CN111936142A

CN111936142A - Asmt表达促进剂

Info

Publication number: CN111936142A
Application number: CN201880091585.9A
Authority: CN
Inventors: 合津阳子; 土师信一郎
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Current assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 2018-04-05
Filing date: 2018-04-05
Publication date: 2020-11-13
Also published as: TW201945345A; WO2019193717A1; JP7142085B2; JPWO2019193717A1; US20210154119A1

Abstract

提供新的ASMT表达促进剂。本发明提供含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分的ASMT表达促进剂。此外，本发明也提供含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成的褪黑激素合成促进剂。通过经由ASMT基因表达的促进而促进褪黑激素的合成，从而可以增强睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性的增强、和抗炎活性的增强这样的作用。

Description

ASMT表达促进剂

技术领域

本发明涉及ASMT表达促进剂。

背景技术

褪黑激素为存在于动植物的激素，报导了具有睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性/抗炎活性的增强这样的效果(专利文献1、2、非专利文献1)。

作为促进褪黑激素合成的物质，已知乙酰5-羟色胺O-甲基转移酶(ASMT)。ASMT是通过ASMT基因的表达而在体内产生，并参与褪黑激素合成途径的最终步骤的酶。因此，可以认为通过促进ASMT的表达从而促进褪黑激素的合成，褪黑激素量增加(专利文献2、非专利文献1～6)。

因此，期望通过促进ASMT的表达从而探索促进褪黑激素的合成的物质。然而，迄今为止，并未充分阐明哪种物质大大有助于ASMT表达促进作用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开第2014-237700号公报

专利文献2：日本特表第2009-511038号公报

专利文献3：日本特开第2002-302444号公报

专利文献4：日本专利第5116917号公报

非专利文献

非专利文献1：服部淳彦，総説メラトニンとエイジング，比較生理生化学Vol.34(2017),No.1,p.2-11

非专利文献2：Pagan et.al.,Mutation screening of ASMT,the last enzymeof the melatonin pathway,in a large sample of patients with IntellectualDisability,BMC Medical Genetics 2011,12:17

非专利文献3：Reiter et.al.,Melatonin and its metabolites:new findingsregarding their production and their radical scavenging actions,ActaBiochimica Polonica,Vol.54No.1,2007,1-9

非专利文献4：Ribelayga et.al.,HIOMT drives the photoperiodic changesin the amplitude of the melatonin peak of the Siberian hamster,AmericanJournal of Physiology Regulatory Integrative Comparative Physiology,278:R1339-R1345,2000.

非专利文献5：Ceinos et.al.,Analysis of Adrenergic Regulation ofMelatonin Synthesis in Siberian Hamster Pineal Emphasizes the Role of HIOMT,Neurosignals 2004；13:308-317

非专利文献6：Monika Talarowska et.al.,ASMT gene expression correlateswith cognitive impairment in patients with recurrent depressive disorder,Medical Science Monitor,2014；20:905-912

非专利文献7：Yi H1 et.al.,Localization of the hydroxyindole-O-methyltransferase gene to the pseudoautosomal region:implications for mappingof psychiatric disorders,Human Molecular Genetics.1993Feb；2(2):127-31.

非专利文献8：Gaia Favero et.al.,Melatonin as an Anti-InflammatoryAgent Modulating Inflammasome Activation,International Journal ofEndocrinology Volume 2017,Article ID 1835195,13pages.

非专利文献9：Andrze Alominski,D.J.Tobin,M.A.Zmijewski,et.al.,Melatoninin the skin:synthesis,metabolism and functions.Tremds in Endocrinology&Metabolism,2008,19:17-24

非专利文献10：DX Tan,LD Chen,B Poeggeler,et.al.,Melatonin:a potentendogenous hydroxyl radical scavenger.Endocrine J,1993,1:57-60

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题是提供新的ASMT表达促进剂。

用于解决课题的方法

发明者们对各种成分的作为ASMT表达促进剂的效果进行了深入研究，结果发现，依克多因作为ASMT表达促进剂具有特别高的效果，从而完成了以下发明：

(1)一种ASMT表达促进剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分。

(2)一种褪黑激素合成促进剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成。

(3)一种抗氧化剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而使抗氧化活性增强。

(4)一种组合物，其包含(1)所述的ASMT表达促进剂。

(5)一种组合物，其包含(2)所述的褪黑激素合成促进剂。

(6)一种组合物，其包含(3)所述的抗氧化剂。

(7)根据(4)或(5)所述的组合物，其通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性的增强、和抗炎活性的增强中的1种或多种作用。

(8)根据(4)～(7)中任一项所述的组合物，其为化妆品组合物或食品组合物。

发明的效果

通过本发明的ASMT表达促进剂的施与，能够促进ASMT表达。根据本发明，能够提供含有ASMT表达促进剂的组合物。通过促进ASMT表达从而能够促进褪黑激素的合成，能够增强睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性/抗炎活性的增强这样的褪黑激素所具有的效果。

附图说明

图1是将由依克多因带来的ASMT表达促进效果与不添加依克多因的对照进行了比较的结果。作为将对照的ASMT基因表达量设为1的比较而显示。

图2是显示由各浓度的依克多因带来的ASMT表达促进效果的结果。定量作为内标的表达量基本恒定的持家基因RPLP0基因的表达量，算出相对于RPLP0的相对表达量ASMT/RPLP0，作为ASMT基因表达量。

图3是将由依克多因带来的ASMT表达促进效果与各种对照药剂和不添加药剂的对照进行了比较的结果。定量作为内标的表达量基本恒定的持家基因RPLP0基因的表达量，算出相对于RPLP0的相对表达量ASMT/RPLP0，作为ASMT基因表达量。

具体实施方式

本发明提供含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分的ASMT表达促进剂。

所谓依克多因，是(4S)-2-甲基-1,4,5,6-四氢嘧啶-4-甲酸((4S)-2-methyl-1,4,5,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid)，是具有以下结构的环状型的氨基酸(CAS编号96702-03-3)。

已知依克多因具有调节渗透压的作用，具有从由渗透压的变化引起的胁迫中保护细胞的作用。此外，已知依克多因具有长时间维持肌肤的保水力的作用等，是配合于各种化妆品的成分(专利文献3、4)。然而，迄今为止并未报导依克多因具有高的ASMT表达促进作用，是非常令人惊讶的发现。

所谓生理学上可接受的盐，包含碱金属盐或碱土金属盐、特别是钾、钠、镁、钙的盐，以及由非毒性脂肪族或芳香族胺等有机碱衍生的盐。

ASMT是指乙酰5-羟色胺O-甲基转移酶(Acetyl serotonin O-methyltransferase)(CAS编号9029-77-0)。ASMT作为催化作为褪黑激素合成途径的最终阶段的将N-乙酰血清素转变为褪黑激素的反应的酶是已知的。此外，ASMT也有时被称呼为羟基吲哚O-甲基转移酶(HIOMT：Hydroxyindole-O-methyltransferase)等名称(非专利文献1～5)。

ASMT基因位于X染色体和Y染色体共同的拟常染色体区域1(PAR1)，是编码乙酰5-羟色胺O-甲基转移酶(ASMT)的基因(非专利文献7)。已显示如果ASMT基因的表达量少，则N-乙酰血清素不转换为褪黑激素，因此褪黑激素产生量减少，相反，如果ASMT基因的表达量多则褪黑激素产生量增加(非专利文献1～5)。

褪黑激素是指N-乙酰-5-甲氧基色胺(N-acetyl-5-methoxytryptamine)(CAS编号73-31-4)。褪黑激素在人等动物中由松果体产生，但近年来报导了在皮肤、视网膜、脑、脊髓、消化道、心脏、肾脏、精巢、卵巢、胸腺、脾脏、水晶体、耳蜗、骨髓、淋巴细胞等各种器官中也产生(非专利文献1、9、10)。此外，报导了褪黑激素具有昼夜节律的调整、睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、皮肤等器官中的抗氧化作用和/或抗炎作用等各种作用(专利文献1、2、非专利文献1、2、6～10)。因此，可以认为只要能够通过由本发明者们发现具有高的ASMT表达促进作用的依克多因而促进褪黑激素，褪黑激素所具有的上述各种效果就会被增强。

所谓ASMT表达的促进，可以指例如，与不施与ASMT表达促进剂的状态(对照)相比，在施与了ASMT表达促进剂的情况下，ASMT基因的表达量例如以使显著性水平为5％的统计学上的显著性差异(例如学生t检验)而增强。或者，所谓ASMT表达的促进，可以指例如，与不施与ASMT表达促进剂的状态(对照)相比，在施与了ASMT表达促进剂的情况下，ASMT基因的表达量增强例如10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上、200％以上、300％以上、400％以上、或500％以上。ASMT基因的表达量可以通过任意的公知技术、例如非专利文献6所记载的方法来求出。

因此，本发明提供含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成的褪黑激素合成促进剂；以及含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而增强抗氧化活性的抗氧化剂。抗氧化活性可以为皮肤等器官中的抗氧化活性。此外，本发明也提供包含含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分的ASMT表达促进剂或褪黑激素合成促进剂或抗氧化剂的组合物。本发明的组合物可以为化妆品组合物或食品组合物。此外，本发明的组合物可以为通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性的增强、和抗炎活性的增强中的1种或多种作用的组合物。

本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物有时含有例如10质量％以上、20质量％以上、30质量％以上、40质量％以上、50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、80质量％以上、90质量％以上、95质量％以上、或99质量％以上的依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分。在某实施方式中，本发明的ASMT表达促进剂或褪黑激素合成促进剂或抗氧化剂也有时由依克多因或其生理学上可接受的盐组成。本发明所使用的依克多因或其生理学上可接受的盐可以通过任意的方法而获得，不受制法、供给源等限定。

本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物可以进行外用施与或经口施与。作为外用施与的形态，可以任意地选择例如，乳膏、乳液、液体、片、喷雾、凝胶等。作为经口施与的形态，可以任意地选择例如，片剂、补充剂、饮料、粉末等。

本发明的化妆品组合物可以为乳液、乳膏、美容液、化妆水、面膜、洗面奶、皂、沐浴露、香波等各种化妆品，可以为液状、乳液状、乳膏状、固体状、片状、喷雾状、凝胶状、泡状、粉末状等各种形态。此外，本发明的食品组合物可以为粉末、饮料、或片剂，可以为粉末状、液状、固体状、颗粒状、粒状、糊状、凝胶状等各种形态。

本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物优选使依克多因或其生理学上可接受的盐以充分发挥ASMT表达促进的效果那样的量含有。

本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物中的依克多因或其生理学上可接受的盐的配合量可以根据它们的种类、目的、形态、利用方法等而适当确定。

在进行外用施与的情况下，依克多因或其生理学上可接受的盐的施与量，例如，依克多因或其生理学上可接受的盐的配合量相对于本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物的总重量可以为0.001～50重量％、0.01～5重量％、0.01～1重量％、0.01～0.1重量％、0.02～0.05重量％等，但不限定于此。

在进行经口施与的情况下，依克多因或其生理学上可接受的盐的配合量相对于本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物的总重量可以为0.001～50重量％、0.01～5重量％、0.01～1重量％、0.01～0.1重量％、0.02～0.05重量％等，但不限定于此。

此外，施与频率可以任意地选择4周1次、2周1次、1周1次、3天1次、2天1次、1天1次、1天2次、1天3次、1天4次、1天5次、每次施与等，但不限定于此。

本发明的ASMT表达促进剂、褪黑激素合成促进剂、抗氧化剂、或组合物可以根据需要任意地选择添加剂而联合使用。作为添加剂，可以使赋形剂等包含。

作为赋形剂，只要是在制成所希望的剂型时通常所使用的即可，可举出例如，小麦淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、环糊精等淀粉类、结晶纤维素类、乳糖、葡萄糖、砂糖、还原麦芽糖、淀粉糖浆、低聚果糖、乳化寡糖等糖类、山梨糖醇、赤藓醇、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇等糖醇类。这些赋形剂可以单独使用或组合使用二种以上。

作为其它添加剂，可以适当选择着色剂、保存剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、分散剂、稳定剂、胶凝剂、抗氧化剂、表面活性剂、保存剂、pH调节剂、油分、水、醇类、螯合剂、有机硅类、紫外线吸收剂、保湿剂、香料、各种药效成分、防腐剂、中和剂等公知的物质而使用。

此外，本发明也提供通过施与依克多因或其生理学上可接受的盐从而经由ASMT表达促进而用于促进褪黑激素的合成的方法。此外，本发明也提供通过施与依克多因或其生理学上可接受的盐从而经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、皮肤的抗氧化活性的增强、和皮肤的抗炎活性的增强中的1种或多种作用的方法。本发明的方法是以美容作为目的的方法，有时并不是通过医师、医疗从业者的治疗。

进而，本发明也提供用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、皮肤的抗氧化活性的增强、和皮肤的抗炎活性的增强中的1种或多种作用的医药的制造中的依克多因或其生理学上可接受的盐的使用。本发明也提供通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、皮肤的抗氧化活性的增强、和皮肤的抗炎活性的增强中的1种或多种作用的方法所使用的依克多因或其生理学上可接受的盐。

实施例

接下来通过实施例进一步详细地说明本发明。另外，本发明不限定于此。

实施例1

依克多因的ASMT基因表达增强作用

试样的调制

将市售的依克多因(メルク)用纯化水溶解并进行过滤除菌，调制出浓度1M的依克多因试样。

表皮角质形成细胞的培养

将市售的来源于正常成人皮肤的角质形成细胞(クラボウ)以成为5×10⁵cells/烧瓶的方式接种于T75烧瓶，在角质形成细胞用培养基(Humedia-KG2，クラボウ)中在37℃、5％CO₂气氛下进行培养直到达到亚汇合(semiconfluency)，作为种细胞。将该角质形成细胞通过胰蛋白酶处理进行回收，以成为2×10⁴cells/孔的方式接种于24孔板，在角质形成细胞用培养基(Humedia-KG2，クラボウ)中在37℃、5％CO₂气氛下进行了培养直到达到汇合(confluency)。

试样的添加

在达到汇合的表皮角质形成细胞中，将依克多因试样以培养基中浓度成为1mM的方式以适当的稀释率进行添加，在37℃、5％CO₂气氛下继续培养。作为对照，仅用不添加依克多因试样的培养基进行了培养。

从细胞的RNA的提取

在添加依克多因后10小时后将培养基除去，使用市售的RNA提取试剂(RNeasyMini Kit，Qiagen)，进行了细胞的溶解和RNA的提取。

采用定量PCR法的ASMT表达量的评价

以提取出的RNA作为模板，使用市售的定量PCR试剂(BrilliantII QRT-PCR kit，Agilent)和定量PCR装置(Mx-3005P，Agilent)实施定量PCR，测定了ASMT基因的表达量。也同时测定了作为内标的表达量基本恒定的RPLP0基因的表达量。PCR用引物使用了对各基因特异性的市售的PCR用引物(タカラバイオ社)。

将结果示于图1中。作为将对照的ASMT基因表达量设为1的比较，而显示添加了各试样的情况下的ASMT基因表达量。由图1确认了，依克多因与仅用培养基进行了培养的情况相比具有非常高的ASMT表达促进作用。

实施例2

依克多因针对ASMT基因表达的浓度依赖性

试样的调制

将市售的依克多因(メルク)用纯化水溶解并进行过滤除菌，调制出10重量％的依克多因试样。

试样的添加

在与实施例1同样地培养了的表皮角质形成细胞中，将依克多因试样以培养基中浓度成为0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.1重量％的方式以适当的稀释率添加，在37℃、5％CO₂气氛下继续培养。

RNA的提取

采用定量PCR法的ASMT表达量的评价

以提取出的RNA作为模板，使用市售的定量PCR试剂(BrilliantII QRT-PCR kit，Agilent)和定量PCR装置(Mx-3005P，Agilent)实施定量PCR，测定了ASMT基因的表达量。也同时测定了作为内标的表达量基本上恒定的RPLP0基因的表达量。PCR用引物使用了对各基因特异性的市售的PCR用引物(タカラバイオ)。

将结果示于图2中。根据图2，0.02重量％的依克多因的ASMT基因表达量与低浓度的依克多因(0.005重量％、0.01重量％)相比高，确认了依克多因的ASMT表达促进作用为浓度依赖性。

实施例3

与各种抗氧化物质进行了比较的依克多因的ASMT基因表达增强作用

试样的调制

通过与实施例1同样的方法调制出依克多因试样。作为对照药剂，也制作出含有已知具有抗氧化作用的物质(葡糖基橙皮苷、绿茶提取液、乌龙茶提取液)的试样。将市售的葡糖基橙皮苷(东洋制糖)用纯化水溶解并进行过滤除菌，调制出100mM的葡糖基橙皮苷试样。绿茶提取液(香荣兴业)、乌龙茶提取液(サントリー)将市售的提取液进行过滤除菌而使用。

在与实施例1同样地培养了的表皮角质形成细胞中，将通过上述而获得的各试样以培养基中的浓度成为依克多因1mM、葡糖基橙皮苷100μM、绿茶提取液0.1％、乌龙茶提取液0.1％的方式以适当的稀释率添加于培养基。这些添加浓度都为外用剂所使用的一般浓度。在添加试样后，将细胞与实施例1同样地操作而培养，评价了ASMT表达量。此外，将不添加试样而仅用培养基进行了培养的物质作为不添加药剂的对照。

将结果示于图3中。由图3确认了，依克多因的ASMT基因表达量与绿茶提取液、乌龙茶提取液、更高浓度的葡糖基橙皮苷相比也高。

产业可利用性

本发明通过含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分的ASMT表达促进剂的施与，能够促进ASMT基因的表达，通过经由ASMT基因表达的促进而促进褪黑激素的合成，从而能够增强睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性的增强、和抗炎活性的增强这样的作用。

Claims

1.一种ASMT表达促进剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分。

2.一种褪黑激素合成促进剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成。

3.一种抗氧化剂，其含有依克多因或其生理学上可接受的盐作为有效成分，并通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而使抗氧化活性增强。

4.一种组合物，其包含权利要求1所述的ASMT表达促进剂。

5.一种组合物，其包含权利要求2所述的褪黑激素合成促进剂。

6.一种组合物，其包含权利要求3所述的抗氧化剂。

7.根据权利要求4或5所述的组合物，其通过经由ASMT表达促进而促进褪黑激素的合成，从而用于增强选自睡眠障碍的改善、认知功能的提高、心境障碍的改善、抗氧化活性的增强、和抗炎活性的增强中的1种或多种作用。

8.根据权利要求4～7中任一项所述的组合物，其为化妆品组合物或食品组合物。