶出，提取效率低，需借助一定温度；甜茶多酚来自于絮凝沉淀，且为有机溶剂萃取，其溶出率和产品得率均低，成本高，且甜茶多酚作为水溶性成分，无法以结晶形式析出。
2、甜茶苷脱苦涩
CN201910089267.5公开了一种甜味组合物及其制备方法和应用。该方法包括获得甜叶悬钩子叶肉碎片，以水为溶剂进行提取，去除含酚羟基成分，浓缩纯化、水相结晶等步骤得甜味组合物。
CN201911007229.7公开了一种甜茶提取物脱苦脱涩的方法，包括以下步骤：(1)溶解：将甜茶提取物溶解于水中；(2)酶解：往甜茶提取物水溶液中加入多酚氧化酶，保温酶解；(3)灭酶：将酶解后的物料加热，并冷却至室温；(4)除杂：将灭酶物料依次通过三根串联的“阳-阴-阳”离子交换树脂柱；(5)浓缩干燥：收集离子交换树脂柱流出液，减压浓缩，干燥，得脱苦脱涩的甜茶苷产品。
CN201811580070.3公开了一种改善甜茶苷提取物口感的方法。本发明一种改善甜茶苷提取物口感的方法，将甜茶苷提取物进行生物酶酶解之后，所得酶解产物在羟丙基-被他环糊精、氧化淀粉作为辅料条件下利用糖基化酶对甜茶苷提取物进行糖基化，将所得甜茶苷糖基化产物进行乙醇醇沉纯化、串联氧化铝层析柱纯化，浓缩干燥之后获得所需产品。
CN201910959454.4公开了一种快速提取甜茶苷的方法，包括粉碎、过筛——提取——脱色——脱涩、脱苦——结晶、重结晶等步骤。
上述方法的目标均指向98％以上纯度的甜茶苷，并以完全去除甜茶苷伴随的多酚为途径，采用酶解、结晶等过度纯化技术，如前所述，市场上主要的99％甜茶苷，仍具有明显的入口先苦后甜的口感，单一的高纯度并不能完全解决甜茶苷的苦涩味。
3、提取甜茶苷
CN201811102849.4公开了一种从甜茶叶中提取甜茶苷的方法，包括以下步骤：(1)将甜茶叶粉碎，过筛，加水，连续逆流提取，过滤；(2)加入酶制剂酶解，灭活，冷却，絮凝，过滤，水洗滤渣；(3)超滤、纳滤；(4)上大孔吸附树脂层析柱吸附，水洗，水洗液弃掉，有机溶剂梯度洗脱，减压浓缩；(5)上氧化铝层析柱吸附，水洗，减压浓缩；(6)加入活性炭，搅拌，过滤，减压浓缩，喷雾干燥；(7)有机溶剂溶解，过滤，结晶，抽滤，真空干燥，粉碎，得甜茶苷产品。
CN201710465808.0公开了一种甜茶苷制备方法，其特征在于包括如下步骤：原料粉碎、闪式提取、双重离心、大孔树脂纯化、解吸、酶解、有机膜分级脱色、浓缩、结晶、干燥后得到成品。
CN201510435737.0公开了一种高纯度甜茶苷的提取方法，包括以下步骤：(1)前处理：将干燥的甜茶原料除杂，粉碎，过筛，得甜茶原料粉；(2)微波逆流提取：将甜茶原料粉微波逆流提取，对提取渣挤压，挤出液与甜茶料液混合，过滤，得提取液；(3)离心得离心液；(4)大孔树脂吸附分离：将离心液调节pH值至10.0～11.0，过大孔树脂进行吸附，静置后水洗，洗脱，收集目标洗脱液；(5)超滤得超滤液；(6)浓缩得浓缩液；(7)结晶与重结晶：向浓缩液中加入有机溶剂进行结晶，再重结晶，干燥，得甜茶苷产品。
CN201410402940.3公开了一种提取甜茶苷的方法，包括：原料粉碎、溶剂提取、膜浓缩、离心、调pH值、大孔树脂纯化、碱酸处理、洗脱、浓缩、复合离子交换树脂层析、浓缩、结晶、干燥后得到成品。
CN201210302985.4公开了一种从甜茶中提取甜茶苷的生产方法。该方法的工艺流程如下：甜茶原料药破碎→溶剂提取→浓缩→乙醇沉淀→大孔树脂纯化→浓缩→聚酰胺树脂层析→浓缩→结晶和重结晶→干燥→成品。
CN201210161595.X公开了一种以广西甜茶叶为原料提取高纯度甜茶苷的生产工艺，经提取、浓缩、絮凝澄清、离心分离、大孔树脂精制、离子交换树脂脱色、脱盐树脂脱盐、复合脱色、浓缩后，将稠膏喷雾干燥得到色泽呈牛奶白至白色的粉末，甜茶苷含量≥98％的高纯度甜茶苷成品。
上述方法均涉及到甜茶叶的粉碎和一定温度提取，并采用相应的絮凝、酶解等技术以辅助澄清；主要工艺涉及到氧化铝、大孔吸附树脂、阴阳离子交换树脂、聚酰胺层析等。但粉碎并经较高温度提取的甜茶叶，在生产过程中极难过滤，且如前所述，粘性杂质多，提取率低的问题突出，且非综合利用甜茶叶同时提取甜茶苷和甜茶多酚的技术。
4、提取甜茶多酚
CN201810421242.6公开了一种从提取甜茶苷后的甜茶絮凝渣中回收甜茶多酚的方法，包括以下步骤：(1)酸溶：在提取甜茶苷后的甜茶絮凝渣中，加入酸溶液，搅拌至絮凝渣溶解，离心，过滤，得滤液；(2)大孔吸附树脂富集：将滤液上大孔吸附树脂柱进行富集，水洗，有机溶剂洗脱，减压浓缩洗脱液并回收溶剂，得浓缩液；(3)氧化铝精制：将浓缩液上氧化铝层析柱，水洗，梯度洗脱，减压浓缩洗脱液并回收洗脱剂，低温真空干燥，得甜茶多酚产品。
该方法为从甜茶絮凝渣中回收甜茶多酚，与甜茶叶粉碎以及絮凝工艺相关，具有工艺局限性；且仅经大孔吸附树脂纯化即得高纯度甜茶多酚，科学性有待求证。
CN201510370730.5公开了一种回收甜茶多酚的方法，包括如下步骤：将甜茶叶进行清洗，杀青，速冻、微波解冻三次和汽爆处理，加入有机溶剂，提取两次，每次1小时，过滤定容至1升后，将甜茶提取液以3BV/h的流速缓慢通过预处理好的D101大孔树脂，收集D101树脂的过柱液，将过柱液减压浓缩2.202mg/ml～3.374mg/ml后以树脂1.2BV/h～1.5BV/h的流速缓慢通过25ml预处理好的HPD-100树脂直至吸附饱和，多酚进样量330.3mg～506.1mg；然后依次进行梯度洗脱。
该方法以有机溶剂提取，提取液中杂质极多，难以分离纯化；D101树脂对将甜茶苷和甜茶多酚均具有一定吸附，其流出液直接导致甜茶多酚回收率低；仅有大孔树脂纯化，难以得到高纯度甜茶多酚。
5、其他方法在提取多酚中的应用
脉冲电场(PEF)作为一种非热加工技术可应用于提取、浸渍等。脉冲电场产生磁场，这种脉冲电场和脉冲磁场交替作用，使细胞膜透性增加，振荡加剧，膜强度减弱，因而膜被破坏，膜内物质容易流出，膜外物质容易渗入，细胞膜的保护作用减弱甚至消失。
超声提取是利用超声波的空化作用、机械效应和热效应等加速胞内有效物质的释放、扩散和溶解，显著提高提取效率的提取方法。当大能量的超声波作用于介质时，介质被撕裂成许多小空穴，这些小空穴瞬时闭合，并产生高达几千个大气压的瞬间压力，即空化现象。超声空化中微小气泡的爆裂会产生极大的压力，使植物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间完成，缩短了破碎时间，同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散和溶解，从而显著提高提取效率。具有提取效率高、提取时间短、提取温度低的显著优点。
CN201810373260.1公开了一种脉冲电场-双水相-柱层析组合提取植物多酚的方法，包括如下步骤：(1)对待提取植物进行预处理得原料液；(2)以乙醇为溶剂，利用脉冲电场提取原料液中的活性物质，得提取液；(3)提取液过滤后采用双水相萃取提取液中的活性成分，得植物多酚粗提液；(4)植物多酚粗提液旋蒸除醇后采用柱层析法对提取物中活性物质进行纯化；(5)浓缩干燥即得植物多酚产品。
CN201310140746.8公开了一种超声协同脉冲电场提取葡萄皮渣多酚的方法，包括以下步骤：待处理的葡萄皮渣和乙醇水溶液置于脉冲电场两电极之间的处理室，将超声探头插入到葡萄皮渣乙醇水溶液中，同时开启超声波和脉冲电场进行提取；所述葡萄皮渣和乙醇水溶液质量比为1:2。该专利采用超声协同脉冲电场提取葡萄皮渣多酚，利用超声波产生的空化效应和一些次级效应，在相同的操作条件下，提取率比纯脉冲电场或超声场有明显提高。
上述方法以单一脉冲电场或与超声协同提取多酚，但均以乙醇水溶液为提取溶剂，而乙醇本身对植物细胞具有极强的穿透能力，不需要脉冲电场处理，二者互相矛盾，造成资源浪费和成本增加；多酚为水溶性物质，从生产成本及生产操作方面综合考虑，乙醇提取的方法不适合工业规模生产。因此，脉冲电场应用于提取植物多酚，需要结合生产实际考虑。
目前国内尚无在保持甜茶叶片完整的前提下，用脉冲电场与超声提取协同对甜茶叶进行前处理，并实现40～50℃高效提取甜茶苷和甜茶多酚。
综上所述，以上关于从甜茶叶中提取甜茶苷和甜茶多酚，以及甜茶苷的脱苦涩等滋味口感改良技术，或多或少存在一定缺陷，不甚理想，仍然存在较大的改进空间。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上不足，提供一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法：以甜茶叶为原料，改变传统粉碎提取的工艺，在保持甜茶叶片完整的前提下，经特殊的前处理，再在较低温度下高效提取甜茶苷和甜茶多酚；不采用酶解、絮凝等加入外来物质辅助澄清的技术实现甜茶提取液的澄清，进而实现了收率高的优点；本发明根据产物的分子量与分子结构、基团特点，采用树脂与膜分离技术相结合，实现专一选择性分离；以去除苦味皂苷和调节甜茶苷与甜茶多酚相对比例的方式对甜茶苷脱苦涩以及滋味口感改良，从而得到含量适中、无苦涩味的甜茶苷以及甜茶多酚，并将此技术应用于规模生产，实现产业化。本发明目标产物不是99％甜茶苷或98％甜茶多酚，而是无苦涩味、含量90～95％甜茶苷，以及含量80～90％甜茶多酚。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：
一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，包括以下步骤：
(1)脉冲电场与超声协同前处理：甜茶叶加水浸过叶面后，在40-50℃下，先用脉冲电场处理，再用超声处理得到前处理物料；
(2)循环提取：将前处理物料投入提取罐进行多次循环提取得提取液；
(3)过滤澄清得澄清液；
(4)分子结构分离：将膜澄清液经过超滤膜，超滤膜透过液经过纳滤膜，收集纳滤膜截留液；
(5)阴离子交换树脂分离：纳滤膜截留液过阴离子交换树脂柱得流出液，先水洗树脂柱得水洗液，再用稀碱液过树脂得到解吸液；
(6)制备无苦涩味甜茶苷：阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液合并后过大孔吸附树脂柱，水洗，合并流出液和初期水洗液；醇水混合溶液对大孔吸附树脂解吸，解吸液回收醇后经过MCI柱(小孔树脂凝胶柱)层析，收集MCI柱层析流出液，用醇水混合溶液对MCI柱解吸，合并MCI柱层析流出液和解吸液，浓缩，冷藏，析出白色絮状沉淀，过滤，干燥得无苦涩味甜茶苷；
(7)制备多酚：步骤(5)所得解吸液用稀酸调节至弱酸性或中性，与步骤(6)的大孔吸附树脂柱流出液和初期水洗液合并，合并液超滤后，过多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，水洗，醇水混合溶液解吸，解吸液浓缩，干燥得到甜茶多酚。
进一步地，所述从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，包括以下步骤：
(1)脉冲电场与超声协同前处理：取干燥的甜茶叶，加适量自来水浸过叶面，浸泡至叶片舒展，在40～50℃下，先用脉冲电场处理，再用超声处理；
(2)循环提取：将前处理物料投入提取罐，保持40～50℃，底部流出的溶液用泵输入至罐顶，使其再次以一定速度通过物料层，循环提取3-5次；
(3)过滤澄清：先将提取液过碟式离心机，离心液再过陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液；
(4)分子结构分离：先将陶瓷膜清液过截留分子量为30～50KD的超滤膜成套设备，收集超滤膜透过液；再将超滤膜透过液过截留分子量为600-800nm的纳滤膜，收集纳滤膜截留液；
(5)阴离子交换树脂分离：纳滤膜截留液过阴离子交换树脂柱得流出液，先水洗树脂柱得水洗液，再用0.5～1.5％的稀碱液过树脂得到解吸液；
(6)阴离子交换树脂流出液和水洗液制备无苦涩味甜茶苷：
(6.1)吸附树脂精制：将阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液合并后过大孔吸附树脂柱，进完料液后，水洗树脂柱至流出液澄清透明，收集进料流出液和初期水洗液；然后用醇水混合溶液I解吸，收集解吸液I；
(6.2)MCI柱(小孔树脂凝胶柱)层析：将吸附树脂解吸液I浓缩至无醇味，加水调节固形物含量，再过MCI柱，收集MCI柱层析流出液；用醇水混合溶液II解吸，收集解吸液II，将解吸液II浓缩回收醇后与MCI柱层析流出液合并，得MCI柱精制液；
(6.3)低温脱苦涩：将MCI柱精制液浓缩，置1～4℃冷藏至析出明显的白色絮状沉淀，过陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液；
(6.4)干燥：将陶瓷膜清液浓缩至固形物含量17～25％，喷雾干燥，得无苦涩味甜茶苷；
(7)阴离子交换树脂解吸液及吸附树脂流出液制备多酚：
(7.1)膜分离：步骤(5)所得解吸液用稀酸调节pH为5～7，再与步骤(6.1)吸附树脂进料流出液和初期水洗液合并，合并液通过截留分子量为20-25KD的有机膜成套设备进行超滤，收集有机膜透过液；
(7.2)专用树脂层析：将有机膜透过液进多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，进完料后，水洗树脂柱至流出液澄清透明，然后用醇水混合溶液III解吸，收集解吸液III；
(7.3)干燥：将解吸液III浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至固形物含量17～25％，喷雾干燥，得甜茶多酚。
本发明所述甜茶叶为蔷薇科甜叶悬钩子的干燥叶片，学名：Rubus SuatrssimusS.Lee，又名广西甜茶、金秀野生甜茶、舜皇山甜茶。
优选地，步骤(1)中，所述在脉冲电场处理前，需先将干燥的甜茶叶加水浸泡至叶片舒展，加水量为甜茶叶重量的8～15倍(W/V)，以提高脉冲电场处理效率。
优选地，步骤(1)中，所述前处理是脉冲电场与超声协同作用，顺序上是先脉冲电场处理，再超声处理。所述脉冲电场强度为0.5～2.0kv/cm，次数为10～30；超声处理频率为20～40kHz，功率300～800W，时间为40～60min。脉冲电场使细胞膜透性增加，振荡加剧，膜强度减弱，因而膜被破坏，膜内物质容易流出，膜外物质容易渗入，细胞膜的保护作用减弱甚至消失；超声使植物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间完成，并引起体系温度升高，同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散和溶解，从而显著提高提取效率。二者协同作用，可以不粉碎甜茶叶而实现甜茶苷和多酚的高效提取。这样做可以不提出或极少提取甜茶叶所特有的鞣质类成分，这类成分粘性强，使提取液极难过滤，堵塞陶瓷膜。
优选地，步骤(2)中，所述循环提取，是对经前处理的物料进行提取，具体为用泵将底部流出液输入至顶部，使其再次以一定速度通过物料层的方式；温度40～50℃。最后一次提取用作套提，合并之前提取液。比如对于循环提取3次而言，加水量第一次为前处理时加水量，提取时间45-60min，第二次为原干叶重量7～9倍，提取时间80-100min，第三次8～10倍，提取时间45-60min。循环提取与前处理相结合，实现了在较低温度下对甜茶苷和多酚的高效提取，而溶液粘度低、粘性杂质少，从而使料液澄清变成可能。
优选地，步骤(3)中，所述过滤澄清是将提取液先过碟式离心机，离心液再过陶瓷膜成套设备。所述陶瓷膜材质为氧化铝或氧化锆，孔径为200～500nm。
优选地，步骤(4)中，所述分子结构分离是根据甜茶苷、甜茶多酚与色素和小分子物质的分子结构空间位阻，采用两种膜截留分离。第一次为超滤膜，截留分子量为30～50KD，收集透过液；第二次为纳滤膜，截留分子量为600-800nm，收集截留液。
优选地，步骤(5)中，在过离子交换树脂之前，调节纳滤膜截留液固含量至5-8％；所述离子交换树脂为弱碱性阴离子交换树脂，型号为LX-94、D941、D900中的一种或任意组合；加入量为甜茶叶原料重量的1～2倍。此规格型号的离子交换树脂具有较大的交换容量，能对甜茶多酚和黄酮进行选择性交换吸附，实现甜茶多酚的富集。而甜茶苷不被吸附而随进料液和水洗柱液流出，从而实现甜茶苷和甜茶多酚的分离。
优选地，步骤(5)中，水洗树脂柱水的用量是阴离子交换树脂质量的3-5倍，解吸时稀碱液的用量是阴离子交换树脂质量的1.5-2倍。
优选地，步骤(6.1)中，所述大孔吸附树脂型号为非极性D101、LX-100B、LX-T28、LX-T81，弱极性AB-8，加入量为甜茶叶原料重量的1～2倍，优选1-1.5倍。此规格型号的大孔吸附树脂对甜茶苷具有很好的吸附，而对离子交换树脂未能交换吸附而随甜茶苷一起流出的小分子甜茶多酚类物质吸附很小或基本无吸附，从而实现甜茶苷与小分子甜茶多酚的分离。
优选地，步骤(6.1)中，水洗树脂柱水的用量是大孔吸附树脂质量的3-5倍；所述醇水混合溶液I中醇的浓度为60-70％，醇水混合溶液I的体积用量是大孔吸附树脂质量的2-3倍，单位L/kg。所述初期水洗液是1-3Bv的水洗液，优选为1.5-2Bv的水洗液。
优选地，步骤(6.2)中，所述醇水混合溶液II中醇的浓度为40-50％，醇水混合溶液II的体积用量是MCI柱层析填料质量的1.5-2倍，单位L/kg。
优选地，步骤(6.2)中，加水调节固含量是调节固含量为4～8％。所述MCI柱填料为聚苯乙烯基反相凝胶填料CHP20P 75～150um系列，规格型号为聚苯乙烯型GEL CHP 20SS、GEL CHP 2MG，甲基丙烯酸酯型GEL CHP 2MG中的一种或它们的任意组合，加入量为甜茶叶原料重量的0.8～1.2倍，收集部分为进柱流出液与40～50％含水醇解吸液。MCI柱对与甜茶苷伴随的苦涩味皂苷成分具有选择性吸附，用一定量和浓度的含水醇洗脱可以实现甜茶苷与这类苦味物质的分离，并调节甜茶苷与少量甜茶多酚的相对比例，从而脱苦涩并改善甜茶苷的滋味口感。
优选地，步骤(6.3)中，所述低温脱苦涩的方法是将MCI柱精制液浓缩至固形物含量9～15％，优选浓缩至固形物含量为10-12％，置于1～5℃冷藏至析出明显的白色絮状沉淀，再过孔径为50～200nm的陶瓷膜成套设备澄清去除沉淀。甜茶苷在此固形物含量和温度条件下，会析出具有明显苦涩味的絮状沉淀，经陶瓷膜微滤澄清以后，溶液已无明显苦涩味。
优选地，步骤(7)中，所述多酚来自于步骤(5)的离子树脂解吸液及步骤(6)的吸附树脂流出液，其中，离子树脂解吸液为用0.5～1.5％稀碱液对离子树脂吸附的多酚解吸附。一定规格型号的阴离子交换树脂对甜茶多酚具有选择性交换吸附，可以被稀碱解吸附；但有部分小分子甜茶多酚不被交换吸附而随甜茶苷一起流出，甜茶苷被一定规格型号的大孔吸附树脂选择性吸附而这些小分子甜茶多酚不被吸附或极少吸附而从大孔吸附树脂流出。因此，这两部分是甜茶叶中甜茶多酚的主要来源。
优选地，步骤(7.1)中，所述有机膜截留分子量为20-25KD，收集透过液。甜茶多酚具有较小的分子量和较小的空间位阻，而色素、黄酮等具有较大的空间位阻，通过此规格超滤膜，可以实现甜茶多酚与黄酮、色素的较好分离，提高树脂精制效果。
优选地，步骤(7.2)中，所述专用树脂为多酚吸附专用树脂，对多酚具有专一和选择性吸附，规格型号为非极性苯乙烯材质LXD-200，极性聚酰胺材质LX-8、丙烯酸材质LX-17、苯乙烯溴化树脂LX-207中的一种或它们的任意组合，加入量为甜茶叶原料重量的2～2.5倍。此规格型号的大孔吸附树脂为多酚吸附专用树脂，属于特殊树脂，对多酚具有专一选择性吸附，对其他物质吸附很少，从而制备得到高含量的甜茶多酚。
优选地，步骤(7.2)中，水洗树脂柱水的用量是多酚吸附专用树脂质量的3-4倍，所述醇水混合溶液III中醇的浓度为60-70％，醇水混合溶液III的体积用量是多酚吸附专用树脂质量的1.5-2倍，单位L/kg。
一种无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚，由上述步骤(1)～(7)制备得到。其中，无苦涩味甜茶苷中甜茶苷含量90～95％，同时含有甜茶多酚1～2％，为牛奶白色粉末，不含舒格罗克苷等苦味皂苷，无苦涩味；所述甜茶多酚含量80～90％，黄酮5～15％，棕色粉末。
本发明提供了一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，以含有4～6％甜茶苷、8～18％甜茶多酚以及2.9～4.2％黄酮的甜叶悬钩子的干燥叶为原料，经水浸泡使叶片充分舒展，叶片的细胞壁和细胞膜充分膨胀。先通过脉冲电场使细胞膜透性增加，振荡加剧，膜强度减弱，膜内物质容易流出，膜外物质容易渗入，细胞膜的保护作用减弱甚至消失。再通过超声使叶片的细胞壁破裂，并引起体系温度升高，加强胞内物质的释放、扩散和溶解。二者协同作用，可以不粉碎甜茶叶、保持叶片外观较为完好的条件下极大地促进甜茶苷和多酚的高效溶出。完成前处理以后，通过中等温度与前处理的进一步协同作用，以循环提取的动态提取方式，进一步促进甜茶叶细胞膜内甜茶苷和多酚向溶液体系转移，形成最大的浓度梯度差，从而实现高效提取。
因不破碎甜茶叶，以及提取温度较低，所以提取液不粘稠，且所含粘性物质少，可以在经过碟式离心的固液分离以后，将离心液通过陶瓷膜的错流过滤、微滤澄清，得到澄清透明的清液，解决了甜茶提取液澄清难题，从而使清液通过有机膜分离变成可能。进而根据甜茶苷、甜茶多酚与色素和小分子物质的分子结构空间位阻，采用两种膜截留分离：通过较大截留分子量的超滤膜去除大部分分子空间位阻大的色素和黄酮类物质，再通过纳滤膜去除无机物质以及小分子物质，实现甜茶苷和甜茶多酚的第一次富集。根据甜茶苷为二萜类物质，不具有酚羟基等基团，而甜茶多酚和黄酮等具有酚羟基，通过一定规格型号的阴离子交换树脂以离子交换吸附的方式，将甜茶多酚和黄酮交换吸附，而甜茶苷不被吸附而随进料液和水洗柱液流出，实现甜茶苷与甜茶多酚的进一步分离。
一定规格型号的大孔吸附树脂对甜茶苷具有很好的吸附，而对离子交换树脂未能交换吸附而随甜茶苷一起流出的小分子甜茶多酚类物质吸附很小或基本无吸附，可以实现甜茶苷与小分子甜茶多酚的分离。MCI柱对与甜茶苷伴随的苦涩味皂苷成分具有选择性吸附，用一定量和浓度的含水醇洗脱可以实现甜茶苷与这类苦味物质的分离，并调节甜茶苷与少量甜茶多酚的相对比例，从而脱苦涩并改善甜茶苷的滋味口感。经分离提纯的甜茶苷在一定固形物含量和温度条件下，会析出具有明显苦涩味的絮状沉淀，其主要成分是甜茶苷，以及残存的苦涩味成分，经陶瓷膜微滤澄清以后，可以完全去除，溶液已无明显苦涩味。再经干燥等步骤，制备得到无苦涩味甜茶苷。
被阴离子交换树脂交换吸附的甜茶多酚，被稀碱解吸附；但有部分小分子甜茶多酚不被交换吸附而随甜茶苷一起流出，而甜茶苷被一定规格型号的大孔吸附树脂选择性吸附而这些小分子甜茶多酚不被吸附或极少吸附而从大孔吸附树脂流出。因此，阴离子交换树脂的解吸液以及精制甜茶苷的吸附树脂流出液是甜茶叶中甜茶多酚的主要来源。甜茶多酚具有较小的分子量和较小的空间位阻，而色素、黄酮等具有较大的空间位阻，通过一定规格超滤膜，可以实现甜茶多酚与黄酮、色素的较好分离，提高树脂精制效果。通过特殊规格型号的多酚吸附专用大孔吸附树脂对甜茶多酚专一选择性吸附，对其他物质基本无吸附，经水洗分离以及一定浓度的含水醇解吸，再经浓缩、干燥等步骤，制备得到高含量的甜茶多酚。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供了一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法。以甜茶叶为原料，经脉冲电场与超声协同前处理、循环提取、过滤澄清、分子结构分离、离子树脂分离步骤，分别制备：①树脂流出液制备无苦涩味甜茶苷：吸附树脂精制，MCI柱层析，低温脱苦涩，干燥；②离子树脂解吸液及吸附树脂流出液制备甜茶多酚：膜分离，专用树脂层析，干燥。该方法可以从甜茶叶中同时制备得到无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚，实现了原料的综合利用，具有工业实用性。
(2)本发明提供了一种无苦涩味甜茶苷和甜茶多酚。其中，无苦涩味甜茶苷中甜茶苷含量90～95％，同时含有甜茶多酚1～2％，为牛奶白色粉末，不含舒格罗克苷等苦味皂苷，无苦涩味；所述甜茶多酚含量80～90％，黄酮5～15％，棕色粉末。本发明改变以往追求99％高纯度甜茶苷的思路，以实际中90～95％纯度且含有一定量甜茶多酚的混合物体系，并且不含苦味皂苷而实现甜茶苷的脱苦涩；该甜茶多酚根据甜茶叶所含黄酮与多酚理化性质相似的特点，纯度80～90％且具有甜茶多酚特征，具有显著的生物活性。
(3)本发明改变传统粉碎和/或高温提取的工艺，在保持甜茶叶片完整的前提下，经脉冲电场与超声协同前处理，再在较低温度下高效提取甜茶苷和甜茶多酚，然后将提取液过滤和陶瓷膜澄清得到。不采用酶解、絮凝等加入外来物质辅助澄清的技术，而实现甜茶提取液的澄清。
(4)本发明根据甜茶苷、甜茶多酚、黄酮、色素等杂质的分子量与分子结构、空间位阻、化学基团特点，采用二种二次膜分离与离子交换树脂、皂苷吸附专用大孔吸附树脂、多酚吸附特殊树脂联用的技术相结合，实现甜茶苷和甜茶多酚的逐级分离，在实现有效成分富集的同时将含有其他成分的料液合并处理，在实现良好分离的同时，提高了产品收率。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行进一步的说明。
本发明实施例所使用的甜茶叶，购于广西桂林市平乐县，甜茶苷含量5.21％，甜茶多酚含量8.30％。
所使用纯化水为生产车间用二级纯水设备制备，所使用的大孔吸附树脂、MCI柱填料、多酚吸附专用大孔树脂以及其他原辅材料，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
本发明实施例中，滋味口感用感观测定；甜茶苷含量用高效液相色谱法(HPLC)测定；甜茶多酚用紫外-可见分光光度法(UV)采用(770nm，福林法)测定。
实施例1
(1)脉冲电场与超声协同前处理。取200kg干燥的甜茶叶，加2000L自来水浸过叶面，搅拌均匀，浸泡2h至叶片舒展。在溶液温度47℃下，先用1.5kv/cm的脉冲电场处理25次，再用频率20kHz、功率500W的超声处理45min。
(2)循环提取。将前处理物料投入3m3多功能提取罐，保温47℃，底部放料，开启循环泵，底部流出的溶液用泵输入至罐顶，使其以1500L/h流速通过物料层，循环提取3次。第一次45min；第二次加入1500L自来水，提取90min；第三次加入1800L自来水，提取60min。第三次提取液用作套提，合并第一、二次提取液，得3100L提取液。
(3)过滤澄清。先将3100L提取液过碟式离心机，离心液再过材质为氧化锆、孔径为500nm的陶瓷膜成套设备，至液位100L时，加入300L纯化水稀释上游液，继续过膜，得3300L澄清透明的陶瓷膜清液。
(4)分子结构分离。先将3300L陶瓷膜清液过截留分子量为30KD的超滤膜成套设备，至液位100L时，加入300L纯化水稀释上游液，继续过膜，如此重复操作1次，收集超滤膜透过液，得3800L；再将超滤膜透过液过截留分子量为800nm的纳滤膜，至液位500L时，加入500L纯化水稀释上游液，继续过膜，收集纳滤膜截留液，得500L。
(5)阴离子交换树脂分离。预先在层析柱内装D941阴离子交换树脂350kg，按离子树脂标准程序处理好待用，测定纳滤膜截留液的固形物含量为6.9％，可直接进阴离子交换树脂柱，进完料后，用1100L纯化水洗树脂柱，用850L浓度1.2％的NaOH水溶液对D941离子树脂吸附的多酚解吸，阴离子交换树脂流出液，水洗液及解吸液分别处理：
(6)阴离子交换树脂流出液和水洗液制备无苦涩味甜茶苷。
(6.1)吸附树脂精制。预先在层析柱内装LX-T28大孔吸附树脂300kg，按吸附树脂标准程序处理好待用。将1500L阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液的合并液过大孔吸附树脂柱，进完料液后，用1200L纯化水洗树脂柱至流出液澄清透明，收集进料流出液和1.5Bv的初期水洗液，得2000L吸附树脂流出液；然后用650L浓度70％的乙醇水溶液解吸，进完乙醇水溶液后，再进250L纯化水洗柱，收集解吸液与水洗醇液，得800L解吸液。
(6.2)MCI柱层析。预先在层析柱内装GEL CHP 20SS填料200kg，按MCI柱标准程序处理好待用。将800L吸附树脂解吸液浓缩回收乙醇至无醇味，加水稀释至250L，再过MCI柱，收集流出液；用300L浓度46％乙醇水解吸，收集解吸液。将解吸液浓缩回收乙醇后与流出液合并，得MCI柱精制液330L。
(6.3)低温脱苦涩。将MCI柱精制液浓缩至固形物含量10.4％，置2℃冷藏5h至析出明显的白色絮状沉淀，再过材质为氧化锆、孔径为200nm的陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液。
(6.4)干燥。将陶瓷膜清液浓缩至固形物含量19.5％，喷雾干燥，得9.71kg无苦涩味甜茶苷。
(7)离子树脂解吸液及吸附树脂流出液制备多酚。
(7.1)膜分离：将步骤(5)的阴离子交换树脂解吸液用3％稀盐酸调节pH为5.9，再与步骤(6.1)的甜茶苷吸附树脂流出液2000L合并。合并液通过截留分子量为20KD的有机膜成套设备，至液位100L时，加入300L纯化水稀释上清液，继续过膜，如此重复操作1次，收集有机膜透过液，得3300L。
(7.2)专用树脂层析。预先在层析柱内装LX-8大孔吸附树脂450kg，按吸附树脂标准程序处理好待用。将3300L有机膜透过液进多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，进完料后，用1800L纯化水洗树脂柱至流出液澄清透明，然后用900L浓度65％的乙醇水溶液解吸，进完乙醇水溶液后，再进400L纯化水洗柱，收集解吸液与水洗醇液，得1200L解吸液。
(7.3)干燥。将解吸液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至固形物含量22.1％，喷雾干燥，得14.75kg甜茶多酚。
经检测，无苦涩味甜茶苷中甜茶苷含量92.61％，同时含有甜茶多酚1.27％，为牛奶白色粉末，口尝无苦涩味；甜茶多酚含量85.36％，黄酮7.65％，棕色粉末。经过计算，甜茶苷总收率86.30％，甜茶多酚总收率76.57％。
实施例2
(1)脉冲电场与超声协同前处理。取500kg干燥的甜茶叶，加4500L自来水浸过叶面，搅拌均匀，浸泡2.5h至叶片舒展。在溶液温度45℃下，先用1.9kv/cm的脉冲电场处理26次，再用频率40kHz、功率400W的超声处理50min。
(2)循环提取。将前处理物料投入6m3多功能提取罐，保温45℃，底部放料，开启循环泵，底部流出的溶液用泵输入至罐顶，使其以4000L/h流速通过物料层，循环提取3次。第一次45min；第二次加入4000L自来水，提取90min；第三次加入4000L自来水，提取60min。第三次提取液用作套提，合并第一、二次提取液，得7600L提取液。
(3)过滤澄清。先将7600L提取液过碟式离心机，离心液再过材质为氧化锆、孔径为400nm的陶瓷膜成套设备，至液位200L时，加入400L纯化水稀释上游液，继续过膜，得7800L澄清透明的陶瓷膜清液。
(4)分子结构分离。先将7800L陶瓷膜清液过截留分子量为40KD的超滤膜成套设备，至液位300L时，加入400L纯化水稀释上游液，继续过膜，如此重复操作1次，收集超滤膜透过液，得8300L；再将超滤膜透过液过截留分子量为800nm的纳滤膜，至液位1200L时，加入1500L纯化水稀释上游液，继续过膜，收集纳滤膜截留液，得1200L。
(5)阴离子交换树脂分离。预先在层析柱内装D900阴离子交换树脂1000kg，按离子树脂标准程序处理好待用。测定纳滤膜截留液的固形物含量为6.7％，可直接进离子交换树脂柱，进完料后，用3500L纯化水洗树脂柱，再用2500L浓度1.1％的NaOH水溶液对D900离子树脂吸附的多酚解吸，得2300L解吸液，对阴离子交换树脂流出液，水洗液及解吸液分别处理：
(6)阴离子交换树脂流出液和水洗液制备无苦涩味甜茶苷。
(6.1)吸附树脂精制。预先在层析柱内装D101大孔吸附树脂800kg，按吸附树脂标准程序处理好待用。将4400L离子树脂柱进料流出液和水洗液的合并液过大孔吸附树脂柱，进完料液后，用3000L纯化水洗树脂柱至流出液澄清透明，收集进料流出液和2Bv的初期水洗液，得6000L吸附树脂流出液；然后用1600L浓度65％的乙醇水溶液解吸，进完乙醇水溶液后，再进600L纯化水洗柱，收集解吸液与水洗醇液，得1900L解吸液。
(6.2)MCI柱层析。预先在层析柱内装GEL CHP 2MG填料600kg，按MCI柱标准程序处理好待用。将1900L吸附树脂解吸液浓缩回收乙醇至无醇味，加水稀释至700L，再过MCI柱，收集流出液；用1000L浓度45％乙醇水解吸，收集解吸液。将解吸液浓缩回收乙醇后与流出液合并，得MCI柱精制液1100L。
(6.3)低温脱苦涩。将MCI柱精制液浓缩至固形物含量11.6％，置4℃冷藏5h至析出明显的白色絮状沉淀，再过材质为氧化锆、孔径为50nm的陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液。
(6.4)干燥。将陶瓷膜清液浓缩至固形物含量17.6％，喷雾干燥，得23.86kg无苦涩味甜茶苷。
(7)阴离子交换树脂解吸液及吸附树脂流出液制备多酚。
(7.1)膜分离：将步骤(5)的阴离子交换树脂解吸液用4％稀盐酸调节pH为6.3，再与步骤(6.1)的甜茶苷吸附树脂流出液6000L合并。合并液通过截留分子量为20KD的有机膜成套设备，至液位200L时，加入200L纯化水稀释上清液，继续过膜，如此重复操作1次，收集有机膜透过液，得8500L。
(7.2)专用树脂层析。预先在层析柱内装LXD-200大孔吸附树脂1000kg，按吸附树脂标准程序处理好待用。将8500L有机膜透过液进多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，进完料后，用3500L纯化水洗树脂柱至流出液澄清透明，然后用1800L浓度70％的乙醇水溶液解吸，进完乙醇水溶液后，再进800L纯化水洗柱，收集解吸液与水洗醇液，得2500L解吸液。
(7.3)干燥。将解吸液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至固形物含量20.8％，喷雾干燥，得36.12kg甜茶多酚。
经检测，无苦涩味甜茶苷中甜茶苷含量93.83％，同时含有甜茶多酚1.62％，为牛奶白色粉末，口尝无苦涩味；甜茶多酚含量85.94％，黄酮7.91％，棕色粉末。经过计算，甜茶苷总收率85.02％，甜茶多酚总收率75.73％。
实施例3
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(1)中，溶液温度为40℃，最终得到甜茶苷产品9.15kg，其中甜茶苷含量93.27％，甜茶多酚1.31％；甜茶多酚产品13.96kg，其中甜茶多酚含量86.84％，黄酮7.82％。经过计算，甜茶苷总收率81.90％，甜茶多酚总收率73.75％。
实施例4
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(1)中，溶液温度为50℃，最终得到甜茶苷产品9.83kg，其中甜茶苷含量92.35％，甜茶多酚1.16％；甜茶多酚产品14.92kg，其中甜茶多酚含量84.93％，黄酮8.01％。经过计算，甜茶苷总收率87.12％，甜茶多酚总收率77.02％。
实施例5
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于(6.3)中，将MCI柱精制液浓缩至固形物含量9.1％。最终得到得9.82kg无苦涩味甜茶苷，其中甜茶苷含量91.72％，同时含有甜茶多酚1.18％，经过计算，甜茶苷总收率86.65％。
实施例6
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于区别在于(6.3)中，将MCI柱精制液浓缩至固形物含量14.5％。最终得到得9.38kg无苦涩味甜茶苷，其中甜茶苷含量93.02％，同时含有甜茶多酚1.29％，经过计算，甜茶苷总收率83.73％。
实施例7
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于区别在于(7.1)中，阴离子交换树脂解吸液用稀盐酸调节pH后没有和步骤(6.1)的甜茶苷吸附树脂流出液合并，直接通过截留分子量为20KD的有机膜成套设备，最终得到甜茶多酚13.31kg，甜茶多酚含量86.13％，黄酮8.32％，经过计算，甜茶多酚总收率69.80％。
对比例1
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(1)中，脉冲电场处理后，不经过超声处理。最终得到甜茶苷产品8.12kg，其中甜茶苷含量91.58％，甜茶多酚1.54％；甜茶多酚产品12.63kg，其中甜茶多酚含量86.23％，黄酮7.82％。经过计算，甜茶苷总收率71.37％，甜茶多酚总收率66.36％。

Claims (10)

1.一种从甜茶叶中提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)脉冲电场与超声协同前处理：甜茶叶加水浸过叶面后，在40-50℃下，先用脉冲电场处理，再用超声处理得到前处理物料；
(2)循环提取：将前处理物料投入提取罐进行多次循环提取得提取液；
(3)过滤澄清得澄清液；
(4)分子结构分离：将膜澄清液经过超滤膜，超滤膜透过液经过纳滤膜，收集纳滤膜截留液；
(5)阴离子交换树脂分离：纳滤膜截留液过阴离子交换树脂柱得流出液，先水洗树脂柱得水洗液，再用稀碱液过树脂得到解吸液；
(6)制备无苦涩味甜茶苷：阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液合并后过大孔吸附树脂柱，水洗，合并流出液和初期水洗液；醇水混合溶液对大孔吸附树脂解吸，解吸液回收醇后经过MCI柱(小孔树脂凝胶柱)层析，收集MCI柱层析流出液，用醇水混合溶液对MCI柱解吸，合并MCI柱层析流出液和解吸液，浓缩，冷藏，析出白色絮状沉淀，过滤，干燥得无苦涩味甜茶苷；
(7)制备多酚：步骤(5)所得解吸液用稀酸调节至弱酸性或中性，与步骤(6)的大孔吸附树脂柱流出液和初期水洗液合并，合并液超滤后，过多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，水洗，醇水混合溶液解吸，解吸液浓缩，干燥得到甜茶多酚。
2.根据权利要求1所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)脉冲电场与超声协同前处理：取干燥的甜茶叶，加适量自来水浸过叶面，浸泡至叶片舒展，在40～50℃下，先用脉冲电场处理，再用超声处理；
(2)循环提取：将前处理物料投入提取罐，保持40～50℃，底部流出的溶液用泵输入至罐顶，使其再次以一定速度通过物料层，循环提取2-5次；
(3)过滤澄清：先将提取液过碟式离心机，离心液再过陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液；
(4)分子结构分离：先将陶瓷膜清液过截留分子量为30～50KD的超滤膜成套设备，收集超滤膜透过液；再将超滤膜透过液过截留分子量为600-800nm的纳滤膜，收集纳滤膜截留液；
(5)阴离子交换树脂分离：纳滤膜截留液过阴离子交换树脂柱得流出液，先水洗树脂柱得水洗液，再用0.5～1.5％的稀碱液过树脂得到解吸液；
(6)阴离子交换树脂流出液和水洗液制备无苦涩味甜茶苷：
(6.1)吸附树脂精制：将阴离子交换树脂柱进料流出液和水洗液合并后过大孔吸附树脂柱，进完料液后，水洗树脂柱至流出液澄清透明，收集进料流出液和初期水洗液；然后用醇水混合溶液I解吸，收集解吸液I；
(6.2)MCI柱(小孔树脂凝胶柱)层析：将吸附树脂解吸液I浓缩至无醇味，加水调节固形物含量，再过MCI柱，收集MCI柱层析流出液；用醇水混合溶液II解吸，收集解吸液II，将解吸液II浓缩回收醇后与MCI柱层析流出液合并，得MCI柱精制液；
(6.3)低温脱苦涩：将MCI柱精制液浓缩，置1～4℃冷藏至析出明显的白色絮状沉淀，过陶瓷膜成套设备，得澄清透明的陶瓷膜清液；
(6.4)干燥：将陶瓷膜清液浓缩至固形物含量17～25％，喷雾干燥，得无苦涩味甜茶苷；
(7)阴离子交换树脂解吸液及吸附树脂流出液制备多酚：
(7.1)膜分离：步骤(5)所得解吸液用稀酸调节pH为5～7，再与步骤(6.1)吸附树脂进料流出液和初期水洗液合并，合并液通过截留分子量为20-25KD的有机膜成套设备进行超滤，收集有机膜透过液；
(7.2)专用树脂层析：将有机膜透过液进多酚吸附专用大孔吸附树脂柱，进完料后，水洗树脂柱至流出液澄清透明，然后用醇水混合溶液III解吸，收集解吸液III；
(7.3)干燥：将解吸液III浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至固形物含量17～25％，喷雾干燥，得甜茶多酚。
3.根据权利要求1或2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脉冲电场强度为0.5～2.0kv/cm，次数为10～30；超声处理频率为20～40kHz，功率300～800W，时间为40～60min。
4.根据权利要求1或2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(2)中所述循环提取，是对经前处理的物料进行3-5次提取，温度40～50℃，最后一次提取用作套提，合并之前提取液。
5.根据权利要求1或2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述过滤澄清是将提取液先过碟式离心机，离心液再过陶瓷膜成套设备；所述陶瓷膜材质为氧化铝或氧化锆，孔径为200～500nm。
6.根据权利要求1或2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述分子结构分离是先过超滤膜，再过纳滤膜；优选地，超滤膜截留分子量为30～50KD，收集透过液；纳滤膜截留分子量为600-800nm，收集截留液。
7.根据权利要求1或2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(5)中，在过阴离子交换树脂之前，调节纳滤膜截留液固含量至5-8％；所述离子交换树脂为弱碱性阴离子交换树脂，型号为LX-94、D941、D900中的一种或任意组合；加入量为甜茶叶原料重量的1～2倍；水洗树脂柱水的用量是阴离子交换树脂质量的3-5倍，解吸时稀碱液的用量是阴离子交换树脂质量的1.5-2倍。
8.根据权利要求2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(6.1)中，所述大孔吸附树脂加入量为甜茶叶原料重量的1～2倍，优选1-1.5倍；水洗树脂柱水的用量是大孔吸附树脂质量的3-5倍；所述醇水混合溶液I中醇的浓度为60-70％，醇水混合溶液I的体积用量是大孔吸附树脂质量的2-3倍，单位L/kg，所述初期水洗液是1-3Bv的水洗液，优选为1.5-2Bv的水洗液；和/或
步骤(6.2)中，所述醇水混合溶液II中醇的浓度为40-50％，醇水混合溶液II的体积用量是MCI柱层析填料质量的1.5-2倍，单位L/kg；所述MCI柱填料加入量为甜茶叶原料重量的0.8～1.2倍；和/或
步骤(6.3)中，MCI柱精制液浓缩至固形物含量9～15％，优选浓缩至固形物含量为10-12％，置于1～5℃冷藏至析出明显的白色絮状沉淀，再过孔径为50～200nm的陶瓷膜成套设备澄清去除沉淀。
9.根据权利要求2所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，步骤(7.1)中，所述有机膜截留分子量为20-25KD，收集透过液；和/或
步骤(7.2)中，所述多酚吸附专用树脂为非极性苯乙烯材质LXD-200，极性聚酰胺材质LX-8、丙烯酸材质LX-17、苯乙烯溴化树脂LX-207中的一种或它们的任意组合，加入量为甜茶叶原料重量的2～2.5倍；和/或
步骤(7.2)中，水洗树脂柱水的用量是多酚吸附专用树脂质量的3-4倍，所述醇水混合溶液III中醇的浓度为60-70％，醇水混合溶液III的体积用量是多酚吸附专用树脂质量的1.5-2倍，单位L/kg。
10.根据权利要求1-9任一项所述的提取无苦涩味甜茶苷和多酚的方法，其特征在于，所得无苦涩味甜茶苷中甜茶苷含量90～95％，同时含有甜茶多酚1～2％，为白色粉末，无苦涩味；所述甜茶多酚含量80～90％，黄酮5～15％，棕色粉末。
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