CN111742887A - 放疗后分泌性中耳炎树鼩模型的建立方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种放疗后分泌性中耳炎树鼩模型的建立方法，方法通过（1）动物饲养、（2）动物麻醉、（3）对麻醉后动物的耳侧进行放射处理、（4）放射后观察饲养四个步骤完成。本发明构建了一种放疗后树鼩分泌性中耳炎动物模型，此放疗后动物模型方法具有造模时间短、成功率高、死亡率低的优势，对鼻咽癌放射治疗后并发的分泌性中耳炎提供了一种新的治疗策略，同时，也为确保其将来在临床应用的安全性提供充分的理论依据。

Description

放疗后分泌性中耳炎树鼩模型的建立方法

技术领域：

本发明属于生物医学技术领域，具体是一种树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型的构建方法，它涉及一种树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型的高效建立方法及相关放射损伤鉴定。

背景技术

分泌性中耳炎(SOM)是耳鼻咽喉科常见疾病,以鼓室积液和传导性聋为主要特征,属于中耳非化脓性炎。近年来大量的临床研究显示,SOM的形成是咽鼓管功能障碍、乳突气化不良、感染、变态反应、细胞因子等多种因素相互作用的结果,与鼻咽癌及放疗有关的SOM的发病机制更为复杂,预后欠佳，[谢华,孙文忠.分泌性中耳炎的形成机制与鼻咽癌放疗的相关性及治疗进展[J].医学综述,2013,19(09):1610-1612.],然而，目前基础研究中仍缺乏与鼻咽癌放疗有关的SOM动物模型建立方法。因此，放疗后动物模型建立对于临床上鼻咽癌放疗后并发分泌性中耳炎治疗进展具有重要意义。现有的分泌性中耳炎动物模型分为两类。一种是咽鼓管结扎或烧灼，采用经颈或经口，咽鼓管功能障碍是导致分泌性中耳炎的重要解剖学原因之一。然而，咽鼓管的结扎或烧灼使咽鼓管周围严重的热损伤可引起严重出血或口咽不良，有些动物无法承受这种压力。另一方法是通过鼓膜注射化学物质，可以用骨髓针。[Park MK,Lee BD. Development of animal models of otitis media.Korean JAudiol. 2013Apr；17(1):9-12.]。目前已有实验对分泌性中耳炎进行动物造模，通过鼓膜观察、鼓室导抗图、颞骨Micro-CT及中耳病理检查, 证实电凝法堵塞咽鼓管咽口能有效诱发树鼩分泌性中耳炎[比贝克 (Bibek Gyanwali).树鼩分泌性中耳炎动物模型的研究[D].广西医科大学,2015.]。

目前癌症治疗方案主要包括化疗、放疗和手术，在一些病例中，治疗相关的副作用超过了治疗的好处并使患者的病情恶化，目前的癌症治疗程序无法避免这个问题[Hendijani F.Human mesenchymal stromal cell therapy for prevention andrecovery of chemo/radiotherapy adverse reactions.Cytotherapy. 2015；17(5):509-25]。放疗与所有癌症治疗方案一样，一些患者在放射治疗后会有不良反应，这种不良反应可能持续数年甚至是永久性的，并可能对生活质量产生负面影响。对于一个给定的肿瘤位置，周围的多个组织都可能受到放疗的影响，在某些情况下，在与肿瘤相邻的正常组织或器官内以及辐射场内可能存在多种类型的终末点。[Di R,Li G.Use of a SmartphoneMedical App Improves Complications and Quality of Life in Patients withNasopharyngeal Carcinoma Who Underwent Radiotherapy and Chemotherapy.Med SciMonit. 2018；24:6151–6156.]。例如，鼻咽癌(NPC)是发生在鼻咽粘膜上皮的恶性肿瘤，多发于我国两广地区。放射治疗是鼻咽癌的主要治疗方法之一，放射治疗的迅速发展对提高鼻咽癌的控制概率起到了重要作用。[Men K,Chen X,Zhang Y,et al.DeepDeconvolutional Neural Network for Target Segmentation of NasopharyngealCancer in Planning Computed Tomography Images.Front Oncol. 2017；7:315]。分泌性中耳炎是临床上鼻咽癌放疗的常见不良反应，还有其他不良反应如皮肤反应、口腔黏膜反应以及全身反应等，一定程度上损害了鼻咽癌患者的机体。鼻咽癌放疗后的并发症和不良反应是不容忽视的，因此，在临床研究中提供一种放疗后分泌性中耳炎动物模型的建立方法是必需的。

现有研究能够成功建立放疗后小鼠建立卵巢早衰模型,为临床卵巢早衰患者的基础研究提供了稳定可靠的动物模型。放疗后动物模型的构建方法具有造模时间短、成功率高、死亡率低的优势[贺宇恒, 谭容容,浦丹华,吴洁.放疗致卵巢早衰小鼠动物模型的构建[J].生殖医学杂志,2017,26(12):1243-1249.]。因此，需要一个稳定高效的放疗后动物模型建立方法，用单一的病因在短时间内复制出典型的动物疾病模型以满足临床研究的需求。

本发明以麻醉后树鼩的耳侧进行放射处理为动物放疗后分泌性中耳炎模型，建立了自己的一整套实验技术平台及方法，优化了放疗后动物模型的建立方法，并对其进行放射性损伤鉴定，通过在树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型建立的过程中简化其实验条件、提高与人类疾病相似性及发病率、缩短其发病时间，取得了可喜的研究成果，为树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型应用于肿瘤学、生物医学研究及在临床上处理鼻咽癌放疗后不良反应和并发症提供可靠的理论依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型的构建方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种树鼩放疗后分泌性中耳炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：

(1)动物饲养

普通清洁级成年树鼩均放置于实验用的笼具中(长、宽、高为 40cm、30cm、35cm)单笼饲养，笼具配有食盒及饮水瓶。每笼旁设置一与笼具相同的暗盒供树鼩睡眠(长、宽、高为15cm、12cm、12cm)。饲养温度24±1℃，相对湿度40-60％，光暗周期12h:12h，噪音≤60dB。

(2)动物麻醉

实验树鼩用1％戊巴比妥钠，30mg/kg，腹腔注射进行麻醉。

(3)对麻醉后动物的耳侧进行放射处理

麻醉后的树鼩取侧卧位，被照射耳侧朝上的体位；树鼩放射体表范围：上界为外耳道口上壁，下界为下颌角，后界为耳后沟，前界为颞下颌关节；放射野2cm*2.5cm，源皮距10cm，单次照射总剂量16Gy，深度1.9cm，跳数2376(放射设备为直线加速器，美国VARIAN9.01 CLINAC ix-SN4948)；放射完成后立即将树鼩放归饲养笼中继续饲养。

(4)放射后观察饲养

放射后树鼩行颞骨CT检查，放射侧听泡内出现低密度影，未经放射侧无影像学改变；放射后树鼩检查鼓膜，经放射侧鼓膜内陷，色泽改变为橘黄色或琥珀色，可见气液平面或气泡；未经放射侧无上述改变，色泽灰白色呈半透明状；放射后树鼩检查听泡，放射侧听泡内可见浆液性稀薄液体或黄色胶冻状液体，未经放射侧听泡内无上述改变。

本发明的有益效果

本发明构建了一种放疗后树鼩分泌性中耳炎动物模型，此放疗后动物模型方法具有造模时间短、成功率高、死亡率低的优势，对鼻咽癌放射治疗后并发的分泌性中耳炎提供了一种新的治疗策略，同时，也为确保其将来在临床应用的安全性提供充分的理论依据。

附图说明

图1为树鼩麻醉后放射过程中处于侧卧位的示意图。

图2为树鼩照射前与照射后发生了分泌性中耳炎的CT检查结果。该树鼩的被照射耳为左耳，其中A为照射前，B为照射后，可见在照射前树鼩左侧中耳腔内无密度影，照射后左侧中耳腔内存在均等密度影，而右侧中耳腔在照射前后均未发现密度影。

图3显示了未经放射和经放射后树鼩鼓膜改变情况。其中A为未经放射鼓膜；B为经放射后发生了分泌性中耳炎的鼓膜，可见鼓膜浑浊有积液

图4为移除鼓膜后可见听泡内呈淡黄色胶冻状积液(红色箭头所指处)。

Claims (6)

1.一种放疗后分泌性中耳炎树鼩模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）动物饲养

普通清洁级成年树鼩均放置于实验用的笼具中（长、宽、高为40cm、30cm、35cm）单笼饲养，笼具配有食盒及饮水瓶。

2.每笼旁设置一与笼具相同的暗盒供树鼩睡眠（长、宽、高为15cm、12cm、12cm）。

3.饲养温度24±1℃，相对湿度40-60%，光暗周期12h:12h，噪音≤60dB。

4.（2）动物麻醉

实验树鼩用1%戊巴比妥钠，30mg/kg，腹腔注射进行麻醉。

5.（3）对麻醉后动物的耳侧进行放射处理

麻醉后的树鼩取侧卧位，被照射耳侧朝上的体位；树鼩放射体表范围：上界为外耳道口上壁，下界为下颌角，后界为耳后沟，前界为颞下颌关节；放射野2cm*2.5cm，源皮距10cm，单次照射总剂量16Gy，深度1.9cm，跳数2376（放射设备为直线加速器，美国VARIAN9.01CLINAC ix-SN4948）；放射完成后立即将树鼩放归饲养笼中继续观察饲养。

6.（4）放射后观察饲养

放射后树鼩行颞骨CT检查，放射侧听泡内出现低密度影，未经放射侧无影像学改变；放射后树鼩检查鼓膜，经放射侧鼓膜内陷，色泽改变为橘黄色或琥珀色，可见气液平面或气泡；未经放射侧无上述改变，色泽灰白色呈半透明状；放射后树鼩检查听泡，放射侧听泡内可见浆液性稀薄液体或黄色胶冻状液体，未经放射侧听泡内无上述改变。

Images