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CN112999337A - 生物酶消毒液制剂及其制备方法 - Google Patents

生物酶消毒液制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种预防奶牛乳房炎的生物酶消毒液制剂及其制备方法，组成及重量百分含量为：溶葡萄球菌酶0.1％‑20％；溶菌酶2％‑80％；蛋白稳定剂1％‑50％；离子化合物1‑20％；杀菌剂0.1％‑30％；其余用蒸馏水；各组份的重量百分比总和为100％。本发明的生物酶消毒液制剂，克服碘为主的消毒剂造成的皮肤皲裂和损伤，以及碘在牛奶中的残留问题，使用方便，杀菌效果明显，可用于奶牛乳房炎的预防。

Description

生物酶消毒液制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种预防奶牛乳房炎的生物酶消毒液制剂及其制备方法。
背景技术
奶牛乳房炎(Mastitis)是其乳腺组织的各类型炎症，包括隐性乳房炎和临床型乳房炎。该病是奶牛的一种常发病和多发病，据报告全世界约三分之一的奶牛患有各种类型乳房炎，由于诸多因素影响，我国奶牛乳房炎发病率普遍高于国外，尤其是在我国南方高温、高湿条件下，奶牛乳房炎的发病率更高，雨季可达70％以上。乳房炎可引起产奶量减少、鲜奶品质降低、牛群更替成本增加，是造成奶牛生产经济损失最严重的疾病之一。每年造成的经济损失约达1135亿元。据报道，科学合理的乳头药浴可使乳房感染减少50％，即可使经济损失减少567亿元。
由于长期、大剂量地使用抗生素和化学合成药来预防、治疗奶牛乳房炎，蓄积在奶牛体内和乳汁里的残留药物量已经远远超过人用安全标准。虽然长期科学使用乳头药浴液可有效预防和减少奶牛乳房炎的发生，但是长期使用或者挤奶前没有彻底清洗和擦净乳头，就有可能使牛奶碘含量增加。不久前，我国卫生部对135份鲜奶和60份奶粉的抽样调查结果显示，鲜奶中抗生素残留检出率为22％，奶粉为3.3％。局部地区鲜奶抗生素残留检出率甚至高达60％。在我国，牛奶消费水平最高的群体集中在婴幼儿和儿童，大量的“有抗奶”严重危害了人们的身体健康。随着生活水平的不断提高，消费者对乳与乳制品的需求量日益增加，其质量和安全性问题需要国家、社会、奶牛业尤为给予重视和投入。目前碘为主的消毒剂造成的皮肤皲裂和损伤，以及碘在牛奶中的残留问题较为严重。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有抗菌制剂刺激性强，具有残留问题，容易产生耐药和对耐药性细菌感染无效的缺陷，提供一种预防奶牛乳房炎的生物酶消毒液制剂，使用方便，活性发挥作用时间强，杀菌效果明显。
本发明还提供了该预防奶牛乳房炎的生物酶消毒液制剂的制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂，该制剂包括杀菌有效量的溶葡萄球菌酶、溶菌酶，以及其他辅助成份，所述制剂组份和重量百分比为：
溶葡萄球菌酶 0.1％-20％；
溶菌酶 2％-80％；
蛋白稳定剂 1％-50％；
离子化合物 1-20％；
杀菌剂 0.1％-30％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
其优选的组份和重量百分比为：
溶葡萄球菌酶 0.1％-10％；
溶菌酶 2％-40％；
蛋白稳定剂 1％-5％；
离子化合物 1-20％；
杀菌剂 0.1％-2％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
所述及的溶葡萄球菌酶∶溶菌酶＝1∶20-400。
其中的溶葡萄球菌酶为野生类型、重组产生、突变异种或保留抗葡萄球菌细胞壁肽聚糖的含甘氨酸交联键的任何重组或有关的酶中的一种或一种以上；溶菌酶为细菌胞壁溶解酶、酵母菌胞壁溶解酶、霉菌胞壁溶解酶中的一种或一种以上。所用的溶葡萄球菌酶是由基因重组产生，枯草杆菌分泌的。所用的溶菌酶是由蛋清中提取的或者基因重组产生。
所述及的蛋白质稳定剂包括聚乙二醇类物质或壳聚糖、甲壳素、N-乙酰-D-氨基等药用高分子化合物，可以包裹蛋白质或多肽，免受其他物质的破坏，从而增强蛋白质或多肽的稳定性；
所述及的离子化合物是K+、Na+、Mg2+、PO4 3-、HPO4 2-、H2PO4 -、CI-中任意两种阴离子与阳离子的组合，如NaH2PO4、KCI等，可以辅助增强该复配制剂的稳定性，并可以调节其酸碱度，使之适用于不同部位的创面或黏膜。
所述及的聚乙二醇类物质包括是聚乙二醇400-6000中的一种或一种以上。
为了增强该复配制剂杀菌力，扩大杀菌谱，还包括以制剂总重量计0-30％的杀菌剂。其中杀菌剂是指醋酸氯己定、抑菌肽或者有杀菌作用的中药提取物，如蒜头素、麝香草酚、儿茶酚、番茄碱、大黄素等。
本发明的制剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按配比分别称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、蛋白稳定剂，配制溶液A；
(2)按配比分别称取离子化合物，搅拌溶液A，向溶液A缓慢加入离子化合物，得到溶液B；
(3)按配比称取杀菌剂，搅拌溶液B，向溶液B缓慢加入和杀菌剂，搅拌均匀，即得成品。
本发明预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂的特点是：
生物蛋白在常温下很不稳定，尤其在液体制剂中由于成分比较复杂，生物蛋白活性更加难以维持，本发明制剂含有多种我们筛选的稳定剂和增效剂，稳定性大为增强，使之可适用于工业化应用。
本发明护理液制剂稳定性实验比较，经37℃保存3个月(相当于常温保存2年)，见表1。
表1护理液制剂37℃3个月放置前后溶葡萄球菌酶活性比较
Figure BSA0000197736620000031
由上表可见本发明护理液制剂核心成分溶葡萄球菌酶酶活稳定性高。
1、杀菌谱较溶葡萄球菌酶广。不仅能有效杀灭葡萄球菌、葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、大肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌、厌氧菌、嗜麦芽窄食单孢菌等常见致病细菌，对淋球菌、胃幽门螺旋杆菌也有很强的杀灭作用。此外对一些耐药性细菌，如耐药性金黄色葡萄球菌、耐药性肺炎双球菌等也显示出极强的杀菌效果。
2、杀菌活性和稳定性大大高于溶葡萄球菌酶。由于溶葡萄球菌复合酶是以溶葡萄球菌酶为主要成分，配以溶菌酶、上述小分子化合物及稳定剂、增效剂等成分复合而成，比纯的溶葡萄球菌酶具有更大的稳定性，经测试证明，该产品在常温下可保存2年。
3、不易产生耐药性。作为主要活性成分的溶葡萄球菌酶和溶菌酶，具有独特的杀菌机理，溶葡萄球菌酶是通过专一性的切断胞壁肽聚糖中的甘氨酸键，达到快速杀死致病菌的效果；而溶菌酶则能作用于胞壁中的β-1，4糖苷键或β-1，3葡聚糖，使之断裂。两种酶以一定的比例进行复配，协同作用，双重裂解细菌细胞壁，因而细菌不易对其产生耐药性。
4、对机体无毒副作用。溶葡萄球菌酶和溶菌酶均为蛋白质产品，对皮肤和粘膜产生刺激，不对机体产生任何形式的毒副作用，并可通过代谢彻底降解，没有残留，不会富集。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂作进一步详细说明。
实施例1
1、组成和配比
溶葡萄球菌酶 0.1％；
溶菌酶 2％；
聚乙二醇 400 1％；
NaH2PO4 1％；
醋酸氯己定 0.1％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
2、配制步骤
(1)按配比分别称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、聚乙二醇400，配制溶液A；
(2)按配比分别称取NaH2PO4，搅拌溶液A，向溶液A缓慢加入NaH2PO4，得到溶液B；
(3)按配比称取醋酸氯己定，搅拌溶液B，向溶液B缓慢加入醋酸氯己定，搅拌均匀，即得成品。
实施例2
1、组成和配比
溶葡萄球菌酶 10％；
溶菌酶 80％；
聚乙二醇 6000 5％；
KCI 20％；
醋酸氯己定 2％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
2、配制步骤
(1)按配比分别称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、聚乙二醇6000，配制溶液A；
(2)按配比分别称取KCI，搅拌溶液A，向溶液A缓慢加入KCI，得到溶液B；
(3)按配比称取醋酸氯己定，搅拌溶液B，向溶液B缓慢加入醋酸氯己定，搅拌均匀，即得成品。
实施例3
1、组成和配比
溶葡萄球菌酶 1％；
溶菌酶 20％；
聚乙二醇 2000 10％；
Na2HPO4 5％；
蒜头素 1％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
2、配制步骤
(1)按配比分别称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、聚乙二醇2000，配制溶液A；
(2)按配比分别称取NaH2PO4，搅拌溶液A，向溶液A缓慢加入NaH2PO4，得到溶液B；
(3)按配比称取蒜头素，搅拌溶液B，向溶液B缓慢加入蒜头素，搅拌均匀，即得成品。
本发明预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂的临床试用报告说明其功效：
临床试验一：预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌杀菌实验
一、器材
1、试验菌：金黄色葡萄球菌第6代(军取医学科学院消羝检测中心提供)、大肠杆菌笫6代(军取医学科学院消毒检测中心提供)
2、样品：预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂
3、中和剂：2％组氨酸、8％卵磷腊、10％吐温-80的D/E肉汤
4、PBS：0.03mol/L磷酸盐缓冲液
5、GNP-9160型隔水式恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)
6、培养基：普通营养琼脂
7、机械秒表(504型)
8、可调恒温水浴箱(CBN28-3)
二、方法
1、检验依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C3
2、中和剂鉴定试验：试验菌株：金黄色葡萄球菌样品浓度：1∶20稀释液，作用时间：0.5min
3、定量杀菌试验：样品浓度：1∶20稀释液
4、试验温度20℃，试验重复3次
三、结果
1、中和剂鉴定试验结果表明：笫1、2组生长茵落数分别为0cfu/mL和4.47*102cfu/mL，第3、4、5组三组间误差率分别为7.80％、9.72％、4.08％。
表2中和剂鉴定试验结果
Figure BSA0000197736620000051
2、试验温度20℃时，样品1∶2稀释液作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌杀菌率均为100％。
表3对实验菌杀菌效果
Figure BSA0000197736620000061
临床试验二：预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂对白色念珠菌杀菌实验
一、器材
1、试验菌：白色念珠菌第6代(军取医学科学院消羝检测中心提供)
2、样品：预防奶牛乳房炎的生物消毒液制剂
3、中和剂：2％组氨酸、8％卵磷腊、10％吐温-80的D/E肉汤
4、PBS：0.03mol/L磷酸盐缓冲液
5、GNP-9160型隔水式恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)
6、培养基：沙氏培养基
7、机械秒表(504型)
8、可调恒温水浴箱(CBN28-3)
二、方法
1、检验依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C3
2、中和剂鉴定试验：样品浓度：原液，作用时间：0.5min
3、定量杀菌试验：样品浓度：原液
4、试验温度20℃，试验重复3次
三、结果
1、中和剂鉴定试验结果表明：笫1、2组生长茵落数分别为0cfu/mL和1.06*103cfu/mL，第3、4、5组三组间误差率分别为7.78％、13.83％、9.08％。
表4中和剂鉴定试验结果
Figure BSA0000197736620000062
2、试验温度20℃时，样品1∶2稀释液作用2分钟、5分钟、10分钟、20分钟对白色念珠菌的杀菌率均为100％。
表5对实验菌杀菌效果
Figure BSA0000197736620000071

Claims (2)

1.一种生物酶消毒液制剂，其特征在于，包括溶葡萄球菌酶和溶菌酶，以及，组成及重量百分含量为：
溶葡萄球菌酶 0.1％-20％；
溶菌酶 2％-80％；
蛋白稳定剂 1％-50％；
离子化合物 1-20％；
杀菌剂 0.1％-30％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
2.根据权利要求1所述的优选的组成及重量百分比为：
溶葡萄球菌酶 0.1％-10％；
溶菌酶 2％-40％；
蛋白稳定剂 1％-5％；
离子化合物 1-20％；
杀菌剂 0.1％-2％；
其余用蒸馏水；
各组份的重量百分比总和为100％。
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