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CN111630387A - 用于检测先兆子痫相关生物标志物的方法和装置 - Google Patents

用于检测先兆子痫相关生物标志物的方法和装置 Download PDF

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CN111630387A
CN111630387A CN201880071852.6A CN201880071852A CN111630387A CN 111630387 A CN111630387 A CN 111630387A CN 201880071852 A CN201880071852 A CN 201880071852A CN 111630387 A CN111630387 A CN 111630387A
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苏珊·费希尔
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Aquinomi
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Abstract

在一些实施方式中，本文提供了用于检测获得自患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象的样品中的差异表达基因的方法和组合物。

Description

用于检测先兆子痫相关生物标志物的方法和装置
相关申请
本申请要求于2017年9月5日提交的申请号为62/554,471的美国临时专利申请的优先权，其内容通过引用合并在此。
技术领域
本文所述的方法和组合物涉及检测指示患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的差异表达基因(例如生物标志物)。
背景技术
先兆子痫(PE)会影响约8％的首次妊娠，每年影响全世界800万对母婴(Winn etal.,Pregnancy Hypertens,2011,1(1):100-108；Fisher,Am J Obstet Gynecol,2015,213(4Suppl):S115-122)。这种并发症是人类妊娠所特有的，以新发的高血压、蛋白尿以及其他母体血管损伤迹象(例如水肿)为特征(Roberts et al.,Lancet,2001,357(9249):53-56)。根据血压进一步升高(收缩压≥160mm Hg或舒张压≥100mm Hg)或以下的任一项而诊断为严重先兆子痫(sPE)：血小板减少症、肝功能受损、进行性肾功能不全、肺水肿以及新发脑病或视觉障碍(Gynecologists ACoOa&Pregnancy TFoHi,Obstet Gynecol,2013,122(5):1122-1131)。当前，典型的治愈方法是分娩胎盘，因此是分娩婴儿。结果，先兆子痫在美国占早产的15％。虽然进行了数十年的研究，但是对PE发病机理的全面了解仍然遥不可及，这加剧了涉及识别预测性生物标志物和开发靶向疗法策略的困难。
发明内容
本发明部分地基于以下发现：与曾正常妊娠的妇女相比，在先前妊娠中患有先兆子痫的妇女中，某些基因(例如生物标志物)差异表达。
因此，本发明的方面提供了用于检测差异表达基因(例如生物标志物)的方法和组合物，其中差异表达基因指示患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC2、TMEM25、CCDC81、MYCN、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：A1BG-AS1、ARL5B、BAC1-AS、C7、COL8A1、CP、CSPG4、CYP19A1、DEFB1、ENPP4、IPW、LOC101928439、LOC101929607、LOC644172、MIR365A、MIR4509-1、MIR548H1、MME-AS1、MS4A2、OGN、PRKXP1、PSMD3、RNA5SP187、RNA5SP463、RNU2-5P、RNU4-39P、RNU4-76P、RNU4ATAC1BP、RNU6-1111P、RNU6-521P、RNU6-540R、RNU6V、RNUC-901P、RP11-1026M7.3、RP11-106K3.1、RP11-12D16.2、RP11-661A12.4、RP11-872017.8、SNORD115-32、SNORD52、SNORD71、SPINK1、TAS2R46、TRAJ59、TRBV4-2、TRIM48、TSPAN1、UGT2B7和ZNF483；(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：AC073218.2、AC073218.3、ACE2、ADAMTS15、ADAMTS4、AOX1、BMP2、CTC-498J12.1、CXCL5、CXCL8、DOCK4-AS1、DSC3、GBP2、GPR126、ICAM1、IER3、IGSF10、IL1A、IL23A、INHBA、KIR2DL2、KLRF1、LINC00312、LINCO1338、LOC100506530、LOC101929174、MMP10、MT1CP、MUM1L1、NOTUM、PDGFD、PRG2、PROM1、PZP、RN7SKP16、RNASE2、RNU6-162P、RNU7-40P、RNUC-1024P、RP11-57P19.1、RP11-59H7.3、RP1-68D18.4、SAPCD1、SERPIN811、SPINK1、SULF2、TMEM27、TNC、TRPC4和Xxbac-BPG252F；(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定至少一种另外的生物标志物的水平，所述至少一种另外的生物标志物来自基本上由以下组成的组：ABLIM2、ADRA2A、ANGPT2、ARHGDIB、C10orf10、C1orf133、C1QTNF7、C4orf49、CCDC、CCDC81、CCL8、CLIC2、CNIH3、COL14A1、COL8A1、CPE、DBC1、EDNRA、EGR1、GALNTL2、GRP、HSD17B2、IGFBP1、IGFBP5、IL1、IL15、IL1B、IRS2、ITGA11、LPAR1、LTBP1、MYCN、NCKAP5、NKAIN1、PRL和IGFBP1。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值小于2，从而确定对象未患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，本文所述的方法进一步包括确定至少一种另外的生物标志物的水平，所述至少一种另外的生物标志物来自基本上由以下组成的组：ABLIM2、ADRA2A、ANGPT2、ARHGDIB、C10orf10、C1orf133、C1QTNF7、C4orf49、CCDC、CCDC81、CCL8、CLIC2、CNIH3、COL14A1、COL8A1、CPE、DBC1、EDNRA、EGR1、GALNTL2、GRP、HSD17B2、IGFBP1、IGFBP5、IL1、IL15、IL1B、IRS2、ITGA11、LPAR1、LTBP1、MYCN、NCKAP5、NKAIN1、PRL和IGFBP1。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自以下途径中的至少一种：胞外结构组构、组织发育、炎症、免疫功能、转运和/或代谢、细胞信号传导、转录和/或翻译、信号转导、蛋白质降解、胰岛素相关的、G-蛋白信号传导、细胞周期和激活、未指定的；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中确定至少一种生物标志物的水平包括杂交测定和至少一种结合剂，并且其中所述至少一种结合剂选自基本上由SEQ ID NO:1至8的组成的组，并且其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ALDH1A1、IGFBP1、NANOS3和HSD17B2；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。在一些实施方式中，所述至少一种结合剂包括至少一种标记的结合剂。
在一些实施方式中，一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法涉及：(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中确定至少一种生物标志物的水平包括杂交测定和至少一种标记的结合剂，并且其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3；以及(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，本文所述的方法可进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。在一些实施方式中，本文所述的方法可以进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法治疗对象。在一些实施方式中，本文所述的对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
在一些实施方式中，本文所述的确定生物标志物的水平包括对获得自对象的样品进行测定。
在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种生物标志物的水平组成。在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。在一些实施方式中，本文所述的方法的步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
在一些实施方式中，本文所述的方法进一步基本上由测量PRL和IGFBP1的水平组成。
在一些实施方式中，生物标志物基本上由ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3组成。
在一些实施方式中，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。在一些实施方式中，使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术来测定来确定每种生物标志物蛋白的水平。
在一些实施方式中，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。在一些实施方式中，通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量每种生物标志物核酸的水平。
在一些实施方式中，本文所述的方法进一步包括将一个或多个受精卵或胚胎移植至对象中。
在一些实施方式中，使用杂交测定和至少一种标记的结合剂来测量每种生物标志物核酸的水平。在一些实施方式中，至少一种标记的结合剂是至少一种标记的寡核苷酸结合剂。在一些实施方式中，所述至少一种标记的结合剂是至少一种荧光标记的结合剂。
在一些实施方式中，样品选自由子宫内膜组织、子宫内膜基质细胞和子宫内膜液组成的组。在一些实施方式中，样品获得自人。在一些实施方式中，人已经怀孕或正试图怀孕。
在一些实施方式中，一种用于确定与先兆子痫相关的一种或多种生物标志物的水平的固态测定装置，该装置包括：芯片，该芯片包含一个或多个分析区域，其中每个分析区域基本上由5至129个结合配偶体的组组成，并且其中每个结合配偶体均特异性结合选自图14至16的生物标志物的表达产物。
在一些实施方式中，固态测定装置包括每个分析区域，该每个分析区域基本上由来自该组的5至25个结合配偶体组成。在一些实施方式中，固态测定装置包括每个分析区域，该每个分析区域基本上由来自该组的25至50个结合配偶体组成。在一些实施方式中，固态测定装置包括每个分析区域，该每个分析区域基本上由来自该组的50至100个结合配偶体组成。在一些实施方式中，固态测定装置包括每个分析区域，该每个分析区域基本上由来自该组的100至129个结合配偶体组成。在一些实施方式中，固态测定装置包括每个分析区域，该每个分析区域基本上由来自该组的100至129个结合配偶体组成。
在一些实施方式中，固态测定装置包括选自基本上由以下组成的组中的生物标志物：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3。
在一些实施方式中，固态测定装置包括选自基本上由以下组成的组中的生物标志物：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3。
在一些实施方式中，固态测定装置包括选自基本上由以下组成的组中的生物标志物：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC2、TMEM25、CCDC81、MYCN、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1。
在一些实施方式中，固态测定装置包括选自基本上由以下组成的组中的生物标志物：A1BG-AS1、ARL5B、BAC1-AS、C7、COL8A1、CP、CSPG4、CYP19A1、DEFB1、ENPP4、IPW、LOC101928439、LOC101929607、LOC644172、MIR365A、MIR4509-1、MIR548H1、MME-AS1、MS4A2、OGN、PRKXP1、PSMD3、RNA5SP187、RNA5SP463、RNU2-5P、RNU4-39P、RNU4-76P、RNU4ATAC1BP、RNU6-1111P、RNU6-521P、RNU6-540R、RNU6V、RNUC-901P、RP11-1026M7.3、RP11-106K3.1、RP11-12D16.2、RP11-661A12.4、RP11-872017.8、SNORD115-32、SNORD52、SNORD71、SPINK1、TAS2R46、TRAJ59、TRBV4-2、TRIM48、TSPAN1、UGT2B7和ZNF483。
在一些实施方式中，固态测定装置包括选自基本上由以下组成的组中的生物标志物：AC073218.2、AC073218.3、ACE2、ADAMTS15、ADAMTS4、AOX1、BMP2、CTC-498J12.1、CXCL5、CXCL8、DOCK4-AS1、DSC3、GBP2、GPR126、ICAM1、IER3、IGSF10、IL1A、IL23A、INHBA、KIR2DL2、KLRF1、LINC00312、LINCO1338、LOC100506530、LOC101929174、MMP10、MT1CP、MUM1L1、NOTUM、PDGFD、PRG2、PROM1、PZP、RN7SKP16、RNASE2、RNU6-162P、RNU7-40P、RNUC-1024P、RP11-57P19.1、RP11-59H7.3、RP1-68D18.4、SAPCD1、SERPIN811、SPINK1、SULF2、TMEM27、TNC、TRPC4和Xxbac-BPG252F。
在一些实施方式中，生物标志物的表达产物是mRNA。在一些实施方式中，生物标志物的表达产物是蛋白质。在一些实施方式中，芯片用于分析获得自对象的至少一种样品。在一些实施方式中，试剂盒包含固态测定装置和使用说明书。
该技术的这些和其他方面由以下非限制性附图示出，并在详细描述和实施例中更详细地描述。
附图说明
以下附图构成本说明书的一部分，并且被包括在内以进一步说明本发明的某些方面，通过参考这些附图中的一个或多个并结合对本文中呈现的具体实施方式的详细描述，可以更好地理解本发明的某些方面。
图1A示出了通过对来自无并发症妊娠(无先兆子痫(PE)妇女的hESC进行若丹明-鬼笔环肽染色，对F-肌动蛋白进行定位的代表性免疫荧光图像。比例尺＝100μm。
图1B示出了通过对来自患有sPE的妇女的hESC进行若丹明-鬼笔环肽染色，对F-肌动蛋白进行定位的代表性免疫荧光图像。
图1C示出了在来自正常妊娠患者的未蜕膜化hESC和蜕膜化hESC的条件培养基中检测到的PRL水平的图表。
图1D示出了在来自sPE患者的未蜕膜化hESC和蜕膜化hESC的条件培养基中检测到的PRL水平的图表。
图1E示出了概述正常妊娠和sPE患者的未蜕膜化hESC和蜕膜化hESC的条件培养基中的PRL水平的图表。**p<0.01，***p<0.005。n.s.，不显著。比例尺＝100μm。
图1F示出了在来自正常妊娠患者的未蜕膜化的hESC和蜕膜化的hESC的条件培养基中检测到的IGFBP1水平的图表。
图1G示出了在来自sPE患者的非蜕膜化hESC和蜕膜化hESC的条件培养基中检测到的IGFBP1水平的图表。
图1H示出了概述正常妊娠和sPE患者的未蜕膜化hESC和蜕膜化hESC的条件培养基中的IGFBP1水平的图表。**p<0.01，***p<0.005。n.s.，不显著。比例尺＝100μm。
图2A示出了研究设计的示意图。hESCs分离自子宫内膜活检，一部分细胞在体外蜕膜化。供体是先前正常妊娠结果的未怀孕妇女或既往sPE患者。
图2B示出了LIMMA配对比较的概述，LIMMA配对比较示出了各组之间差异表达基因(DEG)的数量≥2倍。
图2C示出了在来自正常妊娠结果组和先前sPE患者的hESC蜕膜化之前调节的5个DEG的热图。
图2D示出了在来自曾有正常妊娠结果的供体的hESC蜕膜化过程中调节的50个最高DEG的热图(总计＝74；还参见图13)。
图2E示出了与正常妊娠的供体相比，在来自既往sPE妊娠的供体的hESC蜕膜化之后错表达的50个最高DEG的热图(总计＝129；还参见图14)。*表示通过qRT-PCR验证的mRNA表达模式；Δ，倍数变化。
图3A示出了研究设计的示意图。激光显微切割技术能够将基蜕膜的部分与基板和壁蜕膜(毗邻胎膜)分离。
图3B示出了LIMMA配对比较的概述，LIMMA配对比较示出了在sPE对比无感染迹象早产(无感染早产；nPTB)中等同的蜕膜区室之间的差异表达基因(DEG)的数量。
图3C示出了表明在nPTB对比sPE患者的基蜕膜中的50个最高DEG(总数＝79；还参见图15)的热图。
图3D示出了表明在nPTB对比sPE患者的壁蜕膜中的50个最高DEG(总数＝227；还参见图16)的热图。
图4A至4D示出了母胎界面的代表性组织切片，母胎界面包含基蜕膜或壁蜕膜的一部分，这些部分用能够使细胞滋养层(CTB)可视化的抗细胞角蛋白(CK7)以及蜕膜标志物(图4A和4B分别示出了来自基蜕膜和壁蜕膜的切片)和IGFBP1(图4C和4D分别示出了来自基蜕膜和壁蜕膜的切片)的抗体共免疫染色。
图4E至4F示出了用抗波形蛋白(VIM)染色以标记DEC细胞的基蜕膜(图4E)和壁蜕膜(图4F)的代表性毗邻切片。用DAPI使细胞核可视化。分析每个样品的代表性区域(3至4个)(sPE，n＝5例；nPTB，n＝4例)。iCTB，侵袭性CTB；Am，羊膜；schCTBs，平滑绒毛膜CTB。比例尺：100μm。
图4G至4H示出了无感染早产(nPTB)和sPE患者的基蜕膜和壁蜕膜中的相对PRL免疫反应性(图4G)和相对IGFBP1免疫反应性(图4H)的图表。
图5A至5J示出了代表性图像，表明来自sPE患者的蜕膜活检的新鲜分离的基质细胞在培养中显示蜕膜化缺陷。从基蜕膜或壁蜕膜分离细胞，并在P0进行分析。供体是妊娠伴发无感染迹象早产(无感染早产；nPTB；n＝4)或严重先兆子痫(sPE；n＝5)的妇女。
图5A至5B示出了来自基蜕膜或壁蜕膜的细胞的代表性免疫荧光图像，其中细胞的F-肌动蛋白细胞骨架通过若丹明-鬼笔环肽染色而染色并且细胞核用DAPI染色。在nPTB妊娠中，来自任意蜕膜区室的细胞均呈多边形，具有复杂的发达的肌动蛋白微丝网络。相比之下，来自sPE妊娠的细胞因发育不良的肌动蛋白细胞骨架而扁平化。
图5C至5H示出了针对催乳素(PRL)(图5C至5D)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)(图5E至5F)和波形蛋白(图5G至5H)而染色的、来自nPTB或sPE患者的基蜕膜或壁蜕膜的细胞的代表性免疫荧光图像。
图5I至5J示出了来自nPTB或sPE患者的基蜕膜或壁蜕膜的PRL(图5I)和IGFBP1分泌(图5J)的图表。以一式三份分析每个样品，数据表示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；比例尺，100μm。
图6A至6B示出了来自nPTB患者(图6A)和sPE患者(图6B)的基蜕膜或壁蜕膜的蜕膜化或非蜕膜化活检的hESC的代表性免疫荧光图像。F-肌动蛋白的细胞骨架通过若丹明-鬼笔环肽进行染色。细胞核用DAPI染色。
图6C至6D示出了来自基蜕膜和壁蜕膜的蜕膜化和非蜕膜化活检物中的PRL(图6C)和IGFBP1(图6D)分泌的图表。使用ELISA测量水平。数据以一式三份分析每个样品，数据表示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01；n.s.，不显著；比例尺，100μm。
图7A示出了实验设计的示意图。从基蜕膜(DB)或壁蜕膜(DP)分离蜕膜细胞并培养过夜。然后分离条件培养基(CM)。供体是妊娠伴有无感染迹象早产(无感染早产；nPTB；n＝3)或严重先兆子痫(sPE；n＝4)的妇女。从孕中期胎盘中分离出CTB(15至17周，n＝4；18至20周，n＝3；21至23周，n＝3)。将它们在Matrigel涂覆的Transwell过滤器上，在nPTB或sPE蜕膜细胞调节的培养基中培养(72小时)。计算到达过滤器底面的CTB和细胞过程。
图7B示出了来自nPTB供体和sPE供体的培养物中CTB的数目和细胞过程的图表。与等同的nPTB样品相比，来自sPE供体细胞的CM显著抑制CTB侵袭，无论细胞是分离自DB还是DP。
图7C示出了在来自nPTB供体和sPE供体的培养物中在PRL和IGFBP1(各10ng/ml)存在下CTB的数目和细胞过程的图表。向新鲜培养基中添加PRL和IGFBP1将CTB侵袭恢复到在来自nPTB培养物的细胞在CM中孵育时所观察到的水平。数据表示为重复孔的平均值±SEM。**p<0.01，***p<0.001；n.s.，不显著。
图8A示出了来自图2A至2E和图13中描述的对照样品的数据的创新途径分析(Ingenuity Pathway Analysis)的结果。
图8B示出了来自图3A至3B和图14中描述的严重先兆子痫样品的数据的创新途径分析的结果。黑条表示上调途径，灰条表示下调途径。
图8C示出了重叠基因的示意图，在来自曾有正常妊娠结果的妇女的细胞的体外蜕膜化过程中，所述重叠基因上调，而在来自先前sPE妊娠的妇女的细胞的体外蜕膜化过程中，所述重叠基因下调。
图8D示出了重叠基因的示意图，在来自曾有正常妊娠结果的妇女的细胞的体外蜕膜化过程中，所述重叠基因下调，而在来自先前sPE妊娠的妇女的细胞的体外蜕膜化过程中，所述重叠基因上调。
图9示出了通过微阵列数据的qRT-PCR验证获得的mRNA表达数据的图表。根据在培养中蜕膜化的sPE对比对照人子宫内膜基质细胞样品的基因表达水平计算倍数变化。FC，倍数变化。
图10示出了在壁蜕膜876个样品中失调的基因的途径分析的结果(sPE对比nPTB)。数据是通过图3D和图16中描述的结果的创新途径分析产生的。黑条，上调；灰条，下调。p≤0.05。
图11A至11C示出了母胎界面中包含基蜕膜和平滑绒毛膜的一部分的代表性组织切片图像。供体是患有无感染迹象早产(nPTB；n＝5)或严重先兆子痫(sPE；n＝5)的妇女。组织切片用能够使细胞滋养层(CTB)可视化的抗细胞角蛋白(CK7)抗体以及识别如下的蛋白的抗体共染色：PEG1(MEST)(图11A)、PRG2(图11B)和BMP2(图11C)，所述蛋白由患有先兆子痫的供体的壁蜕膜中差异表达基因所编码。细胞核用DAPI染色。相对于nPTB样品，sPE中PEG1和PRG2上调；BMP2下调。比例尺，100μm。
图12A示出了使用ELISA测量的来自sPE(n＝4)或对照nPTB(n＝3)病例的基蜕膜和壁蜕膜的样品的分离的基质细胞调节的培养基中PRL水平的图表。
图12B示出了使用ELISA测量的来自sPE(n＝4)或对照nPTB(n＝3)病例的基蜕膜和壁蜕膜的样品的分离的基质细胞调节的培养基中IGPBP1水平的图表。
图13示出了列举对照人子宫内膜基质细胞的体外蜕膜化过程中差异表达2倍或更大的基因的热图。倍数变化显示在右侧(Δ)。
图14示出了列举分离自既往sPE患者的人子宫内膜基质细胞的体外蜕膜化过程中差异表达2倍或更大的基因的热图。*＝表达模式通过qRT-PCR验证的基因。倍数变化显示在右侧(Δ)。
图15示出了列举与无感染迹象早产(无感染早产；nPTB)的患者相比，分离自sPE患者的基蜕膜样品中差异表达2倍或更大的基因的热图。倍数变化显示在右侧(Δ)。
图16示出了列举与无感染迹象早产(无感染早产；nPTB)的患者相比，分离自sPE患者的壁蜕膜样品中差异表达2倍或更大的基因的热图。倍数变化显示在右侧(Δ)。
图17A-17C显示子宫内膜的转录谱证实了sPE患者的体内蜕膜化缺陷。主成分分析(PCA)示出了基于全局(图17A)和靶向(图17B)RNA-seq方法的样品分布。图17C示出了通过导向测序靶向的129个基因的基因表达与通过全局RNA-seq识别的相同基因之间的相关性。
图18提供了如实施例8中所述的，与正常孕妇相比，分离自既往严重先兆子痫患者的体外蜕膜化的人子宫内膜基质细胞(hESCs)的差异基因表达小组(DIFFERENTIAL GENEEXPRESSION PANEL)。对基因表达值进行预处理(从每个斑点的平均强度中减去半背景强度中值)，标准化，并使用R软件中的bioconductor LIMMA软件包进行分析。通过错误发现率(调整后的p值)的统计分析确定了显著差异表达基因。
具体实施方式
本发明的方面涉及用于检测差异表达基因的方法和组合物。在一些实施方式中，在来自患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象(例如患者)的样品中检测差异表达基因。这样的方法可用于临床目的，例如，识别患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象(例如患者)，选择治疗方法，监测先兆子痫进展，评估针对先兆子痫的治疗方法的功效或确定对象(例如患者)的治疗过程。本文所述的测定方法还可用于非临床应用，例如出于研究目的，包括：例如，研究先兆子痫的发展机制和/或先兆子痫所涉及的生物学途径和/或生物过程，并在此类研究的基础上开发新的先兆子痫疗法。
生物标志物
本文所述的方法至少部分基于生物标志物的识别，所述生物标志物被发现与曾正常妊娠的妇女相比，在先前妊娠中患有先兆子痫(PE)妇女中存在差异。
如本文所用，术语“生物标志物”或“生物标志物集”是指以特定水平存在的生物分子(例如蛋白质)或这样的生物分子的集合。在特定的细胞群(例如人子宫内膜基质细胞(hESC))中可能存在一种或多种这样的生物标志物，每种生物标志物的水平可能偏离不同细胞群和/或不同对象(例如患者)中的相同生物标志物的水平。例如，指示先兆子痫的生物标志物在来自对象的样品(来自患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象)中相对于对照样品(来自正常对象，例如未患有先兆子痫或不处于先兆子痫的风险中的对象)中相同标志物的水平可能升高或降低。
表1中提供了指示先兆子痫的示例性生物标志物。在一些实施方式中，所述生物标志物在来自先前妊娠中患有先兆子痫的对象的样品中与来自曾正常妊娠的对象的样品相比差异表达。在一些实施方式中，生物标志物在蜕膜化的样品中与未蜕膜化的样品相比差异表达。
表1.示例性生物标志物
Figure BDA0002479314440000071
Figure BDA0002479314440000081
Figure BDA0002479314440000091
Figure BDA0002479314440000101
*HGNC-HUGO基因命名委员会基因识别号
在其他实施方式中，生物标志物是表A中定义的那些生物标志物中的一种或多种(例如，所有或基本上所有)。在一些实施方式中，生物标志物代表与从未患有sPE的足月产和早产患者取得的对照生物组织相比，来自从之前有严重先兆子痫(sPE)的患者取得的生物样品的36种差异表达基因(“DEG”)的集合。在各种实施方式中，生物样品是子宫内膜样品，该样品可以包含子宫内膜组织、子宫内膜细胞和/或子宫内膜液。在其他实施方式中，生物样品可以是血液。表A的生物标志物包括：
表A：全局RNAseq：sPE对比对照
Figure BDA0002479314440000102
Figure BDA0002479314440000111
Figure BDA0002479314440000121
在其他实施方式中，生物标志物是表B中定义的那些生物标志物中的一种或多种(例如，全部或基本上所有)。在一些实施方式中，生物标志物代表与从未患有sPE的早产患者(例如，早产患者与先兆子痫患者具有相同胎龄)中取得的对照生物组织相比，来自从之前患有严重先兆子痫(sPE)的患者中取得的生物样品中的246种差异表达基因(“DEG”)的集合。在各种实施方式中，生物样品是子宫内膜样品，该样品可以包含子宫内膜组织、子宫内膜细胞和/或子宫内膜液。在其他实施方式中，生物样品可以是血液。
表B的生物标志物包括：
表B：全局RNAseq：sPE对比对照早产
Figure BDA0002479314440000122
Figure BDA0002479314440000131
Figure BDA0002479314440000141
Figure BDA0002479314440000151
Figure BDA0002479314440000161
Figure BDA0002479314440000171
Figure BDA0002479314440000181
Figure BDA0002479314440000191
Figure BDA0002479314440000201
在另一种实施方式中，生物标志物是表C中定义的那些生物标志物中的一种或多种(例如，全部或基本上所有)。在一些实施方式中，生物标志物代表与从未患有sPE的足月产患者取得的对照生物组织相比，来自从之前患有严重先兆子痫(sPE)的患者取得的生物样品中的15种差异表达基因(“DEG”)的集合。在各种实施方式中，生物样品是子宫内膜样品，该样品可以包含子宫内膜组织、子宫内膜细胞和/或子宫内膜液。在其他实施方式中，生物样品可以是血液。表C的生物标志物包括：
表C：全局RNAseq：sPE对比对照足月产
Figure BDA0002479314440000202
Figure BDA0002479314440000211
本文所述的生物标志物在先前妊娠患有先兆子痫的对象(例如患者)中的水平与获得自曾正常妊娠的妇女的样品中相同生物标志物的水平相比可以偏差(例如，增加或减少)至少20％(例如30％、50％、80％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更多)。本文所述的生物标志物在蜕膜化细胞中的水平与未蜕膜化细胞中相同生物标志物的水平偏差(例如，增加或减少)至少20％(例如30％、50％、80％、100％、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或更多)。这样的生物标志物或生物标志物集可以用于诊断/预后应用和非临床应用(例如，出于研究目的)。
在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定来自表1的指示先兆子痫的1至129种生物标志物之间的水平，和/或来自表A的指示先兆子痫的1至36种生物标志物之间的水平，和/或来自表B的指示先兆子痫的1至246种生物标志物之间的水平，和/或来自表C的指示先兆子痫的1至15种生物标志物之间的水平。例如，在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定来自表1的指示先兆子痫的5至129种生物标志物之间、10至129种生物标志物之间、15至129种生物标志物之间、25至129种生物标志物之间、50至129种生物标志物之间、75至129种生物标志物之间、100至129种生物标志物之间或125至129种生物标志物之间的水平。例如，在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定来自表A的指示先兆子痫的5至36种生物标志物之间、10至36种生物标志物之间、15至36种生物标志物之间、25至36种生物标志物之间、10-15种生物标志物之间、15至25种生物标志物之间、25至30种生物标志物之间或30至36生物标志物之间的水平。在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定来自表B的指示先兆子痫的5至246种生物标志物之间、10至246种生物标志物之间、15至246种生物标志物之间、25至246种生物标志物之间、50至246种生物标志物之间、75至246种生物标志物之间、100至246种生物标志物之间、125至246种生物标志物之间、150至246种生物标志物之间、200至246种生物标志物之间的水平。在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定来自表C的指示先兆子痫的5至15种生物标志物之间、10至15种生物标志物之间或5至10种生物标志物之间的水平。在一些实施方式中，使用来自不同的表的生物标志物的组合。在一些实施方式中，本文所述的方法提供了确定指示先兆子痫的1至125种生物标志物之间、1至100种生物标志物之间、1至75种生物标志物之间、1至50种生物标志物之间、1至25种生物标志物之间、1至15种生物标志物之间、1至10种生物标志物之间或1至5种生物标志物之间的水平(例如来自表1、表A、表B和/或表C中的一种或多种)。
在一些实施方式中，本文所述的方法提供确定指示先兆子痫的至少1种生物标志物、至少2种生物标志物、至少3种生物标志物、至少4种生物标志物、至少5种生物标志物、至少6种生物标志物、至少7种生物标志物、至少8种生物标志物、至少9种生物标志物或至少10种生物标志物的水平。
在一些实施方式中，本文所述的方法提供确定指示先兆子痫的少于500种生物标志物、少于450种生物标志物、少于400种生物标志物、少于350种生物标志物、少于300种生物标志物、少于250种生物标志物、少于200种生物标志物、少于150种生物标志物、少于100种生物标志物、少于50种生物标志物、少于25种生物标志物或少于5种生物标志物的水平。
在各种实施方式中，可在本文中使用的生物标志物包括来自表1、表A、表B和表C的生物标志物的任何组合。例如，本文所述的方法可将来自表1的一种或多种生物标志物与来自表A的一种或多种生物标志物组合使用。在另一个实例中，本文所述的方法可以将来自表1的一种或多种生物标志物与来自表B的一种或多种生物标志物组合使用。在又一个实例中，本文所述的方法可以将来自表1的一种或多种生物标志物与来自表C的一种或多种生物标志物组合使用。在又一个实例中，本文所述的方法可以将来自表1的一种或多种生物标志物与来自表A的一种或多种生物标志物、和/或来自表B的一种或多种生物标志物、和/或来自表C的一种或多种生物标志物组合使用。该方法可以将来自表1、表A、表B和表C的生物标志物的任何组合与未包含在表1、表A、表B和表C中的本文公开的任何其他生物标志物组合使用。
在一些实施方式中，本文所述的方法提供确定选自指示先兆子痫的生物标志物组中的至少一种生物标志物的水平。在一些实施方式中，本文所述的方法提供确定选自指示先兆子痫的两组或更多组生物标志物中的至少一种生物标志物的水平。生物标志物组可以基本上由指示先兆子痫的至少3种生物标志物、至少5种生物标志物、至少9种生物标志物、至少22种生物标志物、至少50种生物标志物或至少100种生物标志物组成。
本文所述的方法和组合物可以包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：任何组合或数量的所述的生物标志物或生物标志物组，而没有限制。如本文所用，“基本上由”指定基因或基因产物的列表组成的生物标志物组会包括该组中列举的基因(例如生物标志物)，并且可以包括一种或多种不会实质性影响所要求保护的组的基本和新颖特征的无关紧要的或对照基因(例如生物标志物)。在一些实施方式中，一种或多种对照基因(例如生物标志物)可以是例如一种或多种管家基因。在一些实施方式中，对照基因(例如生物标志物)是阳性对照。在一些实施方式中，对照基因(例如生物标志物)是阴性对照。在一些实施方式中，一种或多种对照基因(例如生物标志物)包括检测对照。在一些实施方式中，检测对照是标记的核酸。在一些实施方式中，检测对照是标记的抗体。在一些实施方式中，检测对照是带有可检测标记的蛋白质。
生物标志物可以基于特定生物标志物的一个或多个特征而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于生物标志物在特定患者群(例如，伴有先兆子痫的妊娠妇女)中的表达而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于生物标志物在特定细胞(例如，人子宫内膜基质细胞(hESC))中的表达而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于生物标志物在特定组织(例如，基蜕膜或壁蜕膜)中的表达而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于生物标志物在特定细胞过程(例如，蜕膜化)中的表达而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于与特定途径的关联(例如，胞外结构组构)而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于生物标志物的已知功能而分组。在一些实施方式中，生物标志物基于确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值而分组。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：CNR1、IRS2、CHST7、TSC22D3、PRUNE2、ADAMTS8、MAOA、MGST1、FKBP5、SCARA5、ZBTB16、GLUL、SERPINA3、NPR1、LPAR1、APOD、ABLIM2、CHI3L2、PDLIM1、PID1、TIMP4、ACSL1、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、ABCB4、GPC2、SBK1、TRO、TSPAN6、DOCK6、GNB1L、SOX4、ZSWIM4、PODXL、SERTAD4、LMO2、FOXL2、AFAP1L2、COCH、GPRC5C、FBXO2、C1orf133、TMSB15A、GFRA2、PRAGMIN、TSPAN11、CNIH3、F2RL1和DIO2，这生物标志物组任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC3、TMEM25、CCDC81、MYCN、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1，生物标志物组任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：LOC101928439、RP11-1026M7.3、RNU4ATAC18P、TRBV4-2、RP11-12D16.2、TRAJ59、RNU4-39P、RNU6-540P、RNA5SP187、PRKXP1、MIR4509-1、RNU6-1111P、A1BG-AS1、CSPG4、MIR365A、RNA5SP463、BACE1-AS、RNU6-621P、RNU4-76P、TRIM48、PSMD3、RP11-661A12.4、LOC644172、ZNF483、ARL5B、ENPP4、IPW、SPINK1、C7、SNORD52、CYP19A1、TSPAN1、LOC101929607、SNORD52、RNU2-5P、MS4A2、SNORD71、RNU6V、RNU6-901P、MME-AS1、TAS2R46、MIR548H1、COL8A1、SNORD115-32、UGT2B7、OGN、RP11-872D17.8、RP11-108K3.1、CP和DEFB1，该生物标志物组任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：PRG2、AC073218.2、AC073218.3、RNASE2、LOC100506530、AOX1、PZP、RP11-57P19.1、LINC01338、NOTUM、TMEM27、CTC-498J12.1、IGSF10、KLRF1、TRPC4、GPR126、ADAMTS15、PROM1、PDGFD、KIR2DL2、LOC101929174、SULF2、MUM1L1、ACE2、SAPCD1、RP11-59H7.3、DOCK4-AS1、GBP2、TNC、XXbac-BPG252P9.10、RNU6-1024P、MT1CP、RN7SKP16、IER3、INHBA、DSC3、SERPINB11、RP1-68D18.4、IL1A、BMP2、ADAMTS4、LINC00312、MMP10、RNU6-162P、CXCL5、ICAM1、RNU7-40P、SPINK1、IL23A和CXCL8，该生物标志物组任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC3、TMEM25、CCDC81、MYCN、SLITRK6、TTR、ISM1、PITX1、SULF1、OXTR、AADAC、MEST、C17orf107、CNIH3、HMCN1、C1orf133、MYLK、CLEC3B、F2RL2、ADAMTS19、ATCAY、BDNF、DUSP6、KLF2、REEP2、DENND2A、LPL、KRTAP17-1、LOXL4、NANOS3、OLFML1、C14orf37、ENST00000313664、LAMA5、LYPD1、GBP2、FAM19A2、SERTAD4、CHODL、ERAP2、ERP27、FAM38B、GALNT14、LOC728392、PDGFD、FAT1、TNFRSF10C、EHD3、MFAP2、MRVI1、TNFAIP6、FST、DMKN、ANXA2、DES、EFEMP1、RGS20、CA12、GGT5、ENST00000380464、LTBP1、C6orf176、TNFRSF8、BAIAP2L2、LSAMP、DDIT4、RHOU、IRS2、EDNRB、COL15A1、DCN、WNT6、LPAR1、RGS16、KCNJ8、ABLIM2、LRRC15、CRLF1、RASL11B、CFD、GAL、ALDH1A1、PRUNE2、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1，这组生物标志物任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3，这组生物标志物任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
在一些实施方式中，生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3，这组生物标志物任选地与来自表1、表A、表B或表C中任一个中的一种或多种另外生物标志物组合。
任何数量和/或组合的本文列出的生物标志物或本文列出的生物标志物组可以用于所述的方法和/或装置中。例如，在该方法或测定中使用的生物标志物组可以包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：本文列出的生物标志物中的1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种、40种、41种、42种、43种、44种、45种、46种、47种、48种、49种、50种、51种、52种、53种、54种、55种、56种、57种、58种、59种、60种、61种、62种、63种、64种、65种、66种、67种、68种、69种、70种、71种、72种、73种、74种、75种、76种、77种、78种、79种、80种、81种、82种、83种、84种、85种、86种、87种、88种、89种、90种、91种、92种、93种、94种、95种、96种、97种、98种、99种、100种、101种、102种、103种、104种、105种、106种、107种、108种、109种、110种、111种、112种、113种、114种、115种、116种、117种、118种、119种、120种、121种、122种、123种、124种、125种、126种、127种、128种、129种、130种或更多种。
在一些实施方式中，在该方法或测定中使用的生物标志物组可以包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：本文列出的生物标志物中的多于10种、多于11种、多于12种、多于13种、多于14种、多于15种、多于16种、多于17种、多于18种、多于19种、多于20种、多于21种、多于22种、多于23种、多于24种、多于25种、多于26种、多于27种、多于28种、多于29种、多于30种、多于31种、多于32种、多于33种、多于34种、多于35种、多于36种、多于37种、多于38种、多于39种、多于40种、多于41种、多于42种、多于43种、多于44种、多于45种、多于46种、多于47种、多于48种、多于49种、多于50种、多于51种、多于52种、多于53种、多于54种、多于55种、多于56种、多于57种、多于58种、多于59种、多于60种、多于61种、多于62种、多于63种、多于64种、多于65种、多于66种、多于67种、多于68种、多于69种、多于70种、多于71种、多于72种、多于73种、多于74种、多于75种、多于76种、多于77种、多于78种、多于79种、多于80种、多于81种、多于82种、多于83种、多于84种、多于85种、多于86种、多于87种、多于88种、多于89种、多于90种、多于91种、多于92种、多于93种、多于94种、多于95种、多于96种、多于97种、多于98种、多于99种、多于100种、多于101种、多于102种、多于103种、多于104种、多于105种、多于106种、多于107种、多于108种、多于109种、多于110种、多于111种、多于112种、多于113种、多于114种、多于115种、多于116种、多于117种、多于118种、多于119种、多于120种、多于121种、多于122种、多于123种、多于124种、多于125种、多于126种、多于127种、多于128或多于129种。
在一些实施方式中，在该方法或测定中使用的生物标志物组可以包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：本文列出的生物标志物中的不多于10种、不多于11种、不多于12种、不多于13种、不多于14种、不多于15种、不多于16种、不多于17种、不多于18种、不多于19种、不多于20种、不多于21种、不多于22种、不多于23种、不多于24种、不多于25种、不多于26种、不多于27种、不多于28种、不多于29种、不多于30种、不多于31种、不多于32种、不多于33种、不多于34种、不多于35种、不多于36种、不多于37种、不多于38种、不多于39种、不多于40种、不多于41种、不多于42种、不多于43种、不多于44种、不多于45种、不多于46种、不多于47种、不多于48种、不多于49种、不多于50种、不多于51种、不多于52种、不多于53种、不多于54种、不多于55种、不多于56种、不多于57种、不多于58种、不多于59种、不多于60种、不多于61种、不多于62种、不多于63种、不多于64种、不多于65种、不多于66种、不多于67种、不多于68种、不多于69种、不多于70种、不多于71种、不多于72种、不多于73种、不多于74种、不多于75种、不多于76种、不多于77种、不多于78种、不多于79种、不多于80种、不多于81种、不多于82种、不多于83种、不多于84种、不多于85种、不多于86种、不多于87种、不多于88种、不多于89种、不多于90种、不多于91种、不多于92种、不多于93种、不多于94种、不多于95种、不多于96种、不多于97种、不多于98种、不多于99种、不多于100种、不多于101种、不多于102种、不多于103种、不多于104种、不多于105种、不多于106种、不多于107种、不多于108种、不多于109种、不多于110种、不多于111种、不多于112种、不多于113种、不多于114种、不多于115种、不多于116种、不多于117种、不多于118种、不多于119种、不多于120种、不多于121种、不多于122种、不多于123种、不多于124种、不多于125种、不多于126种、不多于127种、不多于128种、或不多于129种
在一些实施方式中，生物标志物组与以下途径中的至少一种相关：胞外结构组构、组织发育、炎症、免疫功能、转运和/或代谢、细胞信号传导、转录和/或翻译、信号转导、蛋白质降解、胰岛素相关、G-蛋白信号传导以及细胞周期和激活。
在一些实施方式中，与胞外结构组构途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：LAMA5、DMKN、CCDC81、DES、LAMA5、SULF1、ITGA11、COL8A1、COL14A1、MFAP2、BAIAP2L2、MRVI1、TMEM132C、和TMEM25。
在一些实施方式中，与组织发育途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：SLITRK6、CHODL、MEST和SULF1。
在一些实施方式中，与炎症途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：CXCL8、IL23A、IL1A、CXCL5和CCL8。
在一些实施方式中，与免疫功能途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：TNFRSF10C、TNFRSF8、ADRA2A、COCH、FAN19A2、GAL、GBP2、IL1B、IL15、LSAMP、SERPINA和SLC7A2。
在一些实施方式中，与转运和/或代谢途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：ALDH1A1、AADAC、CNR1、CHST7、CA12、CPE、CHI3L2、CLIC3、HSD17B2、LPL、NPR1、GALNT14、PRUNE2、OXTR、TTR、ATCAY、DENND2A、NKAIN1、CNIH3、NPTX1、KCNJ8、REEP2、SCG5、SLC35F3和ERAP2。
在一些实施方式中，与细胞信号传导途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：LTBP1、F2RL2、FAT1、ANXA2、BDNF、DCN、EDNRA、EDNRB、ITGA11、LRRC15、RKB2、SSTR1、RSPO3、WNT6、LPAR1、PDGFD、RHOU、MYLK、DDIT4、ARHGDIB和DUSP6。
在一些实施方式中，与转录和翻译途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：EFEMP1、KLF2、ABLIM2、EGR1、FST、PITX1、NTCB和NANOS3。
在一些实施方式中，与信号转导途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：SPARCL1、TNFAIP6、ANGPT2、COL15A1和GRP。
在一些实施方式中，与蛋白质降解途径相关的生物标志物组相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：ERP27、ADAMTS19、ADAMTS8、FBXO2、CFD、GGT5、EHD3、LOXL4和SCAR5。
在一些实施方式中，与胰岛素相关途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：IGFBP1、IGFBP5和IRS2。
在一些实施方式中，与G蛋白信号传导途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：P2RY14、RGS20、RASGRP2、RASL11B、RGS16和SIPA1L2。
在一些实施方式中，与细胞周期和激活途径相关的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：LYPD1、HMCN1、CRLF1和CLE3B。
在一些实施方式中，与未指定的途径生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：C1QTNF7、NCKAP5、SERTAD4、C10orf10、C14orf37、C17orf107、ISM1、OLFML1和SBSN。
在一些实施方式中，确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值大于10的生物标志物组包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：CNR1、IRS2、CHST7、TSC22D3、PRUNE2、HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1、IGFBP1、CP、DEFB1、PRG2、AC073218.2、AC073218.3、RNU7-40P、SPINK1、IL23A和CXCL8。
生物标志物的效用
本文所述的任何生物标志物，无论是单独使用还是组合使用(例如，至少两种生物标志物、至少三种生物标志物或更多种生物标志物)，均可用于本文所述的测定方法中，以分析来自患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象的样品。获得自这样的测定方法的结果可用于临床应用或非临床应用，包括但不限于本文所述的那些。
(i)生物样品分析
可以包含生物标志物的任何样品(例如生物样品，如子宫内膜组织、子宫内膜细胞或子宫内膜液)可以通过本文所述的测定方法进行分析。本文所述的方法可以包括提供从对象获得的样品。在一些实例中，样品可以来自体外测定，例如，体外细胞培养物(例如，人子宫内膜基质细胞(hESC)的体外培养物)。如本文所用，“样品”是指包含生物材料的组合物，所述生物材料例如是(但不限于)来自对象的子宫内膜组织、子宫内膜细胞或子宫内膜液。样品既包括采自对象的初始未处理样品，也包括随后处理的样品，例如部分纯化或保存的形式。示例性样品包括子宫内膜组织、子宫内膜基质细胞、胎盘组织、胎儿组织、血液、血浆或粘液。示例性子宫内膜组织包括但不限于基蜕膜、包蜕膜或壁蜕膜。在一些实施方式中，样品是体液样品，例如子宫内膜液样品。在一些实施方式中，可以随时间或以特定的时间间隔从对象采集多个(例如，至少2、3、4、5或更多个)样品，例如以评估疾病进展或评估治疗的功效。
可以使用本领域已知的任何方法从对象获得样品。在一些实施方式中，样品通过从对象切除样品(例如，子宫内膜组织样品)而从对象获得。在一些实施方式中，样品通过手术过程(例如，扩张刮除术(D&C))从对象获得。在一些实施方式中，样品通过活检(例如，子宫内膜活检)从对象获得。在一些实施方式中，样品通过抽吸、轻拭、刮擦或其组合从对象获得。在一些实施方式中，样品是在临产和分娩(labor and delivery)后从对象获得的。在一些实施方式中，样品获得自人。
术语“对象”是指需要本文所述分析的对象。在一些实施方式中，对象是患者。在一些实施方式中，对象是人。在一些实施方式中，对象是女人(妇女)。在一些实施方式中，对象是先前怀孕的妇女。在一些实施方式中，对象是先前(例如在之前妊娠期间)患有先兆子痫的妇女。在一些实施方式中，该人正在怀孕或试图怀孕(例如，初次或后续妊娠)。在一些实施方式中，对象是孕妇(例如，初次或后续妊娠)。在一些实施方式中，对象处于先兆子痫的风险中(无论已知或未知)。这样的对象可能表现出与先兆子痫有关的一种或多种风险因素。示例性风险因素包括但不限于：孕有多于一个婴儿，有慢性高血压、糖尿病、肾脏或器官移植史、初次妊娠、肥胖、产妇年龄超过40岁、产妇年龄低于18岁、先兆子痫家族史、多囊卵巢综合症、对象患有一种或多种自身免疫性疾病(例如狼疮)、体外受精既往史或镰状细胞病。对象还可以包括接受生育治疗(例如，体外受精或相关过程)的人。
可供选择地，需要本文所述的分析的对象可以是患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的患者(已知或未知)。这样的对象目前可能患有先兆子痫，或者过去可能曾患有先兆子痫。这样的对象可能处于先兆子痫的风险中。在一些实例中，对象是正在通过例如抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和/或分娩治疗先兆子痫的人类患者。在其他情况下，这样的人类患者可能没有接受这样治疗(例如，目前未治疗)。在一些实施方式中，在将对象识别为处于先兆子痫的风险中之后，对该对象开始治疗。
先兆子痫的实例包括但不限于轻度先兆子痫、严重先兆子痫(sPE)、子痫和HELLP(溶血、肝酶升高、血小板计数低)综合征。
可以使用本文所述的测定方法分析本文所述的任何样品，所述测定方法涉及测量本文所述的一种或多种生物标志物的水平。可以使用常规测定或本文所述的那些方法来评估本文公开的生物标志物的水平(例如，量)或生物标志物的水平变化。
如本文所用，术语“确定”或“测量”或可供选择地“检测”可包括评估样品中某种物质的存在、不存在、数量和/或量(可以是有效量)，包括推导这样的物质的定性或定量浓度水平，或以其他方式评估来自对象的样品中这样的物质的值和/或分类。
在一些实施方式中，通过直接检测样品(例如，子宫内膜组织样品、子宫内膜细胞样品或子宫内膜液样品)中的蛋白质来评估或测量生物标志物的水平。可供选择地或另外地，可以例如通过检测蛋白质的活性水平(例如，酶促测定)来间接地评估或测量样品中蛋白质的水平。
可以使用免疫测定法来测量蛋白质(例如生物标志物蛋白质)的水平。免疫测定的实例包括任何已知的测定(没有限制)，并且可以包括以下中的任何一种：免疫印迹测定(例如蛋白质印迹)、免疫组织化学分析、流式细胞术测定、免疫荧光测定(IF)、酶联免疫吸附测定(ELISA)(例如夹心ELISA)、放射免疫分析、基于电化学发光的检测分析、磁性免疫测定、侧向流动分析和相关技术。本文提供的用于检测生物标志物蛋白的另外的合适的免疫测定对于本领域技术人员将是显而易见的。
这样的免疫测定可涉及使用目标生物标志物的特异试剂(例如抗体)。“特异性结合”目标生物标志物的试剂(例如抗体)是本领域熟知的术语，并且确定这样的特异性结合的方法也是本领域熟知的。如果抗体与特定目标生物标志物的反应或结合比与可供选择的生物标志物更频繁、更迅速、以持久和/或亲和力更大，则该抗体被称为表现出“特异性结合”。通过阅读该定义还应理解，例如，特异性结合第一目标肽的抗体可以特异性结合或可以不特异性结合或优先结合第二目标肽。这样，“特异性结合”或“优先结合”并不一定需要(尽管可以包括)排他地结合。通常，但并非必须，提及结合是指优先结合。在一些实例中，“特异性结合”目标肽或其表位的抗体可以不结合同一抗原中的其他肽或其他表位。在一些实施方式中，样品可以与多于一种的结合不同蛋白质生物标志物的结合剂同时或依次接触(例如，多重分析(multiplexed analysis))。
如本文所用，术语“抗体”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域或免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质。例如，抗体可以包括重(H)链可变区(在本文中缩写为VH)和轻(L)链可变区(在本文中缩写为VL)。在另一个实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如，单链抗体、Fab和sFab片段、F(ab')2、Fd片段、Fv片段、scFv、结构域抗体(dAb)片段(de Wildt et al.,Eur JImmunol.1996；26(3):629-39.)以及完整抗体。抗体可以具有IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亚型)的结构特征。抗体可以来自任何来源，包括但不限于灵长类(人类和非人灵长类)和灵长类化(例如人源化)抗体。
在一些实施方式中，如本文所述的抗体可以与可检测标记偶联，并且可以基于从可检测标记释放的信号的强度来确定检测试剂与目标肽的结合。可供选择地，可以使用对检测试剂具有特异性的第二抗体。一种或多种抗体可以与可检测标记偶联。本领域已知的任何合适的标记可用于本文所述的测定方法。在一些实施方式中，可检测标记包括荧光团。如本文所用，术语“荧光团”(也称为“荧光标记”或“荧光染料”)是指在限定的激发波长下吸收光能并以不同波长发射光能的部分。在一些实施方式中，检测部分是酶或包含酶。在一些实施方式中，酶是一种从无色底物产生有色产物的酶(例如，β-半乳糖苷酶)。
在一些实例中，本文描述的测定方法被应用于测量样品中细胞生物标志物的水平。可以根据常规实践采集这样的细胞，并且可以通过常规方法测量细胞生物标志物的水平。
在其他实例中，本文描述的测定方法被应用于测量样品中循环生物标志物的水平，该样品可以是任何生物样品，包括但不限于流体样品(例如血液样品或血浆样品)、组织样品或细胞样品。本领域已知的任何测定，包括例如免疫测定，均可用于测量这样的生物标志物的水平。
对于本领域技术人员而言显而易见的是，本发明不限于免疫测定。不基于抗体的检测测定(例如质谱法)也可用于本文提供的生物标志物的检测和/或定量。依赖于发色底物的测定也可用于本文提供的生物标志物的检测和/或定量。
可供选择地，可以通过常规方法测量样品中编码生物标志物的核酸的水平。在一些实施方式中，测量编码生物标志物的核酸的表达水平包括测量mRNA。在一些实施方式中，可以使用实时逆转录酶(RT)Q-PCR或核酸微阵列来测量编码生物标志物的mRNA的表达水平。检测生物标志物核酸序列的方法包括但不限于聚合酶链式反应(PCR)、逆转录酶PCR(RT-PCR)、原位PCR、定量PCR(Q-PCR)、实时定量PCR(RT Q-PCR)、原位杂交、DNA印迹、RNA印迹、序列分析、微阵列分析、报告基因检测或其他DNA/RNA杂交平台。
在一些实施方式中，样品中编码生物标志物的核酸的水平可通过杂交测定来测量。在一些实施方式中，杂交测定包含至少一种结合配偶体。在一些实施方式中，杂交测定包含至少一种寡核苷酸结合配偶体。在一些实施方式中，杂交测定包含至少一种标记的寡核苷酸结合配偶体。在一些实施方式中，杂交测定包括至少一对寡核苷酸结合配偶体。在一些实施方式中，杂交测定包括至少一对标记的寡核苷酸结合配偶体。
在一些实施方式中，杂交测定包含至少一种寡核苷酸结合配偶体，所述结合配偶体如SEQ ID NO:1至8中的任一个所示。在一些实施方式中，杂交测定包括成对的寡核苷酸结合配偶体，所述成对的结合配偶体如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。在一些实施方式中，杂交测定包括成对的寡核苷酸结合配偶体，所述成对的结合配偶体如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。在一些实施方式中，杂交测定法包括成对的寡核苷酸结合配偶体，所述成对的结合配偶体如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。在一些实施方式中，杂交测定法包括成对的寡核苷酸结合配偶体，所述成对的结合配偶体如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。在一些实施方式中，标记可以是荧光标记、放射性标记或本文所述的其他可检测标记。
特异性结合期望生物标志物的任何结合剂可以用于本文所述的方法和试剂盒中，以测量样品中生物标志物的水平。在一些实施方式中，结合剂是特异性结合期望蛋白质生物标志物的抗体或适体。在其他实施方式中，结合剂可以是与编码核酸或其一部分互补的一种或多种寡核苷酸。在一些实施方式中，样品可以同时或依次地与结合不同生物标志物的多于一种结合剂接触(例如，多重分析)。
为了测量目标生物标志物的水平，可以使样品在合适的条件下与结合剂接触。通常，术语“接触”是指结合剂与样品或采集自样品的细胞暴露合适时间段，该合适时间段足以在结合剂与样品中的目标生物标志物之间形成复合物(如果有的话)。在一些实施方式中，通过毛细管作用进行接触，其中样品穿过支撑膜的表面移动。
在一些实施方式中，测定可以在低通量平台上进行，包括单一测定形式。例如，低通量平台可用于测量样品(例如子宫内膜组织、子宫内膜基质细胞和/或子宫内膜液)中蛋白质的存在和量，以用于诊断方法、监测疾病和/或治疗进程和/或预测某种疾病或病症是否可以从特定治疗中受益。
在一些实施方式中，可能有必要将结合剂固定在支撑元件上。固定结合剂的方法将取决于诸如结合剂的性质和支撑元件的材料的因素，并且可能需要特定的缓冲液。这样的方法对于本领域普通技术人员将是显而易见的。例如，可以使用本文还描述的任何试剂盒和/或检测装置来测量本文所述的样品中的生物标志物集。
用于检测和/或定量生物标志物(例如本文提供的那些)的检测测定方法的类型可以取决于要使用的检测方法的特定情况(例如临床或研究应用)，取决于要检测的生物标志物的种类和数量，和/或取决于要并行运行的患者样品的种类和数量，仅举出几个参数。
本文所述的测定方法可用于临床和非临床目的。本文提供了一些实例。
(ii)诊断和/或预后应用
可以通过本文所述的测定方法测量获得自对象的样品中的一种或多种生物标志物的水平，并将其用于各种临床目的。这些临床目的可以包括但不限于：识别患有先兆子痫的对象、识别处于发展先兆子痫的风险中的对象、监测对象中先兆子痫的进展、评估先兆子痫的治疗功效、识别适合于特定治疗的患者和/或预测对象的先兆子痫复发。因此，本文描述的是基于本文描述的一种或多种生物标志物的水平的先兆子痫(例如严重先兆子痫(sPE))诊断和预后方法。
当需要时，可以用同一样品中的内部对照或用标准样品(具有预定量的生物标志物)对通过本文所述测定方法确定的样品中生物标志物的水平进行标准化，以获得标准化值。然后可以将生物标志物的原始值或标准化值与参考样品或对照样品中的原始值或标准化值进行比较。获得自对象的样品中生物标志物相对于参考样品或对照样品中相同生物标志物的值的偏差(例如增加或减少)值指示该样品的先兆子痫。这样的样品表明获得的样品所来自的对象可能患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
在一些实施方式中，可以将获得自对象的样品中的生物标志物的水平与该生物标志物的预定阈值进行比较，该生物标志物的偏差(例如升高或降低)值可以指示该对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
对照样品或参考样品可以是获得自健康个体的样品。可供选择地，对照样品或参考样品包含已知量的待评估生物标志物。在一些实施方式中，对照样品或参考样品是获得自对照对象的样品。
在一些实施方式中，对照对象是无妊娠并发症的怀孕个体。在一些实施方式中，对照对象是至少一次先前妊娠结果正常的未怀孕个体。在一些实施方式中，对照对象是至少一次先前妊娠伴有无感染迹象早产(无感染早产，nPTB)的未怀孕个体。在一些实施方式中，对照对象是至少一次先前妊娠结果为先兆子痫的未怀孕个体。
如本文所用，对照对象可以是健康个体，即，在测量蛋白质水平时明显没有先兆子痫或没有该疾病史的个体。对照对象也可以代表健康对象群，所述健康对象群在与通过本文所述的方法进行分析的对象相比时优选具有一个或多个匹配特征(例如年龄、胎龄、种族、妊娠状态)。
对照水平可以是预定水平或阈值。这样的预定水平可以代表没有先兆子痫或未处于先兆子痫的风险中的对象群的蛋白质水平(例如，健康对象群的平均水平)。它也可以代表患有先兆子痫的对象群的蛋白质水平。
预定水平可以采取多种形式。例如，它可以是单个截止值，例如中值或均值。在一些实施方式中，可以基于比较组建立这样的预定水平，例如一个确定的组已知患有先兆子痫而另一个确定的组已知未患有先兆子痫。可供选择地，预定水平可以是包括这样的范围：例如代表对照群中蛋白质水平的范围。
如本文所述的对照水平可以通过本领域已知的任何技术来确定。在一些实例中，可以通过对本文还描述的对照样品进行常规方法(例如，如本文所述的用于获得测试样品的蛋白质水平的相同测定)来获得对照水平。在其他实例中，蛋白质水平可以自对照群的成员获得，并且可以通过本领域中已知的任何方法(例如，计算程序)来分析结果以获得代表对照群的蛋白质水平的对照水平(预定水平)。
通过将获得自候选对象的样品的生物标志物水平与如本文所述的参考值进行比较，可以确定候选对象是否患有先兆子痫(例如严重先兆子痫(sPE))或处于先兆子痫(例如严重先兆子痫(sPE))的风险中。例如，如果来自候选对象的样品中生物标志物的水平与参考值有偏差(例如增加或减少)(例如，与参考值偏差1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％、500％或更多)，候选对象可能被识别为患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。当参考值代表患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象群中生物标志物水平的值范围时，落入该范围的候选者样品中的生物标志物的值表明候选者对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
如本文所用，“比率的绝对值”是指样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率。对照水平在本文中详细描述。在一些实施方式中，该比率的绝对值为至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少100、至少150、至少200、至少300、至少400、至少500或至少1000。在一些实施方式中，该比率的绝对值在2至1000之间。在一些实施方式中，该比率的绝对值在5至1000之间、在10至1000之间、在15至1000之间、在20至1000之间、在30至1000之间、在40至1000之间、在50至1000之间、在60至1000之间、在70至1000之间、在80至1000之间、在90至100之间、在100至1000之间、在200至1000之间、在300至1000之间、在400至1000之间或在500至1000之间。在一些实施方式中，该比率的绝对值在2至500之间、在2至400之间、在2至300之间、在2至200之间、在2至100之间、在2至90之间、在2至80之间、在2至70之间、在2至60之间、在2至50之间、在2至40之间、在2至30之间、在2至20之间、在2至15之间、在2至10之间或在2至5之间。
如本文所用，“升高的水平”、“增加的水平”或“高于参考值的水平”是指生物标志物的水平高于参考值，例如对照样品中生物标志物的水平的预定阈值。生物标志物的升高或增加的水平包括这样的生物标志物水平：高于参考值例如1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％、500％或更多。在一些实施方式中，测试样品中生物标志物的水平是参考样品中的生物标志物的水平的至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、25、50、100、150、200、300、400、500、1000、10000倍或更多倍。
如本文所用，“降低的水平”、“减少的水平”或“低于参考值的水平”是指生物标志物的水平低于参考值，例如对照样品中生物标志物的水平的预定阈值。生物标志物的降低或减少的水平包括低于参考值例如1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％、500％或更多的生物标志物的水平。在一些实施方式中，参考样品中的生物标志物的水平是测试样品中生物标志物的水平的至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、25、50、100、150、200、300、400、500、1000、10000倍或更多倍。
在一些实施方式中，候选对象是有先兆子痫症状的人类患者。例如，对象可有以下一种或多种症状或其组合：蛋白尿、肾脏问题、头痛、视力改变、腹痛、恶心或呕吐、尿量减少、血小板减少、肝功能受损、呼吸急促。在其他实施方式中，在采集样品时对象没有症状或看起来没有先兆子痫的症状，没有先兆子痫的症状史，或者没有先兆子痫史。在其他实施方式中，所述对象正在怀孕或试图怀孕。
在本文所述的方法中识别为患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象可以接受合适的治疗，例如如本文所述，通过抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和/或分娩治疗。
考虑到在生物标志物水平与先兆子痫之间建立的关系，本文所述的测定方法和试剂盒还可用于评估先兆子痫的治疗功效，例如本文所述的那些治疗功效。例如，可以在治疗之前或之后或在治疗过程中从进行治疗的对象采集多个样品(例如，子宫内膜组织样品、子宫内膜液样品或子宫内膜细胞样品)。可以通过本文所述的任何测定方法或装置来测量生物标志物的水平，并且可以相应地确定生物标志物的值(例如量)。例如，如果生物标志物的绝对值指示对象患有先兆子痫，并且该生物标志物的水平在治疗后或在整个治疗过程中(例如，与较早采集的样品相比，在较晚采集的样品中)发生变化，则表明治疗是有效的。在一些实例中，治疗涉及有效量的抗先兆子痫疗法。抗先兆子痫疗法的实例包括但不限于抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
如果对象被识别为对治疗无反应，则向被识别的对象施用更高的剂量和/或给药频率的治疗剂(例如，抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂和/或糖胺聚糖)，或者，可以施用替代治疗。在一些实施方式中，维持、降低或停止对被识别为对治疗有反应或不需要进一步治疗的对象的治疗剂的剂量或给药频率。可供选择地，可以向发现对初次或后续治疗无反应的对象施用替代治疗。在一些实施方式中，可以向发现对初次或后续治疗具有阴性反应的对象施用替代治疗。
在其他实施方式中，生物标志物或生物标志物集的值也可用于识别可以使用例如抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和/或分娩治疗的先兆子痫。为了实施该方法，可以通过合适的方法(例如本文所述的那些方法，例如蛋白质印迹或RT Q-PCR测定)来测量从患有先兆子痫的对象采集的样品(例如子宫内膜组织样品)中的生物标志物的水平。如果生物标志物的水平比参考值升高或降低，则表明抗先兆子痫治疗可以有效治疗该疾病。如果疾病被识别为易受用抗先兆子痫疗法进行的治疗(例如，先兆子痫的一种或多种症状可以得到改善或停止)的影响，则该方法可以进一步包括向患有该疾病的对象施用有效量的抗先兆子痫疗法。
在其他实施方式中，可以依靠生物标志物或生物标志物集的值来评估先兆子痫的严重性。例如，如本文所述，先兆子痫可以为轻度状态，在此期间对象没有经历疾病的症状。在另一个实例中，先兆子痫可以是严重先兆子痫(sPE)，在此期间对象具有严重症状，例如肝功能受损。在一些实施方式中，一种或多种生物标志物的水平指示对象是否将经历、正在经历或即将经历先兆子痫(例如，严重先兆子痫(sPE))。在一些实施方式中，该方法包括将获得自患有先兆子痫的对象的样品的生物标志物的水平与来自同一对象的对照样品的生物标志物的水平进行比较，所述对照样品例如自同一对象妊娠前获得的样品，或自同一对象在无并发症(例如无先兆子痫)妊娠期间获得的样品。
评估对象的一个或多个受精卵或胚胎移植的方法也在本发明的范围内。为了实施该方法，可以通过合适的方法测量自试图怀孕并且处于先兆子痫的风险中的对象采集的样品中的生物标志物的水平。如果一种或多种生物标志物水平指示对象可能未患有先兆子痫，则可以将一个或多个受精卵或胚胎移植至对象中。如果一种或多种生物标志物水平指示对象可能或将患有先兆子痫，则可在对先兆子痫进行一种或多种治疗之前、之后或同时，将一个或多个受精卵或胚胎移植至对象中。可以使用本领域已知的任何手段将受精卵或胚胎移植至对象中，包括但不限于体外受精(IVF)、超声引导IVF和胚胎手术移植(SET)。
(iii)非临床应用
此外，本文所述的任何生物标志物的水平可以用于非临床用途，包括例如用于研究目的。在一些实施方式中，本文所述的方法可以用于研究细胞行为和/或细胞机制。例如，本文描述的一种或多种生物标志物可用于评估蜕膜化，这可用于各种目的，包括关于蜕膜化和开发特别靶向蜕膜化缺陷的新药剂的研究。
在一些实施方式中，如本文所述，可以依赖生物标志物集的水平来开发先兆子痫的新疗法。例如，可以测量在自已经施用了新疗法(例如，临床试验)的对象获得的样品的生物标志物的水平。在一些实施方式中，生物标志物集的水平可以指示在施用新疗法之前、期间或之后新疗法在对象中的功效或先兆子痫在对象中的进展。
用于测量生物标志物的试剂盒和检测装置
本发明还提供了用于测量如本文所述的生物标志物集的水平的试剂盒和装置。这种试剂盒或装置可包含与目标生物标志物的基因产物特异性结合的一种或多种结合剂(例如寡核苷酸、抗体等)，所述目标生物标志物例如图13至16、图18、表1、表A、表B和/或表C和/或其子集中列出的生物标志物。例如，这样的试剂盒或检测装置可包含至少一种结合剂，所述结合剂对由选自图13至16、图18、表1、表A、表B和/或表C和/或其子集的基因所表达的一个或多个转录本(例如mRNA)或蛋白质生物标志物具有特异性。在一些情况下，试剂盒或检测装置包含对本文所述的RNA和/或蛋白质生物标志物组的两个或更多个成员具有特异性的结合剂。
可以通过任何适当的方法评估基因(例如ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和/或SERPINA3和/或表1、表A、表B和/或表C中列出的差异表达基因中的任意一种或多种)的特定表达产物的水平。在一些实施方式中，使用一种或多种包含任何固体支持物(例如，一种或多种芯片)的测定来分析特定表达产物的水平。例如，固体支持物(例如芯片)可用于分析对象的或来自对象的至少一种(例如1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或更多种)生物样品。因此，在一些实施方式中，试剂盒包含可用于杂交和/或测序测定(例如，下一代测序反应)的多种基因特异性多核苷酸探针或引物。在一些实施方式中，试剂盒包含一种或多种其他结合剂(例如，适体、抗体和/或其他结合剂)。在一些实施方式中，在分开的容器中提供不同的结合剂(例如，以干粉、溶液、悬浮液或其他形式)。在一些实施方式中，提供了两种或更多种结合剂(例如，两种或更多种多核苷酸探针或引物)的混合物(例如，以干粉、溶液、悬浮液或其他形式)。在一些实施方式中，提供一种或多种结合剂，所述结合剂附接于固体支持物(例如芯片，例如以探针阵列、引物或抗体的形式)。在一些实施方式中，标记一种或多种结合剂是(例如，用荧光标志物、发光标志物、放射性标志物、酶接头或其他可检测的标志物)。
可以用一种结合配偶体或多于一种的结合配偶体来修饰固体支持物(例如芯片)的部分。固相支持物可以任何方式与结合配偶体连接。作为非限制性实例，结合配偶体可以被物理吸附或以其他方式结合(例如，直接结合)在固体支持物的表面上，或通过适当的偶联化学法以任何方式共价连接，包括但不限于：通过表面上的环氧化物键合、使用表面上存在的胺或羧酸基团形成酰胺键(例如，通过NHS EDC化学法)、硫醇和硫醇反应性基团(例如马来酰亚胺基团)之间的键合、在醛和胺之间形成席夫碱、与表面上存在的酸酐反应和/或通过光可活化接头。
结合配偶体可以是对本发明的组合物或方法有用的任何结合配偶体。例如，结合配偶体可以是蛋白质(具有天然存在的氨基酸或人工氨基酸)、由天然存在的碱基或人工碱基制成的一种或多种核酸(包括例如DNA或RNA)、糖、碳水化合物、一种或多种小分子(包括但不限于以下的一种或多种：维生素、激素、辅因子、血红素基团、螯合物、脂肪酸或其他已知的小分子和/或噬菌体)。
通过以任何方式并使用任何装置将液滴沉积在预定位置上可以将结合配偶体施加到基底表面上，包括但不限于：使用移液管、液体分配器、绘图仪、纳米点样仪、纳米绘图仪、阵列仪、喷涂机构或其他合适的流体处理设备。
在一些实施方式中，提供了适用于本发明方法和组合物的抗体或抗原结合片段。利用这样的可用于本发明的组合物和方法的抗体或抗原结合片段的免疫测定可以是直接或间接形式的竞争性或非竞争性免疫测定。此类免疫测定的非限制性实例是酶联免疫测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、夹心测定(免疫测定)、基于流式细胞术的测定、蛋白质印迹测定、免疫沉淀测定、免疫组织化学测定、免疫显微镜测定、侧向流动免疫色谱测定和蛋白质组学阵列。例如，结合配偶体可以是对目标蛋白质具有特异性的抗体(或其抗体结合片段)，所述目标蛋白质包括ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和/或SERPINA3中的一种或多种。
在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体用于评估基因的特定表达产物的水平。寡核苷酸结合配偶体可以是已知或使用的任何类型。作为一组非限制性实例，在某些实施方式中，寡核苷酸探针可以是RNA寡核苷酸、DNA寡核苷酸、RNA寡核苷酸和DNA核苷酸的混合物、和/或可以是RNA和DNA的混合物的寡核苷酸。寡核苷酸结合配偶体可以是天然存在的或合成的。寡核苷酸结合配偶体可以有任何长度。作为一组非限制性实例，寡核苷酸结合配偶体的长度可以在约5至约50个核苷酸、约10至约40个核苷酸或约15至约40个核苷酸的范围内。该阵列可包含对每个目标基因具有特异性的任何数量的寡核苷酸结合配偶体。例如，该阵列可包含对每个目标基因具有特异性的少于10个(例如9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个)寡核苷酸探针。作为另一个实例，该阵列可包含对每个目标基因具有特异性的多于10个、多于50个、多于100个或多于1000个寡核苷酸结合配偶体。
该阵列可以进一步包含对照结合配偶体，例如错配对照寡核苷酸结合配偶体或对照抗体或其抗原结合片段。当存在错配对照寡核苷酸结合配偶体时，定量步骤可以包括计算每个寡核苷酸结合配偶体与其对应的错配对照结合配偶体之间的杂交信号强度的差异。在存在对照抗体或其抗原结合片段的情况下，定量步骤可包括计算针对检查中的基因(例如，ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和/或SERPINA3)的抗体或抗原结合片段与对照或“管家”抗体或其抗原结合片段之间的杂交信号强度的差异。定量可以进一步包括针对每个基因计算每个寡核苷酸探针与其对应的错配对照探针之间的杂交信号强度的平均差异。
阵列(例如芯片)可以包含任意数量的分析区域。作为一组非限制性示例，该阵列可以包含一个或多于一个(例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、20个、25个、30个、35个、40个或更多个)分析区域。每个分析区域可包含固定于该分析区域的基底部分的任何数量的结合配偶体。作为非限制性示例集合，每个分析区域可以包括固定于该分析区域的基底部分的1至1,000个结合配偶体、1至500个结合配偶体、1至250个结合配偶体、1至100个结合配偶体、2至1,000个结合配偶体、2至500个结合配偶体、2至250个结合配偶体、2至100个结合配偶体、3至1,000个结合配偶体、3至500个结合配偶体、3至250个结合配偶体或3至100个结合配偶体。
通过例如与固体支持物(例如芯片、载体、膜、柱、蛋白质组阵列等)，可以固定结合配偶体，包括但不限于与特定的目标抗原结合的抗体或抗原结合片段。在一组实施方式中，用于形成固体支持物的材料在光的波长为400至800nm(例如可见范围内的光)之间具有大于90％的光透射率。可以通过厚度为例如约2mm(或在其他实施方式中，约1mm或约0.1mm)的材料测量光透射率。在某些情况下，光透射率在光的波长为400至800nm之间大于或等于80％、大于或等于85％、大于或等于88％、大于或等于92％、大于或等于94％、或大于或等于96％。在一些实施方式中，用于形成固体支持物的材料的光透射率在光的波长为400至800nm之间小于或等于99.9％、小于或等于96％、小于或等于94％、小于或等于92％、小于或等于90％、小于或等于85％、小于或等于80％、小于或等于50％、小于或等于30％、或小于或等于10％。上述范围的组合也是可能的。
该阵列可以在几乎任何形状的表面上(例如该阵列可以是平面的)或者甚至是多个表面上制造。可用于本文所述的组合物和方法的固体支持物材料的非限制性实例可包括玻璃、塑料、弹性体材料、膜或用于进行免疫测定的其他合适的材料。固体支持物可以由一种材料形成，或者可以由两种或更多种材料形成。
特定的固体支持物材料可以包括，但不限于：任何类型的玻璃(例如，熔融石英、硼硅酸盐玻璃、
Figure BDA0002479314440000321
或
Figure BDA0002479314440000322
)。在一种实施方式中，固体支持物还可以包括非玻璃基底(例如，塑料基底)，该非玻璃基底涂覆有通过方法诸如溅射、硅的氧化或通过硅烷试剂的反应而产生的二氧化玻璃膜。玻璃表面可以用官能化硅烷试剂进一步改性，所述官能化硅烷试剂包括例如胺封端的硅烷(氨基丙基三乙氧基硅烷)和环氧化物封端的硅烷(缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷(glycidoxypropyltrimethoxysilane))。
其他特定的固体支持物材料可以包括但不限于：热塑性聚合物，并且可以包含以下中的一种或多种：聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、环烯烃共聚物、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏二氟乙烯、任何含氟聚合物(例如聚四氟乙烯，也称为
Figure BDA0002479314440000323
)，聚乳酸、聚(甲基丙烯酸甲酯)(也称为PMMA或丙烯酸；例如，
Figure BDA0002479314440000325
和
Figure BDA0002479314440000324
)、和丙烯腈-丁二烯-苯乙烯。
其他特定的固体支持物材料可以包括但不限于：一种或多种弹性体材料，包括聚硅氧烷(硅酮，例如聚二甲基硅氧烷)和橡胶(聚异戊二烯、聚丁二烯、氯丁二烯、苯乙烯-丁二烯、丁腈橡胶、聚醚嵌段酰胺、乙烯-醋酸乙烯酯、表氯醇橡胶、异丁烯-异戊二烯、腈、氯丁橡胶、乙烯-丙烯和海帕伦)。
其他特定的固体支持物材料可以包括但不限于：一种或多种膜基底，例如葡聚糖、直链淀粉、尼龙、聚偏二氟乙烯(PVDF)、玻璃纤维和天然或改性纤维素(例如、纤维素、硝化纤维素、CNBr活化纤维素、以及用聚丙烯酰胺、琼脂糖和/或磁铁矿改性的纤维素)。支持物的性质可以固定或悬浮在溶液(例如珠粒)中。
在一些实施方式中，固体支持物(例如芯片)的材料和尺寸(例如厚度)基本上不透水蒸气。在一些实施方式中，也可以存在覆盖物。在一些实施方式中，覆盖物基本上不透水蒸气。例如，固体支持物(例如芯片)可以包括覆盖物，该覆盖物包括已知提供高蒸气屏障的材料，例如金属箔、某些聚合物、某些陶瓷及其组合。下文提供具有低水蒸气渗透率的材料的实例。在其他情况下，至少部分地基于芯片的形状和/或构造而选择材料。例如，某些材料可用于形成平面装置，而其他材料更适合于形成弯曲或不规则形状的装置。
用于形成全部或一部分本文所述任何组合物的部分或组成部分的材料的水蒸气渗透率例如可以为小于约5.0g·mm/m2·d、小于约4.0g·mm/m2·d、小于约3.0g·mm/m2·d、小于约2.0g·mm/m2·d、小于约1.0g·mm/m2·d、小于约0.5g·mm/m2·d、小于约0.3g·mm/m2·d、小于约0.1g·mm/m2·d或小于约0.05g·mm/m2·d。在某些情况下，水蒸气渗透率可以例如为约0.01g·mm/m2·d至约2.0g·mm/m2·d、约0.01g·mm/m2·d至约1.0g·mm/m2·d、约0.01g·mm/m2·d至约0.4g·mm/m2·d、约0.01g·mm/m2·d至约0.04g·mm/m2·d或约0.01g·mm/m2·d至约0.1g·mm/m2·d。水蒸气渗透率可在例如40℃，90％的相对湿度(RH)下测量。具有任何上述水蒸气渗透性的材料的组合可用于本发明的组合物或方法中。
在一些实施方式中，固体支持物(例如芯片)和/或覆盖物的材料和尺寸可以变化。举例来说，芯片可被配置为提供一个或多个区域(例如，液体容纳区域)。在某些实施费事中，芯片可以被配置为提供两个或更多个区域(例如，液体容纳区域)。在某些实施例中，该区域中的两个或更多个与其他区域流体隔离。在一种实施方式中，所有区域都与其他区域流体隔离。在一些实施方式中，所有区域都是流体连接的。芯片可以包括任何数量的液体容纳区域。作为非限制性实例，芯片可以包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个液体容纳区域，每个液体容纳区域可以彼此流体分开。在其他实施例中，芯片可包括彼此流体连接的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个液体容纳区域。
本文所述的固体支持物(例如芯片)可以具有用于进行分析(例如化学和/或生物反应或其他过程)的任何合适的体积。固体支持物的整个体积可以包括例如任何试剂存储区域、分析区域、液体容纳区域、废物区域以及一个或多个识别符。在一些实施方式中，使用少量的试剂和样品，并且液体容纳区域的总体积为，例如小于或等于10mL、小于或等于5mL、小于或等于1mL、小于或等于500μL、小于或等于250μL、小于或等于100μL、小于或等于50μL、小于或等于25μL、小于或等于10μL、小于小于或等于5μL、或小于或等于1μL。在一些实施方式中，使用少量的试剂和样品，并且液体容纳区域的总体积为，例如至少10mL、至少5mL、至少1mL、至少500μL、至少250mLμL、至少100μL、至少50μL、至少25μL、至少10μL、至少5μL或至少1μL。上述参考值的组合也是可能的。
固体支持物(例如芯片)的长度和/或宽度可以为，例如小于或等于300mm、小于或等于200mm、小于或等于150mm、小于或等于100mm、小于或等于95mm、小于或等于90mm、小于或等于85mm、小于或等于80mm、小于或等于75mm、小于或等于70mm、小于或等于65mm、小于或等于60mm、小于或等于55mm、小于或等于50mm、小于或等于45mm、小于或等于40mm、小于或等于35mm、小于或等于30mm、小于或等于25mm、或小于或等于20mm。在一些实施方式中，芯片的长度和/或宽度可以为，例如至少300mm、至少200mm、至少150mm、至少100mm、至少95mm、至少90mm、至少85mm、至少80mm、至少75mm、至少70mm、至少65mm、至少60mm、至少55mm、至少50mm、至少45mm、至少40mm、至少35mm、至少30mm、至少25mm、或至少20mm。上述参考值的组合也是可能的。在一些实施方式中，固体支持物(例如芯片)的厚度可以为，例如小于或等于5mm、小于或等于3mm、小于或等于2mm、小于或等于1mm、小于或等于0.9mm、小于或等于0.8mm、小于或等于0.7mm、小于或等于0.5mm、小于或等于0.4mm、小于或等于0.3mm、小于或等于0.2mm、或小于或等于0.1mm。在一些实施方式中，固体支持物(例如芯片)的厚度可以为，例如至少5mm、至少3mm、至少2mm、至少1mm、至少0.9mm、至少0.8mm、至少0.7mm、至少0.5mm、至少0.4mm、至少0.3mm、至少0.2mm、或至少0.1mm。上述参考值的组合也是可能的。一种或多种固体支持物(例如芯片)可以通过任何合适的装置同时进行分析。适配器可与一个或多个固体支持物(例如芯片)一起使用，以将固体支持物插入并牢固地固定在分析仪中。
在一些实施方式中，固体支持物(例如芯片)包括一个或多个识别符。可以使用任何方法或类型的识别。例如，识别符可以是但不限于任何类型的标签，例如条形码或RFID标签。识别符可以包括姓名、患者编号、社会保险号或用于对象的任何其他识别方法。识别符也可以是在临床环境中有用的任何类型的随机识别符。
应当理解，本文所述的固体支持物(例如芯片)和它们各自的组件是示例性的，并且固体支持物(例如芯片)和组件的其他构造和/或类型可以与本文所述的系统和方法一起使用。
可以通过本领域已知的任何方法来定量一种或多种结合配偶体的结合(例如，以检测蛋白质或其他目标物质的结合，所述目标物质包括但不限于抗原结合的抗体复合物)。定量可以例如通过检测或询问与抗体结合的活性分子来进行。在连续区域上执行多于一个测定的多路格式下，与每个测定相关的信号应可与其他测定区分开。可以使用本领域已知的任何适当策略，包括但不限于：(1)使用具有基本上不重叠的光谱和/或电化学特性的标记：(2)使用保持附接或沉积在示踪剂自身附近的信号放大化学物质。
在一些实施方式中，标记的结合配偶体(例如，抗体或抗原结合片段)可以用作示踪剂以检测结合(例如，使用抗原结合的抗体复合物)。可用于本发明方法和组合物的标记类型的实例包括酶、放射性同位素、胶体金属、荧光化合物、磁性、化学发光化合物、电化学发光基团、金属纳米颗粒和生物发光化合物。可以使用任何已知方法来制备放射性标记的结合配偶体(例如抗体)，并且放射性标记的结合配偶体可能涉及偶联放射性同位素，例如153Eu、3H、32P、35S、59Fe或125I，然后可以通过γ射线计数器、闪烁计数器或通过放射自显影进行检测。结合配偶体(例如抗体或抗原结合片段)可以可供选择地用诸如酵母乙醇脱氢酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等酶标记，然后显影并以分光光度法或视觉方式检测。标记可用于使色原体反应成可检测的生色团(包括，例如，如果色原体是沉淀染料)。
合适的荧光标记可以包括但不限于：荧光素；异硫氰酸荧光素；荧光胺；若丹明；Alexa
Figure BDA0002479314440000341
染料(例如Alexa
Figure BDA0002479314440000342
350、Alexa
Figure BDA0002479314440000343
405、Alexa
Figure BDA0002479314440000344
430、Alexa
Figure BDA0002479314440000345
488、Alexa
Figure BDA0002479314440000346
514、Alexa
Figure BDA00024793144400003418
532、Alexa
Figure BDA00024793144400003417
546、Alexa
Figure BDA00024793144400003416
555、Alexa
Figure BDA0002479314440000349
568、Alexa
Figure BDA0002479314440000348
594、Alexa
Figure BDA0002479314440000347
610、Alexa
Figure BDA00024793144400003419
633、Alexa
Figure BDA00024793144400003415
635、Alexa
Figure BDA00024793144400003413
647、Alexa
Figure BDA00024793144400003410
660、Alexa
Figure BDA00024793144400003411
680、Alexa
Figure BDA00024793144400003412
700、Alexa
Figure BDA00024793144400003420
750或Alexa
Figure BDA00024793144400003414
790)；花菁染料，包括但不限于：Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、和Cy7.5等。标记也可以是时间分辨的荧光(TRF)原子(例如具有适当配体以增强TRF产量的Eu或Sr)。也可以使用一种以上能够产生荧光共振能量转移(FRET)的荧光团。合适的化学发光标记可以包括但不限于：吖啶酯，鲁米诺，咪唑，草酸酯，萤光素和任何其他类似的标记。
作为非限制性实例，使用的合适的电化学发光基团可包括：钌和类似基团。金属纳米颗粒也可以用作标记。金属纳米颗粒可用于催化金属增强反应(例如用于银增强的金胶体)。
可使用共价或非共价手段将本文所述或本领域已知的任何标记与示踪剂连接。标签可以存在在诸如珠粒(包括例如普通珠粒、中空珠粒或具有铁磁芯的珠粒)之类的物体上或内部，然后将珠粒附接到结合配偶体(例如抗体或其抗原结合片段)。标记也可以是纳米粒子，包括但不限于上转换磷光系统、纳米点、量子点、纳米棒和/或纳米线。与抗体连接的标记也可以是核酸，然后所述核酸可以在通过光学、电或电化学手段中的一种或多种进行定量之前进行扩增(例如，使用PCR)。
在一些实施方式中，结合配偶体是寡核苷酸结合配偶体。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体结合至生物标志物的核酸序列。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体是标记的寡核苷酸结合配偶体。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:1所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:2所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:3所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ IDNO:4所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:5所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:6所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:7所示。在一些实施方式中，寡核苷酸结合配偶体如SEQ ID NO:8所示。
在一些实施方式中，结合配偶体在结合复合物形成之前固定在固体支持物上。在其他实施方式中，抗体和抗原结合片段的固定在结合复合物形成后进行。
在一种实施方式中，本文公开的免疫测定方法包括：将结合配偶体(例如，抗体或抗原结合片段)固定在固体支持物(例如芯片)上；，在允许生物标志物的表达产物(例如蛋白质)如果存在于样品中则与一种或多种结合配偶体(例如一种或多种抗体或抗原结合片段)结合的条件下，将样品(例如子宫内膜液样品)施加到固体支持物上；从固体支持物上去除多余的样品；在允许结合(例如表达产物与抗原结合的固定的抗体或抗原结合片段的结合)的条件下，检测结合的复合物(使用例如具有可检测标记的抗体或抗原结合片段)；洗涤该固体支持物并分析标记。
试剂可以在芯片中或芯片上储存不同的时间。例如，试剂可以储存超过1小时、超过6小时、超过12小时、超过1天、超过1周、超过1个月、超过3个月、超过6个月、超过1年或超过2年。任选地，可以以合适的方式处理芯片以延长储存时间。例如，可以将其中含有储存试剂的芯片真空密封，储存在黑暗环境中和/或储存在低温(例如，低于4℃或0℃)下。储存时间的长短取决于一个或多个因素，例如所使用的特定试剂、所储存试剂的形式(例如湿的或干的)、用于形成基底和覆盖层的尺寸和材料、粘附基底和覆盖层的方法以及如何整体处理或储存芯片。将试剂(例如，液体或干燥试剂)储存在固体支持材料上可以涉及在使用之前或包装过程中覆盖和/或密封芯片。
试剂盒中可包括本文所述的任何固态测定装置。试剂盒可包括可用于这样的装置的任何包装。该试剂盒可能包含使用任何格式或语言的说明书。该试剂盒还可以指导用户从一个或多个位置(物理或电子)获得更多说明书。随附的说明书可以包括如何使用试剂盒中包含的组成部分来测量采集自对象(例如人类患者)的生物样品中生物标志物集(例如蛋白质生物标志物或核酸生物标志物)的水平。与试剂盒的使用有关的说明书通常包括关于每种组成部分的量和用于进行本文所述测定方法的合适条件的信息。
试剂盒中的组成部分可以是单位剂量、大包装(例如多剂量包装)或亚单位剂量。试剂盒还可包含本文所述的一种或多种缓冲液，但不限于包被缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液和/或终止缓冲液。
本发明的试剂盒置于合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、广口瓶、软包装(例如，密封的Mylar袋或塑料袋)等。还考虑了与特定装置例如PCR机、核酸阵列或流式细胞仪系统组合使用的包装。
试剂盒可以任选地提供其他组成部分，例如解释性信息，例如对照和/或标准或参考样品。通常，试剂盒包括容器和在容器上或与容器相关的标签或包装插页。在一些实施方式中，本发明提供了包含上述试剂盒内容物的制品。
先兆子痫的治疗
使用本文所述的方法识别的患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中的对象可以用任何适当的抗先兆子痫疗法进行治疗。在一些实施方式中，提供的方法包括基于所描述的方法(例如，测量生物标志物集的水平)的输出来选择针对对象的治疗。
在一些实施方式中，该方法包括选择疗法或施用疗法中的一种或两种以基于测定的输出(例如生物标志物检测)施用至对象，所述疗法例如抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和/或分娩。
在一些实施方式中，疗法包括施用抗高血压剂。抗高血压剂的实例包括但不限于，中枢作用的α2-肾上腺素能激动剂(例如甲基多巴或可乐定)、外周作用的肾上腺素能受体拮抗剂(例如拉贝洛尔或哌唑嗪)、钙通道阻滞剂(例如硝苯地平或维拉帕米)、血管舒张剂(例如肼屈嗪或硝普钠)和利尿剂(例如噻嗪类利尿剂(如氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪、吲达帕胺和甲硝唑)。
在一些实施方式中，疗法包括施用抗凝血剂。抗凝血剂的实例包括但不限于，糖蛋白血小板抑制剂(例如阿昔单抗、依替巴肽、替罗非班)、血小板凝集抑制剂(例如阿司匹林、坎格雷洛、西洛他唑、氯吡格雷、双嘧达莫、普拉格雷、噻氯匹定或替卡格雷)和蛋白酶-活化的受体1拮抗剂(例如沃拉帕沙)。
在一些实施方式中，疗法包括施用皮质类固醇。皮质类固醇的实例包括但不限于，氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟轻松、氟轻松、哈西奈德、醋酸曲安西龙、倍氯米松、倍他米松、地塞米松、氟可龙、卤米松、莫米松、二丙酸阿氯米松、二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、丁酸氯倍他松、醋酸氟泼尼定、糠酸莫米松、环索奈德、醋酸可的松、醋丙氢化可的松、醋酸氢化可的松、丁丙氢化可的松、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、泼尼卡酯和新戊酸替可的松
在一些实施方式中，疗法包括施用抗惊厥剂。抗惊厥剂的实例包括但不限于，硫酸镁、三聚乙醛、司替戊醇、苯巴比妥、扑米酮、甲基苯巴比妥(methylphenobarbital)、甲苯比妥(mephobarbital)、巴比沙隆、氯巴占、氯硝西泮、氯拉卓、地西泮、咪达唑仑、劳拉西泮、硝西泮、替马西泮、硝甲西泮、溴化钾、非尔氨酯、卡马西平、奥卡西平、醋酸艾司利卡西平、丙戊酸、丙戊酸钠、双丙戊酸钠、氨己烯酸、普罗加比、噻加宾、氨己烯酸、普罗加比、托吡酯、加巴喷丁、普瑞巴林、乙内酰脲、乙苯妥英、苯妥英、美芬妥英、磷苯妥英、噁唑烷二酮、甲乙双酮、三甲双酮、依沙双酮、丙酸盐、贝克拉胺、嘧啶二酮、吡咯烷、布瓦西坦、左乙拉西坦、塞曲西坦(seletracetam)、琥珀酰亚胺、乙琥胺、苯琥胺、甲琥胺、磺酰胺、乙酰唑胺、舒噻嗪、醋甲唑胺、唑尼沙胺、三嗪、拉莫三嗪、苯丁酰脲、苯乙酰脲、丙戊酰胺、戊诺酰胺和吡仑帕奈。
在一些实施方式中，疗法包括施用抗氧化剂。抗氧化剂的实例包括但不限于，维生素C和维生素E。在一些实施方式中，所述疗法包括施用低剂量阿司匹林。在一些实施方式中，疗法包括卧床休息。在一些实施方式中，疗法包括住院治疗。在一些实施方式中，治疗包括母婴监测。在一些实施方式中，治疗包括分娩胎儿。
在一些实施方式中，疗法包括施用糖胺聚糖。糖胺聚糖的实例包括但不限于，低分子量肝素、硫酸肝素，化学改性的肝素或硫酸肝素、低分子量硫酸皮肤素及其混合物。
有效量的先兆子痫疗法可以经合适的途径施用至需要治疗的对象(例如，人)，所述合适的途径，例如静脉内施用(例如通过以推注的形式或通过一段时间内的连续输注)，通过肌肉内、腹膜内、脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、吸入或局部途径进行。
如本文所用，“有效量”是指赋予对象治疗效果所需的单独或与一种或多种其他活性剂组合的每种活性剂的量。如本领域技术人员所知，有效量根据所治疗的特定病症、病症的严重程度、个体患者参数(包括年龄、身体状况、大小、体重)、治疗持续时间、合并疗法(如果有的话)的性质、具体的施用途径以及卫生执业者的知识和专业技术内的类似因素而变化。这些因素是本领域普通技术人员熟知的，并且仅通过常规实验即可解决。通常优选使用单个成分或其组合的最大剂量，即根据合理医学所判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，患者可能出于医学原因、心理原因或实际上的任何其他原因而坚持较低剂量或可耐受剂量。
经验性考虑因素(例如试剂的半衰期)通常将有助于确定剂量。施用频率可以在治疗过程中确定和调整，并且通常但非必要地基于先兆子痫的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。可供选择地，持续释放治疗剂的剂型可能是合适的。用于实现持续释放的各种剂型和装置是本领域已知的。
如本文所用，术语“治疗”是指以痊愈、治愈、缓解、缓和、改变、补救、减轻、改善或影响疾病、疾病症状和/或先兆子痫的易感性为目的，将包含一种或多种活性剂的组合物应用或施用至患有先兆子痫、有先兆子痫症状和/或易患先兆子痫的对象。
缓解先兆子痫包括延迟疾病的发展或进程和/或降低疾病的严重程度。缓解疾病不一定要求治愈结果。
如本文所用，“延迟”疾病(例如先兆子痫)的发展是指推迟、阻碍、减缓、阻滞、稳定和/或延缓疾病的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于疾病史和/或被治疗的个体。“延迟”或缓解疾病的发展和/或延迟疾病发作的方法是，与不使用此方法相比，在给定的时间范围内减少疾病的一种或多种症状发展的可能性和/或减少在给定的时间范围内症状程度的方法。这样的比较通常基于临床研究，使用足以给出统计学上显著结果的若干对象。
疾病的“发展”或“进展”是指疾病的初始表现和/或随后进展。可以使用本领域熟知的标准临床技术来检测和评估疾病的发展。但是，发展也指可能无法检测到的进展。为了本发明的目的，发展或进展是指症状的生物学过程。“发展”包括发生、复发和发作。如本文所用，先兆子痫的“发作”或“发生”包括初始发作和/或复发。
在一些实施方式中，将疗法施用至对象一次或多次。疗法，例如抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和/或分娩，可以与作为联合疗法的一部分的另一种疗法一起施用来治疗先兆子痫。
如本文所用，术语联合疗法包括以依次方式施用这些药物，即其中每种治疗剂在不同的时间施用，以及以基本上同时的方式施用这些治疗剂或药剂中至少两种。
依次或基本上同时施用每种药剂可以受到任何适当的途径影响，所述途径包括但不限于，口服途径、静脉内途径、肌内、皮下途径以及通过粘膜组织的直接吸收。药剂可以通过相同途径或通过不同途径来施用。例如，第一药剂可以口服施用，而第二药剂可以静脉施用。
如本文所用，除非另有说明，术语“依次”是指以规则的顺序或次序为特征，例如，如果剂量方案包括施用第一治疗剂和第二治疗剂，则依次剂量方案可以包括在使用第二治疗剂之前、同时、基本上同时或之后施用第一治疗剂，但是两种药物将以规则的顺序或次序施用。除非另有说明，术语“分开的”是指彼此分开。除非另有说明，术语“同时”是指同时发生或完成，例如，同时施用本发明的药剂。术语“基本上同时”是指试剂彼此在几分钟之内(例如，彼此在10分钟之内)施用，并且旨在包括联合施用以及连续施用，但是如果是连续施用，则仅在短时间(例如，执业医师分开施用两种药物所需要的时间)上是分开的。如本文所用，同时施用和基本上同时施用可互换使用。依次施用是指在时间上分开的施用本文所述的药剂。
无需进一步阐述，相信本领域技术人员可以基于以上描述最大程度地利用本发明。因此，以下具体实施方式应被解释为仅仅是说明性的，而不以任何方式限制本发明的其余部分。本文引用的所有出版物出于本文引用的目的或主题通过引用并入。
实施例
为了可以更充分地理解本文所述的发明，阐述了以下实施例。提供本申请中描述的实施例以举例说明本文提供的方法、组合物和系统，并且不应以任何方式解释为限制其范围。
材料和方法
子宫内膜样品采集
信念医院(Hospital La Fe)(西班牙瓦伦西亚)的临床研究伦理委员会(Comitésde
Figure BDA0002479314440000373
en Investigación Clínica)批准本文描述的子宫内膜样品采集，在采集组织之前获得所有供体的书面知情同意。样品采集自在研究的1至5年前怀孕的妇女。所有供体的月经均是有规律的，没有潜在的子宫内膜病变，并且在样品采集前的三个月内未接受激素治疗。子宫内膜活检是通过吸刮管(pipelle)(比利时Genetics)在黄体期早期(周期第15至17天)在无菌条件下获得的。在处理之前的6小时内，将样品保存在PBS中。表2和表3总结了先前sPE和正常妊娠的临床特征。
表2.子宫内膜供体的母婴特征(体外蜕膜化分析)。
Figure BDA0002479314440000371
平均值±SEM**单尾学生t检验
NA：不适用
表3.子宫内膜供体的母婴特征(体外蜕膜基因表达的转录组分析)。
Figure BDA0002479314440000372
*sPE包括1例溶血、肝酶升高和低血小板综合征(HELLP)和1例子痫。
**单尾学生t检验
平均值±SEM
NA：不适用
hESC分离与培养
如先前所述(Simón et al.,J Clin Endocinol Metab,1994,78(3):675-682)，处理子宫内膜样品并通过温和的胶原酶消化来分离hESC，并进行培养。
体外蜕膜化
如先前所述(Brar et al.,Endocrine,1997,6(3):301-307)，通过cAMP和MPA处理使hESC蜕膜化。在没有添加剂的情况下平行培养hESC作为对照。
F-肌动蛋白染色
如先前所述(Garrido-Gómez et al,FASEB J,2012,26(9):3715-3727)，通过F-肌动蛋白染色在形态学水平上确认蜕膜化。
PRL和IGFBP1 ELISA
在蜕膜化的第5天采集来自培养的hESC的条件培养基。PRL(美国BosterImmunoleader)和IGFBP1(美国Raybiotech)浓度通过使用商业ELISA试剂盒根据制造商的说明书来测定。
体外蜕膜化的hESC的全转录组分析
培养5天后，采集来自sPE供体(n＝5)或正常妊娠供体(n＝7)的蜕膜化和未蜕膜化的hESC，并根据制造商的说明书(Life Technologies)将总RNA提取到Trizol中。使用RNALabChip和A2100生物分析仪(Agilent Technologies)评估RNA质量。选择RNA完整性>7的样品进行微阵列分析。根据制造商的指南，使用Agilent 2100生物分析仪技术完成样品的制备和杂交。杂交的微阵列用Axon 4100A扫描仪(Molecular Devices)成像，并用GenePixPro 6.0软件(Molecular Devices)提取。对基因表达值进行预处理(从每个斑点的平均强度中减去半背景中值强度值)，标准化(R软件中的Bioconductor LIMMA软件包)，并通过ANOVA进行统计分析。使用UPGMA和Pearson相关选项对差异表达基因(p值<0.05)进行聚类。通过LIMMA估算倍数变化。通过使用错误发现率进行p值校正(Benjamini Y et al.,BehavBrain Res,2001,125(1-2):279-284)，以说明多种测试效果。数据保存在基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus；登录号为GSE94644)中。
体外基因表达数据的qRT-PCR验证
使用β-肌动蛋白作为内部对照，通过qRT-PCR确定四种基因(ALDH1A1、IGFBP1、NANOS3和HSD17B2)的相对表达水平。表4提供了每种基因的特异性引物。
表4.通过qRT-PCR来确定表达水平的引物对。
Figure BDA0002479314440000381
胎盘和胎膜的采集
UCSF机构审查委员会批准了本文所述的胎盘和胎膜的采集。从所有供体获得书面知情同意。分娩后立即采集标本。分娩后1小时内获得样品，用PBS洗涤，转移至补充有2.5％FBS的'Cytowash培养基'(DMEM H-21，加1％谷氨酰胺，1％青霉素/链霉素，0.1％庆大霉素)中，并在处理之前置于冰上。表5和表6总结了严重先兆子痫(sPE)和胎龄匹配的未感染早产(nPTB)妊娠的临床特征。
表5.蜕膜供体的母婴特征(蜕膜基因原位表达的转录组分析)。
Figure BDA0002479314440000382
平均值±SEM
**单尾学生t检验
NA：不适用
表6.蜕膜供体的母婴特征(免疫定位和体外分化实验)。
Figure BDA0002479314440000391
平均值±SEM
**单尾学生t检验
NA：不适用
激光显微切割和微阵列分析
使用激光显微切割从sPE和nPTB样品(n＝4/组)中分离出基蜕膜和壁蜕膜。在冷PBS中反复清洗胎盘/基蜕膜和平滑绒毛膜/壁蜕膜的活检样本，以去除血液污垢物。丢弃显示出组织损伤和/或坏死的区域。然后将样品置于含有OCT的冷冻切片用包埋模具(cryomold)中，在干冰/乙醇浆中冷冻，并保存在-80℃下。使用Leica CM3050低温恒温器将试块切成20μm。将切片安装在经过紫外线处理的PEN膜载玻片上，接着储存在冰下，然后于当天晚些时候进行激光显微切割。在即将进行该过程之前，将切片浸入冷PBS中，直到OCT溶解(约1分钟)，浸入0.1％甲苯胺蓝中30秒，在冷PBS中洗涤，以分级乙醇系列(75％、75％、95％、100％)进行脱水(30s/处理)，然后用压缩氮气快速干燥。所有溶液均用无核酸酶的水来制备。对基蜕膜和壁蜕膜进行激光显微切割(Leica LMD 7000)，并直接采集到RLT Plus(Qiagen RNeasy Plus 518Micro试剂盒)中。根据制造商的方案分离总RNA，并用光度法测量浓度(NanoDrop 2000c)。RNA完整性通过微流控电泳(Agilent Bioanalyzer 2100)确定。样品储存于-80℃。
通过使用GeneChipHuGene 2.0ST阵列(美国Affymetrix)完成全局基因绘谱。样品处理和杂交是根据UCSF Gladstone(NHLBI)基因组学核心实验室(UCSF Gladstone(NHLBI)Genomics Core Facility)设计的方案完成的。对基因水平表达数据质量进行确认，标准化(RMA)和总结(Affymetrix表达控制台软件)。通过对错误发现率(FDR<0.05)和绝对线性倍数变化≥2(Transcriptome Analysis Console Software)的统计分析确定了显著差异表达。
组织切片的免疫荧光检验法
如先前所述(Genbacev et al.,Hum Reprod,2016,31(6):1300-1314)，将样品固定在多聚甲醛中，在OCT中冷冻并进行免疫染色。表7列出了在此描述的研究中使用的抗体的来源和浓度。
表7.用于免疫细胞和组织化学实验的抗体。
Figure BDA0002479314440000392
Figure BDA0002479314440000401
从基蜕膜和壁蜕膜分离的基质细胞
用补充有1％青霉素-链霉素、0.25％二性霉素B和0.1％庆大霉素的冷无菌PBS(无Ca++和Mg++)洗涤来自基板和平滑绒毛膜/壁蜕膜的样品。从基板上切下基蜕膜薄层(0.5至2.0mm)并切成小块(3mm2至4mm2)，在含有抗生素和和抗真菌剂的PBS中再次洗涤。为了分离壁蜕膜，手动将羊膜与平滑绒毛膜分离。然后从产妇绒毛膜CTB表面轻轻刮下蜕膜层，并在含有抗生素和抗真菌剂的PBS中再次洗涤。对基蜕膜和壁蜕膜的小块进行一系列的酶消化步骤。第一次胶原酶消化(15至20分钟)在每100ml含有35mg I型胶原酶(美国Sigma)、40mgDNA酶(美国Sigma公司)、69mg透明质酸酶(美国Sigma)以及100mg BSA(美国Sigma)的1xPBS(10ml/g组织)中进行。弃去上清液。然后将组织在每100ml含6.9mg胰蛋白酶(美国Sigma)、20mg EDTA(美国Invitrogen)和40mg DNA酶(美国Sigma)的1xPBS中孵育25至30分钟(第二次消化)。在37℃下在水浴中轻摇进行消化，组织(g)与解离缓冲液体积(ml)之比为1:9。通过添加等体积的含有10％FBS的Cytowash培养基来停止酶的活性。通过70μm无菌过滤器过滤上清液(细胞悬液)，并以1200×g离心7分钟。通过添加基于细胞沉淀(g)的重量计算的7x胶原酶消化缓冲液(参见上文)，然后在37℃下在水浴中轻摇孵育15至20分钟，进行另外的胶原酶处理(第三次消化)。通过离心第二次收集上清液(细胞悬浮液)。合并来自胰蛋白酶和第二次胶原酶消化的细胞沉淀，并在Percoll(美国Sigma公司)梯度(44)上纯化。该梯度以2700×g离心25分钟(4℃)，并收集20％至40％密度部分。用Cytowash培养基重复洗涤后，在含有10％炭吸附型FBS(charcoal-stripped FBS)和0.1％青霉素-链霉素的DMEM F12中使分离的蜕膜细胞生长。
培养细胞的免疫荧光检验法
将玻璃盖玻片与50μL 0.5％明胶(美国Sigma)在37℃下孵育30分钟。在包被的玻璃盖玻片上培养从基蜕膜或壁蜕膜分离的细胞，直至细胞实现汇合。然后如先前所述(Genbacev et al.,Hum Reprod,2016,31(6):1300-1314)，对细胞进行免疫染色。
体外再蜕膜化
将从基蜕膜或壁蜕膜分离的基质细胞传代(p)五次。细胞迅速恢复为未蜕膜化的形态表型(p1至2)。如本文所述，在p3或p4，对细胞进行蜕膜化和分析(形态学、免疫定位和ELISA)。
CTB侵袭测定
如先前所述(Kliman et al.,Endocrinology,1986,118(4):1567-1582；Hunkapiller et al.,Development,2011,138(14):2987-2998)，从孕中期人胎盘中分离出CTB。使用具有8μm孔的Transwell聚碳酸酯插入件(6.5mm)对侵袭进行定量，该插件上涂有10μl未稀释的Matrigel(美国Corning Corp)。简而言之，将CTB(分离自10个胎盘)以每个插入件250,000个细胞的密度接种于24孔板中，并用400μL来自新鲜分离基蜕膜或壁蜕膜细胞的条件培养基培养，培养过夜(p0；见图7A)。将PRL(10ng/ml；美国Boster Immunoleade)和/或IGFBP1(10ng/ml；美国Raybiotech)添加到新鲜培养基中，与不含添加剂的相同培养基相比，对CTB侵袭的作用进行定量。实验条件和对照条件以一式两份进行测试。如先前所述(Genbacev et al.,Hum Reprod,2016,31(6):1300-1314)，对侵袭进行测定。整个实验重复4次。计算重复测量的平均值。将结果绘制为平均值±SEM。使用学生t检验分析各组之间的差异。
统计
数据表示为平均值±SEM，n表示实验数量。使用学生t分布分析各组之间的全局差异。p值≤0.05被认为是显著的。
实施例1：来自之前sPE妊娠的妇女的人子宫内膜基质细胞未能在体外蜕膜化
评估自在先前妊娠中发生sPE的患者(n＝13)的子宫内膜活检样本分离的hESC的蜕膜化，并与分娩结果正常的对照患者(n＝13)进行比较。表2总结了参与者的母婴特征。通过用cAMP和醋酸甲羟孕酮(MPA)处理5天来使hESC蜕膜化。作为实验对照，来自同一供体的细胞在不存在cAMP和MPA的情况下平行培养。
F-肌动蛋白在来自非异常妊娠妇女的蜕膜细胞中的定位显示了预期的细胞骨架重构和形状改变，这与成纤维细胞向蜕膜表型的转化相一致(图1A)。相反，来自有sPE的妇女的hESC未经历这些改变(图1B)。在未蜕膜化hESC中，条件培养基中检测到的PRL(图1C-1E)和IGFBP1(图1F-1H)水平很低，两组之间无统计学差异。大多数对照培养物在蜕膜化后，两种分子的分泌都大大增加，但是来自既往sPE患者的hESCs未能显示出增加(图1D、1E、1G和1H)。
因此，结果表明，与对照组相比，获得自既往sPE患者的hESC的体外蜕膜蜕化功能受损。
实施例2：来自既往sPE患者的蜕膜化hESC的全局转录谱的改变。
为了识别在经历过sPE的妇女的hESC中发现的功能性蜕膜化缺陷的分子变化，使用了微阵列策略。具体地，在体外进行由正常妊娠组和sPE妊娠组建立的未蜕膜化和蜕膜化的hESC的转录组学分析(图2A)。表3示出了子宫内膜供体的临床特征。
图2B中给出了结果的概述。在未蜕膜化状态下，对照和sPE样品之间仅5种基因差异表达，并且倍数差异较小(图2C)。因此，在基础状态下，来自既往sPE患者的hESC与来自对照女性的hESC非常相似。
在来自对照供体的样品的蜕膜化过程中，74种基因的表达受到≥2倍的显著调节(图2D和图13)。结果包括熟知的涉及蜕膜化的基因上调(例如，CNR1、IRS2和MAOA)以及基因下调(例如，COCH、SERTADA4和CNIH3)。在途径水平上，与蜕膜化有关的过程(包括氧反应的调节、胰岛素分泌和增殖)上调(图8A)。未检测到显著下调的途径。
与图1A至图1H中所示的结果一致，分离自既往sPE患者的未蜕膜化hESC和蜕膜化hESC之间的比较未能检测到调节的基因表达(0DEG；图2B)。相反，两组中蜕膜化细胞的转录组的比较揭示了129种错表达的基因(≥2倍；图2E和图14)。在图2E和图14中，表达模式已通过qRT-PCR分析得以验证的mRNA(图9)用星号表示。DE基因包括涉及激素转换(HSD17B2)、胞外结构组构(LAMA5、SULF1和ITGA11)、血管发育(ANGPT2、EGR1和RELAXIN2)和对肽的反应(KLF2、SSTR1和IGBFP5)的mRNA编码分子的上调(图8B)。下调的类别包括在蜕膜化中起重要作用的基因(例如，IGFBP1、CNR 1和IL-1B)。后一组在许多途径中起作用，例如细胞因子-受体相互作用、创伤反应、炎症反应、雌激素反应和TGF-β信号传导(图8B)。
最后，分析了来自曾正常妊娠的妇女的非蜕膜化hESC对比蜕膜化hESC中的DE基因之间的重叠(图2D)，以及蜕膜化后sPE妊娠组对比正常妊娠组的DE基因之间的重叠(图2E)。15种基因在正常hESC蜕膜化的过程中上调，而在来自sPE妇女的hESC蜕膜化的过程中下调。它们包括信号传导分子如CNR1、IRS2、LPAR1、ABLIM2和LTBP1，所有这些信号传导分子在蜕膜化过程中具有重要的功能(图8C)。相反，7种基因在正常蜕膜化的过程中下调，而在来自既往sPE患者的等同样品中上调(图8D)。它们包括诸如COCH和CNIH3的分子。
因此，如本文所述的基蜕膜和壁蜕膜的全局转录组绘谱揭示了sPE妊娠中与对照怀孕相比的差异表达基因。
实施例3：来自对照对比sPE妊娠的基蜕膜或壁蜕膜的原位分子缺陷
使用激光显微解剖方法分离基蜕膜(DB)或壁蜕膜(DP)的部分。从来自sPE妇女病例对比对照(来自无感染迹象早产(nPTB)的妇女的胎龄匹配的样品；图3A)的活检样本的组织切片中捕获细胞。表8总结了参与者的临床特征。
表8.蜕膜供体的母婴特征(严重先兆子痫(sPE)对比自发性无感染迹象早产(无感染早产；nPTB)的蜕膜基因原位表达的转录组分析)
Figure BDA0002479314440000411
平均值±SEM**单尾学生t检验
NA：不适用
图3B中示出了结果的概述。在基蜕膜中，在sPE对比nPTB中，有79种基因是显著DE，具有倍数变化较小(图3C和图15)。这些基因包括涉及RNA加工的mRNA编码分子的上调。下调的基因包括DEFB1、CP、OGN和COL8A1。
平滑绒毛膜和壁蜕膜之间的清晰边界使后者细胞得以进行高效激光显微切割。分离自sPE病例对比nPTB对照的mRNA样品的热图的比较揭示了sPE中有227种基因的DE≥2倍(图3D和图16)。上调的基因编码具有免疫功能的分子，例如PRG2和KLRF1。该类别中的其它基因包括RNASE2、PZP、PDGFD、NOTUM和PROM1，它们在维持成年干细胞中发挥作用。催化过氧化物和NO形成的AOX1也上调，这可能是氧化应激的迹象。在途径水平上，细胞通讯、若干代谢过程和跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号传导以及其他途径的调节显著上调(图10)。
下调的mRNA包括白细胞介素(CXCL8、IL23A、IL1A)，CXCL5以及蛋白酶及其抑制剂(SPINK1、ADAMTS4和MMP10)，它们在蜕膜化过程中起重要作用。在途径水平上，细胞粘附、运动和迁移、形态发生、胞外结构和免疫过程的调节受到影响(图10)。
微阵列结果验证了三种DE基因的蛋白质水平(PEG1/MEST和PRG2，在sPE中上调；BMP2，在sPE中下调)。在这些实验中，将免疫定位方法应用于具有相邻壁蜕膜的胎膜的组织切片。在所有病例中，蛋白质水平的结果证实了转录组数据所表明的表达模式(图11A至11C)。
因此，本文所述的基蜕膜和壁蜕膜的全局转录组绘谱揭示了严重先兆子痫(sPE)对比对照妊娠的差异表达基因(DEG)。
实施例4：sPE妊娠中不存在蜕膜化标志物
为了进行蜕膜化原位分析，评估了与nPTB(n＝5)相比，sPE(n＝5)中基蜕膜和壁蜕膜的组织切片中PRL(图4A至4B)和IGFBP1(图4C至4D)表达。表9总结了这些孕妇的临床特征。
表9.蜕膜供体的母婴特征(免疫定位和体外分化实验)。
Figure BDA0002479314440000421
平均值±SEM **单尾学生t
检验
NA：不适用
通过抗细胞角蛋白7的免疫反应性(CK7；图4A至4F)确认了细胞滋养层本体，并且用抗波形蛋白(VIM；图4E至4F)观察了基质细胞。结果表明，在对照nPTB样品中，蜕膜化基质细胞(基蜕膜和壁蜕膜)广泛表达PRL和IGFBP1(图4A和4C)。相反，在sPE样品中，两种蜕膜化标志物的表达大大降低并且在许多情况下不存在(图4B和4D)。对PRL(图4G)和IGFBP1(图4H)的相对免疫反应性进行定量。
因此，结果表明，sPE与蜕膜中PRL和IGFBP1表达的下调有关。该结果还提供了其他证据，表明sPE与蜕膜化中的广泛缺陷有关，这在分娩后立即获得的样品中很明显。
实施例5：从sPE蜕膜活检新鲜分离的基质细胞中未能表达蜕膜化标志物
从sPE(n＝5)或nPTB(n＝4)病例中分离出蜕膜细胞，目的是根据表达通常与这些细胞相关的阶段特异性抗原来确定所述细胞的状态。
过夜培养的新鲜分离的基质细胞不与对内皮细胞或造血细胞(包括巨噬细胞)的标志物具有特异性的抗体反应(数据未显示)。铺板后立即进行的若丹明-鬼笔环肽免疫染色显示了F-肌动蛋白在从来自对照nPTB样品的基蜕膜或壁蜕膜分离的多边形/圆形细胞中的预期分布模式(图5A)。对比之下，来自sPE患者的蜕膜活检的基质细胞具有细长的形态，并伴随成纤维细胞样的F-肌动蛋白组构(图5B)。用抗PRL(图5C至5D)或抗IGFBP1(图5E至5F)进行免疫染色显示了来自sPE蜕膜的基质细胞(其本体通过波形蛋白的表达得到了证实(图5G至5H))的抗体反应性比对照nPTB样品中观察到的低得多。另外，过夜培养后对PRL(图5I)和IGFBP1(图5J)的细胞分泌进行定量。在nPTB中，与基蜕膜相比，从壁蜕膜分离的细胞产生的两种分子的产量都更高。相比之下，sPE与从两个区室分离的细胞分泌的PRL和IGFBP1急剧减少有关。
综上，结果表明，来自sPE患者蜕膜活检的新鲜分离的基质细胞在培养中表现出蜕膜化缺陷。
实施例6：从sPE患者分娩时获得的蜕膜活检分离出的基质细胞不能在体外再蜕膜化
为了确定培养3至5代的分离的基质细胞是否可以在体外再蜕膜化，用激素处理5天后监测形态学变化和分泌的生物标志物(PRL和IGFBP1)。
在来自nPTB对照患者的细胞中，根据如若丹明-鬼笔环肽免疫染色所证实，无论其来源的区室如何，蜕膜化都与特征性多边形/圆形表型相关(图6A)。相反，来自sPE患者的基质细胞在再蜕膜化的过程中未能显示出形态变化(图6B)。在蜕膜化之后的对照细胞中，PRL(图6C)和IGFBP1的分泌增加(图6D)。相反，从sPE患者分离并培养的等同细胞未能响应于MPA和cAMP处理而增加任一分子的分泌(图6C至6D)。
综上，结果表明由sPE患者蜕膜活检培养的人子宫内膜基质细胞(hESC)未能在体外进行再蜕膜化。
实施例7：来自sPE蜕膜细胞的条件培养基未能促进成纤维细胞侵袭。
为了确定sPE相关的蜕膜化缺陷是否与CTB侵袭减少有关，从sPE(n＝4)或对照nPTB(n＝3)病例的基蜕膜和壁蜕膜的样品中分离出基质细胞。将基质细胞过夜培养，并收集条件培养基(CM)。与nPTB培养物相比，sPE样品的CM显示PRL和IGFBP1分泌的下调(图12A至12B)。因此，将实验或对照CM添加至培养在Matrigel基底上的孕中期CTB(n＝10个胎盘)中。通过计算到达过滤器底侧的CTB的数目或其细胞过程来分析侵袭(图7A)。在存在对照(nPTB)CM的情况下，观察到强烈侵袭，这在基蜕膜或壁蜕膜样品中培养的CTB之间没有统计学差异(图7B)。相反，来自sPE病例的等同基质细胞群的CM不支持CTB侵袭。
为了确定来自sPE患者的蜕膜化基质细胞减少PRL和IGFBP1分泌是否与来自这些细胞的CM不能刺激CTB侵袭有关，将细胞在新鲜培养基中培养。当在新鲜的而不是条件培养基中培养细胞时，几乎没有CTB到达过滤器的底侧(图7C)，这表明nPTB蜕膜细胞释放了促进CTB侵袭的因子。向新鲜培养基中添加PRL或IGFBP1(10ng/ml)的影响最小。但是，PRL和IGFBP1组合可显著增加侵袭。
因此，这些结果显示，来自sPE患者的蜕膜细胞的条件培养基在体外抑制了细胞滋养层(CTB)的侵袭。
讨论
如本文所述，异常蜕膜化促成了与先兆子痫(PE)相关的胎盘表型改变。人子宫内膜基质细胞(hESC)从之前因严重PE(sPE)导致有并发症的未怀孕供体分离。如形态学标准和阶段特异性抗原(例如IGFBP1和PRL)的分析所证实，与对照细胞相比，从sPE患者中分离出的hESC在体外无法蜕膜化。结果由全局转录组绘谱数据证实，该数据显示从sPE患者中分离出的hESC在转录上是惰性的。另外，使用激光显微切割从sPE中的母胎界面组织切片中分离出蜕膜。全局转录组绘谱揭示基因表达中的缺陷。此外，在体外去分化的来自sPE患者的蜕膜细胞未能在培养中再蜕膜化。从sPE患者中分离出的hESC的条件培养基未能支持CTB侵袭，这可以通过联合添加IGFBP1和PRL来挽救。这些数据说明，未能蜕膜化是sPE中下调CTB侵袭的重要原因。
实施例8：全局转录组绘谱证实严重先兆子痫中子宫内膜的缺陷型蜕膜化模式
上文讨论的结果证明了，从先前患有严重先兆子痫(sPE)的患者分离的子宫内膜基质细胞的缺陷型体外蜕膜化影响129个基因表达。为了在体内印证这些发现，在此，对先前患有sPE的患者在月经周期的分泌期期间进行了全局和靶向RNA测序，以识别这种蜕膜内膜缺陷。
在前瞻性研究试验中，在来自先前sPE妊娠(n＝16)的患者对比妊娠结果正常的对照(包括早产(n＝10)和足月(n＝8)分娩)的分泌期中获得了子宫内膜活检。
使用针对129种失调基因而设计的定制面板来进行全局基因绘谱和靶向RNA测序(参见表1和图18)。使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen)提取RNA，并通过片段分析仪(美国AATI)进行质量检查。在NexSeq 500平台(美国Illumina)中使用TruSeq Stranded mRNA分析全局RNAseq的基因表达，在Ion S5系统(美国Life Tech)中使用Ion AmpliSeq RNA分析定制面板的基因表达。将所有序列进行预处理，标准化和分析，对sPE与对照样本(“SANAS”)进行比较。通过FDR<0.05和倍数变化≥2的统计分析确定差异表达基因(DEG)。
全局RNAseq分析揭示了，在之前sPE的患者对比对照妊娠组的子宫内膜中，有36种DEG(参见表A)。具体地说，sPE与早产对照妊娠的样品比较以及sPE与足月产对照妊娠的样品比较分别显示了246种DEG(见表B)和15种DEG(见表C)。有趣的是，足月产与早产对照妊娠之间的比较未能检测到基因谱的任何差异。主成分分析(PCA)显示了sPE与对照组之间基于它们的转录谱的分离。引人注目的是，在PCA中，全局和靶向RNAseq方法所有样品获得了相似的分布(图17A至17B)。相关性分析揭示了，在129种靶向DEG与通过全局转录组分析检测到的那些基因之间有很强的基因表达关联性(Pearson值＝0.89)(图17C)。
使用全局基因绘谱和靶向RNA测序的结果印证了sPE患者的体内蜕膜化转录谱存在变化。这些发现进一步强化了产妇产生sPE的可能原因，从而为寻找早期诊断和可能的治疗的策略提供了新的方向。
等同物
尽管已经在本文中描述和示出了几个发明实施方式，但是本领域普通技术人员将容易想到用于执行功能和/或获得结果和/或所描述的一个或多个优点的多种其他手段和/或结构。在本文中，这些变型和/或修改中的每一个都被认为在本文所述的发明实施方式的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易地理解，本文描述的所有参数、尺寸、材料和构造均是示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或配置将取决于使用本发明的教导的一个或多个具体应用。仅通过常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的具体发明实施方式的许多等同方案。因此，应当理解，前述实施方式仅以举例的方式给出，并且在所附权利要求及其等同物的范围内，可以以不同于具体描述和要求保护的方式来实践本发明的实施方式。本发明的发明实施方式涉及本文所述的每个单独的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法。另外，如果这样的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法不是相互矛盾的，则两个或更多个这样的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法的任意组合包含在本发明的发明范围内。
如本文所定义和使用的所有定义应被理解为受到字典定义、通过引用并入的文献中的定义和/或所定义的术语的普通含义的限制。
本文所公开的所有参考文献、专利和专利申请通过引用其各自所引用的主题并入本文，在某些情况下，这些主题可以涵盖整个文献。
除非明确指出相反的含义，否则本文中在说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一个/一种(a/an)”应理解为表示“至少一个/一种”。
在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为是指这样结合的元素中的“一者或两者”，即在某些情况下共同存在而在其他情况下分离存在的元素。用“和/或”列出的多个元素应以与，即，如此连接的元素中的“一个或多个”相同的方式解释。除了由“和/或”子句具体标识的元素之外，还可以任选地存在其他元素，无论与那些具体标识的元素相关还是无关。因此，作为非限制性示例，在与开放式语言(例如“包含”)结合使用时，“A和/或B”的引用在一种实施方式中可以仅指A(任选地包括除B以外的元素)；而在另一个实施例中可以仅指B(任选地包括除A以外的元素)；在又一种实施方式中可以指A和B(任选地包括其他元素)；等等。
如本文在说明书和权利要求书中所使用的，“或”应被理解为具有与如上文所定义的“和/或”相同的含义。例如，当将列表中的项目分开时，“或”或“和/或”应解释为包含性的，即包含多个元素或多列元素中的至少一个/一列，但也包括多于一个/一列，以及任选的其他未列出的项目。仅明确指出相反的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”，或当在权利要求书中使用时，“由...组成”将指的是仅包括多个元素或一列元素中的恰好一个元素。一般而言，本文中使用的术语“或”仅应在前面有排他性术语(例如“一者”、“…中的一个”、““…中的唯一一个”或“…中的恰好一个”之时才阐释为指示互斥的替换(即，“一个或另一个而非两个”)。当在权利要求书中使用时，“基本上由...组成”应具有专利法领域中所使用的普通含义。
如本文在说明书和权利要求书中所使用的，在提及一列一个或多个元素时，短语“至少一个”应理解为是指选自该列元素中的任何一个或多个元素中的至少一个元素，但不一定包括该列元素中具体列出的每个元素中的至少一个，并且不排除该列元素中的元素的任何组合。该定义还允许除了短语“至少一个”所指代的该列元素中明确标识的元素之外，还可以选择性地存在其他元素，无论与明确标识的那些元素相关还是无关。因此，作为非限制性示例，“A和B中的至少一个”(或等同地，“A或B中的至少一个”，或等同地“A和/或B中的至少一个”)在一种实施方式中可以指，任选地包括多于一个A，同时不存在B(任选地包括除了B以外的元素)；在另一种实施方式中可以指，至少一个B，任选地包括多于一个B，同时不存在A(并且任选地包括除了A以外的元素)；在又一个实施方式中可以指，至少一个A，任选地包括多于一个A，以及至少一个B，任选地包括多于一个B(以及任选地包括其他元素)；等等。
还应该理解的是，除非有明显的相反指示，否则在本文要求保护的包括多个步骤或动作的任何方法中，该方法的步骤或动作的顺序不必限于叙述该方法的步骤或动作的顺序。。
在权利要求书以及以上说明书中，所有过渡性短语，例如“包含”、“包括”、“携带”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“构成”等等应理解为开放式的，即意指包括但不限于。如美国专利局专利审查程序手册第2111.03节所述，仅连接短语“由……组成”和“基本上由……组成”应分别是封闭的或半封闭的连接短语。应该理解的是，在替代实施方式中，在本文中使用开放式连接短语(例如，“包含”)描述的实施方式也被考虑为“由”开放式连接短语描述的特征“组成”和“基本上由”开放式过渡性短语描述的特征“组成”。例如，如果本发明内容描述了“包含A和B的组合物”，则本发明内容还考虑了替代实施方式“由A和B组成的组合物”和“基本上由A和B组成的组合物”。
序列表
<110> 艾基诺米公司
<120> 用于检测先兆子痫相关生物标志物的方法和装置
<130> I0439.70008WO00
<140> 未分配
<141> 同时随附
<150> US 62/554,471
<151> 2017-09-05
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 1
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<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成多核苷酸
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 6
agcacgtggg actggtagat 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 7
agtctgcctg ctcatcctgt 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 8
ttatctgcat cggcttcgtg 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 9
cacactgtgc ccatctacga 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 10
tagctcttct ccagggagga 20

Claims (177)

1.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法来治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法来治疗所述对象。
4.根据权利要求2的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述生物标志物基本上由ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3组成。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种生物标志物的水平组成。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，进一步基本上由测量PRL和IGFBP1的水平组成。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
18.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平使用杂交测定和至少一种标记的结合剂来测量。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述至少一种标记的结合剂是至少一种标记的寡核苷酸结合剂。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
23.一种用于检测来自对象的样品中与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括：
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC2、TMEM25、CCDC81、MYCN、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法来治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法来治疗所述对象。
26.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
27.根据权利要求23或24所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
28.根据权利要求23-27中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
29.根据权利要求23-28中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
30.根据权利要求23-29中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
31.根据权利要求30所述的方法，其特征在于，所述生物标志物基本上由ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3组成。
32.根据权利要求23-31中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种生物标志物的水平组成。
33.根据权利要求23-32中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
34.根据权利要求23-33中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少二十种生物标志物的水平组成。
35.根据权利要求23-34中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少三十种生物标志物的水平组成。
36.根据权利要求23-35中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少四十种生物标志物的水平组成。
37.根据权利要求23-36中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
38.根据权利要求23-37中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括测量PRL和IGFBP1的水平。
39.根据权利要求23-38中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
40.根据权利要求39所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
41.根据权利要求23-38中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
42.根据权利要求41所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
43.根据权利要求23-42中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
44.根据权利要求23-43中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
45.根据权利要求23-44中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
46.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：A1BG-AS1、ARL5B、BAC1-AS、C7、COL8A1、CP、CSPG4、CYP19A1、DEFB1、ENPP4、IPW、LOC101928439、LOC101929607、LOC644172、MIR365A、MIR4509-1、MIR548H1、MME-AS1、MS4A2、OGN、PRKXP1、PSMD3、RNA5SP187、RNA5SP463、RNU2-5P、RNU4-39P、RNU4-76P、RNU4ATAC1BP、RNU6-1111P、RNU6-521P、RNU6-540R、RNU6V、RNUC-901P、RP11-1026M7.3、RP11-106K3.1、RP11-12D16.2、RP11-661A12.4、RP11-872017.8、SNORD115-32、SNORD52、SNORD71、SPINK1、TAS2R46、TRAJ59、TRBV4-2、TRIM48、TSPAN1、UGT2B7和ZNF483；
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
47.根据权利要求46所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法来治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
48.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法来治疗所述对象。
49.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
50.根据权利要求46或47所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
51.根据权利要求46-50中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
52.根据权利要求46-51中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
53.根据权利要求46-52中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
54.根据权利要求46-53中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种生物标志物的水平组成。
55.根据权利要求46-54中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
56.根据权利要求46-55中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少二十种生物标志物的水平组成。
57.根据权利要求46-56中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少三十种生物标志物的水平组成。
58.根据权利要求46-57中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少四十种生物标志物的水平组成。
59.根据权利要求46-58中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
60.根据权利要求46-59中任一项所述的方法，其特征在于，进一步基本上由测量PRL和IGFBP1的水平组成。
61.根据权利要求46-60中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
62.根据权利要求61所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
63.根据权利要求46-60中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
64.根据权利要求63所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
65.根据权利要求46-64中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
66.根据权利要求46-65中任一项所述的方法，其特征在于，所述子宫内膜组织样品是基蜕膜样品。
67.根据权利要求46-66中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
68.根据权利要求46-67中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
69.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，该方法包括：
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：AC073218.2、AC073218.3、ACE2、ADAMTS15、ADAMTS4、AOX1、BMP2、CTC-498J12.1、CXCL5、CXCL8、DOCK4-AS1、DSC3、GBP2、GPR126、ICAM1、IER3、IGSF10、IL1A、IL23A、INHBA、KIR2DL2、KLRF1、LINC00312、LINCO1338、LOC100506530、LOC101929174、MMP10、MT1CP、MUM1L1、NOTUM、PDGFD、PRG2、PROM1、PZP、RN7SKP16、RNASE2、RNU6-162P、RNU7-40P、RNUC-1024P、RP11-57P19.1、RP11-59H7.3、RP1-68D18.4、SAPCD1、SERPIN811、SPINK1、SULF2、TMEM27、TNC、TRPC4和Xxbac-BPG252F；
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
70.根据权利要求69所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
71.根据权利要求70所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法来治疗所述对象。
72.根据权利要求70所述的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
73.根据权利要求69或70所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
74.根据权利要求69-73中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
75.根据权利要求69-74中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
76.根据权利要求69-75中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
77.根据权利要求69-76中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种生物标志物的水平组成。
78.根据权利要求69-77中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
79.根据权利要求69-78中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少二十种生物标志物的水平组成。
80.根据权利要求69-79中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少三十种生物标志物的水平组成。
81.根据权利要求69-80中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少四十种生物标志物的水平组成。
82.根据权利要求69-81中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
83.根据权利要求69-82中任一项所述的方法，其特征在于，进一步基本上由测量PRL和IGFBP1的水平组成。
84.根据权利要求69-83中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
85.根据权利要求84所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
86.根据权利要求69-83中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
87.根据权利要求86所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
88.根据权利要求69-87中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
89.根据权利要求88所述的方法，其特征在于，所述子宫内膜组织样品是壁蜕膜样品。
90.根据权利要求69-89中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
91.根据权利要求69-90中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
92.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
93.根据权利要求92所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法来治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
94.根据权利要求93所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法治疗所述对象。
95.根据权利要求93所述的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
96.根据权利要求92或93所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
97.根据权利要求92-96中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
98.根据权利要求92-97中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
99.根据权利要求92-98中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
100.根据权利要求92-99中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括确定至少一种另外的生物标志物的水平，所述至少一种另外的生物标志物来自基本上由以下组成的组：ABLIM2、ADRA2A、ANGPT2、ARHGDIB、C10orf10、C1orf133、C1QTNF7、C4orf49、CCDC、CCDC81、CCL8、CLIC2、CNIH3、COL14A1、COL8A1、CPE、DBC1、EDNRA、EGR1、GALNTL2、GRP、HSD17B2、IGFBP1、IGFBP5、IL1、IL15、IL1B、IRS2、ITGA11、LPAR1、LTBP1、MYCN、NCKAP5、NKAIN1、PRL和IGFBP1。
101.根据权利要求100所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种另外的生物标志物的水平组成。
102.根据权利要求100或101所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种另外的生物标志物的水平组成。
103.根据权利要求100-102中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
104.根据权利要求100-103中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种另外的生物标志物的水平组成。
105.根据权利要求100-104中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
106.根据权利要求100-105中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少二十种生物标志物的水平组成。
107.根据权利要求100-106中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少三十种另外的生物标志物的水平组成。
108.根据权利要求100-107中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有另外的生物标志物的水平组成。
109.根据权利要求92-108中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
110.根据权利要求109所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
111.根据权利要求92-108中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
112.根据权利要求111所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
113.根据权利要求92-112中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
114.根据权利要求113所述的方法，其特征在于，所述子宫内膜组织样品是壁蜕膜样品或基蜕膜样品。
115.根据权利要求92-114中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
116.根据权利要求92-115中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
117.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值小于2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
118.根据权利要求117所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将一个或多个受精卵或胚胎转移至所述对象。
119.根据权利要求117或118所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
120.根据权利要求117-119中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种生物标志物的水平组成。
121.根据权利要求117-120中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种生物标志物的水平组成。
122.根据权利要求117-121中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有生物标志物的水平组成。
123.根据权利要求117-122中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括确定至少一种另外的生物标志物的水平，所述至少一种另外的生物标志物来自基本上由以下组成的组：ABLIM2、ADRA2A、ANGPT2、ARHGDIB、C10orf10、C1orf133、C1QTNF7、C4orf49、CCDC、CCDC81、CCL8、CLIC2、CNIH3、COL14A1、COL8A1、CPE、DBC1、EDNRA、EGR1、GALNTL2、GRP、HSD17B2、IGFBP1、IGFBP5、IL1、IL15、IL1B、IRS2、ITGA11、LPAR1、LTBP1、MYCN、NCKAP5、NKAIN1、PRL和IGFBP1。
124.根据权利要求123所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少五种另外的生物标志物的水平组成。
125.根据权利要求123或124所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少七种另外的生物标志物的水平组成。
126.根据权利要求123-125中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少九种生物标志物的水平组成。
127.根据权利要求123-126中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十种另外的生物标志物的水平组成。
128.根据权利要求123-127中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少十五种生物标志物的水平组成。
129.根据权利要求123-128中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少二十种生物标志物的水平组成。
130.根据权利要求123-129中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的至少三十种另外的生物标志物的水平组成。
131.根据权利要求123-130中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)基本上由确定来自所述组的所有另外的生物标志物的水平组成。
132.根据权利要求117-131中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
133.根据权利要求132所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
134.根据权利要求117-131中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
135.根据权利要求134所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
136.根据权利要求117-135中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
137.根据权利要求136所述的方法，其特征在于，所述子宫内膜组织样品是壁蜕膜样品或基蜕膜样品。
138.根据权利要求117-137中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
139.根据权利要求117-138中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
140.一种用于确定与先兆子痫相关的一种或多种生物标志物的水平的固态测定装置，所述装置包括：
芯片，该芯片包含一个或多个分析区域，
其中每个分析区域基本上由5至129个结合配偶体组成的组，
并且其中每个结合配偶体均特异性结合选自图14至16的生物标志物的表达产物。
141.根据权利要求140所述的固态测定装置，其特征在于，每个分析区域基本上由来自所述组的5至25个结合配偶体组成。
142.根据权利要求140或141所述的固态测定装置，其特征在于，每个分析区域基本上由来自所述组的25至50个结合配偶体组成。
143.根据权利要求140-142中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，每个分析区域基本上由来自所述组的50至100个结合配偶体组成。
144.根据权利要求140-143中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，每个分析区域基本上由来自所述组的100至129个结合配偶体组成。
145.根据权利要求140-144中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，每个分析区域基本上由来自所述组的100至129个结合配偶体组成。
146.根据权利要求140-145中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物选自基本上由以下组成的组：ADAMTS8、CHI3L2、CHST7、CNR1、COCH、FBXO2、NPR1、SCARA5和SERPINA3。
147.根据权利要求140-146中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物选自基本上由以下组成的组：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3。
148.根据权利要求140-147中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物选自基本上由以下组成的组：HSD17B2、ANGPT2、NCKAP5、ADRA2A、DBC1、C1QTNF7、COL8A1、EGR1、SSTR1、FBXO2、CPE、C4orf49、GRP、IGFBP5、COCH、ARHGDIB、SCG5、ITGA11、SLC35F3、RLN2、COL14A1、CLIC2、TMEM25、CCDC81、MYCN、NPR1、RASGRP2、CHI3L2、RSPO3、C10orf10、TMEM132C、PPAP2B、NKAIN1、ADAMTS8、IL15、SLC7A2、SERPINA3、NPTX1、CHST7、GALNTL2、SBSN、EDNRA、IL1B、SPARCL1、SCARA5、SIPA1L2、CCL8、P2RY14、CNR1和IGFBP1。
149.根据权利要求140-148中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物选自基本上由以下组成的组：A1BG-AS1、ARL5B、BAC1-AS、C7、COL8A1、CP、CSPG4、CYP19A1、DEFB1、ENPP4、IPW、LOC101928439、LOC101929607、LOC644172、MIR365A、MIR4509-1、MIR548H1、MME-AS1、MS4A2、OGN、PRKXP1、PSMD3、RNA5SP187、RNA5SP463、RNU2-5P、RNU4-39P、RNU4-76P、RNU4ATAC1BP、RNU6-1111P、RNU6-521P、RNU6-540R、RNU6V、RNUC-901P、RP11-1026M7.3、RP11-106K3.1、RP11-12D16.2、RP11-661A12.4、RP11-872017.8、SNORD115-32、SNORD52、SNORD71、SPINK1、TAS2R46、TRAJ59、TRBV4-2、TRIM48、TSPAN1、UGT2B7和ZNF483。
150.根据权利要求140-149中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物选自基本上由以下组成的组：AC073218.2、AC073218.3、ACE2、ADAMTS15、ADAMTS4、AOX1、BMP2、CTC-498J12.1、CXCL5、CXCL8、DOCK4-AS1、DSC3、GBP2、GPR126、ICAM1、IER3、IGSF10、IL1A、IL23A、INHBA、KIR2DL2、KLRF1、LINC00312、LINCO1338、LOC100506530、LOC101929174、MMP10、MT1CP、MUM1L1、NOTUM、PDGFD、PRG2、PROM1、PZP、RN7SKP16、RNASE2、RNU6-162P、RNU7-40P、RNUC-1024P、RP11-57P19.1、RP11-59H7.3、RP1-68D18.4、SAPCD1、SERPIN811、SPINK1、SULF2、TMEM27、TNC、TRPC4和Xxbac-BPG252F。
151.根据权利要求140-150中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物的表达产物是mRNA。
152.根据权利要求140-151中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述生物标志物的表达产物是蛋白质。
153.根据权利要求140-152中任一项所述的固态测定装置，其特征在于，所述芯片用于分析获得自对象的至少一种样品。
154.根据权利要求153所述的固态测定装置，其特征在于，所述样品选自子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品。
155.根据权利要求153或154所述的固态测定装置，其特征在于，所述样品自人获得。
156.根据权利要求155所述的固态测定装置，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
157.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求140所述的固态测定装置和使用说明书。
158.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中所述至少一种生物标志物选自以下途径中的至少一种：胞外结构组构、组织发育、炎症、免疫功能、转运和/或代谢、细胞信号传导、转录和/或翻译、信号转导、蛋白质降解、胰岛素相关、G-蛋白信号传导、细胞周期和激活以及尚未明确的；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
159.根据权利要求158所述的方法，其特征在于，进一步包括用有效量的抗先兆子痫疗法来治疗对象，所述抗先兆子痫疗法选自由以下组成的组：抗高血压剂、抗凝血剂、皮质类固醇、抗惊厥剂、抗氧化剂、糖胺聚糖、卧床休息、住院、母婴监测和分娩。
160.根据权利要求159所述的方法，其特征在于，进一步包括用另一种抗先兆子痫疗法来治疗所述对象。
161.根据权利要求159所述的方法，其特征在于，所述对象正在接受另一种抗先兆子痫疗法或已经用另一种抗先兆子痫疗法进行治疗。
162.根据权利要求158或159所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括对获得自所述对象的样品进行测定。
163.根据权利要求158-162中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)包括确定来自所述途径中的一种的至少一种生物标志物的水平。
164.根据权利要求158-163中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)包括确定来自所述途径中的两种或更多种中的至少一种生物标志物的水平。
165.根据权利要求158-164中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)包括确定来自每种所述途径中的至少一种生物标志物的水平。
166.根据权利要求158-165中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(a)包括确定来自至少一种另外的途径中的至少一种生物标志物的水平。
167.根据权利要求158-166中任一项所述的方法，其特征在于，进一步基本上由测量PRL和IGFBP1的水平组成。
168.根据权利要求158-167中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物蛋白的水平。
169.根据权利要求168所述的方法，其特征在于，每种生物标志物蛋白的水平使用免疫组织化学测定、免疫印迹测定或流式细胞术测定来确定。
170.根据权利要求158-167中任一项所述的方法，其特征在于，确定生物标志物的水平包括确定生物标志物核酸的水平。
171.根据权利要求170所述的方法，其特征在于，每种生物标志物核酸的水平通过实时逆转录酶PCR(RT-PCR)测定或核酸微阵列测定来测量。
172.根据权利要求158-171中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品选自由子宫内膜组织样品、子宫内膜基质细胞样品和子宫内膜液样品组成的组。
173.根据权利要求158-172中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品自人获得。
174.根据权利要求158-173中任一项所述的方法，其特征在于，所述人已经怀孕或正试图怀孕。
175.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，所述方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中确定至少一种生物标志物的水平包括杂交测定和至少一种结合剂，并且其中所述至少一种结合剂选自基本上由SEQ ID NO:1至8的组成的组，并且其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：ALDH1A1、IGFBP1、NANOS3和HSD17B2；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
176.根据权利要求175所述的方法，其特征在于，至少一种结合剂包括至少一种标记的结合剂。
177.一种用于检测来自对象的样品中的与先兆子痫相关的至少一种生物标志物的水平的方法，该方法包括
(a)确定获得自对象的样品中的至少一种生物标志物的水平，其中确定至少一种生物标志物的水平包括杂交测定和至少一种标记的结合剂，并且其中所述至少一种生物标志物选自基本上由以下组成的组：CNR1、IRS2、CHST7、PRUNE2、ADAMTS8、SCARA5、SERPINA3、NPR1、LPAR1、ABLIM2、CHI3L2、LTBP1、TNFRSF8、SLC27A3、IL1、CCDC、PPAP2C、SERTADA4、COCH、FBXO2、C1orf133和CNIH3；和
(b)确定样品中确定的生物标志物水平与对照的生物标志物水平的比率的绝对值至少为2，从而确定对象患有先兆子痫或处于先兆子痫的风险中。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114350805A (zh) * 2022-01-14 2022-04-15 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 Ablim1作为胶质瘤分子标志物的应用
CN114822682A (zh) * 2022-04-12 2022-07-29 苏州市立医院 一种与早发型重度子痫前期发生相关的靶标基因组合及其应用
CN117192096A (zh) * 2023-09-18 2023-12-08 上海交通大学医学院附属仁济医院 靶向抑制羊膜adamts4的化合物在制备筛选早产防治的药物中的用途
CN118275677A (zh) * 2024-06-03 2024-07-02 山东大学 检测erap2的试剂在制备预测poi预后情况的产品中的应用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017024311A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 The University Of Utah Research Foundation Methods of identifying male fertility status and embryo quality
EP4013888A4 (en) * 2019-08-15 2024-01-10 Washington State University Methods and kits for infertility diagnostics
CN110794136A (zh) * 2019-11-26 2020-02-14 中国人民武装警察部队特色医学中心 长链脂肪酸辅酶a连接酶1在诊断或预测子痫前期中的应用
KR102302742B1 (ko) * 2019-12-31 2021-09-15 의료법인 성광의료재단 임신중독증 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도
AU2021288592A1 (en) * 2020-06-10 2023-02-09 Arcedi Biotech Aps Method for determining risk of pre-term birth
US20230400472A1 (en) * 2020-10-26 2023-12-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Combination of biomarkers of preterm delivery
CN112630436A (zh) * 2021-01-25 2021-04-09 安士(广州)医疗科技有限公司 一种定量检测tex101浓度的荧光试剂条的制备方法及其应用
WO2022171318A1 (en) * 2021-02-12 2022-08-18 Ipremom Pregnancy Healthcare Diagnostics, S.L. In vitro method for determining the risk of suffering from preeclampsia
CN113406326B (zh) * 2021-06-01 2022-08-26 大连医科大学 一种用于预测子痫前期的生物学标志物及其应用
WO2022255401A1 (ja) * 2021-06-03 2022-12-08 国立大学法人 東京大学 Ｅｒｋ－ｍａｐｋ経路の異常な活性化に伴い発現する疾患マーカー
WO2022256617A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Inherent Biosciences, Inc. Dna methylation analysis to identify cell type
CN115044669B (zh) * 2022-06-27 2023-05-16 山东第一医科大学附属省立医院(山东省立医院) 一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用
CN115873943B (zh) * 2023-02-13 2024-03-29 山东大学 骨形态发生蛋白2在子痫前期诊断、预防和治疗中的应用
KR20250079483A (ko) * 2023-11-27 2025-06-04 의료법인 성광의료재단 임신 중기 임신중독증 예측 및 진단을 위한 질환 특이적인 바이오마커 및 그의 용도
KR20250079482A (ko) * 2023-11-27 2025-06-04 의료법인 성광의료재단 임신 초기 임신중독증 예측 및 진단을 위한 질환 특이적인 바이오마커 및 그의 용도

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070178605A1 (en) * 2006-02-02 2007-08-02 Yale University Pregnancy biomarker profiles, methods and compositions related thereto
US20100035284A1 (en) * 2005-10-27 2010-02-11 Yale Univeristy Urinary Proteomic Biomarker Patterns in Preeclampsia
US20110171650A1 (en) * 2008-09-16 2011-07-14 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Gene expression related to preeclampsia
US20150031616A1 (en) * 2013-07-25 2015-01-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Use of relaxin to treat placental syndromes
CN104704364A (zh) * 2012-06-15 2015-06-10 韦恩州立大学 用于先兆子痫和/或hellp综合征的预测或早期检测的生物标记物测试
CN106662589A (zh) * 2014-03-21 2017-05-10 艾基诺米公司 先兆子痫的早期检测

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100035284A1 (en) * 2005-10-27 2010-02-11 Yale Univeristy Urinary Proteomic Biomarker Patterns in Preeclampsia
US20070178605A1 (en) * 2006-02-02 2007-08-02 Yale University Pregnancy biomarker profiles, methods and compositions related thereto
US20110171650A1 (en) * 2008-09-16 2011-07-14 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Gene expression related to preeclampsia
CN104704364A (zh) * 2012-06-15 2015-06-10 韦恩州立大学 用于先兆子痫和/或hellp综合征的预测或早期检测的生物标记物测试
US20150031616A1 (en) * 2013-07-25 2015-01-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Use of relaxin to treat placental syndromes
CN106662589A (zh) * 2014-03-21 2017-05-10 艾基诺米公司 先兆子痫的早期检测

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114350805A (zh) * 2022-01-14 2022-04-15 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 Ablim1作为胶质瘤分子标志物的应用
CN114822682A (zh) * 2022-04-12 2022-07-29 苏州市立医院 一种与早发型重度子痫前期发生相关的靶标基因组合及其应用
CN117192096A (zh) * 2023-09-18 2023-12-08 上海交通大学医学院附属仁济医院 靶向抑制羊膜adamts4的化合物在制备筛选早产防治的药物中的用途
CN118275677A (zh) * 2024-06-03 2024-07-02 山东大学 检测erap2的试剂在制备预测poi预后情况的产品中的应用
CN118275677B (zh) * 2024-06-03 2024-08-09 山东大学 检测erap2的试剂在制备预测poi预后情况的产品中的应用

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