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CN111481678A - 一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法 - Google Patents

一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法 Download PDF

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CN111481678A
CN111481678A CN202010278759.1A CN202010278759A CN111481678A CN 111481678 A CN111481678 A CN 111481678A CN 202010278759 A CN202010278759 A CN 202010278759A CN 111481678 A CN111481678 A CN 111481678A
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顾辰辉
王清清
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Sir Run Run Shaw Hospital
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Abstract

本发明公开了一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法，针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料包括纳米材料、骨靶向分子和对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；对纳米材料进行骨靶向分子修饰后，包载对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；本发明通过精确的成熟破骨细胞靶向和生理性化学反应调控的生物级联反应抑制破骨细胞，为破骨细胞异常活化的药物治疗提供了新思路和新工具。

Description

一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法
技术领域
本发明属于骨组织药物治疗领域，具体涉及一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法。
背景技术
骨质疏松症是一种全球性的慢性疾病，可导致严重的骨质流失和骨折，对患者造成痛苦，生活质量严重下降。骨肿瘤及肿瘤骨转移中的破骨细胞异常活化也可造成破骨细胞异常活化，引起骨质疏松，从而导致病理性骨折。目前对破骨细胞异常活化的治疗主要有钙剂、维生素D、降钙素、二磷酸盐、雌激素等抑制骨吸收药与氟化物、合成类固醇、甲状旁腺激素等促进骨形成药，这些治疗方法虽然可以影响破骨细胞的功能或通过促进骨生成来延缓病程，但难以完全抑制骨质流失，因为破骨细胞引起的酸化和骨质破坏是不可逆的。破骨细胞与骨接触界面的酸化是骨质疏松症期间骨矿物溶解和有机降解的根源，因此亟需研发新的精准针对破骨细胞酸性封闭区从而防治破骨细胞异常活化的材料。
用于骨组织药物治疗的纳米材料十分丰富，主要有脂质体、聚合物纳米颗粒、二氧化硅颗粒及纳米涂层等，这些纳米材料可以通过一定的靶向方式和药物释放方式达到治疗效果。在治疗骨质疏松症层面，这些纳米材料可以达到靶向骨组织，并以一定方式影响破骨细胞功能的作用，但是常见的材料常出现靶向不精确、效用不显著、药物毒副作用大等问题。申请号为201710283530.5的专利公开了一种用于骨质疏松的双靶向载药纳米颗粒脂-聚合物制备方法，加强了药物的靶向作用以减少药物的副作用。申请号为201710841290.6的专利公开了一种pH响应纳米材料在制备防治骨质疏松抗骨吸收药物中的应用，利用pH响应型氧化石墨烯、壳聚糖或水凝胶选择性地抑制破骨细胞。这些专利在一定维度上优化了递送或释放过程。
但既往的材料仍然难以同时解决两个问题，即破骨细胞靶向的精准性与作用药物的生理性。在骨质疏松症的病程进展中，成熟破骨细胞骨吸收导致的骨质破坏是重要的一方面，但是其他细胞介导的骨修复和稳态维持也是十分重要的一方面。因此，合理的骨质疏松治疗材料应具有在循环中对骨组织，尤其是酸化破骨细胞的靶向，同时，用于靶向和pH响应的材料应在临床上广泛使用或为体内常见物质。符合上述两点，可实现对破骨细胞的抑制而其他细胞产生尽可能低的毒副作用，从而达到更优的抗骨吸收和促骨形成的效果。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法。通过临床常用药物进行骨靶向，并通过化学反应同时达到对破骨细胞的精准靶向与功能抑制。
为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，包括纳米材料、骨靶向分子和对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；对纳米材料进行骨靶向分子修饰后，包载对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；所述的纳米材料为可包载、可修饰的纳米材料；所述的骨靶向分子为对骨组织具有明确亲和力的分子，所述的可对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物为弱碱性或中性碳酸氢根盐。
作为优选，所述纳米材料为脂质体、聚合物纳米颗粒或介孔氧化硅颗粒。
作为优选，所述骨靶向分子为四环素、膦酸盐或天冬氨酸类多肽序列。
作为优选，所述可对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物为碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铵，所述的碳酸氢钠为1mol/L的碳酸氢钠。
一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备方法，该方法具体为：将可包载、可修饰的纳米材料与骨靶向分子交联后，与卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，并控制PH值为8.0-8.4，室温下磁力搅拌交联24-72小时，在旋蒸仪中薄膜化，然后加入待包载溶液进行震荡水化，并超声乳化后进行透析；其中可包载、可修饰的纳米材料与骨靶向分子的摩尔比为1：1至1：2。
所述的可包载、可修饰的纳米材料为功能化磷脂，与骨靶向分子交联后得到骨靶向功能磷脂。
所述的超声乳化流程为开1-2s，关2-3s，功率30-70％，时间5-20分钟，所述的透析时间为1-3天。
所述的功能化磷脂采用DSPE-PEG-NHS，所述骨靶向分子采用四环素，即TC。
本发明的有益效果：本发明提供了针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料及其制备方法，通过精确的成熟破骨细胞靶向和生理性化学反应调控的生物级联反应抑制破骨细胞，为破骨细胞异常活化的药物治疗提供了新思路和新工具。
相比现有治疗骨质疏松的药物或材料，本发明显著的进步在于：
1)采用骨组织靶向分子与针对破骨细胞封闭区域的pH响应进行双重精确靶向，提高药物利用率，降低对其他组织器官的副作用。
2)所用药物为人体内存在的生理性化合物，确保低毒性。可同时作为治疗效应产生成分和pH迅速响应成分，具有双重作用。
3)体外实验验证显著的抗破骨细胞骨侵蚀作用，对破骨细胞数量及大小、骨侵蚀区域数量及面积均有明确的抑制作用。
4)体外实验验证显著的促破骨细胞外泌体作用，利用外泌体表面RANK实现与血清中RANKL的无效结合，继而实现远期破骨抑制作用。
5)在体实验验证显著的抗骨质疏松作用，对骨质疏松的骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙均有明确的改善作用。
6)作为一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料模型，其中各组分均可替换，具有充足的可借鉴性。
因此，针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可应用于防治破骨细胞异常活化，具有明确的治疗效果。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供以下附图进行说明：
图1针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备和表征。a为针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料作用机制示意图；b，c为针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备流程示意图；d-f为MALDI-TOF、共聚焦显微镜、荧光光度计验证骨靶向分子与功能化磷脂的交联；g为针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料在冷冻电镜下的表征。
图2针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的功能验证。a为酸滴定试验验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的抗酸能力；b为测定不同pH下粒径验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的pH响应；c，d为原位液体原子力显微镜验证不同pH下针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的力学变化；e为冷冻电镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料在酸性条件(pH＝4)下释放；f，g为体外荧光显微镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的长期(7天)稳定性及快速pH响应；h为活体荧光验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料在小鼠体内靶向骨的快速富集；i为荧光共聚焦显微镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料对破骨细胞骨侵蚀的抑制作用。
图3针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料通过化学反应调控的生物级联效应对破骨细胞的抑制作用。a为TRAP染色验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料对破骨细胞的抑制作用；b为扫描电子显微镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料对破骨细胞骨侵蚀的显著改善；c，d为Western-blot、qPCR验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可抑制破骨细胞NFATc-1、c-Fos、CTSK表达随时间的递增效应；e为荧光共聚焦显微镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可抑制破骨细胞封闭区形成；f，g为Western-blot、荧光共聚焦显微镜验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可抑制破骨细胞RANK表达随时间的递增效应；h，i为Western-blot、细胞外囊泡流式计数验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可促进破骨细胞产生含RANK的外泌体；j，k为TRAP染色验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料促进破骨细胞分泌的含RANK的细胞外囊泡可进一步抑制破骨细胞形成。
图4针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料对OVX小鼠骨质疏松的抑制作用。A为构建动物模型及分组、评估方式；b，c为micro-CT验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可对OVX小鼠脊柱及股骨、胫骨的骨量、骨小梁数量及骨小梁间隙起到显著改善作用；d，e为H&E染色及TRAP染色验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可对OVX小鼠骨组织的骨量、破骨细胞数量及面积起到显著改善作用；f为血清学指标验证针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料可对OVX小鼠的破骨细胞代谢指标起到显著抑制作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料材料及其制备方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
如图1(a)所示，破骨细胞酸性封闭区的纳米材料作用机制示意图；
本发明中的针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的优选案例为包载碳酸氢钠的四环素修饰的纳米脂质体(简称NaHCO3-TNLs)，由以下方法制备，具体步骤如下：将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与3.05mg四环素溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时后得到DSPE-PEG-TC，与80.00-120.00mg卵磷脂、12.00-20.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化，然后加入10mL的1mol/L碳酸氢钠溶液进行震荡水化，然后进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关3s，功率40％，时间10分钟。最后于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。制得的材料如图1中b、c所示。
本发明还可以使用其他现有的针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，如包载碳酸氢铵或碳酸氢钾的四环素或阿仑膦酸修饰的纳米脂质体等均可获得相同的技术效果。
实施例1、包载碳酸氢钠的四环素修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与3.05mg四环素溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时。
2、将步骤1得到的产物与100.00mg卵磷脂、16.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢钠溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关3s，功率40％，时间10分钟
5、于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例2、包载碳酸氢钠的阿仑膦酸修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与2.30mg阿仑膦酸钠溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时。
2、将步骤1得到的产物与100.00mg卵磷脂、16.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢钠溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关3s，功率40％，时间20分钟
5、于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例3、包载碳酸氢钾的四环素修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与3.05mg四环素溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联24小时。
2、将步骤1得到的产物与80mg卵磷脂、16.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢钾溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关3s，功率40％，时间10分钟
5、于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例4、包载碳酸氢钾的阿仑膦酸修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与2.30mg阿仑膦酸钠溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时。
2、将步骤1得到的产物与120.00mg卵磷脂、16.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢钾溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关3s，功率40％，时间5分钟
5、于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例5、包载碳酸氢铵的四环素修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与3.05mg四环素溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时。
2、将步骤1得到的产物与100.00mg卵磷脂、12.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢铵溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开1s，关3s，功率40％，时间10分钟
5、于透析袋中透析24小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例6、包载碳酸氢铵的阿仑膦酸修饰纳米脂质体的制备
1、将20.00mg的DSPE-PEG-NHS与2.30mg阿仑膦酸钠溶于10.00mL氯仿，加入三乙胺调节pH至8.2，室温下磁力搅拌交联48小时。
2、将步骤1得到的产物与100.00mg卵磷脂、20.00mg胆固醇溶于氯仿，在旋蒸仪中薄膜化。
3、在烧瓶中加入10mL的1mol/L碳酸氢铵溶液进行震荡水化。
4、进行超声乳化，超声乳化流程为开2s，关2s，功率70％，时间10分钟
5、于透析袋中透析72小时，取出后经0.22微米滤头过滤，4度保存。
实施例7、NaHCO3-TNLs的合成评估
1、将DSPE-PEG-NHS与DSPE-PEG-TC分别使用MALDI-TOF进行质谱检测，可得DSPE-PEG-NHS分子量分布于2900，DSPE-PEG-TC分子量分布于3250，与理论分子量一致(图1中d)。
2、将FITC与碳酸氢钠溶液共同包载，激光共聚焦显微镜可见四环素荧光与脂质体膜定位一致(图1中e)。
3、荧光分光光度计显示四环素修饰的材料在525nm处荧光比未修饰的材料明显增强(图1中f)。
4、冷冻透射电子显微镜显示材料粒径均为纳米级别且形状规则(图1中g)。
实施例8、NaHCO3-TNLs的特性评估
1、将包载碳酸氢钠的四环素修饰的纳米脂质体(NaHCO3-TNLs)、包载氯化钠的四环素修饰的纳米脂质体(NaCL-TNLs)、水、1mol/L碳酸氢钠溶液、0.02mol/L碳酸氢钠溶液用1％的盐酸进行滴定实验，并实时检测pH的动态变化，结果显示NaHCO3-TNLs具有显著的抗酸能力(图2中a)。
2、将NaHCO3-TNLs、NaCL-TNLs分别于pH为7、6、4的环境中测定粒径，结果显示NaHCO3-TNLs在pH＝4酸性环境中粒径显著减小，提示内容物在酸性环境中释放(图2中b)。
3、将NaHCO3-TNLs通过原位液体原子力显微镜进行pH＝7和pH＝4环境下力学特性的比较，结果显示在pH＝4条件下粒径显著变小，且脂质体膜倾向破裂(图2中c、d)。
4、将NaHCO3-TNLs通过冷冻透射电子显微镜进行pH＝7和pH＝4环境下形态的比较，结果显示pH＝4条件下脂质体膜出现断裂(图2中e)。
5、将FITC包载入NaHCO3-TNLs后与牛骨片在10％血清培养基中孵育1天、3天、7天观察荧光，并在7天后将培养基环境换为pH＝4，观察0分钟、1分钟、3分钟的脂质体荧光。结果显示NaHCO3-TNLs在7天内可吸附于骨面并保持稳定，且在7天后仍具有对pH的快速响应功能。(图2中f，g)。
6、将包载吲哚氰绿的四环素修饰的纳米脂质体(ICG-TNLs)与包载吲哚氰绿的无四环素修饰的纳米脂质体(ICG-NLs)以0.025ml/g剂量进行尾静脉注射。结果显示ICG-TNLs相对于ICG-NLs具有显著的快速骨组织富集作用(图2中h)。
7、将NaHCO3-TNLs、NaCL-TNLs分别与FITC包被的牛骨片共孵育，并分别种植成熟破骨细胞，结果显示NaHCO3-TNLs组骨面FITC荧光强度及面积显著优于NaCL-TNLs组，提示NaHCO3-TNLs可有效抑制破骨细胞的骨侵蚀作用。(图2中i)。
实施例9、NaHCO3-TNLs的破骨细胞抑制作用
1、将NaHCO3-TNLs加入破骨细胞诱导体系并与单纯破骨细胞诱导体系对照，结果显示NaHCO3-TNLs组TRAP染色破骨细胞数量与面积均显著抑制，提示NaHCO3-TNLs对破骨细胞具有显著的抑制作用(图3中a)。
2、将NaHCO3-TNLs加入牛骨片培养的破骨细胞诱导体系并与牛骨片培养的单纯破骨细胞诱导体系对照，结果显示NaHCO3-TNLs组扫描电镜骨吸收区域数量与面积均显著抑制，提示NaHCO3-TNLs对破骨细胞具有显著的抑制作用(图3中b)。
3、将NaHCO3-TNLs加入破骨细胞诱导体系并与单纯破骨细胞诱导体系对照，Western-blot及q-PCR结果显示NaHCO3-TNLs可抑制破骨细胞NFATc-1、c-Fos、CTSK表达随时间的递增效应，激光共聚焦显微镜结果显示NaHCO3-TNLs可抑制破骨细胞actin环形成，提示NaHCO3-TNLs对破骨细胞骨吸收功能具有显著的抑制作用(图3中c-e)。
4、对破骨细胞诱导体系进行每日的RANK表达评估，Western-blot及激光共聚焦显微镜结果提示破骨细胞RNAK表达量随破骨细胞成熟递增(图3中f，g)。
5、将NaHCO3-TNLs加入破骨细胞诱导体系并与单纯破骨细胞诱导体系对照，提取外泌体进行评估，Western-blot及外泌体流式计数结果显示NaHCO3-TNLs组细胞外囊泡RANK含量显著增多，与步骤1-4结果进行分析，提示NaHCO3-TNLs可促进破骨细胞分泌富含RANK的细胞外囊泡(图3中h，i)。
6、将按步骤5中提取的细胞外囊泡分别加入破骨细胞诱导体系，结果显示计入NaHCO3-TNLs细胞外囊泡组TRAP染色破骨细胞显著抑制，提示富含RANK的细胞外囊泡可进一步抑制破骨细胞(图3中j，k)。
实施例10、NaHCO3-TNLs对OVX小鼠骨质疏松的治疗作用
1、动物疾病模型构建及分组
分组方式：将11周C57BL/6母鼠分为四组：a)施行假手术并尾静脉注射生理盐水(Sham)；b)施行卵巢切除并尾静脉注射生理盐水(OVX)；c)施行卵巢切除并尾静脉注射NaCL-TNLs(OVX+NaCL-TNLs)；d)施行卵巢切除并尾静脉注射NaHCO3-TNLs(OVX+NaHCO3-TNLs)。
实施方式：对各组动物进行相应手术，1周后开始以0.025ml/g剂量进行尾静脉注射相应药物，每2天给药一次，持续2周。给药结束4周后取出各组小鼠脊柱、股骨、胫骨及血液进行分析，分析方式包括：micro-CT、H&E染色、TRAP染色、血清骨代谢指标ELISA(图4中a)。
2、将各实验组脊柱、股骨、胫骨micro-CT进行比较，结果显示OVX+NaHCO3-TNLs组骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙指标均显著优于OVX组(图4中b，c)。
3、将各实验组脊柱、股骨、胫骨H&E染色、TRAP染色进行比较，结果显示OVX+NaHCO3-TNLs组骨量、破骨细胞面积、破骨细胞数量指标均显著优于OVX组(图4中d，e)。
4、将各实验组血清骨代谢指标进行比较，结果显示OVX+NaHCO3-TNLs组破骨细胞代谢指标显著低于OVX组。结合步骤2，3实验结果，提示NaHCO3-TNLs可有效治疗OVX小鼠的骨质流失及破骨细胞代谢，从而治疗骨质疏松(图4中f)。
对实施例2-6所得的针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料分别进行合成评估、特性评估、破骨细胞抑制作用评估、对OVX小鼠骨质疏松小鼠的治疗作用评估，结果与实施例7-10中NaHCO3-TNLs材料结果相似，这表明可通过上述优化后确定的试剂浓度和处理时间的调整，实现效果类似的针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备。
由上述实施例可知，本发明提供的针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料通过靶向骨组织，对破骨细胞酸性封闭区域进行产气的pH响应，中和酸化的同时破坏破骨细胞封闭区域，抑制破骨细胞成熟，并促使破骨细胞分泌富含RANK的细胞外囊泡，与血清RANKL形成无效结合，从而达到远期治疗破骨细胞异常活化的效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本技术领域的技术人员来应当理解，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围，不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，其特征在于：包括纳米材料、骨靶向分子和对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；对纳米材料进行骨靶向分子修饰后，包载对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物；所述的纳米材料为可包载、可修饰的纳米材料；所述的骨靶向分子为对骨组织具有明确亲和力的分子，所述的可对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物为弱碱性或中性碳酸氢根盐。
2.根据权利要求1所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，其特征在于：所述纳米材料为脂质体、聚合物纳米颗粒或介孔氧化硅颗粒。
3.根据权利要求1所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，其特征在于：所述骨靶向分子为四环素、膦酸盐或天冬氨酸类多肽序列。
4.根据权利要求1所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，其特征在于：所述可对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物为碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铵。
5.根据权利要求1所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料，其特征在于：所述可对破骨细胞酸性区域产生化学反应的化合物为1mol/L的碳酸氢钠。
6.根据权利要求1所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备方法，其特征在于：将可包载、可修饰的纳米材料与骨靶向分子交联后，与卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，并控制PH值为8.0-8.4，室温下磁力搅拌交联24-72小时，在旋蒸仪中薄膜化，然后加入待包载溶液进行震荡水化，并超声乳化后进行透析；其中可包载、可修饰的纳米材料与骨靶向分子的摩尔比为1：1至1：2。
7.根据权利要求6所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备方法，其特征在于：所述的可包载、可修饰的纳米材料为功能化磷脂，与骨靶向分子交联后得到骨靶向功能磷脂。
8.根据权利要求6所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备方法，其特征在于：所述的超声乳化流程为开1-2s，关2-3s，功率30-70％，时间5-20分钟，所述的透析时间为1-3天。
9.根据权利要求7所述的一种针对破骨细胞酸性封闭区的纳米材料的制备方法，其特征在于：所述的功能化磷脂采用DSPE-PEG-NHS，所述骨靶向分子采用四环素，即TC。
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