CN111568831B - 用于皮肤化妆品的中草药提取物的组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于皮肤化妆品的中草药提取物的组合物。本发明的组合物含有菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木的中草药提取物，可用于皮肤抗衰老，具有抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提高皮肤光泽度等功效。本发明还涉及所述中草药提取物的组合物的制备方法及其在化妆品中的应用，本发明进一步涉及含有所述中草药提取物的组合物的化妆品。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有皮肤化妆品作用的中草药提取物的组合物。本发明的组合物含有菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木的中草药提取物，可用于皮肤抗衰老，具有抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提高皮肤光泽度等功效。本发明还涉及用于制备所述中草药提取物的组合物的方法以及所述组合物在化妆品中的应用，本发明进一步涉及含有所述中草药提取物的组合物的化妆品。
背景技术
随着人口老龄化增加以及人们对外表关注度的增加，皮肤护理和抗衰老成为化妆品领域的研究重点。随着年龄增长，皮肤细胞老化，活性降低；皮肤裸露在外很容易受到外部环境(例如紫外线辐射、空气污染、吸烟等)的影响，此外，过度自由基化导致真皮层细胞分泌胶原蛋白的表达减少或胶原水解酶类(例如基质金属蛋白酶MMPs)增加，导致胶原蛋白分解和细胞外基质ECM降解，细胞缺乏胶原蛋白和纤维蛋白的支撑，角质层和表皮层内陷形成皱纹，皮肤弹性降低，光泽度降低，肤色暗沉，这些都是皮肤衰老表现形式。
转录因子AP-1是MMP-1表达的重要调控因子，MMP-1可以降解Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白，其中Ⅰ型胶原蛋白占真皮层蛋白总量的75％，可以帮助皮肤达到相应的机械强度和纹理，Ⅲ型胶原蛋白协同Ⅰ型胶原蛋白，使肌肤光滑有弹性；AP-1可以通过调节降低MMP-1的表达，增加成纤维细胞的伸展及机械张力及Ⅰ型胶原纤维的坚韧，而达到皮肤抗衰的作用。
另外，熬夜后经常会发生黑眼圈和眼周水肿，疲劳会导致皮肤暗淡无光泽等问题。研究证明，熬夜后出现的黑眼圈和眼周水肿主要是由于眼周微循环障碍引起局部水液滞留和黑色素沉积所致。目前采用的眼部化妆品大多数存在效果不明显并出现不良反应等问题。
目前的研究开始着眼于比较安全的传统中草药领域，但很多含有中草药提取物的化妆品产品存在一些问题，例如，成本较高、不易被皮肤吸收、效果不明显、安全性低、产品不稳定等。人们非常需要效果明确、安全、无不良反应的含有中草药提取物的化妆品。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种具有强效协同作用的皮肤抗衰老作用的中草药提取物的组合物。本发明的组合物含有菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木的中草药种类的提取物。
本发明的另一个目的是提供制备含有所述中草药提取物的组合物的方法。本发明方法可以以菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木为原料对一种或多种中草药进行分别提取，然后将所得到的各提取物相混合进行制备，或者将上述中草药原料一起进行提取直接进行制备。
本发明通过实验验证了中草药提取物的组合物作为化妆品的功效。本发明提供的组合物具有抗衰老、抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提高皮肤光泽度等功效。本发明还提供了该组合物在化妆品中的应用。本发明的中草药提取物的组合物可直接与常用的化妆品基质相组合用于制备化妆品。根据本发明制备的化妆品组分稳定、效果明显、安全、无毒副作用。
发明详述
为准确理解本发明中所使用的术语，下面特别定义部分术语的含义。对于在此没有特别定义的术语，它们具有本领域技术人员普遍理解和接受的含义。如果在此所定义的某个术语的含义与本领域技术人员普遍理解和接受的含义不一致，则该术语的含义以在此所定义的含义为准。
本发明中使用的术语“中草药提取物”是指用合适的溶剂从任何适当形式的所述中草药药材，包括中草药粉末和中草药微粉化粉末，提取得到的产物，包括特定的有效成分和包含有效成分的混合物。该提取物的形式包括但不限于固体、半固体、溶液、混悬液、浓缩液、膏状体和粉末。
菊花，为菊科甘菊属或雏菊属植物的干燥花状头序或叶或茎，所述菊花优选选自野菊(Chrysanthemum Indicum)、甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)、杭菊(Chrysanthemum morifolium)和雏菊(Bellis perennis)等，更优选雏菊。
山柳菊，为菊科山柳菊属植物山柳菊(Hieracium krameri Franch.et Sev.)、伞花山柳菊(Hieracium umbellatum L.)或绿毛山柳菊(Hieracium Pilosella)等的干燥花状头序或叶或茎。
当归，为伞形科当归属植物当归(Angelica sinensis.)、圆叶当归(AngelicaArchangelica)或东当归(Angelica Acutiloba)等的根或叶。
三七，为五加科人参属植物三七(Panax notoginseng)的干燥根。
黄芪，为豆科黄芪属植物蒙古黄芪(Astragalus memeranaceus mongholicus)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus)等的根。
女贞子，为木犀科女贞属植物女贞(Ligustrum lucidum)的成熟果实或籽。
甘草，为豆科甘草属植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)、胀果甘草(Glycyrrhizainflata)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra)等的干燥根和根茎。
接骨木，为忍冬科接骨木属植物接骨木(Sambucus Williamsii Hance)、西洋接骨木(Sambucus Nigra)或美洲接骨木(Sambucus Canadensis)等的花或果。
在根据本发明的实施方案中，本发明提供了一种具有协同增效作用的皮肤抗衰老的中草药原料提取物的组合物，所述中草药原料含有:
菊花10-50份、山柳菊5-30份、当归0.5-20份、三七0.5-20份、黄芪0.25-10份、女贞子0.25-15份、甘草0.25-20份、接骨木1-25份；优选的，菊花12-45份、山柳菊6-25份、当归0.5-10份、三七0.5-10份、黄芪0.5-7.5份、女贞子0.5-10份、甘草0.5-7.5份、接骨木2.5-20份；更优选的，菊花15-40份、山柳菊7-20份、当归1-5份、三七1-5份、黄芪0.5-2.5份、女贞子0.5-2.5份、甘草0.5-2.5份、接骨木5-10份。
本发明的另一个目的是提供制备含有所述中草药原料提取物的组合物的方法。在本发明的方法中，可以以菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木为原料对一种或多种中草药原料进行分别提取，然后将所得到的各提取物相混合进行制备，或者将上述中草药原料一起进行提取直接进行制备。各中草药原料或中草药提取物的重量比例如下：菊花10-50份、山柳菊5-30份、当归0.5-20份、三七0.5-20份、黄芪0.25-10份、女贞子0.25-15份、甘草0.25-20份、接骨木1-25份；优选的，菊花12-45份、山柳菊6-25份、当归0.5-10份、三七0.5-10份、黄芪0.5-7.5份、女贞子0.5-10份、甘草0.5-7.5份、接骨木2.5-20份；更优选的，菊花15-40份、山柳菊7-20份、当归1-5份、三七1-5份、黄芪0.5-2.5份、女贞子0.5-2.5份、甘草0.5-2.5份、接骨木5-10份。
在根据本发明的实施方案中，本发明的提取物是水和/或C2-4醇提取物，提取用溶剂为水、C2-4醇或其组合。所述C2-4醇优选为乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合，更优选丙二醇和乙醇，常用的丙二醇为1,3-丙二醇。选择性的，其中一种或多种粉碎的中草药材料分别采用水提取法，另外一种或多种中草药材料分别采用20％-85％的C2-4醇水溶液的提取法，然后将几种提取物相混合，得到所述提取物组合物。在进一步优选的实施方案中，所述C2-4醇水溶液是20％-85％、优选40％-70％的C2-4醇水溶液。更优选的，所述C2-4醇水溶液是20％-85％、优选40％-70％的丙二醇和/或乙醇水溶液。
在进一步的实施方案中，将上述得到提取物组合物通过微孔滤膜超滤以进行纯化，优选采用0.1-10μm、更优选0.22-1μm微孔滤膜过滤以进行纯化，回收溶剂，得到浓缩液。
在本发明优选的实施方案中，本发明的组合物由预备物1、预备物2和预备物3组合而成，其中所述预备物1含有菊花和山柳菊的提取物，预备物2含有当归、三七、黄芪、女贞子和甘草的提取物，预备物3含有接骨木提取物。
在本发明优选的实施方案中，以菊花和山柳菊为原料进行提取，得到预备物1；以当归、三七、黄芪、女贞子和甘草为原料进行提取，得到预备物2；以接骨木为原料进行提取，得到预备物3；然后将三种预备物相混合制备得到本发明的组合物。
在本发明更优选的实施方案中，以菊花和山柳菊为原料用20％-85％的C2-4醇水溶液进行提取，得到预备物1；以当归、三七、黄芪、女贞子和甘草为原料用水进行提取，得到预备物2；以接骨木为原料用20％-85％的C2-4醇水溶液进行提取，得到预备物3；然后将三种预备物相混合制备得到本发明的组合物。
在本发明特别优选的实施方案中，以菊花和山柳菊为原料用20％-85％、优选40％-70％的乙醇水溶液进行提取，得到预备物1；以当归、三七、黄芪、女贞子和甘草为原料用水进行提取，得到预备物2；以接骨木为原料用20％-85％、优选40％-70％的乙醇水溶液进行提取，得到预备物3；然后，将三种预备物相混合制备得到本发明的组合物。
在本发明另外的实施方案中，将菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木所有中草药原料一起进行提取制备得到本发明的组合物，所述提取液为20％-85％的C2-4醇水溶液，优选20％-85％的乙醇水溶液、更优选40％-70％的乙醇水溶液。
在根据本发明的进一步实施方案中，将所述中草药原料进行粉碎，称量后混合，然后进行提取。中草药原料粉碎的目数优选为10-200目，更优选为10-80目，更优选10-50目。
在优选的实施方案中，本发明的中草药提取物的组合物是按照下列方法制备的：
1)将各种中草药原料粉碎，按重量比称量，混匀；所述中草药原料粉碎的目数优选为10-200目，更优选为10-80目，更优选10-50目；
2)将粉碎的中草药原料采用水提取和/或20％-85％的C2-4醇水溶液提取，得到提取液；使溶剂挥发得到浓缩液；
可选择的，用水调整浓缩液标示浓度至100％，即：调整浓缩液重量至相当于最初采用的中草药材料重量；
*浓缩液标示浓度＝中草药材料重量/最终浓缩液重量*100％
3)可选择的，用多元醇/水处理：将浓缩液与多元醇和/或水混合，冷却至30℃以下，真空抽滤或滤膜过滤，收集滤液，得到中草药提取物的混合物；其中所述多元醇选自丁二醇和丙二醇，常用的是1，3-丁二醇和1，3-丙二醇；浓缩液与多元醇及水混合的质量比为1:(0-3)：(0-3)，优选为1:(0-1)：(0-1)，更优选为1：0.5：0.5；
4)可选择的，采用微孔滤膜超滤进行纯化，回收溶剂，得到滤液；优选采用0.1-10μm、更优选0.22-1μm微孔滤膜；
5)可选择的，进行高温灭菌，冷却至30℃以下，制备得到本发明中草药提取物的组合物；优选灭菌温度为80-100℃，更优选80-90℃；灭菌时间可以为20-60min，优选30-45min。
其中所述水提取法包括：将待水提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，以1:5-1:20的质量比、优选1:10-1:15的质量比与水进行混合，在约50-100℃、优选70-90℃的温度下提取一次或多次，每次0.5-5小时、优选1-2小时，过滤移除残渣，得到滤液；浓缩，优选将滤液在40-60℃温度下进行减压浓缩，使水挥发得到浓缩液。
其中所述醇水溶液提取法包括：将待醇水溶液提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，与醇水溶液进行回流提取，冷却至30℃以下，真空抽滤；其中所述原料与醇水溶液的质量体积比为1:5-1:20，优选的1:8-1:15；所述醇水溶液是20％-85％、优选40％-70％的C2-4醇水溶液；优选所述醇水溶液是20％-85％、更优选40％-70％的丙二醇和/或乙醇水溶液；将抽滤后得到的溶液混合物蒸发溶剂，得到浓缩液；优选所述蒸发采用旋转蒸发，旋转蒸发的温度通常为40-80℃，优选50-70℃，蒸发时间通常为1-5h，优选1-3h。
应当指出的是，在根据本发明的化妆品中，各中草药提取物的重量比可以以提取物的干重进行计算，但在制备过程中往往采用的是包含提取物的溶液、半固体、混悬液、浓缩液、膏状体和粉末。
在本发明的实施方案中，可选择的，可以对单个中草药原料分别进行提取获得提取物，然后将得到的提取物合并，从而得到本发明的中草药提取物的组合物。可以采用已知的提取方法对中草药原料进行提取，但优选的，采用本发明说明书所述的方法进行提取。根据本发明方法制备的化妆品组分稳定、效果明显、安全、无毒副作用。
在本发明的实施方案中，所述的提取溶剂量、提取时间和提取次数不是绝对的，即在所述范围以外且接近所述范围的相应参数值也可实现本发明的目的。这样的显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。
本领域技术人员知道，为了促进实现本发明的目的，在上述方法步骤中可以增加一个或几个步骤。例如，可将中草药原料在提取之前浸泡一段时间，也可以将中草药原料进行物理加工处理以有利于活性物质的提取。这样的显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。
本领域技术人员知道，在本说明书公开内容的基础上，可以分别采用单独的中草药原料或采用它们的混合物，提取制备得到本发明适合的中草药提取物；也可以通过商业途径购买本发明所采用的一种或几种的中草药活性提取物，然后与其余的中草药活性提取物配伍，得到本发明的中草药提取物的组合物。这样的显而易见的变化形式都在本发明的范围之内。
含有本发明中草药提取物的组合物可广泛用于制备化妆品，所述的化妆品可以为霜剂、乳液、糊剂、软膏剂、面膜、凝胶剂或洗剂等。可以采用现有技术已知的基质、辅料、载体、添加剂等，按照常规方法进行混合，并制备成护肤水、精华、面膜、原液、安瓶、乳液、面霜、眼霜等，优选面霜和眼霜，更优选眼霜。所述中草药提取物的组合物在化妆品中的含量可以为，例如，以重量计，约0.1～20％，优选1-15％，更优选2～8％。本领域技术人员可以根据实际情况和需要适当调整所述浓度。
本发明的化妆品还可以含有一种或多种其它成分，如其它中草药提取物、营养性添加剂、表面活性剂、香精与香料、色素、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、紫外线吸收剂、收敛剂、助渗剂、pH值调节剂，等等。本领域技术人员可以根据他们的常识和具体需要进行选择。
在优选的实施方式中，本发明的化妆品的含有一种或多种以下成分：
保湿剂，选自以下一种或多种：甘油、1,3-丁二醇、1，3-丙二醇、丙二醇、双丙甘醇、山梨醇、甜菜碱、甘油聚丙烯酸酯、海藻糖、尿素、丝氨酸、甲基葡糖醇聚醚-20、聚乙烯吡咯烷酮、透明质酸钠、聚谷氨酸钠、1，2-戊二醇、辛甘醇、己二醇。
乳化增稠剂，选自以下一种或多种：氢化卵磷脂、黄原胶、羟乙基纤维素、聚丙烯酸钠、氢化聚癸烯、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、山梨坦异硬脂酸酯、聚山梨醇酯-60、聚丙烯酸酯交联聚合物-6、聚丙烯酸钠接枝淀粉、羟丙基淀粉磷酸酯、卡波姆、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、鲸蜡醇、甘油硬脂酸酯、PEG-75硬脂酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯。
皮肤调理剂，选自以下一种或多种：甘草酸二钾、甘油聚醚-26、柠檬酸、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷PEG-10/15交联聚合物、木薯淀粉、锦纶-12、硅石、精氨酸。
润肤剂，选自以下一种或多种：生育酚乙酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、油橄榄果壳油，牛油果树果脂、甜扁桃油、霍霍巴籽油、鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、角鲨烷、山茶籽油、季戊四醇二硬脂酸酯、氢化聚异丁烯、C10-18脂酸甘油三酯类.
抗氧化剂，选自以下一种或多种：对羟基苯乙酮、季戊四醇四(双-叔丁基羟基氢化肉桂酸)酯、生育酚(维生素E)。
螯合剂：EDTA二钠、EDTA四钠；
pH调节剂，选自以下一种或多种：三乙醇胺、氢氧化钠、四羟丙基乙二胺，精氨酸；
芳香剂，(日用)香精。
防腐剂，选自以下一种或多种：双(羟甲基)咪唑烷基脲、苯氧乙醇、氯苯甘醚、羟苯甲酯。
在更加优选的实施方案中，本发明化妆品可以分别制备水相组分和油相组分，加热搅拌并混合，均质后保温一段时间，降温加入中和相，继续冷却，然后加入含有本发明中草药提取物的相，调整pH值至5.0-7.0，检测后出料。例如，所述水相中可含有下列成分：甘油3-10％、1,3-丁二醇2-8％、甜菜碱1-5％、黄原胶0.05-0.2％、甘草酸二钾0.1-0.05％、甘油聚醚-26 1-3％、透明质酸钠0.01-0.1％、聚谷氨酸钠0.01-0.2％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.5-2％、山梨坦异硬脂酸酯0.01-0.2％、聚山梨醇酯-60 0.01-0.2％、EDTA二钠0.02-0.1％、对羟基苯乙酮0.2-1％。所述油相中可含有下列成分：角鲨烷1-5％、生育酚乙酸酯0.2-1.0％、氢化卵磷脂0.1-1.5％、C10-18脂酸甘油三酯类1.0-5.0％、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯0.5-3.0％、山梨坦橄榄油酸酯0.5-3.5％、C13-14异链烷烃1.0-3.0％、月桂醇聚醚-7 0.1-0.8％。所述中和相可含有四羟丙基乙二胺0.01-0.5％。含有本发明中草药提取物的相还可含己二醇0.2-1.0％或其他皮肤调理剂。
根据《化妆品安全技术规范2015版》进行人体皮肤斑贴试验，测试本发明化妆品的安全性。
根据本发明的含有多种中草药提取物的组合物以及含有所述组合物可以通过调节AP-1因子的表达，进而在化妆品中起到抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提升皮肤光泽度等作用，具有意想不到的强效的皮肤抗衰老效果，本发明的含有多种中草药提取物的组合物与仅含有其中部分种类的中草药提取物相比效果显著提高，具有更好的协同增效作用。人体斑贴测试证明，本发明组合物对人体温和，不会对皮肤造成刺激，安全性好、无毒副作用。
在具体的实施方案中，将本发明的组合物制备成眼霜，测试表明，其具有降低黑色素、淡化黑眼圈、提亮肤色、减少皱纹等功效。
附图说明
图1：显示了测试样品减少衰老因子AP-1信号的实验结果；
图2：显示了测试样品对降低眼周黑色素的实验结果；
图3：显示了测试样品对降低眼周皱纹的作用。
具体实施方案
下面将结合实施例进一步详细描述本发明。
I.制备实施例
对比实施例1(预备物1):
称取中草药原料，雏菊(Bellis perennis)4份、山柳菊(Hieracium Pilosella)2.5份，将原料粉碎成40目粉末，混合，以1:14的质量体积比加入70％乙醇进行回流提取，75℃热回流提取90min，冷却至35℃以下，真空抽滤，得到滤液；在65℃温度下旋转蒸发去除溶剂，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与丁二醇及水以1：0.5：0.5的质量比例混合，采用0.22μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，即得。
对比实施例2(预备物2)：
称取中草药原料，当归(Angelica sinensis)2.5份、三七(Panax notoginseng)2份、黄芪(Astragalus memeranaceus)1份、女贞子(Ligustrum lucidum)1份、甘草(Glycyrrhiza uralensis)1份，将原料粉碎成20目粉末，混合，以1:15的质量体积比加入纯水，于80℃提取4h，过滤，得到滤液；在65℃温度下旋转蒸发，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与丁二醇及水以1：0.5：0.5的质量比例混合，采用0.22μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，即得。
对比实施例3(预备物3)：
称取中草药原料，接骨木(Sambucus Nigra)7份，将原料粉碎成40目粉末，以1:18的质量体积比加入70％乙醇进行回流提取，55℃热回流提取120min，冷却至30℃以下，真空抽滤，得到滤液；在50℃温度下旋转蒸发去除溶剂，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与1,3-丙二醇和水以1:0.5：0.5的质量比例混合，采用为0.22μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，即得。
对比实施例4：
将通过对比实施例1和2的方法得到的预备物1、预备物2按照质量比为6:1的比例进行混合，即得。
对比实施例5：
将通过对比实施例2和3的方法得到的预备物2、预备物3按照质量比为1:1的比例进行混合，即得。
对比实施例6：
将通过对比实施例1和3的方法得到的预备物1、预备物3按照质量比为6:1的比例进行混合，即得。
实施例1：
将通过对比实施例1、2和3的方法得到的预备物1、预备物2和预备物3按照质量比为6:1:1的比例进行混合，得到中草药提取物的组合物。
实施例2：
称取中草药原料，雏菊20份、山柳菊10份、当归3份、三七3份、黄芪1.5份、女贞子1.5份、甘草1.5份、接骨木9份，将原料粉碎成40目粉末，以1:10的质量体积比加入60％乙醇进行回流提取，70℃热回流提取120min，冷却至30℃以下，真空抽滤，得到滤液；在60℃温度下旋转蒸发去除溶剂，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与丙二醇及水以1：0.5：0.5的质量比例混合，采用0.45μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，得到中草药提取物的组合物。
实施例3：
1.称取雏菊30份，粉碎成40目粉末，以1:12的质量体积比加入65％乙醇进行回流提取，75℃热回流提取100min，冷却至35℃以下，真空抽滤，得到滤液；在65℃温度下旋转蒸发去除溶剂，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与丁二醇及水以1：0.5：0.5的质量比例混合，采用为0.45μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，备用。
分别称取山柳菊15份，接骨木8份，进行单独提取，提取方法同雏菊的提取方法，提取完成后备用。
2.称取当归4份，将原料粉碎成20目粉末，混合，以1:16的质量体积比加入纯水，于80℃提取3h，过滤，得到滤液；在65℃温度下旋转蒸发，得到浓缩液，冷却至30℃以下，用水调整浓缩液标示浓度至100％；将浓缩液与丁二醇及水以1:0.5：0.5的质量比例混合，采用为0.22μm微孔滤膜进行真空抽滤，将滤液经85℃灭菌30min，冷却，即得。
分别称取称取三七4份、黄芪2份、女贞子2份、甘草2份进行单独提取，提取方法同当归提取，提起完成后备用。
3.将以上单独提取得到的雏菊、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草、接骨木提取物按照1:1:1:1:1:1:1:1的比例进行混合，混合均匀，即得中草药提取物的组合物。
II.活性效果实验
2.1.实验试剂及器材
A-Hacat细胞(包含转录因子AP-1的Hacat细胞)，DMEM培养液(SIGMA)，血清，培养箱(赛默飞)，荧光酶标仪(美谷MD)，荧光素酶检测试剂盒(购自上海易英生物技术有限公司)，DPBS，，胰酶(SIGMA)，96孔板。
2.2.待测样品
实施例1的待测样品：取实施例1制备的中草药提取物的组合物适量，加入DMEM培养液中，配得样品浓度为1％(v/v)的待测样品。
实施例2-3和对比实施例的待测样品的配制方法与实施例1相同。
表1：
试剂：TNF-α(10ng/ml)
2.3.实验方法
自培养箱取出培养的A-Hacat细胞，经消化离心，制成细胞悬液，调整细胞密度为2*105个/ml，每孔135μl，接种96孔板，培养24h。向孔板中加入预先配好的特定浓度的待测样品(实施例1-3、对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3)15μl，以杜氏磷酸盐缓冲液DPBS作为空白对照，继续培养12-24h，向孔板中每孔加入16.5ulTNF-α(留3个加入DPBS的空白对照孔加入等体积DPBS作为阴性对照)。继续培养24h，培养完毕后弃去培养液并向孔板中每孔加入裂解液100μl(得自荧光素酶检测试剂盒，参见试剂盒使用说明书)，按照荧光素酶检测试剂盒说明书进行操作，放入荧光酶标仪，以Lum模式读值。
2.4.实验结果
实验结果如附图1和表1所示。可以看出，实施例1、实施例2和实施例3的待测样品均可显著减少衰老因子AP-1信号的表达，活性数据明显优于所有对比实施例，而实施例1效果最明显；对比实施例1、对比实施例4及对比实施例6的待测样品可以在一定程度上降低衰老因子AP-1信号的表达，对比实施例2、对比实施例3和对比实施例5未能减少衰老因子AP-1信号。
综合上述结果，表明本发明的中草药提取物的组合物在抑制抗衰老因子AP-1的表达方面具有协同增效作用，可共同抑制AP-1衰老因子的表达。按照实施例1的中草药组合和提取方式获得的组合物可显著降低AP-1信号且达到最佳抑制效果。
III.制剂实施例(眼霜)
制剂实施例1(眼霜)：
3.1.组成(以制剂重量百分比计)：
A相组分：甘油5％、1,3-丁二醇3％、甜菜碱3％、黄原胶0.1％、甘草酸二钾0.2％、甘油聚醚-26 2％、透明质酸钠0.05％、聚谷氨酸钠0.05％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物1.2％、山梨坦异硬脂酸酯0.07％、聚山梨醇酯-60 0.07％、卡波姆0.1％、EDTA二钠0.1％、对羟基苯乙酮0.6％，加水至85％；
B相组分：角鲨烷2％、生育酚乙酸酯1％、氢化卵磷脂1.0％、C10-18脂酸甘油三酯类2％、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯1％、山梨坦橄榄油酸酯1.5％、C13-14异链烷烃2％、月桂醇聚醚-7 0.5％；
C相组分:四羟丙基乙二胺约0.1％；
D相组分：实施例1的中草药提取物的3％，己二醇0.5％。
对比制剂实施例(眼霜)1：
与制剂实施例1的眼霜相比，除不添加实施例1制备得到的中草药提取物以外，其他组分及工艺与制剂实施例1的眼霜相同。
3.2.制备方法：
1)在容器中，先把A相中黄原胶、透明质酸钠分散在水中，分散完全后加入A相其他原料，并同时升高温度到约85℃，搅拌备用；
2)在另一容器中，依次加入B相组分，升高温度到约85℃，搅拌溶解，备用；
3)将B相加入A相中搅拌均质，消泡，冷却至约60℃；
4)加入C相组分调节pH，继续搅拌降温；
5)降温到30℃以下，加入D相组分，搅拌均匀，调整pH值在5.5-6.5，加水调整重量至100％，检测合格后，出料封装，即得眼霜。
3.3.安全性测试
根据《化妆品安全技术规范》2015版进行人体皮肤封闭型斑贴试验。
斑贴试用胶带：Finn chambers on Scanpor-8mm(Smart Practice公司美国)
医院皮肤笔：用于定位及皮肤标记
受试者的选择：志愿者31名，为19-60岁身体健康中国人
实验方法：将制剂实施例1的眼霜放入斑试器内，用量约为0.025g，对照孔为空白对照(不置任何物质)，将加有制剂实施例1的眼霜的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的背部，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。去除制剂实施例1的眼霜斑试器后30min，待压痕消失后观察皮肤反应。如结果为阴性，于斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。
整个测试周期为三天。在进行斑贴前，志愿者需由工作人员对测试区域进行肌肤筛选(BL)。选择无影响评估因素的肌肤区域进行斑贴。在贴敷后，用医用皮肤笔在未贴区域标记样品区域。为了防止斑试器的脱落，四周可用医用胶带固定。在斑贴敷贴24小时后(即第二天回访)，由工作人员去除斑贴并在下方标记横线以便医生评估。休息半小时以上，待测试区域斑试器的印痕消失后进行医生评估(T0.5)。斑试器去除24小时后，临床医生根据医用皮肤笔的记号来评估该区域产品的肌肤反应(T24)。
测试结果
表2
表2测试结果可以得出以下结论，共31名志愿者参加且完成了测试，完成31份有效数据。本发明制剂实施例1的眼霜在30分钟及24小时后都未观察到任何皮肤反应。本发明化妆品在判断标准允许的范围内，未对人体产生皮肤不良反应，说明本发明制剂实施例1的眼霜及实施例1的中草药提取物的组合物是安全无刺激的，将实施例1的中草药提取物的组合物应用于化妆品中时安全无刺激。
3.4.功效对比试验
3.4.1实验器材及人员
VisioSere 3D数字脸(法国)，皮肤测试仪cutometer dual MPA580；
志愿者，30名，为20-50岁健康女性。纳入标准：面部肤色无光泽，眼角有明显细纹及黑眼圈和眼袋，皮肤缺乏弹性；能很好配合试验，测试期间保持生活规律；能阅读和理解知情同意书的所有内容并自愿签署；试验期间停止使用皮肤护理产品，不再参与其他任何研究中心的临床试验，并同意不使用任何可能会对结果有影响的化妆品、药物和保健品；
3.4.2待测样品:制剂实施例1(眼霜)和对比制剂实施例1(眼霜)。
3.4.3测试方法
进行单眼对照测试，一侧使用制剂实施例1(眼霜)的产品，另一侧使用对比制剂实施例1(眼霜)的产品，其他护肤品按平时习惯使用，禁止更换或增加新的护肤品。连续使用四周，在使用前、使用两周后、使用四周后分别进行眼周功效测试，测试期间，在恒温恒湿环境静坐，且不允许喝热的或含有咖啡因的饮料，黑色素通过皮肤测试仪cutometer dualMPA580探头进行测试，单位面积皱纹通过VisioSere 3D数字脸采集处理得到。
3.4.4实验效果
a.提亮肤色
由表3和图2结果可以看出，使用含有本发明实施例1中草药提取物的组合物制备得到的制剂实施例1(眼霜)的两周后，眼周黑色素含量显著降低(*0.01≤P＜0.05)；使用四周后，眼周黑色素有非常显著性降低(**p＜0.01)。
使用不含有本发明中草药提取物的原料制备得到的对比制剂实施例1(眼霜)，两周和四周后，眼周黑色素无显著变化。
在两周(W2)和四周(W4)的时间点分别进行测定。使用含有本发明实施例1中草药提取物的眼霜的眼周黑色素降低量明显好于不含有实施例1中草药提取物的眼霜。
表3
通过单眼对比试验可见，将本发明的中草药提取物的组合物应用到眼部可以起到降低黑色素含量、美白、淡化黑眼圈、提亮肤色等功效，且随着使用时间增加效果更明显，同理，可以将本发明的中草药提取物的组合物应用在其他化妆水、面膜、精华、面霜等化妆品中。起到降低黑色素含量、美白、提亮肤色、改善光泽度和弹性等功效。
b.改善皱纹
使用含有本发明实施例1的中草药提取物的制剂实施例1的眼霜两周后，眼周皱纹明显降低；使用四周后，眼周皱纹持续降低。使用不含有本发明中草药提取物的原料制备得到的对比制剂实施例1的眼霜两周和四周后，眼周皱纹无显著变化。
在两周(W2)和四周(W4)的时间点分别进行测定，使用含有本发明实施例1的中草药提取物制得的制剂实施例1的眼霜的眼周皱纹降低量明显优于不含本发明提取物制得的对比制剂实施例1的眼霜的结果。
结果如表4和图3所示。
表4
| 单位面积皱纹(百分比) | W0 | W2 | W4 |
| 制剂实施例(眼霜)1 | 0.089505 | 0.079048 | 0.075577 |
| 对比制剂实施例(眼霜)1 | 0.071798 | 0.070789 | 0.072485 |
通过单眼对比试验可见，以眼霜为例，将本发明的中草药提取物应用于化妆品中，可以起到改善皱纹，尤其减少鱼尾纹的功效，且随着使用时间增加效果更明显，同理，可以将本发明的中草药提取物应用于化妆水、面膜、精华、面霜等其它化妆品制剂中，起到减少皱纹，淡纹、增加弹性等抗老功效。
Claims (28)
1.一种用于皮肤化妆品的中草药提取物的组合物，其中含有雏菊、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木的中草药提取物，其中按重量计，各中草药原料的重量比例如下：
雏菊12-45份、山柳菊6-25份、当归0.5-10份、三七0.5-10份、黄芪0.5-7.5份、女贞子0.5-10份、甘草0.5-7.5份、接骨木2.5-20份；
其中所述提取物是用水或20％-85％的乙醇水溶液提取得到的。
2.根据权利要求1的组合物，其中各中草药原料的重量比例如下：雏菊15-40份、山柳菊7-20份、当归1-5份、三七1-5份、黄芪0.5-2.5份、女贞子0.5-2.5份、甘草0.5-2.5份、接骨木5-10份。
3.根据权利要求1的组合物，其中所述乙醇水溶液浓度40％-70％。
4.根据权利要求1的组合物，所述组合物由预备物1、预备物2和预备物3组合而成，其中所述预备物1含有雏菊和山柳菊的乙醇水溶液提取物，预备物2有当归、三七、黄芪、女贞子和甘草的水提取物，预备物3含有接骨木的乙醇水溶液提取物。
5.根据权利要求1-4任一项的组合物，其中一种或多种中草药原料分别采用水提取得到，另外一种或多种中草药原料分别采用20％-85％的乙醇水溶液提取得到，然后将几种提取物相混合，得到所述提取物的组合物。
6.用于制备权利要求1-5中任一项所述的中草药提取物的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
1)将各种中草药原料粉碎，按重量比称量，混匀；所述中草药原料粉碎的目数为10-200目；
2)将粉碎的中草药原料采用水提取或20％-85％的乙醇水溶液提取，得到提取液；使溶剂挥发得到浓缩液；
用水调整浓缩液标示浓度至100％，即：调整浓缩液重量至相当于最初采用的中草药原料重量；
*浓缩液标示浓度＝中草药原料重量/最终浓缩液重量*100％
3)多元醇/水处理：将浓缩液与多元醇和水混合，冷却至30℃以下，真空抽滤或滤膜过滤，收集滤液，得到中草药提取物的混合物；其中所述多元醇选自丁二醇和丙二醇；浓缩液与多元醇及水混合的质量比为1:(0.5-3)：(0.5-3)；
4)采用0.1-10μm微孔滤膜超滤进行纯化，回收溶剂，得到滤液。
7.根据权利要求6的方法，所述方法还包括以下步骤：
5)进行高温灭菌，冷却至30℃以下，制备得到本发明中草药提取物的组合物；灭菌温度为80-100℃，灭菌时间为20-60min。
8.根据权利要求6的方法，其中在步骤1)中，所述中草药原料粉碎的目数为10-80目。
9.根据权利要求8的方法，其中在步骤1)中，所述中草药原料粉碎的目数为10-50目。
10.根据权利要求6的方法，其中在步骤3)中，所述浓缩液与多元醇及水混合的质量比为1:(0.5-1)：(0.5-1)。
11.根据权利要求6的方法，其中在步骤3)中，所述浓缩液与多元醇及水混合的质量比为1：0.5：0.5。
12.根据权利要求6的方法，其中在步骤4)中，采用0.22-1μm微孔滤膜超滤进行纯化。
13.根据权利要求7的方法，其中在步骤5)中，所述灭菌温度为80-90℃。
14.根据权利要求7的方法，其中在步骤5)中，所述灭菌时间为30-45min。
15.根据权利要求6的方法，其中将一种或多种粉碎的中草药原料分别采用水提取法，另外一种或多种中草药原料原分别采用20％-85％的乙醇水溶液的提取法，然后将几种提取物相混合。
16.根据权利要求6-15任一项的方法，
其中所述水提取法包括：将待水提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，以1:5-1:20的质量比与水进行混合，在50-100℃的温度下提取一次或多次，每次0.5-5小时，过滤移除残渣，得到滤液；浓缩，使水挥发得到浓缩液；
其中所述醇水溶液提取法包括：将待醇水溶液提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，与醇水溶液进行回流提取，冷却至30℃以下，真空抽滤；其中所述原料与醇水溶液的质量体积比为1:5-1:20；所述醇水溶液是20％-85％的乙醇水溶液；将抽滤后得到的溶液混合物蒸发溶剂，得到浓缩液。
17.根据权利要求16的方法，其中所述水提取法包括：将待水提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，以1:10-1:15的质量比与水进行混合，在70-90℃的温度下提取一次或多次，每次1-2小时，过滤移除残渣，得到滤液；浓缩，使水挥发得到浓缩液。
18.根据权利要求16的方法，其中在所述水提取法中，过滤移除残渣得到滤液后，将滤液在40-60℃温度下进行减压浓缩，使水挥发得到浓缩液。
19.根据权利要求16的方法，其中在所述醇水溶液提取法中，所述蒸发采用旋转蒸发，旋转蒸发的温度为40-80℃，蒸发时间为1-5h。
20.根据权利要求19的方法，其中所述旋转蒸发的温度为50-70℃。
21.根据权利要求19的方法，其中所述蒸发时间为1-3h。
22.根据权利要求16的方法，其中所述醇水溶液提取法包括：将待醇水溶液提取的中草药原料粉碎，按重量比称重，混合，与醇水溶液进行回流提取，冷却至30℃以下，真空抽滤；其中所述原料与醇水溶液的质量体积比为1:8-1:15；所述醇水溶液是40％-70％的乙醇水溶液；将抽滤后得到的溶液混合物蒸发溶剂，得到浓缩液。
23.按照权利要求6-22任一项的方法制备得到的中草药提取物的组合物。
24.根据权利要求1-5或23任一项的中草药提取物的组合物在制备用于皮肤的化妆品中的用途，所述化妆品具有抗衰老、抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提高皮肤光泽度功效。
25.一种化妆品，其中包含根据权利要求1-5或23任一项的中草药提取物的组合物，其中所述化妆品为霜剂、乳液、糊剂、软膏剂、面膜、凝胶剂或洗剂；以重量计，所述中草药提取物的组合物在化妆品中的含量为0.1～20％。
26.根据权利要求25的化妆品，其中所述化妆品为面霜或眼霜。
27.根据权利要求25的化妆品，其中以重量计，所述中草药提取物的组合物在化妆品中的含量为1-15％。
28.根据权利要求25的化妆品，其中以重量计，所述中草药提取物的组合物在化妆品中的含量为2～8％。
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