CN111903983A - 植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，属于微生物技术领域。本发明提供的植物乳杆菌Y44可以清除自由基；小鼠摄食植物乳杆菌Y44，可提高肝脏抗氧化酶活力，提高肠道紧密连接蛋白的表达，维持肠道菌群平衡，调节甘油磷脂代谢，从而缓解活性氧积累对机体的损伤。具有很好的应用前景。

Description

植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益 生菌产品中的应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌Lactobacillusplantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，属于微生物技术领域。

背景技术

机体正常生理代谢会产生ROS，机体内正常水平的ROS具有参与调整细胞氧化还原电势，调节信号传导、基因表达，杀灭有害菌等作用。但是高浓度的ROS会降低氧化还原酶的活力，破坏氧化还原电势，攻击生物大分子物质，抑制细胞生长。

抗氧化剂能够清除活性氧、自由基，缓解氧化损伤。但是丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)和没食子酸丙酯(PG)等合成抗氧化剂，虽然已广泛用于食品中，但其安全性受到质疑。因此，近年来从自然生物资源中筛选抗氧化剂引起了极大的关注。摄食某些乳杆菌属细菌可以帮助宿主清除休内自由基、缓解氧胁迫造成的机体损伤。

发明内容

本发明提供了一种具有抗氧化活性的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44，该植物乳杆菌Y44已于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述菌种的保藏编号为CCTCC NO：M 2018558。

本发明还提供了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用。

本发明还提供了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44的如下(1)-(5)中任一所述的应用：

(1)制备清除自由基产品；

(2)制备提高抗氧化酶活力产品；

(3)制备提高肠紧密连接蛋白表达产品；

(4)制备调节肠道菌群组成产品；

(5)制备调节甘油磷脂代谢产品。

发明作用与效果：

本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44可以清除氧自由基；提高氧化损伤小鼠的肝脏抗氧化酶活力；提高氧化损伤小鼠的结肠紧密连接蛋白表达；改善氧化损伤小鼠的肠道菌群多样性，提高乳杆菌属相对丰度；调节氧化损伤小鼠的甘油磷脂代谢；从而具有良好的抗氧化作用。因此本发明的植物乳杆菌Y44具有广阔的应用价值。

附图说明

图1为植物乳杆菌Y44显微镜图片(100×10)。

图2为植物乳杆菌Y44的溶血性实验。

图3为植物乳杆菌Y44的产生物胺能力实验。

图4为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肝脏结构的影响(40×10)。

图5为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肝脏抗氧化酶活力的影响，A：MDA含量；B：SOD活力；C：GPx活力；D：CAT活力。

图6为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠结肠紧密连接蛋白表达量影响，A：Claudin-1相对表达量；B：Occludin表达量；

图7为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肠道菌群门水平影响，A为各组门水平组成Bar图，B为各组门水平相对丰度。

图8为植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠肠道菌群科水平影响，A为各组科水平组成Bar图，B为各组科水平相对丰度。

具体实施方式

下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1菌株培养与安全性

本发明的植物乳杆菌Y44在MRS培养基中进行培养活化，具体步骤如下：

一、菌株培养方法

(1)MRS培养基制备

按照20g/L葡萄糖，10g/L蛋白胨，5g/L酵母膏，10g/L牛肉膏，1mL吐温80，2g/L磷酸氢二钾，2g/L柠檬酸二铵，5g/L乙酸钠，0.58g/L七水硫酸镁，0.25g/L四水硫酸锰，2％琼脂；称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度121℃下灭菌20min，得到所述的MRS培养基。

植物乳杆菌Y44划线接种于含有2％琼脂的步骤(1)培养基中，在温度37℃下厌氧培养48h～72h，挑取单菌落，进行革兰氏染色，采用显微镜进行形态学观察，同时进行过氧化氢酶试验，微生物菌种的移接的所有操作，均应在无菌环境下严格的无菌操作。

二、菌株染色

采用革兰氏染色法对菌株染色，镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。

三、菌株过氧化氢酶试验

接种环挑取上述植物乳杆菌Y44菌株于含有3％过氧化氢溶液液滴的载玻片上，如有大量气泡产生为阳性，否则为阴性。

将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性的植物乳杆菌Y44，接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养24h～48h后，委托大连宝生物公司进行16S rDNA测序鉴定，序列如SEQ ID NO.1所示，鉴定结果为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44的显微镜图片(100×10)如图1所示。

四、菌株保藏

所述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44的菌种保藏号为CCTCC NO：M 2018558，保藏日期为2018年8月21日，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，菌株名称为Y44。

五、菌株安全性

(1)评价植物乳杆菌Y44的溶血性。培养基配置方法：Columbia琼脂培养基中加入7％(v/v)山羊血。将活化好的植物乳杆菌Y44、L.rhamnosus GG(ATCC53103)及L.Monocytogenes EGDE(ATCC BAA-679)划线接种于Columbia固体培养基中，37℃培养48h。若菌落周围有透明圈出现则具有β-溶血性，若无透明圈出现则具有γ-溶血性，其中具有β-溶血性的菌株通常具有致病性。以L.Monocytogenes EGDE作为阳性对照。证明植物乳杆菌Y44不具有溶血性，是一株较为安全的菌株。见图2。

(2)评价植物乳杆菌Y44的抗生素敏感性。根据美国临床实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)标准[99]的方法，选择抗生素(氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素、万古霉素)进行植物乳杆菌Y44抗生素敏感性试验。证明植物乳杆菌Y44对氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素均具有敏感性，具有安全性，见表1。

表1植物乳杆菌Y44对抗生素的临界值(μg/mL)

S：对抗生素敏感n.r.：即不需要测定

(3)评价植物乳杆菌Y44产生物胺能力。脱羧酶培养基配置方法：改良氨基脱羧酶琼脂培养基中分别加入不同1％(w/v)的前体氨基酸(酪氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、精氨酸)，并调整pH至5.3。首先，将L.plantarum Y44在分别添加了不同0.1％(w/v)的前体氨基酸(酪氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、精氨酸)和0.005％(w/v)吡哆醛-5-磷酸的MRS肉汤培养基中活化3-4次，每次培养24h，以诱导该菌株表达脱羧酶。其次，将无菌滤纸片放置于固体脱羧酶培养基上，取10μL左右的菌液滴在无菌滤纸片表面，并于37℃培养96h，若无菌滤纸片周围有紫色出现，说明L.plantarum Y44具有产生物胺的能力，若周围无紫色出现，说明不具有产生物胺的能力，并以L.rhamnosus GG作为阳性对照。如图3所示，植物乳杆菌Y44及LGG菌株周围并没有紫色圈产生，初步推断植物乳杆菌Y44不具有产生生物胺的潜力，见图3。

实施例2植物乳杆菌Y44清除自由基能力

一、样品制备

将-80℃保藏菌株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG(ATCC 53103)接入MRS液体培养基中37℃培养18h，连续活化3次。发酵液经3500r/min，离心10min，收集菌体。收集的菌体经PBS洗涤2次，重悬于PBS中，调整菌浓度为1×10⁹CFU/mL，作为样品备用。

二、DPPH自由基清除能力测定

1mL样品加入1mL 0.2mmol/L DPPH-无水乙醇溶液，室温下避光反应30min后；经3500r/min离心10min，测定上清液在517nm下的吸光度。

菌体对DPPH自由基清除率

其中：A_i为1mL DPPH-无水乙醇+1mL样品吸光度

A_j为1mL PBS+1mL样品吸光度

A_c为1mL DPPH-无水乙醇+1mL PBS吸光度

三、羟自由基(·OH)清除能力测定

样品组：1mL 0.02mol/L PBS(pH7.4)溶液依次加入0.5mL 2.5mmol/L邻二氮菲溶液、0.5mL 2.5mmol/L FeSO₄溶液和0.5mL 20mmol/L H₂O₂溶液，充分混匀后再加入0.5mL样品，作为样品组As；用0.5mL蒸馏水取代0.5mL样品，作为对照组Ac；用1mL蒸馏水取代样品和H₂O₂，作为空白组Ab。37℃恒温水浴1h，于536nm处测定吸光值。

羟自由基(·OH)的清除率/％＝(As-Ab)/(Ac-Ab)×100％

其中：As为含有样品和H₂O₂组的吸光值

Ac为不含样品但含H₂O₂的吸光值

Ab为不含有样品和H₂O₂组的吸光值

四、H₂O₂耐受能力测定

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)GG培养18h，以2％(v/v)分别接入含有终浓度为0.5mmol/L H₂O₂的MRS液体培养基中，培养8h。菌株接入不含H₂O₂的MRS液体培养基作为对照组。测定培养液OD₆₀₀吸光值，表示菌株在不同H₂O₂浓度下的生长情况，

存活率/％＝OD_600实验/OD_600对照×100％

五、氧自由基吸收能力(ORAC)测定

将传代活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG在PBS(pH7.4)中配置菌悬液，浓度调整至10⁸ CFU/mL，将20μL样品(10⁸ CFU/mL乳杆菌)添加到底部透明的黑色96孔板中，加入20μL荧光素钠，使每孔终浓度为0.96μM，37℃下孵育20min，使样品与荧光素钠自动混合。最后，每孔添加140μL12.8mmol/L偶氮二异丁咪盐酸盐(AAPH)。在激发波长485nm和发射波长538nm下以顶读方式测量荧光强度。总共测量60个循环，每个循环间隔2min，测量温度保持37℃恒定。使用Trolox作阳性对照，配制浓度梯度为6.25、12.5、25、37.5、50、62.5μmol/L的Trolox溶液，以其相对ORAC值为纵坐标，绘制标准曲线。试验结果ORAC值表示为10⁸ CFU/mL乳杆菌对应的Trolox的当量(μM)。

实验结果如表2所示植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44具有DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、H₂O₂耐受能力测定和氧自由基吸收能力。并且植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44的自由基清除能力、H₂O₂耐受能力测定和氧自由基吸收能力显著高于鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG(不同小写字母表示差异显著性p<0.05)。以上结果表明植物乳杆菌Y44具有自由基清除能力。

表2乳杆菌清除自由基能力测定

注：Y44＝植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44，LGG＝鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG，不同小写字母表示差异显著性p<0.05

实施例3植物乳杆菌Y44对氧化损伤小鼠的保护作用

一、样品制备

取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44(以下用Y44表示)于MRS培养基中活化3次。活化后的菌株经平板划线纯化，挑取单一菌落接种于MRS培养基，以1％(V/V)比例接种于MRS培养液，37℃培养18h，连续传代3次。活化的菌株利用无菌0.85％生理盐水清洗3次，重悬至无菌0.85％生理盐水中，调整Y44浓度为10⁹ CFU/mL和10⁸ CFU/mL。

二、分组处理

六周龄的雄性Balb/C小鼠适应性饲养一周后，随机分组，每组10只处理如下：CK组、DG组Balb/c小鼠每日灌胃0.85％生理盐水，VC组Balb/c小鼠每日灌胃抗坏血酸(50mg/kg小鼠体重)，HC组和LC组Balb/c小鼠每日灌胃10⁹CFU/mL和10⁸CFU/mL Y44，各组灌胃剂量均为1mL/100g小鼠体重。DG组、HC组、LC组和VC组Balb/c小鼠每日通过皮下注射方式给予200μL 800mg/kg小鼠体重的D-半乳糖(D-gal)，CK组小鼠用同体积0.85％生理盐水代替D-gal进行皮下注射。各组Balb/c小鼠处理6周，每周称量体重1次。灌胃与皮下注射时间间隔超过4h。

表3动物试验分组

三、缓解小鼠肝脏氧化损伤

1、抗氧化酶活力测定

处死试验动物后，冰袋上取出肝脏组织，加入9倍预冷的0.85％生理盐水，匀浆，4℃、3500r/min离心10min，取上清液。南京建成生物工程研究所生产的总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(产品序列号A001)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)测定试剂盒(产品序列号A001)、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(产品序列号A007)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(产品序列号A003)对相应指标进行测定。

结果如图5所示，相对于CK组，DG组小鼠肝脏MDA含量显著提高，SOD、GPx、CAT活力显著降低(不同小写字母表示差异显著性p<0.05)，经过10⁹CFU/mL本发明的植物乳杆菌Y44干预后小鼠肝脏MDA含量显著降低，SOD、GPx、CAT活力显著提高(p<0.05)，与阳性对照抗坏血酸没有显著性差异(p>0.05)。

2、肝脏病理组织切片

处死小鼠后取小鼠肝脏用4％多聚甲醛进行固定、包埋、切片以及H&E染色。结果如图4所示，DG组小鼠肝脏细胞呈现细胞肿胀、胞质疏松、炎症细胞增多、脂肪空泡以及核分裂症。经过本发明的植物乳杆菌Y44干预小鼠后，症状明显缓解。

四、维持小鼠肠道屏障功能

(1)蛋白提取

处死小鼠后，取出小鼠结肠并且进行蛋白免疫印迹实验(western-blot)。利用北京索莱宝科技有限公司提供的总蛋白提取试剂盒(货号BC3710)提取小鼠结肠组织细胞总蛋白。

(2)蛋白定量

上清液按照北京索莱宝科技有限公司提供的BCA试剂盒(货号PC0020)的方法进行蛋白质的定量，计算出蛋白量后，用PBS将蛋白浓度调一致，然后经过计算加入一定体积的5×loading buffer，沸水浴变性5min，待温度降至室温后，-80℃保存。

(3)SDS-PAGE凝胶电泳

选用12％的分离胶和5％的浓缩胶进行电泳。两块板的电流为16mA—32mA，蛋白质上样量为30μg。

(4)湿法转膜

将跑好的胶放到转膜液中备用，同时注意胶的正反面。将PVDF膜裁剪好并做好标记，用纯甲醇活化30s后，置于转膜液中浸泡10min。电泳结束前，将两片海绵、六片滤纸、玻璃棒、切胶刀提前放到转膜液中浸泡。浸泡结束后，“三明治”夹膜。夹子黑下白上，依次放置海绵、三次滤纸、凝胶、PVDF膜、三层滤纸和海绵，每放置一层要赶净气泡，夹好后置于转膜槽内，黑负白正，转膜槽内加入转膜液，准备好冰水降温，开始转膜。220mA转1h。

(5)封闭：PVDF膜放到5％脱脂奶粉TBST溶液中，摇床封闭2h。

(6)洗膜：用TBST溶液洗膜3次，洗掉表面奶粉即可。

(7)一抗孵育及洗膜：将Occludin、Claudin-1、β-actin分别用不同的一抗孵育，4℃过夜(一抗稀释按1:1000配制)后TBST洗5次，每次摇5min。

(8)二抗孵育及洗膜：选择相应二抗孵育，室温孵育1h后TBST洗5次，每次摇5min。再用TBS洗一遍，然后可以浸泡在TBS中。

(9)化学发光成像：取等量ECL的A液、B液(美仑公司)，混合后均匀覆盖膜1min，至于化学曝光仪器中进行曝光，最后得到曝光条带。

实验结果如图6所示，与DG组相比，经过10⁹CFU/mL本发明的植物乳杆菌Y44干预后小鼠结肠紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1发生上调。植物乳杆菌Y44可以显著提高小鼠结肠紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1的表达，维持小鼠肠道屏障功能。

五、调节小鼠肠道菌群

(1)DNA提取及PCR扩增

根据

soil DNA kit(Omega Bio-tek,Norcross,GA,U.S.)说明书进行微生物群落总DNA抽提，使用1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的提取质量，使用NanoDrop2000测定DNA浓度和纯度；使用上游引物SEQ ID NO.2：338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’)和下游引物SEQ ID NO.3：806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)对16S rRNA基因V3-V4可变区进行PCR扩增，扩增程序如下：95℃预变性3min，27个循环(95℃变性30s，55℃退火30s,72℃延伸45s)，然后72℃稳定延伸10min，最后在10℃进行保存(PCR仪：ABI

9700型)。PCR反应体系为：5×TransStart FastPfu缓冲液4μL，2.5mMdNTPs 2μL，上游引物(5μM)0.8μL，下游引物(5μM)0.8μL,TransStart FastPfu DNA聚合酶0.4μL，模板DNA 10 ng，补足至20μL。每个样本3个重复。

(2)Illumina Miseq测序

将同一样本的PCR产物混合后使用2％琼脂糖凝胶回收PCR产物，利用AxyPrep DNAGel Extraction Kit(Axygen Biosciences,Union City,CA,USA)进行回收产物纯化，2％琼脂糖凝胶电泳检测，并用Quantus^TMFluorometer(Promega,USA)对回收产物进行检测定量。使用NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit进行建库:(1)接头链接；(2)使用磁珠筛选去除接头自连片段；(3)利用PCR扩增进行文库模板的富集；(4)磁珠回收PCR产物得到最终的文库。利用Illumina公司的Miseq PE300平台进行测序(上海美吉生物医药科技有限公司)。

结果显示与DG相比，在门水平上本发明的植物乳杆菌Y44改善了厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)相对丰度(图7)；在科水平上增加了乳杆菌科(Lactobacteriaceae)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、Ruminococcaceae(瘤胃菌科),降低了Muribaculaceae、脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)的相对丰度(图8)。结果表明植物乳杆菌Y44可以调节小鼠肠道微生物群，使肠道菌群趋于正常组小鼠。

七、调节小鼠甘油磷脂代谢

本研究中所有Balb/c小鼠血清样本交由上海美吉生物医药科技有限公司进行血清代谢组学测定。取小鼠血清与冷甲醇溶液，冰上超声萃取。将样品静置于-20℃保持30min，经13000×g、4℃、离心15min，离心后取上清液，进行LC-MS/MS分析。试验过程制备质控样品(QC)，评价在上机过程中分析系统的稳定性。过滤后原始数据导入代谢组学处理软件Progenesis QI进行搜库鉴定，将MS和MS/MS质谱信息与代谢数据库进行匹配。

结果如表4所示，DG组小鼠血清中甘油磷脂及衍生物增多造成甘油磷脂代谢紊乱。经过本发明的植物乳杆菌Y44干预后小鼠血清中甘油磷脂及衍生物含量恢复与CK组相近水平，结果表明植物乳杆菌Y44具有调节甘油磷脂代谢能力。

表4.参与甘油磷脂代谢的差异代谢物

注：CK，空白组；DG，D-半乳糖组；HC，高浓度组；↑表示表达上调，↓表达下调，*代表VIP值>1且p<0.05；FC，Fold Change，差异倍数；PE，磷脂酰乙醇胺；PC，磷脂酰胆碱；PS，磷脂酰丝氨酸；LysoPC，溶血磷脂酰胆碱；LysoPA，溶血甘油磷脂酸

以上对D-gal引起氧化损伤的小鼠灌胃植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44，可以显著缓解D-gal对。以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 大连工业大学

<120> 植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用

<130> 2020

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1546

<212> DNA

<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)

<400> 1

attaatttga gagtttgatc ctggctcagg acgaacgctg gcggcgtgcc taatacatgc 60

aagtcgaacg aactctggta ttgattggtg cttgcatcat gatttacatt tgagtgagtg 120

gcgaactggt gagtaacacg tgggaaacct gcccagaagc gggggataac acctggaaac 180

agatgctaat accgcataac aacttggacc gcatggtccg agtttgaaag atggcttcgg 240

ctatcacttt tggatggtcc cgcggcgtat tagctagatg gtggggtaac ggctcaccat 300

ggcaatgata cgtagccgac ctgagagggt aatcggccac attgggactg agacacggcc 360

caaactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tggacgaaag tctgatggag 420

caacgccgcg tgagtgaaga agggtttcgg ctcgtaaaac tctgttgtta aagaagaaca 480

tatctgagag taactgttca ggtattgacg gtatttaacc agaaagccac ggctaactac 540

gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa 600

gcgagcgcag gcggtttttt aagtctgatg tgaaagcctt cggctcaacc gaagaagtgc 660

atcggaaact gggaaacttg agtgcagaag aggacagtgg aactccatgt gtagcggtga 720

aatgcgtaga tatatggaag aacaccagtg gcgaaggcgg ctgtctggtc tgtaactgac 780

gctgaggctc gaaagtatgg gtagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccataccgta 840

aacgatgaat gctaagtgtt ggagggtttc cgcccttcag tgctgcagct aacgcattaa 900

gcattccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga cgggggcccg 960

cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagctacgcg aagaacctta ccaggtcttg 1020

acatactatg caaatctaag agattagacg ttcccttcgg ggacatggat acaggtggtg 1080

catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 1140

cttattatca gttgccagca ttaagttggg cactctggtg agactgccgg tgacaaaccg 1200

gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc 1260

tacaatggat ggtacaacga gttgcgaact cgcgagagta agctaatctc ttaaagccat 1320

tctcagttcg gattgtaggc tgcaactcgc ctacatgaag tcggaatcgc tagtaatcgc 1380

ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat 1440

gagagtttgt aacacccaaa gtcggtgggg taacctttta ggaaccagcc gcctaaggtg 1500

ggacagatga ttagggtgaa gtcgtaacaa ggtagccgta ggagaa 1546

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 2

actcctacgg gaggcagcag 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

ggactachvg ggtwtctaat 20

Claims (2)

1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44在制备抗氧化益生菌产品中的应用，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44已于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述菌种的保藏编号为CCTCC NO：M 2018558。

2.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y44的如下(1)-(5)中任一所述的应用：

(1)制备清除自由基产品；

(2)制备提高抗氧化酶活力产品；

(3)制备提高肠紧密连接蛋白表达产品；

(4)制备调节肠道菌群组成产品；

(5)制备调节甘油磷脂代谢产品。

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