CN111837038A - 用于评估感染持续时间的快速定量分析 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于评估受试者中病毒(例如HIV)感染持续时间的系统和方法。更具体地，本发明涉及使用(尤其是)读取器评估受试者中病毒(例如HIV)感染持续时间，所述读取器被配置成测量信号像素的数量和信号像素的强度，以生成定量信号读数，用于评估样品液中抗病毒抗体(例如抗HIV抗体)的平均抗体亲和力，和/或受试者中病毒(例如HIV)的感染持续时间。

Description

用于评估感染持续时间的快速定量分析

相关申请的交叉引用

本申请请求了于2018年2月1日提交的美国临时专利申请62/625,281的优先权，出于所有目的通过引用将其公开的内容全部并入本文。

技术领域

本发明涉及用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的系统和方法。更具体来说，本发明涉及使用(尤其是)读取器评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的系统和方法，所述读取器被配置成测量信号像素的数量和信号像素的强度，以生成定量信号读数，用于评估样品液中的抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)的平均抗体亲和力和/或受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间。

背景技术

Granade等人(1)所描述的分析方法采用两线侧向层析免疫层析分析(LFICA)，并添加了第三条反应线(我们现在将其称为“发病线”或“新近线”)作为二元指标，使用减少量(相对于通常饱和的诊断线)的HIV-1抗原(特别是多簇重组gp41构建体)来区分近期感染和长期感染，所述HIV-1抗原以相对于样品中抗体量的有限浓度呈条带状地固定在膜上并位于诊断线和对照线的前面(相对于试剂流动)。这就建立了抗体捕获线，由于捕获线是有限的，并且因为加入分析的样本中的抗体转运以很短的、短暂的方式穿过了这条线，因此主要是基于较高亲和力抗体的比例保留来捕获的(其中较低亲和力抗体往往不会被捕获，而是继续迁移过去。Granade的文章将二元分析描述为“基于限制性抗原的亲和力测量的概念[…]从酶免疫测定形式扩展到快速的侧向层析检测装置……”，但未将检测结果与亲和力检测或与确定的近期感染平均持续时间(MDRI)相关联。Granade确实将其与另一种根据与疾病进展相关的HIV-1抗体滴度的变化来区分近期感染和长期感染的方法(HIV-1BED酶免疫测定或“BED”分析(2))进行了比较，该方法得到的临界MDRI值与BED分析获得的临界MDRI值相似。但是，BED分析是根据样本中的总抗体中的HIV-1抗体的比例(早期感染时HIV-1阳性的百分比较低，后期感染时百分比较高)来估算MDRI。BED分析和HIV-1阳性抗体比例被认为在评估感染时间或MDRI方面不如一般抗体亲和力的测量准确，尤其是HIV-1限制性抗原亲和力EIA(3,4)。US 2017/0307613 A1公开了一种用于同时检测人类免疫缺陷病毒(HIV)的两种或多种抗原的抗体并确定HIV感染后的大致时间(持续时间)，从而确定感染，并确定HIV感染的新近度的方法及其衍变方法。(18)

因此需要一种用来评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的测定方法。本发明满足了这个需求以及其他相关的需求。

发明内容

一方面，本文公开了一种用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的系统，该系统包括：a)侧向层析检测装置，其包括多孔基质，所述多孔基质从上游到下游包括：样品施加位点，其被配置用于接收来自受试者的样品液；以及第一检测位置，其包含固定的第一结合试剂，所述第一结合试剂特异地结合所述样品液中具有第一平均抗体亲和力的抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)，其中，相对于所述样品液中的所述抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)，所述第一结合试剂是有限的，并且所述抗病毒抗体是过量的，所述样品液沿着所述侧向层析检测装置侧向流动并通过所述第一检测位置以形成包括多个信号像素的第一可检测信号；和b)读取器，其被配置用于测量所述第一可检测信号中的所述信号像素的数量和所述信号像素的强度，以产生第一定量信号读数，所述第一定量信号读数用于评估所述样品液中的抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)的平均抗体亲和力和/或所述受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间。

另一方面，本文公开了一种用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的方法，该方法包括：a)将来自受试者的样品与上述系统接触，其中，将所述液体样品施加到所述侧向层析检测装置的所述第一检测位置的上游位置；b)将抗病毒抗体(例如抗HIV抗体，如果存在于所述液体样品中的话)和标记试剂输送到所述第一检测位置，从而在所述第一检测位置形成第一可检测信号，所述第一可检测信号包括多个信号像素；和c)使用所述读取器测量所述第一可检测信号中的所述信号像素的数量和所述信号像素的强度，以产生第一定量信号；和d)基于所述第一定量信号，评估所述样品液中所述抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)的平均抗体亲和力和/或所述受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间。

附图说明

图1示出了在用于评估病毒(例如，HIV)感染持续时间的示例性系统中的示例性侧向层析检测装置。所示装置是一个检测条，其包括安装(例如，使用粘合剂安装)在支撑板上的几种重叠材料，包含样品缓冲液和血液或其他标本的液体样品将通过该检测条流经样品垫(调整样本)、结合垫(其中识别抗体的彩色标记物与样品中的抗体结合)并在膜上的三条试剂线上产生反应，即，按样品流动的顺序排列：1)指示HIV感染持续时间的新近线，2)指示HIV抗体的存在以及因此感染的诊断线，和3)指示适当的检测功能和有效样品的对照线。样品继续迁移至所述检测装置远端的吸收芯，该吸收芯吸收并牵引所述样品通过整个检测条，使其畅通并有助于膜上的三条反应线显色。为了美观或便于识别检测或标记检测样品识别的位置，可以选择将盖子(例如金垫盖和棉芯盖)分别安装在所述样品垫/结合垫和所述吸收垫上。

图2示出了与图1类似的示例性侧向层析检测装置条，作为评估病毒(例如，HIV)感染持续时间的示例性系统，除了装置条可选地不包括金垫盖或棉芯盖之外，该装置条也可以安装在塑料外壳中。这样的装置可以具有比图1所示装置条更多的优点，即可以最大程度地减少试剂和样品暴露于用户或直接环境，可以在所述塑料外壳上附加标签以清楚地识别不同的反应条，附加的商业外观可以为用户提供其他信息，并且在装置上将会有额外的空间来标记样品的识别。该示例性设计还使外壳能够替代在自动读取器中读取装置条时可能需要的托架或适配器，在将检测装置插入所述读取器中时该自动读取器测量装置条反应。

图3示出了与HIV-1抗体亲和力相关的Asanté^TM HIV-1 Rapid Recency^TM检测响应示例和估计的近期感染平均持续时间。通过合适的读取器仪器测量本发明装置条上新近线的反应，该仪器测量“新近”线的积分像素密度单位(IPDU)，并将这些测量结果的对数值(y轴)与通过HIV-1抗体限制性抗原亲和力EIA确定的所述样品的相对抗体亲和力测量结果(标准化OD值或“ODn”)(下x轴)相关联，或与先前根据抗体亲和力确定的已知感染持续时间(上x轴)相关联(3,5)。

详细描述

A.定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的涵义相同的涵义。本文引用的所有专利、专利申请(公开或未公开)和其他出版物均通过整体引用并入本文。如果本节中提出的定义与通过引用并入本文中的专利、申请及公开的申请和其他出版物中提出的定义相反或不一致，在本节中提出的定义优先于通过引用并入本文的定义。

可以使用多个利用硬件和软件的设备以及多个不同的结构组件来实现本发明。另外，应该理解的是本发明的实施例可以包括硬件、软件和电子组件或模块，为了讨论的目的，这些组件或模块可以被说明和描述为好像大多数组件仅在硬件中实施。然而，本领域的普通技术人员基于对本发明详细描述的阅读将认识到，在至少一个实施例中，本发明基于电子的方面可以在可由一个或多个处理器执行的软件(例如，存储在非暂时性计算机可读介质上)中实现。因此，应当注意，可以利用多个基于硬件和软件的设备以及多个不同的结构组件来实现本发明。

本文中使用“包括”、“包含”或“具有”及其变换的词语意在涵盖其后面列出的项目及其等同物以及附加项目。除非另外说明，使用任何和所有示例或示例性语言(例如，“例如”)旨在更好地阐明实施例，并非对权利要求的范围构成限制。

除非上下文另外明确指出，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一种”，“一个”和“所述”包括复数指称对象。同样地，当使用复数形式时，应视上下文允许将其解释为涵盖单数形式。例如，“一种”或“一个”表示“至少一个”或“一个或多个”。因此，提及“分析物”是指一种或多种分析物，而提及“方法”包括提及本文公开的和/或本领域技术人员已知的等同步骤和方法，等等。

本文自始至终，所要求保护的主题的各个方面以范围格式呈现。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，不应认为对所要求保护的主题范围的不灵活限制。因此，范围的描述应被理解为已经具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，在提供数值范围的情况下，应理解为，在该范围的上限和下限之间的每个中间值，以及在规定范围内的任何其他规定值或中间值都包括在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包含在较小范围内，也可以包含在所要求保护的主题内，但受所述范围内任何明确排除限制的限制。如果规定范围包含一个或两个所述限制，那些不包含一个或两个所述限制的范围也包含在要求保护的主题内。不管范围有多宽，这一点都适用。

如本文所述，“个体”或“受试者”可以是任何活的生物体，包括人类和其他哺乳动物。如本文所述，术语“受试者”不限于特定物种或样品类型。例如，术语“受试者”可以指患者，通常指人类患者。但是，该术语不限于人类，而是涵盖了各种哺乳动物或其他物种。在一个实施例中，受试者可以是哺乳动物，或者哺乳动物的细胞、组织、器官或一部分。哺乳动物包括任何类别的哺乳动物，优选是人类(包括人类，人类受试者或人类患者)。哺乳动物包括但不限于农场动物、运动动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠和大鼠。

如本文所述，术语“样品”是指可能包含需要进行分析物分析的分析物的任何物质。如本文所述，“生物样品”可以指从活的或病毒来源或其他大分子和生物分子来源获得的任何样品，并且包括受试者的任何细胞类型或组织，从中可以获得核酸或蛋白质或其他大分子。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或是经过处理的样品。例如，分离的核酸被扩增后构成一个生物样品。生物样品包括但不限于，体液，例如唾液、尿液、血液、血浆、血清、精液、粪便、痰、脑脊髓液、滑液、汗液、眼泪、粘液、羊水，动植物的组织和器官样品以及由此衍生的处理样品。生物组织的示例还包括器官、肿瘤、淋巴结、动脉和单个细胞。

如本文所述，“抗体”是指由免疫球蛋白基因或其片段衍生、模仿或者基本编码的肽或多肽，能够特异性结合抗原或表位。参见，例如，Fundamental Immunology,3rdEdition,W.E.Paul,ed.,Raven Press,N.Y.(1993)；Wilson(1994；J.Immunol.Methods175:267-273；Yarmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods 25:85-97。术语抗体包括抗原结合部分，即“抗原结合位点”(例如，片段、子序列、互补决定区(CDR))，其保留结合抗原的能力，包括(i)Fab片段，由VL，VH，CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，一个二价片段，包含两个在铰链区通过二硫键连接的Fab片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward et al.,(1989)Nature 341:544-546)，由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。单链抗体也包括在术语“抗体”中。“抗体”可以是天然产生的或人造的，例如通过常规杂交瘤技术、各种展示方法(例如噬菌体展示)产生的单克隆抗体，和/或其功能片段。

术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的抗原决定簇。表位通常或经常由分子的化学活性表面基团组成，例如氨基酸或糖侧链，并且可以具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的区别在于，在变性溶剂的存在下，与前者而不是后者的结合丧失。

如本文所述，“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，即包含该群体的抗体是相同的，只是可能存在少量自然突变。如本文所述，“单克隆抗体”还指单克隆抗体的功能片段。

如本文所述，“结合试剂”是指以理想的亲和力和/或特异性结合靶标或分析物的任何物质。结合试剂的非限制性实例包括细胞、细胞器、病毒、颗粒、微粒、分子、或其聚集体或复合物、或分子聚集体或复合物。示例性结合试剂可以是氨基酸、肽、蛋白质(例如抗体或受体)、核苷、核苷酸、寡核苷酸、核酸(例如DNA或RNA)、维生素、单糖、寡糖、碳水化合物、脂质、适体及其复合物。

如本文所述，术语“特异性结合”是指结合试剂(例如，抗体或适体)的特异性，使得结合试剂优先结合确定的靶标或分析物。如果结合试剂与靶标的结合比它与其他物质的结合具有更大的亲和力、亲合力、更容易和/或持续时间更长，则该结合试剂“特异性结合”靶标。例如，特异性结合靶标的结合试剂与所述靶标结合的亲和力，比它与其他物质结合的亲和力高至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％或更多；或与靶标分析物结合的亲和力是它与其他物质结合的亲和力的至少约两倍，至少约五倍，至少约十倍或更多。在其他潜在干扰物质的存在下，结合试剂识别靶标分析物也是特异性结合的一个特征。优选地，对靶标分析物具有特异性或特异性结合靶标分析物的结合试剂，例如抗体或适体，避免与显著百分比的非靶标物质(例如检测样品中存在的非靶标物质)结合。在一些实施例中，结合试剂避免结合约90％以上的非靶标物质，尽管更高的百分比是明确考虑和首选的。例如，结合试剂可避免结合约91％，约92％，约93％，约94％，约95％，约96％，约97％，约98％，约99％，约99％和约99.9％或更多的非靶标物质。在其他实施例中，结合试剂可避免结合约10％，20％，30％，40％，50％，60％或70％以上，或约75％以上，或约80％以上，或约85％以上的非靶标物质。

B.用于评估受试者病毒感染持续时间的系统

一方面，本文公开了一种用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的系统，该系统包括：a)侧向层析检测装置，其包括多孔基质，该多孔基质从上游到下游包括：样品施加位点，其被配置用于接收来自受试者的样品液；以及第一检测位置，其包含固定的第一结合试剂，所述第一结合试剂特异地结合所述样品液中具有第一平均抗体亲和力的抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)，其中，相对于所述样品液中的所述抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，所述第一结合试剂是有限的，并且抗病毒抗体是过量的，所述样品液沿着所述侧向层析检测装置侧向流动并通过所述第一检测位置以形成包括多个信号像素的第一可检测信号；和b)读取器，其被配置用于测量所述第一可检测信号中的所述信号像素的数量和所述信号像素的强度，以产生第一定量信号读数，所述第一定量信号读数用于评估所述样品液中的所述抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)的平均抗体亲和力和/或所述受试者中的病毒(例如，HIV)感染持续时间。

在一些实施例中，本系统中所述侧向层析检测装置的多孔基质还包括位于所述第一检测位置下游的第二检测位置；所述第二检测位置包含与所述样品中具有第二平均抗体亲和力的抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)特异性结合的固定化的第二结合试剂，其中相对于所述样品液中的所述抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，所述第二结合试剂过量并且所述抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)是有限的，所述第一平均抗体亲和力高于所述第二平均抗体亲和力，所述样品液沿着所述侧向层析检测装置侧向流动并通过所述第一检测位置以形成第一可检测信号，并且通过所述第二检测位置以形成第二可检测信号；所述第一可检测信号和所述第二可检测信号中的每一个包括多个信号像素。

本系统中的侧向层析检测装置在任何合适的配置下可包括样品施加位点、第一检测位置和第二检测位置。在一些实施例中，所述侧向层析检测装置包括单个多孔基质，所述多孔基质从上游到下游包括样品施加位点、第一检测位置和第二检测位置。在一些实施例中，所述侧向层析检测装置包括多个多孔基质，所述多孔基质从上游到下游包括样品施加位点、第一检测位置和第二检测位置。在一些实施例中，所述侧向层析检测装置包括两个多孔基质，上游的多孔基质包括样品施加位点，下游的多孔基质包括第一检测位置和第二检测位置。

所述结合试剂可以任何合适的方式固定在所述检测位置上。例如，将第一结合试剂共价地固定在所述第一检测位置上。在另一个实施例中，所述第一结合试剂非共价地固定在所述第一检测位置上。还在另一个实施例中，所述第一结合试剂通过载体固定在所述第一检测位置上。

本系统可以被配置或用于评估受试者中任何合适的病毒的感染持续时间。在一些实施例中，所述系统可以被配置或用于评估受试者中HIV-1的感染持续时间。所述第一结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-1抗体。例如，所述第一结合试剂与抗HIV-1M组、N组、O组、P组的抗体特异性结合。所述第一结合试剂可以与HIV-1包膜或核心蛋白的抗体特异性结合。例如，所述第一结合试剂可特异性结合抗HIV-1包膜糖蛋白120(gp120)、包膜糖蛋白41(gp41)或病毒核心蛋白24(p24)的抗体。

可以使用与抗HIV-1抗体特异性结合，优选与抗HIV-1抗体的抗原抗体结合位点特异性结合的任何合适的第一结合试剂，例如第一结合抗原试剂。例如，所述第一结合试剂包含与抗HIV-1抗体特异性结合的多肽。在另一个实施例中，与抗HIV-1抗体特异性结合的多肽是重组多肽。仍在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-1包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。还在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-1gp120，gp41或p24的免疫优势区(IDR)。

在一些实施例中，本系统可以被配置或用于评估受试者中HIV-2的感染持续时间。所述第一结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-2抗体。例如，所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2A，B，C，D，E，F，G或H组的抗体。所述结合试剂可以特异性结合抗HIV-2包膜或核心蛋白的抗体。例如，所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2包膜糖蛋白105(gp105)、包膜糖蛋白125(gp125)、包膜糖蛋白36(gp36)或核心蛋白26(p26)的抗体。

可以使用与抗HIV-2抗体特异性结合的任何合适的第一结合试剂。例如，所述第一结合试剂包含与抗HIV-2抗体特异性结合的多肽。在另一个实施例中，与抗HIV-2抗体特异性结合的多肽是重组多肽。仍在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-2包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。还在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的免疫优势区(IDR)。

在一些实施例中，本系统可以被配置或用于评估受试者中HIV-1的感染持续时间，并且所述系统中的侧向层析检测装置的多孔基质还包括在第一检测位置下游的第二检测位置，所述第二检测位置包含与抗HIV-1抗体特异性结合的固定化的第二结合试剂。可以用任何合适的方式将所述第二结合试剂固定在所述检测位置。例如，将第二结合试剂共价地固定在第二检测位置。在另一个实施例中，将第二结合试剂非共价地固定在第二检测位置。仍在另一个实施例中，将第二结合试剂通过载体固定在第二检测位置。

所述第二结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-1抗体。例如，所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1M组、N组、O组、P组的抗体。所述第二结合试剂可以特异性结合抗HIV-1包膜或核心蛋白的抗体。例如，所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1包膜糖蛋白120(gp120)、包膜糖蛋白41(gp41)或核心蛋白24(p24)的抗体。

可以使用特异性结合抗HIV-1抗体的任何合适的第二结合试剂。例如，所述第二结合试剂包含与抗HIV-1抗体特异性结合的多肽。在另一个实例中，与抗HIV-1抗体特异性结合的多肽是重组多肽。仍在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-1包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。还在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-1gp120，gp41或p24的免疫优势区(IDR)。

在一些实施例中，本系统可以被配置或用于评估受试者中HIV-2的感染持续时间，并且所述系统中的侧向层析检测装置的多孔基质还包括位于所述第一检测位置下游的第二检测位置，所述第二检测位置包含与抗HIV-2抗体特异性结合的固定化的第二结合试剂。所述第二结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-2抗体。例如，所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2A，B，C，D，E，F，G或H组的抗体。第二结合试剂可特异性结合抗HIV-2包膜或核心蛋白的抗体。例如，所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的抗体。

可以使用特异性结合抗HIV-2抗体的任何合适的第二结合试剂。例如，所述第二结合试剂包含与抗HIV-2抗体特异性结合的多肽。在另一个实施例中，与抗HIV-2抗体特异性结合的多肽是重组多肽。仍在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-2包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。还在另一个实施例中，所述多肽包含HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的免疫优势区(IDR)。

所述第一结合试剂和所述第二结合试剂可以特异性结合抗相同类型的HIV或不同类型的HIV的抗体。在一些实施例中，第一结合试剂和第二结合试剂特异性结合抗不同类型的HIV的抗体。例如，第一结合试剂和第二结合试剂分别特异性结合抗HIV-1抗体和抗HIV-2抗体(或者反之亦然)。

在一些实施例中，第一结合试剂和第二结合试剂均特异性结合抗相同类型的HIV的抗体，例如抗HIV-1抗体或抗HIV-2抗体。例如，第一结合试剂和第二结合试剂均特异性结合抗HIV-1的抗体。

所述第一结合试剂和所述第二结合试剂可以包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体的相同表位，或者包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体的不同表位。在一些实施例中，第一结合试剂和第二结合试剂均包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体(例如，抗HIV-1抗体或抗HIV-2抗体)的相同表位。在一些实施例中，第一结合试剂和第二结合试剂包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体(例如，抗HIV-1抗体或抗HIV-2抗体)的不同表位。

所述第一检测位置可以包含任何合适的量、水平或者浓度的固定化的第一结合试剂。在一些实施例中，第一检测位置包含约1ng/mm至约100ng/mm或其任何子范围的固定化的第一结合试剂，例如约1ng/mm，2ng/mm，3ng/mm，4ng/mm，5ng/mm，6ng/mm，7ng/mm，8ng/mm，9ng/mm，10ng/mm，20ng/mm，30ng/mm，40ng/mm，50ng/mm，60ng/mm，70ng/mm，80ng/mm，90ng/mm或100ng/mm的固定化的第一结合试剂。

所述第二检测位置可以包括任何合适的量、水平或浓度的固定化的第二结合试剂。在一些实施例中，第二检测位置包含约50ng/mm至约250ng/mm或其任何子范围的固定化的第二结合试剂，例如约50ng/mm，60ng/mm，70ng/mm，80ng/mm，90ng/mm，100ng/mm，110ng/mm，120ng/mm，130ng/mm，140ng/mm，150ng/mm，160ng/mm，170ng/mm，180ng/mm，190ng/mm，200ng/mm，210ng/mm，220ng/mm，230ng/mm，240ng/mm或250ng/mm的固定化的第二结合试剂。

在第一检测位置固定的第一结合试剂的量、水平或浓度与在第二检测位置的第二结合试剂的量、水平或浓度可以不同。在一些实施例中，在第一检测位置固定的第一结合试剂的量、水平或浓度低于在第二检测位置的第二结合试剂的量、水平或浓度。在一些实施例中，在第二检测位置固定的第二结合试剂的量、水平或浓度与在第一检测位置的第一结合试剂的量、水平或浓度之间的比率可以是约2.5：1至约50：1或其任何子范围，例如，约2.5：1、3：1、3.5：1、4：1、4.5：1、5：1、5.5：1、6：1、6.5：1，7：1、7.5：1、8：1、8.5：1、9：1、9.5：1、10：1、20：1、30：1、40：1或50：1。

从样品施加垫或位点的底部到第一检测位置的距离可以是任何合适的距离。在一些实施例中，从样品施加垫的底部到第一检测位置的距离是从约37mm到约39mm，或其任何子范围，例如，约37mm，37.5mm，38mm，38.5mm或39mm。

从样品施加垫或位点的底部到第二检测位置的距离可以是任何合适的距离。在一些实施例中，从样品施加垫的底部到第二检测位置的距离是从约43mm到约45mm，或其任何子范围，例如，约43mm，43.5mm，44mm，44.5mm或45mm。

从样品施加垫或位点的底部到第一检测位置的距离与从样品施加垫或位点的底部到第二检测位置的距离之间的比率可以是任何合适的比率。在一些实施例中，从样品施加垫的底部到第一检测位置的距离与从样品施加垫的底部到第二检测位置的距离之间的比率是约0.5到约1，或者其任何子范围，例如，约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1。

所述第一结合试剂可以与具有任何合适的第一平均抗体亲和力的抗HIV抗体特异性结合。在一些实施例中，第一结合试剂特异性结合抗HIV抗体，通过Duong等人(3)中所述的HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量，该抗HIV抗体具有约0.25归一化OD单位(ODn)至约6.0ODn的第一平均抗体亲和力，或其任何子范围，例如，约0.25ODn，0.5ODn，0.75ODn，1ODn，1.5ODn，2ODn，2.5ODn，3ODn，3.5ODn，4ODn，4.5ODn，5ODn，5.5ODn或6ODn。

所述多孔基质可以具有任何合适的形式或形状。例如，多孔基质可以呈条形或圆形。多孔基质也可以具有合适数量的元件。例如，多孔基质可以由单个元件制成或可以包含多个元件。

所述检测装置可以进一步包括样品施加元件，该样品施加元件位于基质的上游并且与基质流体连通。所述多孔基质和/或样品施加元件可以由任何合适的材料制成，例如硝化纤维素、玻璃纤维、聚丙烯、聚乙烯(优选具有非常高的分子量)、聚偏二氟乙烯、乙烯乙酸乙烯酯、丙烯腈或聚四氟乙烯。所述多孔基质和所述样品施加元件可以包括相同或不同的材料。

所述检测装置进一步包括位于基质下游并与基质流体连通的液体吸收元件。所述液体吸收元件可以由任何合适的材料制成，例如纸或纤维素材料。

所述检测装置可以进一步包括对照位置，该对照位置包括用于指示液体样品的正确流动和/或有效检测结果的手段。可以使用任何合适的手段。在一个实施例中，所述手段包括结合试剂，所述结合试剂与具有可检测标记且同样结合分析物(例如抗病毒抗体，例如抗HIV抗体)的结合试剂结合。在另一个实施例中，所述手段包括结合试剂，所述结合试剂与具有可检测标记且不与分析物结合的结合试剂结合。仍在另一个实施例中，所述手段包括一种物质，一旦液体沿着或穿过对照位置流动，该物质将产生可检测的信号，例如颜色或电信号。

在一些实施例中，所述基质至少有一部分由固体背衬支撑。在其他实施例中，所述基质的一半、一半以上或全部由固体背衬支撑。所述固体背衬可以由任何合适的材料制成，例如，固体塑料。如果所述检测装置包含电极或其他电气元件，则固体背衬通常应包含非导电材料。

在一些实施例中，标记试剂可以在检测装置上干燥，并且干燥的标记试剂可以通过液体(例如，样品液和/或另外的液体)重新溶解或重悬，并侧向输送通过所述检测装置，产生读数信号、对照信号和/或其他信号。例如，在第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置上游的基质的一部分可包含干燥的标记试剂，该标记试剂能够被液体样品和/或另一种液体移动到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置，以产生可检测的信号。也可以将干燥的标记试剂放在所述检测装置上的任何合适位置。在一个实施例中，干燥的标记试剂位于所述检测装置上样品施加位置的下游。在另一个实施例中，干燥的标记试剂位于所述检测装置上样品施加位置的上游。可以基于预期的测定形式确定标记试剂的类型。例如，如果将检测装置用于夹心测定中，则标记试剂应能够结合，并且优选特异性结合分析物(例如抗病毒抗体，例如抗HIV抗体)或与分析物结合的另一种物质。相同的标记试剂也可以用于某些竞争性结合测定。对于其他类型的竞争性结合测定，标记试剂应该是分析物，例如抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，或者是与可检测标记物相连的分析物类似物。在一些实施例中，对照位置包含与样品液中的标记试剂或抗体结合的固定化的第三结合试剂。

在一些实施例中，所述检测装置可以进一步包括位于第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置的上游且含有干燥的标记试剂的结合元件，该标记试剂能够被液体样品和/或另一种液体移动到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置，以产生可检测的信号。结合元件可以位于检测装置上样品施加位置的下游。结合元件也可以位于检测装置上样品施加位置的上游。在一些实施例中，标记试剂结合液体样品中的分析物，例如抗病毒抗体，例如抗HIV抗体。在其他实施例中，标记试剂与液体样品中的分析物(例如抗病毒抗体，例如抗HIV抗体)在第一检测位置和/或第二检测位置竞争结合分析物的结合试剂。

可以使用任何合适的标记试剂。在一些实施例中，所述标记试剂结合(优选特异性结合)样品中的抗病毒抗体，例如抗HIV抗体。

可以使用任何合适的标记。标记可以是可溶性标记，例如比色、放射性、酶促、发光或荧光标记。标记还可以是颗粒或微粒标记，例如微粒直接标记或彩色颗粒标记。示例性的颗粒或微粒标记包括胶体金标记、乳胶颗粒标记、纳米颗粒标记和量子点标记。根据特定的配置，诸如比色、放射性、酶促、发光或荧光标记之类的标记可以是可溶性标记或颗粒或微粒标记。在一些实施例中，标记是可溶性标记，例如荧光标记。在一些实施例中，标记是颗粒标记，例如金或乳胶颗粒标记。

在一些实施例中，标记试剂在稳定标记试剂、促进标记试剂在液体中溶解或重悬和/或促进标记试剂迁移的材料的存在下被干燥。可以使用任何合适的材料。例如，所述材料可以是蛋白质(例如间可溶性蛋白质，酪蛋白或BSA)、肽、多糖、糖(例如蔗糖)、聚合物(例如，聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40))、明胶或洗涤剂(例如，Tween-20)。参见，例如，美国专利号5,120,643和6,187,598等。

本发明的检测装置可与任何合适的样品液体一起使用。在一个实施例中，仅使用样品液将分析物和/或标记试剂输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。在另一个实施例中，使用显影液将分析物和/或标记试剂输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。还在另一个实施例中，使用样品液和显影液将分析物和/或标记试剂输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。

在一些实施例中，检测装置可以进一步包括覆盖至少部分检测装置的壳体，其中，壳体包括样品施加口，以允许在第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置的上游或向第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置施加样品；还包括围绕第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置的光学开口，以允许在第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置进行信号检测。光学开口可以任何合适的方式实现。例如，光学开口可以简单地是开放空间。另外，光学开口可以是透明盖。

在其他实施例中，所述壳体可以覆盖整个检测装置。还在其他实施例中，所述基质的样品接收部分或所述样品施加元件的至少一部分未被壳体覆盖，在壳体外将样品施加到所述基质的样品接收部分或所述样品施加元件的该部分，然后将其输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。所述壳体可以包括任何合适的材料。例如，所述壳体可以包括塑料、生物可降解材料或纤维素材料。在另一个示例中，无论是部分还是全部的壳体，都可以包括不透明、半透明和/或透明的材料。

本系统中的读取器包括图像传感器。可以使用任何合适的图像传感器。在一些实施例中，图像传感器是有源像素传感器，例如互补金属氧化物半导体(CMOS)有源像素传感器。本系统中的读取器可以包括任何合适数量的图像传感器或像素传感器。例如，读取器可以包括单个图像传感器或像素传感器。在另一个实施例中，读取器可以包括像素传感器的阵列。

本系统中的读取器可以具有或使用任何合适的光学格式。在一些实施例中，读取器具有从约1/13英寸到约4/3英寸或其任何子范围的光学格式，例如，约1/6英寸，1/5英寸，1/4英寸，1/3.6英寸，1/3.2英寸，1/3英寸，1/2.7英寸，1/2.5英寸，1/2.3英寸，1/2英寸或2/3英寸。

本系统中的读取器可以具有或使用任何合适的像素尺寸。在一些实施例中，读取器具有从约1.1微米到约8微米或其任何子范围的像素大小，例如，约1.2微米，1.25微米，1.4微米，1.67微米，1.75微米，1.9微米，2.2微米，2.4微米，2.8微米，3.0微米，3.5微米，3.75微米，4.5微米，4.7微米，4.8微米，5.2微米，5.6微米或6.0微米。

本系统中的读取器可以具有或使用任何合适的阵列尺寸。在一些实施例中，读取器具有从约1兆像素到约5兆像素，或其任何子范围的阵列大小，例如，约1兆像素，2兆像素，3兆像素，4兆像素或5兆像素。

本系统中的读取器可以具有或使用任何合适的读取时间。在一些实施例中，读取器具有从约1秒到约30秒或其任何子范围的读取时间，例如，约1秒，2秒，3秒，4秒，5秒，6秒，7秒，8秒，9秒，10秒，12秒，15秒，17秒，20秒，25秒或30秒。

定量信号读数可以使用任何合适的单位。在一些实施例中，第一定量信号读数使用积分像素密度单位(IPDU)。本系统中的读取器可以被配置为生成具有任何合适的线性范围的第一定量信号读数。在一些实施例中，读取器被配置为生成线性范围从约1IPDU到约10,000,000IPDU或其任何子范围的第一定量信号读数，例如，约1IPDU，5IPDU，10IPDU，50IPDU，100IPDU，500IPDU，1,000IPDU，5,000IPDU，10,000IPDU，50,000IPDU，100,000IPDU，500,000IPDU，1,000,000IPDU，2,000,000IPDU，3,000,000IPDU，4,000,000IPDU，5,000,000IPDU，6,000,000IPDU，7,000,000IPDU，8,000,000IPDU，9,000,000IPDU或10,000,000IPDU。

在一些实施例中，第二定量信号读数使用积分像素密度单位(IPDU)。本系统中的读取器可以被配置为生成任何具有合适的线性范围的第二定量信号读数。在一些实施例中，读取器被配置为生成线性范围从约1IPDU到约10,000,000IPDU或其任何子范围的第二定量信号读数，例如，约1IPDU，5IPDU，10IPDU，50IPDU，100IPDU，500IPDU，1,000IPDU，5,000IPDU，10,000IPDU，50,000IPDU，100,000IPDU，500,000IPDU，1,000,000IPDU，2,000,000IPDU，3,000,000IPDU，4,000,000IPDU，5,000,000IPDU，6,000,000IPDU，7,000,000IPDU，8,000,000IPDU，9,000,000IPDU或10,000,000IPDU。

本系统或检测装置可以进一步包括液体容器。所述液体容器可以包括任何合适的液体和/或试剂。例如，液体容器可以包括显影液、洗涤液和/或标记试剂。

本系统或检测装置可以进一步包括机器可读信息，例如条形码。条形码可以包括任何合适的信息。在一些实施例中，条形码包括本系统或检测装置的批次特定信息，例如本系统或检测装置的批号。在其他实施例中，所述机器可读信息包含在存储介质中，例如，(射频识别)RFID设备。RFID设备可以包括任何合适的信息。例如，RFID设备包括批次特定信息、液体对照信息或用于质量控制目的的信息。

本系统可以被配置为或用于评估任何合适的感染持续时间。在一些实施例中，所述系统可以被配置或用于评估病毒感染持续时间，例如，HIV感染持续时间，从约10天至约450天，或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天。

C.用于评估受试者病毒感染持续时间的系统

在另一方面，本文公开了一种用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的方法，该方法包括：a)使来自受试者的样品与以上B部分所述的系统接触，将所述液体样品施加到所述侧向层析检测装置的所述第一检测位置的上游位置；b)将抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体，如果存在于所述液体样品中的话)和标记试剂输送到所述第一检测位置，并在所述第一检测位置形成第一可检测信号，所述第一可检测信号包括多个信号像素；和c)使用所述读取器测量所述第一可检测信号中所述信号像素的数量和所述信号像素的强度，以产生第一定量信号；和d)基于所述第一定量信号，评估所述样品液中所述抗病毒抗体(例如，抗HIV抗体)的平均抗体亲和力和/或所述受试者中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。

在一些实施例中，将液体样品和标记试剂预混合以形成混合物，并将该混合物施加至检测装置。例如，可以将标记试剂提供或存储在液体中，然后将其与样品液预混合以形成混合物，并将该混合物施加到检测装置上。在另一个实施例中，可以在不与检测装置流体连通的位置或容器中(例如，在试管或诸如微量滴定板的孔中)干燥标记试剂，使用时，可以将样品液添加至上述容器(例如，试管或孔)中以形成混合物，然后将混合物施加至检测装置。

在一些实施例中，本方法在将混合物施加至侧向层析检测装置之后可以进一步包括洗涤步骤。洗涤步骤可以以任何合适的方式进行。例如，洗涤步骤包括在将混合物施加到侧向层析检测装置之后添加洗涤液。在另一个实施例中，侧向层析检测装置包括包含洗涤液的液体容器，并且洗涤步骤包括从所述液体容器中释放洗涤液。

在其他实施例中，检测装置在使用前包括干燥的标记试剂，所述标记试剂被液体样品和/或其他液体溶解或重悬，并输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。干燥的标记试剂可以位于检测装置上任何合适的位置。例如，干燥的标记试剂可以位于样品施加位点的下游，并且干燥的标记试剂可以被液体样品和/或其他液体溶解或重悬，并输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。在另一个实施例中，干燥的标记试剂可以位于样品施加位点的上游，并且干燥的标记试剂可以被另一种液体溶解或重悬，并输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。

在一些实施例中，仅通过液体样品将标记试剂溶解或重悬，并输送至第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。在其他实施例中，分析物和/或标记试剂被另一种液体溶解或重悬，并输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。仍在其他实施例中，分析物和/或标记试剂被样品液体和另一种液体(例如显影液)溶解或重悬，并输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。

本方法可用于评估任何合适的受试者中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。在一些实施例中，本方法可用于评估哺乳动物(例如，人类或非人类哺乳动物)中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。在其他实施例中，本方法可用于评估禽类(例如，鸡)中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。仍在其他实施例中，本方法可用于评估爬行动物或鱼类中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。

本方法可用于使用任何合适的样品来评估受试者中病毒(例如，HIV)的感染持续时间。在一些实施例中，液体样品可以是体液样品，例如全血、血清、血浆、尿液样品或口腔液。这种体液样品可以直接使用或在使用前进行处理，例如浓缩、纯化或稀释。在其他实施例中，液体样品可以是液体提取物、悬浮液或溶液，其衍生自固体或半固体生物材料，例如噬菌体、病毒、细菌细胞、真核细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞、培养的细胞、细胞或亚细胞结构、细胞聚集体、组织或器官。在一些实施例中，样品液获自或衍生自哺乳动物或人类来源。在其他实施例中，样品液是临床样品，例如人或动物临床样品。仍在其他实施例中，样品液是人造样品，例如，出于质量控制或校准目的的标准样品。

本方法可用于评估受试者中任何合适的病毒的感染持续时间。在一些实施例中，本方法可以用于评估受试者中HIV-1的感染持续时间。第一结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-1抗体。例如，第一结合试剂与抗HIV-1M组、N组、O组、P组的抗体特异性结合。第一结合试剂可以与抗HIV-1包膜或核心蛋白的抗体特异性结合。例如，第一结合试剂可特异性结合抗HIV-1包膜糖蛋白120(gp120)、包膜糖蛋白41(gp41)或病毒核心蛋白24(p24)的抗体。

在一些实施例中，本方法可用于评估受试者中HIV-2的感染持续时间。第一结合试剂结合并且优选特异性结合任何合适的抗HIV-2抗体。例如，第一结合试剂特异性结合抗HIV-2A，B，C，D，E，F，G或H组的抗体。结合试剂可以特异性结合抗HIV-2包膜或核心蛋白的抗体。例如，第一结合试剂特异性结合抗HIV-2包膜糖蛋白105(gp105)、包膜糖蛋白125(gp125)、包膜糖蛋白36(gp36)或核心蛋白26(p26)的抗体。

所述第一结合试剂可以与具有任何合适的第一平均抗体亲和力的抗HIV抗体特异性结合。在一些实施例中，第一结合试剂特异性结合抗HIV抗体，通过Duong等人(3)中所述的HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量，该抗HIV抗体具有约0.25归一化OD单位(ODn)至约6.0ODn的第一平均抗体亲和力，或其任何子范围，例如，约0.25ODn，0.5ODn，0.75ODn，1ODn，1.5ODn，2ODn，2.5ODn，3ODn，3.5ODn，4ODn，4.5ODn，5ODn，5.5ODn或6ODn。所述第二结合试剂可以特异性结合具有任何合适的第二平均抗体亲和力的抗HIV抗体。在一些实施例中，第二结合试剂特异性结合抗HIV抗体，所述抗HIV抗体具有第二平均抗体亲和力，通过Duong等人(3)中所述的HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量，该抗HIV抗体具有约0.25归一化OD单位(ODn)至约6.0ODn的第二平均抗体亲和力，例如，约0.25ODn，0.50ODn，0.75ODn，1.00ODn，1.25ODn，1.50ODn，1.75ODn，2.00ODn，2.25ODn，2.50ODn，2.75ODn，3.00ODn，3.25ODn，3.50ODn，3.75ODn，4.00ODn，4.25ODn，4.50ODn，4.75ODn，5.00ODn，5.25ODn，5.50ODn，5.75ODn或6.00ODn，或其任何子范围。

本方法中的定量信号读数可具有或使用任何合适的单位。在一些实施例中，第一定量信号读数使用积分像素密度单位(IPDU)。本系统中的读取器可用于生成具有任何合适的线性范围的第一定量信号读数。在一些实施例中，读取器用于生成第一定量信号读数，所述第一定量信号读数具有从约1IPDU到约10,000,000IPDU或其任何子范围的线性范围，例如，约1IPDU，5IPDU，10IPDU，50IPDU，100IPDU，500IPDU，1,000IPDU，5,000IPDU，10,000IPDU，50,000IPDU，100,000IPDU，500,000IPDU，1,000,000IPDU，2,000,000IPDU，3,000,000IPDU，4,000,000IPDU，5,000,000IPDU，6,000,000IPDU，7,000,000IPDU，8,000,000IPDU，9,000,000IPDU或10,000,000IPDU。

在一些实施例中，第二定量信号读数使用积分像素密度单位(IPDU)。本系统中的读取器可用于产生具有任何合适的线性范围的第二定量信号读数。在一些实施例中，读取器用于生成第二定量信号读数，所述第二定量信号读数具有从约1IPDU到约10,000,000IPDU或其任何子范围的线性范围，例如，约1IPDU，5IPDU，10IPDU，50IPDU，100IPDU，500IPDU，1,000IPDU，5,000IPDU，10,000IPDU，50,000IPDU，100,000IPDU，500,000IPDU，1,000,000IPDU，2,000,000IPDU，3,000,000IPDU，4,000,000IPDU，5,000,000IPDU，6,000,000IPDU，7,000,000IPDU，8,000,000IPDU，9,000,000IPDU或10,000,000IPDU。

本方法可以任何合适的方式用于评估受试者中的病毒(例如，HIV)感染持续时间。在一些实施例中，可以通过将第一定量信号与病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)和参考定量信号之间的预定相关性进行比较来评估受试者中病毒的(例如，HIV)感染持续时间。在其他实施例中，可以通过将第一定量信号与参考平均抗体亲和力进行比较来评估受试者中病毒的感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)，在病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)与所述参考平均抗体亲和力之间具有预定的相关性。

本方法可用于评估任何合适的感染持续时间。在一些实施例中，本方法可用于评估病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)，约10天至约450天的近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)，或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天的近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)。

在一些实施例中，本方法可用于根据预定的MDRI临界值来评估人群中HIV感染的发生率，例如，区分近期感染与长期感染，例如HIV感染持续时间，从约10天至约450天的近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)，或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天的近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)。例如，本方法可用于根据多个预定的MDRI临界值、通过确定低于指定临界值的近期感染来评估人群中HIV感染的发生率，例如，近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)从约10天至约450天的那些临界值，或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天的近期感染平均持续时间(MDRI)(自血清转阳后开始测量)。

本方法可用于评估任何合适的感染持续时间。在一些实施例中，本方法可用于评估病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)，约10天至450天，或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天。

本方法可以用于任何合适的目的。在一些实施例中，本方法可以用于评估受试者的病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)，相对于给定的MDRI具有小于10％的假新近率(FRR)。在一些实施例中，本方法可用于评估受试者中病毒感染持续时间(例如，HIV感染持续时间)，相对于给定的MDRI具有小于9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％，2％，1％，0.5％或0.1％的假新近率(FRR)。

本方法可以包括任何合适的附加步骤。在一些实施例中，本方法可以进一步包括治疗已经感染病毒的受试者。例如，本方法可以进一步包括治疗在过去约10天至约450天(或其任何子范围，例如，约10天，20天，30天，40天，50天，60天，70天，80天，90天，100天，150天，200天，250天，300天，350天，400天或450天)内已经感染HIV的受试者。

D.示例性实施方式

在一些实施例中，本发明旨在增强或改进现有的由Granade等人(1)描述的快速胶体金侧向层析免疫层析分析(LFICA)以区分近期和长期感染，使用了改进的诊断性LFICA，其特点是除了两线诊断检测(具有一个对照线和一个诊断线)外，还增加了第三条反应线(现在称为“发病线”，或更准确地说是“新近线”，因为它是用于评估感染的新近度)。原始分析是一种二元分析，将HIV感染确定为“近期”或“长期”，而不是根据视觉上是否存在新近线来量化感染的可变持续时间。本方法通过允许用户实际估算任何样本的感染持续时间来增强分析，通过结合独立的仪器读取新近线的大小和强度并与HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量的抗体亲和力相关联，将所述分析的实用性扩展到简单的“近期/长期”结果之外，上述HIV-1限制性抗原亲和力EIA是一种用于测量HIV-1抗体亲和力的方法，其已经建立了患者血液/血清或血浆样品的HIV-1抗体亲和力与患者感染持续时间或“近期感染平均持续时间”(或“MDRI”)之间的关系。(5)。这需要对新近线进行筛选和量化，将像素化颜色(基于数字CCR摄像机的系统上的像素数和强度)的定量测量值的对数转换为与已知MDRI值相关的限制性抗原亲和力EIA(LAg-Avidity EIA)中的抗体亲和力值相关的对数。(参见图3。)

增强/改善

然而，在一些实施例中，思迪亚生物科学公司(Sedia Biosciences)在商业化Granade等人(1)构想的二元分析和开发本发明方法的过程中所进行的研究，已将第三条线、新近线的结果与通过HIV-1LAg-Avidity EIA测量的抗体亲和力相关联，通过扩展(因为LAg-Avidity EIA归一化的ODn值已与各种MDRI值相关联)至HIV-1感染的持续时间。人们仍然可以维持二元分析来测量与固定MDRI相对应的临界值，在这种情况下，捕获的较高亲和力抗体倾向于(如果存在足够的量)形成一条可见线，而较低的亲和力抗体往往不被捕获，从而降低了可见线的可能性。进一步地，通过调节固相上条带化的抗原的量，可以调节所捕获抗体的亲和力的临界值或阈值，使得通常更高或更低的抗体平均亲和力被捕获并形成对应较高或较低的固定MDRI的可见线。在本研究中，我们建立了HIV-1感染病例中抗体亲和力和MDRI之间的关系。我们相信这也适用于引起体液(抗体)反应的其他疾病。

Granade等人的分析方法(1)用于确定临界值，以区分近期感染与长期感染(临界值或MDRI估计值可能为4-6个月)。Granade等人的分析方法(1)不是使用新近线并通过对新近线进行定量测量以建立可变感染持续时间测量能力的定量测量。Granade等人的分析方法(1)没有使用读取器，因为许多商业读取器要么灵敏度不够(正如我们发现的那样)，要么没有足够的线性范围，无法获得能够与任何事物相关的新近线反应的准确定量。在一些实施例中，我们展示了该线的仪器解读与抗体的亲和力反应之间可能存在定量相关性(图3)。当将示例的读取器(Detekt RDS-1500Pro)上新近线的定量测量值转换为相应的对数值，并将这些值与使用LAg-Avidity EIA获得的相同样品的亲和力(Avidity)值进行比较时，获得了具有高回归系数(R>0.8)的二阶多项式回归。那些亲和力值，如LAg-Avidity EIA所测量的，也与已知的MDRI值相对应，使分析中的新近线结果能够定量转换为相应的感染持续时间。

读取器

在一些实施例中，在我们的研究中使用的读取器是Detekt RDS-1500(DetektBiomedical LLC，Austin TX，www.idetekt.com)。该读取器使用带有630nm LED灯光源的线性CCD传感器和具有16MB SDRAM和4MB闪存的33MHz Motorola DragonBall-VZ微处理器。读取器包含一个FSTN(TDF)4位灰度LCD显示屏(160x 160显示屏)。附加信息包含在读取器操作上，其基于Model IDV-BCS1 ID::VERIFI条形码扫描仪(Aceeca，新西兰基督城，www.aceeca.com)。读取器的软件设计用于识别插入到读取器中图像传感器所在位置的检测条上的条状反应线的位置，并仅读取提供像素化强度测量的那些区域(最小分辨率0.127mm)。制造商提供的输出必须转换为其log₁₀值，以创建与LAg-Avidity EIA值的二阶多项式相关性(图3)。

示范性实用性

用于区分近期感染和长期感染的分析方法，最初是为流行病学家开发的，他们试图开发一种方法来识别人群中的“新感染”，以便他们估计HIV感染的发病率。发病率是一定时期内新发病例的比率。由于艾滋病永远无法治愈，而且简单的诊断检测无法分辨出哪些患者是新患者还是长期患者，因此，确定发病率的最准确方法是在一段时间内对有感染风险的阴性受试者进行纵向队列监测，并确定有多少人呈阳性。这可能是极其昂贵和费时的，尤其是在低患病率的环境中，并在人口选择、受试者参与和跟进以及其他考虑因素方面有其固有的偏见。通过开发“新近度”检测方法来鉴定近期感染与长期感染，人们可以在实验室中通过检测一组受试者来确定发病率的估计值。这些实验室分析的快速检测形式具有更多优势：使用更简单(并且不需要熟练的技术人员执行)，不需要复杂、昂贵的实验室基础设施，可以被带到接触点，可以在环境条件下存储(无需冷链存储)等。然而LFICA检测通常无法定量测量，因此在新近度分析的情况下，用户只有MDRI的一种选择可用来估计发生率，由该分析的制造商确定。当分析使用太短的MDRI而必须对大量样本进行检测以得到统计上有效的“新近”感染数以准确估算发病率时，或者当MDRI太长以至于增加错误的近期感染的可能性时，尤其是在患病率较高的人群中，这可能是有问题的。利用本文描述的定量新近度分析，可以为给定的研究选择最适合研究者目的的临界值。

本文描述的定量新近度分析具有其他应用，其可能需要不同的临界值，因此与分析制造商预定的单个的固定临界值不同，需要不同的MDRI。近年来，越来越多的人呼吁更加积极地确定最近感染的个体并对其进行早期和果断的治疗，因为越来越多的证据表明，对早期HIV感染的积极干预对于控制这一流行病至关重要(6-8)。最近感染的人通常是具有较高病毒载量的最具传染性的个体(9)，结果发现，通常占所有HIV-1传播的40-50％，在某些报告中，高达90％(10-12)。实际上，识别和分类最近感染艾滋病毒的个体的能力已被称为“临床和公共卫生突发事件”(12)。对新感染的积极干预不仅降低了现阶段的高传播风险，而且增加了防止病毒库建立的机会，在这些病毒库中抗病毒药物的有效性可能会下降。阻止这种病毒库的建立可能最终在“治愈”的最终发展中很重要，例如终止抗病毒治疗后的持续病毒缓解(13)。适用于确定高传染性早期感染或确定临床患者进行靶向治疗的临界值可能并非在所有情况下都相同或与HIV-1发病率估计的最佳值相同。具有能够测量可变MDRI的分析方法为此类分析提供了更大的灵活性，并具有更广泛的实用性。一些出版物报道了这种功能性疗法的可能用途，记载了对这种疗法的需求，如想要获得效果，最好在最近感染的人中使用(13-17)，尽管在没有详尽的实验室检测的情况下，没有简便的方法来确定一个人被感染的新近程度。可适用于HIV感染者初次接触时的快速简单检测，如本发明所述的这种检测，可用于结合HIV的新功能疗法的开发和治疗来确定合适的候选药物。

本发明的一些实施例侧重于鉴定HIV-1的近期感染与长期感染。然而，本文描述的定量新近度分析也可以用于许多其他类型的感染，尤其是那些可能无法快速或容易“治愈”的感染，并且对于这些感染来说区分早期感染与晚期感染很重要，例如丙型肝炎、乙型肝炎、登革热等。E.实施例

实施例1.与HIV-1抗体亲和力相关的Asanté^TM HIV-1 Rapid Recency^TM分析响应和估 计的近期感染平均持续时间

图3示出了与HIV-1抗体亲和力相关的Asanté^TM HIV-1 Rapid Recency^TM分析响应示例和估计的近期感染平均持续时间。通过合适的测量“新近”线的积分像素密度单位(IPDU)的读取器测量本发明的装置条上的新近线反应，并将这些测量值的对数值(y轴)与HIV-1抗体限制性抗原亲和力EIA确定的样品的相对抗体亲和力测量值(标准化OD值或“ODn”)(下x轴)相关联，或与先前根据抗体亲和力确定的已知感染持续时间(上x轴)相关联(3,5)。

F.参考文献列表

下面列出了某些引用的参考文献。

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18.US 2017/0307613 A1

Claims (128)

1.一种用于评估受试者中病毒(例如HIV)感染持续时间的系统，所述系统包括：

a)侧向层析检测装置，其包括多孔基质，所述多孔基质从上游到下游包括：

样品施加位点，其被配置用于接收来自受试者的样品液，以及

第一检测位置，其包含固定化的第一结合试剂，所述第一结合试剂特异性结合所述样品液中具有第一平均抗体亲和力的抗病毒抗体，例如抗HIV抗体；

其中，相对于所述样品液中的所述抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，所述第一结合试剂是限制性的，并且所述抗病毒抗体是过量的，所述样品液沿着所述侧向层析检测装置侧向流动并通过所述第一检测位置以形成包括多个信号像素的第一可检测信号；和

b)读取器，其被配置用于测量所述第一可检测信号中的所述信号像素的数量和所述信号像素的强度以生成第一定量信号读数，所述第一定量信号读数用于评估所述样品液中所述抗病毒抗体(例如抗-HIV抗体)的平均抗体亲和力，和/或所述受试者中病毒(例如HIV)的感染持续时间。

2.根据权利要求1所述的系统，其中所述多孔基质还包括位于所述第一检测位置下游的第二检测位置；所述第二检测位置包括固定化的第二结合试剂，所述第二结合试剂特异性结合所述样品液中具有第二平均抗体亲和力的抗病毒抗体，例如抗HIV抗体；

其中相对于所述样品液中的所述抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，所述第二结合试剂过量并且所述抗病毒抗体(例如抗HIV抗体)是限制性的，所述第一平均抗体亲和力高于所述第二平均抗体亲和力，所述样品液沿着所述侧向层析检测装置侧向流动并通过所述第一检测位置以形成第一可检测信号，并通过所述第二检测位置以形成第二可检测信号；所述第一可检测信号和所述第二可检测信号中的每一个包括多个信号像素。

3.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述侧向层析检测装置包括单个多孔基质，所述单个多孔基质从上游到下游包括所述样品施加位点、所述第一检测位置和所述第二检测位置，或所述侧向层析检测装置包括多个多孔基质，所述多个多孔基质从上游到下游包括所述样品施加位点、所述第一检测位置和所述第二检测位置。

4.根据权利要求3所述的系统，其中所述侧向层析检测装置包括两个多孔基质，上游的多孔基质包括所述样品施加位点，下游的多孔基质包括所述第一检测位置和所述第二检测位置。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂共价地固定在所述第一检测位置。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂非共价地固定在所述第一检测位置。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂通过载体固定在所述第一检测位置。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-1抗体。

9.根据权利要求8所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-1M组、N组、O组、P组的抗体。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-1包膜或核心蛋白的抗体。

11.根据权利要求10所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-1包膜糖蛋白120(gp120)、包膜糖蛋白41(gp41)或病毒核心蛋白24(p24)的抗体。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂包括特异性结合抗HIV-1抗体的多肽。

13.根据权利要求12所述的系统，其中所述特异性结合抗HIV-1抗体的多肽是重组多肽。

14.根据权利要求12或13所述的系统，其中所述多肽包含HIV-1包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。

15.根据权利要求14所述的系统，其中所述多肽包含HIV-1gp120，gp41或p24的免疫优势区(IDR)。

16.根据权利要求1-7中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2抗体。

17.根据权利要求16所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2A，B，C，D，E，F，G或H组的抗体。

18.根据权利要求16或17所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2包膜或核心蛋白的抗体。

19.根据权利要求18所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV-2包膜糖蛋白105(gp105)、包膜糖蛋白125(gp125)、包膜糖蛋白36(gp36)或核心蛋白26(p26)的抗体。

20.根据权利要求16-19中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂包括特异性结合抗HIV-2抗体的多肽。

21.根据权利要求20所述的系统，其中所述特异性结合抗HIV-2抗体的多肽是重组多肽。

22.根据权利要求20或21所述的系统，其中所述多肽包含HIV-2包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。

23.根据权利要求22所述的系统，其中所述多肽包含HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的免疫优势区(IDR)。

24.根据权利要求1-23中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂共价地固定在所述第二检测位置。

25.根据权利要求1-23中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂非共价地固定在所述第二检测位置。

26.根据权利要求1-23中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂通过载体固定在所述第二检测位置。

27.根据权利要求1-26中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1抗体。

28.根据权利要求27所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1M组、N组、O组、P组的抗体。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1包膜或核心蛋白的抗体。

30.根据权利要求29所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-1包膜糖蛋白120(gp120)、包膜糖蛋白41(gp41)或核心蛋白24(p24)的抗体。

31.根据权利要求1-30中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂包括特异性结合抗HIV-1抗体的多肽。

32.根据权利要求31所述的系统，其中所述特异性结合抗HIV-1抗体的多肽是重组多肽。

33.根据权利要求31或32所述的系统，其中所述多肽包含HIV-1包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。

34.根据权利要求33所述的系统，其中所述多肽包含HIV-1gp120，gp41或p24的免疫优势区(IDR)。

35.根据权利要求1-26中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2抗体。

36.根据权利要求35所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2A，B，C，D，E，F，G或H组的抗体。

37.根据权利要求35或36所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2包膜核心蛋白的抗体。

38.根据权利要求37所述的系统，其中所述第二结合试剂特异性结合抗HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的抗体。

39.根据权利要求35-38中任一项所述的系统，其中所述第二结合试剂包含特异性结合抗HIV-2抗体的多肽。

40.根据权利要求39所述的系统，其中所述特异性结合抗HIV-2抗体的多肽是重组多肽。

41.根据权利要求39或40所述的系统，其中所述多肽包含HIV-2包膜或核心蛋白的免疫优势区(IDR)。

42.根据权利要求41所述的系统，其中所述多肽包含HIV-2gp105，gp125，gp36或p26的免疫优势区(IDR)。

43.根据权利要求1-42中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂和所述第二结合试剂均特异性结合抗相同类型HIV的抗体。

44.根据权利要求43所述的系统，其中所述第一结合试剂和所述第二结合试剂均特异性结合抗HIV-1的抗体。

45.根据权利要求1-43中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂和所述第二结合试剂均包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体的相同表位。

46.根据权利要求1-43中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂和所述第二结合试剂包含特异性结合抗相同类型HIV的抗体的不同表位。

47.根据权利要求45或46所述的系统，其中所述HIV是HIV-1。

48.根据权利要求1-47中任一项所述的系统，其中所述第一检测位置包括约1ng/mm至约100ng/mm的固定化的第一结合试剂。

49.根据权利要求1-48中任一项所述的系统，其中所述第二检测位置包括约50ng/mm至250ng/mm的固定化的第二结合试剂。

50.根据权利要求1-49中任一项所述的系统，其中所述第一检测位置的所述固定化的第一结合试剂的量与所述第二检测位置的所述第二结合试剂的量不同。

51.根据权利要求1-50中任一项所述的系统，其中所述第一检测位置的所述固定化的第一结合试剂的量低于所述第二检测位置的所述第二结合试剂的量。

52.根据权利要求51所述的系统，其中所述第二检测位置的所述固定化的第二结合试剂的量与所述第一检测位置的所述第一结合试剂的量之间的比率为约2.5:1至约50:1。

53.根据权利要求1-52中任一项所述的系统，其中从所述样品施加垫的底部到所述第一检测位置的距离为约37mm至约39mm。

54.根据权利要求1-53中任一项所述的系统，其中从所述样品施加垫的底部到所述第二检测位置的距离为约43mm至约45mm。

55.根据权利要求1-54中任一项所述的系统，其中从所述样品施加垫的底部到所述第一检测位置的距离与从所述样品施加垫的底部到所述第二检测位置的距离之间的比率为约0.8至约0.9。

56.根据权利要求1-55中任一项所述的系统，其中所述第一结合试剂特异性结合抗HIV抗体，所述抗HIV抗体具有通过Duong et at.,PLoS ONE,7(3):e33328(2012)记载的HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量的约0.25归一化OD单位(ODn)至约6.0ODn的第一平均抗体亲和力。

57.根据权利要求1-56中任一项所述的系统，其中所述多孔基质为条形或圆形。

58.根据权利要求1-57中任一项所述的系统，其中所述侧向层析检测装置还包括位于所述多孔基质的上游并且与所述多孔基质流体连通的样品施加元件。

59.根据权利要求1-58中任一项所述的系统，其中所述侧向层析检测装置还包括位于所述多孔基质的下游并且与所述多孔基质流体连通的液体吸收元件。

60.根据权利要求1-59中任一项所述的系统，其中所述侧向层析检测装置还包括对照位置。

61.根据权利要求60所述的系统，其中所述对照位置包括与样品液中的抗体结合的固定化的第三结合试剂。

62.根据权利要求1-61中任一项所述的系统，其中所述基质的至少一部分由固体背衬支撑。

63.根据权利要求1-62中任一项所述的系统，其中所述第一检测位置上游的一部分基质包含干燥的标记试剂，所述标记试剂能够被液体样品和/或另外的液体移动到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置，以产生可检测的信号。

64.根据权利要求63所述的系统，其中所述干燥的标记试剂位于所述侧向层析检测装置上样品施加位置的下游。

65.根据权利要求63所述的系统，其中所述干燥的标记试剂位于所述侧向层析检测装置上样品施加位置的上游。

66.根据权利要求1-65中任一项所述的系统，其中所述侧向层析检测装置还包括位于所述第一检测位置上游的结合元件，所述结合元件包含干燥的标记试剂，所述标记试剂能够被液体样品和/或另外的液体移动到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置，以产生可检测的信号。

67.根据权利要求66所述的系统，其中所述结合元件位于所述侧向层析检测装置上样品施加位置的下游。

68.根据权利要求66所述的系统，其中所述结合元件位于所述侧向层析检测装置上样本施加位置的上游。

69.根据权利要求63-68中任一项所述的系统，其中所述标记试剂结合并且优选特异性结合样品中的抗病毒抗体，例如抗HIV抗体。

70.根据权利要求63-69中任一项所述的系统，其中所述标记是可溶性标记，例如荧光标记。

71.根据权利要求63-69中任一项所述的系统，其中所述标记是颗粒标记，例如，金或乳胶颗粒标记。

72.根据权利要求63-71中任一项所述的系统，其中所述标记试剂在以下材料的存在下被干燥：a)稳定所述标记试剂；b)促进标记试剂在液体中溶解或重悬；和/或c)促进标记试剂迁移的材料。

73.根据权利要求72所述的系统，其中所述材料选自由蛋白质，例如酪蛋白或BSA，肽，多糖，糖，聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)，明胶和去污剂，例如Tween-20，组成的组。

74.根据权利要求1-73中任一项所述的系统，其中所述侧向层析检测装置还包括覆盖至少一部分所述侧向层析检测装置的壳体，其中所述壳体包括样本施加口，以允许在所述第一检测位置的上游或向所述第一检测位置施加样品，以及围绕第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置的光学开口，以允许在第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置进行信号检测。

75.根据权利要求74所述的系统，其中所述壳体覆盖整个侧向层析检测装置。

76.根据权利要求74所述的系统，其中所述多孔基质或所述样品施加元件的样品接收部分的至少一部分未被所述壳体覆盖，并且样品被施加到所述多孔基质或所述样品施加元件位于壳体外的那部分，然后被输送到第一检测位置、第二检测位置和/或对照位置。

77.根据权利要求74-76中任一项所述的系统，其中所述壳体包括塑料材料。

78.根据权利要求1-77中任一项所述的系统，其中所述读取器包括图像传感器。

79.根据权利要求78所述的系统，其中所述图像传感器是有源像素传感器。

80.根据权利要求79所述的系统，其中所述有源像素传感器是互补金属氧化物半导体(CMOS)有源像素传感器。

81.根据权利要求1-80中任一项所述的系统，其中所述读取器包括像素传感器阵列。

82.根据权利要求1-81中任一项所述的系统，其中所述读取器具有1/13英寸至4/3英寸的光学格式。

83.根据权利要求1-82中任一项所述的系统，其中所述读取器具有约1.1微米至约8微米的像素大小。

84.根据权利要求1-83中任一项所述的系统，其中所述读取器具有约1兆像素至约5兆像素的阵列尺寸。

85.根据权利要求1-84中任一项所述的系统，其中所述读取器具有约1秒至约30秒的读取时间。

86.根据权利要求1-85中任一项所述的系统，其中所述第一定量信号读数使用积分像素密度单元(IPDU)。

87.根据权利要求1-86中任一项所述的系统，其中所述读取器被配置为生成具有约1IPDU至约10,000,000IPDU的线性范围的第一定量信号读数。

88.根据权利要求1-87中任一项所述的系统，其中所述第二定量信号读数使用积分像素密度单元(IPDU)。

89.根据权利要求1-88中任一项所述的系统，其中所述读取器被配置为生成具有约1IPDU至约10,000,000IPDU的线性范围的第二定量信号读数。

90.根据权利要求1-89中任一项所述的系统，其进一步包括液体容器。

91.根据权利要求1-90中任一项所述的系统，其进一步包括机器可读信息，例如条形码。

92.根据权利要求91所述的系统，其中所述条形码包括所述检测装置的批次特定信息，例如，所述检测装置的批号。

93.根据权利要求91所述的系统，其中所述机器可读信息包含在存储介质中，例如，RFID设备。

94.根据权利要求93所述的系统，其中所述RFID设备包含批次特定信息，关于液体控制的信息或用于质量控制目的的信息。

95.根据权利要求1-94中任一项所述的系统，其被配置用于评估约10天至约450天的HIV感染持续时间。

96.用于评估受试者中病毒(例如，HIV)感染持续时间的方法，该方法包括：

a)将来自受试者的样品与权利要求1-95任一所述的系统接触，其中将所述液体样品施加至所述侧向层析检测装置上位于所述第一检测位置上游的位置；

b)将抗病毒抗体，例如抗HIV抗体，如果存在于所述液体样品中的话，和标记试剂输送到所述第一检测位置，以在所述第一检测位置形成第一可检测信号，所述第一可检测信号包括多个信号像素；和

c)使用所述读取器测量所述第一可检测信号中的所述信号像素的数量和所述信号像素的强度，以产生第一定量信号；和

d)基于所述第一定量信号，评估所述样品液中所述抗病毒抗体(例如抗HIV抗体)的平均抗体亲和力，和/或所述受试者中病毒(例如HIV)的感染持续时间。

97.根据权利要求96所述的方法，其中将所述液体样品和所述标记试剂预混合以形成混合物，并将所述混合物施加至所述侧向层析检测装置。

98.根据权利要求97所述的方法，其进一步包括在将所述混合物施加至所述侧向流动测试装置之后的洗涤步骤。

99.根据权利要求98所述的方法，其中所述洗涤步骤包括在将所述混合物施加至所述侧向层析检测装置之后添加洗涤液。

100.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述侧向层析检测装置包括包含洗涤液的液体容器，并且所述洗涤步骤包括从所述液体容器释放所述洗涤液。

101.根据权利要求96所述的方法，其中所述侧向层析检测装置在使用之前包含干燥的标记试剂，并且所述干燥的标记试剂被所述液体样品溶解或重悬，并输送至所述第一检测位置。

102.根据权利要求101所述的方法，其中所述干燥的标记试剂位于所述样品施加位点的下游，并且所述干燥的标记试剂被所述液体样品溶解或重悬，并输送至所述第一检测位置。

103.根据权利要求101所述的方法，其中所述干燥的标记试剂位于所述样品施加位点的上游，并且所述干燥的标记试剂被另一种液体溶解或重悬，并输送至所述第一检测位置。

104.根据权利要求101所述的方法，其中所述标记试剂仅通过所述液体样品溶解或重悬，并输送至所述第一检测位置。

105.根据权利要求101所述的方法，其中所述抗HIV抗体和/或标记试剂被另一种液体溶解或重悬，并输送至所述第一检测位置。

106.根据权利要求96-105中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

107.根据权利要求106所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

108.根据权利要求106所述的方法，其中所述哺乳动物是非人类哺乳动物。

109.根据权利要求96-105中任一项所述的方法，其中所述受试者是禽类，例如鸡。

110.根据权利要求96-105中任一项所述的方法，其中所述受试者是爬行动物。

111.根据权利要求96-105中任一项所述的方法，其中所述受试者是鱼。

112.根据权利要求96-111中任一项所述的方法，其中所述样品是来自受试者的体液。

113.根据权利要求112所述的方法，其中所述体液是来自受试者的血液、血浆、血清、唾液或尿液样品。

114.根据权利要求96-113中任一项所述的方法，其中所述抗HIV抗体是抗HIV-1的抗体。

115.根据权利要求100-114中任一项所述的方法，其中所述抗HIV抗体具有通过Duonget at.,PLoS ONE,7(3):e33328(2012)中记载的HIV-1限制性抗原亲和力EIA测量的约0.25归一化OD单位(ODn)至约6.0ODn的平均抗体亲和力。

116.根据权利要求96-115中任一项所述的方法，其中所述第一定量信号读数使用积分像素密度单元(IPDU)。

117.根据权利要求96-116中任一项所述的方法，其中所述读取器被配置为生成具有约1IPDU至约10,000,000IPDU的线性范围的第一定量信号读数。

118.根据权利要求96-117中任一项所述的方法，其中所述第二定量信号读数使用积分像素密度单元(IPDU)。

119.根据权利要求96-118中任一项所述的方法，其中所述读取器被配置为生成具有约1IPDU至约10,000,000IPDU的线性范围的第二定量信号读数。

120.根据权利要求96-119中任一项所述的方法，其中通过将所述第一定量信号与HIV感染持续时间与参考定量信号之间的预定相关性进行比较来评估所述受试者中的HIV感染持续时间。

121.根据权利要求96-119中任一项所述的方法，其中通过将所述第一定量信号与参考平均抗体亲和力进行比较来评估所述受试者中的HIV感染持续时间，在HIV感染持续时间和所述参考平均抗体亲和力之间具有预定相关性。

122.根据权利要求96-121中任一项所述的方法，其用于评估HIV感染持续时间，从血清转阳起开始测量的约10天至约450天的近期感染平均持续时间(MDRI)。

123.根据权利要求96-122中任一项所述的方法，其用于根据预定的MDRI临界值评估人群中HIV感染的发生率。

124.根据权利要求123所述的方法，其用于根据多个预定的MDRI临界值来评估人群中HIV感染的发生率。

125.根据权利要求96-124中任一项所述的方法，其用于确定在过去约10天至约450天中已感染HIV的受试者。

126.根据权利要求96-125中任一项所述的方法，其中所述受试者中的HIV感染持续时间的评估具有相对于给定的MDRI小于10％的假新近率(FRR)。

127.根据权利要求96-126中任一项所述的方法，其进一步包括治疗在过去约10天至约450天中已感染HIV的受试者。

128.根据权利要求96-127中任一项所述的方法，其用于评估(例如确定和/或确认)受试者中病毒感染(例如HIV感染)及其新近度。

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