CN111094289B

CN111094289B - 吡啶并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

Info

Publication number: CN111094289B
Application number: CN201980004502.2A
Authority: CN
Inventors: 张国宝; 陈一千; 贺峰; 陶维康
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-07-03
Filing date: 2019-07-02
Publication date: 2022-11-22
Anticipated expiration: 2039-07-02
Also published as: TWI823959B; WO2020007275A1; EP3822271A1; CN115710266B; AU2019299609B9; UA128528C2; EP3822271A4; KR20210028208A; BR112020026890A2; JP7349456B2; CN115710266A; CN111094289A; MX2020013785A; US12162879B2; JP2021529190A; AU2019299609A1; AU2019299609B2; TW202019925A; CA3105286A1; US20210269439A1

Abstract

本发明公开了一种通式(I)所示的吡啶并嘧啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为TLR8激动剂的用途，其中通式(I)的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

吡啶并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种通式(I)所示的吡啶并嘧啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为TLR8激动剂的用途。

背景技术

Toll样受体(toll-like receptors；TLRs)是参与先天免疫的一类重要受体。TLRs是单体跨膜的非催化性受体，通常在岗哨细胞如巨噬细胞和树突状细胞中表达，可以识别由微生物产生的结构保守的分子。一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理屏障，就会被TLRs识别，继而激活免疫细胞应答(Mahla，R S.等人，Front Immunol.4：248(2013))。免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能力，某种程度上是由于Toll样免疫受体的广泛存在。

在哺乳动物中至少有10种不同的TLRs。一些此类受体的配体和相应的信号级联放大已经被鉴定出。TLR8是TLRs亚组(TLRs 3、7、8和9)的成员，局限于专门识别非己核酸的细胞的内涵体隔室。TLR8在人身上主要通过单核细胞、NK细胞和髓样树突细胞(mDC)表达。TLR8激动剂可以导致各种不同的促炎细胞因子的释放，如IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ。

TLR8在机体的固有免疫和获得性免疫都起着重要的作用。TLR8激动剂作为免疫调节剂，可以用于各种不同的与免疫相关的疾病的治疗，如卵巢癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌(basal cell carcinoma)、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺炎(COPD)、溃疡性结肠炎、肝纤维化、HBV、黄病毒科(Flaviviridae)病毒、HCV、HPV、RSV、SARS、HIV或流行性感冒的病毒感染等。

由于TLR8和TLR7高度同源，因此TLR8激动剂在大多数情况下也是TLR7激动剂。因此TLR8和TLR7的双重激动剂在很多专利里都有报道，如WO2009111337、WO2011017611、WO2011068233、WO2011139348、WO2012066336、WO2013033345和WO2017046112。TLR8选择性的激动剂报道的比较少，主要有VentiRX公司的VTX-2337(WO2007024612)和Gilead公司的GS-9688(WO2016141092)。

发明内容

本发明人经过潜心研究，设计合成了一系列吡啶并嘧啶类化合物，其对TLR8具有较好的激活作用，而对TLR7没有激活作用，因此可以被开发为TLR8选择性激动剂，而用于治疗和/或预防与TLR8活性相关的各种疾病。

因此，本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，

其中：

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自CH、CR⁵或N；

L¹选自亚烷基或共价键，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；

R¹选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

R²和R³相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁴选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

R⁵选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。

在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(Ia)所示的化合物：

其中：

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(Ib)所示的化合物：

其中：

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：

其中：

G¹、L¹和R¹～R⁴如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)所示的化合物：

其中：

G¹、L¹、R¹和R⁴如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、或通式(III)所示的化合物，其中所述的R⁴为杂环基，其中所述的杂环基任选被一个或多个烷基取代；优选为4至6元的杂环基，其中所述的杂环基含有1至2个相同或不同选自N、O和S的杂原子，并且所述的4至6元的杂环基任选被一个或多个烷基取代；更优选为吡咯基、哌嗪基、哌啶基或吗啡啉基。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、或通式(HI)所示的化合物，其为通式(IVa)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶选自氢原子或烷基，优选烷基；

s为0或1；

G¹、G³、L¹和R¹如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、或通式(III)所示的化合物，其为通式(IV)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶选自氢原子或烷基，优选烷基；

s为0或1；

G¹、L¹和R¹如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、通式(III)、通式(IVa)或通式(IV)所示的化合物，其中所述的R¹为烷基，其中所述的烷基任选被一个或多个羟基取代；优选为C_1-12烷基，其中所述的C_1-12烷基任选被一个或多个羟基取代。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、通式(IH)、通式(IVa)或通式(IV)所示的化合物，其为通式(Va)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶选自氢原子或烷基，优选烷基；

s为0或1；

G¹、G³和L¹如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、通式(III)、通式(IVa)或通式(IV)所示的化合物，其为通式(V)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶选自氢原子或烷基，优选烷基；

s为0或1；

G¹和L¹如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，所述的通式(I)、通式(Ia)、通式(Ib)、通式(II)、通式(III)、通式(IVa)、通式(IV)、通式(Va)或通式(V)所示的化合物，其中所述的L¹为-(CH₂)_n-或共价键；n为1至6的整数；优选为-CH₂-或共价键。

本发明通式(I)的典型化合物包括但不限于：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。

本发明的另一方面涉及一种通式(IB)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，其为制备通式(I)的中间体，

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自CH、CR⁵或N；

R²和R³相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。

R⁶选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、叔丁氧羰基(BOC)、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(IB)所示的化合物，其为通式(IA)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，为制备通式(I)的中间体，

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自CH、CR⁵或N；

本发明通式(IB)的典型化合物包括但不限于：

本发明的另一方面涉及一种制备根据本发明所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IB)化合物脱保护，得到通式(I)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自CH、CR⁵或N；

R⁶选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、叔丁氧羰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

将通式(IA)化合物脱保护，得到通式(I)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹～G³、L¹和R¹～R⁴如通式(I)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(Ia)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(Ia-A)化合物脱保护，得到通式(Ia)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(Ia)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(Ib)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(Ib-A)化合物脱保护，得到通式(Ib)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(Ib)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(II)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IIA)化合物脱保护，得到通式(II)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹和R¹～R⁴如通式(II)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(III)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IIIA)化合物脱保护，得到通式(III)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹、R¹和R⁴如通式(III)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(IV)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IVA)化合物脱保护，得到通式(IV)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹、R¹、W¹、W²和s如通式(IV)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(Va)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(Va-A)化合物脱保护，得到通式(Va)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹、W¹、W²和s如通式(Va)所定义。

本发明的另一方面的优选例涉及一种制备根据本发明所述的通式(V)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(V-A)化合物脱保护，得到通式(V)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹、W¹、W²和s如通式(V)所定义。

本发明的进一步提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于激动TLR8的药物中的用途。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途，所述病毒优选乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒和艾滋病毒。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于调节免疫系统的药物中的用途。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。

本发明进一步涉及一种激动TLR8的方法，其包括将根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物与TLR8接触的步骤。

本发明进一步涉及一种治疗由病毒引起的感染的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，所述病毒优选乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒和艾滋病毒。

本发明进一步涉及一种治疗或预防肿瘤的方法，其包括向有需要的患者施用治疗或预防有效量的根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作药物。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作TLR8激动剂。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作药物，所述药物用于治疗由病毒引起的感染，所述病毒优选乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒和艾滋病毒。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作药物，所述药物用于调节免疫系统。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作药物，所述药物用于治疗或预防肿瘤。

本发明所述的肿瘤优选为癌症，更优选选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。

本发明治疗方法中所用化合物或组合物的剂量通常将根据疾病的严重性、患者的体重和化合物的相对功效而改变。然而，作为一般性指导，合适的单位剂量可以是0.1～1000mg。

本发明的药物组合物除活性化合物外，还可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方式的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。

含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，造粒剂、崩解剂，粘合剂，和润滑剂。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。

也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂、分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油、或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。

本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳，可通过局部大量注射将注射液或微乳注入患者的血流中。可选地，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。

药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

发明的详细说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2，2-二乙基戊基、正癸基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基和环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子(例如3、4、5或6个碳原子)，最优选包含5至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。

术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等；优选苯基并环戊基、四氢萘基。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，优选四氢吡喃基、哌啶基、吡咯烷基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。

术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。

杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，更优选5至6元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、1H-1，2，3-三唑基、4H-1，2，4-三唑基、4H-1，2，3-三唑基、1H-四唑基、2H-四唑基、5H-四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更优选吡唑基或咪唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。

术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基、2，4-二甲氧基苄基和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。所述氨基保护基优选为2，4-二甲氧苄基。

术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。

术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。

术语“羟基”指-OH基团。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氧代基”指＝O。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

现有技术中已公开的TLR8激动剂，对Cyp和hERG选择性较差。所以仍有必要继续研发安全的和治疗上更有效的TLR8激动剂。

本发明针对现有技术的问题，提供了一种对Cyp和hERG选择性更好，对TLR8的选择性更好和激活效果更明显的药物化合物，是更安全和更有效的TLR8激动剂。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

方案一

本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：

将通式(ID)化合物和通式(IC)在碱性条件下，加入催化剂，进行偶联反应，得到通式(IA)化合物；

步骤二：

将通式(IA)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(I)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹～G³、L¹和R¹～R⁴如通式(I)所定义。

方案二

本发明通式(Ia)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

将通式(Ia-A)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(Ia)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(Ia)所定义。

方案三

本发明通式(Ib)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

将通式(Ib-A)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(Ib)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如通式(Ib)所定义。

方案四

本发明通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：

将通式(ID)化合物和通式(IIC)在碱性条件下，加入催化剂，进行偶联反应，得到通式(IIA)化合物；

步骤二：

将通式(IIA)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(II)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹和R¹～R⁴如通式(II)所定义。

方案五

本发明通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

将通式(IIIA)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(III)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹、R¹和R⁴如通式(III)所定义。

方案六

本发明通式(IVa)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：

将通式(IVa-D)化合物和通式(IVa-C)在碱性条件下，加入催化剂，进行偶联反应，得到通式(IVa-A)化合物；

步骤二：

将通式(IVA)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(IV)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹、R¹、W¹、W²和s如通式(IV)所定义。

方案七

本发明通式(IV)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：

将通式(IV-D)化合物和通式(IV-C)在碱性条件下，加入催化剂，进行偶联反应，得到通式(IV-A)化合物；

步骤二：

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、L¹、R¹、W¹、W²和s如通式(IV)所定义。

方案八

本发明通式(Va)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

将通式(Va-A)化合物在酸性条件下脱保护，得到通式(Va)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基，优选为2，4-二甲氧苄基；

G¹、G³、L¹、W¹、W²和s如通式(Va)所定义。

提供酸性条件的试剂包括但不限于氯化氢、氯化氢的1，4-二氧六环溶液、三氟乙酸、甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、Me₃SiCl和TMSOTf，优选为三氟乙酸。

上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：乙酸、三氟乙酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1，4-二氧六环、水、N，N-二甲基甲酰胺及其混合物。

上述各方案中提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基胺基锂、醋酸钾、乙酸钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾和正丁醇钠，所述的无机碱类包括但不限于碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂；优选碳酸钾；

所述的催化剂包括但不限于钯/碳、四(三苯基膦)钯、二氯化钯、醋酸钯、双(二亚苄基丙酮)钯、氯(2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基-1，1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1，1′-联苯)]钯、[1，1′-双二苯基膦基二茂铁二氯化钯、1，1′-双(二苄基磷)二氯二戊铁钯或三(二亚苄基丙酮)二钯；优选1，1′-双二苯基膦基二茂铁二氯化钯。

具体实施方式

实施例

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。

手性HPLC分析测定使用Agilent 1260 DAD高效液相色谱仪。

制备型高效液相色谱法使用Waters 2767、Waters 2767-SQ Detecor2、ShimadzuLC-20AP和Gilson-281制备型色谱仪。

手性制备HPLC使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄层色谱法(TLC)硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层层析检测产品使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，C：石油醚/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

实施例1

2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇1

第一步

2-((7-溴-2-氯吡啶[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇1c

将7-溴-2，4-二氯吡啶并[3，2-d]嘧啶1a(5.4g，19.36mmol，采用专利申请WO2014022728公开的方法制备而得)加入到120mL乙腈中，加入2-氨基-2-甲基已烷-1-醇1b(3.8g，28.96mmol，采用专利申请WO2009129097公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(8.027g，58.08mmol)，于45℃搅拌反应16小时。反应结束，过滤去不溶物，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物1c(4.0g，产率：55.3％)。

MS m/z(ESI)：373.1[M+1]。

第二步

2-((7-溴-2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇1d

将化合物1c(4.0g，10.71mmol)加入到25mL四氢呋喃中，加入2，4-二甲氧基苯甲胺(6.0g，35.861mmol)，加入N，N-二异丙基乙胺(4.15g，32.11mmol)，封管100℃搅拌16小时。向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷萃取(20mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(50mL)、饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1d(3.5g，产率：64.8％)。

MS m/z(ESI)：504.1[M+1]。

第三步

2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇1e

将化合物1d(130mg，0.237mmol)加入到5mL乙二醇二甲醚中，加入联硼酸频那醇酯(91mg，0.358mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(35mg，0.048mmol)，加入乙酸钾(70mg，0.713mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗品标题产物1e(130mg，产率：99.2％)。

第四步

2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇1g

将粗品化合物1e(130mg，0.235mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入5-溴-2-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶1f(68mg，0.282mmol，采用专利申请WO2007084451公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氩气三次，反应液温度升至80℃反应2小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷(20mL)萃取。合并有机相，用水(50mL)、饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物1g(60mg，产率：43.5％)。

MS m/z(ESI)：586.0[M+1]。

第五步

将化合物1g(60mg，0.102mmol)加入到10mL三氟乙酸中，室温反应2小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用水(50mL)、饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物1(10mg，产率：22.4％)。

MS m/z(ESI)：436.0[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.91(s，1H)，8.64(s，1H)，8.18-8.20(m，1H)，7.83(s，1H)，7.56-7.58(m，1H)，7.24(s，1H)，6.40(br，2H)，5.16-5.20(m，1H)，3.79(s，2H)，3.70-3.73(m，1H)，3.51-3.54(m，1H)，2.54(s，4H)，1.91-1.95(m，2H)，1.71-1.75(m，4H)，1.43(s，3H)，1.23-1.27(m，4H)，0.84-0.87(m，3H)。

实施例2

(R)-2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇2

第一步

(R)-2-((7-溴-2-氯吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇2c

将化合物1a(400mg，1.434mmol)加入到10mL四氢呋喃中，加入(R)-2-氨基-2-甲基己烷-1-醇2b(采用专利申请“WO2016141092中说明书第207页的实施例59”公开的方法制备而得)(377mg，2.873mmol)，加入N，N-二异丙基乙胺(556mg，4.302mmol)，100℃封管搅拌反应16小时，反应结束，冷却到室温，过滤去不溶物，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物2c(4.0g，产率：55.3％)。

MS m/z(ESI)：373.1[M+1]。

第二步

(R)-2-((7-溴-2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇2d

将化合物2c(250mg，0.669mmol)加入到10mL四氢呋喃中，加入2，4-二甲氧基苯甲胺(560mg，3.349mmol)，加入N，N-二异丙基乙胺(259mg，2.004mmol)，封管100℃搅拌16小时。向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷萃取(20mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物2d(295mg，产率：87.5％)。

MS m/z(ESI)：504.1[M+1]。

第三步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇2e

将化合物2d(295mg，0.54mmol)加入到5mL乙二醇二甲醚中，加入联硼酸频那醇酯(223mg，878.169umol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(43mg，0.059mmol)，加入乙酸钾(173mg，1.76mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗品标题产物2e(322mg，产率：100％)。

第四步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇2g

将粗品化合物2e(322mg，0.584mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入化合物1f(141mg，0.584mmol)，加入碳酸钾(242mg，1.75mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(43mg，0.059mmol)，置换氩气三次，反应液温度升至80℃反应2小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷(20mL)萃取。合并有机相，用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物2g(100mg，产率：29.2％)。

MS m/z(ESI)：586.0[M+1]

第五步

将化合物2g(100mg，0.170mmol)加入到10mL三氟乙酸中，室温反应2小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用水(50mL)、饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物2(45mg产率：60.5％)。

MS m/z(ESI)：436.0[M+1]。

实施例3

2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇3

第一步

2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(1′-甲基-1′，2′，3′，6′-四氢-[2，4′-联吡啶]-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇3b

将化合物1e(218mg，0.395mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入5-溴-1′-甲基-1′，2′，3′，6′-四氢-2，4′-联吡啶3a(100mg，0.395mmol，采用专利申请WO2010054279公开的方法制备而得)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(29mg，0.040mmol)，加入碳酸钾(164mg，1.187mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3b(100mg，产率：43.2％)。

MS m/z(ESI)：598.0[M+1]。

第二步

2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇3c

将化合物3b(100mg，0.163mmol)加入到10mL甲醇中，加入钯碳(20mg)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氢气5次，室温反应20小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩得到粗品标题产物3c(68mg，产率：67.8％)。

MS m/z(ESI)：600.0[M+1]。

第三步

将粗品化合物3c(60mg，0.100mmol)加入到5mL三氟乙酸中，室温反应3小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物3(15mg，产率：33.4％)。

MS m/z(ESI)：450.0[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.91(s，1H)，8.62(s，1H)，8.11-8.13(d，1H)，7.80(s，1H)，7.42-7.44(m，1H)，7.23(s，1H)，6.38(br，2H)，3.70-3.72(m，1H)，3.50-3.53(m，1H)，2.87-2.90(m，2H)，2.68-3.72(m，1H)，2.00(s，3H)，1.83-1.93(m，9H)，1.42(s，3H)，1.23-1.27(m，4H)，0.83-0.86(m，3H)。

实施例4

(R)-2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇4

第一步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(1′-甲基-1′，2′，3′，6′-四氢-[2，4′-联吡啶]-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇4b

将化合物2e(284mg，0.515mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入化合物3a(130mg，0.515mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(38mg，0.052mmol)，加入碳酸钾(214mg，1.551mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物4b(102mg，产率：33.1％)。

MS m/z(ESI)：598.0[M+1]。

第二步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇4c

将化合物4b(100mg，0.163mmol)加入到10mL甲醇中，加入钯碳(20mg)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氢气5次，室温反应20小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩得到粗品标题产物4c(85mg，产率：84.7％)。

MS m/z(ESI)：600.0[M+1]。

第三步

将粗品化合物4c(80mg，0.133mmol)加入到5mL三氟乙酸中，室温反应2小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×2)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物4(26mg，产率：43.3％)。

MS m/z(ESI)：450.0[M+1]。

实施例5

2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇5

第一步

2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇5b

将化合物1e(200mg，0.363mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入1-((5-溴吡啶-2-基)甲基)-4-甲基哌嗪5a(108mg，0.401mmol，采用专利申请WO20020026052公开的方法制备而得)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(27mg，0.037mmol)，加入碳酸钾(150mg，1.085mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物5b(121mg，产率：54.2％)。

MS m/z(ESI)：615.1[M+1]。

第二步

将化合物5b(85mg，0.138mmol)加入到5mL三氟乙酸中，室温反应3小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物5(23mg，产率：49.5％)。

MS m/z(ESI)：465.1[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.87-8.88(d，1H)，8.60-8.61(m，1H)，8.14-8.16(d，1H)，7.79-7.80(s，1H)，7.51-7.53(d，1H)，7.20(s，1H)，6.36(br，2H)，5.12-5.15(t，1H)，3.66(s，2H)，3.68-3.70(m，1H)，3.48-2.53(m，1H)，2.32-3.42(m，8H)，2.12(s，3H)，1.90-1.92(m，2H)，1.40(s，3H)，1.22-1.23(m，4H)，0.80-0.84(m，3H)。

实施例6

(R)-2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇6

第一步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇6b

将化合物2e(650mg，1.178mmol)加入到20mL 1，4-二氧六环和4mL水中，加入1-((5-溴吡啶-2-基)甲基)-4-甲基哌嗪5a(318mg，1.170mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(86mg，0.117mmol)，加入碳酸钾(489mg，3.538mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水30ml，用二氯甲烷萃取(30mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(30mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物6b(650mg，产率：89.70％)。

MS m/z(ESI)：615.1[M+I]。

第二步

将化合物6b(650mg，0.138mmol)加入到5mL三氟乙酸中，室温反应3小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到产物6(320mg产率：65.14％)。

MS m/z(ESI)：465.1[M+1]。

实施例7

(R)-2-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇

第一步

5-溴-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶7c

将化合物5-溴-2-(溴甲基)嘧啶7a(200mg，0.794mmol)加入到5mL乙腈中，加入碳酸钾(220mg，1.592mmol)，于0℃加入1-甲基哌嗪7b(120mg，1.198mmol)，升温到室温搅拌反应2小时。反应结束，过滤去不溶物，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物7c(200mg，产率：92.9％)。

MS m/z(ESI)：273.1[M+1]。

第二步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇7d

将化合物2e(163mg，0.296mmol)加入到5mL 1，4-二氧六环和1mL水中，加入7c(81mg，0.299mmol)，加入四三苯基磷钯(35mg，0.030mmol)，加入碳酸钾(82mg，0.593mmol)，置换氩气三次，升温到100℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物7d(127mg，产率：69.8％)。

MS m/z(ESI)：616.3[M+1]。

第三步

(R)-2-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇7

将化合物7d(127mg，0.206mmol)加入到3mL三氟乙酸中，室温反应1小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过高效液相色谱法(Waters-2767，洗脱体系：H₂O(10mmol NH₄OAc)、ACN)纯化，得到产物7(34mg，产率：35.4％)。

MS m/z(ESI)：466.3[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.19(s，2H)，8.66(s，1H)，7.92(s，1H)，7.23(s，1H)，6.40(br，2H)，5.15(br，1H)，3.73(s，2H)，3.70(d，2H)，3.50(d，2H)，2.51(br，3H)，2.29(br，3H)，2.11(s，3H)，1.90-1.88(m，2H)，1.41(s，3H)，1.28-1.20(m，4H)，0.83(t，3H)。

实施例8

(R)-2((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇8

第一步

5-溴-2-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶8c

将化合物5-溴-2-碘嘧啶8a(4g，14.041mmol)加入到200mL 1，4-二氧六环和40mL水中，加入1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶8b(3.45g，15.463mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(1.05g，1.435mmol)，加入碳酸钾(3.89g，28.146mmol)，置换氩气三次，升温到45℃搅拌反应过夜。反应液减压浓缩后，向体系中加入水30ml，用二氯甲烷萃取(60mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(30mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物8c(2.5g，产率：70.1％)。

MS m/z(ESI)：255.9[M+1]。

第二步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基-2-甲基己烷-1-醇8d

将化合物2e(4.15g，7.5252mmol)加入到80mL 1，4-二氧六环和16mL水中，加入8c(1.53g，6.021mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(551mg，0.753mmol)，加入碳酸钾(2.1g，15.195mmol)，置换氩气三次，升温到95℃搅拌反应45分钟。反应液减压浓缩后，向体系中加入水40ml，用二氯甲烷萃取(40mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(40mL)、饱和氯化钠溶液(40mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物8d(3.5g，产率：77.7％)。

MS m/z(ESI)：599.4[M+1]。

第三步

(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基-2-甲基己烷-1-醇8e

将化合物8d(3.5g，5.846mmol)加入到50mL甲醇中，加入钯碳(1g)，置换氢气5次，室温反应48小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物8e(1.7g，产率：48.4％)。

MS m/z(ESI)：601.4[M+1]。

第四步

将粗品化合物8e(1.7g，2.830mmol)加入到20mL三氟乙酸中，室温反应1小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入50mL饱和碳酸钠，用二氯甲烷(50mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过高效液相色谱法(Waters-2767，洗脱体系：H₂O(10mmol NH₄OAc)、ACN)纯化，得到产物8(600mg，产率：47.1％)。

MS m/z(ESI)：451.3[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.16(s，2H)，8.64(s，1H)，7.90(s，1H)，7.22(s，1H)，6.37(br，2H)，5.14-5.12(m，1H)，3.71-3.67(m，1H)，3.51-3.47(m，1H)，2.89-2.72(m，3H)，2.17(s，3H)，2.05-1.72(m，8H)，1.40(s，3H)，1.28-1.19(m，4H)，0.83(t，3H)。

实施例9

2-((2-氨基-7-(6-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己-1-醇9

第一步

4-((5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯9b

将化合物9a(采用专利申请“WO2013103973中说明书第220页的实施例121”公开的方法制备而得)(180mg，0.51mmol)加入到5mL乙二醇二甲醚中，加入联硼酸频那醇酯(193mg，0.76mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(37mg，0.050mmol)，加入乙酸钾(149mg，1.52mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)。合并有机相，有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物9b(203mg，产率：100％)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI)：404.2[M+1]。

第二步

2-((2-氨基-7-溴吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己-1-醇9c

将化合物1d(1.0g，1.98mmol)加入到15mL三氟乙酸中，室温反应1小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过高效液相色谱法(Waters2767洗脱体系：H2O(10mmolNH4OAc)、ACN)纯化，得到产物9c(402mg，产率：58.0％)。

第三步

4-((5-(2-氨基-4-((1-羟基-2-甲基己-2-基)氨基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-7-基)吡啶-2-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯9d

将化合物9c(193mg，0.546mmol)加入到10mL 1，4-二氧六环和2mL水中，加入粗品9b(200mg，0.50mmol)，加入1，1′-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(37mg，0.050mmol)，加入碳酸钾(138mg，1.00mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20ml，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相。有机相分别用水(20mL)、饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物9d(125mg，产率：45.9％)。

MS m/z(ESI)：551.3[M+1]。

第四步

将化合物9d(100mg，0.181mmol)加入到5mL三氟乙酸中，室温反应1小时。反应液减压浓缩，向反应液中加入50mL饱和碳酸钠，用二氯甲烷(50mL×3)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩。残余物通过高效液相色谱法(Waters2767洗脱体系：H2O(10mmol NH4OAc)、ACN)纯化，得到产物9(30mg，产率：36.7％)。

MS m/z(ESI)：451.2[M+1]。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.88(s，1H)，8.60(s，1H)，8.14-8.17(m，1H)，7.79(s，1H)，7.21(s，1H)，6.37(br，3H)，3.67-3.71(m，1H)，3.71-3.67(m，1H)，3.60(s，2H)，3.48-3.50(m，1H)，2.71-2.74(m，3H)，2.30-2.35(m，4H)，1.90-1.92(m，2H)，1.40(s，3H)，1.21-1.24(m，6H)，0.81-0.84(t，3H)

测试例：

生物学评价

测试例1、本发明化合物对人源TLR8和TLR7激动活性的测定

本发明化合物对HEK-Blue^TM hTLR8稳转株细胞表达的hTLR8激活作用采用如下实验方法测定。

一、实验材料及仪器

1.DMEM(Gibco，10564-029)；

2.胎牛血清(GIBCO，10099)；

3.台盼蓝溶液(Sigma，T8154-100ML)；

4.Flexstation 3多功能酶标仪(Molecμlar Devices)；

5.HEK-Blue^TM hTLR8细胞系(InvivoGen，hkb-hTLR8)，或HEK-Blue^TM hTLR7细胞系(InvivoGen，hkb-hTLR7)；

6.HEK-Blue检测试剂(InvivoGen，hb-det3)；

7.磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4(上海源培生物科技股份有限公司，B320)。

二、实验步骤

a.对人源TLR8激动活性的测定

配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50ml去内毒素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6×10⁶nM，然后3倍梯度稀释，共10个点；用培养基先将上述配制好的化合物稀释20倍，然后每孔加入20μl稀释后的化合物。

取HEK-Blue^TM hTLR8细胞，先去掉上清，再加入2-5ml预热的PBS，放入培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬细胞，调整浓度为2.2×10⁵个细胞/ml，加180μl细胞至上述已加入20μl化合物的96孔细胞培养板中，37℃，培养16小时。

酶标仪读数，波长为620nm。可获得相应的OD值，经Graphpad Prism计算得到化合物的EC₅₀值。

b.对人源TLR7激动活性的测定

配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50ml去内毒素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6×10⁶nM，经3倍梯度稀释，共10个点。用培养基先将上述配制好的化合物稀释20倍，然后每孔加入20μl稀释后的化合物。

取HEK-Blue^TM hTLR7细胞，先去掉上清，再加入2-5ml预热的PBS，放入培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬细胞，调整浓度为2.2×10⁵个细胞/ml，加180μl细胞至上述已加入20μl化合物的96孔细胞培养板中，37℃，培养16小时。

本发明化合物对人源TLR8和TLR7激活作用可通过以上的试验进行测定，测得的EC₅₀值见表1。

表1本发明化合物对人源TLR8和TLR7的EC₅₀值

“--”，表示没有测试。

结论：本发明化合物对人源TLR8具有较好的激活作用，对人源TLR7没有激活作用，说明本发明化合物对TLR8具有选择性。

测试例2、本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定。

一、实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液(PBS)；(上海源培生物科技股份有限公司，B320，下同)

2.NADPH(Sigma N-1630)；

3.人肝微粒体(Corning Gentest)；

4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)；

5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)；

6.CYP探针底物(15μM的咪达唑仑，SIGMAUC429)和阳性对照抑制剂(酮康唑，SIGMAK1003)。

二、实验步骤

配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/ml的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的酮康唑工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至15μM浓度的咪达唑仑工作液。

分别取2.5mg/ml的微粒体溶液、15μM的咪达唑仑工作液、MgCl₂溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后取20μl NADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标(100ng/ml喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟，然后3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。

数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC₅₀值见表2。

表2本发明化合物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC₅₀值

结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4的咪达唑仑代谢位点没有抑制作用，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP3A4代谢咪达唑仑代谢位点的代谢性药物相互作用。

测试例3、本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性采用如下实验方法测定。

一、实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液(PBS)；

2.NADPH(Sigma N-1630)；

3.人肝微粒体(Corning Gentest)；

4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)；

5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)；

6.CYP探针底物(20μM的右美沙芬，SIGMA Q0750)和阳性对照抑制剂(奎尼丁，SIGMA D9684)。

二、实验步骤

配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/ml的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的奎尼丁工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至20μM浓度的右美沙芬工作液。

分别取2.5mg/ml的微粒体溶液、20μM的右美沙芬工作液、MgCl₂溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的奎尼丁代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟，5分钟之后取20μl NADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标(100ng/ml喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟。3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。

数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP2D6酶抑制作用的IC₅₀值见表3。

表3本发明化合物对CYP2D6酶抑制作用的IC₅₀值

实施例编号	IC<sub>50</sub>(μM)
		2	＞30
4	＞30
		5	＞30
6	＞30
		8	＞30

结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6的酶活性抑制作用弱，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP2D6发生代谢性药物相互作用。

测试例4、本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4睾酮代谢位点的酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4睾酮代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定。

一、实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液(PBS)；

2.NADPH(Sigma N-1630)；

3.人肝微粒体(Corning Gentest)；

4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)，

5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)，

6.CYP探针底物(睾酮/100μM，SIGMA K1003)和阳性对照抑制剂(酮康唑，Dr.Ehrenstorfer GmbH，C17322500)。

二、实验步骤

配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/ml的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的酮康唑工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至50μM浓度的右美沙芬工作液。

分别取2.5mg/ml的微粒体溶液、50μM的睾酮工作液、MgCl₂溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后取20μl NADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标(100ng/ml喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟。3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。

数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP3A4睾酮代谢位点的IC₅₀值见表4。

表4本发明化合物对CYP3A4睾酮代谢位点的IC₅₀值

实施例编号	IC<sub>50</sub>(μM)
		4	16
5	8.3
		6	＞30
8	＞30

结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4的睾酮代谢位点没有抑制作用，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP3A4的睾酮代谢位点的代谢性药物相互作用。

测试例5、本发明化合物刺激外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL12和IFNγ能力的测定

本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ能力采用如下实验方法测定。

一、实验材料及仪器

1.RMPI 1640(Invitrogen，11875)；

2.FBS(Gibco，10099-141)；

3.Ficoll-Paque PREMIUM(GE，17-5442-02)；

4.台盼蓝溶液(Sigma，T8154-100ML)；

5.SepMateTM-50(Stemcell，15460)；

6.Bright-Line^TM血细胞计数仪(Sigma，Z359629-1EA)；

7.96孔细胞培养板(Corning，3599)；

8.96孔v底板(Corning，3894)；

9.Human IL-12 ELISA试剂盒(欣博盛，EHC152.96)；

10.Human IFNγ试剂盒(cisbio，62HIFNGPEG)；

11.PHERAStar多功能酶标仪(BMG，PHERAStar)。

二、实验步骤

化合物用纯DMSO稀释，最高浓度为5mM，4倍梯度稀释，共9个点。然后取4μl化合物，加入到196μl含10％FBS的RMPI 1640培养基中，混匀。取50μl至96孔细胞培养板。

所有试剂平衡到室温，取250ml培养瓶，将60ml健康人血液和等体积的PBS(含2％FBS)加入其中，轻轻吹打混匀稀释。取50ml PBMC分离管SepMateTM-50，加入15ml淋巴细胞分离液Ficoll-Paque PREMIUM，然后加入30ml上述稀释后血液。室温以1200g离心10分钟。取上清，然后以300g离心8分钟。用含10％FBS的RMPI 1640培养基重悬并计数，调整PBMC数量至3.33×10⁶个细胞/ml，取150μl至上述已加入化合物的细胞培养板中，37℃，5.0％CO₂的培养箱中培养24小时。将细胞培养板放入离心机中，1200rpm，室温离心10分钟，每孔取出150μl上清。

平衡Human IL-12 ELISA检测试剂盒的试剂至常温，根据试剂盒说明书，标准品的最高浓度为2000pg/ml，二倍梯度稀释共8个点。待测样本稀释20倍。然后100ul/孔加入预包被好的板子内。37℃孵育90分钟，洗板；加入抗生素化抗体100ul/孔，37℃孵育60分钟，洗板；加入HRP结合酶100ul/孔，37℃孵育30分钟，洗板；加入TMB，室温孵育5分钟。最后加入终止液终止反应，酶标仪读取450nm处的吸光值。

平衡Human IFNγ检测试剂盒的试剂至常温，在避光条件下根据试剂盒说明书，配制标准品及检测抗体。每孔加入16μl的离心获得的上清液，再每孔加入4ul现配的混合检测抗体，震荡混匀，室温避光孵育过夜，使用PHERAStar多功能酶标仪程序读数

将能刺激PBMC产生比未加化合物组平均值高3倍SD(未加化合物组的SD)所对应化合物浓度，定义为该化合物的最低有效浓度(MEC，Minimal Effective Concentration)值。

本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的能力通过以上的试验进行测定，测得的MEC值见表5。

表5本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的MEC

实施例编号	IL12 MEC(nM)	IFNγMEC(nM)
			2	23	24
3	15	27
			4	31	33
6	41	--
			8	5	--
9	24	94

“--”，表示没有测试。

结论：从刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的活性的数据上看，本发明化合物具有起效浓度较低的优势。

测试例6 Patchliner检测化合物对hERG钾离子通道的抑制作用

1、实验目的

应用全自动膜片钳在转染hERG钾通道的稳定细胞株上测试本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用。

2、实验方法

2.1实验材料与仪器

2.1.1实验材料：

试剂名称	供货公司	货号
			FBS	GIBCO	10099
丙酮酸钠溶液	sigma	S8636-100ML
			MEM非必需氨基酸溶液(100×)	sigma	M7145-100ML
G418硫酸盐	Enzo	ALX-380-013-G005
			MEM	Hyclone	SH30024.01B
hERG cDNA	Origene	-
			G418.Sulfate	Enzo	ALX-380-013-G005
pcDNA3.1(+)	invitrogen	V79020
			HEK293人胚肾细胞	中科院细胞库	货号GNHu18

2.1.2实验仪器：

2.2全自动膜片钳实验步骤

通过将已经构建了hERG基因的pCDNA3.1(+)转染HEK293细胞系，然后通过加入G418筛选出单克隆HEK293-hERG稳定细胞株。HEK293-hERG稳定细胞株按照1∶4的密度在MEM/EBSS培养基(10％FBS，400μg/ml G418，1％MEM非必需氨基酸溶液(100×)，1％丙酮酸钠溶液)中进行传代培养，培养48-72小时之内进行全自动膜片钳实验。实验当天将细胞用0.25％胰酶(life technologies，12563-029)消化后，离心收集细胞，用细胞外液(140mMNaCl，4mM KCl，1mM MgCl₂，2mM CaCl₂，5mMD一水葡萄糖，10mM HEPES，pH7.4，298mOsmol)重悬细胞制成细胞悬液。将细胞悬液放置在Patchliner仪器的细胞库上，Patchliner仪器利用负压控制器将细胞加到芯片(NPC-16)上，负压将单个细胞吸引在芯片的小孔上。当形成全细胞模式后，仪器将按照设定的hERG电流电压程序得到hERG电流，然后仪器自动的由低浓度到高浓度，进行化合物灌流。通过HEAK EPC10膜片钳放大器(Nanion)和Pathlinersoftware以及Pathcontrol HTsoftware提供的数据分析软件，对化合物各浓度下的电流以及空白对照电流进行分析。

2.3测试结果

本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值见表6。

表6本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用的IC₅₀

实施例编号	IC<sub>50</sub>(μM)
		2	7
4	14
		5	17
6	26
		8	＞30

结论：本发明化合物对hERG的抑制作用弱，可降低由hERG通路引起的副作用。

Claims

1.一种通式(I)所示的化合物：

或其外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，

其中：

G¹为N；

G²为CR⁵；

G³为CR⁵或N；

L¹为-(CH₂)_n-或共价键；

n为1；

R¹为C_1-12烷基，其中所述的C_1-12烷基任选被一个或多个羟基取代；

R²和R³相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和C_1-6烷基；

R⁴为4至6元的杂环基，其中所述的4至6元杂环基含有1至2个相同或不同选自N、O和S的杂原子，并且所述的4至6元的杂环基任选被一个或多个C_1-6烷基取代；

R⁵选自氢原子、卤素和C_1-6烷基。

2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(Ia)所示的化合物：

其中：

G¹、G³、L¹和R¹～R⁴如权利要求1中所定义。

3.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：

其中：

G¹、L¹和R¹～R⁴如权利要求1中所定义。

4.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)所示的化合物：

其中：

G¹、L¹、R¹和R⁴如权利要求1中所定义。

5.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(IV)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶为氢原子或C_1-6烷基；

s为0或1；

G¹、L¹和R¹如权利要求1中所定义。

6.根据权利要求5所述的通式(I)所示的化合物，其中R⁶为C_1-6烷基。

7.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(V)所示的化合物：

其中：

W¹为CH且W²为NR⁶；或者

W¹为N且W²为CH₂或NR⁶；

R⁶为氢原子或C_1-6烷基；

s为0或1；

G¹和L¹如权利要求1中所定义。

8.根据权利要求7所述的通式(I)所示的化合物，其中R⁶为C_1-6烷基。

9.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

或其外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。

10.一种通式(IB)所示的化合物：

其中：

R^a为氨基保护基；

G¹为N；

G²为CR⁵；

G³为CR⁵或N；

L¹为-(CH₂)_n-或共价键；

n为1；

R⁶为4至6元的杂环基，其中所述的4至6元杂环基含有1至2个相同或不同选自N、O和S的杂原子，并且所述的4至6元的杂环基任选被一个或多个C_1-6烷基或叔丁氧羰基取代；

R⁵选自氢原子、卤素和C_1-6烷基。

11.根据权利要求10所述的通式(IB)所示的化合物，其为通式(IA)所示的化合物：

其中：

R^a为氨基保护基；

G¹为N；

G²为CR⁵；

G³为CR⁵或N；

L¹为-(CH₂)_n-或共价键；

n为1；

R⁵选自氢原子、卤素和C_1-6烷基。

12.根据权利要求10或11所述的通式(IB)所示的化合物，其中R^a为2,4-二甲氧苄基。

13.化合物，其选自：

14.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IB)化合物脱保护，得到通式(I)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基；

G¹为N；

G²为CR⁵；

G³为CR⁵或N；

L¹为-(CH₂)_n-或共价键；

n为1；

R⁵选自氢原子、卤素和C_1-6烷基。

15.根据权利要求14所述的方法，其中R^a为2,4-二甲氧苄基。

16.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括以下步骤：

将通式(IA)化合物脱保护，得到通式(I)化合物；

其中：

R^a为氨基保护基；

G¹～G³、L¹和R¹～R⁴如权利要求1中所定义。

17.根据权利要求16所述的方法，其中R^a为2,4-二甲氧苄基。

18.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至9中任一项所述的通式(I)所示的化合物，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

19.根据权利要求1至9中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求18所述的药物组合物在制备用于激动TLR8的药物中的用途。

20.根据权利要求1至9中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求18所述的药物组合物在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途。

21.根据权利要求20所述的用途，所述病毒选自乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒和艾滋病毒。

22.根据权利要求1至9中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求18所述的药物组合物在制备用于调节免疫系统的药物中的用途。

23.根据权利要求1至9中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求18所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。

24.根据权利要求23所述的用途，其中所述的肿瘤选自癌症。

25.根据权利要求24所述的用途，其中所述的癌症选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。