CN111620819B - 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 - Google Patents
芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111620819B CN111620819B CN202010571105.8A CN202010571105A CN111620819B CN 111620819 B CN111620819 B CN 111620819B CN 202010571105 A CN202010571105 A CN 202010571105A CN 111620819 B CN111620819 B CN 111620819B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethanol
- compounds
- methanol
- components
- gel column
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000003805 Musa ABB Group Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 235000015266 Plantago major Nutrition 0.000 title claims abstract description 31
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 240000008790 Musa x paradisiaca Species 0.000 title abstract description 26
- ZVNRUZDCFKVYGA-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbenzo[de]isoquinoline-1,3-dione Chemical compound O=C1NC(=O)c2c(ccc3cccc1c23)-c1ccccc1 ZVNRUZDCFKVYGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 127
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 25
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 claims description 12
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000234295 Musa Species 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- CWCQDDCELZQSJG-UHFFFAOYSA-N 4-(4-hydroxyphenyl)benzo[de]isoquinoline-1,3-dione Chemical compound OC1=CC=C(C=C1)C1=CC=C2C3=C1C(NC(C3=CC=C2)=O)=O CWCQDDCELZQSJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 abstract description 5
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical class C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000000297 Erysipelas Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 241000234615 Musaceae Species 0.000 description 1
- 241000201976 Polycarpon Species 0.000 description 1
- 238000001237 Raman spectrum Methods 0.000 description 1
- 206010053262 Skin swelling Diseases 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical group C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSVZGWAJIHWNQK-UHFFFAOYSA-N [3-(hydroxymethyl)-2-bicyclo[2.2.1]heptanyl]methanol Chemical compound C1CC2C(CO)C(CO)C1C2 YSVZGWAJIHWNQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005693 optoelectronics Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- -1 tetramethylazolyl Chemical group 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D221/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00
- C07D221/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00 condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D221/04—Ortho- or peri-condensed ring systems
- C07D221/06—Ring systems of three rings
- C07D221/14—Aza-phenalenes, e.g. 1,8-naphthalimide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途，化合物的化学名4‑Phenyl‑benzo[de]isoquinoline‑1,3‑dione(1),4‑(4‑Hy droxy‑phenyl)‑benzo[de]isoquinoline‑1,3‑dione(2)结构式为：
本发明采用高分辨质谱HR‑ESI‑MS、1H NMR、13C NMR、二维HMBC、HMQC核磁谱对这两个化合物进行结构鉴定，推导出两个化合物的分子式及分子结构。经体外细胞活性研究表明，从芭蕉根中分离得到的这两个化合物对人肝癌细胞、人肺癌细胞及人乳腺癌细胞具有较好的抑制活性，可将该化合物开发制备成防治相关肿瘤的药物。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从芭蕉根药材中提取、分离和鉴别出的新化合物及其提取分离方法。
背景技术
芭蕉根为芭蕉科芭蕉属植物芭蕉的新鲜或干燥根茎，是多年生的草本植物，茎短，种子多数，全年可采，农舍庭院栽种居多。芭蕉始载于《汉书》，又名巴且，《史记》中称之为天苴，《群芳谱》中称之为绿天、扇仙，《分类草药性》称之为香蕙、甘露树、大叶芭蕉、芭蕉头。芭蕉根在中医药中主治黄疸、消渴及天行热毒等病症，有利尿以及清热解毒的功效，临床上还可治疗丹毒、风热头痛、血淋及肌肤肿痛等疾病，骨康胶囊及肿痛舒的复方制剂中均含有芭蕉根，功效主要是舒经通络和消肿止痛。芭蕉根除了具备上述药用功能外，常常作为民间食用的食材。
现代研究表明：芭蕉根中化学成分种类较多，主要是黄酮、皂苷、挥发油、香豆素、生物碱以及蒽醌类成分，具有抗炎、降血糖、镇痛、抑制α-葡萄糖苷酶及抑菌的药理活性。现代研究鉴定芭蕉根中含有16 种氨基酸，其中7种是人体所必需氨基酸，分别为蛋氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸，对人体健康较为重要。
目前对于芭蕉根鉴别较多，分别有显微鉴别、紫外光谱鉴别、拉曼光谱鉴别、指纹图谱等方法鉴别，然而苗药芭蕉根中化学成分种类多而复杂、药理作用机制不够明确，研究较浅，对芭蕉根具体化学成分鲜有报道。由于物质基础不够明确，当前临床上所用含芭蕉根的药物大部分仅为复方或较粗糙的制剂，缺乏对芭蕉根有效组分的开发利用，质量控制水平低，难以保证临床疗效。因此，加大对芭蕉根单一化学成分研究，确定有效成分，具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种芭蕉根两个新化合物分离纯化方法及用途。
本发明提供一种芭蕉根中分离得到的两种新化合物，新化合物成分的化学名称分别为：4-Phenyl-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(1),4- (4-Hydroxy-phenyl)-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(2)，其化学结构公式如下：
本发明还提供了前述化合物的分离纯化方法，包括如下步骤：
1)取芭蕉根来源的新鲜或干燥根茎部分，经干燥、粉碎后，70％乙醇回流提取三次，1.5小时/次，加入的乙醇量分别为7倍、7倍、5 倍，合并三次提取液，减压浓缩得到总浸膏；
2)将步骤1)中总浸膏拌样，上样于D101大孔吸附树脂，洗脱剂依次用水、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，减压浓缩后得到三部分浸膏，分别是水段、50％乙醇段、95％乙醇段；
3)将步骤2)中50％乙醇段浸膏使用硅胶拌样后上硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇以(15:1→1:1)洗脱，结合TLC检测方法，根据极性不同，得到若干组分(Fr.1-Fr.10)；
4)将步骤3)中组分Fr.8过Toyopearl HW-40C，用氯仿/甲醇(1:1) 洗脱，得到两个亚组分，将其中一个亚组分进行结晶与重结晶的操作，得到新化合物1。
5)将步骤3)中某个组分过正相硅胶柱，用二氯甲烷/乙酸乙酯洗脱，浓缩液过反复Sephadex LH-20与Toyopearl HW-40C、洗脱液为氯仿/甲醇(1:1)，浓缩含目标化合物洗脱液，最后将浓缩液过 Toyopearl HW-40F凝胶柱，纯甲醇洗脱，得到新化合物2。
本发明从芭蕉根中提取的新化合物优点在于，首先通过硅胶柱色谱，用TLC方法跟踪目标化合物，合并相似组分，富集低含量组分，最后通过反复凝胶柱色谱，减少样品损失，凝胶填料可重复使用，成本较低，操作也较简单，可控性好。这两个新化合物可以在制备抗肿瘤药物中得到应用。
附图说明
图1为本发明新化合物1的HR-ESI-MS图；
图2为本发明新化合物1的1H-NMR光谱图；
图3为本发明新化合物1的13C-NMR光谱图；
图4为本发明新化合物1的核磁共振HMQC光谱图；
图5为本发明新化合物1的核磁共振HMBC光谱图；
图6为本发明新化合物2的HR-ESI-MS图；
图7为本发明新化合物2的1H-NMR光谱图；
图8为本发明新化合物2的13C-NMR光谱图；
图9为本发明新化合物2的核磁共振HMQC光谱图；
图10为本发明新化合物2的核磁共振HMBC光谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1)取芭蕉根干燥药材，采用70％乙醇提取，回流提取3次，每次1.5小时，第一次加入7倍量70％乙醇，第二次加入7倍量70％乙醇，第三次加入5倍量70％乙醇，醇提液滤过，合并滤液回收乙醇，直接加热浓缩，浓缩液挥至无醇味，得到总浸膏；
2)将步骤1)中最后所得到的总浸膏拌样，上样于D101大孔吸附树脂，即使用D101大孔吸附树脂进行粗分，洗脱剂依次用水、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，得到三段组分，分别是水段、50％乙醇段、 95％乙醇段，水段直接挥干成浸膏，其余两段减压浓缩后回收乙醇分别得到50％乙醇段、95％乙醇段两部分浸膏；
3)将步骤2)中50％乙醇段所得到的浸膏经正相硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，比例为(15:1→1:1)，相似组分合并后浓缩，得到10个组分(Fr.1-Fr.10)，每个组分旋干备用；
4)将步骤3)中Fr.8过Toyopearl HW-40C凝胶柱，洗脱剂以氯仿/甲醇(1:1)进行洗脱，使用TLC检测，合并相似组分，得到两个组分(Fr.8.1-Fr.8.2)，结晶再重结晶得化合物1。
5)将步骤3)中Fr.6过正相硅胶柱，以二氯甲烷/甲醇洗脱，TLC 检测，合并相似组分，浓缩后得到3个组分(Fr.6.1-Fr.6.3)，Fr.6.2 再过正相硅胶柱，用二氯甲烷/乙酸乙酯洗脱，得到的洗脱液浓缩后过Sephadex LH-20与Toyopearl HW-40C凝胶柱，洗脱剂皆为氯仿/ 甲醇，最后再经Toyopearl HW-40F(甲醇)得新化合物2；
本发明进行的TLC检识的条件：显色剂a：紫外灯(254nm，365 nm)下观察荧光；显色剂b：10％硫酸乙醇喷洒,电烤炉适度烘烤至显色；显色剂c：碘显色；
结构鉴定：采用现代核磁谱技术如1H NMR、13C NMR、二维核磁谱HMBC、HMQC以及高分辨质谱HR-ESI-MS对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。
化合物1为白色固体，HR-ESI-MS[M+H]+m/z 274.0723，结合 NMR谱确定化合物1的分子式为C18H11NO2 ；
化合物2为淡黄色固体，HR-ESI-MS[M+H]+m/z 290.0685，结合NMR谱确定化合物2分子式为C18H11NO3。
经鉴定，化合物1为4-Phenyl-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(1)，化合物2为4-(4-Hydroxy-phenyl)-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(2)，其核磁共振谱图如表1表2所示。
表1：新化合物1的1H(400MHz,CDCL3)，13C(100MHz,CDCL3) 和HMBC核磁数据
表2：新化合物2的1H(400MHz,DMSO)，13C(100MHz,DMSO)和 HMBC核磁数据
实施例2
1)取芭蕉根干燥药材，70％乙醇提取，回流提取3次，1.5小时 /次，第一次加入70％乙醇(7倍柱体积)，第二次也加入70％乙醇 (7倍柱体积)，第三次加入70％乙醇(5倍柱体积)，将全程收集到的醇提液滤过，合并滤液并回收乙醇，加热浓缩，使用旋转蒸发仪蒸发浓缩至无醇味，得到总浸膏；
2)将步骤1)中收集的总浸膏拌样，上样于D101大孔吸附树脂，即使用D101大孔吸附树脂进行粗分，洗脱剂依次用水(3倍柱体积)、 50％乙醇(3倍柱体积)、95％乙醇(5倍柱体积)依次进行洗脱，得到三段组分，分别是水段、50％乙醇段、95％乙醇段,水段直接挥干成浸膏得到(2.4kg)，其余两段减压浓缩后回收乙醇分别得到50％乙醇段(42g)、95％乙醇段(60g)两部分浸膏；
3)将步骤2)中50％乙醇段所得到的浸膏经正相硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，比例为(15:1,10:1,8:1,6:1,4:1,2:1,1:1)，分段收集，TLC检测，相似组分合并后浓缩，得到10个组分(Fr.1- Fr.10)，每个组分通过旋转蒸发仪旋干备用；
4)将步骤3)中Fr.8过Toyopearl HW-40C凝胶柱，洗脱剂以氯仿/甲醇(1:1)进行洗脱，使用TLC检测，合并相似组分，得到两个组分(Fr.8.1-Fr.8.2)，将Fr.8.1结晶，再重结晶得到新化合物1。
5)将步骤3)中Fr.6过正相硅胶柱，以二氯甲烷/甲醇(4:3，加少量冰醋酸)洗脱，TLC检测，合并相似组分，浓缩后得到3个组分(Fr.6.1-Fr.6.3)，其中Fr.6.2再过正相硅胶柱，用二氯甲烷/乙酸乙酯洗脱，得到的洗脱液浓缩后过Sephadex LH-20与Toyopearl HW-40C 凝胶柱，洗脱剂皆为氯仿/甲醇(1:1)，最后再经Toyopearl HW-40F (甲醇)得新化合物2；
为检测芭蕉根中分离得到的化合物对不同肿瘤细胞增殖的影响，现做以下抗肿瘤实验；
用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)，MTT全称3-(4,5-dimethyl-2-t hiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，商品名为噻唑蓝，是一种黄色染料。通过MTT法对从芭蕉根中分离得到的化合物进行了体外抗肿瘤活性研究。
细胞株：人肺癌细胞株A549，人肝癌细胞株HepG2，人乳腺癌细胞株MCF-7，人神经胶质瘤细胞U251；
培养液：RPMI1640培养液(RPMI1640培养液与FBS(胎牛血清) 以9:1混匀，配制成含10％FBS培养基，4℃密封保存，DMEM培养液(制法与RPMI1640培养液相同)；
其中A549、U251所用培养液为RPMI-1640标准培养液，MCF-7、 HepG2细胞所用培养液为DMEM高糖培养液。
阳性对照药(顺铂)，细胞冻存溶液：90％的完全培养基；
仪器：SW-CJ-2FD型超净工作台(浙江苏净净化设备有限公司)， EL204万分之一天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)，HH.CP-01 型二氧化碳培养箱(上海申贤恒温设备厂)；倒置显微镜(广州市明美光电技术有限公司)，L530型高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)，通用酶标仪(美国Biotek公司)；
细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮罐中取出，立刻放入37-40℃水浴中使其融化，转入离心管中，再逐滴缓慢加入4-5mL培养液，吹打使细胞悬浮，1000r/min离心4min，弃掉上清液，加入适量(1-2 mL)培养液，转移至培养瓶中，于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养，每3d更换1次培养液，定时观察细胞生长状况；
细胞培养与传代：每天观察细胞的生长情况。若细胞生长较慢，未生长到70～80％，只需要换液，若细胞生长至70～80％时则可以进行传代，最后将得到的细胞加入完全培养液后，分瓶培养；
体外抗肿瘤活性测定：分别取处于对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用含10％胎牛血清的培养基稀释成约40000个细胞/mL，在96孔板中每孔加入100μL细胞悬液，每孔加人设定浓度的受试药物100μL，每组设计6个复孔，并设置空白组(完全培养液)，在95％湿度、37℃、5％CO2培养箱中培养24h，弃旧培养液，每孔加入浓度为5mg/mL 的MTT约20μL，继续培养4h后，弃上清液，每孔加入150μL的 DMSO溶解结晶甲瓒，轻微振荡，结晶完全溶解后，用酶标仪在490 nm处检测光密度(OD，optical density)。
细胞抑制率及药物的半数抑制量IC50计算：
增殖抑制率＝(OD对照组－OD给药组)/OD对照组x 100％。OD值数据用
表示，药物的半数抑制量IC50＝lg-1[Xm－i(∑P－(3－Pm－Pn)/4)]。式中，Xm：设计的最大浓度的对数值；i：最大浓度/相邻浓度的对数值；∑P：各组生长抑制率之和；Pm：最大抑制率；Pn：最小抑制率。
表3化合物Ⅰ对肿瘤细胞活性的影响
其中IC50为增殖抑制率为50％时化合物Ⅰ的浓度，用于表示抗肿瘤活性；
如表3所示，化合物1和2对人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞 A549，人神经胶质瘤细胞U251以及人乳腺癌细胞MCF-7都具较好的抑制活性。
数据分析：实验数据采用SPSS22.0软件进行分析。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.芭蕉根中的 两个化合物：
4-Phenyl-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(1),4-(4-Hydroxy-phenyl)-benzo[de]isoquinoline-1,3-dione(2)，结构式如下：
2.一种如权利要求1所述的芭蕉根中的 两个化合物的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
1)取芭蕉根干燥药材，采用70％乙醇提取，回流提取3次，每次1.5小时，第一次加入7倍量70％乙醇，第二次加入7倍量70％乙醇，第三次加入5倍量70％乙醇，醇提液滤过，合并滤液回收乙醇，直接加热浓缩，浓缩液挥至无醇味，得到总浸膏；
2)将步骤1)中最后所得到的总浸膏拌样，上样于D101大孔吸附树脂，即使用D101大孔吸附树脂进行粗分，洗脱剂依次用水、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，得到三段组分，分别是水段、50％乙醇段、95％乙醇段，水段直接挥干成浸膏，其余两段减压浓缩后回收乙醇分别得到50％乙醇段、95％乙醇段两部分浸膏；
3)将步骤2)中50％乙醇段所得到的浸膏经正相硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇进行梯度洗脱，比例为15:1→1:1，相似组分合并后浓缩，得到10个组分Fr.1-Fr.10，每个组分旋干备用；
4)将步骤3)中Fr.8过Toyopearl HW-40C凝胶柱，洗脱剂以氯仿/甲醇1:1进行洗脱，使用TLC检测，合并相似组分，得到两个组分Fr.8.1-Fr.8.2，结晶再重结晶得化合物1；
5)将步骤3)中Fr.6过正相硅胶柱，以二氯甲烷/甲醇洗脱，TLC检测，合并相似组分，浓缩后得到3个组分Fr.6.1-Fr.6.3，Fr.6.2再过正相硅胶柱，用二氯甲烷/乙酸乙酯洗脱，得到的洗脱液浓缩后过Sephadex LH-20与Toyopearl HW-40C凝胶柱，洗脱剂皆为氯仿/甲醇，最后再经Toyopearl HW-40F、 甲醇洗脱 得化合物2。
3.权利要求2分离纯化得到的芭蕉根中的 两个化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010571105.8A CN111620819B (zh) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010571105.8A CN111620819B (zh) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111620819A CN111620819A (zh) | 2020-09-04 |
| CN111620819B true CN111620819B (zh) | 2022-05-13 |
Family
ID=72269538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010571105.8A Active CN111620819B (zh) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111620819B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014014904A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Substituted cycloalkyl 1,2,4-triazine-3,5-diones as herbicides |
| CN107586312A (zh) * | 2017-07-25 | 2018-01-16 | 贵州维康子帆药业股份有限公司 | 一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法 |
| CN109942385A (zh) * | 2019-04-19 | 2019-06-28 | 贵州医科大学 | 芭蕉根中三个新化合物及提取分离方法 |
| CN110452211A (zh) * | 2019-09-05 | 2019-11-15 | 贵州医科大学 | 芭蕉根中2个新化合物的提取分离方法及用途 |
| CN111067939A (zh) * | 2019-12-29 | 2020-04-28 | 黄泳华 | 含有苯并二氧杂环戊烷衍生物混合物的组合物及其用途 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1278629C (zh) * | 2001-06-21 | 2006-10-11 | 协和发酵工业株式会社 | 含有植物体粉末的植物提取物的制造方法 |
| WO2013037626A1 (en) * | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Syngenta Participations Ag | Isothiazoline derivatives as insecticidal compounds |
-
2020
- 2020-06-22 CN CN202010571105.8A patent/CN111620819B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014014904A1 (en) * | 2012-07-20 | 2014-01-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Substituted cycloalkyl 1,2,4-triazine-3,5-diones as herbicides |
| CN107586312A (zh) * | 2017-07-25 | 2018-01-16 | 贵州维康子帆药业股份有限公司 | 一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法 |
| CN109942385A (zh) * | 2019-04-19 | 2019-06-28 | 贵州医科大学 | 芭蕉根中三个新化合物及提取分离方法 |
| CN110452211A (zh) * | 2019-09-05 | 2019-11-15 | 贵州医科大学 | 芭蕉根中2个新化合物的提取分离方法及用途 |
| CN111067939A (zh) * | 2019-12-29 | 2020-04-28 | 黄泳华 | 含有苯并二氧杂环戊烷衍生物混合物的组合物及其用途 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| A biosynthetic intermediate of phytoalexins in banana fruits;Kamo, T，等;《PHYTOCHEMISTRY》;19981130;第49卷(第06期);第1617-1621页 * |
| A short synthetic route to the natural products cis-3-phenyl-acenaphthene-1,2-diol and 4-phenyl-benzo[de]isochromene-1,3-dione from acenaphthylene-chromium tricarbonyl;Izquierdo, LR，等;《SYNTHESIS-STUTTGART》;20050801(第12期);第1926-1928页 * |
| Intramolecular Aryne-Furan Cycloadditions for the Synthesis of Anticancer Naphthalimides;Sébastien Prévost，等;《J. Org. Chem.》;20180329;第83卷(第08期);第4871-4881页 * |
| Radical-anions of derivatives of naphthalenedicarboxylic acid;V. A. Ryabinin，等;《Journal of Structural Chemistry》;19790930;第19卷;第693-701页 * |
| Two new compounds from rhizomes of Musa basjoo;Xue Ma，等;《J Asian Nat Prod Res.》;20211231;第23卷(第12期);第1135-1139页 * |
| 苗药芭蕉根化学成分研究;付思红等;《中药材》;20180323;第41卷(第03期);第595-599页 * |
| 苗药芭蕉根的化学成分研究(Ⅱ);蒋礼等;《中药材》;20200122;第42卷(第12期);第2809-2812页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111620819A (zh) | 2020-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113861114B (zh) | 吗啡烷类和双苄基异喹啉类生物碱化合物及其制备方法和用途 | |
| CN115304653A (zh) | 从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物及其制备方法与应用 | |
| CN111689965A (zh) | 具有抗肿瘤活性的生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108610387B (zh) | 一种具有神经细胞保护活性的四个异黄烷苷类化合物及其制备方法 | |
| CN103599144B (zh) | 蜘蛛香环氧环烯醚萜酯有效部位的制备方法 | |
| CN113387997B (zh) | 一种具有改善糖脂代谢紊乱作用的三萜皂苷化合物及其制备和应用 | |
| CN111620819B (zh) | 芭蕉根中的两个化合物的分离纯化方法及用途 | |
| CN109091602B (zh) | 韭菜子有效成分、提取方法及其在制备保护肝损伤药物方面的应用 | |
| CN110452211A (zh) | 芭蕉根中2个新化合物的提取分离方法及用途 | |
| CN114539192A (zh) | 松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 | |
| CN103027909B (zh) | 香豆素类化合物的应用及其从瑞香中提取的方法 | |
| CN105712844A (zh) | 杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用 | |
| CN105601693A (zh) | 人参皂苷f1的制备及其抗肿瘤作用 | |
| CN106361731B (zh) | 联苄类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
| CN104788525A (zh) | 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的三萜化合物及其制备方法 | |
| CN108578416A (zh) | 一种对人乳腺癌mda-mb-231细胞的抑制药物及其制备方法 | |
| CN105541858B (zh) | Xanthone类化合物及其制备方法、组合物和用途 | |
| CN102432666B (zh) | 从合子草中分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN110204589B (zh) | 青葙子有效成分、提取方法及其在制备神经保护药物方面的应用 | |
| CN119080724B (zh) | 地骨皮中倍半萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN105418717A (zh) | 一种用于治疗白血病的甾体类化合物及其制备方法 | |
| CN106495998B (zh) | 一种联苄醚类化合物及其制备方法与用途 | |
| CN118978505B (zh) | 一种麻黄根中的二氢黄烷醇类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN113461704B (zh) | 一种单萜骈香豆素类化合物、制备方法及其应用 | |
| CN116003238B (zh) | 茉莉根中倍半萜类化合物及其提取方法和用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |