CN111868062A

CN111868062A - 制备显像化合物的新方法

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Publication number: CN111868062A
Application number: CN201980009477.7A
Authority: CN
Inventors: M·策尔纳; M·伯恩特; H·席费施泰因; J·卡斯蒂罗梅利恩; H·克罗特; J·莫丽特; V·达芒希; E·加贝列里
Original assignee: Biomolecular Imaging Co ltd; AC Immune SA
Current assignee: Biomolecular Imaging Co ltd; AC Immune SA
Priority date: 2018-01-24
Filing date: 2019-01-22
Publication date: 2020-10-30
Anticipated expiration: 2039-01-22
Also published as: CO2020008834A2; CN111868062B; IL275995B2; US20210038747A1; CA3088219A1; ES2930259T3; EA202091767A1; TW201932468A; EP3743427A1; KR20200113234A; MX2020007298A; TWI839341B; SG11202006543QA; BR112020014949A8; WO2019145294A1; IL275995A; AU2019212170A1; JP2021512064A; IL275995B1; AU2019212170B2

Abstract

本发明涉及制备式I化合物的新方法。还公开了诊断组合物以及它们在与Tau聚集物相关的病症和异常如阿尔茨海默病(AD)和其它Tau病变的选择性检测、例如采用正电子发射断层扫描(PET)显像进行的选择性检测中的用途。

Description

制备显像化合物的新方法

发明领域

本发明涉及制备式I化合物的新方法，所述式I化合物可用于与Tau聚集物相关的病症和异常如阿尔茨海默病(AD)和其它Tau病变(taupathies)的选择性检测，例如采用正电子发射断层扫描(PET)显像进行的选择性检测。包含所获得的化合物的诊断组合物以及其在诊断和显像中的用途也是本申请的主题。

背景

阿尔茨海默病是一种神经系统疾病，主要被认为由淀粉样蛋白斑块引起，所述斑块是在脑或眼中淀粉样β(Aβ)聚集物的异常沉积的细胞外积聚。AD中其它的主要神经病理学标志是细胞内神经原纤维缠结(NFT)，其产生于高磷酸化Tau(微管蛋白相关单位)蛋白、磷酸化Tau或病理性Tau及其构象异构体的聚集。AD与多种神经变性Tau病变、特别是特定类型的额颞叶痴呆(frontotemporal dementia)(FTD)有共同的病理。在AD脑中，Tau病理(Tau病变)的发展晚于淀粉样蛋白病理，但是仍然有争议地讨论了Aβ蛋白是否是AD中的致病因子，这构成了所谓的淀粉样蛋白级联假说的实质(Hardy等人，Science 1992，256，184-185，和最新的Musiek等人，Nature Neurosciences 2015，18(6)，800-806，“Three dimensionsof the amyloid hypothesis：time，space and′wingmen′”)。

目前，诊断AD的唯一明确方法是通过个体的活组织或死亡后尸检材料的组织学分析来鉴别脑组织中的斑块和缠结。除了AD，Tau还在其它(非AD)神经变性疾病中发挥重要作用。这类非-AD Tau病变包括例如核上性麻痹(PSP)、皮克病(PiD)和皮质基底节变性(CBD)。

已经提出通式A化合物可用于与Tau聚集物相关的病症和异常如阿尔茨海默病(AD)和其它Tau病变的选择性检测，现有技术中已经记载了生产该化合物的一些方法。

Gobbi等人在WO 2015/052105中公开了通过使具有硝基基团而不是¹⁸F的前体与[¹⁸F]氟化物在微波装置中反应获得式A化合物的方法。在合成步骤后，式A化合物通过包括以下的两步操作进行纯化：

1)HPLC，采用甲醇和三乙胺的流动相；和

2)重配制，采用固相提取柱用于捕获式A化合物和随后用盐水(0.9％NaCl，在水中)稀释的乙醇从柱洗脱。

该方法以26.1％的产率提供了式A化合物。

Gobbi等人在J.Med.Chem.2017，第60卷，第7350至7370页中还公开了如下两种方法：

a)微波方法：在阳离子交换柱上捕获[¹⁸F]氟化物，用

/碳酸钾混合物洗脱活性。加入乙腈后，将混合物在升高温度下干燥。然后将装有干燥[¹⁸F]氟化物混合物小瓶转移至微波装置，加入在400μL DMSO中的0.5mg前体分子(未被保护的硝基衍生物)。通过50W微波照射小瓶240秒。将所得溶液稀释，通过制备型HPLC纯化(C-18柱，乙腈/三甲胺缓冲液，pH 7.2)。

收集产品峰，用水稀释，通过C-18 Sep-Pak Plus柱。将柱用水洗涤，用乙醇洗脱¹⁸F-标记的产物，用盐水溶液稀释。

b)热加热方法：在阳离子交换柱上捕获[¹⁸F]氟化物，用

/碳酸钾混合物洗脱活性。加入乙腈后，将混合物在升高温度下干燥。加入在400μL DMSO中的0.5mg前体分子(未被保护的硝基衍生物)，将溶液于160℃加热10分钟。将所得溶液稀释，通过制备型HPLC纯化(C-18柱，乙腈/三甲胺缓冲液，pH 7.2)。

因此，上述现有技术中的制备式A化合物的方法具有两个纯化/重配制步骤，其中如图1所示，在微波方法的情况下，该方法仅仅是部分自动化的。

现有技术中描述的方法的硝基前体(和主要副产物)具有差的溶解性，尤其是在纯化(制备型HPLC)中使用的乙醇、乙腈和乙腈/水性缓冲液混合物中如此，尤其是如果使用具有中性pH的水性缓冲液混合物的话。在现有技术的实施例中仅使用了0.5至0.7mg的前体。

本发明的目的是提供改进的制备式I化合物的方法，该方法比现有技术的方法更具有成本和时间效率(如图2所概述)。而且，还应当改善了方法的产率。

附图说明

图1：Gobbi等人选择的现有技术方法的示意图概述。

图2：本发明的方法的示意图概述。

图3：GE Tracerlab FX合成仪的设置。

图4：IBA Synthera合成仪的设置。

发明简述

本发明涉及如下项：

1.制备式I化合物的方法，

该方法包括如下步骤：

A)使式II化合物与¹⁸F氟化剂反应

其中X是H或PG，

LG是离去基，且

PG是胺保护基，和

B)任选地，如果X是PG，则裂解保护基PG，和

C)使所得的式I化合物采用包含乙醇和水的流动相进行高效液相色谱法(HPLC)。

2.根据项目1的方法，其中X是PG，步骤B不存在，和保护基PG在步骤A中裂解。

3.根据项目1的方法，其中X是PG，和保护基PG在步骤B中裂解。

4.根据项目1-3任一项的方法，其中流动相中乙醇：水的比例为约5/95v/v至约80/20v/v。

5.根据项目1-4任一项的方法，其中流动相的pH为约0至约8，优选约1至约3，更优选约2至约3.0，甚至更优选约2.2至约2.8。

6.根据项目1-5任一项的方法，其中流动相还包含缓冲剂，所述缓冲剂优选选自碱金属磷酸二氢盐、二碱金属磷酸氢盐、三碱金属磷酸盐、碱金属乙酸盐、碱土金属乙酸盐、碱土金属甲酸盐、单/二/三碱金属柠檬酸盐。

7.根据项目1-6任一项的方法，其中高效液相色谱法(HPLC)在约50至约400巴、优选约50至约250巴的压力下进行。

8.根据项目1-7任一项的方法，其中所述方法是自动化方法，其中步骤A、任选的步骤B和步骤C在自动化合成仪上进行。

9.根据项目1-8任一项的方法，其中高效液相色谱法(HPLC)产生了包含式I化合物的级分，并且该级分进行步骤D)过滤除菌。

10.根据项目1-9任一项的方法，其中所述方法不包括在步骤C后进行式I化合物的固相提取，优选其中所述方法不包括在步骤C之前或之后进行式I化合物的固相提取。

11.根据项目1-10任一项的方法，其中式I化合物在步骤C的高效液相色谱法(HPLC)之后不进行色谱法，优选其中式I化合物不进行除步骤C的高效液相色谱法(HPLC)以外的色谱法。

12.诊断组合物，包含式I化合物和任选的诊断上可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂，

所述式I化合物可通过项目1-12任一项的方法获得。

13.用于诊断的根据项目12的组合物。

14.用于Tau聚集物的显像、特别是用于Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像的根据项目12的组合物。

15.根据项目13或14的用于所述用途的组合物，其中所述病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病(Gerstmann-

-Scheinker disease)、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征(Parkinsonism-dementia complex of Guam)、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结(non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangles)、嗜银颗粒病(argyrophilic grain disease)、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病(Hallervorden-Spatzdisease)、多系统萎缩、C型尼曼-皮克(Niemann-Pick)病、苍白球-脑桥-黑质变性(pallido-ponto-nigral degeneration)、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良(myotonic dystrophy)、Tau全脑病(Taupanencephalopathy)、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变(white matter tauopathy withglobular glial inclusions)、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣(optic nerve drusen)、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良(lattice dystrophy)；优选阿尔茨海默病。

16.根据项目13或14的用于所述用途的组合物，其中所述病症选自亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病。

17.根据项目13至16任一项的用于所述用途的组合物，其中组合物将通过注射施用。

18.如项目12中所定义的组合物，用于与Tau聚集物相关的病症的诊断或用于Tau病变的诊断，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

19.根据项目18的用于所述用途的组合物，其中Tau病变是3R Tau病变。

20.根据项目18的用于所述用途的组合物，其中Tau病变是4R Tau病变。

21.根据项目18的用于所述用途的组合物，其中所述病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-likewith astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良；优选阿尔茨海默病。

22.根据项目18的用于所述用途的组合物，其中所述病症选自亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病。

23.根据项目21的用于所述用途的组合物，其中所述病症是阿尔茨海默病(AD)。

24.根据项目21的用于所述用途的组合物，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

25.根据项目21的用于所述用途的组合物，其中所述病症是进行性核上麻痹(PSP)。

26.根据项目21的用于所述用途的组合物，其中所述病症是皮克病(PiD)。

27.根据项目18至26任一项的用于所述用途的组合物，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像。

28.Tau聚集物的显像方法，特别是Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像方法，其中给患者施用有效量的如项目12中所定义的组合物

29.诊断与Tau聚集物相关的病症或Tau病变的方法，其中给患者施用有效量的如项目12中所定义的组合物，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

30.根据项目29的方法，其中Tau病变是3R Tau病变。

31.根据项目29的方法，其中Tau病变是4R Tau病变。

32.根据项目29的方法，其中所述病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良；优选阿尔茨海默病。

33.根据项目29的方法，其中所述病症选自亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病。

34.根据项目32的方法，其中所述病症是阿尔茨海默病(AD)。

35.根据项目32的方法，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

36.根据项目32的方法，其中所述病症是进行性核上麻痹(PSP)。

37.根据项目32的方法，其中所述病症是皮克病(PiD)。

38.根据项目28至37任一项的方法，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像。

39.如项目12中所定义的组合物在制备用于Tau聚集物显像、特别是Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像的诊断剂中的用途。

40.如项目12中所定义的组合物在制备用于诊断与Tau聚集物相关的病症或用于诊断Tau病变的诊断剂中的用途，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

41.根据项目40的用途，其中Tau病变是3R Tau病变。

42.根据项目40的用途，其中Tau病变是4R Tau病变。

43.根据项目40的用途，其中所述病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良；优选阿尔茨海默病。

44.根据项目40的用途，其中所述病症选自亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病。

45.根据项目43的用途，其中所述病症是阿尔茨海默病(AD)。

46.根据项目43的用途，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

47.根据项目43的用途，其中所述病症是进行性核上麻痹(PSP)。

48.根据项目43的用途，其中所述病症是皮克病(PiD)。

49.根据项目39至48任一项的用途，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像.

50.根据项目12的组合物作为分析参比物的用途。

51.根据项目12的组合物作为体外筛选工具的用途。

52.在样品或患者中采集用于诊断与Tau聚集物相关的病症的数据的方法，该方法包括：

(a)使被怀疑含有Tau聚集物的样品或特定身体部分或身体区域与含有式I化合物的如项目12所定义的组合物接触；

(b)使式I化合物与Tau聚集物结合；

(c)检测与Tau聚集物结合的式I化合物；和

(d)任选地，使与Tau聚集物结合的式I化合物的存在与否与样品或特定身体部分或身体区域中Tau聚集物的存在与否相关联。

53.确定组织和/或体液中Tau聚集物的量的方法，该方法包括：

(a)提供代表待研究的组织和/或体液的样品；

(b)用含有式I化合物的如项目12中所定义的组合物测试样品中Tau聚集物的存在；

(c)确定与Tau聚集物结合的式I化合物的量；和

(d)计算组织和/或体液中Tau聚集物的量。

54.采集用于确定患者中患有与Tau聚集物相关的病症的倾向、包括用于在样品中或原位检测含有式I化合物的如项目12所定义的组合物与Tau聚集物的特异性结合的数据的方法，该方法包括如下步骤：

(a)使被怀疑含有Tau聚集物的样品或特定身体部分或身体区域与含有特异性结合Tau聚集物的式I化合物的如项目12所定义的组合物接触；

(b)使式I化合物与Tau聚集物结合以形成化合物/Tau聚集物复合物；

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(d)任选地，使化合物/Tau聚集物复合物的存在与否与样品或特定身体部分或身体区域中Tau聚集物的存在与否相关联；和

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。

55.在已经用药物进行治疗的罹患与Tau聚集物相关的病症的患者中采集用于监测残余病症的数据的方法，该方法包括：

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。

56.采集用于预测罹患与Tau聚集物相关的病症和正用药物进行治疗的患者的响应性的数据的方法，该方法包括：

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。

定义

术语“烷基”指饱和的直链或支链碳链，含有1-6个碳原子，另有指示除外。

“Hal”或“卤素”表示F、Cl、Br和I。优选地，“卤素”在每次出现时独立地选自F、Cl和Br，更优选选自F和Cl，甚至更优选F。

如本文所用的术语“胺保护基”(PG)是适于在期望化学反应期间保护氨基基团的任意保护基。适宜保护基的实例是本领域技术人员熟知的。适宜保护基在例如教科书Greene和Wuts，Protecting groups in Organic Synthesis，第3版，第494-653页中进行了讨论，该文献通过引用并入本文。保护基可以选自碳酸酯、酰胺、亚酰胺、N-烷基胺、N-酰基胺、亚胺、烯胺、硼烷、N-P保护基、N-氧硫基、N-磺酰基和N-甲硅烷基。保护基(PG)的特定优选实例有苄氧羰基(Cbz)、(对甲氧基苄基)氧基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧羰基(BOC)、9-芴基甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、3，4-二甲氧基苄基(DMPM)、对甲氧基苯基(PMP)、三苯基甲基(三苯甲基)、甲氧基苯基二苯基甲基(MMT)或二甲氧基三苯甲基(DMT)。保护基PG的更优选的实例包括叔丁氧羰基(BOC)、二甲氧基三苯甲基(DMT)和三苯基甲基(三苯甲基)。保护基PG的一个更优选的实例是叔丁氧羰基(BOC)。

术语“氨甲酸酯胺保护基”指含有*-CO-O基团的胺保护基，其中星号表示与胺连接的键。实例有苄氧羰基(Cbz)、(对甲氧基苄基)氧基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧羰基(BOC)和9-芴基甲氧羰基(FMOC)。

如本文采用的术语“离去基”(LG)是任意离去基，其指可以被其它原子或原子基团替换的原子或原子基团。实例在例如如下文献中给出：Synthesis(1982)，第85-125页，表2，Carey和Sundberg，Organische Synthese，(1995)，第279-281页，表5.8；或Netscher，Recent Res.Dev.Org.Chem.，2003，7，71-83，流程1、2、10和15和其它)。(Coenen，Fluorine-18Labeling Methods：Features and Possibilities of Basic Reactions，(2006)，在：Schubiger P.A.，Friebe M.，Lehmann L.，编辑，PET-Chemistry-The Driving Force inMolecular Imaging.Springer，Berlin Heidelberg，第15-50页，明确地是：第25页流程4，第28页流程5，第30页表4，第33页图7)。优选地，“离去基”(LG)选自硝基、溴、碘、氯、三烷基铵、羟基、硼酸、碘鎓、磺酸酯。更优选地，“离去基”(LG)是硝基或三甲基铵。应当理解，含有三烷基铵或碘鎓的化合物可以还包含阴离子。还更优选地，“离去基”(LG)是硝基。其它更优选的“离去基”(LG)是三甲基铵。

如本文所用的术语“冠醚”指包括含有多个醚基团的环的化学化合物。更具体地，术语“冠醚”优选指可以被取代并且在环中含有8至16个碳原子和4至8个选自N、O和S的杂原子的单环有机基团。一个或多个任选的取代基各自可以独立地选自含有1-15个碳原子和任选的1-6个选自N、O和S的杂原子的任意有机基团。“冠醚”的优选实例是任选被取代的在环中含有10至14个碳原子和5至7个选自N、O和S的杂原子的单环。“冠醚”的实例是任选被取代的在环中含有12个碳原子和6个选自N和O的杂原子的单环。特定的实例包括18-冠-6、二苯并-18-冠-6和二氮杂-18-冠-6。

如本文所用的术语“穴状配体”指与冠醚相关的一类多环化合物，具有在两个氮原子处连接的三条链。熟知的“穴状配体”是4，7，13，16，21，24-六氧杂-1，10-二氮杂双环并[8.8.8]二十六烷

如本文所用的Tau指主要在神经元中发现的高度溶解的微管结合蛋白，主要包括6种同工型，裂解或截短形式和其它经修饰形式如来自磷酸化、糖基化、加糖作用、脯氨酰异构化、硝化、乙酰化、聚胺化、泛素化、苏素化和氧化。如本文所用的病理性Tau或Tau聚集物(神经原纤维缠结，NFTs)指含有配对螺旋纤丝和直纤丝的高磷酸化Tau蛋白质的不溶性聚集物。它们的存在是AD和其它已知为Tau病变的疾病的标志。

Tau基因含有16个外显子，主要的Tau蛋白同工型由它们中的11个外显子编码。外显子10的可变剪切产生了具有3(缺失外显子10)或4(存在外显子10)个重复结构域的Tau同工型，分别称为3R和4R Tau(A.Andreadis等人，Biochemistry 31，(1992)10626-10633；M.Tolnay等人，IUBMB Life，55(6)：299-305，2003)。在阿尔茨海默病中，3R和4R同工型的比例是相似的。与之不同，在一些Tau病变中，这两种同工型之一的存在占优势。在本文中，术语“3R Tau病变”指其中3R同工型的存在占优势的Tau病变(例如皮克病(PiD))。在本文中，术语“4R Tau病变”指其中4R同工型的存在占优势的Tau病变(例如进行性核上麻痹(PSP)和皮质基底节变性(CBD))。

如下文在本发明的说明书和权利要求书中所用的术语“可药用盐”指所公开的化合物的无毒衍生物，其中母体化合物通过制成其无机和有机酸盐来进行修饰。无机酸包括但不限于诸如盐酸、硝酸或硫酸的酸。有机酸包括但不限于羧酸和磺酸如脂族酸、脂环族酸、芳族酸、芳脂族酸和杂环酸。本发明的可药用盐可以由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法进行合成。通常，这类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当的碱或酸在水或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。适宜盐的名单可以从Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司，伊士顿，PA，1990，第1445页中找到，该文献通过引用并入本文。

“可药用”、“药学上可接受的”或“诊断上可接受的”定义为指这样的那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理的医学判断范围内适用于与人和动物组织接触而没有过度的毒性、刺激性、变态响应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

本发明中的患者或个体通常是动物，特别是哺乳动物，更特别是人。

“色谱法”或“液相色谱法”指用于分离化合物的混合物的方法。将混合物溶于流体中，经由“流动相”转运通过“固定相”。该分离基于流动相中的化合物与固定相的相互作用。这种不同的相互作用产生了在固定相上不同的保留，因此实施了分离。色谱法可以是制备型的或分析型的。制备型色谱法的目的是分离混合物的组分，因而是纯化的形式。分析型色谱法用物质的小样本进行，用于测定混合物中化合物的比例。

“高效液相色谱法(HPLC)”是通过采用非常小颗粒的固定相(≤10μm)和应用足够的较高压力来分离化合物的液相色谱法形式。HPLC系统通常包括(一种或多种)流动相的储库、泵、进样器、分离柱(含固定相)和检测器。对于放射活性化合物的分离，给适宜的HPLC系统装配放射活性检测器。任选地，HPLC系统具有额外的检测器，例如UV、光电二极管阵列、折光指数、电导率、萤光、质谱仪。

“固相提取(SPE)”是具有两个或更多个分离步骤的样品制备和/或纯化过程。首先，将化合物溶于或混悬于溶剂的液体混合物中，使液体样品通过固定相(固相)。一些化合物被保留在固定相上，而其它化合物通过固定相。在第二步，用适宜的溶剂洗脱所保留的化合物。任选地，在洗脱步骤之前，将固定相用其它溶液洗涤。与HPLC技术不同，所用的粒度大得多(例如与具有≤10μm的典型粒度的HPLC相比为≥25μm)，因此所应用的压力也低得多(对于HPLC，压力通常为＞50巴)。

“固相提取柱(SPE柱)”是预填充有用于SPE的固定相的注射器或容器(如Sep

)。

“过滤除菌”是通过经由微滤器过滤对溶液进行除菌的方法。微滤器是具有例如约0.25μm或更低、优选约20nm至约0.22μm的孔径的过滤器，其通常用于除去微生物。在生产方法中在微滤中使用的膜滤器常规地由诸如混合纤维素酯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚偏二氟乙烯(PVDF)或聚醚砜(PES)的材料制成。

本文所用的“自动化”指通过适宜的装置(合成仪)进行合成和/或纯化步骤。

术语“放射清除剂”(radioscavenger)指降低由于放射分解而降解的速率的化合物。优选的放射清除剂包括抗坏血酸及其盐和龙胆酸及其盐。更优选的放射清除剂是抗坏血酸、抗坏血酸钠及其混合物。

适用于¹⁸F-放射标记的“合成仪”是本领域技术人员熟知的，包括但不限于IBASynthera、GE Fastlab、GE Tracerlab MX、GE Tracerlab FX、GE Tracerlab FX、TrasisAllinOne、ORA Neptis Perform、ORA Neptis Mosaic、ORA Neptis Plug、Scintomics GPR、Synthera、Comecer Taddeo、Raytest Synchrom、Sofie Elixys、Eckert&Ziegler ModularLab、Sumitomo Heavy Industries F100 F200 F300、Siemens Explora。

“放射化学纯度”指以其指定化学形式存在的放射性核素的总活性的比例。通常，放射化学纯度通过薄层色谱法或HPLC来确定。

“定义”部分中给出的优选定义应用于本文所述的所有实施方案，另有指示除外。

本发明的方法

在第一方面，本发明涉及制备式I化合物的方法。

该方法包括如下步骤：

A)使式II化合物与¹⁸F氟化剂反应

其中X是H或PG，

LG是离去基，且

PG是胺保护基，和

B)任选地，如果X是PG，则裂解去保护基PG，和

优选的式I化合物选自：

更优选的式I化合物是

优选的式II化合物选自：

更优选的式II化合物选自：

在这些化合物中，PG和LG如“定义”部分中所定义。

甚至更优选的式II化合物选自

其中X^-为抗衡离子，例如选自卤素、CF₃SO₃ ^-和CF₃CO₂ ^-的抗衡离子。

步骤A

步骤A包括使式II化合物与¹⁸F氟化剂反应，

其中

X是H或PG，

LG是离去基，且

PG是胺保护基，

如果X是H，则将产生具有式I的化合物。如果X是PG，则将获得具有式III的中间体化合物。

¹⁸F氟化剂是本领域技术人员熟知的。可以采用任何适宜的¹⁸F-氟化剂。典型的实例包括H¹⁸F、碱金属或碱土金属¹⁸F-氟化物(如K¹⁸F、Rb¹⁸F、Cs¹⁸F和Na¹⁸F)。任选地，¹⁸F-氟化剂可以与螯合剂如穴状配体(如：4，7，13，16，21，24-六氧杂-1，10-二氮杂双环[8.8.8]-二十六烷-

)或冠醚(如：18-冠-6)联合使用。或者，¹⁸F-氟化剂可以是¹⁸F的四烷基铵盐或¹⁸F的四烷基鏻盐；例如¹⁸F的四(C_1-6烷基)铵盐或¹⁸F的四(C_1-6烷基)鏻盐。其实例包括四丁基[¹⁸F]氟化铵和四丁基[¹⁸F]氟化鏻。优选地，¹⁸F-氟化剂是K¹⁸F、H¹⁸F、Cs¹⁸F、Na¹⁸F或四丁基[¹⁸F]氟化铵。在甚至更优选的实施方案中，¹⁸F-氟化剂是K¹⁸F。在另一个更优选的实施方案中，¹⁸F-氟化剂是四丁基[¹⁸F]氟化铵。

¹⁸F-氟化通常在溶剂中进行，所述溶剂优选选自乙腈、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、戊醇、叔丁醇或其混合物，优选溶剂含有或者是乙腈或DMSO。但是也可以使用本领域技术人员熟知的其它溶剂。溶剂可以进一步包含水和/或其它醇如C_1-10直链、支链或环状醇作为助溶剂。在一个优选的实施方案中，用于进行¹⁸F放射标记的溶剂含有二甲基亚砜。在另一个优选的实施方案中，用于进行¹⁸F放射标记的溶剂含有乙腈。在一个优选的实施方案中，用于进行¹⁸F放射标记的溶剂是二甲基亚砜。在另一个优选的实施方案中，用于进行¹⁸F放射标记的溶剂是乙腈。

¹⁸F-氟化通常进行至多约60分钟。优选的反应时间为至多约30分钟。进一步优选的反应时间为至多约15分钟。典型的反应时间为约1-15分钟，优选5-15分钟，更优选10-15分钟。

¹⁸F-氟化通常在约60至约200℃的温度下、在常规或微波支持的加热下进行。在优选的实施方案中，¹⁸F-氟化在约100至约180℃下进行。在更优选的实施方案中，¹⁸F-氟化在约100至约160℃下进行。优选地，¹⁸F-氟化在常规加热下进行。常规加热理解为不使用微波的任何加热。

起始物质的量不受特别的限制。例如，在一个批量中可以使用约0.5至约50μmol的式II化合物来生产式I化合物。在优选的实施方案中，使用约2至约25μmol的式II化合物。在更优选的实施方案中，使用约2.5至约15μmol的式II化合物。在一个实施方案中，使用至少约2μmol的式II化合物。在优选的实施方案中，使用至少约2.5μmol的式II化合物。在更优选的实施方案中，使用至少约3μmol的式II化合物。

通常，在一个批量中可以使用约0.5至约10mg的式II来产生式I化合物。在优选的实施方案中，使用约0.5至约5mg的式II化合物。在更优选的实施方案中，使用约1至约3mg的式II化合物。

如果X是PG，则将获得具有式III的中间体化合物。保护基PG可以在步骤A期间或在任选的随后步骤B中裂解。

优选的式III化合物选自：

在这些化合物中，PG如“定义”部分中所定义。

步骤B

步骤B是任选的步骤，其包括从式III化合物裂解保护基PG获得式I化合物。如对本领域技术人员清楚的是，如果步骤A用其中X为氢的式II化合物进行或者如果保护基PG已经在步骤A中裂解，则该步骤不适用。

用于裂解各种保护基的反应条件是本领域技术人员熟知的，可以选自但不限于Greene和Wuts的教科书，Protecting groups in Organic Synthesis，第3版，第494-653页和P.J.Kocienski的教科书，Protecting Groups，第3版，2003中所述的那些，这两篇文献通过引用并入本文。

步骤B所采用的条件将取决于所要裂解的保护基，因此没有特别的限制。

可能的反应条件包括i)于约60至约160℃加热，ii)添加酸和于约0℃至约160℃加热；或iii)添加碱和于约0℃至约160℃加热。

优选的酸有盐酸、硫酸和磷酸。一种优选的酸是硫酸。另一种优选的酸是磷酸。另一种优选的酸是盐酸。优选的碱有氢氧化钠、氢氧化钾。

优选的反应条件是添加酸和于约25℃至160℃、优选25℃至120℃、更优选90-120℃加热。优选地，反应混合物加热约1至约20分钟，更优选约5至约15分钟。

如果希望，步骤A和B可以在相同或不同反应容器中进行。优选地，步骤A和B在相同反应容器中进行。

如果希望，在步骤B之后获得的溶液可以原样用于步骤C中。或者，可以调整溶液的组成，以便更适合用于进行HPLC。例如，在步骤C之前可以添加缓冲剂或稀释剂。

优选的稀释剂有乙醇、水；或其组合。

另外，可以调整溶液的pH。在优选的实施方案中，在步骤C之前调节pH至约6或更低，更优选约4或更低，或者甚至更优选约3或更低。在优选的实施方案中，在步骤C之前调节pH至约0至约6，更优选约0至约4，甚至更优选约1至约3。

步骤C

步骤C是其中在步骤A中或如果采用的话在步骤B中获得的式I化合物采用包含乙醇和水的流动相进行HPLC的步骤。

在现有技术中认定需要采用两个色谱步骤以获得可注射的示踪剂，即，首先通过HPLC纯化式I化合物和然后通过SPE重配制。本发明人已经出人意料地发现，如果使用乙醇和水的混合物作为流动相，则可以省略随后的经由固相提取来捕获化合物。因此，能够使用单个色谱步骤来纯化和配制。这在本申请的放射氟化情况中是特别重要的，因为¹⁸F的半衰期仅为约110分钟，从而获得化合物I的可注射配制物的方法的速度是非常重要的。

因为目前所要求的方法与现有方法相比更快和更不复杂，因此可以以更高的非衰减校正产率获得式I化合物。

选择乙醇和水的混合物作为流动相的额外优点是，这两种组分是诊断上可接受的，从而(不像现有技术中采用的甲醇、乙腈、三乙胺和三甲胺那样)它们可以保留在施用于患者的组合物中。因此，选择乙醇和水作为流动相显著降低了式I化合物的制备中所要求的时间和成本和/或与现有技术的方法相比给出了更高的产率和更高的放射化学纯度。

本发明的方法优选在步骤C之后不包括式I化合物的固相提取，更优选本发明的方法在步骤C之前或之后不包括式I化合物的固相提取。

式I化合物优选在步骤C的高效液相色谱法(HPLC)之后不进行色谱法，更优选式I化合物不进行除步骤C的高效液相色谱法(HPLC)之外的色谱法。

HPLC方法中所用的流动相包含乙醇和水。而且，可以含有酸、碱、缓冲剂、盐和/或放射清除剂和任选地其混合物。

乙醇∶水的比例没有特别的限制，但是优选是约5/95v/v至约80/20v/v，更优选约5/95v/v至约50/50v/v，甚至更优选约5/95v/v至约20/80v/v。

流动相的pH没有特别的限制，但是优选是约0至约8，优选约0至约6，更优选约1至约5，甚至更优选约1至约3和甚至更优选约2.2至约2.8。

可能的缓冲液可以包括盐，所述盐可以选自碱金属磷酸二氢盐、二碱金属磷酸氢盐、三碱金属磷酸盐、碱金属乙酸盐、碱土金属乙酸盐、碱土金属甲酸盐、单/二/三碱金属柠檬酸盐，优选的碱金属和碱土金属是钠和钾。

可能的碱可以是氢氧化钠和/或氢氧化钾。

如果希望，可以使用无机或有机酸调节流动相的pH。无机酸的实例包括抗坏血酸、柠檬酸和乙酸。有机酸的实例包括盐酸、硫酸和磷酸，优选磷酸。

放射清除剂是减少式I化合物通过放射分解而降解的化合物。其实例包括抗坏血酸和抗坏血酸盐、龙胆酸和龙胆酸盐。其它实例包括柠檬酸和柠檬酸盐。更优选的放射清除剂是抗坏血酸、抗坏血酸钠及其混合物。

优选地，流动相包含pH为约1至约3的约50至约500mM的缓冲液(如碱金属磷酸二氢盐)，更优选pH为约1至约3的约50至约250mM的缓冲液(如碱金属磷酸二氢盐)，甚至更优选pH为约1至约3的约50至约150mM的缓冲液(如碱金属磷酸二氢盐)。

优选的流动相包含约5至约20％v/v乙醇、约95至约80％v/v水、pH为约1至约3的约50至约150mM的缓冲剂(如碱金属磷酸二氢盐)和任选的放射清除剂。更优选的流动相包含约5至约20％v/v乙醇、约95至约80％v/v水、pH为约2.2至约2.8的约50至约150mM的缓冲液(如碱金属磷酸二氢盐)和任选的放射清除剂。

用于HPLC方法的固定相是熟知的，可以由本领域技术人员适当地选择。在优选的实施方案中，固定相是“反相”(RP)固定相。

RP-HPLC固定相的实例包括C18、C8、苯基、氰基(如氰基丙基)、五氟苯基、氨基(如氨基丙基)、酰胺(如C_10-24-链烷酸-氨基丙基)、苯基己基官能化树脂或混合相树脂。

在一个实施方案中，HPLC固定相的粒度为约1.6至约15μm。在优选的实施方案中，HPLC固定相的粒度为约5至约10μm。在另一个实施方案中，HPLC固定相的粒度为约10μm。

通常，HPLC柱的直径为约2.0至约50mm，长度为约50至约300mm。在优选的实施方案中，HPLC柱的直径为约4.6至约20mm，长度为约150至约250mm。在更优选的实施方案，HPLC柱的尺寸为10x 250mm。

高效液相色谱法中所采用的流速没有限制，可以为约1至约20mL/min，更通常为约2至约15mL/min，甚至更通常为约2至约7mL/min。

高效液相色谱法中所采用的压力没有特别的限制，其范围可以是约50至约400巴、通常约50至约250巴、更通常约50至200巴。

在一个实施方案中，约1至约500GBq[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在优选的实施方案中，约50至约500GBq[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在更优选的实施方案中，约100至约500GBq[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在甚至更优选的实施方案中，约200至约500GBq[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。

在一个实施方案中，约10GBq或更多[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在优选的实施方案中，约50GBq或更多[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在更优选的实施方案中，约100GBq或更多[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。在甚至更优选的实施方案中，约200GBq或更多[¹⁸F]氟化物用于生产式I化合物。

在一个实施方案中，获得约10GBq或更多的放射性标记的式I化合物。在优选的实施方案中，获得约20GBq或更多的放射性标记的式I化合物。在更优选的实施方案中，获得约50GBq或更多的放射性标记的式I化合物。在甚至更优选的实施方案中，获得约100GBq或更多的放射性标记的式I化合物。

在一个实施方案中，所获得的式I化合物的放射化学纯度为至少约90％。在优选的实施方案中，所获得的式I化合物的放射化学纯度为至少约93％。在优选的实施方案中，所获得的式I化合物的放射化学纯度为至少约95％。在更优选的实施方案中，所获得的式I化合物的放射化学纯度为至少约98％。

任选的步骤

由于流动相中包含乙醇和水，所以包含式I化合物的HPLC级分如果希望的话可以直接用作可注射制剂。或者，包含式I化合物的HPLC级分可以与其它诊断上可接受的组分如诊断上可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂混合以制备式I化合物的可注射制剂。

如果希望的话，可以在步骤C之后进行步骤D过滤除菌。如果加入其它组分的话，可以在加入它们之前或之后进行过滤除菌。

在一个实施方案中，采用自动化合成装置进行步骤A、任选的步骤B和步骤C。这类自动化合成装置的实例包括但不限于IBA Synthera、GE Fastlab、GE Tracerlab MX、GETracerlab FX、GE Tracerlab FX、Trasis AllinOne、ORA Neptis Perform、ORA NeptisMosaic、ORA Neptis Plug、Scintomics GPR、Synthera、Comecer Taddeo、RaytestSynchrom、Sofie Elixys、Eckert&Ziegler Modular Lab、Sumitomo Heavy IndustriesF100F200 F300和Siemens Explora。

一个优选的方法包括如下步骤：

A)使其中LG＝硝基和PG＝Boc的式II化合物与[¹⁸F]-氟化剂、优选选自K¹⁸F和四丁基[¹⁸F]氟化铵的[¹⁸F]-氟化剂在DMSO中于约100至约180℃、优选约120至约180℃、更优选约140至约160℃反应，其中Boc保护基在放射标记条件下裂解，

C)采用乙醇/磷酸二氢钠缓冲液混合物(约5至约20％EtOH)进行式I化合物的HPLC纯化，其中缓冲液具有约1至约3、优选约2.2至约2.8的pH，和

D)如果希望的话，将包含式I化合物的HPLC级分与预期适用于患者的制剂的其它诊断上可接受的组分混合。如果希望的话，使HPLC级分在与制剂的其它诊断上可接受的组分混合之前或之后通过无菌过滤器。

另一个优选的方法包括如下步骤：

A)使其中LG＝三甲基铵和PG＝三苯甲基的式II化合物与[¹⁸F]-氟化剂、优选选自K¹⁸F和四丁基[¹⁸F]氟化铵的[¹⁸F]-氟化剂在DMSO或乙腈中于约80至约180℃、优选约100至约180℃反应，

B)添加磷酸，于约90至约120℃加热约1至约15分钟，

除非另有指示，式I、II或III化合物中的每个氢可以是¹H或²H(氘)。

本发明的方法可提供包含式I化合物的诊断组合物。由于本发明的方法的速度和降低的复杂性，¹⁸F-标记的化合物I的量可以高于常规方法。该方法还提供了处于高放射活性水平(如至少约20GBq的式I化合物，优选至少约50GBq的式I化合物，更优选至少约100GBq的式I化合物)的具有高的放射化学纯度(如至少约90％，优选至少约93％，更优选至少约95％，甚至更优选至少约98％)的式I化合物。

本发明的诊断组合物适用于诊断。它们特别适用于诊断与Tau聚集物相关的病症或Tau聚集物的显像，特别是采用正电子发射断层扫描(PET)的Tau聚集物的显像。

诊断组合物

“诊断组合物”在本发明中定义为包含式I化合物的组合物。对于体内应用，诊断组合物应当是适于施用于哺乳动物如人的形式。优选地，诊断组合物还包含生理学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂。施用于患者优选通过注射作为溶液的组合物来进行。这类组合物可以任选地含有其它成分如溶剂、缓冲剂；诊断上可接受的增溶剂；和诊断上可接受的稳定剂或抗氧化剂。

诊断上可接受的赋形剂是药学领域熟知的，记载在例如Remington′sPharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co.，新泽西(1975)中。可以根据标准药物实践选择诊断赋形剂。赋形剂在对其接受者而言无毒的意义上必须是可以接受的。

优选地，诊断组合物包含约1％v/v至约20％v/v乙醇，基于乙醇和水的总量计。更优选地，诊断组合物包含约1％v/v至约15％v/v乙醇，基于乙醇和水的总量计。甚至更优选地，诊断组合物包含约5％v/v至约10％v/v乙醇，基于乙醇和水的总量计。除了上述组分，诊断组合物还包含水。对水量进行选择，以便组合物的总量为100％。

式I化合物可以经注射施用。这类施用的实例包括如下的一者或多者：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、脑室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用化合物；和/或通过采用输注技术。对于胃肠外施用，化合物最好以无菌溶液的形式使用，所述无菌溶液可以含有其它赋形剂。如果需要的话，溶液应当是适宜缓冲的(优选至pH3至9，更优选4.0至8.5)。在无菌条件下制备适宜的胃肠外制剂可以通过本领域技术人员熟知的标准药学技术来容易地完成。

本发明的诊断组合物可以以本身是本领域技术人员已知的方式进行配制，如例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co.，新泽西(1975)中所述。

可检测标记的式I化合物的剂量可以根据所施用的确切化合物、患者体重、样品尺寸和类型和本领域技术人员清楚的其它变量而异。通常，质量范围可优选为每个患者剂量约0.001μg至约100μg，优选每个患者剂量约0.01μg至约50μg。放射活性剂量可以为例如每次注射约100至约600MBq，更优选约150至约450MBq，甚至更优选约150至约200MBq。

特别地，在一个实施方案中，可以用可检测标记的式I化合物检测和监测的疾病或病症是与Tau蛋白聚集物相关的疾病或病症，例如3R或4R Tau病变。

可以用通过本发明的方法获得的可检测标记化合物检测和监测的疾病或病症包括神经变性疾病如Tau病变。可以检测和监测的疾病和病症的实例是由神经原纤维病变形成引起的或与神经原纤维病变形成相关。这是Tau病变中的显性脑病状。所述疾病和病症包含不同的神经变性疾病或病症，包括显示出Tau和淀粉样病状共同存在的疾病或病症。涉及Tau聚集物的疾病的实例通常列为Tau病变，这些包括但不限于阿尔茨海默病(AD)、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎和格子状营养不良。优选的可以被检测和监测的疾病和病症包括阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓和具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变，更优选阿尔茨海默病(AD)、克-雅病、拳击员痴呆、肌萎缩性侧索硬化症、嗜银颗粒病、皮质基底节变性、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、皮克病、进行性核上麻痹(PSP)、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、哈-斯病和额颞叶变性。优选地，所述疾病或病症是阿尔茨海默病、帕金森病或非典型帕金森综合征、进行性核上麻痹(PSP)或皮克病(PiD)，更优选阿尔茨海默病。

可以用通过本发明的方法获得的可检测标记化合物检测和监测的疾病或病症的其它实例包括亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病。

本发明的方法与现有技术方法相比具有多个重要的优点。由于在已经制备了式I化合物之后仅需要单个色谱步骤并且没有随后的经SPE重配制，设置比其中进行两个不同色谱步骤的现有技术设置简单得多。

所述方法已经被证明是非常稳健的。由于选择乙醇和水作为具有可调节的pH的流动相，因此可以使用较大量(如＞1mg)的前体而不引起沉淀。

可以将¹⁸F-标记的式I化合物与式II前体化合物和可能的副产物可信赖地分离开。

而且，可以达到高产率和纯度。例如，能够获得至少约35％的非衰减校正产率。产物活性可以为至少约20GBq，优选至少约50GBq，更优选至少约100GBq。在低以及高放射活性水平(在例如至少约100GBq)，放射活性纯度可以为至少约95％，优选至少约98％。

本发明通过下述实施例进行了说明，所述实施例不应当解释为限制。

实施例

缩略语

实验数据

所有试剂和溶剂从商业途径获得，未经进一步纯化进行使用。质子(¹H)谱在Bruker DRX-400MHz NMR光谱仪上或在Bruker AV-400MHz NMR光谱仪上在氘化溶剂中记录。质谱(MS)在Advion CMS质谱仪上记录。色谱法采用硅胶(Fluka：硅胶60，0.063-0.2mm)和适宜的溶剂如具体实施例中指示的那样进行。快速纯化采用Biotage Isolera One快速纯化系统、采用HP-Sil(Biotage)或puriFlash-柱(Interchim)和具体实施例中指示的溶剂梯度进行。薄层色谱法(TLC)在硅胶板上用UV检测进行。

测试化合物的合成

制备实施例A

步骤A

将市售2，6-二溴吡啶(4.12g，16.6mmol)混悬于乙醇(40mL)中，加入在水中的水合肼(10mL，97.6mmol)(～50-60％)。将混合物在沙浴中于～115℃加热18小时。除去溶剂，将残余物经硅胶色谱法采用乙酸乙酯/正庚烷(60/40)纯化，得到标题化合物，为灰白色固体(3.05g，93％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝7.33(t，1H)，6.83(d，1H)，6.67(d，1H)，6.00(br-s，1H)，3.33-3.00(br-s，2H)

步骤B

将来自上述步骤A的标题化合物(10g，53.2mmol)和市售1-Boc-4-哌啶酮(10.6g，53.2mmol)加至500mL烧瓶中，混合至形成均匀混合物。然后加入聚磷酸(80g，115％H₃PO₄基础)，将混合物在沙浴中于～160℃加热。在～120℃，Boc-保护基裂解，导致反应混合物发泡。Boc-裂解完成后，泡沫破裂，将暗色反应混合物于～160℃搅拌20小时。使反应混合物冷却至室温，加入水(400mL)。将反应混合物搅拌/超声处理直至胶状物质溶解。然后将反应混合物放入冰浴中，通过添加固体氢氧化钠小片(放热)调节溶液的pH至pH～12。过滤收集沉淀，用水(400mL)洗涤以除去盐。将沉淀通过超声处理溶于二氯甲烷/甲醇(9/1；1500mL)中，用水(2x 400mL)洗涤以除去剩余的盐和不溶性物质。将有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下除去溶剂。将暗色残余物用二氯甲烷(100mL)处理，超声5分钟，过滤收集沉淀。将沉淀用二氯甲烷(40mL)洗涤和风干，得到标题化合物，为浅褐色固体(3.5g，26％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝11.5(br-s，1H)，7.72(d，1H)，7.15(d，1H)，3.86-3.82(m，2H)，3.06-3.00(m，2H)，2.71-2.65(m，2H)

步骤C

将来自上述步骤B的标题化合物(1.75g，6.94mmol)混悬于二甲苯(380mL)中，加入氧化锰(IV)(6.62g，76.9mmol)。然后将反应混合物在沙浴中于～160℃加热36小时。将冷却的反应混合物在减压下蒸发，残余物混悬于二氯甲烷/甲醇(1/1；400mL)中，于室温搅拌30分钟。然后将反应混合物经滤纸过滤以除去氧化锰(IV)，将滤纸用甲醇(50mL)洗涤。将合并的滤液在减压下蒸发，将暗色残余物经硅胶色谱法(50g HP-SIL-柱)、用Biotage Isolera系统、采用乙酸乙酯/庚烷梯度(5/95-100/0)以除去非极性杂质、继之以二氯甲烷/甲醇(9/1→4/1)进行纯化，得到标题化合物，为暗黄色固体。2次操作的总产量为1.77g(51％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝12.52(br-s，1H)，9.42(s，1H)，8.61(d，1H)，8.53(d，1H)，7.56-7.52(m，2H)

制备实施例B

步骤A

向来自制备实施例A的标题化合物(0.776g，0.72mmol)在二氯甲烷(65mL)中的混悬液中加入三乙胺(1.86mL，13mmol)和三苯甲基氯(2.63g，9.39mmol)。完成4-(二甲基氨基)-吡啶(0.074g，0.608mmol)的添加后，将反应混合物于室温搅拌16小时。反应混合物用二氯甲烷(150mL)和水(50mL)稀释。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物在HP-Sil SNAP柱(50g)上用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)纯化，得到标题化合物B，为浅黄色固体(0.831g，54％)。通过用乙酸乙酯/甲醇(90/10)冲洗柱子回收未反应的起始物质，得到起始物质，为灰白色固体(0.195g，25％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.22(s，1H)，8.23(d，1H)，8.13(d，1H)，7.48-7.42(m，7H)，7.33-7.22(m，12H)，6.41(d，1H)

MS(ESI)；m/z＝490.03/491.96[M+H]⁺

制备实施例C

步骤A

向来自制备实施例A的标题化合物(0.482g，1.94mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混悬液中加入三乙胺(1.15mL，8mmol)和4，4′-(氯(苯基)亚甲基)双(甲氧基苯)(DMTrt-Cl)(1.963g，5.8mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.046g，0.377mmol)后，将反应混合物于室温搅拌3天。将反应混合物用二氯甲烷(100mL)和水(40mL)稀释。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物在HP-Sil SNAP柱(50g)上用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)纯化，得到标题化合物C，为浅黄色固体(0.825g，72％)。通过用乙酸乙酯/甲醇(90/10)冲洗柱子回收未反应的起始物质，得到起始物质，为灰白色固体(0.042g，8.8％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.23(s，1H)，8.23(d，1H)，8.13(d，lH)，7.39-7.31(m，6H)，7.29-7.25(4H)，6.80(d，4H)，6.41(dd，1H)，3.81(s，6H)

实施例1

步骤A

向脱气1，4-二噁烷(4.3mL)和水(1mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0084g，0.01mmol)，然后加入制备实施例A的标题化合物(0.05g，0.2mmol)、(2-氟吡啶-4-基)硼酸(0.035g，0.245mmol)和碳酸铯(0.133g，0.41mmol)。然后将反应混合物于～115℃在沙浴中加热6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)和水(20mL)稀释，分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发溶剂。将暗色残余物经硅胶色谱法(25g HP-SIL)用Biotage Isolera系统、采用二氯甲烷/甲醇梯度(100/0→95/5→90/10→80/20)纯化，得到标题化合物1，为灰白色固体(0.033g，63％)。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ＝12.50(br-s，1H)，9.45(s，1H)，8.83(d，1H)，8.56-8.52(m，1H)，8.43-8.39(m，1H)，8.19-8.14(m，2H)，7.92(s，1H)，7.54-7.50(m，1H)

MS(ESI)：m/z＝265.04[M+H]⁺

实施例2

步骤A

向制备实施例A的标题化合物(0.430g，1.73mmol)在二氯甲烷(25mL)中的混悬液中加入三乙胺(1.93mL，13.89mmol)和二碳酸二叔丁基酯(2.27g，10.02mmol)。加入4-(二甲基氨基)-吡啶(0.042g，0.34mmol)完成后，将反应混合物于室温搅拌3天。在减压下除去溶剂，残余物在HP-Sil SNAP柱(25g)上、用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)纯化，得到标题化合物，为灰白色固体(0.558g，92％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.28(s，1H)，8.73(d，1H)，8.22(d，2H)，7.598d，1H)，1.80(s，9H)

步骤B

向脱气1，4-二噁烷(3mL)和水(0.7mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0058g，0.007mmol)，继之以来自上述步骤A的标题化合物(0.05g，0.143mmol)、(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.024g，0.17mmol)和碳酸铯(0.092g，0.286mmol)。然后将反应混合物于～100℃在沙浴中加热4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(80mL)和水(35mL)稀释，分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发溶剂。将暗色残余物经硅胶色谱法(12g，puriFlash，Interchim)、用Biotage Isolera系统、采用二氯甲烷/甲醇梯度(100/0→98/2→95/5→90/10→80/20)纯化，得到极性较弱的Boc-保护的化合物(0.0255g，49％)和极性较强的为灰白色固体的标题化合物2(0.0116g，31％)。

极性较强的标题化合物2：

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ＝12.40(br-s，1H)，9.40(s，1H)，9.05(s，1H)，8.78-8.70(m，2H)，8.51(d，1H)，8.02(d，1H)，7.50(d，1H)，7.36(dd，1H)

MS(ESI)：m/z＝265.09[M+H]⁺

极性较弱的Boc-保护的化合物：

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ＝9.48(s，1H)，9.13(d，1H)，8.84-8.78(m，2H)，8.68(d，lH)，8.23(d，1H)，8.19(d，1H)，7.40(dd，1H)，1.758s，9H)

在WO 2015/052105(实施例1)中首次记载了通过不同合成进行的标题化合物2的合成。

放射性标记前体的合成

实施例3-a

步骤A

向脱气1，4-二噁烷(4.3mL)和水(1mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0084g，0.01mmol)、制备实施例B的标题化合物(0.1g，0.2mmol)、2-硝基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.061g，0.245mmol)和碳酸铯(0.133g，0.41mmol)。然后将反应混合物于～115℃在沙浴中加热6小时。反应混合物用乙酸乙酯(60mL)和水(20mL)稀释，分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发溶剂。将暗色残余物经硅胶色谱法(25g pufiFlash-柱，Interchim)用Biotage Isolera系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)纯化，得到标题化合物3-a，为淡黄色固体(0.082g，75％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.32(s，1H)；8.56(d，1H)，8.48(d，1H)，8.33(s，1H)；8.30(d，1H)，7.85(d，1H)，7.69(d，1H)，7.58-7.54(m，5H)，7.32-7.25(m，10H)，6.48(d，1H)

MS(ESI)：m/z＝534.28[M+H]⁺.

实施例3-b

方法a：

步骤A

向3-a(0.0396g，0.074mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三氯乙酸(1.2mL)。将反应混合物于室温搅拌6小时，加入甲醇(2mL)。真空蒸发溶剂，残余物溶于/混悬于甲醇(5mL)中。真空蒸发溶剂，将残余物再次溶于/混悬于甲醇(5mL)中。真空蒸发溶剂，残余物混悬于二氯甲烷(2mL)中。加入三乙胺(1mL，7.2mmol)、二碳酸二叔丁基酯(0.098g，0.43mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0018g，0.014mmol)后，将反应混合物于室温搅拌18小时。反应混合物用乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)稀释。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物在硅胶(25g puriFlash，Interchim)上用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)以洗脱非极性副产物、继之以乙酸乙酯/甲醇(95/5)进行纯化，得到标题化合物3-b，为淡黄色固体(0.0184g，63％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.36(s，1H)，9.15(s，1H)，8.82-8.76(m，2H)，8.57(d，1H)，8.45(d，1H)，8.36(d，1H)，8.07(d，1H)，1.87(s，9H)

MS(ESI)；m/z＝391.82[M+H]⁺

方法b：

步骤A

向脱气1，4-二噁烷(2.2mL)和水(0.5mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0042g，0.005mmol)，继之以制备实施例C的标题化合物(0.055g，0.1mmol)、2-硝基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.0305g，0.12255mmol)和碳酸铯(0.067g，0.205mmol)。然后将反应混合物于～115℃在沙浴中加热6小时。反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，过滤收集沉淀，用水(10mL)和甲醇(5mL)洗涤，风干，得到3-c(0.0277g，95％)。

步骤B

向来自上述步骤A的标题化合物粗品(0.0277g，0.095mmol)在二氯甲烷(4mL)中的混悬液中加入三乙胺(1mL，7.2mmol)、二碳酸二叔丁基酯(0.2g，0.86mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g，0.028mmol)。反应混合物于室温搅拌16小时，用乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)稀释。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物在硅胶(25gpuriFlash，Interchim)上用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)以洗脱非极性副产物、继之以乙酸乙酯/甲醇(95/5)纯化，得到标题化合物3-b，为淡黄色固体(0.0261g，70％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.38(s，1H)，9.16(s，1H)，8.83-8.78(m，2H)，8.58(d，1H)，8.46(d，1H)，8.38(d，1H)，8.09(d，1H)，1.88(s，9H)

MS(ESI)；m/z＝391.85[M+H]⁺；291.74[M+H-Boc]⁺

实施例3-d

步骤A

向脱气1，4-二噁烷(2.2mL)和水(0.5mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0042g，0.005mmol)，继之以制备实施例C的标题化合物(0.055g，0.1mmol)、2-硝基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.0305g，0.12255mmol)和碳酸铯(0.067g，0.205mmol)。然后将反应混合物于～115℃在沙浴中加热6小时。反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，过滤收集沉淀，用水(10mL)和甲醇(5mL)洗涤，风干，得到3-c，为灰色固体(0.0277g，95％)。

步骤B

向来自上述步骤A的标题化合物粗品(0.0277g，0.095mmol)在二氯甲烷(4mL)中的混悬液中加入三乙胺(1mL，7.2mmol)、4，4′-(氯(苯基)亚甲基)双(甲氧基苯)(0.081g，0.29mmol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(0.0036g，0.028mmol)。反应混合物于室温搅拌18小时，用乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)稀释。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物在硅胶(25g puriFlash，Interchim)上、用Biotage Isolera One纯化系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)纯化，得到标题化合物3-d，为淡黄色固体(0.0261g，44％)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ＝9.32(s，1H)，8.58(d，1H)，8.50(d，1h)，8.36(s，1H)，8.30(d，1H)，7.85(d，1H)，7.74(d，1H)，7.52-7.42(m，6H)，7.27-7.23(m，4H)，6.80(d，4H)，6.49(d，1H)，3.78(s，6H)

实施例3-e

步骤A

将市售N，N-二甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(0.25g，1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。向所得搅拌溶液中于室温滴加三氟甲磺酸甲酯(0.124mL，1.1mmol)。将溶液于室温搅拌4小时。将反应混合物浓缩以除去二氯甲烷，将残余物真空干燥，获得黄色玻璃/泡沫状物，将其直接用于下一步骤。

步骤B

向脱气1，4-二噁烷(12mL)和水(3mL)在微波小瓶中的溶液中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.034g，0.04mmol)、制备实施例B的标题化合物(0.4g，0.816mmol)、来自上述步骤A的标题化合物粗品(～1mmol)和碳酸铯(0.544g，1.68mmol)。将反应混合物于～120℃在沙浴中加热6小时。反应混合物用乙酸乙酯(150mL)和水(50mL)稀释，分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发溶剂。将暗色残余物经硅胶色谱法(25g HP-Ultra)用Biotage Isolera系统、采用乙酸乙酯/正庚烷梯度(5/95→100/0→100/0)以洗脱未反应的起始物质和非极性副产物进行纯化。然后将梯度改变为二氯甲烷/甲醇(100/0→95/5→90/10)，得到淡黄色玻璃状的二甲胺衍生物(0.127g，29％；MS(ESI)：m/z＝532.27[M+H]+)和为灰色固体的甲胺衍生物(0.0547g，13％；MS(ESI)：m/z＝519.18[M+H]+)。然后再次将梯度转变为二氯甲烷/甲醇(90/10→80/20)，于(80/20)维持，获得标题化合物3-e，为褐色固体(0.104g，18％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.47(s，1H)；8.89(d，1H)，8.55(d，1H)，8-35-8.32(m，2H)，8.29(d，1H)，7.63-7.57(m，5H)，7.48(d，1H)，7.34-7.25(m，10H)，6.48(d，1H)，3.60(s，9H)

MS(ESI)：m/z＝546.26[M+H]⁺

实施例3-f

步骤A

将3-e(0.199g，0.364mmol)混悬于二氯甲烷(10mL)中。添加三氟乙酸(10mL)后，将反应混合物于室温搅拌18小时。在减压下除去溶剂，残余物溶于甲醇(10mL)中，在减压下除去溶剂。将残余物的甲醇处理再重复两次。然后将残余物混悬于二氯甲烷(20mL)中，超声～5分钟。过滤收集沉淀，用二氯甲烷(10mL)洗涤，风干，得到标题化合物3-f，为灰色固体(0.127g，83％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝13.76(br-s，1H)，9.84(s，1H)；8.12(d，1H)，8.89(d，1H)，8.80(d，1H)，8.75(s，1H)，8.54-8.50(m，2H)，8.04(d，1H)，3.72(s，9H)

MS(ESI)：m/z＝303.91[M+H]⁺

实施例4-a

步骤A

向脱气1，4-二噁烷(3mL)和水(0.7mL)在微波小瓶中的混合物中加入与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.0058g，0.007mmol)，继之以来自实施例2步骤A的标题化合物(0.05g，0.143mmol)、2-硝基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.0428g，0.17mmol)和碳酸铯(0.092g，0.286mmol)。然后将反应混合物于～100℃在沙浴中加热4小时。反应混合物用乙酸乙酯(80mL)和水(35mL)稀释，分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发溶剂。将暗色残余物经硅胶色谱法(12g，puriFlash，Interchim)用Biotage Isolera系统、采用二氯甲烷/甲醇梯度(100/0→98/2→95/5→90/10→80/20)纯化，得到标题化合物4-a，为淡黄色固体(0.0173g，31％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ＝9.45(d，1H)，9.32(s，1H)，8.93(dd，1H)，8.68-8.64(m，2H)，8.46(d，1H)，8.35(d，1H)，8.14(d，1H)，1.82(s，9H)

MS(ESI)：m/z＝392.13[M+H]⁺

在WO 2015/052105(实施例3a)通过不同合成首次记载了标题化合物4-a的合成。

用¹⁸F对前体进行放射标记

放射性标记前体的实例：

通用放射标记方法A，在如图3中说明的tracerlab FX上进行(放射标记、脱保护、HPLC和SPE)-比较实施例

在Sep-Pak Accell Plus QMA light柱(Waters)上捕获[¹⁸F]氟化物，用溶液K₂CO₃/

2.2.2洗脱。采用He或N₂流于95℃除去水，与MeCN(1mL)共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于150℃加热15分钟。随后，加入酸(HCl，H₂SO₄或H₃PO₄)，将混合物于150℃加热10分钟。将反应混合物用1mLNaOH和2.4mL制备型HPLC流动相稀释，粗产物经半制备型HPLC(如Phenomenex，Gemini C18，5μm，250x 10mm)以4mL/min纯化。所分离的示踪剂用水(20mL+10mg/mL抗坏血酸钠)稀释，在C-18Plus柱(Waters)上捕获，用水(10mL+10mg/mL抗坏血酸钠)洗涤，用乙醇(1mL)洗脱，与水(14mL+10mg/mL抗坏血酸钠)混合。

通用放射标记方法B，在如图3中说明的tracerlab FX上进行(放射标记、HPLC和SPE)-比较实施例

2.2.2洗脱。才艺He或N₂流于95℃除去水，与MeCN(1mL)共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于150℃加热15分钟。反应混合物用0.5-1mL NaOH和2.4mL制备型HPLC流动相稀释，粗产物经半制备型HPLC(如Phenomenex，Gemini C18，5μm，250x 10mm)以4mL/min纯化。所分离的示踪剂用水(20mL+10mg/mL抗坏血酸钠)稀释，在C-18Plus柱(Waters)上捕获，用水(10mL+10mg/mL抗坏血酸钠)洗涤，用乙醇(1mL)洗脱，与水(14mL+10mg/mL抗坏血酸钠)混合。

通用放射标记方法C，在如图4中说明的IBA Synthera+Synthera HPLC上进行(放射标记、HPLC)

2.2.2洗脱。采用He或N₂流于95-110℃除去水，共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于150℃加热15分钟。反应混合物用0.5-1mL 1M H₃PO₄和3-3.5mL制备型HPLC流动相的水性组分稀释，粗产物经半制备型HPLC(例如Waters XBridge Peptide BEH C18，

10μm，10mm x 250mm)以3-6mL/min纯化。收集含有产物的级分(5-10mL)，用稀释介质稀释，所述稀释介质含有0-2mL EtOH、10-20mL水和0-4mL磷酸盐缓冲浓缩液(Braun，3.05g磷酸氢二钠十二水合物，0.462g磷酸二氢钠二水合物，在20mL注射用水中)和/或抗坏血酸钠(100-1000mg)和/或柠檬酸钠(100-1000mg)和/或龙胆酸(20-200mg)。

通用放射标记方法D，在如图3中说明的tracerlab FX上进行(放射标记、HPLC)

2.2.2洗脱。采用He或N₂流于95℃除去水，与MeCN(1mL)共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于150℃加热15分钟。反应混合物用0.5-1mL 1M H₃PO₄和3-3.5mL制备型HPLC流动相的水性组分稀释，粗产物经半制备型HPLC(如Waters XBridge Peptide BEH C18，

10μm，10mm x 250mm或Gemini 5μm C18，250x10mm，Phenomenex：00G-4435-N0)以3-6mL/min纯化。收集含有产物的级分(5-10mL)，用稀释介质稀释，所述稀释介质含有0-2mL EtOH、10-20mL水和0-4mL磷酸盐缓冲浓缩液(Braun)和/或抗坏血酸钠(100-1000mg)和/或柠檬酸钠(100-1000mg)和/或龙胆酸(20-200mg)。

通用放射标记方法E，在如图3中说明的tracerlab FX上进行(放射标记、脱保护、HPLC)

2.2.2洗脱。采用He或N₂流于95℃除去水，与MeCN(1mL)共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于150℃加热15分钟。随后，加入1mL 0.5M H₂SO₄，混合物于100℃加热10分钟。反应混合物用0.5-1mL 1MNaOH和2-3mL制备型HPLC流动相的水性组分稀释，粗产物经半制备型HPLC(如WatersXBridge Peptide BEH C18，

通用放射标记方法F，在如图4中说明的IBA Synthera+Synthera HPLC上进行(放射标记、脱保护、HPLC)

2.2.2洗脱。采用He或N₂流于95-110℃除去水，共蒸发至干。之后，将溶解前体的溶液加入无水K[¹⁸F]F-Kryptofix复合物中。将反应小瓶密封，于110-120℃加热5-10分钟。在氟化后，加入0.5-1mL 1M H₃PO₄，反应混合物于100-110℃加热10-15分钟。混合物用3-3.5mL制备型HPLC流动相的水性组分稀释，粗产物经半制备型HPLC(如Waters XBridgePeptide BEH C18，

放射化学纯度的确定

通过分析型HPLC确定了放射化学纯度，例如：柱子：Atlantis T3，Waters，100×4.6mm，3μm，100；流动相A：40m乙酸钠，最后用冰醋酸调节至pH 5.0；流动相B：甲醇在乙腈中的35％溶液；流速：1.8mL/min；梯度：0-5min 15-32％B，5-8min 32-80％B，8-12min 80％B，12-13min 80-15％B，13-16min 15％B。

Claims

1.制备式I化合物的方法，

该方法包括如下步骤：

A)使式II化合物与¹⁸F氟化剂反应

其中X是H或PG，

LG是离去基，且

PG是胺保护基，和

B)任选地，如果X是PG，则裂解保护基PG，和

2.根据权利要求1所述的方法，其中X是PG，步骤B不存在，和保护基PG在步骤A中裂解。

3.根据权利要求1所述的方法，其中X是PG，和保护基PG在步骤B中裂解。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中流动相中乙醇:水的比例为约5/95v/v至约80/20v/v。

5.根据权利要求1-4任一项的方法，其中流动相的pH为约0至约8、优选约1至约3。

6.根据权利要求1-5任一项的方法，其中流动相还包含缓冲剂，所述缓冲剂优选选自碱金属磷酸二氢盐、二碱金属磷酸氢盐、三碱金属磷酸盐、碱金属乙酸盐、碱金属甲酸盐和单/二/三碱金属柠檬酸盐。

7.根据权利要求1-6任一项的方法，其中高效液相色谱法(HPLC)在约50至约400巴、优选约50至约250巴的压力下进行。

8.根据权利要求1-7任一项的方法，其中所述方法是自动化方法，其中步骤A、任选的步骤B和步骤C在自动化合成仪上进行。

9.根据权利要求1-8任一项的方法，其中高效液相色谱法(HPLC)产生了包含式I化合物的级分，并且该级分进行步骤D)过滤除菌。

10.根据权利要求1-9任一项的方法，其中所述方法不包括在步骤C后进行式I化合物的固相提取，优选其中所述方法不包括在步骤C之前或之后进行式I化合物的固相提取。

11.根据权利要求1-10任一项的方法，其中式I化合物在步骤C的高效液相色谱法(HPLC)之后不进行色谱法，优选其中式I化合物不进行除步骤C的高效液相色谱法(HPLC)以外的色谱法。

所述式I化合物可通过权利要求1-12任一项的方法获得。

13.用于诊断学的根据权利要求12的组合物。

14.根据权利要求12的组合物，用于Tau聚集物的显像，特别是用于Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像。

15.根据权利要求13或14的用于所述用途的组合物，其中病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-likewith astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎、格子状营养不良、亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病；优选阿尔茨海默病。

16.根据权利要求13至15任一项的用于所述用途的组合物，其中组合物将通过注射施用。

17.如权利要求12中所定义的组合物，用于诊断与Tau聚集物相关的病症或用于诊断Tau病变，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

18.根据权利要求17的用于所述用途的组合物，其中Tau病变是3R Tau病变。

19.根据权利要求17的用于所述用途的组合物，其中Tau病变是4R Tau病变。

20.根据权利要求17的用于所述用途的组合物，其中病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-likewith astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎、格子状营养不良、亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病；优选阿尔茨海默病。

21.根据权利要求20的用于所述用途的组合物，其中病症是阿尔茨海默病(AD)。

22.根据权利要求20的用于所述用途的组合物，其中病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

23.根据权利要求20的用于所述用途的组合物，其中病症是进行性核上麻痹(PSP)。

24.根据权利要求20的用于所述用途的组合物，其中病症是皮克病(PiD)。

25.根据权利要求17至24任一项的用于所述用途的组合物，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像。

26.Tau聚集物的显像方法，特别是Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像方法，其中给患者施用有效量的如权利要求12中所定义的组合物。

27.诊断与Tau聚集物相关的病症或Tau病变的方法，其中给患者施用有效量的如权利要求12中所定义的组合物，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

28.根据权利要求27的方法，其中Tau病变是3R Tau病变。

29.根据权利要求27的方法，其中Tau病变是4R Tau病变。

30.根据权利要求27所述的方法，其中病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like withastrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎、格子状营养不良、亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病；优选阿尔茨海默病。

31.根据权利要求30所述的方法，其中病症是阿尔茨海默病(AD)。

32.根据权利要求30所述的方法，其中病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

33.根据权利要求30所述的方法，其中病症是进行性核上麻痹(PSP)。

34.根据权利要求30所述的方法，其中病症是皮克病(PiD)。

35.根据权利要求26至34任一项的方法，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像。

36.如权利要求12中所定义的组合物在制备用于Tau聚集物显像、特别是Tau聚集物的正电子发射断层扫描显像的诊断剂中的用途。

37.如权利要求12中所定义的组合物在制备用于诊断与Tau聚集物相关的病症或用于诊断Tau病变的诊断剂中的用途，特别是其中诊断通过正电子发射断层扫描进行。

38.根据权利要求37的用途，其中Tau病变是3R Tau病变。

39.根据权利要求37的用途，其中Tau病变是4R Tau病变。

40.根据权利要求37的用途，其中病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症、关岛型帕金森综合征-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、哈-斯病、多系统萎缩、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆(tangle only dementia)、脑炎后帕金森综合征、强直性营养不良、Tau全脑病、具有星形胶质细胞的AD-样(AD-like with astrocytes)、一些朊病毒病(具有Tau的GSS)、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、额颞叶变性、Guadeloupean帕金森综合征、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、创伤性应激综合症、癫癎、卢伊体痴呆(LBD)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、非典型帕金森综合征、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、青光眼、眼淀粉样变性、原发性视网膜变性、黄斑变性(例如年龄相关性黄斑变性(AMD))、视神经玻璃疣、视神经病变、视神经炎、格子状营养不良、亨廷顿病、缺血性卒中和AD中的精神病；优选阿尔茨海默病。

41.根据权利要求40的用途，其中所述病症是阿尔茨海默病(AD)。

42.根据权利要求40的用途，其中所述病症是帕金森病或非典型帕金森综合征。

43.根据权利要求40的用途，其中所述病症是进行性核上麻痹(PSP)。

44.根据权利要求40的用途，其中所述病症是皮克病(PiD)。

45.根据权利要求36至44任一项的用途，其中Tau聚集物在脑中或在眼中显像。

46.根据权利要求12的组合物作为分析参比物的用途。

47.根据权利要求12的组合物作为体外筛选工具的用途。

48.在样品或患者中采集用于诊断与Tau聚集物相关的病症的数据的方法，该方法包括：

(a)使被怀疑含有Tau聚集物的样品或特定身体部分或身体区域与含有式I化合物的如权利要求12所定义的组合物接触；

(b)使式I化合物与Tau聚集物结合；

(c)检测与Tau聚集物结合的式I化合物；和

49.确定组织和/或体液中Tau聚集物的量的方法，该方法包括：

(a)提供代表待研究的组织和/或体液的样品；

(b)用含有式I化合物的如权利要求12中所定义的组合物测试样品中Tau聚集物的存在；

(c)确定与Tau聚集物结合的式I化合物的量；和

(d)计算组织和/或体液中Tau聚集物的量。

50.采集用于确定患者中患有与Tau聚集物相关的病症的倾向、包括用于在样品中或原位检测含有式I化合物的如权利要求12所定义的组合物与Tau聚集物的特异性结合的数据的方法，该方法包括如下步骤：

(a)使被怀疑含有Tau聚集物的样品或特定身体部分或身体区域与含有特异性结合Tau聚集物的式I化合物的如权利要求12所定义的组合物接触；

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。

51.在已经用药物进行治疗的罹患与Tau聚集物相关的病症的患者中采集用于监测残余病症的数据的方法，该方法包括：

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。

52.采集用于预测罹患与Tau聚集物相关的病症和正用药物进行治疗的患者的响应性的数据的方法，该方法包括：

(c)检测化合物/Tau聚集物复合物的形成；

(e)任选地，将化合物/Tau聚集物的量与正常对照值进行比较。