CN111904959A

CN111904959A - α-L-岩藻糖苷酶抑制剂在制备治疗小儿肺炎的药物中的用途

Info

Publication number: CN111904959A
Application number: CN202010851711.5A
Authority: CN
Inventors: 董莉; 武晓萌; 艾恒玲; 苗春兴; 蔡冰冰; 韩丽萍
Original assignee: Mudanjiang Medical University
Current assignee: Mudanjiang Medical University
Priority date: 2020-08-21
Filing date: 2020-08-21
Publication date: 2020-11-10

Abstract

本发明提供一种α‑L‑岩藻糖苷酶抑制剂脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗小儿病毒性肺炎的药物中的用途。所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐抑制病毒活性，降低受试者的肺指数、降低死亡率、延长存活时间，抑制炎症因子产生，降低IFN‑γ，TNF‑α和IL‑6水平。

Description

α-L-岩藻糖苷酶抑制剂在制备治疗小儿肺炎的药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及脱氧岩藻糖野尻霉素(Deoxyfuconojirimycin)或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗受试者中小儿肺炎的药物中的应用。

背景技术

小儿肺炎是婴幼儿时期的常见病，是婴幼儿死亡的常见原因。肺炎是由病原体感染或吸入羊水及油类和过敏反应等所引起的肺部炎症，主要临床表现为发热、咳嗽、呼吸急促、呼吸困难以及肺部啰音等，早期体温为38～39℃，亦可高达40℃。除呼吸道症状外，患儿可伴有精神萎靡，烦躁不安，食欲不振，腹泻等全身症状。小婴儿常见拒食、呛奶、呕吐及呼吸困难。引起小儿肺炎的病原体包括细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等。其中，病毒性肺炎在小儿肺炎中占比很高，呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒等病毒感染是引起小儿病毒性肺炎的主要病原体。两种或多种病毒可以混合感染，病毒性肺炎也可继发细菌感染。

临床上常用的治疗小儿肺炎的药物包括西药抗病毒药和中成药。西药抗病毒药根据化学结构主要分为核苷类抗病毒药，非核苷类抗病毒药和干扰素。其中，核苷类抗病毒药主要模拟天然核苷酸的结构，竞争性作用于酶活性中心，嵌入正在合成的病毒DNA链中，终止DNA链的延长，从而抑制病毒复制。临床上常用的核苷类抗病毒药包括利巴韦林、阿昔洛韦、阿糖腺苷、更昔洛韦、西多福韦等。非核苷类抗病毒药物主要有阿比多尔，阿比多尔是一种非核苷类光谱抗病毒药，体内外实验表明，对多种病毒包括流感病毒、人鼻病毒、柯萨奇病毒、腺病毒都有抑制作用。阿比多尔抑制病毒的作用是通过直接杀伤病毒和抗病毒生物合成，而且随着药物与细胞作用时间的延长，治疗指数也随之增大。干扰素是有关生物细胞在病毒感染或其他有声剂刺激下产生的一类蛋白质，干扰素不直接作用于病毒，它通过引起细胞产生某些酶类和其他机制发挥抗病毒作用，对DNA、RNA病毒都有作用。西药抗病毒药在发挥抗病毒作用的同时，也存在诸多不良反应，利巴韦林大剂量服用可至可逆性贫血，干扰素可能使患者出现发热头痛、乏力，白细胞水平降低和转氨酶升高等副作用。阿昔洛韦有暂时性肾功能不良反应，更昔洛韦可使白细胞和血小板水平降低。而中药抗病毒药作用机制不明确，治疗效果不确切，存在诸多不确定性。因此，临床上仍需要开发新的治疗小儿病毒性肺炎感染的药物。

亚氨基糖是一类合成糖类化合物。他们能够干扰糖基水解酶(糖苷酶)和糖基转移酶，具有相当多的生物活性，包括抗糖尿病、抗虫、调节植物生长、免疫调节，抗癌以及抗细菌和病毒感染等。在这类亚氨基糖类化合物中，α-D-葡糖苷酶抑制剂以及α-L-岩藻糖苷酶抑制剂受到广泛关注。研究表明，α-葡糖苷酶I抑制剂，例如脱氧野尻霉素和栗精胺能够干扰了HIV病毒包膜糖蛋白(如糖蛋白gp120和gp41)的正确糖基化，具有抗逆转录病毒活性。N-丁基脱氧野尻霉素对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)具有活性，可诱导病毒包膜蛋白的错折叠。此外，该化合物作为一种新型糖脂类生物合成抑制剂还有抑制人乙肝病毒(HBV)的活性。栗精胺除了抗HIV活性外，还被发现具有抗麻疹病毒的活性，这两种效应都归因于病毒糖蛋白的异常折叠。此外，栗精胺还干扰了流感病毒神经氨酸酶在细胞表面的表达以及登革病毒包膜糖蛋白的正确折叠，具有抗流感病毒和登革热病毒的活性。而现有技术中缺乏与α-D-葡糖苷酶抑制剂结构类似的α-L-岩藻糖苷酶抑制剂抗病毒活性的报道。

本发明的研究表明，α-L-岩藻糖苷酶抑制剂脱氧岩藻糖野尻霉素(Deoxyfuconojirimycin)对常见呼吸系统病毒腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒或副流感病毒等都有显著的体外抗病毒活性，并进一步的，通过动物模型，证实了岩藻糖野尻霉素在甲型流感病毒引起的新生小鼠肺炎中的抗病毒作用，进而完成本发明。

发明内容

本发明一方面提供一种脱氧岩藻糖野尻霉素(Deoxyfuconojirimycin)或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗受试者中小儿肺炎的药物中的应用。

在一个具体实施例方式中，所述受试者是婴幼儿，所述受试者的年龄在0至6岁之间。

在另一具体的实施方式中，脱氧岩藻糖野尻霉素以药学上可接受的盐的形式存在，所述药学上可接受的盐可以选自例如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、丁二酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸，优选为脱氧岩藻糖野尻霉素盐酸盐(Deoxyfuconojirimycin hydrochloride)。

根据本发明的一个具体实施方式，所述肺炎是由病毒感染引起的。

进一步地，所述病毒是腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒或副流感病毒。优选地，所述病毒是甲型流感病毒H1N1亚型。

根据本发明的一个具体实施方式，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐能够直接抑制病毒活性，降低所述受试者的肺指数、降低死亡率、延长存活时间。

进一步地，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐抑制炎症因子产生，降低IFN-γ，TNF-α和IL-6水平。

根据本发明的一个具体实施方式，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐于药学上可接受的辅料制备成药物制剂，所述药物制剂选自口服制剂、胃肠外制剂、吸入制剂或局部给药制剂。

进一步地，所述制剂选自片剂、胶囊剂、口服液、水针剂、粉针剂、喷雾剂、透皮贴剂、乳剂、膏剂。

有益效果

本发明通过体外抗病毒实验证实了α-L-岩藻糖苷酶抑制剂脱氧岩藻糖野尻霉素对腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒或副流感病毒等常见的容易引起小儿上呼吸道感染和小儿肺炎的呼吸道病毒的抗病毒活性。并进一步通过体内动物实验证实了脱氧岩藻糖野尻霉素治疗H1N1流感病毒感染的新生小鼠肺炎的治疗作用，结果表明，脱氧岩藻糖野尻霉素能够显著降低新生肺炎小鼠的肺感染指数，降低死亡率、延长存活时间，抑制炎症因子产生，降低IFN-γ，TNF-α和IL-6水平。

具体实施方式

在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。

实施例1脱氧岩藻糖野尻霉素的体外抗病毒活性研究

1、药品及试剂

脱氧岩藻糖野尻霉素盐酸盐(DMF-H)购于北京泰泽嘉业科技发展有限公司，病毒唑(利巴韦林)购于江西汇仁药业有限公司。人胚肺细胞(MRC-5)购于武汉普诺赛生命科技有限公司。甲型流感H1N1细胞株(FM/1/47)、乙型流感病毒B、腺病毒(dV7)、副流感病毒(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)购于中国预防医学科学院病毒研究所。

2、实验方法

(1)测定DMF对细胞的最大无毒浓度

将MRC-5细胞(30万/ml)接种在96孔板中，每孔0.1ml，放入5％CO₂培养箱，36℃培养24～36h，待细胞长成单层后加入不同浓度的DMF-H，首先将DMF溶于DMSO，配制成2mM的母液，然后按比例稀释为10个浓度梯度，分别为2mM、1mM、500μM、250μM、125μM、62.5μM、31.25μM、15.625μM、7.8125μM、3.90625μM，每孔0.1ml，每个浓度设2孔，另外设置一组空白细胞对照。放入5％CO₂，60℃培养箱培养72h，以相同浓度下2个孔均不出现细胞病变的药物最小稀释倍数(对细胞不产生毒性的最高药物浓度)作为无毒限量稀释倍数。

(2)测定DMF对常见呼吸道病毒的抑制作用

以最大无毒浓度为起始浓度，稀释为3个浓度(125μM，62.5μM和31.25μM)，以病毒唑(5μM)为阳性对照，进行抗病毒试验，分别于100TCID₅₀的H1N1型、乙型流感病毒B型、副流感病毒SPV、呼吸道合胞病毒RSV以及腺病毒AdV7混匀，放入4℃冰箱24小时后取出，每个药液浓度与病毒的混合液取0.1mL，加入载有单层MRC-5细胞的96孔板中，每个浓度设两孔，同时设病毒对照孔和细胞对照孔，5％CO2、37℃培养72小时，利用MTT法测定细胞活力。

3、实验结果

(1)DMF的最大无毒浓度

经测定，DMF对人胚肺细胞MRC-5的最大无毒浓度为125μM。

(2)体外抗病毒作用

从表1的结果可知，DMF对H1N1甲型流感病毒、乙型流感病毒B、腺病毒(dV7)、副流感病毒(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)都有一定的抑制作用，其中对H1N1甲型流感病毒的抑制作用最强，与病毒对照组相比，有极显著性差异(p<0.001)。

表1 DMF的体外抗病毒作用的OD490值(

n＝2)

^*p<0.5,^**p<0.01,^*＊*p<0.001

实施例2脱氧岩藻糖野尻霉素对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的影响

1、实验动物及试剂

出生10天的ICR小鼠(SPF/VAF级)，体重10g左右，雌雄不限，由北京维通利华试验动物技术有限公司购买。脱氧岩藻糖野尻霉素盐酸盐(DMF-H)购于北京泰泽嘉业科技发展有限公司。小鼠γ干扰素(IFN-γ)酶联反应试剂盒，美国R&D公司产品；小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联反应试剂盒，美国R&D公司产品；IL-6测试盒，南京建成公司产品。达菲(磷酸奥司他韦胶囊)，上海罗氏制药有限公司。

2、实验方法

小鼠随机分为6组，每组20只，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(达菲27.5mg/kg)、DHF高剂量组(80mg/kg)、中剂量组(40mg/kg)、低剂量组(20mg/kg)以及联合用药组(达菲13.75mg/kg+DHF20mg/kg)剂量组。试验时各组药物按照等体积配制成20mL·kg^-1给药。除正常对照组外，小鼠用乙醚轻度麻醉，以15个LD₅₀H1N1流感病毒液滴鼻感染，每只35μL。感染当天开始给药，每次按20mL·kg-¹灌胃，1次/d，连续4d，正常对照组和模型对照组分别用等体积蒸馏水灌胃。第5天，每组取10只小鼠，称体重后摘眼球取血测定血清中TNF-α，IFN-γ，IL-6含量，然后解剖称肺质量，计算肺指数及肺指数抑制率。其余小鼠感染后继续观察2周，观察2周内动物死亡情况，计算死亡率、平均存活天数和生命延长率。采用组间比较t检验进行统计学处理。

肺指数＝肺湿质量(g)/体质量(g)

肺指数抑制率＝(m病毒对照组肺-m实验组肺)/(m病毒对照组肺-m正常对照组肺)×100％

生命延长率＝(试验组存活天数-病毒对照组存活天数)/(病毒对照组存活天数)×100％

3、实验结果

(1)DHF对H1N1肺炎感染小鼠肺指数的影响

采用甲型H1N1流感病毒感染正常小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著差异(P<0.01)；使用DHF治疗4d后3个剂量组肺指数均有不同程度降低，其中DHF高、中剂量组以及联合用药组与模型对照组比较有显著差异(P<0.05)。结果如表1所示。

表1DHF对H1N1肺炎感染小鼠肺指数的影响(

n＝10)

*p<0.5,**p<0.01

(2)DHF对H1N1肺炎感染小鼠肺炎模型生存天数及死亡率的影响

甲型H1N1流感病毒感染小鼠14d后，动物死亡率为90％，平均存活天数为8.15d，DHF治疗4d，3个剂量组和联合用药组动物的死亡数明显减少，死亡率均明显下降；3个剂量组均可延长动物平均存活天数，与模型对照组比较差异显著(P<0.01)。结果如表2所示。

表2 DHF对H1N1肺炎感染小鼠死亡率、存活天数的影响(n＝10)

*p<0.5,**p<0.01

(3)DHF对H1N1肺炎感染小鼠血清中细胞因子的影响

H1N1流感病毒感染后，肺炎小鼠肺部巨噬细胞释放的相关炎症细胞因子IFN-γ，TNF-a及IL-6的含量显著提高。高剂量和中剂量的DHF以及联合用药组治疗后，IFN-γ，TNF-a和IL-6的含量下降，有统计学意义(p<0.01，p<0.05)。说明DHF主要防治流感病毒感染性肺炎的作用机制与抑制炎症损伤的细胞因子有关。具体结果见表3。

表3 DHF对H1N1肺炎感染小鼠炎症细胞因子的影响(

n＝10)

*p<0.5,**p<0.01。

以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。

Claims

1.脱氧岩藻糖野尻霉素(Deoxyfuconojirimycin)或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗受试者中小儿肺炎的药物中的应用。

2.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述受试者是婴幼儿，所述受试者的年龄在0至6岁。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的盐是脱氧岩藻糖野尻霉素盐酸盐(Deoxyfuconojirimycin hydrochloride)。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述肺炎是由病毒感染引起的。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述病毒是腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒或副流感病毒。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述病毒是甲型流感病毒H1N1亚型。

7.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐降低所述受试者的肺指数、降低死亡率、延长存活时间。

8.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐抑制炎症因子产生，降低IFN-γ，TNF-α和IL-6水平。

9.根据权利要求1-8任一项所述的应用，其特征在于，所述脱氧岩藻糖野尻霉素或其药学上可接受的盐于药学上可接受的辅料制备成药物制剂，所述药物制剂选自口服制剂、胃肠外制剂、吸入制剂或局部给药制剂。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述制剂选自片剂、胶囊剂、口服液、水针剂、粉针剂、喷雾剂、透皮贴剂、乳剂、膏剂。