CN111032067A

CN111032067A - 用于治疗脂肪肝病的刺地榆提取物

Info

Publication number: CN111032067A
Application number: CN201880055929.0A
Authority: CN
Inventors: T·罗森茨威格; K·罗森贝格
Original assignee: Ariel Scientific Innovations Ltd
Current assignee: Ariel Scientific Innovations Ltd
Priority date: 2017-08-31
Filing date: 2018-08-28
Publication date: 2020-04-17
Also published as: EP3675888A4; US20200197471A1; WO2019043700A1; EP3675888A1; RU2020110253A

Abstract

本发明提供了用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险的刺地榆(S.spinosum)提取物、包含所述提取物的组合物和使用它们的方法。

Description

用于治疗脂肪肝病的刺地榆提取物

技术领域

本发明涉及用于治疗脂肪肝病的方法。

背景技术

脂肪肝病(FLD)的特征在于脂质在肝细胞中蓄积。蓄积的脂质会造成细胞损伤，使肝脏对进一步的损伤敏感并且还可能损害肝微血管循环。许多因素可能导致FLD，包括过量饮酒(AFLD)和代谢紊乱，如与胰岛素抵抗、肥胖和高血压相关的那些。AFLD是非常普遍的并且是全世界范围内20种主要死亡原因之一。在美国，发病率可能超过200万例。非酒精性脂肪肝病(NAFLD)也是一种极为常见的病症，影响了多达1/3的美国人口。广泛的疾病和病症可能增加NAFLD的风险，包括：高胆固醇、高血液甘油三酯水平、肥胖、多囊卵巢综合征、睡眠呼吸暂停、2型糖尿病、甲状腺功能减退和垂体功能减退以及心血管疾病。NAFLD被包括在代谢综合征中，所述代谢综合征可能表现为糖尿病或糖尿病前期(胰岛素抵抗)、超重或肥胖、诸如胆固醇和甘油三酯的血脂升高以及高血压。

AFLD和NAFLD具有相似的发病机制和组织学。这些疾病在肝活检时无法区分，并且这两种病变之间的区别是基于酒精摄入量(Bedogni等,2005)。

FLD的特征在于肝内甘油三酯含量过量。在FLD的广泛诊断下包括轻度形式，即脂肪肝，其仅在组织学上表现为脂肪变性(脂质在细胞内异常滞留)。

脂肪肝可能会进展为更严重的形式，即脂肪性肝炎(在NAFLD的情况下是非酒精性脂肪性肝炎(NASH))，其特征在于另外存在肝叶炎症、肝细胞气球样变性和纤维化。肝纤维化可能导致肝硬化，这涉及肝衰竭和肝细胞癌的风险。在AFLD和NAFLD这两者中可能导致脂肪性肝炎发展的因素包括：氧化应激(导致肝细胞损伤的促氧化化学物质与抗氧化化学物质之间的不平衡)；患者自身的炎性细胞、肝细胞或脂肪细胞产生和释放毒性炎性蛋白(例如细胞因子)；肝细胞坏死或被称为细胞凋亡的死亡；脂肪组织炎症和白细胞浸润；和可能在肝脏炎症中起作用的肠道微生物群(肠道细菌)。影响AFLD或NAFLD的因素分别具体包括酒精代谢和胰岛素抵抗。AFLD和NAFLD这两者的特征均在于肝脂质代谢的改变(Livero和Acco2016)。

然而，虽然AFLD和NAFLD代表了慢性肝病的相当常见的病因，但是目前尚无针对这些疾病和它们的进行性形式脂肪性肝炎的特定疗法。生活方式的改变是管理的基石(在AFLD和NAFLD中分别是限制饮酒量和减轻体重)。此外，几种药物被建议用于治疗代谢综合征(与NAFLD相关)的各种临床症状，如针对胰岛素抵抗的二甲双胍(metformin)、针对高血压的替米沙坦(telmisartan)并且他汀类(statin)药物可以适用于高脂血症，并且减肥手术被鼓励用于保守管理无法改善的高风险患者。然而，目前尚无特定治疗可用于治疗这种肝脏病症。类似地，没有针对AFLD治疗的药理策略。因此，非常需要针对AFLD和NAFLD这两者的新的安全且有效的疗法。预计除非开发出针对NAFLD的有效疗法，否则在10年-20年内NASH在美国将成为肝脏移植的主要适应症。

刺地榆(Sarcopoterium spinosum，S.spinosum)是蔷薇科的地上芽植物。它的分枝是木质的，以分枝刺为末端并且长到30cm-40cm的长度。在夏季，分枝末端处的绿色冬叶长成刺并且被细小的叶片代替。刺地榆由于它的抗糖尿病作用而已经被用于民间医学中(Smirin等,2010,Journal of Ethnopharmacology 129(1):10-17；Rosenzweig等,2007,Israel Journal of Plant Sciences,55(1):103-109)。WO 2010/143140公开了通过施用来自刺地榆的提取物来治疗或预防糖尿病。

发明内容

在一个方面，本发明提供了一种刺地榆(S.spinosum)提取物，其用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含根据本发明的刺地榆的提取物，以用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

在另一个方面，本发明提供了一种营养药物组合物，其包含根据本发明的刺地榆的提取物，以用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

在另一个方面，本发明提供了一种用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险的方法，所述方法包括向所述受试者施用刺地榆的提取物。

附图说明

图1A-1C示出了使用刺地榆进行抢先处理改善了高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的葡萄糖耐量。向C57BL/J小鼠喂食标准饮食(STD，圆形)或HFD，其中在它们的饮用水中给予(A中的三角形或B中的空心正方形)或不给予(实心正方形)刺地榆提取物(根据预防方案)。(A)每周测量体重。(B)如材料和方法中所述，在15周大时进行葡萄糖耐量测试(GTT)。(C)在17周大时测量空腹血清胰岛素水平。结果被示为平均值±SE，通过学生t检验(student′st-test)，与HFD喂养的小鼠相比，*p＜0.05，**p＜0.005，***p＜0.0005。

图2A-2B示出了使用刺地榆进行抢先处理增强了HFD喂养的小鼠的肝脏中的胰岛素信号传导。向C57BL/J小鼠模型喂食STD、HFD或HFD+刺地榆(根据预防方案)，在17周大时取出肝脏。(A)使用特异性抗体对肝脏裂解物进行蛋白质印迹分析。这些是三次独立实验的代表性结果。(B)中的条形图是A中蛋白质印迹的光密度测量的结果。每一个条柱代表从4只小鼠获得的数据的平均值±SE。空心条柱(左侧)：STD，灰色条柱(中间)：HFD，黑色条柱(右侧)：HFD+刺地榆。在学生t检验中，*p<0.05和**p<0.005。在学生t检验中，*p<0.05和***p<0.0005。

图3A-3D示出了使用刺地榆提取物进行抢先处理对HFD喂养的小鼠的肝糖原和脂质含量的影响。向C57BL/6J小鼠喂食STD或HFD，其中在它们的饮用水中给予或不给予刺地榆提取物(根据预防方案)。在17周大时将小鼠处死并且测量肝糖原(A)、甘油三酯(B)和总胆固醇(C)水平。结果被示为平均值±SE(n≥5只小鼠)。通过学生t检验，与HFD喂养的小鼠相比，*p<0.05，**p<0.005。(D)喂食STD或HFD并且用刺地榆提取物处理的小鼠的肝脏的H&E染色。箭头指向代表性的大泡性脂肪变性(在HFD喂养的小鼠中)和小泡性脂肪变性(在HFD+刺地榆组中)。

图4A-4D示出了使用刺地榆提取物进行抢先处理增加了葡萄糖激酶(GCK)的肝脏mRNA表达。向C57BL/J小鼠喂食STD、HFD或HFD+刺地榆(根据预防方案)，在17周大时取出肝脏。通过实时PCR测量(A)葡萄糖-6磷酸酶(G6Pase)、(B)磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、(C)GCK和(D)葡萄糖转运蛋白(GLUT)-2的mRNA表达。将结果相对于看家基因，即次黄嘌呤-丙酮酸次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)的表达归一化。通过学生t检验，***P<0.0005。

图5A-5G示出了使用刺地榆提取物进行抢先处理逆转了参与由HFD诱导的脂质代谢的基因的mRNA表达的改变。如方法中所述，向C57BL/J小鼠喂食STD、HFD或HFD+刺地榆(根据预防方案)，在17周大时取出肝脏。通过实时PCR测量所示基因(PPARα(A)、PPARγ(B)、ACC1(C)、SREBP-1c(D)、SREBP2(E)、FAS(F)和HSL(G))的mRNA表达。将结果相对于看家基因HPRT的表达归一化。通过学生t检验，***P<0.0005。

图6A-6B示出了使用刺地榆提取物进行抢先处理增加了AdipoR2的肝脏mRNA表达。向C57BL/J小鼠喂食STD、HFD或HFD+刺地榆(根据预防方案)，在17周大时取出肝脏。通过实时PCR测量脂联素受体AdipoR1(A)和AdipoR2(B)的mRNA表达。将结果相对于看家基因HPRT的表达归一化。通过学生t检验，***P<0.0005。

图7A-7E示出了使用刺地榆进行处理改善了高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的葡萄糖耐量。在给予或不给予刺地榆干燥提取物的情况下向C57BL/J小鼠喂食标准饮食(STD)或HFD(根据治疗方案)。(A)每周测量体重。(B)如材料和方法中所述，在15周大时进行葡萄糖耐量测试(GTT)。(C和D)如材料和方法中所述，在16周大时进行胰岛素耐量测试。结果被示为绝对值(C)或相对值(D)。(E)在17周大时测量空腹血清胰岛素水平。结果被示为平均值±SE，通过学生t检验，与HFD喂养的小鼠相比，*p<0.05，**p<0.005，***p<0.0005。STD：实心圆形；HFD：实心正方形；HFD+刺地榆提取物(SSE)30毫克/天：X；60毫克/天：空心圆形；90毫克/天：空心菱形。

图8A-8D示出了使用刺地榆提取物进行处理对HFD喂养的小鼠的肝脏脂质含量的影响。在给予或不给予刺地榆干燥提取物的情况下向C57BL/6J小鼠喂食STD或HFD(根据治疗方案)。在17周大时将小鼠处死并且测量肝脏甘油三酯(A)和总胆固醇(B)水平。结果被示为平均值±SE。通过学生t检验，与HFD喂养的小鼠相比，*p<0.05，**p<0.005。(C)如材料和方法中所述，通过独立的病理学家评价NAFLD的严重程度。(D)喂食STD或HFD并且通过所示剂量的SSE处理的小鼠的肝脏的H&E染色。箭头指向代表性的脂肪变性肝细胞。

图9A-9D示出了使用刺地榆进行处理不影响西方饮食(WD)喂养的小鼠的葡萄糖耐量。在给予或不给予刺地榆干燥提取物的情况下向C57BL/J小鼠喂食标准饮食(STD)或WD(根据治疗方案)。(A)每周测量体重。(B)如材料和方法中所述，在18周大时进行葡萄糖耐量测试(GTT)。(C)如材料和方法中所述，在19周大时进行胰岛素耐量测试。(D)在20周大时测量空腹血清胰岛素水平。结果被示为平均值±SE，通过学生t检验，与WD喂养的小鼠相比，*p<0.05，**p<0.005，***p<0.0005。STD：实心圆形；WD：实心正方形；WD+刺地榆提取物(SSE)30毫克/天：X；60毫克/天：空心圆形；90毫克/天：空心菱形。

图10A-10D示出了使用刺地榆提取物进行处理对WD喂养的小鼠的肝脏脂质含量的影响。在给予或不给予刺地榆干燥提取物的情况下向C57BL/6J小鼠喂食STD或WD(根据治疗方案)。在20周大时将小鼠处死并且测量肝脏甘油三酯(A)和总胆固醇水平(B)。结果被示为平均值±SE。通过学生t检验，与WD喂养的小鼠相比，*p<0.05，**p<0.005。(C)喂食STD或WD并且用所示剂量的SSE处理的小鼠的肝脏的H&E染色。箭头指向代表性的脂肪变性肝细胞，圆圈标出炎症病灶。(D)如材料和方法中所述，通过独立的病理学家评价NAFLD的严重程度。

图11示出了使用刺地榆提取物进行处理降低了WD喂养的小鼠的血清ALT。在给予或不给予刺地榆干燥提取物的情况下向C57BL/6J小鼠喂食STD或WD(根据治疗方案)。在20周大时将小鼠处死并且如材料和方法中所述，测量血清ALT。结果被示为平均值±SE，通过学生t检验，与WD喂养的小鼠相比，*p<0.05。

具体实施方式

本发明是基于以下发现，即刺地榆的提取物(刺地榆提取物或SSE)减少了喂食高脂饮食(HFD，图3D和图8D)或西方饮食(WD，图10C)的小鼠的脂肪变性。如图2B中所示，使用刺地榆提取物进行预防性处理改善了肝脏中的信号传导，并且还引起由于HFD而降低的脂质代谢基因的表达增加(实施例5)。与WD喂养的小鼠相比，使用本发明的刺地榆提取物处理HFD或WD喂养的小鼠引起肝脏甘油三酯减少(图8A：HFD和图10A：WD)，NAFLD的评分更低(图10D)以及肝酶减少(图11)。值得注意的是，虽然使用SSE进行处理改善了HFD喂养的小鼠的葡萄糖耐量(图1和图7)，但是它似乎并不影响WD喂养的小鼠(图9B)。还应当注意的是(参见实施例11)，WD喂养的小鼠模型类似于人类的代谢综合征，并且与HFD喂养的小鼠相比，表现出更低的空腹葡萄糖水平和葡萄糖负荷后的葡萄糖水平。因此，本申请的发明人已经在与糖尿病无关的模型中证实了刺地榆提取物对肝功能的作用。

因此，在一个方面，本发明提供了一种刺地榆(S.spinosum)提取物，其用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

与疾病、病症和症状有关的实施方案：

脂肪肝病(FLD)是其中脂肪在肝脏中蓄积的病症。存在两种主要类型的FLD，它们是由过量饮酒所引起的酒精性FLD(AFLD)和与代谢紊乱相关的非酒精性FLD(NAFLD)。FLD的轻度形式，即脂肪肝在组织学上表现为脂质在细胞内的异常滞留，这被称作脂肪变性。脂肪肝的轻度形式可能进展为更严重的形式，其被称作脂肪性肝炎(对于非酒精性病例，是NASH)，特征在于另外存在肝叶炎症、肝细胞气球样变和纤维化。肝纤维化可能导致肝硬化，这涉及肝衰竭和肝细胞癌的风险。

因此，在某些实施方案中，所述刺地榆提取物用于预防或治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。在某些实施方案中，所述刺地榆提取物用于预防或治疗酒精性脂肪肝病(AFLD)。

在某些实施方案中，所述刺地榆提取物用于预防或治疗脂肪性肝炎。在某些实施方案中，所述刺地榆提取物用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在某些实施方案中，所述刺地榆提取物用于预防或治疗酒精性脂肪性肝炎。

广泛的疾病和病症可能增加NAFLD的风险，包括：高胆固醇、高血液甘油三酯水平、肥胖、高血压、多囊卵巢综合征、睡眠呼吸暂停、2型糖尿病、甲状腺功能减退和垂体功能减退、心血管疾病、代谢综合征。

因此，当脂肪肝病与相关病症一起出现时，所述刺地榆提取物可以用于预防或治疗脂肪肝病，所述相关病症选自但不限于高胆固醇、高血液甘油三酯水平、代谢综合征、肥胖、高血压、多囊卵巢综合征、睡眠呼吸暂停、甲状腺功能减退、垂体功能减退、载脂蛋白E缺乏症和心血管疾病。

此外，所述刺地榆提取物可以用于预防或治疗NAFLD，所述NAFLD是由代谢紊乱，例如半乳糖血症、糖原贮积病、高胱氨酸尿症和酪氨酸血症而引起，以及由饮食状况，如营养不良、全胃肠外营养、饥饿和营养过剩而引起，或在暴露于某些药物，如胺碘酮(amiodarone)、抗病毒药(如核苷类似物)、阿司匹林(aspirin)、非类固醇抗炎药(NSAID)、雌激素、皮质类固醇、甲氨蝶呤(methotrexate)、他莫昔芬(tamoxifen)或四环素(tetracycline)之后而引起。

根据本发明，所述刺地榆提取物还可以用于预防或治疗与酒精相关性脂肪肝或非酒精性脂肪肝相关的病症，如伴有肝纤维化的酒精性或非酒精性肝炎、伴有肝硬化的酒精性或非酒精性脂肪性肝炎或伴有肝硬化和肝细胞癌的酒精性或非酒精性脂肪性肝炎。

应当了解的是，尽管脂肪肝病可能与糖尿病相关，但是患有NAFLD的受试者不一定患有糖尿病。因此，在一些实施方案中，所述受试者没有糖尿病。在一些实施方案中，所述受试者不是糖尿病患者或糖尿病前期患者。

患有糖尿病或是糖尿病患者在本文中被定义为具有血红蛋白A1C>6％或血糖水平≥125mg/dL。术语“糖尿病患者”包括患有I型糖尿病或II型糖尿病的个体。术语“糖尿病前期患者”包括具有100mg/dL至125mg/dL的血糖水平的个体。

在一些实施方案中，使用刺地榆提取物治疗脂肪肝病涉及减轻其至少一种症状，所述症状选自：肝内甘油三酯含量、肝叶炎症、肝细胞气球样变、肝纤维化、肝脂肪变性和肝硬化。

与所述提取物的来源、形式和施用有关的实施方案：

刺地榆的提取物可以从完整植物以及植物的各个部分制备。在传统上，已经使用植物的根来制备所述提取物。

在某些实施方案中，刺地榆提取物是来自植物的根的提取物。在某些其它实施方案中，刺地榆提取物是植物的果实和/或叶片的提取物。在一些实施方案中，刺地榆提取物是完整植物提取物。

在一些实施方案中，刺地榆提取物被配制用于以液体形式，优选地在水中施用。在某些实施方案中，刺地榆提取物被配制成干燥形式，例如粉剂、片剂或胶囊。

在一些实施方案中，所述提取物是通过将所期望的植物部分，例如根在水或另一种合适的溶剂中煮沸，过滤，并且任选地冻干以得到干燥提取物而获得的。在一些实施方案中，所述提取物是通过将刺地榆根在水中煮沸，过滤并且任选地冻干以得到干燥提取物而获得的。

在某些实施方案中，所述刺地榆提取物适用于口服施用。

本发明的提取物可以通过制备茶、浸液、煎煮、渗滤或通过从植物中提取化学物质的类似方法来制备。所述提取可以在水中或在另一种适当的溶剂中进行。

在另一个方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含如上文所定义的刺地榆的提取物，以用于预防、治疗如上文所述的脂肪肝病和/或降低患如上文所述的脂肪肝病的风险。

可以使用药学上可接受的载体或赋形剂配制所述药物组合物。在某些其它实施方案中，所述组合物被配制成草药组合物，如草药组合物粉末。

根据本发明使用的药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂以常规的方式配制。一种或多种载体必须在与组合物的其它成分相容并且对其接受者无害的意义上是“可接受的”。

载体、施用方式、剂型等的以下举例说明被列为已知的可能性，可以从中选择载体、施用方式、剂型等以用于本发明。然而，本领域的普通技术人员将了解的是，所选择的任何给定的制剂和施用方式应当首先被测试以确定它实现所期望的结果。

用于口服施用的药物制剂可以呈液体形式，例如溶液、糖浆或悬浮液，或可以作为用于在使用之前用水或其它合适的媒介物复原的药物产品存在。这样的液体制剂可以通过常规手段用药学上可接受的添加剂制备，如助悬剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水媒介物(例如杏仁油、油酯或分馏植物油)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。药物组合物可以采用例如片剂或胶囊的形式，所述形式是通过常规手段用药学上可接受的赋形剂制备的，如粘合剂(例如预胶凝化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。所述片剂可以通过本领域公知的方法包衣。

营养药物是天然的具有生物活性的化学物质或提取物，其提供许多生理益处，尤其包括疾病预防和健康促进。

因此，在又一个方面，本发明涉及一种营养药物组合物，其包含如上文所定义的刺地榆的提取物，以用于预防、治疗如上文所述的脂肪肝病和/或降低患如上文所述的脂肪肝病的风险。

在某些实施方案中，所述组合物是营养药物组合物，其可以包含其它营养或膳食补充剂，如维生素，和/或一种或多种赋形剂，所述赋形剂可以是药学上可接受的或营养药物载体、稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物，如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、加香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分配剂，这取决于施用方式和剂型的性质。每一种载体必须在与制剂的其它成分相容并且对患者无害的意义上是可接受的。在某些实施方案中，所述组合物被配制成口服制剂，所述口服制剂可以是液体或固体，例如呈片剂、糖锭、胶囊、糖浆等形式。

在一些实施方案中，本发明的药物组合物或营养药物组合物用于预防或治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。在某些实施方案中，本发明的药物组合物或营养药物组合物用于预防或治疗酒精性脂肪肝病(AFLD)。在某些实施方案中，本发明的药物组合物或营养药物组合物用于预防或治疗脂肪性肝炎。在某些实施方案中，本发明的药物组合物或营养药物组合物用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在某些实施方案中，本发明的药物组合物或营养药物组合物用于预防或治疗酒精性脂肪性肝炎。在一些实施方案中，所述提取物是来自刺地榆的根的提取物。在一些实施方案中，所述提取物呈液体形式。在一些实施方案中，所述提取物呈干燥形式，如粉剂、片剂或胶囊。

根据另一个方面，本发明提供了一种用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险的方法，所述方法包括向所述受试者施用如上文所述的根据本发明的刺地榆的提取物。

待用于人类使用的活性成分的剂量的确定是基于本领域的常用惯例，并且最终将由医师在临床试验中确定。用于向人类施用的预期近似等效剂量可以基于本文以下所公开的体内实验证据，使用已知的公式来计算(例如Reagan-Show等(2007)Dose translationfrom animal to human studies revisited(重新审视从动物研究到人类研究的剂量转换),The FASEB Journal22:659-661)。根据该范例，成人等效剂量(每公斤体重的毫克数)等于给予小鼠的剂量(每公斤体重的毫克数)乘以0.081。

关于待向人类施用的干燥刺地榆提取物的日剂量，基于本申请中公开的小鼠实验(每只小鼠每天30mg、60mg或90mg)，在某些实施方案中，所述日剂量可以在约2.5g至约25g的剂量之间变化，并且在其它实施方案中，可以在约4g至约15g之间的剂量之间变化。可选地，每公斤人类受试者的干燥刺地榆提取物的日剂量是约40mg/kg至约400mg/kg或约70mg/kg至约250mg/kg。根据需要，刺地榆提取物的日剂量可以每日施用一次或多次。

术语“载体”指的是与活性剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。药物组合物中的载体可以包括粘合剂，如微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(聚烯吡酮(polyvidone)或聚维酮(povidone))、黄蓍胶、明胶、淀粉、乳糖或一水合乳糖；崩解剂，如藻酸、玉米淀粉等；润滑剂或表面活性剂，如硬脂酸镁或十二烷基硫酸钠；和助流剂，如胶态二氧化硅。

如本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”指的是获得所期望的生理作用的手段。就部分或完全治愈疾病和/或归因于所述疾病的症状而言，所述作用可以是治疗性的。所述术语指的是抑制疾病，即阻止它的发展；或改善疾病，即引起疾病消退。该术语还包括逆转或减慢疾病活动性的进展或疾病的医学后果。

如本文所用的术语“预防”涉及中止、推迟、延迟或完全消除某种病症、疾病或疾患的出现或与某种病症、疾病或疾患相关的症状的出现。此外，术语“预防(preventing)”和“预防(prevention)”指的是预防性使用以降低这些术语所适用的疾病、病症或疾患或这样的疾病、病症或疾患的一种或多种症状的可能性。没有必要实现100％的预防可能性；至少实现降低罹患这样的疾病、病症或疾患的风险的部分作用足矣。

如本文所用的术语“约”意指还意图包括比所示值大或小10％的值。

应当了解的是，即使未明确指示，涉及提取物的第一方面的所有实施方案也适用于与药物组合物或营养药物组合物和方法有关的方面。这些实施方案至少包括与疾病、病症和症状有关的实施方案和与提取物的来源、形式和施用有关的实施方案。

现在将通过以下非限制性实施例来说明本发明。

实施例

方法

刺地榆提取物的制备

将100g新鲜的刺地榆根切成小块并且在1L水中煮沸30分钟。将溶液静置3小时并且在不干扰沉淀物的情况下将红色上清液过滤到无菌瓶中并且保持在4℃。在所示的实验中，将提取物通过冻干来干燥，得到7克/升的产率。

研究设计

肝脂肪变性的预防方案：

所述研究是根据国家卫生研究院(National Institutes of Health)的实验室动物护理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)中的建议进行的。基于美国NIH实验室动物护理和使用指南(US NIH Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals)，艾瑞尔大学(Ariel University)的动物房遵照以色列动物研究委员会(Israel Council for Research in Animals)的规则和指南操作。将小鼠饲养在具有20℃-24℃、45％-65％湿度和12小时光/暗周期的受控环境的动物实验室中。根据需要通过氯胺酮+甲苯噻嗪使动物麻醉，并且尽一切努力使痛苦减到最低限度。

使用高脂饮食喂养的C57bl/6小鼠(HFD，总卡路里的60％源自于脂肪酸，18.4％源自于蛋白质并且21.3％源自于碳水化合物，Envigo公司，Teklad TD.06414)对饮食诱发的葡萄糖耐受不良模型进行研究。C57Bl/6J小鼠购自Envigo公司(以色列)。将6周大的雄性C57bl/6小鼠如下分为3个处理组，每组8只-10只小鼠：喂食标准(STD)饮食(总卡路里的18％源自于脂肪，24％源自于蛋白质并且58％源自于碳水化合物，Harlan公司，TekladTD.2018)或HFD的对照小鼠，和补充刺地榆提取物(SSE)的HFD喂养的小鼠。从6周大开始，每天在饮用水中施用SSE(30mg/天的干燥材料)。每周测量一次体重。在17周大时，使用氯胺酮+甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且通过终末采血，继而颈椎脱位来安乐死。

从心脏收集血液并且制备血清。使用市售的ELISA试剂盒(瑞典的Mercodia公司(Mercodia,Sweden))，通过免疫测定来测量血清胰岛素。对肝脏进行灌注并且将肝脏和比目鱼肌分离。为了追踪肝脏和骨骼肌中胰岛素诱导的蛋白质磷酸化，在一些小鼠(n＝5)中，在杀死动物前15分钟注射胰岛素(每克体重0.75mU)。将肝脏和肌肉在液氮中速冻，并且保存在-80℃以用于后续的蛋白质和RNA提取。将肝脏部分保存在4％多聚甲醛中以用于组织学分析。

肝脂肪变性的治疗方案：

使用高脂饮食喂养的C57bl/6小鼠，使用与上述相同的饮食诱发的葡萄糖耐受不良模型进行研究。对于这些实验，向6周大的雄性小鼠给予STD或HFD。在10周大时，将HFD喂养的小鼠如下分为处理组，每组8只-10只小鼠：HFD喂养的小鼠和补充3种不同剂量(30毫克/天、60毫克/天和90毫克/天)的刺地榆提取物(SSE)的HFD喂养的小鼠。虽然饮食方案早在6周大时就给予，但是在10周大时将SSE补充到饮食中。每周测量一次体重。在17周大时，使用氯胺酮+甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且通过终末采血，继而颈椎脱位来安乐死。从心脏收集血液并且制备血清。使用市售的ELISA试剂盒(瑞典的Mercodia公司)，通过免疫测定来测量血清胰岛素。将肝脏在液氮中速冻，并且保存在-80℃以用于后续的脂质提取。将肝脏部分保存在4％多聚甲醛中以用于组织学分析。

NASH模型

食用果糖是NAFLD从脂肪变性的第1阶段向脂肪性肝炎(NASH)的第2阶段进展所必需的。NASH的特征在于肝细胞脂肪变性伴有另外的病理特征，如肝脏炎症和代表肝纤维化开始的肝窦胶原形成。在此阶段时肝功能下降，如可以通过测量血浆中的肝酶所评价。在饮用水(随意)中摄取果糖的西方饮食喂养的C57bl/6小鼠被验证为NASH模型。

通过向小鼠喂食西方饮食(WD)而产生所述模型，所述西方饮食含有42％的脂肪、42.7％的碳水化合物和15.2％的蛋白质。将42g/L浓度的果糖添加到饮用水中。将小鼠随机分为喂食STD(1组)或喂食WD(4组)4周(从6周大直到10周大为止)。在喂食STD或WD饮食4周之后，分别向第3组、第4组和第5组给予30mg/天、60mg/天或90mg/天的干燥刺地榆提取物，再持续8周。每周测量一次体重。在20周大时将小鼠处死：通过氯胺酮/甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且进行终末采血。对肝脏进行灌注并且保存用于后续的组织学和生化分析。制备血清并且将其保存在-80℃以用于随后分析脂质、细胞因子和肝酶。

葡萄糖耐量测试(GTT)

在C57bl/6小鼠中在15周大时进行腹膜内葡萄糖耐量测试(GTT)。在6小时禁食之后向小鼠注射每克体重1.5mg葡萄糖。使用ACCU-CHEK Go血糖仪(德国的罗氏公司(Roche,Germany))从尾巴血中测定血糖。

胰岛素耐量测试(ITT)

在15周大时，在6小时禁食后进行胰岛素耐量测试(ITT)。在腹膜内胰岛素注射(0.5U/kg)后测量血糖。

通过实时PCR分析mRNA表达

分别使用RNeasy脂质组织小型试剂盒(快而精公司(Qiagen))和TRI试剂(俄亥俄州辛辛那提的分子研究中心公司(Molecular Research Center,Inc.Cincinnati,OH))，根据制造商的说明书，从肝脏中提取总RNA。根据制造商的说明书，通过寡核苷酸dT引物引发(Stratascript 5.0多重温度逆转录酶，Stratagene公司)对3μg-4μg的总RNA进行逆转录。通过MxPro QPCR仪器(Stratagene公司)，使用SYBR快速通用预混试剂盒(Kappabiosystems公司)进行实时PCR扩增反应。用于实时PCR反应的引物是由以色列的西格玛公司(Sigma,Israel)合成的。引物序列如表1中所示：

表1：引物序列

**ID：SEQ ID NO.

肝脏甘油三酯(TG)水平

将100mg的肝脏在1ml含有5％NP-40的水中匀浆。将样品两次加热到80℃-100℃，持续5分钟，并且冷却到室温。将样品离心2分钟并且将上清液用于甘油三酯(TG)分析。使用甘油三酯定量试剂盒(ab65336，英国剑桥的艾博抗公司(Abcam,Cambridge,UK))，根据制造商的说明书，测量TG。

肝脏胆固醇水平

将10mg的肝脏在氯仿:异丙醇:NP-40(7:11:0.1)的溶液中匀浆。收集有机相并且将其真空干燥约2小时，并且重悬在由艾博抗公司供应的胆固醇测定缓冲液中。通过胆固醇/胆固醇酯定量试剂盒(ab65359，英国剑桥的艾博抗公司)，根据制造商的说明书，测量总胆固醇。

肝糖原含量

将10mg的肝脏在由艾博抗公司供应的糖原水解缓冲液中匀浆。将样品离心5分钟并且使用糖原测定试剂盒II(ab65620，英国剑桥的艾博抗公司)，根据制造商的说明书，将上清液用于糖原分析。

组织化学

将肝脏灌注，分离，在4％多聚甲醛中固定并且包埋在石蜡中。切割连续4μm切片并且用苏木精和伊红(H&E)染色。通过病理学家盲法评价炎症的存在和脂肪变性评分。肝脏切片的评分改编自Liang W.等,Establishment of a General NAFLD Scoring System forRodent Models and Comparison to Human Liver Pathology(啮齿类动物模型的一般NAFLD评分系统的建立和与人类肝脏病理学的比较),PLoS ONE 9(12):e115922。使用Olympus光学显微镜BX43、Olympus数码照相机DP21和Olympus cellSens Entry 1.13软件进行评价。

血清ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)

分别使用丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶活性测定试剂盒(分别是ab105134和ab105130，英国剑桥的艾博抗公司)，根据制造商的说明书，在新鲜样品中测量血清ALT和AST水平。

统计分析

值被示为平均值±SEM。在适当时，通过不成对双尾学生t检验或单因素方差分析(ANOVA)，继而通过邦费罗尼事后检验(Bonferroni′s post hoc testing)来检验处理组与对照组之间的统计学差异。使用GraphPad Prism 5.0软件进行分析。平均值的p＜0.05或更小的差异被认为具有统计显著性。

实施例1：溶液中的刺地榆提取物对小鼠脂肪变性模型的作用(预防方案)

使用高脂饮食(HFD)喂养的C57bl/6小鼠(HFD，总卡路里的60％源自于脂肪酸，18.4％源自于蛋白质并且21.3％源自于碳水化合物，Envigo Teklad饮食TD.06414)对饮食诱发的葡萄糖耐受不良模型进行研究。将6周大的雄性小鼠如下分为3个处理组，每组8只-10只小鼠：1)喂食标准饮食(STD，总卡路里的18％源自于脂肪，24％源自于蛋白质并且58％源自于碳水化合物，Envigo Teklad饮食TD.2018)的对照C57bl/6小鼠；2)HFD喂养的小鼠；和3)HFD喂养的小鼠，其中将饮食补充以刺地榆提取物，所述刺地榆提取物从6周大开始每天在饮用水中施用。

每周测量一次体重。在16周大时，使用氯胺酮+甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且通过终末采血，继而颈椎脱位来安乐死。从心脏收集血液并且制备血清。对肝脏进行灌注并且将其分离。将肝脏在液氮中速冻，并且保存在-80℃以用于后续的脂质、蛋白质和RNA提取。将肝脏部分保存在4％多聚甲醛中以用于组织学分析。

实施例2：刺地榆改善了高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的葡萄糖耐量(预防方案)

追踪刺地榆根提取物对体重和葡萄糖稳态的影响。证实了HFD喂养组的体重显著增加(图1A)。测量了摄食量和饮水习惯，证实了HFD喂养组的摄食量更低并且所有3组之间在饮水习惯方面没有差异(数据未示)。HFD喂养的小鼠的体重更高，刺地榆对体重累积速率没有影响。HFD喂养的小鼠的空腹血糖和腹膜内葡萄糖负荷后的葡萄糖处置改变。刺地榆提取物不影响空腹葡萄糖水平，但是改善了HFD喂养的小鼠的葡萄糖处置(图1B)，该作用伴随有空腹血清胰岛素水平降低(图1C)。这些结果表明了刺地榆提取物对HFD喂养的小鼠的积极作用。

实施例3：刺地榆改善了HFD喂养的小鼠的肝脏中的胰岛素信号传导(预防方案)

为了确定葡萄糖耐受不良的HFD喂养的小鼠的葡萄糖耐量的改善是否是由胰岛素信号传导级联的激活升高所介导，在肝脏中追踪了介导胰岛素信号转导的关键蛋白的磷酸化(图2A)。发现在刺地榆处理的HFD喂养的小鼠的肝脏中胰岛素诱导的胰岛素受体(IR)和GSK-3β的磷酸化显著增加(图2B)。这些发现支持了刺地榆提取物改善了代谢肝功能的建议。

实施例4：刺地榆提取物对肝糖原和脂质贮积的作用(预防方案)

补充刺地榆提取物的HFD喂养的小鼠的糖原水平升高(图3A)。碳水化合物贮积的这种增加与在这些小鼠中证实的高GSK3β磷酸化水平相符。

另一方面，刺地榆处理不影响甘油三酯和胆固醇水平(图3B、图3C)；HFD喂养的小鼠的未处理组和刺地榆处理组在肝脏中均具有升高的脂质水平。另一方面，对接受或没有接受刺地榆补充的HFD喂养的小鼠的肝脏中的脂肪变性的严重程度的组织学评价清楚地表明刺地榆处理的小鼠的脂肪变性状态更低，与对照相似(图3D)。

实施例5：刺地榆提取物对HFD喂养的小鼠的肝脏中的葡萄糖和脂质代谢基因的作用

迄今为止的结果表明，在补充刺地榆后肝脏的功能改善。由于HFD喂养的小鼠表现出更低阶段的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，其包括肝脂肪变性而没有炎症、纤维化和肝功能障碍，因此为了支持表明所述提取物对肝脏的有益作用的结果，我们测量了参与葡萄糖和脂质代谢的几种基因的肝脏mRNA表达。虽然糖异生基因G6Pase和PEPCK的mRNA表达不受饮食或刺地榆处理的影响(分别是图4A、图4B)，但是GCK表达增加(图4C)。GCK基因编码葡萄糖激酶，该酶将葡萄糖磷酸化，从而维持葡萄糖的浓度梯度并且有助于它在肝细胞内部的转运。饮食或所述提取物对Glut2mRNA表达没有显著影响(图4D)。

关于调节脂质代谢的基因的表达，虽然一些基因不受饮食和所述提取物的影响(图5B、图5D)，但是HFD下调了几种其它基因，包括脂肪生成基因(ACC1、SREBP2和FAS，分别是图5C、图5E和图5F)以及参与脂肪分解的基因(HSL，图5G)。在HFD喂养的小鼠中，PPARα(脂质代谢和氧化的关键主基因)的表达也降低(图5A)。通过使用刺地榆处理，表达已经被HFD饮食降低的所有基因的表达均增加，这表明尽管饮食过量供给脂质，但是该提取物使肝脏的基因表达谱和代谢功能正常化。

与这些结果一致，在通过刺地榆处理的HFD喂养的小鼠中，主要在肝脏中表达的脂联素受体AdipoR2的mRNA表达增加(图6B)。已知脂联素会降低肝脏胰岛素抵抗并且减轻肝脏炎症和纤维化，因此它的受体的表达的增加表明了补充刺地榆的小鼠的肝脏中脂联素功能的激活增加。

实施例6：干燥刺地榆提取物对小鼠脂肪变性模型的作用(治疗方案)

将如实施例1中所述的6周大的雄性小鼠随机分为喂食STD(第1组)和喂食HFD(第2-5组)，并且基于所选择的饮食喂食4周(从6周大直到10周大为止)。在喂食STD或HFD 4周之后，分别向第3组、第4组和第5组给予30mg/天、60mg/天或90mg/天的干燥刺地榆提取物，再持续7周。

每周测量一次体重。在17周大时，使用氯胺酮+甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且通过终末采血，继而颈椎脱位来安乐死。从心脏收集血液并且制备血清。对肝脏进行灌注并且将其分离。将肝脏在液氮中速冻，并且保存在-80℃以用于后续的脂质、蛋白质和RNA提取。将肝脏部分保存在4％多聚甲醛中以用于组织学分析。

实施例7：刺地榆提取物改善了高脂饮食(HFD)喂养的小鼠的葡萄糖耐量(治疗方案)

追踪刺地榆根提取物对体重和葡萄糖稳态的影响。证实了HFD喂养组的体重显著增加(图7A)。测量了摄食量和饮水习惯，证实了HFD喂养组的摄食量更低并且所有5组之间在饮水习惯方面没有差异(数据未示)。与STD相比，HFD诱导体重显著增加。与HFD喂养的同窝小鼠相比，以最高剂量(90mg/天)食用的SSE的处理引起更低的体重积累(图7A)。HFD喂养的小鼠的空腹血糖和腹膜内葡萄糖负荷后的葡萄糖处置改变。刺地榆提取物(60mg/天、90mg/天)改善了HFD喂养的小鼠的空腹血糖和葡萄糖处置(图7B)。在HFD喂养的小鼠中出现胰岛素抵抗，如由胰岛素耐量测试受损(图7C和图7D)和血清胰岛素升高(图7E)所证实，而补充SSE改善了对所述激素的敏感性，从而引起对胰岛素注射的响应改善(图7C和图7D)和血清胰岛素水平降低(图7E)。这些结果表明了刺地榆提取物对HFD喂养的小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性的积极作用。

实施例8：刺地榆提取物对肝脏脂质贮积的作用(治疗方案)

刺地榆处理以剂量依赖性方式使甘油三酯水平完全正常化(图8A)。HFD喂养的小鼠的肝脏总胆固醇更高并且不受SSE补充的影响(图8B)。进行了肝脏的H&E染色。由独立的病理学家(以色列的Patho-Lab Diagnostics有限公司)对接受或没有接受刺地榆补充的HFD喂养的小鼠的肝脏中的脂肪变性的严重程度进行的组织学评价证实了在给予的所有剂量下，SSE处理的小鼠的NAFLD评分降低(图8C)。HFD喂养诱导严重的肝脂肪变性，即覆盖超过66％的肝面积。在几乎所有的肝细胞中均可以看到脂滴(图8D，箭头指向代表性的脂肪变性肝细胞)。在接受30mg/天和60mg/天的刺地榆提取物处理的小鼠中证实了肝脏脂肪变性的改善，其显示出小得多的脂滴，而在接受90mg/天的SSE处理的HFD喂养的小鼠中发现肝脏形态几乎完全正常化，其中仅检测到少量和零星的脂滴，而肝细胞形态是正常的。

实施例9：刺地榆提取物对脂肪性肝炎模型的作用

食用果糖是NAFLD从脂肪变性的第1阶段向脂肪性肝炎(NASH)的第2阶段进展所必需的。NASH的特征在于肝细胞脂肪变性伴有另外的病理特征，如肝脏炎症和代表肝纤维化开始的肝窦胶原形成。在此阶段时肝功能下降，如可以通过测量血浆中的肝酶所评价。在饮用水(随意)中摄取果糖的西方饮食喂养的c57bl/6小鼠表现出所有病理特征。

通过向小鼠喂食西方饮食(WD)而产生所述模型，所述西方饮食含有42％的脂肪、42.7％的碳水化合物和15.2％的蛋白质。将42g/L浓度的果糖添加到饮用水中。将小鼠随机分为喂食STD(1组)或喂食WD(4组)4周(从6周大直到10周大为止)。在喂食WD 4周之后，分别向第3组、第4组和第5组给予30mg/天、60mg/天或90mg/天的干燥刺地榆提取物，再持续8周，同时继续喂食WD。每周测量一次体重。在20周大时将小鼠处死：通过氯胺酮/甲苯噻嗪使小鼠麻醉并且进行终末采血。对肝脏进行灌注并且保存用于后续的组织学、生化和分子(mRNA表达)分析。制备血清并且将其保存在-80℃以用于随后分析脂质和肝酶。

实施例10：刺地榆不改善脂肪性肝炎模型的葡萄糖耐量

追踪用刺地榆根提取物处理对体重和葡萄糖稳态的影响。证实了WD喂养组的体重显著增加(图9A)。测量了摄食量和饮水习惯，证实了WD喂养组的摄食量更低并且所有5组之间在饮水习惯方面没有差异(数据未示)。WD喂养的小鼠的体重更高，刺地榆对体重累积速率没有影响。WD喂养的小鼠NASH模型的空腹血糖和腹膜内葡萄糖负荷后的葡萄糖处置比HFD模型低得多(WD喂养的小鼠和HFD喂养的小鼠的平均空腹血糖分别是159mg/dL和217mg/dL，并且WD喂养的小鼠和HFD喂养的小鼠的在葡萄糖负荷后30分钟测量的最大葡萄糖水平分别是309mg/dL和416mg/dL)。可以看出的是，刺地榆提取物不影响WD喂养的小鼠的空腹血糖或葡萄糖处置(图9B)。

此外，在10周大时，作为胰岛素耐量测试的一部分进行的胰岛素负荷诱导了严重的低血糖症(图9C)，这表明在该NASH模型中没有出现胰岛素抵抗。对胰岛素的低血糖响应可能归因于由于肝功能受损而导致肝脏胰岛素清除率更低。胰岛素清除率受损的这一假设得到了WD喂养的小鼠的血清胰岛素增加的支持(图9D)，这被认为反映了胰岛素清除率的缺陷，而不是高胰岛素分泌(Bril等,2014；Livero等,2016)。SSE处理纠正了该升高的血清胰岛素。由于低血糖响应，因此没有在该模型中再次进行胰岛素耐量测试，因此没有关于18周大的小鼠在SSE处理后的数据。这些结果表明了在该模型中，葡萄糖耐受不良和胰岛素抵抗不是主要的病理。

实施例11：刺地榆提取物对肝脏脂质贮积的作用(NASH方案)

WD喂养的小鼠的肝脏甘油三酯(TG)和胆固醇水平增加。SSE(90mg/天)降低了肝脏中TG蓄积的严重程度，而胆固醇水平不受影响(图10A、图10B)；对接受或没有接受刺地榆处理的WD喂养的小鼠的肝脏中脂肪变性的严重程度的组织学评价清楚地表明刺地榆处理的小鼠的NAFLD评分更低(图10C和图10D)。如从图10C中所看到，虽然WD喂养的小鼠发生严重的肝脂肪变性，即覆盖超过66％的肝脏样品，但是在本研究中使用的所有剂量下，SSE将脂肪变性的严重程度降低到被认为轻度的水平，即覆盖5％-33％的肝脏样品(箭头指向代表性的脂肪变性肝细胞)。此外，在WD喂养的小鼠的肝脏中检测到炎症病灶(以圆圈标记)，但是在刺地榆处理的小鼠中未检测到。

实施例12：刺地榆提取物对血清肝酶水平的作用(NASH方案)

测量了血清ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)水平。在所有实验组中，WD方案均不影响AST水平(数据未示)。WD诱导血清ALT的增加，这被SSE处理完全纠正，表明SSE消除了WD诱导的肝脏损伤(图11)。

实施例13：刺地榆提取物对小鼠AFLD模型的肝功能的作用

在添加或不添加30mg/天、60mg/天和90mg/天的刺地榆干燥提取物的情况下，对8周大的C57BL/6雌性小鼠进行6周的慢性乙醇喂养(5％，v/v)。向对照小鼠喂食葡聚糖-麦芽糖代替乙醇以替代乙醇卡路里。在6周乙醇喂养结束时测量体重以及血清ALT、AST、TG和胆固醇水平，以及对肝脂肪变性进行组织学评价和评分，如上文所详述。

预期与没有喂食乙醇的小鼠相比，喂食乙醇的小鼠将表现出脂肪变性和肝酶升高。进一步预期，与未处理的小鼠相比，用SSE处理的小鼠将表现出更少的脂肪变性和更低的肝酶水平。

参考文献

Bedogni G,Miglioli L,Masutti F,Tiribelli C,Marchesini G,BellentaniS.Prevalence of and risk factors for nonalcoholic fatty liver disease:theDionysos nutrition and liver study(非酒精性脂肪肝病的患病率和风险因素：狄厄尼索斯营养和肝脏研究),Hepatology 2005；42(1):44-52。

Bertola A,Mathews S,Ki SH,Wang H,Gao B.Mouse model of chronic andbinge ethanol feeding(the NIAAA model)(慢性和无节制乙醇喂养的小鼠模型(NIAAA模型)),Nature protocols 2013；8(3):627-37。

Bril F,Lomonaco R,Orsak B,Ortiz-Lopez C,Webb A,Tio F,Hecht J,CusiK.Relationship between disease severity,hyperinsulinemia,and impaired insulinclearance in patients with nonalcoholic steatohepatitis(患有非酒精性脂肪性肝炎的患者的疾病严重程度、高胰岛素血症与胰岛素清除率受损之间的关系),Hepatology2014；59(6):2178-87。

Livero FA,Acco A.Molecular basis of alcoholic fatty liver disease:From incidence to treatment(酒精性脂肪肝病的分子基础：从发病到治疗),Hepatologyresearch:the official journal of the Japan Society of Hepatology2016；46(1):111-23。

序列表

<110> 艾瑞尔科学创新有限公司

<120> 用于治疗脂肪肝病的刺地榆提取物

<130> ARIUNI-007 PCT

<140> 62/552,538

<141> 2017-08-31

<160> 20

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 1

atgccagtac tgccgttttc 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 2

ccgaatcttt caggtcgtgt 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 3

caggcctcat gaagaacctt 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 4

acccttgcat ccttcacaag 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 5

agaggcggac aacacacaat 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 6

acgccagact tgtgcatctt 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 7

aagagccctg cacttcttga 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 8

ccacaaagaa acggtgacct 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 9

tgctcttctt cgagggtgat 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 10

tctcgttgcg tttgtagtgc 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 11

catgaacacc cagagcattg 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 12

atttgtcgta gtggccgttc 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 13

ttgctggcac tacagaatgc 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 14

aacagcctca gagcgacaat 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 15

tcgtgtataa ggtctgggag 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 16

gcagatgtgt ccagatgttg 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 17

cccaggaaga tgaagggttt 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 18

ttaagccaat ccggtagcac 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 19

tgttgttgga tatgcccttg 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 20

ttgcgctcat cttaggcttt 20

Claims

1.一种刺地榆(Sarcopoterium spinosum，S.spinosum)提取物，其用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

2.根据权利要求1所述的刺地榆提取物，其中所述脂肪肝病是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

3.根据权利要求1所述的刺地榆提取物，其中所述脂肪肝病是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述受试者没有糖尿病。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述治疗包括减轻脂肪肝病的至少一种症状，所述症状选自肝内甘油三酯含量、肝叶炎症、肝细胞气球样变、肝纤维化、肝脂肪变性和肝硬化。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述提取物是来自刺地榆的根的提取物。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述提取物呈液体形式。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述提取物呈干燥形式，如粉剂、片剂或胶囊。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的刺地榆提取物，其中所述提取物能够通过将所期望的植物部分在水中煮沸，过滤并且任选地冻干以得到干燥提取物而获得。

10.一种包含刺地榆的提取物的药物组合物，其用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

11.一种包含刺地榆的提取物的营养药物组合物，其用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险。

12.根据权利要求11所述的营养药物组合物，其还包含其它营养或膳食补充剂和/或一种或多种赋形剂，所述赋形剂可以是药学上可接受的或营养药物载体、稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。

13.根据权利要求11或12所述的营养药物组合物，其被配制用于以片剂、胶囊、丸剂、糖锭或糖浆的形式口服施用。

14.一种用于在受试者中预防、治疗脂肪肝病和/或降低患脂肪肝病的风险的方法，所述方法包括向所述受试者施用刺地榆的提取物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述脂肪肝病是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述脂肪肝病是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

17.根据权利要求14至16中任一项所述的方法，其中所述受试者没有糖尿病。

18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法，其中所述治疗包括减轻脂肪肝病的至少一种症状，所述症状选自肝内甘油三酯含量、肝叶炎症、肝细胞气球样变、肝纤维化、肝脂肪变性和肝硬化。

19.根据权利要求14至18中任一项所述的方法，其中所述提取物是来自刺地榆的根的提取物。

20.根据权利要求14至19中任一项所述的方法，其中所述提取物呈液体形式。

21.根据权利要求14至19中任一项所述的方法，其中所述提取物呈干燥形式，如粉剂、片剂或胶囊。