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CN111712240A - 用于治疗非酒精性脂肪性肝炎的脂肪酸衍生物 - Google Patents

用于治疗非酒精性脂肪性肝炎的脂肪酸衍生物 Download PDF

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CN111712240A
CN111712240A CN201880079329.8A CN201880079329A CN111712240A CN 111712240 A CN111712240 A CN 111712240A CN 201880079329 A CN201880079329 A CN 201880079329A CN 111712240 A CN111712240 A CN 111712240A
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D.A.弗拉泽
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Abstract

本公开提供用于治疗性和/或预防性处置非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或酒精性脂肪性肝炎(ASH)的化合物。根据本发明的用途的化合物是具有加入到β‑位上的氧且进一步包含α‑取代基的不饱和脂肪酸。更具体地，本发明提供用于治疗NASH和/或ASH的化合物及其使用方法，其中所述化合物具有式(II)，其中R1、R2、R3、X和Y如说明书中所定义；且其中该化合物可单独施用或与其他活性剂组合施用。

Description

用于治疗非酒精性脂肪性肝炎的脂肪酸衍生物
本申请要求于2017年12月6日提交的挪威专利申请第20171944号；于2017年12月6日提交的挪威专利申请第20171945号；和于2018年10月9日提交的美国临时专利申请第62/734,013号的优先权权益。所有上述申请以其整体在此引入作为参考。
技术领域
本公开涉及在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性脂肪性肝炎(ASH)和其它特征为纤维化和/或肝脏炎症的肝疾病的方法。而且，本公开涉及化合物和包含该化合物的组合物，该化合物和组合物用于在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性脂肪性肝炎(ASH)和其它特征为纤维化和/或肝脏炎症的肝疾病。用于根据本发明的用途的化合物为不饱和脂肪酸，该不饱和脂肪酸具有加入到β-位上的氧且进一步包含α-取代基。
背景技术
长链ω-3脂肪酸，例如(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸(EPA)和(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸(DHA)具有广泛的生物学作用，影响血浆脂质水平、心血管和免疫功能、胰岛素作用、神经元发育和视觉功能。大剂量EPA/DHA目前作为处方药用于治疗严重的高甘油三酯血症(HTG)。这些作用至少部分地通过对肝脏中脂肪酸代谢的作用来介导。
在现有技术中已经建议使用ω-3化合物如EPA和DHA来治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。举例来说，Mochida的WO 2014/057522涉及用于治疗或减轻NASH症状的包含二十碳五烯酸乙酯的组合物。
Dignity Science LTD(WO2014/118097)已建议使用修饰的ω-3化合物如15-羟基二十碳五烯酸(15-OHEPA)治疗脂肪肝疾病，例如非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)和NASH。Krisani Biosciences(WO2014/045293)也建议使用修饰的ω-3化合物治疗包括NASH在内的各种疾病。最近，Pronova Biopharma AS(WO2016173923A1)提出含硫的结构修饰脂肪酸用于治疗NASH的用途。
尽管NAFLD包括更宽范围的肝疾病[包括孤立的肝性脂肪变性(在组织学上肝细胞>5％)]的这一事实，但是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)通常可互换使用。当不伴有炎症性反应和细胞损伤时，肝硬化很可能是相对良性的疾病。然而，NAFLD病患的一个亚组除肝硬化外还有肝细胞损伤和炎症，一种称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的病况。NASH在组织学上与酒精性脂肪性肝炎(ASH)几乎无法区分。尽管在NAFLD中发现的简单脂肪变性与短期发病率或死亡率增加无关，但NASH显著增加了肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌(HCC)的风险。NASH引起的肝硬化是越来越频繁的肝移植原因。尽管在患有NASH的病患中由肝脏引起的发病率和死亡率大大增加，但其与心血管疾病的发病率和死亡率甚至更为相关。
诊断和分期NASH的统一标准仍然有争议(见后面部分的详述)。NASH的关键组织学成分是脂肪变性、肝细胞气球样变性(hepatocellular ballooning)和小叶炎症；纤维化不是NASH的组织学定义的一部分。然而，肝活检的纤维化的程度(阶段)对预后(prognosis)有预测性，而肝活检的炎症和坏死的程度(等级)则否。
对于各种组织学成分，已经显示使用ω-3脂肪酸的治疗有效降低了NAFLD病患的肝硬化(Scorletti E等，Effects of purified eicosapentaenoic anddocosahexanoicacids in non-alcohol alcohol liver disease：Results from the*WELCOME study，Hepatology.2014℃t；60(4)：1211-2nd)，如果在疾病早期确立治疗，可以理解的是这会延缓进展到后期更严重的疾病阶段。然而，ω-3脂肪酸是否足以有效治疗和/或逆转已经形成明显的组织学/炎症变化的NASH仍有疑问(Sanyal AJ等人；EPE-A StudyGroup，Gastroenterology.2014Aug；147(2)：377-84.e1)。
ω-3脂肪酸在NASH治疗中的温和疗效可能次于其对基于NASH发病机制基础的其他途径的温和作用。对NASH的人类和动物模型的研究令人信服地证明，与孤立的肝性脂肪变性相反，脂肪性肝炎和纤维化的发展涉及多个因素。这些包括胰岛素抵抗、氧化应激、炎症、肠源性内毒素和过量的肝脏胆固醇和胆汁酸。已经显示所有这些因素在遗传易感个体中起重要作用，因此正在开发靶向这些途径的药物以用于治疗NASH。
与NASH一样，酒精性肝病(ALD)可以分为代表从脂肪肝或单纯脂肪变性到酒精性肝炎(即ASH)，最后转变为伴有肝纤维化或肝硬化的慢性肝炎的多个组织学阶段。因此，尽管ASH和NASH的起源可能不同，但是对于各种慢性损伤的肝反应有很多相似之处，包括涉及巨噬细胞激活和细胞因子产生的促炎性和促纤维化级联反应以及所产生的激活的星形细胞，即增殖了肌成纤维细胞(参见，例如，Friedman,SL；Alcoholism：Clinical andExperimental Research.1999May；23(5)：904-910)。
开发靶向NASH和ASH的药物面临的挑战是缺乏单独代表人类这些疾病的临床前模型。啮齿动物模型可能更代表通常伴有NASH的代谢紊乱，例如血脂异常和胰岛素抵抗，其特征是非常轻微的肝脏炎症和纤维化。在谱的另一端是化学诱导的纤维化模型，例如四氯化碳(CCl4)或硫代乙酰胺诱导的纤维化，它们发展为更严重的纤维化，但在诸如胰岛素抵抗和肥胖症等代谢成分方面可能缺乏对人类的翻译能力。因此，需要多种临床前模型来解决致病谱(aetiopathogenic spectrum)(代谢紊乱-炎症反应-纤维化)的两端，以鉴定潜在的NASH和ASH药物。
在比较啮齿动物和人类肝纤维化时，另一个重要考虑的因素是诱导的肝纤维化的位置和功能相关性。例如，持续时间较短的严重肝纤维化模型可能只代表胶原蛋白密集的大型汇管区，而不是功能上更相关并且通常代表肝胶原主体的实质胶原沉积物。因此，在啮齿类动物模型中使用纤维化的生化(如羟脯氨酸)和组织学(如天狼星红形态学)评估的组合对于肝脏胶原沉积的数量、位置和功能相关性是最佳的。
确定靶向NASH和ASH的纤维化成分的药物是至关重要的，因为肝纤维化可进展为肝硬化，而肝硬化又与显著增加的发病率和死亡率有关。它也代表慢性肝病临床研究中的主要硬性终点。例如，新出现的数据表明，纤维化而非NASH本身，是肝脏和非肝脏相关死亡的最重要的组织学预测指标。此外，肝硬化是原发性肝癌的一个强有力的辅助因素。因此，正在开发的治疗NASH和ASH的新药必须有足够的疗效，以阻止已建立的肝纤维化的发展和/或逆转已建立的肝纤维化的进展。
Pronova Biopharma Norge AS的WO2016173923A1公开了含硫的结构修饰脂肪酸，如2-乙基-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基硫基)丁酸(化合物N)，可用于治疗NASH。这是基于以下发现：化合物N在预防饮食诱导的肝纤维化方面优于PPAR-γ激动剂罗格列酮。它还表明，化合物N可以防止炎症细胞进入肝脏。这证明了化合物N在减少APOE*3Leiden.CETP小鼠中具有减少纤维化的功效(以羟脯氨酸/脯氨酸比值来测量)。重要的是，APOE*3Leiden.CETP小鼠仅发展出非常温和的肝纤维化反应(20-30％的细胞外基质增加)，其通过评估羟脯氨酸(HYP)含量的生化测定法测定。此外，在WO2016173923A1(其内容通过引用并入本文)中描述的特定模型中，通过天狼星红(SR)形态学测量的肝脏纤维化的量远低于之前5项使用类似实验装置的研究中发现的肝纤维化的量。在这些研究中，通过SR形态测量法测量发现20周后的纤维化约为4-5％，25-30周后为7-8％，与此相比，在WO2016173923A1中提出的研究中为1.5％。对于纤维化的测量，SR形态测量法比生化分析(HYP)更敏感，与功能相关性较低但数量上普遍的肝门胶原蛋白不同，这可能会低估了主要是实质的功能相关性更强的胶原。
因此，基于对用于治疗NASH和ASH(例如预防性处置或逆转肝纤维化)的有效药物的需要，已经进行了数项新的研究以基于新的评估和具有较高纤维化水平的更好的模型来鉴定可用于治疗肝病这些方面的化合物，并证实疗效。
基于对用于治疗NASH和ASH(预防性处置或逆转肝纤维化)的有效药物的需求，已进行了几项新的研究以基于新的评估和更好的模型来鉴定可用于治疗肝病这些方面的化合物，并证实疗效。
发明内容
本公开提供在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎的方法，包括向受试者施用药学有效量的式(II)的化合物：
Figure BDA0002528780430000041
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自以下取代基：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团，条件是R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。本公开提供了该化合物可作为单一治疗施用或与一种或多种其他活性剂组合施用。
本公开的一个等同方面提供式(II)的化合物
Figure BDA0002528780430000051
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自以下取代基：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团，其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
该化合物用于治疗性和/或预防性处置非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎。本公开还提供了用于该用途的化合物可作为单一治疗施用或与一种或多种其他活性剂组合施用。
在至少一个实施方案中，R2和R3相同或不同，且可选自以下取代基：氢原子、烷基基团、烷氧基基团、烯基基团；或R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X表示羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸酯、甘油酯或磷脂；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
更具体地，本公开涉及在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎的方法，包括向受试者施用药学有效量的式(I)的化合物：
Figure BDA0002528780430000061
其中R2和R3和X如式II所定义。更具体地，
R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸酯、甘油酯或磷脂；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
同样，本公开提供式(I)的化合物：
Figure BDA0002528780430000062
其中R2和R3和X如式II所定义。更具体地，
R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸酯、甘油酯或磷脂；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
所述化合物用于治疗非酒精性脂肪性肝炎。
本公开还提供了在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎的方法，该方法包括向受试者施用药学有效量的2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)：
Figure BDA0002528780430000063
或其药学上可接受的盐或酯。
本公开还提供2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)或其药学上可接受的盐或酯，其用于治疗非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎。
附图简述
图1A-1C描绘了在CDAA/高脂饮食小鼠模型中化合物A对胶原纤维数量(图1A)、厚度(图1B)和长度(图1C)的影响。
图2A-2D描绘了在CDAA/高脂饮食小鼠模型中化合物A对甘油三酯(TG，图2A)、甘油二酯(DG，图2B)、游离脂肪酸(FFA，图2C)和胆固醇酯(图2D)的肝脂质含量的影响。
图3A-3D显示化合物A在ob/ob AMLN喂养的小鼠中在治疗4周后对体重(图3A)或肝重(图3B)，或在治疗8周后对体重(图3C)或肝重(图3D)没有显著影响。
图4A-4F描绘了在ob/ob AMLN喂养的小鼠中用化合物A治疗4周对调节肝纤维发生的典型基因表达的影响。
图5A-5D显示了在ob/ob AMLN喂养的小鼠中用化合物A治疗4周对调节细胞外基质(ECM)稳定性或纤维溶解的基因表达的影响。
图6A-6F显示了在ob/ob AMLN喂养的小鼠中用化合物A治疗8周可降低肝脏α-SMA(图6A-6B)、col1a1(图6C-6D)和胶原蛋白(图6E-6F)的含量。
图7A-7B显示在ob/ob AMLN喂养的小鼠中用化合物A治疗8周减少了活化的肝脏星形细胞(肌成纤维细胞)的数量，并诱导了肝纤维化的消退，这通过与治疗前水平相比肝α-SMA(图7A)和col1a1(图7B)含量分别的减少来证明。
图8A-8F显示了在ob/ob AMLN小鼠中用112mg/kg的化合物A治疗4周导致与炎症相关的肝基因的较低表达。
图9A-9B描绘了在ob/ob AMLN小鼠中用化合物A治疗8周对肝脏半乳凝素-3(Gal-3)水平的影响。
图10A-10B描绘了在ob/ob AMLN小鼠中用化合物A治疗8周对肝细胞损伤的作用，如通过肝酶氨基转移酶(ALT)(图10A)和天冬氨酸转氨酶(AST)的水平所确定的(图10B)。
图11A-11E描绘了在ob/ob AMLN小鼠中用化合物A治疗8周对肝脂肪变性的作用，其由面积百分比(图11A)、总肝脂质(图11B)、胆固醇含量(图11C)、血浆甘油三酯(图11D)和胆固醇(图11E)水平确定。
图12A-12C描绘了在ob/ob AMLN小鼠中用化合物A治疗3周对血糖控制的影响。
图13A-13B描绘了化合物A在体外对人肝脏星形细胞(LX-2)的作用。
发明详述
应当注意，在本公开的一个方面的上下文中描述的实施方案和特征也适用于本公开的其他方面。特别地，适用于根据本公开的治疗非酒精性脂肪性肝炎或酒精性脂肪性肝炎的方法的实施方案也适用于根据本公开的针对用于治疗非酒精性脂肪性肝炎或酒精性脂肪性肝炎的化合物或包含该化合物的组合物的方面。在一些实施方案中，化合物或包含该化合物的组合物与一种或多种其他活性剂组合施用。
下面更详细地描述本公开的特定方面。在本申请中使用并在本文中阐明的术语和定义旨在表示本公开的含义。
单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文另有指出。
术语“大约”和“约”意指与所提及的数字或数值近似相同。本文所用术语“大约”和“约”应通常理解为包括指定量、频率或数值的±5％。
术语“治疗(treat、treating和treatment)”包括可对人或非人哺乳动物有益的任何治疗或预防性应用。人和兽医治疗都在本公开的范围内。治疗可能响应于现有病症，或者其可以是预防的，即预防剂。
本文所用术语“施用(administer、administration和administering)”是指(1)由健康从业者或其授权代理人或根据其指导将根据本公开的化合物或组合物提供、施用、施用和/或开处方，以及(2)由人类病患或个人本人或非人类哺乳动物摄入、服用或摄食根据本公开的化合物或组合物。
术语“预防和/或治疗”和“治疗性和/或预防性处置”可以互换使用。通常，式(I)或式(II)的化合物将用于NASH或ASH的治疗，即治疗性治疗。然而，也可以预见，在某些情况下，式(I)或式(II)的化合物将用于NASH或ASH的预防性处置，例如在患者患有与NASH或ASH相关的一个或多个危险因素的情况下。
术语“组合施用”和“共同施用”或“共施用”可互换使用，并且是指施用(a)式(I)或(II)的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物；和(b)以协作的方式施用至少一种另外的活性剂。例如，共同施用可以是同时施用，顺序施用，重叠施用，间隔施用，连续施用，或其组合。对于化合物和另外的一种或多种药剂，施用方式可以不同，并且共同施用包括任何施用方式，例如口服、皮下、舌下、跨粘膜、肠胃外、静脉内、动脉内、腹膜内、含服、舌下、局部、阴道、直肠、眼、耳、鼻、吸入和经皮或其组合。肠胃外施用的示例包括但不限于静脉内(IV)施用，动脉内施用，肌内施用，皮下施用，骨内施用，鞘内施用，或其组合。式(I)或(II)的化合物和另外的活性剂可以独立地施用，例如口服或肠胃外。在一个实施方案中，式(I)或(II)的化合物口服施用；并且另外的活性剂是肠胃外施用的。肠胃外施用可以通过注射或输注进行。在一些实施方案中，本公开的方法和/或用途涉及分别使用至少两种不同的活性剂、式(I)或(II)的化合物和另外的活性剂对NASH或ASH的治疗性和/或预防性处置。所述至少两种活性剂可以被视为“组合产品”，其中药剂为例如分开包装，并且两种药剂都需要达到最佳预期效果。
术语“药学有效量”是指足以实现所需药理学和/或治疗效果的量，即所公开的化合物对其预期目的有效的量。尽管个体对象/病患的需求可能变化，但是所公开化合物的有效量的最佳范围的确定在本领域的技术范围内。通常，用本文公开的化合物治疗疾病和/或病症的剂量方案可以根据多种因素如对象/病患的类型、年龄、体重、性别、饮食和/或医学病症来确定。
术语“药物组合物”是指具有任何适于医学用途的形式的根据本公开的化合物。
式(I)和(II)的化合物可以以各种立体异构形式(包括对映体、非对映体或其混合物)存在。应当理解，本公开包括式(I)和(II)的化合物的所有光学异构体以及它们的混合物。因此，作为非对映体、外消旋体和/或对映体存在的式(I)和(II)的化合物在本公开的范围内。
在一方面，用于根据本发明的用途的化合物为式(II)的化合物
Figure BDA0002528780430000091
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同且可选自以下取代基：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团，其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X表示羧酸或其衍生物，其中该衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
在一个实施方案中，R1为具有3-6个双键(如5或6个双键)的C18-C22烯基，且优选其中一个双键在ω-3位。
R2和R3更优选独立选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团。在一个实施方案中，R2和R3中至少之一为氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团和异丙基基团、丁基基团或戊基基团。
X优选表示羧酸或羧酸酯；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
用于所述用途的式(II)的化合物可作为单一治疗施用或与一种或多种其他活性剂组合施用。
更具体地，本公开提供了在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎或酒精性脂肪性肝炎的方法，包括向受试者施用药学有效量的式(I)的化合物：
Figure BDA0002528780430000101
其中R2、R3和X如式(II)所定义。
优选地，对于式(I)的化合物，R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；且
X为羧酸或羧酸酯；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
式(I)的化合物可作为单一治疗施用或与一种或多种其他活性剂组合施用。
在一些实施方案中，本公开提供了式(I)的化合物：
Figure BDA0002528780430000102
Figure BDA0002528780430000111
其中R2、R3和X如式(II)所定义,
其用于治疗非酒精性脂肪性肝炎或酒精性脂肪性肝炎。
优选地，对于式(I)的化合物，R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或羧酸酯；或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
在其中R2和R3不同的那些情况下，式(I)和式(II)的化合物能够以立体异构形式存在。应理解本发明包括式(I)和式(II)的化合物的所有旋光异构体及其混合物。
在至少一个实施方案中，R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团、异丙基基团、丁基基团和戊基基团。
在至少一个实施方案中，R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团和乙基基团。
在至少一个实施方案中，R2和R3之一为氢原子，且R2和R3中另一个选自C1-C3烷基基团。在一个实施方案中，R2和R3之一为氢原子，且R2和R3中另一个选自甲基基团和乙基基团，最优选地，R2和R3之一为氢原子且另一个为乙基基团。
对于式I和式II的化合物，在一些实施方案中，R2和R3独立为C1-C6烷基基团。在一些实施方案中，R2和R3都为C1-C3烷基基团。在一些实施方案中，R2和R3相同或不同，且各自独立地选自甲基基团、乙基基团、正丙基基团或异丙基基团。在一些实施方案中，R2和R3相同，且选自一对甲基基团、一对乙基基团、一对正丙基基团或一对异丙基基团。在至少一个优选实施方案中，R2和R3为乙基基团。在一些实施方案中，R2和R3之一为甲基基团且另一个为乙基基团。在一些实施方案中，R2和R3之一为乙基基团且另一个为正丙基基团。
在至少一个实施方案中，该化合物以其多种立体异构形式存在，如对映体(R或S)、非对映体或其混合物。在至少一个实施方案中，该化合物以外消旋形式存在。
在根据式(I)的化合物是具有至少一个立体中心的抗衡离子的盐或具有至少一个立体中心的醇的酯的情况下，化合物可以具有多个立体中心。在这些情况下，本公开的化合物可以以非对映体存在。因此，在至少一个实施方案中，本公开的化合物作为至少一种非对映体存在。
在至少一个实施方案中，本公开的化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)：
Figure BDA0002528780430000121
在至少一个实施方案中，本公开的化合物为以其S和/或R形式存在的2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)，由下式表示：
Figure BDA0002528780430000122
在一些实施方案中，2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)作为单一治疗施用。在一些实施方案中，2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)与一种或多种其他活性剂组合施用。
如前所述，多种独立和相互依赖的代谢、炎症和最终纤维化成分在人类NASH的发展中趋同。很可能任何成功的治疗都将需要解决NASH的多个方面，优选是通过上游代谢/炎症靶点。但是，由于纤维化的发展与临床结果相关，理想的NASH治疗应针对炎症成分，并且还理想地减少或预防性处置纤维化的发展和逆转现有的纤维化。随附的示例显示了含氧的结构修饰脂肪酸(例如化合物A)具有令人惊讶且出乎意料的有效抗炎和抗纤维化作用。这些发现已在多个临床前NASH模型中显示，支持本公开的含氧化合物在治疗性和预防性处置人类受试者的NASH和ASH中的用途。
令人惊讶地发现，化合物A在减少或预防性处置纤维化发展和逆转肝纤维化方面具有显著活性，例如，通过在CDAA(胆碱缺乏性l-氨基酸定义的)、饮食诱导的纤维化小鼠模型中评估羟脯氨酸含量的生化测定来测量(细胞外基质(ECM)增加2-400％，与此相比在较温和的APOE*3Leiden.CETP小鼠模型中的ECM中增加20-30％)。
在CDAA诱导的NASH模型中还有一个新发现是化合物A还减少了肝纤维化，如使用天狼星红形态测量学(SR形态测量学)进行组织学测量所测得的。与测量大血管中胶原蛋白的羟脯氨酸(HYP)含量的生化评估相反，SR形态计量学定量了功能上更相关的正弦曲线胶原蛋白沉积物。
鉴于纤维化在NASH相关的发病率和死亡率中具有至关重要的意义，CDAA诱导的NASH模型结果支持这样的观念，即含氧的结构修饰脂肪酸(例如化合物A)可有效治疗NASH相关的并发症。纤维化相关的肝基因表达(Col1a1)和炎症反应(肝TNF-α基因表达)的变化也支持这一发现。通过SR形态测量学测量，功能上更相关的正弦曲线胶原蛋白的显著减少也支持化合物A在人NASH中的测试和使用。
尽管纤维化在临床结果中具有至关重要的意义，但用于治疗NASH的新型有效药物的监管批准与解决NASH但不会使纤维化恶化相关。同样重要的是，通过新型化合物改善NAS评分成分。因此，除了所需的纤维化改善之外，理想地还应发生脂肪变性、小叶炎症和肝细胞气球样变性的改善。
在另一个NASH模型(STAM小鼠模型)中，一个新发现是，除了改善脂肪变性和炎症外，化合物A还改善了肝细胞气球样变性。肝细胞气球样变性通常被定义为细胞增大正常肝细胞直径的1.5-2倍，伴有细胞质稀少，并已显示与纤维化相关并与肝损伤有关。
化合物A在APOE*3L.CETP双转基因小鼠中也阻止了细胞增大(定义为肝细胞肥大)。肥大相对于气球样变性的定义涉及啮齿动物相对于人类肝细胞的特异的组织学差异。
与所描述的抗炎作用相结合，这些与肝细胞气球样变性/肥大有关的新发现突显了化合物A改善所有NAS评分成分的潜在效用，而这又应有助于临床发展的积极结果和随后的监管批准。
令人惊奇地发现化合物A在多种NASH啮齿动物模型中调节炎性和纤维化成分两者的功效，其严重程度如上和如实施例所示。
NASH中适应性和非适应性免疫细胞募集、活化、分化和增殖之间的复杂相互作用推断，对任何一种炎症参数的依赖都需要同时测量纤维化，才能解释这种读数的功能意义。因此，化合物A在CDAA模型中的抗纤维化作用可以增强氧取代的结构修饰脂肪酸所观察到的抗炎作用的临床相关性。
由于用于治疗NASH的新型有效药物的监管批准取决于解决NASH但不会使纤维化恶化，因此在两种不同的NASH啮齿动物模型中用化合物A治疗观察到的肝细胞气球样变性/肥大的改善也是一项重要且新颖的发现(在CDAA小鼠模型中未测量气球样变性/肥大)。
与所描述的抗炎作用相结合，这些与肝细胞气球样变性/肥大有关的新发现突显了化合物A改善所有NAS评分成分的潜在效用，而这又应有助于临床发展的积极结果和随后的监管批准。
重要的是，化合物(例如化合物A)改善所有NAS评分成分和与不同病理发病机制的多种临床前NASH模型中门管和实质相关的纤维化的能力为其在人类NASH受试者中的测试提供了有力的支持。
此外，由于相当一部分的NASH患者也患有2型糖尿病，因此重要的是研究在肥胖饮食诱发的NASH模型中药物(如化合物A)治疗的延迟发作对肝脂肪变性、炎症和纤维化的影响，以及对血糖控制的影响。在肥胖饮食诱导的NASH模型(ob/ob AMLN高脂喂养的小鼠)中进一步证明了上述化合物A的抗炎、抗纤维化和减少脂肪变性的作用。与噻唑烷二酮类(例如吡格列酮)不同，化合物A在该模型中对血糖控制也具有积极作用而不影响体重，而不像噻唑烷二酮类(例如吡格列酮)对体重有不利影响。此外，化合物A降低了丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的血浆水平，表明减少了肝细胞损伤和/或损害。
基于这些发现，可施用式(II)或优选式(I)的化合物以治疗和/或逆转非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或其他特征在于纤维化、炎症和/或肝细胞气球样变性的肝病。在一些实施方案中，NASH的治疗可以是预防性的。此外，可以施用所述化合物以治疗与NASH有关的至少一种疾病、病症或危险因素。在一些实施方案中，与NASH有关的至少一种疾病、病症或危险因素的治疗可以是预防性的。
考虑到NASH和酒精性脂肪性肝炎(ASH)在促炎和促纤维化机制方面的相似性，因此本文描述的所公开的化合物在NASH模型和体外实验中的抗炎和抗纤维化作用与ASH的治疗和/或逆转相关，尤其是与预防晚期ASH和相关纤维化的进展和诱导其消退相关。例如，化合物A在体外对分离的LX-2(人星状)细胞增殖的抑制作用与实质细胞和/或Kupffer细胞的旁分泌信号传导无关，这表明不论上游刺激是否源于NASH-或ASH-相关的肝脏损伤，均可实现化合物A的抗纤维化作用。
因此，可施用式(II)或优选式(I)的化合物以治疗和/或逆转ASH。在一些实施方案中，ASH的治疗可以是预防性的。此外，可以施用所述化合物以治疗与ASH有关的至少一种疾病、病症或危险因素。在一些实施方案中，与ASH有关的至少一种疾病、病症或危险因素的治疗可以是预防性的。
因此，本公开包括减少或预防性处置肝纤维化的发展并减少现有的肝纤维化的方法。通过该方法，通过减少纤维化面积、纤维化含量或纤维化的严重性来治疗纤维化。在至少一个实施方案中，该方法提供了肝纤维化表面积百分比的降低，例如显著降低。在至少一个实施方案中，该方法提供了复合NAS评分的降低，例如NAS评分的显著降低。此外，该方法除了改善纤维化状况，还包括减轻肝炎症，例如小叶性炎症；减少肝细胞气球样变性；和减少脂肪性肝炎。
在一些实施方案中，本公开的化合物使肝纤维化面积减少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％或70％，如通过天狼星红形态测定法测定。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝纤维化面积减少20-30％、30-40％、10-40％、40-50％、40-60％、50-60％、50-70％或60-70％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝纤维化含量减少20％、25％、30％、35％或40％，如通过肝脏羟基脯氨酸含量测定。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝纤维化含量减少20-30％、20-25％、24-30％或30-40％、30-35％或35-40％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝脏胶原含量减少20％、25％、30％、35％或40％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝脏胶原含量减少20-30％、20-25％、25-30％、30-40％、30-35％或35-40％。在一些实施方案中，相比于治疗前水平，本公开的化合物使肝脏α-SMA含量面积减少3％。
在一些实施方案中，本公开的化合物使脂肪变性减少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％。在一些实施方案中，本公开的化合物使脂肪变性减少40-50％、50-60％、60-70％、50-70％、70-80％、60-80％、70-90％或80-90％。在一些实施方案中，本公开的化合物使总肝脏脂质含量减少20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％。在一些实施方案中，本公开的化合物使总肝脏脂质含量减少20-30％、30-40％或40-50％。
在一些实施方案中，本公开的化合物使肝细胞气球样变性减少30％、35％、40％、45％或50％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝细胞气球样变性减少30-40％、30-35％、35-40％、40-50％、40-45％或45-50％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝细胞肥大减少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝细胞肥大减少40-50％、50-60％、60-70％或70-80％。在一些实施方案中，本公开的化合物使NAS评分减少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％或70％。在一些实施方案中，本公开的化合物使NAS评分减少30-40％、40-50％、30-50％、50-60％、60-70％或50-70％。
在一些实施方案中，本公开的化合物使肝脏炎症减少20％、30％或40％，如通过半乳凝素(Gal-3)水平测定。在一些实施方案中，本公开的化合物使肝脏炎症减少20-30％、20-25％、25-30％、30-40％、30-35％或35-40％。在一些实施方案中，本公开的化合物使血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平减少20％、35％、30％、35％或40％。在一些实施方案中，本公开的化合物使ALT水平减少20-30％、20-25％、25-30％、30-40％、30-35％或35-40％。在一些实施方案中，本公开的化合物使血浆天冬氨酸转氨酶(AST)水平减少10％、15％或20％。在一些实施方案中，本公开的化合物使AST水平减少10-15％、10-20％或15-20％。
在一些实施方案中，本公开的化合物和/或用本公开的化合物例如化合物A进行的治疗，相比于对照，改善肝活检的NAS评分、MRI LiverMultiScan评估PDFF和cT1、肝功能测试、HOMA-IR和/或炎症和纤维化的生物标记(包括hsCRP、Pro-C3、ELF分组和其它合适的生物标记)。
在一些实施方案中，本公开的化合物和/或用本公开的化合物例如化合物A进行的治疗，相比于对照，导致改善，例如，减少气球样变性(例如，评分＝0)，例如，小叶性炎症评分为0或1且没有纤维化恶化。在一些实施方案中，本公开的化合物和/或用本公开的化合物例如化合物A进行的治疗，相比于对照，导致以下方面从基线发生改变，例如改善：肝活检的NAS评分，脂肪变性、气球样变性、炎症和纤维化的个体组织学评分，肝酶，成像参数，和/或生物标记(包括hsCRP、Pro-C3、ELF分组、细胞因子和其它合适的生物标记)。
在一些实施方案中，可以通过与对照相比，监测患者的不良事件，监测实验室值(血液学、生物化学和尿液分析)、生命体征(血压、脉率和温度)、hsCRP和/或静息12导联心电图来评估本公开的化合物例如化合物A在患者中的安全性和耐受性。可以研究化合物A在患者中的药代动力学，例如，通过比较以固定间隔获取的化合物A在稳态下的平均谷血浆浓度。例如，可以以8周的间隔获取平均谷血浆浓度，以测定化合物A的药代动力学。
与不符合相同的一项或多项标准的患者相比，符合以下标准中的一项或多项的患者可对化合物A的治疗显示改进的反应：NASH的组织学诊断，纤维化评分为1-3(含端点)(F1上限为30％)，通过MRI测定的PDFF>10％，进入方案后具有以下血液学和生化标准的补偿性肝病：ALT<5x ULN，AST>30，女性血红蛋白>11g/dL和男性血红蛋白>12g/dL，白细胞(WBC)>2.5K/μL，嗜中性粒细胞计数>1.5K/μL，血小板>100K/μL，总胆红素<35μmol/L(尽管如果在Gilbert综合征背景的非缀合胆红素的情况下，则可包括胆红素>35μmol/L的患者)，白蛋白>36g/L，国际标准化比率(INR)<1.4，血清肌酸酐<1.3mg/dL(男性)或<1.1(女性)，或肾小球滤过率估算值≥60mL/min/1.73m2，没有其他慢性肝病的诱因(例如自身免疫、原发性胆源性胆管炎、HBV、HCV、Wilson's、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、血色素沉着症)和/或(如果适用)稳定型2型糖尿病(定义为HgbA1c<9.5％和空腹血糖<10mmol/L)，在过去6个月内用药没有变化，和/或在过去3个月内没有与代偿性糖尿病相关的新症状)。
相反，与不存在相同的一项或多项标准的患者相比，符合以下标准中的一项或多项的患者可能不显示对化合物A治疗的反应：持续过量饮酒的历史，不稳定的代谢状况(例如，如最近三个月体重增加或减少超过5kg，血糖控制不良(HgbA1c>9.5％)的糖尿病，或在筛查前的6个月内引入抗糖尿病药或抗肥胖药/吸收不良或限制性肥胖症治疗(减重)的手术)，在不到5年内有胃肠道吸收不良减肥手术史，或在过去6个月内摄入已知会引起肝脂肪变性的药物，包括皮质类固醇、大剂量雌激素、甲氨蝶呤、四环素或胺碘酮，HB抗原>0，HCVPCR>0(如果HCV PCR阴性3年以上，则可包括有HCV感染史的患者)或HIV感染、接受胰岛素治疗的1型糖尿病或2型糖尿病，糖尿病性酮症酸中毒，空腹甘油三酯>300mg/dL，止血障碍或目前正在使用抗凝剂治疗，有心律不齐的病史或目前有心律不齐，和/或有心血管疾病(包括心肌梗塞)史，以下患者除外：该患者具有良好控制的高血压以及任何临床上显著的ECG异常和/或服用已知对NASH具有活性的抗糖尿病药(例如吡格列酮和GLP-1受体激动剂)。
式(I)和式(II)的化合物可按照，例如，PCT申请WO2009/061208、WO2010/128401、WO2011/089529、WO2016/156912和根据以下实施例制备。此外，化合物A可按照例如PCTWO2010/128401和WO2014/132135中所述和根据以下实施例2制备。
下面提供的实施例是示例性，并且本领域技术人员将理解如何使用这些通用方法得到在式(I)和式(II)范围的其他化合物。本公开化合物可为药学上可接受的盐或酯的形式。例如，式(I)和式(II)的化合物可为酯，如磷脂、甘油酯或C1-C6-烷基酯的形式。在至少一个实施方案中，所述酯选自甘油酯或C1-C6-烷基酯。在至少一个实施方案中，所述酯选自甘油三酯、1,2-甘油二酯、1,3-甘油二酯、1-甘油单酯、2-甘油单酯、甲基酯、乙基酯、丙基酯、异丙基酯、正丁基酯和叔丁基酯。在至少一个实施方案中，式(I)的化合物作为甲基酯、乙基酯、异丙基酯、正丁基酯或叔丁基酯，例如作为甲基酯或乙基酯存在。通常，式(I)所示的酯(例如，乙基酯)将在胃肠道中水解。
适合本公开的盐包括，但不限于，NH4+；金属离子如Li+、Na+、K+、Mg2+或Ca2+；质子化伯胺如叔丁铵、(3S,5S,7S)-金刚烷-1-铵、1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-铵、质子化氨基吡啶(例如，吡啶-2-铵)；质子化仲胺如二乙铵、2,3,4,5,6-五羟基-N-甲基己烷-1-铵、N-乙基萘-1-铵，质子化叔胺如4-甲基吗啉-4-鎓，质子化季胺如2-羟基-N,N,N-三甲基乙-1-铵，和质子化胍如氨基((4-氨基-4-羧丁基)氨基)甲铵，或质子化杂环化合物如1H-咪唑-3-鎓的盐。合适的盐的其他示例包括双质子化二胺的盐如乙-1,2-二铵或哌嗪-1,4-二鎓。根据本公开的其他盐可以包含质子化的壳聚糖。
Figure BDA0002528780430000181
在至少一个实施方案中，所述盐选自钠盐、钙盐和胆碱盐。在一个实施方案中，所述盐为钠盐或钙盐。
本公开提供了在需要其的受试者中治疗NASH或ASH的方法，包括向受试者施用药学有效量的式(I)或式(II)的化合物。所述受试者可为人或非人哺乳动物。本文公开的化合物可作为药物施用，如以药物组合物。在一方面，本公开提供了包含式(II)的化合物(如式(I)的化合物，如化合物A)的药物组合物，其用于治疗非酒精性脂肪性肝炎。本文公开的组合物可以包含至少一种本文公开的化合物和任选至少一种非活性药物成分，即赋形剂。非活性成分可将活性成分溶解、悬浮、增稠、稀释、乳化、稳定、保存、保护、着色、调味和/或成形为合适有效的制剂，由此使其可以是安全的、便利的和/或其他方面使用上可接受的。赋形剂的示例包括但不限于溶剂、载体、稀释剂、粘合剂、填料、甜味剂、香料、pH调节剂、粘度调节剂、抗氧化剂、补充剂、保湿剂、崩解剂、溶液阻滞剂、吸收加速剂、润湿剂、吸收剂、润滑剂、着色剂、分散剂和防腐剂。赋形剂可能具有多个作用或功能，或者可分类为多于一组；分类只是描述性的，并非意图限制。在一些实施方案中，例如至少一种赋形剂可以选自玉米淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、酒石酸、水、乙醇、甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、丙二醇、十六烷基硬脂醇、羧甲基纤维素和脂肪物质(如硬脂肪)或其合适的混合物。在一些实施方案中，本文公开的组合物包含至少一种式(II)的化合物(如式(I)中的一种)和至少一种在药学上可接受的抗氧化剂，例如生育酚如α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚或其混合物，BHA如2-叔丁基-4-羟基苯甲醚和3-叔丁基-4-羟基苯甲醚或其混合物，以及BHT(3,5-二叔丁基-4-羟基甲苯)，或其混合物。
本文中所公开的组合物可以配制成例如口服施用形式(如片剂或者明胶软或硬胶囊)。剂型可以具有适用于口服施用的任何形状，例如球形、卵形、椭圆形、立方体形、规则和/或不规则形状。本领域已知的常规配制技术可以用于配制根据本公开的化合物。在一些实施方案中，组合物可以是明胶胶囊或片剂的形式。
本文公开的化合物，如式(I)的化合物或式(II)的化合物的合适的每日剂量的范围可以为约5mg至约4g，如约5mg至约2g。例如，在一些实施方案中，每日剂量的范围为约10mg至约1.5g、约50mg至约1g、约100mg至约1g、约150mg至约900mg、约50mg至约800mg、约100mg至约800mg、约100mg至约600mg、约150mg至约550mg或约200mg至约500mg。在至少一个实施方案中，每日剂量的范围为约200mg至约600mg。在至少一个实施方案中，每日剂量为约50mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg或约900mg。化合物可以例如每日施用一次、两次或者三次。
在至少一个实施方案中，式(I)的化合物以每剂约200mg至约800mg的量施用。在至少一个实施方案中，式(I)的化合物每天施用一次。在至少一个实施方案中，式(I)的化合物以750mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物以600mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物以500mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物以300mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(I)的化合物以250mg的剂量每天施用一次。优选地，式(I)的化合物以300mg或600mg的剂量每天施用一次。
在至少一个实施方案中，式(II)的化合物施用的量的范围为每剂约200mg至约800mg。在至少一个实施方案中，式(II)的化合物每天施用一次。在至少一个实施方案中，式(II)的化合物以750mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(II)的化合物以600mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(II)的化合物以500mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(II)的化合物以300mg的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，式(II)的化合物以250mg的剂量每天施用一次。优选地，式(II)的化合物以300mg或600mg的剂量每天施用一次。
根据本公开，式(I)或(II)的化合物可作为单一治疗施用或与一种或多种其他活性剂组合施用。对于共同施用，其他活性剂优选是治疗活性剂，例如药物，并且其优选对NASH或ASH具有治疗作用，例如对涉及NASH或ASH发展和/或恶化的一种或多种因素具有治疗作用。优选地，组合产物，即式(I)或(II)的化合物与一种或多种其他活性剂的组合的使用，对预防和/或治疗NASH或ASH具有协同作用。在一个实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂独立地选自变构乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、凋亡信号调节激酶-1(ASK1)抑制剂、半胱天冬酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯离子通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPP IV)抑制剂、成纤维细胞-生长因子(FGF)-21激动剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、抗CD3 mAb、半乳凝素-3抑制剂、胰高血糖素样肽1(GLP1)激动剂、谷胱甘肽前体、丙肝病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、1Ιβ-羟化类固醇脱氢酶(ΙΙβ-HSDl)抑制剂、热休克蛋白(Hsp)47抑制剂、IL-Ιβ拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同系物2(LOXL2)抑制剂、溶血磷脂酸1(LPA1)受体拮抗剂、ω-3脂肪酸、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARa激动剂、PPARy激动剂、PPAR5激动剂、重组人正五聚蛋白-2蛋白质(PRF-1)、Rho相关的蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制剂、钠葡萄糖转运体-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶-1抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体和小激活RNA(saRNA)。
特别是，在一些实施方案中，一种或多种其他活性剂选自胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂；二肽基肽酶抑制剂(DPP-4拮抗剂)和ω-3(n-3)脂肪酸。
胰高血糖素样肽-1受体激动剂也称为GLP-1受体激动剂或肠促胰岛素类似物为GLP-1受体的激动剂。该类药物通常用于治疗2型糖尿病。GLP-激动剂的非限制性示例列表包括：艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉来、阿必鲁肽、杜拉鲁肽、他司鲁泰和索马鲁肽。
在一些实施方案中，其他活性剂为二肽基肽酶抑制剂(DPP-4拮抗剂)。DPP-4拮抗剂为一类阻断DPP-4(DPP-IV)的口服降血糖药。其可用于治疗2型糖尿病。胰高血糖素增加血液葡萄糖水平，且DPP-4抑制剂减少胰高血糖素和血液葡萄糖水平。DPP-4抑制剂的机理是增加肠促胰岛素水平(GLP-1和GIP)，其抑制胰高血糖素释放，这又增加胰岛素分泌，降低胃排空，和减少血液葡萄糖水平。二肽基肽酶抑制剂的非限制性示例包括：西他列汀、维格列汀、沙格列汀、利拉利汀、吉格列汀、阿拉格列汀、特力利汀、阿格列汀、曲格列汀、奥格列汀、依沃格列汀、杜拓格利普汀。
在一些实施方案中，其他药剂为ω-3脂肪酸。当其他活性剂为ω-3脂肪酸时，ω-3脂肪酸通常为长链多不饱和ω-3脂肪酸(LC n-3PUFA)。优选地，其包括以下中的至少一种：(全-Zω-3)-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)和(全-Zω-3)-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)，或其衍生物。n-3PUFA，包括EPA和DHA，可以为不同的形式，并以以下中的至少一种存在：游离脂肪酸形式；酯化形式，如C1-C4烷基酯，优选乙基酯；磷脂；单/二/三-甘油酯；及其盐。ω-3脂肪酸可以以组合物的形式提供，如用于口服施用的组合物。此类组合物可包含至少40％，如至少50％、60％、70％或80％的活性ω-3脂肪酸。在一些实施方案中，其他活性剂为包含EPA和DHA至少之一，优选乙基酯形式的组合物，其浓度为至少70％。
在一些实施方案中，一种或多种其他活性剂独立地选自乙酰基水杨酸、替帕阿利泼金、aramchol、阿托伐他汀、BI 1467335、BLX-1002、BMS-986036、BMS-986020、cenicriviroc、cobiprostone、考来维仑、恩利卡生、依那普利、foramulab、GFT-505、GR-MD-02、GS-0976、GS-9674、氢氯噻嗪、二十碳五烯酸乙酯(乙基二十碳五烯酸、EPA乙基酯)、IMM-124E、IVA337、K-877、KD-025、利拉利汀、利拉鲁肽、巯乙胺、MGL-3196、ND-L02-s0201、奥贝胆酸、奥利索西、聚乙二醇化伊洛白介素、吡格列酮、PRM-151、PX-102、依碳酸瑞格列净、司隆色替、辛妥珠单抗、SHP-626、索利霉素、泰鲁司特、TRX-318、熊去氧胆酸和VBY-376。组合产品的第一组分，即式(I)或(II)的化合物可以如上所述的任何方式施用或配制。组合产品的第二种成分其他活性剂，可以根据其适合的药剂类型进行配制，并取决于包括该药剂的施用方式在内的多种因素。其他活性剂的剂量取决于所选用的药剂类型，且应根据特定药剂的批准用量确定。如示例中所提供的，使用CDAA(定义为胆碱缺乏的l-氨基酸定义的)饮食诱导的NASH模型提供了用于肝纤维化和炎症二者的模型。如实施例所支持的，与单独用GLP-1治疗相比，GLP-1激动剂与式(I)或(II)的化合物例如化合物A的组合对于NASH相关的纤维化和炎症具有更好的效果。由于肝纤维化在很大程度上是对炎症反应的反应，因此炎症相关肝基因表达(TNF-α)中的已证实变化也支持了这一点，其证明了与单独的GLP-1激动剂相比，含氧的结构修饰脂肪酸(化合物A)与GLP-1激动剂的组合的优越性。总体而言，数据表明，GLP-1激动剂(或DPP-4拮抗剂)与本公开的化合物的组合可达到治疗肝炎症和纤维化二者的协同作用。
虽然肝性脂肪变性本身可能是一种良性的疾病，但它可能会使肝脏易受到诱发炎症反应的其他因素的"二次打击"。因此，就脂肪变性对NAS评分和NASH(作为其他或持续性肝损伤的潜在“诱因”)的解决的贡献而言，减少脂肪变性是可取的。高剂量ω-3-乙基酯和低剂量含氧的结构修饰脂肪酸(化合物A)的组合在肝脂质方面取得了新的和显著的改善，这强烈地表明了协同作用的实现，特别是由于这两种化合物都没有在ApoE*3L-CETP转基因小鼠中单独实现肝脏甘油三酯(TG)的显著降低。
值得注意的是，化合物A在ω-3乙基酯剂量的一小部分处会显著上调或下调APOE*3.CETP转基因小鼠肝脏中的>1094基因表达探针，而ω-3乙酯是<10(数据未显示)。不受理论的束缚，对肝转录组的这种不同作用可能表明观察到的协同作用是靶向不同途径的继发作用，而不是累积剂量作用。对肝胆固醇含量的显著作用也可能对与NASH和ASH发病机理有关的炎症反应产生积极影响。总体而言，APOE*3.CETP小鼠中的数据支持了ω-3PUFA制剂(例如EPA乙酯)和根据式(I)或(II)的含氧的结构修饰脂肪酸的组合为用于减少肝脂肪变性的有效疗法，从而治疗NASH和/或ASH。
式(II)或优选式(I)的化合物可作为单一治疗或与至少一种其他活性剂联合使用，以治疗和/或逆转非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或酒精性脂肪性肝炎(ASH)。在一些实施方案中，至少一种其他活性剂是GLP-1激动剂。另外，基于在APOE*3.CETP转基因小鼠中的发现，可以将式(II)或优选式(I)的化合物与至少一种其他活性剂组合施用以治疗性和/或预防性处置和/或逆转肝性脂肪变性(甘油三酯和/或胆固醇含量)。在一些实施方案中，至少一种其他活性剂是ω-3脂肪酸，例如ω3PUFA乙酯。
以上示例突显了含氧的结构修饰脂肪酸与多种其他活性剂组合用于治疗NASH和/或ASH的潜力。这些组合与单药治疗相比不仅可以改善疗效相关的结果，而且可以提高安全性。作为后者的一个示例，已证明化合物A显著降低了APOE*3.CETP小鼠的CETP表达，并改善了啮齿动物和人类的脂质分布。与奥贝胆酸(FXR激动剂)组合使用可能是有利的，与化合物A相比，奥贝胆酸在APOE*3.CETP小鼠和人类中均增加CETP表达并恶化脂质分布。
本发明人已发现式(I)的化合物，如2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸，具有显著的良好药物活性。出人意料地，相比于胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)激动剂，本公开的式(I)的化合物对于NASH相关肝纤维化和炎症的治疗显示改善的生物活性。当与其他活性剂组合施用时，式(I)的化合物还可显示协同作用。
实施例
本公开可以通过以下非限制性实施例进一步描述，其中在适当的情况下可以使用熟练的化学工作者已知的标准技术和类似于在这些实施例中描述的那些的技术。应当理解，本领域技术人员将会构造与本文提供的公开内容一致的其他实施例。
除非另有说明，反应在室温(通常在18-25℃的范围内)下在无水条件下用HPLC级溶剂进行。通过真空旋转蒸发进行蒸发。通过在硅胶40-63μm(Merck)上的快速程序或通过使用预先填充的硅胶柱“MiniVarioFlash”、“SuperVarioFlash”、“SuperVarioPrep”或“EasyVarioPrep”(Merck))的Armen Spotflash进行柱层析。在Bruker Avance DPX 200或300仪器上记录核磁共振(NMR)位移值，其中峰的多重性如下所述：s，单峰；d，双峰；dd，双双重峰；t，三重峰；q，四重峰；p，五重峰；m，多重峰；br，宽度。用LC/MS光谱仪记录质谱。在具有梯度洗脱的Eclipse XDB-C18 2.1x150mm柱上使用Agilent 1100系列模块进行分离。作为洗脱剂，使用在包含0.01％三氟乙酸或0.005％甲酸钠的缓冲液中5-95％乙腈的梯度。用Gl956A质谱仪(电喷雾，3000V)切换正离子和负离子模式来记录质谱。所记录的产率是示例性的，并不一定代表可获得的最大产率。
化合物的制备
实施例1：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000241
在室温在氮气下将四丁基氯化铵(0.55g，1.98mmol)添加至(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(3.50g，12.1mmol)在甲苯(35mL)中的溶液中。在室温剧烈搅拌下添加氢氧化钠水溶液(50％(w/w)，11.7mL)，然后添加2-溴丁酸叔丁酯(5.41g，24.3mmol)。所得混合物加热至50℃，且在1.5小时(2.70g，12.1mmol)、3.5小时(2.70g，12.1mmol)和4.5小时(2.70g，12.1mmol)后添加额外的2-溴丁酸叔丁酯，总共搅拌12小时。冷却至室温后，添加冰水(25mL)且分离所得两相。有机相用NaOH(5％)和盐水的混合物洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯的混合物(100：0->95：5)作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到1.87g(36％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCI3)：δ0.85-1.10(m，6H)，1.35-1.54(m，11H)，1.53-1.87(m，4H)，1.96-2.26(m，4H)，2.70-3.02(m，8H)，3.31(dt，1H)，3.51-3.67(m，2H)，5.10-5.58(m，10H)。
实施例2：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(化合物A)：
Figure BDA0002528780430000251
将2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸叔丁酯(19.6g，45.5mmol)溶于二氯甲烷(200mL)且置于氮气下。添加三氟乙酸(50mL)，且将反应混合物在室温搅拌1小时。添加水且水相用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。将残余物进行快速硅胶色谱法，使用极性渐增的庚烷、乙酸乙酯和甲酸(90：10：1->80：20：1)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到12.1g(71％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.00(m，6H)，1.50(m，2H)，1.70(m，2H)，1.80(m，2H)，2.10(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.50(m，1H)，3.60(m，1H)，3.75(t，1H)，5.30-5.50(m，10H)；MS(电喷雾)：373.2[M-H]-.
实施例3：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸钙
Figure BDA0002528780430000252
将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(1.87g，4.99mmol，93％)与CaCO3(0.25g，2.50mmol)混合。添加水(1ml)，且将混合物在室温机械搅拌1小时。CO2产生。形成致密和均匀的糊。在搅拌下，添加丙酮(7ml)。固体材料分离。将固体材料过滤且用氮气干燥，密封且储存在4℃冰箱中。产量：1.86克(95％)。固体没有进一步通过分析或光谱学方法表征，但进行了一些实验表明已形成钙盐：
·固态材料在低于100℃的热板上熔化。没有测定明确熔点
·该材料在添加酸时不会释放CO2，但会“溶解”并沉淀为油
实施例4：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸钠
Figure BDA0002528780430000261
2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(1.87g，4.99mmol，93％)与NaHCO3(0.420g，5.00mmol)混合。添加水(1ml)，且将混合物在室温机械搅拌1小时。CO2产生，且形成稠的均匀糊。在搅拌下，将乙醇(7ml)添加至反应烧瓶。在添加乙醇(7ml)后，从2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸形成的钠盐进入溶液。过滤掉少量未反应的NaHCO3且将溶液蒸发至干。将粗的稍粘稠的油状物用96％的乙醇蒸发两次，以除去痕量的水。
实施例5：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸2-羟基-N,N,N-三甲基乙-1-铵
Figure BDA0002528780430000262
氢氧化胆碱(327.7μL)的水溶液移液至具有约2.5mL MTBE和7.5mL正庚烷的闪烁瓶中。在氮气室内，将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(500mg，95.8％)转移至瓶中。在氮气室内在搅拌下将约1.0mL水缓慢添加至瓶。然后将瓶密封。将反应混合物搅拌约30分钟。形成的2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸胆碱盐是一种刚性凝胶状物质，其在布氏漏斗中过滤。过滤器上的湿物质用1mL MTBE洗涤3次。洗涤后的材料显示为刚性凝胶状固体。
实施例6：制备(4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮和(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮：
Figure BDA0002528780430000263
在0℃在氮气下将DMAP(1.10g，8.90mmol)和DCC(1.90g，9.30mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸(3.20g，8.50mmol)在无水二氯甲烷(100mL)中的混合物中。所得混合物在0℃搅拌20分钟。添加(4S,5R)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮(1.50g，8.50mmol)且所得浑浊混合物在环境温度搅拌5天。将混合物过滤且在减压下浓缩以得到包含所需产物的粗产物，其为两种非对映体的混合物。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用15％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将两种非对映体分离且将合适的级分浓缩。将(4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮首先洗脱且以1.1g(40％产率)获得，其为油状物。(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮以0.95g(34％产率)获得，其为油状物。
(4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮(E1)：1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90(d，3H)，1.00(t，3H)，1.07(t，3H)，1.45-1.57(m，2H)，1.62-1.76(m，3H)，1.85-1.95(m，1H)，2.05-2.15(m，4H)，2.87(m，8H)，3.39(m，1H)，3.57(m，1H)，4.85-4.92(m，2H)，5.30-5.45(m，10H)，5.75(d，1H)，7.32(m，2H)，7.43(m，3H)。
(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮(E2)：1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.98(d，3H)，0.99(t，3H)，1.08(t，3H)，1.40-1.52(m，2H)，1.55-1.75(m，3H)，1.80-1.90(m，1H)，2.05-2.15(m，4H)，2.84(m，8H)，3.39(m，1H)，3.56(m，1H)，4.79(pent，1H)，4.97(dd，1H)，5.30-5.45(m，10H)，5.71(d，1H)，7.33(m，2H)，7.43(m，3H)。
实施例7：制备(S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸：
Figure BDA0002528780430000271
在0℃在氮气下将过氧化氢(35％在水中，0.75mL，8.54mmol)和氢氧化锂一水合物(0.18g，4.27mmol)添加至(4S,5R)-3-((S)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮(1.10g，2.13mmol)在四氢呋喃(12mL)和水(4mL)中的溶液中。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。添加10％Na2SO3(aq)(30mL)，用2MHCl将pH调节至～2且混合物用庚烷(30mL)萃取两次。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。将残余物进行快速硅胶色谱法，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(98：8->1：1)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.48g(60％产率)标题化合物，为油状物。1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.00(m，6H)，1.48(m，2H)，1.65(m，2H)，1.85(m，2H)，2.10(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.55(m，1H)，3.60(m，1H)，3.88(t，1H)，5.35-5.45(m，10H)；MS(电喷雾)：373.3[M-H]-；[α]D-37°(c＝0.104，乙醇)。
实施例8：制备(R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酸：
Figure BDA0002528780430000281
在0℃在氮气下将过氧化氢(35％在水中，0.65mL，7.37mmol)和氢氧化锂一水合物(0.15g，3.69mmol)添加至(4S,5R)-3-((R)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丁酰基)-4-甲基-5-苯基噁唑烷-2-酮(0.95g，1.84mmol)在四氢呋喃(12mL)和水(4mL)中的溶液中。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。添加10％Na2SO3(aq)(30mL)，用2MHCl将pH调节至2且混合物用庚烷(30mL)萃取两次。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。将残余物进行快速硅胶色谱法，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(98：8->50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.19g(29％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.00(m，6H)，1.48(m，2H)，1.65(m，2H)，1.85(m，2H)，2.10(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.55(m，1H)，3.60(m，1H)，3.88(t，1H)，5.35-5.45(m，10H)；MS(电喷雾)：373.3[M-H]-；[α]D-31°(c＝0.088，乙醇)。
实施例9：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸乙酯：
Figure BDA0002528780430000282
在0℃在N2气氛下将二环己基甲烷二亚胺(DCC)(304mg，1.47mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP)(10mg，0.067mmol)添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(501.3mg，1.335mmol)在二氯甲烷(DCM)(4mL)中的搅拌溶液中。将混合物搅拌5分钟，然后添加乙醇(EtOH)(0.16mL，2.67mmol)。所得混合物在室温搅拌20小时。反应混合物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用渐增的庚烷和乙酸乙酯(100：0→99：1)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到473mg(88％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ0.95(2x t，6H)，1.37-1.48(m，2H)，1.54-1.79(m，4H)，2.01-2.10(m，4H)，2.77-2.84(m，8H)，3.27-3.34(m，1H)，3.53-3.60(m，1H)，3.69-3.73(dd，1H)，4.13-4.24(m，2H)，5.25-5.33(m，10H)，MS(电喷雾)；425.3[M+Na]+；HRMS(电喷雾)：实测值425.3021[M+Na]+，[C26H42O3+Na]+的计算值425.3031.
实施例10：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸异丙酯
Figure BDA0002528780430000291
在0℃在N2气氛下将DCC(310mg，1.47mmol)和DMAP(9mg，0.067mmol)添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(501mg，1.335mmol)在DCM(4mL)中的搅拌溶液中。将混合物搅拌5分钟，然后添加异丙醇(iPrOH)(0.16mL，2.67mmol)。所得混合物在室温搅拌20小时。将混合物过滤且真空浓缩。向残余物添加庚烷(50mL)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用1％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到496mg(89％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.97(2x t，6H)，1.25(m，6H)，1.42-1.50(m，2H)，1.61-1.70(m，2H)，1.70-1.77(m，2H)，2.05-2.12(m，4H)，2.79-2.86(m，8H)，3.29-3.34(m，1H)，3.54-3.59(m，1H)，3.67-3.71(m，1H)，5.06-5.10(m，1H)，5.31-5.42(m，10H)；MS(电喷雾)：439.3[M+Na]+.
实施例11：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸甲酯：
Figure BDA0002528780430000292
在室温在N2气氛下将硫酸(0.049ml，0.918mmol)添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸((385mg，1,028mmol)在甲醇(20ml)中的溶液中，所得混合物在室温搅拌过夜。MS(电喷雾)：389.3[M+1]+.
实施例12：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸丁酯：
Figure BDA0002528780430000301
在室温在N2气氛下将硫酸(0.049ml，0.918mmol)添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸((33g，88mmol)在丁-1-醇(400mL，4.37mol)中的溶液中，且将反应混合物搅拌120小时。添加庚烷(400mL)和乙酸乙酯(400mL)，且溶液用饱和NaHCO3水溶液(3x 300mL)和水(2x 300mL)洗涤。合并的水相用庚烷/醚(1：1)(2x 300mL)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用渐增的庚烷和乙酸乙酯(99：1→96：4)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到26.3g(67％产率)标题化合物，为油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.93-1.02(m，9H)，1.36-1.51(m，4H)，1.60-1.70(m，4H)，1.72-1.84(m，2H)，2.05-2.16(m,4H)，2.78-2.92(m，8H)，3.28-3.39(m，1H)，3.54-3.65(m，1H)，3.70-3.82(m，1H)，4.08-4.24(m，2H)，5.27-5.48(m，10H)，MS(电喷雾)：453.2[M+Na]+.
实施例13：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸2,3-二羟丙酯：
步骤a)制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲酯
Figure BDA0002528780430000302
在氮气氛下将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(25g，66,7mmol)和DMAP(8.15g，66.7mmol)添加至2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇(7.54mL，60.7mmol)在氯仿(150mL)中的溶液中。然后在环境温度滴加DCC(13.77g，66,7mmol)在氯仿(65mL)中的溶液。将混合物搅拌过夜且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的10％乙酸乙酯的庚烷溶液的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到19.6g(66％产率)标题产物，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(t，6H)，1.37-1.40(m，3H)，1.41-1.53(m，5H)，1.59-1.71(m，2H)，1.72-1.85(m，2H)，2.05-2.14(m，4H)，2.74-2.95(m，8H)，3.31-3.38(m，1H)，3.57-3.65(m，1H)，3.72-3.86(m，2H)，4.07-4.12(m，1H)，4.15-4.27(m，2H)，4.29-4.40(m，1H)，5.23-5.50(m，10H)。MS(电喷雾)：511.3[M+Na]+.
步骤b)制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸2,3-二羟丙酯
Figure BDA0002528780430000311
在室温在氮气下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲酯(27.5g，56.3mmol)在二噁烷(280mL)中的溶液中添加HCl水溶液(37％(w/w)，28mL，341mmol)，且将混合物搅拌60分钟。然后将混合物小心倒入饱和NaHCO3水溶液(500mL)中，且用EtOAc(2x 300mL)萃取。有机相用1M HCl(200mL)、盐水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用庚烷和乙酸乙酯(50：50)作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到19g标题产物，其为油状物，掺杂有～10％的异构体2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸1,3-二羟基丙-2-酯。将该材料与另一批1.35克混合，然后进一步通过制备型HPLC纯化。水/乙腈(9：1)至乙腈(100％)的等度17：83混合物用作洗脱液。将合适的级分浓缩得到11.3g(38％产率)标题产物，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97-1.03(m，6H)，1.41-1.51(m，2H)，1.59-1.69(m，2H)，1.72-1.87(m，2H)，2.05-2.14(m，5H)，2.56(s，1H)，2.73-2.94(m，8H)，3.33-3.40(m，1H)，3.55-3.68(m，2H)，3.69-3.77(m，1H)，3.79-3.85(m，1H)，3.93-4.03(m，1H)，4.15-4.37(m，2H)，5.25-5.51(m，10H)。MS(电喷雾)：471.3[M+Na]+.
实施例14：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸1,3-二羟基丙-2-酯
步骤a)制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸氧杂环丙烷-2-基甲酯
Figure BDA0002528780430000321
将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(800mg，2.14mmol)、缩水甘油(0.17mL，2.56mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC*HCl)(491mg，2.56mmol)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(313mg，2.56mmol)在无水DCM(7mL)中的混合物在室温在N2气氛下搅拌。反应混合物真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(99：1→95：5)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到527mg(57％产率)标题产物，其为油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.94-0.98(m，6H)，1.40-1.44(m，2H)，1.57-1.64(m，2H)，1.70-1.82(m，2H)，2.02-2.12(m，4H)，2.63(bs，1H)，2.78-2.84(m，9H)，3.20(bs，1H)，3.30-3.35(m，1H)，3.55-3.61(m，1H)，3.77-3.80(m，1H)，3.94-4.01(m，1H)，4.42-4.48(m，1H)，5.36-5.26(m，10H)。MS(电喷雾)：453.3[M+Na]+.
步骤b)制备二(2,2,2-三氟乙酸)2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)丙烷-1,3-二酯
Figure BDA0002528780430000322
在-20℃在N2气氛下将三氟乙酸酐(TFAA)(0.55mL，3.96mmol)在无水DCM(3mL)中的溶液分批添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸氧杂环丙烷-2-基甲酯(286mg，0.66mmol)在无水DCM(3mL)中的预冷却的溶液中。移除冷却浴，且将混合物在环境温度搅拌19小时，然后反应混合物真空浓缩。将残余物溶于甲苯(6mL)且通过二氧化硅垫(6.5g)，用甲苯(150mL)洗脱。真空浓缩以得到357mg(84％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.95(2x t，6H)，1.38-1.45(m，2H)，1.57-1.63(m，2H)，1.66-1.78(m，2H)，2.09-2.02(m，4H)，2.78-2.84(m，8H)，3.27-3.33(m，1H)，3.51-3.56(m，1H)，3.77(dd，1H)，4.30-4.53(m，2H)，4.60-4.69(m，2H)，5.17-5.43(m，10H)，5.43-5.55(m，1H)。MS(电喷雾)：661.1[M+Na]+.
步骤c)制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸1,3-二羟基丙-2-酯
Figure BDA0002528780430000331
在N2气氛下将吡啶(0.4mL，4.95mmol)和甲醇(0.3mL，7.41mmol)在戊烷/DCM(2：1)(4.5mL)中的溶液滴加至冷却至-20℃的二(2,2,2-三氟乙酸)2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)丙烷-1,3-二酯(354mg，0.552mmol)在戊烷/DCM(2：1)(5mL)中的溶液中。移除冷却浴，且将混合物搅拌3小时在室温，然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→90：10→80：20→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到223mg标题产物，其为粗油状物。通过制备型HPLC纯化得到58mg(22％产率)标题化合物，为油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.95(t，3H)，0.96(t，3H)，1.38-1.45(m，2H)，1.54-1.64(m，2H)，1.67-1.84(m，2H)，2.01-2.09(m，4H)，2.45(bs，2H)，2.83-2.77(m，8H)，3.36-3.30(m，1H)，3.60-3.55(m，1H)，3.84-3.78(m，5H)，4.98-4.93(m，1H)，5.65-5.09(m，10H)。MS(电喷雾)：471.1[M+Na]+.
实施例15：制备二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)3-羟基丙烷-1,2-二酯
步骤a)制备叔丁基((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)二甲基硅烷
Figure BDA0002528780430000332
在环境温度在氮气氛下将叔丁基-氯二甲基硅烷(14.41g，91mmol)添加至(2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(10g，76mmol)和咪唑(7.73g，114mmol)在THF(100mL)中的溶液中。将混合物搅拌1.5小时，倒入水(200mL)中，且用叔丁基甲基醚(2x 150mL)萃取。分离相和有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用3％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到18g(97％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.02-0.05(m，6H)，0.85-0.89(m，9H)，1.31-1.35(m，3H)，1.35-1.40(m，3H)，3.50-3.60(m，1H)，3.63-3.72(m，1H)，3.75-3.85(m，1H)，3.96-4.05(m，1H)，4.07-4.18(m，1H)。MS(电喷雾)：229.2[M+Na]+.
步骤b)制备3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙烷-1,2-二醇
Figure BDA0002528780430000341
向叔丁基((2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)二甲基硅烷在氯仿(60mL)中的溶液中添加吸附在硅胶上的FeCl3x6H2O(30g，11.9mmol)，且将混合物搅拌过夜。将混合物过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(50：50→25：75)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到760mg(9％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.09-0.12(m，6H)。0.91-0.95(m，9H)，2.11-2.17(m，1H)，2.60(d，1H)，3.57-3.85(m，5H)。MS(电喷雾)：229.2[M+Na]+.
步骤c)制备二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙烷-1,2-二酯
Figure BDA0002528780430000342
在N2气氛下在环境温度向3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙烷-1,2-二醇(0.91g，4.41mmol)在DMF(20ml)中的溶液中添加2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(3.47g，9.3mmol)、DMAP(1.13g，9.3mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(DCI)(1.776g，9.26mmol)和无水DCM(60ml)。将混合物搅拌过夜，然后反应混合物用乙醚(200mL)稀释。将混合物用1M HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用3％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到2.26g(56％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.08(s，6H)，0.90(d，9H)，0.95-1.03(m，12H)，1.40-1.52(m，4H)，1.58-1.69(m，4H)，1.70-1.83(m，4H)，2.04-2.15(m，8H)，2.77-2.92(m，16H)，3.27-3.37(m，2H)，3.57-3.67(m，2H)，3.72-3.80(m，4H)，4.14-4.32(m，1H)，4.41-4.56(m，1H)，5.09-5.22(m，1H)，5.23-5.49(m，20H)。MS(电喷雾)：941.6[M+Na]+.
步骤d)制备二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)3-羟基丙烷-1,2-二酯
Figure BDA0002528780430000351
向二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙烷-1,2-二酯(2.26g，2.46mmol)在二噁烷(100mL)中的溶液中添加HCl水溶液(37％(w/w，2mL)，且将混合物在氮气氛下在环境温度搅拌3小时，然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用15％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.83g(42％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.96-1.03(m，12H)，1.40-1.53(m，4H)，1.58-1.68(m，4H)，1.70-1.85(m，4H)，1.87-2.01(m，1H)，2.05-2.15(m，8H)，2.75-2.95(m，16H)，3.28-3.41(m，2H)，3.56-3.65(m，2H)，3.73-3.85(m，4H)，4.24-4.37(m，1H)，4.42-4.53(m，1H)，5.14-5.23(m，1H)，5.26-5.51(m，20H)。MS(电喷雾)：827.5[M+Na]+.
实施例16：制备二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)2-羟基丙烷-1,3-二酯：
步骤a)二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)2-氧代丙烷-1,3-二酯
Figure BDA0002528780430000352
在氮气氛下将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(5.0g，13.4mmol)和DMAP(1.63g，13.4mmol)添加至1,3-二羟基丙酮二聚体(1.145g，6.36mmol)在氯仿(25mL)中的溶液中。然后在环境温度滴加DCC(2.75g，13.35mmol)在氯仿(10mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(90：10→88：12)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到2.4g(47％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97-1.06(m，12H)。1.38-1.53(m，4H)，1.57-1.73(m，4H)，1.73-1.96(m，4H)，2.03-2.17(m，8H)，2.76-2.92(m，16H)，3.35-3.42(m，2H)，3.63-3.70(m，2H)，3.89(dd，2H)，4.75-4.93(m，4H)，5.27-5.49(m，20H)。MS(电喷雾)：827.5[M+Na]+.
步骤b)二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)2-羟基丙烷-1,3-二酯
Figure BDA0002528780430000361
在0℃将NaBH4(0.336g，8.87mmol)小心添加至2-氧代丙烷-1,3-二基二(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)酯(3.24g，4.03mmol)在THF(55mL)和水(4mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌15分钟。然后小心添加乙酸(1mL)，然后添加乙酸乙酯(100mL)。将混合物用水(100mL)、饱和NaHCO3水溶液(100mL)和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。将残余物与另一批次材料合并，然后通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用15％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到1.62g(50％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97-1.03(m，12H)，1.41-1.52(m，4H)，1.58-1.69(m，6H)，1.71-1.87(m，4H)，2.05-2.14(m，8H)，2.38-2.42(m，1H)，2.78-2.92(m，16H)，3.32-3.39(m，2H)，3.57-3.64(m，2H)，3.80-3.84(m，2H)，4.05-4.34(m，5H)，5.26-5.49(m，20H)。MS(电喷雾)：827.5[M+Na]+.
实施例17：制备三(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸)丙烷-1,2,3-三酯
Figure BDA0002528780430000362
在N2气氛下在室温将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(4.0g，10.7mmol)、4-二甲基氨基吡啶(1.305g，10.7mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.047g，10.7mmol)和无水DCM(30ml)添加至甘油(0.173ml，2.373mmol)在DMF(10ml)中的溶液中。将混合物搅拌过夜，然后反应混合物用乙醚(250mL)稀释。将混合物用1MHCl水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用5％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到2.1g(73％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.91-1.05(m，18H)，1.40-1.52(m，6H)，1.57-1.69(m，6H)，1.69-1.86(m，6H)，2.01-2.17(m，12H)，2.69-2.96(m，24H)，3.27-3.38(m，3H)，3.53-3.67(m，3H)，3.73-3.81(m，3H)，4.17-4.27(m，2H)，4.37-4.54(m，2H)，5.28-5.47(m，30H)。MS(电喷雾)：1183.8[M+Na]+.
实施例18：制备2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰基)氧基)苯甲酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000371
将1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(316mg，1.65mmol)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(20mg，0.15mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(561mg，1.5mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，且将反应混合物搅拌10分钟。添加2-羟基苯甲酸叔丁酯(291mg，1.5mmol)，且将混合物搅拌3小时。添加盐水且分离所得两相。水相用DCM萃取，且将合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用5％EtOAc在庚烷中的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到500mg(61％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.98(t，3H)，1.11(t，3H)，1.13(t，3H)，1.45-1.75(m，4H)，1.56(s，9H)，1.90-2.20(m，6H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.60(m，1H)，3.80-3.90(m，1H)，4.05-4.15(m，1H)，5.25-5.50(m，10H)，7.06(m，1H)，7.28(m，1H)，7.52(m，1H)，7.89(m，1H)。MS(ESI)：573[M+Na]+.
实施例19：制备2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰基)氧基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000372
将2-((2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰基)氧基)苯甲酸叔丁酯(500mg，0.9mmol)在FA(10mL)中的溶液搅拌2天。在减压下去除溶剂且将残余物进行快速色谱法，使用1-5％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩，且将残余物进一步通过第二快速色谱法纯化，使用1-10％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到75mg(17％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.99(t，3H)，1.13(t，3H)，1.45-1.60(m，2H)，1.65-1.70(m，2H)，1.90-2.15(m，6H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.55(m，1H)，3.80-3.90(m，1H)，4.05-4.15(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，7.14(d，1H)，7.35-7.45(m，1H)，7.60-7.70(m，1H)，8.10-8.15(m，1H)。MS(ESI)：517[M+Na]+.
实施例20：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酯：
Figure BDA0002528780430000381
将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)(800mg，2.1mmol)和TEA(0.56mL，4mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(748mg，2mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，且将反应混合物搅拌20分钟。添加N-(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(340mg，2.1mmol)在DCM(1mL)中的溶液，且所得混合物在室温搅拌过夜。添加Et2O(100mL)，且将混合物用水、1MHCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用10-20％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到780mg(76％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.98(t，6H)，1.40-1.55(m，2H)，1.45(s，9H)，1.60-1.85(m，4H)，2.05-2.20(m，4H)，2.75-2.90(m，8H)，3.30-3.45(m，3H)，3.55-3.65(m，1H)，3.75-3.80(m，1H)，4.20-4.25(m，2H)，4.76(br s，1H)，5.30-5.45(m，10H)。MS(ESI)：540[M+Na]+.
实施例21：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-(2-乙酰氧基苯甲酰胺基)乙酯：
Figure BDA0002528780430000382
在0℃将乙酰氯(1mL)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酯(300mg，0.58mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中，且将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物真空浓缩以得到2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-氨基乙酯的HCl盐(286mg)，其为粗产物。将TEA(109μL，0.78mmol)添加至乙酰基水杨酸(137mg，0.76mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，且将混合物冷却至0℃。滴加氯甲酸乙酯(75μL，0.78mmol)，且将反应混合物搅拌2小时。然后将该溶液添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-氨基乙酯的HCl盐粗产物在DCM(10mL)和TEA(2mL)的混合物中的溶液中。所得混合物在室温搅拌3.5小时，然后添加水。分离所得两相，且水相用DCM萃取两次。合并的有机相用1MHCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用20％EtOAc在庚烷中的溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到90mg(23％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.95-1.05(m，6H)，1.35-1.45(m，2H)，1.55-1.70(m，2H)，1.70-1.85(m，2H)，2.05-2.15(m，4H)，2.35(s，3H)，2.80-2.90(m，8H)，3.30-3.40(m，1H)，3.55-3.65(m，1H)，3.70-3.85(m，3H)，4.33(t，2H)，5.30-5.45(m，10H)，6.61(br s，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.25-7.35(m，1H)，7.45-7.50(m，1H)，7.70-7.75(m，1H)。MS(ESI)；602[M+Na]+.
实施例22：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-(2-羟基苯甲酰胺基)乙酯：
Figure BDA0002528780430000391
将氨(水溶液，28％，20滴)滴加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸2-(2-乙酰氧基苯甲酰胺基)乙酯(99mg，0.17mmol)在2-丙醇(9mL)和水(3mL)中的溶液中，且将反应混合物搅拌10分钟。添加水，且所得混合物用Et2O萃取两次。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用0-40％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到33mg(36％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.95-1.05(m，6H)，1.35-1.45(m，2H)，1.60-1.70(m，2H)，1.70-1.85(m，2H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.35-3.45(m，1H)，3.50-3.60(m，1H)，3.75-3.85(m，3H)，4.40-4.50(m，2H)，5.30-5.45(m，10H)，6.80-6.90(m，2H)，6.95-7.05(m，1H)，7.35-7.45(m，1H)，12.22(s，1H)。MS(ESI)：560[M+Na]+.
实施例23：制备N-苄基-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺
Figure BDA0002528780430000401
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(302.1mg，0.807mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(285mg，0.888mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.887mmol)。搅拌15分钟后向混合物添加苄基胺(97μL，0.887mmol)且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。将有机相合并，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.253g(66％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)d 0.97–0.90(m，6H)，1.41–1.35(m，2H)，1.59–1.52(m，2H)，1.75–1.68(m，1H)，1.86–1.80(m，1H)，2.09–2.03(m，4H)，2.82–2.77(m，8H)，3.44(t，J＝6.4，2H)，3.72–3.71(m，1H)，4.46(d，J＝5.8，2H)，5.36–5.28(m，10H)，6.83(s，1H)，7.26–7.24(m，3H)，7.33–7.30(m，2H)。
实施例24：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)-N,N-二甲基丁酰胺
Figure BDA0002528780430000402
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(300.2mg，0.801mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(286.4mg，0.892mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.884mmol)。搅拌15分钟后向混合物添加二甲基胺(2.0M在THF中)(0.80mL，1.60mmol)，且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。将有机相合并，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.268g(81％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.95(t，3H)，0.96(t，3H)，1.35–1.46(m，2H)，1.53–1.63(m，2H)，1.66–1.79(m，2H)，2.01–2.10(m，4H)，2.77–2.87(m，8H)，2.93(s，3H)，3.10(s，3H)，3.28(dt，J＝9.1，6.5，1H)，3.46(dt，J＝9.1，6.3，1H)，3.96(dd，J＝7.7，6.1，1H)，4.97–5.70(m，10H)。
实施例25：制备N-乙基-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺
Figure BDA0002528780430000411
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(304.6mg，0.813mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(286.9mg，0.894mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.884mmol)。搅拌15分钟后向混合物添加乙基胺(2.0M在THF中)(0.80mL，1.60mmol)，且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。将有机相合并，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.186g(56％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.90(t，3H)，0.95(t，3H)，1.13(t，3H)，1.55–1.62(m，2H)，1.64–1.66(m，2H)，1.69–1.69(m，1H)，1.74–1.83(m，1H)，2.01–2.12(m，4H)，2.78–2.84(m，8H)，3.25–3.34(m，2H)，3.44(t，2H)，3.64(dd，1H)，5.50-5.13(m，10H)，6.50(s，1H)。
实施例26：制备(2-(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0002528780430000412
在0℃在N2气氛下将二环己基甲烷二亚胺(DCC)(1.73g，8.4mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(HOBt)(1.14g，8.4mmol)添加至2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(3.14g，8.4mmol)在THF(25mL)中的搅拌溶液中。将混合物搅拌20分钟，然后滴加N-Boc-乙二胺(1.12克)在THF(1mL)中的溶液。所得混合物在室温搅拌1.5小时。添加乙醚(200mL)，且将混合物用水、1M HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用25％乙酸乙酯的庚烷溶液(添加0.5％HCOOH)作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到3.0g(83％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：d 0.90(t，3H)，0.96(t，3H)，1.43(s，9H)，1.40–1.80(m，6H)，2.05–2.20(m，4H)，2.75–2.90(m，8H)，3.20–3.60(m，6H)，3.65–3.75(m，1H)，5.02(brs，1H)，5.30–5.45(m，10H)，7.01(br s，1H)。MS(电喷雾)；539[M+Na]+
实施例27：制备N-(2-氨基乙基)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺
Figure BDA0002528780430000421
在N2气氛下在环境温度将(2-(2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(774mg，1.5mmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(2mL)，且将反应在室温搅拌30分钟，然后真空浓缩。将乙醚(50mL)和NaOH(水溶液，1M，50mL)添加至残余物且将混合物剧烈搅拌30分钟。分离相，且有机相用盐水洗涤，干燥(NaSO4)，过滤且真空浓缩以得到560mg(90％)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：d0.85–1.05(2xt，6H)，1.35–1.50(m，2H)，1.55–1.85(m，4H)，2.05–2.20(m，4H)，2.75–2.95(m，8H)，3.10–3.20(m，1H)，3.30–3.80(m，6H)，4.05–4.20(br m，1H)，4.25–4.75(br s，2H)，5.30–5.50(m，10H)。MS(电喷雾)；417[M+H]+，439[M+Na]+
实施例28：制备N-(2-羟基乙基)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺
Figure BDA0002528780430000431
在N2气氛下在室温向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(4.5g，12mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加草酰氯(8.4mL，100mmol)，然后添加2滴DMF。将混合物在室温搅拌30分钟且真空浓缩。在N2气氛下将残余物溶于DCM(100mL)。添加三乙胺(3.34mL，24mmol)，然后添加乙醇胺(1.08mL，18mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。添加水(300mL)且混合物用二氯甲烷萃取两次。合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(50：50→20：80)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到4.6g(92％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：d 0.90–1.05(m，6H)，1.40–1.55(m，2H)，1.60–1.90(m，4H)，2.05–2.20(m，4H)，2.75–2.90(m，8H)，3.05(br s，1H)，3.40–3.55(m，4H)，3.70–3.80(m，3H)，5.30–5.45(m，10H)，7.04(br s，1H)。MS(电喷雾)；440[M+Na]+
实施例29：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)-N-异丙基丁酰胺
Figure BDA0002528780430000432
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(300mg，0.801mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(284mg，0.884mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.884mmol)。在室温在N2气氛下搅拌15分钟后添加异丙基胺(76μL，0,884mmol)且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.207g(59％产率)标题化合物，为油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)d 0.83-0.93(m，3H)，0.95(t，J＝7.5，3H)，1.14(t，J＝6.1，6H)，1.39–1.47(m，2H)，1.56–1.73(m，3H)，1.73–1.83(m，1H)，2.02–2.11(m，4H)，2.80–2.84(m，8H)，3.43(t，J＝6.4，2H)，3.60(dd，J＝6.6，4.4，1H)，4.02–4.11(m，1H)，5.66–5.01(m，10H)，6.33(d，J＝5.9，1H)。
实施例30：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)-N-甲基丁酰胺
Figure BDA0002528780430000441
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(303.6mg，0.811mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(285.3mg，0.889mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.884mmol)。在室温在N2气氛下搅拌15分钟后添加甲基胺(2.0M)在THF(0.8ml，1.600mmol)中的溶液，且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x50mL)萃取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.235g(72％产率)标题化合物，为油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.89(t，J＝7.4，3H)，0.95(t，J＝7.5，3H)，1.37–1.47(m，2H)，1.56–1.72(m，3H)，1.74–1.84(m，1H)，2.01–2.15(m，4H)，2.78–2.84(m，11H)，3.44(t，J＝6.4，2H)，3.66(dd，J＝6.4，4.4，1H)，5.18–5.52(m，10H)，6.51(s，1H)。
实施例31：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)-1-(哌啶-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002528780430000442
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(302.2mg，0.807mmol)和O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(284mg，0.884mmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加三乙胺(123μL，0.884mmol)。在室温在N2气氛下搅拌15分钟后添加哌啶(87μL，0,884mmol)且反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.270g(73％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)d 0.93–0.98(m，6H)1.37–1.46(m，2H)，1.51–1.62(m，8H)，1.66–1.77(m，2H)，2.02–2.09(m，4H)，2.77–2.83(m，8H)，3.30(dt，J＝9.1，6.6，1H)，3.47–3.52(m，2H)，3.54–3.62(m，3H)，3.95(dd，J＝7.9，6.1，1H)，5.02–5.65(m，10H)。
实施例32：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺：
Figure BDA0002528780430000451
向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(320g，854mmol)在甲苯(2500mL)中的溶液中添加草酰氯(276mL，3.15mol)。然后小心滴加DMF(10mL)，然后将混合物在环境温度搅拌1小时且真空浓缩。将残余物溶于DCM(750mL)，且缓慢添加至搅拌、冷却的(0℃)氨溶液(28％，aq.)(528mL，6.84mol)。将混合物在环境温度搅拌30分钟。分离相且水相用甲基叔丁基醚(700mL)萃取。合并的有机相用3M HCl(2x300mL)、饱和NaHCO3水溶液(500mL)、盐水(2x 300mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(70：30→60：40)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到249.8克(76％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)d 0.87–0.92(m，6H)，1.32–1.46(m，2H)，1.52–1.59(m，2H)，1.62–1.79(m，2H)，1.97–2.06(m，4H)，2.68–2.85(m，8H)，3.34–3.51(m，2H)，3.60(dd，J＝6.5，4.5，1H)，5.18–5.42(m，10H)，5.61(s，1H)，6.42(s，1H)。
实施例33：制备N-(叔丁基)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰胺：
Figure BDA0002528780430000452
在室温在N2气氛下向2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(301.3mg，0.804mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(285.6mg，0.889mmol)，然后添加三乙胺(0.123ml，0.885mmol)。在室温在N2气氛下将混合物搅拌15分钟，然后添加2-氨基-2-甲基丙烷(0.10mL，0.952mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NaHCO3水溶液(25mL)，且将混合物用叔丁基甲基醚(2x 50mL)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(95：5→50：50)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到244.1mg(70％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)d 0.89(t，J＝7.4，3H)，0.96(t，J＝7.5，3H)，1.34(s，9H)，1.41–1.46(m，2H)，1.57–1.70(m，3H)，1.74–1.81(m，1H)，2.02–2.11(m，4H)，2.80–2.83(m，8H)，3.27–3.48(m，2H)，3.48–3.56(m，1H)，4.93–5.55(m，10H)，6.38(s，1H)。
实施例34：制备(R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)-N-((R)-1-苯基乙基)丁酰胺
Figure BDA0002528780430000461
在0℃在氮气下向(R)-2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(40mg，0.11mmol)和(R)-1-苯基乙-1-胺(14μL，0.11mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉(14μL，0.13mmol)，然后添加邻-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)(45mg，0.14mmol)。反应混合物在室温在N2气氛下搅拌30分钟。添加水(10mL)，且将混合物用庚烷(10mL)萃取。分离相且水相用庚烷(10mL)萃取，然后用乙醚(10mL)萃取。合并有机物且用饱和NH4Cl水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发以得到标题化合物(20mg0.042mmol，38％产率)，其为油状物。
实施例35：制备2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(2S)-乙酯：
Figure BDA0002528780430000471
将N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)(1.13g，5.5mmol)、羟基苯并三唑(HOBt)(0.74g，5.5mmol)和三乙胺(TEA)(1.58mL，11.4mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(1.87g，5.0mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中，且将混合物搅拌10分钟。添加L-亮氨酸乙酯盐酸盐(0.89g，4.6mmol)且所得混合物搅拌2小时。将混合物真空浓缩，溶于Et2O(100mL)且用1M HCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用10-15％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到1.88g(80％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.05(m，12H)，1.25-1.35(m，3H)，1.45-1.85(m，9H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.40-3.70(m，3H)，4.18(q，2H)，4.55-4.70(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.80-6.95(m，1H)。MS(ESI)：538[M+Na]+.
实施例36：制备(2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸：
Figure BDA0002528780430000472
将LiOH(700mg，29mmol)在水(10mL)中的溶液添加至2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(2S)-乙酯(1.88g，3.65mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中，且将反应混合物在40℃搅拌1小时。将混合物冷却至环境温度且添加3M HCl(aq)，直到pH～2。所得混合物用Et2O萃取两次且将合并的有机相干燥(NaSO4)，过滤且在减压下浓缩以得到1.55g(87％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.05(m，12H)，1.45-1.55(m，2H)，1.65-1.85(m，7H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.65(m，2H)，3.70-3.80(m，1H)，4.55-4.70(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.85-7.00(m，1H)，10.30(br s，1H)。MS(ESI)；510[M+Na]+.
实施例37：制备2-(((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰基)氧基)苯甲酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000481
将2-羟基-苯甲酸叔丁酯(291mg，1.5mmol)、TEA(0.46mL，3.3mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(TBTU)(500mg，1.65mmol)添加至(2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(730mg，1.5mmol)在二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)中的溶液中。反应混合物在65℃加热2小时，冷却至室温且添加Et20(100mL)。分离所得两相且有机相用10％NH4Cl(aq)和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用10％EtOAc在庚烷中的溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到404mg(41％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.05(m，12H)，1.40-1.55(m，2H)，1.57(s，9H)，1.60-1.85(m，6H)，2.00-2.20(m，5H)，2.80-2.90(m，8H)，3.40-3.60(m，2H)，3.70-3.80(m，1H)，4.90-5.05(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，7.10(d，2H)，7.25-7.35(m，1H)，7.50-7.55(m，1H)，7.85-7.95(m，1H)。MS(ESI)：686[M+Na]+.
实施例38：制备2-(((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰基)氧基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000482
在0℃将TFA(1mL)添加至2-(((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰基)氧基)苯甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol)在DCM(4mL)中的溶液中，且将反应混合物搅拌40分钟。添加甲苯(10mL)，且将混合物真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用13％EtOAc(包含0.1％FA)在庚烷(还包含0.1％FA)中的溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩且残余物(100mg)溶于Et2O(50mL)。溶液用饱和NaHCO3(aq)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩以得到60mg所需产物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.05(m，12H)，1.35-2.15(m，13H)，2.75-2.90(m，8H)，3.40-3.60(m，2H)，3.70-3.80(m，1H)，4.85-5.05(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，7.0-7.20(m，2H)，7.25-7.40(m，1H)，7.50-7.65(m，1H)，8.00-8.15(m，1H)。MS(ESI)；630[M+Na]+.HR-MS(ESI)：C37H53NO6+Na的计算值：630.3770，实测值：630.3786.
实施例39：制备(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000491
在0℃将DCC(1.73g，8.4mmol)和HOBt(1.14g，8.4mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(3.14g，8.4mmol)在THF(25mL)中的溶液中，且将混合物搅拌20分钟。滴加N-Boc-乙二胺在THF(1mL)中的溶液且所得混合物在室温搅拌1.5小时。添加Et2O(200mL)，且将混合物用水、1M HCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用25％EtOAc(包含0.5％FA)在庚烷(还包含0.5％FA)中的溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到3.0g(83％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90(t，3H)，0.96(t，3H)，1.43(s，9H)，1.40-1.80(m，6H)，2.05-2.20(m，4H)，2.75-2.90(m，8H)，3.20-3.60(m，6H)，3.65-3.75(m，1H)，5.02(br s，1H)，5.30-5.45(m，10H)，7.01(br s，1H)。MS(ESI)：539[M+Na]+.
实施例40：制备2-羟基-N-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)苯甲酰胺：
Figure BDA0002528780430000492
将TFA(2mL)添加至(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(668mg，1.3mmol)在DCM(8mL)中的溶液中且所得混合物搅拌1.5小时。将混合物真空浓缩以得到N-(2-氨基乙基)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺的TFA盐的粗产物(800mg，MS(ESI)：417[M+H]+，439[M+Na]+)。将残余物溶于DCM(10mL)且添加DCC(320mg，1.55mmol)、TEA(0.36mL，2.6mmol)和HOBt(210mg，1.55mmol)。15分钟后，滴加水杨酸(214mg，1.55mmol)在DCM(1mL)中的溶液且所得混合物搅拌过夜。将混合物浓缩，且将残余物溶于Et2O(100mL)，用水、1M HCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。粗油状物通过快速色谱法纯化，使用4-15％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到110mg(16％产率，经两步)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.89(t，3H)，0.99(t，3H)，1.35-1.50(m，2H)，1.60-1.90(m，4H)，2.05-2.20(m，4H)，2.8-2.9(m，8H)，3.47(t，2H)，3.50-3.70(m，4H)，3.70-3.80(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.85-6.95(m，1H)，6.97(dd，1H)，7.14(br s，1H)，7.35-7.45(m，1H)，7.48(dd，1H)，7.95(br s，1H)，12.51(br s，1H)。MS(ESI)：537[M+H]+，559[M+Na]+.
实施例41：制备2-乙酰氧基苯甲酸2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙酯：
Figure BDA0002528780430000501
将TBTU(0.85g，2.64mmol)和TEA(0.8mL，5.3mmol)添加至乙酰基水杨酸(0.4g，2.4mmol)在DCM(20mL)中的溶液中，且将混合物搅拌10分钟。添加N-(2-羟基乙基)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺(1.0g，1.4mmol)在DCM(10mL)中的溶液且将反应混合物在室温搅拌1小时，然后回流过夜。添加水且所得混合物用DCM萃取两次。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用0-20％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到900mg(65％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.00(m，6H)，1.35-1.50(m，2H)，1.50-1.85(m，4H)，2.00-2.20(m，4H)，2.37(s，3H)，2.75-2.90(m，8H)，3.40-3.55(m，2H)，3.55-3.75(m，3H)，4.15-4.45(m，2H)，5.30-5.50(m，10H)，6.80-95(m，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.30-7.40(m，1H)，7.55-7.65(m，1H)，8.00-8.05(m，1H)。MS(ESI)：602[M+Na]+.
实施例42：制备2-羟基苯甲酸2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙酯：
Figure BDA0002528780430000502
将氨(水溶液，28％，3mL)滴加至2-乙酰氧基苯甲酸2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙酯(390mg，0.67mmol)在2-丙醇(27mL)和水(9mL)中的溶液中，且将混合物搅拌10分钟。添加水且所得混合物用Et2O萃取两次。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用0-20％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到63mg(18％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.91(t，3H)，0.97(t，3H)，1.35-1.45(m，2H)，1.55-1.90(m，4H)，2.00-2.15(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.44(t，2H)，3.65-3.80(m，3H)，4.40-4.50(m，2H)，5.30-5.45(m，10H)，6.85-6.95(m，2H)，6.95-7.05(m，1H)，7.40-7.50(m，1H)，7.80-7.85(m，1H)，10.63(s，1H)。MS(ESI)：560[M+Na]+.
实施例43：制备2-羟基-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)苯甲酸甲酯：
Figure BDA0002528780430000511
将2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(300mg，0.80mmol)、5-氨基水杨酸甲酯(140mg，0.83mmol)和TEA(0.22mL，1.60mmol)溶于MeCN(3mL)。添加HATU(320mg，0.83mmol)，且将反应混合物搅拌过夜。然后将混合物在减压下浓缩，且将残余物在Et2O(30mL)和盐水(20mL)之间区分。水相用Et2O(20mL)萃取且合并的有机相用2MHCl(水溶液，15mL)、饱和NaHCO3(水溶液，15mL)和盐水(15mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用5％EtOAc在庚烷中的溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到320mg(77％产率)标题化合物。MS(ESI)：546[M+Na]+.
实施例44：制备2-羟基-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000512
将2M NaOH(水溶液，6mL)添加至2-羟基-5-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)苯甲酸甲酯(320mg，0.61mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中且反应混合物在50℃加热过夜。将混合物冷却至环境温度且用5M HCl(aq)酸化至pH～2。所得混合物用EtOAc萃取且将有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用1-2％MeOH在EtOAc中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到85mg(27％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.05(t，3H)，1.20-1.30(m，1H)，1.45-1.60(m，2H)，1.65-1.75(m，2H)，1.80-1.95(m，2H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.50-3.65(m，2H)，3.85-3.95(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.90-7.00(m，1H)，7.58(brs，1H)，8.11(br s，1H)，8.40(s，1H)。MS(ESI)：508[M-H]-.
实施例45：制备2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(2S)-乙酯：
Figure BDA0002528780430000521
将DCC(1.13g，5.5mmol)和HOBt(0.74g，5.5mmol)然后是TEA(1.58mL，11.4mmol)相继添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(1.87g，5.0mmol)在THF(20mL)中的溶液中，且将混合物搅拌10分钟。添加L-亮氨酸乙酯盐酸盐(0.89g，4.6mmol)且所得混合物搅拌2小时。添加EtOAc(100mL)，且将混合物用水、1M HCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用10-15％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到1.84g(79％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.05(m，12H)，1.25-1.35(m，3H)，1.40-1.85(m，9H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.75(m，3H)，4.15-4.25(m，2H)，4.55-4.75(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.80-6.95(m，1H)。MS(ESI)：538[M+Na]+.
实施例46：制备(2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸：
Figure BDA0002528780430000522
将1M LiOH(水溶液，28mL)添加至2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(2S)-乙酯(1.79g，3.5mmol)在EtOH(50mL)中的溶液中，且将反应混合物加热至50℃保持2小时。将混合物冷却至环境温度且添加6MHCl(aq)以达到pH～2。所得混合物用Et2O萃取两次且将合并的有机相干燥(NaSO4)，过滤且在减压下浓缩以得到1.61g(95％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.05(m，12H)，1.45-1.55(m，2H)，1.60-1.85(m，7H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.65(m，2H)，3.70-3.80(m，1H)，4.60-4.75(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.90-7.05(m，1H)，10.15(br s，1H)。MS(ESI)：486[M-H]-.
实施例47：制备2-羟基-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)苯甲酸甲酯：
Figure BDA0002528780430000531
在0℃将DCC(248mg，1.2mmol)和HOBt(163mg，1.2mmol)添加至(2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酸(487mg，1.0mmol)在THF(8mL)中的溶液中。滴加5-氨基水杨酸甲酯(201mg，1.2mmol)在THF(1mL)中的溶液且将反应混合物在室温搅拌3小时。添加Et2O(100mL)，且将混合物用水、1M HCl(aq)、饱和NaHCO3(aq)和盐水洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用3-15％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到197mg(31％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.05(m，12H)，1.40-1.50(m，2H)，1.60-1.90(m，7H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.55(m，2H)，3.75-3.80(m，1H)，3.94(s，1H)，4.55-4.65(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.90-7.00(m，2H)，7.45-7.50(m，1H)，8.00-8.10(m，1H)，8.66(s，1H)，10.59(s，1H)。MS(ESI)：659[M+Na]+.
实施例48：制备2-羟基-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000532
将1M LiOH(水溶液，2.5mL)添加至2-羟基-5-((2S)-2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)苯甲酸甲酯(190mg，0.3mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中。反应混合物在50℃加热5小时，然后在室温搅拌3天。将混合物用6M HCl(aq)酸化至pH～2且将大多数溶剂真空去除。残余物用Et2O萃取两次且将合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用5-25％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到100mg(54％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90-1.05(m，12H)，1.40-1.50(m，2H)，1.60-1.90(m，7H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.60(m，2H)，3.80-3.90(m，1H)，4.60-4.75(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.89(d，1H)，7.24(d，1H)，7.70-7.90(m，2H)，9.02(d，1H)，10.37(d，1H)。MS(ESI)：623[M+H]+.
实施例49：制备2-羟基-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酸甲酯：
Figure BDA0002528780430000541
在0℃将双光气(0.16mL，1.3mmol)和二异丙胺(0.16mL，0.96mmol)添加至N-(2-羟基乙基)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺(0.4g，0.96mmol)在DCM(15mL)中的溶液中。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后在室温搅拌2小时。混合物在减压下浓缩，且将残余物悬浮于THF(20mL)。将悬浮液过滤且滤液在减压下浓缩。残余物然后悬浮于Et2O，通过二氧化硅垫过滤且真空浓缩以得到0.66g2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)氯甲酸乙酯粗产物。将残余物溶于DCM(15mL)，且添加5-氨基水杨酸甲酯(0.13g，0.77mmol)和TEA(0.2mL，1.54mmol)。将反应混合物搅拌2小时，然后添加水。所得混合物用DCM萃取两次且将合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用30-50％EtOAc在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到145mg(30％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.00(m，6H)，1.35-1.50(m，2H)，1.50-1.85(m，4H)，2.00-2.20(m，4H)，2.75-2.90(m，8H)，3.40-3.55(m，2H)，3.55-3.75(m，3H)，3.95(s，3H)，4.25-4.35(m，2H)，5.25-5.45(m，10H)，6.68(br s，1H)，6.85-7.00(m，2H)，7.35-7.45(m，1H)，7.91(br s，1H)，10.57(s，1H)。MS(ESI)：633[M+Na]+.
实施例50：制备2-羟基-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000551
将1M LiOH(水溶液，1.9mL)添加至2-羟基-5-(((2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙氧基)羰基)氨基)苯甲酸甲酯(145mg，0.24mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中且混合物在50℃加热过夜。反应混合物用1M HCl(aq)酸化至pH～2，然后用Et2O萃取两次。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用20％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的溶液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩。残余物(46mg)进一步通过制备型HPLC纯化，使用30-95％MeCN在水(包含5％MeCN and 0.01％TFA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩，且将残余物溶于甲苯。浓缩溶液得到24mg(17％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.91-1.01(m，6H)，1.35-1.50(m，2H)，1.55-1.90(m，4H)，2.05-2.15(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.45-3.55(m，2H)，3.65-3.75(m，2H)，3.75-3.85(m，1H)，4.25-4.35(m，2H)，5.30-5.45(m，10H)，6.90-7.00(m，2H)，7.00-7.10(m，1H)，7.63(br s，1H)，7.83(s，1H)，10.43(br s，1H)。MS(ESI)：597[M+H]+.
实施例51：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)-N-(2-异氰酸基乙基)丁酰胺：
Figure BDA0002528780430000552
将1,8-二(二甲基氨基)萘(577mg，2.7mmol)添加至N-(2-氨基乙基)-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺(560mg，1.35mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，且将混合物冷却至0℃。滴加氯甲酸三氯甲酯(98μL，0.81mmol)，然后移除冷却浴且将混合物搅拌15分钟。添加1M HCl(水溶液，30mL)和DCM(30mL)。分离所得两相且有机相用1M HCl(aq)洗涤4次且用1M NaOH(aq)洗涤1次，干燥(NaSO4)，过滤且在减压下浓缩以得到500mg(84％产率)标题化合物的粗产物。MS(ESI)：465[M+Na]+.
实施例52：制备2-羟基-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)脲基)苯甲酸甲酯：
Figure BDA0002528780430000561
将5-氨基水杨酸甲酯(189mg，1.13mmol)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)-N-(2-异氰酸基乙基)丁酰胺(500mg，1.13mmol)在DCM(5mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌2小时，然后真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用40-0％庚烷在EtOAc中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到230mg(33％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.85-1.05(2x t，6H)，1.35-1.50(m，2H)，1.55-1.85(m，4H)，2.05-2.20(m，4H)，2.75-2.95(m，8H)，3.35-3.50(m，6H)，3.65-3.75(m，1H)，3.94(s，3H)，5.30-5.50(m，10H)，6.95(d，1H)，7.10(br s，1H)，7.40(dd，1H)，7.88(d，1H)，10.62(s，1H)。MS(ESI)；632[M+Na]+.
实施例53：制备2-羟基-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)脲基)苯甲酸：
Figure BDA0002528780430000562
将1M LiOH(水溶液，2.9mL)滴加至2-羟基-5-(3-(2-(2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酰胺基)乙基)脲基)苯甲酸甲酯(220mg，0.36mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中且混合物在50℃加热过夜。将混合物冷却至环境温度，然后用6M HCl(aq)酸化至pH～2。所得混合物用EtOAc萃取两次且合并的有机相用盐水洗涤，干燥(NaSO4)，过滤且在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，使用5-40％EtOAc(包含5％FA)在庚烷(还包含5％FA)中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到92mg(43％产率)标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.91(t，3H)，0.98(t，3H)，1.40-1.50(m，2H)，1.60-1.90(m，4H)，2.05-2.20(m，4H)，2.80-2.90(m，8H)，3.40-3.60(m，6H)，3.75-3.80(m，1H)，5.30-5.45(m，10H)，6.90(d，1H)，7.25-7.35(m，1H)，7.45-7.55(m，1H)，7.80-7.95(m，2H)，10.56(br s，1H)。MS(ESI)：596[M+H]+，618[M+Na]+.
实施例54：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丙酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000571
将(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇，(1.00g，3.47mmol)、四丁基氯化铵(0.24g，0.87mmol)和2-溴丙酸叔丁酯(3.62g，17.3mmol)的混合物溶于甲苯(36mL)且置于氮气下。在剧烈搅拌下缓慢添加氢氧化钠水溶液(50％，8mL)，且所得混合物在环境温度搅拌20小时。添加水且将混合物用醚萃取三次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用2％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到1.40g(90％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.95(t，3H)，1.41(d，3H)，1.48(s，9H)，1.48-1.66(m，4H)，2.05(m，4H)，2.83(m，8H)，3.35(m，1H)，3.55(m，1H)，3.79(q，1H)，5.32-5.44(m，10H)。
实施例55：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丙酸：
Figure BDA0002528780430000572
在氮气下将三氟乙酸(2mL)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)丙酸酯(1.40g，3.36mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，且将反应混合物在室温搅拌3小时。添加乙醚(50mL)且有机相用水(30mL)洗涤，干燥(Na2SO4)且浓缩。将残余物进行快速硅胶色谱法，使用极性渐增的庚烷、乙酸乙酯和甲酸(95：5：0.25->80：20：1)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.67g稍微不纯的产物。将该材料溶于庚烷(15mL)，用水(5mL)洗涤三次，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩以得到0.50g(41％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.99(t，3H)，1.40-1.48(m，5H)，1.67(m，2H)，2.09(m，4H)，2.80-2.60(m，8H)，3.53(m，2H)，4.01(q，1H)，5.31-5.47(m，10H)；MS(电喷雾)：359.2[M-H]-.
实施例56：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000573
将(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇，(0.83g，3.14mmol)、四丁基氯化铵(0.24g，0.85mmol)和2-溴异丁酸叔丁酯(3.50g，15.7mmol)的混合物溶于甲苯(15mL)且置于氮气下。在室温剧烈搅拌下缓慢添加氢氧化钠水溶液(50％，5mL)。所得混合物加热至60℃且搅拌6小时。将混合物冷却，添加水且用醚萃取三次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用5-10％乙酸乙酯在庚烷中的梯度溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.60g(44％产率)标题化合物，为油状物。MS(电喷雾)：453.3[M+Na]+.
实施例57：制备2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)-2-甲基丙酸：
Figure BDA0002528780430000581
在氮气下将三氟乙酸(5mL)添加至2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯基氧基)-2-甲基丙酸叔丁酯(600mg，1.39mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，且将反应混合物在室温搅拌2小时。添加水且水相用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用庚烷、乙酸乙酯和甲酸(80：20：1)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩且残余物(135mg)进一步通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用5-10％乙酸乙酯和甲酸的混合物(95：5)在庚烷中的梯度液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到80mg稍微不纯的产物。将该材料溶于庚烷(5mL)，用水(5mL)洗涤两次，干燥(Na2SO4)，过滤且浓缩以得到40mg(8％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.99(t，3H)，1.47(s，6H)，1.64(m，2H)，2.07(m，4H)，2.81-2.88(m，8H)，3.46(t，2H)，5.29-5.44(m，10H)；MS(电喷雾)：373.3[M-H]-.
实施例58：制备2-乙基-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸叔丁酯：
Figure BDA0002528780430000582
在-70℃在氮气下将2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸叔丁酯(480mg，1.11mmol)经30分钟滴加至二异丙基胺锂(LDA)(2.0M，750μL，1.50mmol)在无水四氢呋喃(10mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌30分钟。一次性添加碘乙烷(312mg，2.00mmol)，且所得混合物在1小时内温热至环境温度。将反应混合物在环境温度搅拌17小时。将混合物倒入饱和NH4Cl(aq.)(50mL)且用庚烷(2x 50mL)萃取。合并的有机相用盐水(50mL)、0.25M HCl(50mL)和盐水(50mL)连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(100：0->95：5)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到343mg(67％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCI3)：δ0.84(t，6H)，0.99(td，3H)，1.35-1.55(m，11H)，1.54-1.69(m，2H)，1.68-1.87(m，4H)，1.99-2.24(m，4H)，2.74-2.99(m，8H)，3.31(t，2H)，5.23-5.52(m，10H)；MS(电喷雾)：401.3[M-1]-.
实施例59：制备2-乙基-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸：
Figure BDA0002528780430000591
将甲酸(5ml)和2-乙基-2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸叔丁酯(250mg，0.55mmol)的混合物在氮气下在室温剧烈搅拌4.5小时。真空去除甲酸。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯(100：0->80：20)的混合物作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到163mg(74％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.86(t，6H)，0.99(t，3H)，1.36-1.57(m，2H)，1.68(dd，2H)，1.73-1.98(m，4H)，2.11(tt，4H)，2.70-3.01(m，8H)，3.39(t，2H)，5.20-5.56(m，10H)。MS(电喷雾)：481.4[M+Na]+.
实施例60：制备2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯
步骤a)(8Z,11Z,14Z,17Z)-5,6-二羟基二十碳-8,11,14,17-四烯酸
Figure BDA0002528780430000592
将6-((3Z,6Z,9Z,12Z)-1-碘代十五碳-3,6,9,12-四烯-1-基)四氢-2H-吡喃-2-酮(12.5g，29,2mmol)和KOH(5.73g，102mmol)在MeOH(150mL)和水(7.5mL)的混合物中的溶液在60℃在氮气下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，用2M HCl(aq.)酸化且用EtOAc(300mL)萃取。有机层用水(300mL，含有一些盐水)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩得到9.8克(100％产率)，其为油状物。
步骤b)(3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-醇
Figure BDA0002528780430000601
在0℃在氮气下将高碘酸钠(9,34g，43,7mmol)添加至(8Z,11Z,14Z,17Z)-5,6-二羟基二十碳-8,11,14,17-四烯酸(9.8g，29.1mmol)在THF：水(150mL)中的溶液中且搅拌1小时。反应混合物用EtOAc(300mL)萃取。分离有机层且用稀盐水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。将残余物溶于MeOH(100ml)且冷却至0℃。小心分批添加NaBH4(3.31g，87mmol)，且将混合物在0℃搅拌30分钟。小心添加水(300mL)，且将混合物用EtOAc(2′200mL)萃取。合并有机相且用水洗涤(200mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用20％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到4.06g(63％产率)标题化合物，为油状物.
1H NMR(400MHz，CDCl3)d 0.91(t，3H)，1.97–2.05(m，2H)，2.27-2.32(m，2H)，2.73-2.81(m，6H)，3.57-3.62(m，2H)，5.17–5.41(m，7H)，5.42–5.56(m，1H)。
步骤c)2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯
Figure BDA0002528780430000602
在环境温度在氮气下将四丁基氯化铵(0.10g，0.33mmol)添加至((3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-醇(0.22g，1.00mmol)在甲苯(10ml)中的溶液中，然后添加2-溴丁酸叔丁酯(1.11g，5.00mmol)。在室温剧烈搅拌下添加氢氧化钠水溶液(50％(w/w)，4mL)。所得混合物加热至50℃且搅拌2小时，然后在环境温度搅拌过夜。冷却至室温后，添加水且水相用乙醚萃取。分离相且水相用乙醚再萃取两次。合并有机相且用水洗涤，然后用盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用5％乙酸乙酯的庚烷溶液作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.30g(83％)标题化合物，为油状物。
实施例61：制备2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000611
在氮气下将三氟乙酸(2ml)添加至2-(((3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯在二氯甲烷(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后添加水且水相用二氯甲烷萃取两次。合并有机相且用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用5％乙酸乙酯的庚烷溶液(添加1％HCOOH)作为洗脱液。将合适的级分浓缩得到0.18g(71％产率)标题化合物，为油状物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ0.90–1.05(2x t，6H)，1.75–1.90(m，2H)，2.05–2.15(m，2H)，2.30–2.50(m，2H)，2.85(m，6H)，3.60(m，2H)，3.85(t，1H)，5.25–5.60(m，8H)。
实施例62：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-十九碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000612
步骤1：
将十碳-2,5,8-三炔-1-醇(0.94g，6.43mmol)在THF(100ml)中的溶液冷却至0℃，添加至甲磺酰氯(720μL，9.24mmol)，然后经15分钟滴加TEA(1.97mL，14.13mmol)。将混合物在0℃搅拌2小时。然后将混合物倒入水：冰1：1(200克)中，且用乙醚(2x 100)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3(aq.)(200mL)、水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发以得到粗产物，其进一步通过干-快速柱在硅胶上纯化。使用庚烷收集级分1-3，使用EtOAc：庚烷(2.5：100)收集级分4-6，使用EtOAc：庚烷(5：100)收集级分7-10，且使用EtOAc收集级分11。将合适的级分汇集且浓缩以得到1.07g(4.77mmol，74.1％产率)甲磺酸壬-2,5,7-三炔-1-酯。
步骤2：
向用无水THF(25mL)稀释的乙基溴化镁(4.00mL，12.00mmol)的室温溶液，经20分钟分批添加炔丙醇溶液(0.35mL，5.99mmol)。将反应混合物回流90分钟，然后经30分钟冷却至0℃。添加催化量的溴代(二甲基硫化)铜(I)(330mg，1.605mmol)且移除冷却浴。搅拌15分钟后，经5分钟滴加通过加热溶于THF(5ml)的甲磺酸壬-2,5,7-三炔-1-酯(1.05g，4.68mmol)。将反应混合物加热至回流且在回流搅拌过夜。将反应冷却至环境温度且通过小心添加50mL饱和NH4Cl水溶液淬灭。所得混合物转移至包含乙醚(100mL)的分离漏斗。分离有机相且水相用乙醚萃取两次(2x 100mL)。合并的有机相用盐水洗涤(50mL)且干燥(Na2SO4)。残余物真空浓缩，然后通过快速色谱法在硅胶上纯化。将合适的级分汇集且浓缩以得到0.49g(2.65mmol，56.6％产率)十二碳-2,5,8,10-四炔-1-醇。
步骤3：
在氮气下向冷却至0℃的十二碳-2,5,8,10-四炔-1-醇(465mg，2,52mmol)在THF(30ml)中的溶液中，添加甲磺酰氯(0.256ml，3.28mmol)，然后经15分钟滴加TEA(0.704ml，5.05mmol)。将混合物在0℃搅拌1小时。然后将混合物倒入水：冰(1：1)(100克)中，且用乙醚(2x 100mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3(aq.)(200mL)、水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空蒸发以得到622mg粗产物，其进一步通过干-快速柱纯化。使用庚烷收集级分1-3，用EtOAc：庚烷(2.5：100)收集级分4-6使，用EtOAc：庚烷(5：100)收集级分7-10，且使用EtOAc收集级分11。将合适的级分汇集且浓缩以得到466mg(1.78mmol，70.4％产率)甲磺酸十三碳-2,5,8,11-四炔-1-酯。
步骤4：
向碳酸铯(553mg，1.696mmol)、碘化钠(280mg，1.866mmol)和碘化铜(I)(323mg，1.696mmol)在DMF(无水)(15ml)中的溶液/悬浮液中添加己-5-炔酸乙酯(262mg，1.866mmol)在DMF(无水)(5ml)中的溶液。混合物在室温在氮气氛下搅拌40分钟。添加甲磺酸十三碳-2,5,8,11-四炔-1-酯(445mg，1.696mmol)在DMF(无水)(5ml)中的溶液且将混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NH4Cl(200ml)，且将混合物用EtOAc：庚烷(1：1，3x150 ml)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(200ml)，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱液，起始于2％EtOAc在庚烷中的溶液。将合适的级分汇集且浓缩以得到51mg(0.166mmol，9.8％产率)十九碳-5,8,11,14,17-五炔酸乙酯。
步骤5：
将十九碳-5,8,11,14,17-五炔酸乙酯(60mg，0.196mmol)在庚烷(10ml)和甲苯(15mL)中的溶液用N2-气鼓泡，然后在N2-气氛添加喹啉(10μL，0.084mmol)和Lindlar催化剂(50mg，0.023mmol)。将悬浮液在H2气氛(1atm)搅拌15小时。反应混合物通过硅藻土过滤且真空蒸发。粗物质通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用2％EtOAc在庚烷中的混合物作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩以得到十九碳-5,8,11,14,17-五烯酸(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-乙酯(24.6mg，0.078mmol，39.7％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ1.27(t，2H)，1.59–1.70(m，2H)，1.72(s，0H)，2.31(d，1H)，2.72–2.95(m，3H)，4.15(d，1H)，5.40(dq，4H)。
步骤6：
向在0℃冷却的十九碳-5,8,11,14,17-五烯酸(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-乙酯(22mg，0.070mmol)在四氢呋喃(5ml)中的溶液中一次性添加LAH(8mg，0.211mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌90分钟。反应混合物倒入饱和NH4Cl(aq.)(10mL)和冰(10g)上且混合物使用10％HCl(aq.)酸化至pH～1-2。将混合物用Et2O(25ml)萃取两次，且合并的有机层用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩以得到(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-十九碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(15.5mg，0.056mmol，81％产率)，其为油状物。
步骤7：
将2-溴丁酸(100mg，0.599mmol)添加至(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-十九碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(8mg，0.029mmol)在四氢呋喃(10ml)中的溶液中。将混合物冷却至5℃，然后经5分钟滴加叔丁醇钠(500μl，0.678mmol)在叔丁基甲基醚(30ml)中的17％(w/w)溶液中。3小时后，添加额外的叔丁醇钠(100μL 0,136mmol)，且将反应混合物再搅拌3小时。反应通过添加甲酸(0.100ml，2.61mmol)和水(10ml)淬灭，且所得混合物用叔丁基甲基醚(30ml)萃取。有机相用水(4x10 ml)洗涤4次，干燥(MgSO4)，过滤且真空蒸发。将浓缩物溶于Me-THF(50ml)，且用饱和NH4Cl水溶液(20ml)洗涤4次。有机相干燥(MgSO4)，过滤且真空蒸发以得到2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-十九碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(6mg，0.017mmol，57.1％)，其为油状物。HRMS(电喷雾)，[M-H]-：计算值：359.2586，实测值：359.2578.
实施例63：制备2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000641
向(6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯-1-醇(90mg，0.343mmol)在甲苯(3mL)中的溶液中添加四丁基氢氧化铵(TBAOH)(2mg，0.008mmol)、2-溴丁酸叔丁酯(190mg，0.819mmol)和NaOH(50w/w％，1mL)，且将混合物在45℃搅拌3小时。向反应混合物添加更多2-溴丁酸叔丁酯(190mg，0.819mmol)，且将反应混合物在45℃搅拌24小时。将混合物冷却至室温且用Et2O萃取两次(2x 30mL)。合并的有机萃取物用水(3x25 mL)和盐水(25mL)洗涤，过滤且真空蒸发以得到2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯的粗产物。将2-(((6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯的粗产物溶于甲酸(FA)(5mL)，且所得溶液在室温搅拌3h。将混合物在25℃真空浓缩，且将残余物溶于EtOAc(30mL)。溶液用水(4x25 mL)洗涤，用EtOAc(20mL)稀释且干燥(MgSO4)。真空去除溶剂且粗产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，使用极性渐增的庚烷和丙酮(1：0→5：1)的混合物作为洗脱液。将级分汇集且真空蒸发。将残余物溶于FA(5mL)且在室温搅拌3h，然后真空蒸发溶剂。向残余物添加EtOAc(30mL)，用水(4x25 mL)、盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)且真空蒸发。残余物通过制备型HPLC纯化，使用85％MeCN的水溶液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩。将残余物溶于EtOAc，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。将产物溶于Et2O且真空浓缩以得到10mg(8％产率)标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.09–0.81(m，6H)，1.41(dt，4H)，1.67(d，2H)，1.97–1.74(m，2H)，2.10(t，4H)，2.84(q，6H)，3.55–3.42(m，1H)，3.65–3.54(m，1H)，3.88(dd，4.8Hz，1H)，5.53–5.25(m，8H)。HRMS(电喷雾)，[M-H]-：计算值：347.2592，实测值：347.2576.
实施例64：制备2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-十九碳-4,7,10,13,16-五烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000642
步骤1：
向(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-十九碳-4,7,10,13,16-五烯-1-醇(446mg，1.625mmol)和2-溴丁酸叔丁酯(501mg，2.246mmol)在甲苯(5ml)中的溶液中添加四丁基硫酸氢铵(102mg，0.300mmol)。在搅拌下添加氢氧化钠(2,5mL，46.9mmol)，且反应直接温热至50℃。1小时后，添加额外2-溴丁酸叔丁酯(533mg，2.389mmol)，且将反应再静置3小时，然后在搅拌下冷却过夜。添加Et2O(50mL)且形成乳液。添加饱和NH4Cl(aq.)(50mL)，且将混合物震摇。分离相，且水相用Et2O(50mL)萃取。合并的有机相用5％(w/w)NaOH(aq.)(2x 50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且蒸发。残余物在真空管路干燥5天，然后用庚烷(1mL)稀释且使用硅胶(5克)通过干-快速柱纯化，用以下洗脱：2x50mL庚烷，然后是6x50mL庚烷：EtOAc(95：5)的混合物。总共8个级分。收集级分3-4以在蒸发后得到2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-十九碳-4,7,10,13,16-五烯基氧基)丁酸叔丁酯(455mg，1.092mmol，67.2％产率)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ0.98(td，6H)，1.49(s，9H)，1.57–1.84(m，4H)，2.00–2.28(m，4H)，2.74–2.94(m，8H)，3.33(dt，1H)，3.50–3.70(m，2H)，5.24–5.50(m，10H)。
步骤2：
将2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-十九碳-4,7,10,13,16-五烯基氧基)丁酸叔丁酯(373mg，0.895mmol)在HCOOH(10mL)中的混合物剧烈搅拌2.5小时。在总共3小时反应时间后将混合物浓缩，用乙酸乙酯(50mL)稀释且用水洗涤(3x 50mL)以得到水相中的中性pH。有机相干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。通过干-快速柱使用硅胶(8g)纯化，且用庚烷：EtoAc 90：10(3x 30mL)洗脱，然后用80：20(7x 50mL)洗脱。收集级分4-6且真空浓缩以得到2-((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-十九碳-4,7,10,13,16-五烯基氧基)丁酸(122mg，0.338mmol，37.8％产率)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ1.00(td，2.6Hz，6H)，1.62–1.79(m，2H)，1.79–1.92(m，2H)，1.99–2.13(m，2H)，2.19(dd，2H)，2.85(dtd，8H)，3.47–3.67(m，2H)，3.88(dd，1H)，5.31–5.47(m，10H)。HRMS(电喷雾)，[M-H]-：计算值：359.2586，实测值：359.2590.
实施例65：制备2-(((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000661
步骤1：
向碳酸铯(2.67g，8.20mmol)、NaI(1.23g，8.20mmol)和碘化铜(I)(1.56g，8.20mmol)在DMF(20ml)中的溶液中添加壬-8-炔酸甲酯(1.38g，8.20mmol)在DMF(5ml)中的溶液。混合物在室温在氮气氛下搅拌40分钟。添加甲磺酸壬-8-烯-2,5-二炔-1-酯(1.74g，8.20mmol)在DMF(5ml)中的溶液且混合物在室温搅拌过夜。添加饱和NH4Cl(200ml)，且将混合物用EtOAc：庚烷(1：1，3x150 ml)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(100ml)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速色谱法(庚烷/EtOAc 92/8)得到十八碳-17-烯-8,11,14-三炔酸甲酯(1.43g，5.03mmol，61.3％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.80–5.67(m，1H)，5.29–5.18(m，1H)，5.08–4.99(m，1H)，3.60(s，3H)，3.15–3.09(m，2H)，3.09–3.05(m，2H)，2.93–2.85(m，2H)，2.24(t，2H)，2.11–2.05(m，2H)，1.60–1.52(m，2H)，1.46–1.38(m，2H)，1.35–1.23(m，4H)。MS(电喷雾)：307.1[M+Na]+.
步骤2：
在N2气氛下将Lindlar催化剂(1.063g，0.499mmol)在庚烷(15ml)中的悬浮液添加至喹啉(0.177ml，1.498mmol)和十八碳-17-烯-8,11,14-三炔酸甲酯(1.42g，4.99mmol)在庚烷(5ml)中的溶液中。将混合物在H2气氛(1atm)搅拌过夜。将混合物过滤且真空浓缩。快速色谱法(庚烷/EtOAc 98.5/1.5)得到十八碳-8,11,14,17-四烯酸(8Z,11Z,14Z)-甲酯(0.830g，2.86mmol，57.2％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.84–5.65(m，1H)，5.43–5.19(m，6H)，5.05–4.85(m，2H)，3.60(s，3H)，2.81–2.68(m，6H)，2.23(t，2H)，2.02–1.92(m，2H)，1.59–1.52(m，2H)，1.34–1.18(m，6H)。MS(电喷雾)：313.2[M+Na]+.
步骤3：
在N2气氛下将十八碳-8,11,14,17-四烯酸(8Z,11Z,14Z)-甲酯(830mg，2.86mmol)在THF(2ml)中的溶液滴加至LAH(114mg，3.00mmol)在THF(10ml)中的冷却的(0℃)悬浮液中。将混合物在0℃搅拌40分钟且小心倒入冷却的饱和NH4Cl(20mL)中。水层用HCl(2M)酸化至pH～2。分离相，且水相用庚烷(3x20 ml)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(20mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩以得到(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-醇(730mg，2.78mmol，97％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.84–5.66(m，1H)，5.43–5.20(m，6H)，5.03–4.82(m，2H)，3.57(t，2H)，2.84–2.62(m，6H)，2.06–1.90(m，4H)，1.58–1.42(m，3H)，1.33–1.20(m，6H)。MS(电喷雾)：285.1[M+Na]+.
步骤4：
在N2气氛下将NaOH溶液(2ml，37.9mmol)缓慢添加至(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-醇(720mg，2.74mmol)、2-溴丁酸叔丁酯(918mg，4.12mmol)和四丁基硫酸氢铵(279mg，0.823mmol)在甲苯(8ml)中的剧烈搅拌的溶液中。混合物在加热40℃过夜。在5小时和24小时后添加额外2-溴丁酸叔丁酯(306mg，1.372mmol)两次。48小时后将混合物冷却至5-10℃且添加饱和NH4Cl(20ml)。分离相，且水相用EtOAc(50ml)萃取。合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速色谱法(庚烷/EtOAc99/1)得到2-(((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯(675mg，1.668mmol，60.8％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.86–5.65(m，1H)，5.41–5.21(m，6H)，5.04–4.83(m，2H)，3.57–3.46(m，2H)，3.30–3.19(m，1H)，2.81–2.68(m，6H)，2.02–1.89(m，4H)，1.71–1.60(m，2H)，1.54–1.50(m，2H)，1.41(s，12H)，1.32–1.20(m，8H)，0.89(t，3H)。
步骤5：
在40℃在N2气氛下将2-(((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯(675mg，1.668mmol)在HCOOH(6.75ml，179mmol)中的溶液搅拌21hrs。反应混合物在减压下蒸发且通过制备型HPLC纯化，用具有0.02％HCOOH的CH3CN：H2O-90：10洗脱。包含纯的产物的prep-级分在减压下蒸发以去除CH3CN。向残余物添加叔丁基甲基醚和盐水且分离相。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且在减压下蒸发以得到2-((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14,17-四烯-1-基氧基)丁酸(163mg，0.464mmol，27.8％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.89-5.70(m，1H)，5.51-5.22(m，6H)，5.00(dd，2H)，3.84(t，1H)，3.62-3.38(m，2H)，2.79(m，6H)，2.12-1.95(m，2H)，1.88-1.75(m，2H)，1.64-1.58(m，2H)，1.31(s，8H)，0.96(t，3H)。HRMS(电喷雾)[M-H]-：计算值：347.2586，实测值：347.2589.
实施例66：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-十九碳-5,8,11,14-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000681
步骤1：
在氮气氛下将十九碳-5,8,11,14-四烯酸(5Z,8Z,11Z,14Z)-乙酯(21g，65.9mmol)在THF(50ml)中的溶液经15分钟滴加至LAH(2.503g，65.9mmol)在无水THF(300ml)中的冷却的(0℃)悬浮液中。在0℃将混合物搅拌1小时，且小心倒入冷却的饱和NH4Cl(300mL)中。水层用HCl(2M)酸化至pH～2。分离相，且水相用庚烷(2x 250mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(300mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩以得到(5Z,8Z,11Z,14Z)-十九碳-5,8,11,14-四烯-1-醇(17.9g，64.7mmol，98％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.46–5.11(m，8H)，3.68–3.57(m，2H)，2.89–2.69(m，6H)，2.12-1.98(m，4H)，1.62-1.51(m，2H)，1.47–1.23(m，6H)，0.91-0.85(m，3H)。
步骤2：
向(5Z,8Z,11Z,14Z)-十九碳-5,8,11,14-四烯-1-醇(17.9g，64.7mmol)在THF(350ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(10.35ml，97mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经25分钟添加叔丁醇钠(17.42g，181mmol)的溶液(17％在MTBE中(120mL))，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(2.489g，25.9mmol)(17％在MTBE中(25mL))。在8-10℃将混合物搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(6.90ml，64.7mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(4.98g，51.8mmol)(17％在MTBE中(40mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(2.489g，25.9mmol)(17％在MTBE中(25mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。添加HCOOH(3mL)，然后添加2M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x 300mL)萃取。合并的有机相用水(300mL)、饱和NaHCO3(4x200ml)和盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化(庚烷/EtOAc/HCOOH 90/10/0.5)，且将合适的级分汇集且真空浓缩。残余物然后进一步通过制备型HPLC纯化，使用88％MeCN(包含0.02％HCOOH)在水(包含10％MeCN和0.02％HCOOH)中的溶液作为洗脱液。去除溶剂以生成10.16g2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-十九碳-5,8,11,14-四烯-1-基)氧基)丁酸(26.8mmol，41.5％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.93(s，1H)，5.51–5.21(m，8H)，3.84-3.80(m，1H)，3.62-3.54(m，1H)，3.50–3.39(m，1H)，2.96–2.61(m，6H)，2.12-2.01(m，4H)，1.90–1.71(m，2H)，1.69–1.57(m，2H)，1.49–1.37(m，2H)，1.36–1.23(m，4H)，0.97(t，3H)，0.91–0.84(m，3H)。MS(电喷雾)：361.2[M-H]-.
实施例67：制备2-(((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000691
步骤1
在氮气氛下在环境温度向Cs2CO3(106g，326mmol)、碘化钠(44.8g，299mmol)和碘化铜(I)(56.9g，299mmol)在DMF(750ml)中的搅拌溶液中添加壬-8-炔酸乙酯(49.5g，272mmol)，然后添加1-溴壬-2,5-二炔(54.1g，272mmol)。将混合物在环境温度搅拌过夜且倒入饱和NH4Cl(600mL)中。将混合物用MTBE(3x300mL)萃取且合并的有机相用盐水洗涤(400mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速色谱法(庚烷/EtOAc 95/5-92/8-90/10)得到十八碳-8,11,14-三炔酸乙酯(52.8g，176mmol，64.7％产率)，其为油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.09(q，2H)，3.15–3.06(m，4H)，2.26(t，2H)，2.15–2.06(m，4H)，1.63-1.56(m，2H)，1.53-1.42(m，4H)，1.40–1.26(m，4H)，1.22(t，3H)，0.93(t，3H)。MS(电喷雾)：323.2[M+Na]+.
步骤2：
在H2气氛(1atm)在室温向乙酸镍、4-水合物(7.67ml，55.4mmol)在无水EtOH(150ml)中的搅拌溶液中添加固体NaBH4(2.097g，55.4mmol)。所得悬浮液搅拌30分钟，然后添加乙二胺(12.38ml，185mmol)。完成添加后，将悬浮液再搅拌15分钟，然后添加十八碳-8,11,14-三炔酸乙酯(11.1g，36.9mmol)在无水EtOH(50ml)中的溶液。反应混合物在室温在H2(1atm)下搅拌3晚。添加乙醚(500mL)以稀释反应混合物，且然后将所得混合物穿过短硅胶柱。将滤液真空浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(庚烷/EtOAc 98/2)以得到(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯酸乙酯(10g，32.6mmol，88％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.46–5.23(m，6H)，4.10(q，2H)，2.87–2.67(m，3H)，2.26(t，2H)，2.07-1.97(m，4H)，1.66–1.55(m，2H)，1.41–1.18(m，11H)，0.91-0.84(m，3H)。
步骤3：
在氮气下将(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯酸乙酯(24.6g，80mmol)在THF(50ml)中的溶液经15分钟滴加至LAH(3.05g，80mmol)在无水THF(300ml)中的冷却的(0℃)悬浮液中。将混合物在0℃搅拌1小时。将混合物小心倒入冷却的饱和NH4Cl(300mL)中。水层用HCl(2M)酸化至pH～2。分离相，且水相用庚烷(2x 250mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(300mL)，干燥(Na2SO4)且过滤且真空浓缩以得到(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯-1-醇(20.7g，78mmol，98％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.49–5.23(m，6H)，3.61(t，2H)，2.86–2.67(m，4H)，2.11–1.92(m，4H)，1.59-1.49(m，2H)，1.43–1.21(m，10H)，0.94–0.83(m，3H)。
步骤4：
向(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯-1-醇(20.7g，78mmol)在THF(350ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(12.51ml，117mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经15分钟添加叔丁醇钠(21.06g，219mmol)的溶液(17％在MTBE中(130mL))，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(3.01g，31,3mmol)(17％在MTBE中(25mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(8.34ml，78mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(6.02g，62.6mmol)(17％在MTBE中(40mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(3.01g，31.3mmol)(17％在MTBE中(25mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。
添加HCOOH(3mL)，然后添加2M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x300mL)萃取。合并的有机相用水(300mL)、饱和NaHCO3(4x200 ml)和盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化(庚烷/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)，且将合适的级分汇集且真空浓缩。残余物然后进一步通过制备型HPLC纯化，使用88％MeCN(包含0.02％HCOOH)在水(包含10％MeCN和0.02％HCOOH)中的溶液作为洗脱液。去除溶剂以生成10.55g 2-(((8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯-1-基)氧基)丁酸(28.8mmol，36.8％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.70(s，1H)，5.47–5.25(m，6H)，3.85-3.81(m，1H)，3.60-3.52(m，1H)，3.49-3.42(m，1H)，2.87–2.68(m，4H)，2.10–1.94(m，4H)，1.89–1.69(m，2H)，1.66–1.54(m，2H)，1.43–1.24(m，10H)，0.96(t，3H)，0.89(t，3H)。MS(电喷雾)：349.2[M-H]-.
实施例68：制备2-(((9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000711
向(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯-1-醇(29.6g，112mmol)在THF(400ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(17.89ml，168mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经5分钟添加叔丁醇钠(30.1g，313mmol)的溶液(17％在MTBE(180mL)中)，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(4.30g，44.8mmol)(17％在MTBE中(30mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(11.93ml，112mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(8.61g，90mmol)(17％在MTBE中(55mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(4.30g，44.8mmol)(17％在MTBE中(30mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。
添加HCOOH(3mL)，然后添加2M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x300mL)萃取。合并的有机相用水(300mL)、饱和NaHCO3(4x200 ml)和盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法(庚烷/EtOAc/HCOOH 90/10/0.5)在硅胶上纯化。将合适的级分汇集且真空浓缩以生成2-(((9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯-1-基)氧基)丁酸(28g，78mmol，69.9％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.07(s，1H)，5.48–5.16(m，6H)，3.84-3.80(m，1H)，3.60-3.53(m，1H)，3.48-3.40(m，1H)，2.87–2.70(m，4H)，2.12–1.97(m，4H)，1.91–1.70(m，2H)，1.66–1.53(m，2H)，1.38-1.27(m，10H)，0.99-0.93(m，6H)。MS(电喷雾)：373.3[M+Na]+.
实施例69：制备2-(((6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000712
向(6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯-1-醇(29.6g，112mmol)在THF(400ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(17.89ml，168mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经25分钟添加叔丁醇钠(30.1g，313mmol)的溶液(17％在MTBE(180mL)中)，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(4.30g，44.8mmol)(17％在MTBE中(30mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(11.93ml，112mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(8.61g，90mmol)(17％在MTBE中(55mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(4.30g，44.8mmol)(17％在MTBE中(30mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。
添加HCOOH(3mL)，然后添加2M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x300mL)萃取。合并的有机相用水(300mL)、饱和NaHCO3(4x200ml)和盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(庚烷/EtOAc/HCOOH 90/10/0,5)。将合适的级分汇集且真空浓缩以生成2-((6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯-1-基氧基)丁酸(30,2g，83mmol，74,1％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，5.46–5.22(m，6H)，3.84-3.80(m，1H)，3.61-3.54(m，1H)，3.47-3.40(m，1H)，2.86–2.71(m，4H)，2.10-1.99(m，4H)，1.91–1.70(m，2H)，1.65-1.56(m，2H)，1.45–1.18(m，10H)，0.97(t，3H)，0.87(t，3H)。MS(电喷雾)：373.2[M+Na]+.
实施例70：制备2-(((6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-二十一碳-6,9,12,15,18-五烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000721
向(6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-二十一碳-6,9,12,15,18-五烯-1-醇(23g，76mmol)在THF(350ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(12.15ml，114mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经25分钟添加叔丁醇钠(20.46g，213mmol)的溶液(17％在MTBE中(140mL))，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(2.92g，30.4mmol)(17％在MTBE中(25mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(8.10ml，76mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(5.85g，60.8mmol)(17％在MTBE中(45mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。经5分钟添加额外的叔丁醇钠(2.92g，30.4mmol)(17％在MTBE中(25mL))。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。添加HCOOH(3mL)，然后添加2M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x 300mL)萃取。合并的有机相用水(300mL)、饱和NaHCO3(4x200ml)和盐水(300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(庚烷/EtOAc/HCOOH90/10/0,5)。将合适的级分汇集且真空浓缩以生成2-(((6Z,9Z,12Z,15Z,18Z)-二十一碳-6,9,12,15,18-五烯-1-基)氧基)丁酸(18.9g，47.3mmol，62.2％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，5.48–5.21(m，10H)，3.84-3.81(m，1H)，3.61-3.53(m，1H)，3.48-3.41(m，1H)，2.93–2.71(m，8H)，2.18–1.96(m，4H)，1.91–1.70(m，2H)，1.66-1.57(m，2H)，1.45–1.30(m，4H)，0.99-0.93(m，6H)。MS(电喷雾)：411.4[M+Na]+.
实施例71：制备2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000731
向(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯-1-醇(30g，95mmol)在甲苯(11ml)和THF(400ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(17.28ml，162mmol)，然后经35分钟添加叔丁醇钠(25,7g，267mmol)在THF(160ml)中的溶液，同时保持温度介于8-10℃。将反应在8-10℃搅拌40分钟。经10分钟添加叔丁醇钠(4,17g，43,4mmol)在THF(60ml)中的溶液。所得混合物在8-10℃搅拌40分钟，然后一次性添加更多2-溴丁酸(10,17ml，95mmol)。将混合物在8-10℃搅拌1小时，然后经10分钟添加更多叔丁醇钠(7.33g，76mmol)在THF(100ml)中的溶液，保持温度低于12℃。将反应在10℃搅拌60分钟。一次性添加叔丁醇钠(4.17g，43.4mmol)，然后再搅拌1小时。再添加2-溴丁酸(8.5ml，50mmol)和叔丁醇钠(4.8g，50mmol)，且将混合物在8-10℃搅拌1小时。再添加2-溴丁酸(8.5ml，50mmol)和叔丁醇钠(4.8g，50mmol)，且将混合物在8-10℃搅拌1小时。再添加THF(200ml)且反应混合物在室温搅拌过夜。再添加2-溴丁酸(17ml，100mmol)和叔丁醇钠(9.6g，100mmol)，且将反应混合物在8-10℃搅拌1小时。然后向反应添加(1ml)甲酸且所得混合物在8-10℃搅拌10分钟，然后添加6M HCl以得到pH～2。添加水(100mL)且分离水相和有机相。水相用乙醚(2x 500mL)萃取两次。合并的有机相用水(3x 1000ml)、饱和NaHCO3(3x 500ml)和盐水1x100ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(EtOAc/庚烷/5％HCOOH)(90/10)以得到2-(((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯-1-基)氧基)丁酸(10.3g，25.07mmol，26.3％产率)，其为油状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.49–5.20(m，12H)，3.90–3.75(m，1H)，3.65–3.52(m，1H)，3.51–3.35(m，1H)，2.91–2.69(m，10H)，2.21–1.98(m，4H)，1.91–1.59(m，4H)，1.05–0.88(m，6H)。MS(电喷雾)：423.3[M+Na]+.
实施例72：制备2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000741
步骤1：
向镁(0.217g，8.93mmol)在THF(3ml)中的加热悬浮液中添加1,2-二溴乙烷(2滴)，然后在氮气氛下滴加2-((5-溴戊基)氧基)四氢-2H-吡喃(2.07g，8.24mmol)在THF(15ml)中的溶液。将混合物回流1小时且冷却至环境温度。滴加(3Z,6Z,9Z,12Z)-十五碳-3,6,9,12-四烯醛(1.5g，6.87mmol)在THF(10ml)中的溶液且将混合物在环境温度搅拌1小时。添加1MHCl且将混合物用EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速硅胶色谱法(庚烷/EtOAc 80/20-75/25)得到(8Z,11Z,14Z,17Z)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)二十碳-8,11,14,17-四烯-6-醇(0.74g，1.895mmol，27.6％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.59–5.49(m，1H)，5.49–5.25(m，7H)，4.56-4.53(m，1H)，3.88-3.82(m，1H)，3.77–3.67(m，1H)，3.65-3.59(m，1H)，3.52–3.43(m，1H)，3.40-3.34(m，1H)，2.85-2.77(m，6H)，2.23(t，2H)，2.13–1.97(m，2H)，1.84-1.77(m，1H)，1.73-1.67(m，1H)，1.63-1.34(m，12H)，0.96(t，3H)。MS(电喷雾)：413.3[M+Na]+.
步骤2：
向(8Z,11Z,14Z,17Z)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)二十碳-8,11,14,17-四烯-6-醇(0.74g，1.895mmol)在THF(20ml)中的溶液中添加TEA(0.528ml，3.79mmol)，然后添加甲磺酰氯(0.192ml，2.463mmol)。将混合物在氮气氛下搅拌3小时在环境温度。添加柠檬酸(5％，aq，50mL)，且将混合物用EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩以得到0.82g中间体甲磺磺酸酯。将中间体甲磺磺酸酯溶于Et2O(10ml)，且滴加至LAH(0.288g，7.58mmol)在Et2O(25ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在环境温度搅拌1小时。小心添加1M HCl(50mL)。将混合物用MTBE(2x 50mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速硅胶色谱法(庚烷/EtOAc 97/3)得到2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)四氢-2H-吡喃(0.46g，1.228mmol，64.8％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.46–5.20(m，8H)，4.57-4.54(m，1H)，3.88-3.82(m，1H)，3.74-3.68(m，1H)，3.51-3.44(m，1H)，3.39-3.33(m，1H)，2.84-2.77(m，6H)，2.14–1.96(m，4H)，1.85-1.77(m，1H)，1.73–1.65(m，1H)，1.62–1.46(m，6H)，1.37-1.24(m，8H)，0.96(t，3H)。MS(电喷雾)：397.3[M+Na]+.
步骤3：
向2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)四氢-2H-吡喃(0.46g，1.228mmol)在EtOH(5ml)中的溶液中添加吡啶鎓对甲苯磺酸盐(PPTS，0.309g，1.228mmol)，且将混合物在50℃加热2小时。将混合物冷却至环境温度。添加饱和NaHCO3(50mL)，且将混合物用EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤(50mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。快速硅胶色谱法(庚烷/EtOAc 80/20)得到(8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-醇(0.26g，0.895mmol，72.9％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.41–5.17(m，8H)，3.57(t，2H)，2.84–2.68(m，6H)，2.06–1.94(m，4H)，1.54-1.46(m，2H)，1.34–1.21(m，8H)，1.20-1.13(m，1H)，0.91(t，3H)。
步骤4：
向(8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-醇(93mg，0.32mmol)在甲苯(3mL)中的溶液中添加2-溴丁酸叔丁酯(143mg，0.64mmol)、四丁基氢氧化铵(TBAOH)(5mg，0.02mmol)和NaOH(50w/w％，1mL)，且将混合物加热至45℃。搅拌1.5小时后将71.4mg(0.32mmol)2-溴丁酸叔丁酯添加至反应混合物，3小时后将71.4mg(0.32mmol)2-溴丁酸叔丁酯添加至反应混合物，且在8小时后在45℃将143mg(0.64mmol)2-溴丁酸叔丁酯添加至反应混合物。24小时后将混合物冷却至室温且添加水(40mL)。所得混合物用Et2O萃取两次(25+40mL)，且合并的有机萃取物用水(4x25 mL)和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(庚烷→庚烷：丙酮-5：1)。将合适的级分汇集且浓缩以得到15mg2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯。该中间体溶于甲酸(5mL)，且所得混合物在室温搅拌1小时45分钟。真空去除溶剂且将残余物添加至EtOAc(30mL)。溶液用水(4x25mL)和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，使用85％MeCN的水溶液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩以得到15mg(0.04mmol，12％产率)2-(((8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-8,11,14,17-四烯-1-基)氧基)丁酸。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.00(td，6H)，1.49–1.20(m，8H)，1.64(t，2H)，1.96–1.73(m，2H)，2.08(dt，4H)，2.84(q，6H)，3.55–3.43(m，1H)，3.65–3.54(m，1H)，3.87(dd，1H)，5.49–5.24(m，8H)。HRMS(电喷雾)，[M-H]-：计算值：375.2899，实测值：375.2892.
实施例73：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000761
步骤1：
在N2气氛下将二十碳-5,8,11,14-四烯酸(5Z,8Z,11Z,14Z)-乙酯(501.9mg，1,509mmol)在无水THF(1ml)中的溶液滴加至LiAlH4(64.8mg，1.707mmol)在无水THF(3ml)中的冷却的(0℃)悬浮液中。将混合物在0℃搅拌55分钟。滴加水(5ml)，然后添加1M HCl(10ml)。移除冷却浴，且将反应混合物搅拌5分钟。反应混合物用叔丁基甲基醚(2x 50ml)萃取，有机相用1M HCl(20ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且在减压下蒸发以得到(5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯-1-醇(397.7mg，1.369mmol，91％产率)，其为液体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.41-5.29(m，8H)，3.63(t，2H)，2.83-2.77(m，6H)，2.20-1.91(m，4H)，1.61-1.54(m，2H)，1.46-1.41(m，2H)，1.35-1.28(m，8H)，0.87(t，3H)。
步骤2：
向(5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯-1-醇(349mg，1.20mmol)在甲苯(5mL)中的溶液中添加2-溴丁酸叔丁酯(535mg，2.40mmol)、四丁基氢氧化铵(TBAOH)(156mg，0.24mmol，40％w/w)和NaOH(50w/w％，2mL)，且将混合物加热至45℃。12小时后将混合物冷却至室温且添加冰水(25mL)和Et2O(20mL)。分离相且水相用Et2O(20mL)萃取。合并的有机萃取物用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且真空蒸发。将残余物溶于EtOH(20mL)且真空蒸发。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(庚烷：丙酮-1：20→庚烷：丙酮-1：10)。将合适的级分汇集且浓缩以得到360mg(0.83mmol，69％产率)中间体2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯-1-基)氧基)丁酸叔丁酯。将342mg(0.79mmol)该中间体溶于甲酸(7mL)且所得混合物在室温搅拌3小时。真空去除溶剂且将残余物添加至EtOAc(75mL)。溶液用水洗涤(3x50mL)，干燥(MgSO4)，过滤且真空浓缩。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(丙酮：庚烷：HOAc-10：10：1→丙酮：庚烷：HOAc-30：70：1)。将合适的级分汇集且浓缩以得到181mg(0.48mmol，58％产率)2-(((5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯-1-基)氧基)丁酸。
实施例74：制备2-(((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯-1-基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000771
步骤1：
在氮气下将二十二碳-7,10,13,16,19-五烯酸(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-乙酯(1.5g，4.18mmol)在THF(4ml)中的溶液滴加至LAH(0.159g，4.18mmol)在无水THF(20ml)中的冷却的(0℃)悬浮液中。将混合物在0℃搅拌1小时。将混合物小心倒入1M HCl(100mL)中。分离相，且水相用庚烷(100mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤(30mL)，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩以得到(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯-1-醇(1.16g，3.66mmol，88％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.44–5.23(m，10H)，3.62(t，2H)，2.87–2.73(m，8H)，2.10–1.99(m，4H)，1.60–1.51(m，2H)，1.40–1.29(m，6H)，0.95(t，3H)。
步骤2：
向(7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯-1-醇(1.16g，3.66mmol)在THF(50ml)中的溶液中添加2-溴丁酸(0.918g，5.50mmol)。将反应混合物冷却至8-10℃。经5分钟添加叔丁醇钠(0.986g，10.26mmol)在MTBE(15mL)中的溶液。将反应在8-10℃搅拌30分钟。添加额外的叔丁醇钠(0.141g，1.466mmol)在MTBE(4mL)中的溶液。将混合物在8-10℃搅拌30分钟，然后经5分钟添加2-溴丁酸(0.612g，3.66mmol)。然后将混合物在8-10℃搅拌30分钟。添加额外的叔丁醇钠(0.282g，2.93mmol)在MTBE(8mL)中的溶液。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。添加额外的叔丁醇钠(0.141g，1.466mmol)在MTBE(4mL)中的溶液。将混合物在8-10℃搅拌30分钟。添加HCOOH(0.5mL)，然后添加1M HCl(aq)以得到pH～2。分离相，且水相用MTBE(2x50mL)萃取。合并的有机相用水(50mL)、饱和NaHCO3(4x30ml)和盐水(30ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。进行制备型HPLC，使用90％MeCN(包含0.02％HCOOH)在水(包含10％MeCN和0.02％HCOOH)中的溶液作为洗脱液，得到2-(((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-7,10,13,16,19-五烯-1-基)氧基)丁酸(1g，2.439mmol，66.6％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.44–5.24(m，10H)，3.84-3.81(m，1H)，3.59-3.64(m，1H)，3.47-3.41(m，1H)，2.90–2.73(m，8H)，2.11–1.98(m，4H)，1.90–1.71(m，2H)，1.64-1.57(m，2H)，1.41–1.26(m，6H)，0.98-0.93(m，6H)。HRMS(电喷雾)，[M]+：计算值：402.3134，实测值：402.3141.
实施例75：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-酯
Figure BDA0002528780430000781
将2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(14.28g，38.1mmol)和(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-醇(10.00g，34.7mmol)添加至D(+)-10-樟脑磺酸(0.530g，2.282mmol)在环己烷(50mL)中的混合物中且加热至回流，通过Dean-Stark装置去除水。将反应混合物冷却至室温且通过干燥快速色谱法使用硅胶(100g)纯化，且用环己烷(50mL)、然后是庚烷(50mL)、2％EtOAc在庚烷中的溶液(2x 200mL)和4％EtOAc在庚烷中的溶液(2x 200mL)洗脱。将合适的级分汇集且真空浓缩以得到2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-酯(20.3g，30.5mmol，88％产率)，其为油状物。1HNMR(300MHz，氯仿-d)δ0.99(t，9H)，1.45(ddd，4H)，1.56–1.93(m，6H)，2.09(p，8H)，2.85(dt，16H)，3.34(dt，1H)，3.60(dt，1H)，3.76(dd，1H)，4.16(td，2H)，5.05–5.76(m，20H)。MS(电喷雾)：645.5[M+H]+.
实施例76：制备(2R)-2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)丁酸
Figure BDA0002528780430000791
步骤1：
向2-((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基氧基)丁酸(400mg，1.07mmol)在CDM(10mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉(235μL，2.15mmol)和TBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵四氟硼酸盐)(344mg，1.07mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后添加(R)-2-羟基丁酸叔丁酯(250mg，2.14mmol)。所得混合物在室温搅拌22小时，然后用水(10mL)、1M HCl(10mL)、饱和NaHCO3(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。分离161mg(0.312mmol，29.2％产率)中间体2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(R)-1-(叔丁氧基)-1-氧代丁-2-酯，为油状物。MS(电喷雾)：539.4[M+Na]+.
步骤2：
将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(R)-1-(叔丁氧基)-1-氧代丁-2-酯(161mg，0.312mmol)溶于甲酸(4mL)，且将反应混合物在室温搅拌17小时。向该混合物添加EtOAc(10mL)，且所得混合物用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相干燥(Na2SO4)，过滤且真空浓缩。分离60mg(0.130mmol，41.8％产率)(2R)-2-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)丁酸，为油状物。MS(电喷雾)：459.3[M-H]-.
实施例77：制备(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸
Figure BDA0002528780430000792
步骤1：
向(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5,6-四羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸4-甲氧基苄基酯(2.47g，7.86mmol)、2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(2.94g，7.85mmol)和HATU(1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐)(3.00g，7.90mmol)在乙腈(85ml)中的混合物中添加4-甲基吗啉(1.75ml，15.92mmol)。将反应混合物在N2气氛下在室温搅拌23.5hrs。添加Amberlyst-15(4.7mEq/g)(3.35g)，且将混合物搅拌约5分钟。将反应混合物过滤且在减压下浓缩且残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用CH2Cl2-CH2Cl2：EtOH(95：5)洗脱。将合适的级分汇集且真空浓缩以得到2.64g不纯的混合物。残余物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用CH2Cl2-CH2Cl2：EtOH(95：5)洗脱，然后用CH2Cl2-CH2Cl2：EtOH(97：3)洗脱。将合适的级分汇集且真空浓缩以得到中间体(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸(4-甲氧基环己基)甲酯(1.27g，1.78mmol，22.4％产率)，其为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.26-7.22(m，2H)，6.83-6.81(m，2H)，5.60-5.57(m，1H)，5.40-5.26(m，10H)，5.12-5.10(m，2H)，4.60-4.56(m，1H)，4.14-4.13(m，1H)，3.98(t，1H)，3.93-3.67(m，3H)，3.74(s，3H)，3.61-3.56(m，3H)，3.31-3.25(m，1H)，2.82-2.77(m，8H)，2.07-2.02(m，4H)，1.80-1.67(m，2H)，1.57-1.54(s，2H)，1.43-1.36(m，2H)，1.05-0.77(m，6H)。MS(电喷雾)：693.4[M+Na]+.
步骤2：
在0℃在氮气氛下将(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸(4-甲氧基环己基)甲酯(1.20g，1.79mmol)用10％TFA在DCM(8mL)中的溶液处理。在环境温度搅拌3h后，真空去除溶剂。快速色谱法(DCM/MeOH/HCOOH-95/5/0.2)得到500mg不纯的产物。将产物进一步通过制备型HPLC纯化，使用85％MeCN(包含0.02％HCOOH)在水(包含10％MeCN和0.02％HCOOH)中的溶液作为洗脱液。将合适的级分汇集且浓缩以得到(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-((2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酰基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸(80mg，0.139mmol，7.8％产率)，其为固体。1HNMR(400MHz，MeOD)δ5.60-5.56(m，1H)，5.51–5.27(m，10H)，3.99–3.88(m，2H)，3.71-3.63(m，1H)，3.62–3.54(m，1H)，3.53–3.38(m，3H)，2.93-2.83(m，8H)，2.19–2.07(m，4H)，1.93-1.83(m，1H)，1.81–1.72(m，1H)，1.69–1.60(m，2H)，1.53-1.45(m，2H)，1.04-0.98(m，6H)。MS(电喷雾)：549.3[M-H]-.
实施例78：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁-1-醇
Figure BDA0002528780430000811
在0℃在N2气氛下将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸丁酯(1.008g，2.34mmol)在无水THF(3ml)中的溶液滴加至LiAlH4(94.9mg，2.50mmol)在无水THF(10ml)中的悬浮液中。将反应混合物在0℃搅拌1.5hrs，然后移除冷却浴且将反应混合物在室温搅拌20小时。将反应混合物在冰-水浴中冷却，然后滴加水(2.5ml)和1M HCl(10ml)。移除冷却浴，且将混合物搅拌10分钟在室温。所得混合物用庚烷(2x 50ml)萃取，用1M HCl(10ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤且在减压下浓缩。通过快速硅胶色谱用庚烷-EtOAc(90：10)洗脱得到0.705g(83％产率)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.71–4.93(m，10H)，3.63(dd，1H)，3.58–3.34(m，3H)，3.29-3.23(m，1H)，2.95–2.65(m，8H)，2.18–1.98(m，4H)，1.88(bs，1H)，1.66–1.51(m，3H)，1.45(dt，3H)，0.95(t，3H)，0.89(t，3H)。MS(ESI，pos)383[M+Na]+.
实施例79：制备2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)乙酸丁酯
Figure BDA0002528780430000812
将2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁-1-醇(300.9mg，0.834mmol)、三乙胺(140ml，1.00mmol)和DMAP(4.7mg，0.038mmol)在无水CH2Cl2(5ml)中的混合物添加至乙酸酐(95ml，1.00mmol)。将反应混合物在N2气氛下在室温搅拌80分钟。添加水(10ml)，且将混合物用庚烷(2x 50ml)萃取，用盐水洗涤(20ml)，干燥(Na2SO4)，过滤且在减压下浓缩。通过快速硅胶色谱用庚烷-EtOAc(100：1)洗脱得到0.319g(95％)标题化合物，为油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.59–5.14(m，10H)，4.10(dd，1H)，4.02(dd，1H)，3.54(dt，1H)，3.43(dt，1H)，3.38–3.29(m，1H)，2.92–2.65(m，8H)，2.14–1.95(m，4H)，2.05(s，3H)，1.63–1.47(m，4H)，1.45-1.38(m，2H)，0.96(t，3H)，0.92(t，3H)。MS(ESI，pos)425[M+Na]+.
生物实施例
在饮食诱发的NASH小鼠模型(CDAA/高脂饮食)中评估化合物A
良好地建立缺乏甲硫氨酸和/胆碱(分别为MCD和CDAA)的小鼠模型以用于研究临床前药物开发中NASH的开发和治疗。作为合成磷脂酰胆碱的前体，饮食中甲硫氨酸/胆碱的缺乏会导致无法合成用于输出甘油三酯的肝脂蛋白，从而导致严重的肝脂肪变性、炎症和纤维化。
尽管广泛使用的甲硫氨酸-胆碱缺乏型(MCD)饮食能够在小鼠中持续产生严重的NASH样肝炎和纤维化，但它也伴随着严重的体重减轻(骨骼肌和脂肪量减少)。这关系到死亡风险增加，其呈现了长期的纤维化发生实验的主要问题。通过添加次最佳剂量的甲硫氨酸(0.17％)，CDAA饮食模型克服了这些问题，并已被证明可以通过依次产生脂肪性肝炎、肝纤维化和肝癌而在小鼠和大鼠中模拟人类NASH，且具有较不严重的体重损失。
在生物学实施例1-7中，对雄性C56BL/6J小鼠(9周龄)进行了研究。给小鼠饲喂胆碱充足(CS)或胆碱缺乏的高脂饮食(总卡路里为31％；“CDAA/高脂”)。在开始治疗前6周，开始诱导NASH的饮食，以将研究设计为治疗/逆转方式而不是预防方式。
在生物学实施例1-5中，将小鼠分成6个实验组(每组9只)，喂食CS或CDAA/高脂肪饮食。经过6周的CS或CDAA饮食，小鼠口服化合物A或比较化合物N，两者均为2种剂量，0.15mmol/kg体重/天(低剂量，LD)和0.3mmol/kg体重/天(高剂量，HD)。试验物质作为与高脂饮食的混合剂口服。通过羟基脯氨酸(HYP)含量测量和天狼星红(SR)形态测量学评估肝纤维化。通过定量实时聚合酶链式反应(qPCR)测定肝纤维化、炎症和代谢相关转录物水平。
在生物实施例6和7中，如上所述，将小鼠喂食CS或CDAA/高脂肪饮食。在实施例6中，经过6周的CS或CDAA/高脂饮食，小鼠每天口服56mg/kg体重的化合物A，或长效GLP-1R激动剂
Figure BDA0002528780430000821
(艾塞那肽)，所述的
Figure BDA0002528780430000831
(艾塞那肽)被批准用于治疗2型糖尿病，其每周以0.4mg/kg皮下注射，持续6周。通过非线性多光子光学成像系统测定了载体对照组(n＝8)、化合物A组(n＝9)和GLP-1R(n＝8)饲喂组的分离肝脏样本中对肝脏胶原纤维数量、厚度和长度的影响。
在生物实施例7中，经过6周的CS或CDAA/高脂肪饮食，小鼠每天施用112mg/kg体重的化合物A，或等摩尔剂量的二十碳五烯酸(EPA)，口服施用。从CS组(n＝9)、化合物A组(n＝9)和EPA组(n＝8)分离的肝脏样本中进行了肝脏脂质组学分析。
在生物实施例21-24中，研究了化合物A单独和与GLP-1激动剂艾塞那肽联合使用的效果。在雄性C56BL/6J小鼠(9周龄)中进行研究。将小鼠分为6个实验组(每组n＝9)，如上所述，含有CS或CDAA/高脂饮食。NASH诱导的CDAA/高脂肪饮食在开始治疗前6周被施加，以评估治疗/逆转，而不是预防。因此，经过6周的CS或CDAA/高脂肪饮食，小鼠用以下治疗：(A)口服化合物A在0.3mmol/kg体重/天单独治疗，(B)单独的GLP-1激动剂，以0.4mg/kg每周一次腹腔递送，或(C)0.3mmol/kg体重/天的化合物A和按0.4mg/kg每周一次腹腔递送的GLP-1激动剂(由于体重下降过多，最后3周减至0.1mg/kg)的组合。化合物A作为高脂饮食的混合物口服，而GLP-1激动剂通过腹腔注射(i.p.)施用。采用定量实时聚合酶链式反应(qPCR)测定分离出的肝脏组织中的纤维化、炎症和代谢相关转录物水平。
化合物A在链脲佐菌素注射液/高脂饮食诱导的NASH模型(STAM模型)中的评价
在生物实施例8中，从Japan Inc.(Kanagawa，Japan)的Charles RiverLaboratories获得无病原体的妊娠15天的C57BL/6小鼠。通过如下方式在雄性小鼠中建立NASH：在出生后单次皮下注射链脲佐菌素(STZ)(Sigma，美国)，和在4周龄后(第28±2天)以高脂肪饮食(HFD；CLEA)日本)以自由采食方式喂养。小鼠在6周龄在开始治疗前一天被随机分成3组，每组8只小鼠：载体(盐水)、化合物A和替米沙坦(阳性对照)。与高脂饮食联合的口服强饲的剂量为37mg/kg体重/天的化合物A的治疗，施用6周，然后处死。根据标准化的标准计算出NAFLD活动性评分(NAS)，并通过天狼星红染色评估纤维化面积。
评价化合物A在饮食诱导的NASH小鼠模型(APOE*3Leiden.CETP双转基因小鼠)中的效果
APOE*3Leiden.CETP双转基因小鼠除了表达人载脂蛋白C1(APOC1)和CETP外，还表达了人载脂蛋白E3的变体，APOE*3Leiden。APOE*3Leiden.CETP双转基因小鼠表现出血浆胆固醇和甘油三酯水平升高，主要局限于VLDL/LDL大小的脂蛋白部分。通过增加该模型中的饮食中的胆固醇含量，人类NASH的所有特征都得到了发展。
在生物实施例9中，在APOE*3Leiden.CETP小鼠中进行了研究，将其置于具有不同的胆固醇含量(0.25-1％胆固醇w/w)的高脂肪饮食(24％脂肪(w/w)中。在一项研究中(使用1％的胆固醇(w/w)，经过3周的磨合期后，将低反应小鼠(占总数的20％)从研究中剔除，将剩余的小鼠细分为4组，每组12只小鼠(对照组+5只)，对血浆胆固醇、甘油三酯、血糖、体重和年龄(t＝0)匹配，开始治疗。小鼠每天在07hr00至10hr00之间接受0.3mmol/kg体重的化合物A、比较化合物N(0.3mmol/kg体重每天)、罗格列酮(13mg/kg体重每天)或对照(玉米油)的强饲。治疗20周后，用CO2窒息法牺牲小鼠，收集肝脏并对肝细胞肥大程度进行分级。
在生物实施例25中，研究了化合物A单独使用和与ω-3脂肪酸组合使用的效果。将APOE*3Leiden.CETP小鼠置于具有0.25胆固醇w/w的半合成高脂肪饮食(24％脂肪w/w)中。经过4周的磨合期后，将低反应小鼠从研究中剔除，将剩余的小鼠细分为每组8只小鼠，进行血浆胆固醇、甘油三酯、血糖、体重和年龄(t＝0)的匹配，开始治疗。为了便于混合化合物，将向日葵油加入到总油量为10mL/kg饮食中。化合物A以0.3mmol/kg体重/天施用，而ω-3脂肪酸乙酯(85％w/w EPA/DHA乙酯)以3.0mmol/kg体重/天施用。化合物A和ω-3乙酯都作为高脂肪饮食的混合物口服施用。治疗4周后，用CO2窒息法将小鼠牺牲，收集肝脏，经高效薄层色谱法提取和分离后，测定肝脏中游离胆固醇、胆固醇酯和甘油三酯的含量。
评估化合物A在肥胖饮食诱导的NASH小鼠模型(ob/ob AMLN模型)中的效果
当胆固醇(2％)、40％脂肪(包含18％反式-脂肪酸)和20％果糖添加至高热量饮食(即，AMLN高脂肪饮食)时，肥胖饮食诱导的B6.V-Lepob/Jrj小鼠(ob/ob)始终容易发生纤维化(肝)。与喂食相同饮食的野生型C57BL/6小鼠(AMLN小鼠)相比，AMLN饮食的ob/ob小鼠(称为"ob/ob AMLN小鼠")在较短的时间内(≤12周)发生脂肪性肝炎和纤维化。ob/ob AMLN小鼠提供了一个肥胖饮食诱导的NASH模型，其也允许研究对血糖控制的影响。ob/obAMLN模型中NASH的发展通过活检确认。
在生物实施例10-12、15和19中，研究在喂养AMLN高脂饮食15周的雄性ob/ob小鼠(5周龄)中进行，然后随机分成3组(每组10只)，以通过饮食接受112mg/kg体重/天的化合物A、通过饮食接受30mg/kg体重/天的吡格列酮或不接受治疗(载体)达额外4周。口服葡萄糖耐受性试验(OGTT)在第3周时进行。在4周时通过RNA测序测定肝纤维发生/纤维溶解(fibrolytic)基因的表达来评估肝纤维化。
在生物示例10、13-14和16-18中，研究在喂养AMLN高脂饮食18周的雄性ob/ob小鼠(5周龄)中进行，然后随机分成6组(每组n＝10)，以通过饮食接受化合物A(以3种不同的每日剂量，45mg/kg，90mg/kg或135mg/kg)，通过饮食接受30mg/kg体重/天奥贝胆酸(OCA)，或不接受治疗(载体)达额外8周。研究结束时，通过定量免疫组织化学(IHC)测量评估NASH相关参数和纤维化。
关于临床转化，当对人种间差异校正时，这里使用的化合物A的剂量(8周研究中45mg/kg、90mg/kg、和135mg/kg，4周研究中112mg/kg)对应于70kg体重的人剂量约为250mg/天、500mg/天、和750mg/天(4周研究中600mg/天)。人种间剂量转换指南参见Nair，A.B.，和Jacob，S.，J Basic Clin Pharm，2016；7(2)：27-31。
评价化合物A对人肝星形细胞的体外作用。
星形细胞是肝脏的常驻细胞，是参与肝脏纤维化发生和发展的主要细胞类型。在生物实施例20中，对培养的人星形细胞(LX-2细胞)进行体外研究，以评估化合物A对这些细胞的直接影响。用化合物A(10μM、25μM、50μM或75μM)或油酸(OA；75μM)处理细胞24小时，并评估溴代脱氧尿苷(BrdU)的加入，以确定对增殖的影响。使用MTS(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓)测试以确定细胞活力。
生物实施例1.通过每个肝脏的总羟脯氨酸(HYP)含量测定的化合物A和化合物N对肝纤维化含量的影响
以低剂量(LD)和高剂量(HD)施用给CDAA/高脂喂养小鼠的化合物A与对照组相比均诱导了肝纤维化(每个肝脏的HYP含量)的显著降低(分别为p<0.01*和0.001**)。对于比较化合物N，没有观察到显著的影响。表1显示了化合物A对肝HYP含量的影响。
表1羟基脯氨酸(μg HYP/肝)
Figure BDA0002528780430000861
生物实施例2.化合物A和化合物N对肝纤维化含量的影响，用相对羟脯氨酸(HYP)含量(每100毫克肝脏的ug HYP)测量
以低剂量(LD)和高剂量(HD)施用给CDAA/高脂喂养的小鼠的化合物A均会降低肝纤维化(每个肝脏的HYP含量)，而化合物N则没有影响。化合物A对相对HYP含量的作用示于表2。
表2羟基脯氨酸(μg HYP/100mg肝)
Figure BDA0002528780430000862
生物实施例3.化合物A和化合物N对肝炎性基因表达(TNF-αmRNA表达)的影响
与对照组相比，以低剂量(LD)和高剂量(HD)施用给CDAA/高脂喂养的小鼠的化合物A均诱导肝脏炎症(TNF-αmRNA)的显著降低(均p<0.001***)。对于化合物N也观察到显著降低(p＜0001)，但是对于高剂量(HD)没有观察到。表3显示了化合物A对肝TNF-α的作用。
表3肝炎性基因表达(TNF-αmRNA)
Figure BDA0002528780430000871
生物实施例4.化合物A和化合物N对纤维化相关基因表达(Col1a1 mRNA表达)的影响
以低剂量(LD)和高剂量(HD)施用给CDAA/高脂喂养小鼠的化合物A与对照组相比均引起肝纤维化相关基因表达(Col1a1 mRNA)的显著降低(分别为p<0.001***)。没有观察到化合物N的显著作用。化合物A对肝Col1a1的作用列于表4。
表4肝纤维化相关基因表达(Col1a1 mRNA)
Figure BDA0002528780430000872
生物实施例5.通过天狼星红形态学测量的化合物A对肝纤维化含量的影响
为了更准确地量化肝纤维化的数量位置和功能相关性，进行了天狼星红(SR)形态测定。与实施例1和2(其中使用了在大血管中测量胶原蛋白的羟基脯氨酸(HYP)含量的生物化学评估)形成对照，SR形态测量学可量化功能更相关的正弦胶原蛋白沉积物。使用100倍放大率测量每张载玻片10个区域。以低剂量(LD)和高剂量(HD)施用给CDAA/高脂喂养小鼠的化合物A与对照组相比均诱导了肝纤维化的表面积百分比显著降低(分别为p<0.001***和0.05*)。表5显示了通过SR形态学测量的化合物A对肝纤维化的作用。
表5：通过SR形态测量学测定的肝纤维化
Figure BDA0002528780430000883
生物实施例6.化合物A和
Figure BDA0002528780430000881
对胶原纤维的作用
当以低剂量(56mg/kg)施用给CDAA/高脂喂养的小鼠时，化合物A显著降低了胶原纤维数量(图1A)达51％(p＝0.01)。这种效果反映在短(<8.5μm)和细(<3.5μm)胶原纤维的几乎完全消失上，这分别反映在图1B和图1C中的化合物A的纤维厚度和长度略有增加上。
Figure BDA0002528780430000882
(每周皮下注射0.4mg/kg)无显著作用。
生物实施例7.化合物A和EPA对肝脏脂类代谢的作用
为了进一步理解化合物A对肝脂质代谢的影响，在分离的肝组织中进行了CS和CDAA/高脂喂养小鼠(“CD”)的脂质组分析。当以高剂量(112mg/kg)施用给CDAA/高脂喂养的小鼠时，化合物A显著降低胆碱缺乏的影响，如肝脏甘油三酯(TG)(图2A)、肝脏甘油二酯(DG)(图2B)，肝游离脂肪酸(FFA)(图2C)或胆固醇酯(图2D)所测量的。相反，用等摩尔量的EPA处理并不能减少与胆碱缺乏饮食有关的肝TG、DG、FFA或胆固醇酯的增加。
生物实施例8.化合物A对肝细胞气球样变性、小叶性炎症、脂肪变性、复合NAS评分和纤维化面积的影响
除脂肪变性和小叶性炎症外，施用给STAM(模型)小鼠的化合物A减少了肝细胞气球样变性。化合物A降低了复合NAS评分(p<0.001*)和纤维化面积(天狼星红阳性面积)。
表6肝细胞气球样变性、总NAS评分和纤维化面积
Figure BDA0002528780430000891
生物实施例9.化合物A和化合物N对肝细胞肥大的影响
向ApoE* 3L-CETP小鼠(0.25％胆固醇饮食w/w)施用化合物A引起肝细胞肥大的显著减少(p<0.01*)，与对照组相比降低了83％(p<0.01)。用化合物N未观察到作用。
表7肝细胞肥大
Figure BDA0002528780430000892
生物实施例10.化合物A、吡格列酮和OCA对肝脏重量和体重的影响
如图3A所示，在第4周，化合物A(112mg/kg)对ob/ob AMLN小鼠的体重没有影响，而吡格列酮诱导体重显著增加15％(p＜0.01)。如图3B所示，在第4周，所有组的肝脏重量均未改变。如图3C所示，在第8周，化合物A(45mg/kg，90mg/kg和135mg/kg)和OCA均未显著影响体重，并且任一组均未影响食物摄入。如图3D所示，OCA在8周时显著(p＜0.05)减少了肝脏重量，而化合物A在任何剂量下均与载体相比没有显著影响。
生物实施例11.化合物A和吡格列酮对肝纤维发生和纤维溶解基因表达的影响
用化合物A(112mg/kg)或吡格列酮(30mg/kg)治疗4周对ob/ob AMLN小鼠分离的肝样品中纤维发生和纤维溶解基因表达的影响示于图4A-4F。化合物A显著降低调节肝脏纤维发生的典型基因的表达，包括血小板衍生的生长因子-β(PDGF-β)(图4A)、血小板衍生的生长因子受体-β(PDGFR-β)(图4B)、胶原蛋白-1α1(col1A1)(图4C)、col3A1(图4D)、col4A1(图4E)和热休克蛋白47(HSP47)(图4F)。吡格列酮显著降低所检查的胶原亚型(col1A1，col3A1，col4A1)和HSP47的表达，但对PDGF-β或PDGFR-β的表达没有影响。
生物实施例12.化合物A和吡格列酮对肝细胞外基质稳定性和纤溶基因表达的影响
如图5A-5D所示，关于调节细胞外基质(ECM)稳定性或纤维溶解的基因，用化合物A治疗4周显著降低了ob/ob AMLN小鼠中赖氨酰氧化酶(LOX)(图5A)、LOX样2(LOXL2)(图5B)和LOXL1(图5C)以及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP1)(图5D)的肝表达。吡格列酮还显著降低了这些转录物的转录水平，尽管该作用比用化合物A获得的作用要轻。
生物实施例13.化合物A和OCA对肝纤维化进展的影响
为了评估在ob/ob AMLN小鼠中施用化合物A(45mg/kg，90mg/kg或135mg/kg)或OCA(30mg/kg)8周对肝纤维化进展的影响，进行了定量免疫组织化学(IHC)以测量col1A1和α平滑肌肌动蛋白(SMA)含量。如图6A和图6B所示，在90mg/kg和135mg/kg剂量下，化合物A显著降低了肌成纤维细胞标志物α-SMA(以总面积含量和分数面积含量％表示)，而OCA没有显示出任何显著作用。
类似地，以90和135mg/kg施用的化合物A降低了总col1A1含量(图6C)，而OCA没有显著作用。当以总表面积的百分比表示时(图6D)，90mg/kg剂量诱导col1A1水平显著降低，而45和135mg/kg剂量的降低没有统计学显著性。为了证实用定量IHC观察到的抗纤维化作用，如图6E和图6F所示，测量了肝脏中羟脯氨酸(HYP)的浓度。仅化合物A降低了HYP含量，以总含量(对于90和135mg/kg的剂量，p<0.01)或相对含量(对于90和135mg/kg的剂量，p<0.05)表示。
生物实施例14.化合物A和OCA对肝纤维化消退的影响
进行结合IHC测量肝脏col1A1和α-SMA的ob/ob AMLN小鼠的基线(治疗前)活检，将col1A1和α-SMA的终末值与所有组的基线(治疗前活检)值进行比较确定在研究结束时我们观察到的化合物A治疗后与载体相比的显著降低是否与纤维化消退相关。如图7A所示，与治疗前活检中的α-SMA含量相比，用135mg/kg化合物A处理降低了通过免疫组织化学染色评估的α-SMA含量的面积百分比。45mg/kg和90mg/kg剂量的化合物A导致趋势不显著。OCA没有显著作用。类似地，尽管只有90mg/kg剂量具有统计学显著性(p<0.005)，但与活检前含量相比，所有化合物A剂量均显示col1A1含量降低的趋势(图7B)。在8周的施用期后，载体和OCA处理均显示肝脏col1A1含量有轻度增加，尽管增加仅对OCA有显著性(p<0.05)。
生物实施例15.化合物A和吡格列酮对炎性基因表达的影响
与ob/ob AMLN小鼠的纤维化进展有特殊关系，与载体施用的对照小鼠相比，用112mg/kg的化合物A治疗4周可显著降低炎症基因的表达。具体地，分别如图8A和图8B所示，化合物A降低了转化生长因子β1(TGF-β1)(p＜0.05)和TGF-β1受体(TGFRβ)(p＜0.01))的转录水平。吡格列酮降低了TGFRβ的表达(p<0.05)，但不降低TGF-β1的表达。与对照相比，在化合物A处理后发现CCR2、MAC-2(数据未显示)、CD68和CD14(所有p＜0.001)的显著降低，如图8C、8D和8F所示。与载体施用的对照相比，化合物A处理还显著降低了半乳凝素-3(Gal-3)水平(图8E)。吡格列酮显著降低CCR2(p<0.01)(图8C)、CD68(p<0.01)(图8D)和CD14(p<0.001)(图8F)。两种化合物均未显著降低白介素(IL)-1β或MCP-1转录水平(数据未显示)。
生物实施例16.通过肝Gal-3测量的化合物A和OCA对肝炎症的作用
为了评估用化合物A(45mg/kg，90mg/kg或135mg/kg)或OCA(30mg/kg)治疗8周对ob/ob AMLN小鼠肝脏炎症的影响，进行了IHC评估半乳凝素-3(Gal-3)的水平。如图9A和图9B所示，当以总含量或面积百分比测量时，用化合物A处理导致Gal-3表达水平剂量响应性降低，而OCA仅当以总含量测量时降低了Gal-3表达水平
生物实施例17.化合物A和OCA对肝细胞损伤的作用
为了评估化合物A和吡格列酮对ob/ob AMLN小鼠肝细胞损伤或损害的影响，在施用8周后测量了血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)。如图10A所示，用90mg/kg和135mg/kg剂量的化合物A(分别为p＜0.01和p＜0.001)实现了ALT的显著和明显降低，而OCA没有作用。在剂量为90mg/kg和135mg/kg时，化合物A也显著降低AST(分别为p<0.05和p<0.01)，而OCA对AST水平无影响(图10B)。
生物实施例18.化合物A和OCA对肝性脂肪变性、肝脂质水平和血浆脂质水平的影响
如图11A和图11B所示，化合物A和OCA在ob/ob AMLN小鼠施用8周后均显著降低了脂肪变性(以面积百分数或总脂质含量表示)，其中OCA显示出与最高剂量(135mg/kg)的化合物A相当的功效(均p<0.001)。类似地，OCA和化合物A(以90mg/kg和135mg/kg剂量)均表现出血浆甘油三酯和总胆固醇水平的相当降低，如图11D和图11E所示。OCA处理(而非化合物A)显示出降低的总肝胆固醇含量(p<0.01)(图11C)。
生物实施例19.化合物A和吡格列酮对血糖控制的作用
在化合物A(112mg/kg)、吡格列酮或载体对照施用3周后，对ob/ob AMLN小鼠进行了口服葡萄糖耐量测试(OGTT)。如图12A中所示，化合物A和吡格列酮在葡萄糖负载后的前240分钟(AUC 0-240分钟)中均显著降低了葡萄糖偏移，尽管该效果在吡格列酮中更为明显。类似地，尽管与化合物A相比吡格列酮的作用更明显，但两种化合物均实现了空腹血浆葡萄糖水平的显著降低(图12B)。吡格列酮而非化合物A降低了空腹胰岛素(p<0.001)(图12C)。
生物实施例20.化合物A和油酸对星形细胞体外增殖和活力的影响
通过BrdU掺入评估用10-75μM的化合物A或油酸(OA)(75μM)处理24小时的LX-2人肝星形细胞的细胞增殖。结果是5个独立实验(对于icosabutate)和2个独立实验(对于OA)归一化的平均值±S.E.M.。如图13A所示，与OA或载体相比，用25μM(p<0.005)、50μM(p<0.0001)和75μM(p<0.005)的化合物A处理的LX-2细胞的增殖较低。化合物A在24小时的增殖减少量为25-34％，而OA没有作用。比较是通过单向方差分析(ANOVA)进行的，使用Dunnett校正用于多个比较。如图13B所示，如在2个独立实验中通过MTS测定所测量的，化合物A和OA均未显示出对细胞活力的显著影响。
生物实施例21.化合物A和GLP-1激动剂(GLP-1a、艾塞那肽)单独和组合对肝纤维化相关基因表达(Col1a1 mRNA表达)的影响
与CDAA喂养的小鼠相比，向CDAA/高脂喂养的小鼠施用化合物A、GLP-1a和化合物A+GLP-1a的组合诱导Col1a1 mRNA表达显著降低(所有p<0.001***)。表8显示了化合物A单独以及与GLP-1a组合对肝脏Col1a1 mRNA的影响。
表8肝纤维化相关基因表达(Col1a1 mRNA)
Figure BDA0002528780430000931
生物实施例22.化合物A和GLP-1激动剂(GLP-1a，艾塞那肽)单独和组合对肝纤维化相关基因表达(TIMP(基质金属蛋白酶组织抑制剂)-1amRNA表达)的影响
与CDAA喂养的小鼠相比，向CDAA/高脂喂养的小鼠施用化合物A、GLP-1a和化合物A+GLP-1a的组合诱导肝脏TIMP-1a mRNA表达显著降低(所有p<0.001***)。表9显示了化合物A单独以及与GLP-1a组合对肝脏TIMP-1a mRNA的影响。
表9肝纤维化相关基因表达(TIMP-1a mRNA)
Figure BDA0002528780430000932
生物实施例23.化合物A和GLP-1激动剂(GLP-1a，艾塞那肽)单独和组合对肝纤维化相关基因表达(MMP(基质金属蛋白酶)-13mRNA表达)的影响
与CDAA喂养的小鼠相比，向CDAA/高脂喂养的小鼠施用化合物A、GLP-1a和化合物A+GLP-1a的组合诱导肝脏MMP-13mRNA表达显著降低(所有p<0.001***)。表10显示了化合物A单独以及与GLP-1a组合对肝脏MMP-13mRNA的影响。
表10肝纤维化相关基因表达(MMP-13mRNA)
Figure BDA0002528780430000941
生物实施例24.化合物A和GLP-1激动剂(GLP-1a，艾塞那肽)单独和组合对肝脏炎症相关基因表达(TNF-αmRNA表达)的影响
与CDAA喂养的小鼠相比，向CDAA/高脂喂养的小鼠施用化合物A、GLP-1a和化合物A+GLP-1a的组合诱导肝脏TNF-αmRNA表达显著降低(对化合物A单独或与GLP-1a组合，p<0.001，对GLP-1a单独，p<0.05)。表11显示了化合物A单独以及与GLP-1a组合对肝脏TNF-amRNA的影响。
表11肝纤维化相关基因表达(TNF-αmRNA)
化合物 TNF-α(相对mRNA表达)
CSAA(高脂肪胆碱充足的对照) 1
CDAA(胆碱缺乏) 1.7
CDAA+化合物A 0.65***
CDAA+GLP-1a 1.05*
CDAA+化合物A+GLP-1a 0.66***
生物学实施例25.化合物A和浓ω-3乙酯(单独和组合)对肝脂质(胆固醇酯-CE、游离胆固醇-FC、甘油三酯-TG)的影响
向ApoE*3L-CETP转基因小鼠施用低剂量(0.3mmol/kg bw/天)的化合物A(LD)，其中该ApoE*3L-CETP转基因小鼠用具有0.25％的胆固醇和高剂量(3mmol/kg体重/天)85％EPA/DHA乙基-酯ω-3(HD)的组合的西式饮食喂养，导致FC(p<0.01)、CE(p<0.001)和TG(p<0.01)的显著降低。在这种模型中，没有一种化合物可以像单药疗法那样显著降低肝TG。
表12肝脏脂质
Figure BDA0002528780430000951
生物学实施例26：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者中化合物A的多中心、随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究
该临床试验的目的是评估不同剂量的化合物A在不加重纤维化的情况下解决患者NASH的功效，并确定化合物A在患有NASH的患者中的安全性和耐受性。
患者人数
在大约30个地点对600名患有NASH的患者进行了筛查，以了解其适合性；预计将发现大约264名与以下概述的选择标准相容，并且预计大约198名将完成整个试验(假设每个治疗组66位受试者，假设25％的患者退出)。
治疗分配
被发现符合研究条件的患者被随机分为3个平行组，每组88名患者。第1组服用安慰剂化合物A，第2组服用300mg化合物A，第3组服用600mg化合物A。化合物A或安慰剂每天一次服用一个(300mg)或两个(600mg)胶囊持续52周。对F1与F2/F3分层。
化合物A的治疗功效通过例如肝活检的NAS评分、MRI LiverMultiScan评估PDFF和cT1、肝功能测试、HOMA-IR以及炎症和纤维化的生物标志物(包括hsCRP、Pro-C3、ELF分组和其它合适的生物标记)评估。
安全性和耐受性通过不良事件报告、生命体征监测、体格检查、血液学和生物化学(肾脏，肝脏)、尿液分析和静息12导联心电图进行评估。
通过每次就诊时获取的三个坐位血压读数来监控血压。
研究设计
该研究进行了58周，每位患者进行了10次临床就诊，包括筛查、双盲治疗期和治疗后的随访。每次访问时执行的程序在下面进行了描述，并在表13中进行了总结。
·访问1(开始治疗前1至42天)：根据以下概述的标准筛选患者的相容性，并征得患者的同意。评估可能会进行超过一次的访问。
·访问2：将患者随机分为3个治疗组之一。每个治疗组每天服用300或600毫克化合物A或安慰剂，持续52周。进行基线评估，包括肝成像(MRI–PDFF和cT1)、生命体征、安全实验室(基线血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图和生物标志物(HOMA-IR、hsCRP、Pro-C3和ELF分组)。
·访问3(治疗4周后)：评估患者的不良事件，生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图和低谷PK样本。
·访问4(治疗10周后)：评估患者的不良事件，生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图和低谷PK样本。
·访问5(治疗16周后)：评估患者的不良事件，肝成像(MRI–PDFF和cT1)，生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图、生物标记物(HOMA-IR、hsCRP、Pro-C3和ELF分组)和低谷PK样品。
·访问6、7和8(治疗24、32和40周后)：评估患者的不良事件、生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图，生物标志物(hsCRP)和低谷PK样本。
·访问9(治疗52周后)：通过肝活检、肝成像(MRI–PDFF和cT1)，生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图、生物标志物(HOMA-IR、hsCRP、Pro-C3和ELF分组)和低谷PK样品评估患者。
·访问10(停止试验药物后的14-21天)：对患者进行安全性随访，并评估不良事件、生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图和低谷PK样本。
在完成研究前退出研究的患者评估其不良事件、生命体征、安全实验室(血液学、生物化学和尿液分析)、静息12导联心电图、低谷PK样品和生物标记物(HOMA-IR、hsCRP、Pro-C3和ELF分组)。
患者入选标准：
患者符合以下要纳入试验的标准。
·18至75岁。
·女性没有生育能力，或使用可接受的避孕手段。
·如果男性患者的女性伴侣有生育能力，则男性患者愿意使用避孕药具(例如避孕套)。此外，他们的女性伴侣也会使用避孕药具(例如激素，子宫内避孕器等)。从第一次服用化合物药物到最后一次服用研究药物后的90天都使用双重避孕方法。
·书面知情同意书。
·活检之前的任选Fibroscan标准。
·筛查时或筛查6个月内对NASH进行组织学诊断。
·NAS分数≥4。
·纤维化评分为1-3(含端点)(F1上限为30％)。
·MRI测定的任选PDFF>10％
·治疗52周后准备进行肝活检。
·纳入方案后，具有以下血液学和生化指标的代偿性肝病：
·ALT<5x ULN
·AST>30
·女性血红蛋白>11g/dL，男性>12g/dL
·白细胞(WBC)>2.5K/μL
·中性粒细胞计数>1.5K/μL
·血小板>100K/μL
·总胆红素<35μmol/L。如果在吉尔伯特综合征的情况下未缀合胆红素，则可包括胆红素>35μmol/L的患者。
·白蛋白>36g/L
·国际标准化比率(INR)<1.4
·血清肌酸酐<1.3mg/dL(男性)或<1.1(女性)或肾小球滤过率估计≥60mL/min/1.73m2
·没有其他引起慢性肝病的原因(自身免疫、原发性胆源性胆管炎、HBV、HCV、Wilson's、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、血色素沉着症等)。
·如果适用，稳定的2型糖尿病(定义为HgbA1c<9.5％和空腹血糖<10mmol/L，在过去6个月内用药没有变化，和/或在过去3个月内没有与代偿性糖尿病相关的新症状)。
·自进行肝活检以来，体重保持稳定，其中稳定的定义是初始体重减轻不超过5％。
患者排除标准
患者不符合以下任何排除标准：
·根据饮酒量调查表评估的持续过量饮酒史。
·不稳定的代谢状况，定义为：最近三个月体重增加或减少超过5kg，血糖控制不良(HgbA1c>9.5％)的糖尿病，或在筛查前的6个月内引入抗糖尿病药或抗肥胖药/吸收不良或限制性肥胖症治疗(体重减轻)的手术。
·在不到5年内有胃肠道吸收不良减肥手术史，或在过去6个月内摄入已知会引起肝脂肪变性的药物，包括皮质类固醇、大剂量雌激素、甲氨蝶呤、四环素或胺碘酮。
·除肝脏疾病以外的显著全身性或重大疾病，包括充血性心力衰竭(AHA的C级和D级)、不稳定的冠状动脉疾病、脑血管疾病、肺部疾病、肾衰竭、器官移植、严重的精神疾病或恶性肿瘤，研究者认为，其应排除化合物A的治疗。
·HB抗原>0，HCV PCR>0(如果HCV PCR阴性3年以上，则可包括有HCV感染史的患者)或HIV感染。
·研究人员认为会妨碍胜任性或合规性或可能阻碍研究完成的任何其他条件。
·身体质量指数(BMI)>45kg/m2。
·用胰岛素治疗的1型糖尿病或2型糖尿病。
·糖尿病酮症酸中毒。
·空腹甘油三酯>300mg/dL。
·止血障碍或目前抗凝剂治疗。
·肝活检的禁忌症。
·有心律不齐的病史或目前有心律不齐和/或有心血管疾病(包括心肌梗塞)史，除了具有良好控制的高血压以及任何临床上显著的ECG异常
·在该药物的前3个月或5个半衰期内参加了任何其他研究性药物研究。
·已知对IMP的任何成分或赋形剂过敏。
·服用已知对NASH有活性的抗糖尿病药，例如吡格列酮和GLP-1受体激动剂。
终点标准
化合物A疗效的主要终点是解决NASH的患者百分比，其定义为气球样变性消失(评分＝0)且小叶性炎症评分为0或1，且纤维化没有恶化。
化合物A功效的次要终点是NAS评分相对基线的变化，脂肪变性、气球样变性、炎症和纤维化的个体组织学评分的变化，肝酶的变化，成像参数的变化以及生物标志物的变化(包括hsCRP、Pro-C3、ELF分组和细胞因子)。
安全性/耐受性的次要终点包括报告的不良事件，实验室值(血液学，生物化学和尿液分析)，生命体征(血压，脉搏频率和温度)和hsCRP。
药代动力学的次要终点包括比较在第4、5、6、7和8次就诊时服用的3剂化合物A在稳态下的平均低谷血浆浓度。
统计方法
假设安慰剂缓解率为18％，而退出率为25％，则每组88名患者的样本量提供了80％的功效，可检测出活性剂相对安慰剂的缓解率为40％。在进行为期16周的中期分析之后，可以对样本量进行重新估算。对经过修改的意向进行疗效分析，以处理由具有基线和至少一项基线后功效测量的那些人组成的人群。在每个单独的剂量和安慰剂之间进行比较。
表13：评估明细表
1在第1、2、9和10次访问时进行全面检查，在所有其他访问时均采用简化检查
Figure BDA0002528780430000991
Figure BDA0002528780430001001
2血液学、生物化学、凝血、尿分析、脂质
3hsCRP、Pro-C3、ELF分组、HOMA-IR、细胞因子
*如果要进行活检，则长达6周的筛选期可能包括多于一次的实际访问

Claims (99)

1.式(II)的化合物
Figure FDA0002528780420000011
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团；其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
其用于治疗性和/或预防性处置非酒精性脂肪性肝炎。
2.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(I)，并且R2、R3和X如式(II)所定义
Figure FDA0002528780420000012
3.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1或2所述的化合物，
其中R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
其用于治疗非酒精性脂肪性肝炎。
4.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团和异丙基基团。
5.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R2和R3都独立为C1-C6烷基基团。
6.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R2和R3之一为氢原子且另一个为乙基基团。
7.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中X为羧酸。
8.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中X为C1-C6烷基酯。
9.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求8所述的化合物，其中X选自甲基酯、乙基酯、异丙基酯、正丁基酯和叔丁基酯。
10.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1、8和9中任一项所述的化合物，其中X选自甲基酯和乙基酯。
11.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中X为选自以下的甘油酯：甘油三酯、1,2-甘油二酯、1,3-甘油二酯、1-甘油单酯和2-甘油单酯。
12.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中所述化合物以对映体、非对映体或其混合物的形式存在。
13.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求12所述的化合物，其中所述化合物以其R形式、以其S形式或以外消旋形式存在。
14.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)，或其药学上可接受的盐或酯，且其结构式为
Figure FDA0002528780420000021
15.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中所述化合物以每剂约5mg至约4g的剂量施用。
16.用于根据权利要求1所述的用途的根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中所述化合物每天施用一次。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中所述用途治疗或逆转非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中所述用途减少或预防性处置肝纤维化的发展或减少现有的肝纤维化。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中所述用途提供以下中的任一种：肝脏炎症如小叶性炎症的减少；肝细胞气球样变性的减少；和脂肪性肝炎的减少。
20.药物组合物，所述药物组合物包含式(II)的化合物
Figure FDA0002528780420000031
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自以下取代基：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团；其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
其用于治疗性和/或预防性处置非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎。
21.用于根据权利要求20所述的用途的根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述化合物具有式(I)
Figure FDA0002528780420000032
且其中R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或其衍生物，其中所述衍生物为羧酸/盐酯如羧酸酯、甘油酯或酸酐、甲酰胺、磷脂或羟甲基或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
22.用于根据权利要求20所述的用途的根据权利要求20或21所述的组合物，其中所述组合物配制用于口服施用。
23.用于根据权利要求20所述的用途的根据权利要求20至22中任一项所述的组合物，其中所述药物组合物进一步包含至少一种粘合剂、赋形剂、稀释剂或抗氧化剂或其任意组合。
24.用于根据权利要求20所述的用途的根据权利要求20至23中任一项所述的组合物，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸。
25.根据权利要求1至16和18-19中任一项所述的化合物，其中所述用途为预防性处置非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或酒精性脂肪性肝炎。
26.在需要其的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用药学有效量的式(II)的化合物：
Figure FDA0002528780420000041
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团；其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述化合物具有式(I)：
Figure FDA0002528780420000042
28.根据权利要求26或27所述的方法，
其中R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；且
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团和异丙基基团。
30.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中R2和R3都独立为C1-C6烷基基团。
31.根据权利要求26至29中任一项所述的方法，其中R2和R3之一为氢原子且另一个为乙基基团。
32.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中X为羧酸。
33.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中X为C1-C6烷基酯。
34.根据权利要求33所述的方法，其中X选自甲基酯、乙基酯、异丙基酯、正丁基酯和叔丁基酯。
35.根据权利要求26、33或34中任一项所述的方法，其中X选自甲基酯和乙基酯。
36.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中X为选自以下的甘油酯：甘油三酯、1,2-甘油二酯、1,3-甘油二酯、1-甘油单酯和2-甘油单酯。
37.根据权利要求26至36中任一项所述的方法，其中所述化合物的存在形式为对映体、非对映体或其混合物。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述化合物以其R形式、以其S形式或以外消旋形式存在。
39.根据权利要求26所述的方法，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)，或其药学上可接受的盐或酯，且其结构式为
Figure FDA0002528780420000051
40.根据权利要求26至39中任一项所述的方法，其中所述化合物以每剂约5mg至约4g的剂量施用。
41.根据权利要求26至40中任一项所述的方法，其中所述化合物每天施用一次。
42.根据权利要求26至41中任一项所述的方法，其中所述方法治疗或逆转非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎。
43.根据权利要求26至42中任一项所述的方法，其中所述方法包括预防性处置非酒精性脂肪性肝炎和/或酒精性脂肪性肝炎。
44.根据权利要求26至43中任一项所述的方法，其中所述方法减少或预防性处置肝纤维化的发展或减少现有的肝纤维化。
45.根据权利要求26至44中任一项所述的方法，其中所述方法提供肝脏炎症、肝细胞气球样变性、脂肪性肝炎、纤维化和/或炎症和/或纤维化的生物标记如hsCRP、Pro-C3、ELF分组的减少；和/或肝活检的NAS评分、肝功能测试、MRI LiverMultiScan评估PDFF和cT1和/或HOMA-IR的改善。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述肝脏炎症减少为小叶性炎症减少。
47.根据权利要求26至46中任一项所述的方法，其中所述化合物配制为药物组合物。
48.根据权利要求47的方法，其中所述药物组合物配制用于口服施用。
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含至少一种粘合剂、赋形剂、稀释剂或抗氧化剂或其任意组合。
50.根据权利要求47至49中任一项所述的方法，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸。
51.根据权利要求26至50中任一项所述的方法，其中所述治疗方法为预防性的。
52.式(II)的化合物
Figure FDA0002528780420000061
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团；其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
其用于治疗性和/或预防性处置酒精性脂肪性肝炎。
53.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52所述的化合物，其中所述化合物具有式(I)，且R2、R3和X如式(II)所定义
Figure FDA0002528780420000071
54.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52或53所述的化合物，
其中R2和R3独立地选自氢原子或直链、支链和/或环状的C1-C6烷基基团；
X为羧酸或其衍生物；其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物，
其用于预防和/或治疗酒精性脂肪性肝炎。
55.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至54中任一项所述的化合物，其中R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团和异丙基基团。
56.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至54中任一项所述的化合物，其中R2和R3都独立为C1-C6烷基基团。
57.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至55中任一项所述的化合物，其中R2和R3之一为氢原子且另一个为乙基基团。
58.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至57中任一项所述的化合物，其中X为羧酸。
59.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至57中任一项所述的化合物，其中X为C1-C6烷基酯。
60.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求59所述的化合物，其中X选自甲基酯、乙基酯、异丙基酯、正丁基酯和叔丁基酯。
61.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52-57、59和60中任一项所述的化合物，其中X选自甲基酯和乙基酯。
62.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至57中任一项所述的化合物，其中X为选自以下的甘油酯：甘油三酯、1,2-甘油二酯、1,3-甘油二酯、1-甘油单酯和2-甘油单酯。
63.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至62中任一项所述的化合物，其中所述化合物的存在形式为对映体、非对映体或其混合物。
64.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求63所述的化合物，其中所述化合物以其R形式、以其S形式或以外消旋形式存在。
65.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52或53所述的化合物，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)或其药学上可接受的盐或酯，且其结构式为
Figure FDA0002528780420000081
66.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至65中任一项所述的化合物，其中所述化合物以每剂约5mg至约4g的剂量施用。
67.用于根据权利要求52所述的用途的根据权利要求52至66中任一项所述的化合物，其中所述化合物每天施用一次。
68.根据权利要求52至67中任一项所述的化合物，其中所述用途治疗或逆转酒精性脂肪性肝炎。
69.根据权利要求52至68中任一项所述的化合物，其中所述用途预防肝纤维化的发展或减少现有的肝纤维化。
70.根据权利要求52至69中任一项所述的化合物，其中所述用途提供以下中的任一种：肝脏炎症如小叶性炎症的减少；肝细胞气球样变性的减少；和脂肪性肝炎的减少。
71.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中所述化合物以每天600mg的剂量施用。
72.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中所述化合物以每天300mg的剂量施用。
73.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中血浆丙氨酸氨基转移酶水平减少30-40％。
74.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中血浆天冬氨酸转氨酶水平减少10-20％。
75.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中肝性脂肪变性减少70-90％。
76.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中NAS评分减少50-70％。
77.根据前述权利要求中任一项所述的化合物、组合物和方法，其中肝纤维化面积减少40-60％。
78.根据权利要求26至51中任一项所述的方法，其中所述化合物作为单一治疗施用。
79.根据权利要求26至51中任一项所述的方法，进一步包括共同施用至少一种其他活性剂。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自以下：变构乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、凋亡信号调节激酶-1(ASK1)抑制剂、半胱天冬酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯离子通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPP IV)抑制剂、成纤维细胞-生长因子(FGF)-21激动剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、抗CD3 mAb、半乳凝素-3抑制剂、胰高血糖素样肽1(GLP1)激动剂、谷胱甘肽前体、丙肝病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、1Ιβ-羟化类固醇脱氢酶(ΙΙβ-HSDl)抑制剂、热休克蛋白(Hsp)47抑制剂、IL-Ιβ拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同系物2(LOXL2)抑制剂、溶血磷脂酸1(LPA1)受体拮抗剂、ω-3脂肪酸、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARa激动剂、PPARy激动剂、PPAR5激动剂、重组人正五聚蛋白-2蛋白质(PRF-1)、Rho相关的蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制剂、钠葡萄糖转运体-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶-1抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体和小激活RNA(saRNA)。
81.根据权利要求79或80所述的方法，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂；二肽基肽酶(DPP IV)抑制剂)和ω-3脂肪酸(n-3PUFA)。
82.根据权利要求79所述的方法，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自乙酰基水杨酸、替帕阿利泼金、aramchol、阿托伐他汀、BI1467335、BLX-1002、BMS-986036、BMS-986020、cenicriviroc、cobiprostone、考来维仑、恩利卡生、依那普利、foramulab、GFT-505、GR-MD-02、GS-0976、GS-9674、氢氯噻嗪、二十碳五烯酸乙酯(乙基二十碳五烯酸)、IMM-124E、IVA337、K-877、KD-025、利拉利汀、利拉鲁肽、巯乙胺、MGL-3196、ND-L02-s0201、奥贝胆酸、奥利索西、聚乙二醇化伊洛白介素、吡格列酮、PRM-151、PX-102、依碳酸瑞格列净、司隆色替、辛妥珠单抗、SHP-626、索利霉素、泰鲁司特、TRX-318、熊去氧胆酸和VBY-376。
83.根据权利要求79至82中任一项所述的方法，其中所述共同施用通过以下进行：同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
84.根据权利要求1至19和52至77中任一项所述的化合物，其中所述化合物作为单一治疗施用。
85.根据权利要求1至19和52至77中任一项所述的化合物，其中所述化合物与至少一种其他活性剂共同施用。
86.根据权利要求85所述的化合物，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自变构乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、凋亡信号调节激酶-1(ASK1)抑制剂、半胱天冬酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯离子通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPP IV)抑制剂、成纤维细胞-生长因子(FGF)-21激动剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、抗CD3 mAb、半乳凝素-3抑制剂、胰高血糖素样肽1(GLP1)激动剂、谷胱甘肽前体、丙肝病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、1Ιβ-羟化类固醇脱氢酶(ΙΙβ-HSDl)抑制剂、热休克蛋白(Hsp)47抑制剂、IL-Ιβ拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同系物2(LOXL2)抑制剂、溶血磷脂酸1(LPA1)受体拮抗剂、ω-3脂肪酸、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARa激动剂、PPARy激动剂、PPAR5激动剂、重组人正五聚蛋白-2蛋白质(PRF-1)、Rho相关的蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制剂、钠葡萄糖转运体-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶-1抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体和小激活RNA(saRNA)。
87.根据权利要求85或86所述的方法，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂；二肽基肽酶(DPP IV)抑制剂)和ω-3脂肪酸(n-3 PUFA)。
88.根据权利要求85所述的方法，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自乙酰基水杨酸、替帕阿利泼金、aramchol、阿托伐他汀、BI1467335、BLX-1002、BMS-986036、BMS-986020、cenicriviroc、cobiprostone、考来维仑、恩利卡生、依那普利、foramulab、GFT-505、GR-MD-02、GS-0976、GS-9674、氢氯噻嗪、二十碳五烯酸乙酯(乙基二十碳五烯酸)、IMM-124E、IVA337、K-877、KD-025、利拉利汀、利拉鲁肽、巯乙胺、MGL-3196、ND-L02-s0201、奥贝胆酸、奥利索西、聚乙二醇化伊洛白介素、吡格列酮、PRM-151、PX-102、依碳酸瑞格列净、司隆色替、辛妥珠单抗、SHP-626、索利霉素、泰鲁司特、TRX-318、熊去氧胆酸和VBY-376。
89.根据权利要求85至88中任一项所述的方法，其中所述共同施用通过以下进行：同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
90.式(II)的化合物
Figure FDA0002528780420000111
Figure FDA0002528780420000121
其中R1选自具有3-6个双键的C10-C22烯基；
R2和R3相同或不同，且选自以下取代基：氢原子、羟基基团、烷基基团、卤素原子、烷氧基基团、酰氧基基团、酰基基团、烯基基团、炔基基团、芳基基团、烷硫基基团、烷氧基羰基基团、羧基基团、烷基亚磺酰基基团、烷基磺酰基基团、氨基基团和烷基氨基基团，其中R2和R3可连接以形成环烷烃如环丙烷、环丁烷、环戊烷或环己烷；
X为羧酸或其衍生物，其中所述衍生物为羧酸盐或羧酸酯，如羧酸酯；甘油酯；酸酐；甲酰胺；磷脂；或羟甲基；或其前药；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或其此类盐的溶剂合物；
其用于治疗性和/或预防性处置非酒精性脂肪性肝炎，其中所述化合物与一种或多种其他活性剂共同施用。
91.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90所述的化合物，其中所述化合物具有式(I)，且R2、R3和X如式(II)所定义
Figure FDA0002528780420000122
92.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90或91的化合物，其中R2和R3独立地选自氢原子、甲基基团、乙基基团、正丙基基团和异丙基基团。
93.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90至92中任一项所述的化合物，其中所述化合物为2-(((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯-1-基)氧基)丁酸(化合物A)，或其药学上可接受的盐或酯，且其结构式为
Figure FDA0002528780420000123
94.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90至93中任一项所述的化合物，其中所述一种或多种其他活性剂独立地选自变构乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、凋亡信号调节激酶-1(ASK1)抑制剂、半胱天冬酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯离子通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPP IV)抑制剂、成纤维细胞-生长因子(FGF)-21激动剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、抗CD3mAb、半乳凝素-3抑制剂、胰高血糖素样肽1(GLP1)激动剂、谷胱甘肽前体、丙肝病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、1Ιβ-羟化类固醇脱氢酶(ΙΙβ-HSDl)抑制剂、热休克蛋白(Hsp)47抑制剂、IL-Ιβ拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同系物2(LOXL2)抑制剂、溶血磷脂酸1(LPA1)受体拮抗剂、ω-3脂肪酸、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARa激动剂、PPARy激动剂、PPAR5激动剂、重组人正五聚蛋白-2蛋白质(PRF-1)、Rho相关的蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、氨基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)抑制剂、钠葡萄糖转运体-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶-1抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体和小激活RNA(saRNA)。
95.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90至94中任一项所述的化合物，其中所述一种或多种其他活性剂选自胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂；二肽基肽酶(DPPIV)抑制剂和ω-3脂肪酸(n-3PUFA)。
96.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90至93中任一项所述的化合物，其中所述一种或多种其他治疗剂独立地选自乙酰基水杨酸、替帕阿利泼金、aramchol、阿托伐他汀、BI 1467335、BLX-1002、BMS-986036、BMS-986020、cenicriviroc、cobiprostone、考来维仑、恩利卡生、依那普利、foramulab、GFT-505、GR-MD-02、GS-0976、GS-9674、氢氯噻嗪、二十碳五烯酸乙酯(乙基二十碳五烯酸)、IMM-124E、IVA337、K-877、KD-025、利拉利汀、利拉鲁肽、巯乙胺、MGL-3196、ND-L02-s0201、奥贝胆酸、奥利索西、聚乙二醇化伊洛白介素、吡格列酮、PRM-151、PX-102、依碳酸瑞格列净、司隆色替、辛妥珠单抗、SHP-626、索利霉素、泰鲁司特、TRX-318、熊去氧胆酸和VBY-376。
97.用于根据权利要求90所述的用途的根据权利要求90至96中任一项所述的化合物，其中所述共同施用通过以下进行：同时施用、顺序施用、重叠施用、间隔施用、连续施用或其组合。
98.根据权利要求90至97中任一项所述的化合物，其中所述用途预防、治疗或逆转非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或特征为纤维化、炎症和/或肝细胞气球样变性的其他肝疾病。
99.根据权利要求90至97中任一项所述的化合物，其中所述用途预防肝纤维化的发展或减少现有的肝纤维化。
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