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CN113166062A - 8-氨基异喹啉化合物及其用途 - Google Patents

8-氨基异喹啉化合物及其用途 Download PDF

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CN113166062A
CN113166062A CN201980077947.3A CN201980077947A CN113166062A CN 113166062 A CN113166062 A CN 113166062A CN 201980077947 A CN201980077947 A CN 201980077947A CN 113166062 A CN113166062 A CN 113166062A
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alkyl
cycloalkyl
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CN201980077947.3A
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梁军
R·V·门东萨
M·肖
J·泰利斯
王炜如
B·魏
B·陈
E·F·朱
J·A·德罗巴尼克
L·J·加扎德
T·赫夫隆
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F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
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Abstract

描述了式(I)的3‑羰基氨基‑8‑氨基异喹啉化合物，其变化形式及其作为HPK1(造血激酶1)的抑制剂的用途。所述化合物可用于治疗HPK1依赖性病症和增强免疫应答。还描述了抑制HPK1的方法、治疗HPK1依赖性病症的方法、增强免疫应答的方法以及制备所述3‑羰基氨基‑8‑氨基异喹啉化合物的方法。

Description

8-氨基异喹啉化合物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年10月3日提交的美国临时申请号62/740,894和2019年7月3日提交的美国临时申请号62/870,529的优先权权益，所述申请的内容以引用的方式整体合并于此。
背景技术
肿瘤学家用来治疗癌症的主要治疗方式是手术切除、放射治疗和经典化疗药物。不幸的是，对于许多肿瘤或癌症形式来说，手术切除不是可行的选项。此外，放射治疗和化疗药物并不仅仅靶向患病细胞，因此最终损害健康细胞。人们正利用肿瘤细胞内抗原的肿瘤特异性表达或特定蛋白的不当过度表达或激活来开发更特异性地靶向肿瘤细胞的疗法，但是肿瘤细胞易于突变，而且可能对特异性靶向肿瘤细胞的药物产生耐药性。
已经出现利用患者自身的免疫系统来克服许多癌症所采用的免疫逃避策略，并提高抗肿瘤免疫力的新的癌症治疗范式。一种此类策略是对通常起维持外周耐受性作用的免疫应答负调控因子进行抑制，从而使肿瘤抗原被识别为非自身实体。
造血祖细胞激酶1(HPK1)是树突状细胞激活以及T细胞和B细胞应答的负调控因子的一个实例，可以靶向它以提高抗肿瘤免疫力。HPK1主要由造血细胞(包括早期祖细胞)表达。在T细胞中，相信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等(2007)JEM 204:681-691)和Thr254处的Gads发生磷酸化从而降低信号传导微簇的持久性来对T细胞激活进行负调控，从而募集与磷酸化的SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从含LAT的微簇中释放SLP76-Gads-14-3-3复合物(Lasserre等(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。HPK1还可以响应于通常由肿瘤分泌的前列腺素E2而被激活，从而促使肿瘤细胞逃离免疫系统。
发明内容
公开了作为HPK1抑制剂的3-羰基氨基-8-氨基异喹啉化合物，含有这些化合物的组合物，以及增强免疫应答和治疗HPK1依赖性病症(诸如癌症)的方法。
在一个方面，提供了如本文详述的式(I)或其任何变化形式的化合物，或其盐(例如其药用盐)。还提供了药物组合物，所述药物组合物包含本文详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐，以及药用载体或赋形剂。
在另一个方面，提供了一种抑制HPK1的方法，所述方法包括使受试者体内的HPK1与有效量的本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐接触。还提供了一种增强有需要的受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐。
另外提供了一种治疗HPK1依赖性病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，HPK1依赖性病症是癌症，例如结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。在一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用化疗剂。
还提供了本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐，以用于抑制HPK1、增强免疫应答或治疗HPK1依赖性病症诸如癌症的方法中。
还提供了本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐在本文所详述的方法(例如，治疗HPK1依赖性病症诸如癌症)中的用途。
还提供了本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐用于制造供用于本文所详述的方法(例如，治疗HPK1依赖性病症诸如癌症)中的药物的用途。
还提供了一种用于治疗HPK1依赖性病症的药盒，所述药盒包括：药物组合物，所述药物组合物包含本文所详述的式(I)或其任何变化形式的化合物或其药用盐；以及使用说明书。
在另一个方面，提供了一种制造式(I)或其任何变化形式的化合物的方法。还提供了可用于合成式(I)或其任何变化形式的化合物的化合物中间体。
具体实施方式
本文公开了式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物及其药物组合物，它们是HPK1(造血祖细胞激酶1)的抑制剂或调节剂。因而，所述化合物和组合物可用于治疗由HPK1介导的疾病和病症。治疗方法的一个实例是在患有癌症的受试者的情况下。所述化合物不仅可用于对抗癌症，而且还可以有利地用于增强有需要的受试者的免疫应答。
现在将在下文更全面地描述本发明公开的主题。然而，受益于以上描述中提供的教授内容，本发明公开的主题所属领域的技术人员应当能想到本文所阐述的本发明公开的主题的许多修改和其他实施方案。因此，应当理解，本发明公开的主题不限于所公开的具体实施方案，而且修改和其他实施方案希望包括在所附权利要求书的范围内。换言之，本文所述的主题涵盖所有替代、修改和等同形式。如果并入的文献、专利和类似材料中的一项或多项与本申请有所不同或矛盾，包括但不限于定义的术语、术语用法、描述的技术等等，则以本申请为准。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有本领域的普通技术人员通常理解的相同含义。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都以引用的方式整体并入本文。
定义
如本文所用的“烷基”是指具有指定碳原子数(即，C1-10意指一至十个碳原子)的饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。特定的烷基基团是具有1至20个碳原子(“C1-20烷基”)、具有1至8个碳原子(“C1-8烷基”)、具有1至6个碳原子(“C1-6烷基”)、具有2至6个碳原子(“C2-6烷基”)或具有1至4个碳原子(“C1-4烷基”)的那些。烷基基团的实例包括但不限于诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基，以及例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基的同系物和异构体等基团。
如本文所用的“烯基”是指具有至少一个烯属不饱和位点(即，具有至少一个式C＝C部分)并且具有指定碳原子数(即，C2-10意指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。烯基基团可以呈“顺式”或“反式”构象，或替代地呈“E”或“Z”构象。特定烯基基团是具有2至20个碳原子(“C2-20烯基”)、具有2至8个碳原子(“C2-8烯基”)、具有2至6个碳原子(“C2-6烯基”)或具有2至4个碳原子(“C2-4烯基”)的那些。烯基基团的实例包括但不限于诸如次乙基(或乙烯基)、丙-1-烯基、丙-2-烯基(或烯丙基)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、其同系物和异构体等。
如本文所用的“炔基”是指具有至少一个炔属不饱和位点(即，具有至少一个式C≡C部分)并且具有指定碳原子数(即，C2-10意指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，非支链)或支链单价烃链或其组合。特定的炔基基团是具有2至20个碳原子(“C2-20炔基”)、具有2至8个碳原子(“C2-8炔基”)、具有2至6个碳原子(“C2-6炔基”)或具有2至4个碳原子(“C2-4炔基”)的那些。炔基基团的实例包括但不限于诸如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、其同系物和异构体等基团。
如本文所用的“亚烷基”是指与烷基相同但具有二价的残基。特定的亚烷基是具有1至6个碳原子(“C1-6亚烷基”)、1至5个碳原子(“C1-5亚烷基”)、具有1至4个碳原子(“C1-4亚烷基”)或1至3个碳原子(“C1-3亚烷基”)的那些。亚烷基的实例包括但不限于如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2-CH2-)、1,3-亚丙基(-CH2-CH2-CH2-)、1,2-亚丙基(-CH(CH3)-CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2-CH2-CH2-CH2-)等基团。
如本文所用的“次烷基”是指与烷基相同但在连接点处具有二价的残基，并且经由双键连接至母结构。特定的次烷基是具有1至6个碳原子(“C1-6次烷基”)、1至5个碳原子(“C1-5次烷基”)、具有1至4个碳原子(“C1-4次烷基”)或1至3个碳原子(“C1-3次烷基”)的那些。亚烷基的实例包括但不限于诸如次甲基(＝CH2)、次乙基(＝CH-CH3)、1-次丙基(＝CH-CH2-CH3)、2-次丙基(＝C(CH3)2)、1-次丁基(＝CH2-CH2-CH2-CH3)等基团。
如本文所用的“环烷基”是指具有指定碳原子数(即，(C3-10意指三至十个碳原子)的非芳香族饱和或不饱和环状单价烃结构。环烷基可以由一个环(如环己基)或多个环(如金刚烷基)组成，但不包括芳基。包括多于一个环的环烷基可以是稠合、螺环或桥接的，或其组合。特定的环烷基是具有3至12个环碳原子的那些。优选的环烷基是具有3至8个环碳原子(“C3-8环烷基”)或具有3至6个碳原子(“C3-6炔基”)的环状烃。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基、降冰片基等。
如本文所用的“芳基”是指具有单个环(例如，苯基)或多个缩合环(例如，萘基或蒽基)的不饱和芳香族碳环基团，这些缩合环可能是或可能不是芳香族的。特定的芳基基团是具有6至14个环状(即，环)碳原子的基团(“C6-14芳基”)。具有多于一个环(其中至少一个环是非芳香族的)的芳基基团可以在芳香族环位置或非芳香族环位置上连接至母结构。在一个变化形式中，具有多于一个环(其中至少一个环是非芳香族的)的芳基基团在芳香族环位置上连接至母结构。
如本文所用的“杂芳基”是指具有1至14个环状(即，环)碳原子和至少一个环杂原子(包括但不限于杂原子，诸如氮、磷、氧和硫)的不饱和芳香族环状基团。杂芳基基团可以具有单个环(例如，吡啶基、呋喃基)或多个缩合环(例如，吲哚嗪基、苯并噻吩基)，这些缩合环可能是或可能不是芳香族的。特定的杂芳基基团是具有1至12个环状(即，环)碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环状(即，环)杂原子的5元至14元环；具有1至8个环碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环杂原子的5元至10元环；以及具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5元、6元或7元环。在一个变化形式中，杂芳基包括具有1至6个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的单环芳香族5元、6元或7元环。在另一个变化形式中，杂芳基包括具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环杂原子的多环芳香族环。具有多于一个环(其中至少一个环是非芳香族的)的杂芳基基团可以在芳香族环位置或非芳香族环位置上连接至母结构。在一个变化形式中，具有多于一个环(其中至少一个环是非芳香族的)的杂芳基基团在芳香族环位置上连接至母结构。
如本文所用的“杂环”、“杂环的”或“杂环基”是指具有单个环或多个缩合环并且具有1至14个环状(即，环)碳原子和1至6个诸如氮、磷、硫或氧等环状(即，环)杂原子的饱和或不饱和非芳香族环状基团。包括多于一个环的杂环可以是稠合、螺环或桥接的，或其任何组合。在稠合环体系中，一个或多个稠合环可以是环烷基。特定的杂环基基团是具有1至13个环碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、硫的环杂原子的3元至14元环；具有1至11个环碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、硫的环杂原子的3元至12元环；具有1至9个环碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环杂原子的3元至10元环；具有1至7个环碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环杂原子的3元至8元环；以及具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、磷、硫的环杂原子的3元至6元环。在一个变化形式中，杂环基包括具有1至2个、1至3个、1至4个、1至5个或1至6个环碳原子和1至2个、1至3个或1至4个独立地选自氮、磷、氧和硫的环杂原子的单环3元、4元、5元、6元或7元环。在另一个变化形式中，杂环基包括具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、磷、氧和硫的环杂原子的多环非芳香族环。
“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和/或碘。“卤代烷基”是指被一个或多个可能相同或不同的卤素取代的烷基基团。在残基被多于一个卤素取代的情况下，可以通过使用与所连接的卤素部分的数目相对应的前缀来指代它，例如，二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤代基团取代的芳基和烷基，这些卤代基团可能但不一定是相同卤代；因此，4-氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。每一个氢都被卤代基团置换的烷基基团称为“全卤代烷基”。优选的全卤代烷基基团是三氟烷基(-CF3)。类似地，“全卤代烷氧基”是指卤素取代了构成烷氧基基团的烷基部分的烃中的每一个H的烷氧基基团。全卤代烷氧基基团的一个实例是三氟甲氧基(-OCF3)。
“羰基”是指基团C＝O。
“氧代”是指部分＝O。
“偕”是指连接至同一原子的两个部分之间的关系。举例来说，在残基-CH2-CRxRy-中，Rx和Ry是偕的，并且Rx可以称为Ry的偕R基团。
“邻近”是指连接至相邻原子的两个部分之间的关系。举例来说，在残基-CHRx-CHRy-中，Rx和Ry是邻近的，并且Rx可以称为Ry的邻近R基团。
除非另外指明，否则“任选取代的”是指基团可能未被取代或者被一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)针对该基团列出的取代基取代，其中所述取代基可以相同或不同。在一个实施方案中，任选取代的基团具有一个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有两个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有三个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有四个取代基。在一些实施方案中，任选取代的基团具有1至2个、1至3个、1至4个或1至5个取代基。
本文使用“抑制剂”一词意在指抑制HPK1活性的分子。“抑制”在本文中意指靶酶的活性与不存在抑制剂时的活性相比有所降低。在一些实施方案中，术语“抑制”意指HPK1活性降低至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。在其他实施方案中，抑制意指HPK1活性降低约5％至约25％、约25％至约50％、约50％至约75％或约75％至100％。在一些实施方案中，抑制意指HPK1活性降低约95％至100％，例如，活性降低95％、96％、97％、98％、99％或100％。此类降低可以使用本领域技术人员公认的各种技术来测量，包括体外激酶测定。
如本文所用，“HPK1拮抗剂”或“HPK1抑制剂”是降低、抑制或以其他方式削弱HPK1的一种或多种生物学活性(例如，丝氨酸/苏氨酸激酶活性、在TCR激活后募集TCR复合物、与蛋白质结合伴侣诸如SLP76相互作用)。使用HPK1拮抗剂的拮抗作用不一定表明HPK1活性被完全消除。相反，活性可能降低具有统计学意义的量，包括例如HPK1的活性相较于适当的对照物降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％或100％。在一些实施方案中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式削弱HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案中的一些中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其他方式削弱HPK1介导的SLP76和/或Gads磷酸化。本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并且抑制其激酶活性。
“特异性拮抗剂”意指使限定靶标的活性降低、抑制或以其他方式减弱的程度超过无关靶标的剂。举例而言，HPK1特异性拮抗剂使HPK1的至少一种生物活性降低的量在统计上超过所述拮抗剂对任何其他蛋白质(例如其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制效果。在一些实施方案中，拮抗剂对靶标的IC50是拮抗剂对非靶标的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。本发明所公开的化合物可能是或可能不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂使HPK1的生物学活性降低的量在统计上超过该拮抗剂对任何其他蛋白质(例如，其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施方案中，HPK1拮抗剂特异性地抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案中的一些中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC50是HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其他类型激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。
如本文所使用，“治疗”是用于获得有益或所需结果(包括临床结果)的方法。出于本发明的目的，有益或所需临床结果包括但不限于以下项中的一项或多项：减轻由疾病引起的一种或多种症状；削弱疾病程度；稳定疾病(例如预防或延迟疾病恶化)；预防或延迟疾病扩散(例如转移)；延迟或减缓疾病进展、改善疾病状态、缓解(无论是部分还是总体)疾病、降低治疗疾病所需的一种或多种药物的剂量、增强另一种药物的效果、延迟疾病进展；提高生活品质；和/或延长存活时间。“治疗”还涵盖减轻癌症的病理学后果。本发明的方法设想了这些治疗方面中的任一个或多个。
如本文所用，“延迟”癌症发展意指延迟、阻碍、减慢、推迟、稳定和/或延缓疾病的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或欲治疗的受试者。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著延迟实际上可以涵盖预防，因为受试者不会发展该疾病。“延迟”癌症发展的方法是与不使用该方法相比时，在给定时间范围内降低疾病发展的可能性和/或在给定时间范围内降低疾病程度的方法。此类比较通常基于使用具有统计学意义的数目的受试者的临床研究。癌症发展可以使用标准方法诸如常规体检、乳房X线摄影术、成像或活检进行检测。发展还可以指最初可能无法检测到的疾病进展，并且包括发生、复发和发作。
如本文所用，“有风险的”受试者是有罹患癌症的风险的受试者。在接受本文所述的治疗方法治疗之前，“有风险的”受试者可能患有或可能未患有可检测的疾病，并且可能已经或可能尚未表现出可检测的疾病。“有风险的”表示受试者具有一种或多种所谓的风险因素，这些风险因素是与癌症的发展相关的可测量参数，如本文所述。具有这些风险因素中的一种或多种的受试者罹患癌症的可能性高于不具有这些风险因素的受试者。
如本文所用，“组合疗法”意指包括两种或更多种不同化合物的疗法。因此，在一个方面，提供了包含本文所详述的化合物与另一种化合物的组合疗法。在一些变化形式中，组合疗法任选地包括一种或多种药用载体或赋形剂、无药学活性的化合物和/或惰性物质。
如本文所用，术语“有效量”意指在结合其功效和毒性参数时在给定的治疗形式下应当有效的本发明化合物的量。如本领域所理解的，有效量可以在一个或多个剂量中，即，可能需要单个剂量或多个剂量才能达到所需的治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的情况下可以考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他剂联合能实现或实现了理想或有益的结果，则可以考虑给予有效量的单一药剂。由于化合物的组合作用(例如，累加或协同效应)，可以任选地降低任何组合施用的化合物的合适剂量。在各种实施方案中，有效量的组合物或疗法可以(i)减少癌细胞的数目；(ii)减小肿瘤大小；(iii)抑制、推迟、减慢至一定程度并且优选地阻止癌细胞浸润到周围器官中；(iv)抑制(例如，在一定程度上减慢并且优选地停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上缓解与癌症相关联的症状中的一种或多种。在各种实实施方案中，施用的量足以缓解、减轻、降低和/或延迟一种或多种癌症症状。
如本领域内所理解，“有效量”可以在一个或多个剂量中，即，可能需要单个剂量或多个剂量才能达到所需的治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的情况下可以考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他剂联合能实现或实现了理想或有益的结果，则可以考虑给予有效量的化合物或其药用盐。
“治疗有效量”是指足以产生所需的疗效(例如，降低一种或多种癌症症状的严重程度或持续时间、稳定其严重程度或将其消除)的化合物或其盐的量。对于治疗用途，有益或所需的结果包括例如：减少由疾病引起的一种或多种症状(生化、组织学和/或行为，包括其并发症以及疾病发展期间出现的中间病理表型)，改善罹患该疾病的患者的生活质量，减少治疗该疾病所需的其他药物的剂量，增强另一种药物的效果，延迟疾病的进展，和/或延长患者的存活期。
“预防有效量”是指施用至易患癌症和/或可能罹患癌症的受试者时足以预防或减轻癌症的一种或多种将来症状的严重程度的化合物或其药用盐的量。对于预防用途、有益或所需的结果包括例如消除或降低风险、减轻将来疾病的严重程度或延迟疾病发作(包括延迟疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症以及在将来疾病发展过程中出现的中间病理表型)。
应当理解，可以在辅助设定中向受试者施用有效量(包括预防有效量)的化合物或其药用盐，所述辅助设定是指受试者有癌症史并且总体上(但不一定)响应于治疗的临床设定，包括但不限于手术(例如手术切除)、放疗和化疗。然而，由于其癌症病史，这些受试者被视为有罹患癌症的风险。“辅助设定”中的治疗或施用是指后续治疗模式。
如本文所用，“单位剂型”是指物理离散单位，其适合作为单位剂量，每一个单位含有经计算可产生所需疗效的预定数量的活性成分以及所需的药物载体或赋形剂。单位剂型可以含有单一疗法或组合疗法。
如本文所用，术语“受控释放”是指不立即释放药物的含药物制剂或其部分，即，在“受控释放”制剂的情况下，施用后药物不会立即释放到吸收池中。该术语涵盖旨在在较长时间段内逐渐释放药物化合物的贮库制剂。受控释放制剂可以包括多种药物递送系统，一般包括将药物化合物与具有所需释放特征(例如，pH依赖性或非pH依赖性溶解度、不同程度的水溶性等)的载体、聚合物或其他化合物混合并且根据所需递送途径配制混合物(例如，包衣胶囊、可植入储库、含有注射液的生物可降解胶囊等)。
如本文所用，“药用”或“药理学上可接受的”意指物质不会在生物学或其他方面不理想，例如，该物质可以并入药物组合物中，施用至患者而不引起任何显著不理想生物学效应或者以不利的方式与含有它的组合物的任何其他组分相互作用。药用载体或赋形剂优选地符合所需的毒理学和制造测试标准，和/或包括在美国食品药品管理局编写的《非活性成分指南》中。
在一些实施方案中，本发明的化合物的盐是药用盐。“药用盐”是指至少在一定程度上保留了游离(非盐)化合物的生物活性并且可以作为药物或药剂施用给受试者的那些盐。此类盐例如包括：(1)与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸形成或者与诸如乙酸、草酸、丙酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸等有机酸形成的酸加成盐；(2)当母化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)置换或与有机碱配位时形成的盐。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。药用盐可在生产过程中原地制备，或者通过使纯化过的呈其游离酸或碱形式的本发明化合物分别与合适的有机或无机碱或酸反应并在后续纯化过程中分离出如此形成的盐来制备。
如本文所用，术语“赋形剂”意指可用于药物或药剂(诸如含有本发明化合物作为活性成分的片剂)中的惰性或非活性物质。术语赋形剂可以涵盖各种物质，包括但不限于用作粘结剂、崩解剂、包衣剂、压缩/囊封助剂、乳膏或洗液、润滑剂、肠胃外施用溶液、可咀嚼片剂用物质、甜味剂或调味剂、悬浮剂/胶凝剂或湿式造粒剂的任何物质。粘结剂包括例如卡波姆、聚维酮、黄原胶等；包衣剂包括例如醋酸酞酸纤维素、乙基纤维素、结冷胶、麦芽糖糊精、肠溶衣等；压缩/囊封助剂包括例如碳酸钙、葡聚糖、dc级果糖(dc–“可直接压缩”)、dc级蜂蜜、乳糖(无水或单水合物；任选地与阿斯巴甜、纤维素或微晶纤维素组合)、dc级淀粉、蔗糖等；崩解剂包括例如交联羧甲基纤维素钠、结冷胶、羟乙酸淀粉钠等；乳膏或洗液包括麦芽糖糊精、角叉菜胶等；润滑剂包括例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酰富马酸钠等；可咀嚼片剂用物质包括例如葡聚糖、dc级果糖、乳糖(单水合物，任选地与阿斯巴甜或纤维素组合)等；悬浮剂/胶凝剂包括例如角叉菜胶、羟乙酸淀粉钠、黄原胶等；甜味剂包括例如阿斯巴甜、葡聚糖、dc级果糖、山梨糖醇、dc级蔗糖等；并且湿式造粒剂包括例如碳酸钙、麦芽糖糊精、微晶纤维素等。在一些情况下，术语“赋形剂”和“载体”可互换使用。
术语“受试者”或“患者”是指动物，诸如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠等。在某些实施方案中，受试者是人或人类患者。
术语“异常细胞生长”、“失调的细胞生长”和“过度增殖性疾病”在本申请中可以互换使用。除非另外指明，否则如本文所用的“异常细胞生长”是指不依赖正常调控机制(例如，丧失接触抑制)的细胞生长。
术语“癌症”是指受试者以失调的细胞生长为特征的疾患，其中癌细胞能够局部侵袭和/或转移至非连续部位。如本文所使用，“癌细胞”、“癌性细胞”或“肿瘤细胞”是指以这种失调的细胞生长和侵袭性为特征的细胞。术语“癌症”涵盖所有类型的癌症，包括但不限于所有形式的癌瘤、黑素瘤、母细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病，包括但不限于膀胱癌、膀胱癌瘤、脑肿瘤、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、喉癌，肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和甲状腺癌、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、室管膜瘤、尤因肉瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、横纹肌癌和肾母细胞瘤(威尔姆氏瘤)。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物或生物剂。化疗剂的实例包括烷基化剂，诸如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺
Figure BDA0003085169390000141
烷基磺酸酯，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮杂环丙烷，诸如苯佐替派(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三乙烯蜜胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三甲基蜜胺；聚乙酰(尤其布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，
Figure BDA0003085169390000142
)；β-拉帕酮；拉帕醇(lapachol)；秋水仙碱(colchicine)；桦木酸；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan)
Figure BDA0003085169390000143
CPT-11(伊立替康(irinotecan)，
Figure BDA0003085169390000144
)、乙酰基喜树碱(acetylcamptothecin)、东莨菪素(scopolectin)和9-胺基喜树碱)；苔藓抑素；培美曲塞(pemetrexed)；海绵抑素(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素；足叶草酸；替尼泊苷；念珠藻素(尤其念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；TLK-286；口服α-4整合素抑制剂CDP323；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺、甲氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑(melphalan)、新氮芥、苯芥胆留醇、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Nicolaou等,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团及相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素(bleomycins)、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、更生霉素(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括
Figure BDA0003085169390000151
吗啉基多柔比星、氰基吗啉基多柔比星、2-吡咯啉基多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射液
Figure BDA0003085169390000152
和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycins)，诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)、吉西他滨(gemcitabine)
Figure BDA0003085169390000161
替加氟
Figure BDA0003085169390000162
卡培他滨(capecitabine)
Figure BDA0003085169390000163
埃博霉素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如德诺蝶呤(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)和氟尿苷(floxuridine)；抗肾上腺剂，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯尿嘧啶(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟胺酸(elfornithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖(lentinan)；洛尼达宁(lonidainine)；类美登素(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamnol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure BDA0003085169390000164
聚糖复合物(JHS NaturalProducts，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecenes)(尤其T-2毒素、疣孢霉素A、杆孢菌素A及蛇形菌素)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)
Figure BDA0003085169390000165
达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；噻替派；类紫杉醇，例如太平洋紫杉醇
Figure BDA0003085169390000171
太平洋紫杉醇的白蛋白工程化纳米粒子制剂(ABRAXANETM)和欧洲紫杉醇
Figure BDA0003085169390000172
氯尿嘧啶；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春花碱(vinblastine)
Figure BDA0003085169390000173
铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；依弗酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)
Figure BDA0003085169390000174
奥沙利铂；甲酰四氢叶酸(leucovovin)；长春瑞滨(vinorelbine)
Figure BDA0003085169390000175
能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊班膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，诸如视黄酸；以上任一种的药用盐、酸或衍生物；以及以上两种或更多种的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙组合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的治疗方案的缩写)。
化疗剂的其他实例包括作用是调节、减少、阻断或抑制能促进癌症生长的激素的作用并且通常呈系统或全身治疗形式的抗激素剂。它们本身可以是激素。实例包括抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括
Figure BDA0003085169390000176
他莫昔芬)、雷洛昔芬
Figure BDA0003085169390000177
屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、酮洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬
Figure BDA0003085169390000178
抗孕激素；雌激素受体下调剂(ERD)；雌激素受体拮抗剂，诸如氟维司群
Figure BDA0003085169390000179
具有抑制或关闭卵巢功能的药剂，例如黄体生成素释放激素(LHRH)激动剂诸如醋酸氟维司群(
Figure BDA00030851693900001710
和
Figure BDA00030851693900001711
)、醋酸戈舍瑞林、醋酸布舍瑞林和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；以及抑制酶芳香酶(其在肾上腺中调节雌激素的生产)的芳香化酶抑制剂，诸如4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮
Figure BDA0003085169390000181
依西美坦
Figure BDA0003085169390000182
福美坦(formestanie)、法倔唑、伏氯唑
Figure BDA0003085169390000183
来曲唑
Figure BDA0003085169390000184
和阿纳托唑
Figure BDA0003085169390000185
另外，此类化疗剂的定义包括：双膦酸盐，诸如氯膦酸盐(例如
Figure BDA0003085169390000186
或
Figure BDA0003085169390000187
)、依替膦酸盐
Figure BDA0003085169390000188
NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐
Figure BDA0003085169390000189
阿仑膦酸盐
Figure BDA00030851693900001810
帕米膦酸盐
Figure BDA00030851693900001811
替洛膦酸盐
Figure BDA00030851693900001812
或利塞膦酸盐
Figure BDA00030851693900001813
以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些在涉及异常细胞增殖的信号通路中抑制基因的表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-α、Ralf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如
Figure BDA00030851693900001814
疫苗和基因治疗疫苗(例如
Figure BDA00030851693900001815
疫苗、
Figure BDA00030851693900001816
疫苗和
Figure BDA00030851693900001817
疫苗)；拓扑异构酶1抑制剂(例如，
Figure BDA00030851693900001818
)；抗雌激素诸如氟维司群；EGFR抑制剂，诸如厄洛替尼或西妥昔单抗；抗VEGF抑制剂，诸如贝伐单抗；阿林替康(arinotecan)；rmRH(例如，
Figure BDA00030851693900001819
)；17AAG(作为热休克蛋白(Hsp)90毒物的格尔德霉素衍生物)，以及任何上述项的药用盐、酸和衍生物。
“化疗剂”的定义中还包括：(i)用于调控或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫西芬(tamoxifen)(包括
Figure BDA00030851693900001820
柠檬酸他莫西芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、爱多昔芬(iodoxyfene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、酮洛昔芬、LY117018、奥那司酮(onapristone)和及
Figure BDA00030851693900001821
(柠檬酸托瑞米芬(toremifine))；(ii)抑制可调控肾上腺中的雌激素产生的酶芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、
Figure BDA00030851693900001822
(醋酸甲地孕酮)、
Figure BDA00030851693900001823
(依西美坦；Pfizer)、福美坦、法倔唑、
Figure BDA00030851693900001824
(伏氯唑(vorozole))、
Figure BDA00030851693900001825
(来曲唑；Novartis)及
Figure BDA00030851693900001826
(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，尤其抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途径中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-a、Ralf和H-Ras；(vii)核糖酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如
Figure BDA0003085169390000191
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如
Figure BDA0003085169390000192
和
Figure BDA0003085169390000193
Figure BDA0003085169390000194
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如
Figure BDA0003085169390000195
rmRH；(ix)抗血管生成剂，诸如贝伐单抗(bevacizumab)(
Figure BDA0003085169390000196
Genentech)；以及(x)以及以上任一项的药用盐、酸和衍生物。
在一些实施方案中，化疗剂是免疫治疗剂。如本文所使用，“免疫治疗剂”是增强免疫系统以帮助特异性地或非特异性地对抗癌症的化合物。免疫治疗剂包括强化免疫系统的单克隆抗体和非特异性免疫疗法，诸如细胞激素、白介素(例如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21)、干扰素(例如IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、GM-CSF、沙利度胺(
Figure BDA0003085169390000197
Celgene)、来那度胺(
Figure BDA0003085169390000198
Celgene)、泊马度胺(
Figure BDA0003085169390000199
Celgene)、咪喹莫特(imiquimod)(
Figure BDA00030851693900001910
Valeant)。可以用作化疗剂的单克隆抗体的非限制性实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Figure BDA00030851693900001911
Genentech)、贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Figure BDA00030851693900001912
Genentech)、西妥昔单抗(cetuximab)(
Figure BDA00030851693900001913
Bristol-Myers Squibb)、帕尼单抗(
Figure BDA00030851693900001914
Amgen)、依匹莫单抗(ipilimumab)(
Figure BDA00030851693900001915
Bristol-Myers Squibb)、利妥昔单抗(rituximab)(
Figure BDA00030851693900001916
Genentech)、阿仑单抗(alemtuzumab)(
Figure BDA00030851693900001917
Genzyme)、奥法木单抗(ofatumumab)(
Figure BDA00030851693900001918
Genmab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(
Figure BDA00030851693900001919
Wyeth)、贝伦妥单抗维多汀(brentuximab vedotin)(
Figure BDA00030851693900001920
Seattle Genetics)、90Y标记的替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(
Figure BDA00030851693900001921
Biogen Idec)、131I标记的托西莫单抗(tositumomab)(
Figure BDA0003085169390000201
GlaxoSmithKline)、曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine)(
Figure BDA0003085169390000202
Genentech)、布利莫单抗(blinatumomab)(
Figure BDA0003085169390000203
Amgen)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(
Figure BDA0003085169390000204
Genentech)、奥妥珠单抗(obinutuzumab)(
Figure BDA0003085169390000205
Genentech)、尼鲁单抗(nivolumab)(
Figure BDA0003085169390000206
Bristol-Myers Squibb)、喷罗珠单抗(pembrolizumab)(
Figure BDA0003085169390000207
Merck)、皮地珠单抗(pidilizumab)(CureTech)、MPDL3280A(描述于WO2010/077634中，以引用的方式整体并入本文中)、MDX-1105(描述于WO2007/005874中，以引用的方式整体并入本文中)和MEDI4736(描述于WO2011/066389和US2013/034559中，二者各自以引用的方式整体并入本文中)。另一种可用免疫治疗剂是AMP-224(描述于WO2010/027827和WO2011/066342中，二者各自整体并入本文中)。
化合物
本文公开的化合物是式(I)的3-羰基氨基-8-氨基异喹啉化合物或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物。这些化合物是有用的HPK1抑制剂。
在一个方面，提供了一种式(I)化合物，
Figure BDA0003085169390000208
或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中：
R15是-OR16、-SR16或-NR17R18；
每一个R16独立地为C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R16的所述C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
R17是氢或C1-6烷基；
R18是C1-6烷基、C3-10环烷基或3元至14元杂环基；其中R18的所述C1-6烷基、C3-10环烷基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
R3是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-8环烷基、3元至14元杂环基或–OR7；其中R3的所述C1-6烷基、C3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元至14元杂芳基；
R5是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、-C(O)R6、-C(O)OR7、-C(O)NR8aR8b、-OR7、-OC(O)R6、-OC(O)NR8aR8b、-SR7、-S(O)R9、-S(O)2R9、-S(O)2NR8aR8b、-P(O)R9aR9b、-NR8aR8b、-N(R8)C(O)R6、-N(R8)C(O)OR7、-N(R8)C(O)NR8aR8b、-N(R8)S(O)2R9或-N(R8)S(O)2NR8aR8b；其中R5的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R6独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R6的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R7独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R7的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R8独立地为氢或C1-6烷基；
每一个R8a和R8b独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R8a和R8b的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R8a和R8b连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R9独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R9的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R9a和R9b独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C1-6烷基；其中R9a和R9b的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R9a和R9b连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R10独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra、-C(O)ORb、-C(O)NRcRd、-ORb、-OC(O)Ra、-OC(O)NRcRd、-SRb、-S(O)Re、-S(O)2Re、-S(O)(＝NH)Re、-S(O)2NRcRd、-NRcRd、-N(Rf)C(O)Ra、-N(Rf)C(O)ORb、-N(Rf)C(O)NRcRd、-N(Rf)S(O)2Re、-N(Rf)S(O)2NRcRd或-P(O)RgRh；其中R10的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Ra独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Ra的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rb独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rb的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rc和Rd独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rc和Rd的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个Re独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Re的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rf独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg和Rh的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
或Rg和Rh连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R11独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra1、-C(O)ORb1、-C(O)NRc1Rd1、-ORb1、-OC(O)Ra1、-OC(O)NRc1Rd1、-SRb1、-S(O)Re1、-S(O)2Re1、-S(O)2NRc1Rd1、-NRc1Rd1、-N(Rf1)C(O)Ra1、-N(Rf1)C(O)ORb1、-N(Rf1)C(O)NRc1Rd1、-N(Rf1)S(O)2Re1、-N(Rf1)S(O)2NRc1Rd1或-P(O)Rg1Rh1；其中R11的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Ra1独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Ra1的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rb1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rb1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rc1和Rd1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rc1和Rd1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
或Rc1和Rd1连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的4元至8元杂环基；
每一个Re1独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Re1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rf1独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg1和Rh1独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg1和Rh1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
或Rg1和Rh1连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的4元至8元杂环基；
每一个R12独立地为氧代、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基、3元至6元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra2、-C(O)ORb2、-C(O)NRc2Rd2、-ORb2、-OC(O)Ra2、-OC(O)NRc2Rd2、-S(O)2Re2、-S(O)2NRc2Rd2、-NRc2Rd2、-N(Rf2)C(O)Ra2、-N(Rf2)C(O)ORb2、-N(Rf2)C(O)NRc2Rd2、-N(Rf2)S(O)2Re2、-N(Rf2)S(O)2NRc2Rd2或-P(O)Rg2Rh2；其中R12的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Ra2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Ra2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rb2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至6元杂环基；其中Rb2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rc2和Rd2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至8元杂环基；其中Rc2和Rd2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
或Rc2和Rd2连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的4元至6元杂环基；
每一个Re2独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Re2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rf2独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg2和Rh2独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、3元至8元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg2和Rh2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
或Rg2和Rh2连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的4元至6元杂环基；并且
每一个R13独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C1-6烷基)、氰基、C1-6烷基或C1-6卤代烷基。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)，或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R15是-OR16、-SR16或-NR17R18。
在一些实施方案中，R15是-OR16或-SR16；其中每一个R16独立地为C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R16的所述C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在这些实施方案中的一些中，R15是-OR16。在这些实施方案中的一些中，R15是-SR16。
在一个方面，提供了一种式(IA)或式(IC)的化合物，
Figure BDA0003085169390000271
或其盐(例如药用盐)，其中：
每一个R16独立地为C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R16的所述C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；并且
R3、R4、R5和R10如针对本文详述的式(I)或变化形式所定义。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)、式(IA)或式(IC)，或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R16独立地为任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的7元至14元杂芳基；或任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。在一些实施方案中，R16是被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；或任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。
在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。在这些实施方案中的一些中，R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至10元杂环基。在这些实施方案中的一些中，R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至7元单环杂环基。在这些实施方案中的一些中，R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的6元至10元双环杂环基。
在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基。在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-8环烷基。
在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的7元至14元杂芳基。在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的稠合7元至14元杂芳基；其中所述杂芳基含有部分饱和环，且连接点在所述部分饱和环处。在一个变化形式中，R16是5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基。
在一些实施方案中，R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基。在这些实施方案中的一些中，R16是C1-6烷基或C1-6卤代烷基。在这些实施方案中的一些中，R16是C1-6烷基(例如异丙基或新戊基)。在这些实施方案中的一些中，R16是被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基。在一个变化形式中，R16是C1-6卤代烷基(例如2,2,2-三氟乙基)。
在这些实施方案中的一些中，R16是-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19是C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9；其中R19的所述C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R19是任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂芳基；或任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的3元至10元杂环基。在一个变化形式中，R19是任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；或任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的苯基。在另一个变化形式中，R19是氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9。在另一个变化形式中，R19是-OCH3、–NH2或-S(O)2CH3。
在这些实施方案中的一些中，R16选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000291
Figure BDA0003085169390000301
Figure BDA0003085169390000311
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R16选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000312
Figure BDA0003085169390000321
Figure BDA0003085169390000322
其中波浪线表示连接点。
在这些实施方案中的一些中，R16选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000323
各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；其中波浪线表示连接点。在一些实施方案中，各自独立地任选地被1个独立地选自R10的取代基取代。在这些实施方案中的一些中，R10独立地为C1-6烷基(例如甲基)或氰基。在这些实施方案中的一些中，R10独立地为C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，R15是-NR17R18，其中R17是氢或C1-6烷基；R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；或任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基；或R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基。
在一个方面，提供了一种式(IB)化合物，
Figure BDA0003085169390000331
或其盐(例如药用盐)，其中：
R17是氢或C1-6烷基；
R18是C1-6烷基、C3-10环烷基或3元至14元杂环基；其中R18的所述C1-6烷基、C3-10环烷基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；并且
R3、R4、R5和R10如针对本文详述的式(I)或变化形式所定义。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或式(IB)，或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R17是氢或C1-6烷基。在这些实施方案中的一些中，R17是氢。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或式(IB)，或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；或任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C1-6烷基。
在一些实施方案中，R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。在这些实施方案中的一些中，R18选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000341
Figure BDA0003085169390000351
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R18选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000352
Figure BDA0003085169390000361
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基。在这些实施方案中的一些中，R18选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000362
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R18选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000371
Figure BDA0003085169390000372
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R18是C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19是C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9；其中R19的所述C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在这些实施方案中的一些中，R19是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。在这些实施方案中的一些中，R19是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基。在一个变化形式中，R19是任选地被取代的吡唑基(例如1-甲基吡唑-4-基)、环丙基或氰基。
在一些实施方案中，R18选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000373
Figure BDA0003085169390000381
Figure BDA0003085169390000382
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或式(IB)，或其盐(例如药用盐)、溶剂合物(例如水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基。在一个变化形式中，R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂环基。在一个变化形式中，R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成5元或6元杂环基(例如吡咯烷-1-基或哌啶-1-基)。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)，或其盐(例如药用盐)，其中R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元至14元杂芳基。在一些实施方案中，R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元至10元杂芳基。在一些实施方案中，R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂芳基。在一些实施方案中，R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元杂芳基。在一些实施方案中，R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的6元杂芳基。
在一些实施方案中，R4是
Figure BDA0003085169390000391
其中波浪线表示连接点，
R4a、R4b和R4c各自独立地为氢或R10，或者两个邻近的R4(a-c)连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合5元或6元杂芳基或者任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合5元或6元杂环基。
在一些实施方案中，R4是
Figure BDA0003085169390000392
其中波浪线表示连接点，R4a、R4b和R4c各自独立地为氢或R10，或者两个邻近的R4(a-c)连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合5元至10元杂环基或任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合C5-8环烷基。
在这些实施方案中的一些中，R4选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000393
其中波浪线表示连接点。
在一些实施方案中，R4是
Figure BDA0003085169390000394
其中波浪线表示连接点；R4a是卤素、C1-6烷基或C3-6环烷基；并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基。
在一些实施方案中，R4是
Figure BDA0003085169390000401
其中波浪线表示连接点；R4a是C1-6烷基(例如甲基或乙基)，并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成稠合5元至10元杂环基。
在这些实施方案中的一些中，R4选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000402
其中波浪线表示连接点。
在这些实施方案中的一些中，R4选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000411
其中波浪线表示连接点。
在这些实施方案中的一些中，R4是被1个选自R10的取代基取代的
Figure BDA0003085169390000412
其中波浪线表示连接点。在这些实施方案中的一些中，R10独立地为C1-6烷基(例如甲基或乙基)。在这些实施方案中的一些中，R4是
Figure BDA0003085169390000413
希望并且应当理解，针对式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)或式(IC)所描述的R15的每一个和每个变化形式可以与针对式(I)、式(IA)、式(IB)或式(IC)所描述的R4的每一个和每个变化形式组合，就像具体地和个别地描述每一个和每个组合一样。举例来说，在一些实施方案中，其中R15是(a)、(b)或(c)：
(a)-OR16，其中R16是(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)：
(i)具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至10元杂环基；
(ii)任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；
(iii)C1-6烷基；
(iv)C1-6卤代烷基；或
(v)-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19是任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂芳基；任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的3元至10元杂环基；任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的苯基；氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9；
(b)-NR17R18，其中R17是氢，且R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基；任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基；C1-6卤代烷基或-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19是任选地被取代的吡唑基(例如，1-甲基吡唑-4-基)、环丙基或氰基；或
(c)-SR16；
并且R4选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000421
其中波浪线表示连接点。在这些实施方案中的一些中，R4是
Figure BDA0003085169390000422
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)，或其盐(例如药用盐)，其中R3是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-8环烷基、3元至14元杂环基或–OR7；其中R3的所述C1-6烷基、C3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一些实施方案中，R3是氢、氟、氯、氰基、羟基、C3-4环烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-O(C1-6烷基)或-O(C1-6卤代烷基)。在一个变化形式中，R3是氢、氟、氰基或C1-6烷基(例如甲基)。在另一个变化形式中，R3是氢或氟。在另一个变化形式中，R3是氢。
在一些实施方案中，所述化合物具有式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)，或其盐(例如药用盐)，其中R5是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、-C(O)R6、-C(O)OR7、-C(O)NR8aR8b、-OR7、-OC(O)R6、-OC(O)NR8aR8b、-SR7、-S(O)R9、-S(O)2R9、-S(O)2NR8aR8b、-P(O)R9aR9b、-NR8aR8b、-N(R8)C(O)R6、-N(R8)C(O)OR7、-N(R8)C(O)NR8aR8b、-N(R8)S(O)2R9或-N(R8)S(O)2NR8aR8b；其中R5的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一些实施方案中，R5是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-8环烷基、3元至14元杂环基、-OR7、-NR8aR8b或-N(R8)C(O)R6；其中R5的所述C1-6烷基、C3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一些实施方案中，R5是氢、氟、氯、氰基、羟基、C3-4环烷基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-O(C1-6烷基)或-O(C1-6卤代烷基)。在一个变化形式中，R5是氢、氟、氰基或C1-6烷基。在另一个变化形式中，R5是氢、氟或氯。在另一个变化形式中，R5是氢。在另一个变化形式中，R5是氟。
希望并且应当理解，针对式(I)描述的R15和R4或其组合的每一个和每个变化形式可以与针对式(I)、或式(IA)、式(IB)或式(IC)所描述的R3和R5或其组合的每一个和每个变化形式组合，就像具体地和个别地描述每一个和每个组合一样。举例来说，在一些实施方案中，R3是氢；R5是氟；并且R4如针对式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)所详述。在式(I)化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，R15是如以上所详述的(a)、(b)或(c)；R3是氢；R5是氟；并且R4选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003085169390000441
其中波浪线表示连接点。
在式(I)或适用时其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，每一个R6独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R6的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R6是C1-6烷基、C3-8环烷基或3元至12元杂环基；其中R6的所述C1-6烷基、C3-8环烷基和3元至12元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R6是C1-6烷基(例如甲基)。在一个变化形式中，R6是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至12元杂环基。
在式(I)或适用时其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，每一个R7独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R7的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R7是氢、任选地被R10取代的C1-6烷基。在一个变化形式中，R7是C1-6烷基。在一个变化形式中，R7是3元至12元杂环基。
在式(I)或适用时其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，每一个R8独立地为氢或C1-6烷基；且每一个R8a和R8b独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R8a和R8b的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；或者R8a和R8b连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R8是氢或C1-6烷基(例如甲基)。在一个变化形式中，每一个R8a和R8b独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，每一个R8a和R8b是氢。在一个变化形式中，R8a和R8b连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被R10取代的5元至7元杂环基。
在式(I)或适用时其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，每一个R9独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R9的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。在一个变化形式中，R9是任选地被R10取代的C1-6烷基；或任选地被R10取代的C6-10芳基。在一个变化形式中，R9是C1-6烷基(例如甲基)。
在式(I)或适用时其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其盐(例如药用盐)的一些实施方案中，每一个R10独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra、-C(O)ORb、-C(O)NRcRd、-ORb、-OC(O)Ra、-OC(O)NRcRd、-SRb、-S(O)Re、-S(O)2Re、-S(O)(＝NH)Re、-S(O)2NRcRd、-NRcRd、-N(Rf)C(O)Ra、-N(Rf)C(O)ORb、-N(Rf)C(O)NRcRd、-N(Rf)S(O)2Re或-N(Rf)S(O)2NRcRd；其中R10的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。
在一个变化形式中，R10独立地为氧代、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra、-C(O)NRcRd、-ORb、-S(O)2Re、-S(O)2NRcRd、-NRcRd；其中R10的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。
在一个变化形式中，R10独立地为氧代；任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的C1-6烷基；任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的5元至10元杂芳基；卤素、-ORb、-S(O)(＝NH)Re、-NRcRd、-N(Rf)C(O)Ra或-N(Rf)S(O)2NRcRd。
在一个变化形式中，R10独立地为氧代、卤素、氰基、任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的C1-6烷基或者-ORb。
在一个变化形式中，R10独立地为-NRcRd、-N(Rf)C(O)Ra、-N(Rf)C(O)ORb、-N(Rf)C(O)NRcRd、-N(Rf)S(O)2Re或-N(Rf)S(O)2NRcRd。
在一个变化形式中，R10独立地为氧代、-ORb、-OC(O)Ra、-OC(O)NRcRd、-SRb、-S(O)Re、-S(O)2Re、-S(O)(＝NH)Re或-S(O)2NRcRd。
在一个变化形式中，每一个R10独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra、-C(O)ORb、-C(O)NRcRd；其中R10的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。
在一个变化形式中，每一个R10独立地为各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基。
在一个变化形式中，R10是任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的C1-6烷基。在一个变化形式中，R10是任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的3元至12元杂环基。
在一个变化形式中，R10是卤素、氰基、-NRcRd、-C(O)NRcRd、-ORb、-S(O)2Re、C1-6卤代烷基、-(C1-6亚烷基)-OH或-(C1-6亚烷基)-OH。
在一个变化形式中，R10是羟基、氰基、卤素、-CHF2、-CF3、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-O(C1-6烷基)、–SO2(C1-6烷基)、-S(O)2NRcRd、-C(O)NRcRd或-N(Rf)C(O)Ra。
在一个变化形式中，R10独立地为C1-6烷基(例如甲基)或氰基。在一个变化形式中，R10独立地为C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Ra独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Ra的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。在一个变化形式中，Ra独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Ra是氢。在一个变化形式中，Ra是C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Rb独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rb的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。在一个变化形式中，Rb独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rb是氢。在一个变化形式中，Rb是C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Rc和Rd独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rc和Rd的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；或者Rc和Rd与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的4元至12元杂环基。在一个变化形式中，每一个Rc和Rd独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rc和Rd中一个是氢且Rc和Rd中另一个是C1-6烷基。在一个变化形式中，每一个Rc和Rd是氢。在一个变化形式中，每一个Rc和Rd独立地为C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Re独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Re的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代。在一个变化形式中，Re独立地为C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Rf独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rf是氢。
在一些实施方案中，每一个R11独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra1、-C(O)ORb1、-C(O)NRc1Rd1、-ORb1、-OC(O)Ra1、-OC(O)NRc1Rd1、-SRb1、-S(O)Re1、-S(O)2Re1、-S(O)2NRc1Rd1、-NRc1Rd1、-N(Rf1)C(O)Ra1、-N(Rf1)C(O)ORb1、-N(Rf1)C(O)NRc1Rd1、-N(Rf1)S(O)2Re1或-N(Rf1)S(O)2NRc1Rd1；其中R11的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代。
在一个变化形式中，每一个R11独立地为氧代、任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的C1-6烷基或者-ORb1。
在一个变化形式中，每一个R11独立地为氧代、C1-6烷基、C3-6环烷基、3元至8元杂环基、卤素、氰基或-ORb1；其中R11的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代。
在一个变化形式中，R11是任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的C1-6烷基。在一个变化形式中，R11是任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的3元至8元杂环基。
在一个变化形式中，R11是卤素、氰基、-NRc1Rd1、-C(O)NRc1Rd1、-ORb1、-S(O)2Re1、C1-6卤代烷基、-(C1-6亚烷基)-OH或-(C1-6亚烷基)-OH。
在一个变化形式中，R11是羟基、氰基、卤素、-CHF2、-CF3、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-O(C1-6烷基)、–SO2(C1-6烷基)、-S(O)2NRc1Rd1、-C(O)NRc1Rd1或-N(Rf1)C(O)Ra1。
在一个变化形式中，R11是卤素、氰基、-O(C1-6烷基)、-O(C1-6亚烷基)-NH2或-(C1-6亚烷基)-OH。
在一些实施方案中，每一个Ra1独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Ra1的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代。在一个变化形式中，Ra1独立地为氢或C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Rb1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rb1的C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代。在一个变化形式中，Rb1独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rb1是氢。在一个变化形式中，Rb1是C1-6烷基(例如甲基)。
在一些实施方案中，每一个Rc1和Rd1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rc1和Rd1的C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；或者Rc1和Rd1与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的4元至8元杂环基。在一个变化形式中，每一个Rc1和Rd1独立地为氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Re1独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Re1的C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代。在一个变化形式中，Re1独立地为C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Rf1独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rf1为氢。
在一些实施方案中，每一个R12独立地为氧代、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基、3元至6元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra2、-C(O)ORb2、-C(O)NRc2Rd2、-ORb2、-OC(O)Ra2、-OC(O)NRc2Rd2、-S(O)2Re2、-S(O)2NRc2Rd2、-NRc2Rd2、-N(Rf2)C(O)Ra2、-N(Rf2)C(O)ORb2、-N(Rf2)C(O)NRc2Rd2、-N(Rf2)S(O)2Re2或-N(Rf2)S(O)2NRc2Rd2；其中R12的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代。
在一个变化形式中，每一个R12独立地为氧代、卤素、氰基、-ORb2或任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的C1-6烷基。在一个变化形式中，每一个R12独立地为氧代、卤素、氰基或羟基。
在一个变化形式中，R12是任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的C1-6烷基。
在一个变化形式中，R12为氧代、羟基、C1-6烷基或-O(C1-6烷基)。
在一些实施方案中，每一个Ra2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Ra2的C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代。在一个变化形式中，Ra2独立地为氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Rb2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至6元杂环基；其中Rb2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代。在一个变化形式中，Rb2是氢。
在一些实施方案中，每一个Rc2和Rd2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至8元杂环基；其中Rc2和Rd2的C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；或者Rc2和Rd2与它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的4元至6元杂环基。在一个变化形式中，每一个Rc2和Rd2独立地为氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Re2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Re2的C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代。在一个变化形式中，Re2独立地为C1-6烷基。
在一些实施方案中，每一个Rf2独立地为氢或C1-6烷基。在一个变化形式中，Rf2是氢。
在一些实施方案中，每一个R13独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C1-6烷基)、氰基、C1-6烷基或C1-6卤代烷基。
在一个变化形式中，每一个R13独立地为卤素、羟基、-O(C1-6烷基)、氰基或C1-6烷基。
在一个变化形式中，R13为氧代、羟基、C1-6烷基或-O(C1-6烷基)。
另外提供了一种式(IA)化合物：
Figure BDA0003085169390000521
或其盐(例如药用盐)，其中R3、R4、R5和R16如本文中针对式(I)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IA-1)化合物：
Figure BDA0003085169390000522
或其盐(例如药用盐)，其中R4和R16如本文中针对式(IA)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IA-2)化合物：
Figure BDA0003085169390000523
或其盐(例如药用盐)，其中R4a是C1-6烷基；R4b和R4c独立地为氢或R10，或R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基；并且R10和R16如本文中针对式(IA)或其适用变化形式所详述。在一个变化形式中，R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂环基；R4a是C1-6烷基(例如甲基)；并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合6元杂环基。
还提供了一种式(IB)化合物：
Figure BDA0003085169390000531
或其盐(例如药用盐)，其中R3、R4、R5、R17和R18如本文中针对式(I)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IB-1)化合物：
Figure BDA0003085169390000532
或其盐(例如药用盐)，其中R3、R4、R5和R18如本文中针对式(IB)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IB-2)化合物：
Figure BDA0003085169390000533
或其盐(例如药用盐)，其中R4a是C1-6烷基；R4b和R4c独立地为氢或R10，或R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基；并且R10和R18如本文中针对式(IB)或其适用变化形式所详述。
还提供了一种式(IC)化合物：
Figure BDA0003085169390000541
或其盐(例如药用盐)，其中R3、R4、R5和R16如本文中针对式(I)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IC-1)化合物：
Figure BDA0003085169390000542
或其盐(例如药用盐)，其中R4和R16如本文中针对式(IC)或其适用变化形式所详述。
在一些实施方案中，提供了一种式(IC-2)化合物：
Figure BDA0003085169390000543
或其盐(例如药用盐)，其中R4a是C1-6烷基；R4b和R4c独立地为氢或R10，或R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基；并且R10和R16如本文中针对式(IC)或其适用变化形式所详述。在一些实施方案中，R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至10元杂环基。在一个变化形式中，R16是5元或6元杂环基(例如四氢-2H-吡喃-4-基)；R4a是C1-6烷基(例如甲基)；并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成稠合6元杂环基。
表1中列出了代表性化合物。应当理解，下表中通过化合物编号和化合物名称包括个别对映异构体和非对映异构体，并且由此可以容易地确定其相应结构。在一些情况下，对映异构体或非对映异构体通过其各自的性质来鉴定，例如，在手性HPLC上的保留时间或其生物活性，并且手性中心的绝对立体构象是任意指定的。
4.02.1表1
Figure BDA0003085169390000551
Figure BDA0003085169390000561
Figure BDA0003085169390000571
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Figure BDA0003085169390001561
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Figure BDA0003085169390001611
Figure BDA0003085169390001621
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401-584、601和701-756号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401、402、403、403a、403b、404、405、405a、405b、406、407、408、408a、408b、409、409a、409b、410、410a、410b、411、411a、411b、412、412a、412b、413、414、414a、414b、415、415a、415b、416、416a、416b、417、418、418a、418b、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、432a、432b、433、433a、433b、434、435、436、437、437a、437b、438、439、439a、439b、440、440a、440b、441、441a、441b、441c、441d、442、442a、442b、442c、442d、443、444、444a、444b、445、445a、445b、445c、445d、446、447、447a、447b、448、449、450、451、451a、451b、452、452a、452b、452c、452d、453、454、455、456、457、458、459、460、461、461a、461b、462、463、464、465、466、467、467a、467b、467c、467d、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、477a、477b、477c、477d、478、478a、478b、479、479a、479b、480、480a、480b、481、481a、481b、482、482a、482b、482c、482d、483、483a、483b、484、484a、484b、485、485a、485b、486、486a、486b、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、499a、499b、500、501、502、502a、502b、503、504、504a、504b、505、506、506a、506b、507、507a、507b、508、509、510、510a、510b、510c、510d、511、511a、511b、512、512a、512b、513、513a、513b、514、514a、514b、515、515a、515b、515c、515d、516、516a、516b、516c、516d、517、517a、517b、518、518a、518b、518c、518d、519、519a、519b、520、520a、520b、521、522、522a、522b、523、523a、523b、524、525、525a、525b、526、526a、526b、526c、526d、527、527a、527b、528、528a、528b、529、529a、529b、530、530a、530b、531、531a、531b、531c、531d、532、533、533a、533b、533c、533d、534、534a、534b、535、535a、535b、535c、535d、536、536a、536b、537、537a、537b、538、538a、538b、538c、538d、539、539a、539b、540、541、541a、541b、542、542a、542b、542c、542d、543、543a、543b、544、544a、544b、544c、544d、545、545a、545b、545c、545d、546、546a、546b、546c、546d、547、547a、547b、548、548a、548b、548c、548d、549、549a、549b、550、550a、550b、551、551a、551b、552、553、553a、553b、554、554a、554b、555、555a、555b、555c、555d、556、556a、556b、556c、556d、557、557a、557b、558、558a、558b、558c、558d、559、559a、559b、559c、559d、560、560a、560b、560c、560d、561、561a、561b、561c、561d、562、562a、562b、562c、562d、563、563a、563b、563c、563d、566、566a、566b、566c、566d、567、567a、567b、567c、567d、567e、567f、567g、567h、568、568a、568b、568c、568d、569、569a、569b、569c、569d、570、570a、570b、570c、570d、571、571a、571b、572、572a、572b、573、573a、573b、573c、573d、574、574a、574b、575、575a、575b、576、576a、576b、577、577a、577b、578、578a、578b、579、580、581、581a、581b、581c、581d、582、582a、582b、582c、582d、583、583a、583b、583c、583d、584、584a、584b、584c、584d、601、701、702、703、703a、703b、703c、704、705、706、707、708、709、710、710a、710b、711、711a、711b、712、712a、712b、712c、712d、713、713a、713b、714、715、716、717、718、719、719a、719b、720、721、722、722a、722b、723、723a、723b、723c、723d、724、724a、724b、725、726、726a、726b、726c、726d、727、727a、727b、727c、727d、728、728a、728b、728c、728d、729、729a、729b、729c、729d、730、730a、730b、730c、730d、731、732、732a、732b、733、733a、733b、734、734a、734b、735、736、736a、736b、736c、736d、737、738、739、740、740a、740b、741、742、743、744、745、746、747、747a、747b、747c、747d、748、748a、748b、749、750、750a、750b、750c、750d、751、752、753、754、755和756号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401-456、458-494和496-509、601、701-720和722-745号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401、402、403、403a、403b、404、405、405a、405b、406、407、408、408a、408b、409、409a、409b、410、410a、410b、411、411a、411b、412、412a、412b、413、414、414a、414b、415、415a、415b、416、416a、416b、417、418、418a、418b、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、432a、432b、433、433a、433b、434、435、436、437、437a、437b、438、439、439a、439b、440、440a、440b、441、441a、441b、442、442a、442b、442c、442d、443、444、444a、444b、445、445a、445b、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、601、701、702、703、703a、703b、703c、704、705、706、707、708、709、710、710a、710b、711、711a、711b、712、712a、712b、712c、713、713a、713b、714、715、716、717、718、719、720、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743,744和745号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的457、495、510-563和566-584号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401-563和566-584号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401、402、403、403a、403b、404、405、405a、405b、406、407、408、408a、408b、409、409a、409b、410、410a、410b、411、411a、411b、412、412a、412b、413、414、414a、414b、415、415a、415b、416、416a、416b、417、418、418a、418b、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、432a、432b、433、433a、433b、434、435、436、437、437a、437b、438、439、439a、439b、440、440a、440b、441、441a、441b、441c、441d、442、442a、442b、442c、442d、443、444、444a、444b、445、445a、445b、445c、445d、446、447、447a、447b、448、449、450、451、451a、451b、452、452a、452b、452c、452d、453、454、455、456、457、458、459、460、461、461a、461b、462、463、464、465、466、467、467a、467b、467c、467d、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、477a、477b、477c、477d、478、478a、478b、479、479a、479b、480、480a、480b、481、481a、481b、482、482a、482b、482c、482d、483、483a、483b、484、484a、484b、485、485a、485b、486、486a、486b、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、499a、499b、500、501、502、502a、502b、503、504、504a、504b、505、506、506a、506b、507、507a、507b、508、509、510、510a、510b、510c、510d、511、511a、511b、512、512a、512b、513、513a、513b、514、514a、514b、515、515a、515b、515c、515d、516、516a、516b、516c、516d、517、517a、517b、518、518a、518b、518c、518d、519、519a、519b、520、520a、520b、521、522、522a、522b、523、523a、523b、524、525、525a、525b、526、526a、526b、526c、526d、527、527a、527b、528、528a、528b、529、529a、529b、530、530a、530b、531、531a、531b、531c、531d、532、533、533a、533b、533c、533d、534、534a、534b、535、535a、535b、535c、535d、536、536a、536b、537、537a、537b、538、538a、538b、538c、538d、539、539a、539b、540、541、541a、541b、542、542a、542b、542c、542d、543、543a、543b、544、544a、544b、544c、544d、545、545a、545b、545c、545d、546、546a、546b、546c、546d、547、547a、547b、548、548a、548b、548c、548d、549、549a、549b、550、550a、550b、551、551a、551b、552、553、553a、553b、554、554a、554b、555、555a、555b、555c、555d、556、556a、556b、556c、556d、557、557a、557b、558、558a、558b、558c、558d、559、559a、559b、559c、559d、560、560a、560b、560c、560d、561、561a、561b、561c、561d、562、562a、562b、562c、562d、563、563a、563b、563c、563d、566、566a、566b、566c、566d、567、567a、567b、567c、567d、567e、567f、567g、567h、568、568a、568b、568c、568d、569、569a、569b、569c、569d、570、570a、570b、570c、570d、571、571a、571b、572、572a、572b、573、573a、573b、573c、573d、574、574a、574b、575、575a、575b、576、576a、576b、577、577a、577b、578、578a、578b、579、580、581、581a、581b、581c、581d、582、582a、582b、582c、582d、583、583a、583b、583c、583d、584、584a、584b,584c和584d号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401-456、458-494和496-509号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的401、402、403、403a、403b、404、405、405a、405b、406、407、408、408a、408b、409、409a、409b、410、410a、410b、411、411a、411b、412、412a、412b、413、414、414a、414b、415、415a、415b、416、416a、416b、417、418、418a、418b、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、432a、432b、433、433a、433b、434、435、436、437、437a、437b、438、439、439a、439b、440、440a、440b、441、441a、441b、442、442a、442b、442c、442d、443、444、444a、444b、445、445a、445b、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508和509号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的457、495、510-563和566-584号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的701-756号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的701、702、703、703a、703b、703c、704、705、706、707、708、709、710、710a、710b、711、711a、711b、712、712a、712b、712c、712d、713、713a、713b、714、715、716、717、718、719、719a、719b、720、721、722、722a、722b、723、723a、723b、723c、723d、724、724a、724b、725、726、726a、726b、726c、726d、727、727a、727b、727c、727d、728、728a、728b、728c、728d、729、729a、729b、729c、729d、730、730a、730b、730c、730d、731、732、732a、732b、733、733a、733b、734、734a、734b、735、736、736a、736b、736c、736d、737、738、739、740、740a、740b、741、742、743、744、745、746、747、747a、747b、747c、747d、748、748a、748b、749、750、750a、750b、750c、750d、751、752、753、754、755和756号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的701-720和722-745号化合物或其盐(例如，药用盐)。在一些实施方案中，所述化合物选自表1中的701、702、703、703a、703b、703c、704、705、706、707、708、709、710、710a、710b、711、711a、711b、712、712a、712b、712c、713、713a、713b、714、715、716、717、718、719、720、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744和745号化合物，或其盐(例如药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物选自表1中的721和746-756号化合物或其盐(例如，药用盐)。
在一些实施方案中，所提供的化合物是表1中的601号化合物或其盐(例如，药用盐)。
本文所描述的式(I)化合物或其盐可以呈立体异构形式存在(例如，它含有一个或多个不对称碳原子)。个别立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本文所公开的主题的范围内。同样，应当理解，式(I)的化合物或盐可以呈除该式中所示以外的互变异构形式存在，并且这些也包括在本文所公开的主题的范围内。应当理解，本文所公开的主题包括本文所述的特定组的组合和子集。本文所公开的主题的范围包括立体异构体的混合物，以及纯化过的对映异构体或对映异构体/非对映异构体富集的混合物。应当理解，本文所公开的主题包括本文所定义的特定组的组合和子集。
本文所公开的主题还包括本文所述的化合物的同位素标记形式，但一个或多个原子被原子质量或质量数与自然界中通常发现的原子质量或质量数不同的原子取代的情况除外。可并入本文所述的化合物及其药用盐中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。举例来说，本文所公开的化合物包括其中一个或多个氢原子被氘置换或富集的形式。
本文所公开的主题包括式(I)化合物的前药、代谢物、衍生物和药用盐。式(I)化合物的代谢物包括通过包括使式(I)化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段的过程产生的化合物。
如果式(I)化合物是碱，则所需的药用盐可以通过本领域可用的任何合适的方法来制备，例如，用诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等无机酸用诸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙磺酸)等有机酸处理游离碱。
如果式(I)化合物是酸，则可以通过任何合适的方法来制备所需的药用盐，例如，用诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等无机或有机碱处理游离酸。合适的盐的说明性实例包括但不限于来源于诸如甘氨酸和精氨酸等氨基酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及诸如哌啶、吗啉和哌嗪等环胺的有机盐，以及来源于钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝及锂的无机盐。
式(I)化合物可以呈“前药”形式，其包括具有可以在体内代谢的部分的化合物。总体来说，前药在体内被酯酶或通过其他机制代谢为活性药物。前药的实例及其用途在本领域中是众所周知的(参见例如Berge等(1977)“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.66:1-19)。前药可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过使呈游离酸形式的纯化过的化合物或羟基与合适的酯化剂分别反应来制备。羟基基团可以通过用羧酸处理而转化为酯。前药部分的实例包括取代和未取代的、支链或无支链低级烷基酯部分(例如丙酸酯)、低级烯基酯、二低级烷基-氨基低级烷基酯(例如，二甲基氨基乙基酯)、酰基氨基低级烷基酯(例如，乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如，新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基-低级烷基酯(例如，苯甲基酯)、取代的(例如，用甲基、卤代或甲氧基取代基取代)芳基和芳基-低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二低级烷基酰胺和羟基酰胺。还包括在体内通过其他机制转化为活性形式的前药。在一些方面，本发明的化合物是本文中任何式的前药。
式(I)化合物可以通过通用合成方法和如本文所述的实施例以及本领域已知方法中所描述的程序来制备。
药物组合物和制剂
本发明公开的化合物可以与药用载体或赋形剂一起配制成药物组合物。
可以根据标准药学实践将式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和(IC)的化合物配制成药物组合物。根据该方面，提供了包含式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物连同药用赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物。
通过混合式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物和载体、稀释剂或赋形剂来制备典型制剂。合适的载体、稀释剂和赋形剂对本领域技术人员是众所周知的，并且包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可膨胀聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油类、溶剂、水等材料。所使用的特定载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物的方式和目的。总体上基于业内人士公认安全(GRAS)的溶剂来选择溶剂以施用给哺乳动物。总体来说，安全的溶剂是无毒水性溶剂，诸如水以及在水中可溶或可混溶的其他无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等及其混合物。制剂还可以包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂和其他已知的添加剂，以提供药物(即，式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药物组合物)的美观呈现或有助于制造药物产品(例如，药物)。
可以使用常规的溶解和混合程序来制备制剂。举例来说，在一种或多种上述赋形剂存在下，将原料药(即，式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物，或者式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物的稳定形式(例如，与环糊精衍生物或其他已知络合剂的复合物))溶解在合适的溶剂中。通常将式(I)化合物配制成药物剂型，以提供容易控制的药物剂量并使患者能够顺应处方方案。
取决于用于施用药物的方法，可以用多种方式包装用于施用的药物组合物(或制剂)。一般来说，用于分配的制品包括药物制剂以适当形式寄存在其中的容器。合适的容器对本领域技术人员是众所周知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等材料。容器还可以包括干预防护组件，以防止不慎接触包装的内容物。另外，容器上贴有描述容器内容物的标签。标签上还可能包括适当的警告。
可以针对各种施用途径和类型制备药物制剂。举例来说，可以任选地将具有所需纯度的式(I)化合物与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合(Remington’sPharmaceutical Sciences(1980)第16版,Osol,A.编)，呈冻干制剂、研磨粉剂或水溶液形式。可以通过在环境温度下、在适当的pH值下和在所需纯度下与生理学上可接受的赋形剂或载体(即，在所用剂量和浓度下对接受者无毒的赋形剂或载体)混合来进行配制。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但可以在约3至约8的范围内。在pH 5乙酸盐缓冲液中配制是一个合适的实施方案。
式(I)化合物可以是无菌的。具体来说，欲用于体内施用的制剂应当是无菌的。此类灭菌通过无菌过滤膜过滤很容易实现。
化合物通常可以呈固体组合物、冻干制剂或呈水溶液形式存储。
包含式(I)化合物的药物组合物可以按符合良好医学实践的方式，即施用量、浓度、时间安排、过程、载体和途径进行配制、计量和施用。这种情况下考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个别患者的临床疾患、病症的原因、剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。欲施用的化合物的“治疗有效量”将受此类考虑约束，并且是预防、改善或治疗凝血因子介导的病症所需的最小量。在一些实施方案中，该量低于对宿主有毒或致使宿主更易出血的量。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分还可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(分别例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中或粗滴乳液中。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980)中。
可以制备式(I)化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有式(I)化合物的固态疏水性聚合物的半渗透基质，所述基质呈例如膜或微胶囊等成型制品的形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(US 3773919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球体)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
所述制剂包括适合于本文详述的施用途径的那些。所述制剂可以方便地呈单位剂型存在，并且可以通过药学领域众所周知的方法中的任一种来制备。技术和配方通常可在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)中找到。此类方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的赋形剂或载体缔合的步骤。一般通过将活性成分与液体赋形剂或载体或细粉状固体赋形剂或载体或两者均匀且紧密地混合，然后在必要时将产品成形来制备所述制剂。
适合口服施用的式(I)化合物的制剂可以制备为离散单位，诸如丸剂、胶囊、扁囊剂或片剂，各自含有预定量的式(I)化合物。
可以通过在合适的机器中压制呈自由流动形式的活性成分，诸如粉末或颗粒，任选地与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合来制备压制片剂。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状活性成分的混合物来制备。片剂可以任选地包衣或刻痕，并且可以任选地配制以提供活性成分从其中缓慢或受控释放。
可以制备片剂、口含片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊(例如明胶胶囊)、糖浆或酏剂以供口服。供口服使用的式(I)化合物的制剂可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备，并且此类组合物可以含有一种或多种剂，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供适口的制剂。含有活性成分与适合制造片剂的无毒药用赋形剂的混合物的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒和崩解剂，诸如玉米淀粉或海藻酸；粘结剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣，也可以通过包括微囊化在内的已知技术进行包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供持续的作用。举例来说，可以使用延时材料，诸如单独或与蜡一起的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
为了治疗眼睛或其他外部组织(例如口腔和皮肤)，制剂优选呈含有例如0.075％至20％w/w含量的活性成分的局部软膏或乳膏的形式施用。当配制成软膏时，活性成分可以与石蜡或与水混溶性软膏基质一起使用。替代地，可以将活性成分与水包油乳膏基质一起配制成乳膏。
需要时，乳膏基质的水相可以包括多元醇，即具有两个或更多个羟基基团的醇，诸如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部制剂可以理想地包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响区域吸收或渗透的化合物。此类皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
乳液的油相可以由已知成分按已知方式构成。尽管所述相可以仅包含乳化剂，但它还可以包含至少一种乳化剂和脂肪或油，或脂肪与油两者的混合物。与亲脂性乳化剂一起包括在内的亲水性乳化剂可以充当稳定剂。总之，乳化剂与或不与稳定剂一起构成所谓的乳化蜡，并且所述蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，由此形成乳膏制剂的油性分散相。适用于所述制剂的乳化剂和乳液稳定剂包括
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鲸蜡硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。
式(I)化合物的水性悬浮液含有活性物质与适合制造水性悬浮液的赋形剂的混合物。此类赋形剂包括悬浮剂，诸如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯胶，以及分散或润湿剂，诸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七碳乙烯氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；以及一种或多种甜味剂，诸如蔗糖或糖精。
式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物的药物组合物可以呈无菌可注射制剂形式，诸如无菌可注射水性或油质悬浮液。该悬浮液可以根据已知技术，使用上面已经提到的那些合适的分散或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可以是处在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(诸如1,3-丁二醇)中的无菌注射液或悬浮液。无菌可注射制剂还可以制成冻干粉。可采用的可接受媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发油常规上可以用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸诸如油酸同样可以用于制备注射剂。
可与赋形剂或载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和特定的施用模式而变化。举例来说，希望口服施用给人的延时释放制剂可以含有约1至1000mg活性物质，混配有适当且方便量的赋形剂或载体物质，所述量可能占总组合物的约5％至约95％(重量:重量)。可以制备药物组合物以提供容易测量的施用量。举例来说，希望用于静脉内输注的水溶液可以每毫升溶液含有约3至500μg活性成分，以便能以约30mL/h的速率输注合适的体积。
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，从而使制剂与预期接受者的血液等渗，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。
适合局部施用至眼睛的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的赋形剂或载体中，尤其是活性成分的水性溶剂中。活性成分优选以约0.5％w/w至20％w/w，例如约0.5％w/w至10％w/w，例如约1.5％w/w的浓度存在于此类制剂中。
适合局部施用在口腔中的制剂包括在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基质(例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的含片；以及在合适的液体赋形剂或载体中包含活性成分的漱口水。
供直肠施用的制剂可以用包含例如可可脂或水杨酸酯的合适基质呈现为栓剂。
适合肺内或鼻腔施用的制剂的粒径例如在0.1至500微米的范围内(包括以诸如0.5微米、1微米、30微米、35微米等微米增量在0.1微米至500微米范围内的粒径)，由此可通过鼻腔快速吸入或通过嘴部吸入以达到肺泡囊来施用。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适合气雾剂或干粉剂施用的制剂可以根据常规方法制备，并且可以与其他治疗剂，诸如迄今为止用于治疗或预防如下所述的病症的化合物一起递送。
适合阴道施用的制剂可以呈阴道栓、卫生棉条、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂的形式，除了活性成分以外还含有诸如本领域中已知适当的赋形剂或载体。
制剂可以包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下存储，仅需要在临使用前加入无菌液体赋形剂或载体，例如注射用水。由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备临时注射溶液和悬浮液。优选的单位剂量制剂是含有如本文上述的每日剂量或单位每日亚剂量或其适当部分的活性成分的那些。
本发明的主题还提供了兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及兽用赋形剂或载体。兽用赋形剂或载体是可用于施用组合物的材料，并且可以是固体、液体或气体材料，它们在兽医领域是惰性或可接受的并且与活性成分相容。这些兽用组合物可以肠胃外、口服或通过任何其他所需途径施用。
在特定实施方案中，包含本发明所公开的化合物的药物组合物还包含化疗剂。在这些实施方案中的一些中，化疗剂是免疫治疗剂。
使用方法
本发明所公开的化合物可用于抑制酶HPK1的活性。HPK1也称为丝裂原激活蛋白激酶1或MAP4K1，是Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶的偕中心激酶亚家族的成员。HPK1通过磷酸化和激活MAP3K蛋白(包括MEKK1、MLK3和TAK1)而用作MAP4K，从而激活MAPK Jnk。
在一个实施方案中，本文所公开的主题涉及抑制HPK1的方法，所述方法包括使HPK1与有效量的本文所述的式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物接触。
在一个实施方案中，本文所公开的主题涉及增强有需要的受试者的免疫应答的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物，或药物组合物。在该实施方案的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者的T细胞具有增强的引发、增强的激活、增强的迁移、增强的增殖、增强的存活期和增强的细胞溶解活性中的至少一项。在该实施方案的某些方面，T细胞激活的特征在于相对于施用化合物或药物组合物之前，γ-IFN+CD8 T细胞的频率升高、γ-IFN+CD4 T细胞的频率升高或T细胞的IL-2或颗粒酶B产生水平升高。在该实施方案的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，T细胞的数目增加。在该实施方案的某些方面，T细胞为抗原特异性CD8 T细胞。在该实施方案的某些方面，T细胞为抗原特异性CD4 T细胞。在该实施方案的某些方面，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者体内的抗原呈递细胞的成熟和激活增强。在该实施方案的某些方面，抗原呈递细胞为树突状细胞。在该实施方案的某些方面，抗原呈递细胞的成熟特征在于CD83+树突状细胞的频率升高。在该实施方案的某些方面，抗原呈递细胞的激活的特征在于树突状细胞上CD80和CD86的表达升高。在一些方面，式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药物组合物提供了对肿瘤或病毒的免疫应答的通用引发作用(即，疫苗)以增强/产生抗病毒/肿瘤免疫力。
在本文所述的方法中，向患有本文其他部分所述的癌症的受试者施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药物组合物。
在一个实施方案中，本文所公开的主题涉及治疗HPK1依赖性病症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或药物组合物。在该实施方案的某些方面，HPK1依赖性病症为癌症。在该实施方案的某些方面，癌症包括选自由以下项组成的组中的至少一种癌症：结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。在该实施方案的某些方面，癌症具有升高的T细胞浸润水平。在该实施方案的某些方面，相对于施用化合物或组合物之前，受试者体内的癌细胞选择性地具有升高的I类MHC抗原表达水平。
在本文所述的方法中，该方法可能还包括向所述受试者施用化疗剂。在该实施方案的某些方面，向受试者同时施用化疗剂与所述化合物或所述组合物。在该实施方案的某些方面，在施用本文所述的化合物或组合物之前，向受试者施用化疗剂。在该实施方案的某些方面，在施用本文所述的化合物或所述组合物之后，向受试者施用化疗剂。
HPK1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Hu等(1996)Genes Dev.10:2251-2264，该文献全文以引用方式并入本文)。某些HPK1多核苷酸和包含人HPK1多核苷酸的多肽是可获得的，并且其序列是已知的，例如GenBank登录号NM_007181.5的核苷酸141-2642和编码的人HPK1多肽(登录号NP_009112.1)；以及GenBank登录号NM_001042600.2的核苷酸141-2606和编码的人HPK1多肽(登录号NP_001036065.1)。
HPK1多肽包含各种保守的结构基序。HPK1多肽包含氨基末端Ste20样激酶结构域，该结构域包括ATP结合位点。激酶结构域之后为四个富含脯氨酸(PR)的基序，这些基序是含SH3的蛋白质诸如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nck和Crk的结合位点。HPK1响应于TCR或BCR刺激而发生磷酸化并且被激活。TCR和BCR诱导PR1和PR2之间的酪氨酸残基磷酸化介导经由SLP-76或BLNK SH2结构域与T细胞中的SLP-76或B细胞中的BLNK结合，并且为激酶激活所需要。在HPK1的C末端发现的citron同源结构域可能是一个调节域，并且可能参与了大分子相互作用。
本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并且抑制其激酶活性。在一些实施方案中，本发明所公开的化合物降低、抑制或以其他方式削弱HPK1介导的SLP76和/或Gads磷酸化。
本发明所公开的化合物可能是或可能不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂使HPK1的生物学活性降低的量在统计上超过该拮抗剂对任何其他蛋白质(例如，其他丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施方案中，本发明所公开的化合物特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案中的一些中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC50是HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其他类型激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更小。
本发明所公开的化合物可用于抑制HPK1的方法中。此类方法包括使HPK1与有效量的本发明所公开的化合物接触。“接触”希望使化合物与分离的HPK1酶或表达HPK1的细胞(例如，T细胞、B细胞、树突状细胞)足够接近，使得该化合物能够结合至HPK1并且抑制其活性。该化合物可以在体外或通过向受试者施用化合物而在体内与HPK1接触。
可使用本领域中已知的可用于测定HPK1激酶活性的任何方法来确定HPK1是否已受到抑制，这些方法包括体外激酶测定、用对HPK1磷酸化靶标(诸如SLP76和Gads)具有特异性的抗体进行免疫印迹，或测量HPK1激酶活性的下游生物效应(诸如将14-3-3蛋白募集到磷酸化的SLP7和Gads、从含LAT的微簇释放SLP76-Gads-14-3-3复合物或者T细胞或B细胞激活)。
本发明所公开的化合物可用于治疗HPK1依赖性病症。如本文所用，“HPK1依赖性病症”是指以下病理状态，其中HPK1活性对于该病理状态的发生或维持是必需的。在一些实施方案中，HPK1依赖性病症为癌症。
本发明所公开的化合物还可用于增强有需要的受试者的免疫应答。此类方法包括施用有效量的本发明所公开的化合物(即，式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物)。
如本文所用，“增强免疫应答”是指对抗原的任何免疫原性应答的改善。改善对抗原的免疫原性应答的非限制性实例包括增强树突状细胞的成熟或迁移、增强T细胞(例如CD4 T细胞、CD8 T细胞)激活、增强T细胞(例如CD4T细胞、CD8 T细胞)增殖、增强B细胞增殖、延长T细胞和/或B细胞存活期、改善抗原呈递细胞(例如树突状细胞)的抗原呈递、改善抗原清除率、增加T细胞产生的细胞因子(例如白介素-2)、增强对前列腺素E2诱导的免疫抑制的抵抗力以及提高CD8 T细胞的引发和/或细胞溶解活性。
在一些实施方案中，相对于施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的CD8 T细胞具有增强的引发、激活、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，CD8 T细胞引发的特征在于CD8 T细胞中CD44表达水平升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施方案中，CD8 T细胞激活的特征在于γ-IFN+CD8 T细胞的频率升高。在一些实施方案中，CD8 T细胞是抗原特异性T细胞。
在一些实施方案中，相对于施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的CD4 T细胞具有增强的引发、激活、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，CD4 T细胞引发的特征在于CD4 T细胞中CD44表达水平升高和/或细胞溶解活性增强。在一些实施方案中，CD4 T细胞激活的特征在于γ-IFN+CD4 T细胞的频率升高。在一些实施方案中，CD4 T细胞是抗原特异性T细胞。
在一些实施方案中，相对于施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的抗原呈递细胞具有增强的成熟和激活作用。在一些实施方案中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些实施方案中，抗原呈递细胞成熟的特征在于CD83+树突状细胞的频率升高。在一些实施方案中，抗原呈递细胞激活的特征在于树突状细胞上CD80和CD86的表达升高。
在一些实施方案中，相对于施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者体内的血清细胞因子IL-10和/或趋化因子IL-8(鼠KC的人同源物)的血清水平下降。
TCR的参与导致HPK1激活，其用作TCR诱导的AP-1应答途径的负调节剂。据信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等(2007)JEM204:681-691)和Thr254处的Gads发生磷酸化来降低信号传导微簇的持久性对T细胞激活进行负调控，从而募集与磷酸化SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从包含LAT的微簇中释放出SLP76-Gads-14-3-3复合物，其导致T细胞功能障碍(包括细胞无能和细胞耗竭)(Lasserre等(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。
在免疫功能障碍的上下文中，术语“功能障碍”是指对抗原刺激的免疫应答下降的状态。该术语包括可能发生抗原识别的耗竭和/或无能的常见要素，但随后的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效。
如本文所用，术语“功能障碍”还包括难以实现抗原识别或对抗原识别无应答，具体来说，将抗原识别转化为下游T细胞效应功能(诸如增殖、细胞因子产生(例如IL-2、γ-IFN)和/或靶细胞杀伤)的能力受损。
术语“无能”是指通过T细胞受体传递的信号不完全或不充分而引起的对抗原刺激的无应答状态(例如，在不存在ras激活的情况下细胞内Ca+2升高)。在不存在协同刺激的情况下，抗原刺激也导致T细胞无能，即使在发生协同刺激的情况下，细胞随后也难以被抗原激活。无应答状态通常可能被存在的白细胞介素-2覆盖。无能T细胞不发生克隆扩增和/或获得效应子功能。
术语“耗竭”是指呈由于许多慢性感染和癌症期间发生持续TCR信号传导所引起的T细胞功能障碍状态的T细胞耗竭。它与“无能”的不同之处在于它不是由不完全或不充分的信号传导产生，而是由持续的信号传导产生。它被定义为效应功能不佳、抑制性受体的持续表达以及不同于功能性效应子或记忆T细胞的转录状态。细胞耗竭阻碍了对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可能源于外在的负调控途径(例如，免疫调节性细胞因子)以及细胞内在负调控(协同刺激)途径(PD-1、B7-H3、B7-H4等)。
在一些实施方案中，向受试者施用式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物导致T细胞功能增强。在一些实施方案中，施用本文所述的HPK1抑制剂可增强/更新/重新激活免疫应答或激活新的免疫应答。
“增强T细胞功能”意指诱导、引起或刺激T细胞以具有持续或扩增的生物功能，或者更新或再激活已耗竭或无活性的T细胞。增强T细胞功能的实例包括：相对于干预前的水平，细胞因子(例如-干扰素、IL-2、IL-12和TNFα)分泌增加、增殖增加、抗原应答能力(例如病毒、病原体或肿瘤清除率)增加，以及CD8 T细胞或CD4 T细胞(诸如颗粒酶B)的效应颗粒产生增加。在一个实施方案中，增强水平是至少50％，或者60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量这种增强的方式对本领域普通技术人员是已知的。
因此，目前所公开的式(I)或其变化形式，诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物，或其药用盐、前药、代谢物或衍生物可用于治疗T细胞功能障碍性病症。“T细胞功能障碍性病症”是以对抗原刺激的应答能力降低为特征的T细胞疾病或病症。在一个特定实施方案中，T细胞功能障碍性病症是与HPK1的激酶活性增加特别相关的病症。在另一个实施方案中，T细胞功能障碍性病症是T细胞无能或者分泌细胞因子、增殖或执行细胞溶解活性的能力降低的病症。在一个具体方面，应答能力降低导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的控制无效。以T细胞功能障碍为特征的T细胞功能障碍性病症的实例包括原因不明性急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。
因此，本发明所公开的化合物可用于治疗需要增强免疫原性的疾患，诸如增高肿瘤免疫原性以治疗癌症。
“免疫原性”是指特定物质引起免疫应答的能力。肿瘤具有免疫原性，并且增强免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。病毒也可能具有免疫原性，并且增强/激活免疫原性可有助于通过免疫应答清除病毒颗粒。
“肿瘤免疫”是指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。因此，作为治疗概念，当此类逃避行为减弱时，肿瘤免疫得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并且攻击。肿瘤识别的实例包括肿瘤结合、肿瘤缩小和肿瘤清除。
在一个方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物。在一些实施方案中，受试者患有黑素瘤。黑素瘤可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有结直肠癌。结直肠癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有非小细胞肺癌。非小细胞肺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有胰腺癌。胰腺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有血液恶性肿瘤。血液恶性肿瘤可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有卵巢癌。卵巢癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有乳腺癌。乳腺癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，受试者患有肾细胞癌。肾细胞癌可处于早期或晚期。在一些实施方案中，癌症具有升高的T细胞浸润水平。
在一个方面，提供了一种用于治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物。在一个方面，提供了用于增强或促进有需要的受试者对疫苗(诸如癌症疫苗或个性化癌症疫苗(PCV))或CAR-T细胞疗法的应答的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物。
本发明所公开的化合物可通过本领域中已知的任何合适的方式来施用。在一些实施方案中，式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物经静脉内、肌内、皮下、局部、经口、经皮、腹膜内、经眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内、肿瘤内或鼻内施用。
在一些实施方案中，连续施用HPK1拮抗剂。在其他实施方案中，间歇地施用HPK1拮抗剂。此外，用有效量的HPK1拮抗剂治疗受试者可包括单次治疗或者可包括一系列治疗。
应当理解，适当剂量的活性化合物取决于本领域普通技术水平的医师或兽医的知识范围内的许多因素。活性化合物的剂量可以变化，例如，取决于受试者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食、施用时间、施用途径、排泄率以及任何药物组合。
还应当理解，用于治疗的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物的有效剂量在特定治疗过程中可能增加或减少。剂量的变化可能由诊断测定的结果引起并且从诊断测定的结果中变得显而易见。
在一些实施方案中，HPK1拮抗剂施用至受试者的剂量在约0.001μg/kg和约1000mg/kg之间，包括但不限于约0.001μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约250μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约100mg/kg和约200mg/kg。
在一些实施方案中，提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)化合物或其药用盐、前药、代谢物或衍生物，所述方法另外包括施用附加疗法。附加疗法可以是放疗、手术(例如乳房肿瘤切除术和乳房切除术)、化疗、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法或前述疗法的组合。附加疗法可以呈辅助疗法或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，附加疗法是施用抗转移剂。在一些实施方案中，附加疗法是施用副作用限制剂(例如，旨在减少治疗副作用的发生和/或减轻其严重程度的药物，诸如止吐剂等)。在一些实施方案中，附加疗法是放疗。在一些实施方案中，附加疗法是手术。在一些实施方案中，附加疗法是放疗与手术的组合。在一些实施方案中，附加疗法是伽玛辐照。在一些实施方案中，附加疗法是靶向PI3K/AKT/mTOR途径的疗法、HSP90抑制剂、微管蛋白抑制剂、细胞凋亡抑制剂和/或化学预防剂。
附加疗法可以是化疗剂中的一种或多种。因此，治疗癌症的方法可以包括本发明所公开的HPK1拮抗剂与至少一种化疗剂联合施用。
如本文所用，“与……联合”是指在一种治疗方式以外还施用另一种治疗方式。因此，“与……联合”是指在向受试者施用一种治疗方式之前、施用过程中或施用之后施用另一种治疗方式。
举例来说，HPK1拮抗剂和化疗剂可以依次(在不同时间)或同时(在同一时间)施用。HPK1拮抗剂和化疗剂可通过相同的施用途径或不同的施用途径来施用。
在某些实施方案中，HPK1拮抗剂与另一种免疫疗法联合施用。例如，HPK1拮抗剂可与靶向PD-L1/PD-1通路的化疗剂或生物制剂联合施用。已知的抑制检查点通路涉及通过PD-1受体的信号传导。程序性死亡1(PD-1)受体及其配体PD-L1和PD-L2与CTLA-4属于同一共调节分子家族。-更多信息参见：http://www.onclive.com/web-exclusives/the-role-of-anti-pd-l1-immunotherapy-in-cancer/2#sthash.cGfYa1T1.dpuf。阻断PD-L1与PD-1和CD80结合的化疗剂或生物制剂可防止PD-L1介导的对T细胞激活的抑制/压制。程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)在抗原呈递细胞(APC)及其他免疫细胞上广泛表达。它在各种人类癌症的肿瘤细胞中上调，并且与抑制抗肿瘤T细胞免疫有关。PD-L1是一种细胞表面蛋白，与激活的T细胞、B细胞和其他骨髓细胞上的受体PD-1和CD80结合。已发现PD-L1与激活T细胞上的PD-1结合以干扰T细胞增殖并且抑制免疫应答。PD-L1在癌细胞上的过度表达可能使这些细胞避免免疫检测和清除。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达水平与肿瘤侵袭性增加和预后不良相关联。阻断PD-L1与PD-1结合的化疗剂或生物剂尤其包括抗PD-L1抗体，诸如德瓦鲁单抗、纳武单抗、匹地利珠单抗、MPDL3280A、MK-3475和BMS-936559。在一些实施方案中，HPK1拮抗剂与PD-1拮抗剂(诸如抗PD-1抗体)、PD-L1拮抗剂(诸如抗PD-L1抗体)和/或PD-L2拮抗剂(诸如抗PD-L2抗体)联合施用。抗PD-L1抗体的实例包括但不限于阿维单抗、阿特珠单抗(也称为MPDL3280A)、派姆单抗(也称为MK-3475)、LY3300054(Eli Lilly)、STI-A1014(Sorrento)、KN035(Suzhou Alphamab)和BMS-936559(Bristol Myers Squibb)。抗PD-1抗体的实例包括但不限于纳武单抗、匹地利珠单抗、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、BGB-108(BeiGene)、BGB-A317(BeiGene)、JS-001(Shanghai Junshi)、STI-A1110(Sorrento)、INCSHR-1210(Incyte)、PF-06801591(Pfizer)、TSR-042(也称为ANB011；Tesaro/AnaptysBio)、AM0001(ARMO Biosciences)和ENUM 244C8(Enumeral BiomedicalHoldings)。
在另一个实例中，HPK1拮抗剂可与靶向OX40及其配体OX40L(TNF超家族的成员)的化疗剂或生物制剂组合。OX40在激活的CD4(+)和CD8(+)T细胞以及许多其他淋巴样细胞和非淋巴样细胞上表达。从OX40到常规T细胞的协同刺激信号促进分裂和存活，从而增加效应子和记忆群在产生抗原时的克隆扩增。OX40还抑制T调节细胞的分化和活性，进一步放大这一过程。OX40和OX40L还调节T细胞、抗原呈递细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的细胞因子产生，并且调节细胞因子受体信号传导。作为已知控制T细胞的最重要的协同刺激分子之一，刺激OX40已被证明是针对癌症的治疗免疫策略的目标。某些OX40激动剂包括GBR 830以及Linch等,Frontiers in Oncology第5卷第1-10页(2015年)中公开的那些，该文献以引用的方式整体并入本文。
在其他实例中，HPK1拮抗剂可以与靶向CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40、ICOS、HVEM、NKG2D、MICA、2B4、IL-2、IL-12、IFNγ、IFNα、TNFα、IL-1、CDN、HMGB1、TLR、PD-L1轴、CTLA-4、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7H4、CD96、CD226、前列腺素、VEGF、内皮素B、IDO、精氨酸酶、MICA/MICB、TIM-3、IL-10、IL-4、IL-13、TIGIT或TGFβ的化疗剂或生物剂组合。在其他实例中，HPK1拮抗剂可以与包含PD-L1轴、CTLA-4、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7H4、CD96、TIGIT、CD226、前列腺素、VEGF、内皮素B、IDO、精氨酸酶、MICA/MICB、TIM-3、IL-10、IL-4或IL-13拮抗剂的免疫治疗组合。在其他实例中，HPK1拮抗剂可以与包含CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40、ICOS、HVEM、NKG2D、MICA、2B4、IL-2、IL-12、IFNγ、IFNα、TNFα、IL-1、CDN、HMGB1或TLR拮抗剂的免疫疗法组合。
在另一个实例中，HPK1拮抗剂可以与PCV组合。在另一个实例中，HPK1拮抗剂可以与过继性T细胞治疗组合。
提供了一种抑制HPK1的方法，所述方法包括使受试者体内的HPK1与有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐或者包含式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐的药物组合物接触。
一种用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法，其中该方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐或者包含式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐的药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述受试者患有癌症。
还提供了一种用于治疗HPK1依赖性病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐或者包含式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或其药用盐的药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述HPK1依赖性病症是癌症。
在一些实施方案中，其中癌症包括选自由以下项组成的组中的至少一种癌症：结直肠癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤和肾细胞癌。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述受试者施用化疗剂。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或本文所述的药物组合物，以供用于如本文所述的抑制HPK1的方法中、用于如本文所述的增强有需要的受试者的免疫应答的方法中和/或用于如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物，以供用于如本文所述的抑制HPK1的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物，以供用于如本文所述的增强受试者的免疫应答的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物，或如本文所述的药物组合物，以供用于如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、(IB)和(IC)的化合物或本文所述的药物组合物用于制造供抑制HPK1用的药物、供增强有需要的受试者的免疫应答用的药物和/或供治疗HPK1依赖性病症用的药物的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物用于制造供抑制HPK1用的药物的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物用于制造供增强有需要的受试者的免疫应答用的药物的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物，或如本文所述的药物组合物用于制造供治疗HPK1依赖性病症的药物的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或本文所述的药物组合物在如本文所述的抑制HPK1的方法中、在如本文所述的增强有需要的受试者的免疫应答的方法中和/或在如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物在如本文所述的抑制HPK1的方法中的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物在如本文所述的增强受试者的免疫应答的方法中的用途。
在一些实施方案中，本发明还提供了如本文所述的式(I)或其变化形式诸如式(IA)、式(IB)和式(IC)的化合物或如本文所述的药物组合物在如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中的用途。
在一些实施方案中，治疗引起受试者在治疗停止后的持续应答。“持续应答”是指在停止治疗后对减缓肿瘤生长的持续作用。举例来说，与施用阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以保持相同或较小。在一些实施方案中，持续应答的持续时间至少与治疗持续时间相同，是治疗持续时间的至少1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0长。
本文所公开的治疗方法可以引起部分或完全应答。如本文所用，“完全应答”或“CR”是指所有靶病变都消失；“部分应答”或“PR”是指以基线SLD为参考，靶病变的最长直径(SLD)之和降低至少30％；并且“稳定疾病”或“SD”是指以治疗以来的最小SLD为参考，既没有将靶病变未充分缩小至符合PR，又没有充分增加至符合PD。如本文所用，“总体应答率”(ORR)是指完全应答(CR)率和部分应答(PR)率的总和。
本文所公开的治疗方法可以导致施用了HPK1拮抗剂的受试者的无进展存活期和总体存活期增加。如本文所用，“无进展存活期”(PFS)是指在治疗期间和之后所治疗的疾病(例如癌症)没有恶化的时间长度。无进展存活期可以包括患者经历完全应答或部分应答的时间量以及患者经历稳定疾病的时间量。
如本文所用，“总体存活期”是指在特定持续时间之后组中可能存活的受试者的百分比。
在一些实施方案中，施用了HPK1拮抗剂的受试者是哺乳动物，诸如驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，所治疗的受试者是人。
需要治疗癌症的受试者可以是显示癌症症状的人、已经被诊断出患有癌症的受试者、正从癌症缓解的受试者，或罹患癌症的风险(例如遗传易感性、某些饮食或环境暴露)增高的受试者。
在所描述的方法中的任一种中，在一个方面，受试者是人，诸如需要该方法的人。受试者可以是已经被诊断或怀疑患有HPK1依赖性病症(诸如癌症)的人。该个体可以是没有可检测的疾病但具有一个或多个发展为癌症的风险因素的人。
还提供了用于进行本文详述的方法的药盒，其包含一种或多种本文所述的化合物或者包含本文所述的化合物的药物组合物。药盒可以采用本文所公开的化合物中的任一种。在一个变化形式中，药盒采用本文所述的化合物或其药用盐。药盒可以用于本文所述的用途中的任一种或多种，因此可以含有用于治疗HPK1依赖性病症(诸如癌症)的说明书。在一些实施方案中，药盒含有用于治疗癌症的使用说明书。
药盒通常包含合适的包装。药盒可以包含一个或多个包含本文所述的任何化合物的容器。各种组分(如果存在多于一种组分)可以包装在单独的容器中，或者某些组分可在交叉反应性和有效期允许的情况下组合在一个容器中。药盒中的一种或多种组分可以是无菌的和/或可以容纳在无菌包装中。
药盒可以是单位剂型、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可提供包含足够剂量的本文所公开的化合物(例如，治疗有效量)和/或可用于HPK1依赖性病症(例如，癌症)的第二药物活性化合物的药盒，为个体提供长时间(诸如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间)的有效治疗。药盒还可以包括多个单位剂量的化合物和使用说明书，并且包装的数量足以在药房(例如，医院药房和复配药房)中储存和使用。
药盒可以任选地包括一组关于使用本发明方法的组分的说明书，通常为书面说明书，但包含说明书的电子存储介质(例如，磁盘或光盘)也是可接受的。药盒随附的说明书通常包括有关组分及其施用至受试者的信息。
下列实例以举例的方式而非限制性的方式给出。
实施例
缩写
Figure BDA0003085169390001931
Figure BDA0003085169390001941
所有样品都通过非手性系统预先纯化，并且在SFC手性纯化之前检查纯度。
LCMS分析方法
方法J：在Shimadzu 20AD HPLC上，利用Shimadzu LCMS2020质谱仪，使用ESI作为电离源，使用Shim-Pack XR-ODS C18 2.2μm 3.0×50柱和1.2ml/min流速进行实验。溶剂系统是以95％含0.05％TFA的水(溶剂A)和5％含0.05％TFA的乙腈(溶剂B)开始，在2.0分钟内逐渐升至95％溶剂B的梯度。最终溶剂系统再保持恒定0.7分钟。
方法K：在Shimadzu 20AD HPLC上，利用Shimadzu LCMS2020质谱仪，使用ESI作为电离源，使用Shim-Pack XR-ODS C18 2.2μm 3.0×50柱和1.2ml/min流速进行实验。溶剂系统是以95％含0.05％TFA的水(溶剂A)和5％含0.05％TFA的乙腈(溶剂B)开始，在2.0分钟内逐渐升至95％溶剂B的梯度。最终溶剂系统再保持恒定0.7分钟。
方法L：在Shimadzu 30AD HPLC上，利用Shimadzu LCMS2020质谱仪，使用ESI作为电离源，使用Ascentis Express C18 2.7μm 2.1×50柱和1.0ml/min流速进行实验。溶剂系统是以95％含0.05％TFA的水(溶剂A)和5％含0.05％TFA的乙腈(溶剂B)开始，在2.0分钟内逐渐升至95％溶剂B的梯度。最终溶剂系统再保持恒定0.7分钟。
方法M：在Shimadzu 20AD XR HPLC上，利用Shimadzu LCMS2020质谱仪，使用ESI作为电离源，使用Poroshell HPH-C18 2.7μm 3.0×50柱和1.2ml/min流速进行实验。溶剂系统是以95％含5mM碳酸氢铵的水(溶剂A)和5％乙腈(溶剂B)开始，在2.0分钟内逐渐升至95％溶剂B的梯度。最终溶剂系统再保持恒定0.7分钟。
方法N：在与Agilent MSD(6140)质谱仪偶联的Agilent 1290UHPLC上，使用ESI作为电离源进行实验。使用Phenomenex XB-C18，1.7mm，50×2.1mm柱，以0.4ml/min流速进行LC分离。溶剂A是水+0.1％FA，且溶剂B是乙腈+0.1％FA。在7min内使梯度与2％至98％溶剂B一致，并且在平衡1.5min后保持98％B持续1.5min。LC柱温是40℃。在220nm和254nm收集UV吸光度，并且对所有实验应用质谱全扫描。
合成实施例
以下是制备用来制备通用方法和诸表中所描述的化合物的中间物的程序。
5.03.1实施例1
中间物1：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390001951
步骤1：7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390001961
在0℃下向7-溴-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1g，4.37mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中逐滴加入LiHMDS(8.73mL，8.73mmol，1mol/L)。在0℃下，在氮气下将所得溶液搅拌0.5小时。然后加入二碳酸二叔丁酯(2.85g，13.07mmol)，并且在室温下将反应物搅拌2小时。通过加入甲醇(50mL)淬灭反应物。在真空下浓缩反应混合物。通过硅胶快速色谱法(乙酸乙酯/石油醚，1/4)纯化残余物，得到7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg，2.43mmol)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝329.2。
步骤2：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390001962
在90℃下，在氮气下将7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(6.2g，18.83mmol)、双(频哪醇)二硼(23.93g，94.22mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(2.76g，3.77mmol)和乙酸钾(5.55g，56.62mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物搅拌2.5小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(30％)洗脱，得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(5g，13.29mmol)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝376.3。
5.03.2实施例2
中间物2：7-溴-8-氯-6-碘代异喹啉-3-胺
Figure BDA0003085169390001971
步骤1：4-氨基-3-溴-2-氯代苯甲腈
Figure BDA0003085169390001972
向4-氨基-2-氯代苯甲腈(1.5g，9.83mmol)在乙腈(30mL)中的溶液中加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(1.5g，5.25mmol)。在25℃下将溶液搅拌2小时。通过加入饱和NaHSO3溶液(30mL)淬灭反应物，并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。浓缩有机层，然后通过快速色谱法(10％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到4-氨基-3-溴-2-氯代苯甲腈和4-氨基-5-溴-2-氯代苯甲腈的混合物(850mg，5/2比率的区域异构体，26％产率)，呈黄色固体状，直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2.6H),6.80(s,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2.6H),4.81(bs,5H),4.71(bs,2H)。
步骤2：3-溴-2-氯-4-碘代苯甲腈
Figure BDA0003085169390001973
向CuI(51.63g，271.74mmol)在乙腈(300mL)中的悬浮液中加入亚硝酸叔丁酯(33.59g，326.09mmol)。在65℃下将混合物搅拌10分钟。加入4-氨基-3-溴-2-氯代苯甲腈与4-氨基-5-溴-2-氯代苯甲腈(3/4比率，25g，108.7mmol)的混合物，然后在65℃下将反应混合物搅拌12小时。冷却至室温后，用饱和Na2S2O4溶液(30mL)淬灭混合物，并且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤所合并的有机层，经Na2SO4干燥，并且过滤。浓缩滤液，并且通过快速柱色谱法(5％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，得到3-溴-2-氯-4-碘代苯甲腈(5g，31％产率)，呈黄色固体状。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H)。
步骤3：(3-溴-2-氯-4-碘代苯基)甲胺
Figure BDA0003085169390001981
向3-溴-2-氯-4-碘代苯甲腈(3g，8.76mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入硼烷-THF(30mL，1M THF溶液，30mmol)。在65℃下，在N2下将混合物搅拌3小时。冷却至室温后，通过加入甲醇(10mL)和HCl(12N，10mL)淬灭混合物。将反应物浓缩至干燥。将残余物溶解在乙酸乙酯(100mL)中，并用水(50mL×2)萃取。丢弃有机层，并通过加入饱和NaHCO3水溶液将水层调节至pH 9。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取混合物。用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤所合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到(3-溴-2-氯-4-碘代苯基)甲胺(3g，99％产率)，呈黄色油状，直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.9。
步骤4：N-(3-溴-2-氯-4-碘代苯基)-2,2-二乙氧基乙脒
Figure BDA0003085169390001982
向(3-溴-2-氯-4-碘代苯基)甲胺(2.5g，7.22mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯(3.75g，23.26mmol)。在25℃下将溶液搅拌12小时，然后浓缩至干燥。将残余物溶解在二氯甲烷(20mL)中，用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到N-(3-溴-2-氯-4-碘代苯甲基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g，87％产率)，呈黄色固体状，直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝474.9。
步骤5：7-溴-8-氯-6-碘代异喹啉-3-胺
Figure BDA0003085169390001991
在60℃下将硫酸(10mL)和N-(3-溴-2-氯-4-碘代苯甲基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g，6.31mmol)的混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却至0℃，然后加入NaOH溶液，以便将pH值调节至9。用二氯甲烷(100mL×3)萃取所得溶液。用盐水洗涤所合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到7-溴-8-氯-6-碘代异喹啉-3-胺(2.4g，99％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝382.8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99(s,1H),8.32(s,1H),6.56(s,1H),6.49(s,2H)。
5.03.3实施例3
中间物3：8-氯-7-氟-6-碘代异喹啉-3-胺
Figure BDA0003085169390001992
步骤1：4-氨基-2-氯-3-氟代苯甲腈
Figure BDA0003085169390001993
向压力反应管中加入氰化铜(I)(1.2g，13.37mmol)、4-溴-3-氯-2-氟代苯胺(1g，4.46mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(8mL)。在微波反应器中，在170℃下将混合物加热1小时。通过加入饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭反应混合物，并过滤。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取滤液。用盐水(3×10mL)洗涤所合并的有机层，用Na2SO4干燥，通过硅胶垫过滤并浓缩至干燥，得到4-氨基-2-氯-3-氟代苯甲腈(700mg，92％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝171.1。
步骤2：2-氯-3-氟-4-碘代苯甲腈
Figure BDA0003085169390002001
在65℃下，在N2下向CuI(3341mg，17.59mmol)在乙腈(50mL)中的悬浮液中加入亚硝酸叔丁酯(1811mg，17.59mmol)。在65℃下将混合物搅拌10分钟，然后加入4-氨基-2-氯-3-氟代苯甲腈(2g，11.73mmol)。在65℃下将混合物搅拌12小时。冷却至室温后，用饱和Na2S2O4水溶液(30mL)和NH4Cl水溶液(30mL)淬灭混合物，并用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。用盐水(2×10mL)洗涤所合并的有机层，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到粗产物，通过快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)进行纯化，得到2-氯-3-氟-4-碘代苯甲腈(1g，30％产率)，呈黄色固体状。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(dd,J＝5.6,8.2Hz,1H),7.22(dd,J＝1.4,8.2Hz,1H)。
步骤3：(2-氯-3-氟-4-碘代苯基)甲胺
Figure BDA0003085169390002002
在0℃下将2-氯-3-氟-4-碘代苯甲腈(1g，3.55mmol)加入到硼烷-THF(35.53mL，1MTHF溶液，35.53mmol)在THF(30mL)中的溶液中。然后将混合物升温至室温并搅拌过夜。通过逐滴加入HCl溶液(6M，2mL)淬灭反应溶液，然后用NaHCO3水溶液中和至pH 8，并且用二氯甲烷(2×200mL)萃取。用水(2×10mL)和盐水(1×10mL)洗涤所合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到(2-氯-3-氟-4-碘代苯基)甲胺(400mg，粗物质)，没有另外纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝285.9。
步骤4：N-(2-氯-3-氟-4-碘代苯甲基)-2,2-二乙氧基乙脒
Figure BDA0003085169390002003
向2,2-二乙氧基乙酰亚胺酸甲酯(0.3g，1.88mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入(2-氯-3-氟-4-碘代苯基)甲胺(250mg，0.88mmol)。在25℃下将反应混合物搅拌12小时，然后浓缩至干燥。将残余物溶解在二氯甲烷(20mL)中，依次用水(2×10mL)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到N-(2-氯-3-氟-4-碘代苯甲基)-2,2-二乙氧基乙脒(360mg，粗物质)，呈黄色固体状，没有另外纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝415.0。
步骤5:8-氯-7-氟-6-碘代异喹啉-3-胺
Figure BDA0003085169390002011
在60℃下将N-(2-氯-3-氟-4-碘代苯甲基)-2,2-二乙氧基乙脒(0.36g，0.87mmol)和浓H2SO4(10mL，26.05mmol)的溶液搅拌12小时。将混合物冷却至0℃，用NaOH(10wt％)调节至pH 9，然后用二氯甲烷(5×100mL)萃取。用盐水洗涤所合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到8-氯-7-氟-6-碘代异喹啉-3-胺(0.25g，粗产物)，呈黄色固体状，没有另外纯化就直接使用。LCMS(ESI)[M+H]+＝322.9。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.00(s,1H),8.08(d,J＝5.6Hz,1H),6.70(s,1H)。
5.03.4实施例4
7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002012
在60℃下，在氮气下将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(249.0g，772.07mmol)、8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(290.0g，770.76mmol)、Pd(dppf)Cl2(57.0g，77.98mmol)和K2CO3(320.0g，2318.8mmol)在1,4-二噁烷(3000mL)和水(300mL)中的混合物搅拌12小时。将反应混合物缓慢冷却至室温。加入无水硫酸钠(500g)并搅拌0.5小时。滤出固体。在真空下浓缩滤液。用乙酸乙酯(3L)洗涤残余物。通过过滤来收集固体，并且用乙酸乙酯洗涤，在真空下干燥，得到240g产物。在真空下浓缩滤液，且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(0-100％)洗脱，得到60g产物。合并两个批料，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300g，674.32mmol，87.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝445。
5.03.5实施例5
7-(3-氨基-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002021
步骤1：7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002022
在100℃下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0g，674.32mmol)、新干燥过的
Figure BDA0003085169390002031
分子筛(300g)和酞酸酐(150.0g，1012.7mmol)在甲苯(3000mL)中的溶液搅拌3小时。将反应物缓慢冷却至室温，然后过滤所得混合物。在真空下浓缩滤液。用乙酸乙酯(2000mL)洗涤残余物。利用过滤来收集固体并且在真空下干燥，得到200g产物。在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到100g产物。合并两个批料，得到7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300g，521.75mmol，77.4％产率)，呈灰白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝575。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002032
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0g，521.75mmol)、NH2Boc(916.0g，7829.1mmol)、Brettphos Pd G3(24.0g，26.48mmol)、新干燥过的
Figure BDA0003085169390002033
分子筛(300g)和K2CO3(227.0g，1644.9mmol)在1,4-二噁烷(3000mL)中的混合物搅拌2小时。将反应物缓慢冷却至室温，然后过滤混合物。在真空下浓缩滤液，并且残余物没有另外纯化就用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝656。
步骤3：7-(3-氨基-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002041
在40℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(来自上一步的粗产物)和水合肼(228.0g，4560mmol)在甲醇(3000mL)中的溶液搅拌2小时。沉淀出产物，过滤并且用MeOH(3×500mL)洗涤。在真空下干燥固体，得到130g产物。在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用DCM/MeOH(5％)洗脱，得到22g产物。合并两个批料，得到7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(152g，288.97mmol，55.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝526。
5.03.6实施例6
7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002042
向氯甲酸苯酯(0.60g，3.82mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0g，1.9mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.23g，1.88mmol)在吡啶(5mL)和二氯甲烷(5mL)中的悬浮液。在0℃下将混合物搅拌2小时。用水洗涤所得溶液，并在真空下浓缩有机层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.09g，1.553mmol，81.7％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝646.2。
5.03.7实施例7
7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002051
步骤1：5-溴-2-碘-4-甲基-吡啶-3-胺
Figure BDA0003085169390002052
在25℃下将5-溴-4-甲基-吡啶-3-胺(60.0g，320.79mmol)和n-碘代琥珀酰亚胺(72.2g，320.92mmol)在乙酸(1000mL)中的溶液搅拌12小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用PE/EA(1/20)洗脱，得到5-溴-2-碘-4-甲基-吡啶-3-胺(72g，177.16mmol，55.2％产率)，呈黄色固体状。
步骤2：N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002061
在0℃下将5-溴-2-碘-4-甲基-吡啶-3-胺(55g，175.76mmol)和NaHMDS(360.mL，720mmol)在四氢呋喃(500mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入(Boc)2O(43g，197.25mmol)，并且在25℃下搅拌1.5小时。用水稀释所得溶液，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/20)洗脱，得到N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(58g，140.42mmol，79.9％产率)，呈黄色油状。
步骤3：3-[5-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-2-吡啶基]丙酸甲酯
Figure BDA0003085169390002062
在70℃下，在氮气下将N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(500.0mg，1.21mmol)、溴-(3-甲氧基-3-氧代-丙基)锌(15mL，6.89mmol)和Pd(PPh3)4(115.0mg，0.10mmol)在四氢呋喃(10mL)中的混合物搅拌2小时。用水稀释反应混合物。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到3-[5-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-2-吡啶基]丙酸甲酯(313mg，0.79mmol，65.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝373.0。
步骤4：7-溴-8-甲基-3,4-二氢-1H-1,5-萘啶-2-酮
Figure BDA0003085169390002063
在室温下将3-[5-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-2-吡啶基]丙酸甲酯(313.0mg，0.79mmol)在三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(4mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到7-溴-8-甲基-3,4-二氢-1H-1,5-萘啶-2-酮(140mg，0.55mmol，70％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝241.0。
步骤5：7-溴-8-甲基-1,2,3,4-四氢-1,5-萘啶
Figure BDA0003085169390002071
在60℃下，将7-溴-8-甲基-3,4-二氢-1H-1,5-萘啶-2-酮(120.0mg，0.47mmol)在四氢呋喃(10mL)和BH3.THF(1M)(1.4mL，1.42mmol)中的溶液搅拌2小时。用甲醇和稀盐酸淬灭反应物。在真空下浓缩混合物。通过反相色谱法(乙腈0-70/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化所得残余物，得到7-溴-8-甲基-1,2,3,4-四氢-1,5-萘啶(70mg，0.29mmol，61.9％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝227.0。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.74(s,1H),5.67(s,1H),3.26-3.21(m,2H),2.76-2.72(m,2H),2.12(s,3H),1.89-1.81(m,2H)。
步骤6：7-溴-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002072
在0℃下，将NaHDMS(0.5mL，0.26mmol，0.5mol/L THF溶液)加入到7-溴-8-甲基-1,2,3,4-四氢-1,5-萘啶(60.0mg，0.26mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中，然后在该温度下将混合物搅拌0.5小时。然后加入(Boc)2O(100.0mg，0.46mmol)，并且在室温下搅拌1小时。利用甲醇(1mL)淬灭反应物。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到7-溴-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.20mmol，76.9％)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝327.0。
步骤7：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002081
在100℃下，在氮气下将7-溴-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(30.0g，91.68mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(117.0g，460.63mmol)、Pd(dppf)Cl2(6.7g，9.17mmol)和KOAc(27.0g，275.51mmol)在1,4-二噁烷(500mL)中的混合物搅拌3小时。通过过滤去除固体。然后在真空下浓缩混合物。通过反相色谱法(乙腈5-30/0.1％HCl水溶液)纯化所得残余物，得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(30g，80.154mmol，87.4％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝375.0。
步骤8：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002082
在60℃下，在氮气下将8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(30.0g，80.15mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(28.5g，88.37mmol)、Pd(dppf)Cl2(5.9g，8.07mmol)和K2CO3(33.0g，239.13mmol)在1,4-二噁烷(500mL)和水(50mL)中的混合物搅拌16小时。用乙酸乙酯(1000mL)稀释反应混合物。用水(3×100mL)洗涤所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(9:1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(26g，58.703mmol，73.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝443。
5.03.8实施例8
步骤1：7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002091
在110℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(26.0g，58.7mmol)和异苯并呋喃-1,3-二酮(17.5g，118.24mmol)在甲苯(300mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(18g，31.41mmol，53.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝573。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002092
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(17.0g，29.67mmol)、NH2Boc(104.0g，888.89mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(6.1g，5.89mmol)、Brettphos(6.4g，11.92mmol)和K2CO3(12.3g，89.13mmol)在1,4-二噁烷(300mL)中的混合物搅拌3小时。过滤混合物并且在真空下浓缩。粗产物没有另外纯化就用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝654。
步骤3：7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002101
在50℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(13.0g，19.89mmol)和N2H4 H2O(12.5g，200mmol)在乙醇(130mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(8g，15.279mmol，76.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝524。
5.03.9实施例101
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(化合物401)
Figure BDA0003085169390002102
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002111
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(145mg，0.33mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入吡啶(1mL，12mmol)。向所得溶液中逐滴加入氯甲酸四氢吡喃-4-基酯(81mg，0.50mmol)在二氯甲烷(0.5mL)中的溶液。然后将反应物搅拌90分钟。
然后用20mL二氯甲烷稀释反应物，并用40mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤。分离有机层，并且用二氯甲烷(2×25mL)进一步萃取水层。用无水粉末状硫酸镁干燥所合并的二氯甲烷层，过滤并浓缩，得到棕色固体。通过快速柱色谱法(0-100％乙酸异丙酯/庚烷)纯化粗物质，得到7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(181mg，0.3mmol)，呈白色固体状。LCMS(ESI,m/z):575[M+H]+。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002112
在20mL压力管中，用氮气吹扫含7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(181mg，0.3mmol)、氨基甲酸叔丁酯(949.3mg，8.1mmol)、三(二亚苯甲基丙酮)二钯-三氯甲烷加合物(83.4mg，0.08mmol)、BrettPhos(94.8mg，0.17mmol)和碳酸铯(624.7mg，1.9mmol)的1,4-二噁烷(4mL)，密封，随后在90℃下加热3.5小时。然后将反应物冷却至室温，用20mL二氯甲烷稀释，并且通过硅藻土过滤。然后浓缩滤液，得到黄红色固体，并通过柱色谱法(0-50％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(197mg，0.3mmol)，呈棕色油状。LCMS(ESI,m/z):654[M+H]+。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002121
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(197mg，0.3mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入三氟乙酸(8mL)。然后在室温下将反应物搅拌45分钟。然后浓缩反应物并通过反相HPLC进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(56mg，0.12mmol)，呈浅黄色固体状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(d,J＝3.0Hz,1H),4.88(dt,J＝8.8,4.6Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.88-3.83(m,2H),3.50-3.45(m,2H),3.38-3.36(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,5H),1.61(dt,J＝12.9,4.5Hz,2H)。LCMS(ESI,m/z):454.2[M+H]+,Rt＝3.502min，方法N。
5.03.10实施例102
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基氮杂环丁-3-基酯(化合物402)
Figure BDA0003085169390002131
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002132
在0℃下，将三光气(203mg，0.68mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液缓慢加入到1-boc-3-羟基氮杂环丁烷(370mg，2.14mmol)和DIEA(275mg，2.13mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。在0℃下将反应物搅拌1小时。在0℃下将所得混合物加入到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.43mmol)和DIEA(111mg，0.86mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。在室温下将反应物搅拌2小时。用水淬灭反应物，然后用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.28mmol，65.4％产率)，呈黄色固体状。
步骤2：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002141
在90℃下，将7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180.0mg，0.28mmol)、NH2Boc(981.0mg，8.38mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(29.0mg，0.03mmol)、Brettphos(27.0mg，0.06mmol)和Cs2CO3(273.0mg，0.84mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.19mmol，69.1％产率)，呈棕色固体状。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390002151
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140.0mg，0.19mmol)在二氯甲烷(2mL)和TFA(0.5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(40mg，0.09mmol，48.8％产率)，呈黄色固体状。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-甲基氮杂环丁-3-基)酯
Figure BDA0003085169390002152
在25℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(40mg，0.09mmol)和甲醛(40％水溶液，14mg，0.19mmol)在甲醇(2mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(32mg，0.28mmol)，并且在25℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-甲基氮杂环丁-3-基)酯(9.2mg，0.021mmol，22.1％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝439,Rt＝1.574min，方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.69(s,1H),4.95(p,J＝6.0Hz,1H),4.29(s,2H),3.65(t,J＝7.4Hz,2H),3.36-3.33(m,2H),3.04(t,J＝6.9Hz,2H),2.30(s,3H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
5.03.11实施例103
(±)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物403)
Figure BDA0003085169390002161
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002162
在0℃下向3-羟基四氢呋喃(790mg，8.97mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.32mL，1.86mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(414mg，1.40mmol)。将反应物搅拌30分钟。然后加入7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.90mmol)。在0℃下将反应物搅拌6小时。在真空下浓缩所得混合物，并通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.32mmol，35.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝559。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002171
在100℃下，将7-[8-氯-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.29mmol)、氨基甲酸叔丁酯(1.0g，8.54mmol)、碳酸铯(290mg，0.88mmol)、2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(62mg，0.12mmol)和三(二亚苯甲基丙酮)二钯-三氯甲烷加合物(60mg，0.06mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用甲烷/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol，54.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝640。
步骤3：(±)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390002181
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(45mg，0.07mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(1mL)中的溶液搅拌30分钟。在真空下浓缩所得溶液。用氨的甲醇溶液(7mol/L)将残余物的pH调节至pH 8。在真空下浓缩所得溶液，并通过制备型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD柱30*150mm,5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝19％B至42％B，7min；60mL/min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(17.8mg，0.041mmol，57.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝440,2.216min，方法M。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.31-5.24(m,1H),4.29(t,J＝4.5Hz,2H),3.89-3.69(m,4H),3.39-3.34(m,2H),2.20-2.18(m,1H),1.98-1.96(m,1H),1.92(s,3H)。
5.03.12实施例104
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基哌啶-4-基酯(化合物407)和(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-4-基酯(化合物404)
Figure BDA0003085169390002191
步骤1：7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002192
在0℃下，向4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.26g，11.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.95mL，11.23mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中逐滴加入含三光气(1g，3.43mmol)的二氯甲烷(2ml)。在0℃下将反应物搅拌2小时。然后在0℃下将反应混合物加入到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.95mL，11.23mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。在室温下将混合物搅拌16小时。用水淬灭反应物，然后用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.74mmol，66％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝672。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002201
在室温下向7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.74mmol)、氨基甲酸叔丁酯(1.75g，14.9mmol)、三(二亚苯甲基丙酮)二钯-三氯甲烷加合物(155mg，0.15mmol)和2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(160mg，0.30mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入碳酸铯(730mg，2.23mmol)。在90℃下将反应物搅拌3小时。在真空下浓缩所得溶液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.33mmol，44.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390002211
在室温下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.33mmol)和三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的混合物搅拌30分钟。在真空下浓缩反应溶液。将残余物溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺将pH调节至7。在真空下浓缩混合物，并通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-哌啶基酯(70mg，0.15mmol，45.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453,1.479min，方法J；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.82(d,J＝6.4Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.73-4.71(m,1H),4.29(t,J＝4.0Hz,2H),3.49(s,3H),2.97-2.94(m,2H),2.58-2.55(m,2H),1.92(s,3H),1.89-1.85(m,2H),1.53-1.48(m,2H)。
步骤4:(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390002212
在室温下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-哌啶基酯(70mg，0.15mmol)和甲醛(9mg，0.30mmol)在甲醇(8mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入氰基硼氢化钠(18.8mg，0.30mmol)。在室温下将反应混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，然后用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(XBridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):CH3CN＝31％B至53％B，7min；60mL/min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-甲基-4-哌啶基)酯(24.4mg，0.052mmol，34.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝467,Rt＝1.545min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.82(d,J＝6.4Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.68-4.66(m,1H),4.29(t,J＝4.0Hz,2H),3.36-3.33(m,2H),2.64-2.62(m,2H),2.15-2.12(m,5H),1.90-1.87(m,5H),1.65-1.63(m,2H)。
5.03.13实施例105
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸吡咯烷-3-基酯(化合物405a和化合物405b)
Figure BDA0003085169390002221
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002231
在0℃下，在氮气下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.56mmol)、1-boc-3-羟基吡咯烷(105mg，0.56mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌5分钟。然后在0℃下将含三光气(168mg，0.59mmol)的二氯甲烷(1mL)加入到反应溶液中。在室温下将反应物搅拌1小时。然后用水淬灭反应物，并用二氯甲烷(200mL)萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.33mmol，59.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝658.0。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002241
在90℃下，在氮气下将7-[3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.35mmol)、氨基甲酸叔丁酯(1.2g，10.26mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(36mg，0.03mmol)、Brettphos(35mg，0.070mmol)和Cs2CO3(350mg，1.07mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物搅拌4小时。过滤反应溶液，并且在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.27mmol，76.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝739.0。
步骤3：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390002242
在28℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.27mmol)和三氟乙酸(3mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。然后在真空下浓缩混合物。用三乙胺将残余物的pH值调节至pH 9。通过制备型HPLC(YMC-Actus TriartC18 30*250，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):CH3CN＝50％B至70％B，7min；60mL/min)纯化粗产物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物405a)(27.1mg，0.062mmol，22.8％产率):保留时间：2.075min(ChIRALPAK IC-3,0.46*5cm,3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝75:25，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.2,Rt＝0.935min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.32(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),5.14-5.11(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.36(s,3H),3.04(dd,J＝12.4,5.6Hz,1H),2.92-2.74(m,3H),1.98(dd,J＝14.3,7.3Hz,1H),1.92(s,3H),1.78(q,J＝6.9,6.1Hz,1H)。
对映异构体2(化合物405b)(25.9mg，0.059mmol，21.8％产率):保留时间：3.237min(ChIRALPAK IC-3,0.46*5cm,3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝75:25，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.2,Rt＝0.935min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.32(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),5.14-5.11(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.36(s,3H),3.04(dd,J＝12.4,5.6Hz,1H),2.92-2.74(m,3H),1.98(dd,J＝14.3,7.3Hz,1H),1.92(s,3H),1.78(q,J＝6.9,6.1Hz,1H)。
5.03.14实施例106
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-3-基酯(化合物408a和化合物408b)
Figure BDA0003085169390002261
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002262
在室温下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)和3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，1.24mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入DIEA(300mg，2.33mmol)。加入三光气(120mg，0.40mmol)，并且在0℃下将反应混合物搅拌1小时。用二氯甲烷稀释反应物，然后用水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.21mmol，46.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝672.2。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002271
在室温下向7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.21mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1.5g，12.82mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液中加入Pd2(dba)3.CHCl3(50mg，0.05mmol)、Brettphos(50mg，0.09mmol)和Cs2CO3(220mg，0.67mmol)。在90℃下将所得混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/3)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.20mmol，95.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753.2。
步骤3：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-3-基酯
Figure BDA0003085169390002272
在室温下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.19mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用三乙胺将残余物调节至pH 8，然后通过制备型HPLC(YMC-ActusTriart C18 30*250,5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):CH3CN＝23％-49％，7min；60mL/min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定
对映异构体1(化合物408a)(15.9mg，0.035mmol，18.9％产率)：保留时间：1.937min(CHIRALPAK IG-3,0.46*5cm,3μm；DCM(0.1％DEA):MeOH＝50:50，3min；1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,1.814min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.59(dt,J＝8.7,4.4Hz,1H),4.29(s,2H),2.36-3.32(m,3H),3.06-3.04(m,1H),2.76-2.72(m,1H),2.45-2.40(m,2H),1.98-1.92(m,4H),1.68-1.64(m,1H),1.46(dt,J＝21.7,10.5Hz,2H)。
对映异构体2(化合物408b)(12.6mg，0.0278mmol，15％产率)：保留时间：1.235min(CHIRALPAK IG-3,0.46*5cm,3μm；DCM(0.1％DEA):MeOH＝50:50；1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,1.814min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.59(dt,J＝8.7,4.4Hz,1H),4.29(s,2H),2.36-3.32(m,3H),3.06-3.04(m,1H),2.76-2.72(m,1H),2.45-2.40(m,2H),1.98-1.92(m,4H),1.68-1.64(m,1H),1.46(dt,J＝21.7,10.5Hz,2H)。
5.03.15实施例107
N-[8-氨基-7-氟-6-[(4S)-4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯和
N-[8-氨基-7-氟-6-[(4R)-4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
(化合物412a和化合物412b)
Figure BDA0003085169390002291
步骤4：6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺
Figure BDA0003085169390002292
用氮气吹扫8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(311mg，0.96mmol)、[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]硼酸(190mg，0.6mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(74.2mg，0.09mmol)和碳酸钾(294.4mf，2.1mmol)在二噁烷(5mL)和水(1mL)中的混合物，并且在90℃下加热24小时。然后将反应物冷却至室温，用20mL乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土过滤。然后浓缩滤液，并通过快速柱色谱法(0-100％乙酸异丙酯/庚烷)进行纯化，得到6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(204mg，0.4mmol)，呈棕色固体状。LCMS(ESI,m/z):474[M+H]+。
步骤5：N-[6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002301
使用与实施例101的步骤1类似的程序，使用6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺替代7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(207.8mg，0.34mmol)来制备标题化合物。LCMS(ESI,m/z):602[M+H]+。
步骤6：N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002302
使用与实施例101的步骤2类似的程序，使用N-[6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯替代7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸酯(207.8mg，0.34mmol)来制备标题化合物。LCMS(ESI,m/z):602[M+H]+。绝对立体化学结构任意指定。
步骤7：N-[8-氨基-7-氟-6-[(4S)-4-羟基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002311
使用与实施例101的步骤3类似的程序，使用N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯替代7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸酯来制备标题化合物。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物412b)：保留时间：1.556min(CHIRALPAK IH,0.46*5cm,3μm；等度40％MeOH，2.5min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.35(s,1H),7.98(d,J＝2.8Hz,2H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.24(s,2H),5.40(d,J＝5.5Hz,1H),4.85(s,2H),4.40-4.30(m,2H),3.86(dt,J＝11.7,4.5Hz,2H),3.48(ddd,J＝11.8,9.3,2.9Hz,2H),2.24(d,J＝1.4Hz,3H),1.95(ddd,J＝16.6,8.0,3.9Hz,4H),1.65-1.56(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):469.2[M+H]+,3.437min，方法N。
对映异构体2(化合物412a)：保留时间：1.082min(CHIRALPAK IH,0.46*5cm,3μm；等度40％MeOH，2.5min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.35(s,1H),7.98(d,J＝2.8Hz,2H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.24(s,2H),5.40(d,J＝5.5Hz,1H),4.85(s,2H),4.40-4.30(m,2H),3.86(dt,J＝11.7,4.5Hz,2H),3.48(ddd,J＝11.8,9.3,2.9Hz,2H),2.24(d,J＝1.4Hz,3H),1.95(ddd,J＝16.6,8.0,3.9Hz,4H),1.65-1.56(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):469.2[M+H]+,3.437min，方法N。
5.03.16实施例108
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲(化合物701)
Figure BDA0003085169390002321
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002322
在0℃下，在10分钟内将含三光气(320mg，1.08mmol)的四氢呋喃(40mL)加入到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.67mmol)和吡啶(0.16mL，2.02mmol)的溶液中。加入四氢-2H-吡喃-4-胺(700mg，6.92mmol)，并且在0℃下将反应混合物搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物，并通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.45mmol，67.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝572。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002331
在90℃下将7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.28mmol)、氨基甲酸叔丁酯(1g，8.54mmol)、碳酸铯(284mg，0.87mmol)、2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(61mg，0.11mmol)和三(二亚苯甲基丙酮)二钯-三氯甲烷加合物(60mg，0.06mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.15mmol，54.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝653.0。
步骤3：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-四氢吡喃-4-基-脲
Figure BDA0003085169390002332
在25℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.15mmol)在二氯甲烷(10mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液。用氨的甲醇溶液(7mol/L)将残余物的pH调节至pH 8。在真空下浓缩所得溶液，并通过制备型HPLC(YMC-Actus Triart C18 30*250，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):CH3CN＝37％B至62％B，7min；60mL/min)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-四氢吡喃-4-基-脲(59.8mg，0.13mmol，86.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453,Rt＝0.893min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.87(s,1H),7.84(s,1H),7.33(s,1H),7.20(d,J＝7.5Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),3.88-3.75(m,3H),3.42-3.34(m,4H),1.92(s,3H),1.87-1.83(m,2H),1.43-1.39(m,2H)。
5.03.17实施例109
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸9-甲基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯(化合物406)
Figure BDA0003085169390002341
步骤1：7-[3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002351
在0℃下，对7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.34mmol)、7-羟基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-甲酸叔丁酯(410.2mg，1.69mmol)和DIEA(435.8mg，3.37mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液进行搅拌。然后在0℃下逐滴加入三光气(150.1mg，0.51mmol)，然后在25℃下搅拌2小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2:1)洗脱，得到7-[3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(115mg，0.16mmol，47.8％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝714.2。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002352
在90℃下，将7-[3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(105mg，0.15mmol)、NH2Boc(516.1mg，4.41mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(31mg，0.030mmol)、Brettphos(32mg，0.06mmol)和Cs2CO3(143.8mg，0.44mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97:3)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(85mg，0.11mmol，72.7％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝795.5。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯
Figure BDA0003085169390002361
在25℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(9-叔丁氧基羰基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.10mmol)和TFA(2ml)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。用TEA将残余物调节至pH 8。用水稀释所得混合物。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯(40mg，0.08mmol，80.4％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.3。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸9-甲基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯(化合物406)
Figure BDA0003085169390002371
将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯(34.5mg，0.07mmol)在甲醇(15mL)中的溶液加入甲醛(10.5mg，0.14mmol，40％)，并且在25℃下搅拌2小时。然后加入NaBH3CN(8.8mg，0.14mmol)，并且在25℃下搅拌2小时。用水稀释反应物。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3),流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至31％B，10min；Rt:9.87min)纯化残余物，得到(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸9-甲基-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-7-基酯(9.9mg，0.02mmol，27.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.2,RT＝0.720min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),9.33(s,1H),8.04(s,1H),7.33(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.69(s,1H),5.05-5.08(m,1H),4.29(d,J＝4.8Hz,2H),3.80(dd,J＝11.0,2.2Hz,2H),3.42-3.36(m,4H),2.70(d,J＝8.4Hz,2H),2.43-2.33(m,5H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.62(dd,J＝13.1,5.8Hz,2H)。
5.03.18实施例110
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-6-氧代哌啶-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-6-氧代哌啶-3-基酯(化合物409a和化合物409b)
Figure BDA0003085169390002381
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002382
在0℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.56mmol)、5-羟基-1-甲基-哌啶-2-酮(90mg，0.70mmol)和DIEA(292mg，2.25mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液加入含三光气(60mg，0.20mmol)的二氯甲烷(3mL)。在室温下将反应物搅拌16小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化所得残余物，得到7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(290mg，0.495mmol，88.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝600。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-6-氧代-3-哌啶基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002391
在90℃下将7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-6-氧代-3-哌啶基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.47mmol)、NH2Boc(3.28g，28.03mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(97mg，0.09mmol)、Brettphos(101mg，0.19mmol)和Cs2CO3(304mg，0.94mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液搅拌3小时。用水稀释反应混合物。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(88/12)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-6-氧代-3-哌啶基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.264mmol，56.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝681。
步骤3：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-6-氧代哌啶-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-6-氧代哌啶-3-基酯
Figure BDA0003085169390002401
在25℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-6-氧代-3-哌啶基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol)在TFA(3mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。用TEA将残余物调节至pH 9。通过利用以下条件的制备型HPLC(柱：X BridgeShield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：14％B至37％B，7min；220/254nm；Rt:6.57min)和手性HPLC纯化粗产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物409a)(17.9mg，0.0373mmol，16.9％产率)：保留时间：2.367(CHIRALPAK IC-3：0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min；梯度：50B至50B，5min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2,RT＝1.017min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.12(s,1H),4.29(s,2H),3.64(dd,J＝13.3,3.9Hz,1H),2.81(s,3H),2.48-2.36(m,3H),2.31-2.20(m,2H),2.02(s,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物409b)(17.6mg，0.0366mmol，16.6％产率)：保留时间：3.097(CHIRALPAK IC-3：0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min；梯度：50B至50B，5min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2,RT＝1.017min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.12(s,1H),4.29(s,2H),3.64(dd,J＝13.3,3.9Hz,1H),2.81(s,3H),2.48-2.36(m,3H),2.31-2.20(m,2H),2.02(s,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例111
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物410a和化合物410b)
Figure BDA0003085169390002411
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002412
在0℃下，在氮气下向4-羟基-1-甲基-吡咯烷-2-酮(200mg，1.74mmol)、7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(386mg，0.87mmol)和DIEA(903mg，6.95mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中缓慢加入含三光气(155mg，0.52mmol)的二氯甲烷(5mL)。在室温下将反应物搅拌2小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷稀释所得溶液，并且用水洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-70/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(307mg，0.5239mmol，30.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝586。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002421
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(307mg，0.52mmol)、NH2Boc(3.7g，31.62mmol)、Brettphos(112mg，0.21mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(108mg，0.10mmol)和Cs2CO3(340mg，1.05mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.39mmol，74.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝667。
步骤3：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390002431
在室温下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol)在TFA(3mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10％B至30％B，10min；254/220nm；Rt:9.58min)和手性HPLC纯化粗产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物410a)(37.7mg，0.0808mmol，35.9％产率)。保留时间：2.589min(CHIRALPAK IC-3：0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝75:25；1.0ml/min；梯度：50B至50B，5min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,1.659min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.69(s,1H),5.28(dd,J＝7.1,5.5Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.42(dd,J＝11.5,1.5Hz,1H),2.84–2.75(m,2H),2.76(s,4H),2.30(d,J＝17.3Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物410b)(41.6mg，0.0892mmol，39.6％产率)。保留时间：3.581min(CHIRALPAK IC-3：0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝75:25；1.0ml/min；梯度：50B至50B，5min)，LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,1.659min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.69(s,1H),5.28(dd,J＝7.1,5.5Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.42(dd,J＝11.5,1.5Hz,1H),2.84–2.75(m,2H),2.76(s,4H),2.30(d,J＝17.3Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例112
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基吡咯烷-3-基酯(化合物411a和化合物411b)
Figure BDA0003085169390002441
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002451
在0℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1200mg，2.7mmol)、1-Boc-3-羟基吡咯烷(660mg，3.52mmol)和DIEA(2000mg，15.5mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加入(COCl2)3(312mg，1.05mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时。用水淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(100/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1600mg，2.1881mmol，81.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝659.0。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002452
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1600mg，2.8mmol)、NH2Boc(1.40g，119.66mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(250mg，0.24mmol)、Brettphos(240mg，0.50mmol)和Cs2CO3(2400mg，7.36mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物搅拌2小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1300mg，1.793mmol，64.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝739.0。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390002461
在室温下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.51mmol)在二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(20mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸吡咯烷-3-基酯(200mg，0.4105mmol，79.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.0。
步骤4：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390002471
在室温下将甲醛(20mg，0.67mmol)和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸吡咯烷-3-基酯(300mg，0.68mmol)在甲醇(30mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(127mg，2.05mmol)，并且在室温下将反应物搅拌30分钟。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法(乙腈0-70/0.1％NH4HCO3水溶液)和手性HPLC纯化残余物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物411a)(25mg，0.0553mmol，8.1％产率)：保留时间：7.952(CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：HEX:DCM＝3:1，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，15min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT 0.931min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),5.14(dd,J＝8.0,4.3Hz,1H),4.29(s,2H),3.37(s,2H),2.71(dt,J＝7.6,3.9Hz,1H),2.65(d,J＝4.5Hz,2H),2.32-2.17(m,5H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.85-1.73(m,1H)。
对映异构体2(化合物411b)(22mg，0.0485mmol，7.1％产率)。保留时间：12.08(CHIRALPAK IG，2*25cm，5μm；流动相A：HEX:DCM＝3:1，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，15min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT 0.931min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),5.14(dd,J＝8.0,4.3Hz,1H),4.29(s,2H),3.37(s,2H),2.71(dt,J＝7.6,3.9Hz,1H),2.65(d,J＝4.5Hz,2H),2.32-2.17(m,5H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.85-1.73(m,1H)。
5.03.19实施例113
(8-氨基-7-氟-6-(8-羟基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯(化合物413)
Figure BDA0003085169390002481
步骤1：N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-丁-3-烯基-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002482
在室温下将N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(58g，140.42mmol)在四氢呋喃(500mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入4-溴-1-丁烯(50g，370.37mmol)和NaI(55g，366.67mmol)，并且在95℃下搅拌16小时。然后通过加入水来淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-丁-3-烯基-氨基甲酸叔丁酯(30g，64.22mmol，45.7％产率)，呈黄色油状，并且回收8g起始物质。LCMS(ESI)[M+H]+＝467。
步骤2：7-溴-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002483
在110℃下，在氮气下将N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-丁-3-烯基-氨基甲酸叔丁酯(30g，64.22mmol)、Pd(dppf)Cl2(2.4g，3.28mmol)和TEA(13.1g，128.43mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1500mL)中的溶液搅拌1小时。用水稀释所得溶液，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到7-溴-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(13g，38.32mmol，59.7％产率)，呈黄色。LCMS(ESI)[M+H]+＝339。
步骤3：7-溴-8-甲基-4-氧代-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002491
在25℃下，将7-溴-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(13g，38.32mmol)、RuCl3(2.4g，11.59mmol)和NaIO4(20.5g，95.79mmol)在乙腈(350mL)、四氯化碳(350mL)和水(350mL)中的溶液搅拌1.5小时。然后通过加入300mL硫代硫酸钠溶液来淬灭反应物。用碳酸氢钠将所得溶液调节至pH 6-7，并且用乙酸乙酯萃取。然后在真空下浓缩有机相。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-溴-8-甲基-4-氧代-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(7g，20.52mmol，53.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝341。
步骤4：7-溴-4-羟基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002492
在室温下将7-溴-8-甲基-4-氧代-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.47mmol)和NaBH4(150mg，4.05mmol)在乙醇(30mL)中的溶液搅拌2小时。用水稀释反应混合物。用乙酸乙酯萃取所得混合物。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩，得到7-溴-4-羟基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，1.049mmol，71.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝343。
步骤5：7-溴-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002501
在25℃下，在氮气下向7-溴-4-羟基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(330mg，0.96mmol)和咪唑(200mg，2.94mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TBDMSCl(293mg，1.95mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌2小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-溴-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.874mmol，90.9％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝457。
步骤6：4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002502
在室温下，在氮气下向7-溴-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.87mmol)和双(频哪醇)二硼(440mg，1.73mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(130mg，0.18mmol)和KOAc(260mg，2.65mmol)。在100℃下将所得溶液搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化所得残余物，得到4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.634mmol，72.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝505。
步骤7：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002511
在室温下，在氮气下向4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.79mmol)和8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(400mg，1.24mmol)在1,4-二噁烷(12mL)和水(1.2mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(120mg，0.16mmol)和K2CO3(330mg，2.39mmol)。在60℃下将所得混合物搅拌2小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.523mmol，66％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝573。
步骤8：4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002512
在0℃下，在氮气下向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.38mmol)和氯甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯(350mg，2.13mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入DIEA(268mg，2.08mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌2小时。用二氯甲烷稀释反应物，然后用水洗涤。干燥有机相，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.214mmol，55.7％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝701。
步骤9：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002521
在室温下，在氮气下向4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.21mmol)和NH2-Boc(1.5g，12.82mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中加入Pd(dba)3CHCl3(45mg，0.04mmol)、Brettphos(45mg，0.08mmol)和Cs2CO3(225mg，0.69mmol)。在90℃下将所得混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.179mmol，83.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝782。
步骤10：N-[8-氨基-6-[8-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002531
在室温下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.18mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1mL)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用TEA将残余物调节至pH 8。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％HCl水溶液)纯化所得混合物，得到N-[8-氨基-6-[8-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(60mg，0.103mol,57.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝58
步骤11：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-羟基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390002532
在25℃下向N-[8-氨基-6-[8-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(60mg，0.10mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(120mg，0.46mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌2小时。浓缩所得混合物，并且通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％TFA水溶液)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-羟基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(9mg，0.019mmol，18.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,1.275min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.65(s,1H),6.84(s,1H),6.23(s,2H),5.65(s,1H),5.19(s,1H),4.87(dq,J＝8.7,4.4Hz,1H),4.61(d,J＝3.9Hz,1H),3.90-3.81(m,2H),3.53-3.42(m,2H),3.34(m,2H),1.97-1.87(m,6H),1.81(s,1H),1.61(dtd,J＝12.9,9.1,4.0Hz,2H)。
5.03.20实施例114
(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-乙酰胺基环己酯和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-乙酰胺基环己酯(化合物414a和化合物414b)
Figure BDA0003085169390002541
步骤1：(±)-N-((1R,2R)-2-羟基环己基)乙酰胺
Figure BDA0003085169390002542
在室温下将(±)-(1s,2s)-2-氨基环己醇(1.0g，8.68mmol)和MeONa(474.0mg，8.62mmol)在甲醇(50mL)中的溶液搅拌15分钟。然后加入乙酸酐(1.0g，9.8mmol)，并且在室温下搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到(±)-N-[(反式)-2-羟基环己基]乙酰胺(1g，6.361mmol，73.3％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝157.2。
步骤2：(±)-7-(3-(((((1R,2R)-2-乙酰胺基环己基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002551
在0℃下搅拌N-[(反式)-2-羟基环己基]乙酰胺(133mg，0.85mmol)、7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.56mmol)和DIEA(363mg，2.81mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液。然后加入三光气(75.0mg，0.25mmol)，并且在室温下将反应物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(9:1)洗脱，得到(±)-7-[3-[[(反式)-2-乙酰胺基环己氧基]羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(310mg，0.494mmol，87.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝628.1。
步骤3：(±)-7-(3-(((((反式)-2-乙酰胺基环己基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002561
在90℃下，在氮气下将(±)-7-[3-[[(反式)-2-乙酰胺基环己氧基]羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.48mmol)、氨基甲酸叔丁酯(2800mg，23.9mmol)、Pd(dba)3.CHCl3(99mg，0.10mmol)、Brettphos(103mg，0.19mmol)和Cs2CO3(467mg，1.43mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌5小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97:3)洗脱，得到(±)-7-[3-[[(反式)-2-乙酰胺基环己氧基]羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.3104mmol，65％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝708.8。
步骤4：(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-乙酰胺基环己酯和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-乙酰胺基环己酯
Figure BDA0003085169390002562
在室温下将(±)-7-[3-[[(反式)-2-乙酰胺基环己氧基]羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.28mmol)和TFA(1.0mL，0.28mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液搅拌1.5小时。用二氯甲烷稀释反应物，然后用三乙胺调节至pH 6-7。在真空下浓缩混合物，且通过制备型HPLC(X Bridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝20％-45％，7min；60mL/min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定
对映异构体1(化合物414a)(29.6mg，0.0582mmol，20.6％产率)：保留时间：1.225min(CHIRALPAK IG-3,0.46*5cm；3μm；MTBE(0.2％IPAmine)：EtOH＝50:50，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.2,RT＝2.029min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),9.30(s,1H),7.92(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.67(s,1H),4.61-4.44(m,1H),4.27-4.26(m,2H),3.82-3.76(m,1H),3.34-3.33(m,2H),2.05-2.04(m,1H),1.95(s,3H),1.91-1.90(m,1H),1.84(s,3H),1.74-1.61(m,2H),1.45-1.28(m,4H)。
对映异构体2(化合物414b)(28.3mg，0.0556mmol，19.7％产率)：保留时间：2.338min(CHIRALPAK IG-3,0.46*5cm；3μm；MTBE(0.2％IPAmine)：EtOH＝50:50，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.2,RT＝2.029min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),9.30(s,1H),7.92(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.67(s,1H),4.61-4.44(m,1H),4.27-4.26(m,2H),3.82-3.76(m,1H),3.34-3.33(m,2H),2.05-2.04(m,1H),1.95(s,3H),1.91-1.90(m,1H),1.84(s,3H),1.74-1.61(m,2H),1.45-1.28(m,4H)。
5.03.21实施例115
(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(甲基氨基)环己酯和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(甲基氨基)环己酯(化合物415a和化合物415b)
Figure BDA0003085169390002581
步骤1：反式-(2-羟基环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002582
向反式-2-(甲基氨基)环己醇(200mg，1.55mmol)在1,4-二噁烷中的溶液中加入氢氧化钠(80.0mg，1.86mmol)在水(30ml)和Boc2O(503.0mg，2.31mmol)中的溶液。在室温下将混合物搅拌16小时。用1N HCl将反应溶液调节至pH 6-7。用乙酸乙酯萃取所得混合物。合并有机层，干燥并且在真空下浓缩，得到反式-(2-羟基环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(310mg，1.3518mmol，87.3％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝229.3。
步骤2：反式-7-(3-((((2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)环己基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002591
在0℃下向反式-7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.560mmol)、(2-羟基环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(194.0mg，0.850mmol)和DIEA(362.0mg，2.81mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(75.0mg，0.250mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到反式-7-(3-((((2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)环己基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(330mg，0.4713mmol，83.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝700.2。
步骤3：反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((2-(甲基氨基)环己基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002592
在90℃下将反式-7-(3-((((2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)环己基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320.0mg，0.460mmol)、氨基甲酸叔丁酯(2698.0mg，23.03mmol)、Pd(dba)3.CHCl3(94.0mg，0.090mmol)、Brettphos(98.0mg，0.180mmol)和Cs2CO3(447.0mg，1.37mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌5小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1:2)洗脱，得到反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((2-(甲基氨基)环己基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.3202mmol，70.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝780.9。
步骤4：(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(甲基氨基)环己酯和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(甲基氨基)环己酯
Figure BDA0003085169390002601
在室温下将反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((2-(甲基氨基)环己基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230.0mg，0.290mmol)和TFA(1.0mL，0.290mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液搅拌1.5小时。用二氯甲烷稀释反应物，然后用三乙胺调节至pH 6-7。在真空下浓缩反应混合物，且通过制备型HPLC(YMC-Actus Triart C18 30*250，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝31％-44％，7min；60mL/min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定
对映异构体1(化合物415a)(22.9mg，0.0477mmol，16.2％产率)：保留时间：1.553min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，7min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3,Rt＝1.030min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.67(s,1H),4.46-4.40(m,1H),4.27(s,2H),3.34-3.33(m,3H),2.49-2.42(m,1H),2.33(s,3H),2.06-1.90(m,5H),1.65-1.63(m,2H),1.39-1.33(m,4H)。
对映异构体2(化合物415b)(24.6mg，0.0512mmol，17.4％产率)：保留时间：3.752min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，17min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3,Rt＝1.030min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.67(s,1H),4.46-4.40(m,1H),4.27(s,2H),3.34-3.33(m,3H),2.49-2.42(m,1H),2.33(s,3H),2.06-1.90(m,5H),1.65-1.63(m,2H),1.39-1.33(m,4H)。
5.03.22实施例116
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基哌啶-3-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基哌啶-3-基酯(化合物416a和化合物416b)
Figure BDA0003085169390002611
在室温下向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸3-哌啶基酯(100mg，0.22mmol)(来自实施例106)在甲醇(10mL)中的溶液中加入甲醛(20mg，0.27mmol，40％)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。然后加入NaBH4(20mg，0.53mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。通过加入水来淬灭反应物，在真空下浓缩，并且通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVO C18柱21.2*150，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：15％B至41％B，10min；254nm；Rt:9.75min)和手性HPLC(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(10mM NH3-MeOH)--HPLC,流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：50％B至50％B，21min)进行纯化，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物416a)(22.6mg，0.0484mmol,21.9％产率)：保留时间：2.690min(CHIRALPAK IE-3,0.46*5cm；3μm，(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，5min；1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.3,RT＝1.514min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.72(dt,J＝8.4,4.3Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.33(t,J＝4.4Hz,2H),2.78(d,J＝10.8Hz,1H),2.48(d,J＝10.8Hz,1H),2.18(s,3H),2.13-2.01(d,J＝10.3Hz,2H),1.92-1.87(s,4H),1.75-1.71(m,1H),1.55-1.34(m,2H)。
对映异构体2(化合物416b)(19.8mg，0.0424mmol，19.2％产率)：保留时间：3.558min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm，3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，5min；1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.3,RT＝1.514min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.72(dt,J＝8.4,4.3Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.33(t,J＝4.4Hz,2H),2.78(d,J＝10.8Hz,1H),2.48(d,J＝10.8Hz,1H),2.18(s,3H),2.13-2.01(d,J＝10.3Hz,2H),1.92-1.87(s,4H),1.75-1.71(m,1H),1.55-1.34(m,2H)。
5.03.23实施例117
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物417)
Figure BDA0003085169390002631
步骤1：7-(3-((((2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002632
在0℃下，在氮气下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)、6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(195mg，0.91mmol)和DIEA(285mg，2.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌10分钟。然后加入三光气(95mg，0.32mmol)，并且在0℃下搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(60/30)洗脱，得到7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.278mmol，61.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝684。
步骤2：7-(3-((((2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002641
在90℃下将7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.44mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(90mg，0.090mmol)、Brettphos(93mg，0.17mmol)、Cs2CO3(420mg，1.29mmol)和NH2Boc(1250mg，10.68mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.248mmol，89.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝765。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390002651
在室温下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(5mL，0.25mmol)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩有机层，并且通过反相HPLC，用CH3CN/H2O(10/2)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(90mg，0.194mmol，78％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝465。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390002652
在室温下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(20mg，0.040mmol)和甲醛(3mg，0.10mmol，40％)在甲醇(2mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaCNBH3(8mg，0.13mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩混合物，并且通过反相HPLC，用ACN/水(10mmol/LNH4HCO3)(45/15)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)酯(4.6mg，0.0096mmol，22.3％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝479.2,RT＝1.584min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.34(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),6.87-6.80(d,J＝6Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.89-4.81(m,1H),4.29-4.27(m,2H),3.19-3.07(d,J＝15Hz,4H),2.20-2.14(m,5H),1.96-1.89(m,3H),1.24(s,4H)。
5.03.24实施例118
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-异丙基氮杂环丁-3-基)酯(化合物419)
Figure BDA0003085169390002661
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002662
在室温下，在氮气下向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，3.37mmol)和1-boc-3-羟基氮杂环丁烷(3.0g，17.32mmol)在二氯甲烷(250mL)中的溶液中加入DIEA(3.5g，27.13mmol)。然后加入三光气(1.4g，4.72mmol)，并且在0℃下将反应物搅拌1小时。用水洗涤反应混合物。干燥有机相，在真空下浓缩，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用PE/EA(1/1)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.1g，1.71mmol，50.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝644。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002671
在室温下，在氮气下向7-[3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(700mg，1.09mmol)和NH2-Boc(800mg，6.84mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物中加入Pd(dba)3CHCl3(250mg，0.24mmol)、Brettphos(250mg，0.47mmol)和Cs2CO3(1.1g，3.37mmol)。在90℃下将所得混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.69mmol，63.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝725。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390002681
在室温下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g，1.66mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌2小时。用TEA将反应混合物调节至pH 8。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化所得残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(250mg，0.353mmol，21.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝425。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-异丙基氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390002682
在室温下，在氢气气氛(1大气压)下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(100mg，0.24mmol)、Pd/C(5.0mg，0.24mmol)和丙酮(10mL)在甲醇(20mL)中的混合物搅拌3小时。然后过滤混合物并浓缩。通过制备型HPLC，利用以下条件纯化残余物：柱：Sunfire prep C18柱30*150，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至18％B，7min；254/220nm；Rt:5.92/6.67min，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-异丙基氮杂环丁-3-基)酯(33.6mg，0.072mmol，30.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT＝1.685min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.36(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.69(d,J＝2.8Hz,1H),5.10-5.02(m,1H),4.60-4.25(m,3H),4.09(d,J＝8.9Hz,2H),3.66(s,2H),2.96(s,2H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.02(d,J＝6.2Hz,6H)。
5.03.25实施例119
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁-3-基酯(化合物420)
Figure BDA0003085169390002691
在室温下，向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(40mg，0.09mmol)和三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(28mg，0.12mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入DIEA(25mg，0.19mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌3小时。通过加入水来淬灭反应物，然后通过制备型HPLC(柱：Sunfire prep C18柱，30*150,5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：13％B至40％B，7min；254/220nm；Rt:6.90min)直接纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁-3-基]酯(8.1mg，0.016mmol，17％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝507.2,RT＝1.842min，方法J。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.26(s,1H),8.05(s,1H),7.44(s,1H),6.96(d,J＝6.2Hz,1H),5.18(t,J＝5.8Hz,1H),4.50(t,J＝4.4Hz,2H),3.96-3.88(m,2H),3.55(s,4H),3.26(t,J＝9.6Hz,2H),2.07(d,J＝1.7Hz,3H)。
5.03.26实施例120
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(化合物421)
Figure BDA0003085169390002701
步骤1：7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002702
在0℃下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.25mmol)、DIEA(1449.0mg，11.23mmol)和1-boc-4-羟基哌啶(903.0mg，4.49mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入三光气(440.0mg，1.48mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭混合物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(50/50)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1195mg，1.7779mmol，79.1％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝672。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002711
在90℃下，在N2下将7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，0.74mmol)、NH2Boc(1740.0mg，14.87mmol)、Brettphos(159.0mg，0.30mmol)、Pd2(dba)3(153.0mg，0.15mmol)和Cs2CO3(727.0mg，2.23mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(80/20)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-5,6-二氢异喹啉-6-基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(419mg,0.55mmol，74％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753。
步骤3.(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390002721
在25℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.53mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(1mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。用Et3N将残余物调节至pH 8，并且通过反相色谱法进行纯化，用水(10mmol/LNH4HCO3)/ACN(70/30)洗脱，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-哌啶基酯(89mg,0.19mmol，37％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390002722
在60℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-哌啶基酯(50.0mg，0.11mmol)、氧杂环丁-3-酮(80.0mg，1.11mmol)和四异丙醇钛(126.0mg，0.44mmol)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(21.0mg，0.33mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC，利用以下条件(柱：YMC-Actus Triart C18 30*250，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝30％B至40％B，9min；60mL/min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[1-(氧杂环丁-3-基)-4-哌啶基]酯(17.9mg，0.035mmol，32％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝509,RT＝1.635min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.31(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.66(s,1H),4.69-4.60(m,1H),4.60-4.50(m,2H),4.40-4.30(m,2H),4.30-4.20(m,2H),3.51-3.30(m,3H),2.52-2.40(m,2H),2.10-2.05(m,2H),1.90-1.80(m,5H),1.73-1.50(m,2H)。
5.03.27实施例121
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基酯(化合物422)
Figure BDA0003085169390002731
在25℃下，在N2下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-哌啶基酯(50.0mg，0.11mmol)、Et3N(34.0mg，0.34mmol)和三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(205.0mg，0.88mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 30*250，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝50％B至64％B，7min；60mL/min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[1-(2,2,2-三氟乙基)-4-哌啶基]酯(21.9mg,0.041mmol，37％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝535,RT＝2.101min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.31(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.69(s,1H),4.27(s,2H),3.23(s,2H),3.19(q,J＝10.1Hz,2H),2.89-2.84(m,2H),2.55(d,J＝10.4Hz,2H),1.90(d,J＝1.6Hz,5H),1.63(d,J＝9.8Hz,2H)。
5.03.28实施例122
N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)酯(化合物423)
Figure BDA0003085169390002741
步骤1：7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002751
在0℃下，在氮气下向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(128mg，0.29mmol)、2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(204mg，0.85mmol)和DIEA(192mg，1.48mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(128mg，0.43mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液。在室温下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(164mg，0.2309mmol，79.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝710。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002752
在90℃下，在氮气下将7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(164mg，0.23mmol)、NH2Boc(0.81g，6.92mmol)、Pd(dba)3CHCl3(48mg，0.050mmol)、Brettphos(49mg，0.090mmol)和Cs2CO3(150mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.177mmol，76.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝791。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390002761
在30℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.18mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(80mg，0.1631mmol，92.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝491。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)酯
Figure BDA0003085169390002762
在30℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(80mg，0.16mmol)和甲醛(35mg，0.47mmol)在甲醇(4mL)中的混合物搅拌1小时。然后加入NaCNBH3(30mg，0.48mmol)。在30℃下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：18％B至39％B，7min；Rt:6.67min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)酯(7.7mg，0.0153mmol，9.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝505.4,Rt＝1.987min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.56(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.43(t,J＝2.6Hz,1H),4.97(p,J＝7.2Hz,1H),3.33-3.30(m,3H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.32–2.22(m,4H),2.11(s,4H),1.95–1.89(m,2H),1.88–1.75(m,5H),1.55(t,J＝5.4Hz,4H)。
5.03.29实施例123
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物424)
Figure BDA0003085169390002771
在0℃下，在氮气下向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(40.0mg，0.09mmol)和Et3N(26.0mg,0.26mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入乙酰酸酐(13.0mg,0.1300mmol)。在25℃下将混合物搅拌2小时。通过加入MeOH(2mL)来淬灭反应物。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在3ml DMF中。通过反相快速色谱法(ACN/水(10mmol/LNH4HCO3))纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)酯(11.5mg，0.0227mmol，42.2％)，呈黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝507.2,RT＝1.697min，方法J。1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.23(s,1H),8.05(s,1H),7.38(s,1H),6.94(d,J＝6.2Hz,1H),5.01(t,J＝7.0Hz,1H),4.41(t,J＝4.4Hz,2H),4.26(d,J＝14.8Hz,2H),4.02(d,J＝14.9Hz,2H),3.50(s,2H),2.73(ddd,J＝10.2,6.9,3.3Hz,2H),2.44(d,J＝8.0Hz,2H),2.03(d,J＝1.7Hz,3H),1.87(d,J＝3.2Hz,3H)。
5.03.30实施例124
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物425)
Figure BDA0003085169390002781
步骤1：7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002782
在0℃下向6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(289mg，1.36mmol)、7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)和DIEA(294mg，2.26mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(202mg，0.68mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/9)洗脱，得到7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.2199mmol，48.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝682。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002791
在90℃下将7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(46mg，0.040mmol)、Brettphos(47mg，0.090mmol)、NH2Boc(1.3g，11.11mmol)和Cs2CO3(143mg，0.44mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(81mg，0.106mmol，48.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝763。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390002801
在30℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(81mg，0.106mmol)在二氯甲烷(10mL)和TFA(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(30mg，0.0649mmol，62.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝763。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390002802
在30℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(30mg，0.0649mmol)和甲醛(9.7mg，0.1298mmol，40％)在甲醇(4mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(28mg，0.44mmol)。在30℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBDC18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：50％B至57％B，9min；254/220nm；Rt:8.87min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)酯(5.5mg，0.0115mmol，7.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝477.2,Rt＝1.670min，方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.56(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.43(d,J＝2.6Hz,1H),4.83(p,J＝7.2Hz,1H),3.28(s,3H),2.84(t,J＝6.4Hz,5H),2.56-2.46(m,2H),2.20-2.10(m,5H),1.92(s,2H),1.86(d,J＝1.5Hz,3H)。
5.03.31实施例125
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)酯(化合物426)
Figure BDA0003085169390002811
在25℃下将7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(50mg，0.070mmol)在二氯甲烷(4mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。向残余物中加入二氯甲烷(5mL)，并且用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 30*250，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：27％B至42％B，7min；254/220nm；Rt:6.18min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)酯(11.8mg，0.0249mmol，33.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,Rt＝1.751min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),9.34(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.67(s,1H),5.19-5.15(m,1H),4.52-4.40(m,1H),4.27(s,2H),4.23-4.06(m,2H),3.78(d,J＝11.2Hz,1H),3.34-3.33(m,2H),1.90(s,3H),1.77(s,3H)。
5.03.32实施例126
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(化合物427)
Figure BDA0003085169390002821
步骤1：7-(3-((((7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002822
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.67mmol)、2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(325.5mg，1.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(435.75mg，3.37mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入三光气(200.1mg，0.67mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得混合物。合并有机层，经无水钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.56mmol，83.2％产率)]，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝712.4。
步骤2：7-(3-((((7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002831
在室温下向7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.42mmol)和Pd2(dba)3·CHCl3(87.2mg，0.08mmol)、BrettPhos(90.44mg，0.17mmol)和Cs2CO3(411.73mg，1.26mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中加入碳酸叔丁酯(1.23g，10.53mmol)，并且在90℃下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(99/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.315mmol，74.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝793.4
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390002841
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(490.0mg，0.62mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2mL)。在室温下将所得溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH8。在减压下浓缩所得溶液。通过反相色谱法(乙腈0-90％/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(100mg，0.20mmol，32.9％产率)]，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝493.4。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390002851
向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(40mg，0.08mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中加入甲醛水溶液(40％，12.24mg)。在室温下将混合物搅拌2小时。然后加入硼氢化钠(6.2mg，0.16mmol)，并且在室温下搅拌2小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得混合物。合并有机层并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：14％B至30％B，10min；254/220nm；Rt:9.42min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(7-甲基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)酯(16.2mg，0.032mmol，39.4％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝507.3,RT＝1.420min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.31(s,1H),7.93(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.19(s,2H),5.70-5.62(m,1H),4.96(p,J＝7.2Hz,1H),4.27(t,J＝4.3Hz,2H),3.32(s,2H),2.34-2.13(m,6H),2.10(s,3H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H),1.78(dd,J＝12.2,7.3Hz,2H),1.54(t,J＝5.4Hz,4H)。
5.03.33实施例127
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6-甲基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基酯(化合物428)
Figure BDA0003085169390002861
步骤1：7-(3-((((6-(叔丁氧基羰基)-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002862
在0℃下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.67mmol)、DIEA(436.0mg，3.38mmol)和2-羟基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(307.0mg，1.35mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(132.0mg，0.45mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭混合物，并且用二氯甲烷萃取。在真空下浓缩有机层，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用EA/PE(70/30)洗脱，得到7-[3-[(6-叔丁氧基羰基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(430mg，0.62mmol，91％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝698。
步骤2：7-(3-((((6-(叔丁氧基羰基)-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002871
在90℃下，将7-[3-[(6-叔丁氧基羰基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.57mmol)、NH2Boc(1343.0mg，11.48mmol)、Pd2(dba)3(119.0mg，0.11mmol)、Brettphos(123.0mg，0.23mmol)和Cs2CO3(561.0mg，1.72mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用EA/PE(78/22)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-叔丁氧基羰基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(396mg，0.51mmol，88％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝779。
步骤3.(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6-氮杂螺[3.4]辛-2-基酯
Figure BDA0003085169390002872
在25℃下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-叔丁氧基羰基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(396.0mg，0.51mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(2.5mL)。在25℃下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。用Et3N将残余物调节至pH 8，并且通过反相色谱法进行纯化，用水(10mmol/L NH4HCO3)/ACN(65/35)洗脱，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸6-氮杂螺[3.4]辛-2-基酯(73mg，0.15mmol，30％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝479。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6-甲基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基酯
Figure BDA0003085169390002881
在25℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸6-氮杂螺[3.4]辛-2-基酯(63.0mg，0.13mmol)和甲醛(18.0mg，0.60mmol，40％)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(23.0mg，0.37mmol)。在25℃下将反应混合物搅拌1小时。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/L NH4HCO3)/ACN)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(6-甲基-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)酯(25mg，0.051mmol，39％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝493.4,RT＝1.982min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.92-4.80(m,1H),4.30-4.20(m,2H),3.40-3.30(m,2H),2.49-2.27(m,6H),2.19(d,J＝9.4Hz,3H),2.14-1.98(m,2H),1.93-1.77(m,5H)。
5.03.34实施例128
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基氮杂环丁-3-基酯甲酸(化合物429)
Figure BDA0003085169390002891
步骤1：7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002892
在0℃下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)、1-(3-羟基氮杂环丁-1-基)乙酮(80mg，0.69mmol)和DIEA(180mg，1.40mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液搅拌5分钟。然后在0℃下将三光气(60mg，0.20mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液逐滴加入到反应溶液中。在室温下将反应物搅拌1小时。用二氯甲烷(200mL)萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(7％)洗脱，得到7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.2397mmol，53.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝584.0。
步骤2：7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002901
在90℃下将7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.34mmol)、NH2Boc(280mg，2.39mmol)、Brettphos Pd G3(80mg，0.09mmol)和Cs2CO3(280mg，0.86mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌2小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(13％)洗脱，得到7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.1625mmol，47.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝665.0。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基氮杂环丁-3-基酯甲酸
Figure BDA0003085169390002902
在室温下将7-[3-[(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.16mmol)和TFA(3mL)在DCM(12mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：15％B至36％B，10min；254nm)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-乙酰基氮杂环丁-3-基)酯甲酸(14mg，0.0274mmol，16.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝465.2,Rt＝1.805min，方法J；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ10.44(s,1H),9.39(s,1H),7.99(s,1H),7.75(s,1H),6.90(d,J＝6.0Hz,1H),6.34(s,2H),5.95(s,1H),5.33-5.12(m,1H),4.48(dd,J＝9.8,6.7Hz,1H),4.27-4.04(m,2H),3.81(dd,J＝10.8,4.1Hz,1H),2.94(t,J＝6.3Hz,2H),2.55(s,2H),1.95(d,J＝1.5Hz,5H),1.80(s,3H)。
5.03.35实施例129
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(化合物430)
Figure BDA0003085169390002911
步骤1：7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002912
在0℃下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(128mg，0.29mmol)、2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(204mg，0.85mmol)和DIEA(192mg，1.48mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(128mg，0.43mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液。在室温下将所得溶液搅拌16小时。在真空下浓缩反应溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(164mg，0.231mmol，79.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝710。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002921
在90℃下，将7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(164mg，0.23mmol)、NH2Boc(0.81g，6.92mmol)、Pd(dba)3CHCl3(48mg，0.050mmol)、Brettphos(49mg，0.090mmol)和Cs2CO3(150mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.177mmol，76.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝791。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390002931
在30℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.18mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(50mg，0.1018mmol，58.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝491。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390002932
在60℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(30mg，0.060mmol)、3-氧杂环丁酮(44mg，0.61mmol)和四异丙醇钛(69mg，0.24mmol)在甲醇(3mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(12mg，0.19mmol)，并且在室温下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC进行纯化，得到(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(4.9mg，0.009mmol，14.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝547.3,RT＝2.106min，方法M。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.02(s,1H),8.01(s,1H),7.75(s,1H),6.91(s,1H),5.04(t,J＝4.0Hz,1H),4.67(t,J＝3.9Hz,4H),3.45(t,J＝4.0Hz,3H),2.98(dd,J＝14.2,3.9Hz,2H),2.45-2.23(m,6H),2.10-1.87(m,7H),1.67-1.65(m,4H)。
5.03.36实施例130
(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯(化合物432a)
Figure BDA0003085169390002941
步骤1：7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002942
在0℃下，在氮气下将6-羟基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(223.0mg，1.12mmol)、7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.45mmol)和DIEA(322mg，2.5mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入三光气(103.0mg，0.35mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(5/1)洗脱，得到7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.328mmol，73％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝670。
步骤2：7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002951
在90℃下，在氮气下将7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(90.0mg，0.13mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(27.0mg，0.030mmol)、Brettphos(29.0mg，0.05mmol)、Cs2CO3(135.0mg，0.41mmol)和NH2Boc(405.0mg，3.46mmol)在1,4-二噁烷(9mL)中的混合物搅拌1小时。过滤之后，收集溶液并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(32/68)洗脱，得到7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.1066mmol，79.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝751。
步骤3：(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯
Figure BDA0003085169390002961
在室温下将7-(3-(((((1R,5S,6s)-3-(叔丁氧基羰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(95mg，0.13mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(1.0mL，0.13mmol)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法，用MeOH/水(65/30)进行纯化，得到(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯(45mg，0.0999mmol，79％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝451。
步骤4：(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯
Figure BDA0003085169390002971
在0℃下将甲醛(4.5mg，0.15mmol，40％)和(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯(20.0mg，0.040mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入NaCNBH3(14.0mg，0.050mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(25/75)洗脱，得到(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基酯(10mg，0.0215mmol，35％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝465.2,RT 0.967min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.33(s,1H),8.15(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.87-6.82(d,J＝6Hz,1H),6.23(s,2H),5.69(s,1H),4.29(s,2H),4.11(s,1H),3.34(s,1H),3.10-3.01(d,J＝9Hz,2H),2.43-2.34(s,J＝9Hz,1H),2.25(s,4H),1.96-1.89(d,J＝3Hz,3H),1.74(s,2H)。
5.03.37实施例131
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]酯(化合物433)
Figure BDA0003085169390002981
步骤1：7-[3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390002982
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，1.35mmol)、(3S,4R)-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(591.5mg，2.7mmol)和DIEA(871.5mg，6.74mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(280.2mg，0.94mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg,1.16mmol，86％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝690.2。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003085169390002991
在90℃下，在氮气下将7-[3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600.0mg，0.86mmol)、氨基甲酸叔丁酯(509.2mg，4.34mmol)、BrettPhos Pd G3(157.6mg，0.18mmol)和Cs2CO3(567.0mg，1.74mmol)的混合物搅拌4小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(410mg，0.53mmol，62.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771.3。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]酯
Figure BDA0003085169390002992
在0℃下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.52mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(10mL)。然后在室温下将所得溶液搅拌0.5小时。在真空下浓缩反应物。用二氯甲烷稀释残余物，用TEA调节至pH 8，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈1-60％,0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]酯(120mg，0.256mmol，49.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471.2。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-1-甲基-4-哌啶基]酯
Figure BDA0003085169390003001
在室温下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]酯(90.0mg，0.19mmol)和甲醛(11.5mg，0.38mmol，40％)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌2小时。然后向混合物中加入NaBH3CN(48.1mg，0.77mmol)，并且在室温下搅拌1小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得混合物。合并有机层，经硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge PrepC18 OBD柱19×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：32％B至45％B，10min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-3-氟-1-甲基-4-哌啶基]酯(9.2mg，0.02mmol，9.8％产率)，呈黄色固体状。绝对立体化学结构任意指定。LCMS(ESI)[M+H]+＝485.2,RT＝1.656min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.68(s,1H),4.92(s,1H),4.85(s,1H),4.28(s,2H),3.38(s,2H),2.72-2.89(m,2H),2.38(s,1H),2.20(s,4H),1.91(d,J＝1.6Hz,4H),1.80(s,1H)。
5.03.38实施例132
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)氮杂环丁-3-基酯(化合物434)
Figure BDA0003085169390003011
在室温下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(50mg，0.12mmol)和三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(20mg，0.09mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TEA(30mg，0.30mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。通过加入水来淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至22％B，10min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[1-(2,2-二氟乙基)氮杂环丁-3-基]酯(13.1mg，0.0268mmol，22.8％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝489.2,RT＝1.608min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),9.34(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),6.15-5.80(m,1H),5.68(s,1H),5.00(q,J＝5.6Hz,1H),4.29-4.27(m,2H),3.76-3.65(m,2H),3.35-3.33(m,2H),3.22(dd,J＝8.4,5.5Hz,2H),2.87(td,J＝16.1,4.1Hz,2H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H)。
5.03.39实施例133
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1,3,3-三甲基-4-哌啶基)酯(化合物435)
Figure BDA0003085169390003021
步骤1：7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003022
在氮气下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.67mmol)、4-羟基-3,3-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，1.31mmol)和DIEA(435.0mg，3.37mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三光气(141.0mg，0.48mmol)，并且在0℃下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(40/60)洗脱，得到7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(315mg，0.45mmol，66.7％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝700.3。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003031
在90℃下，在氮气下将7-[3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.43mmol)、NH2Boc(1254.0mg，10.72mmol)、Pd2(dba)3(90.0mg，0.09mmol)、BrettPhos(93.0mg，0.17mmol)和Cs2CO3(420.0mg，1.29mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速硅胶柱色谱法纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(37/63)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.077mmol，17.9％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝781.4。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3,3-二甲基-4-哌啶基)酯
Figure BDA0003085169390003041
在25℃下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3,3-二甲基-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(55.0mg，0.07mmol)和TFA(1.0mL，0.07mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)(27/73)洗脱，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3,3-二甲基-4-哌啶基)酯(33.5mg，0.069mmol，99％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1,3,3-三甲基-4-哌啶基)酯
Figure BDA0003085169390003042
在25℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3,3-二甲基-4-哌啶基)酯(25.0mg，0.05mmol)和甲醛(7.8mg，0.26mmol，40％)在甲醇(2mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(10.0mg，0.16mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC，用(柱：X Bridge PrepOBD C18柱30×150mm 5μm；水(10MMOL/L NH4HCO3):ACN＝20％B至43％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1,3,3-三甲基-4-哌啶基)酯(10.5mg，0.021mmol，40.8％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2,RT 1.696min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.32(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),4.45-4.36(m,1H),4.28-4.20(m,2H),3.40-3.31(m,2H),2.36-2.20(m,5H),2.14(s,4H),1.91-1.60(m,7H),1.03(s,3H),0.92(s,3H)。
5.03.40实施例134
(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基-3-氟代哌啶-4-基酯和(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基-3-氟代哌啶-4-基酯(化合物437a和化合物437b)
Figure BDA0003085169390003051
步骤1：7-[3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003061
在0℃下，在氮气下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.12mmol)、(±)-顺式-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(492.9mg，2.25mmol)和DIEA(726.3mg，5.62mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(233.5mg，0.79mmol)。在室温下将所得溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(2％)洗脱，得到(±)-顺式-7-[3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(520mg，0.754mmol，67％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝690.2
步骤2：(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003062
在90℃下，在氮气下将(±)-顺式-7-[3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.72mmol)、氨基甲酸叔丁酯(2546.26mg，21.74mmol)、BrettPhos Pd G3(131.4mg，0.14mmol)和Cs2CO3(472.4mg，1.45mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(4％)洗脱，得到(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(480mg，0.4035mmol，55.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771.3
步骤3：(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-氟-4-哌啶基]酯
Figure BDA0003085169390003071
在0℃下，向(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(480mg，0.622mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入TFA(4mL)。在室温下将所得溶液搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过反相快速色谱法进行纯化，用H2O/ACN(44％)洗脱，得到(±)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-氟-4-哌啶基]酯(110mg，0.242mmol，40.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471.2。
步骤4：(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基-3-氟代哌啶-4-基酯和
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙酰基-3-氟代哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390003081
在0℃下，向(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-氟-4-哌啶基]酯(100mg，0.21mmol)和TEA(64.6mg，0.64mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入Ac2O(32.6mg，0.32mmol)。在室温下将所得溶液搅拌4小时。用水淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至42％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。外消旋产物通过手性HPLC，利用以下条件进行分离：柱：CHIRALPAK IG，5*25cm，5μm；流动相A：MTBE-HPLC，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，17min。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物437a)(8.7mg，0.0162mmol，7.6％产率)；RT 3.793min(CHIRALPAK IC-3 0.46*10cm；3μm。(MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝513.2，1.603min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(d,J＝1.4Hz,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.68(s,1H),4.94(dd,J＝50.8,21.4Hz,2H),4.46-4.12(m,3H),4.09-3.71(m,1H),3.53(dd,J＝32.6,14.8Hz,1H),3.26(s,2H),3.21-2.84(m,1H),2.03(d,J＝11.5Hz,3H),1.94-1.65(m,5H)。
对映异构体2(化合物437b)(6.5mg，0.0125mmol，5.9％产率)；RT 3.793min(CHIRALPAK IC-3 0.46*10cm；3um。MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝513.2，1.603min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(d,J＝1.4Hz,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.68(s,1H),4.94(dd,J＝50.8,21.4Hz,2H),4.46-4.12(m,3H),4.09-3.71(m,1H),3.53(dd,J＝32.6,14.8Hz,1H),3.26(s,2H),3.21-2.84(m,1H),2.03(d,J＝11.5Hz,3H),1.94-1.65(m,5H)。
5.03.41实施例135
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(化合物438)
Figure BDA0003085169390003091
步骤1：7-(3-((((7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003101
在室温下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.67mmol)、2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(325.5mg，1.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(435.8mg，3.37mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入三光气(200.1mg，0.67mmol)，并且在0℃下搅拌。在室温下将反应物搅拌1小时。然后用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.562mmol，83.2％产率)]，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝712.4。
步骤2：7-(3-((((7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003102
在氮气下，向7-[3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.42mmol)和Pd2(dba)3·CHCl3(87.2mg，0.08mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中加入BrettPhos(90.44mg，0.17mmol)、Cs2CO3(411.73mg，1.26mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1.23g，10.53mmol)。在90℃下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(99/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.315mmol，74.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝793.4。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390003111
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(490.0mg，0.62mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。通过反相色谱法(乙腈0-40,0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(100mg，0.20mmol，32.9％产率)]，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝493.4。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390003121
在60℃下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(45.0mg，0.09mmol)、氧杂环丁-3-酮(65.83mg，0.91mmol)和四异丙醇钛(103.8mg，0.37mmol)在甲醇(4mL)中的溶液搅拌1小时。将反应溶液冷却至室温。加入NaCNBH3(17.22mg，0.27mmol)，并且在室温下搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：MeOH；流速：60mL/min；梯度：38％B至58％B，7min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[7-(氧杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基]酯(15.5mg，0.0283mmol，30.9％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝549.4,RT＝1.752min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(s,1H),4.98(t,J＝7.1Hz,1H),4.51(t,J＝6.4Hz,2H),4.41(d,J＝5.9Hz,2H),4.29(s,2H),3.32(s,3H),2.34-2.20(m,3H),2.11(s,3H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.81(s,2H),1.60-1.56(m,4H)。
5.03.42实施例136
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4S)-1,4-二甲基吡咯烷-3-基]酯和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R,4R)-1,4-二甲基吡咯烷-3-基]酯(化合物442a和化合物442b)
Figure BDA0003085169390003131
步骤1：(±)-顺式-7-[3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003132
在氮气下，向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.90mmol)和(±)-顺式-3-羟基-4-甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(361.0mg，1.79mmol)和DIEA(580.0mg，4.5mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(186.0mg，0.63mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。然后在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(71/29)洗脱，得到(±)-顺式-7-[3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(580mg，0.86mmol，96％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝672.3。
步骤2：(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003141
在90℃下，在氮气下将(±)-顺式-7-[3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(227.0mg，0.34mmol)、NH2Boc(988.0mg，8.44mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(70.0mg，0.07mmol)、BrettPhos(72.4mg，0.14mmol)和Cs2CO3(330.0mg，1.01mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(254mg,0.34mmol，99％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753.4。
步骤3：(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[4-甲基吡咯烷-3-基]酯
Figure BDA0003085169390003151
在25℃下，将(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.33mmol)和TFA(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法纯化，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)洗脱，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[4-甲基吡咯烷-3-基]酯(80mg，0.18mmol，53％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4S)-1,4-二甲基吡咯烷-3-基]酯和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R,4R)-1,4-二甲基吡咯烷-3-基]酯
Figure BDA0003085169390003152
在25℃下，将(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[4-甲基吡咯烷-3-基]酯(70.0mg，0.15mmol)和甲醛(23.2mg，0.31mmol)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入NaBH4(11.7mg，0.31mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC，用(柱XBridge Prep OBDC18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝15％B至26％B，10min；60mL/min)纯化残余物，得到产物的外消旋混合物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物442a)(13.5mg，0.029mmol，18.7％产率)；RT3.073min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+＝467.2,Rt＝1.844min；方法M。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.25(s,1H),8.07(s,1H),7.39(s,1H),6.95(d,J＝6.2Hz,1H),5.34-5.25(m,1H),4.52-4.94(m,2H),3.52-3.48(m,2H),3.22-3.19(m,1H),2.96-2.85(m,1H),2.80-2.75(m,1H),2.64-2.34(m,5H),2.03(s,3H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H)。
对映异构体2(化合物442b)(13.7mg，0.0294mmol，19％产率)；RT3.911min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1，含0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝467.2,Rt＝1.844min；方法M。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.25(s,1H),8.07(s,1H),7.39(s,1H),6.95(d,J＝6.2Hz,1H),5.34-5.25(m,1H),4.52-4.94(m,2H),3.52-3.48(m,2H),3.22-3.19(m,1H),2.96-2.85(m,1H),2.80-2.75(m,1H),2.64-2.34(m,5H),2.03(s,3H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H)。
5.03.43实施例137
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基吡咯烷-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基吡咯烷-3-基酯(化合物442c和化合物442d)
Figure BDA0003085169390003171
步骤1：(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003172
在室温下，向反式-7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)和3-羟基-4-甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.79mmol)在二氯甲烷(350mL)中的溶液中加入DIEA(500mg，3.88mmol)。然后加入三光气(67mg，0.23mmol)并且在0℃下搅拌2小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.212mmol，55.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753。
步骤2：(±)-[(反式)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-甲基吡咯烷-3-基]酯
Figure BDA0003085169390003181
在室温下，向(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-1-叔丁氧基羰基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.21mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在25℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液，并且粗产物没有纯化就将直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝453。
步骤3：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基吡咯烷-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390003182
在25℃下，向(±)-[(反式)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸4-甲基吡咯烷-3-基]酯(160mg，0.35mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入甲醛(80mg，1.07mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时。然后加入NaBH4(40mg，1.05mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。用水淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：19％B至22％B，12min)纯化残余物，得到产物的外消旋混合物。通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IG,2.0cm I.D*25cm L(5μm)；流动相A：Hex:DCM＝3:1(10mM NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，28min)分离外消旋物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物442c)(23.1mg，0.0495mmol，14％产率)；RT 2.590min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1，含0.1％DEA):EtOH＝50:50；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.3,RT 1.558min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(d,J＝3.1Hz,1H),4.69(dt,J＝6.0,2.9Hz,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.41-3.30(m,2H),2.95(t,J＝8.1Hz,1H),2.77-2.69(m,1H),2.64(dd,J＝10.9,6.3Hz,1H),2.24(s,3H),2.28-2.17(m,1H),1.95-1.86(m,4H),1.11(d,J＝7.1Hz,3H)。
对映异构体2(化合物442d)(23.8mg，0.0510mmol，14.4％产率)。RT5.364min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。(Hex:DCM＝3:1，含0.1％DEA):EtOH＝50:50；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.3,RT 1.885min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(d,J＝3.1Hz,1H),4.69(dt,J＝6.0,2.9Hz,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.41-3.30(m,2H),2.95(t,J＝8.1Hz,1H),2.77-2.69(m,1H),2.64(dd,J＝10.9,6.3Hz,1H),2.24(s,3H),2.28-2.17(m,1H),1.95-1.86(m,4H),1.11(d,J＝7.1Hz,3H)。
5.03.44实施例138
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(氧杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物443)
Figure BDA0003085169390003201
步骤1：7-(3-((((2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003202
在0℃下，在氮气下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.45mmol)、6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(195.0mg，0.91mmol)和DIEA(285.0mg，2.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌10分钟。然后加入三光气(95mg，0.32mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上纯化，用石油醚/乙酸乙酯(60/40)洗脱，得到7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg,0.2777mmol，61.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝684。
步骤2：7-(3-((((2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003211
在室温下，将7-[3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190.0mg，0.28mmol)在二氯甲烷(2mL)和Pd2(dba)3CHCl3(1mL，0.060mmol)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(20/80)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.248mmol，89.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝765。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390003212
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190.0mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法，用CH3CN/H2O(15/85)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(90mg，0.194mmol，78％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝465。
步骤4：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(氧杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390003221
在室温下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(46.0mg，0.10mmol)、3-氧杂环丁酮(71.0mg，0.99mmol)和四异丙醇钛(30.0mg，0.11mmol)在甲醇(2mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaCNBH3(18.0mg，0.29mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过反相色谱法(ACN/水(0.1％FA))进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[2-(氧杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]酯(40mg，0.0768mmol，77.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝521.2,RT 0.887min，方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83-6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),4.92-4.80(m,1H),4.55-4.46(t,J＝6Hz,2H),4.34-4.24(m,4H),3.68-3.56(m,1H),3.41-3.46(m,2H),3.25-3.15(d,J＝12Hz,4H),2.61-2.52(m,2H),2.25-2.13(m,2H),1.82(s,3H)。
5.03.45实施例139
(R)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物444a和化合物444b)
Figure BDA0003085169390003231
步骤1：5-溴-4-乙基-吡啶-2-胺
Figure BDA0003085169390003232
向2-氨基-4-乙基吡啶(20g，163.71mmol)和NH4OAc(1.3g，16.88mmol)在乙腈(500mL)中的溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(30.6g，171.91mmol)。在25℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物并且用水稀释。用乙酸乙酯萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98:2)洗脱，得到5-溴-4-乙基-吡啶-2-胺(22g，109.42mmol，66.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝200.9。
步骤2：5-溴-4-乙基-3-硝基-吡啶-2-醇
Figure BDA0003085169390003233
在25℃下，将5-溴-4-乙基-吡啶-2-胺(17.5g，87.04mmol)在H2SO4(200mL，87.04mmol)中的溶液搅拌15分钟。在0℃下加入HNO3(9.1mL，130.56mmol)。然后在25℃下将反应物搅拌3小时。用冰/水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98:2)洗脱，得到5-溴-4-乙基-3-硝基-吡啶-2-醇(10.2g，41.29mmol，47.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝247.1。
步骤3：3-氨基-5-溴-4-乙基-吡啶-2-醇
Figure BDA0003085169390003241
在90℃下，将5-溴-4-乙基-3-硝基-吡啶-2-醇(10.2g，41.29mmol)、铁(18.5g，330.36mmol)和NH4Cl(17.8g，329.63mmol)在乙醇(160mL)和水(160mL)中的混合物搅拌2小时。将反应物冷却至室温，然后过滤。在真空下浓缩滤液。用水洗涤残余物，得到3-氨基-5-溴-4-乙基-吡啶-2-醇(8.1g，37.32mmol，90.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝217.1。
步骤4：7-溴-8-乙基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮
Figure BDA0003085169390003242
在25℃下，将3-氨基-5-溴-4-乙基-吡啶-2-醇(8.1g，37.32mmol)和K2CO3(15.4g，111.59mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的溶液搅拌15分钟。然后在0℃下加入氯乙酰氯(5.5g，48.7mmol)。将反应物在25℃下搅拌1小时并且在90℃下搅拌2小时。通过过滤去除固体。在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(98:2)洗脱，得到7-溴-8-乙基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(5g，19.45mmol，52.1％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝257.2。
步骤5：7-溴-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003085169390003251
在0℃下，在氮气下向7-溴-8-乙基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(1.4g，5.45mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入BH3·THF(16.5mL，16.34mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌1小时。用MeOH淬灭反应物，并且用HCl(1N)调节至pH 2。在0℃下将反应物搅拌0.5小时。然后，在0℃下用NH3.H2O将反应混合物调节至pH 8。用水稀释溶液，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98:2)洗脱，得到7-溴-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1.1g，4.525mmol，83.1％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝243.2。
步骤6：7-溴-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003252
在0℃下，在氮气下向7-溴-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1.3g，5.35mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入NaHMDS(5.6mL，10.93mmol，2mol/LTHF溶液)。在0℃下将所得溶液搅拌1小时。然后在0℃下加入(Boc)2O(1.8g，8.26mmol)。在25℃下将混合物搅拌3小时。通过加入MeOH来淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到7-溴-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.6g，4.66mmol，87.2％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝343.1。
步骤7：8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003261
在90℃下，在氮气下将双(频哪醇)二硼(2.3g，9.06mmol)、7-溴-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，4.37mmol)、Pd(dppf)Cl2(640.0mg，0.87mmol)和KOAc(1.3g，13.16mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物搅拌2小时。过滤反应混合物并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱，得到8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(2.6g，6.66mmol)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝391.3。
步骤8：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003262
在60℃下，在氮气下将8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(2.7g，6.92mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.1g，3.41mmol)、Pd(dppf)Cl2(499.1mg，0.68mmol)和K2CO3(1.4g，10.14mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(97:3)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，2.18mmol，63.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS85(ESI)[M+H]+＝459.3。
步骤9：7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003271
在100℃下，在氮气下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g,2.61mmol)和酞酸酐(0.6g，4.05mmol)在甲苯(20mL)中的溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(888mg，1.51mmol，57.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝589.3。
步骤10：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003272
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg，1.36mmol)、NH2Boc(4767.3mg，40.74mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(281.2mg，0.28mmol)、Brettphos(291.2mg，0.54mmol)和Cs2CO3(1328.4mg，4.08mmol)在1,4-二噁烷(52mL)中的混合物搅拌45分钟。在真空下浓缩反应物，没有纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝670.4。
步骤11：7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003281
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(455.0mg，0.68mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入N2H4.H2O(340.2mg，6.80mmol)。在40℃下将所得溶液搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(94:6)洗脱，得到7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(162mg，0.30mmol，44.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝540.4。
步骤12：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003291
在0℃下，向4-羟基-1-甲基-吡咯烷-2-酮(405.4mg，3.52mmol)和7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.70mmol)在二氯甲烷(16mL)中的溶液中加入DIEA(910.2mg，7.04mmol)和三光气(313.5mg，1.06mmol)。在25℃下将反应物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96:4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.34mmol，48％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝681.4。
步骤13：(R)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390003292
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.29mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入TFA(2mL,0.29mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用TEA将残余物调节至pH 8，并且通过制备型HPLC(X select CSHOBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7％B至30％B，7min；Rt:7.38min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC(CHIRALPAK IC，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：30B至30B，15min)分离外消旋物，得到两种对映异构体(绝对立体化学结构任意指定)。
对映异构体1(化合物444a)(25.1mg，0.0522mmol，17.8％产率)。RT3.593min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝80:20；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2,RT 1.972min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.25(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.76(s,1H),5.27(td,J＝5.5,2.7Hz,1H),4.29(t,J＝4.5Hz,2H),3.78(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.41(dd,J＝11.6,1.6Hz,1H),3.39-3.33(m,2H),2.83–2.74(m,1H),2.75(s,3H),2.42-2.41(m,1H),2.29-2.27(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
对映异构体1(化合物444b)(26.3mg，0.0547mmol，18.6％产率)。RT5.240min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝80:20；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2,RT1.926min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.25(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.76(s,1H),5.27(td,J＝5.5,2.7Hz,1H),4.29(t,J＝4.5Hz,2H),3.78(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.41(dd,J＝11.6,1.6Hz,1H),3.39-3.33(m,2H),2.83–2.74(m,1H),2.75(s,3H),2.42-2.41(m,1H),2.29-2.27(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
5.03.46实施例140
(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(化合物445cd)
Figure BDA0003085169390003311
在室温下，向(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-4-哌啶基)酯(70.0mg，0.15mmol)(来自实施例137)和3-氧杂环丁酮(107.2mg，1.49mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入四异丙醇钛(169.2mg，0.60mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌1小时，然后允许冷却至室温。加入NaBH3CN(28mg，0.45mmol)。然后在室温下将反应物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep C18 OBD柱19×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：40％B至65％B，10min)进行纯化，得到(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(14.2mg，0.026mmol，17.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝527.3,RT 1.907min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(s,1H),4.79-4.96(m,2H),4.59-4.50(m,2H),4.43(dt,J＝15.7,6.1Hz,2H),4.28(s,2H),3.58-3.47(m,1H),3.31(s,2H),2.79(s,1H),2.20-2.47(s,2H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.85(s,2H),1.23(s,1H)。
实施例141
S-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]硫代氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(化合物601)
Figure BDA0003085169390003321
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基硫烷基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003322
在0℃下，在氮气下将四氢吡喃-4-硫醇(17mg，0.14mmol)、7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg，0.11mmol)和DIEA(44mg，0.3400mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液搅拌5分钟。加入(COCl2)3(13mg，0.04mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时。用水淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(70:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基硫烷基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.0284mmol，24.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝670.0。
步骤2：S-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]硫代氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯甲酸
Figure BDA0003085169390003331
在室温下，将7-[8-氨基-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基硫烷基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.040mmol)在2,2,2-三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至39％B，7min；254nm；Rt:6.3min)进行纯化，得到S-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]硫代氨基甲酸四氢吡喃-4-基酯(5mg，0.0095mmol，27.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝470.2,RT 2.061min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),9.36(s,1H),8.09(s,1H),7.40(s,1H),6.88(d,J＝6.2Hz,1H),4.36(t,J＝4.3Hz,2H),3.61(tt,J＝10.7,4.1Hz,1H),3.48(dd,J＝11.1,2.4Hz,2H),3.40(d,J＝4.7Hz,2H),3.14(d,J＝1.8Hz,2H),1.95(d,J＝1.7Hz,3H),1.90(d,J＝3.7Hz,2H),1.63(dtd,J＝14.3,10.7,4.2Hz,2H)。
实施例142
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-环丙基脲(化合物702)
Figure BDA0003085169390003341
步骤1：7-(8-氯-3-(3-环丙基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003342
在25℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)和异氰酰基环丙烷(523mg，6.29mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌3天。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到7-[8-氯-3-(环丙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(228mg，0.43mmol，96％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝528。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-环丙基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003343
在90℃下，将7-[8-氯-3-(环丙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.47mmol)、NH2Boc(1108mg，9.47mmol)、Pd2(dba)3(98mg，0.09mmol)、Brettphos(101.0mg，0.19mmol)和Cs2CO3(463.0mg，1.42mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(159mg，0.26mmol，55％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝609。
步骤3：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-环丙基脲
Figure BDA0003085169390003351
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(75.0mg，0.12mmol)和7-[3-(环丙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(75.0mg，0.15mmol)在二氯甲烷(5mL)与TFA(1mL)的混合物中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩混合物。用Et3N将残余物调节至pH 8，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝17％B至37％B，7min)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-环丙基-脲(13.6mg,0.033mmol，14％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝409。RT 1.577min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),8.78(s,1H),7.84(s,1H),7.30(s,1H),7.18(s,1H),6.72(d,J＝6.2Hz,1H),6.14(s,2H),5.66(s,1H),4.31-4.27(m,2H),3.40-3.31(m,2H),2.60-2.48(m,1H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H),0.70-0.63(m,2H),0.41-0.30(m,2H)。
实施例143
1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(化合物705)
Figure BDA0003085169390003361
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003362
在0℃下，向氯甲酸苯酯(275.7mg，1.76mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(156mg，0.35mmol)、DMAP(43mg，0.35mmol)和吡啶(3mL，0.35mmol)。然后在0℃下将反应混合物搅拌2小时。然后加入甲胺(4mL，8.10mmol)，并且在60℃下搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(93:7)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(135mg，0.27mmol，76.7％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝500.3。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003371
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(125mg，0.25mmol)、NH2Boc(731.3mg，6.25mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(51.8mg，0.05mmol)、Brettphos(53.6mg，0.10mmol)和Cs2CO3(244.5mg，0.75mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物搅拌40分钟。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(93:7)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(110mg，0.19mmol，75.8％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝581.2。
步骤3：1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲
Figure BDA0003085169390003372
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.17mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1mL)。在25℃下将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。用TEA将残余物调节至pH 9，并且通过制备型HPLC(X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm,5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至34％B，10min；254/220nm；Rt:9.68min)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(23.3mg，0.06mmol，35.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝381.2,RT 1.648min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),9.02(s,1H),7.81(s,1H),7.57(s,1H),7.02(d,J＝4.7Hz,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.43(s,1H),3.33-3.28(m,2H),2.85(t,J＝6.4Hz,2H),2.71(d,J＝4.6Hz,3H),1.95-1.84(m,5H)。
实施例144
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-环戊基脲(化合物706)
Figure BDA0003085169390003381
步骤1：7-(8-氯-3-(3-环戊基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003382
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(214mg，0.48mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入吡啶(190mg，2.41mmol)和三光气(214mg，0.72mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。在0℃下将反应物搅拌30分钟，然后加入环戊胺(408mg，4.79mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时。用二氯甲烷稀释所得混合物，然后用水洗涤。经硫酸钠干燥有机相，在真空下浓缩，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(3/7)洗脱，得到7-[8-氯-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(254mg，0.457mmol，95.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝556。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-环戊基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003391
向7-[8-氯-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.47mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1666mg，14.22mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入Pd2(dba)3.CHCl3(100mg，0.10mmol)、BrettPhos(100mg，0.19mmol)、碳酸铯(464mg，1.42mmol)。在90℃下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg，0.0942mmol，20.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝637。
步骤3：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-环戊基脲
Figure BDA0003085169390003401
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg，0.09mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1ml)。在室温下将反应物搅拌1小时。浓缩之后，用二氯甲烷(3ml)稀释残余物，并且用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩所得溶液。通过制备型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：27％B至51％B，7min；254/220nm；Rt:6.5min)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-环戊基-脲(14.4mg，0.033mmol，35％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝437.2,Rt＝1.973min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.79(s,1H),7.85(s,1H),7.33(s,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.15(s,2H),5.68(s,1H),4.29(s,2H),3.99(q,J＝6.6Hz,1H),3.37(s,2H),1.95-1.81(m,5H),1.70-1.53(m,4H),1.40(dd,J＝12.3,6.1Hz,2H)。
实施例145
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(2-(2,2,2-三氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(化合物708)
Figure BDA0003085169390003411
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003412
在0℃下，向氯甲酸苯酯(358mg，2.29mmol)在二氯甲烷(7mL)中的溶液中加入DMAP(69mg，0.57mmol)和7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)在吡啶(4mL)中的溶液。在0℃下将反应物搅拌2小时。然后加入6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(608mg，2.86mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液，并且在80℃下搅拌12小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.525mmol，91.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝764。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲
Figure BDA0003085169390003421
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.65mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应溶液。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(130mg，0.28mmol，42.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝464。
步骤3：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(2-(2,2,2-三氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲
Figure BDA0003085169390003422
在室温下，向1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(220mg，0.47mmol)和TEA(500mg，4.95mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中加入三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(330mg，1.42mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌15分钟。用水淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[2-(2,2,2-三氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]脲(201mg，0.368mmol，77.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝546.2,RT 2.67min，方法N。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.85(s,1H),7.81(s,1H),7.29(s,2H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),4.03(q,J＝7.8Hz,1H),3.37-3.29(m,4H),3.13(q,J＝10.1Hz,2H),2.55-2.44(m,4H),1.96-1.92(m,2H),1.89(s,3H)。
实施例146
(S)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢-2H-吡喃-3-基)脲和(R)-1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[四氢吡喃-3-基]脲(化合物711a和化合物711b)
Figure BDA0003085169390003431
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003432
在0℃下，向氯甲酸苯酯(527.89mg，3.37mmol)在二氯甲烷(7mL)中的溶液中加入7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.67mmol)和DMAP(82.38mg，0.67mmol)在吡啶(7mL)中的溶液。然后在60℃下将反应物搅拌1小时。然后加入四氢-2H-吡喃-3-胺(682.08mg，6.74mmol)，并且在60℃下搅拌12小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得溶液，并且合并有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(270mg，0.472mmol，70％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝572.2。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003441
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.35mmol)、氨基甲酸叔丁酯(204.8mg，1.75mmol)、Brettphos Pd G3(63.4mg，0.07mmol)和Cs2CO3(228mg，0.70mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物搅拌1小时。然后将混合物冷却至室温。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.27mmol，78.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝653.3。
步骤3：(S)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢-2H-吡喃-3-基)脲和(R)-1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[四氢吡喃-3-基]脲
Figure BDA0003085169390003451
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100.0mg，0.15mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2.5mL)。在室温下将反应物搅拌0.5小时，并且在真空下浓缩。用二氯甲烷稀释残余物，并且用三乙胺调节至pH 8。然后在真空下浓缩溶液。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至39％B，7min)纯化粗产物，得到外消旋产物。然后通过制备型手性HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物711a)(8.0mg，0.0002mmol)。RT 1.699min(CHIRALPAK IG-30.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT1.965min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.95(s,1H),7.84(s,1H),7.33(s,2H),6.75(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.68(s,1H),4.29(s,2H),3.80-3.70(m,1H),3.66(s,2H),3.52(s,1H),3.27(dd,J＝10.6,6.4Hz,3H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.88(s,1H),1.71(s,1H),1.54(d,J＝8.4Hz,2H)。
对映异构体2：(化合物711b)(6.6mg，0.0001mmol)。RT 2.361min(CHIRALPAK IG-30.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT1.971min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.95(s,1H),7.84(s,1H),7.33(s,2H),6.75(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.68(s,1H),4.29(s,2H),3.80-3.70(m,1H),3.66(s,2H),3.52(s,1H),3.27(dd,J＝10.6,6.4Hz,3H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.88(s,1H),1.71(s,1H),1.54(d,J＝8.4Hz,2H)。
实施例147
(±)-反式-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(2-氰基环丁基)脲(化合物712a)
Figure BDA0003085169390003461
步骤1：(±)-反式-N-(2-氨基甲酰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003462
在25℃下，将(±)-反式-2-(叔丁氧基羰基氨基)环丁烷甲酸(1.0g，4.65mmol)、NH4Cl(0.7g，12.96mmol)、HATU(2.6g，6.84mmol)和DIEA(1.2g，9.23mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液搅拌16小时。用水淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩，得到(±)-反式-N-(2-氨基甲酰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(628mg，2.931mmol，63.1％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝215。
步骤2：(±)-反式-N-(2-氰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003471
在50℃下，将(±)-反式-N-(2-氨基甲酰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(628mg，2.93mmol)、1-丙烷膦酸环酐(3.7g，5.82mmol)和TEA(593mg，5.86mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩，得到(±)-反式-N-(2-氰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(480mg，2.446mmol，83.4％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝197。
步骤3：(±)-反式-2-氨基环丁烷甲腈
Figure BDA0003085169390003472
在25℃下，将(±)-反式-N-(2-氰基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(480mg，2.45mmol)在2,2,2-三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，得到(±)-反式-2-氨基环丁烷甲腈(200mg，粗产物)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝97。
步骤4：(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003473
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.34mmol)和吡啶(5mL)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中加入三光气(50mg，0.17mmol)。在0℃下将反应物搅拌1小时。然后加入(±)-反式-2-氨基环丁烷甲腈(197mg,2.05mmol)，并且在室温下搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法(乙腈0-60/0.1％NH4HCO3水溶液)进行纯化，得到(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.1235mmol，36.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝648。
步骤5：(±)-反式-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(2-氰基环丁基)脲(化合物712a)
Figure BDA0003085169390003481
在25℃下，将(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.06mmol)在TFA(4mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep Phenyl OBD柱5μm，19*250mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：40％B至76％B，21min；RT 18min)纯化粗产物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2S)-2-氰基环丁基]脲(5.2mg，0.0116mmol，18.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝448.2,RT 1.999min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),9.05(s,1H),7.88(s,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(s,1H),6.78(d,J＝6.2Hz,1H),6.17(s,2H),5.67(s,1H),4.45(q,J＝8.3Hz,1H),4.28(t,J＝4.3Hz,2H),2.27-2.11(m,3H),2.14-2.12(m,1H),2.11-1.99(m,2H),2.03-1.86(m,4H)。
实施例148
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲(化合物713a)
Figure BDA0003085169390003491
步骤1：7-(3-(3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003492
在0℃下，向氯甲酸苯酯(445.2mg，2.85mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.57mmol)和4-二甲基氨基吡啶(69.73mg，0.57mmol)在吡啶(2.0mL)中的溶液。在室温下将混合物搅拌1小时。然后在0℃下加入(内消旋-1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-内-胺盐酸盐(231.26mg，1.71mmol)和三乙胺(231.04mg，2.28mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液。在50℃下将混合物再搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-(3-(3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.25mmol，43％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝651.3。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲
Figure BDA0003085169390003501
向7-(3-(3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.23mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.0mL)。在室温下将反应混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩所得混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSHPrep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：12％B至18％B，15min)进行纯化，得到1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,5S,6r)-3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基)脲(31.9mg,0.071mmol，30.9％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝451.3,RT1.853min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.88(s,1H),7.88(s,1H),7.32(s,1H),7.20(d,J＝2.5Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.16(s,2H),5.67(s,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.84(d,J＝8.4Hz,2H),3.62(d,J＝8.1Hz,2H),3.37(s,2H),2.46(m,1H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.80(d,J＝2.4Hz,2H)。
实施例149
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(3,3-二氟环丁基)脲(化合物714)
Figure BDA0003085169390003511
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3,3-二氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003512
在0℃下，将氯甲酸苯酯(298mg，1.9mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液加入DMAP(47mg，0.39mmol)、吡啶(5.mL,0.38mmol)和7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时。然后加入含3,3-二氟环丁-1-胺(244mg，2.28mmol)的二氯甲烷(14mL)。在50℃下将反应混合物搅拌16小时，用二氯甲烷稀释，并且用水洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3,3-二氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.228mmol，59.8％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝659。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(3,3-二氟环丁基)脲
Figure BDA0003085169390003521
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3,3-二氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol)在TFA(4mL)和二氯甲烷(15mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：22％B至43％B，7min；254/220nm；RT6.87min)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(3,3-二氟环丁基)脲(56.5mg，0.123mmol，54.1％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝459.2,RT 1.920min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),9.01(s,1H),7.85(s,1H),7.52(d,J＝6.7Hz,1H),7.33(s,1H),6.76(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.68(s,1H),4.29(s,2H),4.07(s,1H),3.34(s,2H),3.06-2.86(m,2H),2.65-2.53(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例150
(R)-(8-氨基-6-(4,8-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯和(S)-(8-氨基-6-(4,8-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯(化合物461a和化合物461b)
Figure BDA0003085169390003531
步骤1：8-甲基-4-亚甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003532
在100℃下，将7-溴-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.96mmol)(来自实施例113)、B2Pin2(3746.0mg，14.81mmol)、Pd(dppf)Cl2(200.0mg，0.27mmol)和KOAc(867.0mg，8.85mmol)在1,4-二噁烷(15.0mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/10)洗脱，得到8-甲基-4-亚甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.1g，2.85mmol，78.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝387。
步骤2：7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-4-亚甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003533
在60℃下，将8-甲基-4-亚甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(1.8g，4.66mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.5g，4.65mmol)、Pd(dppf)Cl2(340.0mg，0.47mmol)和K2CO3(2.0g，14.49mmol)在1,4-二噁烷(20.0mL)和水(2.0mL)中的混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(700mg，1.539mmol，33％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝455。
步骤3：7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-4,8-二甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003541
在25℃下，在氢气下将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-4-亚甲基-2,3-二氢-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(700.0mg，1.54mmol)和Pd/C(500.0mg，1.54mmol)在甲醇(50.0mL)中的混合物搅拌4小时。然后通过硅藻土过滤反应混合物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.875mmol，56.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝457。
步骤4：7-(8-氯-7-氟-3-((((四氢-2H-吡喃-4-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-4,8-二甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003551
在0℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.66mmol)、四氢-2h-吡喃-4-醇(342.0mg，3.35mmol)和DIEA(1270mg，9.84mmol)在二氯甲烷(15.0mL)中的溶液搅拌10分钟。然后加入三光气(312.0mg，1.05mmol)。在0℃下将反应物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.513mmol，78.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝585。
步骤5：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((四氢-2H-吡喃-4-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-4,8-二甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003552
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.85mmol)、NH2Boc(1000mg，8.55mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(196mg，0.19mmol)、Brettphos(184mg，0.34mmol)和Cs2CO3(836mg，2.56mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1:2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.751mmol，87.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝666。
步骤6：(R)-(8-氨基-6-(4,8-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯和(S)-(8-氨基-6-(4,8-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢-2H-吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390003561
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢吡喃-4-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-4,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.30mmol)和TFA(2.0mL，0.30mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：13％B至43％B，12.5min；RT 10.03min)和手性HPLC纯化残余物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物461a)(19.6mg，0.0421mmol，14％产率)。RT2.933min(CHIRALPAK IF-3 0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝90:10,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝466.2,RT 2.106min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.62(s,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),6.23(s,2H),5.49(s,1H),4.88(dt,J＝8.9,4.7Hz,1H),3.85(dd,J＝10.4,5.9Hz,2H),3.47-3.31(t,J＝9.2Hz,4H),2.96(q,J＝6.5Hz,1H),1.98-1.84(m,7H),1.60(dtd,J＝13.0,9.3,4.2Hz,2H),1.31(d,J＝7.0Hz,3H)。
对映异构体2(化合物461b)(19.5mg，0.0419mmol，13.9％产率)。RT3.662min(CHIRALPAK IF-3 0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝90:10,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝466.2,RT 2.106min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.62(s,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),6.23(s,2H),5.49(s,1H),4.88(dt,J＝8.9,4.7Hz,1H),3.85(dd,J＝10.4,5.9Hz,2H),3.47-3.31(t,J＝9.2Hz,4H),2.96(q,J＝6.5Hz,1H),1.98-1.84(m,7H),1.60(dtd,J＝13.0,9.3,4.2Hz,2H),1.31(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例151
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基-1,4-二氮杂环庚烷-6-基酯(化合物465)
Figure BDA0003085169390003571
步骤1：6-(((6-(1-(叔丁氧基羰基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酰基)氧)-1,4-二氮杂环庚烷-1,4-二甲酸二叔丁酯
Figure BDA0003085169390003572
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.57mmol)、6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1,4-二甲酸二叔丁酯(361.0mg，1.14mmol)和DIEA(369.0mg，2.86mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(112.0mg，0.38mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭混合物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(84/16)洗脱，得到6-[[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(1-叔丁氧基羰基-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酰基氧]-1,4-二氮杂环庚烷-1,4-二甲酸二叔丁酯(490mg，0.56mmol，98％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝868。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二氮杂环庚烷-6-基酯
Figure BDA0003085169390003581
在25℃下，向6-[[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(1-叔丁氧基羰基-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酰基氧]-1,4-二氮杂环庚烷-1,4-二甲酸二叔丁酯(398.0mg，0.46mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在25℃下将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。用Et3N将残余物调节至pH 8，并且通过反相色谱法进行纯化(用水(NH4HCO3)/MeOH(66/34)洗脱)，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸1,4-二氮杂环庚烷-6-基酯(52mg,0.11mmol，24％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝468。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4-二甲基-1,4-二氮杂环庚烷-6-基酯
Figure BDA0003085169390003591
在25℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸1,4-二氮杂环庚烷-6-基酯(80.0mg，0.17mmol)和甲醛(40％,51.0mg，1.7mmol)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH3CN(32.0mg，0.51mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝12％B至30％B，10min；60mL/min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1,4-二甲基-1,4-二氮杂环庚烷-6-基)酯(12.8mg,0.025mmol，15％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝496,RT＝0.907min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.30(s,1H),7.95(s,1H),7.30(s,1H),6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.92-4.86(m,1H),4.31-4.27(m,2H),3.32-3.29(m,2H),2.90-2.85(m,2H),2.75-2.61(m,2H),2.60-2.40(m,4H),2.28(s,6H),1.90(s,3H)。
实施例152
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物478a和化合物478b)
Figure BDA0003085169390003601
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-乙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003602
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)和1-乙基-4-羟基-吡咯烷-2-酮(300mg，2.32mmol)在二氯甲烷(60mL)中的溶液中加入DIEA(500mg，3.88mmol)。然后加入三光气(200mg，0.67mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-乙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.41mmol，72.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝681。
步骤2：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-乙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390003611
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-乙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.41mmol)和TFA(2mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7％B至25％B，10min)和手性HPLC(柱：CHIRALPAK IC，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：30B至30B，8.5min；220/254nm)纯化残余物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1化合物478a(28.6mg，0.0595mmol，14.5％产率)：RT 3.418min(ChIRALPAK IE-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％FA):EtOH＝50:50，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3,Rt＝1.671min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.70(s,1H),5.32-5.25(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.41(dd,J＝11.7,1.5Hz,2H),3.32-3.15(m,3H),2.80(dd,J＝17.6,7.0Hz,1H),2.30(dd,J＝17.6,1.9Hz,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)。
对映异构体2化合物478b(31.6mg，0.0658mmol，16％产率)：保留时间：4.48min(ChIRALPAK IE-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％FA):EtOH＝50:50，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3,Rt＝1.671min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.70(s,1H),5.32-5.25(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.41(dd,J＝11.7,1.5Hz,2H),3.32-3.15(m,3H),2.80(dd,J＝17.6,7.0Hz,1H),2.30(dd,J＝17.6,1.9Hz,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例153
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸环丁酯(化合物487)
Figure BDA0003085169390003621
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丁氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003622
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.19mmol)和环丁醇(70mg，0.97mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入DIEA(300mg，2.33mmol)。然后加入三光气(75mg，0.25mmol)，并且在0℃下搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丁氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol，84.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝624。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸环丁酯
Figure BDA0003085169390003631
在25℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丁氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.19mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在25℃下将所得溶液搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：45％B至60％B，10min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸环丁酯(17.8mg，0.042mmol，21.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝424.2,RT 0.981min，方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(t,J＝2.8Hz,1H),4.95(p,J＝7.6Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.41(t,J＝4.4Hz,2H),2.31(dddt,J＝9.8,7.6,5.5,2.5Hz,2H),2.14-2.00(m,2H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.76-1.60(dtd,J＝18.6,10.4,8.0Hz,2H)。
实施例154
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-乙基脲(化合物720)
Figure BDA0003085169390003641
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-乙基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003642
在0℃下，在氮气下将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.38mmol)、DMAP(54.0mg，0.44mmol)、吡啶(4mL，0.38mmol)和氯甲酸苯酯(350mg，2.24mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入乙胺(5mL，0.38mmol)，并且在60℃下搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(63/27)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(乙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.251mmol，66.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝597。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-乙基脲
Figure BDA0003085169390003651
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(乙基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩溶液。用三乙胺将残余物的pH值调节至碱性。在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L/NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：16％B至35％B，7min)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-乙基-脲(70mg，0.177mmol，70.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝397.4,RT 1.696min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),8.91(s,1H),7.81(s,1H),7.30(s,1H),7.05(d,J＝5.9Hz,1H),6.72(d,J＝6.2Hz,1H),6.13(s,2H),5.66(s,1H),4.30-4.24(m,2H),3.32-3.29(m,2H),3.20-3.08(m,2H),1.90(s,3H),1.12-1.02(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例155
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸8-(氧杂环丁-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸8-(氧杂环丁-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-基酯(化合物511a和化合物511b)
Figure BDA0003085169390003661
步骤1：7-(3-((((8-(叔丁氧基羰基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003662
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.38mmol)、3-羟基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(194.0mg，0.76mmol)和DIEA(246.0mg，1.91mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(75.0mg，0.25mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(93/7)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(8-叔丁氧基羰基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(279mg，0.34mmol，90％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝807。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸8-氮杂螺[4.5]癸-2-基酯
Figure BDA0003085169390003671
在25℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(8-叔丁氧基羰基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1mL)，并且在25℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。利用反相柱纯化残余物，用水(0.1％NH4HCO3)/MeOH(60/40)洗脱，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基酯(50mg，0.098mmol，39％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝507。
步骤3：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸8-(氧杂环丁-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸8-(氧杂环丁-3-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-2-基酯
Figure BDA0003085169390003672
在60℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸8-氮杂螺[4.5]癸烷-3-基酯(100.0mg，0.20mmol)、3-氧杂环丁酮(142.0mg，1.97mmol)和四异丙醇钛(224.0mg，0.79mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入NaBH3CN(38.0mg，0.60mmol)，并且在25℃下搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC，用以下条件进行纯化(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；水(0.1％FA):ACN＝7％B至18％B，10min；25mL/min)，得到外消旋物。然后通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；MTBE(10mM NH3-MEOH):EtOH＝50％B至50％B，17min；17mL/min)分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物511a)(11.1mg，0.019mmol，10％产率)。RT 2.666min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝563,RT 1.587min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.30(s,1H),6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.19(s,2H),5.66(s,1H),5.15-5.08(m,1H),4.60-4.28(m,6H),3.40-3.29(m,2H),2.27-1.72(m,10H),1.70-1.40(m,8H)。
对映异构体2(化合物511b)(10.7mg，0.0190mmol，9.6％产率)。RT2.120min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝563,RT 1.589min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.30(s,1H),6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.19(s,2H),5.66(s,1H),5.15-5.08(m,1H),4.60-4.28(m,6H),3.40-3.29(m,2H),2.27-1.72(m,10H),1.70-1.40(m,8H)。
实施例156
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯(化合物485a)
Figure BDA0003085169390003691
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-羟基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003692
在室温下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)、(1s,3s)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)环丁-1-醇(230mg，1.14mmol)和DIEA(368.86mg，2.85mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入三光气(169.4mg，0.57mmol)。然后在0℃下将反应混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法(乙腈0-60/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol，53.7％产率)，呈淡黄色固体状。LC/MS(ESI):[M+H]+＝640.3。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯
Figure BDA0003085169390003701
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-羟基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.23mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1.6mL)。在室温下将反应物搅拌2小时。然后在真空下浓缩混合物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，然后用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7％B至33％B，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-羟基环丁基)酯(19.9mg，0.045mmol，19.3％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝440.2,RT 1.028min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(d,J＝2.8Hz,1H),5.22(d,J＝6.5Hz,1H),4.53(p,J＝7.4Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.84-3.80(m 1H),3.38-3.34(m,2H),2.69-2.74(m,2H),2.01-1.86(m,5H)。
实施例157
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-氟环丙基]脲(化合物734a)
Figure BDA0003085169390003711
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003712
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(700.0mg，1.58mmol)和吡啶(622.4mg，7.86mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三光气(700.4mg，2.36mmol)。在0℃下将反应混合物搅拌40分钟。然后加入4-甲基苯磺酸[[(1R,2S)-2-氟代环丙基]氨基]酯(2.32g，9.44mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。在0℃下将溶液搅拌1.5小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(1R,2S)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.37mmol，46.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝546.3。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003721
在80℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.37mmol)、NH2Boc(2571.6mg，21.98mmol)、Brettphos Pd G3(66.5mg，0.07mmol)和Cs2CO3(238.9mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.11mmol，30.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝627.4。
步骤3：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-氟环丙基]脲
Figure BDA0003085169390003722
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-氟环丙基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(64.8mg，0.10mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将反应混合物搅拌1.5小时，并且在真空下浓缩。将残余物溶解在二氯甲烷中，用TEA调节至pH 8，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：14％B至38％B，7min)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R,2S)-2-氟环丙基]脲(10.04mg，0.02mmol,22.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝427.2,RT 1.890min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),9.06(s,1H),7.84(s,1H),7.44(s,1H),7.33(s,1H),6.76(d,J＝6.1Hz,1H),6.18(s,2H),5.68(s,1H),4.89-4.68(m,1H),4.29(t,J＝4.5Hz,2H),3.37-3.35(m,2H),2.70-2.67(m,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.11-1.09(m,1H),0.83-0.80(m,1H)。
实施例158
(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯和(3S,3aS,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(化合物568a和化合物568b)
Figure BDA0003085169390003731
步骤1:4-亚甲基-2,3,3a,6a-四氢呋喃并[2,3-b]呋喃
Figure BDA0003085169390003732
在110℃下，向Bu3SnH(1700.0mg，5.82mmol)和AIBN(65.0mg，0.40mmol)在甲苯(15mL)中的溶液中逐滴加入(2R,3S)-3-碘-2-丙-2-炔氧基-四氢呋喃(1000.0mg，3.97mmol)在甲苯(2mL)中的溶液。将混合物搅拌5小时。在真空下浓缩反应物。将残余物溶解在ACN(100mL)中，并且用石油醚洗涤。在真空下浓缩ACN层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(80/20)洗脱，得到4-亚甲基-2,3,3a,6a-四氢呋喃并[2,3-b]呋喃(150mg，1.189mmol，30％产率)，呈淡黄色油状。LCMS(ESI):[M+H]+＝127.1。
步骤2：(3aR,4S,6aS)-2,3,3a,4,5,6a-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-4-醇
Figure BDA0003085169390003741
在25℃下，将2,3,3a,6a-四氢呋喃并[2,3-b]呋喃-4-酮(247.0mg，1.93mmol)和NaBH4(147.0mg，3.87mmol)在乙醇(5mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到(3aR,4S,6aS)-2,3,3a,4,5,6a-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-4-醇(160mg，1.229mmol，63.8％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝131.1
步骤3：(3R,3aR,6aS)-4-硝基苯甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390003742
向PPh3(705.0mg，2.69mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入DIAD(540.0mg，2.67mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌1小时。然后加入4-硝基苯甲酸(465.0mg，2.78mmol)和(3aR,4S,6aS)-2,3,3a,4,5,6a-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-4-醇(300.0mg,2.31mmol)在THF中的溶液。在25℃下将混合物搅拌3小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(50/50)洗脱，得到(3R,3aR,6aS)-4-硝基苯甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(360mg，1.2892mmol，55.9％产率)。
步骤2：(3R,3aR,6aS)-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390003751
在25℃下，将(3R,3aR,6aS)-4-硝基苯甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(360mg，1.28mmol)和K2CO3(883mg，6.4mmol)在甲醇(1mL)中的混合物搅拌12小时。在真空下浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(3R,3aR,6aS)-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-醇(120mg，0.92mmol)，呈无色油状。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.89(d,J＝4.9Hz,1H),4.23(d,J＝3.2Hz,1H),3.99(dd,J＝10.3,3.2Hz,1H),3.94-3.77(m,3H),2.88-2.75(m,1H),2.17(ddt,J＝13.1,10.6,8.4Hz,1H),1.71(ddt,J＝13.1,6.6,4.3Hz,1H)。
步骤3：(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯和7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3S,3aS,6aR)-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003752
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380.0mg，0.72mmol)、2,3,3a,4,5,6a-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-4-醇(188.0mg，1.44mmol)和DIEA(466.0mg，3.61mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物中加入三光气(128.0mg，0.43mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到外消旋产物(300mg)。通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IC，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE(10mMNH3/MeOH)，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：20％B至20％B，12min)分离外消旋物，得到(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(92mg，0.135mmol，18.7％产率)和7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3S,3aS,6aR)-六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg，0.1379mmol，19.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝682。
步骤4：(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯和(3S,3aS,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390003761
向(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(92.0mg，0.13mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在室温下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min)纯化残余物，得到(3R,3aR,6aS)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(化合物568a)(38.1mg，0.0791mmol，58.6％产率)，呈黄色固体状(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定)：RT 1.229min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝482,RT1.861min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.77(d,J＝5.0Hz,1H),5.67(s,1H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.02(dd,J＝10.9,3.6Hz,1H),3.92(d,J＝10.9Hz,1H),3.87-3.68(m,2H),3.45-3.35(s,2H),2.92(dt,J＝9.8,4.1Hz,1H),2.21-2.02(m,1H),1.93-1.89(m,4H)。
以类似的方式制备(3S,3aS,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[2,3-b]呋喃-3-基酯(化合物568b)(37.2mg，0.0773mmol，57.3％产率)，呈黄色固体状(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定)：RT 1.600min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝482,RT 1.861min，方法J，1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.77(d,J＝5.0Hz,1H),5.67(s,1H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.02(dd,J＝10.9,3.6Hz,1H),3.92(d,J＝10.9Hz,1H),3.87-3.68(m,2H),3.45-3.35(s,2H),2.92(dt,J＝9.8,4.1Hz,1H),2.21-2.02(m,1H),1.93-1.89(m,4H)。
实施例159
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(3-甲氧基环丁基)脲(化合物733a)
Figure BDA0003085169390003781
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003782
在氮气下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)和DMAP(37.8mg，0.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入(1r,3r)-3-甲氧基环丁-1-胺(127.4mg，1.26mmol)，并且在60℃下将混合物搅拌5小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(91/9)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(186mg，0.28mmol，92％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝653.3。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(3-甲氧基环丁基)脲
Figure BDA0003085169390003791
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180.0mg，0.28mmol)和TFA(1.0mL，0.28mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD 柱30*150mm，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝19％B至34％B，10min；60mL/min)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(3-甲氧基环丁基)脲(82.1mg,0.18mmol，65.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝453.3；RT 1.105min；方法M；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.83(s,1H),7.82(s,1H),7.49-7.20(m,2H),6.72(d,J＝6.2Hz,1H),6.14(s,2H),5.66(s,1H),4.46-4.20(m,3H),4.10-3.95(m,1H),3.40-3.30(m,2H),3.26(s,3H),2.24-2.07(m,4H),1.90(s,3H)。
实施例160
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-异丙基脲(化合物746)
Figure BDA0003085169390003792
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003801
在0℃下，在氮气下向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.12mmol)和吡啶(2mL)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(167mg，0.56mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。然后加入异丙胺(664mg，11.23mmol)，然后在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(24/76)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.434mmol，38.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝530。
步骤2：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003802
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.42mmol)、NH2Boc(2.5g，21.37mmol)、Cs2CO3(270mg，0.83mmol)、Brettphos(89mg，0.17mmol)和Pd2(dba)3CHCl3(86mg，0.080mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用甲醇/二氯甲烷(1/9)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(191mg，0.235mmol，56.5％产率)，呈棕色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝611。
步骤3：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲
Figure BDA0003085169390003811
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.31mmol)在2,2,2-三氟乙酸(4mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。用TEA将残余物调节至pH 9，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBDC18柱，30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：21B至39B，7min)纯化粗产物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(16.3mg，0.0397mmol，12.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝411.2,RT 2.153min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.81(s,1H),7.84(s,1H),7.32(s,1H),6.98(d,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝6.2Hz,1H),6.14(s,2H),5.67(s,1H),4.29(d,J＝4.5Hz,2H),3.82-3.80(m,1H),3.40-3.38(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.13(d,J＝6.5Hz,6H)。
实施例161
(R)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲和(S)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲(化合物722a和化合物722b)
Figure BDA0003085169390003821
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003822
在室温下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.46mmol)和四氢-3-呋喃基胺(200mg，2.30mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入吡啶(80mg，1.01mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌16小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.3914mmol，84.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝639。
步骤2：(R)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲(化合物722a)和(S)-1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲(化合物722b)
Figure BDA0003085169390003831
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.39mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液加入TFA(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌3小时，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：5％B至35％B，7min；254/220nm；RT 6.80min)和手性HPLC(柱：CHIRALPAK IG，20*250mm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：MeOH；流速：20mL/min)纯化粗产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1化合物722a(32.1mg，0.0732mmol，18.7％产率)。RT 1.617min(CHIRALPAK IG-3，46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝60:40，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.1,RT 0.915min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.86(s,1H),7.85(s,1H),7.36(d,J＝6.4Hz,1H),7.32(s,1H),6.74(d,J＝6.0Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.32-4.20(m,3H),3.87-3.67(m,3H),3.52(dd,J＝9.0,3.4Hz,1H),3.33(s,2H),2.16(dq,J＝13.4,7.5Hz,1H),1.92(s,3H),1.73(ddt,J＝12.6,8.2,4.6Hz,1H)。
对映异构体2化合物722b(30.9mg，0.0705mmol，18％产率)。RT 2.441min(CHIRALPAK IG-3，46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝60:40，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.1,RT 0.915min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.86(s,1H),7.85(s,1H),7.36(d,J＝6.4Hz,1H),7.32(s,1H),6.74(d,J＝6.0Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.32-4.20(m,3H),3.87-3.67(m,3H),3.52(dd,J＝9.0,3.4Hz,1H),3.33(s,2H),2.16(dq,J＝13.4,7.5Hz,1H),1.92(s,3H),1.73(ddt,J＝12.6,8.2,4.6Hz,1H)。
实施例162
(3S,5S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯、(3R,5R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯、(3S,5R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯和(3R,5S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯(化合物467a、化合物467b、化合物467c和化合物467d)
Figure BDA0003085169390003841
Figure BDA0003085169390003851
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003852
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.34mmol)、3-羟基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸叔丁酯(162mg，0.67mmol)和DIEA(630mg，4.88mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液中加入三光气(198mg，0.67mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释反应溶液，并且用水洗涤所得溶液。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(158mg，0.0018mmol，50％产率)，呈红棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝795.3。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯
Figure BDA0003085169390003861
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.19mmol)在2,2,2-三氟乙酸(3mL)和二氯甲烷(12mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在二氯甲烷(10mL)中，用三乙胺调节至pH 8，并且在真空下浓缩。粗产物没有纯化就将直接用于下一步。
步骤3：(3S,5S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯、(3R,5R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯、(3S,5R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯和(3R,5S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-甲基-1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯
Figure BDA0003085169390003871
在25℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸1-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-3-基酯(140mg，0.28mmol)和甲醛(15.0mg，0.38mmol)在甲醇(14mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入硼氢化钠(27mg，0.71mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时。然后通过加入水来淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈5-50/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到两对外消旋产物。分别通过手性HPLC分离这两种外消旋物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体1化合物467a(11.5mg，0.0221mmol，7.8％产率)。RT 2.818min(CHIRALPAKIF-3，0.46*5cm；3μm。MTBE(0.2％IPA):MeOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.4,RT 1.584min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.30(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.24(s,1H),4.27(s,2H),4.05-3.92(m,1H),3.72(d,J＝10.4Hz,1H),2.80-2.55(m,3H),2.46-2.36(m,1H),2.35-2.05(m,6H),1.98-1.78(m,6H)。
异构体2化合物467b(10.3mg，0.0197mmol,7％产率)。RT2.000 min(CHIRALPAKIF-3，0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.2％IPA):MeOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.4,RT1.580min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.30(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.24(s,1H),4.27(s,2H),4.05-3.92(m,1H),3.72(d,J＝10.4Hz,1H),2.80-2.55(m,3H),2.46-2.36(m,1H),2.35-2.05(m,6H),1.98-1.78(m,6H)。
异构体3化合物467c(10.3mg，0.0197mmol，7％产率)。RT 2.404min(CHIRALPAKIE-3，0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.2％IPA):EtOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.4,RT1.610min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.32(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),5.26-5.17(m,1H),4.27(t,J＝4.3Hz,2H),4.02-3.92(m,1H),3.76(d,J＝10.3,2.1Hz,1H),2.70-2.58(m,2H),2.48-2.35(m,3H),2.32-2.13(m,5H),2.1-1.92(m,3H),1.95-1.88(m,3H)。
异构体4化合物467d(19.0mg，0.0358mmol，12.7％产率)。RT 3.773min(CHIRALPAKIE-3，0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.2％IPA):EtOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.4,RT1.610min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.32(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),5.26-5.17(m,1H),4.27(t,J＝4.3Hz,2H),4.02-3.92(m,1H),3.76(d,J＝10.3,2.1Hz,1H),2.70-2.58(m,2H),2.48-2.35(m,3H),2.32-2.13(m,5H),2.1-1.92(m,3H),1.95-1.88(m,3H)。
实施例163
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4,4-三甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4,4-三甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物480a和化合物480b)
Figure BDA0003085169390003891
步骤1：4-溴-2,2-二甲基-3-氧代丁酸乙酯
Figure BDA0003085169390003892
向2,2-二甲基-3-氧代丁酸乙酯(3.50g，22.13mmol)在乙醇(40.0mL)中的溶液中加入Br2(3.85g，24.34mmol)。在室温下将反应物搅拌4小时。在真空下浓缩混合物，得到标题产物(4.80g)。粗产物没有纯化就直接用于下一步。
步骤2：1,3,3-三甲基吡咯烷-2,4-二酮
Figure BDA0003085169390003893
向4-溴-2,2-二甲基-3-氧代-丁酸乙酯(4.80g，20.25mmol)在乙醇(10 0mL)中的溶液中加入甲胺(628.82mg，20.25mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1,3,3-三甲基吡咯烷-2,4-二酮(1.70g，12.05mmol，59.5％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝142。
步骤3：4-羟基-1,3,3-三甲基-吡咯烷-2-酮
Figure BDA0003085169390003894
向1,3,3-三甲基吡咯烷-2,4-二酮(1.50g，10.63mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入硼氢化钠(803.92mg，21.25mmol，并且在室温下搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，在真空下浓缩，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到4-羟基-1,3,3-三甲基-吡咯烷-2-酮(1.0g，6.99mmol，66.7％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝144；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.16(s,1H),3.82(s,1H),3.44(dd,J＝10.1,6.2Hz,1H),2.97(dd,J＝10.0,4.7Hz,1H),2.67(s,3H),0.93(s,3H),0.88(s,3H)。
步骤4：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1,4,4-三甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003901
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.57mmol)、DIEA(368.86mg，2.85mmol)和4-羟基-1,3,3-三甲基-吡咯烷-2-酮(163.46mg，1.14mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入三光气(169.39mg，0.5700mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用DCM/MeOH(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1,4,4-三甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol，37.9％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝695。
步骤5：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4,4-三甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,4,4-三甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390003911
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1,4,4-三甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.22mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(10mL)。在室温下将反应物搅拌30分钟，然后在减压下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：8％B至32％B，10min；254/220nm；RT 10.20min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物480a)(26.0mg，0.053mmol，24.3％产率)。RT 2.681min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝495.2,RT 2.126min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(s,1H),4.98(dd,J＝5.5,2.3Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.5,5.5Hz,1H),3.30(dd,J＝11.4,2.3Hz,3H),2.75(s,3H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.08(d,J＝6.5Hz,6H)。
对映异构体2：(化合物480b)(21.1mg，0.053mmol，19.7％产率)。RT4.892min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝495.2,RT 2.126min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(s,1H),4.98(dd,J＝5.5,2.3Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.79(dd,J＝11.5,5.5Hz,1H),3.30(dd,J＝11.4,2.3Hz,3H),2.75(s,3H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.08(d,J＝6.5Hz,6H)。
实施例164
(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯(化合物482b和化合物482a)
Figure BDA0003085169390003921
步骤1：(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环戊氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003922
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)和(±)-反式-2-羟基环戊烷甲腈(300mg，2.7mmol)在二氯甲烷(60mL)中的溶液中加入DIEA(500mg，3.88mmol)。然后加入三光气(200mg，0.67mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环戊氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.332mmol，58.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝663。
步骤2：(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯
Figure BDA0003085169390003931
在室温下，向(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-氰基环戊氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.33mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液加入TFA(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10％B至37％B，10min；然后在37％B保持2min)和手性HPLC(柱：CHIRALPAK IG，20*250mm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：30B至30B，15min)进行纯化，得到两种对映异构体。
对映异构体1：化合物482a(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯(27.1mg，0.062mmol，22.8％产率)。RT 1.726min(CHIRALPAK Ig-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.2,RT 0.996min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.68(s,1H),5.26-5.18(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(t,J＝4.4Hz,2H)3.17(dd,J＝7.6,4.9Hz,1H),2.13(m,2H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.84-1.76(m,4H)。
对映异构体2：化合物482b(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环戊酯(25.9mg，0.059mmol，21.8％产率)。RT 2.428min(CHIRALPAK Ig-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.2,RT 1.05min，方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.68(s,1H),5.26-5.18(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(t,J＝4.4Hz,2H)3.17(dd,J＝7.6,4.9Hz,1H),2.13(m,2H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.84-1.76(m,4H)。
实施例165
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,2R)-2-甲基环丙基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,2S)-2-甲基环丙基)脲(化合物736a和化合物736b)
Figure BDA0003085169390003951
步骤1：(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(2-甲基环丙基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003952
在0℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.46mmol)和4-二甲基氨基吡啶(57mg，0.47mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中逐滴加入(±)-顺式-2-甲基环丙胺盐酸盐(108mg，1mmol)和三乙胺(1.0mL，7.21mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。然后在0℃下将反应物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所得溶液。用水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱，得到(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(2-甲基环丙基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.361mmol，77.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝623.2。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,2R)-2-甲基环丙基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,2S)-2-甲基环丙基)脲
Figure BDA0003085169390003961
在25℃下，将(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(2-甲基环丙基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.40mmol)在二氯甲烷(20mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物加入二氯甲烷(5mL)，并且用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：XBridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：19％B至33％B，10min)进行纯化，得到外消旋产物，呈黄色固体状。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1化合物736a(34.5mg，0.0807mmol，20.1％产率)。RT 4.285min(Lux 5μCellulose-4，2.12*25cm，5μm。Hex(0.1％DEA):EtOH＝60:40，8min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝432.2,RT 2.226min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.76(s,1H),7.86(s,1H),7.30(s,1H),7.13(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.13(s,2H),5.66(s,1H),4.26(d,J＝4.7Hz,2H),3.30-3.26(m,2H),2.26(d,J＝7.0Hz,1H),1.90(d,J＝1.7Hz,3H),1.02(d,J＝6.1Hz,3H),0.91-0.72(m,1H),0.57-0.43(m,2H)。
对映异构体1化合物736b(35.6mg，0.0819mmol,20.4％产率)：保留时间：5.542min(Lux 5μCellulose-4，2.12*25cm，5μm。Hex(0.1％DEA):EtOH＝60:40，8min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝432.2,RT 2.226min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.76(s,1H),7.86(s,1H),7.30(s,1H),7.13(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.13(s,2H),5.66(s,1H),4.26(d,J＝4.7Hz,2H),3.30-3.26(m,2H),2.26(d,J＝7.0Hz,1H),1.90(d,J＝1.7Hz,3H),1.02(d,J＝6.1Hz,3H),0.91-0.72(m,1H),0.57-0.43(m,2H)。
实施例166
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(二甲基氨基)丙-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(二甲基氨基)丙-2-基酯(化合物523a和化合物523b)
Figure BDA0003085169390003971
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1-((叔丁氧基羰基)氨基)丙-2-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390003972
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.59mmol)和N-boc-1-氨基-2-丙醇(300mg，1.71mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入DIEA(370mg，2.87mmol)和三光气(120mg，0.40mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所得溶液，然后用水洗涤。然后在真空下浓缩有机相。通过快速色谱法，利用反相HPLC(0.1％甲酸)/ACN(45/55)纯化残余物，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)-1-甲基-乙氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(106mg，0.149mmol，25.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝727。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-氨基丙-2-基酯
Figure BDA0003085169390003981
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)-1-甲基-乙氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.55mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL，0.55mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过反相色谱法(水(0.1％甲酸)/MeOH(80/20))纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-氨基-1-甲基-乙基)酯(106mg，0.249mmol，45.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝427。
步骤3：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(二甲基氨基)丙-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(二甲基氨基)丙-2-基酯
Figure BDA0003085169390003991
向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-氨基-1-甲基-乙基)酯(100mg，0.23mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入甲醛溶液(29mg，0.97mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时，然后加入氰基硼氢化钠(56mg，0.89mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至19％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物523a)(13.6mg，0.0299mmol，12.8％产率)。RT 6.077min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 1.583min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(d,J＝3.3Hz,1H),5.03-4.92(m,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.41-3.52(m,2H),2.47(d,J＝7.3Hz,1H),2.28(dd,J＝12.7,5.1Hz,1H),2.19(s,6H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.23(d,J＝6.3Hz,3H)。
对映异构体2(化合物523b)(11.7mg，0.0257mmol，11％产率)。RT 7.841min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 1.583min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(d,J＝3.3Hz,1H),5.03-4.92(m,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.41-3.52(m,2H),2.47(d,J＝7.3Hz,1H),2.28(dd,J＝12.7,5.1Hz,1H),2.19(s,6H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.23(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例167
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-羟基环戊基]脲(化合物728a)
Figure BDA0003085169390004001
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-羟基环戊基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004002
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)和DMAP(37.9mg，0.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌15分钟。然后加入顺式-2-氨基-环戊醇(128.8mg，0.93mmol)和TEA(93.93mg，0.93mol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在55℃下将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1R,2S)-2-羟基环戊基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol，74.2％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝653.3。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-羟基环戊基]脲
Figure BDA0003085169390004011
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R)-2-羟基环戊基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140.0mg，0.21mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将混合物搅拌1.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：13％B至35％B，7min)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-羟基环戊基]脲(53.8mg，0.12mmol，55.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT 1.908min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.10(s,1H),7.84(s,1H),7.33(s,1H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(d,J＝3.0Hz,1H),4.88(d,J＝4.1Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.94-3.97(m,1H),3.85(d,J＝8.6Hz,1H),3.33-3.31(m,2H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H),1.89-1.38(m,6H)。
实施例168
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-异丙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-异丙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物479a和化合物479b)
Figure BDA0003085169390004021
步骤1：1-异丙基-3-甲氧基-2H-吡咯-5-酮
Figure BDA0003085169390004022
在氮气下，向(Z)-4-氯-3-甲氧基-丁-2-烯酸甲酯(5.0g，30.3mmol)在乙腈(80mL)中的溶液中逐滴加入异丙胺(2.3g，38.98mmol)和三乙胺(3.97g，39.31mmol)在乙腈(20mL)中的溶液。在回流下将混合物搅拌4小时。在真空下浓缩反应混合物。用水稀释残余物，然后用二氯甲烷萃取。用1N HCl洗涤有机层。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1-异丙基-3-甲氧基-2H-吡咯-5-酮(2.26g，13.543mmol，44.7％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝156.1。
步骤2：1-异丙基吡咯烷-2,4-二酮
Figure BDA0003085169390004031
在65℃下，将1-异丙基-3-甲氧基-2H-吡咯-5-酮(2.26g，14.58mmol)在1N HCl(88mL)和乙腈(44mL)中的溶液搅拌4小时。在真空下浓缩反应混合物，得到粗产物(1.6g)。粗产物没有纯化就将直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝142.1。
步骤3：4-羟基-1-异丙基-吡咯烷-2-酮
Figure BDA0003085169390004032
在室温下，将1-异丙基吡咯烷-2,4-二酮(1.6g，11.35mmol)和硼氢化钠(1.29g，33.95mmol)在乙醇(50mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。用水稀释残余物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到4-羟基-1-异丙基-吡咯烷-2-酮(700mg，4.498mmol，39.6％产率)，呈棕色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝144.1。
步骤4：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-异丙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004033
在0℃下，在氮气下将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)、4-羟基-1-异丙基-吡咯烷-2-酮(245mg，1.71mmol)和N,N-二异丙基乙胺(736mg，5.71mmol)在二氯甲烷(28mL)中的溶液搅拌10分钟。然后逐滴加入三光气(240mg，0.81mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所得溶液，并且用DCM萃取。用水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(19/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-异丙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.246mmol，43.2％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝695.3。
步骤5：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-异丙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-异丙基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390004041
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-异丙基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.26mmol)在二氯甲烷(20mL)和TFA(5mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X-Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至36％B，7min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物479a(21.6mg，0.0433mmol，16.7％产率)。RT 2.014min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2,RT 1.857min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.82(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.27(s,1H),4.28(d,J＝4.3Hz,2H),4.16(p,J＝6.7Hz,1H),3.88-3.69(m,1H),3.41-3.38(m,2H),2.89-2.75(m,1H),2.31-2.25(m,2H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H),1.06(t,J＝6.5Hz,6H)。
对映异构体2：化合物479b(22.1mg，0.044mmol，17％产率)。RT 3.049min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝50:50，5min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2,RT 1.857min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.82(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.27(s,1H),4.28(d,J＝4.3Hz,2H),4.16(p,J＝6.7Hz,1H),3.88-3.69(m,1H),3.41-3.38(m,2H),2.89-2.75(m,1H),2.31-2.25(m,2H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H),1.06(t,J＝6.5Hz,6H)。
实施例169
(S)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯(化合物481a和化合物481b)
Figure BDA0003085169390004061
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004062
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.76mmol)、DIEA(493.7mg，3.82mmol)和4-羟基-1-甲基-吡咯烷-2-酮(176.0mg，1.53mmol)在二氯甲烷(14mL)中的溶液中加入三光气(226.7mg，0.76mmol)，并且在0℃下搅拌1.5小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.38mmol，49.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝665。
步骤2：(S)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390004071
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.38mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。然后在室温下将混合物搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应物。将残余物溶解在二氯甲烷中且用TEA调节至pH 8，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至24％B，7min)纯化残余物，并且通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：MeOH；流速：20mL/min；梯度：30B至30B，16min)分离，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物481a)(35.2mg，0.069mmol，18.3％产率)。RT2.164min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm；3μm,流动相：MTBE:MeOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝465.3,RT 1.939min；方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.64(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.27(s,2H),5.63(s,1H),5.33-5.23(m,1H),3.78(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.42(m,3H),2.94-2.74(m,3H),2.76(s,3H),2.29(d,J＝17.6Hz,1H),1.92-1.90(m,5H)。
对映异构体2：(化合物481b)(35.2mg,0.069mmol，18.3％产率)。RT3.101min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm；3μm,流动相：MTBE:MeOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝465.3,RT 1.939min；方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.64(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.27(s,2H),5.63(s,1H),5.33-5.23(m,1H),3.78(dd,J＝11.6,5.7Hz,1H),3.42(m,3H),2.94-2.74(m,3H),2.76(s,3H),2.29(d,J＝17.6Hz,1H),1.92-1.90(m,5H)。
实施例170
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(化合物483a)
Figure BDA0003085169390004081
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004082
在0℃下，在氮气下向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.29mmol)、顺式-3-羟基环丁烷甲腈(55.6mg，0.57mmol)和DIEA(185.0mg，1.43mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(59.5mg，0.20mmol)，并且将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用PE/EA(22/78)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(100mg，0.15mmol，54％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝647.3。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯
Figure BDA0003085169390004091
在25℃下，将7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(95.0mg，0.15mmol)和TFA(1.0mL，0.15mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；水(0.1％FA):ACN＝5％B至29％B，7min；25mL/min)纯化残余物，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(24mg，0.054mmol，36.6％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝447.3；RT 1.163min；方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.33(s,1H),7.93(s,1H),7.56(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.47(s,1H),5.00-4.92(m,1H),3.50-3.23(m,2H),3.20-3.10(m,1H),2.83-2.70(m,4H),2.42-2.20(m,2H),1.98-1.69(m,5H)。
实施例171
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲(化合物723a和化合物723b)
Figure BDA0003085169390004101
步骤1：(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004102
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)、(±)-顺式-4-甲氧基四氢呋喃-3-胺盐酸盐(143.0mg，0.93mmol)和DMAP(38.0mg，0.31mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液加入DIEA(200mg，1.55mmol)。在55℃下将混合物搅拌24小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(88/12)洗脱，得到(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(182mg，0.27mmol，87％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝669。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲
Figure BDA0003085169390004111
向(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-甲氧基四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(172.0mg，0.26mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1mL)。在25℃下将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用Et3N将残余物调节至pH 8。通过制备型HPLC，用以下条件(柱：X Bridge BEH130 Prep C18 OBD柱19×150mm 5μm 13nm；水(10mM NH4HCO3):MeOH＝35％B至45％B，7min，25mL/min)纯化粗产物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物723a)(29.5mg，0.06mmol，24％产率)。RT 1.241min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝469,RT 1.781min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.22(s,1H),7.77(s,1H),7.58(s,1H),7.30(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.16(s,2H),5.66(s,1H),4.38-4.22(m,3H),3.97-3.70(m,4H),3.40-3.31(m,6H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物723b)(28.9mg，0.062mmol，24％产率)。RT 1.805min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝469,RT 1.781min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.22(s,1H),7.77(s,1H),7.58(s,1H),7.30(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.16(s,2H),5.66(s,1H),4.38-4.22(m,3H),3.97-3.70(m,4H),3.40-3.31(m,6H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例172
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物494)
Figure BDA0003085169390004121
步骤1：7-(3-((((2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004122
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)、6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(164mg，0.77mmol)和DIEA(245mg，1.9mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入三光气(80mg，0.27mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(C18柱，利用ACN/水(20/80))纯化残余物，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.288mmol，75.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝764。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390004131
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.26mmol)在TFA(2mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法(C18柱，利用ACN/水(18/82))进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(90mg，0.194mmol，74.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝465。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390004132
在室温下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(66.0mg，0.14mmol)和Et3N(72mg，0.14mmol)在四氢呋喃(6.6mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(45mg，0.21mmol)，并且在室温下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(X Select CSH PreC18 OBD柱，5μm，19×150nm)；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速25mL/min；梯度：5％B至25％，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]酯(15mg，0.0284mmol，20％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝529.3,RT 6.230min，方法M。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),10.12(s,1H),9.34(s,1H),7.94(s,1H),7.33(s,1H),6.85-6.82(d,J＝6Hz,1H),6.34-6.20(m,2H),5.71(s,1H),4.31-4.13(m,6H),3.84-3.67(m,2H),3.46-3.30(m,2H),2.77(s,1H),2.69(s,1H),2.24-26(m,2H),2.63(s,1H),1.92(s,3H)。
实施例173
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸(3-氟-1-甲基吡咯烷-3-基)甲酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸(3-氟-1-甲基吡咯烷-3-基)甲酯(化合物451a和化合物451b)
Figure BDA0003085169390004141
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-吡咯烷-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004151
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(370mg，0.70mmol)、3-氟-3-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(680mg，3.1mmol)和DIEA(0.90g，6.92mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液加入三光气(208mg，0.70mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液。在室温下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/7)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-吡咯烷-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.259mmol，36.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代吡咯烷-3-基)甲酯
Figure BDA0003085169390004152
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-吡咯烷-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.26mmol)在2,2,2-三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代吡咯烷-3-基)甲酯(120mg，0.2551mmol，98.3％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471。
步骤3：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸(3-氟-1-甲基吡咯烷-3-基)甲酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸(3-氟-1-甲基吡咯烷-3-基)甲酯
Figure BDA0003085169390004161
在25℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代吡咯烷-3-基)甲酯(120mg，0.26mmol)和甲醛(40％，38mg，0.51mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入NaBH4(28mg，0.76mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至21％B，7min；254/220nm；Rt:6min)进行纯化，得到产物的外消旋混合物。通过手性HPLC分离外消旋混合物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物451a)(22.2mg，0.0458mmol，18％产率)。RT 10.715min(CHIRALPAK IG，2.0cm I.D*25cm L(5μm)；流动相A：Hex:DCM＝1:1(10mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，18min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝485,RT 2.158min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(d,J＝3.2Hz,1H),4.28(d,J＝6.0Hz,4H),3.34-3.32(m,2H),2.83-2.42(m,4H),2.26(s,3H),2.16-1.98(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物451ab)(20.2mg，0.0417mmol，16.3％产率)。保留时间：15.235min(CHIRALPAK IG,2.0cm I.D*25cm L(5μm)；流动相A：Hex:DCM＝1:1(10mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：50B至50B，18min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝485,RT 2.158min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(d,J＝3.2Hz,1H),4.28(d,J＝6.0Hz,4H),3.34-3.32(m,2H),2.83-2.42(m,4H),2.26(s,3H),2.16-1.98(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例174
1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(化合物739)
Figure BDA0003085169390004171
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004181
在0℃下，将氯甲酸苯酯(358mg，2.29mmol)在二氯甲烷(7mL)中的溶液中加入DMAP(69mg，0.57mmol)和7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)在吡啶(4mL)中的溶液。在0℃下将反应物搅拌2小时。然后加入6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(608mg，2.86mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液。在80℃下将反应物搅拌16小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.525mmol，91.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝762。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲
Figure BDA0003085169390004182
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.53mmol)在2,2,2-三氟乙酸(4mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(200mg，0.4333mmol，82.5％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝462。
步骤3：1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲
Figure BDA0003085169390004191
在25℃下，将1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(200mg，0.43mmol)、三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(186mg，0.87mmol)和TEA(87.7mg，0.87mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC进行纯化，得到1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)脲(40mg，0.076mol,27.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝526,RT 2.262min，方法＝M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.86(s,1H),7.82(s,1H),7.56(s,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),6.14-5.72(tt,J＝4.2Hz,54Hz,1H),5.43(s,1H),4.02(q,J＝7.9Hz,1H),3.88-3.39(m,4H),3.21(s,2H),2.91-2.64(m,4H),2.44(t,J＝10.0Hz,2H),2.05-1.89(m,4H),1.87(s,3H)。
实施例175
1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-((1r,3r)-3-氟环丁基)脲(化合物732a)
Figure BDA0003085169390004201
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004202
在0℃下，向氯甲酸苯酯(299mg，1.91mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)和DMAP(47mg，0.39mmol)在吡啶(4mL)中的溶液。加入含3-氟代环丁胺(204mg，2.29mmol)的二氯甲烷(12mL)。在50℃下将混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用乙酸乙酯(100％)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.313mmol，82％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝639。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-((1r,3r)-3-氟环丁基)脲
Figure BDA0003085169390004211
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.19mmol)在TFA(4mL)和二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10％B至33％B，7min)进行纯化，得到1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-((1r,3r)-3-氟环丁基)脲(56.2mg，0.116mmol，61.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.2,RT 1.271min，方法M。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.90(s,1H),7.86(s,1H),7.58(s,1H),7.38(d,J＝6.7Hz,1H),6.75(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(s,2H),5.48(s,2H),4.35(dq,J＝6.4,3.1Hz,1H),3.34(dq,J＝6.5,3.6Hz,4H),2.86(t,J＝6.4Hz,2H),2.44(s,2H),1.93(s,2H),1.88(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例176
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-羟基丙-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-羟基丙-2-基酯(化合物530a和化合物530b)
Figure BDA0003085169390004221
步骤1：7-(3-((((1-(苯甲氧基)丙-2-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004222
在0℃下，将1-苯甲氧基-2-丙醇(126.0mg，0.76mmol)、7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)和DIEA(246mg，0.38mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入三光气(80mg，0.27mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(C18)，利用ACN/水(18/82)纯化残余物，得到7-[3-[(2-苯甲氧基-1-甲基-乙氧基)羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(210mg，0.293mmol，76.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝718.3。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(苯甲氧基)丙-2-基酯
Figure BDA0003085169390004231
在室温下，将7-[3-[(2-苯甲氧基-1-甲基-乙氧基)羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.28mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法(C18)，利用ACN/水(20/80)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-苯甲氧基-1-甲基-乙基)酯(130mg，0.251mmol，90.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝517.2
步骤3：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-羟基丙-2-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-羟基丙-2-基酯
Figure BDA0003085169390004232
在室温下，在氢气(1大气压)下将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(2-苯甲氧基-1-甲基-乙基)酯(140.0mg，0.27mmol)和Pd/C(80mg，0.27mmol)在甲醇(2mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH PreC18 OBD柱，5μm，19×150nm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速25ML/min；梯度：6％B至36％，7min)进行纯化，得到产物的外消旋混合物。通过手性HPLC分离外消旋混合物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物530a)(4.4mg，0.0103mmol，3.8％产率)。RT 1.208min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝428.2,RT 2.081min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.84-6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(s,1H),4.95-4.78(m,2H),4.32-4.26(m,2H),3.53-3.42(m,4H),1.92(s,3H),1.26-1.18(d,J＝6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物530b)(4.5mg，0.0105mmol，3.9％产率)。RT 2.402min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝428.2,RT 2.081min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.33(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.84-6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(s,1H),4.95-4.78(m,2H),4.32-4.26(m,2H),3.53-3.42(m,4H),1.92(s,3H),1.26-1.18(d,J＝6Hz,3H)。
实施例177
(R)-1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲(化合物719a)
Figure BDA0003085169390004241
步骤1：(R)-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(四氢呋喃-3-基)脲基)异喹-啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004251
在0℃下，向氯甲酸苯酯(149.5mg，0.95mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入四氢-3-呋喃基胺(249.6mg，2.87mmol)和4-二甲基氨基吡啶(23.3mg，0.19mmol)在吡啶(1mL)中的溶液。在室温下将混合物搅拌1小时。然后加入四氢-3-呋喃基胺(249.6mg，2.87mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液，并且在60℃下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(90mg，0.141mmol，74％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝637。
步骤2：(R)-1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲
Figure BDA0003085169390004252
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3S)-四氢呋喃-3-基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(90.0mg，0.14mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3.0mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，再溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。在减压下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：18％B至48％B，8min；2)进行纯化，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]-3-[(3S)-四氢呋喃-3-基]脲(38mg，0.0871mmol，61.6％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝437.3,RT1.876min，方法L；1H NMR 1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.86(s,1H),7.85(s,1H),7.56(s,1H),7.35(d,J＝6.8Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.42(d,J＝2.7Hz,1H),4.23-4.26(m,1H),3.88-3.65(m,3H),3.52(dd,J＝8.9,3.4Hz,1H),3.29(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.14-2.17(m,1H),1.96-1.83(m,6H)。
实施例178
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,2R)-2-甲氧基环戊基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,2S)-2-甲氧基环戊基)脲(化合物729a和化合物729b)
Figure BDA0003085169390004261
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(2-甲氧基环戊基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004262
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.23mmol)和4-二甲基氨基吡啶(28.5mg，0.23mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2-甲氧基环戊胺(54.0mg，0.47mmol)。在55℃下将反应混合物搅拌5小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(15:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-甲氧基环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.21mmol，90.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝667.1。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,2R)-2-甲氧基环戊基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,2S)-2-甲氧基环戊基)脲
Figure BDA0003085169390004271
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-甲氧基环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.21mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三氟乙酸(5.6mL，72.69mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：22％B至40％B，7min)纯化粗产物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物729a)(19.6mg，0.0417mmol，19.9％产率)，呈黄色。RT2.097min(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT 1.183min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.09(s,1H),7.81(s,1H),7.35(s,1H),7.32(s,1H),6.73(d,J＝6.0Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.28(t,J＝4.0Hz,2H),4.01-3.97(m,1H),3.65-3.62(m,1H),3.37(s,2H),3.28(s,3H),1.92(s,3H),1.92-1.85(m,1H),1.76-1.65(m,3H),1.56-1.42(m,2H)。
对映异构体2：(化合物729b)(20.2mg，0.0431mmol，20.5％产率)，呈黄色固体状。RT 2.802min(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT 1.183min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.09(s,1H),7.81(s,1H),7.35(s,1H),7.32(s,1H),6.73(d,J＝6.0Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.28(t,J＝4.0Hz,2H),4.01-3.97(m,1H),3.65-3.3.62(m,1H),3.37(s,2H),3.28(s,3H),1.92(s,3H),1.92-1.85(m,1H),1.76-1.65(m,3H),1.56-1.42(m,2H)。
实施例179
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R,2S)-2-氟代环戊基]脲和1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-氟代环戊基]脲(化合物727a和化合物727b)
Figure BDA0003085169390004281
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-氟代环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004291
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(56.7mg，0.46mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入2-氟代环戊胺盐酸盐(194.6mg，1.39mmol)在二氯甲烷中的溶液。然后在55℃下将反应物搅拌6小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-氟代环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(290mg，0.443mmol，95.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝655.3。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R,2S)-2-氟代环戊基]脲和1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S,2R)-2-氟代环戊基]脲
Figure BDA0003085169390004292
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-氟代环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(450.0mg，0.69mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(3mL)。在室温下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩混合物，用二氯甲烷再溶解，并用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：XBridge Prep C18 OBD柱19×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：41％B至54％B，11min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物727a)(71.5mg，0.1573mmol，22.9％产率)。RT2.828min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 2.100min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.04(s,1H),7.81(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.73(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.66(s,1H),5.04(d,J＝3.9Hz,1H),4.27(t,J＝4.5Hz,2H),4.01(s,1H),3.31(s,2H),1.75-1.96(m,7H),1.53-1.72(m,2H)。
对映异构体2：(化合物727b)(74.2mg,0.163mmol，23.8％产率)。RT4.162min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI):[M+H]+＝455.2,RT 2.100min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.04(s,1H),7.81(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.73(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.66(s,1H),5.04(d,J＝3.9Hz,1H),4.27(t,J＝4.5Hz,2H),4.01(s,1H),3.31(s,2H),1.75-1.96(m,7H),1.53-1.72(m,2H)。
实施例180
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1R,2S)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯和(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1S,2R)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯(化合物531a和化合物531b)
Figure BDA0003085169390004311
在室温下，向N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(100mg，0.24mmol)和(±)-反式-2-氟代环丙烷甲酸(35mg，0.34mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入HATU(100mg，0.26mmol)和DIEA(100mg，0.78mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至29％B，8min；254/220nm；Rt:7.83min)和手性HPLC纯化残余物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物531a)(21.9mg，0.0431mmol，18.2％产率)。RT2.539min(ChIRALPAK IG-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.3,RT 0.91min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.36(s,1H),7.97(s,1H),7.56(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.43(s,1H),5.24(dd,J＝7.2,3.4Hz,1H),4.85-4.62(m,2H),4.31-4.18(m,2H),3.84(td,J＝10.8,4.0Hz,1H),3.38(t,J＝6.3Hz,2H),2.84(t,J＝6.3Hz,2H),2.17(dt,J＝18.0,8.8Hz,1H),1.92(s,2H),1.86(d,J＝1.5Hz,3H),1.41(ddd,J＝12.8,6.6,2.7Hz,1H),1.11(ddd,J＝12.8,6.6,2.7Hz,1H)。
对映异构体2(化合物531b)(20.9mg，0.0411mmol，17.4％产率)。RT3.613min(ChIRALPAK IG-3，46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.3,RT0.911min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.36(s,1H),7.97(s,1H),7.56(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.43(s,1H),5.24(dd,J＝7.2,3.4Hz,1H),4.85-4.62(m,2H),4.31-4.18(m,2H),3.84(td,J＝10.8,4.0Hz,1H),3.38(t,J＝6.3Hz,2H),2.84(t,J＝6.3Hz,2H),2.17(dt,J＝18.0,8.8Hz,1H),1.92(s,2H),1.86(d,J＝1.5Hz,3H),1.41(ddd,J＝12.8,6.6,2.7Hz,1H),1.11(ddd,J＝12.8,6.6,2.7Hz,1H)。
实施例181
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(化合物532)
Figure BDA0003085169390004321
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004322
在0℃下，在氮气下搅拌7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)、6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酸叔丁酯(160mg，0.75mmol)和N,N-二异丙基乙胺(490mg，3.8mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液。然后逐滴加入三光气(110mg，0.37mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在0℃下将反应物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所得溶液，并且用水洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层，在真空下浓缩，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(19/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.302mmol，79％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝763。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺-[3.3]庚-6-基酯
Figure BDA0003085169390004331
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(2-叔丁氧基羰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.33mmol)在含2N HCl的1,4-二噁烷(20mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。粗产物没有纯化就将直接用于下一步。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]酯
Figure BDA0003085169390004341
在室温下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(200mg，0.43mmol)和三乙胺(2.01mL，14.46mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(90mg，0.42mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。然后在真空下浓缩混合物，并且通过反相色谱法(乙腈5-50/水)进行纯化，得到(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基酯(19.5mg，0.0332mmol，7.7％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝527.2,RT 0.876min；方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.57(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),6.08-5.77(m,1H),5.44(s,1H),4.98-4.76(m,1H),3.32-3.14(m,6H),2.90(t,J＝10.3,2H),2.85-2.65(m,2H),2.61(s,2H),2.25-2.10(m,2H),1.98-1.82(m,2H),1.86(s,3H)。
实施例182
1-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)-3-环戊基脲(化合物749)
Figure BDA0003085169390004342
步骤1：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004351
在0℃下将氯甲酸苯酯(933.8mg，5.96mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(600.0mg，1.19mmol)和4-二甲基氨基吡啶(729.4mg，5.97mmol)在吡啶(20mL)中的溶液。在0℃下在室温下将反应物搅拌1小时。然后向反应混合物中加入环戊胺(1.01g，11.93mmol)。在55℃下将所得溶液搅拌12小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(50/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，0.84mmol，70.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝614.2。
步骤2：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-环戊基脲基)-7-氟代异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004352
在室温下，在氮气下向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(600.0mg，0.98mmol)、氨基甲酸叔丁酯(2.30g，19.62mmol)、三(二亚苯甲基丙酮)二钯三氯甲烷加合物(204.0mg，0.20mmol)和2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(210.0mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(45ml)中的混合物中加入碳酸铯(966.0mg，2.95mmol)。在90℃下将所得混合物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(800mg，0.81mmol，82.5％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝695.3。
步骤3：1-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)-3-环戊基脲
Figure BDA0003085169390004361
向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环戊基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(800.0mg，0.81mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三氟乙酸(10.0mL，129.8mmol)。在室温下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用二氯甲烷稀释残余物，并且用三乙胺调节至pH 7。然后在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：26％B至45％B，8min)进行纯化，得到1-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]-3-环戊基-脲(100.2mg，0.254mmol，31.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝395.2,RT1.943min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.79(s,1H),7.98(s,1H),7.85(s,1H),7.65(s,1H),7.12(d,J＝7.2Hz,1H),6.75(d,J＝6Hz,1H),6.17(s,2H),5.24(s,2H),4.01-3.96(m,1H),1.91(s,3H),1.91-1.83(m,2H),1.68-1.62(m,2H),1.60-1.55(m,2H),1.43-1.35(m,2H)。
实施例183
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)脲(化合物750b和化合物750a)
Figure BDA0003085169390004371
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[3-甲氧基四氢吡喃-4-基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004372
在室温下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)和DMAP(38.1mg，0.31mmol)在二氯甲烷(7.5mL)中的溶液中加入3-甲氧基四氢吡喃-4-胺(81.2mg，0.61mmol)和DIEA(2.0mL，0.31mmol)在二氯甲烷中的溶液。在55℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[3-甲氧基四氢吡喃-4-基]氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.29mmol，94.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝683.3。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)脲
和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)脲
Figure BDA0003085169390004381
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基四氢吡喃-4-基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.29mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(5mL)。在室温下将所得溶液搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应混合物。用DCM稀释残余物，用TEA调节至pH 8，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至38％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。
对映异构体1：(化合物750b)(29.9mg，0.062mmol，21.2％产率),RT 2.205min(柱：CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI):[M+H]+＝483.2,RT 1.790min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),9.11(s,1H),7.79(s,1H),7.51(s,1H),7.32(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.67(d,J＝2.7Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.91-3.95(m,2H),3.76(d,J＝11.6Hz,1H),3.48-3.32(m,7H),3.29(s,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.80-1.53(m,2H)。
对映异构体2：(化合物750a)(28.7mg，0.0595mmol，20.3％产率)。RT 2.782min(柱：CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI):[M+H]+＝483.2,RT 1.790min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),9.11(s,1H),7.79(s,1H),7.51(s,1H),7.32(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.17(s,2H),5.67(d,J＝2.7Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.91-3.95(m,2H),3.76(d,J＝11.6Hz,1H),3.48-3.32(m,7H),3.29(s,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.80-1.53(m,2H)。
实施例184
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(化合物484a)
Figure BDA0003085169390004391
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004401
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.34mmol)、(1s,3s)-3-羟基环丁烷-1-甲腈(40mg，0.41mmol)和DIEA(132mg，1.02mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液中加入三光气(150mg，0.51mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液，并且通过反相色谱法在硅胶上进行纯化，用MeOH/DCM(7％)洗脱，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(200mg，0.308mmol，90.0％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝650.0
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯化合物484a
Figure BDA0003085169390004402
在室温下，将(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(81mg，0.12mmol)在2,2,2-三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(8mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：29％B至50％B，7min)进行纯化，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(27mg，0.0542mmol，44.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝449.2,RT1.837min，方法＝J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.35(s,1H),7.95(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.24(s,2H),5.69(s,1H),4.94(t,J＝7.4Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.34-3.33(m,2H),3.12(tt,J＝9.6,8.0Hz,1H),2.89-2.71(m,2H),2.39(tdd,J＝9.8,7.7,2.6Hz,2H),1.92(d,J＝1.7Hz,3H)。
实施例185
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯(化合物553a)
Figure BDA0003085169390004411
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004412
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.34mmol)、(1s,3s)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)环丁-1-醇(130mg，0.64mmol)和DIEA(132mg，1.02mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液中加入三光气(150mg，0.51mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(7％)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(200mg，0.239mmol，69.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝752.0。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-羟基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004421
向7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(200mg，0.27mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入TBAF(130mg，0.50mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时。然后在真空下浓缩混合物，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-羟基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(150mg，0.165mmol，61.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝638.0。
步骤3：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯
Figure BDA0003085169390004431
在室温下，将7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-羟基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(96mg，0.15mmol)在二氯甲烷(10mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至21％B，7min)纯化残余物，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯(60mg，0.123mmol，81.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝438.2,RT1.645min，方法＝J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.56(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.43(s,1H),5.20(s,1H),4.52(p,J＝7.3Hz,1H),3.81(p,J＝7.1Hz,1H),3.34-3.33(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.75-2.64(m,2H),1.97-1.88(m,4H),1.86(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例186
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基酯
(化合物504a和化合物504b)
Figure BDA0003085169390004441
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004442
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(56.7mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-醇(173.0mg，1.39mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液。在90℃下将所得溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(71/29)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(247mg，0.36mmol，78％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝676.3。
步骤2：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基酯和(S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基酯
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(237.0mg，0.35mmol)和TFA(2.5mL，0.35mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌30分钟。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Select CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19*150mm；水(0.1％FA):ACN＝5％B至21％B，7min；25mL/min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物504a)(21.9mg，0.046mmol，13％产率)。RT 1.952min(CHIRALCellulose-SB 0.46*10cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2,RT 1.084min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),8.02(s,1H),7.34(s,1H),7.24(d,J＝1.2Hz,1H),7.06(d,J＝1.2Hz,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.24(s,2H),6.01-5.98(m,1H),5.72-5.69(m,1H),4.30-4.20(m,2H),4.20-3.97(m,2H),3.37-3.33(m,2H),3.15-3.00(m,1H),2.60(s,1H),1.93(s,3H)。
对映异构体2(化合物504b)(10.5mg，0.0221mmol，6.3％产率)RT 2.419min(CHIRAL Cellulose-SB 0.46*10cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2,RT 1.084min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.34(s,1H),8.02(s,1H),7.34(s,1H),7.24(d,J＝1.2Hz,1H),7.06(d,J＝1.2Hz,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.24(s,2H),6.01-5.98(m,1H),5.72-5.69(m,1H),4.30-4.20(m,2H),4.20-3.97(m,2H),3.37-3.33(m,2H),3.15-3.00(m,1H),2.60(s,1H),1.93(s,3H)。
实施例187
1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-((2s,4s)-6-氧杂螺[3.4]辛-2-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-((2r,4r)-6-氧杂螺[3.4]辛-2-基)脲(化合物740a)(化合物740b)
Figure BDA0003085169390004461
步骤1：7-(3-(3-(6-氧杂螺[3.4]辛-2-基)脲基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004462
向氯甲酸苯酯(270mg，1.72mmol)在吡啶(3mL)中的溶液中加入7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.29mmol)在二氯甲烷(3mL)和DMAP(35mg，0.29mmol)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌1小时。然后加入6-氧杂螺[3.4]辛-2-胺(220mg，1.73mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(6-氧杂螺[3.4]辛-2-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.177mmol，61.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝677。
步骤2:1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(6-氧杂螺[3.4]辛-2-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(6-氧杂螺[3.4]辛-2-基)脲
Figure BDA0003085169390004471
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(6-氧杂螺[3.4]辛-2-基氨基甲酰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(128mg，0.19mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1ml)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：25％B至44％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物740a)(13.5mg，0.0289mmol，18.7％产率)。RT2.196min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝477.2,RT 2.108min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.86(s,1H),7.82(s,1H),7.56(s,1H),7.37(d,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.16(s,2H),5.42(s,1H),4.09(q,J＝7.9Hz,1H),3.70-3.60(m,4H),3.25-3.35(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.33(s,2H),2.01-1.83(m,9H)。
对映异构体2(化合物740b)(28.3mg，0.0594mmol，31.4％产率)。RT3.188min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝477.2,RT 2.108min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.86(s,1H),7.82(s,1H),7.56(s,1H),7.37(d,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.16(s,2H),5.42(s,1H),4.09(q,J＝7.9Hz,1H),3.70-3.60(m,4H),3.25-3.35(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.33(s,2H),2.01-1.83(m,9H)。
实施例188
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)酯(化合物486)
Figure BDA0003085169390004481
步骤1：3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇
Figure BDA0003085169390004482
在-78℃下，在氮气下向3-(苯甲氧基)环丁酮(4.0g，22.7mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液中加入甲基镁(5.03mL，68.19mmol)。在室温下将所得溶液搅拌2小时。通过加入MeOH来淬灭反应物。在真空下浓缩所得溶液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇(3.7g，19.25mmol，84.8％产率)，呈黄色油状。
步骤2：(3-苯甲氧基-1-甲基-环丁氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷
Figure BDA0003085169390004491
在0℃下，向3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇(2.4g，12.48mmol)和咪唑(4.26g，62.57mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入叔丁基二甲基氯代硅烷(5.64g，37.42mmol)。在室温下将所得溶液搅拌5小时。在真空下浓缩所得溶液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/二氯甲烷(1/1)洗脱，得到(3-苯甲氧基-1-甲基-环丁氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(3g，9.79mmol，78.4％产率)，呈无色油状。
步骤3：7-溴-1H-1,6-萘啶-2-酮
Figure BDA0003085169390004492
在室温下，向(3-苯甲氧基-1-甲基-环丁氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(800.0mg，2.61mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，160.0mg，0.15mmol)。在室温下，在氢气下将所得溶液搅拌16小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁醇(500mg，2.31mmol，88.5％产率)，呈黄色油状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.96(s,1H),3.70(t,J＝7.1Hz,1H),2.25-2.31(m,2H),1.88-1.93(m,2H),1.21(s,3H),0.84(s,9H),0.05(s,6H)。
步骤4：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004501
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(155.3mg，0.3mmol)、3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁醇(127.5mg，0.59mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.15mL，0.88mmol)在二氯甲烷(15mL)中的混合物中加入三光气(87.0mg，0.29mmol)。在室温下将所得溶液搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(130mg，0.17mmol，57.3％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝768.4。
步骤5：三氟甲磺酸[7-(叔丁氧基羰基氨基)-1,6-萘啶-2-基]酯
Figure BDA0003085169390004502
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(110.0mg，0.14mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3mL)。在室温下将所得溶液搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液，溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。然后在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7％B至37％B，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)酯(18mg，0.037mmol，25.8％产率)，呈灰白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.724min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(d,J＝2.7Hz,1H),5.16(s,1H),4.58-4.65(m,J＝7.3Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.37(t,J＝4.0Hz,2H),2.49-2.44(m,2H),2.21-2.07(m,2H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.23(s,3H)。
实施例189
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)脲、1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,3S)-3-甲氧基环戊基)脲、1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,3S)-3-甲氧基环戊基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,3R)-3-甲氧基环戊基)脲(化合物730a、化合物730b；化合物730c和化合物730d)
Figure BDA0003085169390004521
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(3-甲氧基环戊基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004522
向6-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-5-甲基-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸叔丁酯(400mg，0.62mmol)和DIEA(0.5ml)在二氯甲烷(16mL)中的混合物中加入3-甲氧基环戊胺盐酸盐(94mg，0.62mmol)和DIEA(0.5ml)在二氯甲烷(1ml)中的混合物。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到6-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-5-甲基-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸叔丁酯(300mg，0.451mmol，72.6％产率)，呈黄色固体状。LC/MS(ESI)[M+H]+＝667。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)脲(化合物730a)、1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,3S)-3-甲氧基环戊基)脲(化合物730b)、1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,3S)-3-甲氧基环戊基)脲(化合物730c)和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,3R)-3-甲氧基环戊基)脲(化合物730d)
向6-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环戊基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-5-甲基-2,3-二氢-1,4-苯并噁嗪-4-甲酸叔丁酯(400mg，0.60mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：22％B至43％B，7min)纯化残余物，得到产物的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到四种异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物730a)(41.3mg，0.0887mmol，14.8％产率)。RT1.733min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 2.093min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.79(s,1H),7.85(s,1H),7.32(s,1H),7.11(d,J＝7.0Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.14(s,2H),5.67(s,1H),4.28(s,2H),4.08(q,J＝7.2Hz,1H),3.85(dd,J＝6.1,3.2Hz,1H),3.32-3.36(m,2H),3.17(s,3H),1.97(s,2H),2.06-1.84(m,4H),1.62-1.51(m,2H),1.38(dt,J＝11.4,7.5Hz,1H)。
对映异构体2(化合物730c)(24.1mg，0.0518mmol，8.6％产率)。RT2.900min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 2.125min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.93(s,1H),7.79(s,1H),7.32(s,1H),7.29(s,1H),6.72(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.28(s,2H),4.06(q,J＝6.7Hz,1H),3.78(tt,J＝6.2,3.5Hz,1H),3.41-3.31(m,2H),3.22(s,3H),2.19-2.03(m,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,4H),1.79-1.60(m,2H),1.58-1.43(m,2H)。
对映异构体3(化合物730b)(18.3mg，0.0393mmol，6.5％产率)，RT 2.264min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 2.093min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.79(s,1H),7.85(s,1H),7.32(s,1H),7.11(d,J＝7.0Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.14(s,2H),5.67(s,1H),4.28(s,2H),4.08(q,J＝7.2Hz,1H),3.85(dd,J＝6.1,3.2Hz,1H),3.32-3.36(m,2H),3.17(s,3H),1.97(s,2H),2.06-1.84(m,4H),1.62-1.51(m,2H),1.38(dt,J＝11.4,7.5Hz,1H)。
对映异构体4(化合物730d)(33.8mg，0.0726mmol，12.1％产率)。RT 4.378min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝455.2,RT 2.125min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),8.93(s,1H),7.79(s,1H),7.32(s,1H),7.29(s,1H),6.72(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.28(s,2H),4.06(q,J＝6.7Hz,1H),3.78(tt,J＝6.2,3.5Hz,1H),3.41-3.31(m,2H),3.22(s,3H),2.19-2.03(m,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,4H),1.79-1.60(m,2H),1.58-1.43(m,2H)。
实施例190
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(甲基磺酰基)氮杂环丁-3-基酯(化合物493)
Figure BDA0003085169390004551
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004552
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.29mmol)和1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-醇(220mg，1.46mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入DIEA(200mg，1.55mmol)。然后加入三光气(250mg，0.84mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时，然后浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.171mmol，59.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝701。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(甲基磺酰基)氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390004561
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.17mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应溶液，并且通过制备型HPLC进行纯化，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)酯(38.1mg，0.0761mmol，44.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝501.2,Rt＝1.941min，方法M。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.81(s,1H),6.92(d,J＝6.0Hz,1H),6.35(s,2H),6.12(s,1H),5.21(tt,J＝6.7,4.8Hz,1H),4.24(dd,J＝9.6,6.7Hz,2H),3.94(dd,J＝9.7,4.7Hz,2H),3.38(s,2H),3.08(s,3H),2.98(t,J＝6.5Hz,2H),1.98(d,J＝1.4Hz,5H)。
实施例191
(±)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物441ab)
Figure BDA0003085169390004562
步骤1：(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004571
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1.19g，2.26mmol)、DIEA(5mL，2.26mmol)和(±)-反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(578mg，5.66mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液加入含三光气(537mg，1.81mmol)的二氯甲烷(10mL)。在室温下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(22/78)洗脱，得到(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(900mg，1.377mmol，60.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝654。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390004572
在25℃下，将(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(900mg，1.38mmol)和TFA(2mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。通过反相色谱法(乙腈0-50/0.1％FA水溶液)纯化残余物，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯甲酸盐(271mg，0.543mmol，39.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 2.307，方法＝M。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.0Hz,1H),6.22(s,2H),5.70(s,1H),4.85(s,1H),4.28(s,2H),3.97(q,J＝7.4,6.8Hz,2H),3.75(d,J＝10.6Hz,2H),3.36(s,2H),3.33(dd,J＝8.2,4.9Hz,1H),1.92(s,3H),1.05(s,3H)。
通过手性SFC(Chiralpak IC，150×30mm×5μM；等度45％甲醇+0.1％NH4OH)进一步纯化外消旋混合物，得到两种单一对映异构体：
对映异构体1：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物441a)(86mg)：RT＝1.204min(CHIRALPAK IC；等度50％MeOH+0.1％NH4OH，2.5min运行时间)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT＝3.57min，方法N。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.34(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.70(s,1H),4.85(dt,J＝4.6,2.1Hz,1H),4.34–4.26(m,2H),4.03–3.91(m,2H),3.75(m,1H),2.34-2.32(m,1H),1.93(s,3H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)。
对映异构体2：(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物441b)(80mg)：RT＝1.777min(CHIRALPAK IC；等度50％MeOH+0.1％NH4OH，2.5min运行时间)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT＝3.56min，方法N。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.85(dt,J＝4.6,2.1Hz,1H),4.34–4.26(m,2H),4.03–3.91(m,2H),3.75(m,1H),3.37-3.34(m,3H),2.36-2.31(m,1H),1.93(s,3H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例192
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(顺式)-3-氰基环戊基]脲(化合物726)
Figure BDA0003085169390004591
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(顺式)-3-氰基环戊基]氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004592
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)和DMAP(37.8mg，0.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入(顺式)-3-氨基环戊烷甲腈(135.8mg，0.93mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在60℃下将所得溶液搅拌4小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(顺式)-3-氰基环戊基]氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(175mg,0.26mmol，85％产率)，呈浅黄色固体状。LC/MS(ESI)[M+H]+＝662.3。
步骤2：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(顺式)-3-氰基环戊基]脲
Figure BDA0003085169390004601
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(顺式)-3-氰基环戊基]氨基甲酰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(170.0mg，0.26mmol)和TFA(1.0mL,0.26mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm 5μm；水(10mmol/LNH4HCO3):ACN＝17％B至39％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(顺式)-3-氰基环戊基]脲(65mg，0.14mmol，55％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝462.2；RT 1.839min；方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.87(s,1H),7.86(s,1H),7.35-7.20(m,2H),6.75(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.32-4.20(m,2H),4.10-4.01(m,1H),3.50-3.30(m,2H),3.10-3.00(m,1H),2.50-2.26(m,2H),2.10-1.85(m,5H),1.70-1.50(m,2H)。
实施例193
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-丙酰基氮杂环丁-3-基酯(化合物492)
Figure BDA0003085169390004611
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004612
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)和1-boc-3-羟基氮杂环丁烷(500mg，2.89mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入DIEA(200mg，1.55mmol)。然后加入三光气(250mg，0.84mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应溶液，并且通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.304mmol，53.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝723。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390004621
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(220mg，0.30mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入HCl/二噁烷(2mL，3mol/L)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时，然后在真空下浓缩。粗产物没有纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝423。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-丙酰基氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390004622
在室温下，向N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(50mg，0.12mmol)和丙酸酐(20mg，0.15mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TEA(20mg，0.20mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱19*250mm,10μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH；流速：25mL/min；梯度：25％B至37％B，10min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-丙酰基氮杂环丁-3-基)酯(22.6mg，0.0472mmol，39.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝479.2,RT 1.765min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.36(s,1H),7.96(s,1H),7.57(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.45-5.39(m,1H),5.20(td,J＝6.8,3.5Hz,1H),4.52-4.43(m,1H),4.20(dd,J＝10.7,6.8Hz,1H),4.11(dd,J＝9.8,4.0Hz,1H),3.81(dd,J＝10.7,4.0Hz,1H),3.35(t,J＝6.5Hz,2H),2.85(t,J＝6.5Hz,2H),2.09(qd,J＝7.4,1.6Hz,2H),1.92(s,2H),1.86(d,J＝1.5Hz,3H),0.96(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例194
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-1-甲基-氮杂环丁-3-基)甲酯(化合物450)
Figure BDA0003085169390004631
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-氮杂环丁-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004632
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.29mmol)、3-氟-3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(116mg，0.57mmol)和DIEA(108mg，0.84mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(120mg，0.40mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用甲醇/二氯甲烷(15％)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-氮杂环丁-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(85mg，0.101mmol，35.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝757.0。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代氮杂环丁-3-基)甲酯
Figure BDA0003085169390004641
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-氮杂环丁-3-基)甲氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.19mmol)在二氯甲烷(16mL)和TFA(4mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代氮杂环丁-3-基)甲酯(85mg，0.149mmol，78.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝456.0。
步骤3：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-1-甲基-氮杂环丁-3-基)甲酯
Figure BDA0003085169390004651
在室温下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟代氮杂环丁-3-基)甲酯(85mg，0.17mmol)在甲醇(10mL)和甲醛(40％，15mg，0.47mmol)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH4(18mg，0.46mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-1-甲基-氮杂环丁-3-基)甲酯(7.8mg，0.015mmol，8.9％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471.2,RT 2.204min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.48(s,1H),4.42(s,1H),4.29(d,J＝4.8Hz,2H),3.51(dd,J＝12.5,8.8Hz,2H),3.36(s,2H),3.11(dd,J＝21.6,8.4Hz,2H),2.32(s,3H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例195
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基环丁酯(化合物576a)
Figure BDA0003085169390004652
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1r,3r)-3-甲氧基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004661
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氯-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.37mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.32mL，1.84mmol)和反式-3-甲氧基环丁醇(76.0mg，0.74mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(76.0mg，0.26mmol)。在0℃下将混合物搅拌30分钟。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(50/1)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1r,3r)-3-甲氧基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(200mg，0.298mmol，80.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝652.3。
步骤2：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基环丁酯
Figure BDA0003085169390004662
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.30mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液中加入三氟乙酸(6mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150m，5μm，流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：11％B至32％B，10min)纯化残余物，得到(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基环丁酯(23.8mg,0.053mmol，18％产率)，呈白色固体状。任意指定立体化学结构。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 2.031min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),8.04(s,1H),7.38(s,1H),6.93(d,J＝6.4Hz,1H),4.79-4.72(m,1H),4.41(t,J＝4.4Hz,2H),3.71-3.65(m,1H),3.51-3.48(m,2H),3.15(s,3H),2.87-2.81(m,2H),2.11-2.02(m,2H),2.02(s,3H)。
实施例196
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二氟甲基)环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二氟甲基)环丁酯(化合物577a和化合物577b)
Figure BDA0003085169390004671
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(二氟甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004681
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.72mmol)和3-(二氟甲基)环丁醇(180mg，1.47mmol)在二氯甲烷(20mL)和DIEA(300mg，2.33mmol)中的溶液中加入三光气(300mg，1.01mmol)。在0℃下将反应物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(7％)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(二氟甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.297mmol，41.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝674.0。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二氟甲基)环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二氟甲基)环丁酯
Figure BDA0003085169390004691
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(二氟甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.18mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：20％B至43％B，10min)纯化残余物。手性HPLC拆分得到两种对映异构体。任意指定立体化学结构。
对映异构体1：(化合物577a)(40mg，0.0827mmol，46.4％产率)。RT 10.917min(CHIRALPAK IA，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(10mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH；流速：18mL/min；梯度：50B至50B，15min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝474.2,RT 1.321min，方法J。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.34(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,3H),5.67(d,J＝2.8Hz,1H),5.05(p,J＝7.2Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.36(t,J＝4.4Hz,2H),2.73(dtt,J＝11.9,7.5,4.0Hz,1H),2.42(td,J＝7.7,3.6Hz,2H),2.36-2.25(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2：(化合物577b)(8.6mg，0.0181mmol，10.2％产率)。RT14.166 min(CHIRALPAK IA，2*25cm,5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(10mM NH3-MEOH)，流动相B：EtOH；流速：18mL/min；梯度：50B至50B，15min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝474.2,RT 1.321min，方法J；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.34(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,3H),5.67(d,J＝2.8Hz,1H),5.05(p,J＝7.2Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.36(t,J＝4.4Hz,2H),2.73(dtt,J＝11.9,7.5,4.0Hz,1H),2.42(td,J＝7.7,3.6Hz,2H),2.36-2.25(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例197
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(6R)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基]酯和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(6S)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基]酯(化合物578a和化合物578b)
Figure BDA0003085169390004701
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004702
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(154.8mg，0.24mmol)和DMAP(29.3mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中加入6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-醇(90.0mg，0.72mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液。在90℃下将反应物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(123mg，0.18mmol，76％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝677.3
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(6R)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基]酯和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(6S)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基]酯
Figure BDA0003085169390004711
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]三唑-6-基氧羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120.0mg，0.18mmol)和TFA(2.5mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌30分钟。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；水(0.1％FA):ACN＝5％B至31％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物578a，11.2mg，0.024mmol，13％产率)。RT 2.251min(CHIRALPAK ID-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2,RT 1.873min，方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),9.34(s,1H),8.00(s,2H),7.34(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.92(t,J＝6.3Hz,1H),5.68(s,1H),4.60-4.51(m,1H),4.35-4.20(m,3H),3.44-3.30(m,4H),1.93(s,3H)。
对映异构体2(化合物578b，10.9mg，0.023mmol，13％产率)。RT 3.276min(CHIRALPAK ID-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2,RT 1.873min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),9.34(s,1H),8.00(s,2H),7.34(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.92(t,J＝6.3Hz,1H),5.68(s,1H),4.60-4.51(m,1H),4.35-4.20(m,3H),3.44-3.30(m,4H),1.93(s,3H)。
实施例198
(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,1-二氧负离子基四氢-2H-噻喃-4-基酯(化合物579)
Figure BDA0003085169390004721
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1,1-二氧负离子基四氢-2H-噻喃-4-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004731
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-5-鎓-1-甲酸叔丁酯(100.0mg，0.19mmol)、四氢-2H-噻喃-4-醇1,1-二氧化物(57.26mg，0.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(122.95mg，0.95mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入三光气(56.57mg，0.19mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物。用二氯甲烷萃取反应混合物。合并有机层，在真空下浓缩，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1,1-二氧代硫杂环己烷-4-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.143mmol，75％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝700.3。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1,1-二氧负离子基四氢-2H-噻喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390004732
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1,1-二氧代硫杂环己烷-4-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(90.0mg，0.13mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1.0mL)。在室温下将反应混合物搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。将残余物溶解在二氯甲烷中，并用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至17％B，10min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1,1-二氧代硫杂环己烷-4-基)酯(32.1mg，0.064mmol，50％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝500.2,RT2.194min；方法M。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),9.38(s,1H),7.98(s,1H),7.64(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.26(s,2H),5.62(s,1H),4.99-5.02(m,1H),3.28-3.16(m,6H),2.89(t,J＝6.4Hz,2H),2.21(q,J＝5.5,4.8Hz,4H),1.98-1.87(m,5H)
实施例199
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯(化合物580)
Figure BDA0003085169390004741
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004751
在0℃下，向2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(920mg，3.81mmol)和DIEA(490mg，3.8mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入三光气(300mg，1.01mmol)。在0℃下将反应物搅拌30分钟。然后加入含7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1000mg，1.9mmol)和DIEA(490mg，3.8mmol)的二氯甲烷(10mL)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，0.757mmol，39.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝793。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯
Figure BDA0003085169390004761
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7-叔丁氧基羰基-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，0.76mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入TFA(4mL)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5B至43B，7min)纯化残余物，得到(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯。将产物溶解在甲醇(50mL)中，用HCl的1,4-二噁烷溶液(0.04M)处理，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸7-氮杂螺[3.5]壬-2-基酯盐酸盐(270.5mg，0.5113mmol，67.6％产率)，呈红色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝493.3,RT0.635min；方法L；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),9.41(s,1H),8.87(s,2H),7.97(s,1H),7.52(s,1H),6.90(d,J＝6.0Hz,1H),5.80(bs,2H),4.99(p,J＝7.1Hz,1H),4.47(t,J＝4.5Hz,2H),3.47(t,J＝4.4Hz,2H),2.99(s,2H),2.94(s,2H),2.43-2.34(m,2H),2.01(d,J＝1.6Hz,3H),1.96-1.86(m,2H),1.81-1.73(m,4H)。
实施例200
(R)-(8-氨基-7-氟-6-(7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物581a)
Figure BDA0003085169390004771
步骤1：2-(((5-溴-2-碘-4-甲基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯
Figure BDA0003085169390004772
向N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(8.0g，19.37mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中的溶液中加入NaH(1.55g，38.75mmol，60％纯度)。在0℃下将混合物搅拌30分钟。加入2-(溴甲基)丙烯酸乙酯(6.0g，31.08mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌2小时。用乙酸乙酯稀释所得溶液，然后用水洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过反相快速色谱法，利用水(0.01％NH4HCO3)/ACN(50/50)纯化残余物，得到2-[[(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-叔丁氧基羰基-氨基]甲基]丙-2-烯酸乙酯(3.3g，6.284mmol，32.4％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝525。
步骤2：7-溴-8-甲基-1,5-萘啶-1,3(2H)-二甲酸1-(叔丁基)酯3-乙酯
Figure BDA0003085169390004773
向2-[[(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-叔丁氧基羰基-氨基]甲基]丙-2-烯酸乙酯(3.3g，6.28mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入乙酸钯(2.0g，8.93mmol)、TBAB(2.0g，6.21mmol)和碳酸氢钠(1.6g，19.05mmol)。在90℃下将混合物搅拌4小时。浓缩之后，通过快速色谱法在Al2O3胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(90/10)洗脱，得到7-溴-8-甲基-1,5-萘啶-1,3(2H)-二甲酸1-(叔丁基)酯3-乙酯(800mg，2mmol，32％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝397。
步骤3：7-溴-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004781
向7-溴-8-甲基-1,5-萘啶-1,3(2H)-二甲酸1-(叔丁基)酯3-乙酯(800mg，2.02mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中加入NaBH4(230mg，9.58mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到7-溴-3-(羟基甲基)-8-甲基-四氢化萘-1-甲酸叔丁酯(539mg，1.517mmol，75.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝357。
步骤4：(5-(叔丁氧基羰基)-7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)硼酸
Figure BDA0003085169390004782
向7-溴-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(530mg，1.48mmol)和B2Pin2(1890mg，7.47mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(220mg，0.30mmol)和乙酸钾(440mg，4.49mmol)。在90℃下将混合物搅拌3小时。浓缩之后，通过反相色谱法纯化残余物，用水(0.01％NH4HCO3)/ACN(80/20)洗脱，得到(5-(叔丁氧基羰基)-7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)硼酸(400mg，1.242mmol，83.7％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝323。
步骤5：7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004791
向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(480.0mg,1.49mmol)和(5-(叔丁氧基羰基)-7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)硼酸(480mg，1.49mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(220mg，0.30mmol)、碳酸钾(615mg，4.46mmol)。在90℃下将混合物搅拌3小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(400mg，0.848mmol，57％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝473。
步骤6：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-8-甲基-8l5-异喹啉-6-基)-3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧)甲基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004792
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.40mmol)和叔丁基二甲基氯代硅烷(76mg，0.50mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中加入咪唑(114mg，1.67mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.255mmol，63.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝602。
步骤7：3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧)甲基)-7-(8-氯-7-氟-3-(((((R)-四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004801
在0℃下，向8-氨基-7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.17mmol)和3-羟基四氢呋喃(80mg，0.91mmol)在二氯甲烷(6mL)中的混合物中加入三光气(40mg，0.13mmol)和DIEA(120mg，0.93mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到8-氨基-3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-7-[8-氯-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.142mmol，83.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝701。
步骤8：(6-(7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧)甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3,8-二基)二氨基甲酸叔丁酯((R)-四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390004811
向3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-7-[8-氯-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.17mmol)和氨基甲酸叔丁酯(599mg，5.11mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中加入Pd2(dba)3(48mg，0.050mmol)、碳酸铯(168mg，0.52mmol)和BrettPhos(48mg，0.090mmol)。在70℃下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(95mg，0.1215mmol，71％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝682。
步骤9：(7-氟-6-(7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3,8-二基)二氨基甲酸叔丁酯((R)-四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390004812
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]-8-甲基-3,4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸叔丁酯(90mg，0.12mmol)在四氢呋喃(5mL)中的溶液中加入TBAF.3H2O(108mg，0.34mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(四氢呋喃-3-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-喹啉-1-甲酸叔丁酯(50mg,0.075mmol，65.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝568。
步骤10：(R)-(8-氨基-7-氟-6-(7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390004821
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-(羟基甲基)-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(30mg，0.040mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep Phenyl OBD柱5μm，19*250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7％B至20％B，12min)纯化残余物，得到(R)-(8-氨基-7-氟-6-(7-(羟基甲基)-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(2.7mg，0.0053mmol，11.7％产率)，呈黄色固体状。非对映异构体混合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝478,RT 1.382min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.59(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.46(s,1H),5.28(tt,J＝4.4,2.1Hz,1H),4.69(s,1H),3.92-3.67(m,4H),3.41-3.52(m,3H),2.96(t,J＝10.4Hz,1H),2.86(dd,J＝16.7,5.0Hz,1H),2.66-2.52(m,1H),2.27-2.11(m,1H),2.02(s,2H),1.88(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例201
(1S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环戊酯和(1R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环戊酯(化合物582a和化合物582b3)
Figure BDA0003085169390004831
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,3R)-3-羟基环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004832
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.23mmol)和DMAP(28.5mg，0.23mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中加入(±)-顺式-环戊烷-1,3-二醇(48.0mg，0.47mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液。在90℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-羟基环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg,0.23mmol，98％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝654.3
步骤2：(1S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环戊酯和(1R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环戊酯
Figure BDA0003085169390004841
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,3R)-3-羟基环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(210.0mg，0.32mmol)和TFA(2.5mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌30分钟。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝14％B至35％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物582a，13.1mg，0.029mmol，18％产率)。RT 1.855min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.980min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.33(s,1H),7.99(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.68(s,1H),5.13-4.94(m,1H),4.63(d,J＝4.5Hz,1H),4.35-4.25(m,2H),4.14-4.00(m,1H),3.41-3.37(m,2H),2.37-2.21(m,1H),1.92(s,3H),1.87-1.69(m,3H),1.65-1.47(m,2H)。
对映异构体2(化合物582b，12.2mg，0.027mmol，17％产率)：保留时间：3.647min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.973min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.33(s,1H),7.99(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.68(s,1H),5.13-4.94(m,1H),4.63(d,J＝4.5Hz,1H),4.35-4.25(m,2H),4.14-4.00(m,1H),3.41-3.37(m,2H),2.37-2.21(m,1H),1.92(s,3H),1.87-1.69(m,3H),1.65-1.47(m,2H)。
实施例202
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1s,3s)-3-氟环丁基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1r,3r)-3-氟环丁基)脲(化合物748a和化合物748b)
Figure BDA0003085169390004851
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004861
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.72mmol)、DMAP(88mg，0.72mmol)和吡啶(5mL)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入氯甲酸苯酯(566mg，3.61mmol)。在室温下将所得溶液搅拌1小时。然后加入3-氟代环丁胺盐酸盐(363mg，2.89mmol)。在50℃下将混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10％)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.306mmol，42.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝641.0。
步骤2：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1s,3s)-3-氟环丁基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1r,3r)-3-氟环丁基)脲
Figure BDA0003085169390004862
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟环丁基)氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.47mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过SFC纯化残余物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1：(化合物748a)(10mg，0.0227mmol，4.8％产率)，呈黄色固体状。RT6.70min(柱：Ultimate XB-NH2，21.2*250mm；5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH:ACN＝2:8(0.1％NH3.H2O)；流速：50mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝441.2,RT 2.370min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.86(s,1H),7.84(s,1H),7.36(d,J＝6.7Hz,1H),7.34(s,1H),6.75(d,J＝6.2Hz,1H),6.14(s,2H),5.65(s,1H),4.94-4.76(m,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.78-3.72(m,1H),3.38-3.36(m,2H),2.80-2.72(m,2H),2.13-2.09(m,2H),1.93(d,J＝1.7Hz,3H)。
异构体2：(化合物748b)(27mg，0.0613mmol，13.1％产率)，呈黄色固体状。RT 7.57(柱：Ultimate XB-NH2，21.2*250mm；5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH:ACN＝2:8(0.1％NH3.H2O)；流速：50mL/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝441.2,RT 2.370min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.90(s,1H),7.86(s,1H),7.38(d,J＝6.7Hz,1H),7.34(s,1H),6.76(d,J＝6.2Hz,1H),6.16(s,1H),5.70(s,1H),5.33-5.18(m,1H),4.30(t,J＝4.4Hz,3H),3.38(d,J＝4.4Hz,3H),2.55(s,2H),2.42-2.23(m,2H),1.93(d,J＝1.7Hz,3H)。
实施例203
(3S,4S)-8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；和(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯(化合物583a、化合物583b、化合物583c和化合物583d)
Figure BDA0003085169390004881
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基四氢吡喃-4-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004882
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，0.95mmol)、DIEA(614.8mg，4.76mmol)和3-甲氧基四氢吡喃-4-醇(251.5mg，1.9mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入三光气(282.4mg，0.95mmol)。在0℃下将混合物搅拌1.5小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基四氢吡喃-4-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.55mmol，58.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝684。
步骤2：(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；
(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯；
和(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基酯
Figure BDA0003085169390004891
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基四氢吡喃-4-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380.0mg，0.56mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物溶解在二氯甲烷中，并用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC，用以下条件(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7％B至37％B，7min)纯化残余物，得到产物的异构体混合物。通过手性HPLC进一步分离外消旋产物，得到四种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1：(化合物583a)(23.7mg，0.05mmol，8.8％产率)。RT 1.686min(柱：CHIRALPAK ID-3 0.46*5cm；3μm，流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝484.2,RT 2.156min，方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.36(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(d,J＝2.6Hz,1H),5.14-5.18(m,1H),4.34-4.25(m,2H),3.70-3.75(m,2H),3.61-3.53(m,3H),3.37(m,5H),1.93(d,J＝1.6Hz,4H),1.83-1.70(m,1H)。
异构体2：(化合物583b)(2.5mg，0.005mmol，0.9％产率)。RT 2.489min(柱：CHIRALPAK ID-3 0.46*5cm；3μm，流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝484.2,RT 2.092min；方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(d,J＝2.6Hz,1H),4.80(s,1H),4.34-4.25(m,2H),3.98(dd,J＝9.6,6.1Hz,1H),3.76-3.80(m,1H),3.51-3.34(m,3H),3.38(s,3H),3.31-3.22(m,2H),2.11-1.99(m,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.60(m,1H)。
异构体3：(化合物583c)(5.1mg，0.01mmol，1.9％产率)。RT 2.109min(柱：CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝484.2,RT 2.092min，方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(d,J＝2.6Hz,1H),4.80(s,1H),4.34-4.25(m,2H),3.98(dd,J＝9.6,6.1Hz,1H),3.76-3.80(m,1H),3.51-3.34(m,3H),3.38(s,3H),3.31-3.22(m,2H),2.11-1.99(m,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.60(m,1H)。
异构体4：(化合物583d)(47.8mg，0.09mmol，17.8％产率)。RT 3.113min(柱：CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝60:40,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝484.2,RT 2.156min，方法L。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),9.36(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(d,J＝2.6Hz,1H),5.14-5.18(m,1H),4.34-4.25(m,2H),3.70-3.75(m,2H),3.61-3.53(m,3H),3.37(m,5H),1.93(d,J＝1.6Hz,4H),1.83-1.70(m,1H)。
实施例204
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-吗啉代环丁酯(化合物550b)
Figure BDA0003085169390004911
步骤1：4-((1s,3s)-3-(苯甲氧基)环丁基)吗啉
Figure BDA0003085169390004912
在22℃下，将3-(苯甲氧基)环丁-1-酮(1.0g，5.68mmol)和吗啉(988.8mg，11.35mmol)在甲醇(18mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入NaBH4(644.06mg，17.03mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到4-(3-苯甲氧基环丁基)吗啉(920mg，3.7197mmol，65.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝248.1。
步骤2：(1s,3s)-3-吗啉代环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390004921
在室温下，在氢气(1大气压)下将4-(3-苯甲氧基环丁基)吗啉(740.0mg，2.99mmol)和Pd/C(10％，150mg)在甲醇(15mL)中的混合物搅拌24小时。过滤反应混合物并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到3-吗啉代环丁醇(100mg，0.64mmol，21.3％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝158.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.92(d,J＝6.9Hz,1H),3.76-3.80(m,1H),3.54(t,J＝4.7Hz,4H),2.30(qd,J＝7.8,4.7Hz,2H),2.19(q,J＝6.3,5.5Hz,4H),2.18-2.07(m,1H),1.58(qd,J＝8.7,2.3Hz,2H)。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-吗啉代环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004922
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120.0mg，0.23mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.12mL，0.69mmol)和3-吗啉代环丁醇(72.0mg，0.4600mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中加入三光气(48.0mg，0.1600mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水稀释反应物。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-吗啉代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.21mmol，92.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝709.3。
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-吗啉基环丁酯
Figure BDA0003085169390004931
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-吗啉代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.21mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(5mL)。在室温下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。用乙腈(2mL)稀释残余物。用NaHCO3将反应混合物调节至pH 8。过滤之后，收集固体，得到粗产物。通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-吗啉代环丁基)酯(62.6mg，0.1221mmol，57.7％产率)，呈红色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.3,RT 1.434min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.87(s,1H),10.35(s,1H),9.43(s,1H),7.99(s,1H),7.56(s,1H),6.96(d,J＝6.0Hz,1H),4.86-4.77(m,1H),4.50(s,2H),3.99-3.80(m,4H),3.49-3.31(m,5H),2.98-2.91(m,2H),2.75-2.72(m,2H),2.60-2.50(m,1H),2.00(s,3H)。
实施例205
(1s,3R)-(8-氨基-7-氟-6-((6aR,7aS)-4-甲基-6,6a,7,7a-四氢-5h-环丙并[c][1,5]萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯和(1s,3S)-(8-氨基-7-氟-6-((6aS,7aR)-4-甲基-6,6a,7,7a-四氢-5H-环丙并[c][1,5]萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯(化合物584a和化合物584b)
Figure BDA0003085169390004941
步骤1：N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004942
在室温下，在氮气下向N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(5.0g，12.11mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.8g，18.18mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(5mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(0.85g，1.16mmol)和K2CO3(5.0g，36.23mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(3.5g，11.175mmol，92.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝313。
步骤2：N-烯丙基-N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004951
在室温下，在氮气下将N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(1000mg，3.19mmol)和NaHMDS(4mL，8mmol，2mol/L THF溶液)在四氢呋喃(20mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入NaI(1198mg，7.99mmol)和烯丙基溴(966mg,7.98mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:2)洗脱，得到N-烯丙基-N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(670mg，1.897mmol，59.4％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝353。
步骤3：7-溴-8-甲基-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004952
在40℃下，在氮气下将N-烯丙基-N-(5-溴-4-甲基-2-乙烯基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，11.32mmol)和第2代格拉布催化剂(2.0g，2.36mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液搅拌2小时。用水洗涤反应溶液。然后在真空下浓缩有机相。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到7-溴-8-甲基-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(2.68g，8.241mmol，72.8％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝325。
步骤4：5-溴-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004953
在室温下，将三甲基碘化亚砜(8.1g，36.81mmol)和t-BuOK(3.3g，29.46mmol)在DMSO(100mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入7-溴-8-甲基-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(2.4g，7.38mmol)，并且在50℃下将混合物搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用碳酸钠(水溶液)和盐水洗涤。干燥有机相，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到5-溴-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1500mg，4.422mmol，59.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝339。
步骤5：4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004961
在60℃下，将5-溴-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1500mg，4.42mmol)、双(频哪醇)二硼(5600mg，22.05mmol)、Pd(dppf)Cl2(323mg，0.44mmol)和KOAc(1300mg，13.27mmol)在1,4-二噁烷(60mL)和水(6mL)中的溶液搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/10)洗脱，得到4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1500mg，3.88mmol，87.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝387。
步骤6：5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004962
在60℃下，将4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1.5g，3.90mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.35g，4.2mmol)、Pd(dppf)Cl2(300mg，0.30mmol)和K2CO3(1650mg，1.20mmol)在1,4-二噁烷(150mL)和水(3mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1200mg，2.637mmol，67.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝455。
步骤7：5-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004971
在室温下，向5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(1.0g，2.2mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中加入酞酸酐(700mg，4.73mmol)。在100℃下将所得溶液搅拌16小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/3)洗脱，得到5-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(700mg，1.197mmol，54.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝585。
步骤8：5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004981
在室温下，在氮气下向5-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(640mg，1.09mmol)和NH2Boc(2.6g，22.22mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中加入Brettphos Pd G3(200mg，0.22mmol)和K2CO3(450mg，3.26mmol)。在90℃下将所得混合物搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。粗产物没有纯化就用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝666。
步骤9：5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004982
在室温下，在氮气下向5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(600mg，0.90mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入N2H4.H2O(600mg，9.6mmol)。在40℃下将所得溶液搅拌2小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(400mg，0.7468mmol，82.9％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝536。
步骤10：5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390004991
在室温下，向5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(300mg，0.56mmol)和3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁醇(250mg，1.24mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入DIEA(730mg，5.66mmol)。然后加入三光气(140mg，0.47mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(220mg，0.288mmol，51.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝764。
步骤11：(1s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-((6ar,7as)-4-甲基-6,6a,7,7a-四氢-5H-环丙并[c][1,5]萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-((6as,7ar)-4-甲基-6,6a,7,7a-四氢-5H-环丙并[c][1,5]萘啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯
Figure BDA0003085169390005001
在室温下，向5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-1,1a,2,7b-四氢环丙并[c][1,5]萘啶-3-甲酸叔丁酯(220mg，0.29mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入TFA(3mL)。在真空下浓缩反应物，并且通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化，得到立体异构体的混合物。通过手性制备型HPLC(柱：CHIRALPAK IF，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE(10mM NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：13mL/min；梯度：15B至15B，38min)分离混合物，得到两种对映异构体。环丁基上的相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物584a)(27.1mg，0.062mmol，22.8％产率)。RT3.018min(CHIRALPAK IF-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝85:15，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝450.2,RT 1.057min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.59(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.20(d,J＝6.6Hz,1H),5.14(s,1H),4.53(p,J＝7.4Hz,1H),3.81(p,J＝7.1Hz,1H),3.46-3.36(m,1H),3.25-3.14(m,1H),2.78-2.63(m,2H),2.09(td,J＝8.5,4.3Hz,1H),2.01-1.85(m,6H),1.30-1.28(m,1H),0.95(dt,J＝8.4,4.2Hz,1H)。
对映异构体2(化合物584b)(25.9mg，0.059mmol，21.8％产率)。RT4.381min(CHIRALPAK IF-3，46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝85:15，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝450.2,RT 1.057min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.59(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.20(d,J＝6.6Hz,1H),5.14(s,1H),4.53(p,J＝7.4Hz,1H),3.81(p,J＝7.1Hz,1H),3.46-3.36(m,1H),3.25-3.14(m,1H),2.78-2.63(m,2H),2.09(td,J＝8.5,4.3Hz,1H),2.01-1.85(m,6H),1.30-1.28(m,1H),0.95(dt,J＝8.4,4.2Hz,1H)。
实施例206
(1s,3s)-(8-氨基-6-((S)-4,7-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-6-((R)-4,7-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯(化合物560a和化合物560b)
Figure BDA0003085169390005011
步骤1：N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(3-溴-2-甲基-丙基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005012
在0℃下，在氮气下搅拌N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(4.40g，10.65mmol)、3-溴-2-甲基-1-丙醇(3.20g，20.91mmol)和PPh3(5.60mg，21.37mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液。然后逐滴加入DIAD(4.30g，21.29mmol)。在25℃下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(3-溴-2-甲基-丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.20g，9.488mmol，89.1％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝547。
步骤2：7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005021
在室温下搅拌锌(2.86g，43.74mmol)、氯化镍(1.9g，14.62mmol)和丙烯酸甲酯(3.77g，43.84mmol)在吡啶(40mL)中的溶液，然后加热至55℃保持20分钟。然后逐滴加入N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(3-溴-2-甲基-丙基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，7.3mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(160mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物。过滤之后，收集滤液并且用水稀释。用乙酸乙酯萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，得到7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(1g，2.784mmol，38.1％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝341。
步骤3：3,8-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005022
在0℃下，将7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.94mmol)、双(频哪醇)二硼(7.47g，29.42mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(0.48g，0.59mmol)和乙酸钾(0.86g，8.78mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物搅拌16小时。过滤之后，收集滤液并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-50/0.1％NH4OH水溶液)纯化所得残余物，得到3,8-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(0.72g，1.762mmol，59.9％产率)，呈黑色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝341。
步骤4：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005031
在60℃下，将3,8-二甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(700.0mg,1.8mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(698mg，2.16mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(372mg，0.46mmol)和碳酸钾(746.0mg,5.41mmol)在1,4-二噁烷(30mL)和水(3mL)中的混合物搅拌12小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并且经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(680mg，1.369mmol，75.9％产率)，呈棕色固体状。
步骤5：7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005032
在100℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(660mg，1.44mmol)和酞酸酐(427mg，2.89mmol)在甲苯(40mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(60:40)洗脱，得到7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(450mg，0.728mmol，50.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝587。
步骤6：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005041
在90℃下，将7-[8-氯-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(450mg，0.77mmol)、氨基甲酸叔丁酯(1.79g，15.3mmol)、Brettphpos Pd G3(132mg，0.15mmol)和碳酸钾(198mg，1.43mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液，得到粗产物，呈棕色固体状。粗产物没有纯化就将直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝668。LCMS(ESI)[M+H]+＝668。
步骤7：7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005042
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(1,3-二氧代异喹啉-2-基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，粗产物)和水合肼(299mg，5.98mmol)在甲醇(26mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油(60/40)洗脱，得到7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(240mg，0.429mmol，71.6％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝538。
步骤8：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]-羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯：
Figure BDA0003085169390005051
在0℃下搅拌7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(240mg，0.45mmol)、顺式-3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁醇(180mg，0.89mmol)和N,N-二异丙基乙胺(575mg，4.46mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液。然后逐滴加入三光气(132mg，0.44mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌2小时。用二氯甲烷稀释所得混合物，并且用水洗涤。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(19:1)洗脱，得到顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.372mmol，83.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝766。
步骤9：(1s,3s)-(8-氨基-6-((S)-4,7-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-6-((R)-4,7-二甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基环丁酯
Figure BDA0003085169390005061
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-3,8-二甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.34mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入TFA(20mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(柱：X-Bridge Prep Phenyl OBD柱5μm，19*250mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：5％B至33％B，8min)纯化粗产物，得到立体异构体的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种异构体。环丁基上的相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体1(化合物560a)(20.4mg，0.044mmol，13％产率)。RT 1.984min(CHIRALPAKIF-3，2*25cm,5μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，6min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.3,RT 2.263min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.59(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.50(s,1H),5.21(d,J＝6.6Hz,1H),4.53(p,J＝7.3Hz,1H),3.81(p,J＝7.1Hz,1H),2.89(d,J＝11.5Hz,2H),2.76–2.67(m,2H),2.59-2.52(m,2H),2.00-1.86(m,6H),1.06(d,J＝6.6Hz,3H)。
异构体2(化合物560b)(20.9mg，0.0457mmol，13.5％产率)。RT 3.275min(CHIRALPAK IF-3，2*25cm，5μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，6min，1.0mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.3,RT 2.263min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.59(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.22(s,2H),5.50(s,1H),5.21(d,J＝6.6Hz,1H),4.53(p,J＝7.3Hz,1H),3.81(p,J＝7.1Hz,1H),2.89(d,J＝11.5Hz,2H),2.76–2.67(m,2H),2.59-2.52(m,2H),2.00-1.86(m,6H),1.06(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例207
(R)-(8-氨基-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物562a)
Figure BDA0003085169390005071
步骤1：3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶
Figure BDA0003085169390005072
向乙酸钠(11.6mL，215.05mmol)和2-甲氧基-4-甲基吡啶(8.83g，71.69mmol)在乙酸(70mL)中的悬浮液中加入溴(34.4g，215.06mmol)。在80℃下将所得溶液加热12小时。将反应物冷却至室温，并且在减压下浓缩。然后用10％氢氧化钠溶液和饱和亚硫酸钠溶液处理残余物。用乙醚萃取所得混合物。用无水硫酸镁干燥所合并的有机层，过滤并浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基-吡啶(18.54g，65.64mmol，91.6％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝280.0。
步骤2：1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇
Figure BDA0003085169390005073
在氮气下，将3,5-二溴-2-甲氧基-4-甲基-吡啶(18.54g，65.64mmol)在乙醚(250mL)中的溶液冷却至-65℃。在将温度维持在-65℃的同时，边搅拌边逐滴加入正丁基锂(5.06g，79.12mmol)。将反应物冷却至-70℃，并且在氮气下搅拌1小时。在-65℃下逐滴加入丙烯醛(4.43g，79.12mmol)。然后将反应物升温至室温过夜。用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥所合并的萃取物，并过滤。浓缩滤液，得到1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)丙-2-烯-1-醇(16.84g，65.48mmol)，呈澄清油状，不另外纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝258.0。
步骤3：1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)丙-2-烯-1-酮
Figure BDA0003085169390005081
在室温下，向1-(3-溴-6-甲氧基-2-甲基-苯基)丙-2-烯-1-醇(16.84g，65.48mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中加入戴斯-马丁过碘烷(41.7g，98.21mmol)。在室温下将反应物搅拌过夜，然后通过加入饱和碳酸氢钠溶液将其淬灭。收集有机层。用二氯甲烷萃取水层。用硫酸镁干燥所合并的有机层，过滤并浓缩，得到黄色油，通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用PE/EtOAc(8/1)洗脱，得到1-(3-溴-6-甲氧基-2-甲基-苯基)丙-2-烯-1-酮(4.81g，18.78mmol，28.6％产率，两个步骤)，呈澄清油状。LC/MS(ESI):(M+H)+＝256.0。
步骤4：6-溴-5-甲基-2,3-二氢-4H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-酮
Figure BDA0003085169390005082
向1-(5-溴-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)丙-2-烯-1-酮(4.81g，18.78mmol)在乙酸(80mL)中的溶液中加入氢溴酸(9.5g，56.35mmol)。将反应物加热至100℃保持45分钟，然后冷却至室温并用乙醚萃取。用饱和碳酸氢钠溶液洗涤所合并的有机层。收集有机层，用硫酸镁干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到6-溴-5-甲基-2,3-二氢吡喃并[2,3-b]吡啶-4-酮(1803.9mg，7.45mmol，39.7％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝242.1。
步骤5：6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-醇
Figure BDA0003085169390005091
向6-溴-5-甲基-2,3-二氢吡喃并[2,3-b]吡啶-4-酮(1.81mg，7.45mmol)在甲醇(50ml)中的溶液中加入硼氢化钠(657mg，17.35mmol)。在室温下将混合物搅拌12小时。用水淬灭反应物，然后用乙酸乙酯萃取混合物。然后用硫酸镁干燥所合并的有机层，过滤并浓缩，得到6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-醇(1771.4mg，7.26mmol)，呈白色固体状，不另外纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝244.1。
步骤6：6-溴-4-氯-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶
Figure BDA0003085169390005092
在0℃下将6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-醇(1.77g，7.26mmol)和三乙胺(3.03ml，21.77mmol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液搅拌5分钟。然后加入甲磺酰氯(0.84ml，10.88mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用DCM萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩，得到6-溴-4-氯-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶(2.28g，8.71mmol)，呈红色油状，不另外纯化就直接用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝262.1。
步骤7：6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-甲腈
Figure BDA0003085169390005101
在70℃下，将6-溴-4-氯-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶(2.29mg，8.71mmol)和四乙基氰化铵(4.08g，26.11mmol)在甲苯(90ml)中的溶液搅拌3小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(800.0mg，3.16mmol，42.42％产率，两个步骤)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝253.1。
步骤8：5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-甲腈
Figure BDA0003085169390005102
在室温下，在氮气下向6-溴-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(800.0mg，3.16mmol)、双(频哪醇)二硼(1.60g，6.32mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(468.9mg，0.63mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的溶液中加入乙酸钾(0.59mL，9.48mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌2小时，并且在减压下浓缩。反应混合物没有纯化就用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝301.2。
步骤9：(R)-(8-氯-7-氟-6-碘代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005111
在0℃下，向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(2.0g，6.2mmol)和(R)-3-羟基四氢呋喃(1.09g，12.42mmol)在二氯甲烷(60ml)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(5.4ml，31.01mmol)。然后加入溶解在二氯甲烷中的三光气(1.29g，4.34mmol)。在0℃下将混合物搅拌0.5小时。然后在室温下将所得溶液搅拌12小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(1.5g，3.4mmol，55.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝436.9。
步骤10：(R)-(8-氯-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005112
在室温下，在氮气下向5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(944.0mg，3.14mmol)、N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(1.51g，3.46mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(466.6mg，0.63mmol)在1,4-二噁烷(60ml)和水(6ml)中的混合物中加入K2CO3(1.30g，9.43mmol)。在70℃下将所得溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到N-[8-氯-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(600.0mg，1.24mmol，39.2％产率，两个步骤)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝483.1。
步骤11：(6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟代异喹啉-3,8-二基)二氨基甲酸叔丁酯((R)-四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390005121
在室温下，在氮气下向N-[8-氯-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(600.0mg，1.24mmol)、氨基甲酸叔丁酯(8.73g，74.55mmol)和BrettPhos Pd G3(225.3mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的混合物中加入K2CO3(515.2mg，3.73mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(250mg，0.44mmol，35.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝564.2。
步骤12：(R)-(8-氨基-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005131
在室温下，向N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(250.0mg，0.4436mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三氟乙酸(5.0mL，64.9mmol)。将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用二氯甲烷稀释残余物，并用三乙胺将pH调节至7。然后浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：12％B至47％B，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-6-(4-氰基-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-6-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(58.4mg,0.1255mmol，28.3％产率)，呈黄色固体状(非对映异构体的混合物)。LCMS(ESI)[M+H]+＝464.2,RT1.325min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.36(s,1H),8.09(s,1H),8.00(s,1H),6.91(s,1H),6.29(s,2H),5.29-5.27(m,1H),4.57(d,J＝14.0Hz,2H),4.30-4.24(m,1H),3.87-3.72(m,4H),2.39(d,J＝2.0Hz,1H),2.23-2.15(m,5H),2.01-1.97(m,1H)。
实施例208
(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯和(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯(化合物452a和化合物452b)
Figure BDA0003085169390005141
步骤1：(3S,4S)-4-氟代吡咯烷-3-醇
Figure BDA0003085169390005142
向3-氟-4-羟基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，2.44mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.0mL)。将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。粗产物没有纯化就直接用于下一步。
步骤2：(±)-反式-4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇
Figure BDA0003085169390005143
向4-氟代吡咯烷-3-醇(512.0mg，4.88mmol)和乙酸(585.0mg，9.74mmol)在甲醇(3.0mL)中的溶液中加入甲醛水溶液(7.2g，40％)。在室温下将混合物搅拌2小时。加入硼氢化钠(2.21g，58.46mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(±)-反式-4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇(250mg，2.10mmol，43.0％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝120。
步骤3：(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005151
在90℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.39mmol)、(±)-反式-4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇(230.7mg，1.94mmol)和DMAP(47.3mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(110mg，0.164mmol，42.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝120。
步骤4：(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯
和(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390005152
向(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(110.0mg，0.16mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至20％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物452a)(10.5mg，0.022mmol，13.4％产率)。RT1.274min(柱：CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝471.2,RT 1.524min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(s,1H),5.31-5.21(m,1H),5.15(s,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.60(s,2H),3.10(s,1H),3.01(s,1H),2.73(s,1H),2.5(s,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2：(化合物452b)(8.5mg，0.018mmol，11％产率)。RT 2.616min(柱：CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝471.2,RT 1.520min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(s,1H),5.31-5.21(m,1H),5.15(s,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.60(s,2H),3.10(s,1H),3.01(s,1H),2.73(s,1H),2.5(s,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例209
(1S,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((R)-1-羟基乙基)环丁酯；(1S,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((S)-1-羟基乙基)环丁酯；(1R,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((R)-1-羟基乙基)环丁酯；和(1R,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((S)-1-羟基乙基)环丁酯(化合物573a、化合物573b、化合物573c和化合物573d)
Figure BDA0003085169390005171
步骤1：3-(苯甲氧基)-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-甲酰胺
Figure BDA0003085169390005172
在室温下将3-苯甲氧基-环丁烷甲酸(1000mg，4.85mmol),N-甲氧基-N-甲基-甲胺盐酸盐(815mg，7.3mmol)和DIEA(2505mg，19.42mmol)在DMF(10mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入HATU(2766mg，7.27mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时。用甲醇淬灭反应物，然后用乙酸乙酯稀释混合物。用水洗涤所得溶液。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩，得到3-苯甲氧基-N-甲氧基-N-甲基-环丁烷甲酰胺(1102mg，4.42mmol，91.2％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝250。
步骤2：1-(3-(苯甲氧基)环丁基)乙-1-酮
Figure BDA0003085169390005181
向叔丁基3-(苯甲氧基)-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-甲酰胺(1050mg，4.22mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入甲基溴化镁(5.6mL，5.6mmol/L，1mol/L THF溶液)。在0℃下将混合物搅拌2小时。用甲醇淬灭反应物。用乙酸乙酯稀释混合物，并且用水洗涤所得溶液。在真空下浓缩有机层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(30/70)洗脱，得到1-(3-(苯甲氧基)环丁基)乙-1-酮(1028mg，4.42mmol，90％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝204。
步骤3：1-(3-(苯甲氧基)环丁基)乙-1-醇
Figure BDA0003085169390005182
在室温下，将1-(3-苯甲氧基环丁基)乙酮(1028mg，5.03mmol)和NaBH4(385mg，10.13mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌2小时。通过加入硫代硫酸钠水溶液来淬灭反应物。用水稀释反应物，然后用碳酸氢钠调节至pH 6～7。用二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，并且在真空下浓缩，得到1-(3-苯甲氧基环丁基)乙醇(816mg，3.956mmol，78.6％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝206。
步骤4：(1-(3-(苯甲氧基)环丁基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷
Figure BDA0003085169390005183
在室温下，在氮气下将1-(3-苯甲氧基环丁基)乙醇(816mg，3.961mmol)、叔丁基氯代二甲基硅烷(1188mg，7.952mmol)和咪唑(108mg，15mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/90)洗脱，得到(1-(3-(苯甲氧基)环丁基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(900mg，3.956mmol，78.6％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝321。
步骤5：3-(1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)乙基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390005191
在40℃下，在氢气(1大气压)下将1-(3-苯甲氧基环丁基)乙氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(600mg，1.87mmol)和Pd/C(10％,420mg，1.87mmol在甲醇中的混合物搅拌2小时。然后过滤混合物并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(18/82)洗脱，得到3-[1-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧乙基]环丁醇(400mg，1.736mmol，92.7％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝231。
步骤6：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((3-(1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)乙基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005192
在90℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(460mg，0.71mmol)、3-[1-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧乙基]环丁醇(328mg，1.42mmol)、DIEA(90mg，0.70mmol)和DMAP(88mg，0.72mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(38/62)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[1-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧乙基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.639mmol，89.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝782。
步骤7：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((3-(1-羟基乙基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005201
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[1-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧乙基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.38mmol)和TBAF(277mg，0.88mmol)在四氢呋喃(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(1-羟基乙基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.299mmol，78.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝782。
步骤8：(1S,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((R)-1-羟基乙基)环丁酯、(1S,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((S)-1-羟基乙基)环丁酯、(1R,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((R)-1-羟基乙基)环丁酯和(1R,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-((S)-1-羟基乙基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005211
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(1-羟基乙基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.27mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(X Bridge CSH OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9B至41B，7min)纯化残余物，得到异构体产物的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到四种异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物573a)(12.2mg，0.021mmol，9.7％产率)。RT 1.526min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；MTBE:EtOH＝80:20,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 1.845min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),4.56-4.47(d,J＝6Hz,1H),4.27(s,1H),3.57-3.44(m,2H),3.50(q,J＝5.5Hz,1H),3.56-3.44(m,2H),2.32-2.24(m,2H),1.94-1.81(m,6H),1.03-0.92(m,3H)。
对映异构体2(化合物573b)(2.4mg，0.005mmol，1.9％产率)。RT 2.059min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；MTBE:EtOH＝85:15,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.059min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),5.00-4.71(m,1H),4.59-4.57(m,1H),4.26(s,2H),3.67-3.58(m,1H),3.36-3.32(m,2H),3.26-2.50(m,1H),2.38-2.35(m,4H),2.34-2.31(m,3H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H)。
对映异构体3(化合物573c)(3mg，0.006mmol，2.4％产率)。RT 3.911min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；MTBE:EtOH＝85:15,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.059min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),5.00-4.71(m,1H),4.59-4.57(m,1H),4.26(s,2H),3.67-3.58(m,1H),3.36-3.32(m,2H),3.26-2.50(m,1H),2.38-2.35(m,4H),2.34-2.31(m,3H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H)。
对映异构体4(化合物573b)(13.6mg，0.029mmol，10.8％产率)。RT3.911min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；MTBE:EtOH＝80:20,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 1.845min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),4.56-4.47(d,J＝6Hz,1H),4.27(s,1H),3.57-3.44(m,2H),3.50(q,J＝5.5Hz,1H),3.56-3.44(m,2H),2.32-2.24(m,2H),1.94-1.81(m,6H),1.03-0.92(m,3H)。
实施例210
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-羟基丙-2-基)环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-羟基丙-2-基)环丁酯(化合物574a和化合物574b)
Figure BDA0003085169390005231
步骤1：3-(苯甲氧基)环丁烷-1-甲酸甲酯
Figure BDA0003085169390005232
向3-苯甲氧基-环丁烷甲酸(1000mg，4.85mmol)、N-甲氧基-N-甲基-甲胺盐酸盐(815.0mg，7.3mmol)和DIEA(2505mg，19.42mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(2766mg，7.27mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。用甲醇和乙酸乙酯稀释反应物。用水洗涤所得溶液，经无水硫酸钠干燥，并且在真空下浓缩，得到3-苯甲氧基-N-甲氧基-N-甲基-环丁烷甲酰胺(1102mg，4.420mmol，91.2％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝220。
步骤2：2-(3-(苯甲氧基)环丁基)丙-2-醇
Figure BDA0003085169390005241
在室温下，在氮气下将3-苯甲氧基环丁烷甲酸甲酯(1200mg，5.45mmol)和MeMgCl(7mL，21mmol，3mol/L)在四氢呋喃(2mL)中的溶液搅拌2小时。通过加入甲醇来淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到2-(3-苯甲氧基环丁基)丙-2-醇(1000mg，4.539mmol，83.3％产率)，呈无色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝220。
步骤3：3-(2-羟基丙-2-基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390005242
在40℃下，在氢气(1大气压)下，将2-(3-苯甲氧基环丁基)丙-2-醇(1000mg，4.54mmol)和Pd/C(210mg，4.54mmol)在甲醇(2mL)中的混合物搅拌12小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，得到3-(1-羟基-1-甲基-乙基)环丁醇(500mg，3.84mmol，84.6％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝130。
步骤4：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((3-(2-羟基丙-2-基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005251
在90℃下，在氮气下将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)、3-(1-羟基-1-甲基-乙基)环丁醇(120mg，0.92mmol)、DIEA(299mg，2.32mmol)和DMAP(57mg，0.47mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(38/62)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[1-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧乙基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.358mmol，77.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝681。
步骤5：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-羟基丙-2-基)环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-羟基丙-2-基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005252
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.417mmol)在TFA(1mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至26％B，10min)纯化残余物，得到外消旋混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1(化合物574a)((27.2mg，0.0565mmol，77％产率)。RT 7.921min(CHIRALPAK IC 2*25cm，5μm，流动相A：MTBE；水(0.1％FA)，流动相B：EtOH)。LCMS(ESI)[M+H]+＝482.5,RT 2.197min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.80(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),4.93(t,J＝6.6Hz,1H),4.40-4.20(m,3H),3.50-3.30(m,2H),2.50-2.28(m,3H),2.20-2.05(m,2H),1.92(s,3H),1.03(s,6H)。
异构体2(化合物574b)(3.1mg，0.0064mmol，8.8％产率)。RT 10.454min(CHIRALPAK IC 2*25cm，5μm，流动相A：MTBE；水(0.1％FA)，流动相B：EtOH)。LCMS(ESI)[M+H]+＝482.5,RT 1.209min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.31(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),4.75(t,J＝7.7Hz,1H),4.29-4.24(m,3H),3.40-3.20(m,2H),2.30-2.10(m,2H),2.04-1.95(m,2H),1.90(s,3H),1.88-1.78(m,1H),0.98(s,6H)。
实施例211
(3S,3aR,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基酯和(3R,3aR,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基酯(化合物563a和化合物563b)
Figure BDA0003085169390005271
步骤1：(±)-反式-4-丙-2-炔氧基四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390005272
在0℃下，向3,4-环氧四氢呋喃(30.0g，348.5mmol)和炔丙醇(19.8g，353.2mmol)在二氯甲烷(1.8L)中的溶液中加入三氟化硼乙醚合物(4.42mL，34.88mmol)。在室温下将所得溶液搅拌16小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/5)洗脱，得到(±)-反式-4-丙-2-炔氧基四氢呋喃-3-醇(10g，70.35mmol，20.2％产率)，呈黄色油状。
步骤2：甲基硫烷基硫代甲酸O-[(3S,4S)-4-丙-2-炔氧基四氢呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390005273
在0℃下，在N2气氛下，向(±)-反式-4-丙-2-炔氧基四氢呋喃-3-醇(7.0g，49.24mmol)在四氢呋喃(140mL)中的溶液中加入NaH(3.53g，147mmol，60％纯度)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在0℃下加入二硫化碳(4.42mL，73.6mmol)，并且在室温下将混合物搅拌30分钟。在0℃下加入碘甲烷(10.5g，73.97mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。用NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。干燥有机层(Na2SO4)，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到甲基硫烷基硫代甲酸O-[(3S,4S)-4-丙-2-炔氧基四氢呋喃-3-基]酯(6.8g，29.3mmol，59.4％产率)，呈黄色油状。
步骤3：3-亚甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-b]呋喃
Figure BDA0003085169390005281
在室温下，在N2气氛下，向甲基硫烷基硫代甲酸O-[(1S,2S)-2-丙-2-炔氧基环戊基]酯(6.0g，26.04mmol)在甲苯(420ml)中的溶液中加入三正丁基氢化锡(13.86mL，51.6mmol)。在回流下将混合物加热30分钟。在回流下加入催化量的AIBN(216mg，1.32mmol)，并且使混合物继续回流4小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到3-亚甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-b]呋喃(1.8g，14.4mmol，54.78％产率)，呈无色油状。
步骤4：(3R,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390005282
在0℃下，向3-亚甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-b]呋喃(1.26g，9.99mmol)和RuCl3(620.55mg，3mmol)在四氯化碳(10mL)、乙腈(10mL)和水(10mL)中的溶液中加入NaIO4(5.34g，24.95mmol)。在室温下将所得溶液搅拌2小时。用NaHCO3水溶液和Na2S2O3水溶液淬灭反应物。用乙酸乙酯萃取所得混合物。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。将残余物溶解在乙醇(10mL)中，并且在室温下加入NaBH4(468.8mg，12.34mmol)。在室温下将所得溶液搅拌3小时。在减压下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到(3R,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇(450mg，3.46mmol，39.9％产率)，呈黄色油状。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ4.60-4.50(m,1H),4.40-4.30(m,2H),4.02-4.07(m,1H),3.90(d,1H,),3.60(dd,J＝2.1,8.8Hz,1H),3.46-3.40(m,2H),2.90-2.75(m,1H),2.20(bs,1H)。
步骤5：4-硝基苯甲酸[(3S,3aR,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390005291
在0℃下，向(3R,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇(420.0mg，3.23mmol)、4-硝基苯甲酸(808.5mg，4.84mmol)和PPh3(1.27g，4.84mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入DIAD(978.6mg，4.84mmol)。在室温下将所得溶液搅拌16小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到4-硝基苯甲酸[(3S,3aR,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基]酯(700mg，2.5mmol，77.7％产率)，呈白色固体状。
步骤6：(3S,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390005292
在室温下，将4-硝基苯甲酸[(3S,3aR,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基]酯(700.0mg，2.51mmol)在甲醇(35mL)和K2CO3(1.73g，12.53mmol)中的混合物搅拌4小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到(3S,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇(200mg，1.54mmol，57.3％产率)，呈黄色油状。1H NMR(300MHz,三氯甲烷-d)δ4.86(dd,J＝6.7,3.7Hz,1H),4.25(dt,J＝3.1,1.4Hz,1H),4.03(d,J＝10.4Hz,1H),3.92(dd,J＝9.8,3.4Hz,1H),3.86–3.71(m,3H),3.56(dd,J＝10.4,3.8Hz,1H),2.85(qd,J＝7.0,6.1,3.5Hz,1H),1.88(s,1H)。
步骤7：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3S,3aR,6aR)-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯和7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3R,3aS,6aS)-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005301
在0℃下，向(3S,3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-醇(198.09mg，1.52mmol)、7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.76mmol)和DIEA(294.54mg，2.28mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入三光气(158.09mg，0.53mmol)。在0℃下将所得混合物搅拌30分钟，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/4)洗脱，得到外消旋产物。通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK IC，3*25cm，5μm；流动相A：己烷:DCM＝3:1(0.1％DEA)，流动相B：EtOH；流速：40mL/min；梯度：50％B至50％B，20min)进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物563a的中间物)：(150mg，0.22mmol，28.9％产率)。RT1.621min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝682.3。
对映异构体2(化合物563b的中间物)：(145mg，0.22mmol，27.9％产率)。RT2.772min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝682.3。
步骤8：(3S,3aR,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基酯和(3R,3aR,6aR)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005311
在室温下，将7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3S,3aR,6aR)-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol)在二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)中的混合物搅拌2小时。然后在真空下浓缩所得溶液。将残余物溶解在乙腈中，并且用NaHCO3水溶液调节至pH 8。通过过滤收集固体，并且用水洗涤，得到对映异构体1(化合物563a)(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。)(49mg，0.102mmol，46.2％产率)：RT4.377min(CHIRALPAK IA-U 3.0*50mm 1.6μm；流动相A:CO2，流动相B：IPA(20mM NH3)，10％-50％，6.5min；2ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝482.2,RT2.137min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(d,J＝3.4Hz,1H),5.23-5.00(m,1H),4.77(dd,J＝6.7,3.6Hz,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.96-3.78(m,4H),3.68(dd,J＝9.5,8.0Hz,1H),3.46(dd,J＝10.2,3.7Hz,1H),3.16-3.20(m,2H)3.04-2.90(m,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
类似地，使用7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3R,3aS,6aS)-六氢呋喃并[3,4-b]呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯得到对映异构体2(化合物563b)(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。)(49.5mg，0.102mmol，46.5％产率)：RT 4.856min CHIRALPAKIA-U 3.0*50mm 1.6μm；流动相A：CO2，流动相B：IPA(20mM NH3)，10％-50％，6.5min；2ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝482.2,RT 2.137min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.33(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(d,J＝3.4Hz,1H),5.23-5.00(m,1H),4.77(dd,J＝6.7,3.6Hz,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.96-3.78(m,4H),3.68(dd,J＝9.5,8.0Hz,1H),3.46(dd,J＝10.2,3.7Hz,1H),3.16-3.20(m,2H)3.04-2.90(m,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例212
(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯和(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯(化合物477a和化合物477b)
Figure BDA0003085169390005321
步骤1：4-氟代四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390005331
在120℃下，将3,4-环氧四氢呋喃(2.7g，31.40mmol)和三乙胺三氢氟酸盐(7.68mL，47.1mmol)的混合物搅拌12小时。将混合物冷却至室温，然后用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。用二氯甲烷/2-丙醇(5/1)萃取所得溶液，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱，得到4-氟代四氢呋喃-3-醇(2.02g，19.04mmol，60.9％产率)，呈黄色油状。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-氟代四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005332
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.38mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.33mL，1.92mmol)和4-氟代四氢呋喃-3-醇(2.02g，19.04mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入含三光气(80.0mg，0.27mmol)的二氯甲烷，并且在0℃下将反应物搅拌0.5小时。用水淬灭反应混合物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(30/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟代四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190.0mg，0.29mmol，76.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝658.3。
步骤3：(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯
和(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005341
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟代四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(190.0mg，0.29mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液中加入三氟乙酸(6mL)。在室温下将混合物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。用二氯甲烷稀释残余物，并且用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：11％B至34％B，10min)进行纯化，得到外消旋混合物。通过手性制备型HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物477a(12.3mg，0.0264mmol，9.1％产率)，呈黄色固体状。RT1.349min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝75:25，1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+＝458.2,RT1.843min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.0Hz,1H),6.22(s,2H),5.67(s,1H),5.40(s,1H),5.27-5.24(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.14-4.10(m,1H),3.99(d,J＝2.0Hz,1H),3.99-3.87(m,1H),3.83-3.79(m,1H),3.37(s,2H),1.92(s,3H)。
对映异构体2：化合物477b(9mg，0.0195mmol，6.8％产率)，呈黄色固体状。RT2.474min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝75:25，1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+＝458.2,RT 1.843min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.0Hz,1H),6.22(s,2H),5.67(s,1H),5.40(s,1H),5.27-5.24(m,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.14-4.10(m,1H),3.99(d,J＝2.0Hz,1H),3.99-3.87(m,1H),3.83-3.79(m,1H),3.37(s,2H),1.92(s,3H)。
实施例213
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-4-氟代四氢呋喃-3-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-4-氟代四氢呋喃-3-基)脲(化合物724a和化合物724b)
Figure BDA0003085169390005351
步骤1：(±)-顺式-N,N-二苯甲基-4-氟代四氢呋喃-3-胺
Figure BDA0003085169390005352
在-78℃下，向(±)-顺式-4-(二苯甲基氨基)四氢呋喃-3-醇(620mg，2.19mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入DAST(700mg，4.35mmol)。在-78℃下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(88/12)洗脱，得到(±)-顺式-N,N-二苯甲基-4-氟代四氢呋喃-3-胺(300mg，1.051mmol，48％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝286。
步骤2：(±)-顺式-4-氟代四氢呋喃-3-胺
Figure BDA0003085169390005361
在40℃下，将(±)-顺式-N,N-二苯甲基-4-氟-四氢呋喃-3-胺(340mg，1.19mmol)和Pd/C(10％,120mg，1.19mmol)在1,4-二噁烷(1mL)和甲醇(4mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，得到(±)-顺式-4-氟代四氢呋喃-3-胺(120mg，1.142mmol，95.8％产率)，呈黄色固体状。GCMS＝106。
步骤3：(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-氟代四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005362
在90℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.46mmol)、DMAP(56mg，0.46mmol)和(±)-顺式-4-氟代四氢呋喃-3-胺(98mg，0.93mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(43/57)洗脱，得到(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-氟代四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.426mmol，91.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝657。
步骤4：1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3S,4S)-4-氟代四氢呋喃-3-基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((3R,4R)-4-氟代四氢呋喃-3-基)脲
Figure BDA0003085169390005371
在室温下，将(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(3-(4-氟代四氢呋喃-3-基)脲基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(130mg，0.20mmol)在二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应溶液。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至26％B，10min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
1(化合物724a)(54.2mg，0.119mmol，60％产率)。RT 1.216min(CHIRALPAK IG-30.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT 1.892min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.94(s,1H),7.85(s,1H),7.45-7.38(d,J＝6Hz,1H),7.31(s,1H),6.75-6.73(s,J＝6Hz,1H),5.65(s,2H),5.28-5.04(m,1H),5.07(s,1H),4.31-4.23(m,3H),4.08-3.81(m,3H),3.68-3.36(m,1H),3.43-3.32(m,2H).1.93(s,3H)。
对映异构体2(化合物724b)(52.7mg，0.116mmol，58.3％产率)。RT1.861min(CHIRALPAK IG-3 0.46*5cm；3μm；(MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT 1.892min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),8.94(s,1H),7.85(s,1H),7.45-7.38(d,J＝6Hz,1H),7.31(s,1H),6.75-6.73(s,J＝6Hz,1H),5.65(s,2H),5.28-5.04(m,1H),5.07(s,1H),4.31-4.23(m,3H),4.08-3.81(m,3H),3.68-3.36(m,1H),3.43-3.32(m,2H).1.93(s,3H)。
实施例214
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯(化合物452c和化合物452d)
Figure BDA0003085169390005381
步骤1：(3S,4R)-4-氟代吡咯烷-3-醇
Figure BDA0003085169390005382
在室温下，将3-氟-4-羟基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，2.44mmol)在二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(2.0mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。粗产物没有纯化就直接用于下一步。
步骤2：4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇
Figure BDA0003085169390005391
在室温下，将4-氟代吡咯烷-3-醇(510.0mg，4.86mmol)和乙酸(585.0mg，9.74mmol)在甲醇(3.0mL)和甲醛水溶液(7.2g，40％)中的溶液搅拌2小时。加入硼氢化钠(2.21g，58.46mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇(310mg，2.60mmol，53.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝120。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3S,4S)-4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005392
在90℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(310.0mg，0.484mmol)、4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-醇(286.1mg，2.41mmol)和DMAP(58.7mg，0.484mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3S,4S)-4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg,0.119mmol，30.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝671.3。
步骤4：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟-1-甲基吡咯烷-3-基酯
Figure BDA0003085169390005401
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟-1-甲基-吡咯烷-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80.0mg，0.119mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(1mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。将残余物溶解在DCM中，并用三乙胺调节至pH 8。在真空下浓缩所得溶液。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至20％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC进一步分离外消旋产物，获得两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物452c(5.9mg，0.017mmol，10.4％产率)。RT 1.203min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝471.3,RT 1.692min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),5.27-5.09(m,2H),4.27(s,2H),3.37(s,2H),2.79-2.72(m,4H),2.28(s,3H),1.90(s,3H)。
对映异构体2：化合物452d(8.3mg，0.0196mmol，12％产率)。RT 2.607min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝471.3,RT 1.692min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),5.27-5.09(m,2H),4.27(s,2H),3.37(s,2H),2.79-2.72(m,4H),2.28(s,3H),1.90(s,3H)。
实施例215
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(羟基甲基)环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(羟基甲基)环丁酯(化合物571a和化合物571b)
Figure BDA0003085169390005411
步骤1：(3-(苯甲氧基)环丁基)甲醇
Figure BDA0003085169390005412
在25℃下，将3-苯甲氧基-环丁烷甲酸(3.0g，14.55mmol)和B2H6(44mL，46.15mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液搅拌1小时。用甲醇淬灭反应物。在真空下浓缩反应物。粗产物将用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝192。
步骤2：((3-(苯甲氧基)环丁基)甲氧基)(叔丁基)二甲基硅烷
Figure BDA0003085169390005413
在25℃下，将(3-苯甲氧基环丁基)甲醇(500mg，2.6mmol)、TBDMSCl(777mg，5.18mmol)和咪唑(704mg，10.34mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(77/23)洗脱，得到(3-苯甲氧基环丁基)甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(770mg，2.512mmol，96.6％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝307。
步骤3：3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧)甲基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390005421
在40℃下，在氢气(1大气压)下，将(3-苯甲氧基环丁基)甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(840mg，2.74mmol)和Pd/C(800mg，6.78mmol)在甲醇(30mL)中的混合物搅拌2天。过滤之后，在真空下浓缩反应混合物。将粗产物(800mg)将用于下一步。LCMS(ESI)[M+H]+＝216。
步骤4：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((3-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧)甲基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005422
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(609mg，1.16mmol)、3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]环丁醇(587mg，2.71mmol)、三光气(265mg，0.89mmol)和DIEA(868mg，6.73mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(850mg，1.1068mmol，95.5％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝768。
步骤5：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((3-(羟基甲基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005431
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧甲基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(889mg，1.16mmol)和TBAF(1460mg，4.63mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液搅拌4小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(羟基甲基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(416mg，0.636mmol，55％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝654。
步骤6：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(羟基甲基)环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(羟基甲基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005441
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(羟基甲基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.18mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩溶液。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至26％B，10min)纯化残余物，得到立体异构体的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种立体异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1(化合物571a)(26.9mg，0.0593mmol，32.3％产率)。RT 12.514min(CHIRALPAK IA 2×25cm；5μm。流动相A：(Hex:DCM＝3:1)(10M NH3-MeOH)；流动相B：EtOH)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.864min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.30(s,1H),7.94(s,1H),7.30(s,1H),6.85-6.78(d,J＝6Hz,1H),6.17(s,2H),5.66(s,1H),5.10-4.93(m,1H),4.71-4.63(m,1H),4.27(s,2H),3.48-3.40(d,J＝4.5Hz,2H),3.37-3.31(m,2H),2.38-2.15(m,2H),2.16-2.05(m,3H),1.90(s,3H)。
异构体2(化合物571b)(20.7mg，0.0456mmol，24.9％产率)：保留时间：13.339min(CHIRALPAK IA 2*25cm；5μm。流动相A：(Hex:DCM＝3:1)(10M NH3-MeOH)；流动相B：EtOH)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.771min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.36(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.83-6.78(d,J＝6Hz,1H),6.18(s,2H),5.68(s,1H),4.91-4.74(m,1H),4.62-4.52(m,1H),2.28(s,2H),3.40-3.32(m,4H),2.40-2.28(m,2H),2.05-1.98(m,1H),1.98-1.77(m,5H)。
实施例216
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基磺酰基)环丁酯(化合物572a)
Figure BDA0003085169390005451
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(甲基磺酰基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005452
在室温下，在氮气下向顺式-3-甲基磺酰基环丁醇(150mg，1mmol)和7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液加入TEA(250mg，2.48mmol)。然后加入三光气(90mg，0.30mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/9)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(甲基磺酰基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.143mmol，61.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝702。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基磺酰基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005461
在25℃下，向7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(甲基磺酰基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.14mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌2小时。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9％B至34％B，7min)纯化粗产物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-甲基磺酰基环丁基)酯(58.3mg，0.106mmol，74.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝502.1,RT 1.931min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.67(d,J＝3.2Hz,1H),4.99(p,J＝7.6Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.82-3.69(m,1H),3.33(s,2H),2.93(s,3H),2.76-2.64(m,2H),2.39(ddd,J＝12.4,6.3,2.4Hz,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例217
(1r,3r)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氰基环丁基)酯(化合物484b)
Figure BDA0003085169390005471
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005472
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(56.7mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入3-羟基环丁烷甲腈(135.0mg，1.39mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(290mg，0.45mmol，96％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝649.3
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氰基环丁基)酯
Figure BDA0003085169390005481
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(290.0mg，0.45mmol)和TFA(3.0mL，0.45mmol)在二氯甲烷(9mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱19*250mm，10μm；水(0.1％FA):ACN＝14％B至30％B，15min；25mL/min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氰基环丁基)酯(37mg，0.08mmol，19％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝449.2；RT 1.973min；方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(d,J＝2.7Hz,1H),5.22-5.10(m,1H),4.32-4.20(m,2H),3.47-3.37(m,3H),2.70-2.60(m,2H),2.61-2.53(m,2H),1.92(s,3H)。
实施例218
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)-3-氟代哌啶-4-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)-3-氟哌啶-4-基酯(化合物566a和化合物566b)
Figure BDA0003085169390005491
步骤1：(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005492
在0℃下，在氮气下向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(3000.0mg，5.71mmol)、3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1880.0mg，8.57mmol)和DIEA(3680.0mg，28.53mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入三光气(1185.0mg，3.99mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌2小时。在真空下浓缩有机层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(62/38)洗脱，得到一对对映异构体(2400mg，3.1136mmol，54.5％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771。
通过手性HPLC分离对映异构体，得到一对对映异构体：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1100mg，1.4271mmol，45.8％产率)和7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3R,4S)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg，1.0379mmol，33.3％产率)。(绝对立体化学结构任意指定。)
步骤2：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390005501
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.13mmol)在HCl(5mL，2mol/L MeOH溶液)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，得到(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代哌啶-4-基酯(50mg，0.1063mmol，81.9％产率)，呈红色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471。
步骤3：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)-3-氟代哌啶-4-基酯(化合物566a)
Figure BDA0003085169390005511
在室温下，将(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代哌啶-4-基酯(70.0mg，0.148mmol)和三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(25mg)在二氯甲烷(5mL)和TFA(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩溶液。通过反相色谱法，用水(0.1％FA)/ACN(30/70)纯化所得残余物，得到(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)-3-氟代哌啶-4-基酯(化合物566a)(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。)(28mg，0.0524mmol，8.2％产率)：RT 4.235min(CHIRALPAKIC，3.0*100mm，3μm；CO2:MeOH(0.1％DEA)梯度(B％)：10％至50％，4.0min；在50％下保持2.0min。回压(psi)：1500.000，流速：2ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝535.3,RT 1.905min，方法J；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.60(s,1H),7.93(s,1H),7.65(s,1H),7.18(d,J＝5.9Hz,1H),6.75-6.31(m,1H),5.45-5.24(m,2H),4.76-4.67(t,J＝4.5Hz,2H),4.06-3.98(m,1H),3.90-3.75(m,7H),3.72-3.65(m,1H),2.52-2.36(m,2H),2.23-2.28(d,J＝3Hz,3H)。
使用相同程序，由7-(3-(((((3R,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-3-氟代哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯制备(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(2,2-二氟乙基)-3-氟代哌啶-4-基酯(化合物566b)(相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。)：RT4.771min(CHIRALPAK IC，3.0*100mm，3μm；CO2:MeOH(0.1％DEA)梯度(B％)：10％至50％，4.0min，在50％下保持2.0min。回压(psi)：1500.000，流速：2ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝535.3,RT1.905min；方法J。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.60(s,1H),7.93(s,1H),7.65(s,1H),7.18(d,J＝5.9Hz,1H),6.75-6.31(m,1H),5.45-5.24(m,2H),4.76-4.67(t,J＝4.5Hz,2H),4.06-3.98(m,1H),3.90-3.75(m,7H),3.72-3.65(m,1H),2.52-2.36(m,2H),2.23-2.28(d,J＝3Hz,3H)。
实施例219
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1R,3R)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐、N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐、N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,3R)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐(化合物533a、化合物533b、化合物533c和化合物533d)
Figure BDA0003085169390005521
步骤1：3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环戊酮
Figure BDA0003085169390005531
向3-羟基环戊酮(1000.0mg，9.99mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入叔丁基二苯基氯硅烷(4110.0mg，14.95mmol)和咪唑(2720.0mg，40mmol)。在25℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(92/8)洗脱，得到3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环戊酮(3350mg，9.89mmol，99％产率)，呈澄清油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝339.2。
步骤2：3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧-1-甲基-环戊醇
Figure BDA0003085169390005532
在0℃下，在氮气下向3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环戊酮(3900.0mg，11.52mmol)在四氯乙烯(50mL)中的溶液中加入甲基氯化镁(15.4mL，46.2mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩，得到3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧-1-甲基-环戊醇(4000mg，11.28mmol，97％产率)，呈澄清油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝355.2
步骤3：(1S,3R)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇和(1S,3S)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390005533
在25℃下，在3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧-1-甲基-环戊醇(4000.0mg，11.28mmol)和TBAF(9000.0mg，28.57mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到(1S,3R)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇(500mg，4.30mmol，38％产率)，呈黄色油状。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.48(d,J＝5.0Hz,1H),4.31(s,1H),4.12-3.89(m,1H),1.88-1.23(m,6H),1.13(s,3H)。和(1S,3S)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇(200mg,1.72mmol，15％产率)，呈黄色油状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.38(d,J＝4.2Hz,1H),4.29-4.16(m,1H),4.14(s,1H),1.98-1.81(m,2H),1.72-1.34(m,4H),1.24(s,3H)。
步骤4：(+/-)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005541
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(56.7mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(1S,3R)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇(108.0mg，0.93mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.45mmol，96％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668.3。
(+/-)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005551
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(56.7mg，0.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入(1S,3S)-1-甲基环戊烷-1,3-二醇(108.0mg，0.93mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.299mmol，64％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668.3。
步骤5：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1R,3R)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390005561
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(295.0mg，0.44mmol)和TFA(3.0mL)在二氯甲烷(9mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；水(0.1％FA):CAN＝9％B至41％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。任意指定立体化学结构。
对映异构体1(化合物533a)(22.8mg，0.045mmol，10％产率)。RT 2.162min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.019min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.37(s,1H),7.99(s,1H),7.49(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),5.07-4.99(m,1H),4.70-4.20(m,6H),3.50-3.44(m,2H),2.12-1.95(m,5H),1.94-1.82(m,1H),1.81-1.70(m,2H),1.61-1.53(m,1H),1.23(s,3H)。
对映异构体2(化合物533b)(24.8mg，0.049mmol，11％产率)。RT 3.594min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.019min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.37(s,1H),7.99(s,1H),7.49(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),5.07-4.99(m,1H),4.70-4.20(m,6H),3.50-3.44(m,2H),2.12-1.95(m,5H),1.94-1.82(m,1H),1.81-1.70(m,2H),1.61-1.53(m,1H),1.23(s,3H)。
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,3R)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐和N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊基]酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390005571
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,3S)-3-羟基-3-甲基-环戊氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.30mmol)和TFA(3.0mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；水(10mmol/L NH4HCO3):ACN＝7分钟内18％B至35％B；60mL/min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC(柱：CHIRALPAK ID-03,2.0cm I.D*25cm L(5μm)；MTBE(10M NH3-MEOH):IPA＝20分钟内30％B至30％B；流速15mL/min)分离外消旋产物，得到两种对映异构体。任意指定立体化学结构。
对映异构体3(化合物533c)(21.5mg，0.042mmol，14％产率)。RT 2.380min(CHIRALPAK ID-3尺寸：0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.077min；方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.44(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.25-5.10(m,1H),4.41-4.38(m,2H),4.20-3.61(m,4H),3.43-3.30(m,2H),2.39-2.14(m,2H),1.97(s,3H),1.78-1.49(m,4H),1.31(s,3H)。
对映异构体4(化合物533d)(13.3mg，0.026mmol，9％产率)。RT 3.737min(CHIRALPAK ID-3尺寸：0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/min)。LCMS(ESI):[M+H]+＝468.2,RT 2.077min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.35(s,1H),7.98(s,1H),7.44(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.25-5.10(m,1H),4.41-4.38(m,2H),4.20-3.61(m,4H),3.43-3.30(m,2H),2.39-2.14(m,2H),1.97(s,3H),1.78-1.49(m,4H),1.31(s,3H)。
实施例220
(1s,3s)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯(化合物534a)
Figure BDA0003085169390005581
步骤1：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005582
向N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(196.5mg，0.33mmol)、3-羟基环丁烷甲腈(163.5mg，1.68mmol)和DIEA(435.1mg，3.36mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(99.9mg，0.33mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.28mmol，84.1％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝707.4。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯
Figure BDA0003085169390005591
向N-[5-[(Z)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[6-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-4-甲基-3-吡啶基]-2-氟-烯丙基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-(羟基甲基)氨基甲酸叔丁酯；异丁烷(250.0mg，0.36mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入TFA(4mL，0.36mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7％B至35％B，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氰基环丁基)酯(26.1mg，0.064mmol，18％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝407.1,RT 1.942min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.37(s,1H),7.99(d,J＝11.3Hz,2H),7.73(s,1H),6.89(d,J＝6.1Hz,1H),6.28(s,2H),5.44(s,2H),4.95(m,1H),3.12(m,1H),2.90-2.73(m,2H),2.40(m,2H),1.95(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例221
(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯盐酸盐和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯盐酸盐(化合物542c和化合物542d)
Figure BDA0003085169390005601
步骤1：反式-2-(苯甲氧基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390005602
在90℃下，将苯甲醇(3850mg，35.65mmol)和钠(250.0mg，10.87mmol)的混合物搅拌0.5小时。加入5-氧杂双环[2.1.0]戊烷(250.0mg，3.57mmol)，并且在90℃下将混合物搅拌12小时。通过乙酸淬灭反应物。过滤并且在真空下浓缩之后，通过反相色谱法纯化粗物质，通过60％水(0.01％NH4HCO3)和40％ACN洗脱，得到反式-2-苯甲氧基环丁醇(280mg，1.571mmol，44％产率)，呈黄色油状。
步骤2：反式-环丁烷-1,2-二醇
Figure BDA0003085169390005603
在40℃下，在氢气下将反式-2-苯甲氧基环丁醇(300.0mg，1.68mmol)和Pd/C(10wt％，150mg)在甲醇(5mL)中的混合物搅拌8小时。然后过滤混合物并浓缩，得到反式-环丁烷-1,2-二醇(234mg，2.65mmol)，呈无色油状。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.00(t,J＝6.3Hz,1H),3.51(s,1H),2.08(q,J＝6.2Hz,3H),1.56–1.19(m,1H)。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1S,2S)-2-羟基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005611
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(234.0mg，0.36mmol)和反式-环丁烷-1,2-二醇(160.0mg，1.82mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入DMAP(44.0mg，0.36mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2S)-2-羟基环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.2189mmol，60.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝640。
步骤4：(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯盐酸盐和(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390005612
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-羟基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160.0mg，0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm,5μm，19*150mm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：20％B至40％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物542c(25.7mg，0.0540mmol，21.6％产率)。RT0.975min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝440.2,RT 1.819min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.36(s,1H),7.97(s,1H),7.48(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),4.70(d,J＝7.8Hz,1H),4.42(s,2H),3.99(q,J＝7.9Hz,1H),3.43(s,2H),2.08-1.94(m,5H),1.38-1.21(m,2H)。
对映异构体2：化合物542d(27.2mg，0.0572mmol，22.9％产率)。RT2.281min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝440.2,RT 1.819min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.36(s,1H),7.97(s,1H),7.48(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),4.70(d,J＝7.8Hz,1H),4.42(s,2H),3.99(q,J＝7.9Hz,1H),3.43(s,2H),2.08-1.94(m,5H),1.38-1.21(m,2H)。
实施例222
(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环丁酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环丁酯(化合物535a和化合物535b)
Figure BDA0003085169390005631
步骤1：反式-2-羟基环丁烷-1-甲腈
Figure BDA0003085169390005632
在25℃下，将二乙基氰化铝(5.7mL，2.85mmol)和5-氧杂双环[2.1.0]戊烷(200.0mg，2.85mmol)在甲苯(8mL)中的溶液搅拌6小时。用NaHCO3水溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。在真空下浓缩有机层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(0％至100％)洗脱。将产物直接用于下一步。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.93(d,J＝9.0Hz,1H),4.25-4.09(m,1H),2.99-2.84(m,1H),2.18-2.03(m,1H),2.02-1.84(m,1H),1.87-1.71(m,1H),1.71-1.52(m,1H)。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1S,2R)-2-氰基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005633
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(464.0mg，0.88mmol)、反式-2-羟基环丁烷甲腈(171.0mg，1.76mmol)和DIEA(569.0mg，4.41mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(175mg，0.59mmol)。在25℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。在真空下浓缩有机层。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-2-氰基环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(366mg，0.56mmol，64％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝649。
步骤3：(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环丁酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-氰基环丁酯
Figure BDA0003085169390005641
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(1S,2R)-2-氰基环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(356.0mg，0.44mmol)在二氯甲烷(2mL)和TFA(1.5mL)中的溶液搅拌1小时。用三乙胺将残余物调节至pH 8，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；水(0.1％FA):ACN＝10％B至35％B，10min；60mL/min)纯化粗产物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物535a(8.9mg，0.02mmol，5％产率)。RT 1.604min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝449,RT 2.035min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),5.22-5.13(m,1H),4.35-4.27(m,2H),3.52-3.41(m,3H),2.41-2.10(m,3H),2.02-1.87(m,4H)。
对映异构体2：化合物533b(9.1mg，0.020mmol，5％产率)。RT 2.656min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm。MTBE:EtOH＝70:30,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝449,RT 2.035min；方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.31(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),5.22-5.13(m,1H),4.35-4.27(m,2H),3.52-3.41(m,3H),2.41-2.10(m,3H),2.02-1.87(m,4H)。
实施例223
(1r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氰基甲基)环丁酯和(1s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氰基甲基)环丁酯(化合物536a和化合物536b)
Figure BDA0003085169390005651
步骤1：3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁烷甲酸乙酯
Figure BDA0003085169390005652
在室温下，将3-羟基环丁烷甲酸乙酯(10g，69.36mmol)和咪唑(4.8g，70.51mmol)在二氯甲烷(300mL)中的溶液加入叔丁基氯代二苯基硅烷(21.0g，76.64mmol)中。在25℃下将所得溶液搅拌2小时。用甲醇淬灭反应物，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁烷甲酸乙酯(25g，65.348mmol，94.2％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝383。
步骤2：[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲醇
Figure BDA0003085169390005661
在0℃下，向3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁烷甲酸乙酯(5.0g，13.07mmol)在二苯醚(300mL)中的溶液中加入LiAlH4(13mL，13.07mmol，1mol/L)。在0℃下将所得混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，用乙酸乙酯萃取，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲醇(1.1g，3.23mmol，24.7％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝341。
步骤3：甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲酯
Figure BDA0003085169390005662
在0℃下，向[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲醇(5.0g，14.68mmol)和TEA(5.0g，49.5mmol)在二氯甲烷(300mL)中的溶液中加入甲磺酰氯(5.0g，43.86mmol)。在0℃下将反应物搅拌2小时，然后用水淬灭。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲酯(5.3g，12.661mmol，86.2％产率)，呈无色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝419。
步骤4：2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]乙腈
Figure BDA0003085169390005663
在室温下，向甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]甲酯(5.3g，12.66mmol)在DMSO(50mL)中的溶液中加入KCN(2.65g，40.77mmol)。在110℃下将所得溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，然后用乙酸乙酯萃取。干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]乙腈(4g，11.444mmol，90.4％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝350。
步骤5：2-(3-羟基环丁基)乙腈
Figure BDA0003085169390005671
在25℃下，将2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]乙腈(2.0g，5.72mmol)在四氢呋喃(5mL)和TBAF(2.98g，11.44mmol)中的溶液搅拌16小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到2-(3-羟基环丁基)乙腈(200mg，1.799mmol，31.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝112。
步骤6：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(氰基甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005672
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)和2-(3-羟基环丁基)乙腈(200mg，1.8mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入DIEA(800mg，6.2mmol)。然后加入三光气(200mg，0.67mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(氰基甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.3772mmol，66.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝663。
步骤7：(1r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氰基甲基)环丁酯和(1s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氰基甲基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005681
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(氰基甲基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.38mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液加入TFA(2mL)。将所得溶液搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：12B至40B，9min)纯化粗产物，得到外消旋混合物。通过手性HPLC(柱(CHIRALPAK IA-3，4.6*50mm，3μm；流动相A：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；流速：1mL/min)分离外消旋物，得到两种对映异构体。任意指定立体化学结构。
对映异构体1(化合物536a)(23.4mg，0.0506mmol，13.4％产率)。RT3.696min(CHIRALPAK IA-3，0.46*5cm，3μm；Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.2,RT 0.677min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(t,J＝2.7Hz,1H),5.15(p,J＝6.7Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.41(t,J＝4.4Hz,2H),2.75(d,J＝7.4Hz,2H),2.63(d,J＝6.1Hz,1H),2.38-2.16(m,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物536b)(60.7mg，0.1312mmol，34.8％产率)。RT4.659min(CHIRALPAK IA-3，46*5cm，3μm；Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.2,RT 0.677min，方法K；1H NMR((400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(t,J＝2.7Hz,1H),5.15(p,J＝6.7Hz,1H),4.28(t,J＝4.4Hz,2H),3.41(t,J＝4.4Hz,2H),2.75(d,J＝7.4Hz,2H),2.63(d,J＝6.1Hz,1H),2.38-2.16(m,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例224
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基-3-甲基环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基-3-甲基环丁酯(化合物537a和化合物537b)
Figure BDA0003085169390005691
步骤1：3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁烷甲腈
Figure BDA0003085169390005692
在室温下，将3-羟基环丁烷甲腈(800.0mg，8.24mmol)、1H-咪唑(2.80mg，41.19mmol)在二氯甲烷(40mL)和TBDMSCl(3.72g，24.71mmol)中的溶液搅拌4小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(90/10)洗脱，得到3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁烷甲腈(1.6g，7.57mmol，91.9％产率)，呈棕色油状。
步骤2：3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-1-甲基-环丁烷甲腈
Figure BDA0003085169390005701
在氮气下，向3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧环丁烷甲腈(1.20mg，5.68mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入二异丙基氨基锂(1.8g，17.03mmol)。在-78℃下将混合物搅拌1小时。然后在-78℃下加入碘甲烷(1.61g，11.35mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-1-甲基-环丁烷甲腈(600mg，2.66mmol，46.9％产率)，呈黄色固体状。
步骤3：3-羟基-1-甲基-环丁烷甲腈
Figure BDA0003085169390005702
向3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-1-甲基-环丁烷甲腈(1.0g，4.44mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入三水合四丁基氟化铵(2.80g，8.87mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到3-羟基-1-甲基-环丁烷甲腈(770mg，6.93mmol，64.1％产率)，呈黄色油状。
步骤4：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005711
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600.0mg，1.14mmol)、3-羟基-1-甲基-环丁烷甲腈(253.8mg，2.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(737.7mg，5.71mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中加入三光气(338.8mg，1.14mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-60/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，0.91mmol，79.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝663.3。
步骤5：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基-3-甲基环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基-3-甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390005712
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(590.0mg，0.89mmol)在二氯甲烷(14mL)中的溶液中加入三氟乙酸(7.0mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(柱：CHIRALPAK IA，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：EtOH；流速：16mL/min；梯度：50B至50B，16min)纯化残余物，得到外消旋混合物。通过手性制备型HPLC进一步分离混合物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1：化合物537a(43.5mg，0.094mmol，10.6％产率)。RT 1.187min(CHIRALPAKIA-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。[M+H]+＝463.1,RT 2.176min，方法＝K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(s,1H),5.08(p,J＝7.2Hz,1H),4.30(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(s,2H),3.00-2.87(m,2H),2.33-2.20(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.55(s,3H)。
异构体2：化合物537b(36.6mg，0.080mmol，8.9％产率)。RT 1.874min(CHIRALPAKIA-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE:EtOH＝50:50,1ml/min)。[M+H]+＝463.1,RT 2.176min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.69(s,1H),5.08(p,J＝7.2Hz,1H),4.30(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(s,2H),3.00-2.87(m,2H),2.33-2.20(m,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.55(s,3H)。
实施例225
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氰基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氰基四氢呋喃-3-基酯(化合物538a和化合物538b)
Figure BDA0003085169390005731
步骤1：反式-4-羟基四氢呋喃-3-甲腈
Figure BDA0003085169390005732
在室温下，将二乙基氰化铝(2.58g，23.24mmol)在甲苯中的溶液缓慢加入到3,4-环氧四氢呋喃(1.0g，11.62mmol)在甲苯(40mL)中的溶液中。搅拌过夜之后，通过缓慢加入1.0N NaOH溶液小心地淬灭反应混合物(警告：放热)，然后用水稀释。用乙酸乙酯萃取水性混合物。用水和盐水洗涤所合并的有机物，干燥(MgSO4)，过滤并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到反式-4-羟基四氢呋喃-3-甲腈(1g，8.841mmol，76.1％产率)，呈无色油状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.80-5.76(m,1H),4.53-4.49(m,1H),4.01-3.97(m,1H),3.94-3.91(m,1H),3.87-3.83(m,1H),3.52-3.49(m,1H),3.15-3.14(m,1H)。
步骤2：(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((4-氰基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005733
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.57mmol)和反式-4-羟基四氢呋喃-3-甲腈(129.0mg，1.14mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5mL，2.86mmol)。然后加入三光气(120.0mg，0.40mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时，然后在室温下搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(50:1)洗脱，得到(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((4-氰基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，0.346mmol，60.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝665。
步骤3：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氰基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氰基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005741
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4-氰基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.30mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三氟乙酸(8.0mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。用二氯甲烷稀释残余物，并且用三乙胺将溶液pH调节至pH8。然后在真空下浓缩混合物。通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速60mL/min；梯度：13B至43B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：(化合物538a)(7.9mg，0.0170mmol，5.6％产率)，呈黄色固体状。RT1.349min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE:EtOH＝70:30；1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+＝465.2,RT 1.886min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.35(s,1H),7.99(s,1H),7.33(s,1H),6.88(d,J＝6.6Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(s,1H),5.44-5.41(m,1H),4.29(s,2H),4.16-4.06(m,2H),3.89(t,J＝7.35Hz,2H),3.62-3.57(m,1H),3.36(s,2H),1.92(s,3H)。
对映异构体2：(化合物538b)(12.8mg，0.0274mmol，9.1％产率)，呈黄色固体状。RT2.474min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；流动相：MTBE:EtOH＝70:30；1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+＝465.2,RT 1.886min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.35(s,1H),7.99(s,1H),7.33(s,1H),6.88(d,J＝6.6Hz,1H),6.23(s,2H),5.67(s,1H),5.44-5.41(m,1H),4.29(s,2H),4.16-4.06(m,2H),3.89(t,J＝7.35Hz,2H),3.62-3.57(m,1H),3.36(s,2H),1.92(s,3H)。
实施例226
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基氨基)环丁酯(化合物539a)
Figure BDA0003085169390005751
步骤1：7-(3-((((1r,3r)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005761
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)、N-(3-羟基环丁基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(229mg，1.14mmol)和N,N'-二异丙基乙胺(736mg，5.71mmol)在二氯甲烷(18mL)中的溶液搅拌5分钟。然后逐滴加入三光气(169mg，0.57mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用乙酸乙酯/石油醚(4:1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.398mmol，69.9％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝753。
步骤2：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基氨基)环丁酯
Figure BDA0003085169390005762
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(50mg，0.070mmol)和TFA(1mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(X-Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm 5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：11％B至31％B，7min)纯化粗产物，得到(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基氨基)环丁酯(17.2mg，0.0377mmol，56.7％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝453.2,RT 1.421min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.33(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),5.08(p,J＝6.2Hz,1H),4.29(s,2H),3.45-3.3.5(m,2H),3.28-3.15(m,1H),2.32-2.09(m,7H),2.11-1.92(m,4H)。
实施例227
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代环丁酯盐酸盐(化合物541a)
Figure BDA0003085169390005771
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005781
在室温下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.62mmol)和DMAP(75.6mg，0.62mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液中加入3-氟代环丁醇(111.6mg，1.24mmol)。在90℃下将所得溶液搅拌5小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(310mg，0.483mmol，78％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝642.3。
步骤2：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390005782
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-氟代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将所得溶液搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并且用TEA将溶液的pH值调节至pH 8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至38％B，7min)进行纯化，得到产物的游离碱形式。然后将游离碱溶解在甲醇中，并且用HCl(0.04mL，1M二噁烷溶液)处理20分钟。在真空下浓缩混合物，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代环丁酯盐酸盐(32.8mg，0.068mmol，14.6％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝442.2。RT 2.019min；方法J。1H NMR 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.55(s,1H),6.92(d,J＝6.1Hz,1H),4.78-4.82(m,1H),4.58-4.62(m,1H),4.48(t,J＝4.4Hz,2H),3.48(t,J＝4.4Hz,2H),2.97-2.86(m,2H),2.22-2.33(m,2H),2.02(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例228
(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯(化合物542a和化合物542b)
Figure BDA0003085169390005791
步骤1：顺式-环丁烷-1,2-二醇
Figure BDA0003085169390005792
向1,2-(三甲基硅烷氧基)环丁烯(3.0g，13.02mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，800.0mg，6.35mmol。在室温下，在氢气下将混合物搅拌12小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)洗脱，得到顺式-环丁烷-1,2-二醇(300mg，3.40mmol，26.2％产率)，呈无色油状。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.59(s,2H),4.19(q,J＝3.7Hz,2H),2.17-1.69(m,4H)。
步骤2：(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[2-羟基环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005801
在90℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)、顺式-环丁烷-1,2-二醇(54.6mg，0.62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(37.8mg，0.31mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的溶液搅拌2小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈0-65/0.1％FA水溶液)纯化残余物，得到(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[2-羟基环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(90mg，0.141mmol，45.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝640.3。
步骤3：(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯和(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-羟基环丁酯
Figure BDA0003085169390005811
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-羟基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(84.0mg，0.13mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(2.5mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过制备型HPLC(CHIRALPAK IC，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE，流动相B：MeOH；流速：35mL/min；梯度：50％B至50％B，30min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物542a(7mg，0.016mmol，11.8％产率)。RT 0.906min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI):[M+H]+＝440.2,RT 1.942min。方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.40(s,1H),8.00(s,1H),7.53(s,1H),6.89(d,J＝6.1Hz,1H),5.03-4.90(m,1H),4.46(t,J＝4.2Hz,2H),4.30-4.32(m,1H),3.47(t,J＝4.3Hz,2H),2.15-1.98(m,6H),1.85-1.89(m,1H)。
对映异构体2：化合物542b(12mg，0.027mmol，19.6％产率)。RT 1.829min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝50:50)。LCMS(ESI):[M+H]+＝440.2,RT 1.942min。方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.40(s,1H),8.00(s,1H),7.53(s,1H),6.89(d,J＝6.1Hz,1H),5.03-4.90(m,1H),4.46(t,J＝4.2Hz,2H),4.30-4.32(m,1H),3.47(t,J＝4.3Hz,2H),2.15-1.98(m,6H),1.85-1.89(m,1H)。
实施例229
(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基酯和(1R,5S,6r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基酯(化合物543a和化合物543b)
Figure BDA0003085169390005821
步骤1：2-(二碘代甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
Figure BDA0003085169390005822
在-100℃下，在氮气下向硼酸三甲酯(19mL，157mmol)在四氢呋喃(250mL)中的溶液中加入正丁基锂(60mL，142mmol，2.5M正己烷溶液)。在-100℃下将所得溶液搅拌40分钟。然后加入二氯甲烷(10mL，157mmol)。在-100℃下将混合物搅拌30分钟。用HCl(30mL，5N水溶液)淬灭反应物。用水稀释反应混合物，并且用Et2O萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。
将残余物溶解在甲苯(300mL)中，然后加入频哪醇(1.67g，141.3mmol)。在110℃下将溶液搅拌18小时。在真空下浓缩溶液。将残余物再溶解在丙酮(400mL)中，并且加入碘化钠(5.4g，361.1mmol)。在室温下将溶液搅拌24小时。在真空下浓缩溶液，用水稀释并且用Et2O萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。然后将残余物悬浮在己烷中。倾析混合物以去除黑色不溶性固体，然后用己烷再结晶，得到2-(二碘代甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(8g，20.32mmol,12.9％产率)，呈黄色固体状。
步骤2：4,4,5,5-四甲基-2-[3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基]-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
Figure BDA0003085169390005831
在室温下，在氮气下将CrCl2(5.5g，44.71mmol)和TMEDA(5.2g，44.71mmol)在四氢呋喃(85mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入2-(二碘代甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(4.4g，11.18mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时。加入2,5-二氢呋喃(522.3mg，7.45mmol)，并且在50℃下将混合物再搅拌20小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到4,4,5,5-四甲基-2-[3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基]-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.2g，5.57mmol，74.7％产率)，呈淡黄色油状。
步骤3：3-氧杂双环[3.1.0]己-6-醇
Figure BDA0003085169390005832
在0℃下，将4,4,5,5-四甲基-2-[3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基]-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.15.0g，5.45mmol)在四氢呋喃(26mL)和水(26mL)中的溶液搅拌15分钟。然后加入NaBO3·4H2O(2.52g，16.35mmol)。在0℃下将混合物搅拌4小时。过滤反应混合物，并且用水稀释。用乙酸乙酯萃取所得溶液。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到3-氧杂双环[3.1.0]己-6-醇(400mg，4.0mmol，73.3％产率)，呈无色油状。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.29(s,1H),3.94(s,1H),3.73(d,J＝8.3Hz,2H),3.60-3.46(m,2H),1.64(q,J＝1.8Hz,2H)
步骤4.7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005841
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(210.0mg，0.40mmol)、DIEA(516.4mg，4mmol)和3-氧杂双环[3.1.0]己-6-醇(80.1mg，0.80mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入三光气(83.0mg，0.28mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应混合物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(112mg，0.17mmol，43％产率)，呈黄色固体状。
步骤5：(1R,5S,6s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基酯(化合物543a)和(1R,5S,6r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基酯(化合物543b)
Figure BDA0003085169390005851
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.38mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入TFA(2mL。在室温下将混合物搅拌3小时，并且在真空下浓缩。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并且用TEA将溶液的pH调节至8。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10％B至32％B，10min)进行纯化，得到立体异构体的混合物。通过手性HPLC进一步分离混合物，得到两种异构体。
异构体1：化合物543a(54.6mg，0.12mmol，31.5％产率)。RT 2.331min(CHIRALPAKIC-3 0.46*5cm；3μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.1,RT 2.132min；方法K.1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.46(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),6.96(d,J＝6.0Hz,1H),4.55(t,J＝4.4Hz,2H),3.90(d,J＝8.5Hz,2H),3.72(t,J＝1.7Hz,1H),3.60-3.66(m,2H),3.52(t,J＝4.3Hz,2H),2.27-2.01(m,5H)。
异构体2：化合物543b(12mg，0.027mmol，6.9％产率)。RT 3.307min(CHIRALPAKIC-3 0.46*5cm；3μm；流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.1,RT 2.132min；方法K.1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),9.46(s,1H),8.03(s,1H),7.60(s,1H),6.96(d,J＝6.0Hz,1H),4.55(t,J＝4.4Hz,2H),3.90(d,J＝8.5Hz,2H),3.72(t,J＝1.7Hz,1H),3.60-3.66(m,2H),3.52(t,J＝4.3Hz,2H),2.12-2.03(m,5H)。
实施例230
(3R,4S)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3S,4R)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物544a和化合物544b)
Figure BDA0003085169390005861
步骤1：(±)-反式-N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390005862
向N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(300.0mg，0.62mmol)、DIEA(801.9mg，6.20mmol)和反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(316.9mg，3.10mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(184.2mg，0.62mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应混合物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(200mg，0.33mmol，52.7％产率)，呈黄色油状。
步骤2：(3R,4S)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3S,4R)-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005871
向N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(200.0mg，0.33mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在0℃下将混合物搅拌1.5小时。在真空下浓缩反应混合物，再溶解在DCM中，并且用TEA将混合物的pH调节至pH 8。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5B至28B，7min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物544a(9.7mg，0.024mmol，7.2％产率)。RT 2.031min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝412.1,RT 0.963min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.35(s,1H),7.99(d,J＝1.9Hz,2H),7.66(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),4.84-4.87(m,1H),4.04-3.91(m,2H),3.76(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),3.34(dd,J＝8.4,4.7Hz,1H),2.30-2.37(m,1H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.07(d,J＝7.1Hz,3H)。
对映异构体2：化合物544b(5.1mg，0.012mmol，3.8％产率)。RT 2.527min(CHIRALPAK IA-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50)。LCMS(ESI)[M+H]+＝412.1,RT 0.963min，方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.35(s,1H),7.99(d,J＝1.9Hz,2H),7.66(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),4.84-4.87(m,1H),4.04-3.91(m,2H),3.76(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),3.34(dd,J＝8.4,4.7Hz,1H),2.30-2.37(m,1H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.07(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例231
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基)环丁酯盐酸盐(化合物447a)
Figure BDA0003085169390005881
在25℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-(甲基氨基)环丁基]酯(90mg，0.20mmol)和甲醛(40％，9.0mg，0.22mmol)在甲醇(8mL)中的溶液搅拌1小时。然后加入硼氢化钠(18mg，0.47mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)；流动相B：MeOH；流速：60mL/min；梯度：29％B至63％B，7min)纯化残余物，得到(1R,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基)环丁酯。然后向(1R,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基)环丁酯在甲醇(10mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(2ml，1N)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在真空下浓缩反应物，得到(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基)环丁酯盐酸盐(50.7mg，0.101mmol，50.6％产率)，呈红色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.2,RT 1.469min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),10.29(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.49(s,1H),6.90(d,J＝6.1Hz,1H),5.20(bs,3H),5.08(d,J＝3.8Hz,1H),4.43(s,2H),3.90-3.70(m,1H),3.60-3.40(m,2H),2.90-2.65(m,8H),2.43(d,J＝10.3Hz,2H),1.99(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例232
(+/-)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(化合物445ab)
Figure BDA0003085169390005891
步骤1：(+/-)-反式-7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)-3-氟代哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005901
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.95mmol)、(+/-)-反式-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(416mg，1.9mmol)和DIEA(613mg，4.75mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌0.5小时。然后加入三光气(146mg，0.49mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(65/35)洗脱，得到(+/-)-反式-7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)-3-氟代哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，0.778mmol，81.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771。
步骤2：(+/-)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390005902
在25℃下，将(+/-)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(800mg，1.04mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(4m)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法，用MeOH/水(44/56)进行纯化，得到(+/-)-反式-7-[8-氨基-7-氟-3-[[3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(580mg,1.0165mmol，97.9％产率)，呈黄色固体状。GCMS(ESI)[M+H]+＝471。
步骤3：(+/-)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390005911
在室温下，将3-氧杂环丁酮(534.82mg，7.42mmol)和(+/-)-反式-7-[8-氨基-7-氟-3-[[3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(350mg，0.74mmol)在甲醇(15mL)中的溶液搅拌10分钟。然后加入四异丙醇钛(849.82mg，2.99mmol)。在60℃下将混合物搅拌2小时。然后加入NaCNBH3(140.0mg，2.22mmol)。在室温下将混合物再搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法在硅胶上进行纯化，用[MeOH]/[水](66/34)洗脱，得到(+/-)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(3.2mg，0.0061mmol，0.8000％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2,RT 1.522min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.83-6.78(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),4.48-4.67(m,2H),4.58-4.46(m,2H),4.45-4.37(m,2H),4.27(s,2H),3.60-3.49(m,1H),3.39-3.32(m,2H),3.04-2.95(m,1H),2.69-2.57(m,1H),2.21-1.99(m,3H),1.90(s,3H),1.70-1.52(m,1H)。
实施例233
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1R,2S)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯和(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1S,2R)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯(化合物545a和化合物545b)
Figure BDA0003085169390005921
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005922
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.46mmol)和1-boc-3-羟基氮杂环丁烷(350mg，2.02mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入DMAP(60mg，0.49mmol)。在60℃下将反应物搅拌16小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.276mmol，59.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝725。
步骤2：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390005931
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.28mmol)在二氯甲烷(8mL)和TFA(2mL)中的溶液搅拌1小时。然后在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法(乙腈0-40/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(80mg，0.1885mmol，68.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝425。
步骤3：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1R,2S)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯和(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-((1S,2R)-2-氟代环丙烷-1-羰基)氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390005941
在25℃下，向N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸氮杂环丁-3-基酯(80mg，0.19mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入反式-2-氟代环丙烷甲酸(30mg，0.29mmol)、DIEA(100mg，0.78mmol)和HATU(80mg，0.21mmol)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC和手性HPLC纯化残余物，得到两种对映异构体。用HCl的1,4-二噁烷溶液(0.04M)处理该两种对映异构体，得到其盐酸盐。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物545a(21.3mg，0.0389mmol，20.7％产率)。RT 2.853min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝511.2,RT 1.943min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.52(s,1H),6.91(d,J＝6.1Hz,1H),5.62(bs,1H),5.31-5.19(m,2H),4.89(s,1H),4.69-4.67(m,2H),4.45-4.43(m,2H),4.28-4.26(m,2H),3.88-3.85(m,1H),3.47-3.46(m,2H),2.18(dt,J＝17.6,8.9Hz,1H),2.00(d,J＝1.6Hz,3H),1.50-1.36(m,1H),1.13(tt,J＝12.3,5.5Hz,1H)。
对映异构体2：化合物545b(20.8mg，0.038mmol，20.2％产率)。RT 4.366min(CHIRALPAK IG-3，0.46*5cm，3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30，8min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝511.2,RT 1.943min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.52(s,1H),6.91(d,J＝6.1Hz,1H),5.62(bs,1H),5.31-5.19(m,2H),4.89(s,1H),4.69-4.67(m,2H),4.45-4.43(m,2H),4.28-4.26(m,2H),3.88-3.85(m,1H),3.47-3.46(m,2H),2.18(dt,J＝17.6,8.9Hz,1H),2.00(d,J＝1.6Hz,3H),1.50-1.36(m,1H),1.13(tt,J＝12.3,5.5Hz,1H)。
实施例234
(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲氧基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲氧基四氢呋喃-3-基酯(化合物546a和化合物546b)
Figure BDA0003085169390005951
步骤1：(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-甲氧基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005952
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4色谱]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(3000.0mg，5.71mmol)和反式-4-甲氧基四氢呋喃-3-醇(2040.0mg，17.27mmol)在二氯甲烷(300mL)中的溶液中加入DIEA(3690.0mg，28.6mmol)。然后加入三光气(1800.0mg，6.07mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-甲氧基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(2100mg，3.1357mmol，54.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝670。
步骤2：(±)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲氧基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390005961
在室温下，将(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-甲氧基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1500.0mg，2.24mmol)在二氯甲烷(10mL)和TFA(10mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。用CH3CN稀释残余物。用NaHCO3将反应混合物调节至pH 8。过滤之后，收集固体并且用MeOH(50mL)洗涤，得到(±)-反式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲氧基四氢呋喃-3-基酯(602.8mg，1.252mmol，55.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝470.2,RT2.543min，方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.34(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.4Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(s,1H),5.15(d,J＝4.8Hz,1H),4.30-4.27(m,2H),3.99-3.91(m,3H),3.79(d,J＝10.4Hz,1H),3.69-3.36(m,1H),3.37(s,5H),1.92(s,3H)。
通过手性SFC(Chiralcel OX；等度50％MeOH+0.1％NH4OH)进一步纯化外消旋混合物，得到两种单一对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物546a)(39mg)：RT 0.707min(Chiralcel OX；等度50％MeOH+0.1％NH4OH，2.5min运行时间)。LCMS(ESI)[M+H]+＝470.2,RT 3.35，方法＝N。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.35(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(s,1H),5.15(d,J＝4.2Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.02–3.89(m,3H),3.79(m 1H),3.68(m,1H),3.37(s,5H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
对映异构体2(化合物546b)(19mg)：RT 0.901min(Chiralcel OX；等度50％MeOH+0.1％NH4OH，2.5min运行时间)。LCMS(ESI)[M+H]+＝470.2,RT 3.36，方法＝N。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(s,1H),5.15(d,J＝4.2Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.02–3.89(m,3H),3.79(m 1H),3.68(m,1H),3.37(s,5H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
5.03.47实施例235
(R)-(8-氨基-6-(7-氰基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物547a)
Figure BDA0003085169390005971
步骤1：N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(2-氰基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005981
在0℃下，向N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g，7.75mmol)在DMF(80mL)中的溶液中加入氢化钠(0.22g，9.17mmol)。在0℃下将反应物搅拌30分钟。然后逐滴加入2-(溴甲基)丙-2-烯腈(1.5g，10.27mmol)在DMF(5ml)中的溶液。在0℃下将所得混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(2-氰基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(3.3g，6.419mmol，82.8％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝478。
步骤2：7-溴-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005982
在25℃下，将氯化铟(416.0mg,1.88mmol)和甲醇钠(101.0mg，1.87mmol)在THF(30mL)中的溶液搅拌30分钟。加入二苯基硅烷(800mg，4.35mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌30分钟。然后加入N-(5-溴-2-碘-4-甲基-3-吡啶基)-N-(2-氰基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，1.88mmol)在THF(30mL)中的溶液和三乙基硼烷(185mg，1.888mmol)。在0℃下将混合物搅拌4小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到7-溴-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(325mg，0.924mmol，49.1％产率)，呈浅黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝325。
步骤3：3-氰基-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390005991
在100℃下，在氮气下将7-溴-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.57mmol)、双(频哪醇)二硼(1.44g，5.67mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(92mg，0.11mmol)和乙酸钾(111mg，1.13mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物搅拌2小时。用乙酸乙酯(10mL)稀释反应混合物并过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到3-氰基-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(124mg，0.2888mmol，50.8％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝400。
步骤4：N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390005992
在氮气下，将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.2g，3.72mmol)、(R)-3-羟基四氢呋喃(0.65g，7.39mmol)和N,N-二异丙基乙胺(6.83g，37.12mmol)在二氯甲烷(55ml)中的混合物加入含三光气(1.1g，3.7mmol)的二氯甲烷(5ml)。在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(900mg，2.061mmol，55.5％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝437。
步骤5：7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006001
在室温下，在氮气下向3-氰基-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)、N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(131mg，0.30mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(40.9mg，0.050mmol)和碳酸钾(34.59mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入水(1mL)。然后在90℃下将反应混合物搅拌2小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并过滤。在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(75mg，0.122mmol，48.8％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝582。
步骤6：7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006002
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.12mmol)、氨基甲酸叔丁酯(140mg，1.20mmol)、Brettphos Pd G3(22mg，0.020mmol)和碳酸钾(34mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的悬浮液搅拌2小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.12mmol)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝663。
步骤7：(R)-(8-氨基-6-(7-氰基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006011
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氰基-8-甲基-3,4-二氢-2H-1,5-萘啶-1-甲酸叔丁酯(45mg，0.070mmol)在二氯甲烷(2.5mL)和TFA(0.60mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm，5μm，n；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至25％B，7min)进行纯化，得到N-[8-氨基-6-(7-氰基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-1,5-萘啶-3-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(15.3mg，0.0321mmol，47.3％产率)，呈黄色固体状(非对映异构体的混合物)。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.2,RT 4.045min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.39(s,1H),8.01(s,2H),6.96(s,1H),6.52-6.37(m,2H),5.33-5.24(m,1H),3.92-3.69(m,4H),3.57(dd,J＝24.2,10.7Hz,3H),3.48-3.35(m,2H),2.28-2.12(m,2H),2.09-1.94(m,4H)。
实施例236
(R)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物548a和化合物548b)
Figure BDA0003085169390006021
步骤1：5-溴-4-甲基-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-3-甲酸甲酯
Figure BDA0003085169390006022
在室温下，将5-溴-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(2500.0mg，10.87mmol)和m-CPBA(3756.0mg，21.84mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌2小时。通过硫代硫酸钠水溶液淬灭反应物。用饱和NaHCO3水溶液将溶液的pH调节至pH 7-8。用二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机层并且在真空下浓缩，得到5-溴-4-甲基-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-3-甲酸甲酯(2400mg，9.75mmol，89％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝246.0。
步骤2：2,5-二溴-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯
Figure BDA0003085169390006023
在室温下，向5-溴-4-甲基-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-3-甲酸甲酯(1000.0mg，4.06mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入POBr3(1161.0mg，4.07mmol)。在65℃下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并且用NaHCO3水溶液中和。用乙酸乙酯萃取混合物。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱，得到2,5-二溴-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(500mg，1.62mmol，40％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝307.9。
步骤3：5-溴-2-(3-甲氧基-3-氧代-丙基)-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯
Figure BDA0003085169390006031
在室温下，将Zn(2.96g，45.54mmol)和I2(771.0mg，3.04mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(20mL)中的悬浮液搅拌10分钟。然后加入3-碘代丙酸甲酯(6.9g，32.24mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时并过滤。将滤液转移至2,5-二溴-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(2.33g，7.54mmol)和Pd(PPh3)4(2.36g，1.52mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(20mL)中的混合物中。在70℃下将混合物搅拌2小时，然后用乙酸乙酯稀释。用水洗涤所得溶液。在真空下浓缩有机层，并且通过反相色谱法进行纯化，用ACN/水(NH4HCO310 mmol/L)洗脱，得到5-溴-2-(3-甲氧基-3-氧代-丙基)-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(1070mg,3.38mmol，45％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝330.0。
步骤4：3-溴-4-甲基-5-氧代-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-6-甲酸甲酯
Figure BDA0003085169390006032
向5-溴-2-(3-乙氧基-3-氧代-丙基)-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(1070.0mg，3.24mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入NaOMe(1.2mL，6.48mmol)。在25℃下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)洗脱，得到3-溴-4-甲基-5-氧代-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-6-甲酸甲酯(372mg，1.31mmol，40％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝284.0。
步骤5：3-溴-4-甲基-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-5-酮
Figure BDA0003085169390006041
在100℃下，将3-溴-4-甲基-5-氧代-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-6-甲酸甲酯(367.0mg，1.29mmol)和LiCl(271.0mg，6.45mmol)在DMSO(10mL)和水(0.5mL)中的溶液搅拌1小时。通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)洗脱，得到3-溴-4-甲基-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-5-酮(234mg，1.035mmol，80％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝226.0。
步骤6：3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-醇
Figure BDA0003085169390006042
在25℃下，将3-溴-4-甲基-6,7-二氢环戊并[b]吡啶-5-酮(568.0mg，2.51mmol)和NaBH4(191.0mg，5.03mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌30分钟。浓缩之后，通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L)洗脱，得到3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-醇(535mg，2.34mmol，93％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝228.0。
步骤7：(3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-基)氧-叔丁基-二甲基-硅烷
Figure BDA0003085169390006043
在25℃下，将3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-醇(630.0mg，2.76mmol)、咪唑(1134.0mg，16.66mmol)和叔丁基氯代二甲基硅烷(1660.0mg，11.07mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(80/20)洗脱，得到(3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-基)氧-叔丁基-二甲基-硅烷(850mg,2.48mmol，89％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝342.1。
步骤8：[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]硼酸
Figure BDA0003085169390006051
在100℃下，将(3-溴-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-5-基)氧-叔丁基-二甲基-硅烷(800.0mg，2.34mmol)、Pd(dppf)Cl2(382.0mg，0.52mmol)、B2Pin2(4750.0mg，18.7mmol)和KOAc(688.0mg，7.02mmol)在DMSO(10mL)中的混合物搅拌2小时。通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)(5％至100％，30min)洗脱，然后用100％MeOH洗脱，得到[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]硼酸(510mg，1.66mmol，71％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝308.2。
步骤9：N-[6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390006052
在70℃下，将N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(476.0mg，1.09mmol)、[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]硼酸(510.0mg，1.66mmol)、Pd(dppf)Cl2(178.0mg，0.24mmol)和K2CO3(451.0mg，3.27mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(40/60)洗脱，得到N-[6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(300mg,0.52mmol，48％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝572.2。
步骤10：N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390006061
在100℃下，将N-[6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(400.0mg，0.70mmol)、氨基甲酸叔丁酯(2040.0mg，17.41mmol)、Pd2(dba)3·CHCl3(142.0mg，0.14mmol)、Brettphos(147.0mg，0.27mmol)和Cs2CO3(680.0mg，2.09mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(20/80)洗脱，得到N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(270mg，0.413mmol，59％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝653.3。
步骤11：N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯
Figure BDA0003085169390006071
在25℃下，将N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[5-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(240.0mg，0.37mmol)和TBAF(233.0mg，0.74mmol)在四氢呋喃(4mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，并且通过反相色谱法进行纯化，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)洗脱，得到N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(190mg，0.35mmol，96％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝539.2。
步骤12：(R)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006072
在25℃下，将N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-[(5S)-5-羟基-4-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-3-基]-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(150.0mg，0.28mmol)和TFA(2.0mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC纯化残余物，得到立体异构体的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种立体异构体。任意指定醇的绝对立体化学结构。
异构体1(化合物548a)(16.7mg，0.038mmol，14％产率)；RT 1.297min(CHIRALPAKIC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝90:10；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝539.2,RT 1.761min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.42(s,1H),8.72(s,1H),8.03(s,1H),6.99(d,J＝6.0Hz,1H),5.82-4.86(m,5H),3.90-3.70(m,4H),3.42-3.30(m,1H),3.19-2.96(m,1H),2.51-2.42(m,4H),2.32-1.87(m,3H)。
异构体2(化合物548b)(14.5mg，0.0331mmol，11.9％产率)；RT 2.128min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):MeOH＝90:10；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝539.2,RT 1.761min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.42(s,1H),8.72(s,1H),8.03(s,1H),6.99(d,J＝6.0Hz,1H),5.82-4.86(m,5H),3.90-3.70(m,4H),3.42-3.30(m,1H),3.19-2.96(m,1H),2.51-2.42(m,4H),2.32-1.87(m,3H)。
实施例237
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-氰基丙-2-基)环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-氰基丙-2-基)环丁酯(化合物549a和化合物549b)
Figure BDA0003085169390006091
步骤1：2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]-2-甲基-丙腈
Figure BDA0003085169390006092
在0℃下，在氮气下向2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]乙腈(2600mg，7.44mmol)在四氢呋喃(130mL)中的溶液中加入LDA(24mL，44.63mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌1小时。然后在0℃下加入碘甲烷(5200mg，36.62mmol)，并且在室温下将混合物搅拌3小时。用NH4Cl水溶液淬灭反应物。用乙酸乙酯萃取所得混合物，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/二氯甲烷(2/1)洗脱，得到2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]-2-甲基-丙腈(1.6g，4.237mmol，57％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝378。
步骤2：2-(3-羟基环丁基)-2-甲基-丙腈
Figure BDA0003085169390006093
在室温下，向2-[3-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧环丁基]-2-甲基-丙腈(1.6g，4.24mmol)在THF(6mL)中的溶液中加入TBAF(3.317g，12.71mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到2-(3-羟基环丁基)-2-甲基-丙腈(450mg，3.233mmol，76.3％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝140。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(1-氰基-1-甲基-乙基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006101
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.57mmol)和2-(3-羟基环丁基)-2-甲基-丙腈(300mg，2.16mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入DIEA(800mg，6.20mmol)。然后加入三光气(200mg，0.6700mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(1-氰基-1-甲基-乙基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.376mmol，65.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝691。
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-氰基丙-2-基)环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(2-氰基丙-2-基)环丁酯
Figure BDA0003085169390006111
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(1-氰基-1-甲基-乙基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.38mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2mL，0.38mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC和手性HPLC纯化粗产物，得到两种对映异构体。任意指定立体化学结构。
对映异构体1(化合物549a)(2.4mg，0.0049mmol，1.3％产率)。RT 2.064min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm，3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50，5min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝491.2,RT 1.334min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.04(p,J＝6.7Hz,1H),4.29-4.28(m,2H),3.40-3.38(m,2H),2.60-2.58(m,1H),2.44-2.21(m,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.26(s,6H)。
对映异构体2(化合物549b)(47.3mg，0.0964mmol，25.6％产率)。RT2.987min(CHIRALPAK IC-3，46*5cm，3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝491.2,RT 1.343min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.34(s,1H),7.97(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),5.04(p,J＝6.7Hz,1H),4.29-4.28(m,2H),3.40-3.38(m,2H),2.60-2.58(m,1H),2.44-2.21(m,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.26(s,6H)。
实施例238
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-吗啉代环丁酯(化合物550a)
Figure BDA0003085169390006121
步骤1：反式-4-(3-苯甲氧基环丁基)吗啉
Figure BDA0003085169390006122
在100℃下，在氮气下将甲磺酸(3-苯甲氧基环丁基)酯(400.0mg，1.56mmol)在吗啉(2.5mL，1.56mmol)中的溶液搅拌10小时。在真空下浓缩反应物。通过反相色谱法纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)(60/40)洗脱，得到反式-4-(3-苯甲氧基环丁基)吗啉(270mg，1.09mmol，70％产率)，呈浅黄色油状。LC/MS(ESI)[M+H]+＝248.2。
步骤2：反式-3-吗啉代环丁醇
Figure BDA0003085169390006123
在40℃下，在氢气下将反式-4-(3-苯甲氧基环丁基)吗啉(260.0mg，1.05mmol)和Pd/C(10％，130.0mg)在甲醇(10mL)中的混合物搅拌24小时。过滤反应混合物并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到反式-3-吗啉代环丁醇(165mg，1.05mmol，99％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝158.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.92(d,J＝5.2Hz,1H),4.19-4.07(m,1H),3.56(t,J＝4.6Hz,4H),2.79-2.65(m,1H),2.23(s,4H),2.09(m,2H),1.83(m,2H)。
步骤3：反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-吗啉代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006131
在90℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(233.0mg，0.36mmol)和DMAP(44.0mg，0.36mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入反式-3-吗啉-4-基环丁醇(170.0mg，1.08mmol)。将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法在硅胶上纯化残余物，用ACN/水(10mmol/L NH4HCO3)(42/58)洗脱，得到反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-吗啉代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(110mg，0.15mmol，43％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝709.3。
步骤4：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-吗啉代环丁酯(化合物550a)
Figure BDA0003085169390006141
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-吗啉代环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100.0mg，0.14mmol)和TFA(2.0mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌3小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；水(0.1％FA):ACN＝5％B至21％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-吗啉代环丁基)酯(42mg，0.083mmol，58％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝509.2；RT 1.063min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),10.07(s,1H),9.36(s,1H),7.96(s,1H),7.35(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.84-5.07(m,3H),5.22-5.10(m,1H),4.35-4.30(m,2H),4.14-3.90(m,4H),3.71-3.64(m,2H),3.50-3.32(m,3H),3.10-2.90(m,2H),2.80-2.64(m,2H),2.56-2.40(m,2H),1.93(s,J＝1.7Hz,3H)。
实施例239
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-环丙基-3-羟基-环丁基)酯(化合物551a)
Figure BDA0003085169390006151
步骤1：3-苯甲氧基-1-环丙基-环丁醇
Figure BDA0003085169390006152
在0℃下，在氮气下向3-(苯甲氧基)环丁酮(500.0mg，2.84mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入环丙基溴化镁(11mL，1M，11mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩，得到3-苯甲氧基-1-环丙基-环丁醇(600mg，2.75mmol，96％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝219.1。
步骤2：1-环丙基环丁烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390006153
在40℃下，在氢气(1大气压)下，将3-苯甲氧基-1-环丙基-环丁醇(750.0mg，3.44mmol)和Pd/C(10％，400.0mg，3.44mmol)在甲醇(20mL)中的悬浮液搅拌24小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1-环丙基环丁烷-1,3-二醇(200mg，1.56mmol，45％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝129.1。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.86(d,J＝5.8Hz,1H),3.17(d,J＝5.3Hz,2H),2.18(m,2H),1.88–1.75(m,2H),0.98–0.81(m,1H),0.34–0.23(m,2H),0.18(m,2H)。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-环丙基-3-羟基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006161
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.310mmol)和DMAP(38.0mg，0.31mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入1-环丙基环丁烷-1,3-二醇(119.0mg，0.93mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌24小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-环丙基-3-羟基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.20mmol，66％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝680.1。
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-环丙基-3-羟基-环丁基)酯
Figure BDA0003085169390006162
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-环丙基-3-羟基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100.0mg，0.15mmol)和HCl(1.0mL，4M，4mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；水(10mmol/LNH4HCO3):ACN＝19％B至40％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-环丙基-3-羟基-环丁基)酯(4.2mg,0.0088mmol，6％产率)，呈浅黄色固体状(立体异构体的混合物)。LCMS(ESI)[M+H]+＝480.1,RT 4.468min，方法M；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(s,1H),6.19(s,2H),5.66(s,1H),5.15–5.03(m,1H),4.84(s,1H),4.35-4.25(m,2H),3.42-3.35(m,2H),2.35-2.19(m,2H),2.01-1.88(m,5H),1.10-0.99(m,1H),0.41-0.32(m,2H),0.31-0.28(m,2H)。
实施例240
(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(甲基磺酰基)氮杂环丁-3-基酯(化合物552)
Figure BDA0003085169390006171
步骤1：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006181
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.29mmol)和1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-醇(150mg，0.99mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入DIEA(350mg，2.71mmol)。然后加入三光气(90mg，0.30mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.1708mmol，59.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝703。
步骤2：(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(甲基磺酰基)氮杂环丁-3-基酯
Figure BDA0003085169390006182
在25℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.17mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在25℃下将反应物搅拌1小时，然后在真空下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-甲基磺酰基氮杂环丁-3-基)酯(49.8mg，0.0991mmol，58％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝503.2,RT0.961min，方法K。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),9.37(s,1H),7.96(s,1H),7.37(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.26(s,2H),5.77(s,1H),5.21(tt,J＝6.7,4.7Hz,1H),4.32(t,J＝4.4Hz,2H),4.24(dd,J＝9.5,6.7Hz,2H),3.94(dd,J＝9.7,4.7Hz,2H),3.39(d,J＝8.9Hz,2H),3.08(s,3H),1.94(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例241
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯
(化合物445c和化合物445d)
Figure BDA0003085169390006191
步骤1：(±)-顺式-7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)-3-氟代哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006201
在0℃下，将7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1000mg，1.9mmol)、(±)-顺式-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(833mg，3.8mmol)、三光气(373mg，1.26mmol)和DIEA(1226.0mg，9.5mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。在真空下浓缩有机层，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(80/20)洗脱，得到(±)-顺式-7-(3-((((1-(叔丁氧基羰基)-3-氟代哌啶-4-基)氧)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1126mg，1.461mmol，76.8％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝771。
步骤2：(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟代哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390006202
在25℃下，将(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[1-叔丁氧基羰基-3-氟-4-哌啶基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1116.0mg，1.45mmol)在二氯甲烷(6mL)和TFA(3mL)中的溶液搅拌6小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过反相色谱法(水(NH4HCO3)/MeOH(56/44))进行纯化，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-4-哌啶基)酯(436mg，0.927mmol，64％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝471。
步骤3：(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯
在60℃下，将(±)-顺式-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氟-4-哌啶基)酯(426.0mg，0.91mmol)、3-氧杂环丁酮(651.0mg，9.03mmol)和四异丙醇钛(1027.0mg，3.62mmol)在甲醇(15mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入NaCNBH3(171.0mg，2.71mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法(水(NH4HCO3)/ACN(35/65))纯化所得残余物，得到(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(170mg，0.3229mmol，35.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝526。
步骤4：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯
Figure BDA0003085169390006221
在室温下，将(±)-顺式-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-(氧杂环丁-3-基)哌啶-4-基酯(420mg，0.89mmol)和3-氧杂环丁酮(651.0mg，9.03mmol)在甲醇(15mL)中的溶液搅拌10分钟。然后加入四异丙醇钛(1027mg，3.62mmol)，并且在60℃下将混合物搅拌1小时。然后加入NaCNBH3(172.0mg，2.73mmol)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至26％B，10min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物445c)(48mg，0.0912mmol，2.5％产率)。RT 2.267min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1):MeOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝527.2,RT 1.444min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),4.94-4.78(m,2H),4.53-4.26(m,6H),3.51(p,J＝6.4Hz,1H),3.33(s,2H),2.78(s,1H),2.51(s,1H),2.45-2.18(m,2H),1.90-1.83(m,5H)。
对映异构体2(化合物445d)(25mg，0.0475mmol，1.3％产率)。RT3.911min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1):MeOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝527.2,Rt＝1.444min；方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.81(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.65(s,1H),4.94-4.78(m,2H),4.53-4.26(m,6H),3.51(p,J＝6.4Hz,1H),3.33(s,2H),2.78(s,1H),2.51(s,1H),2.45-2.18(m,2H),1.90-1.83(m,5H)。
实施例242
(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物441c和化合物441d)
Figure BDA0003085169390006231
步骤1：(±)-反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390006232
在-60℃下，在氮气下向CuI(16.6g，87.16mmol)在THF(750mL)中的溶液中加入甲基氯化镁(289.7mL，869.1mmol，3M THF溶液)。在-60℃下将所得溶液搅拌30分钟。然后加入3,4-环氧四氢呋喃(50.0g，580.8mmol)，并且在-60℃下搅拌3小时。用氯化铵水溶液淬灭反应物。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层并且经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(±)-反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(31g，303.53mmol，52.3％产率)，呈黄色油状。
步骤2：(±)-顺式-4-硝基苯甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390006241
在0℃下，向(±)-反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(1.0g，9.79mmol)、4-硝基苯甲酸(3.27g，19.58mmol)和PPh3(6.42g，24.48mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(4.82mL，24.48mmol)。在室温下将所得溶液搅拌4小时。在真空下浓缩所得混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(±)-顺式-4-硝基苯甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(1.5g，5.98mmol，61％产率)，呈黄色固体状。
步骤3：(±)-顺式-(3R,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390006242
在室温下，向(±)-顺式-4-硝基苯甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(1.5g，5.98mmol)在水(5mL)和四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入氢氧化锂(430.56mg，17.94mmol)。在室温下将所得混合物搅拌3小时。用水稀释反应物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(±)-顺式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(330mg，3.23mmol，32.5％产率)，呈黄色油状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.71(d,J＝4.5Hz,1H),4.04(qd,J＝4.6,1.8Hz,1H),3.83-3.72(m,2H),3.52(dd,J＝9.2,1.8Hz,1H),3.25(dd,J＝10.1,7.5Hz,1H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤4：(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006251
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(310.63mg，0.59mmol)、(±)-顺式-(3R,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-醇(120.0mg，1.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.31mL，1.76mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三光气(123.0mg，0.41mmol)。在室温下将所得溶液搅拌30分钟，并且在真空下浓缩。通过快速柱色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/3)洗脱，得到(±)-顺式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.49mmol，82.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝654.3。
步骤5：(3R,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3S,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006261
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(顺式)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(5.0mL，64.9mmol)。在室温下将所得溶液搅拌30分钟，并且在真空下浓缩。然后用乙腈稀释所得溶液，并且用碳酸氢钠水溶液调节至pH 8。过滤之后，收集固体并且用水洗涤。将固体溶解在甲醇中，并且用HCl(0.2mL，1M二噁烷溶液)处理。然后在真空下浓缩所得混合物，得到外消旋产物。通过手性HPLC进一步分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物441c(32.9mg，0.0618mmol，23.4％产率)，呈黄色固体状。RT1.493min(CHIRALPAK IA-3，4.6*50mm 3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％FA):EtOH＝50:50；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.870min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.51(s,1H),6.90(d,J＝6.1Hz,1H),5.26-5.16(m,1H),4.45(s,2H),4.08-3.87(m,2H),3.84-3.71(m,1H),3.57-3.30(m,3H),2.49-2.33(m,1H),2.00(d,J＝1.6Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
对映异构体2：化合物441d(31mg，0.0618mmol，22.3％产率)，呈黄色固体状。RT3.114min(CHIRALPAK IA-3，4.6*50mm 3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％FA):EtOH＝50:50；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.870min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.51(s,1H),6.90(d,J＝6.1Hz,1H),5.26-5.16(m,1H),4.45(s,2H),4.08-3.87(m,2H),3.84-3.71(m,1H),3.57-3.30(m,3H),2.49-2.33(m,1H),2.00(d,J＝1.6Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例243
(1s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-乙基-3-羟基环丁酯和(1r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-乙基-3-羟基环丁酯盐酸盐(化合物512a和化合物512b)
Figure BDA0003085169390006271
步骤1：3-(苯甲氧基)-1-乙基环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390006272
在0℃下，向3-(苯甲氧基)环丁酮(1.0g，5.68mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入乙基氯化镁(8.51mL，17.03mmol，2mol/L)。在室温下将混合物搅拌2小时，然后用MeOH淬灭。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/90)洗脱，得到3-苯甲氧基-1-乙基-环丁醇(300mg，1.454mmol，25.6％产率)，呈无色油状。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.60–6.93(m,5H),4.34(s,2H),3.61(p,J＝7.1Hz,1H),2.31(m,1H),1.88(m 2H),1.54–1.21(m,2H),1.04–0.57(m,3H)。
步骤2：1-乙基环丁烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390006281
向3-苯甲氧基-1-乙基-环丁醇(300mg，1.45mmol)在甲醇(6mL)中的溶液中加入Pd/C(150mg，20％)。在40℃下，在氢气(1大气压)下将混合物搅拌8小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1-乙基环丁烷-1,3-二醇(100mg，0.861mmol，59.2％产率)，呈无色油状。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((3-乙基-3-羟基环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006282
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(170mg，0.26mmol)和1-乙基环丁烷-1,3-二醇(90mg，0.77mmol)在二氯甲烷(6mL)中的混合物中加入DMAP(32mg，0.26mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-乙基-3-羟基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.225mmol，85.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668。
步骤4：(1s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-乙基-3-羟基环丁酯盐酸盐和(1r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-乙基-3-羟基环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006291
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-乙基-3-羟基-环丁氧基)羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(145.0mg，0.22mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌3小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10％B至32％B，10min)纯化残余物，得到两种异构体。在室温下，将个别异构体用2当量的HCl的二噁烷溶液(4M)处理30分钟。浓缩之后，将每一种异构体冻干。任意指定立体化学结构。
异构体1：化合物512a(3.5mg，0.0069mmol，3.2％产率)，LCMS(ESI)[M+H]+＝468,RT＝2.635min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.35(s,1H),7.95(s,1H),7.47(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.39-4.51(t,J＝6.7Hz,5H),4.41(d,J＝4.1Hz,2H),3.44(m,2H),2.31(dd,J＝13.1,7.4Hz,2H),2.07-1.94(m,5H),1.55(q,J＝7.4Hz,2H),0.82(t,J＝7.3Hz,3H)。
异构体2：化合物512b(27.8mg，0.0552mmol，25.4％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468,RT＝1.732min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.37(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.55-4.96(m,4H),4.53(q,J＝7.2Hz,1H),4.43(s,2H),3.44(s,2H),2.44(dd,J＝6.9,2.9Hz,2H),2.12-2.04(m,2H),1.98(d,J＝1.6Hz,3H),1.44(q,J＝7.2Hz,2H),0.84(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例244
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯(化合物477c和化合物477d)
Figure BDA0003085169390006301
步骤1：顺式-4-硝基苯甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006302
在室温下，在氮气下将PPh3(3.21g，12.25mmol)在THF(40mL)中的溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(2.41mL，12.25mmol)。在室温下将所得溶液搅拌1小时。然后加入含反式-4-氟代四氢呋喃-3-醇(1.0g，9.43mmol)和4-硝基苯甲酸(1.58g，9.43mmol)的THF，并且在室温下将混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到顺式-4-硝基苯甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯(3.5g，52％纯度)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝256.1。
步骤2：顺式-4-氟代四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390006311
向顺式-4-硝基苯甲酸(4-氟代四氢呋喃-3-基)酯(3.5g，13.67mmol)在甲醇(180mL)中的溶液中加入K2CO3(9.45g，68.35mmol)，并且在室温下将混合物搅拌1.5小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到4-氟代四氢呋喃-3-醇(500mg，4.71mmol，50％产率)，呈微黄色油状。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.26(d,J＝6.0Hz,1H),5.02-4.56(m,1H),4.26-4.14(m,1H),3.98-3.78(m,3H),3.43-3.38(m,1H)。
步骤3：(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-氟代四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006312
在60℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)、4-二甲基氨基吡啶(60.0mg，0.49mmol)和顺式-4-氟代四氢呋喃-3-醇(249.0mg，2.35mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液搅拌过夜。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(50/1)洗脱，得到(±)-顺式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((4-氟代四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(270mg，0.41mmol，88.4％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝658。
步骤4：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-氟代四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006321
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟代四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260.0mg，0.40mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(4.0mL，51.92mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。用二氯甲烷稀释混合物，并且用三乙胺将pH调节至pH 8。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：12B至38B，7min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性制备型HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定，
对映异构体1：化合物477c(39.2mg，0.084mmol，21.2％产率)。RT1.726min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50。1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+458.2,RT 1.727min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.53(s,1H),6.92(d,J＝6.0Hz,1H),5.43-5.18(m,2H),4.47(t,J＝4.0Hz,2H),4.07-4.03(m,2H),4.01-3.92(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.47(s,2H),2.01(s,3H)。
对映异构体2：化合物477d(41mg，0.0873mmol，22.1％产率)。RT2.403min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50。1ml/min)；LCMS(ESI):[M+H]+458.2,RT 1.727min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.40(s,1H),7.99(s,1H),7.53(s,1H),6.92(d,J＝6.0Hz,1H),5.43-5.18(m,2H),4.47(t,J＝4.0Hz,2H),4.07-4.03(m,2H),4.01-3.92(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.47(s,2H),2.01(s,3H)。
实施例245
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁基酯(化合物513a)
Figure BDA0003085169390006331
步骤1：1-((1s,3s)-3-(苯甲氧基)环丁基)-3,3-二氟氮杂环丁烷
Figure BDA0003085169390006332
在室温下将3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(3.7g，28.38mmol)在甲醇(20mL)中的溶液搅拌5分钟。然后在室温下加入N,N-二异丙基乙胺(3.7g，28.38mmol)、3-(苯甲氧基)环丁酮(1.0g，5.68mmol)和四异丙醇钛(4.8g，17.03mmol)，并且在60℃下将混合物搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(1.07g，17.03mmol)，并且在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到1-(3-苯甲氧基环丁基)-3,3-二氟-氮杂环丁烷(415mg,1.6mmol，28.9％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝254。
步骤2：(1s,3s)-3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390006341
在室温下，在氢气下将1-(3-苯甲氧基环丁基)-3,3-二氟-氮杂环丁烷(360mg，1.42mmol)和Pd/C(10％，180mg)在甲醇(8mL)中的悬浮液搅拌4小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(1s,3s)-3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁-1-醇(150mg，0.91mmol，64.5％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝164。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.01-4.93(m,1H),4.20-4.24(m,1H),3.74-3.78(m,1H),3.47-3.51(m,4H),2.34-2.19(m,1H),1.95-1.99(m,1H),1.88-1.74(m,1H),1.67-1.52(m,1H)。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006342
在60℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(317.0mg，0.49mmol)、(1s,3s)-3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁-1-醇(120.0mg，0.74mmol)和4-二甲基氨基吡啶(60.0mg，0.49mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(186mg,0.26mmol，53％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝715。
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁酯
Figure BDA0003085169390006351
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(170.0mg，0.24mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入TFA(1.0mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在DCM中，并用TEA调节至pH 8。在真空下浓缩所得混合物。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：27B％至45％B，8min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-(3,3-二氟氮杂环丁-1-基)环丁基]酯(31.7mg，0.062mmol，25.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝515.2,RT 1.666min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.69-4.74(m,1H),4.29(t,J＝4.3Hz,2H),3.57(t,J＝12.6Hz,4H),3.38(s,2H),2.99-3.04(m,1H),2.55(s,2H),1.96-1.80(m,5H)。
实施例246
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(1H-咪唑-1-基)环丁酯盐酸盐(化合物514a)
Figure BDA0003085169390006361
步骤1：(1s,3s)-甲磺酸3-(苯甲氧基)环丁酯
Figure BDA0003085169390006362
向3-苯甲氧基环丁醇(200.0mg，1.12mmol)和TEA(350.0mg，3.47mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(200.0mg，1.75mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩，得到甲磺酸(3-苯甲氧基环丁基)酯(220mg，0.858mmol，76.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝257。
步骤2：1-((1r,3r)-3-(苯甲氧基)环丁基)-1H-咪唑
Figure BDA0003085169390006363
向(1s,3s)-甲磺酸3-(苯甲氧基)环丁酯(750mg，2.93mmol)和咪唑(796mg，11.69mmol)在DMF(15mL)中的混合物中加入碳酸铯(4775mg，14.65mmol)。在80℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过反相色谱法(乙腈0-60/0.1％NH4OH水溶液)纯化所得残余物，得到1-((1r,3r)-3-(苯甲氧基)环丁基)-1H-咪唑(356mg，1.559mmol，53.3％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝227。
步骤3：(1r,3r)-3-(1H-咪唑-1-基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390006371
向1-(3-苯甲氧基环丁基)咪唑(358mg，1.57mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入Pd/C(800mg，10％)。在40℃下，在氢气(1大气压)下将混合物搅拌8小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到3-咪唑-1-基环丁醇(170mg，1.23mmol，78.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝139。
步骤4：7-(3-((((1r,3r)-3-(1H-咪唑-1-基)环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006372
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.39mmol)和3-咪唑-1-基环丁醇(245mg，1.77mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入DMAP(50mg，0.41mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(90/10)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-咪唑-1-基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.203mmol，52.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝690。
步骤5：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(1H-咪唑-1-基)环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006381
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-咪唑-1-基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.20mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X Bridge Prep Phenyl OBD柱，5μm，19*250mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：29％B至45％B，9min)纯化残余物，得到所需产物。用HCl的二噁烷溶液(5ml，3mol/L)处理游离碱物质，并且在室温下搅拌30分钟。在真空下浓缩所得溶液，得到(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(1H-咪唑-1-基)环丁酯盐酸盐(55.2mg，0.105mmol，51.7％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝490.3,RT 1.560min，方法J；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),9.41(s,1H),9.34(t,J＝1.5Hz,1H),8.00(dd,J＝3.6,1.8Hz,2H),7.77(t,J＝1.7Hz,1H),7.47(s,1H),6.89(d,J＝6.1Hz,1H),6.17-5.71(m,3H),5.21(d,J＝7.3Hz,2H),4.42(s,2H),3.44(s,2H),2.96(dt,J＝13.9,7.0Hz,2H),2.76(ddd,J＝14.3,8.5,3.6Hz,2H),1.99(d,J＝1.7Hz,3H)。
实施例247
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-乙基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-乙基四氢呋喃-3-基酯((化合物515a和化合物515b
Figure BDA0003085169390006391
步骤1：(±)-反式-4-乙基四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390006392
向CuI(331.0mg，1.74mmol)在THF(50mL)中的混合物中加入乙基氯化镁(8.7mL，17.4mmol，2mol/L)。在-40℃下将混合物搅拌30分钟。然后加入3,4-环氧四氢呋喃(1000mg，11.62mmol)，并且在-40℃下将混合物搅拌2小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩，得到4-乙基四氢呋喃-3-醇(1100mg，9.469mmol，81.5％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝117.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.87(d,J＝3.6Hz,1H),3.94–3.84(m,2H),3.72(m,1H),3.43(m,1H),3.32(m,1H),1.83(m,1H),1.44–1.31(m,1H),1.28–1.12(m,1H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H)。
步骤2：(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3S,4R)-4-乙基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006393
在60℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.46mmol)和DMAP(57.0mg，0.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入4-乙基四氢呋喃-3-醇(161.0mg，1.39mmol)。将混合物搅拌12小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到(±)-反式-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[4-乙基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.4493mmol，96.7％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668.3。
步骤3：(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-乙基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-乙基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006401
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4-乙基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.45mmol)和TFA(2.0mL，0.45mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌3小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：17％B至41％B，10min)纯化残余物，得到外消旋物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物515a)(27.4mg，0.0586mmol，13％产率)：RT 1.775min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.279min；方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.30(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),4.94(dt,J＝4.4,2.1Hz,1H),4.30(t,J＝4.3Hz,2H),3.98(dd,J＝8.7,6.8Hz,1H),3.91-3.84(m,5H),3.37(d,J＝4.1Hz,3H),2.18–2.08(m,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.49(dd,J＝14.1,7.0Hz,1H),1.41-1.29(m,1H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
对映异构体2(化合物515b)(24.4mg，0.0522mmol，11.6％产率)：RT2.996min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.279min；方法K；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.30(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),4.94(dt,J＝4.4,2.1Hz,1H),4.30(t,J＝4.3Hz,2H),3.98(dd,J＝8.7,6.8Hz,1H),3.91-3.84(m,5H),3.37(d,J＝4.1Hz,3H),2.18–2.08(m,1H),1.91(d,J＝1.6Hz,3H),1.49(dd,J＝14.1,7.0Hz,1H),1.41-1.29(m,1H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例248
(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-环丙基四氢呋喃-3-基酯和(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-环丙基四氢呋喃-3-基酯(化合物516a和化合物516b)
Figure BDA0003085169390006421
步骤1：(±)-反式-4-环丙基四氢呋喃-3-醇
Figure BDA0003085169390006422
向3,4-环氧四氢呋喃(1000mg，11.62mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐滴加入环丙基溴化镁(17.4mL，1M THF溶液，17.4mmol)，然后在-40℃下将混合物搅拌2小时。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(±)-反式-4-环丙基四氢呋喃-3-醇(1300mg，10.143mmol，87.3％产率)，呈无色油状。
步骤2：(±)-反式-7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((4-环丙基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006423
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.46mmol)和(±)-反式-4-环丙基四氢呋喃-3-醇(300mg，2.34mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入DMAP(57.0mg，0.47mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4-环丙基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.206mmol，44.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝680。
步骤3：(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-环丙基四氢呋喃-3-基酯和
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-环丙基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006431
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4-环丙基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.22mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：27％B至43％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物516a(13.1mg，0.0254mmol，11.5％产率)。RT 1.826min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝480.2,RT 2.507min；方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.49(s,1H),6.89(d,J＝6.2Hz,1H),5.07(dd,J＝4.7,2.3Hz,1H),4.51-4.42(m,4H),4.16-3.96(m,3H),3.75(d,J＝10.7Hz,1H),3.52(dd,J＝8.5,4.6Hz,1H),3.49-3.39(m,2H),1.98(s,3H),1.70(s,1H),0.81-0.72(m,1H),0.53-0.42(m,2H),0.29(s,1H),0.20(s,1H)。
对映异构体2：化合物516b(12.5mg，0.0242mmol，11％产率)，呈黄色固体状。RT3.068min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝480.2,RT 2.507min；方法L；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.49(s,1H),6.89(d,J＝6.2Hz,1H),5.07(dd,J＝4.7,2.3Hz,1H),4.51-4.42(m,4H),4.16-3.96(m,3H),3.75(d,J＝10.7Hz,1H),3.52(dd,J＝8.5,4.6Hz,1H),3.49-3.39(m,2H),1.98(s,3H),1.70(s,1H),0.81-0.72(m,1H),0.53-0.42(m,2H),0.29(s,1H),0.20(s,1H)。
实施例249
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁酯(化合物517a)
Figure BDA0003085169390006441
步骤1.氮杂环丁-1-基((1s,3s)-3-羟基环丁基)甲酮
Figure BDA0003085169390006442
向顺式-3-羟基环丁烷甲酸(300.0mg，2.58mmol)、氮杂环丁烷(221.4mg，3.88mmol)和DIEA(1.0g，7.74mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入HATU(1.47g，3.87mmol)。在室温下将混合物搅拌3小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到氮杂环丁-1-基((1s,3s)-3-羟基环丁基)甲酮(230mg，1.60mmol，62.2％产率)，呈灰白色固体状。
步骤2：7-(3-((((1s,3s)-3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006451
在0℃下，向7-[3-氨基-7-氟-8-(异丙氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.29mmol)、氮杂环丁-1-基-(3-羟基环丁基)甲酮(91.5mg，0.59mmol)和DIEA(111.0mg，0.86mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入三光气(61.5mg，0.21mmol)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/3)洗脱，得到7-(3-((((1s,3s)-3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.21mmol，72.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝707.3。
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁酯(化合物517a)
Figure BDA0003085169390006461
向7-(3-((((1s,3s)-3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.21mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3.0mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟。在真空下浓缩所得溶液。将残余物再溶解在二氯甲烷中，并用TEA调节至pH 8。通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9％B至39％B，7min)纯化残余物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-(氮杂环丁烷-1-羰基)环丁基]酯(27.4mg，0.053mmol，25.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝507.2,RT 1.724min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),9.33(s,1H),7.95(s,1H),7.32(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(d,J＝2.7Hz,1H),4.87-4.94(m,1H),4.28(t,J＝4.3Hz,2H),4.07(t,J＝7.6Hz,2H),3.83(t,J＝7.7Hz,2H),3.31-3.37(m,2H),2.77-2.63(m,1H),2.46(dd,J＝7.4,2.8Hz,2H),2.24-2.09(m,4H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例250
(R)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯(化合物518a和化合物518b)
Figure BDA0003085169390006471
步骤1：7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮
Figure BDA0003085169390006472
在室温下，在氮气下向3-氨基-5-溴-4-甲基-吡啶-2-醇(6.0mg，29.55mmol)和KF(6.87g，118.2mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液中加入溴氟代乙酸乙酯(1.09g，59.1mmol)。在80℃下将所得溶液搅拌5小时。用水稀释反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(1.4g，5.363mmol，24.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝261.1。
步骤2：7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003085169390006473
在0℃下，在氮气下向7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(1.4g，5.36mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液中加入BH3(16.1mL，16.1mmol，1M THF溶液)。在0℃下将所得溶液搅拌0.5小时并且在60℃下搅拌2小时。在0℃下用MeOH淬灭反应物。然后加入HCl(3ml，6M水溶液)，并且将混合物搅拌0.5小时。然后用NH3·H2O将混合物调节至pH8，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(800mg，3.24mmol，60.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝247.1。
步骤3：7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006481
在0℃下，在氮气下向7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(800.0mg，3.24mmol)在THF(25mL)中的溶液中加入NaHMDS(4.8ml，9.71mmol，2M THF溶液)。在0℃下将所得溶液搅拌0.5小时。然后加入(Boc)2O(2.12g，9.71mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1.5小时。用MeOH淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.44mmol，44.5％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝347.2。
步骤4：3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006482
在100℃下，在氮气下将7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，1.44mmol)、B2Pin2(1.83g，7.2mmol)、Pd(dppf)Cl2(235.2mg，0.29mmol)和KOAc(424.0mg，4.32mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg,1.27mmol，88.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝394.3。
步骤5：7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006491
在90℃下，在氮气下将N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸[(3R)-四氢呋喃-3-基]酯(500.0mg，1.15mmol)、3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(541.8mg，1.37mmol)、Pd(dppf)Cl2(186.9mg，0.23mmol)和K2CO3(474.1mg，3.44mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩所得混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg,0.66mmol，57.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝577.0。
步骤6：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006501
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(380.0mg，0.66mmol)、NH2Boc(3.82g，32.93mmol)、Brettphos Pd G3(119.4mg，0.13mmol)和Cs2CO3(428.1mg，1.32mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(270mg，0.41mmol，62.3％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝657.7。
步骤7：(R)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯和(R)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006502
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(270mg，0.41mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入TFA(3.6mL)。在室温下将混合物搅拌3小时。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN)纯化残余物，得到立体异构体的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种立体异构体。然后将两种异构体溶解在甲醇中，用HCl(0.1ml，1M二噁烷溶液)处理并浓缩，得到其盐酸盐。任意指定噁嗪处的绝对立体化学结构。
异构体1：(化合物518a)(8mg，0.016mmol，6.7％产率)。RT 1.306min(CHIRALPAKIC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(MTBE(0.3％IPAmine):EtOH＝60:40)。LCMS(ESI):[M+H]+＝457.4,RT 2.070min；方法J。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.42(s,1H),7.86(s,1H),7.57(s,1H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H),6.34(d,J＝53.4Hz,1H),5.52-5.36(m,1H),4.02-3.94(m,3H),3.90(td,J＝8.4,4.4Hz,1H),3.72(dd,J＝13.2,4.2Hz,1H),3.53-3.38(m,1H),2.31(dtd,J＝14.5,8.5,6.2Hz,1H),2.24-1.98(m,4H)。
异构体2(化合物518b)(6.1mg，0.0124mmol，5.1％产率)。RT 1.2660min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm。流动相：(MTBE(0.3％IPA):EtOH＝60:40)。LCMS(ESI):[M+H]+＝457.4,RT 2.070min；方法J。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.42(s,1H),7.86(s,1H),7.57(s,1H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H),6.34(d,J＝53.4Hz,1H),5.52-5.36(m,1H),4.02-3.94(m,3H),3.90(td,J＝8.4,4.4Hz,1H),3.72(dd,J＝13.2,4.2Hz,1H),3.53-3.38(m,1H),2.31(dtd,J＝14.5,8.5,6.2Hz,1H),2.24-1.98(m,4H)。
实施例251
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基甲酰基)环丁酯(化合物519a)
Figure BDA0003085169390006521
步骤1：(1s,3s)-3-羟基-N,N-二甲基环丁烷-1-甲酰胺
Figure BDA0003085169390006522
在室温下，向3-羟基环丁烷甲酸(300.0mg，2.58mmol)、N,N-二甲胺(174.8mg，3.88mmol)和DIEA(1.0g，7.74mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入HATU(1.47g，3.88mmol)。在室温下将所得溶液搅拌3小时。然后在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(1s,3s)-3-羟基-N,N-二甲基环丁烷-1-甲酰胺(230mg,1.60mmol，62.2％产率)，呈灰白色固体状。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-(二甲基氨基甲酰基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006531
在0℃下，向7-[3-氨基-7-氟-8-(异丙氧羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.29mmol)、3-羟基-N,N-二甲基-环丁烷甲酰胺(81.7mg，0.57mmol)和DIEA(110.7mg，0.86mmol)在1,2-二氯乙烷(15mL)中的溶液中加入三光气(59.3mg，0.20mmol)。在室温下将所得溶液搅拌30分钟，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/3)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-(二甲基氨基甲酰基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.23mmol，80.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝695.3。
步骤3：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(二甲基氨基甲酰基)环丁酯
Figure BDA0003085169390006532
向7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-(二甲基氨基甲酰基)环丁氧基)羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.22mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3.0mL)。在室温下将混合物搅拌30分钟。然后在真空下浓缩所得溶液。用TEA将残余物的pH调节至pH 8。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9％B至36％B，7min)纯化所得残余物。将纯化过的产物溶解在甲醇中，用HCl(0.2ml，1M二噁烷溶液)处理并浓缩，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-(二甲基氨基甲酰基)环丁基]酯盐酸盐(55.1mg，0.10mmol，46.4％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2,RT 1.786min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.45(s,1H),7.98(s,1H),7.59(s,1H),6.95(d,J＝6.0Hz,1H),4.89-4.97(m,1H),4.53(t,J＝4.5Hz,2H),3.51(d,J＝4.5Hz,2H),3.00-3.07(m,1H),2.91(s,3H),2.82(s,3H),2.59-2.54(m,2H),2.30-2.14(m,2H),2.05(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例252
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基氨基甲酰基)环丁酯盐酸盐(化合物520a)
Figure BDA0003085169390006541
步骤1：3-羟基-N-甲基-环丁烷甲酰胺
Figure BDA0003085169390006542
在室温下，向顺式-3-羟基环丁烷甲酸(300.0mg，2.58mmol)、甲胺(120.4mg，3.88mmol)和DIEA(1.0g，7.74mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入HATU(1.47g,3.87mmol)。在室温下将所得混合物搅拌3小时。然后在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(1s,3s)-3-羟基-N-甲基环丁烷-1-甲酰胺(230mg，1.78mmol，68.9％产率)，呈灰白色固体状。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(甲基氨基甲酰基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006551
在0℃下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.29mmol)、3-羟基-N-甲基-环丁烷甲酰胺(73.7mg，0.57mmol)和DIEA(110.7mg，0.86mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(59.3mg，0.20mmol)。在室温下将所得溶液搅拌30分钟，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/3)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(甲基氨基甲酰基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.18mmol，61.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝681。
步骤3：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(甲基氨基甲酰基)环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006561
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(甲基氨基甲酰基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(150.0mg，0.22mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.0mL，25.96mmol)。在室温下将所得溶液搅拌30分钟。用TEA将反应混合物的pH调节至pH 8。通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：5％B至33％B，7min)纯化粗产物。将纯化过的产物溶解在甲醇中，用HCl(0.2ml，1M二噁烷溶液)处理并且在真空下浓缩，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[3-(甲基氨基甲酰基)环丁基]酯盐酸盐(67.9mg，0.13mmol，58.4％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2,RT 1.771min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),9.44(s,1H),7.98(s,1H),7.84(d,J＝5.2Hz,1H),7.59(s,1H),6.94(d,J＝6.0Hz,1H),4.86-4.93(m,1H),4.53(d,J＝4.7Hz,2H),3.50(t,J＝4.5Hz,2H),2.69-2.58(m,4H),2.42-2.46(m,2H),2.16-2.24(m,2H),2.04(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例253
(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基酯；(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基酯；(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基酯；和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氟-1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基酯(化合物569a、化合物569b、化合物569c和化合物569d)
Figure BDA0003085169390006571
在25℃下，将N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸((3S,4R)-3-氟-4-哌啶基)酯(300.0mg，1.28mmol)和3-氧代四氢呋喃(164mg，1.92mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌5分钟。然后加入四异丙醇钛(362.0mg，1.27mmol)。在60℃下将混合物搅拌1小时。冷却至室温之后，加入NaCNBH3(120.0mg，1.62mmol)，并且在25℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol，NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：23％B至40％B，10min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC(CHIRALPAK IA-32*25cm，5μm。流动相A：MeOH(8mmol/L NH3的MeOH溶液)，流动相B：MDCM；流速20ml/L，梯度：30％B至30％B，17.4min)分离外消旋产物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体1：化合物569a(22mg，0.0407mmol，3.2％产率)：RT 2.412min(CHIRALPAKIE-3 0.46*5cm；3μm；MeOH:DCM(0.1％DEA)＝70:30；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3,RT0.939min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(s,1H),4.92(s,2H),4.76(s,2H),4.28(s,2H),3.80(s,1H),3.72(t,J＝7.8Hz,1H),3.62(q,J＝7.9Hz,3H),3.12-2.92(m,2H),2.75-2.54(m,1H),2.40-2.19(m,1H),1.91(s,5H),1.84-1.70(m,2H)。
异构体2：化合物569b(23mg，0.0425mmol，3.9％产率)：RT 2.986min(CHIRALPAKIE-3 0.46*5cm；3μm；MeOH:DCM(0.1％DEA)＝70:30；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3,RT0.939min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.21(s,2H),5.66(s,1H),4.92(s,2H),4.76(s,2H),4.28(s,2H),3.80(s,1H),3.72(t,J＝7.8Hz,1H),3.62(q,J＝7.9Hz,3H),3.12-2.92(m,2H),2.75-2.54(m,1H),2.40-2.19(m,1H),1.91(s,5H),1.84-1.70(m,2H)。
使用类似的程序，使用N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸((3R,4S)-3-氟-4-哌啶基)酯作为起始物质来制备另外2种异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体3：化合物569c(13.8mg，0.0255mmol，2％产率)：RT 4.903min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):MeOH＝40:60)；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3,RT 1.882min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.90(s,2H),4.74(s,2H),3.85-3.77(m,1H),3.76-3.68(m,1H),3.65-3.58(m,1H),3.56-3.48(m,1H),3.31(s,3H),3.11-2.94(m,1H),2.94-2.79(m,1H),2.89-2.74(m,1H),2.76-2.54(m,1H),1.93-1.88(m,5H),1.84-1.74(m,2H)
异构体4：化合物569d(10.7mg，0.0198mmol，1.6％产率)：RT 6.596min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):MeOH＝40:60)；1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3,RT 1.882min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),9.35(s,1H),7.96(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(s,1H),4.90(s,2H),4.74(s,2H),3.85-3.77(m,1H),3.76-3.68(m,1H),3.65-3.58(m,1H),3.56-3.48(m,1H),3.31(s,3H),3.11-2.94(m,1H),2.94-2.79(m,1H),2.89-2.74(m,1H),2.76-2.54(m,1H),1.93-1.88(m,5H),1.84-1.74(m,2H)。
实施例254
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯(化合物527a和化合物527b)
Figure BDA0003085169390006591
步骤1：N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006601
在-78℃下，将5-溴-4-甲基-吡啶-3-胺(8000.0mg，42.77mmol)在THF(400mL)中的溶液逐滴加入NaHMDS(45mL，45mmol，1mol/L THF溶液)。在-78℃下将反应物搅拌1小时。然后加入(Boc)2O(11.60g，53.21mmol)。在-78℃下将混合物搅拌2小时。用甲醇淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(46/54)洗脱，得到N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(10g，34.825mmol，81.4％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝288。
步骤2：N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006602
在室温下，向N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁酯(8000.0mg，27.86mmol)和t-BuOK(4683.0mg，41.81mmol)在THF(150mL)中的溶液中加入碘甲烷(5937.0mg，41.81mmol)。在室温下将反应物搅拌2小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(30/70)洗脱，得到N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(7900mg，26.23mmol，94.1％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝303。
步骤3：N-甲基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006611
在90℃下，将N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(7900.0mg，26.23mmol)、B2Pin2(33.754g，132.89mmol)、Pd(dppf)Cl2(3800.0mg，5.2mmol)和KOAc(7800.0mg，79.59mmol)在1,4-二噁烷(150mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到N-甲基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(8000mg，22.973mmol，87.6％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝349。
步骤4：N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006612
在70℃下，将N-甲基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(13g，37.33mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(10g，31.01mmol)、Pd(dppf)Cl2(4.5g，6.16mmol)和K2CO3(12g，86.96mmol)在1,4-二噁烷(150mL)和水(15mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(10/90)洗脱，得到N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(9000mg，21.589mmol，57.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝417。
步骤5：(5-(3-(((3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-3-甲基环丁氧基)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006621
在0℃下，将3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁醇(1061.0mg，4.90mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1025.0mg，2.46mmol)和DIEA(1585.0mg，12.29mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌30分钟。然后加入三光气(509.0mg，1.72mmol)。在0℃下将混合物搅拌1小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到(5-(3-(((3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧)-3-甲基环丁氧基)羰基)氨基)-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.375g，2.091mmol，85％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝660。
步骤6：N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006622
在90℃下，将N-[5-[3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(5700.0mg，8.65mmol)、NH2Boc(20.1g，171.79mmol)、Brettphos-Pd-G3(1500.0mg，1.66mmol)和K2CO3(1193.16mg，8.65mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(44/56)洗脱，得到N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(5000mg，6.757mmol，78.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝740。
步骤7：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006631
在室温下，将N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧-3-甲基-环丁氧基]羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2000.0mg，2.7mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩混合物。用Et3N将残余物的pH调节至8。然后浓缩混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用水/ACN(47/53)洗脱，得到(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-5-(甲基氨基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯(550mg)。通过SFC分离混合物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1(化合物527a)(154mg，0.365mmol，18％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝425.2,RT 1.086min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.48(s,1H),6.92(d,J＝6.1Hz,1H),6.49(s,1H),6.24(s,2H),5.45-5.36(m,1H),5.12-5.01(m,1H),4.98(s,1H),2.89(s,3H),2.49-2.30(m,2H),2.17-1.99(m,2H),1.93(s,3H),1.32(s,3H)。
异构体2(化合物527b)(37mg，0.087mmol，3％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝425.2,RT1.106min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.30(s,1H),9.42(s,1H),7.98(s,1H),7.89(s,1H),7.77(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.49(s,1H),5.46-4.39(m,1H),5.16(s,1H),4.69-4.59(m,1H),2.94(s,3H),2.51-2.37(m,2H),2.20-2.09(m,2H),1.94(d,J＝1.6Hz,3H),1.11-1.02(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例255
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁酯和(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁酯((化合物525a和化合物525b)
Figure BDA0003085169390006641
步骤1：1-(3-苯甲氧基环丁基)-3-氟-氮杂环丁烷
Figure BDA0003085169390006642
在60℃下，将3-(苯甲氧基)环丁酮(550.0mg，3.12mmol)、3-氟代氮杂环丁烷盐酸盐(1050mg，9.41mmol)、四异丙醇钛(1775.0mg，6.25mmol)和DIEA(1209.0mg，9.37mmol)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌2小时。然后加入NaCNBH3(200.0mg，3.17mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。用MeOH淬灭反应物，并且过滤。在真空下浓缩滤液。通过反相色谱法，用水/CH3CN(34/66)纯化残余物，得到1-(3-苯甲氧基环丁基)-3-氟-氮杂环丁烷(620mg，2.635mmol，84.4％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝236。
步骤2：(1s,3s)-3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁-1-醇
Figure BDA0003085169390006651
在40℃下，在氢气(1大气压)下将1-(3-苯甲氧基环丁基)-3-氟-氮杂环丁烷(330.0mg，1.4mmol)和Pd/C(100.0mg，1.4mmol)在甲醇(3mL)中的悬浮液搅拌24小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，得到3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁醇(180mg，1.24mmol，88.4％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝146。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((((1s,3s)-3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006652
在60℃下，将3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁醇(149.0mg，1.03mmol)、7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(331mg，0.51mmol)和DMAP(65.0mg，0.53mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过反相色谱法，用水/ACN(26/74)纯化所得残余物，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.402mmol，39.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝697。
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁酯(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁酯
Figure BDA0003085169390006661
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[3-(3-氟代氮杂环丁-1-基)环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(275.51mg，0.40mmol)在二氯甲烷(5mL)和TFA(1mL)中的溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应物，并且通过制备型HPLC(X Select CSH PreC18 OBD柱，30*150mm，5μm，流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速60mL/min；梯度：7％B至16％，7min)进行纯化，得到异构体的混合物。通过手性HPLC分离混合物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
异构体1(化合物525a)(2.5mg，0.0054mmol，1.7％产率)。RT 3.073min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝497.3,RT 1.237min，方法M；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.31(s,1H),7.93(s,1H),7.31(s,1H),6.86-6.78(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),5.30-4.95(m,2H),4.29(s,2H),3.60-3.44(m,2H),3.19-3.03(m,2H),3.09-2.89(m,3H),2.15-2.02(m,4H),1.92-1.89(m,3H)。
异构体2(化合物525b)(17mg，0.0323mmol，9.5％产率)。RT 3.911min(CHIRALPAKIG-3 0.46*5cm；3μm；(Hex:DCM＝3:1)(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝497.3,RT 1.589min，方法K。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.31(s,1H),7.93(s,1H),7.31(s,1H),6.86-6.78(d,J＝6.2Hz,1H),6.18(s,2H),5.65(s,1H),5.30-4.95(m,2H),4.29(s,2H),3.60-3.44(m,2H),3.19-3.03(m,2H),3.09-2.89(m,3H),2.15-2.02(m,4H),1.92-1.89(m,3H)。
实施例256
(1R,2R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯和(1S,2S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯((化合物526a和化合物526b)
Figure BDA0003085169390006671
步骤1：(Z)-丙-1-烯氧基]甲基苯
Figure BDA0003085169390006672
在37℃下，将烯丙基苯甲醚(1.0g，6.75mmol)和t-BuOK(113mg，1.01mmol)在二甲亚砜(10mL)中的溶液搅拌72小时。用乙酸乙酯稀释反应物，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1:10)洗脱，得到(Z)-丙-1-烯氧基]甲基苯(900mg，6.073mmol，90％产率)，呈无色油状。
步骤2：(±)-顺式-3-(苯甲氧基)-2-甲基环丁-1-酮
Figure BDA0003085169390006681
向(Z)-丙-1-烯氧基]甲基苯(8.0g，53.98mmol)和Zn/Cu(53.0g，815.38mmol)在乙醚(250mL)中的混合物中逐滴加入三氯乙酰氯(19.5g，107.73mmol)。在20℃下将混合物搅拌30分钟。加入NH4Cl(44.0g，814.81mmol)在甲醇(200mL)中的饱和溶液，并且使所得混合物回流10分钟。过滤所得溶液，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，得到(±)-顺式-3-(苯甲氧基)-2-甲基环丁-1-酮(3.4g，17.872mmol，33.1％产率)，呈无色油状。
步骤3：(±)-(1R,2S,3S)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇
Figure BDA0003085169390006682
在-78℃下，将甲基氯化镁(0.2mL，0.60mmol)逐滴加入到(±)-顺式-3-苯甲氧基-2-甲基-环丁酮(100mg，0.53mmol)在四氢呋喃(1mL)中的溶液中。在-78℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且用乙酸乙酯萃取。经Na2SO4干燥有机相，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到(±)-(1R,2S,3S)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇(60mg，0.291mmol，55.3％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝207。
步骤4：(±)-(1R,2S,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390006683
在25℃下，在氢气下将(±)-(1R,2S,3SI)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇(1.0g，4.85mmol)和Pd/C(10％，300.0mg，4.85mmol)在甲醇(40mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用PE/EA(1/2)洗脱，得到(±)-(1R,2S,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇(400mg，3.44mmol，71％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝116。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)4.75(d,J＝6Hz,1H),4.27(s,1H),3.72-3.63(m,1H),2.12-2.06(m,1H),1.82-1.73(m,1H),1.64-1.58(m,1H),1.17(s,3H),(d,J＝6Hz,1H)。
步骤5：(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2S,3R)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006691
在室温下，向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.48mmol)和(±)-(1R,2S,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇(200.0mg，1.72mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入DIEA(600.0mg，4.65mmol)。然后加入三光气(150.0mg，0.51mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用PE/EA(1/1)洗脱，得到(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2S,3R)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.3744mmol，78.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668。
步骤6：(1r,2r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯和(1s,2s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006701
在室温下，向(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1R,2R,3S)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250.0mg，0.37mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时并浓缩。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10％B至40％B，7min)和手性HPLC(柱：CHIRALPAK IE，2*25cm，5μm；流动相A：MeOH(8mmol/L NH3.MeOH)，流动相B：DCM；流速18mL/min)纯化粗产物，得到单一对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：在室温下，将含化合物526a(1R,2R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯的甲醇(10mL)用HCl(4mol/L，2当量)的1,4-二噁烷溶液处理，并且搅拌30分钟。在真空下浓缩所得溶液并冻干，得到(1R,2R,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基-环丁基]酯盐酸盐(21.1mg,0.0419mmol，11.2％产率)，呈红色固体状。RT 1.183min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm，3μm；DCM(0.1％DEA):MeOH＝50:50，3min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT1.940min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.44(s,1H),7.97(s,1H),7.55(s,1H),6.91(d,J＝5.9Hz,1H),6.50-5.90(bs,4H),4.75-4.70(m,1H),4.50(s,2H),3.48(s,2H),2.33-2.31(m,1H),2.23-2.03(m,2H),2.03(s,3H),1.25(s,3H),0.96(d,J＝7.3Hz,3H)。
对映异构体2：在室温下，将含化合物526b(1S,2S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯的甲醇(5mL)用HCl(4mol/L，2当量)的1,4-二噁烷溶液处理30分钟。在真空下浓缩所得溶液并冻干，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,2S,3R)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁基]酯盐酸盐(20.2mg，0.0401mmol,10.7％产率)，呈红色固体状。RT 1.840min(CHIRALPAK IE-3，0.46*5cm，3μm；DCM(0.1％DEA):MeOH＝50:50，3min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT1.141min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.44(s,1H),7.97(s,1H),7.55(s,1H),6.91(d,J＝5.9Hz,1H),6.50-5.90(bs,4H),4.75-4.70(m,1H),4.50(s,2H),3.48(s,2H),2.33-2.31(m,1H),2.23-2.03(m,2H),2.03(s,3H),1.25(s,3H),0.96(d,J＝7.3Hz,3H)。
实施例257
(1S,2R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯和(1R,2S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯(化合物526c和化合物526d)
Figure BDA0003085169390006721
步骤1：(±)-(2r,3s)-3-苯甲氧基-2-甲基-环丁酮
Figure BDA0003085169390006722
在25℃下，向(±)-(2S,3S)-3-苯甲氧基-2-甲基-环丁酮(4.8g，25.23mmol)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中加入DBU(1.2g，7.89mmol)。在25℃下将所得溶液搅拌16小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到(±)-(2R,3S)-3-苯甲氧基-2-甲基-环丁酮(1.7g，8.94mmol，35.4％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝191。
步骤2：(±)-(1S,2R,3S)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇
Figure BDA0003085169390006723
在-78℃下，向(±)-(2R,3S)-3-苯甲氧基-2-甲基-环丁酮(1.7g，8.94mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入甲基溴化镁(4.5mL，9mmol)。在室温下将所得溶液搅拌1小时。用饱和氯化铵(20mL)淬灭反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到(±)-(1S,2R,3S)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇(1.3g，6.302mmol，70.5％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝207。
步骤3：(±)-(1S,2R,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390006724
在25℃下，在氢气(1大气压)下，将(±)-(1S,2R,3S)-3-苯甲氧基-1,2-二甲基-环丁醇(1.0g，4.85mmol)和Pd/C(10％，300mg，4.85mmol)在甲醇(20mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到(±)-(1S,2R,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇(330mg，2.84mmol，58.6％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝116。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.75(d,J＝6.0Hz,1H),4.27(s,1H),3.72-3.63(m,1H),2.12-2.06(m,1H),1.82-11.72(m,1H),1.64-1.58(m,1H),1.17(s,3H),0.89(d,J＝6.0Hz,3H)。
步骤4：(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R,3S)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006731
在室温下，在氮气下向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.49mmol)和(±)-(1S,2R,3S)-1,2-二甲基环丁烷-1,3-二醇(120mg，1.03mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入DIEA(700mg，5.43mmol)。然后加入三光气(80mg，0.27mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到(±)-7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R,3S)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.389mmol，78.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668。
步骤5：(1s,2r,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯和(1r,2s,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-2,3-二甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006741
在室温下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S,2R,3S)-3-羟基-2,3-二甲基-环丁氧基]羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.39mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在25℃下将所得溶液搅拌1小时。通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：12％B至37％B，7min)和手性HPLC纯化粗产物，得到两种对映异构体。将每一种对映异构体溶解在甲醇中，在室温下用HCl/1,4-二噁烷(0.04M，2当量)处理30分钟并浓缩，得到相应的盐酸盐。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物526c)(28.4mg，0.0564mmol，14.5％产率)。RT2.040min(CHIRALPAK IC-3，0.46*5cm，3m；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):IPA＝60:40，4min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 1.151min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.41(s,1H),7.97(s,1H),7.54(s,1H),6.92(d,J＝6.0Hz,1H),4.66(q,J＝7.3Hz,1H),4.49(s,2H),3.48(d,J＝5.3Hz,2H),2.30(dd,J＝12.0,7.6Hz,1H),2.13(t,J＝6.9Hz,1H),2.02(s,3H),1.91(dd,J＝12.1,7.1Hz,1H),1.24(s,3H),1.01(d,J＝7.0Hz,3H)。
对映异构体2(化合物526d)(25.9mg，0.0514mmol，13.2％产率)。RT2.857min(ChIRALPAK IC-3，46*5cm，3μm；(Hex:DCM＝1:1)(0.1％DEA):IPA＝60:40，4min；1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 1.154min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),9.40(s,1H),7.97(s,1H),7.54(s,1H),6.92(d,J＝6.0Hz,1H),4.66(q,J＝7.2Hz,1H),4.48(s,2H),3.47(s,2H),2.30(dd,J＝12.1,7.7Hz,1H),2.13(t,J＝7.1Hz,1H),2.02(s,3H),1.91(dd,J＝12.0,7.3Hz,1H),1.24(s,3H),1.01(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例258
N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-氨基甲酸(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)酯盐酸盐(化合物524)
Figure BDA0003085169390006751
步骤1：3-苯甲氧基-1-环丙基磺酰基-氮杂环丁烷
Figure BDA0003085169390006752
向3-苯甲氧基氮杂环丁烷(1.0g，6.13mmol)、三乙胺(3.1g，30.69mmol)和4-二甲基氨基吡啶(224mg，1.83mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入环丙磺酰氯(2.6g，18.42mmol)。在0℃下将混合物搅拌2小时。用水洗涤反应溶液并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到3-苯甲氧基-1-环丙基磺酰基-氮杂环丁烷(900mg，3.37mmol，54.9％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝268。
步骤2：1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-醇
Figure BDA0003085169390006761
向3-苯甲氧基-1-环丙基磺酰基-氮杂环丁烷(500mg，1.87mmol)在甲醇(20mL)中的溶液加入Pd(OH)2/C(800mg，1.87mmol)。在45℃下将反应物搅拌2天。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯洗脱，得到1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-醇(160mg，0.903mmol，48.3％产率)，呈无色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝178。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)-氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006762
向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.38mmol)、1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-醇(100.0mg，0.56mmol)和N,N-二异丙基乙胺(490.0mg，3.8mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入三光气(112mg，0.38mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液。在0℃下将混合物搅拌2小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并-[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(168mg，0.2075mmol，54.6％产率)，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]＝729.
步骤4：N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006771
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)氧羰基氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.22mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在25℃下将混合物搅拌1小时，并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC(X-select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至39％B，7min)纯化残余物，得到(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸1-(环丙基磺酰基)氮杂环丁-3-基酯(60mg)，呈黄色固体状。然后向纯化过的产物在甲醇(8mL)中的溶液中加入含0.4M HCl的甲醇(0.5mL)，并且在25℃下将溶液搅拌0.5小时。在真空下浓缩溶液，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-氨基甲酸(1-环丙基磺酰基氮杂环丁-3-基)酯盐酸盐(56.1mg，0.0989mmol，45％产率)，呈红色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝529.1,RT 0.995min，方法L；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),9.39(s,1H),7.98(s,1H),7.49(s,1H),6.90(d,J＝6.1Hz,1H),5.24(t,J＝5.5Hz,1H),4.48-4.35(m,4H),4.32-4.21(m,3H),3.98(dd,J＝9.5,4.8Hz,2H),3.52-3.40(m,2H),2.90-2.70(m,1H),1.99(d,J＝1.6Hz,3H),1.11-0.93(m,4H)。
实施例259
(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基-3-甲基环丁酯(化合物528a)
Figure BDA0003085169390006781
步骤1：(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)甲基苯
Figure BDA0003085169390006782
在0℃下，向3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇(500.0mg，2.6mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入NaH(150.0mg，3.91mmol)。将混合物搅拌15分钟。然后加入碘甲烷(1110.0mg，7.82mmol)在THF(1mL)中的溶液，并且在0℃下将混合物搅拌3小时。用甲醇稀释反应物并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(79/21)洗脱，得到(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)甲基苯(420mg，2.04mmol，78％产率)，呈澄清油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝267。
步骤2：3-甲氧基-3-甲基-环丁醇
Figure BDA0003085169390006783
在40℃下，在氢气(1大气压)下，将(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)甲基苯(400mg，1.94mmol)和Pd/C(10％，200mg，1.94mmol)在甲醇(10mL)中的混合物搅拌24小时。过滤反应物，并且浓缩滤液，得到3-甲氧基-3-甲基-环丁醇(372mg，1.92mmol，99％产率)，呈澄清油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝117.1。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006791
在25℃下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600.0mg，0.93mmol)和DMAP(114.0mg，0.93mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入3-甲氧基-3-甲基-环丁醇(322.0mg，2.77mmol)。在60℃下将所得溶液搅拌24小时，然后在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(450mg，0.67mmol，73％产率)，呈浅黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668.3
步骤4：(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基-3-甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006792
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-甲氧基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(450.0mg，0.67mmol)和TFA(2.0mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；ACN：水(0.1％FA)＝梯度：19％B至40％B，7min；60mL/min)纯化残余物，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基-3-甲基环丁酯。
在室温下，将(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基-3-甲基环丁酯和HCl的二噁烷溶液(0.4mL，4M，1.6mmol)在MeOH(5mL)中的溶液搅拌10分钟。在真空下浓缩混合物，得到(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-甲氧基-3-甲基环丁酯盐酸盐(52.9mg，0.11mmol，17％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.053min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.37(s,1H),7.97(s,1H),7.48(s,1H),6.88(d,J＝6.0Hz,1H),4.74(q,J＝7.2Hz,1H),4.56-4.00(m,5H),3.44-3.45(m,2H),3.09(s,3H),2.44-2.26(m,2H),2.13-2.20(m,2H),1.98(d,J＝1.6Hz,3H),1.27(s,3H)。
实施例260
(1r,3r)-乙酸3-(((8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)氧)-1-甲基环丁酯和(1s,3s)-乙酸3-(((8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)氧)-1-甲基环丁酯(化合物529a和化合物529b)
Figure BDA0003085169390006811
步骤1：乙酸3-(苯甲氧基)-1-甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006812
在0℃下，向3-(苯甲氧基)环丁酮(1.0g，5.68mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入乙基氯化镁(8.51mL，17.03mmol)。在室温下将混合物搅拌2小时。用甲醇稀释反应物，浓缩并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(10/90)洗脱，得到3-苯甲氧基-1-乙基-环丁醇(300mg，1.454mmol，25.6％产率)，呈无色油状。
步骤2：乙酸3-羟基-1-甲基环丁酯
Figure BDA0003085169390006813
在40℃下，在氢气下将乙酸(3-苯甲氧基-1-甲基-环丁基)酯(500mg，2.13mmol)和Pd/C(200mg，10wt％)在甲醇(10ml)中的混合物搅拌8小时。然后过滤混合物并且在真空下浓缩，得到乙酸3-羟基-1-甲基环丁酯(170mg，1.18mmol)，呈无色油状。
步骤3：7-(3-(((3-乙酰氧基-3-甲基环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006821
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.39mmol)和乙酸(3-羟基-1-甲基-环丁基)酯(170mg，1.18mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中加入DMAP(50mg，0.41mmol)。在60℃下将混合物搅拌12小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-(3-(((3-乙酰氧基-3-甲基环丁氧基)羰基)氨基)-8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝696.3。
步骤4：(1r,3r)-乙酸3-(((8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)氧)-1-甲基环丁酯
和(1s,3s)-乙酸3-(((8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)氧)-1-甲基环丁酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006822
向7-[3-[(3-乙酰氧基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.29mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X Bridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：27％B至57％B，7min)纯化残余物，得到两种异构体。任意指定立体化学结构。
非对映异构体1：化合物529a(3.4mg，0.0069mmol，2.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝496.2,1.287min，方法J，1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.33(s,1H),7.94(s,1H),7.31(s,1H),6.82(d,J＝6.1Hz,1H),6.19(s,2H),5.65(s,1H),5.08-4.97(m,1H),4.27(s,2H),3.41-3.33(m,2H),2.74(dd,J＝13.8,7.4Hz,2H),2.23(dd,J＝14.0,4.3Hz,2H),1.97(s,3H),1.90(d,J＝1.6Hz,3H),1.58(s,3H)。
非对映异构体2：化合物529b(40.1mg，0.0754mmol，26.2％产率)(制成盐酸盐之后)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝496.2,1.284min，方法J，1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.36(s,1H),7.95(s,1H),7.49(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),4.85-4.79(m,2H),4.40-4.35(m,4H),3.44(s,2H),2.67(td,J＝7.8,7.0,4.3Hz,2H),2.37-2.23(m,2H),1.97(d,J＝5.8Hz,6H),1.47(s,3H)。
实施例261
(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物567a和化合物567b)
Figure BDA0003085169390006841
步骤1：7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮
Figure BDA0003085169390006842
在0℃下，在氮气下向3-氨基-5-溴-4-甲基-吡啶-2-醇(5g，24.63mmol)和K2CO3(10.195g，73.88mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入2-氯-2-氟-乙酰氯(4191.51mg，32.01mmol)。在室温下将所得混合物搅拌1小时并且在90℃下搅拌1小时。用水淬灭反应物，并用乙酸乙酯萃取。经无水硫酸钠干燥有机层，过滤并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(45/55)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(2500mg，9.576mmol，38.9％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝261.05。
步骤2：7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪
Figure BDA0003085169390006843
在0℃下，在氮气下向7-溴-3-氟-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(2500.0mg，9.58mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入BH3·THF(28.73mL，28.73mmol)。将反应物在0℃下搅拌0.5小时并且在60℃下搅拌1小时。在0℃下用甲醇淬灭反应物。向反应混合物中加入1N HCl(10ml)溶液。然后在室温下将混合物搅拌30分钟，并且用氢氧化铵调节至pH 8。用二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机层并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(26/74)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1100mg，4.452mmol，46.5％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝246。
步骤3：7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006851
在-78℃下，在氮气下向7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1100.0mg，4.45mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入NaHMDS(2449.29mg，13.36mmol)。在-78℃下将所得溶液搅拌0.5小时。然后加入(Boc)2O(2923.2mg，13.36mmol)，并且在-78℃下搅拌1小时。用MeOH淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(14/86)洗脱，得到7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(850mg，2.448mmol，55％产率)，呈白色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝347.2。
步骤4：3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006852
在100℃下，将[7-溴-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(50.0mg，0.140mmol)、KOAc(57.0mg，0.58mmol)、B2pin2(110.0mg，0.43mmol)和Pd(dppf)Cl2(21.0mg，0.030mmol)]在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物搅拌16小时。过滤之后，在减压下浓缩滤液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(70/30)洗脱，得到3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(50mg，0.127mmol，88.1％产率)，呈淡黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝395。
步骤5：(3R,4S)-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006861
在0℃下，在氮气下向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(800.0mg，2.48mmol)、DIEA(1.6g，12.38mmol)和(3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-醇(507.0mg，4.96mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三光气(514.0mg，1.74mmol)。在0℃下将反应物搅拌0.5小时。在真空下浓缩所得溶液。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到(3R,4S)-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(720mg，1.598mmol，64.4％产率)]，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝451。
步骤6：7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006862
在100℃下，在氮气下向N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(100.0mg，0.22mmol)、Pd(dppf)Cl2(24.0mg，0.030mmol)、K2CO3(93.0mg，0.67mmol)和3-氟-8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(96.0mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(1.8mL)和水(0.20mL)中的溶液搅拌3.5小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(35/65)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.1184mmol，53.4％产率)]，呈淡黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝592。
步骤7：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006871
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(350.0mg，0.59mmol)、BrettphosPd G3(109.0mg，0.12mmol)、K2CO3(247.0mg，1.78mmol)和NH2Boc(1.7g，14.66mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(25/75)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.4764mmol，80.4％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝671。
步骤8：(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-((S)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯和(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-((R)-3-氟-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390006881
在室温下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-3-氟-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.45mmol)在TFA(5mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应溶液。通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％TFA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：23％B至46％B，10min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC(CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25cm，5μm；流动相A：己烷，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：30％B至30％B，10min)分离外消旋产物，得到两种对映异构体。任意指定噁嗪处的绝对立体化学结构。
对映异构体1(化合物567a)(42.9mg，0.0845mmol，18.9％产率)：RT4.768(CHIRALCellulose-SB4，6*100mm 3μm。流动相：流动相：:Hex(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1ml/min)LCMS(ESI)[M+H]+＝472.2,RT6.081min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.48(s,1H),6.92(d,J＝6.1Hz,1H),6.49(s,1H),4.91-4.83(m,1H),4.05-3.91(m,2H),3.82-3.71(m,1H),3.64-3.53(m,1H),3.65-3.54(m,2H),2.43-2.26(m,1H),1.98(d,J＝1.6Hz,3H),1.12-1.02(d,J＝7.2Hz,3H)。
对映异构体2(化合物567b)(50mg，0.0984mmol，22％产率)：RT 5.717(CHIRALCellulose-SB4，6*100mm 3μm。流动相：流动相：Hex(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1ml/min)LCMS(ESI)[M+H]+＝472.2,RT 6.081min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.27(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.48(s,1H),6.92(d,J＝6.1Hz,1H),6.49(s,1H),4.91-4.83(m,1H),4.05-3.91(m,2H),3.82-3.71(m,1H),3.64-3.53(m,1H),3.65-3.54(m,2H),2.43-2.26(m,1H),1.98(d,J＝1.6Hz,3H),1.12-1.02(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例262
(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯(化合物486b)和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-1-甲基环丁酯(化合物554a)
Figure BDA0003085169390006891
步骤1：3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇
Figure BDA0003085169390006892
在-78℃下，向3-(苯甲氧基)环丁酮(5000.0mg，28.38mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中逐滴加入甲基氯化镁(28.4mL，85.13mmol，3mol/L THF溶液)。在-78℃下将所得溶液搅拌2小时。用MeOH淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇(4300mg，22.367mmol，78.8％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝193.1。
步骤2：1-甲基环丁烷-1,3-二醇
Figure BDA0003085169390006901
在室温下，在氢气(1大气压)下将3-苯甲氧基-1-甲基-环丁醇(2000.0mg，10.4mmol)和Pd/C(10wt％，400mg，0.52mmol)在甲醇(30mL)中的混合物搅拌16小时。然后过滤混合物并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到1-甲基环丁烷-1,3-二醇(1100mg，10.232mmol，98.4％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝103.1。
步骤3：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((3-羟基-3-甲基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006902
在0℃下，在氮气下向7-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1000.0mg，1.9mmol)、1-甲基环丁烷-1,3-二醇(388.6mg，3.8mmol)和DIEA(1229.52mg，9.51mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入三光气(282.3mg，0.95mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌0.5小时。用水淬灭反应物，并且用二氯甲烷萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(5％)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-羟基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1100mg，1.6827mmol，88.4％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝654.3。
步骤4：(1r,3r)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-3-甲基环丁酯(化合物486b)和(1s,3s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-羟基-1-甲基环丁酯(化合物554b)
Figure BDA0003085169390006911
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(3-羟基-3-甲基-环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(1100.0mg，1.68mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中加入TFA(10mL)。在室温下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm5μm，n；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：16％B至46％B，7min；254nm)进行纯化，得到两种异构体。
异构体1(化合物486b)(277.9mg，0.5672mmol，33.7％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.053min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.40(s,1H),7.98(s,1H),7.53(s,1H),6.91(d,J＝6.1Hz,1H),5.06(tt,J＝7.4,5.6Hz,1H),4.47(t,J＝4.5Hz,2H),3.48(d,J＝4.6Hz,2H),2.45-2.26(m,2H),2.11-2.03(m,2H),2.01(d,J＝1.5Hz,3H),1.34(s,3H)。
异构体2(化合物554a)(10.4mg，0.0208mmol，1.2％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 1.710min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),9.32(s,1H),7.97(s,1H),7.34(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),5.72(s,2H),4.31(t,J＝4.3Hz,2H),3.90(p,J＝7.2Hz,1H),3.47(d,J＝4.6Hz,2H),2.56-2.52(m,2H),2.14(t,J＝9.7Hz,2H),1.93(d,J＝1.5Hz,3H),1.47(s,3H)。
实施例263
(3R,4S)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐(化合物555a和化合物555b)
Figure BDA0003085169390006921
步骤1：8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006922
向7-溴-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.46mmol)和B2pin2(1851mg，7.29mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中加入KOAc(428mg，4.37mmol)、Pd(dppf)Cl2(213mg，0.29mmol)。在90℃下将混合物搅拌3小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，1.0249mmol，70.4％产率)，呈黄色油状。LCMS(ESI)[M+H]+＝391.2。
步骤2：7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006931
向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(483mg，1.5mmol)和8-乙基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(758mg，1.94mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(220mg，0.30mmol)、K2CO3(620mg，4.49mmol)。在90℃下将混合物搅拌3小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.697mmol，46.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝459.1。
步骤3：7-(8-氯-7-氟-3-(((((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006932
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.70mmol)和4-甲基四氢呋喃-3-醇(214mg，2.1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入三光气(103mg，0.35mmol)、DIEA(450mg，3.49mmol)，然后在0℃下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.545mmol，78.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝587.2。
步骤4：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006941
向7-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(320mg，0.56mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1913mg，16.33mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物中加入Pd2(dba)3CHCl3(85mg，0.080mmol)、BrettPhos(116mg，0.22mmol)、碳酸铯(533mg，1.63mmol)。在90℃下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-甲基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg，0.397mmol，71.2％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝668.3。
步骤5：(3R,4S)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-6-(8-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-7-氟代异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006951
向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-甲基四氢呋喃-3-基)氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-乙基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.30mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中加入TFA(2mL)，然后在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15％B至45％B，7min)纯化残余物，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋物，得到两种对映异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1(化合物555a)(17mg，0.0337mmol，11.3％产率)。RT 1.080min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.030min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),9.34(s,1H),7.96(s,1H),7.36(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),4.93-4.73(m,1H),4.37(s,2H),4.03-3.77(m,4H),3.79-3.71(m,2H),3.46-3.17(m,3H),2.43-2.16(m,3H),1.04(d,J＝7.2Hz,3H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。
对映异构体1(化合物555b)(25mg，0.0496mmol，16.6％产率)。RT 1.735min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm；MTBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50,1mL/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2,RT 2.031min，方法J。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.37(s,1H),7.97(s,1H),7.46(s,1H),6.88(d,J＝6.1Hz,1H),5.20(bs,3H),4.93-4.73(m,1H),4.46(s,2H),4.03-3.84(m,2H),3.79-3.70(m,1H),3.44(s,2H),3.32(dd,J＝8.4,4.8Hz,1H),2.42-2.22(m,3H),1.04(d,J＝7.2Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例264
(3R,4S)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐(化合物556a和化合物556b)
Figure BDA0003085169390006961
步骤1：7-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006962
在氮气下，将8-氯-6-碘-异喹啉-3-胺(3.5g，11.49mmol)、8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(4.76g，12.64mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.88g，2.3mmol)和Na2CO3(3.66g，34.48mmol)在1,4-二噁烷(30mL)和水(3mL)中的溶液搅拌2小时，在90℃下搅拌4小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(3g，7.02mmol，61.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝426.9。
步骤2：7-[8-氯-3-[[(3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006971
在0℃下，在氮气下，向7-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.94mmol)、反式-4-甲基四氢呋喃-3-醇(191.2mg，1.87mmol)和DIEA(605.5mg，4.69mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入三光气(139.0mg，0.47mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-氯-3-[[(反式)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(530mg，0.88mmol，93.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝555.0。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(3R,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390006981
在90℃下，在氮气下将7-[8-氯-3-[[(反式)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，0.90mmol)、NH2Boc(5.25g，45.04mmol)、Brettphos Pd G3(163.3mg，0.18mmol)和Cs2CO3(587.4mg，1.8mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg,0.56mmol，62.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝635.7。
步骤4：(3R,4S)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390006991
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400.0mg，0.63mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入TFA(5mL)。然后在室温下将溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。将残余物再溶解在乙腈中。用NaHCO3水溶液将混合物的pH调节至pH 8。在真空下浓缩所得溶液，并且通过制备型HPLC(柱：X select CSH OBD柱30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：6％B至36％B，7min)进行纯化，得到外消旋产物。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到两种对映异构体。然后将每一种对映异构体溶解在甲醇中，用HCl(0.1ml，1M二噁烷溶液)处理并浓缩，得到盐酸盐。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
对映异构体1：化合物556a(36.7mg，0.0764mmol，16.2％产率)。RT 1.746min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30)。LCMS(ESI)[M+H]+＝435.5,RT 1.092min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.50(s,1H),6.93(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),4.86(dt,J＝4.5,2.1Hz,1H),4.47(t,J＝4.4Hz,2H),4.08-3.92(m,2H),3.78-3.68(m,1H),3.47(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(dd,J＝8.5,4.8Hz,1H),2.43-2.26(m,1H),2.11(s,3H),1.07(d,J＝7.2Hz,3H)。
对映异构体2：化合物556b(36.2mg，0.0759mmol，16.1％产率)。RT 1.746min(CHIRALPAK IC-3 0.46*5cm；3μm；(MTBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30)。LCMS(ESI)[M+H]+＝435.5,RT＝1.092min；方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.32(s,1H),7.95(s,1H),7.50(s,1H),6.93(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),4.86(dt,J＝4.5,2.1Hz,1H),4.47(t,J＝4.4Hz,2H),4.08-3.92(m,2H),3.78-3.68(m,1H),3.47(t,J＝4.4Hz,2H),3.35(dd,J＝8.5,4.8Hz,1H),2.43-2.26(m,1H),2.11(s,3H),1.07(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例265
(1s,3s)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯盐酸盐(化合物557a)
Figure BDA0003085169390007001
步骤1：7-(8-氯-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007002
在0℃下，在氮气下向7-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0mg，0.70mmol)、3-羟基环丁烷甲腈(136.5mg，1.41mmol)和DIEA(454.1mg，3.51mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三光气(104.3mg，0.35mmol)。在0℃下将所得溶液搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(21/1)洗脱，得到7-(8-氯-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(434mg，0.62mmol，88.7％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝550.2。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007011
在90℃下，在氮气下将7-(8-氯-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(420.0mg，0.76mmol)、NH2Boc(4.43mg，38.18mmol)、Brettphos Pd G3(138.4mg，0.15mmol)和Cs2CO3(497.9mg，1.53mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((((1s,3s)-3-氰基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.63mmol，83.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝631.3
步骤3：(1s,3s)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯盐酸盐(化合物557a)
Figure BDA0003085169390007021
在0℃下，向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(3-氰基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(390mg，0.62mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入TFA(3mL)。然后在室温下将溶液搅拌2.5小时。在真空下浓缩反应物。用乙腈稀释残余物，并且用NaHCO3水溶液将pH调节至8。在真空下浓缩所得混合物，并且通过制备型HPLC(柱：X Bridge Prep OBD C18柱30×150mm,5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：20％B至43％B，7min)进行纯化，得到(1s,3s)-(8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸3-氰基环丁酯。然后，将产物溶解在甲醇中，用HCl(0.1ml，1M二噁烷溶液)处理并浓缩，得到N-[8-氨基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(3-氰基环丁基)酯盐酸盐(33.7mg，0.072mmol，22.6％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝431.2,RT 1.067min，方法J。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),9.29(s,1H),7.92(s,1H),7.46(s,1H),6.88(d,J＝1.4Hz,1H),6.51(d,J＝1.5Hz,1H),4.95(p,J＝7.5Hz,1H),4.43(t,J＝4.4Hz,2H),3.45(t,J＝4.4Hz,2H),3.10-3.14(m,1H),2.78-2.85(m,2H),2.46-2.30(m,2H),2.09(s,3H)。
实施例266
(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐(化合物558a和化合物558b)
Figure BDA0003085169390007031
步骤1：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2(3H)-酮
Figure BDA0003085169390007032
在90℃下，将7-溴-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(3g，12.34mmol)、双(频哪醇)二硼(31.34g，123.43mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(1.86g，2.51mmol)和乙酸钾(2.33g，37.29mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(70％)洗脱，得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(1778mg，6.128mmol，49.7％产率)，呈棕色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝291.2。
步骤2：7-(3-氨基-8-氯-7-氟代异喹啉-6-基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2(3H)-酮
Figure BDA0003085169390007041
在70℃下，在氮气下将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(2955.9mg，9.17mmol)、8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(1770mg，6.1mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(920.4mg，1.24mmol)和K2CO3(2531.1mg，18.31mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(450mg，1.254mmol，20.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝359.1。
步骤3：(±)-反式-(8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯
Figure BDA0003085169390007042
向7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-2-酮(300mg，0.84mmol)和4-甲基四氢呋喃-3-醇(171mg，1.67mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.73mL，4.2mmol)。在0℃下将混合物搅拌5分钟。然后加入三光气(174mg，0.59mmol)，并且在0℃下将混合物搅拌1小时。用水淬灭反应物，并且在真空下浓缩。通过反相色谱法(乙腈5-55/0.1％NH4HCO3水溶液)纯化残余物，得到(±)-反式-(8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(100mg，0.205mmol，24.6％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝487.2。
步骤4：(7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3,8-二基)二氨基甲酸叔丁酯((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)酯和(7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3,8-二基)二氨基甲酸叔丁酯((3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基)酯
Figure BDA0003085169390007051
向(±)-反式-(8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(268mg，0.55mmol)和氨基甲酸叔丁酯(1913mg，16.33mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物中加入Brettphos Pd G3(50mg，0.060mmol)、碳酸钾(230mg，1.67mmol)。在90℃下将混合物搅拌2小时。浓缩之后，通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸(4-甲基四氢呋喃-3-基)酯(200mg，0.352mmol，64％产率)，呈黄色固体状。然后通过手性HPLC(CHIRALPAK IC，2*25cm，5μm；流动相A：MTBE(10mM NH3)，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：0％B至20％B，15min；220/254nm；RT 1:7.454min；RT 2:12.621min)分离对映异构体混合物，得到两种对映异构体(对映异构体1：41mg，0.07mmol；对映异构体2：40mg，0.07mmol)，呈黄色固体状。
步骤5：(3R,4S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐和(3S,4R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯盐酸盐
Figure BDA0003085169390007061
向N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]酯(50mg，0.090mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm 5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：18％B至43％B，7min)纯化残余物。然后将产物溶解在MeOH中。加入1当量HCl(4M HCl的1,4-二噁烷溶液)。然后浓缩混合物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]酯盐酸盐(化合物558a)(24.9mg，0.0494mmol，18.7％产率)，呈橙色固体状。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。RT 1.354min(CHIRALPAKIE-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2。RT 1.282min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),10.24(s,1H),9.39(s,1H),7.98(s,1H),7.74(s,1H),6.92-6.90(dd,1H),5.10(brs,3H),4.91-4.85(m,1H),4.85-4.78(m,2H),4.03-3.95(m,2H),3.80-3.75(m,1H),3.35-3.30(m,1H),2.45-2.21(m,1H),2.12-2.07(m,3H),1.09-1.03(s,3H)。
向N-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基]酯(50.0mg，0.090mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)，并且在室温下将混合物搅拌1小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(X select CSH OBD柱30*150mm 5μm，n；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：18％B至43％B，7min)纯化残余物。然后将产物溶解在MeOH中。加入1当量HCl(4M HCl的1,4-二噁烷溶液)。然后浓缩混合物，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2-氧代-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基]酯盐酸盐(化合物558b)(21.2mg，0.0421mmol，15.9％产率)，呈橙色固体状。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。RT2.020min(CHIRALPAK IE-3 0.46*5cm；3μm。流动相：MTBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20,1ml/min)。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2。RT 1.282min，方法J；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),10.24(s,1H),9.39(s,1H),7.98(s,1H),7.74(s,1H),6.92-6.90(dd,1H),5.10(brs,3H),4.91-4.85(m,1H),4.85-4.78(m,2H),4.03-3.95(m,2H),3.80-3.75(m,1H),,3.35-3.30(m,1H),2.45-2.21(m,1H),2.12-2.07(m,3H),1.09-1.03(s,3H)。
实施例267
(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯、(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯、(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯和(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯(化合物559a、化合物559b、化合物559c和化合物559d)
Figure BDA0003085169390007081
步骤1：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-(((2-甲基环丁氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007082
在室温下，在氮气下向7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(苯氧基羰基氨基)-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(600.0mg，0.93mmol)和DMAP(120.0mg，0.98mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2-甲基环丁醇(240.0mg，2.79mmol)。在60℃下将溶液搅拌24小时。在真空下浓缩反应物。通过快速色谱法在硅胶上纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-甲基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg,0.78mmol，84％产率)，呈浅黄色固体状。LC/MS(ESI)[M+H]+＝638.3。
步骤2：(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯、(1S,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯、(1R,2R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯和(1S,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯
在25℃下，将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(2-甲基环丁氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(500.0mg，0.78mmol)和TFA(2.0mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液搅拌2小时。浓缩之后，通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm，5μm；水(0.1％FA):ACN＝25％B至55B％，7min；60mL/min)纯化残余物，得到(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯。通过手性HPLC分离外消旋产物，得到四种异构体。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体1(化合物559a)：RT 2.721min(CHIRALPAK AS-H，4.6*100cm，3μm；CO2/MeOH(0.1％DEA)＝10％-50％，4min；4mL/min)，得到(1R,2S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基环丁酯(58.7mg，0.1342mmol，17.1％产率)，呈橙色固体状，LCMS(ESI):[M+H]+＝438.2,RT 1.428min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.37(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.20-5.80(m,3H),4.98(q,J＝7.5Hz,1H),4.44(d,J＝4.7Hz,2H),3.44(s,2H),2.74-2.61(m,1H),2.35-2.14(m,2H),1.98(s,3H),1.91-1.76(m,1H),1.40(t,J＝10.5Hz,1H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)。
异构体2(化合物559b)：RT 2.951min(CHIRALPAK AS-H，4.6*100cm，3μm；CO2/MeOH(0.1％DEA)＝10％-50％，4min；4mL/min)，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,2S)-2-甲基环丁基]酯(62.5mg，0.1429mmol，18.2％产率)，呈橙色固体状，LCMS(ESI)[M+H]+＝438.2；RT1.428min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.37(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),5.20-5.80(m,3H),4.98(q,J＝7.5Hz,1H),4.44(d,J＝4.7Hz,2H),3.44(s,2H),2.74-2.61(m,1H),2.35-2.14(m,2H),1.98(s,3H),1.91-1.76(m,1H),1.40(t,J＝10.5Hz,1H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)。
异构体3(化合物559c)：RT 3.001min,(CHIRALPAK AS-H，4.6*100cm，3μm；CO2/MeOH(0.1％DEA)＝10％-50％，4min；4mL/min)，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1R,2S)-2-甲基环丁基]酯(25.7mg，0.0587mmol，7.5％产率)，呈橙色固体状，LCMS(ESI)[M+H]+＝438.2,RT 1.453min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.38(s,1H),7.98(s,1H),7.52(s,1H),6.92(s,1H),4.60-4.57(m,1H),4.55-4.46(m,2H),3.46-3.50(m,2H),2.74-2.52(m,1H),2.51-2.19(m,1H),2.01-1.83(m,5H),1.27-1.12(m,4H)。
异构体4(化合物559d)：RT:3.336min,(CHIRALPAK AS-H，4.6*100cm，3μm；CO2/MEOH(0.1％DEA)＝10％-50％，4min；4mL/min)，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基甲酸[(1S,2R)-2-甲基环丁基]酯(21.9mg，0.050 1mmol，6.4％产率)，呈橙色固体状。LCMS(ESI):[M+H]+＝438.2,RT1.453min，方法K；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),9.38(s,1H),7.98(s,1H),7.52(s,1H),6.92(s,1H),4.60-4.57(m,1H),4.55-4.46(m,2H),3.46-3.50(m,2H),2.74-2.52(m,1H),2.51-2.19(m,1H),2.01-1.83(m,5H),1.27-1.12(m,4H)。
实施例268
(3R,4S)-(8-氨基-7-氰基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物561a)
Figure BDA0003085169390007111
步骤1：N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007112
在70℃下，在氮气下将N-甲基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(13g，37.33mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(10g，31.01mmol)、Pd(dppf)Cl2(4.5g，6.16mmol)和K2CO3(12g，86.96mmol)在1,4-二噁烷(150mL)和水(15mL)中的混合物搅拌2小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(10/90)洗脱，得到N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(9g，21.589mmol，57.8％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝505。
步骤2：7-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007121
在100℃下，在氮气下将7-(3-氨基-7-溴-8-氯-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(200.0mg，0.40mmol)、Pd(PPh3)4(92.0mg，0.060mmol)和Zn(CN)2(25.0mg，0.22mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中的混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法，用水/ACN(47/53)纯化所得残余物，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.221mmol，56％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝452。
步骤3：7-(8-氯-7-氰基-3-(((((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007122
在0℃下，将7-(3-氨基-8-氯-7-氰基-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(80.0mg，0.18mmol)、(3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-醇(36.0mg，0.35mmol)和DIEA(114.0mg，0.88mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物，并且通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用石油醚/乙酸乙酯(60/40)洗脱，得到(87.2mg，85％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝580。
步骤4：7-(7-氰基-8-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(((((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003085169390007131
在100℃下，在氮气下将7-[8-氯-7-氰基-3-[[(3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基]氧羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(70.0mg，0.12mmol)、Pd(OAc)2(6.0mg，0.030mmol)、Xantphos(28.0mg，0.050mmol)、Cs2CO3(118.0mg，0.36mmol)和二苯甲酮亚胺(66.0mg，0.36mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和甲苯(1mL)中的混合物搅拌3小时。过滤之后，在真空下浓缩滤液。通过反相色谱法，用水/ACN(35/65)纯化残余物，得到7-(7-氰基-8-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(((((3R,4S)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(50mg，0.0701mmol，58.1％产率)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝712。
步骤5：(3R,4S)-(8-氨基-7-氰基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物561a)
Figure BDA0003085169390007141
在室温下，将7-(7-氰基-8-((二苯基亚甲基)氨基)-3-(((((3S,4R)-4-甲基四氢呋喃-3-基)氧)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁酯(40.0mg，0.060mmol)在二氯甲烷(0.5mL)和TFA(1mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩反应混合物。通过反相色谱法，用水/ACN(46/54)纯化所得残余物，得到(3R,4S)-(8-氨基-7-氰基-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸4-甲基四氢呋喃-3-基酯(40.0mg，0.060mmol)，呈黄色固体状。LCMS(ESI)[M+H]+＝461.2,RT 1.844，方法K1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.44(s,1H),7.98(s,1H),7.30(s,3H),6.81(s,1H),5.71(s,1H),4.86(s,1H),4.29(s,2H),4.04-3.90(m,2H),3.76(d,J＝10.6Hz,1H),3.41-3.42(m,2H),3.31-3.27(m,1H),2.24-2.28(m,1H),1.93(s,3H),1.10-1.02(d,J＝6Hz,3H)。
5.03.48实施例269
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1R,3S)-3-氰基环戊基)脲和1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-3-((1S,3R)-3-氰基环戊基)脲(化合物726a和化合物726b)
Figure BDA0003085169390007151
根据通用合成方法，遵循与上述那些类似的程序来合成。相对立体化学结构如图所示。绝对立体化学结构任意指定。
异构体1：化合物726a LCMS(ESI)[M+H]+＝462.2,RT＝3.306min，方法N；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.87(s,1H),7.86(s,1H),7.35-7.20(m,2H),6.75(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.32-4.20(m,2H),4.10-4.01(m,1H),3.50-3.30(m,2H),3.10–3.00(m,1H),2.50-2.26(m,2H),2.10-1.85(m,5H),1.70-1.50(m,2H)。
异构体2：化合物726b LCMS(ESI)[M+H]+＝462.2,RT＝3.308min，方法N；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.87(s,1H),7.86(s,1H),7.35-7.20(m,2H),6.75(d,J＝6.2Hz,1H),6.15(s,2H),5.67(s,1H),4.32-4.20(m,2H),4.10-4.01(m,1H),3.50-3.30(m,2H),3.10–3.00(m,1H),2.50-2.26(m,2H),2.10-1.85(m,5H),1.70-1.50(m,2H)。
5.03.49实施例270
(2S,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基四氢呋喃-3-基酯、(2R,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基四氢呋喃-3-基酯、(2S,3S)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基四氢呋喃-3-基酯和(2R,3R)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸2-甲基四氢呋喃-3-基酯(化合物510a、化合物510b、化合物510c和化合物510d)
Figure BDA0003085169390007161
遵循与本文所述的那些类似的程序以及本领域中已知的方法来合成。任意指定相对立体化学结构和绝对立体化学结构。
异构体1：化合物510a LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 3.413min，方法N；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.34(d,J＝0.9Hz,1H),7.97(d,J＝0.9Hz,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.70–5.62(m,1H),5.20(ddd,J＝6.1,3.9,2.0Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),3.97–3.82(m,2H),3.64(td,J＝8.6,5.8Hz,1H),2.41–2.26(m,1H),2.06–1.89(m,4H),1.27–1.15(m,5H)。
异构体2：化合物510b LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 3.418min，方法N；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),9.34(d,J＝0.9Hz,1H),7.97(d,J＝0.8Hz,1H),7.33(s,1H),6.84(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(t,J＝2.8Hz,1H),5.20(ddd,J＝6.1,3.9,2.0Hz,1H),4.33–4.25(m,2H),3.97–3.82(m,2H),3.64(td,J＝8.6,5.8Hz,1H),3.37(d,J＝4.8Hz,1H),2.33(ddt,J＝12.8,8.8,6.5Hz,1H),2.06–1.89(m,4H),1.27–1.15(m,4H)。
异构体3：化合物510c LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 3.498min，方法N。
异构体4：化合物510d LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2,RT 3.503min，方法N；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(s,1H),9.33(d,J＝1.0Hz,1H),8.00–7.94(m,1H),7.33(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.66(t,J＝2.7Hz,1H),4.85(dt,J＝6.5,2.3Hz,1H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.03–3.86(m,2H),3.78(ddd,J＝9.5,8.5,6.5Hz,1H),3.41–3.33(m,2H),2.24(dddd,J＝13.6,9.5,8.3,6.4Hz,1H),2.01–1.89(m,4H),1.18(d,J＝6.5Hz,3H)。
5.03.50实施例271
(1R,5S,9s)-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸7-(氧杂环丁-3-基)-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基酯(化合物575a)
Figure BDA0003085169390007171
遵循与本文所述的那些类似的程序以及本领域中已知的方法来合成。任意指定立体化学结构。LCMS(ESI)[M+H]+＝551.3,RT 2.427min，方法N。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.37(s,1H),7.98(s,1H),7.33(s,1H),6.83(d,J＝6.1Hz,1H),6.20(s,2H),5.70–5.62(m,1H),4.75(t,J＝3.7Hz,1H),4.51(p,J＝6.3Hz,4H),4.29(t,J＝4.4Hz,2H),4.00(d,J＝11.1Hz,2H),3.67(d,J＝11.0Hz,2H),3.00–2.90(m,2H),2.24(d,J＝11.0Hz,2H),1.92(d,J＝1.6Hz,4H),1.86(d,J＝3.7Hz,3H),1.65(s,1H)。
5.03.51实施例272
使用与上述那些类似的方法和程序以及本领域中已知的方法来合成其他化合物。表A1中提供了LC/MS分析数据。
5.03.52表A1
Figure BDA0003085169390007181
Figure BDA0003085169390007191
Figure BDA0003085169390007201
Figure BDA0003085169390007211
Figure BDA0003085169390007221
Figure BDA0003085169390007231
Figure BDA0003085169390007241
Figure BDA0003085169390007251
生物学实施例
测试示例性式(I)化合物以评估化合物对HPK-1的抑制。
5.04.1实施例B1：HPK1-FL HTRF酶测定(“HTRF”)
测定原理：HPK-FL酶在存在1mM ATP和不同浓度的测试化合物的情况下使生物素-SLP-76底物磷酸化。通过FRET，使用Eu-抗pSLP76抗体和SA-XL665检测产物。另外参阅www.cisbio.com/HTRF以获取额外的HTRF技术信息。
仪器：Echo555化合物分配器；Agilent Bravo；Perkin Elmer Envision。
最终测定条件：
HPK全长，T165E S171E：0.125nM
生物素-SLP76：100nM
ATP：1mM(ATP Km＝20μM)
Eu-抗-pSLP76：2nM
SA-XL665：8.3nM
预孵育时间：30min
激酶反应时间：60min
温度：环境温度
总体积：12μL
ATPapp Km：17.7μM
材料：
测定板：白色ProxiPlate 384F(PerkinElmer目录号6008289)
激酶：HPK全长双突变体
底物：生物素-SLP76
ATP：100mM ATP
BSG2％BSG
DMSO:DMSO(Sigma目录号34869-100ML)
反应缓冲液：H2O/50mM HEPES，pH 7.5/10mM MgCl2/2mM TCEP/0.01％Brij-35/0.01％BSG
检测混合物：Eu-抗-pSLP76/SA-XL665(Cisbio，编号610SAXAC)
测定程序Ki测定：
向上面点有80nL化合物或DMSO的384孔Proxiplate中加入4μL/孔激酶混合物。将混合物预孵育30分钟，然后加入4μL/孔底物混合物。将溶液孵育60分钟，然后加入4μl/孔检测混合物。将溶液再孵育60分钟。然后将板装载到Perkin Elmer Envision上，并且在615和665nm处测量TR-FRET信号。使用665/620的比率来计算在每一个化合物浓度下的活性％。
5.04.2实施例B2：HPK1 Lantha结合测定(“Lanth”)
材料：
Figure BDA0003085169390007261
Figure BDA0003085169390007271
程序：
I.化合物稀释：
使用Bravo液体处理平台，通过在第2列和第13列中制备12.5μL/孔的5mM化合物(100X)以及在第3列到第12列、第14列到第23列和化合物板的孔A1到H1和I24到P24中制备10μL/孔的DMSO来稀释欲测试的化合物。对于参考化合物，最高浓度是1mM。在孔J1到P1和A24到H24中向板加入10μL 2mM星形孢菌素。使用Bravo液体处理平台进行11点5倍化合物连续稀释。从板中将2.5μL溶液从第2列和第13列转移到第3列和第14列中的10μL DMSO中，依此类推。以2500rpm将化合物板离心1分钟。使用Echo液体处理器系统，将80nl化合物从化合物板转移到测定板中。一个化合物板做成两个测定板。将每一个测定板密封并存储在N2柜中。
II.测定条件：
使用以下测定浓度和时间：2nM HPK1、2nM Eu-抗-GST抗体和15nM示踪剂222，60分钟孵育时间。
III.HPK Lantha结合测定：
对于结合测定，使用Multidrop试剂分配器将4μL 2X HPK1和Eu-抗GST抗体加入到测定板的每个一孔中。在23℃孵育箱中将溶液孵育1小时。使用Multidrop试剂分配器向测定板的每一个孔中加入4μL 2X示踪剂-222。在23℃孵育箱中将溶液再次孵育1小时。使用Envision板读取器，在以下参数下读取测定结果：TR_FRET，340激发/615和665发射；100μs延迟；和200μs积分。
IV.分析：
使用XL-fit中的Morrison ki拟合模型分析化合物Ki
a.fit＝(1-((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))-(((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))^2)-((4*E)*x))^0.5))/(2*E)))
res＝(y-fit)
b.参数：
E＝酶浓度
S＝示踪剂222浓度，Kd＝示踪剂222Kd
所有测量结果都使用相同的单位(nM)报告。
在HTRF结合测定中测试示例性化合物。测得的Ki值列在表B1中。
5.04.3表B1
Figure BDA0003085169390007281
Figure BDA0003085169390007291
Figure BDA0003085169390007301
Figure BDA0003085169390007311
Figure BDA0003085169390007321
Figure BDA0003085169390007331
5.04.4实施例B3：人T细胞IL2诱导测定
测定原理：抗CD3和抗CD28激活原代人pan T细胞中的TCR信号传导，从而引起IL-2启动子诱导。使用针对IL-2的捕获抗体和经SULFO标签标记过的抗IL-2抗体，通过电化学发光检测细胞培养上清液中的分泌的IL-2。另外参阅www.mesoscale.com，以获取额外的电化学发光技术信息。
测定程序：在加湿孵育器中，在37℃和5％CO2下将原代人pan T细胞与不同浓度的测试化合物一起孵育30分钟。将细胞转移至预涂有固定浓度的抗人CD3(针对每一个供体批次分别测定)的板上，并加入可溶性抗人CD28(最终浓度＝1μg/ml)。在加湿孵育器中，在37℃和5％CO2下刺激细胞4小时。将25μL上清液转移至预涂有抗人IL-2抗体的MSD单点板。在4℃下，在轻轻振荡下将MSD板孵育过夜。用洗涤缓冲液将MSD板洗涤4次。加入以1:50稀释的SULFO标签化检测抗体，并且在室温下振荡孵育2小时。用洗涤缓冲液将MSD板洗涤4次，并且加入150μL 2X MSD读取缓冲液。在MSD仪器上读取。将数据相对于刺激/未处理对照组进行标准化，以计算在各种浓度的化合物下的活性％。
材料：
冷冻原代人Pan-T细胞(StemCell Technologies，编号70024)
抗人CD3(OKT3克隆)(eBioscience，编号16-0037-81)
抗人CD28(CD28.2克隆)(BD，编号555725)
96孔人IL-2组织培养试剂盒(MSD，编号K151AHB-4)
仪器：
用于液体处理的Biomek FX(Beckman Coulter)
MSD SECTOR S 600(Meso Scale Discovery)
在人T细胞IL-2诱导测定中测试示例性式(I)化合物。表B2中针对某些化合物提供了经测试化合物处理的细胞相对于未处理细胞中针对IL-2测量的增加％。
5.04.5表B2
Figure BDA0003085169390007341
5.04.6实施例B4：pSLP76测定
测定原理：抗CD3激活人Jurkat细胞中的TCR信号传导，从而引起S376处的SLP-76被HPK-1磷酸化。使用抗pSLP76(S376)捕获抗体和生物素化抗SLP76检测抗体，通过夹心ELISA检测磷酸化SLP76(S376)。
材料：
Jurkat，克隆E6-1(ATCC目录号TIB-152)
抗CD3 DynaBeads(Invitrogen，目录号111.51D)
兔单克隆抗pSLP76(S376)(Genentech)
兔多克隆生物素化抗SLP76
(Thermo，内部进行生物素结合)
链霉亲和素-辣根过氧化物酶(GE，目录号RPN4401V)
TMB底物(Cell Signaling，目录号7004)
STOP溶液(Cell Signaling，目录号7002)
测定程序：
在加湿孵育器中，在37℃和5％CO2下，将Jurkat细胞与不同浓度的测试化合物一起孵育30分钟。以4:1珠粒:细胞比率加入抗CD3 DynaBeads。在加湿孵育器中，在37℃和5％CO2下刺激细胞10分钟。加入冷溶解缓冲液，并且在4℃下在振荡器上孵育30分钟。将细胞溶解物转移到涂有捕获抗体的预先阻断型ELISA板上。在室温下振荡孵育2小时。用洗涤缓冲液洗涤ELISA板5次，并加入25μl生物素化检测抗体，最终浓度为0.5μg/ml。在室温下振荡孵育1小时。用洗涤缓冲液洗涤ELISA板5次，并加入25μl链霉亲和素酶结合物，最终稀释度为1:8000。在室温下振荡孵育20分钟。用洗涤缓冲液洗涤ELISA板5次，并加入25μl TMB底物溶液。在室温下，在暗处振荡孵育20分钟。加入25μl STOP溶液，并且在SoftMax Pro上读取450nm下的吸光度。
在pSLP76测定中测试示例性式(I)化合物。表B3中针对某些化合物提供了测量IC50值。
5.04.7表B3
Figure BDA0003085169390007361
5.04.8实施例B5：渗透率测定
在gMDCKI细胞系中评估目标化合物的细胞渗透率，该细胞系是最初从美国菌种保藏中心(Manassa，VA)获取并在Genentech产生的改良MDCKI(马丁达比犬肾)。使用之前4天，在37℃、5％CO2和95％湿度下，将细胞以2.5×105个细胞/mL的接种密度接种在24孔Millicell板(Millipore，Billerca，MA)(聚对苯二甲酸乙二酯膜，1mm孔径)上。在10μM下按顶侧至基底侧(A-B)和基底侧至顶侧(B-A)方向对测试物进行测试。将测试化合物溶解在由汉克平衡盐溶液和10mM HEPES(Invitrogen Corporation，Grand Island，NY)组成的输送缓冲液中。在实验开始和结束时，分别使用经上皮电阻(TEER)和荧光素黄(LY)渗透率监测单层完整性。通过LC-MS/MS分析测试物。
在2小时孵育之后，顶侧至A-B和B-A方向的表观渗透率(Papp)计算为：Papp＝(dQ/dt)·(1/AC0)其中：dQ/dt＝接收室中化合物出现的速度；A＝插入物的表面积；C0＝T0处的初始底物浓度。流出比(ER)计算为(Papp,B-A/Papp,A-B)。
评估示例性式(I)化合物的细胞渗透率。表B3中针对某些化合物列出了MDCK ABPapp值。
5.04.9实施例B6：肝细胞稳定性测定
使用肝细胞稳定性测定来评估化合物的代谢稳定性。在37℃下，将来自10名供体的库的冷冻保存人肝细胞快速解冻，悬浮在预先升温过的In VitroGROTMHT培养基中，然后在室温下以100×g离心10分钟。丢弃上清液，并且将细胞再悬浮于5mL杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)培养基中。在
Figure BDA0003085169390007371
Vision(Lonza，NC)上对悬浮液中的细胞活力进行计数，然后在DMEM中将活细胞调节至1.0×106个细胞/mL。首先用DMEM培养基将化合物稀释至2μM，然后将含药物培养基的125μL等分试样转移至未涂覆过的96孔板。通过加入125μL肝细胞悬浮液开始孵育，产生250μL总孵育体积。每一种化合物的最终浓度是1μM，且最终细胞密度是0.5×106个细胞/mL。在加湿孵育箱中，在37℃下进行孵育。在不同的时间间隔(0、60、120和180分钟)取出50μL孵育培养基等分试样，并立即与100μL含50nM普萘洛尔(内标物)的冰冷乙腈混合。然后将样品以10,000×g离心10分钟，取出80μL上清液，并且用160μL水稀释，然后进行LC/MS-MS分析。如Obach等J.Pharmacol.Exp.Ther.283:46-58(1997)中所述来测定体外固有清除率和分级肝脏清除率。
根据上述程序评估示例性式(I)化合物的人肝细胞稳定性。表B3中针对某些化合物列出了人肝脏清除率(HHep)值。
5.04.10实施例B7：药代动力学(PK)研究
在大鼠中的药代动力学研究：在PK研究中使用获自Lingchang/Vital RiverLaboratory Animal Technology有限公司(中国上海/北京)的雄性SD大鼠，体重在200g至300g范围内。一组3只大鼠给予1mg/kg静脉推注(IV)剂量的呈溶液制剂形式的测试物，而另一组3只大鼠则给予2或5mg/kg口服(PO)剂量的呈0.5％甲基纤维素+0.2％Tween 80(MCT)悬浮液形式或呈溶液形式的测试物。在静脉内或口服施用后0.033、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6和8小时，经由股动脉中的导管从每一只大鼠连续采集血液样品(每个时间点250μL)。将血液样品采集到含有钾(K2)EDTA的预冷管中，并且在采集后1小时内在2至8℃下以3,200g离心10分钟以收集血浆。将血浆样品存储在-70℃下，直到进行LC/MS/MS分析。通过未经验证的LC/MS/MS测定每一个血浆样品中的浓度。使用多反应监测(MRM)获取数据，其中监测每一种化合物的具体转变。
药代动力学分析：使用
Figure BDA0003085169390007381
6.4版(Certara L.P.)，通过如Gibaldi和Perrier中所述的非房室方法计算药代动力学参数。口服施用后，通过每一个口服剂量后获得的血浆浓度-时间曲线下外推至无穷大的剂量标准化面积(AUC∞)除以通过静脉注射给药的动物的平均剂量标准化AUC∞来确定每一只动物的生物利用率百分比(F％)。所有PK参数都呈现为平均值±标准偏差(SD)。
在大鼠中对示例性式(I)化合物进行药代动力学研究。表B4中列出了针对某些化合物测定的生物利用率百分比(F％)值以及研究中所使用的剂量、媒介物和形式。
5.04.11表B4
Figure BDA0003085169390007382
Figure BDA0003085169390007391
应当注意，术语“一个”或“一种”实体是指一个(种)或多个(种)该实体，例如，“一种多肽”应当理解为表示一种或多种多肽。因此，术语“一个”(或“一种”)、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可以互换使用。
本文使用的所有技术和科学术语都具有相同的含义。已经尽力确保所用数字(例如量、温度等)的准确性，但应当考虑一些实验误差和偏差。
在整个说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”是在非排他性的意义上使用。应当理解，本文描述的实施方案包括“由实施方案组成”和/或“基本上由实施方案组成”。
如本文所用，术语“约”在指代一个值时意在涵盖相对于指定量在一些实施方案中±50％、在一些实施方案中±20％、在一些实施方案中±10％、在一些实施方案中±5％、在一些实施方案中±1％、在一些实施方案中±0.5％且在一些实施方案中±0.1％的变化，因为此类变化适于执行所公开的方法或采用所公开的组合物。
在提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文另外清楚地指出，否则在该范围的上限与下限之间的每一个中间值直至下限单位的十分之一以及所述范围内的任何其他所述值或中间值都涵盖在本发明内。可以独立地包括在更小范围内的这些小范围的上限和下限也涵盖在本发明内，服从于所述范围内的任何明确排除的界限。在所述范围包括所述界限之一或两者的情况下，本发明还包括排除那些所包括的界限之一或两者的范围。
受益于前述发明描述和相关附图中提供的教导，这些发明相关领域的技术人员将会想到本文所述的发明的许多修改和其他实施方案。因此，应当理解，本发明不限于所公开的具体实施方案，而且所附权利要求书的范围内希望包括修改和其他实施方案。尽管本文采用了具体的术语，但这些术语仅在通用和描述性的意义上使用，而非出于限制的目的。

Claims (54)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0003085169380000011
或其药用盐，其中：
R15是-OR16、-SR16或-NR17R18；
每一个R16独立地为C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基或3元至14元杂环基；其中R16的所述C1-6烷基、C3-10环烷基、7元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
R17是氢或C1-6烷基；
R18是C1-6烷基、C3-10环烷基或3元至14元杂环基；其中R18的所述C1-6烷基、C3-10环烷基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R17和R18连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
R3是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-8环烷基、3元至14元杂环基或–OR7；其中R3的所述C1-6烷基、C3-8环烷基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
R4是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的5元至14元杂芳基；
R5是氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、卤素、氰基、-C(O)R6、-C(O)OR7、-C(O)NR8aR8b、-OR7、-OC(O)R6、-OC(O)NR8aR8b、-SR7、-S(O)R9、-S(O)2R9、-S(O)2NR8aR8b、-P(O)R9aR9b、-NR8aR8b、-N(R8)C(O)R6、-N(R8)C(O)OR7、-N(R8)C(O)NR8aR8b、-N(R8)S(O)2R9或-N(R8)S(O)2NR8aR8b；其中R5的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R6独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R6的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R7独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R7的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R8独立地为氢或C1-6烷基；
每一个R8a和R8b独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R8a和R8b的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R8a和R8b连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R9独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基或3元至12元杂环基；其中R9的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
每一个R9a和R9b独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C1-6烷基；其中R9a和R9b的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至14元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代；
或R9a和R9b连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R10独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra、-C(O)ORb、-C(O)NRcRd、-ORb、-OC(O)Ra、-OC(O)NRcRd、-SRb、-S(O)Re、-S(O)2Re、-S(O)(＝NH)Re、-S(O)2NRcRd、-NRcRd、-N(Rf)C(O)Ra、-N(Rf)C(O)ORb、-N(Rf)C(O)NRcRd、-N(Rf)S(O)2Re、-N(Rf)S(O)2NRcRd或-P(O)RgRh；其中R10的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Ra独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Ra的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rb独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rb的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rc和Rd独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Rc和Rd的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个Re独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至12元杂环基；其中Re的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
每一个Rf独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至12元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg和Rh的所述C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至12元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代；
或Rg和Rh连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R11的取代基取代的4元至12元杂环基；
每一个R11独立地为氧代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra1、-C(O)ORb1、-C(O)NRc1Rd1、-ORb1、-OC(O)Ra1、-OC(O)NRc1Rd1、-SRb1、-S(O)Re1、-S(O)2Re1、-S(O)2NRc1Rd1、-NRc1Rd1、-N(Rf1)C(O)Ra1、-N(Rf1)C(O)ORb1、-N(Rf1)C(O)NRc1Rd1、-N(Rf1)S(O)2Re1、-N(Rf1)S(O)2NRc1Rd1或-P(O)Rg1Rh1；其中R11的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Ra1独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Ra1的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rb1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rb1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rc1和Rd1独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Rc1和Rd1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
或Rc1和Rd1连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的4元至8元杂环基；
每一个Re1独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基或3元至8元杂环基；其中Re1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
每一个Rf1独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg1和Rh1独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基、3元至8元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg1和Rh1的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6-10芳基、5元至10元杂芳基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代；
或Rg1和Rh1连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R12的取代基取代的4元至8元杂环基；
每一个R12独立地为氧代、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基、3元至6元杂环基、卤素、氰基、-C(O)Ra2、-C(O)ORb2、-C(O)NRc2Rd2、-ORb2、-OC(O)Ra2、-OC(O)NRc2Rd2、-S(O)2Re2、-S(O)2NRc2Rd2、-NRc2Rd2、-N(Rf2)C(O)Ra2、-N(Rf2)C(O)ORb2、-N(Rf2)C(O)NRc2Rd2、-N(Rf2)S(O)2Re2、-N(Rf2)S(O)2NRc2Rd2或-P(O)Rg2Rh2；其中R12的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Ra2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Ra2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rb2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至6元杂环基；其中Rb2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rc2和Rd2独立地为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3元至8元杂环基；其中Rc2和Rd2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
或Rc2和Rd2连同它们所连接的氮原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的4元至6元杂环基；
每一个Re2独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基或3元至6元杂环基；其中Re2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基、C6芳基、5元至6元杂芳基和3元至6元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
每一个Rf2独立地为氢或C1-6烷基；
每一个Rg2和Rh2独立地为C1-6烷基、C3-6环烷基、3元至8元杂环基或-O-C1-6烷基；其中Rg2和Rh2的所述C1-6烷基、C3-6环烷基和3元至8元杂环基各自任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代；
或Rg2和Rh2连同它们所连接的磷原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R13的取代基取代的4元至6元杂环基；并且
每一个R13独立地为氧代、卤素、羟基、-O(C1-6烷基)、氰基、C1-6烷基或C1-6卤代烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，或其药用盐，其中R3是氢。
3.如权利要求1或2所述的化合物，或其药用盐，其中R5是氢、氟或氯。
4.如权利要求1或2所述的化合物，或其药用盐，其中R5是卤素。
5.如权利要求3所述的化合物，或其药用盐，其中R5是氟。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R4是
Figure FDA0003085169380000071
其中波浪线表示连接点，R4a、R4b和R4c各自独立地为氢或R10，或者两个邻近的R4(a-c)连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合5元至10元杂环基或任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的稠合C5-8环烷基。
7.如权利要求6所述的化合物，或其药用盐，其中R4是
Figure FDA0003085169380000072
其中R4a是C1-6烷基，并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基。
8.如权利要求7所述的化合物，或其药用盐，其中R4是
Figure FDA0003085169380000081
其中R4a是C1-6烷基，并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成稠合5元至10元杂环基。
9.如权利要求6所述的化合物，或其药用盐，其中R4选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000082
其中波浪线表示连接点。
10.如权利要求6所述的化合物，或其药用盐，其中R4是
Figure FDA0003085169380000091
其中波浪线表示连接点。
11.如权利要求10所述的化合物，或其药用盐，其中R4是被1个选自R10的取代基取代的
Figure FDA0003085169380000092
12.如权利要求11所述的化合物，或其药用盐，其中R4是
Figure FDA0003085169380000093
13.如权利要求1至12中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R15是-OR16。
14.如权利要求13所述的化合物，或其药用盐，其中R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。
15.如权利要求14所述的化合物，或其药用盐，其中R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的4元至10元杂环基。
16.如权利要求14所述的化合物，或其药用盐，其中R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子并且被1个选自R10的取代基取代的4元至10元杂环基。
17.如权利要求13所述的化合物，或其药用盐，其中R16是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-8环烷基。
18.如权利要求17所述的化合物，或其药用盐，其中R16是被1个独立地选自R10的取代基取代的C3-8环烷基。
19.如权利要求13所述的化合物，或其药用盐，其中R16是-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19独立地为C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9；其中R19的所述C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。
20.如权利要求19所述的化合物，或其药用盐，其中R19是任选地被1、2、3或4个独立地选自R10的取代基取代的5元或6元杂芳基。
21.如权利要求13所述的化合物，或其药用盐，其中R16选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000101
Figure FDA0003085169380000111
Figure FDA0003085169380000121
Figure FDA0003085169380000131
其中波浪线表示连接点。
22.如权利要求13所述的化合物，或其药用盐，其中R16选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000132
各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。
23.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R10独立地为C1-6烷基或氰基。
24.如权利要求23所述的化合物，或其药用盐，其中R10独立地为甲基或氰基。
25.如权利要求23所述的化合物，或其药用盐，其中R10独立地为甲基。
26.如权利要求1至12中任一项所述的化合物，或其药用盐，其中R15是-NR17R18。
27.如权利要求26所述的化合物，或其药用盐，其中R17是氢。
28.如权利要求26或27所述的化合物，或其药用盐，其中R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的3元至14元杂环基。
29.如权利要求28所述的化合物，或其药用盐，其中R18选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000141
Figure FDA0003085169380000151
Figure FDA0003085169380000161
Figure FDA0003085169380000162
其中波浪线表示连接点。
30.如权利要求26或27所述的化合物，或其药用盐，其中R18是任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代的C3-10环烷基。
31.如权利要求30所述的化合物，或其药用盐，其中R18选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000163
Figure FDA0003085169380000171
其中波浪线表示连接点。
32.如权利要求26或27所述的化合物，或其药用盐，其中R18是C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-(C1-6亚烷基)-R19，其中R19独立地为C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基、3元至14元杂环基、氰基、-OR7、–NR8aR8b或-S(O)2R9；其中R19的所述C3-10环烷基、C6-14芳基、5元至14元杂芳基和3元至14元杂环基各自独立地任选地被1、2、3、4或5个独立地选自R10的取代基取代。
33.如权利要求32所述的化合物，或其药用盐，其中R18选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003085169380000172
Figure FDA0003085169380000181
Figure FDA0003085169380000182
其中波浪线表示连接点。
34.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IA)：
Figure FDA0003085169380000183
或其药用盐，其中R3、R4、R5和R16在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
35.如权利要求34所述的化合物，或其药用盐，其中：
R3是氢；
R4是
Figure FDA0003085169380000184
其中R4a是C1-6烷基，并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成稠合5元至10元杂环基；
R5是卤素；
R16是具有1或2个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子的4元至10元杂环基，或C3-8环烷基，其中所述4元至10元杂环基和C3-8环烷基被1个选自R10的取代基取代；并且
R10是C1-6烷基或氰基。
36.如权利要求34所述的化合物，或其药用盐，其中：
R3是氢；
R4是
Figure FDA0003085169380000191
其中R4a是甲基，并且R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成吗啉环；
R5是氟；
R16选自由
Figure FDA0003085169380000192
组成的组；其中R16被1个选自R10的取代基取代；并且
R10是甲基或氰基。
37.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IA-1)：
Figure FDA0003085169380000193
或其药用盐，其中R4和R16在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
38.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IA-2)：
Figure FDA0003085169380000194
或其药用盐，其中R4a是C1-6烷基；R4b和R4c独立地为氢或R10，或R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基，或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基；并且R10和R16在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
39.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IB)：
Figure FDA0003085169380000201
或其药用盐，其中R3、R4、R5和R18在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
40.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IB-1)：
Figure FDA0003085169380000202
或其药用盐，其中R4和R18在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
41.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IB-2)：
Figure FDA0003085169380000203
或其药用盐，其中R4a是C1-6烷基；R4b和R4c独立地为氢或R10，或R4b和R4c连同它们所连接的原子一起形成任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合5元至10元杂环基；或任选地被1、2、3或4个独立地选自由C1-6烷基、羟基、卤素和氰基组成的组的取代基取代的稠合C5-8环烷基；并且R10和R18在适用时如权利要求1至33中任一项所定义。
42.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由表1中的401-563、566-584、601和701-756号化合物或其药用盐组成的组。
43.一种药物组合物，其包含如权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药用盐；和药用赋形剂。
44.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述组合物还包含化疗剂。
45.一种抑制HPK1的方法，所述方法包括使受试者的HPK1与有效量的如权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物接触。
46.一种用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物。
47.如权利要求45或46所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
48.一种治疗HPK1依赖性病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的如权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述HPK1依赖性病症是癌症。
50.如权利要求47或49所述的方法，其中所述癌症包括至少一种选自由以下项组成的组的癌症：结直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、恶性血液病和肾细胞癌。
51.如权利要求45至50中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述受试者施用化疗剂。
52.如权利要求1至42中任一项所述的化合物，或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物；用于如权利要求45至51中任一项所述的方法中。
53.一种如权利要求1至42中任一项所述的化合物，或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物的用途；用于制造用于如权利要求45至51中任一项所述的方法中的药物。
54.一种如权利要求1至42中任一项所述的化合物，或其药用盐；或如权利要求43或44所述的药物组合物的用途；用于如权利要求45至51中任一项所述的方法中。
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