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CN111286038B - 一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用 - Google Patents

一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用 Download PDF

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CN111286038B
CN111286038B CN202010268193.4A CN202010268193A CN111286038B CN 111286038 B CN111286038 B CN 111286038B CN 202010268193 A CN202010268193 A CN 202010268193A CN 111286038 B CN111286038 B CN 111286038B
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Abstract

本发明公开一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用,涉及天然蛋白质化学改性领域。所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法包括以下步骤:将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液;将玉米醇溶蛋白配制成溶液,加入到所述聚甘油醛溶液中,发生脱水缩合反应,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白。本发明通过将聚甘油氧化为聚甘油醛,再与玉米醇溶蛋白反应,改变了玉米醇溶蛋白的表面亲水性,从而提高了玉米醇溶蛋白的水溶性。

Description

一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用
技术领域
本发明属于天然蛋白质化学改性领域,具体涉及一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用。
背景技术
玉米醇溶蛋白是来源于玉米的醇溶性蛋白质,具有生物降解性和生物相容性,适用于食品和医用材料领域,是生物活性物质递送系统的良好载体。然而,它的非极性氨基酸比例超过50%,等电点为6.8,使得玉米醇溶蛋白在接近等电点的中性溶液中不溶解而发生聚集,导致递送系统的不稳定,极大地限制了其在食品、医药等行业的应用。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法及应用,旨在解决玉米醇溶蛋白水溶性差的问题。
为实现上述目的,本发明提出一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法包括以下步骤:
将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液;
将玉米醇溶蛋白配制成溶液,加入到所述聚甘油醛溶液中,发生脱水缩合反应,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
可选地,将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液的步骤中:所述聚甘油和高碘酸钠的质量比为(4~6):(1~3)。
可选地,将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液的步骤中:所述氧化反应的反应时间为0.5~1h;
所述氧化反应的反应温度为20~30℃;
所述氧化反应在避光条件下进行。
可选地,将玉米醇溶蛋白配制成溶液,加入到所述聚甘油醛溶液中,发生脱水缩合反应,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白的步骤,包括:
将玉米醇溶蛋白溶于缓冲溶液中,制得玉米醇溶蛋白溶液;
将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中搅拌发生脱水缩合反应,反应结束后调节溶液pH至中性,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液;
将所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液离心,取上清液进行流水透析处理,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
可选地,将玉米醇溶蛋白溶于缓冲溶液中,制得玉米醇溶蛋白溶液的步骤中:
所述缓冲溶液的pH值为11~13;和/或,
所述缓冲溶液为KCl-NaOH缓冲溶液。
可选地,将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中搅拌反应,反应结束后调节溶液pH至中性,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液的步骤中:所述脱水缩合反应的反应温度为60~100℃。
可选地,将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中搅拌反应,反应结束后调节溶液pH至中性,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液的步骤中:所述脱水缩合反应的反应时间为4~5h。
可选地,将所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液离心,取上清液进行流水透析处理,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白的步骤中:所述流水透析处理的时间为12~36h。
可选地,所述聚甘油包括十聚甘油和六聚甘油中的任意一种。
本发明还提出一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白在稳定水包油乳液中的应用,所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白由如上述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法制得。
本发明提供的技术方案中,将具有高亲水性的聚甘油与高碘酸钠发生氧化反应制得聚甘油醛,并将其与玉米醇溶蛋白中的游离氨基发生脱水缩合反应,使亲水性的聚甘油接枝到玉米醇溶蛋白上,改变玉米醇溶蛋白的表面亲水性,从而提高了玉米醇溶蛋白的水溶性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法一实施例的流程示意图;
图2为本发明实施例1和2制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的接枝度;
图3为本发明实施例1和2制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白水分散液的荧光强度变化图;
图4为本发明实施例1和2制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的红外光谱图;
图5为本发明实施例1制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的扫描电镜图;
图6为本发明实施例2制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的扫描电镜图;
图7为本发明实施例5制得的的十聚甘油改性玉米醇溶蛋白稳定水包油乳液的激光扫描共聚焦显微镜照片;
图8为本发明实施例6制得的的六聚甘油改性玉米醇溶蛋白稳定水包油乳液的激光扫描共聚焦显微镜照片。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例,参照附图做进一步说明。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。
需要说明的是,实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外,全文中出现的“和/或”的含义,包括三个并列的方案,以“A和/或B”为例,包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外,各个实施例之间的技术方案可以相互结合,但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础,当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在,也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
玉米醇溶蛋白是来源于玉米的醇溶性蛋白质,具有生物降解性和生物相容性,适用于食品和医用材料领域,是生物活性物质递送系统的良好载体。然而,玉米醇溶蛋白不具有水溶性,仅在60%~90%的乙醇溶液中溶解,而食品、医药递送体系的应用环境均为水溶液,从而限制了玉米醇溶蛋白的应用。
聚甘油是一种柔性亲水脂肪族聚醚多元醇,具有良好的水溶性、生物相容性、热稳定性,与常用作亲水改性的聚乙二醇相比,聚甘油具有更低的毒性,在取代聚乙二醇等亲水聚合物方面具有极大的潜力。为了增强玉米醇溶蛋白的亲水性或将其改性为两亲性蛋白质,突破玉米醇溶蛋白质在水溶液体系的使用限制,本发明提出一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,利用聚甘油作为亲水物质对玉米醇溶蛋白进行化学改性,从而合成出水溶性优良的玉米醇溶蛋白-聚甘油接枝物,图1所示为本发明提出的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法的一实施例。请参阅图1,在本实施例中,所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法包括以下步骤:
S10、将聚甘油和高碘酸钠、水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液。
S20、将玉米醇溶蛋白配制成溶液,加入到所述聚甘油醛溶液中,发生脱水缩合反应,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
在本实施例中,将聚甘油溶于蒸馏水中,加入高碘酸钠,利用高碘酸钠的氧化性,将聚甘油氧化为聚甘油醛;再将玉米醇溶蛋白溶解,配制成溶液,然后加入到所述聚甘油醛溶液中,聚甘油醛的羰基与玉米醇溶蛋白的游离氨基脱水缩合,脱去一分子水,生成C=N键,使得聚甘油接枝到所述玉米醇溶蛋白上。
需要说明的是,聚甘油是一种来源天然、生物降解性好、安全性高的新型脂肪族聚醚多元醇,是由甘油聚合而成,具有良好的水溶性,可以在市面上购得。聚甘油种类繁多,而受聚甘油的聚合度影响,不同聚甘油改性玉米醇溶蛋白的亲水性有一定差异。
在本实施例中,聚甘油可以包括十聚甘油和六聚甘油中的任意一种,优选为十聚甘油。进一步地,所述聚甘油和高碘酸钠的质量比对应为(4~6):(1~3),由于所选择的聚甘油的种类不同,使用聚甘油-10时,所述聚甘油、高碘酸钠的质量比优选为5:1.4,使用聚甘油-6时,所述聚甘油、高碘酸钠的质量比优选为5:2.32,在所述氧化反应中,所述聚甘油、高碘酸钠和水的比例为(4~6):(1~3):100,聚甘油与高碘酸钠的摩尔比约为1:1,高碘酸钠可稍微过量,使聚甘油上的一个醇羟基氧化为一个醛基或羰基;所述聚甘油和玉米醇溶蛋白的质量比约为1:1,其中聚甘油过量,也即聚甘油醛过量,使得聚甘油醛与玉米醇溶蛋白充分反应,可提高聚甘油在玉米醇溶蛋白上的接枝度。
所述氧化反应的反应时间为0.5~1h,由于所选择的聚甘油的种类不同,使用聚甘油-10时,优选反应时间为30min,使用聚甘油-6时,优选反应时间为40min;所述氧化反应的反应温度为20~30℃,即室温下进行;为避免高碘酸钠分解,所述氧化反应在避光条件下进行。
具体实施时,溶解玉米醇溶蛋白的溶剂可选用缓冲溶液或醇类水溶液,优选为缓冲溶液。
对应地,步骤S20包括以下步骤:
步骤S201、将玉米醇溶蛋白溶于缓冲溶液中,制得玉米醇溶蛋白溶液。
在本实施例中,所述缓冲溶液的pH值为11~13,优选pH值为12,在该pH下的缓冲溶液中,玉米醇溶蛋白容易溶解,且不会发生水解反应。
在本实施例中,为便于溶解玉米醇溶蛋白,所述缓冲溶液的选择种类很多,可选用碱性缓冲溶液,优选为KCl-NaOH缓冲溶液。
步骤S202、将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中搅拌,发生脱水缩合反应,反应结束后调节溶液pH至中性,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液。
在本实施例中,所述脱水缩合反应的反应温度为60~100℃,优选为80℃,反应时间为4~5h。
具体实施时,将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中,于室温下搅拌0.5h使之混合均匀,然后将混合溶液置于60~100℃油浴锅中,搅拌反应4~5h,反应结束后调节pH至7.0,得到所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液,其中,作为一种优选的实施方式,所述脱水缩合反应的反应温度优选设置为80℃,在此温度下,反应温和且反应速度较快。
步骤S203、将所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液离心,取上清液进行流水透析处理,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
具体实施时,将聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液以5000rmp/min离心10min,得到的上清液用去离子水透析12~36h,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白,其中,透析时间优选为24h。
本实施例中利用亲水性的聚甘油与玉米醇溶蛋白进行分子间的化学键合,形成了聚甘油改性玉米醇溶蛋白,一方面,由于分子间相互作用,玉米醇溶蛋白的形貌和结构改变,减少了蛋白质的聚集,另一方面,由于聚甘油的多羟基,显著增加了改性玉米醇溶蛋白分子中的亲水基团,从而促进了蛋白质的水合作用,进而改善了玉米醇溶蛋白的水溶性。此外,本发明提供的制备方法工艺简单且需要的仪器设备常见、投入生产时,不仅易于操作,而且能耗低、重复性高,易于工业化生产。
此外,基于上述聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法制得的亲水性玉米醇溶蛋白,由该聚甘油改性玉米醇溶蛋白在水中形成的分散液具有高度的稳定性。因此,本发明还提出了一种该聚甘油改性玉米醇溶蛋白在稳定水包油乳液中的应用。具体实施时,可以将该聚甘油改性玉米醇溶蛋白与水混合形成分散液后,向其中加入油相,从而可以形成均一的、稳定的水包油纳米乳液。
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明,应当理解,以下实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
称取5g十聚甘油溶于100mL蒸馏水中,加入1.4g高碘酸钠,于室温下避光反应30min;另外称取5g玉米醇溶蛋白溶于100mL KCl-NaOH缓冲溶液(pH=12.0)中。将玉米醇溶蛋白溶液加入到反应后十聚甘油溶液,于室温下搅拌30min使之混合均匀,然后将混合溶液置于80℃油浴锅中混合搅拌反应4h。反应结束后调节pH至7.0,以5000rmp/min离心10min,得到的上清液用去离子水透析24h,取截留液冷冻干燥得到十聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
实施例2
称取5g六聚甘油溶于100mL蒸馏水中,加入2.32g高碘酸钠,于室温下避光反应40min;另外称取5g玉米醇溶蛋白溶于100mL KCl-NaOH缓冲溶液(pH=12.0)中。将玉米醇溶蛋白溶液加入到反应后六聚甘油溶液,于室温下搅拌30min使之混合均匀,然后将混合溶液置于80℃油浴锅中混合搅拌反应5h。反应结束后调节pH至7.0,以5000rmp/min离心10min,得到的上清液用去离子水透析24h,取截留液冷冻干燥得到六聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
实施例3
称取4g十聚甘油溶于100mL蒸馏水中,加入1g高碘酸钠,于室温下避光反应30min;另外称取4g玉米醇溶蛋白溶于100mL KCl-NaOH缓冲溶液(pH=11.0)中。将玉米醇溶蛋白溶液加入到反应后十聚甘油溶液,于室温下搅拌30min使之混合均匀,然后将混合溶液置于60℃油浴锅中混合搅拌反应4h。反应结束后调节pH至7.0,以5000rmp/min离心10min,得到的上清液用去离子水透析12h,取截留液冷冻干燥得到十聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
实施例4
称取6g六聚甘油溶于100mL蒸馏水中,加入3g高碘酸钠,于室温下避光反应60min;另外称取6g玉米醇溶蛋白溶于100mL KCl-NaOH缓冲溶液(pH=13.0)中。将玉米醇溶蛋白溶液加入到反应后十聚甘油溶液,于室温下搅拌30min使之混合均匀,然后将混合溶液置于100℃油浴锅中混合搅拌反应5h。反应结束后调节pH至7.0,以5000rmp/min离心10min,得到的上清液用去离子水透析36h,取截留液冷冻干燥得到十聚甘油改性玉米醇溶蛋白。
鉴于实施例1-4制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白包括十聚甘油改性玉米醇溶蛋白和六聚甘油改性玉米醇溶蛋白,以下应用实施例以及性能检测中选用实施例1制得的十聚甘油改性玉米醇溶蛋白和实施例2制得的六聚甘油改性玉米醇溶蛋白为例进行进一步说明。
应用实施例1
(1)取实施例1中制得的十聚甘油改性玉米醇溶蛋白,配制成浓度为10mg/mL的水分散液6mL;
(2)称取0.96g大豆油(十聚甘油改性玉米醇溶蛋白质量的16倍)加入到十聚甘油改性玉米醇溶蛋白的水分散液中,然后,采用高压均质处理形成均一的水包油纳米乳液。
效果验证:该水包油纳米乳液放置90天后未见有分层现象,表明十聚甘油改性玉米醇溶蛋白的乳化性优良。
应用实施例2
(1)取实施例2中制得的六聚甘油改性玉米醇溶蛋白,配制浓度为10mg/mL的水分散液6mL;
(2)称取0.96g大豆油(六聚甘油改性玉米醇溶蛋白质量的16倍)加入到六聚甘油改性玉米醇溶蛋白的水分散液中,然后,采用高压均质处理形成均一的水包油纳米乳液。
效果验证:该水包油纳米乳液放置90天后未见有分层现象,表明六聚甘油改性玉米醇溶蛋白的乳化性优良。
性能检测
(一)聚甘油改性玉米醇溶蛋白接枝度测定
采用邻苯二甲醛试剂进行接枝度的测定。邻苯二甲酸试剂配制方法:取80mg邻苯二甲酸颗粒溶解在2mL的95%乙醇中,并与50mL 0.1mol/L的四硼酸钠缓冲溶液(pH 9.5)、5mL质量分数20%SDS以及200μL的β-巯基乙醇混合,充分混匀后用蒸馏水定容至100mL。配制浓度为10mg/mL的玉米醇溶蛋白溶液,改性蛋白溶于去离子水中,未改性蛋白溶于70%乙醇/水溶液中。取100μL的待测蛋白样品与2.7mL邻苯二甲酸试剂混合后,在室温下避光孵育2min,然后采用全波长酶标仪测定波长336nm处的吸光度。相同条件下对L-亮氨酸作标准曲线,计算样品中游离氨基的含量,反应前后游离氨基含量的变化即为产物的接枝度。改性蛋白的接枝度计算为未改性与改性玉米醇溶蛋白游离氨基含量变化与未改性玉米醇溶蛋白游离氨基的比值。
图2所示的十聚甘油和六聚甘油改性玉米醇溶蛋白的游离氨基含量和接枝度表明两者差异不大,分别为33.4和32.5%,即大于三分之一的游离氨基酸与聚甘油反应,从而改变了玉米醇溶蛋白表面的亲水聚甘油数量,使得玉米醇溶蛋白的水溶性大大改变。
(二)聚甘油改性玉米醇溶蛋白的内源荧光光谱分析
使用荧光光谱仪检测稀释后的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的水分散液(0.5mg/mL)的荧光强度变化,如图3所示。
请参阅图3,图3中可以看出,未改性玉米醇溶蛋白的最大发射波长在308nm附近,可推知蛋白中酪氨酸残基的含量相对较高。与未改性蛋白相比,聚甘油接枝玉米醇溶蛋白的荧光强度极大降低,表明与聚甘油共价接枝使得玉米醇溶蛋白结构发生较大变化,与接枝度测定的结果一致。蛋白结构的改变增大了酪氨酸残基在水溶剂中的暴露,受到水分子的荧光淬灭作用增大。且十聚甘油比六聚甘油对玉米醇溶蛋白荧光淬灭作用稍强烈。
(三)聚甘油改性玉米醇溶蛋白的FTIR分析
将蛋白样品与溴化钾研磨成均匀粉末,压片后置于FTIR仪中测定。FTIR分析在25℃进行基线校正,分辨率为4cm-1,吸收光谱波数扫描范围为4000~400cm-1,扫描次数为16次。
请参阅图4,图4表明聚甘油改性玉米醇溶蛋白后,羟基伸缩吸收峰从3469cm-1迁移到3426cm-1,说明聚甘油与玉米醇溶蛋白反应后使分子间的氢键缔合向低波数迁移,且3426cm-1处吸收强度增大是由于聚甘油分子的引入增强了游离羟基的伸缩振动,亦说明玉米醇溶蛋白与聚甘油分子形成了共价接枝物。
(四)聚甘油改性玉米醇溶蛋白分散液的表征
用去离子水配制实施例1和2对应的聚甘油改性玉米醇溶蛋白浓度为1mg/mL的分散液,测定pH为7.0时的平均粒径、多分散性指数(PDI)和zeta-电势。
检测方法:取100μL样品用蒸馏水稀释30倍后放于比色皿中,将比色皿放置于马尔文纳米粒度分析仪中,设定条件为室温25℃、水为分散相、准备时间60秒。在此条件下重复测量样品的粒径、PDI和zeta-电势三次,取三次测量结果的平均数作为测量样品的粒径、PDI和zeta电势记入下表1。
表1各实施例的粒径、PDI和zeta-电位数据
粒径/nm PDI Zeta-电势/mV
实施例1 98.2±1.3 0.257±0.006 -43.6±4.9
实施例2 131.5±1.7 0.396±0.065 -43.6±4.6
从上表1可以看出,实施例1和实施例2制得的聚甘油改性玉米醇溶蛋白分散于水中的平均粒径均能够达到纳米级,具有相似的zeta-电势。实施例1对应的十聚甘油改性玉米醇溶蛋白比实施例2的蛋白样品在水分散液中的粒径和PDI均更低,表明长链聚甘油使得玉米醇溶蛋白的亲水性更高,且聚甘油的空间斥力作用可减少蛋白颗粒间的聚集,形成更小的粒径。
(五)聚甘油改性玉米醇溶蛋白的形态表征
检测方法:将实施例1和2对应的聚甘油改性玉米醇溶蛋白配制浓度为1mg/mL的水分散液,滴加5~10μL到200目铜网上晾干后于80KV电压下广策,观察不同样品的微观形态,如图5和图6所示。
请参阅图5和图6,分别为实施例1和2对应的十聚甘油与六聚甘油改性玉米醇溶蛋白的微观形态。实施例1和2的改性玉米醇溶蛋白均呈现完美球形颗粒,具有清晰和光滑的表面,也说明改性后玉米醇溶蛋白是以粒子形式均匀分散。
(六)使用激光扫描共聚焦显微镜观测应用实施例1和应用实施例2的产品,分别如图7和图8所示。
参阅图7和图8,大豆油均匀分散于聚甘油改性玉米醇溶蛋白稳定的水包油乳液中,具有很好物理稳定性与分散性,形成的油水状乳液液滴相对均匀,粒径较小,绝大部分油滴程纳米尺度分布。表明长链聚甘油改性玉米醇溶蛋白能通过空间位阻和静电排斥作用减少液滴间的絮凝和聚结,同时也表明聚甘油改性玉米醇溶蛋白能稳定其质量16倍的大豆油水包油乳液,从而显著减少两亲性蛋白的用量,具有很大的应用价值和前景。
以上仅为本发明的优选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液;
将玉米醇溶蛋白溶于缓冲溶液中,制得玉米醇溶蛋白溶液;
将所述玉米醇溶蛋白溶液加入到所述聚甘油醛溶液中搅拌,发生脱水缩合反应,反应结束后调节溶液pH至中性,得聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液;
将所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液离心,取上清液进行流水透析处理,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白;
其中,所述脱水缩合反应的反应温度为60~100℃,所述脱水缩合反应的反应时间为4~5h。
2.如权利要求1所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液的步骤中:所述聚甘油和高碘酸钠的质量比为(4~6):(1~3)。
3.如权利要求1所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,将聚甘油、高碘酸钠和水混合,发生氧化反应,得聚甘油醛溶液的步骤中:所述氧化反应的反应时间为0.5~1h;
所述氧化反应的反应温度为20~30℃;
所述氧化反应在避光条件下进行。
4.如权利要求1所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,将玉米醇溶蛋白溶于缓冲溶液中,制得玉米醇溶蛋白溶液的步骤中:
所述缓冲溶液的pH值为11~13;和/或,
所述缓冲溶液为KCl-NaOH缓冲溶液。
5.如权利要求1所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,将所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白溶液离心,取上清液进行流水透析处理,取截留液冷冻干燥,得到聚甘油改性玉米醇溶蛋白的步骤中:所述流水透析处理的时间为12~36h。
6.如权利要求1所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法,其特征在于,所述聚甘油包括十聚甘油和六聚甘油中的任意一种。
7.一种聚甘油改性玉米醇溶蛋白在稳定水包油乳液中的应用,其特征在于,所述聚甘油改性玉米醇溶蛋白由如权利要求1至6任意一项所述的聚甘油改性玉米醇溶蛋白的制备方法制得。
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