CN112022815B - 一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 - Google Patents
一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112022815B CN112022815B CN202010836824.8A CN202010836824A CN112022815B CN 112022815 B CN112022815 B CN 112022815B CN 202010836824 A CN202010836824 A CN 202010836824A CN 112022815 B CN112022815 B CN 112022815B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dtc
- drug
- protein
- water
- dialysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 238000011068 loading method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 101000972324 Cynodon dactylon Leaf protein Proteins 0.000 title claims abstract 5
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims abstract description 56
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 46
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 41
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 29
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 29
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 13
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 5
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 5
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 4
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L copper(II) chloride Chemical compound Cl[Cu]Cl ORTQZVOHEJQUHG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 101000766308 Bos taurus Serotransferrin Proteins 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 abstract description 2
- LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N diethyldithiocarbamic acid Chemical compound CCN(CC)C(S)=S LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 36
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 11
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AUZONCFQVSMFAP-UHFFFAOYSA-N disulfiram Chemical compound CCN(CC)C(=S)SSC(=S)N(CC)CC AUZONCFQVSMFAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 229960002563 disulfiram Drugs 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- OBBCYCYCTJQCCK-UHFFFAOYSA-L copper;n,n-diethylcarbamodithioate Chemical group [Cu+2].CCN(CC)C([S-])=S.CCN(CC)C([S-])=S OBBCYCYCTJQCCK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101000604027 Homo sapiens Nuclear protein localization protein 4 homolog Proteins 0.000 description 1
- -1 NaOH Chemical class 0.000 description 1
- 102100038438 Nuclear protein localization protein 4 homolog Human genes 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 206010001584 alcohol abuse Diseases 0.000 description 1
- 208000025746 alcohol use disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029650 alcohol withdrawal Diseases 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 229950004394 ditiocarb Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/325—Carbamic acids; Thiocarbamic acids; Anhydrides or salts thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法。该方法包括如下步骤：(1)将蛋白溶于去离子水中，搅拌下加入水溶性铜盐，并调节溶液pH至强碱性；(2)搅拌下在步骤(1)所得溶液中加入新制的NaDTC水溶液，持续搅拌直至反应结束；(3)对步骤(2)反应后的溶液进行透析，透析结束后，过滤除去不溶物，然后冷冻干燥，即得Cu(DTC)2蛋白纳米粒。本发明利用Cu2+与DTC在水中快速反应在蛋白表面原位生成Cu(DTC)2，从而简单快速地获得了Cu(DTC)2蛋白纳米粒子；制备过程中不需要使用有机溶剂，绿色环保，且操作简单，可大剂量重复生产；而且，本发明制备的纳米粒Cu(DTC)2载药量高，接近25wt％，同时，其体外细胞毒性高于自由药物Cu(DTC)2。
Description
技术领域
本发明涉及一种高Cu(DTC)2载药量蛋白纳米药物的制备方法，特别涉及一种水相制备高Cu(DTC)2载药量蛋白纳米药物的方法，属于药物制剂技术领域。
背景技术
Cu(DTC)2中文全称为N,N-二乙基二硫代氨基甲酸铜，英文名称为copperdiethyldithiocarbamate，亦缩写为Cu(DDC)2、CuET等。Cu(DTC)2是戒酒药物双硫仑(disulfiram)与Cu2+反应生成的金属有机配合物，对多种癌症如黑色素瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌等均表现出优异的化疗效果(Alcohol-abuse drug disulfiram targets cancervia p97 segregase adaptor NPL4.Nature 2017,552(7684),194-199；Highly stable,coordinated polymeric nanoparticles loading copper(II)diethyldithiocarbamatefor combinational chemo/chemodynamic therapy of cancer.Biomacromolecules2019,20,2372-2383.)。但 Cu(DTC)2在水中不溶，通过纳米制剂增溶并提高其生物利用度是实现其化疗作用的关键。
蛋白是一类生物大分子，具有良好的生物安全性，可用作疏水药物的天然纳米载体。中国发明专利(公开号CN201310151359.4)公开了一种注射用Cu(DTC)2纳米粒制剂的制备方法，但该方法需要使用有机溶剂如甲醇、乙醇等溶解Cu(DTC)2，且制得的蛋白纳米粒Cu(DTC)2载药量仅为10％。
发明内容
发明目的：针对现有的Cu(DTC)2蛋白纳米制剂制备过程需使用有机溶剂、且制剂Cu(DTC)2载药量低等问题，本发明提供一种不使用有机溶剂的水相制备高Cu(DTC)2载药量蛋白纳米药物的方法。
技术方案：本发明所述的一种水相制备高Cu(DTC)2载药量蛋白纳米药物的方法，包括如下步骤：
(1)将蛋白溶于去离子水中，搅拌下加入水溶性铜盐，并调节溶液pH至强碱性；
(2)搅拌下在步骤(1)所得溶液中加入新制的NaDTC水溶液，持续搅拌直至反应结束；
(3)对步骤(2)反应后的溶液进行透析，透析结束后，过滤除去不溶物，然后冷冻干燥，即得Cu(DTC)2蛋白纳米粒。
上述步骤(1)中，蛋白可为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、转铁蛋白、辣根过氧化物酶等中的至少一种；蛋白溶于去离子水中的溶液浓度优选为10～100mg/mL。水溶性铜盐可为氯化铜、硫酸铜、醋酸铜、硝酸铜等中的至少一种；水溶性铜盐中Cu2+的浓度优选为0.1～0.5mol/L。其中，蛋白与水溶性铜盐的用量满足如下关系：每250毫克蛋白中，加入0.02～0.4毫摩尔的铜离子。本步骤中，调节溶液pH至强碱性可保证较高的载药量，优选可调节溶液pH在至11～13。
上述步骤(2)中，新制NaDTC水溶液的浓度优选为0.1～0.5mol/L。NaDTC水溶液的添加量满足如下比例：反应体系中，铜离子与DTC的摩尔比为1:0.5～1:20。
通过调控蛋白与铜离子的比例可有效控制载药量，作为优选的，当蛋白与水溶性铜盐的用量满足如下关系铜离子与DTC的摩尔比为1:2～1:20，且反应体系中，铜离子与DTC的摩尔比为1:2～1:20时，可获得载药量较高的Cu(DTC)2蛋白纳米粒。
步骤(3)中，透析过程具体为：将步骤(2)反应后的溶液转移至透析袋中透析12～72 小时，外部介质为超纯水。通过透析可除去体系中残留的水溶性无机小分子如NaOH、NaDTC等，确保纳米药物纯净，不含有OH-等有毒物质；透析时间可根据更换透析介质的时间频率确定。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明将制备Cu(DTC)2的水溶性原料预先溶于蛋白的水溶液中，然后利用Cu2+与DTC在水中快速反应在蛋白表面原位生成Cu(DTC)2，从而简单快速地获得了Cu(DTC)2蛋白纳米粒子；与现有技术中通过将成品Cu(DTC)2溶于有机溶剂中、使其与蛋白载体结合的制备工艺相比，本发明的制备过程中不需要使用有机溶剂，绿色环保，且操作简单，可大剂量重复生产；(2) 本发明制备的纳米粒Cu(DTC)2载药量高，接近25wt％，且载药量易于调控；同时，其体外细胞毒性高于自由药物Cu(DTC)2，可提高自由药物的生物利用度；(3)本发明所使用的原料价格低廉，包封率接近100％，不会造成大量化疗药物Cu(DTC)2的浪费。
附图说明
图1为实施例1制备的Cu(DTC)2白蛋白纳米粒的透射电镜图；
图2为实施例1制备的Cu(DTC)2白蛋白纳米粒的紫外吸收谱图；
图3为实施例1制备的Cu(DTC)2白蛋白纳米粒的体外抑制B16癌细胞生长曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒，其透射电镜图如图1，粒径范围为25～43nm。
将冷冻干燥后的Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒子按照纳米粒子浓度0.5mg/mL重新溶于水，其在水中的紫外吸收如图2，表明Cu(DTC)2成功负载。进一步测试Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒子的载药量：测定纳米粒子在乙腈中的紫外吸光度，并根据 Cu(DTC)2在乙腈中的标准曲线计算得载药量为24.3％。
纳米粒的体外抑制4T1小鼠乳腺癌细胞的结果如图3，可以看到，Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒子中药物利用度更高，较自由药物Cu(DTC)2具有增强的抑癌活性。
实施例2
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.02mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.02mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得 Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒，其粒径范围为20～45nm，载药量为2.8％。
实施例3
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.1mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.1mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为25～40nm，载药量为11.2％。
实施例4
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.4mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为27～38nm，载药量为25.0％。
实施例5
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制0.5mL NaDTC水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析 24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为20～58nm，载药量为8.4％。
实施例6
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制10mL NaDTC 水溶液(0.4mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为24～56nm，载药量为23.7％。
实施例7
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析12小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为25～55nm，载药量为24.1％。
实施例8
将250mg牛血清白蛋白(BSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析72小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2牛血清白蛋白纳米粒的粒径为25～48nm，载药量为23.8％。
实施例9
将250mg人血清白蛋白(HSA)溶于10mL去离子水中，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2人血清白蛋白纳米粒，粒径为25～45nm，载药量为23.8％。
实施例10
将250mg转铁蛋白(TRP)溶于10mL去离子水中，，搅拌下依次加入1.0mL CuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析 24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2转铁蛋白纳米粒，粒径为27～51nm，载药量为22.5％。
实施例11
将250mg辣根过氧化物酶(HRP)溶于10mL去离子水中，，搅拌下依次加入1.0mLCuCl2水溶液(0.2mol/L)、0.5mL NaOH溶液(1mol/L)。搅拌下加入新制4mL NaDTC 水溶液(0.2mol/L)，继续搅拌1小时后，转移至截留分子量为10 000Da的透析袋中透析24小时，外部介质为超纯水。透析结束后，过滤除去不溶物，冷冻干燥，制得Cu(DTC)2转铁蛋白纳米粒，粒径为31～55nm，载药量为21.8％。
Claims (3)
1.一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将蛋白溶于去离子水中，搅拌下加入水溶性铜盐，并调节溶液pH至强碱性，调节溶液的pH至11～13；所述蛋白与水溶性铜盐的用量满足如下关系：每250毫克蛋白中，加入0.2～0.4毫摩尔的铜离子；所述蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、转铁蛋白、辣根过氧化物酶中的至少一种；
(2)搅拌下在步骤(1)所得溶液中加入新制的NaDTC水溶液，持续搅拌直至反应结束；反应体系中，铜离子与DTC的摩尔比为1:2～1:20；
(3)对步骤(2)反应后的溶液进行透析，透析结束后，过滤除去不溶物，然后冷冻干燥，即得Cu(DTC)2蛋白纳米粒。
2.根据权利要求1所述的水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述水溶性铜盐为氯化铜、硫酸铜、醋酸铜、硝酸铜中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述透析为：将步骤(2)反应后的溶液转移至透析袋中透析12～72小时，外部介质为超纯水。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010836824.8A CN112022815B (zh) | 2020-08-19 | 2020-08-19 | 一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010836824.8A CN112022815B (zh) | 2020-08-19 | 2020-08-19 | 一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112022815A CN112022815A (zh) | 2020-12-04 |
| CN112022815B true CN112022815B (zh) | 2022-05-10 |
Family
ID=73578534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010836824.8A Active CN112022815B (zh) | 2020-08-19 | 2020-08-19 | 一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112022815B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN120585786B (zh) * | 2025-08-07 | 2025-11-21 | 四川大学华西医院 | 一种联合金属离子的纳米蛋白药物及其制备方法和用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103222961A (zh) * | 2013-04-26 | 2013-07-31 | 沈阳药科大学 | 治疗肿瘤的注射用Cu(DDC)2蛋白纳米粒制剂及其制备方法 |
| CN111467492A (zh) * | 2020-05-20 | 2020-07-31 | 中国科学院生态环境研究中心 | 一种基于铜复合物智能纳米材料及其制备方法和抗肿瘤应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6548540B2 (en) * | 1998-09-08 | 2003-04-15 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives |
-
2020
- 2020-08-19 CN CN202010836824.8A patent/CN112022815B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103222961A (zh) * | 2013-04-26 | 2013-07-31 | 沈阳药科大学 | 治疗肿瘤的注射用Cu(DDC)2蛋白纳米粒制剂及其制备方法 |
| CN111467492A (zh) * | 2020-05-20 | 2020-07-31 | 中国科学院生态环境研究中心 | 一种基于铜复合物智能纳米材料及其制备方法和抗肿瘤应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Apoferritin as a Carrier of Cu(II) Diethyldithiocarbamate and Biomedical Application for Glutathione-Responsive Combination Chemotherapy;Li Xiao et al.,;《ACS Appl. Bio Mater》;20191210;第3卷(第1期);第654-663页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112022815A (zh) | 2020-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107913289A (zh) | 水溶性富勒烯结构在制备治疗肿瘤的药物中的应用 | |
| CN108653238A (zh) | 一种具有pH响应的木质素-组氨酸载药纳米粒子及其制备方法 | |
| CN115919801B (zh) | 一种单宁酸-锌配位的壳聚糖-硒纳米颗粒的制备方法 | |
| CN104940945B (zh) | 一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用 | |
| CN102294040B (zh) | 一种用于核磁共振成像和药物载体的磁性纳米聚合物囊泡及其制备方法 | |
| CN112022815B (zh) | 一种水相制备高Cu(DTC)2载药量抗肿瘤蛋白纳米药物的方法 | |
| CN105902520B (zh) | 一种基于果胶与多臂聚乙二醇的纳米药物共同递送系统的制备方法 | |
| CN103550776B (zh) | 一种疏水性药物纳米颗粒、其制备方法和应用 | |
| CN111420068B (zh) | 聚乙二醇-树枝状聚赖氨酸/酸酐-顺铂复合物及其制备方法和应用 | |
| CN114984217B (zh) | 一种共负载紫杉醇和锰酞菁的适配体铁蛋白纳米粒的制备方法及其应用 | |
| CN104940958B (zh) | 一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法 | |
| CN114159393A (zh) | 一种载汉防己甲素的杂化纳米粒子、载汉防己甲素的可溶性微针递药系统及其制备方法 | |
| CN102793671A (zh) | hrEGF修饰的载顺铂高分子纳米粒、制备及其应用 | |
| CN111821280B (zh) | pH响应性丝胶蛋白-阿霉素纳米药物载体的构建方法 | |
| CN113181199B (zh) | 一种比卡鲁胺与阿霉素联合用药的pH响应智能多孔磁性纳米载药系统及其制备方法 | |
| CN102008476B (zh) | 一种马钱子碱的羟丙基-β-环糊精包合物及其制备方法 | |
| CN107007550A (zh) | 一种氧化还原响应性两亲性共聚物及其制备方法和应用 | |
| CN107184990A (zh) | 一种抗体偶联载药纳米粒子的制备方法 | |
| CN111039821B (zh) | 一种磷酸盐稳定氯硝柳胺纳晶及其制备方法和应用 | |
| CN107802614A (zh) | 一种在胃肠道具有高度稳定性的口服白蛋白纳米粒 | |
| CN113559059A (zh) | 一种阳离子纳米混悬液及其制备方法和应用 | |
| CN1723904A (zh) | 载5－氟尿嘧啶药物的pH敏感可控释放纳米粒及制备方法 | |
| CN105616351A (zh) | 一种新藤黄酸混合胶束制剂及其制备方法 | |
| CN110123787A (zh) | 以叶酸及小分子多肽修饰的n-琥珀酰壳聚糖为载体包载紫杉醇的纳米粒及其制备方法 | |
| CN110664759A (zh) | 一种鬼臼毒素plga纳米粒的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |