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CN110799529A - 改良lamp构建物 - Google Patents

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CN110799529A
CN110799529A CN201880026665.6A CN201880026665A CN110799529A CN 110799529 A CN110799529 A CN 110799529A CN 201880026665 A CN201880026665 A CN 201880026665A CN 110799529 A CN110799529 A CN 110799529A
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特瑞·海兰
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Immunomic Therapeutics Inc
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Abstract

本发明提供了包含LAMP腔内结构域的特定片段的改良LAMP构建物，以将抗原递送到免疫细胞，用于增强加工。这些LAMP构建物可用于疾病、特别是过敏症、感染性疾病、糖尿病、过度增殖性障碍和/或癌症的治疗。所述改良LAMP构建物在施用于对象时允许呈递正确配置的三维表位，用于产生免疫应答。所述改良LAMP构建物可以是多价分子，和/或可以被提供为含有两种或更多种LAMP构建物的多价疫苗的一部分。本文中所描述的改良LAMP构建物也可用于在施用于非人类脊椎动物时产生抗体。

Description

改良LAMP构建物
发明背景
技术领域
本发明涉及改良LAMP构建物以及它们在治疗患有感染性疾病、糖尿病、过敏症、过度增殖性障碍和/或癌症的对象中的用途。此外，本文描述的改良LAMP构建物可用于在非人类脊椎动物中产生抗体，优选地其中所述非人类脊椎动物的基因组至少包含部分人类免疫球蛋白区和/或人源化免疫球蛋白区。还描述了利用本文描述的改良LAMP构建物的初免-加强(prime boost)方案。
背景技术
在下面的讨论中，出于背景和介绍的目的将描述某些文章和方法。本文包含的任何内容都不应被解释为对现有技术的“承认”。申请人明确保留在适当情况下证明本文参考的文章和方法在适用的法律规定下不构成现有技术的权力。
DNA疫苗是用于开发预防性和治疗性疫苗两者的新的且有希望的候选物。它们被证明是安全的，并且如果需要重复的疫苗接种循环以获得临床益处，则缺少对载体骨架的免疫应答可能是明确的优势。然而，常规DNA疫苗的一种察觉到的缺点是它们在人类中的低免疫原性。基于表位的DNA疫苗的免疫原性中的关键限制步骤可能是表位进入MHC II呈递途径到达T细胞，这在不使用靶向技术的疫苗的情况下可能是随机的过程。
美国专利号5,633,234描述了包含修饰的流感血凝素(HA)的抗原性结构域和胞质胞内体/溶酶体靶向信号的嵌合蛋白，所述靶向信号有效地将抗原靶向该区室。所述抗原性结构域被加工，并且来自于它的肽与主要组织相容性(MHC)II类分子联合呈递在细胞表面上。LAMP-1的胞质尾区被用于形成所述嵌合蛋白的胞内体/溶酶体靶向结构域。
美国专利号8,318,173扩展了这些初始的观察，描述了包含插入在LAMP-1的完整腔内结构域与跨膜结构域之间的HIV-1Gag蛋白的嵌合蛋白(以及编码这些蛋白的相应DNA)。将这种构建物引入到树突状细胞中，所述细胞随后被报道为靶向MHC II途径。
这种方法已被证明可用于提高针对几种病毒抗原的细胞和体液应答，所述病毒抗原是人类乳头瘤病毒E7、登革病毒膜蛋白、HIV-1gp160膜蛋白、HIV-1p55 Gag、西尼罗病毒膜蛋白、丙型肝炎病毒NS3蛋白和巨细胞病毒pp65(参见例如Bonini等，J.Immunol.166:5250-5257,2001)。所述增强的免疫应答可以归因于LAMP与MHC II的共定位以及抗原性肽的更高效的加工和递送。此外，LAMP靶向据报道引起数目增加的免疫原性表位的呈递，因此与非靶向抗原相比诱导在定性水平上拓宽的免疫应答。例如，Fernandes等，2000,Eur.J.Immunol.30(8):2333-43证实了在痘苗病毒载体中编码的LAMP转运的OVA抗原的被呈递的肽的数目增加。在从外源供应的OVA产生的12种肽中，9种被OVA/LAMP嵌合体呈递，相比较而言只有2种被不含LAMP的构建物呈递。
尽管已确定LAMP的胞质结构域是必需的(与信号序列和跨膜结构域相结合)，但它对所有抗原的胞内体/溶酶体转运来说不总是足够的。相反，已显示LAMP的完整腔内结构域对于蛋白质向溶酶体囊泡途径的转运来说也是需要的。
然而，即使存在LAMP的完整腔内结构域和完整跨膜/胞质尾区(“完全LAMP构建物”)，但仍越来越多地发现，特定抗原引起免疫应答的效能高度依赖于在这些构建物中使用的具体序列。事实上已发现，当被插入到完全LAMP构建物中时，同一蛋白的不同抗原性片段不引发相同的免疫应答。所述抗原片段有时产生免疫应答，其他时候则不产生。这些观察使得在使用完全LAMP构建物时，事先预测来自于感兴趣的蛋白质的哪个特定抗原性序列将引起免疫应答的能力变得困难。
此外，在产生完全LAMP构建物中，已反复地观察到为了正确地表达和加工抗原，需要完整腔内结构域。例如，在Godinho等，PLoS ONE9(6):e99887.doi:10.1371/journal.pone.0099887中，作者报道了所述完全和完整的腔内结构域是将抗原靶向溶酶体所需的最小必需区域，并且所述腔内结构域的片段不起作用。参见同上，第6页。
具体来说，作者Godinho显示，通过完全去除第一腔内结构域和一部分第二腔内结构域(即T1-Lum/gag构建物)，蛋白质表达和抗体应答两者降低。同样地，去除25％的第一腔内结构域单具有完整的第二腔内结构域(即T2-lum/gag)，蛋白质表达和抗体应答两者相对提高，但仍低于使用完全LAMP构建物获得的结果。
此外，所述作者承认引起免疫应答的能力取决于具体抗原和在这些完全LAMP构建物中使用的表位。例如，在第9页第2栏中，作者陈述道“因此，以前的研究证实，产生作为VLP分泌或采取可溶形式的Gag的DNA疫苗诱导不同水平的T和B细胞活化，其也不同于由胞质Gag诱导的应答”。然而，正如文献中已经描述的抗原性序列在LAMP的完整腔内结构域与LAMP的完整跨膜/胞质结构域之间的插入产生如此大的多核苷酸序列，使得在商业化水平上生产变得过于昂贵或者从科学观点来看不现实。
因此，对设计可用作疫苗以有效治疗例如过敏症、感染性疾病、糖尿病、过度增殖性障碍和/或癌症的新的改良LAMP构建物，存在着需求。此外，在改进后，这些新的LAMP构建物可用于产生抗体。
发明内容
提供该发明内容是为了以简化形式介绍所选的概念，所述概念在下文的详细描述中被进一步描述。该发明内容不打算鉴定要求保护的主题内容的关键或基本特征，也不打算用于限制所述要求保护的主题内容的范围。根据下面书写的详细描述(包括在附图中图示和在随附的权利要求书中定义的那些方面)，所述要求保护的主题内容的其他特征、细节、用途和优点将显而易见。
本发明的一个目的是提供包含LAMP结构域的特定片段和/或变体的新的构建物(“改良LAMP构建物”)，其将感兴趣的抗原有效地呈递到免疫系统，以产生增强的免疫应答。这些改良LAMP构建物有效地将所述抗原导向溶酶体/胞内体区室，在那里它们被加工并呈递到II类主要组织相容性复合物(MHC)分子，使得辅助性T细胞被优先刺激和/或产生抗体。
本文描述的改良LAMP构建物和方法可以在对象中引发免疫应答。所述免疫应答可以是针对所述改良LAMP构建物(例如疫苗)中的抗原的表位的免疫应答。疫苗武装所述对象的免疫系统，使得所述免疫系统可以检测并破坏所述对象中含有所述疫苗的抗原的物质。本文描述的改良LAMP构建物和方法可以在所述对象中引发Thl免疫应答。Thl免疫应答可以包括免疫细胞的亚类(例如抗原特异性T-细胞)分泌炎性细胞因子(例如IFNγ、TNFa)。在某些情况下，所述炎性细胞因子活化另一种亚型的免疫细胞(例如细胞毒性T-细胞)，所述另一种亚型的免疫细胞可以破坏所述对象中含有所述抗原的物质。
在某些情况下，在本文中描述的改良LAMP构建物和方法中使用的表位和/或抗原可以被对象的免疫系统识别，以引发Thl免疫应答并释放I型细胞因子。所述Thl应答可能是由所述表位与所述T-细胞、更具体来说所述T-细胞表达的主要组织相容性复合物(MHC)之间的相互作用启动的。例如，表位与MHC受体的高亲和性结合可以刺激Thl应答。MHC受体可以是多种类型的MHC受体中的至少一种。接合在T-细胞上的MHC受体在群体中的个体之间可以不同。
在某些情况下，所述免疫应答是1型免疫应答。在某些情况下，所述免疫应答的特征在于I型细胞因子生产与II型细胞因子生产之比大于1。在某些情况下，所述免疫应答的特征在于I型细胞因子生产与II型细胞因子生产之比小于1。在某些情况下，所述免疫应答的特征在于IFNy生产与IL-10生产之比大于1。在某些情况下，所述免疫应答的特征在于IFNy生产与IL-10生产之比小于1。
本发明的另一个目的是通过经辅助性T细胞的刺激引发抗肿瘤免疫应答，提供治疗癌症和/或过度增殖性障碍的改进的方法。
本文中描述的改良LAMP构建物也可用于治疗过敏症，例如食物过敏(例如花生过敏原如Ara H1、H2和/或H3)或环境过敏原例如花粉(树木花粉例如CRY J1或CRY J2)、狗毛、猫唾液或尘螨。可以使用本文中描述的改良LAMP构建物治疗的其他疾病和/或障碍包括例如感染性疾病和糖尿病。
本发明还提供了编码本文中描述的任何改良LAMP构建物的核酸分子。本发明还提供了包含抗原的改良LAMP构建物，以产生抗体。所述改良LAMP构建物可以包含其中所述核酸分子被可操作地连接到表达控制序列的核酸。在一种优选情况下，所述改良LAMP构建物是适合于对患者进行疫苗接种的疫苗载体。另一方面，本发明提供了包含所述改良LAMP构建物的递送媒介，以便于将编码所述抗原的核酸分子引入到细胞中。所述递送媒介可以是基于脂质的(例如脂质体制剂)、基于病毒的(例如包含包封所述核酸分子的病毒蛋白)或基于细胞的。
在优选实施方式中，本发明提供了一种可注射组合物，其包含含有感兴趣的抗原的改良LAMP构建物，用于在哺乳动物中引发针对抗原的免疫应答(例如抗体的产生)。在优选实施方式中，相对于Th2应答，这种疫苗优先产生Th1应答。所述改良LAMP构建物包含抗原的至少一个表位。
本发明还提供了包含本文中描述的可用于产生免疫应答的任何改良LAMP构建物的细胞。在一种情况下，所述细胞是抗原呈递细胞。所述抗原呈递细胞可以是专业抗原呈递细胞(例如树突状细胞、巨噬细胞、B细胞等)或工程化改造的抗原呈递细胞(例如被工程化改造成表达抗原呈递所需的分子例如II类MHC分子的非专业抗原呈递细胞)。所述抗原呈递所需的分子可以源自于其他细胞例如天然存在的细胞，或者它们本身可以被工程化改造(例如突变或修饰以表现出所需性质，例如对抗原性表位更高或更低的亲和性)。在一种情况下，所述抗原呈递细胞不表达任何辅助刺激信号，并且所述抗原是自身抗原。
本发明还提供了一种试剂盒，其包含含有本文中描述的任何改良LAMP构建物的多种细胞。至少两种所述细胞表达不同的II类MHC分子，并且每种细胞包含相同的LAMP构建物。在一种情况下，提供了一种试剂盒，其包含改良LAMP构建物和用于接受所述载体的细胞。
本发明还提供了一种转基因动物，其包含本文中描述的至少一种细胞和/或至少一种改良LAMP构建物。本发明还提供了一种转基因动物，其包含至少一种本文中描述的细胞。
本发明还提供了一种在动物(例如人类或非人类脊椎动物)中产生针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括：向所述动物施用如上所述的细胞，其中所述细胞在所述动物中表达或可以被诱导表达所述改良LAMP构建物。在一种情况下，所述细胞包含与所述动物的MHC蛋白相容的II类MHC分子，使得所述动物不产生针对所述II类MHC分子的免疫应答。在一种优选情况下，所述动物是人类。
另一方面，本发明提供了一种引发针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括向动物例如人类或非人类脊椎动物施用本文中描述的任何改良LAMP构建物。优选地，所述改良LAMP构建物对于所述动物的细胞来说是感染性的。例如，所述改良LAMP构建物可以是病毒载体，例如痘苗病毒的改良LAMP构建物。
也设想了初免-加强方案。例如，本发明还提供了一种在动物中产生针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括用本文中描述的包含抗原的改良LAMP构建物初免所述动物，然后用所述抗原或相关抗原(例如源自于同一或高度相似的蛋白序列的第二抗原)对所述动物进行至少一次加强。在所述初免和加强步骤的任一者或两者中，可以使用抗原的混合物。已显示，将改良LAMP构建物用于初免步骤然后用于抗原加强步骤明显产生了更高的滴度，表明了LAMP在增强抗体应答中的能力。
在另一种情况下，从患者获得细胞，将本文中描述的改良LAMP构建物引入到所述细胞中，并将所述细胞或所述细胞的后代重新引入到所述患者中。在一种情况下，所述细胞是能够分化成抗原呈递细胞的干细胞。具体来说设想了人类患者的治疗以及兽医应用。
本发明还包括在非人类脊椎动物中产生抗体的方法，其中将所述非人类脊椎动物用本文中描述的包含感兴趣的抗原的改良LAMP构建物注射。然后，在所述非人类脊椎动物中，所述感兴趣的抗原在LAMP的帮助下被高效呈递到免疫系统，产生针对所述抗原的抗体。
具体来说，通过所述感兴趣的抗原与LAMP的组合呈递，所述抗原随后被有效地运输到胞质胞内体/溶酶体区室，在那里所述抗原可以被加工，并且来自于所述抗原的肽与II类主要组织相容性(MHC)分子相结合被呈递在细胞表面上。
这些产生的抗体可以从所述脊椎动物的血液分离(作为多克隆)，然后使用标准技术进一步分离以产生单克隆抗体。
在优选实施方式中，所述非人类脊椎动物的基因组包含引入的部分人类免疫球蛋白区，所述引入的区域包含人类免疫球蛋白可变区基因座的编码序列和基于所述非人类脊椎动物的内源性免疫球蛋白可变区基因座的非编码序列。优选地，非人类脊椎动物的基因组被移除了至少一部分或所有的内源性免疫球蛋白区。
在其他优选实施方式中，在非人类脊椎动物中生产人类单克隆抗体，要求所述宿主具有至少一个表达人类重链免疫球蛋白的基因座和至少一个表达人类轻链免疫球蛋白的基因座。
在某些情况下，所述部分人类免疫球蛋白可变区基因座包含人类VH编码序列和基于所述非人类脊椎动物的内源性VH区的非编码VH序列。在这些情况下，所述部分人类免疫球蛋白可变区基因座还包含人类D和J基因编码序列和基于所述非人类脊椎动物宿主的内源性基因组的非编码D和J基因序列。
在其他情况下，所述免疫球蛋白区包含引入的区域，所述引入的区域含有人类VL编码序列和基于所述非人类脊椎动物的内源性VL区的非编码VL序列。更优选地，所引入的包含人类VL编码序列的部分人类免疫球蛋白区还包含人类J基因编码序列和基于所述非人类脊椎动物宿主的内源性基因组的非编码J基因序列。
在某些情况下，所述脊椎动物是哺乳动物，并且优选地所述哺乳动物是啮齿动物例如小鼠或大鼠。在其他情况下，所述脊椎动物是禽类，例如鸡。其他非人类脊椎动物包括兔、美洲驼、骆驼、奶牛、豚鼠、仓鼠、狗、猫、马、非人类灵长动物、猿猴(例如猴或猿)、猴(例如狨猴、狒狒、恒河猴)或猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)。
在其他实施方式中，所述部分人类免疫球蛋白区包含人类VH基因编码区，并且还包含i)人类D和J基因编码序列，和ii)基于所述非人类脊椎动物宿主的内源性基因组的非编码D和J基因和pre-DJ序列。在其他情况下，所述VH基因编码区源自于(至少部分源自于)其他来源，例如它们可以是合理设计或以其他方式设计的序列，作为人类序列和其他设计序列的组合的序列，或来自于其他物种例如非人类灵长动物的序列。
在另一种特定情况下，所述部分人类免疫球蛋白区包含人类VL基因编码区，并且还包含i)人类J基因编码序列，和ii)基于所述非人类脊椎动物宿主的内源性基因组的非编码J基因序列。在特定情况下，所述部分人类免疫球蛋白区包含人类VH编码区、人类D和J基因编码序列以及基于所述非人类脊椎动物宿主的内源性基因组的非编码D和J基因和pre-DJ序列。
本文中描述的方法可用于诊断和治疗用途的抗体(包括完全人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体)的生产和/或优化。生产这些抗体的杂交瘤也是本发明的另一个目的。
下文中更详细地描述了这些以及其他的方面、目的和特征。
附图说明
参考下面的详细描述和附图，可以更好地理解本发明的目的和特征。
图1示出了可以如本文中所述使用的不同类型的改良LAMP构建物(被鉴定为ILC-1、ILC-2、ILC-3、ILC-4、ILC-5和ILC-6)的总体方案。
图2A示出了本文中定义的LAMP蛋白的结构域，而图2B定义了这些结构域的具体氨基酸边界，所述LAMP蛋白是人类LAMP-1(SEQ ID NO：1)、人类LAMP-2(SEQ ID NO：2)、人类LAMP-3(SEQ ID NO：3)、人类LIMP-2(SEQ ID NO：4)、人类Endolyn(SEQ ID NO：5)、人类Macrosailin(SEQ ID NO：80)、人类LAMP-5(SEQ ID NO：93)和人类LIMBIC(SEQ ID NO：67)。正如本文中描述的，所述LAMP腔内结构域、同源结构域、跨膜结构域、胞质尾区和所述信号序列可用于产生本文中所描述的改良LAMP构建物ILC-1、ILC-2、ILC-3、ILC-4、ILC-5和ILC-6。
图3提供了在其他物种中发现的LAMP-1蛋白与人类LAMP-1(SEQ ID NO：1)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图3中为人类LAMP-1鉴定的结构域与图3中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图4提供了在其他物种中发现的LAMP-2蛋白与人类LAMP-2(SEQ ID NO：2)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图4中为人类LAMP-2鉴定的结构域与图4中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图5提供了在其他物种中发现的LAMP-3蛋白与人类LAMP-3(SEQ ID NO：3)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图5中为人类LAMP-3鉴定的结构域与图5中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图6提供了在其他物种中发现的LIMP-2蛋白与人类LIMP-2(SEQ ID NO：4)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图6中为人类LIMP-2鉴定的结构域与图6中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图7提供了在其他物种中发现的LIMBIC蛋白与人类LIMBIC(SEQ ID NO：67)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图7中为人类LIMBIC鉴定的结构域与图7中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图8提供了在其他物种中发现的Endolyn蛋白与人类Endolyn(SEQ ID NO：5)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图8中为人类Endolyn鉴定的结构域与图8中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图9提供了在其他物种中发现的Macrosailin蛋白与人类Macrosailin(SEQ IDNO：80)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图9中为人类Macrosailin鉴定的结构域与图9中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图10提供了在其他物种中发现的LAMP-5蛋白与人类LAMP-5(SEQ ID NO：93)相比的比对。这些其他物种的对等结构域可用于产生本文中描述的改良LAMP构建物，并且通过将图2和图10中为人类LAMP-5鉴定的结构域与图10中示出的比对进行比较可以容易地鉴定。
图11示出了当将小鼠在第0、7和14天用HVEM-LAMP、HVEM或LAMP免疫接种时获得的结果。在第28天，对小鼠采血并分离血清样品。通过ELISA检查HVEM特异性IgG。数据表示抗体滴度的几何平均值±几何SD，n＝6。**p值<0.01。
图12示出了当将小鼠在第0、7和14天用HVEM-LAMP、HVEM或LAMP免疫接种时获得的结果。在第35天，将小鼠在铝佐剂存在下用5μg HVEM蛋白加强。在第49天对小鼠采血并分离血清样品。通过ELISA检查HVEM特异性IgG。数据表示抗体滴度的几何平均值±几何SD，n＝6。***p值<0.001；****p值<0.0001。
图13显示LAMP改变了HVEM的CRD3/4中的表位的结合亲和性。
图14证实了所试验的改良LAMP构建物的蛋白质表达。在图14-17每一者中，标注“完全LAMP构建物”、ILC-1、ILC-2、ILC-3和ILC-4对应于图1中所描绘的构建物。
图15显示所述改良LAMP构建物诱导产生INFγ的Th1效应T细胞。
图16示出了针对所有存活蛋白肽合并物引发显著更高的T细胞应答的特定的改良LAMP构建物(例如图1中所示的ILC-4)。
图17显示CD4 T细胞是IFNγ产生细胞的主要来源，并且所述改良LAMP构建物与完全LAMP构建物相比表现出CD4效应记忆细胞群体的增加。
图18显示出所述改良LAMP构建物在BALB/c小鼠中产生更强的存活蛋白特异性总IgG应答。
图19提供了所试验的每种LAMP构建物的氨基酸序列。每种构建物的信号序列用小写且带下划线的字母描述；存活蛋白序列用具有黑色阴影的大写白色字母描述；腔内结构域用斜体大写字母描述，并且跨膜/胞浆结构域用具有灰色阴影的大写字母表示，并且在ILC-4中，第二同源结构域被加粗。可以包括其他氨基酸(LE和EF)作为克隆连接物的一部分。
具体实施方式
本发明提供了可用于产生疫苗和/或用于产生抗体的改良LAMP构建物和编码它们的核酸。所述改良LAMP构建物可用于调节或增强免疫应答。在一种优选情况下，本发明提供了一种通过提供本文中描述的改良LAMP构建物来治疗患有过敏症、感染性疾病、糖尿病、癌症或过度增殖性障碍的患者的方法。所述改良LAMP构建物也可用于在非人类脊椎动物中、优选为非人类哺乳动物中产生抗体。
定义
为下面书面描述中使用的特定术语，提供了下述定义。
当在本说明书和权利要求书中使用时，没有具体数目的指称包括复数指称物，除非上下文明确指示不是如此。例如，术语“细胞”包括多个细胞，包括其混合物。术语“核酸分子”包括多个核酸分子。
当在本文中使用时，术语“包含”旨在意味着所述改良LAMP构建物和方法包括所叙述的要素，但不排除其他要素。当用于定义改良LAMP构建物和方法时，“基本上由……构成”意味着排除对所述组合具有任何重要意义的其他要素。因此，基本上由本文中所定义的要素构成的改良LAMP构建物将不排除来自于分离和纯化方法的痕量污染物和可药用载体，例如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由……构成”意味着排除超过痕量的其他成分要素和用于施用本发明的改良LAMP构建物的实质性方法步骤。由每个这些过渡性术语定义的实施方式都在本发明的范围之内。
术语“约”或“大约”对于特定值来说意味着在由本领域普通技术人员所确定的可接受的范围之内，所述范围部分依赖于测量或确定所述值的方法，例如测量系统的限制。例如，“约”可以意味着给定值的最高20％、优选地最高10％、更优选地最高5％、更优选地最高1％的范围。可选地，特别是对于生物系统或方法来说，所述术语可以意味着在值的一定数量级之内，优选地5倍之内，更优选地2倍之内。除非另有陈述，否则术语“约”对特定值来说意味着在可接受的误差范围例如±1-20％、优选地±1-10％、更优选地±1-5％之内。
在提供值的范围的情况下，应该理解在该范围的上限与下限之间的每个居间值和在该陈述的范围中的任何其他陈述的或居间值，被涵盖在本发明之内。这些较小范围的上限和下限可以被独立地包括在所述较小范围中，并且也被涵盖在本发明之内，除了在所述陈述的范围中任何具体排除的限值之外。在所述陈述的范围包括所述限值中的一者或两者的情况下，排除了那些被包括的限值中的任一者或两者的范围，也被包括在本发明中。
当在本文中使用时，“溶酶体/胞内体区室”是指膜结合的酸性液泡，其含有在膜中的LAMP分子、在抗原加工中发挥作用的水解酶和用于抗原识别和呈递的II类MHC分子。该区室充当通过各种不同机制(包括胞吞、吞噬和胞饮)中的任一者从细胞表面内化的外来物质和通过特化的自溶现象递送到该区室的细胞内物质的降解位点(de Duve,Eur.J.Biochem.137:391,1983)。当在本文和权利要求书中使用时，术语“胞内体”涵盖溶酶体。
当在本文中使用时，“溶酶体相关细胞器”是指包含溶菌酶的任何细胞器，并且包括但不限于MIIC、CIIV、黑素小体、分泌颗粒、裂解性颗粒、血小板致密颗粒、嗜碱粒、Birbeck颗粒、吞噬溶酶体、分泌溶酶体等。优选地，这种细胞器缺少甘露糖6-磷酸受体并包含LAMP，但可以包含或可以不包含II类MHC分子。对于综述，参见例如Blott和Griffiths，Nature Reviews,Molecular Cell Biology,2002；Dell'Angelica等，The FASEB Journal14:1265-1278,2000。
当在本文中使用时，术语“多核苷酸”和“核酸分子”可互换地用于指称任何长度的核苷酸的聚合形式。多核苷酸可以含有脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或它们的类似物。核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。术语“多核苷酸”包括例如单链、双链和三螺旋分子、基因或基因片段、外显子、内含子、mRNA、tRNA、rRNA、核酶、反义分子、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、适体、质粒、载体、分离的任何序列的DNA、分离的任何序列的RNA、核酸探针和引物。核酸分子也可以包含修饰的核酸分子(例如包含修饰的碱基、糖和/或核苷酸间连接物)。
当在本文中使用时，术语“肽”是指两个或更多个亚单位氨基酸、氨基酸类似物或肽模拟物的化合物。所述亚单位可以通过肽键或通过其他键(例如酯、醚等)连接。
当在本文中使用时，术语“氨基酸”是指天然和/或非天然的或合成的氨基酸，包括甘氨酸和D或L光学异构体两者，以及氨基酸类似物和肽模拟物。如果肽链短，三个或更多个氨基酸的肽通常被称为寡肽。如果肽链长(例如大于约10个氨基酸)，所述肽通常被称为多肽或蛋白质。尽管术语“蛋白质”涵盖术语“多肽”，但“多肽”可以小于全长蛋白质。
当在本文中使用时，“LAMP多肽”是指本文中所描述的哺乳动物溶酶体相关膜蛋白人类LAMP-1、人类LAMP-2、人类LAMP-3、人类LIMP-2、人类Endolyn、人类LIMBIC、人类LAMP-5或人类Macrosailin，以及直系同源物(例如在图3-10中示出的LAMP蛋白)和等位基因变体。
当在本文中使用时，“表达”是指多核苷酸被转录成mRNA和/或翻译成肽、多肽或蛋白质的过程。如果所述多核苷酸源自于基因组DNA，表达可以包括从基因组DNA转录的mRNA的剪接。
当在本文中使用时，“在转录控制下”或“可操作地连接”是指由表达控制元件和编码序列的适合的并置所控制的多核苷酸序列的表达(例如转录或翻译)。在一种情况下，当表达控制序列控制并调节DNA序列的转录时，该DNA序列“可操作地连接”到所述表达控制序列。
当在本文中使用时，“编码序列”是当置于适合的表达控制序列的控制之下时被转录并翻译成多肽的序列。编码序列的边界由5'(氨基)端的起始密码子和3'(羧基)端的翻译终止密码子确定。编码序列可以包括但不限于原核序列、来自于真核mRNA的cDNA、来自于真核(例如哺乳动物)DNA的基因组DNA序列和甚至合成的DNA序列。多腺苷化信号和转录终止序列通常位于所述编码序列的3'。
当在本文中使用时，如果两个编码序列或它们的互补序列编码相同的氨基酸序列，则所述两个编码序列彼此“对应”。
当在本文中使用时，“信号序列”是指内质网易位序列。该序列编码与细胞通讯的信号肽，以将它连接(例如通过化学键)的多肽导向内质网囊泡区室，进入胞吐/胞吞细胞器，递送到细胞囊泡区室、细胞表面，或分泌所述多肽。该信号序列有时在蛋白质成熟中被细胞切掉。可以发现与原核生物和真核生物本源的各种不同蛋白质缔合的信号序列。
当在本文中使用时，“转运”是指改良LAMP构建物所编码的多肽的移动或进展，其通过从粗面内质网到发生抗原加工和与MHC II结合的胞内体/溶酶体区室或相关细胞器的途径中的细胞器或区室来进行。
当在本文中使用时，“改良LAMP构建物”和“包含抗原的改良LAMP构建物”和“包含感兴趣的抗原的改良LAMP构建物”可互换使用。所述改良LAMP构建物的不同排列在图1中作为ILC1-ILC6示出。此外，“改良LAMP构建物”的使用涵盖了所述改良LAMP构建物的多核苷酸序列以及由所述改良LAMP构建物的多核苷酸序列编码的蛋白质两者。
当在本文中使用时，“改良LAMP构建物递送媒介”被定义为可以将改良LAMP构建物携带到宿主细胞中并且与本文中所描述的改良LAMP构建物缔合出现的任何分子或成组分子或大分子(例如基因或基因片段、反义分子、核酶、适体等)。
当在本文中使用时，“改良LAMP构建物递送”或“改良LAMP构建物转移”是指将所述改良LAMP构建物引入到宿主细胞中，不论用于引入的方法如何。引入的改良LAMP构建物可以稳定地或暂时地维持在所述宿主细胞中。稳定维持通常要求引入的改良LAMP构建物含有与所述宿主细胞相容的复制起点，或整合到宿主细胞的复制子例如染色体外复制子(例如质粒)或核或线粒体染色体中。
当在本文中使用时，“改进的LAMP病毒构建物”是指包含待体内、离体或体外递送到宿主细胞中的所述改良LAMP构建物的病毒或病毒粒子。改进的LAMP病毒构建物的实例包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒载体、反转录病毒载体等。在基因转移由腺病毒载体介导的情况下，改良LAMP构建物包括腺病毒基因组或其一部分，以及所选择的与腺病毒衣壳蛋白相结合的非腺病毒基因。
当在本文中使用时，“腺病毒介导的基因转移”或“腺病毒转导”是指利用进入细胞的腺病毒将改良LAMP构建物转移到宿主细胞中的过程。优选地，所述改良LAMP构建物能够在所述细胞内复制和/或整合并被转录。
当在本文中使用时，“腺病毒粒子”是指包含外部衣壳和改良LAMP构建物的单个腺病毒毒粒，其中所述衣壳进一步包含腺病毒包膜蛋白。所述腺病毒包膜蛋白可以被修饰以包含融合多肽，所述融合多肽含有共价附连到所述病毒蛋白质的多肽配体，例如用于将所述腺病毒粒子靶向到特定细胞和/或组织类型。
当在本文中使用时，术语“施用”或“免疫接种”或“注射”改良LAMP构建物是指用所述改良LAMP构建物转导、转染、微注射、电穿孔或射击所述细胞。在某些情况下，通过将靶细胞与递送细胞相接触(例如通过细胞融合或通过在所述递送细胞邻近所述靶细胞时将递送细胞裂解)，将改良LAMP构建物引入到所述靶细胞中。
当在本文中使用时，短语“初免-加强”描述了使用本文中描述的改良LAMP构建物来引发T-细胞应答，随后使用第二种包含抗原的改良LAMP构建物、包含抗原或重组抗原的DNA疫苗来加强所述应答。这些异源初免-加强免疫接种引发与通过用相同载体初免和加强所能实现的相比高度和广度更大的免疫应答。使用包含抗原的改良LAMP构建物的初免启动了记忆细胞；所述加强步骤扩大了所述记忆应答。优选地，所述两种不同药剂的使用不引起针对彼此的应答，因此不干扰彼此的活性。在初免和/或加强步骤中特别考虑到了抗原的混合物。加强可以进行一次或多次。
当在本文中使用时，“杂交”是指其中一个或多个多核苷酸进行反应以形成通过核苷酸残基的碱基之间的氢键键合稳定化的复合体的反应。所述氢键键合可以通过Watson-Crick碱基配对、Hoogstein结合或以任何其他序列特异性方式进行。所述复合体可以包含形成双链体结构的两条链、形成多链复合体的三条或更多条链、自我杂交的单链或它们的任何组合。杂交反应可以构成更加广泛的过程例如PCR反应的引发或核酶对多核苷酸的酶切割中的步骤。
当在本文中使用时，与另一个序列具有一定百分比(例如至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％)的“序列同一性”的多核苷酸或多核苷酸区域(或多肽或多肽区域)，意味着在比较所述两个序列时，在使用本领域中常用的软件程序最大对齐时，相同的碱基(或氨基酸)的百分比。
当在DNA序列的确定长度内至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、优选地至少约80％、且最优选地至少约90或95％的核苷酸匹配时，两个序列是“基本上同源的”或“基本上相似的”。同样地，当在多肽序列的确定长度内所述多肽的至少约50％、至少约60％、至少约66％、至少约70％、至少约75％、优选地至少约80％、且最优选地至少约90或95％的氨基酸残基匹配时，两个多肽序列是“基本上同源的”或“基本上相似的”。基本上同源的序列可以通过使用序列数据库中可用的标准软件比较所述序列来鉴定。基本上同源的核酸序列也可以在Southern杂交实验中，在例如为该特定系统定义的严紧条件下鉴定。确定适合的杂交条件在本领域的技术范围之内。例如，严紧条件可以是：在5xSSC和50％甲酰胺和42℃下杂交，并在0.1xSSC和0.1％十二烷基硫酸钠和60℃下洗涤。严紧杂交条件的其他实例包括：约25℃至约37℃的温育温度；约6xSSC至约10xSSC的杂交缓冲液浓度；约0％至约25％的甲酰胺浓度；和约6xSSC的洗涤溶液。温和杂交条件的实例包括：约40℃至约50℃的温育温度；约9xSSC至约2xSSC的缓冲液浓度；约30％至约50％的甲酰胺浓度；和约5xSSC至约2xSSC的洗涤溶液。高严紧条件的实例包括：约55℃至约68℃的温育温度；约1xSSC至约0.1xSSC的缓冲液浓度；约55％至约75％的甲酰胺浓度；和约1xSSC、0.1xSSC或去离子水的洗涤溶液。一般来说，杂交温育时间为5分钟至24小时，使用1、2或更多个洗涤步骤，并且洗涤温育时间为约1、2或15分钟。SSC是0.15M NaCl和15mM柠檬酸盐缓冲液。应该理解，可以利用使用其他缓冲体系的SSC的等效物。相似性可以通过测序来验证，但优选地，也或可选地使用适合于所考虑的特定结构域的测定法，通过功能(例如转运到胞内体区室的能力等)来验证。
术语“百分比(％)序列相似性”、“百分比(％)序列同一性”等，通常是指可以具有或不具有共同进化起源的核酸分子的不同核苷酸序列或多肽的氨基酸序列之间的同一性或对应性程度(参见Reeck等，同上)。序列同一性可以使用大量可公开获得的序列比较算法例如BLAST、FASTA、DNA Strider、GCG(Genetics Computer Group，《GCG软件包程序手册》(Program Manual for the GCG Package)，第7版，Madison,Wisconsin)等中的任一者来确定。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸分子之间的百分比同一性，出于最佳比较的目的将所述序列对齐。所述两个序列之间的百分比同一性是所述序列共有的一致位置的数目的函数(即百分比同一性＝一致位置的数目/位置(例如交叠的位置)的总数x 100)。在一个实施方式中，所述两个序列是相同长度或近似相同长度的。两个序列之间的百分比同一性可以使用与下面描述的相似的技术，在允许或不允许存在间隙的情况下来确定。在计算百分比序列同一性中，通常对完全匹配进行计数。
两个序列之间的百分比同一性的确定，可以使用数学算法来实现。用于两个序列的比较的数学算法的非限制性实例是Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1990,87:2264的算法，如在Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993,90:5873-5877中改良的。这种算法被并入到Altschul等，J.Mol.Biol.1990；215:403的NBLAST和XBLAST程序中。BLAST核苷酸搜索可以使用NBLAST程序，计分＝100，字长＝12来进行，以获得与本发明的序列同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可以使用XBLAST程序，计分＝50，字长＝3来进行，以获得与本发明的蛋白质序列同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的带间隙的比对，可以利用如Altschul等，Nucleic Acids Res.1997,25:3389中所描述的GappedBLAST。或者，可以使用PSI-Blast来进行检测分子之间的远缘关系的迭代搜索。参见Altschul等，(1997)，同上。当利用BLAST、Gapped BLAST和PSI-Blast程序时，可以使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的缺省参数。参见万维网上的ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/。
用于序列比较的数学算法的另一个非限制性实例是Myers和Miller，CABIOS1988；4:11-17的算法。这种算法被并入到ALIGN程序(2.0版)中，所述程序是GCG序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序来比较氨基酸序列时，可以使用PAM120权重残基表、12的间隙长度罚分和4的间隙罚分。
在优选实施方式中，两个氨基酸序列之间的百分比同一性使用Needleman和Wunsch的算法(J.Mol.Biol.1970,48:444-453)来确定，所述算法已被并入到GCG软件包中的GAP程序内(Accelrys,Burlington,MA；可以在万维网上的accelrys.com处获得)，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵，16、14、12、10、8、6或4的间隙权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在另一个优选实施方式中，两个核苷酸序列之间的百分比同一性使用GCG软件包中的GAP程序来确定，使用NWSgapdna.CMP矩阵，40、50、60、70或80的间隙权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。特别优选的一套参数(并且如果从业人员不确定应该使用什么参数来确定分子是否在本发明的序列同一性或同源性限度内的话，可以使用的一套参数)是使用Blossum62计分矩阵，并且间隙开放罚分为12，间隙扩展罚分为4，移码间隙罚分为5。
可以确定百分比同一性的另一个非限制性实例是通过使用软件程序，例如在《现代分子生物学方法》(Current Protocols In Molecular Biology)(F.M.Ausubel等主编，1987)附录30，第7.7.18节，表7.7.1中描述的软件程序。优选地，将缺省参数用于比对。优选的比对程序是使用缺省参数的BLAST。具体来说，优选的程序是BLASTN和BLASTP，使用下述缺省参数：Genetic code＝standard；filter＝none；strand＝both；cutoff＝60；expect＝10；Matrix＝BLOSUM62；Descriptions＝50sequences；sort by＝HIGH SCORE；Databases＝non-redundant,GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS translations+SwissProtein+SPupdate+PIR。这些程序的详情可以在下述英特网网址处找到：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST。
本文中描述的性质的统计分析可以通过标准检验例如t-检验、ANOVA或卡方检验来进行。通常，统计学显著性被计算到p＝0.05(5％)、更优选地p＝0.01、p＝0.001、p＝0.0001、p＝0.000001的水平。
也可以提供结构域序列的“保守修饰的变体”。对于特定核酸序列来说，保守修饰的变体是指编码一致或基本上一致的氨基酸序列的核酸，或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本上一致的序列。具体来说，简并密码子替换可以通过产生其中一个或多个所选择的(或所有)密码子的第三个位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基替换的序列来实现(Batzer等，1991,Nucleic Acids Res.19:5081；Ohtsuka等，1985,J.Biol.Chem.260:2605-2608；Rossolini等，1994,Mol.Cell.Probes 8:91-98)。
术语野生型蛋白的“生物活性片段”、“生物活性形式”、“生物活性等同物”和“功能性衍生物”，具有当使用适合于检测野生型蛋白的生物活性的测定法测量时至少基本上等于(例如不显著不同于)所述活性的生物活性。
当在本文中使用时，“体内”核酸递送、核酸转移、核酸疗法等，是指将改良LAMP构建物直接引入到生物体例如人类或非人类哺乳动物的身体中，由此将所述改良LAMP构建物引入到这种生物体体内的细胞中。
当在本文中使用时，术语“原位”是指一种类型的体内核酸递送，其中将所述改良LAMP构建物带到靶细胞附近(例如所述核酸不被全身性施用)。例如，原位递送方法包括但不限于将改良LAMP构建物直接注射在位点处(例如到组织例如肿瘤或心肌中)，通过开放手术部位将所述改良LAMP构建物与细胞或组织接触，或使用医疗接入装置例如导管将所述改良LAMP构建物递送到位点。
当在本文中使用时，术语“分离的”或“纯化的”意味着与所述多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段在自然界中通常缔合的细胞组分或其他组分分开(或基本上不含所述组分)。例如，对于改良LAMP构建物来说，分离的多核苷酸是与通常在染色体中与其缔合的5'和3'序列分开的多核苷酸。正如对本领域技术人员来说显而易见的，非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、抗体或其片段不需要“分离”以将它与它的天然存在的对应物区分开。基本上不含或基本上纯化的，意味着至少50％、优选地至少70％、更优选地至少80％、甚至更优选地至少90％的所述群体不含在自然界中与它们缔合的组分。
当在本文中使用时，“靶细胞”或“受体细胞”是指期望成为或已经成为本文中描述的改良LAMP构建物的受体的个体细胞或细胞。该术语旨在也包括单个细胞的后代，并且所述后代由于天然、偶然或故意的突变，可以不必定与原始亲代细胞完全一致(在形态上或在基因组或总DNA互补上)。靶细胞可以与其他细胞相接触(例如在组织中)，或者可能被发现在生物体的身体内循环。
当在本文中使用时，“对象”是脊椎动物，优选为哺乳动物，更优选为人类。哺乳动物包括但不限于鼠类、猿猴类、人类、家畜、运动动物(sport animal)和宠物。在其他优选实施方式中，所述“对象”是啮齿动物(例如大鼠、小鼠、兔、美洲驼、骆驼、奶牛、豚鼠、仓鼠、狗、猫、马、非人类灵长动物、猿猴(例如猴或猿)、猴(例如狨猴、狒狒、恒河猴)或猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)。在其他实施方式中，可以使用非人类哺乳动物，特别是常规作为模型用于证实在人类中的治疗效能的哺乳动物(例如鼠科动物、灵长动物、猪科动物、犬科动物或兔类动物)。
术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”可以互换并以单数或复数形式使用，是指已经历恶性转化，使得它们对于宿主生物体来说成为病理性的细胞。原代癌细胞(即从恶性转化的位点附近获得的细胞)可以通过已确立的技术、特别是组织学检查，与非癌性细胞容易地区分开。当在本文中使用时，癌细胞的定义不仅包括原代癌细胞，还包括源自于癌细胞祖先的任何细胞。这包括转移的癌细胞和源自于癌细胞的体外培养物和细胞系。当指称通常表现为实体肿瘤的癌症类型时，“临床可检测的”肿瘤是在肿瘤块的基础上可以例如通过诸如CAT扫描、MR成像、X-射线、超声或触诊的程序检测，和/或由于在可以从患者获得的样品中一种或多种癌症特异性抗原的表达而可以检测的肿瘤。
在优选实施方式中，所述癌症(包括所有发展阶段，包括增生)是腺癌、肉瘤、皮肤癌、黑素瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌(包括但不限于NSCLC、SCLC、鳞状细胞癌)、结肠直肠癌、肛门癌、直肠癌、宫颈癌、肝癌、头颈癌、口腔癌、唾液腺癌、食管癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDA)、肾细胞癌、胃癌、肾癌、多发性骨髓瘤或脑癌。
本文描述的改良LAMP构建物也可用于治疗过敏症，例如食物过敏(例如花生过敏原如Ara H1、H2和/或H3)，或环境过敏原例如花粉(树木花粉例如CRY J1或CRY J2)、狗毛、猫唾液或尘螨。其他疾病和/或障碍包括例如感染性疾病和糖尿病。
当在本文中使用时，术语“可药用载体”涵盖了任何标准制药载体，例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液例如油/水或水/油乳液，和各种不同类型的润湿剂。包含所述改良LAMP构建物的组合物还可以包括稳定剂和防腐剂。对于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见《马丁雷明顿药物科学》(Martin Remington's Pharm.Sci.)第15版(Mack Publ.Co.,Easton(1975))。
当所述改良LAMP构建物已被引入到细胞内部时，所述细胞已被这些核酸“转化”、“转导”或“转染”。转化DNA可以与或不与构成细胞基因组的染色体DNA整合(共价连接)。例如，在原核生物、酵母和哺乳动物细胞中，所述改良LAMP构建物可以维持在游离体元件例如质粒上。在真核细胞中，稳定转化的细胞是其中所述改良LAMP构建物已整合在染色体中使得它通过染色体复制被子细胞继承的细胞。这种稳定性由所述真核细胞建立包含含有所述改良LAMP构建物的子细胞群体的细胞系或克隆的能力所证实。“克隆”是通过有丝分裂从单一细胞或共同祖先产生的细胞群体。“细胞系”是能够在体外稳定生长许多代(例如至少约10代)的原代细胞的克隆。
当在本文中使用时，“有效量”是足以实现有益或所需结果的量，例如所述改良LAMP构建物转化和/或表达和/或达到所需治疗终点的有效量。有效量可以在一次或多次施用、应用或给药中施用。在一种情况下，改良LAMP构建物的有效量是足以在包含至少两个细胞的细胞群体中转化/转导/转染至少一个细胞的量。
当在本文中使用时，“治疗有效量”在本文中用于表示足以防止、校正异常的生理响应和/或使异常的生理响应正常化的量。在一种情况下，“治疗有效量”是足以将疾病的临床显著特征例如过敏反应、肿瘤块尺寸、抗体产生、细胞因子产生、发热或白细胞计数等降低至少约30％、更优选地至少50％、最优选地至少90％的量。
“抗体”是结合特定抗原的任何免疫球蛋白，包括抗体及其片段。所述术语涵盖了多克隆、单克隆和嵌合抗体(例如双特异性抗体)。“抗体结合部位”是抗体分子的包含特异性结合抗原的重链和轻链可变区和高变区的结构部分。示例性的抗体分子是完整免疫球蛋白分子、基本上完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的含有补位的那些部分，包括Fab、Fab'、F(ab')2和F(v)部分，所述部分优选用于本文描述的治疗方法中。因此，术语抗体不仅涵盖了全抗体分子，而且涵盖了抗体片段以及抗体和抗体片段的变体(包括衍生物例如融合蛋白)。在本申请中用术语“抗体”描述的分子的实例包括但不限于：单链Fv(scFv)，Fab片段，Fab'片段，F(ab')2，二硫键连接的Fv(sdFv)，Fv，以及包含VL或VH任一结构域或由其构成的片段。当在本文中使用时，术语“单链Fv”或“scFv”是指包含与抗体的VH结构域相连的抗体的VL结构域的多肽。参见Carter(2006)Nature Rev.Immunol.6:243。
此外，本发明的抗体包括但不限于单克隆、多特异性、双特异性、人类、人源化、小鼠或嵌合抗体，单链抗体，骆驼抗体，Fab片段，F(ab')片段，抗独特型(抗Id)抗体(包括例如针对本发明的抗体的抗Id抗体)，结构域抗体和任何上述抗体的表位结合片段。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
最优选地，所述抗体是人类抗体。当在本文中使用时，“人类”抗体包括具有人类免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并包括从人类免疫球蛋白文库和已被遗传工程改造成生产人类抗体的异种移植小鼠或其他生物体分离的抗体。本文中描述的改良LAMP构建物可以与在示例性流程中所描述的用于产生人类抗体和人类单克隆抗体的已知技术相组合使用，参见例如PCT公布WO 98/24893、WO 92/01047、WO 96/34096、WO 96/33735、欧洲专利号0 598877、美国专利号5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318、5,885,793、5,916,771和5,939,598，以及Lonberg和Huszar，Int.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。
人类抗体或“人源化”嵌合单克隆抗体可以使用所述改良LAMP构建物与本文中描述的或本领域中另外已知的技术相组合来生产。例如，用于生产嵌合抗体的标准方法在本领域中是已知的。对于综述，参见下述参考文献：Morrison,Science 229:1202(1985)；Oi等，BioTechniques 4:214(1986)；Cabilly等，美国专利号4,816,567；Taniguchi等，EP171496；Morrison等，EP 173494；Neuberger等，WO 8601533；Robinson等，WO 8702671；Boulianne等，Nature 312:643(1984)；Neuberger等，Nature 314:268(1985)。
本发明的抗体可以是单价、二价、三价或多价的。例如，单价scFv可以通过化学方法或通过与另一种蛋白质或物质缔合被多聚体化。融合到六聚组氨酸标签或Flag标签的scFv可以使用Ni-NTA琼脂糖(Qiagen)或使用抗Flag抗体(Stratagene,Inc.)被多聚体化。此外，所述改良LAMP构建物可用于产生针对所述改良LAMP构建物中含有的编码的抗原的单特异性、双特异性、三特异性或更高的多特异性。参见例如PCT公布WO 93/17715、WO 92/08802、WO 91/00360、WO 92/05793；Tutt等，J.Immunol.147:60-69(1991)；美国专利号4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819；Kostelny等，J.Immunol.148:1547-1553(1992)。
“表位”是通常由短的肽序列或寡糖构成，被免疫系统的组分特异性识别或特异性结合的结构。通常已显示T-细胞表位是直链寡肽。如果两个表位可以被同一抗体特异性结合，则它们彼此对应。如果两个表位都能结合到相同的B细胞受体或相同的T细胞受体，并且一个抗体与其表位的结合基本上阻止了被另一个表位结合(例如低于约30％、优选地低于约20％、更优选地低于约10％、5％、1％或约0.1％的另一个表位结合)，则两个表位彼此对应。在本发明中，多个表位可以组成抗原。
当在本文中使用时，术语“抗原”或“感兴趣的抗原”覆盖了由克隆到所述改良LAMP构建物中的多核苷酸序列编码的任何多肽序列，其被用于引发先天性或适应性免疫应答。“抗原”涵盖了克隆在所述改良LAMP构建物中的单个抗原以及多个抗原性序列(源自于相同或不同蛋白)两者。
当在本文中使用时，术语“抗原呈递细胞”包括在表面上呈递与主要组织相容性复合物分子或其部分或一种或多种非经典MHC分子或其部分相结合的抗原的任何细胞。适合的APC的实例在下文中详细讨论，并且包括但不限于完整细胞例如巨噬细胞、树突状细胞、B细胞、杂交APC和培养的抗原呈递细胞。
当在本文中使用时，“工程化改造的抗原呈递细胞”是指在其表面上具有非天然分子组成部分的抗原呈递细胞。例如，这种细胞可以在其表面上不天然具有辅助刺激分子，或者在其表面上除了天然辅助刺激分子之外可以还具有另外的人工辅助刺激分子，或者可能在其表面上表达非天然的II类分子。在优选实施方式中，所述工程化改造的抗原呈递细胞在其表面上具有从所述改良LAMP构建物表达的抗原。
当在本文中使用时，“免疫效应细胞”是指能够结合抗原并介导免疫应答的细胞。这些细胞包括但不限于T细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，例如CTL细胞系、CTL克隆和来自于肿瘤、炎性或其他浸润物的CTL。
当在本文中使用时，“部分人类”是指具有来自于人类和非人类脊椎动物两者的序列的核酸。在部分人类序列的情形中，所述部分人类核酸具有人类免疫球蛋白编码区的序列和基于所述非人类脊椎动物的内源性免疫球蛋白区的非编码序列的序列。当指称来自于非人类脊椎动物的内源性非编码序列时，术语“基于”是指对应于所述非编码序列，并与所述宿主脊椎动物例如所述ES细胞所源自的非人类脊椎动物的内源性基因座的非编码序列具有相对高的同源性程度的序列。优选地，所述非编码序列与包含所述非编码序列的部分人类分子已被引入到其中的非人类脊椎动物宿主细胞的内源性基因座中存在的相应非编码序列具有至少80％、更优选地90％的同源性。
当在本文中使用时，术语“免疫球蛋白可变区”是指编码抗体分子的全部或一部分可变区的核苷酸序列或控制抗体分子的表达的全部或一部分调控核苷酸序列。用于重链的免疫球蛋白区可以包括但不限于V、D、J和转换区的全部或一部分，包括内含子。用于轻链的免疫球蛋白区可以包括但不限于与轻链恒定区基因相关或相邻的V和J区、它们的上游侧翼序列、内含子。
“转基因动物”意味着具有作为染色体外元件存在于其部分细胞中或稳定整合在其种系DNA中(即在其大多数或所有细胞的基因组序列中)的外源核酸序列的非人类动物，通常为哺乳动物。在产生包含人类序列的转基因动物中，按照本领域中公知的方法，通过例如所述宿主动物的胚胎或胚胎干细胞的遗传操作，将部分人类核酸引入到这些转基因动物的种系中。
“载体”包括不论是否自我复制，可用于转化或转染细胞的质粒和病毒和任何DNA或RNA分子。
当在本文中使用时，“遗传修饰”是指对细胞的正常核苷酸的任何添加、缺失或破坏。本领域公认的方法包括病毒介导的基因转移、脂质体介导的转移、转化、转染和转导，例如病毒介导的基因转移如使用基于DNA病毒例如腺病毒、腺相关病毒和疱疹病毒的改良LAMP构建物以及基于反转录病毒的载体。
除非另有指明，否则本发明的实践利用在本领域技术范围之内的常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术。这些技术在文献中充分解释。参见例如Maniatis,Fritsch&Sambrook，《分子克隆实验指南》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(1982)；《DNA克隆实用方法》(DNA Cloning:A Practical Approach)，第I和II卷(D.N.Glover主编，1985)；《寡核苷酸合成》(Oligonucleotide Synthesis)(M.J.Gait主编，1984)；《核酸杂交》(Nucleic Acid Hybridization)(B.D.Hames&S.J.Higgins主编，1985)；《转录和翻译》(Transcription and Translation)(B.D.Hames&S.I.Higgins主编，1984)；《动物细胞培养》(Animal Cell Culture)(R.I.Freshney主编，1986)；《固定化细胞和酶》(ImmobilizedCells and Enzymes)(IRL Press，1986)；B.Perbal，《分子克隆实用指南》(A PracticalGuide to Molecular Cloning)(1984)。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的意义。出于描述和公开可以与目前描述的发明相结合使用的装置、制剂和方法的目的，本文中提到的所有出版物通过引用并入本文。
LAMP构建物
正如从cDNA克隆所推演的(Chen等，J.Biol.Chem.263:8754,1988)，LAMP-1由约382个氨基酸的多肽核心构成，具有大的(346个残基)腔内氨基端结构域，然后是24个残基的疏水性跨膜区和短的(12个残基)羧基端胞质尾区。参见图2A和2B。所述腔内结构域被高度糖基化，被约20个天冬酰胺连接的复合体类型的寡糖取代，并由被富含脯氨酸/丝氨酸的铰链区分隔开的两个大约160个残基的“同源结构域”构成。每个这些同源结构域含有4个均匀间隔的半胱氨酸残基，二硫键合形成4个36-38个残基的环，其对称地位于腔内结构域的两半之内(Arterburn等，J.Biol.Chem.265:7419,1990；也参见Chen等，J.Biol.Chem.25:263(18):8754-8,1988)。图2A示意性示出了LAMP-1、LAMP-2、LAMP-3、Endolyn、LIMBIC、LAMP5或Macrosailin之间的保守结构域。
以前报道的LAMP构建物包含采取下面这种特定排列方式的下述元件：
(a)LAMP-1蛋白的完整腔内结构域，所述抗原，然后是LAMP-1蛋白的完整跨膜/胞质尾区；或
(b)所述抗原和LAMP-1蛋白的完整跨膜/胞质尾区。
在实例(a)中，所述抗原性序列被插入到LAMP-1蛋白的完整腔内结构域与LAMP-1的完整跨膜结构域/胞质尾区之间。已显示两种构建物成功地将抗原性序列靶向到溶酶体/胞内体，如图1中所示将被称为“完全LAMP构建物”，相比于本文中描述的改良LAMP构建物ILC1-ILC6。本文中描述的改良LAMP构建物不包括所述在现有技术中描述的完全LAMP构建物。
尽管在文献中已广泛报道了比LAMP-1的完整腔内结构域更小的片段在产生稳健的免疫应答中不是有效的(参见例如Godinho等)，但本发明人出人意料地发现，采取某些排列方式的特定片段事实上有效地将抗原呈递到免疫系统，产生稳健的免疫应答，包括产生不同的抗体谱。例如，本发明人已鉴定到，对产生稳健的免疫应答有效的最小LAMP腔内结构域片段不是所述完整腔内结构域(正如在文献中广泛报道的)，而是LAMP蛋白的腔内结构域的单个同源结构域。
例如，构建物可以不包含所述完整腔内结构域，而是代之以包含LAMP蛋白的腔内结构域的单个同源结构域。当在本文中使用时，所述“同源结构域”如图3-10中所示包含至少4个均匀间隔的半胱氨酸残基。如图3-10中所示，在每个同源结构域中这些半胱氨酸残基被标注为1、2、3和4(并且在LIMP-2和Macrosailin中鉴定到5个半胱氨酸，在LIMBIC中鉴定到6个半胱氨酸，在Endolyn中鉴定到8个半胱氨酸)，并在本文中被定义为“半胱氨酸保守片段”。另外的氨基酸可以被包括到所述半胱氨酸保守片段的N-端末端和/或C-端末端，以产生多达并包括LAMP蛋白的完整同源结构域。这些另外添加的氨基酸可以源自于所述半胱氨酸保守片段所源自的同源结构域或其他LAMP蛋白同源结构域。因此，当在本文中使用时，LAMP同源结构域包含一个半胱氨酸保守片段和/或由一个半胱氨酸保守片段构成。至少两个LAMP同源结构域组成了LAMP-1、LAMP-2、LAMP-3或Endolyn的腔内结构域。
具体来说，在一个优选实施方式中，所述改良LAMP构建物包含融合到LAMP蛋白的腔内结构域的N-端的至少一个感兴趣的抗原、LAMP蛋白的至少一个同源结构域或LAMP蛋白的至少一个半胱氨酸保守片段。参见例如图1的ILC-2和ILC-6。在优选实施方式中，这些构建物还包含LAMP蛋白的跨膜结构域和/或LAMP蛋白的胞浆尾区。在其他优选实施方式中，当抗原含有跨膜结构域时，所述LAMP蛋白的跨膜结构域和/或LAMP蛋白的胞浆尾区是非必需的。在优选实施方式中，在所述改良LAMP构建物中包括两个同源结构域(例如图1的ILC-1)。在其他优选实施方式中，所述两个同源结构域源自于LAMP-1、LAMP-2、LAMP-3或Endolyn蛋白。或者，所述两个同源结构域源自于不同的LAMP蛋白。在这些包含两个同源结构域的构建物中，也可以包括LAMP铰链结构域。本段中描述的改良LAMP构建物相对于现有技术来说是出人意料的，因为所述抗原总是被放置在所述完整腔内LAMP-1结构域与完整LAMP-1跨膜/胞质尾区之间，因为尚未报道所述腔内结构域的片段在产生稳健的免疫应答中有效。
在另一个优选实施方式中，所述改良LAMP构建物包含融合到LAMP蛋白的单个同源结构域或LAMP蛋白的单个半胱氨酸保守片段的C-端的至少一个感兴趣的抗原。参见例如图1中的ILC-3和ILC-5。在优选实施方式中，这些构建物还包含LAMP蛋白的跨膜结构域和/或LAMP蛋白的胞浆尾区。在其他优选实施方式中，当抗原含有跨膜结构域时，所述LAMP蛋白的跨膜结构域和/或LAMP蛋白的胞浆尾区是非必需的。如上所述，本段中描述的改良LAMP构建物相对于现有技术来说是出人意料的。
在另一个优选实施方式中，所述改良LAMP构建物包含融合在LAMP蛋白的第一同源结构域与LAMP蛋白的第二同源结构域之间(或至少在两个半胱氨酸保守片段之间)的至少一个感兴趣的抗原。参见例如图1的ILC-4。在优选实施方式中，这些构建物还包含LAMP蛋白的跨膜结构域和/或LAMP蛋白的胞浆尾区。在优选实施方式中，所述两个同源结构域源自于LAMP-1、LAMP-2、LAMP-3或Endolyn蛋白。在这些构建物中，所述抗原可以被放置在LAMP铰链区中。或者，可以使用来自于两种不同LAMP蛋白的两个同源结构域。如上所述，这种融合在两个LAMP同源结构域(包括半胱氨酸保守片段)之间的至少一个感兴趣的抗原的排列方式相对于现有技术来说是出人意料的。
上文定义的每种改良LAMP构建物可以使用图中定义的结构域来产生。例如，具体设想了例如包括在图1中示出的改良LAMP构建物中的结构域可以起源于从直系同源序列衍生的序列。参见例如图3-10。明确设想了对于直系同源系列来说，在图2A和2B中定义的对等结构域可用于产生图1中示出的改良LAMP构建物。此外，图3-10中示出的直系同源序列是可用于产生所述结构域的序列的代表。鉴定其他直系同源序列和/或同种型并将它们与图3-10中示出的比对进行比较，完全在本领域的技术范围之内。因此，通过使用图3-10中示出的比对为人类LAMP蛋白鉴定图2A和2B中定义的对等边界，人们可以产生图1中示出的改良LAMP构建物。
正如专业技术人员充分理解的，每个结构域的边界是近似值，并且在克隆考虑和限制性酶放置的基础上可以调整至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。因此，当特定结构域(例如LAMP同源结构域)被包括在所述改良LAMP构建物中时，所述结构域的起点和终点可以参照图2B中定义的边界调整至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。
上文描述的每个所述改良LAMP构建物可以另外包含信号序列和/或出于克隆目的在每个结构域之间包含另外的氨基酸，正如本领域中公知的。此外，所述LAMP同源结构域、LAMP腔内结构域、LAMP跨膜结构域和/或LAMP胞浆尾区结构域可以起源于相同的LAMP蛋白(例如人类LAMP-1)或不同的LAMP蛋白(例如腔内结构域来自于人类LAMP-1并且跨膜结构域来自于人类LAMP-2，和/或同一基因家族(例如LAMP-1)或不同基因家族(LAMP-1和LAMP-2)中的直系同源结构域的混合)。
设想了所描述的LAMP构建物的多肽变体。例如，与本文中描述的任何改良LAMP构建物具有至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、96％、97％、98％或99％同一性的多肽，以及编码这些变体的多核苷酸。所述改良LAMP构建物的变体保留了通过将所述抗原性序列靶向溶酶体而起作用的能力。例如，修饰的腔内序列必须保留以与原始的结构域序列相比至少约50％、至少约60％、至少70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％的效能，即使包含所述嵌合序列的细胞产生足够的抗原呈递以使其增强免疫应答的效能，将膜和非膜抗原性材料两者转运到胞内体区室的能力。在一种情况下，通过构建含有卵清蛋白的良好表征的抗原性结构域、含有推测的溶酶体/胞内体靶向信号的蛋白的跨膜结构域和胞质结构域的改良LAMP构建物，可以鉴定含有适合的转运信号的序列。靶向的效率可以通过确定表达所述改良LAMP构建物的抗原呈递细胞刺激HA表位特异性II类MHC限制性T-细胞的能力来测量(参见例如美国专利号5,633,234的实施例5)。
编码任何所描述的改良LAMP构建物的多核苷酸，以及与本文中描述的任何改良LAMP构建物的多核苷酸具有至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、96％、97％、98％或99％同一性的多核苷酸，是本发明的优选实施方式。所述改良LAMP构建物的变体保留了通过将所述抗原性序列靶向到溶酶体而起作用的能力。例如，修饰的腔内序列必须保留以与原始的结构域序列相比至少约50％、至少约60％、至少70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％的效能，即使包含所述嵌合序列的细胞产生足够的抗原呈递以使其增强免疫应答的效能，将膜和非膜抗原性材料两者转运到胞内体区室的能力。在一种情况下，通过构建含有卵清蛋白的良好表征的抗原性结构域、含有推测的溶酶体/胞内体靶向信号的蛋白的跨膜结构域和胞质结构域的改良LAMP构建物，可以鉴定含有适合的转运信号的序列。靶向的效率可以通过确定表达所述改良LAMP构建物的抗原呈递细胞刺激HA表位特异性II类MHC限制性T-细胞的能力来测量(参见例如美国专利号5,633,234的实施例5)。
编码改良LAMP构建物的序列的组装
用于构建包含所述感兴趣的抗原的改良LAMP构建物的程序在本领域中是公知的(参见例如Williams等，J.Cell Biol.111:955,1990)。编码所需区段的DNA序列可以从容易获得的重组DNA材料例如可以从美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection,12301Parklawn Drive,Rockville,Md.20852,U.S.A.)或从含有所需DNA的DNA文库获得的重组DNA材料来获得。
例如，使用重组DNA方法的常规程序，可以将对应于所需结构域序列的DNA区段与适合的控制和信号序列组装。参见例如在美国专利号4,593,002和Langford等，Molec.Cell.Biol.6:3191,1986中所描述的。
编码蛋白质或多肽的DNA序列可以被化学合成或通过几种方法之一被分离。待合成的DNA序列可以被设计成具有对所需氨基酸序列适合的密码子。通常，人们将选择对在其中表达所述序列的目标宿主来说优选的密码子。完整序列可以从通过标准方法制备并组装成完整编码序列的交叠的寡核苷酸组装。参见例如Edge,Nature 292:756,1981；Nambair等，Science 223:1299,1984；Jay等，J.Biol.Chem.259:6311,1984。
在一种情况下，使用聚合酶链反应单个地分离编码所述改良LAMP构建物的结构域序列的一种或多种核酸(M.A.Innis等，《PCR方案：方法和应用指南》(PCR Protocols:AGuide to Methods and Applications)，Academic Press,1990)。所述结构域优选地从已知含有它们的可公开获得的克隆分离，但是它们也可以从基因组DNA或cDNA文库分离。优选地，分离的片段在边缘具有相容的限制性内切核酸酶位点，其允许构建编码所述抗原序列的改良LAMP构建物。这种技术对于本领域技术人员来说是公知的。结构域序列可以彼此直接融合(例如没有居间序列)或插入到彼此之中(例如其中结构域序列是不连续的)，或者可以被居间序列(例如连接物序列)分隔开。
用于制备寡核苷酸引物、探针和DNA文库以及通过核酸杂交对它们进行筛选的基本策略，对于本领域技术人员来说是公知的。参见例如Sambrook等，1989，同上；Perbal，1984，同上。适合的基因组DNA或cDNA文库的构建在本领域的技术范围之内。参见例如Perbal，1984，同上。或者，适合的DNA文库或可公开获得的克隆可以从生物研究材料的供应商例如Clonetech和Stratagene获得，以及从公共保藏处例如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)获得。
选择可以通过从DNA的表达文库表达序列并通过免疫学方法检测表达的肽来实现。选择表达结合到MHC II分子并结合到所需抗体/T细胞受体的肽的克隆。这些选择程序对于本领域普通技术人员来说是公知的(参见例如Sambrook等，1989，同上)。
在含有所需多肽序列的编码序列的克隆被制备或分离后，可以将所述序列克隆到任何适合的载体中，所述载体优选地包含用于在宿主细胞中维持所述序列的复制起点。
核酸递送媒介
在一种情况下，将包含改良LAMP构建物的疫苗组合物引入到细胞中。所述细胞可以是用于复制所述核酸或用于表达所述改良LAMP构建物的宿主细胞。优选地，用于表达所述改良LAMP构建物的宿主细胞是抗原呈递细胞(在下文进一步描述)。
在优选实施方式中，所述改良LAMP构建物还包含用于插入到靶细胞中的多核苷酸序列和可操作地连接到所述多核苷酸序列以控制它在所述细胞中的表达(例如转录和/或翻译)的表达控制序列。实例包括质粒、噬菌体、自主复制序列(ARS)、着丝粒和能够在体外或在宿主细胞(例如细菌、酵母或昆虫细胞)和/或靶细胞(例如哺乳动物细胞、优选为抗原呈递细胞)中复制或被复制和/或将所述编码改良LAMP构建物的序列传送到靶细胞内的所需位置的其他序列。
重组表达载体可以源自于容易感染动物(包括人、马、奶牛、猪、美洲驼、长颈鹿、狗、猫或鸡)的微生物。优选的载体包括已被用作活疫苗的载体，例如痘苗。这些重组体可以被直接接种到宿主中，不仅提供针对所述微生物载体的免疫力，而且表达外来抗原。本文中设想作为活重组疫苗的优选载体包括RNA病毒、腺病毒、疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、以及痘苗和其他痘病毒，正如在例如Flexner，Adv.Pharmacol.21:51,1990中教导的。
表达控制序列包括但不限于结合RNA聚合酶的启动子序列、分别结合到转录激活子和阻遏物的增强子序列或负调控元件和/或用于核糖体结合的翻译起始序列。例如，细菌表达载体可以包括启动子例如lac启动子和用于转录起始的序列、Shine-Dalgarno序列和起始密码子AUG(Sambrook等，1989，同上)。同样地，真核表达载体优选地包括用于RNA聚合酶II的异源、同源或嵌合启动子、下游多腺苷化信号、起始密码子AUG和用于核糖体脱离的终止密码子。
表达控制序列可以从天然存在的基因获得，或者可以被设计。设计的表达控制序列包括但不限于突变的和/或嵌合的表达控制序列或者合成或克隆的共有序列。含有启动子和多核苷酸被可操作地连接到其中的克隆位点的载体，在本领域中是公知的。这些载体能够在体外或体内转录RNA，并且可以从诸如Stratagene(La Jolla,Calif.)和PromegaBiotech(Madison,Wis.)的来源商购。
为了优化表达和/或转录，可能必需去除、添加或改变所述载体的5'和/或3'非翻译部分，以消除额外的或可替选的翻译起始密码子或可能在转录或翻译水平上干扰或降低表达的其他序列。或者，可以将共有核糖体结合位点插入到紧邻起始密码子的5'以增强表达。广范围的各种不同表达控制序列——控制可操作地连接到它的DNA序列的表达的序列——可用于这些载体中，以表达本发明的DNA序列。这些有用的表达控制序列包括例如SV40、CMV、痘苗病毒、多瘤病毒、腺病毒、疱疹病毒的早期或晚期启动子和已知控制哺乳动物细胞的基因表达的其他序列，及其各种不同组合。
在一种情况下，所述改良LAMP构建物包含用于复制所述载体的复制起点。优选地，所述起点在至少一种类型的宿主细胞中起作用，所述宿主细胞可用于产生足够拷贝数的序列用于递送到靶细胞。因此，适合的起点包括但不限于在细菌细胞(例如埃希氏杆菌(Escherichia sp.)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、变形杆菌(Proteus sp.)、梭菌(Clostridium sp.)、克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)、链霉菌(Streptomyces sp.)和假单胞菌(Pseudomonas sp.))、酵母(例如酿酒酵母(Saccharamyces sp.)或毕赤酵母(Pichia sp.))、昆虫细胞和哺乳动物细胞中起作用的起点。在一种优选情况下，提供了在所述核酸递送媒介被引入到其中的靶细胞(例如哺乳动物细胞如人类细胞)中起作用的复制起点。在另一种情况下，提供了至少两个复制起点，一个在宿主细胞中起作用，一个在靶细胞中起作用。
所述改良LAMP构建物可以可替选地或附加性地包含促进所述核酸递送载体的至少一部分整合到靶细胞染色体中的序列。例如，所述改良LAMP构建物可以包含与靶细胞的染色体DNA同源的区域。在一种情况下，所述递送载体包含与编码所述改良LAMP构建物的核酸序列侧接的两个或更多个重组位点。
所述载体可以另外包含可检测和/或可选择的标记物，以确认所述载体已被成功地引入到靶细胞中和/或可以被所述靶细胞表达。这些标记物可以编码活性例如但不限于RNA、肽或蛋白质的产生，或者可以提供用于RNA、肽、蛋白质、无机和有机化合物或组合物等的结合位点。
可检测/可选择标记物基因的实例包括但不限于：编码提供针对原本有毒的化合物(例如抗生素)的抗性的产物的DNA区段；编码在受体细胞中原本缺少的产物的DNA区段(例如tRNA基因、营养缺陷标记物)；编码抑制基因产物的活性的产物的DNA区段；编码可以被容易地鉴定的产物(例如表型标记物例如β-半乳糖苷酶、荧光蛋白(GFP、CFP、YFG、BFP、RFP、EGFP、EYFP、EBFP、dsRed、其突变、修饰或增强的形式等)和细胞表面蛋白)的DNA区段；结合原本对细胞存活和/或功能有害的产物的DNA区段；原本抑制其他核酸区段的活性的DNA区段(例如反义寡核苷酸)；结合修饰底物的产物(例如限制性内切核酸酶)的DNA区段；可用于分离或鉴定所需分子的DNA区段(例如编码特异性蛋白结合位点的区段)；引物序列；在不存在时直接或间接提供对特定化合物的抗性或敏感性的DNA区段；和/或编码在受体细胞中有毒的产物的DNA区段。
所述标记物基因可作为标记物，用于证实成功的基因转移和/或用于分离表达被转移的基因的细胞和/或从细胞回收被转移的基因。例如，在一种情况下，所述标记物基因被用于分离和纯化表达所述改良LAMP构建物的抗原呈递细胞。
可以提供基本上相似的基因，例如与已知基因具有高于约50％、高于约70％、高于80％、高于约90％并且优选地高于约95％的同一性的基因。基本上相似的结构域序列可以首先通过选择在严紧杂交条件下特异性杂交到感兴趣的结构域序列的序列来鉴定。执行测定法以确定同源、变体或修饰的结构域序列的适合性仅仅是对表达适合活性的序列进行筛选的问题。这些筛选在本领域中是常规的。
所述改良LAMP构建物可以被提供为裸露核酸，或与用于促进核酸进入到细胞中的一种或多种分子相结合提供在递送媒介中。适合的递送媒介包括但不限于：脂质体制剂，多肽，多糖，脂多糖，病毒制剂(例如包括病毒、病毒粒子、人工病毒包膜等)，细胞递送媒介等。
基于脂质的制剂
被设计用于促进改良LAMP构建物的细胞内递送的递送媒介，必须与非极性和极性环境两者相互作用(在例如质膜、组织液、细胞内的区室等中或其上)。因此，优选地，递送媒介被设计成含有极性和非极性结构域两者或用于将改良LAMP构建物易位到细胞内的易位序列。
具有极性和非极性结构域的化合物被称为两亲物。阳离子型两亲物具有能够在生理pH下或附近带正电荷的极性基团，用于与带负电荷的多核苷酸例如DNA相互作用。
本文描述的改良LAMP构建物可以被提供在包含脂质单层或双层的制剂中，以促进所述载体进行跨细胞膜转移。可以使用脂质体或任何形式的脂质膜例如平面脂质膜或完整细胞例如红细胞的细胞膜。脂质体制剂可以通过任何手段来施用，包括静脉内或口服施用。
脂质体和脂质体制剂可以按照标准方法来制备，并且在本领域中是公知的，参见例如Remington's；Akimaru,1995,Cytokines Mol.Ther.1:197-210；Alving,1995,Immunol.Rev.145:5-31；Szoka,1980,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9:467；美国专利号4,235,871；美国专利号4,501,728；和美国专利号4,837,028。在一种情况下，所述脂质体包含靶向分子，用于将脂质体：改良LAMP构建物复合物靶向到特定细胞类型。在特别优选的情况下，靶向分子包含用于靶组织中存在的血管或细胞表面上的生物分子(例如受体或配体)的结合配偶体(例如配体或受体)。
脂质体电荷是脂质体从血液清除的重要决定因素，其中带负电荷的脂质体被网状内皮系统更快地摄取(Juliano，1975，Biochem.Biophys.Res.Commun.63:651)并因此在血流中具有更短的半衰期。并入磷脂酰乙醇胺衍生物通过阻止脂质体聚集增加了循环时间。例如，将N-(ω-羧基)酰基酰胺基磷脂酰乙醇胺并入到L-α-二硬脂酰基磷脂酰胆碱的大的单层囊泡，急剧提高了体内脂质体循环寿命(参见例如Ahl，1997，Biochim.Biophys.Acta1329:370-382)。具有延长的循环半衰期的脂质体对于治疗和诊断用途来说通常是合乎需要的。关于药代动力学的一般性讨论，参见例如Remington's，第37-39章，Lee等，在《药代动力学分析实用方法》(Pharmacokinetic Analysis:A Practical Approach)(TechnomicPublishing AG,Basel,Switzerland 1996)中。
通常，使用约5至15摩尔％的带负电荷的磷脂例如磷脂酰甘油、磷酯酰丝氨酸或磷脂酰肌醇来制备脂质体。添加的带负电荷的磷脂例如磷脂酰甘油也起到阻止脂质体的自发聚集的作用，从而使尺寸较小的脂质体聚集体形成的风险最小化。浓度为至少约50摩尔％的膜硬化剂例如神经鞘磷脂或饱和的中性磷脂和5至15摩尔％的单唾液酸化神经节苷脂，也可以合乎需要地提供脂质体性质例如刚性(参见例如美国专利号4,837,028)。
此外，脂质体悬液可以包括脂质保护剂，其在储存时保护脂质以防自由基和脂质过氧化损伤。亲脂性自由基淬灭剂例如α-生育酚和水溶性铁特异性螯合剂例如ferrioxianine是优选的。
本发明的改良LAMP构建物可以包括尺寸不均一的多层囊泡。例如，可以将形成囊泡的脂质溶解在适合的有机溶剂或溶剂系统中，并在真空或惰性气体下干燥，以形成脂质薄膜。如果需要，可以将所述薄膜重新溶解在适合的溶剂例如叔丁醇中，然后冷冻干燥以形成采取更容易水合的粉末状形式的更均匀的脂质混合物。将这种薄膜用肽或多肽复合物的水溶液覆盖，并允许在搅拌下通常在15至60分钟的时间段内水合。通过在更剧烈的搅拌条件下水合所述脂质或通过添加增溶性去污剂例如脱氧胆酸盐，可以使得到的多层囊泡的尺寸分布向较小的尺寸转变。水合介质优选地包含浓度为最终脂质体悬液中脂质体的内部体积中所需的浓度的核酸。
在脂质体制备后，可以将所述脂质体按尺寸筛分，以获得所需的尺寸范围和相对窄的脂质体尺寸分布。一个优选的尺寸范围是约0.2至0.4微米，其允许所述脂质体悬液通过常规滤器、通常为0.22微米滤器过滤来除菌。如果所述脂质体已按尺寸筛分到约0.2至0.4微米，则过滤除菌可以在高通量的基础上进行。几种技术可用于将脂质体按尺寸筛分到所需尺寸(参见例如美国专利号4,737,323)。
适合的脂质包括但不限于DOTMA(Felgner等，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:7413-7417)、DOGS或TransfectainTM(Behr等，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:6982-6986)、DNERIE或DORIE(Felgner等，Methods 5:67-75)、DC-CHOL(Gao和Huang，1991，BBRC179:280-285)、DOTAPTM(McLachlan等，1995，Gene Therapy2:674-622)、LipofectamineRTM和甘油脂质化合物(参见例如EP901463和WO98/37916)。
适合于与所述改良LAMP构建物复合的其他分子包括阳离子型分子例如聚酰胺-胺(Haensler和Szoka，1993，Bioconjugate Chem.4:372-379)、树枝状聚赖氨酸(WO 95/24221)、聚乙烯亚胺(polyethylene irinine)或聚丙烯亚胺(polypropylene h-nine)(WO96/02655)、聚赖氨酸(美国专利号5,595,897；FR 2 719 316)、壳聚糖(美国专利号5,744,166)、DNA-明胶团聚体(参见例如美国专利号6,207,195；美国专利号6,025,337；美国专利号5,972,707)或DEAE葡聚糖(Lopata等，1984，Nucleic Acid Res.12:5707-5717)。
基于病毒的基因递送媒介
在一种情况下，所述改良LAMP构建物递送媒介包含病毒或病毒粒子。在这种情况下，优选地，所述改良LAMP构建物包含病毒载体。病毒载体例如反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和疱疹病毒，通常由两种组分构成，修饰的病毒基因组和包围它的外壳结构(参见例如Smith等，1995，Ann.Rev.Microbiol.49:807-838)，尽管有时病毒载体以裸露形式引入或用病毒蛋白之外的蛋白包被。大多数当前的载体具有与野生型病毒相似的外壳结构。这种结构包装并保护病毒核酸，并提供结合和进入靶细胞的手段。
优选地，包含本文中描述的改良LAMP构建物的病毒载体与野生型病毒基因组相比被修饰，以失去所述病毒在靶细胞中生长的能力，同时使所述病毒能够在用于制备感染性粒子的宿主细胞(例如包装或辅助细胞)中生长。载体核酸通常必需包含用于在辅助细胞系中复制和包装的顺式作用的病毒序列和用于调控被递送到靶细胞的多核苷酸的表达的表达控制序列。其他病毒功能在特定包装或辅助细胞系中反式表达，正如在本领域中已知的。
优选的改良LAMP构建物是从选自疱疹病毒、巨细胞病毒、泡沫病毒、慢病毒、Semliki森林病毒、AAV(腺相关病毒)、痘病毒、腺病毒和反转录病毒的病毒衍生的病毒载体。这些病毒载体在本领域中是公知的。
在一种优选情况下，使用的病毒载体是腺病毒载体。腺病毒基因组由约36kb的线性双链DNA分子构成，带有超过约30个完成病毒复制周期所必需的基因。早期基因分为4个区(E1至E4)，它们对于病毒复制来说是必需的，除了据信调节抗病毒宿主免疫应答的E3区之外。E1区(E1A和E1B)编码负责病毒基因组的转录调控的蛋白质。E2区基因(E2A和E2B)的表达导致病毒复制所需的多肽的合成。由E3区编码的蛋白质阻止由细胞毒性T细胞和肿瘤坏死因子造成的细胞溶解(Wold和Gooding，1991，Virology 184:1-8)。由E4区编码的蛋白质参与DNA复制、晚期基因表达和剪接以及宿主细胞关闭(Halbert等，1985，J.Virol.56:250-257)。晚期基因通常编码对病毒衣壳有贡献的结构蛋白。此外，腺病毒基因组带有顺式作用的5'和3'ITR(末端反向重复序列)和DNA复制所必需的包装序列。所述ITR带有DNA复制起点，而衣壳化区对于腺病毒DNA包装到感染性粒子中而言是必需的。
腺病毒载体可以被工程化改造成条件复制型(CRAd载体)，以便在特定细胞(例如增殖性细胞)中选择性复制，正如在Heise和Kim(2000,J.Clin.Invest.105:847-851)中所描述的。在另一种情况下，腺病毒载体对于E1功能来说是复制缺陷的(例如通过E1的完全或部分缺失或突变)。所述载体的腺病毒骨架可以包含其他修饰(一个或多个病毒基因中的缺失、插入或突变)。E2修饰的一个实例通过位于DBP(DNA结合蛋白)编码基因上的热敏突变来说明(Ensinger等，1972，J.Virol.10:328-339)。所述腺病毒序列也可以缺失全部或一部分E4区(参见例如EP 974 668；Christ等，2000，Human Gene Ther.11:415-427；Lusky等，1999，J.Virol.73:8308-8319)。非必需的E3区内的其他缺失可以允许被递送的多核苷酸的尺寸增加(Yeh等，1997，FASEB Journal 11:615-623)。然而，保留编码允许病毒避开免疫系统(Gooding等，1990，Critical Review of Immunology 10:53-71)或炎性反应(EP00440267.3)的多肽(例如gp19k)的全部或一部分E3序列，可以是有利的。
也可使用保留ITR和包装序列并包含实质性遗传修饰以废除病毒抗原的残留合成的第二代载体，以便提高所表达的基因在被转导细胞中的长期表达(参见例如WO 94/28152；Lusky等，1998，J.Virol 72:2022-2032)。
被引入到细胞中的所述改良LAMP构建物可以插入到病毒基因组的除了顺式作用序列之外的任何位置中。优选地，它被插入以代替缺失区(Ε1、E3和/或E4)，优选地在缺失的E1区内。
腺病毒可以源自于任何人类或动物来源，特别是犬类(例如CAV-1或CAV-2，Genbank参考号分别为CAVIGENOM和CAV77082)、禽类(Genbank参考号AAVEDSDNA)、牛类(例如BAV3；Reddy等，1998，J.Virol.72:1394 1402)、鼠类(Genbank参考号ADRMUSMAVI)、绵羊、猫科动物、猪或猿猴来源，或者可以是杂交病毒。可以使用任何血清型。然而，C亚类的人类腺病毒是优选的，特别是腺病毒2(Ad2)和5(Ad5)。这些病毒可以例如从ATCC获得。
腺病毒粒子或空的腺病毒衣壳也可用于通过病毒介导的辅助内化过程来转移改良LAMP构建物，如在美国专利号5,928,944中所述。这一过程可以在阳离子试剂例如聚碳烯或包含一个或多个脂质层的脂质囊泡存在下实现。
腺病毒粒子可以按照本领域中任何常规的技术(例如WO 96/17070)，使用互补细胞系或辅助病毒来制备和繁殖，所述互补细胞系或辅助病毒反式供应丢失的对于病毒复制而言必需的病毒基因。细胞系293(Graham等，1977，J.Gen.Virol.36:59-72)和PERC6(Fallaux等，1998，Human Gene Therapy 9:1909-1917)常用于补足E1缺失。其他细胞系已被工程化改造成补足缺陷的载体(Yeh等，1996，J.Virol.70:559-565；Kroughak和Graham，1995，Human Gene Ther.6:1575-1586；Wang等，1995，Gene Ther.2:775-783；Lusky等，1998，J.Virol.72:2022-203；EP 919627和WO 97/04119)。腺病毒粒子可以从培养上清液回收，但是也可以在裂解后从细胞回收，并任选地按照标准技术(例如层析、超离心，如在WO96/27677、WO 98/00524、WO 98/26048和WO 00/50573中所描述)进一步纯化。
细胞类型特异性靶向可以使用通过修饰病毒表面蛋白从具有广宿主范围的腺病毒衍生的载体来实现。例如，腺病毒感染的特异性由与允许细胞的表面处存在的细胞受体的附连来决定。就此而言，在腺病毒衣壳表面处存在的纤维和五邻体，在细胞附连中发挥关键作用(Defer等，1990，J.Virol.64:3661-3673)。因此，腺病毒的细胞靶向可以通过编码纤维和/或五邻体的病毒基因的遗传修饰以产生能够与独特的细胞表面受体特异性相互作用的修饰的纤维和/或五邻体来进行。这些修饰的实例描述在Wickarn等，1997，J.Virol.71:8221-8229；Arriberg等，1997，Virol.Chem 268:6866-6869；Roux等，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9079-9083；Miller和Vile，1995，FASEB J.9:190-199；WO93/09221和WO 95/28494中。
在特别优选的情况下，使用腺相关病毒序列作为载体。源自于人类细小病毒AAV-2(腺相关病毒2型)的载体是目前正在开发的最有前景的基因递送媒介之一。这种用于包装单链DNA的系统的几个特征表明它是用于递送的裸露DNA的可能的替选物。与其他病毒载体例如痘苗或腺病毒形成对比，主要的吸引人的特征在于AAV载体不表达任何病毒基因。疫苗构建物中包括的唯一病毒DNA序列是145bp的末端反向重复序列(ITR)。因此，与在使用裸露DNA的免疫接种中相同，表达的唯一基因是抗原或抗原嵌合体的基因。此外，已知AAV载体转导分裂和非分裂细胞两者，例如人类外周血单核细胞衍生的树突状细胞，具有持久的转基因表达，并具有口服和鼻内递送以产生粘膜免疫的可能性。此外，所需的DNA的量似乎大大减少几个数量级，最大应答在1010至1011个粒子或DNA拷贝的剂量下，形成对比的是裸露DNA的剂量为50ug或约1015个拷贝。
在一种情况下，通过用编码AAV ITR嵌合蛋白的构建物中包含的DNA和含有AAV编码区(AAV rep和cap基因)而没有ITR的AAV辅助质粒ACG2共转染适合的细胞系(例如人类293细胞)来包装AAV载体。随后将所述细胞用腺病毒Ad5感染。载体可以使用本领域中已知的方法(例如氯化铯密度梯度超离心)从细胞裂解物纯化，并验证以确保它们不含可检测的能够复制的AAV或腺病毒(例如通过细胞病变效应生物测定法)。可以使用在用蛋白酶K消化后制备的病毒DNA样品，通过定量PCR来确定AAV滴度。优选地，通过这种方法产生的载体滴度为每ml约5x1012至1x1013个DNase抗性粒子。
在其他情况下，使用反转录病毒载体。反转录病毒是一类整合型病毒，其使用病毒编码的反转录酶进行复制，以将病毒的RNA基因组复制成双链DNA，所述双链DNA被整合到感染细胞(例如靶细胞)的染色体DNA中。这些载体包括源自于鼠白血病病毒、特别是Moloney(Gilboa等，1988，Adv.Exp.Med.Biol.241:29)或Friend's FB29株系(WO 95/01447)的载体。通常，反转录病毒载体缺失病毒基因gag、pol和env的全部或一部分，并保留5'和3'LTR和衣壳化序列。这些元件可以被修饰以提高反转录病毒载体的表达水平或稳定性。这些修饰包括用反转录转座子之一例如VL30替换反转录病毒的衣壳化序列(参见例如美国专利号5,747,323)。优选地，所述改良LAMP构建物被插入到所述衣壳化序列下游，优选地以相对于反转录病毒基因组相反的方向。细胞特异性靶向可以通过抗体或抗体片段与反转录病毒的包膜蛋白的偶联来实现，正如本领域中已知的。
反转录病毒粒子在辅助病毒存在下或在适合的互补(包装)细胞系中制备，所述细胞系含有整合在其基因组中的对于所述反转录病毒载体来说有缺陷的反转录病毒基因(例如gag/pol和env)。这些细胞系描述在现有技术中(Miller和Rosman，1989，BioTechniques7:980；Danos和Mulligan，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:6460；Markowitz等，1988，Virol.167:400)。所述env基因的产物负责病毒粒子与靶细胞表面上存在的病毒受体的结合，并因此决定所述反转录病毒粒子的宿主范围。在本发明的情形中，使用含有兼嗜性包膜蛋白的包装细胞系例如PA317细胞(ATCC CRL 9078)或293EI6(WO97/35996)以允许感染人类和其他物种的靶细胞，是有利的。所述反转录病毒粒子优选地从培养上清液回收，并且可以任选地按照标准技术(例如层析、超离心)进一步纯化。
其他适合的病毒包括痘病毒。痘病毒科的几个成员的基因组已被作图并测序。痘病毒载体可以从痘病毒科的任何成员(特别是金丝雀痘、鸡痘和痘苗病毒)获得。适合的痘苗病毒包括但不限于Copenhagen株系(Goebel等，1990，Virol.179:247-266；Johnson等，1993，Virol.196:381-401)、Wyeth株系和修饰的Ankara(MVA)株系(Antoine等，1998，Virol.244:365-396)。用于构建痘苗病毒载体的一般性条件在本领域中是已知的(参见例如EP 83 286和EP 206 920；Mayr等，1975，Infection 3:6-14；Sutter和Moss，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10847-10851)。优选地，将感兴趣的多核苷酸插入到非必需基因座中，例如非编码基因间区或其失活或缺失不显著损害病毒生长和复制的任何基因。
痘病毒粒子如本领域中所述来制备(Piccini等，1987，Methods of Enzymology153:545-563；美国专利号4,769,330；美国专利号4,772,848；美国专利号4,603,112；美国专利号5,100,587和美国专利号5,179,993)。通常，构建供体质粒，通过在大肠埃希氏杆菌(E.coli)中生长进行扩增，并通过常规程序进行分离。然后，将它与痘病毒基因组一起引入到适合的细胞培养物(例如鸡胚成纤维细胞)中，以通过同源重组产生痘病毒粒子。它们可以从培养上清液或在裂解步骤(例如化学裂解、冷冻/融化、渗透压冲击、超声处理等)后从培养的细胞回收。可以使用连续的多轮噬斑纯化来去除污染性的野生型病毒。然后可以使用本领域中已知的技术(例如层析方法或在氯化铯或蔗糖梯度上超离心)来纯化病毒粒子。
在全球根除天花的战役中痘苗作为活病毒疫苗的使用，使得痘苗成为开发作为活重组疫苗载体的明显选择。已经报道了表达接近100种不同外来蛋白质的活重组痘苗病毒，它们中的许多是有效的实验性疫苗(由Moss和Flexner，1987综述)。由于它的基因组尺寸大，能够接受至少25,000个碱基对的外来DNA，以及它感染大多数真核细胞类型(包括昆虫细胞)的能力(出处同上)，痘苗作为表达载体是特别通用的。不同于其他DNA病毒，痘病毒专门在感染的细胞的细胞质内复制，降低了重组病毒DNA与宿主染色体进行遗传交换的可能性。已显示重组痘苗载体正确加工和表达来自于各种不同来源(包括人、其他哺乳动物、寄生虫、RNA和DNA病毒、细菌和噬菌体)的蛋白质。
编码外来蛋白质的DNA的表达受到宿主病毒调控元件，包括上游启动子序列和必要时RNA加工信号的控制。已通过同源重组进行了外来DNA在痘苗病毒基因组的非必需区中的插入(Panicali等，Proc.Nat'l.Acad.Sci,USA,79:4927,1982；Mackett等，Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,79:7415,1982)。
由于在插入位点处或其附近的转录调控元件，或通过更精确的遗传工程，可以发生所述改良LAMP构建物的抗原表达。已构建了极大地促进了外来基因的插入和表达的质粒载体(Mackett等，J.Virol,49:857,1982)。这些载体含有表达位点，其由痘苗转录启动子和用于插入侧接有来自于痘苗基因组的非必需区的DNA的外来编码序列的一个或多个独特的限制性内切核酸酶位点构成。启动子的选择决定了表达的时间(例如早期或晚期)和水平，而侧接的DNA序列决定了同源重组的位点。
通过这种程序产生的病毒粒子仅仅约千分之一是重组的。尽管重组病毒噬斑可以通过DNA杂交来鉴定，但已开发了高效的选择程序。通过使用非必需的痘苗病毒胸苷激酶(TK)基因的区段作为侧接序列，外来基因重组到TK基因座中并通过插入而使所述TK基因失活。TK病毒的选择通过在5-溴脱氧尿苷存在下在TK细胞中进行病毒噬斑测定法来实现。所述核苷类似物的磷酸化和随后致死性掺入到病毒DNA中，只发生在被TK+亲代病毒感染的细胞中。取决于转染和重组的效率，高达80％的噬斑是所需重组体，其余的是自发TK突变体。
含有大肠埃希氏杆菌β-半乳糖苷酶基因以及用于第二个基因的表达位点的质粒载体，允许将重组体与亲代病毒区分开的可替选方法(Chakrabarti等，Mol.Cell.Biol.,5:3403,1985)。由这些重组体形成的噬斑可以通过在添加适合的指示剂后形成的蓝色来正向鉴定。通过将TK选择和β-半乳糖苷酶表达两者组合，重组病毒被容易且快速地分离。然后通过在适合的细胞系中繁殖来扩增所述重组体，并通过适合的酶学、免疫学或物理程序检查插入基因的表达。
可以添加到痘苗病毒基因组的遗传信息的量的上限尚不知道。然而，接近25,000个碱基对的外来DNA的添加对病毒产量没有明显的有害效应(Smith等，Gene,25:21,1983)。在必要时，可以缺失痘苗病毒基因组的大的区段以提供额外的容量(Moss等，J.Virol.40:387,1981)。
病毒的衣壳分子可以包括靶向组成部分以促进靶向和/或进入到细胞中。适合的靶向分子包括但不限于：化学缀合物，脂质，糖脂，激素，糖，聚合物(例如PEG、聚赖氨酸、PEI等)，肽，多肽(参见例如WO 94/40958)，维生素，抗原，凝集素，抗体及其片段。优选地，这些靶向分子识别并结合到细胞特异性标记物、组织特异性标记物、细胞受体、病毒抗原、抗原性表位或肿瘤相关标记物。
包含基于病毒粒子的改良LAMP构建物的组合物可以配制成10至1014i.u.(感染单位)之间、优选地10至1011i.u.之间的药剂的形式。所述滴度可以通过常规技术确定。LAMP构建物的剂量优选地在0.01至10mg/kg之间，更特别地在0.1至2mg/kg之间。
自我复制RNA
自我复制RNA病毒载体也可使用本文中所描述的改良LAMP构建物来构建。例如，甲病毒、黄病毒、麻疹病毒和弹状病毒可用于产生自我复制RNA病毒疫苗。自我复制RNA病毒的优选株系包括但不限于狂犬病病毒(RABV)、水泡性口炎病毒(VSV)、西尼罗病毒、昆津病毒、塞姆利基森林病毒(SFV)、辛德毕斯病毒(SIN)和/或委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)。
自我复制RNA病毒在递送到组织中之后表达本源抗原，因此模拟活的减毒疫苗而没有回归致病性的风险。它们也刺激先天性免疫系统，因此增强应答。参见例如Ljungberg,K.，“自我复制的甲病毒RNA疫苗”(Self-replicating alphavirus RNA vaccines)，ExpertRev Vaccines(2):177-94(2015)；Lundstrom,K.，“癌症免疫疗法中的溶瘤甲病毒”(Oncolytic Alphaviruses in Cancer Immunotherapy)，Vaccines 5:9(2017)；Lundstrom,K.，“作为疫苗的复制子RNA病毒载体”(Replicon RNA Viral Vectors asVaccines)，Vaccines 4:39(2016)(整体通过引用并入本文)。包含本文中描述的改良LAMP构建物的自我复制疫苗的使用，也可用于初免-加强方案中。
此外，自我复制RNA病毒也可以如本文中所述用脂质体包封，以改进递送和靶向。使用包含本文中描述的改良LAMP构建物的自我复制RNA病毒的免疫接种可以提供抗原的更高的瞬时表达水平，导致产生中和抗体应答和在安全条件下针对致命激惹的保护作用。
基于细胞的递送媒介
本发明的改良LAMP构建物可以利用包含所述构建物的其它细胞(“递送细胞”)递送到靶细胞。将构建物引入到细胞中的方法在本领域中是已知的，并包括将DNA微注射到细胞的核中(Capechi等，1980，Cell 22:479-488)，用CaPO4转染(Chen和Okayama，1987，Mol.Cell Biol.7:2745 2752)，电穿孔(Chu等，1987，Nucleic Acid Res.15:1311-1326)，脂转染/脂质体融合(Feigner等，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:7413-7417)和粒子轰击(Yang等，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:9568-9572)。适合的细胞包括自体和非自体细胞，并且可以包括异种细胞。递送细胞可以被诱导成通过诱导它们的死亡(例如通过向这些细胞提供可诱导的自杀基因)来将它们的内含物递送到靶细胞。
辅助分子
本发明的包含改良LAMP构建物的组合物可以包含用于促进将改良LAMP构建物引入到细胞中和/或用于增强特定治疗效果和/或增加抗体生产的一种或多种辅助分子。
此外，本发明的包含改良LAMP构建物的组合物可以包括一种或多种稳定化物质例如脂质、核酸酶抑制剂、水凝胶、透明质酸酶(WO 98/53853)、胶原酶、聚合物、螯合剂(EP890362)，以便抑制在动物/人体内的降解和/或改善所述载体在靶细胞中的转染/感染。这些物质可以单独或组合(例如阳离子型和中性脂质)使用。
也已显示，腺病毒蛋白能够使胞内体失稳并增强DNA被摄入到细胞内。腺病毒与含有脂质复合的DNA载体的溶液的混合物或将DNA结合到使用蛋白质交联剂共价附连到腺病毒的聚赖氨酸，可以显著提高改良LAMP构建物的摄入和表达(参见例如Curiel等，1992，Am.I.Respir.Cell.Mol.Biol.6:247-252)。
宿主细胞
本发明的改良LAMP构建物可以在各种不同的宿主细胞中表达，包括但不限于：原核细胞(例如大肠埃希氏杆菌、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)、芽孢杆菌(Bacillussp.))，酵母细胞(例如酿酒酵母(Saccharomyces sp.))，昆虫细胞，线虫细胞，植物细胞，两栖类细胞(例如爪蟾)，禽类细胞，和哺乳动物细胞(例如人类细胞、小鼠细胞、哺乳动物细胞系、原代培养的哺乳动物细胞例如来自于解剖组织的)。
所述分子可以在从生物体分离的宿主细胞、作为生物体的一部分的宿主细胞或被引入到生物体中的宿主细胞中表达。在一种情况下，改良LAMP构建物在体外例如在培养物中在宿主细胞中表达。在另一种情况下，改良LAMP构建物在转基因生物体(例如转基因小鼠、大鼠、兔、猪、灵长动物等)中表达，所述生物体包括含有编码所述改良LAMP构建物的核酸的体细胞和/或生殖系细胞。用于构建转基因动物的方法在本领域中是已知的并且是常规的。
改良LAMP构建物也可以在体外被引入到细胞中，并且可以将所述细胞(例如干细胞、造血细胞、淋巴细胞等)引入到宿主生物体中。所述细胞对于宿主生物体来说可以是异源或自体的。例如，可以从所述宿主生物体获得细胞，将改良LAMP构建物在体外引入到所述细胞中，然后将所述细胞重新引入到宿主生物体中。
抗原呈递细胞
在本发明的优选情况下，将本文所述的改良LAMP构建物引入到天然或工程化的抗原呈递细胞中。
当在本文中使用时，术语“抗原呈递细胞”(APC)意指在其表面上呈递与主要组织相容性复合物分子、优选为II类分子或其部分结合的抗原的任何细胞。适合的APC的实例在下文中详细讨论，并且包括但不限于完整细胞例如巨噬细胞、树突状细胞、B细胞、杂交APC和培养的抗原呈递细胞。制造杂交APC的方法在本领域中已被描述并且已知。
树突状细胞(DC)是强效抗原呈递细胞。已显示DC提供T细胞活化和增殖所需的所有信号。这些信号可以被分为两种类型。为免疫应答提供特异性的第一种类型通过T-细胞受体/CD3(“TCR/CD3”)复合物与APC表面上由I或II类主要组织相容性复合物(上文定义的“MHC”)蛋白呈递的抗原性肽之间的相互作用介导。这种相互作用对于发生T细胞活化来说是必要的但不是充分的。事实上，在没有第二种类型的信号时，所述第一种类型的信号可以导致T细胞无反应性。被称为辅助刺激信号的第二种类型的信号既不是抗原特异性的也不是MHC限制的，并且在第一种类型的信号存在下可以引起T细胞的完全增殖应答和T细胞效应功能的诱导。
几种分子已显示出增强辅助刺激活性。它们包括但不限于热稳定抗原(HSA)、硫酸软骨素修饰的MHC恒定链(Ii-CS)、细胞内粘附分子I(ICAM-1)和APC表面上的B7辅助刺激分子及其在T细胞上的对应受体CD 28或CTLA-4。
其他重要的辅助刺激分子是CD40、CD54、CD80、CD86。当在本文中使用时，术语“辅助刺激分子”涵盖了当与T细胞表面上的TCR所结合的肽/MHC复合物一起作用时，提供了实现结合所述肽的T细胞的活化的辅助刺激效果的任何单一分子或分子的组合。因此，所述术语涵盖了APC上的B7或其他辅助刺激分子及其片段(单独地，与另外的分子复合地或作为融合蛋白的一部分)，它们与肽/MHC复合物一起结合到同族配体，并在T细胞表面上的TCR特异性结合所述肽时引起所述T细胞的活化。辅助刺激分子可以从各种不同的来源(包括例如Beckman Coulter)商购。
在本发明的一种情况下，使用在Romani等，J.Immunol.Methods196:135-151,1996和Bender等，J.Immunol.Methods 196:121-135,1996中描述的方法，从哺乳动物例如鼠、猿猴或人类的外周血单核细胞(PBMC)产生不成熟和成熟的树突状细胞两者。简单来说，利用免疫磁性技术将分离的PBMC预处理以清除T-和B-细胞。然后将清除淋巴细胞的PBMC在增补有人类血浆(优选为自体血浆)和GM-CSF/IL-4的RPMI培养基9中培养例如约7天，以产生树突状细胞。与它们的单核细胞祖先相比，树突状细胞是非贴壁的。因此，在大约第7天，将非贴壁细胞收获以进一步处理。
在GM-CSF和IL-4存在下从PBMC衍生的所述树突状细胞是不成熟的，因为如果从培养物中去除细胞因子刺激物，它们可以失去非贴壁性质并逆转回到巨噬细胞的细胞命运。所述处于不成熟状态下的树突状细胞，在加工本源蛋白质抗原用于II类MHC限制的途径中非常有效(Romani等，J.Exp.Med.169:1169,1989)。培养的树突状细胞的进一步成熟通过在含有必需的成熟因子的巨噬细胞调制的培养基(CM)中培养3天来完成。成熟的树突状细胞不太能够捕获新的蛋白质用于呈递，但是在刺激静息T细胞(CD4和CD8两者)以生长和分化方面好得多。
成熟的树突状细胞可以通过它们的形态变化来鉴定，例如通过更加能动的细胞质过程的形成，通过它们的非贴壁性，通过存在下述标记物中的至少一者：CD83，CD68，HLA-DR或CD86，或通过Fc受体例如CD 115的丧失来鉴定(综述在Steinman,Annu.Rev.Immunol.9:271,1991中)。成熟的树突状细胞可以被收集，并使用典型的细胞荧光显影术和细胞分拣技术和装置例如FACScan和FACStar来分析。用于流式细胞术的第一抗体是特异性针对成熟树突状细胞的细胞表面抗原的第一抗体，并且是可商购的。第二抗体可以是生物素化的Ig，随后是FITC-或PE-偶联的链亲和素。
可替选地，其他人报道了用于上调(活化)树突状细胞和将单核细胞转化成活化的树突状细胞表型的方法。这种方法包括向培养基添加钙离子载体，以将单核细胞转变成活化的树突状细胞。例如在24-48小时的培养周期的开始时添加钙21离子载体A23187，引起合并的“单核细胞加上DC”级分的均匀的活化和树突状细胞表型转化：特征性地，所述活化的群体均匀地变成CD 14(Leu M3)阴性，并且上调HLA-DR、HLA-DQ、ICAM-1,137.1和137.2。此外，这种活化的大量群体在进一步纯化时在少量的基础上也发挥作用。已将特定的细胞因子组合成功地用于扩增(或部分取代)使用钙离子载体实现的活化/转化：这些细胞因子包括但不限于G-CSF、GM-CSF、IL-2和IL-4。每种细胞因子在单独提供时不足以用于最佳的上调。
用于分离APC的第二种方法是收集相对大量的已经在血液中循环的前定向APC。以前用于从人类外周血分离定向APC的技术包括物理程序的组合，例如甲泛葡胺梯度和粘附/非粘附步骤(Freudenthal等，PNAS 87:7698-7702,1990)，Percoll梯度分离(Mehta-Damani等，J.Immunol.153:996-1003,1994)，和荧光活化细胞分选技术(Thomas等，J.Immunol.151:6840-52,1993)。
存在许多在本领域中常规用于分离专业抗原呈递细胞(或它们的前体)的其它方法，并且这些方法和可能开发的其他方法是非限制性的，并涵盖在本发明的范围之内。
在一个实施方式中，所述APC和因此呈递一种或多种抗原的细胞是自体的。在另一个实施方式中，所述呈递抗原的APC是同种异体的，即源自于不同对象。
正如本文讨论的，可以使用上述方法或本领域中已知的其他方法将改良LAMP构建物引入到APC中，所述方法包括但不限于转染、电穿孔、融合、微注射、基于病毒的递送或基于细胞的递送。Arthur等，Cancer Gene Therapy 4(1):17-25,1997报道了在人类树突状细胞中基因转移方法的比较。
已知的、部分的和推测的人类白细胞抗原(HLA)、人类MHC的基因指定、氨基酸和核苷酸序列(包括共有序列)，已被发表(参见例如Zemmour和Parham，Immunogenetics 33:310-320,1991)，并且表达HLA变体的细胞系是已知的并且通常也可以获得，许多来自于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(“ATCC”)。因此，使用PCR，可以容易地将编码II类MHC的核苷酸序列操作性连接到本发明的表达载体，然后将其用于转化适合的细胞，以在其中表达。
可以使用专业APC，例如巨噬细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞和朗格汉斯细胞。使用标准程序从下述供体的血液或组织收集这些细胞：1)自体供体；2)具有与待治疗的宿主不同的HLA特异性的异源供体；或3)不同物种的异种供体(Coligan等，《免疫学现代方法》(Current Protocols in Immunology)，第3和14节，1994)。所述细胞可以从正常宿主或具有感染性疾病、癌症、自体免疫疾病或过敏症的患者分离。
可以使用白细胞去除术和“FICOLL/HYPAQUE”密度梯度离心(通过Ficoll和不连续Percoll密度梯度逐步离心)，从外周血获得专业APC。使用的程序避免了将所述APC暴露于可以被所述APC内化的抗原，引起不特异性针对感兴趣的抗原的T细胞的活化。
不天然呈递抗原的细胞可以通过引入编码适合分子的序列，被工程化改造成抗原呈递细胞。例如，编码II类MHC分子、辅助分子、辅助刺激分子和抗原加工辅助分子的核酸序列，可以在直接合成、克隆、从含有这些基因的细胞纯化DNA等之后被引入。获得在本文描述的改良LAMP构建物和方法中使用的分子的编码基因的一种方便的手段，是使用选定的寡核苷酸引物对，在选定的核酸模板上进行聚合酶链反应(PCR)扩增。例如，可以使用上皮细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、成纤维细胞、活化的T细胞、嗜曙红细胞、角化细胞、星形细胞、小胶质细胞、胸腺皮质上皮细胞、施旺细胞、视网膜色素上皮细胞、成肌细胞、血管平滑肌细胞、软骨细胞、肠上皮细胞、甲状腺细胞和肾小管细胞。它们可以是最近从宿主外植并且没有在细胞培养物中广泛传代以形成确立细胞系的原代细胞，或者相对均质并且能够增殖许多代或无限增殖的确立细胞系。
不是专业APC的细胞从它们所位于的自体供体、异源供体或异种供体的任何组织，使用各种不同的已知分离方法来分离(Darling，《动物细胞：培养和培养基》(AnimalCells:Culture and Media)，J.Wiley,New York,1994；Freshney，《动物细胞的培养》(Culture of Animal Cells)，Alan R.Liss,Inc.,New York,1987)。非自体细胞例如异源或异种细胞，可以被离体工程化改造以表达匹配已知人类HLA特异性的I类和II类HLA分子。然后可以将这些细胞引入到匹配所述工程化细胞的HLA特异性的人类对象中。将所述细胞进一步离体工程化改造以表达本发明的一种或多种LAMP构建物。
将所述工程化改造的细胞通过标准的细胞培养方法维持在细胞培养物中(Darling，《动物细胞：培养和培养基》(Animal Cells:Culture and Media)，J.Wiley,NewYork,1994；Freshney，《动物细胞的培养》(Culture of Animal Cells)，Alan R.Liss,Inc.,New York,1987)。在本发明中使用的细胞系从各种不同的来源获得(例如《ATCC细胞系和杂交瘤目录》(ATCC Catalogue of Cell Lines&Hybidomas)，American Type CultureCollection，第8版，1995)，或者使用标准方法生产(Freshney，《永生化细胞的培养》(Culture of Immortalized Cells)，Wiley-Liss,New York,1996)。对于在人类对象中使用来说，非转化的细胞系是优选的。
在一种情况下，在GM-CSF的影响下分化成树突状细胞的CD34+前体从对象的身体获得，并将编码本发明的LAMP构建物的核酸引入到所述细胞中，然后将所述细胞注射到所述对象中。利用本文中所描述的改良LAMP构建物，将增强源自于特定抗原的肽与转导的抗原呈递细胞上的II类MHC分子的结合，产生显著更加强力的全身性T细胞依赖性免疫应答和/或抗体生产。尽管在这种策略中转染的抗原呈递细胞优选为自体细胞，但如上所述，可以使用在所述宿主中有效呈递抗原的任何II类MHC细胞。
肽疫苗
在本发明的范围之内还包括由所述改良LAMP构建物编码的肽疫苗。优选地，所述抗原在所述区室/细胞器(或它被递送到的后续区室/细胞器)内被加工，以产生能够调节免疫应答的结合到II类MHC分子的表位。
由所述改良LAMP构建物编码的肽疫苗也可以被结合在膜结构中，以便于将它施用于生物体的身体。例如，由所述改良LAMP构建物编码的肽疫苗可以被并入到脂质体中，如美国专利号4,448,765中所述。
当蛋白质或多肽要被用作免疫原时，它可以通过在重组细胞中表达本文中描述的任一个或多个改良LAMP构建物来生产，或者它可以通过化学合成来制备。例如，可以使用Merrifield技术(Journal of American Chemical Society,vol.85,pp.2149-2154,1968)。
使用LAMP构建物生产抗体的方法
作为多核苷酸的所述改良LAMP构建物、所述改良LAMP构建物的编码蛋白质和/或细胞(例如表达本文中描述的改良LAMP构建物的抗原呈递细胞)可用于通过专业技术人员公知的方法例如本领域中描述的方法来产生抗体。参见例如Sutcliffe等，同上；Wilson等，同上；Chow等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:910-914(1985)；和Bittle等，J.Gen.Virol.66:2347-2354(1985)。如果使用体内免疫接种，则可以用由所述改良LAMP构建物编码的蛋白质和/或包含本文中所描述的含有抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸对动物进行免疫接种。使用作为多核苷酸的改良LAMP构建物、所述改良LAMP构建物的编码蛋白质和/或细胞(例如表达本文中描述的改良LAMP构建物的抗原呈递细胞)进行初免，然后用抗原进行加强，是本发明的优选实施方式。在其他优选实施方式中，具体设想了用本文中所描述的改良LAMP构建物进行初免，然后用抗原进行加强，并且这种方式可用于产生甚至更稳健的免疫应答，特别是从抗体谱多样性和滴度的观点来看。
可以将包含所述抗原的改良LAMP构建物注射到所述非人类脊椎动物中以产生抗体。LAMP构建物的制备及其在非人类脊椎动物中的注射，可以按照本领域技术人员公知的动物免疫接种的原则来完成。
使用改良LAMP构建物有效地呈递所述抗原，在一种情况下涉及所述抗原在胞吞后被抗原呈递细胞中的LAMP加工以及所述胞内体与溶酶体的融合。然后所述胞内体与来自于高尔基体的含有II类MHC分子的胞吐小泡融合，得到的肽结合到所述II类MHC分子。所述MHC-肽复合体然后转运到细胞质膜，在那里所述抗原可用于展示到CD4+T细胞。
动物例如兔、大鼠、小鼠、美洲驼、骆驼和/或奶牛，可以用所述包含抗原的改良LAMP构建物和/或编码所述包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸免疫接种。适合于免疫接种的其他动物包括非人类哺乳动物，例如啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、灵长动物、猿猴(例如猴或猿)、猴(例如狨猴、狒狒、恒河猴)或猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)。
例如，可以使用含有约100微克包含抗原或载体蛋白的改良LAMP构建物和弗氏佐剂或已知用于刺激免疫应答的任何其他佐剂的乳液的腹膜内和/或真皮内注射。可能需要例如以约2周的间隔进行几次加强注射(例如使用重组抗原蛋白)，以提供可以例如使用直接或间接地(例如通过生物素化的AviTag)吸附到固相表面的游离抗原通过ELISA测定法检测的抗抗原抗体的有用滴度。来自于被免疫接种的动物的血清中抗抗原抗体的滴度可以通过抗抗体的选择来提高，例如按照本领域中公知的方法通过吸附到固相支持物上的抗原并洗脱所选择的抗体。
或者，也可以将编码所述包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸直接引入到动物中。参见例如美国专利号5,676,954、6,875,748、5,661,133；Sahin等，Nat Rev DrugDiscov,2014Oct；13(10):759-80；Kariko等，Mol Ther,2008Nov；16(11):1833-40；Kariko等，Nucleic Acid Res,2011,Nov；39(21):e142；美国专利号6,511,832。在一个实例中，将包含抗原的改良LAMP构建物直接注射到非人类脊椎动物中。在所述动物中的注射可以通过肌肉内、真皮内、鼻内、皮下、静脉内、气管内和鞘内递送来进行。使用重组抗原的后续加强，也可以被包括在所述抗体的产生中。
此外，通过本公开的方法产生的抗体可以使用展示技术例如噬菌体展示、酵母展示或核糖体展示进行亲和力成熟。在一个实例中，筛选展示在噬菌体粒子表面上的单链抗体分子(“scFv”)，以鉴定免疫特异性地结合到所述抗原和/或初始蛋白质的scFv。本发明涵盖了scFv及其被鉴定为免疫特异性地结合到所述抗原和/或初始蛋白质的部分两者。这些scFv可以通过将例如编码所述scFv的VH和/或VL结构域的核苷酸序列插入到含有恒定结构域序列的表达载体中，被常规地“转变”成免疫球蛋白分子，所述表达载体被工程化改造成指导所述免疫球蛋白分子的表达。
使用本发明的包含抗原的改良LAMP构建物和编码所述包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸产生的抗体(包括scFv、以及包含抗体片段或其变体或由抗体片段或其变体构成的其他分子(例如本发明的抗体的重链或轻链或其一部分或本发明的单链抗体))的重组表达，需要构建含有编码所述抗体或其片段或变体的多核苷酸的表达载体。一旦获得本发明的编码抗体分子(例如完全抗体、抗体的重链或轻链或其变体或一部分(优选但不必定含有所述重链或轻链可变结构域))的多核苷酸之后，用于生产所述抗体分子的载体可以使用本领域中公知的技术，通过重组DNA技术来生产。因此，在本文中描述了通过表达含有编码抗体的核苷酸序列的多核苷酸来制备抗体的方法。可以使用本领域技术人员公知的方法来构建含有抗体编码序列和适合的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术和体内遗传重组，并且在本文中描述。因此，本发明提供了可复制的载体，其包含可操作地连接到启动子的编码如本文中所述获得并分离的抗抗原抗体(例如完全抗体、抗体的重链或轻链、抗体的重链或轻链可变结构域或其一部分或重链或轻链CDR、单链Fv或其片段或变体)的核苷酸序列。这些载体可以包括编码抗体分子的恒定区的核苷酸序列(参见例如PCT公布WO 86/05807、PCT公布WO89/01036和美国专利号5,122,464)，并且可以将所述抗体的可变结构域克隆到这种载体中，用于表达完整重链、完整轻链或完整重链和轻链两者。
可以通过常规技术将所述表达载体转移到宿主细胞，然后将所述转染的细胞通过常规技术进行培养，以生产任一种所述抗抗原抗体。因此，本发明包括宿主细胞，其含有可操作地连接到异源启动子的编码所述抗抗原抗体(例如完全抗体、其重链或轻链或其部分，或本发明的单链抗体或其片段或变体)的多核苷酸。在优选实施方式中，为了表达完整抗体分子，可以将编码重链和轻链两者的载体在所述宿主细胞中共表达，用于表达所述完整免疫球蛋白分子，正如下文详细描述的。
可以利用各种不同的宿主-表达载体系统来表达抗抗原抗体。这些宿主-表达系统代表了可以用于生产并随后纯化感兴趣的编码序列的媒介，但是也代表了当用适合的核苷酸编码序列转化或转染时可以表达所述抗抗原抗体的细胞。它们包括但不限于用含有序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的微生物例如细菌(例如大肠埃希氏杆菌、枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如酿酒酵母、毕赤酵母)；用含有编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用含有编码序列的重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒CaMV、烟草花叶病毒TMV)感染或用含有编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或带有重组表达构建物的哺乳动物细胞系统(例如COS、CHO、BHK、293、3T3细胞)，所述构建物含有源自于哺乳动物细胞的基因组的启动子(例如金属硫蛋白启动子)或源自于哺乳动物病毒的启动子(例如腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5K启动子)。优选地，将细菌细胞例如大肠埃希氏杆菌、更优选地真核细胞用于所述抗抗原抗体的表达。例如，与载体例如来自于人类巨细胞病毒的主要立即早期基因启动子元件联合的哺乳动物细胞例如中华仓鼠卵巢细胞(CHO)，是一种有效的表达系统(Foecking等，Gene 45:101(1986)；Cockett等，Bio/Technology 8:2(1990))。
在细菌系统中，大量表达载体可以有利地根据预定用途来选择。例如，当将要生产大量蛋白(用于抗体生产或所述改良LAMP构建物的编码多肽)时，指导容易纯化的融合蛋白产物的高水平表达的载体可能是合乎需要的。这样的载体包括但不限于大肠埃希氏杆菌表达载体pUR278(Ruther等，EMBO 1.2:1791(1983))，其中所述编码序列可以被单个地连接到所述载体中，与lac Z编码区同框，以便产生融合蛋白；pIN载体(Inouye&Inouye,NucleicAcids Res.13:3101-3109(1985)；Van Heeke&Schuster,J.Biol.Chem.24:5503-5509(1989))等。pGEX载体也可用于将外来多肽表达为与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。通常，这些融合蛋白是可溶的，并且可以通过吸附并结合到基质谷胱甘肽琼脂糖珠，然后在游离谷胱甘肽存在下洗脱，从裂解的细胞容易地纯化。所述pGEX载体被设计成包括凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位点，以便可以将所述克隆的靶基因产物从GST组成部分释放。
在昆虫系统中，可以使用苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核多角体病毒(AcNPV)作为载体来表达抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码蛋白。所述病毒在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中生长。编码序列可以被单个地克隆在所述病毒的非必需区(例如多角体蛋白基因)中并置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)的控制之下。
在哺乳动物宿主细胞中，可以利用大量基于病毒的表达系统来表达抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码蛋白。在使用腺病毒作为表达载体的情况下，可以将感兴趣的编码序列连接到腺病毒转录/翻译控制复合物，例如晚期启动子和三联前导序列。然后可以将这个嵌合基因通过体外或体内重组插入到腺病毒基因组中。
在病毒基因组的非必需区(例如El或E3区)中的插入将产生在被感染的宿主中存活并且能够表达所述抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的重组病毒(例如参见Logan&Shenk,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8 1:355-359(1984))。
插入的编码序列的高效翻译也可能需要特定的起始信号。这些信号包括ATG起始密码子和相邻序列。此外，所述起始密码子必须与所需编码序列的阅读框同相，以确保整个插入序列的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以是各种不同起源的，包括天然和合成的两者。表达的效率可以通过包含适合的转录增强子元件、转录终止子等来提高(参见例如Bittner等，Methods in Enzymol.153:51-544(1987))。
此外，可以选择以所需的特定方式调节所述插入序列的表达或修饰和加工所述基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的这些修饰(例如糖基化)和加工(例如切割)对所述蛋白质的功能来说可能是重要的。不同宿主细胞具有特征性和特异性的机制用于蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰。可以选择适合的细胞系或宿主系统以确保表达的外来蛋白质的正确修饰和加工，为此，可以使用具有用于原始转录本的正确加工、基因产物的糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。这些哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、VERY、BHK、Hela、COS、NSO、MDCK、293、3T3、W138，以及特别是乳腺癌细胞系例如BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D和正常乳腺细胞系例如CRL7O3O和HsS78Bst。
对于重组蛋白的长期、高得率生产来说，稳定的表达是优选的。例如，可以工程化改造稳定地表达抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的细胞系。代替使用含有病毒复制起点的表达载体，可以将宿主细胞用受到适合的表达控制元件(例如启动子、增强子、序列、转录终止子、多腺苷化位点等)控制的多核苷酸和选择标记物进行转化。在引入所述外来多核苷酸之后，可以允许工程化细胞在富集培养基中生长1-2天，然后切换到选择培养基。所述重组质粒中的选择标记物提供对所述选择的抗性，并允许细胞将所述质粒稳定地整合到它们的染色体中并生长以形成灶点，所述灶点进而可以被克隆并扩增成细胞系。这种方法可以被有利地用于工程化改造表达所述抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的细胞系。
可以使用大量选择体系，包括但不限于可以分别用于tk-、hgprt-或aprt-细胞的单纯性疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等，Cell 11:223(1977))、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska&Szybalski,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:202(1992))和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等，Cell 22:8 17(1980))基因。此外，可以使用抗代谢物抗性作为下述基因的选择基础：dhfr，其提供对甲氨蝶呤的抗性(Wigler等，Natl.Acad.Sci.USA 77:357(1980)；O'Hare等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:1527(1981))；gpt，其提供对霉酚酸的抗性(Mulligan&Berg,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2072(1981))；neo，其提供对氨基糖苷G-418的抗性(Goldspiel等，Clinical Pharmacy,12:488-505(1993)；Wu和Wu，Biotherapy 3:87-95(1991)；Tolstoshev,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596(1993)；Mulligan,Science 260:926-932(1993)；以及Morgan和Anderson，Ann.Rev.Biochem.62:191-217(1993)；TIB TECH 11(5):155-2 15(May；1993))；和hygro，其提供对潮霉素的抗性(Santerre等，Gene 30:147(1984))。重组DNA技术领域中公知的方法可以被常规应用于选择所需的重组克隆，并且这些方法被描述在例如Ausubel等(主编)，《现代分子生物学方法》(Current Protocols in Molecular Biology)，John Wiley&Sons,NY(1993)；Kriegler，《基因转移和表达实验指南》(Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual)，Stockton Press,NY(1990)；以及Dracopoli等(主编)，《人类遗传学现代方法》(CurrentProtocols in Human Genetics)，John Wiley&Sons,NY(1994)的第12和13章；Colberre-Garapin等，J.Mol.Biol.150:1(1981)中。
抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的表达水平可以通过载体扩增来提高(对于综述，参见Bebbington和Hentschel，在DNA克隆中基于基因扩增的载体用于在哺乳动物细胞中克隆基因的表达的用途(The Use Of Vectors Based On GeneAmplification For The Expression Of Cloned Genes In Mammalian Cells In DNACloning)，Vol.3.(Academic Press,New York,1987))。当表达抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的载体系统中的标记物可扩增时，宿主细胞培养物中存在的抑制剂水平的提高将增加所述标记物的拷贝数。由于所述被扩增区与所述编码序列相连，因此所述抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的生产也提高(Crouse等，Mol.Cell.Biol.3:257(1983))。
可以包括在载体序列中的其他元件包括异源信号肽(分泌信号)、膜锚定序列、内含子、可选剪接位点、翻译起始和终止信号、蛋白质内含子、生物素化位点和促进翻译后修饰的其他位点、纯化标签、编码与其他蛋白质或肽的融合蛋白的序列、被内部核糖体进入位点隔开的分隔编码区、编码例如提供可选择性(例如抗生素抗性)或可分拣性(例如荧光)的“标记物”蛋白的序列、修饰的核苷酸和其他已知的多核苷酸顺式作用零件，但不限于这些实例。
所述宿主细胞可以用本发明的两种表达载体共转染，例如，编码重链来源的多肽的第一载体和编码轻链来源的多肽的第二载体。所述两个载体可能含有一致的选择标记物，能够使重链和轻链多肽相等地表达。或者，可以使用编码并且能够表达重链和轻链多肽两者的单一载体。在这种情况下，所述轻链优选被放置在重链之前，以避免有毒的游离重链的过量(Proudfoot,Nature 322:52(1986)；Kohler,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:2 197(1980))。所述重链和轻链的编码序列可以包含cDNA或基因组DNA或合成的DNA序列。
一旦已通过重组表达生产了抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽后，它可以通过本领域中已知的用于蛋白质纯化的任何方法进行纯化，例如通过层析(例如离子交换、亲和(特别是通过蛋白A亲和以及用于特定抗原的免疫亲和)和尺寸分离柱层析)、离心、差异溶解度或通过用于蛋白质纯化的任何其他标准技术。此外，可以将抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽融合到本文中描述的或本领域中原本已知的异源多肽序列，以便于纯化。
在一个实例中，所述抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽可以与免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定结构域或其部分(CH1、CH2、CH3或其任何组合及其部分)或白蛋白(包括但不限于重组人类白蛋白或其片段或变体(参见例如1999年3月2日授权的美国专利号5,876,969、欧洲专利0 413 622和1998年6月16日授权的美国专利号5,766,883)融合，产生嵌合多肽。这些融合蛋白可以便于纯化，并且可以增加体内半衰期。这一点已被由人类CD4-多肽的前两个结构域和哺乳动物免疫球蛋白的重链或轻链的恒定区的各种不同结构域构成的嵌合蛋白显示。参见例如EP 394,827；Traunecker等，Nature,331:84-86(1988)。抗原跨过上皮屏障向免疫系统的递送的增加，已用偶联到FcRn结合配偶体例如IgG或Fe片段的抗原(例如胰岛素)得以证实(参见例如PCT公布WO 96/22024和WO 99/04813)。也已发现，由于IgG部分的二硫键而具有二硫键连接的二聚体结构的IgG融合蛋白，与单独的单体多肽或其片段相比在结合和中和其他分子中更加高效。参见例如Fountoulakis等，J.Biochem.,270:3958-3964(1995)。编码本文中描述的抗抗原抗体或所述改良LAMP构建物的编码多肽的核酸也可以与作为表位标签(例如血凝素(“HA”)标签或flag标签)的感兴趣的基因重组，以帮助所表达的多肽的检测和纯化。例如，由Janknecht等人描述的系统允许容易地纯化在人类细胞系中表达的非变性融合蛋白(Janknecht等，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:8972-897)。在这个系统中，将感兴趣的基因亚克隆在痘苗病毒重组质粒中，使得所述基因的开放阅读框在翻译上被融合到由6个组氨酸残基构成的氨基端标签。所述标签充当所述融合蛋白的基质结合结构域。将来自于用所述重组痘苗病毒感染的细胞的提取物装载到Ni2+次氮基乙酸-琼脂糖柱上，并且带有组氨酸标签的蛋白可以用含有咪唑的缓冲液选择性洗脱。
施用
本发明的疫苗材料可以含有本文中描述的免疫刺激性改良LAMP构建物，或者可以是表达所述免疫刺激性改良LAMP构建物的重组微生物或抗原呈递细胞。本发明的含有改良LAMP构建物的疫苗材料的制备和这些改良LAMP构建物用于个体免疫接种的施用，按照本领域技术人员公知的免疫接种原则来完成。
大量的这些材料可以通过培养含有表达本文中描述的改良LAMP构建物的复制子的重组体或转化的细胞来获得。培养方法对于本领域技术人员来说是公知的，并且在上文引用的一个或多个文献中教导。所述改良LAMP构建物疫苗通常通过重组体或转化的细胞的培养来生产，并配制在通常是生理相容的水性溶液的可药用溶液或悬液中，或配制在包衣片剂、片剂、胶囊、栓剂或安瓿瓶中，如本领域中所述，例如通过引用并入本文的美国专利号4,446,128中所述。施用可以是任何适合的途径，包括口服、直肠、鼻内或通过注射施用，其中注射可以是例如透皮、皮下、肌肉内或静脉内注射。
所述改良LAMP构建物以足以在哺乳动物中诱导免疫应答的量施用于所述哺乳动物。施用的最低优选量是引发抗体形成到至少4倍于施用前存在的浓度所需的量。典型的初始施用剂量，在静脉内、肌肉内或皮下施用时为10-5000微克或者105至1011噬斑形成单位的重组载体，尽管这个量可以由进行所述施用的临床医生调整，正如在疫苗或诱导免疫应答的其他药剂的施用中通常发生的。单次施用通常可以足以诱导免疫，但可以进行多次施用以确保或加强所述应答。
所述改良LAMP构建物疫苗一开始可以在非人类哺乳动物(例如小鼠或灵长动物)中试验。例如可以使用接种小鼠的免疫应答的测定来证实与野生型抗原相比更多的抗体、T细胞增殖和对所述改良LAMP构建物的细胞毒性T细胞应答。可以在恒河猴中评估改良LAMP构建物，以确定在小鼠中高度有效的疫苗制剂是否也引发适合的猴免疫应答。在一种情况下，每只猴每次免疫接种接受总共5mg DNA，IM递送并分为2个位点，其中免疫接种在第0天和第4、8和20周进行，任选额外的药剂。可以测量抗体应答、ADCC、CD4+和CD8+T-细胞的细胞因子产生、CD4+和CD 8+T-细胞的抗原特异性细胞因子染色，以监测对所述疫苗的免疫应答。
本发明的制剂和施用的适合方法的进一步描述，可以在美国专利号4,454,116(构建物)、美国专利号4,681,762(重组细菌)以及美国专利号4,592,002和4,920,209(重组病毒)中找到。
癌症免疫疗法：预防和治疗的候选者
癌症免疫疗法的候选者是用本文中所描述的任何改良LAMP构建物治疗的具有癌症的任何患者。实例包括具有明确的Epstein-Barr病毒相关淋巴瘤的患者、具有HPV相关宫颈癌的患者、具有慢性HCV的患者或具有癌基因或肿瘤抑制基因的确定重排或突变的患者。
在优选实施方式中，可以使用本文描述的疫苗治疗的癌症包括但不限于下述癌症的所有发展阶段，包括增生：腺癌，肉瘤，皮肤癌，黑素瘤，膀胱癌，脑癌，乳腺癌，子宫癌，卵巢癌，前列腺癌，肺癌(包括但不限于NSCLC、SCLC、鳞状细胞癌)，结肠直肠癌，肛门癌，直肠癌，宫颈癌，肝癌，头颈癌，口腔癌，唾液腺癌，食管癌，胰腺癌，胰腺导管腺癌(PDA)，肾细胞癌，胃癌，肾癌，多发性骨髓瘤或脑癌。
设想了一旦个体的癌症被鉴定后，使用包含所述改良LAMP构建物的疫苗组合物的疗法可以在所述癌症进程期间的任何时期使用。在高风险患者中也可以进行疫苗接种，以便预防随后癌症的出现。
用于疗法的程序
在一个实施方式中，可以在患者恶性肿瘤的过程中的任何适合的时间点将所述改良LAMP构建物注入到所述患者中。例如，所述改良LAMP构建物可以在肿瘤负荷低的阶段时注射。在将所述改良LAMP构建物引入到个体的抗原呈递细胞中的可选实施方式中，从所述个体的骨髓或通过静脉穿刺从外周血抽取所述抗原呈递细胞的前体或成熟的抗原呈递细胞。将这些细胞建立培养物，然后用所述改良LAMP构建物转导。一旦转导发生后，将这些抗原呈递细胞注回所述患者中。
在特别优选实施方式中，本发明提供了一种用于具有低肿瘤负荷的癌症患者的治疗方法，例如在疾病的早期、在赘生性肿瘤切除后或在以其他方式降低肿瘤细胞负荷时。在这种方法中，从所述患者获得含有能够分化成表达II类MHC分子的抗原呈递细胞的自体干细胞的细胞群体。将这些细胞培养并通过引入改良LAMP构建物进行转化，以将所述待与II类MHC分子缔合的抗原递送到所述区室/细胞器内或所述抗原被递送到的另一个区室/细胞器内。
然后将所述转染的干细胞群体重新引入到所述患者中，在那里所述干细胞分化成抗原呈递细胞，其表达与来自于所述抗原的Th表位复合的II类MHC分子。通过增强所述辅助性T细胞群体的刺激，针对所述抗原的免疫应答将被增强。
更通常地，在一个实施方式中，本发明提供了一种包含所述改良LAMP构建物的疫苗组合物，用于在哺乳动物中调节针对抗原的免疫应答(即刺激、增强或降低这种应答)。
试剂盒
本发明还包括便于执行本文中描述的方法的试剂盒。在一种情况下，试剂盒包含本文中所述的改良LAMP构建物和用于接受所述改良LAMP构建物的细胞。所述试剂盒可以另外包含用于将所述细胞工程化改造成专业APC的一种或多种核酸。然而，在一种情况下，所述细胞是专业APC。所述细胞可以表达或可以不表达辅助刺激分子。在优选情况下，当所述细胞不表达辅助刺激分子时，由所述改良LAMP构建物编码的抗原是自体抗原。在另一种情况下，提供了表达不同MHC分子(例如已知在人类中表达的MHC分子)的一组细胞。在另一种情况下，所述试剂盒包含促进所述改良LAMP构建物进入到细胞中的试剂(例如基于脂质的制剂、病毒包装材料、细胞等)。在另一种情况下，提供了对所述改良LAMP构建物所编码的抗原特异的一种或多种T细胞系，以验证所述改良LAMP构建物引发、调节或增强免疫应答的能力。
实施例
现在将参考下面的实施例进一步说明本发明。应该认识到，下述内容仅仅是示例性的，并且可以对细节作出修改并仍落于本发明的范围之内。
实施例1–LAMP构建物的构建
图1中示出的改良LAMP构建物可以使用专业技术人员公知的标准分子生物学技术来构建。例如，可以设计包含所述多核苷酸的质粒，以产生图1中示出的不同结构ILC-1至ILC-6。图1中示出的LAMP结构域可以源自于图3-10中示出的氨基酸序列。优选地，所述LAMP结构域源自于图3-10中示出的人类LAMP蛋白。设想了所述相应结构域也可以通过在与人类序列相比时鉴定对等的结构域，从直系同源序列克隆。可以将感兴趣的抗原(包括一种或多种感兴趣的抗原)单个地或组合地克隆到所描述的LAMP构建物中。
实施例2–小鼠对LAMP构建物的免疫应答的评估
可以测试如实施例1中所描述的改良LAMP构建物调节免疫应答的能力。例如，雌性BALB/c小鼠可以在第0、14和28天，使用nanopass针头用100ul PBS中的50ug所述改良LAMP构建物和5ug GMCSF进行i.d免疫接种。随后，实验将在最后一次给药后4周结束。
用抗原性蛋白(10ug/ml)在T细胞培养基(含有10％热失活FBS、1％青霉素/链霉素和1X 2-ME的RPMI)中刺激脾细胞(3x105/孔)，72h后收集上清液。将上清液稀释(400ul上清液+200ul T细胞培养基)，并通过ELISA评估细胞因子。IL-10或IL-4的生产可以通过ELISPOT测定法来测量。
实施例3–使用LAMP构建物改进抗原呈递
存活蛋白是凋亡抑制剂(IAP)蛋白家族的最小成员，参与凋亡的抑制和细胞周期的调控。这些功能属性使得存活蛋白成为表现出相异的功能即调控细胞增殖和细胞死亡的独特蛋白。肿瘤中存活蛋白的表达不仅与凋亡的抑制和细胞死亡率降低相关，而且与对化疗的抗性和肿瘤的侵袭性相关[1-6]。因此，存活蛋白是癌症疫苗和治疗剂的重要靶点[7-9]。也已发现，存活蛋白显著表达在人类胚胎干细胞和许多身体干细胞类型两者上，表明它在干细胞产生和维持中具有尚未探测过的作用。
癌症是一组混杂的疾病，其中具有侵入其他身体部位的潜力的异常细胞生长控制着正常的内稳态，并且如果不及时且正确治疗，将变得致命。免疫疗法特异性靶向肿瘤细胞，从而避免了对非肿瘤细胞的附带损伤并诱导抗肿瘤应答。这种抗肿瘤应答也具有根除身体中远处的也许不可能通过手术切除的肿瘤的潜力。抗肿瘤免疫应答的诱导或增强在癌症中是艰巨的挑战，因为肿瘤细胞使用多种逃避策略并避免被免疫细胞检测或消除。
本项目的目的是评估通过I.D.注射到BALB/c小鼠中的全新一代LAMP构建物的体内免疫应答。具体来说，通过真皮内注射将小鼠用50μg在图1的图例中定义的试验构建物进行免疫接种。在这个试验中未添加佐剂。在一个月内，每组6只小鼠每7天用疫苗施用，总共三剂。在最后一次免疫接种后14天监测免疫应答。
所述试验LAMP构建物如本文中所述来产生，并且每个试验构建物的序列示出在图19中。存活蛋白购自MyBiosource(San Diego,CA)。存活蛋白的肽来自于GenScript(Piscataway,NJ)。抗存活蛋白抗体和m-IgGk-BP-HRP购自Santa Cruz Biotechnology(Dallas,TX)，并且小鼠抗LAMP-1/CD107a单克隆抗体来自于OriGene Technologies(Rockville,MD)。用于IFNγ的ELISPOT抗体对来自于Biolegend。荧光偶联的CD3、CD4、CD8、CD44、CD62L、IFNγ、TNFα、颗粒酶B、CD69单克隆抗体和Zombie aqua可固定存活率试剂盒购自BioLegend(San Diego,CA)。山羊抗小鼠IgG2a-HRP和山羊抗小鼠IgG-HRP购自SouthernBiotechnologies(Birmingham,AL)。链亲和素-HRP购自Thermo Fisher(Waltham,MA)。SureBlue TMB微孔过氧化物酶底物和TMB终止溶液购自KPL(Gaithersburg,MD)。
对于Pharmajet来说，每只小鼠每剂使用100ul总体积中的50μg每种构建物。在第0、7和14天，通过i.d.递送将小鼠用疫苗免疫接种。在第28天将小鼠取血，用于血清收集。收集血清并储存在-30℃。在第28天实验结束时收集脾脏并处理，用于ELISPOT和FACS，以评估存活蛋白特异性T细胞应答。
通过ELISA测量血浆存活蛋白特异性总IgG。针对存活蛋白的鼠类抗体应答通过间接ELISA来评估。将ELISA板(MaxiSorp)用碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中的2μg/ml存活蛋白(1-142)包被过夜，然后用PBS中的2％BSA阻断。将血浆样品在阻断缓冲液中1:100稀释。用山羊抗小鼠IgG-HRP(Southern Biotech,Birmingham,AL)检测样品。反应用SureBlue TMB底物进行显色并用来自于KPL(Gaithersburg,MD)的TMB终止溶液终止。使用Epoch ELISA读板器(BioTek,Winooski,VT)读板(OD450)。
抗原特异性T细胞应答的评估。为了在疫苗接种过的小鼠中评估抗原特异性T细胞应答，通过酶联免疫斑点(ELISPOT)来评估来自于疫苗接种过的小鼠的脾细胞的抗原特异性IFNγ生产。对于ELISPOT测定来说，将96孔硝酸纤维素板(Millipore)用100μl/孔的在PBS中的捕获单克隆抗体在4℃包被过夜。将板用200μl/孔的PBS洗涤三次，并用200μl/孔的T细胞培养基在室温阻断至少2hr。将脾细胞以3x105个细胞/孔铺板，并与2μg/ml的存活蛋白的合并肽(表1)或刀豆蛋白A(0.125μg/ml)或单独的培养基，在总体积为200μl/孔的T细胞培养基(含有L-谷氨酰胺和HEPES(ATCC)、1％青霉素、1％链霉素和5x 10-5Mβ-ME的RPMI-1640)中，以3x105个细胞/孔的密度在37℃下和5％CO2中共培养48h。将板用200μl/孔的PBS洗涤两次，并用200μl/孔的PBS-T(0.05％Tween/PBS)洗涤两次。添加稀释的检测抗体(50μl/孔，在PBS-T/0.5％BSA中)，并将板在室温下振摇温育2hr。将板用PBS洗涤四次。添加在PBS中稀释的链亲和素-碱性磷酸酶(50μl/孔)并温育2h。将板用PBS洗涤四次，并用50μl/孔的3-氨基-9-乙基咔唑(AEC,BD Bioscience)底物显色10min。通过在流动自来水下洗涤来终止显色。在室温下在暗处干燥72h后，使用AID ELISPOT高分辨率读板器系统和AIDELISPOT软件3.5版(Autoimmun Diagnostika GmbH)对着色的斑点进行计数。
表1.来自于Genscript的合并的肽
Figure BDA0002242926420000751
Western印迹。使用lipofectamine 2000试剂(Invitrogen)将293T细胞用所述试验构建物转染。将转染的细胞用PBS洗涤并悬浮在200μl含有停止蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液(Thermo Scientific,Waltham,MA)中。将裂解物离心(4℃下700g 15分钟)，然后使用Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)测量澄清的上清液中的蛋白质浓度。将10μg蛋白质在预制(4-20％)SDS-PAGE凝胶(BioRad,Hercules,California)中电泳，转移到硝酸纤维素膜(BioRad)上，并用针对hLAMP的mAb进行免疫印迹。将膜用DetectionTM阻断缓冲液(KPL)阻断，用兔抗人LAMP抗体(Sino Biological Inc.,Beijing,China)或抗存活蛋白抗体和山羊抗兔HRP抗体探测，然后用TMB(KPL)显色。
流式细胞术。将细胞首先用PBS中的Zombie aqua可固定存活性染料(1:500稀释)标记，然后用染色缓冲液(含有4％FBS、2％兔血清、2％小鼠血清的PBS)中的表面抗体(1:100稀释)标记。对于细胞内染色来说，将细胞用Zombie aqua染色，然后进行表面染色，用4％聚甲醛固定，并用通透化缓冲液(含有1％FCS和0.1％皂苷的PBS)中的细胞内抗体染色。样品在CytoFlex流式细胞仪(Beckman Coulter)上进行分析，并使用Kaluza软件(BeckmanCoulter)进行分析。
统计学。使用GraphPad Prism 6.0软件或R文件来进行双向ANOVA检验，以评估统计学显著性。从抗原活化的结果推导出每只小鼠的RPMI结果。
研究设计
Figure BDA0002242926420000761
图14：质粒的验证：将293T细胞用所述质粒转染3天。将转染的细胞裂解，然后在预制SDS-PAGE凝胶中电泳。将蛋白质转移到硝酸纤维素膜并用针对人类LAMP(OriGene,#TA337108)或存活蛋白(Santa Cruz#17779)的mAb进行免疫印迹。LAMP的分子量＝100KD，存活蛋白的分子量＝16KD。图13显示所有试验的LAMP构建物产生尺寸适合的蛋白质。
图15和16：试验的LAMP构建物诱导产生IFNγ的Th1效应T细胞。在第0、7和14天，将雌性BALB/c小鼠通过Pharmajet装置用100μl PBS中的50μg指定构建物i.d免疫接种。实验在最后一次给药后14天结束。用存活蛋白的合并肽(4μg/ml)在T细胞培养基(含有10％热失活FBS、1％青霉素/链霉素和1Xβ-ME的RPMI)中刺激脾细胞(3x105/孔)48h。A.通过斑点测量的IFNγ生产。B.由所有合并肽诱导的IFNγ生产(来自于A的条形图)。n＝每组6只。将双向ANOVA(R文件)用于统计分析。图14显示所有试验的LAMP构建物诱导稳健的T细胞应答，正如由IFNγ生产所示。
我们出人意料地发现，在所述改良LAMP构建物的3次给药(相隔一周)之后，稳健的Th1型应答被试验的LAMP构建物引发，特别是其中铰链序列被存活蛋白基因代替的ILC-4。更有趣的是，改良LAMP构建物ILC-4显得识别从N-端到C-端的存活蛋白表位，并诱导针对与小鼠具有100％同一性的人类存活蛋白肽序列的T细胞应答。我们也发现，将冻融的脾细胞用存活蛋白肽刺激更长时间(72hr)，ILC-4与第一代LAMP-存活蛋白相比显示出显著更高的IFNγ生产(参见图19)。具体来说，图16显示试验的所有改良LAMP构建物都显示出较高T细胞应答，其中ILC-4具有最好的活性，因为这种构建物针对所有存活蛋白肽合并物引发显著更高的T细胞应答。此外，与本领域中已知的相反，去除腔内结构域的第二同源结构域产生的改良LAMP构建物与完全LAMP构建物相比引发更稳健的免疫应答(参见ILC-2和ILC-3的结果)。用合并肽4(4μg/ml)在T细胞培养基(含有10％热失活FBS、1％青霉素/链霉素和1Xβ-ME的RPMI)中刺激冷冻的脾细胞(4x105/孔)48h。n＝每组6只。将双向ANOVA用于统计分析。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.005，****p<0.0001。
图17.CD4 T细胞是IFNγ生产细胞的主要来源。在第0、7和14天，将雌性BALB/c小鼠通过Pharmajet装置用100μl PBS中的50μg指定构建物进行i.d免疫接种。实验在最后一次给药后14天结束。用合并肽1(4μg/ml)在T细胞培养基(含有10％热失活FBS、1％青霉素/链霉素和1Xβ-ME的RPMI)中刺激脾细胞(1x106/孔)过夜，然后添加莫能霉素和布雷菲德菌素A并继续培养5h。收获细胞并按照ITI染色方案用Zombie、表面标记物和细胞内染色进行染色。将细胞对记忆性CD4 T细胞(CD4+CD44+CD62L-)或CD8 T细胞(CD8+CD44+CD62L-)进行门选。数据代表了每个组中的一只小鼠。尽管在用各种不同构建物疫苗接种的小鼠中存在CD8效应记忆细胞的增加，但在CD4 T细胞群体中IFNγ生产更加显著。
图18：在BALB/c小鼠中改良LAMP构建物产生更强的存活蛋白特异性总IgG应答。在第0、7和14天，将雌性BALB/c小鼠通过Pharmajet装置用100μl PBS中的50μg指定疫苗进行i.d免疫接种。实验在最后一次给药后14天结束。在第28天对小鼠取血。分离血清并储存在-30℃下。通过ELISA确定血清中的总IgG和IgG2a。简单来说，将ELISA板用2μg/ml存活蛋白(1-142aa)包被，用PBS/2％BSA阻断，血清(在阻断缓冲液中1:100稀释)通过HRP偶联的山羊抗小鼠IgG(1:6000)和IgG2a(1:11000)抗体进行评估。n＝每组6只小鼠。**p<0.01，***p<0.005，****p<0.0001。重要的并且与本领域中已知的相反的是，图18显示腔内结构域的片段比使用完整腔内结构域效果更好(即将完全LAMP构建物与构建物ILC-2和IL-3相比)。此外并且出人意料地，在腔内结构域的两个同源结构域之间插入抗原产生了最强的抗体应答(参见ILC-4)。
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实施例4：LAMP构建物的治疗性治疗
雌性BALB/c小鼠可以在第0天用7000个同基因4T1乳腺癌细胞s.c接种。在肿瘤可触知后，使用nanopass针头i.d给予100ul PBS中的50ug疫苗和5ug GMCSF。使用卡尺测量原发肿瘤，并使用公式p/6(长度x宽度)3/2来计算肿瘤体积。可以测量平均肿瘤体积随肿瘤接种后的天数的变化。可以使用Kaplan-Meier图来显示结束点时的总存活率。
实施例5–初免/加强方案
疱疹病毒进入介导物(HVEM)，也被称为肿瘤坏死因子受体超家族成员14(TNFRSF14)或CD270，是一种TNF受体超家族的人类细胞表面受体。近年中，已发现HVEM在造血细胞和各种不同的实质细胞例如乳腺癌、黑素瘤、结肠直肠癌和卵巢癌细胞以及肠上皮上高表达。HVEM是一种双向作用蛋白，通过结合到BTLA或LIGHT(TNFSF14)抑制或刺激T细胞。
我们产生了编码HVEM-LAMP的DNA疫苗，以产生用于肿瘤治疗性应用的能够阻断HVEM的抑制性功能的抗体。我们假设LAMP将通过提高HVEM特异性抗体的亲和性和/或扩展HVEM蛋白中的B细胞表位谱来促进抗体应答。在本研究中，我们比较了含有和不含LAMP的HVEM编码质粒的免疫原性。所述HVEM序列是：
HVEM氨基酸39-202(SEQ ID NO：114)
LPSCKEDEYPVGSECCPKCSPGYRVKEACGELTGTVCEPCPPGTYIAHLNGLSKCLQCQMCDPAMGLRASRNCSRTENAVCGCSPGHFCIVQDGDHCAACRAYATSSPGQRVQKGGTESQDTLCQNCPPGTFSPNGTLEECQHQTKCSWLVTKAGAGTSSSHWV
编码HVEM-LAMP和HVEM和重组HVEM蛋白的质粒由ITI设计并由NTC(Lincoln,NE)生产。将编码下述HVEM序列的多核苷酸克隆到本文中描述的改良LAMP构建物中：
山羊抗小鼠IgG-HRP购自Southern Biotechnologies(Birmingham,AL)。SureBlueTMB微孔过氧化物酶底物和TMB终止溶液购自KPL(Gaithersburg,MD)。ELISPOT板从EMDMillipore(Billerica,MA,Cat.No.MAIPS4510)订购。在ELISPOT中使用的IFN-γ抗体对购自BioLegend(San Diego,CA)，并将克隆AN18和R46A2分别用作包被和检测抗体。链亲和素-HRP和AEC底物购自BD Biosciences(San Jose,CA)。
6至8周龄雌性Balb/c小鼠购自Harlan Laboratories(Frederick,MA)，并维持在Immunomic Therapeutics,Inc.(Rockville,MA)的动物房中。在第0、7和14天，通过Ichor电穿孔IM递送将小鼠(n＝6)用10μg/剂的HVEM-LAMP、HVEM或LAMP载体对照进行处理。在第35天，将小鼠在铝佐剂存在下用5μg HVEM蛋白通过i.p.注射进行加强。在第28和49天，将小鼠取血并分离血清用于抗体检测。在第56天将小鼠处死，并通过ELISPOT试验脾细胞的IFN-γ生产。
ELISA程序遵照Su等，J of Immunol Res；(10):1-15(2016)。将板用5μg/ml HVEM蛋白包被。数据使用Microsoft Excel和Prism 6软件进行分析。
本研究的主要目的是在HVEM-LAMP和HVEM之间比较抗体特性。在第28天，HVEM-LAMP疫苗接种的小鼠与HVEM组相比产生显著更高水平的HVEM特异性IgG抗体(图11)。在蛋白质加强后，在HVEM免疫接种的小鼠中HVEM特异性抗体增加约1000倍，平均滴度从100变成108000。这个结果表明免疫记忆被HVEM DNA质粒诱导。尽管单独的HVEM DNA仅诱导极低的抗体应答，但蛋白质加强快速唤醒免疫记忆。另一方面，HVEM-LAMP组再一次表现出比HVEM和LAMP组显著更高的滴度，平均滴度为HVEM组的5倍，指示了LAMP在增强抗体应答中的作用(图12)。
此外，将来自于HVEM+LAMP或单独的HVEM免疫接种/HVEM蛋白加强的小鼠的血清样品(第49天)合并并进行肽作图试验。发现12种肽结合到所述合并的血清(小鼠IgG反应)，并且所述12种肽中的7种显示出强的结合亲和性。如图13中所示，与单独的HVEM相比HVEM+LAMP改变了肽17、24、25和28的结合亲和性。这些变化在保护肿瘤生长中可能具有生理效应。
总而言之，来自于本研究的数据表明两种构建物在体内表达，并且LAMP显著提高体液免疫应答。
实施例6：从多肽生产抗体
抗抗原抗体可以使用动物注射，通过各种不同的产生抗体的标准方法来制备(参见《现代方法》(Current Protocols)，第2章)。例如，将表达本文中描述的包含抗原的改良LAMP构建物的细胞施用于非人类脊椎动物，以诱导含有单克隆抗体的血清的生产。在优选方法中，制备并纯化所述LAMP/抗原蛋白的制备物，以使它基本上不含天然污染物。然后将这种制备物引入到非人类脊椎动物中，以产生具有更高特异性活性的多克隆抗血清。
在最优选的方法中，本发明的抗抗原抗体是单克隆抗体(或其蛋白结合片段)。这种单克隆抗体可以使用杂交瘤技术来制备(Kohler等，Nature 256:495(1975)；；Kohler等，Eur.J.Immunol.6:511(1976)；Kohler等，Eur.J.Immunol.6:292(1976)；Hammerling等，《单克隆抗体和T-细胞杂交瘤》(Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas)，Elsevier,N.Y.,pp.563-681(1981))。一般来说，这些程序包括用包含抗原的改良LAMP构建物、包含抗原的改良LAMP构建物的编码蛋白或更优选地用表达改良LAMP构建物的细胞对非人类脊椎动物(优选为兔、小鼠、奶牛、骆驼、美洲驼)进行免疫接种。这些细胞可以在任何适合的组织培养基中培养；然而，优选地在增补有10％胎牛血清(在约56℃下失活)并增补有约10g/l的非必需氨基酸、约1,000U/ml的青霉素和约100ug/ml的链霉素的Earle's改良的Eagle's培养基中培养细胞。
提取这些非人类脊椎动物宿主(例如小鼠)的脾细胞，并将其与适合的骨髓瘤细胞系融合。根据本发明，可以使用任何适合的骨髓瘤细胞系；然而，优选地使用可以从ATCCTM获得的亲本骨髓瘤细胞系(SP20)。在融合后，将得到的杂交瘤细胞选择性维持在HAT培养基中，然后如Wands等人所述(Gastroenterology 80:225-232(1981))通过有限稀释法进行克隆。然后测定通过这种选择获得的杂交瘤细胞，以鉴定分泌能够结合所述抗原的抗体的克隆。
应该认识到，根据本文公开的方法，可以使用所述抗抗原抗体的Fab和F(ab')2以及其他片段。通常通过蛋白水解切割，使用酶例如木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab')2片段)产生这些片段。或者，可以通过使用重组DNA技术或通过合成化学来生产分泌的蛋白结合片段。
对于抗体在人类中的体内使用来说，使用“人源化”嵌合单克隆抗体可能是优选的。这些抗体可以使用源自于上述产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞的遗传构建物来生产。用于生产嵌合抗体的方法在本领域中是已知的(对于综述，参见Morrison,Science229:1202(1985)；Oi等，BioTechniques 4:214(1986)；Cabilly等，美国专利号4,816,567；Taniguchi等，EP 171496；Morrison等，EP 173494；Neuberger等，WO 8601533；Robinson等，WO 8702671；Boulianne等，Nature 312:643(1984)；Neuberger等，Nature 314:268(1985))。
实施例7：使用多核苷酸产生多克隆和单克隆抗体
将多核苷酸直接注射到动物中的方法在本领域中已充分描述。参见例如美国专利号5,676,954、6,875,748、5,661,133。例如，可以将编码包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸注射到受约束的清醒小鼠(雌性6-12周龄BALB/c或裸小鼠nu/nu，来自于HarlanSprague Dawley,Indianapolis,Ind.)的四头肌中。在一个实施方式中，使用一次性无菌塑料胰岛素注射器和装配有从微量移液器头切下的塑料套环的28G1/2针头(Becton-Dickinson,Franklin Lakes,N.J.，目录号329430)，50μl溶液中的50μg多核苷酸可用于注射小鼠，如Hartikka,J.等，Hum.Gene Ther.7:1205-1217(1996)中所述。
或者，在注射前24小时开始，可以向6周龄Sprague Dawley雌性小鼠(体重20-25克)在饮用水中提供5000ppm ZnOSO4。已显示该锌量能够激活金属硫蛋白启动子。然后使用25号针头通过微静脉穿刺，用30μl总体积中的与150μg脂质体(Lipofection TM)复合的30μg编码含有抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸静脉内注射每只小鼠。动物看护应该在整个研究期间维持，并且应该遵照“实验室动物使用和护理指南”(Guide for the Use andCare of Laboratory Animals,Institute of Laboratory Animal Resources,Commission on Life Sciences,National Research Council,National Academy Press)来进行。
在所述注射的编码包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸被递送到动物中的细胞内之后，所述抗原被递送到胞内体/溶酶体，加工并递送到免疫系统。然后所述包含抗原的改良LAMP构建物可以刺激特异性针对所述抗原的抗体的产生。这些抗体可以被分离并用作多克隆混合物，或者被进一步分离成单一物类或单克隆。免疫应答的过程和针对外来抗原的抗体的体内生产，在本领域中是公知的。
在第三种动物模型中，将Balb/c 3T3 A31细胞通过电穿孔用编码包含抗原的改良LAMP构建物的多核苷酸转染。表达包含抗原的LAMP构建物的G418抗性克隆通过它们结合人类RBC的能力来鉴定。为了产生多克隆抗体，将Balb/c小鼠以14天的时间间隔，用107个包含所述含有抗原的改良LAMP构建物的细胞进行两次腹膜内免疫接种。在最后一次加强后，收集免疫血清，将IgG通过蛋白G Sepharose纯化，并在通过将1.0mg纯化的抗原偶联到溴化氰活化的Sepharose CL-4B而制备的抗原柱上通过。结合的IgG可以用0.1M pH 2.5的甘氨酸缓冲液洗脱，并用0.1体积的pH 8.0的0.1M Tris中和。为了产生单克隆抗体(mAb)，将Balb/c小鼠用包含抗原的LAMP构建物免疫接种，并按照标准方法(28)通过将免疫脾细胞与SP2骨髓瘤融合来产生杂交瘤。可以通过如本领域中所述的酶联免疫吸附测定法来鉴定特异性与抗原反应的阳性孔。将所述杂交瘤通过有限稀释法克隆三次，以产生抗体。
实施例8：包含抗原的改良LAMP构建物的免疫接种
在哺乳动物中产生抗体的方法在本领域中是公知的。在一个实例中，通过在两个月的时间段内用总共500μg包含抗原的改良LAMP构建物免疫接种无病原体的兔，产生针对包含抗原的LAMP构建物的多克隆抗血清。例如，可以将所述包含抗原的改良LAMP构建物溶解在PBS中，并用等体积的弗氏佐剂乳化。在最后一次加强后，可以分离所述兔的血清以确定多克隆抗血清的滴度。
在另一个动物模型中，可以将5只小鼠(C57BL/6J；Jackson Labs)的组用在铝佐剂中乳化的5μg无内毒素的包含抗原的LAMP构建物皮下免疫接种。三周后，对小鼠取血，并且可以通过ELISA通过滴定所述血清来确定抗抗原特异性抗体的存在(血清中的抗体直接结合到直接或间接地(通过生物素化标签和链亲和素)包被在孔上的野生型BPTI或APP-KI)。
为了获得单克隆抗体，可以将4-6周龄Balb/c小鼠用包含抗原的改良LAMP构建物免疫接种(例如以2周的时间间隔用10-100μg/注射来免疫接种四次，第一次注射时溶解在弗氏完全佐剂中，随后的免疫接种时溶解在弗氏不完全佐剂中)。分离脾细胞并与融合细胞系例如Sp2/0骨髓瘤细胞融合，然后进行有限稀释。生长的克隆使用例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)来筛选。将96孔板用包含抗原的改良LAMP构建物或用对照蛋白包被。添加培养上清液，然后洗涤并添加用于检测的标记的抗小鼠抗体。在有限稀释后，获得产生所述抗抗原抗体的稳定杂交瘤的克隆。从每种细胞收集上清液，并且通过使用蛋白A琼脂糖柱的亲和层析，可以纯化单克隆抗体。
对于本领域普通技术人员来说，可以对本文中描述的内容进行改变、修改和其他操作，而不背离本发明和权利要求书的精神和范围。指明的所有专利、专利申请、国际申请和参考文献明确地以其整体通过引用并入本文。
序列表
<110> 免疫治疗有限公司（Immunomic Therapeutics, Inc.）
<120> 改良LAMP构建物
<130> ITI-07-PCT
<150> US 62/488,741
<151> 2017-04-22
<150> US 62/549,119
<151> 2017-08-23
<150> US 62/549,033
<151> 2017-08-23
<160> 119
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 417
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
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Leu Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met
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305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Arg Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Glu Gly Met His Pro Asn Gln Glu Asp His Glu Thr Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Lys Ala Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Ile Tyr Val Lys Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asp
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Leu Asn Glu Ser Val His
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Ser Arg Leu Lys Ser Met Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Ile Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Val Phe Thr Trp Leu Ala Cys Lys Gly Gln Gly Ser Met
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 5
<211> 197
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 5
Met Ser Arg Leu Ser Arg Ser Leu Leu Trp Ala Ala Thr Cys Leu Gly
1 5 10 15
Val Leu Cys Val Leu Ser Ala Asp Lys Asn Thr Thr Gln His Pro Asn
20 25 30
Val Thr Thr Leu Ala Pro Ile Ser Asn Val Thr Ser Ala Pro Val Thr
35 40 45
Ser Leu Pro Leu Val Thr Thr Pro Ala Pro Glu Thr Cys Glu Gly Arg
50 55 60
Asn Ser Cys Val Ser Cys Phe Asn Val Ser Val Val Asn Thr Thr Cys
65 70 75 80
Phe Trp Ile Glu Cys Lys Asp Glu Ser Tyr Cys Ser His Asn Ser Thr
85 90 95
Val Ser Asp Cys Gln Val Gly Asn Thr Thr Asp Phe Cys Ser Val Ser
100 105 110
Thr Ala Thr Pro Val Pro Thr Ala Asn Ser Thr Ala Lys Pro Thr Val
115 120 125
Gln Pro Ser Pro Ser Thr Thr Ser Lys Thr Val Thr Thr Ser Gly Thr
130 135 140
Thr Asn Asn Thr Val Thr Pro Thr Ser Gln Pro Val Arg Lys Ser Thr
145 150 155 160
Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly Val
165 170 175
Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu Arg
180 185 190
Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 6
<211> 406
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 6
Met Ala Ala Pro Gly Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala
1 5 10 15
Gly Leu Ala His Gly Ala Ser Ala Leu Phe Glu Val Lys Asn Asn Gly
20 25 30
Thr Thr Cys Ile Met Ala Ser Phe Ser Ala Ser Phe Leu Thr Thr Tyr
35 40 45
Glu Thr Ala Asn Gly Ser Gln Ile Val Asn Ile Ser Leu Pro Ala Ser
50 55 60
Ala Glu Val Leu Lys Asn Gly Ser Ser Cys Gly Lys Glu Asn Val Ser
65 70 75 80
Asp Pro Ser Leu Thr Ile Thr Phe Gly Arg Gly Tyr Leu Leu Thr Leu
85 90 95
Asn Phe Thr Lys Asn Thr Thr Arg Tyr Ser Val Gln His Met Tyr Phe
100 105 110
Thr Tyr Asn Leu Ser Asp Thr Glu His Phe Pro Asn Ala Ile Ser Lys
115 120 125
Glu Ile Tyr Thr Met Asp Ser Thr Thr Asp Ile Lys Ala Asp Ile Asn
130 135 140
Lys Ala Tyr Arg Cys Val Ser Asp Ile Arg Val Tyr Met Lys Asn Val
145 150 155 160
Thr Val Val Leu Arg Asp Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu Ser Ser Gly
165 170 175
Asn Phe Ser Lys Glu Glu Thr His Cys Thr Gln Asp Gly Pro Ser Pro
180 185 190
Thr Thr Gly Pro Pro Ser Pro Ser Pro Pro Leu Val Pro Thr Asn Pro
195 200 205
Thr Val Ser Lys Tyr Asn Val Thr Gly Asn Asn Gly Thr Cys Leu Leu
210 215 220
Ala Ser Met Ala Leu Gln Leu Asn Ile Thr Tyr Leu Lys Lys Asp Asn
225 230 235 240
Lys Thr Val Thr Arg Ala Phe Asn Ile Ser Pro Asn Asp Thr Ser Ser
245 250 255
Gly Ser Cys Gly Ile Asn Leu Val Thr Leu Lys Val Glu Asn Lys Asn
260 265 270
Arg Ala Leu Glu Leu Gln Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Ser Leu Phe
275 280 285
Phe Leu Gln Gly Val Arg Leu Asn Met Thr Leu Pro Asp Ala Leu Val
290 295 300
Pro Thr Phe Ser Ile Ser Asn His Ser Leu Lys Ala Leu Gln Ala Thr
305 310 315 320
Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn Thr Glu Glu His Ile Phe Val Ser
325 330 335
Lys Met Leu Ser Leu Asn Val Phe Ser Val Gln Val Gln Ala Phe Lys
340 345 350
Val Asp Ser Asp Arg Phe Gly Ser Val Glu Glu Cys Val Gln Asp Gly
355 360 365
Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu
370 375 380
Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His
385 390 395 400
Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405
<210> 7
<211> 411
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 7
Met Ala Arg Ala Ala Gly Val Cys Trp Thr Leu Leu Met Gly Cys Val
1 5 10 15
Phe Ala Ala His Ala Val Thr Phe Glu Val Thr Asp Gly Asn Ser Thr
20 25 30
Cys Ile Lys Gly Glu Leu Asn Ala Ser Phe Ser Ile Ser Tyr Asn Thr
35 40 45
Thr Asn Gly Thr Ser Val Ser Val Phe Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ser
50 55 60
Val Ser Glu Arg Ser Ser Cys Gly Ser Ala Ala Val Pro Pro Glu Leu
65 70 75 80
Ala Leu Val Phe Gly Asp Thr His Thr His Thr Leu Ser Leu Leu Phe
85 90 95
Ser Arg Asp Gln Arg Leu Tyr Arg Val Ser Asn Ile Ser Leu Gln Tyr
100 105 110
Asn Leu Ser Asp Gly Asp Ile Phe Pro Gln Ser Ser Ser Ala Gly Val
115 120 125
Gln Ser Val Met Ala Ser Val Ser Glu Leu Met Ser Ala Arg Leu Asn
130 135 140
Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Ser Ser Ser Ile Ser Leu Ser Ala Ala
145 150 155 160
Val Asn Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Met Glu Ala Tyr Met Ser Ser
165 170 175
Ala Asn Leu Ser Ala Asp Glu Ser Val Cys Ser Ala Asp Gln Pro Ser
180 185 190
Thr Thr Val Ala Pro Pro Pro Ser Thr Thr Thr Ser Pro Pro Pro Ile
195 200 205
Pro Pro Val Pro Glu Arg Gly Asn Tyr Ser Val Thr Asp Gly Asn Gly
210 215 220
Thr Val Cys Val Leu Ala Leu Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Thr His
225 230 235 240
Thr Thr Thr Gln Asn Gln Ser Val Ser Glu Leu Met Asn Leu Gln Pro
245 250 255
Asn Gln Thr Thr Val Ser Gly Ser Cys Gly Val Thr Glu Ser Ser Leu
260 265 270
Arg Leu Ser Asp Glu Thr Thr Asn Leu Thr Phe Ser Phe Thr Met Asn
275 280 285
Ser Thr Thr Gln Lys Tyr Tyr Leu Ser Ala Val Ser Val Ser Ala Leu
290 295 300
Trp Pro Asp Met Ser Val Val Phe Glu Ala Gly Asn Thr Ser Leu Ser
305 310 315 320
Ala Leu Gln Cys Ser Val Gly Arg Ser Tyr Val Cys Ser Ala Gln Gln
325 330 335
Met Leu Ser Val Thr Pro Val Phe Ser Ile Asn Thr Phe Arg Leu Gln
340 345 350
Leu Gln Pro Phe Asn Ile Thr Ala Asn Arg Phe Ser Thr Ala Glu Glu
355 360 365
Cys Arg Val Asp Gln Glu Asn Met Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala
370 375 380
Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Val Ala Tyr Leu Ile Gly
385 390 395 400
Arg Lys Arg Thr His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410
<210> 8
<211> 417
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 8
Met Ser Trp Arg Gln Val Lys Met Pro Val Tyr Trp Met Ala Val Met
1 5 10 15
Leu Leu Ile Gly Val Val Gln Val Ala Thr Ala Val Gln Phe Glu Val
20 25 30
Lys Asp Gly Lys Thr Asn Ile Thr Cys Ile Leu Ala Asp Leu Ser Ile
35 40 45
Asn Phe Ser Val Ser Tyr Asn Val Ser Ser Lys Met Glu Leu Ala Thr
50 55 60
Phe Val Leu Pro Ser Glu Ala Val Thr Asn Ile Asn Lys Ser Ser Cys
65 70 75 80
Gly Val Glu Asn Thr Thr Ala Pro Val Leu Ala Ile Gln Phe Gly Ser
85 90 95
Asn His Ser Leu Ser Ile His Phe Ala Arg Asn Asn Thr Arg Tyr Glu
100 105 110
Val Ala Glu Leu Val Met Ser Tyr Asn Leu Ser Asp Lys Ile Ile Phe
115 120 125
Pro Asn Ala Ser Glu Asn Gly Thr Lys Thr Val Ser Thr Asn Lys Thr
130 135 140
Ala Val Leu Ala Glu Asn Asp Thr Val Tyr Lys Cys Met Asn Pro His
145 150 155 160
Leu Ile Arg Met Asp Asn Ala Asn Ala Thr Phe His Asp Ile Arg Leu
165 170 175
Glu Ala Tyr Leu Lys Gln Ser Asn Phe Ser Gln Lys Val Ser Thr Cys
180 185 190
Ser Glu Asp Ile Thr Pro Thr Ser Ala Pro Ala Pro Val Thr Thr Thr
195 200 205
Ala Pro Val Pro Ala Pro Val Pro Asp Pro Pro Val Val Gln Tyr Ser
210 215 220
Val Asn Arg Ser Ser Glu Pro Cys Leu Leu Ala Lys Val Gly Leu Gln
225 230 235 240
Met Asn Ile Thr Tyr Thr Thr Lys Asp Gly Lys Asn Gly Ser Tyr Val
245 250 255
Phe Asn Ile Glu Ser Lys Gly Val Thr Val Asp Gly Asn Cys Thr Asn
260 265 270
Thr Thr Ala Tyr Leu Ser Leu Ser Thr Gly Ser Ile Asp Leu Arg Phe
275 280 285
Asn Phe Thr Leu Asn Ser Ser Leu Glu Val Phe Tyr Leu Asp Gly Val
290 295 300
Ser Leu Ser Thr Gly Leu Pro Ala Asp Ala Asn Asp Thr His Phe Glu
305 310 315 320
Ala Ala Asn Ser Ser Leu Asn Tyr Met Gln Thr Asn Val His Lys Ser
325 330 335
Phe Lys Cys Asn Ser Lys Gln Thr Leu Gln Ile Thr Asp Pro Phe Thr
340 345 350
Val Asn Thr Tyr His Leu Gln Val Gln Ala Phe Asn Ser Asp Asn Thr
355 360 365
Phe Ala Ser Ala Val Glu Cys Ser Leu Asp Glu Asn Gly Met Leu Val
370 375 380
Pro Ile Val Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu
385 390 395 400
Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr
405 410 415
Ile
<210> 9
<211> 417
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 9
Met Ala Ala Pro Gly Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met
20 25 30
Val Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala
35 40 45
Ser Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr
50 55 60
Phe Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys
65 70 75 80
Gly Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg
85 90 95
Gly His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser
100 105 110
Val Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe
115 120 125
Pro Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp
130 135 140
Ile Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln
145 150 155 160
Val His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln
165 170 175
Ala Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu
180 185 190
Gln Asp Arg Pro Ser Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ser Pro
195 200 205
Ser Pro Ser Pro Val Pro Glu Ser Pro Ser Val Asp Lys Tyr Asn Val
210 215 220
Ser Gly Thr Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Leu Thr Tyr Glu Arg Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Leu Leu
245 250 255
Asn Ile Asn Pro Asn Lys Thr Ser Ala Ser Gly Ser Cys Gly Ala His
260 265 270
Leu Val Thr Leu Glu Leu His Ser Glu Gly Ser Thr Val Leu Leu Phe
275 280 285
Leu Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile
290 295 300
Gln Leu Asn Thr Thr Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ala Phe Lys Ala
305 310 315 320
Ala Asn Gly Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr
325 330 335
Lys Cys Asn Ala Glu Glu His Val Arg Val Thr Lys Ala Phe Ser Val
340 345 350
Asn Ile Phe Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Lys Val Glu Gly Gly Gln
355 360 365
Phe Gly Ser Val Glu Glu Cys Val Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu Ile
370 375 380
Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu
385 390 395 400
Ile Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr
405 410 415
Ile
<210> 10
<211> 415
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 10
Met Ala Ala Pro Gly Ser Ala Arg Arg Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Ile Val
20 25 30
Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala
35 40 45
Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Phe
50 55 60
Asp Leu Pro Ser Asp Ala Lys Val Val Leu Asn Ser Ser Ser Cys Gly
65 70 75 80
Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly
85 90 95
Gln Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val
100 105 110
Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro
115 120 125
Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile
130 135 140
Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val
145 150 155 160
His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala
165 170 175
Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Glu Glu Thr Arg Cys Glu Gln
180 185 190
Asp Arg Pro Ser Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ser Pro Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Val Pro Glu Ser Pro Ser Val Asp Lys Tyr Asn Val Ser
210 215 220
Gly Thr Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn
225 230 235 240
Leu Thr Tyr Glu Arg Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Leu Leu Asn
245 250 255
Ile Asn Pro Asn Lys Thr Leu Ala Ser Gly Ser Cys Gly Ala His Leu
260 265 270
Val Thr Leu Glu Leu His Ser Glu Gly Ser Thr Val Leu Leu Phe Gln
275 280 285
Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile Gln
290 295 300
Leu Asn Thr Thr Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ala Phe Lys Ala Ala
305 310 315 320
Asn Ser Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys
325 330 335
Cys Asn Ala Glu Glu His Val Arg Val Thr Lys Ala Phe Ser Val Asn
340 345 350
Ile Phe Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Lys Val Glu Gly Gly Gln Phe
355 360 365
Gly Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu Ile Pro
370 375 380
Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile
385 390 395 400
Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr
405 410 415
<210> 11
<211> 413
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 11
Met Ala Ala Phe Gly Gly Ala Arg Pro Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ala Gly Leu Val His Gly Ala Ala Ala Val Phe Val Val Lys Asp
20 25 30
Ala Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala Phe Leu
35 40 45
Ala Ser Tyr Glu Thr Arg Ser Gly Pro Lys Asn Val Thr Phe Asp Leu
50 55 60
Pro Ser Asp Ala Val Val Leu Asn Ser Ser Ser Cys Gly Lys Glu Asn
65 70 75 80
Thr Ser Asp Pro Ser Leu Met Ile Ala Phe Gly Lys Gly His Gly Leu
85 90 95
Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val Gln Leu Met
100 105 110
Ser Phe Ile Tyr Asn Leu Ser Asp Thr Gln Ile Phe Pro Asn Ala Ser
115 120 125
Ser Lys Glu Thr Lys Thr Val Glu Ser Ala Thr Asp Ile Arg Ala Asp
130 135 140
Ile Asn Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Asn Thr Gln Ile His Met His
145 150 155 160
Asn Val Thr Val Thr Phe His Asp Val Thr Ile Gln Ala Tyr Leu Ala
165 170 175
Asn Ser Asn Phe Ser Lys Glu Glu Thr Arg Cys Glu Gln Asp Gly Pro
180 185 190
Phe Pro Thr Thr Ala Pro Pro Pro Pro Pro His Pro Ser Pro Ser Pro
195 200 205
Ala Pro Glu Ser Pro Ser Val His Lys Tyr Asn Val Ser Gly Ala Asn
210 215 220
Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Val Thr Tyr
225 230 235 240
Lys Lys Lys Asp Asn Thr Thr Val Val Lys Val Val Ser Ile Asn Pro
245 250 255
Asn Lys Thr Thr Ala Gly Gly Ser Cys Gly Ala Gln Leu Val Thr Leu
260 265 270
Glu Leu Arg Ser Glu Ser Val Thr Leu Leu Ala Phe Gln Phe Gly Met
275 280 285
Asn Ala Ser Thr Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile Gln Leu Asn Met
290 295 300
Thr Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Thr Phe Lys Ala Gly Asn Asn Ser
305 310 315 320
Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Ile Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn Ala
325 330 335
Gly Glu His Val Gln Val Thr Glu Ala Phe Ser Val Asn Ile Ile Lys
340 345 350
Val Trp Val Gln Ala Phe Gln Val Gln Gly Asp Lys Phe Gly Ser Val
355 360 365
Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Ser Met Leu Ile Pro Ile Ala Val
370 375 380
Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu
385 390 395 400
Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410
<210> 12
<211> 417
<212> PRT
<213> 家兔（Oryctolagus cuniculus）
<400> 12
Met Glu Ala Pro Gly Gly Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Leu Val His Gly Ala Ser Ala Val Phe Val Val Arg Asn Ser
20 25 30
Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Val Phe Ser Val
35 40 45
Ile Tyr Glu Ser Lys Ser Gly Tyr Lys Asn Ala Ser Phe Glu Leu Pro
50 55 60
Ala Thr Ala Glu Val Gln Asn Thr Ser Ser Cys Gly Arg Glu Asn Thr
65 70 75 80
Ser Asn Pro Ser Leu Gln Ile Ala Phe Gly Arg Gly His Val Leu Ala
85 90 95
Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Leu Tyr Ser Val Pro Leu Leu Ser
100 105 110
Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Ser Asp Leu Phe Pro Asn Ala Ser Ser
115 120 125
Lys Asp Ile Lys Thr Val Gly Ser Thr Thr Asp Ile Lys Ala Asp Ile
130 135 140
Asp Lys Arg Tyr Arg Cys Val Ser Asp Ser Lys Val Pro Met Gly Asn
145 150 155 160
Val Thr Val Thr Leu Gln Asp Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu Trp Asn
165 170 175
Asn Ser Phe Ser Gln Ala Glu Ser Arg Cys Arg Gln Asp Met Pro Ser
180 185 190
Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Val Pro Pro Ser Pro Pro Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Pro Pro Lys Pro Glu Ser Pro Ser Val Ser Arg Tyr Asn
210 215 220
Val Ser Asp Gly Asn Ala Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln
225 230 235 240
Leu Asn Leu Thr Tyr Val His Arg Asp Asn Ala Thr Val Thr Arg Val
245 250 255
Phe Asn Ile Asn Pro Asn Lys Thr Lys Pro Ser Gly His Cys Gly Ala
260 265 270
Gln Gln Val Thr Leu Glu Leu Gln Ser Glu Arg Ser Thr Val Leu Val
275 280 285
Phe Gln Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Gly Gln Tyr Phe Leu Gln Gly
290 295 300
Val Leu Leu Asn Thr Thr Leu Pro Asp Ala Arg Glu Pro Ala Phe Ser
305 310 315 320
Ala Ser Asn Ser Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Leu Gly Asn Ser
325 330 335
Tyr Lys Cys Asn Ser Glu Glu His Val Arg Val Thr Pro Ala Phe Ser
340 345 350
Leu Ser Ile Phe Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Gln Val Lys Gly Asp
355 360 365
Lys Phe Gly Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Gln Asp Ser Met Leu
370 375 380
Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Val Val
385 390 395 400
Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln
405 410 415
Thr
<210> 13
<211> 409
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 13
Met Ala Ala Pro Gly Gly Ala Arg Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Phe Ala Gly Leu Val His Gly Ala Ser Ala Val Phe Val Val Lys Asn
20 25 30
Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asp Phe Ser Ala Thr Phe Leu
35 40 45
Thr Ser Tyr Asp Thr Arg Ser Gly Pro Gln Asn Lys Ser Phe Glu Leu
50 55 60
Pro Ala Gly Ala Glu Val Ser Asn Ser Ser Ser Cys Gly Lys Glu Asn
65 70 75 80
Ala Ser Asp Ser Ser Leu Val Ile Thr Phe Gly Arg Gly His Thr Leu
85 90 95
Thr Leu Ile Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Glu Val Gln Leu Met
100 105 110
Arg Phe Ala Tyr Asn Leu Ser Asp Thr Asp Thr Phe Pro Asn Ser Ser
115 120 125
Ser Thr Gly Val Lys Thr Val Glu Ser Ala Thr Asp Ile Lys Ala Asp
130 135 140
Ile Asn Lys Thr Tyr Arg Cys Val Ser Glu Thr Gln Val Asn Met Asp
145 150 155 160
Asn Val Thr Val Thr Leu Arg Asp Ala Ala Ile Gln Ala Tyr Leu Ser
165 170 175
Ser Ser Asn Phe Ser Arg Glu Glu Thr Arg Cys Glu Gln Asp Leu Pro
180 185 190
Thr Pro Thr Thr Pro Pro Gln Pro Ala Pro Thr Pro Ala Pro Ala Ser
195 200 205
Pro Ala Val Phe Arg Tyr Asn Val Ser Gly Ser Asn Gly Thr Cys Leu
210 215 220
Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Val Thr Tyr Arg Arg Val Asp
225 230 235 240
Asn Lys Thr Val Thr Arg Glu Phe Asn Val Asn Pro Asn Lys Thr Thr
245 250 255
Phe Gly Gly Asn Cys Ser Ala Thr Leu Ala Thr Leu Glu Leu His Ser
260 265 270
Glu Asn Leu Leu Leu Leu Ala Leu Gln Phe Val Met Asn Glu Ser Ser
275 280 285
Ser Arg Val Phe Leu Gln Gly Val Gln Leu Asn Leu Thr Leu Pro Asp
290 295 300
Ala Lys Glu Gly Ser Phe Thr Ala Thr Asn Ser Ser Leu Arg Ala Leu
305 310 315 320
Gln Ala Thr Ala Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn Ala Glu Gln Arg Leu
325 330 335
Arg Val Thr Ser Ser Phe Ser Leu Asn Met Phe Arg Val Trp Leu Gln
340 345 350
Ala Phe Arg Val Asp Gly Asp Lys Phe Gly Pro Val Glu Glu Cys Gln
355 360 365
Leu Asp Glu Asn Ser Met Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu
370 375 380
Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Leu Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys
385 390 395 400
Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405
<210> 14
<211> 407
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 14
Met Ala Ala Pro Gly Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala
1 5 10 15
Gly Leu Ala His Ser Ala Pro Ala Leu Phe Glu Val Lys Asp Asn Asn
20 25 30
Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Ser Phe Ser Ala Ser Phe Leu Thr Thr
35 40 45
Tyr Asp Ala Gly His Val Ser Lys Val Ser Asn Met Thr Leu Pro Ala
50 55 60
Ser Ala Glu Val Leu Lys Asn Ser Ser Ser Cys Gly Glu Lys Asn Ala
65 70 75 80
Ser Glu Pro Thr Leu Ala Ile Thr Phe Gly Glu Gly Tyr Leu Leu Lys
85 90 95
Leu Thr Phe Thr Lys Asn Thr Thr Arg Tyr Ser Val Gln His Met Tyr
100 105 110
Phe Thr Tyr Asn Leu Ser Asp Thr Gln Phe Phe Pro Asn Ala Ser Ser
115 120 125
Lys Gly Pro Asp Thr Val Asp Ser Thr Thr Asp Ile Lys Ala Asp Ile
130 135 140
Asn Lys Thr Tyr Arg Cys Val Ser Asp Ile Arg Val Tyr Met Lys Asn
145 150 155 160
Val Thr Ile Val Leu Trp Asp Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu Pro Ser
165 170 175
Ser Asn Phe Ser Lys Glu Glu Thr Arg Cys Pro Gln Asp Gln Pro Ser
180 185 190
Pro Thr Thr Gly Pro Pro Ser Pro Ser Pro Pro Leu Val Pro Thr Asn
195 200 205
Pro Ser Val Ser Lys Tyr Asn Val Thr Gly Asp Asn Gly Thr Cys Leu
210 215 220
Leu Ala Ser Met Ala Leu Gln Leu Asn Ile Thr Tyr Met Lys Lys Asp
225 230 235 240
Asn Thr Thr Val Thr Arg Ala Phe Asn Ile Asn Pro Ser Asp Lys Tyr
245 250 255
Ser Gly Thr Cys Gly Ala Gln Leu Val Thr Leu Lys Val Gly Asn Lys
260 265 270
Ser Arg Val Leu Glu Leu Gln Phe Gly Met Asn Ala Thr Ser Ser Leu
275 280 285
Phe Phe Leu Gln Gly Val Gln Leu Asn Met Thr Leu Pro Asp Ala Ile
290 295 300
Glu Pro Thr Phe Ser Thr Ser Asn Tyr Ser Leu Lys Ala Leu Gln Ala
305 310 315 320
Ser Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn Ser Glu Glu His Ile Phe Val
325 330 335
Ser Lys Ala Leu Ala Leu Asn Val Phe Ser Val Gln Val Gln Ala Phe
340 345 350
Arg Val Glu Ser Asp Arg Phe Gly Ser Val Glu Glu Cys Val Gln Asp
355 360 365
Gly Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly
370 375 380
Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser
385 390 395 400
His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405
<210> 15
<211> 414
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 15
Met Gly Gly Ala Ala Arg Ala Val Leu Leu Gly Phe Leu Gln Ala Ser
1 5 10 15
Ser Ser Phe Asp Val Arg Asp Ser Thr Gly Lys Val Cys Ile Ile Ala
20 25 30
Asn Leu Thr Val Ala Phe Ser Val Glu Tyr Lys Ser Ser Gly Gln Lys
35 40 45
Gln Phe Ala His Phe Phe Leu Pro Gln Asn Ala Thr Ser Gln Ser His
50 55 60
Ser Ser Cys Gly Glu Gly Asn Thr Ser His Pro Ile Leu Ala Leu Ser
65 70 75 80
Phe Gly Ala Gly His Leu Ile Ser Leu Asn Phe Ser Lys Thr Leu Asp
85 90 95
Lys Tyr Gln Val Glu Glu Leu Thr Phe His Tyr Asn Leu Ser Asp Glu
100 105 110
Thr Leu Phe Pro Asn Ala Thr Glu Gly Lys Val Met Val Ala Thr Gln
115 120 125
Lys Ser Val Ile Gln Ala Arg Ile Gly Thr Glu Tyr Arg Cys Ile Asn
130 135 140
Ser Lys Tyr Val Arg Met Lys His Val Asn Ile Thr Phe Ser Asn Val
145 150 155 160
Thr Leu Glu Ala Tyr Pro Thr Asn Asp Thr Phe Ser Ala Asn Lys Thr
165 170 175
Glu Cys Arg Glu Asp Met Val Ser Thr Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr
180 185 190
Pro Lys His Ala Thr Ser Gln Val Pro Thr Thr Ser Pro Ala Pro Thr
195 200 205
Ala Ala Pro Ser Ser Pro Ala Val Gly Lys Tyr Asn Val Thr Gly Ala
210 215 220
Asn Gly Thr Cys Val Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Thr
225 230 235 240
Tyr Val Lys Lys Asp Glu Lys Met Gly Leu Asp Leu Leu Asn Phe Ile
245 250 255
Pro His Asn Thr Ser Ala Ser Gly Met Cys Glu Ser Thr Ser Ala Phe
260 265 270
Leu Asn Leu Ala Phe Glu Lys Thr Lys Ile Thr Phe His Phe Val Leu
275 280 285
Asn Ala Ser Ser Glu Lys Phe Phe Leu Gln Gly Val Asn Val Ser Thr
290 295 300
Thr Leu Pro Ser Glu Ala Lys Ala Pro Thr Phe Glu Ala Ser Asn Asp
305 310 315 320
Ser Met Ser Glu Ser Arg Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Ser
325 330 335
Ala Glu Glu Asn Phe Gln Val Thr Asp Lys Ala Leu Val Asn Val Phe
340 345 350
Asn Val Gln Val Gln Ala Phe Lys Val Asp Gly Asp Lys Phe Gly Ala
355 360 365
Met Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile Ile
370 375 380
Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr
385 390 395 400
Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410
<210> 16
<211> 413
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 16
Met Ala Ala Pro Gly Gly Ala Trp Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly Ala Ser Ala Val Phe Val Val Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asp Phe Ala Ala Ala Phe
35 40 45
Glu Ile Ser Tyr Asp Ser Arg Ser Gly Ala Lys Asn Thr Thr Phe Ser
50 55 60
Leu Pro Ala Ser Ala Gln Val Leu Asn Ser Ser Ser Cys Gly Lys Glu
65 70 75 80
Asn Thr Ser Asp Ser Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly His Thr
85 90 95
Leu Thr Leu Ser Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val Gln Leu
100 105 110
Met Thr Leu Val Tyr Asn Leu Ser Asp Ala Glu Phe Phe Pro Ser Ala
115 120 125
Ser Ser Lys Gly Thr Lys Thr Val Ala Ala Ser Thr Asp Ile Arg Ala
130 135 140
Asp Leu Asn Thr Lys Tyr Arg Cys Val Ser Asn Ser Gln Val His Leu
145 150 155 160
Leu Asn Val Thr Val Thr Leu Gly Asn Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu
165 170 175
Ala Asn Asn Ser Phe Ser Gln Gln Glu Thr Arg Cys Glu Gln Asp Lys
180 185 190
Pro Ser Pro Pro Thr Pro Thr Ala Pro Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro
195 200 205
Ala Pro Thr Ser Pro Val Val Ser Arg Tyr Asn Val Ser Gly Ala Asn
210 215 220
Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Val Thr Tyr
225 230 235 240
Arg Thr Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Gly Leu Asn Ile Asn Pro
245 250 255
Asn Lys Thr Thr Phe Gly Gly Ser Cys Ser Ala Gln Leu Val Thr Leu
260 265 270
Glu Leu Gln Gly Glu Ser Leu Arg Leu Leu Ala Leu Gln Phe Ala Leu
275 280 285
Asn Thr Ser Ser Ser Arg Val Phe Leu Gln Gly Val Gln Leu Asn Met
290 295 300
Thr Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ser Phe Ser Ala Ala Asn Ser Ser
305 310 315 320
Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Ala Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Arg Ser
325 330 335
Glu Gln Arg Leu Gln Val Thr Glu Ala Phe Ala Leu Asn Val Phe Gln
340 345 350
Val Arg Val Gln Ala Phe Arg Val Asp Gly Asp Lys Phe Gly Pro Ala
355 360 365
Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Ser Met Leu Ile Pro Ile Ala Val
370 375 380
Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Val Val Leu Met Ala Tyr Leu
385 390 395 400
Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410
<210> 17
<211> 422
<212> PRT
<213> 短尾负鼠（Monodelphis domestica）
<400> 17
Met Ala Glu Pro Gly Gly Ala Arg Thr Pro Gln Arg Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Gly Leu Ile His Val Ala Ser Ser Ile Phe Val Val Lys Asn
20 25 30
Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Thr Phe Ser
35 40 45
Met Asn Tyr Thr Thr Lys Ser Gly Leu Glu Ser Thr Thr Phe Arg Leu
50 55 60
Pro Gln Asn Ala Ser Val Met Asn Ser Ser Ser Cys Gly Lys Glu Asn
65 70 75 80
Thr Ser Asn Pro Ile Leu Glu Ile Gly Phe Gly Gly Gly His Thr Leu
85 90 95
Thr Met Asn Phe Ser Ser Thr Thr Gln Ser Tyr Gln Val Glu Leu Leu
100 105 110
Ser Phe Ser Tyr Asn Leu Ser Asp Ala Thr Leu Phe Pro Asn Ala Ser
115 120 125
Lys Gly Ser Glu Glu Ser Ser Val Lys Ser Lys Thr Asp Ile Gln Ala
130 135 140
Asp Ile His Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Ser Asn Arg Ile Thr Met
145 150 155 160
Ser Asn Val Thr Ile Val Leu Ser Asp Val Thr Ile Gln Ala Tyr Leu
165 170 175
Ser Asn Asn Thr Phe Ser Lys Glu Glu Thr Arg Cys Ser Gln Asp Thr
180 185 190
Pro Ser Pro Ser Pro Val Pro Thr Thr His Pro Thr Thr Ile Pro Val
195 200 205
Pro Thr Pro Thr Pro Thr Arg Pro Pro Thr Pro Ala Glu Ile Pro Pro
210 215 220
Ile Phe Lys Tyr Asn Val Ser Asp Ala Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala
225 230 235 240
Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Thr Tyr Ala Lys Lys Asp Asn Ser
245 250 255
Ser Ala Arg Ile Ile Trp Asn Ile Asn Pro Asn Lys Thr Val Ala Gly
260 265 270
Gly Ser Cys Ser Pro Gln Val Ala Ile Leu Glu Leu Gln Thr Glu Asn
275 280 285
Ser Thr Leu Ala Phe Ser Phe Gly Met Asn Ala Thr Thr Ser Lys Phe
290 295 300
Phe Leu Arg Glu Ile Arg Phe His Lys Phe Phe Pro Asp Ala Lys Asp
305 310 315 320
Pro Ala Phe Gly Ala Val Asn Ser Ser Leu Lys Glu Leu Gln Ala Thr
325 330 335
Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn Ala Glu Glu Asn Val His Val Thr
340 345 350
Asp Gly Phe Ser Val Asn Ile Phe Arg Val Arg Val Gln Ala Phe Lys
355 360 365
Val Glu Gly Asp Lys Phe Gly Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu
370 375 380
Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu
385 390 395 400
Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His
405 410 415
Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
420
<210> 18
<211> 415
<212> PRT
<213> 火鸡（Meleagris gallopavo）
<400> 18
Met Ala Arg Ala Leu Leu Ala Ala Val Leu Leu Gly Phe Leu Gln Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ser Phe Asp Val Arg Asp Ser Thr Gly Lys Val Cys Ile Ile
20 25 30
Ala Asn Leu Thr Val Ala Phe Ser Val Glu Tyr Lys Ser Asn Gly Gln
35 40 45
Lys Gln Phe Ala His Phe Phe Leu Pro Gln Asn Ala Thr Ser Gln Ser
50 55 60
His Ser Ser Cys Gly Glu Gly Asn Thr Ser His Pro Ile Leu Ala Leu
65 70 75 80
Ser Phe Gly Ala Gly His Leu Leu Ser Leu Asn Phe Ser Lys Thr Leu
85 90 95
Asp Lys Tyr Gln Val Glu Glu Leu Thr Phe His Tyr Asn Leu Ser Asp
100 105 110
Glu Thr Leu Phe Pro Asn Ala Ser Glu Gly Lys Val Met Glu Val Thr
115 120 125
Gln Lys Ser Val Ile Gln Ala Arg Ile Gly Thr Glu Tyr Arg Cys Ile
130 135 140
Asn Ser Lys Tyr Ile Tyr Ile Arg His Val Asn Ile Thr Phe Ser Asn
145 150 155 160
Val Thr Leu Glu Ala Tyr Pro Thr Asn Gly Thr Phe Ser Thr Asn Lys
165 170 175
Thr Glu Cys Ser Glu Asp Met Val Ser Thr Thr Thr Val Ala Pro Thr
180 185 190
Thr Pro Lys His Ile Thr Ser Gln Val Pro Ala Thr Ser Pro Ala Pro
195 200 205
Thr Ala Ala Pro Ser Asn Pro Ala Val Gly Lys Tyr Asn Val Thr Gly
210 215 220
Ala Asn Gly Thr Cys Val Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile
225 230 235 240
Thr Tyr Leu Lys Lys Asp Gly Lys Thr Gly Leu Asp Leu Leu Asn Phe
245 250 255
Val Pro His Asn Thr Asn Ala Ser Gly Thr Cys Glu Asn Thr Ser Ala
260 265 270
Phe Leu Asn Leu Ala Phe Glu Lys Thr Lys Ile Thr Phe His Phe Val
275 280 285
Leu Asn Ala Ser Ser Glu Lys Phe Phe Leu Gln Gly Val Asn Val Ser
290 295 300
Thr Thr Leu Pro Ser Glu Ala Lys Ala Pro Met Phe Glu Ala Ser Asn
305 310 315 320
Asp Ser Met Ser Glu Leu Arg Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys
325 330 335
Ser Ala Glu Glu Asn Leu Gln Val Thr Asp Lys Ala Leu Val Asn Val
340 345 350
Phe Asn Val Gln Val Gln Ala Phe Lys Val Asp Gly Asp Lys Phe Gly
355 360 365
Ala Val Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile
370 375 380
Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala
385 390 395 400
Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410 415
<210> 19
<211> 415
<212> PRT
<213> 斑胸草雀（Taeniopygia guttata）
<400> 19
Met Ala Arg Gly Leu Leu Ala Ala Ala Ala Leu Leu Gly Phe Leu Gln
1 5 10 15
Ala Ser Ser Ser Phe Glu Val Lys Asp Ser Ser Gly Lys Val Cys Ile
20 25 30
Leu Ala Asp Leu Thr Val Ala Phe Ser Val Glu Tyr Lys Thr Asn Val
35 40 45
Gln Lys Glu Phe Val His Phe Phe Leu Pro Gln Asn Ala Ser Val Asp
50 55 60
Ser Gln Ser Ser Cys Gly Lys Asp Asn Ala Ser His Pro Ile Leu Val
65 70 75 80
Leu Asp Phe Gly Gly Gly His Ser Leu Ser Leu Asn Phe Ser Glu Ser
85 90 95
Ala Asp Lys Tyr Gln Val Glu Glu Leu Val Phe His Tyr Asn Leu Ser
100 105 110
Asp Ala Thr Leu Phe Pro Asn Ser Ser Thr Gly Gly Met Lys Thr Val
115 120 125
Ser His Lys Ser Ile Ile Gln Ala His Met Gly Thr Gln Tyr Arg Cys
130 135 140
Ile Asn Ser Lys His Ile Asn Met Lys Asn Val Asn Val Thr Phe Ser
145 150 155 160
Asn Val Thr Leu Glu Ala Tyr Leu Thr Asn Gly Thr Leu Ser Val Asn
165 170 175
Lys Thr Glu Cys Ala Glu Asp Arg Val Ser Thr Thr Thr Met Val Pro
180 185 190
Thr Thr Pro Lys Gln Thr Thr Ser Gln Ser Pro Thr Thr Gly Pro Ala
195 200 205
Pro Thr Ser Pro Pro Asn Pro Thr Val Gly Lys Tyr Asn Val Thr Gly
210 215 220
Pro Asn Gly Thr Cys Val Leu Ala Tyr Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile
225 230 235 240
Thr Tyr Gln Gln Lys Asp Glu Lys Met Gly Leu Asp Leu Leu Asn Phe
245 250 255
Val Pro His Asn Thr Thr Ser Ser Gly Arg Cys Asp Asn Thr Ser Ala
260 265 270
Leu Leu Asn Leu Thr Phe Glu Lys Thr Arg Val Ile Phe Gln Phe Ala
275 280 285
Leu Asn Ala Thr Ala Glu Lys Phe Phe Leu Gln Gly Val Ser Val Ser
290 295 300
Thr Thr Leu Pro Ser Glu Ala Lys Asn Pro Lys Phe Glu Ala Thr Asn
305 310 315 320
Asn Ser Met Ser Glu Leu Arg Ala Ser Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys
325 330 335
Ser Ser Glu Glu Asn Leu Gln Val Thr Asp Gln Ala Leu Val Asn Val
340 345 350
Phe Asn Val Gln Val Gln Ile Phe Lys Ile Asp Gly Asp Lys Phe Gly
355 360 365
Pro Val Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu Ile Pro Ile
370 375 380
Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala
385 390 395 400
Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
405 410 415
<210> 20
<211> 418
<212> PRT
<213> 变色蜥（Anolis carolinensis）
<400> 20
Met Val Ser Ser Ser Ser Cys Arg Arg Gly Leu Leu Leu Ala Ala Val
1 5 10 15
Leu Leu Gly Phe Leu Gln Ala Ser Ser Thr Phe Glu Val Arg Asp Lys
20 25 30
Thr Gly Lys Ile Cys Ile Leu Ala Asn Phe Ser Ala Glu Phe Thr Val
35 40 45
Asp Tyr Ser Thr Lys Ala Lys Val Glu Arg Lys Thr Phe Gln Leu Pro
50 55 60
Ser Ser Ala His Ile Asn Lys Glu Ser Ser Ser Cys Gly Lys Glu Lys
65 70 75 80
Glu Thr Ser Gln Val Leu Val Val Glu Phe Gly Thr Gly Asn Ser Leu
85 90 95
Thr Phe Thr Phe Glu Lys Ser Asn Asp Phe Tyr His Val Ser Asn Leu
100 105 110
Thr Phe Ser Tyr Asn Leu Ser Asp Ser Ser Phe Phe Pro Asn Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gln Arg Glu Val Ser Arg Ala Gly Asp Ile Gln Ala Asn Ile
130 135 140
Asn Thr Thr Tyr Arg Cys Arg Ser Asn His Arg Val Asn Met Thr Asn
145 150 155 160
Val Thr Val Leu Phe Ser Asn Val Thr Leu Glu Ala Tyr Leu Pro Asn
165 170 175
Asn Ala Phe Ser Lys Asn Asp Ser Val Cys Ala Glu Asp Lys Thr Ser
180 185 190
Thr Val Ala Pro Pro Ile Thr Thr His Ile Pro Thr Thr Thr Ser Leu
195 200 205
Ala Pro Pro Thr Pro Pro Pro Thr Asp Thr Pro Lys Ile Gly Arg Tyr
210 215 220
Asn Val Thr Gly Leu His Gly Ile Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu
225 230 235 240
Gln Val Asn Val Thr Tyr Ser Thr Lys Asn Lys Thr Ser Lys Ser Glu
245 250 255
Leu Leu Asn Leu Pro Pro Thr Ala Glu Val Ser Gly Thr Cys Glu Asn
260 265 270
Ser Ser Ile Thr Leu Asn Leu Thr Ser Glu Ser Thr Ser Leu Ser Phe
275 280 285
Gln Phe Ser Gln Asn Thr Ser Thr Glu Lys Tyr Phe Leu Gln Gly Ile
290 295 300
Ile Val Thr Ala Asn Leu Pro Pro Glu Ala Thr Glu Lys Asn Ile Ser
305 310 315 320
Tyr Ser Asn His Thr Leu Asn Ala Leu Lys Thr Ser Val Gly Lys Ser
325 330 335
Tyr Lys Cys Ile Ala Glu Glu Ser Ile Trp Ile Ser Gly Lys Ala Ala
340 345 350
Val Asn Ile Phe Asn Ile Gln Leu Gln Ala Phe Lys Ile Pro Gly Asp
355 360 365
Lys Phe Gly Ala Val Glu Glu Cys Gln Leu Asp Glu Asn Asn Met Leu
370 375 380
Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val
385 390 395 400
Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln
405 410 415
Thr Ile
<210> 21
<211> 418
<212> PRT
<213> 青鳉（Oryzias latipes）
<400> 21
Met Lys Ser Phe Pro Ser Phe Val Ala Leu Phe Ile Val Cys Ser Ala
1 5 10 15
Val Leu Ala Asp Thr Gln Ala Val Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly
20 25 30
Asn Ser Thr Cys Ile Lys Ala Glu Phe Ser Ala Val Phe Ser Ile Thr
35 40 45
Tyr Asn Thr Thr Asn Asp Thr Arg Thr Val Ser Val Phe Leu Pro Asn
50 55 60
Ser Thr Thr Val Asp Ser Ala Asn Ser Ser Cys Gly Ser Asn Gly Ser
65 70 75 80
Thr Pro Gly Leu Met Ala Lys Phe Gly Pro Gly His Tyr Phe Gly Met
85 90 95
Asn Phe Ser Thr Asn Gly Ser Leu Tyr Ser Val Asp Thr Leu Phe Leu
100 105 110
Arg Tyr Asn Leu Ser Asp Ala Ser Leu Phe Pro Glu Ala Asn Ser Ser
115 120 125
Gly Pro Val Asp Phe Glu Leu Ser Ala Ser Val Gly Ile Trp Ala Pro
130 135 140
Thr Asn Thr Thr Tyr Arg Cys Leu Ser Pro Thr Thr Ile Thr Ile Thr
145 150 155 160
Arg Pro Ser Val Thr Phe Ser Glu Met Lys Leu Glu Ala Tyr Met Pro
165 170 175
Gly Asn Asp Phe Ser Pro Ala Glu Arg Val Cys Ala Ala Asp Gln Thr
180 185 190
Thr Thr Gly Ala Pro Thr Thr Thr Thr Ser Ala Ala Thr Pro Thr Thr
195 200 205
Pro Ser Pro Thr Pro Ala Gly Thr Pro Glu Gln Gly Ser Tyr Ser Val
210 215 220
Lys Asn Ala Ser Gly Thr Val Cys Leu Met Ala Lys Met Gly Val Gln
225 230 235 240
Leu Asn Val Ser Tyr Phe Ser Gln Ser Gln Asn Lys Thr Val Gln Glu
245 250 255
Leu Leu Asn Leu Thr Pro Asn Leu Thr Ser Ser Ser Gly Leu Cys Gly
260 265 270
Gly Thr Asn Ala Thr Leu Val Leu Ala Gln Glu Glu Thr Thr Val Leu
275 280 285
Ser Phe Leu Phe Thr Val Asn Ser Thr Ser Asn Lys Tyr His Leu Ser
290 295 300
Gly Ile Thr Leu Gln Ala Asn Trp Thr Asp Met Met Ser Pro Phe Ser
305 310 315 320
Ala Ser Asn Thr Ser Leu Asp Tyr Leu Arg Ser Ser Leu Gly His Ser
325 330 335
Tyr Met Cys Asn Ala Glu Gln Thr Leu Phe Val Val Ser Thr Phe Ser
340 345 350
Ile Asn Met Phe Glu Leu Gln Val Gln Pro Phe Gly Val Thr Ser Thr
355 360 365
Gln Phe Ala Ser Ala Glu Val Cys Gln Ile Asp Gln Asp Gln Met Leu
370 375 380
Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val
385 390 395 400
Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln
405 410 415
Thr Ile
<210> 22
<211> 420
<212> PRT
<213> 红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）
<400> 22
Met Lys Arg Ser His Ala Leu Val Val Leu Ile Ile Ala Trp Phe Ser
1 5 10 15
Leu Ser Gly Cys Ile Gln Ala Val Ser Leu Glu Val Lys Glu Gly Asn
20 25 30
Ser Thr Cys Ile Lys Ala Asn Leu Ser Ala Tyr Phe Ser Ile Thr Tyr
35 40 45
Asn Thr Ser Ser Ser Thr Arg Thr Ala Gln Phe Ile Leu Pro Asp Ser
50 55 60
Ala Thr Val Asp Pro Asp Ser Ser Thr Cys Gly Gly Asn Gly Ser Ser
65 70 75 80
Pro Trp Leu Val Ala Val Phe Gly Ala Gly His Ala Leu Gly Leu Gly
85 90 95
Phe Ser Thr Asn Gly Ser Phe Tyr Ser Val Ala Asn Leu Thr Leu Gln
100 105 110
Tyr Asn Leu Ser Asp Ala Ser Val Phe Pro Asp Ala Asn Ser Ser Gly
115 120 125
Val Val Thr Val Val Ser Ser Ser Val Gly Ile Trp Ala Ala Val Asn
130 135 140
Thr Thr Tyr Arg Cys Leu Ser Ser Val Leu Phe Gln Val Gly Gly Ala
145 150 155 160
Thr Val Thr Phe Ser Asp Met Arg Leu Glu Ala Tyr Met Pro Gly Asn
165 170 175
Asp Leu Ser Pro Arg Glu Ser Phe Cys Ala Ala Asp Gln Thr Thr Thr
180 185 190
Ala Pro Pro Thr Thr Thr Ala Ala Pro Thr Thr Thr Ala Ala Thr Thr
195 200 205
Met Ala Pro Pro Ala Pro Thr Pro Pro Gly Thr Pro Val Arg Gly Thr
210 215 220
Tyr Ser Val Val Asn Gly Asn Asp Thr Thr Cys Leu Leu Ala Gln Met
225 230 235 240
Gly Leu Gln Leu Asn Val Ser Tyr Phe Ser Arg Ser Gln Asn Lys Thr
245 250 255
Val Gln Ser Leu Val Asn Leu Thr Pro Asn Leu Thr Asn Ser Thr Gly
260 265 270
Ser Cys Glu Lys Gly Ser Ala Thr Leu Ile Leu Thr Gln Gln Thr Thr
275 280 285
Ile Leu Ile Phe Thr Phe Ser Leu Asn Ser Thr Ser Ser Lys Tyr His
290 295 300
Leu Ser Gly Leu Ser Leu Gln Ala Asn Trp Ser Asp Met Ala Ala Ala
305 310 315 320
Phe Ser Ala Ser Asn Ala Ser Leu Ser Tyr Leu Arg Ser Thr Phe Gly
325 330 335
His Ser Tyr Met Cys Asn Ala Glu Gln Ile Leu Ala Val Thr Pro Val
340 345 350
Phe Ser Leu Asn Thr Phe Ser Leu Gln Ile Gln Pro Phe Gly Val Thr
355 360 365
Thr Asn Gln Phe Ala Ala Ala Glu Glu Cys Gln Met Asp Gln Asp Gln
370 375 380
Met Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ser Leu Ala Gly Leu Val Leu
385 390 395 400
Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Lys Ser His Ala Gly
405 410 415
Tyr Gln Thr Ile
420
<210> 23
<211> 419
<212> PRT
<213> 安大略鲑（Salmo salar）
<400> 23
Met Thr Arg Thr Cys Pro Phe Val Val Gly Ile Ala Cys Phe Ala Ile
1 5 10 15
Leu Gly Cys Val Thr Val Val Gln Ser Gln Val Thr Leu Glu Val Thr
20 25 30
Glu Gly Asn Ser Thr Cys Ile Lys Ala Glu Leu Ser Ala Ser Phe Ser
35 40 45
Ile Thr Tyr Asp Thr Ala Asn Gly Thr Arg Thr Val Met Val Pro Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Ala Val Val Gly Val Ala Ser Ser Cys Gly Gly Asp Gly
65 70 75 80
Arg Ser Pro Trp Leu Val Ala Leu Phe Gly Asp Gly His Ala Leu Gly
85 90 95
Leu Gly Phe Ser Ser Asn Asp Ser Leu Tyr Ser Val Ala Lys Leu Thr
100 105 110
Leu Gln Tyr Asn Leu Ser Asp Val Ser Asn Phe Pro Glu Ala Asn Ser
115 120 125
Thr Asp Val Val Thr Val Glu Thr Thr Ser Val Gly Met Val Ala Arg
130 135 140
Val Asn Thr Thr Tyr Arg Cys Ile Ser Ala Ser Pro Val Ile Val Gly
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Thr Phe Ser Asn Val Thr Met Glu Ala Phe Met Thr
165 170 175
Gly Glu Asp Leu Ser Pro Asn Glu Ser Val Cys Thr Ala Asp Gln Ser
180 185 190
Phe Thr Thr Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ser Thr Thr Thr Ala Ala Pro
195 200 205
Ala Pro Val Pro Thr Pro Pro Gly Thr Pro Ser Gln Gly Ser Tyr Ser
210 215 220
Val Ser Asn Ser Asn Gly Thr Val Cys Leu Leu Ala Arg Met Ala Leu
225 230 235 240
Gln Leu Asn Ile Ser His Phe Ser Ala Ser Gln Asn Lys Thr Ile Gln
245 250 255
Glu Val Val Asn Leu Leu Pro Asn Gln Thr Thr Ser Ser Gly Ser Cys
260 265 270
Asp Pro Thr Ser Ala Thr Leu Val Leu Thr Gln Ala Asn Ala Thr Asn
275 280 285
Leu Ser Phe Leu Phe Thr Leu Asn Ser Thr Ser Asn Arg Tyr His Leu
290 295 300
Thr Gly Leu Ser Val Val Ala Ala Trp Ser Asp Met Thr Ala Pro Phe
305 310 315 320
Asn Thr Ser Asn Ser Ser Leu Asp Tyr Gln Arg Gly Ser Leu Gly Arg
325 330 335
Ser Tyr Met Cys Ile Ser Glu Gln Thr Leu Val Val Asp Gln Asn Phe
340 345 350
Ser Leu Asn Thr Phe Gln Leu Gln Val Gln Pro Phe Gly Ile Thr Arg
355 360 365
Gly Gln Phe Ala Gln Ala Glu Glu Cys Gln Leu Asp Gln Asp Asn Met
370 375 380
Leu Ile Pro Ile Val Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile
385 390 395 400
Val Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr
405 410 415
Gln Thr Ile
<210> 24
<211> 247
<212> PRT
<213> 罗非鱼（Oreochromis niloticus）
<400> 24
Met Val Gln Ile Cys Arg Val Gln Ser Trp Phe Val Gly Val Thr Pro
1 5 10 15
Leu Leu Ile Phe Ala Thr Val Leu His Gln Gly Phe Ala Thr Val Ala
20 25 30
Pro Pro Thr Pro Ala Pro His Lys Glu Pro Gly Arg Pro Glu Arg Gly
35 40 45
Tyr Tyr Asn Val Thr Asn His Asn Gly Thr Ile Cys Leu Met Ala Tyr
50 55 60
Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Ser Tyr Asn Ser Thr Ser Gln Lys Lys
65 70 75 80
Val Val Gln Asp Val Met Asn Leu Gln Pro Asn Leu Thr Lys His Ser
85 90 95
Gly Leu Cys Asp Ser Asp Ile Ala Ser Leu Asn Leu Thr Val Asp Ala
100 105 110
Val Lys Thr Asn Leu Thr Phe Val Phe Thr Met Asn Ser Thr Ser Asn
115 120 125
Lys Tyr His Leu Ser Glu Val Thr Val Ser Ala Ala Trp Pro Glu Met
130 135 140
Lys Glu Pro Val Ser Val His Asn Ser Ser Leu Asp Tyr Leu Arg Gly
145 150 155 160
Thr Val Gly Tyr Ser Tyr Phe Cys Arg Asp Glu Gln Thr Leu Asn Val
165 170 175
Ala Gln Asn Leu Ser Ile Asn Thr Phe Gln Leu Gln Val Gln Pro Phe
180 185 190
Ala Val Lys Gly Asp Gln Phe Gly Ala Ala Glu Glu Cys Gln Leu Asp
195 200 205
Glu Asp Asp Met Leu Ile Pro Ile Val Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly
210 215 220
Leu Val Val Ile Val Leu Leu Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys Arg Ser
225 230 235 240
His Ala Gly Tyr Gln Ser Ile
245
<210> 25
<211> 415
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 25
Met Cys Leu Ser Pro Val Lys Gly Ala Lys Leu Ile Leu Ile Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Gly Ala Val Gln Ser Asn Ala Leu Ile Val Asn Leu Thr Asp
20 25 30
Ser Lys Gly Thr Cys Leu Tyr Ala Glu Trp Glu Met Asn Phe Thr Ile
35 40 45
Thr Tyr Glu Thr Thr Asn Gln Thr Asn Lys Thr Ile Thr Ile Ala Val
50 55 60
Pro Asp Lys Ala Thr His Asp Gly Ser Ser Cys Gly Asp Asp Arg Asn
65 70 75 80
Ser Ala Lys Ile Met Ile Gln Phe Gly Phe Ala Val Ser Trp Ala Val
85 90 95
Asn Phe Thr Lys Glu Ala Ser His Tyr Ser Ile His Asp Ile Val Leu
100 105 110
Ser Tyr Asn Thr Ser Asp Ser Thr Val Phe Pro Gly Ala Val Ala Lys
115 120 125
Gly Val His Thr Val Lys Asn Pro Glu Asn Phe Lys Val Pro Leu Asp
130 135 140
Val Ile Phe Lys Cys Asn Ser Val Leu Thr Tyr Asn Leu Thr Pro Val
145 150 155 160
Val Gln Lys Tyr Trp Gly Ile His Leu Gln Ala Phe Val Gln Asn Gly
165 170 175
Thr Val Ser Lys Asn Glu Gln Val Cys Glu Glu Asp Gln Thr Pro Thr
180 185 190
Thr Val Ala Pro Ile Ile His Thr Thr Ala Pro Ser Thr Thr Thr Thr
195 200 205
Leu Thr Pro Thr Ser Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr
210 215 220
Val Gly Asn Tyr Ser Ile Arg Asn Gly Asn Thr Thr Cys Leu Leu Ala
225 230 235 240
Thr Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Thr Glu Glu Lys Val Pro Phe Ile
245 250 255
Phe Asn Ile Asn Pro Ala Thr Thr Asn Phe Thr Gly Ser Cys Gln Pro
260 265 270
Gln Ser Ala Gln Leu Arg Leu Asn Asn Ser Gln Ile Lys Tyr Leu Asp
275 280 285
Phe Ile Phe Ala Val Lys Asn Glu Lys Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val
290 295 300
Asn Val Tyr Met Tyr Leu Ala Asn Gly Ser Ala Phe Asn Ile Ser Asn
305 310 315 320
Lys Asn Leu Ser Phe Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys
325 330 335
Asn Lys Glu Gln Val Leu Ser Val Ser Arg Ala Phe Gln Ile Asn Thr
340 345 350
Phe Asn Leu Lys Val Gln Pro Phe Asn Val Thr Lys Gly Gln Tyr Ser
355 360 365
Thr Ala Gln Glu Cys Ser Leu Asp Asp Asp Thr Ile Leu Ile Pro Ile
370 375 380
Ile Val Gly Ala Gly Leu Ser Gly Leu Ile Ile Val Ile Val Ile Ala
385 390 395 400
Tyr Leu Ile Gly Arg Arg Lys Thr Tyr Ala Gly Tyr Gln Thr Leu
405 410 415
<210> 26
<211> 415
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 26
Met Gly Asp Thr Gly Ala Met Glu Arg Cys Ala Cys Pro Ala Ala Val
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Leu Val Leu Met Gly Ala Thr Ala Phe Glu Val Glu
20 25 30
Ile Lys Asp Asp Lys Asn Ala Thr Cys Ile Tyr Ala Lys Leu Ser Val
35 40 45
Asn Ile Thr Val Gln Tyr Glu Thr Asp Thr Ser Ser Ser Lys Asn Ile
50 55 60
Thr Phe Pro Val Pro Ser Asp Val Thr Thr Asn Gly Ser Ser Cys Gly
65 70 75 80
Ser Asp Gly Lys Ala Pro Leu Leu Val Ile Asn Phe Gly Asn Ser Gln
85 90 95
Ser Trp Ser Leu Asn Phe Thr Arg Asn Asn Ser Thr Tyr Ser Gly Ser
100 105 110
Ala Leu Ile Phe Thr Tyr Asn Thr Asn Asp Thr Ile Leu Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Leu Arg Lys Gly Leu Ile Ser Ser Thr Ala Met Phe Leu Gly Pro
130 135 140
Val Pro Leu Asn Ser Thr Tyr Lys Cys Ile Ser Arg Glu Val Val Val
145 150 155 160
Ser Glu Asn Val Thr Gln Ile Ile Tyr Asp Val Lys Leu Glu Ala Phe
165 170 175
Met Ala Asn Gly Thr Leu Gly Lys Glu Ile Ile Cys Asp Ala Asp Lys
180 185 190
Pro Ser Pro Val Pro Ser Pro Thr Gln Pro Ser Thr Thr Ala Ser Thr
195 200 205
Ala Ile Pro Ala Pro Thr Ser Lys Pro Leu Asp Lys Pro Thr Met Gly
210 215 220
Asn Tyr Thr Val Ser Asp Ala Ser Gly Ile Cys Leu Leu Ala Ser Met
225 230 235 240
Gly Leu Gln Ile Asn Thr Ser Leu Leu Ser Glu Gly Lys Asn Ile Trp
245 250 255
Arg Pro Phe Asn Ile Asp Pro Leu Gly Ile Lys Thr Asn Gly Thr Cys
260 265 270
Thr Asn Gln Thr Gly Thr Leu Ile Leu Thr Glu Asn Arg Thr Ile Ile
275 280 285
Glu Phe Thr Phe Ala Leu Lys Asn Lys Asn His Phe Tyr Leu Glu Glu
290 295 300
Val Asn Ile Thr Leu Ile Asn Gly Ser Ala Phe Ser Ser Arg Gln Asn
305 310 315 320
Gln Asn Leu Ser Thr Trp Glu Ala Ser Val Asp Ser Ser Tyr Met Cys
325 330 335
His Lys Glu Gln Gln Ile Lys Val Ser Glu Asp Leu Phe Ile Asn Ala
340 345 350
Phe Asp Val Arg Val Gln Pro Phe Gly Val Asn Asn Gly Thr Phe Ala
355 360 365
Thr Ala Glu Asp Cys Phe Ala Asp Gln Asn Phe Ile Val Pro Ile Val
370 375 380
Val Gly Ala Ala Leu Gly Val Leu Val Val Leu Val Met Val Ala Tyr
385 390 395 400
Phe Ile Gly Arg Arg Lys Gln Ser Ser Ala Gly Tyr Glu Gln Met
405 410 415
<210> 27
<211> 355
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 27
Met Ala Val Arg Gly Phe Leu Pro Leu Leu Phe Ile Leu Leu Ser Gly
1 5 10 15
Ile Val His Ala Asp Asp Met Met Thr Ser Pro Leu Pro Ser Thr Ala
20 25 30
Glu Leu Lys Thr Ala Asn Leu Pro Leu Val Ile Gln Thr Thr Ser Ser
35 40 45
Thr Thr Ser Thr Thr Thr Thr Ser Arg Pro Ser Ser Thr Ser Thr His
50 55 60
Ser Thr Leu Thr Thr Glu Pro Ala Ala Lys Thr Thr Thr Ala Arg Thr
65 70 75 80
Thr Val Thr Thr Ser Ala Pro Thr Ser Thr Gln Ser Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Ser Ala Thr Val Thr Thr Leu Ala Pro Thr Thr Thr Gly His
100 105 110
Asn Thr Thr Asn Ser Thr Thr Glu Pro Pro Thr Thr Thr Gly His Asn
115 120 125
Thr Thr Asn Ser Thr Thr Asp Ala Pro Thr Thr Thr His Thr Asn Ala
130 135 140
Thr Val Ala Pro Thr Pro Pro Pro Thr Thr Pro Ser Val Pro Lys Pro
145 150 155 160
Thr Val Gly Asn Tyr Ser Val Lys Thr Asp Asn Val Ser Asp Cys Leu
165 170 175
Leu Ala Lys Met Gly Leu Gln Phe Ser Phe Lys Ile Ser Gly Asn Ala
180 185 190
Ser Leu Gln Thr Val Asn Leu Asp Pro Asn Val Thr Lys Val Asn Gly
195 200 205
Thr Cys Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ser Ser Leu Phe Leu Thr Ser Lys
210 215 220
Asp Ile Thr Val His Phe Val Phe Thr Asn Asp Ser Gln Lys Phe Arg
225 230 235 240
Leu His Ala Leu Thr Leu Thr Val Asp Leu Gly Asn Gly Asn Ile Phe
245 250 255
Asn Asp Ser Asn Thr Asn Leu Ser Leu Trp Glu Ala Ser Val Gly Ser
260 265 270
Ser Tyr Met Cys Arg Lys Glu Gln Ser Tyr Asn Ile Ser Asp Lys Leu
275 280 285
Thr Leu Asn Thr Phe Glu Leu Gln Val Gln Pro Phe Asp Val Lys Lys
290 295 300
Asn Ser Phe Ser Thr Ala His Glu Cys Ser Leu Asp Asp Thr Ser Leu
305 310 315 320
Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Ile Phe Ile
325 330 335
Val Val Ile Ala Tyr Val Ile Gly Arg Arg Arg Thr Tyr Val Gly Tyr
340 345 350
Gln Thr Leu
355
<210> 28
<211> 411
<212> PRT
<213> 东非狒狒（Papio anubis）
<400> 28
Met Val Cys Phe Arg Leu Phe Pro Val Pro Gly Ser Gly Leu Val Leu
1 5 10 15
Val Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Gln Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asp Ser Gly Lys Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Val Arg Tyr Glu Thr Thr Asn Lys Thr Tyr Lys Thr Val
50 55 60
Thr Ile Ser Asp Arg Gly Thr Val Thr Tyr Asn Gly Ser Ile Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asp Gln Asn Gly Pro Lys Ile Ala Val Gln Phe Gly Pro Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Ala Asn Phe Ser Lys Ala Ala Ser Thr Tyr Ser Ile Asp
100 105 110
Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Gly Asp Asn Thr Thr Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Glu Asp Lys Gly Ile Ile Thr Val Asp Glu Leu Leu Ala Ile Lys
130 135 140
Ile Pro Leu Asn Asp Leu Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Thr Leu Glu
145 150 155 160
Lys Asn Asp Val Val Gln Asn Tyr Trp Asp Val Leu Val Gln Ala Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Asn Glu Phe Leu Cys Asp Glu Asp
180 185 190
Lys Thr Ser Thr Val Ala Pro Thr Ile His Thr Thr Val Pro Ser Pro
195 200 205
Thr Thr Thr Pro Thr Pro Lys Glu Lys Pro Glu Ala Gly Thr Tyr Ser
210 215 220
Val Asn Asn Gly Asn Asp Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln
225 230 235 240
Leu Asn Ile Thr Gln Asp Lys Val Ala Ser Val Ile Asn Ile Asn Pro
245 250 255
Asn Thr Thr His Ser Thr Gly Ser Cys Arg Ser His Thr Ala Leu Leu
260 265 270
Arg Leu Asn Ser Ser Thr Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala Val
275 280 285
Lys Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Met Tyr
290 295 300
Leu Val Asn Gly Ser Val Phe Ser Ile Ala Asn Asn Asn Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr
325 330 335
Val Ser Val Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg Val
340 345 350
Gln Pro Phe Asn Val Thr Gln Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Glu Glu Cys
355 360 365
Ser Ala Asp Ser Asp Leu Asn Phe Leu Ile Pro Val Ala Val Gly Val
370 375 380
Ala Leu Gly Phe Leu Ile Ile Val Val Phe Ile Ser Tyr Met Ile Gly
385 390 395 400
Arg Arg Lys Ser Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Val
405 410
<210> 29
<211> 410
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 29
Met Val Cys Phe Arg Leu Phe Pro Val Pro Gly Ser Gly Leu Val Leu
1 5 10 15
Val Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Gln Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asp Ser Gly Lys Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Val Arg Tyr Glu Thr Thr Asn Lys Thr Tyr Lys Thr Val
50 55 60
Thr Ile Ser Asp Arg Gly Thr Val Thr Tyr Asn Gly Ser Ile Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asp Gln Asn Gly Pro Lys Ile Ala Val Gln Phe Gly Pro Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Ala Asn Phe Ser Lys Ala Ala Ser Thr Tyr Ser Ile Asp
100 105 110
Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Gly Asp Asn Thr Thr Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Glu Asp Lys Gly Ile Ile Thr Val Asp Glu Leu Leu Ala Ile Lys
130 135 140
Ile Pro Leu Asn Asp Leu Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Thr Leu Glu
145 150 155 160
Lys Asn Asp Val Val Gln Asn Tyr Trp Asp Val Leu Val Gln Ala Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Asn Glu Phe Leu Cys Asp Glu Asp
180 185 190
Lys Thr Ser Thr Val Ala Pro Thr Ile His Thr Thr Val Pro Ser Pro
195 200 205
Thr Thr Thr Pro Thr Pro Lys Glu Lys Pro Glu Ala Gly Thr Tyr Ser
210 215 220
Val Asn Asn Gly Asn Glu Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln
225 230 235 240
Leu Asn Ile Thr Gln Asp Lys Val Ala Ser Val Ile Asn Ile Asn Pro
245 250 255
Asn Thr Thr His Ser Thr Gly Ser Cys Arg Ser His Thr Ala Leu Leu
260 265 270
Arg Leu Asn Ser Ser Thr Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala Val
275 280 285
Lys Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Met Tyr
290 295 300
Leu Val Asn Gly Ser Val Phe Ser Ile Ala Asn Asn Asn Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr
325 330 335
Val Ser Val Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg Val
340 345 350
Gln Pro Phe Asn Val Thr Gln Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Gln Asp Cys
355 360 365
Ser Ala Asp Asp Asp Asn Phe Leu Val Pro Ile Ala Val Gly Ala Ala
370 375 380
Leu Ala Gly Val Leu Ile Leu Val Leu Leu Ala Tyr Phe Ile Gly Leu
385 390 395 400
Lys Arg His His Ala Gly Tyr Glu Gln Phe
405 410
<210> 30
<211> 364
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<220>
<221> SITE
<222> (200)..(200)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 30
Met Val Cys Phe Arg Leu Phe Pro Val Pro Gly Ser Gly Leu Val Leu
1 5 10 15
Val Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Arg Ser His Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Glu Ala Asp Ser Ala Ile Asn Cys Ser Lys Cys Lys Thr Val Thr Ile
35 40 45
Ser Asp His Gly Thr Val Thr Tyr Asn Gly Ser Ile Cys Gly Asp Asp
50 55 60
Gln Asn Gly Pro Lys Ile Ala Val Gln Phe Gly Pro Gly Phe Ser Trp
65 70 75 80
Ile Ala Asn Phe Thr Lys Ala Ala Ser Thr Tyr Ser Ile Asp Ser Ile
85 90 95
Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Gly Asp Asn Thr Thr Phe Pro Asp Ala Glu
100 105 110
Asp Lys Gly Ile Leu Thr Val Asp Glu Leu Leu Ala Ile Lys Ile Pro
115 120 125
Leu Asn Asp Leu Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Thr Leu Glu Lys Asn
130 135 140
Asp Val Val Gln His Tyr Trp Asp Val Leu Val Gln Ala Phe Val Gln
145 150 155 160
Asn Gly Thr Val Ser Thr Asn Glu Phe Leu Cys Asp Lys Asp Lys Thr
165 170 175
Ser Thr Val Ala Pro Thr Val His Thr Thr Val Pro Ser Pro Thr Thr
180 185 190
Thr Pro Thr Arg Ile Pro Pro Xaa Val Ala Ser Val Ile Asn Ile Asn
195 200 205
Pro Asn Thr Thr His Ser Thr Gly Ser Cys Arg Ser His Thr Ala Leu
210 215 220
Leu Arg Leu Asn Ser Ser Thr Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala
225 230 235 240
Val Lys Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Ile Ser Met
245 250 255
Tyr Leu Val Asn Gly Ser Val Phe Ser Ile Ala Asn Asn Asn Leu Ser
260 265 270
Tyr Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln
275 280 285
Thr Val Ser Val Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg
290 295 300
Val Gln Pro Phe Asn Val Thr Gln Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Glu Glu
305 310 315 320
Cys Ser Ala Asp Ser Asp Leu Asn Phe Leu Ile Pro Val Ala Val Gly
325 330 335
Val Ala Leu Gly Phe Leu Ile Ile Val Val Phe Ile Ser Tyr Met Ile
340 345 350
Gly Arg Arg Lys Ser Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Val
355 360
<210> 31
<211> 411
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 31
Met Val Cys Phe Arg Leu Ser Pro Ala Pro Gly Ser Gly Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Ser Ser Tyr Ala Leu Glu Val Asn
20 25 30
Val Thr Asp Ser Glu Lys Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Ile Gln Tyr Asn Thr Thr Ser Lys Asn Phe Lys Thr Ala
50 55 60
Thr Ile Ser Asp Phe Ser Thr Ala Thr Tyr Asn Gly Ser Val Cys Gly
65 70 75 80
Asn Asp Gln Asn Asn Pro Lys Ile Val Val Gln Phe Gly Ser Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Val Asn Phe Thr Lys Lys Glu Ser Ala Tyr Leu Ile Asp
100 105 110
Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Leu Ser Asp Asn Ala Thr Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Lys Glu Lys Gly Ile Leu Thr Val His Asp Leu Val Gly Phe Arg
130 135 140
Ile Pro Leu Asn Asn Ile Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Thr Leu Glu
145 150 155 160
Lys Asn Gly Val Val Gln Tyr Tyr Trp Asp Val His Val Gln Ala Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Lys Glu Phe Leu Cys Glu Lys Asp
180 185 190
Lys Thr Ser Thr Thr Val Val Pro Thr Ile Ser Thr Thr Thr Pro Ser
195 200 205
Pro Thr Thr Thr Pro Thr Pro Lys Glu Lys Pro Glu Val Gly Ser Tyr
210 215 220
Ser Val Asn Asn Ser Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu
225 230 235 240
Gln Leu Asn Ile Thr His Asn Lys Val Ala Ser Val Ile Asn Ile Asn
245 250 255
Pro Asn Thr Thr Asp Phe Thr Gly Ser Cys Gln Pro Gln Thr Ala Leu
260 265 270
Leu Arg Leu Asn Ser Ser Asn Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala
275 280 285
Val Lys Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Met
290 295 300
Tyr Leu Val Asn Gly Ser Val Phe Ser Ile Ala Asn Asn Asn Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln
325 330 335
Thr Val Ser Val Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg
340 345 350
Val Gln Pro Phe Asn Val Met Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Gln Glu
355 360 365
Cys Ser Leu Asp Asp Asp Thr Ile Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala
370 375 380
Gly Leu Ser Gly Leu Ile Ile Val Ile Val Ile Ala Tyr Leu Ile Gly
385 390 395 400
Arg Arg Lys Ser Tyr Ala Gly Tyr Gln Thr Leu
405 410
<210> 32
<211> 417
<212> PRT
<213> 家马（Equus caballus）
<400> 32
Met Val Cys Phe Arg Leu Ser Pro Val Pro Gly Ser Gly Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Ser Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asp Ser Glu Lys Ala Leu Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Ile Pro Tyr Glu Thr Thr Ser Lys Ser Tyr Lys Thr Val
50 55 60
Thr Ile Ser Asn Phe Gly Thr Pro Thr Tyr Asn Gly Ser Ile Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asn Gln Asn Gly Ser Arg Ile Ala Val Gln Phe Gly Ser Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Val Asn Phe Thr Lys Ser Val Ser Val Tyr Ser Ile Asp
100 105 110
Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Gly Asp Asn Thr Thr Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Lys Asp Lys Gly Ile Leu Thr Val Asn Glu Ser Val Ala Phe Lys
130 135 140
Ile Pro Leu Asn Asp Ile Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Ser Leu Val
145 150 155 160
Lys Asn Gly Val Val Gln Asn Tyr Trp Asp Val His Val Gln Ala Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Asn Glu Tyr Leu Cys Glu Lys Asp
180 185 190
Asn Thr Thr Thr Thr Val Ala Pro Ile Val Pro Thr Thr Val Pro Ser
195 200 205
Pro Thr Thr Thr Ser Ser Pro Thr Thr Thr Pro Ser Pro Lys Glu Lys
210 215 220
Pro Asp Val Gly Ser Tyr Leu Val Lys Asn Gly Ser Asp Thr Cys Leu
225 230 235 240
Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln Leu Asn Val Thr His Asp Lys Val Ala
245 250 255
Ser Val Ile Asn Ile Asn Pro Asn Val Thr Gly Tyr Ser Gly Ser Cys
260 265 270
His Pro Gln Thr Ala Leu Leu Arg Leu Asn Ser Ser Asn Ile Lys Tyr
275 280 285
Leu Asp Phe Val Phe Ala Val Lys Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Leu Lys
290 295 300
Glu Val Asn Val Ser Met Tyr Leu Ala Asn Gly Ser Val Phe Ser Phe
305 310 315 320
Ala Asn Asn Asn Leu Ser Tyr Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr
325 330 335
Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr Val Ser Val Ser Gly Glu Phe Gln Ile
340 345 350
Asn Thr Phe Asp Leu Arg Val Gln Pro Phe Asn Val Lys Asp Gly Lys
355 360 365
Tyr Ser Thr Ala Gln Asp Cys Arg Ala Asp Asp Asp Asn Phe Leu Val
370 375 380
Pro Ile Ala Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Val Leu Ile Leu Val Leu
385 390 395 400
Leu Ala Tyr Phe Ile Gly Leu Lys Arg His His Ala Gly Tyr Glu Gln
405 410 415
Phe
<210> 33
<211> 407
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 33
Met Val Cys Phe Arg Leu Ala Pro Val Pro Gly Ser Gly Phe Leu Leu
1 5 10 15
Leu Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Ser Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asp Ser Ser Asn Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Ile Arg Tyr Glu Thr Thr Asp Lys His Asn Lys Thr Val
50 55 60
Pro Ile Ser Asp Leu Gly Ala Ala Thr Tyr Asn Gly Ser Phe Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asp Gln Asn Gly Pro Lys Ile Ala Val Gln Phe Gly Ser Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Val Asn Phe Thr Lys Glu Ala Ala Ser Pro Ser Thr Tyr
100 105 110
Leu Val Asp Thr Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Asn Asp Asn Lys Thr
115 120 125
Phe Pro Asp Ala Lys Glu Lys Glu Val Phe Thr Val Asn Asn Arg Val
130 135 140
Ala Leu Lys Ile Pro Leu Asn Asp Ile Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser
145 150 155 160
Thr Leu Glu Asn Arg Asp Val Val Gln His Tyr Trp Asp Val His Val
165 170 175
Gln Ala Phe Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Thr Glu Phe Leu Cys
180 185 190
Asp Lys Asp Lys Thr Val Thr Thr Ala Val Pro Ile Val Pro Thr Thr
195 200 205
Leu Pro Ser Pro Thr Lys Pro Val Val Gly Ser Tyr Ser Val Val Asn
210 215 220
Ser Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile
225 230 235 240
Thr His Asp Lys Val Ala Ser Val Phe Asn Ile Asn Pro Asn Thr Thr
245 250 255
Asn Ala Thr Gly Ser Cys Gln Pro Gln Thr Ala Leu Leu Arg Leu Ser
260 265 270
Ser Ser Asn Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala Val Lys Asn Glu
275 280 285
Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Met Ile Leu Val Asn
290 295 300
Gly Ser Val Tyr Ser Ile Ser Asn Thr Asn Leu Ser Tyr Trp Asp Ala
305 310 315 320
Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr Val Ser Val
325 330 335
Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg Val Gln Pro Phe
340 345 350
Ser Val Thr Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Gln Glu Cys Ser Leu Asp
355 360 365
Asp Asp Thr Ile Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Gly Leu Ser Gly
370 375 380
Leu Ile Ile Val Ile Val Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Arg Lys Ser
385 390 395 400
Tyr Ala Gly Tyr Gln Thr Leu
405
<210> 34
<211> 411
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 34
Met Val Cys Phe Arg Leu Ser Pro Val Pro Gly Ser Gly Leu Leu Met
1 5 10 15
Leu Cys Leu Val Leu Gly Ala Val Ser Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asn Ser Glu Lys Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Ile Arg Tyr Glu Thr Thr Asn Asn Ser His Lys Thr Val
50 55 60
Ser Ile Ser Asp Phe Gly Ala Ala Thr Tyr Asn Gly Ser Phe Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asp His Asn Asp Pro Gln Ile Val Met Gln Phe Gly Ser Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Val Asn Phe Ala Lys Glu Ser Ser Ser Tyr Leu Ile Asn
100 105 110
Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Ser Asp Thr Thr Thr Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Lys Lys Lys Gly Val Leu Thr Val Asn Asp Ser Val Gly Phe Gln
130 135 140
Val Pro Leu Asn Asp Ile Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser Thr Leu Glu
145 150 155 160
Lys Asp Asn Val Val Gln His Tyr Trp Asp Val His Val Gln Ala Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Lys Glu Phe Leu Cys Asp Lys Asp
180 185 190
Lys Thr Leu Thr Thr Thr Val Pro Val Ile Pro Thr Ser Val Pro Ser
195 200 205
Pro Thr Thr Thr Pro Thr Pro Lys Glu Lys Pro Glu Thr Gly Ser Tyr
210 215 220
Ser Val Thr Ser Ser Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Asn Met Gly Leu
225 230 235 240
Gln Leu Asn Ile Thr Gln Asp Lys Val Ala Ser Val Ile Asn Ile Asn
245 250 255
Pro Asn Thr Thr Asn Ala Thr Gly Asn Cys His Ser Lys Thr Ala Leu
260 265 270
Leu Arg Leu Ser Gly Ser Asn Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala
275 280 285
Val Lys Asn Asp Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Val
290 295 300
Tyr Leu Val Asn Gly Ser Val Phe Ser Ile Ala Asn Asn Asn Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln
325 330 335
Thr Val Ser Val Ser Gly Ala Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asn Leu Arg
340 345 350
Val Gln Pro Phe Ser Val Met Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Gln Asp
355 360 365
Cys Ser Ala Asp Asp Asp Asn Phe Ile Val Pro Ile Ala Val Gly Ala
370 375 380
Ala Leu Ala Gly Val Leu Ile Leu Val Leu Leu Ala Tyr Phe Ile Gly
385 390 395 400
Leu Lys Arg His His Ala Gly Tyr Glu Gln Phe
405 410
<210> 35
<211> 408
<212> PRT
<213> 绵羊（Ovis aries）
<400> 35
Met Val Cys Phe Arg Leu Ala Pro Val Pro Gly Cys Gly Phe Leu Leu
1 5 10 15
Phe Cys Leu Val Leu Gly Thr Val Ser Ser Tyr Ala Leu Glu Leu Asn
20 25 30
Leu Thr Asp Ser Ser Lys Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Lys Trp Gln Met
35 40 45
Asn Phe Thr Ile Arg Tyr Glu Thr Thr Asp Lys His Asn Lys Thr Val
50 55 60
Thr Ile Ser Asp Phe Asp Ala Ala Ala Tyr Asn Gly Ser Val Cys Gly
65 70 75 80
Asp Asp Gln Asn Gly Pro Lys Ile Ala Val Gln Phe Gly Ser Gly Phe
85 90 95
Ser Trp Ile Val Asn Phe Thr Lys Glu Ala Ser Ser Thr Ser Thr Tyr
100 105 110
Leu Val Asp Ser Ile Ser Phe Ser Tyr Asn Thr Asn Asp Asn Ala Thr
115 120 125
Phe Pro Asp Ala Lys Glu Lys Gly Val Phe Thr Val Asn Asn Arg Val
130 135 140
Ala Leu Lys Ile Pro Leu Asn Asp Ile Phe Arg Cys Asn Ser Leu Ser
145 150 155 160
Thr Leu Glu Lys Ser Asp Val Val Gln His Tyr Trp Asp Val His Val
165 170 175
Gln Ala Phe Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Thr Thr Glu Phe Leu Cys
180 185 190
Asp Lys Asp Lys Thr Val Thr Thr Ala Met Pro Ile Val Pro Thr Thr
195 200 205
Ala Pro Ser Pro Thr Lys Pro Val Val Gly Ser Tyr Ser Val Val Asn
210 215 220
Ser Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile
225 230 235 240
Thr His Asp Lys Val Ala Ser Val Phe Asn Ile Asn Pro Asn Thr Thr
245 250 255
Asn Ala Thr Gly Ser Cys Gln Pro Gln Thr Ala Leu Leu Arg Leu Ser
260 265 270
Ser Ser Asn Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Val Phe Ala Val Lys Asn Glu
275 280 285
Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Met Ile Leu Val Asn
290 295 300
Gly Ser Val Tyr Ser Ile Ser Asn Thr Asn Leu Ser Tyr Trp Asp Ala
305 310 315 320
Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr Val Ser Val
325 330 335
Ser Gly Ala Leu Gln Ile Asn Thr Phe Asp Leu Arg Val Gln Pro Phe
340 345 350
Ser Val Thr Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Glu Glu Cys Ser Ala Asp
355 360 365
Ser Asp Leu Asn Phe Leu Ile Pro Val Ala Val Gly Val Ala Leu Gly
370 375 380
Phe Leu Ile Ile Val Val Phe Ile Ser Tyr Met Ile Gly Arg Arg Lys
385 390 395 400
Ser Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Val
405
<210> 36
<211> 411
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 36
Met Arg Leu Leu Ser Pro Val Thr Gly Ser Lys Leu Val Leu Leu Phe
1 5 10 15
Leu Phe Leu Gly Ala Val Arg Ser Asp Ala Leu Lys Leu Asn Leu Thr
20 25 30
Asp Ser Lys Gly Thr Cys Leu Tyr Ala Glu Trp Glu Met Asn Phe Thr
35 40 45
Ile Thr Tyr Glu Ala Leu Lys Val Asn Glu Thr Val Thr Ile Thr Val
50 55 60
Pro Asp Lys Val Thr Tyr Asn Gly Ser Ser Cys Gly Asp Asp Lys Asn
65 70 75 80
Gly Ala Lys Ile Met Ile Gln Tyr Gly Ser Thr Leu Ser Trp Ala Val
85 90 95
Asn Phe Thr Lys Glu Ala Ser Gln Tyr Phe Ile Asn Asn Ile Thr Leu
100 105 110
Ser Tyr Asn Thr Asn Asp Thr Lys Thr Phe Pro Gly Ala Val Pro Lys
115 120 125
Gly Ile Leu Thr Val Ile Ile Pro Val Gly Ser Gln Leu Pro Leu Gly
130 135 140
Val Ile Phe Lys Cys Ser Ser Val Leu Thr Phe Asn Leu Ser Pro Val
145 150 155 160
Val Gln His Tyr Trp Gly Ile His Leu Gln Ala Phe Val Gln Asn Gly
165 170 175
Thr Val Ser Lys His Glu Gln Val Cys Lys Glu Asp Lys Thr Ala Thr
180 185 190
Thr Val Ala Pro Ile Ile His Thr Thr Val Pro Ser Pro Thr Thr Thr
195 200 205
Leu Thr Pro Thr Ser Ile Pro Val Pro Thr Pro Thr Val Gly Asn Tyr
210 215 220
Thr Ile Ser Asn Gly Asn Ala Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu
225 230 235 240
Gln Leu Asn Ile Thr Glu Glu Lys Val Pro Phe Ile Phe Asn Ile Asn
245 250 255
Pro Ala Thr Thr Asn Phe Thr Gly Ser Cys Gln Pro Gln Thr Ala Gln
260 265 270
Leu Arg Leu Asn Asn Ser Gln Ile Lys Tyr Leu Asp Phe Ile Phe Ala
275 280 285
Val Lys Asn Glu Lys Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Asn Met
290 295 300
Tyr Leu Ala Asn Gly Ser Ala Phe His Val Ser Asn Asn Asn Leu Ser
305 310 315 320
Phe Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln
325 330 335
Val Val Ser Val Ser Arg Thr Phe Gln Ile Asn Thr Phe Asn Leu Lys
340 345 350
Val Gln Pro Phe Asn Val Thr Lys Gly Glu Tyr Ser Thr Ala Gln Asp
355 360 365
Cys Ser Ala Asp Glu Asp Asn Phe Leu Val Pro Ile Ala Val Gly Ala
370 375 380
Ala Leu Gly Gly Val Leu Ile Leu Val Leu Leu Ala Tyr Phe Ile Gly
385 390 395 400
Leu Lys Arg His His Thr Gly Tyr Glu Gln Phe
405 410
<210> 37
<211> 570
<212> PRT
<213> 鸭嘴兽（Ornithorhynchus anatinus）
<400> 37
Met Ala Met Lys Asn Phe Thr Leu Gln Gln Glu Arg Asp Thr Ser Val
1 5 10 15
Ala Leu Ile Ile Arg Thr Tyr Val Arg Ala Phe Leu Lys Val Tyr Thr
20 25 30
Lys Val Pro Lys Pro Gln Arg Cys His Asn Gln Trp Gln Ser Leu Asn
35 40 45
Ile Glu Gly Ile Glu Gly Ile Glu Ile Val Lys Gly Ser Lys Trp Arg
50 55 60
Ser Ala Leu Glu Thr Ile Ile Thr Ile Gln Val Lys Arg Lys Ser Gln
65 70 75 80
Val Gln Lys Tyr His Pro Phe Ser Leu His Ser Glu Cys Gln Lys Thr
85 90 95
Asn Gln Glu Gly Thr Gly Gly Val Ala Thr Val Ile Ala Asp Glu Cys
100 105 110
Leu Leu Trp Pro Ser Ile Pro Phe Ser Thr Leu Ala Gln Lys Val Asn
115 120 125
Leu Gly Ser Cys Glu Ala Phe Ser Ile Ile Gly Tyr Ser Val Phe Ala
130 135 140
Leu Phe Ile Tyr Leu Lys Pro Asn Met Leu Asp Phe Ile Glu Leu Ala
145 150 155 160
Glu Leu Met Leu Ser Thr Glu Thr Gln Leu Leu Glu Pro Thr Arg Val
165 170 175
Cys Cys Gly Ile Cys Gln Ser Tyr Ala Leu Glu Ile Asn Leu Thr Asp
180 185 190
Ser Lys Asn Ala Thr Cys Leu Tyr Ser Lys Trp Gln Met Thr Phe Thr
195 200 205
Ile Asn Tyr Glu Thr Thr Gly Asn Glu Thr Lys Asn Val Thr Val Thr
210 215 220
Val Pro Glu Asn Val Thr Tyr Asp Gly Ser Ser Cys Gly Asp Asn Gln
225 230 235 240
Thr Val Pro Gln Ile Ala Val Gln Phe Gly Leu Gly Tyr Ser Trp His
245 250 255
Leu Asn Phe Thr Lys Lys Glu Asn Asn Ser Tyr Ser Phe Asp Thr Ile
260 265 270
Val Phe Thr Tyr Asn Thr Ser Asp Asn Glu Thr Phe Pro Glu Ala Lys
275 280 285
Glu Lys Gly Gln Val Leu Ser Val Phe Glu Phe Arg Tyr Ala Arg Ile
290 295 300
Pro Leu Asn Lys Ile Phe Arg Cys His Ser Glu Glu Ser Leu Ile Gly
305 310 315 320
Asp Lys Ala Thr His His Tyr Trp Glu Thr Val Val Gln Ala Phe Ile
325 330 335
Gln Asn Gly Thr Ile Ser Lys Glu Glu Phe Ile Cys Ser Lys Asp Arg
340 345 350
Ala Ser Thr Thr Val Ala Pro Val Thr Thr Gln Val Val Pro Ser Thr
355 360 365
Thr Ala Thr Pro Val Pro Gln Asp Lys Pro Tyr Pro Gly Lys Tyr Ala
370 375 380
Val Lys Asn Gly Asn Asp Thr Cys Leu Leu Ala Thr Met Gly Leu Gln
385 390 395 400
Leu Asn Val Thr Gln Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Asn Ile Asn Pro
405 410 415
Asn Val Thr Asp Phe Thr Gly Ser Cys Ser Asn Glu Thr Ala Glu Leu
420 425 430
Arg Leu Ser Gly Ser Asn Val Lys Tyr Ile Asp Phe Ile Phe Ala Val
435 440 445
Lys Asn Gly Asn Arg Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ser Ile Ser
450 455 460
Phe Val Asn Ala Ser Asp Leu Asn Val Ala Asn Asn Asn Leu Ser Tyr
465 470 475 480
Trp Asp Ala Pro Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr
485 490 495
Leu Ala Leu Ala Asp Ser Leu Gln Ile Asn Thr Phe Asn Leu Arg Val
500 505 510
Gln Pro Phe Ser Val Val Ala Gly Lys Tyr Ser Thr Ala Glu Asp Cys
515 520 525
Ser Ala Asp Asp Asp Asn Phe Ile Val Pro Ile Ala Val Gly Ala Ala
530 535 540
Leu Gly Gly Leu Val Ile Leu Val Leu Met Ala Tyr Phe Val Gly Arg
545 550 555 560
Lys Arg Arg Ala Thr Gly Tyr Glu Gln Phe
565 570
<210> 38
<211> 425
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 38
Met Ala Pro Pro Arg Cys Pro Ala Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gly Ala Cys Gly Phe Phe Gln Ser Tyr Ala Val Glu Val Asp Val
20 25 30
Lys Asp Ala Ser Asn Phe Thr Cys Leu Tyr Ala Gln Trp Met Met Lys
35 40 45
Phe Leu Ile Lys Tyr Glu Thr Asn Ser Ser Asp Tyr Lys Asn Ala Ser
50 55 60
Leu Asp Leu Thr Ser Thr Val Thr His Asn Gly Ser Ile Cys Gly Ser
65 70 75 80
Asp Thr Gln Ala Ala Leu Leu Ala Val Gln Phe Gly Asp Gly His Ser
85 90 95
Trp Ser Ile Asn Phe Thr Lys Asn Asn Glu Thr Tyr Arg Ala Glu Phe
100 105 110
Ile Thr Phe Thr Tyr Asn Thr Asn Asp Thr Ala Val Phe Pro Asp Ala
115 120 125
Arg Arg Gln Gly Pro Val Thr Ile Val Val Lys Asp Ala Met His Pro
130 135 140
Ile Gln Leu Asn Asn Val Phe Val Cys His His Thr Thr Ser Leu Glu
145 150 155 160
Ala Glu Asn Val Thr Gln Ile Phe Trp Asn Val Thr Met Gln Pro Phe
165 170 175
Val Gln Asn Gly Thr Ile Ser Lys Lys Glu Ser Arg Cys Tyr Ala Asp
180 185 190
Thr Pro Thr Ala Ala Pro Thr Val Leu Pro Thr Val Ala Asn Val Thr
195 200 205
Thr Ala Ser Thr Thr Ile Ser Pro Ala Pro Thr Thr Ala Pro Lys Pro
210 215 220
Ala Glu Asn Pro Val Thr Gly Asn Tyr Ser Leu Lys Thr Gly Asn Lys
225 230 235 240
Thr Cys Leu Leu Ala Thr Val Gly Leu Gln Leu Asn Ile Ser Gln Asp
245 250 255
Lys Pro Leu Leu Ile Asn Ile Asp Pro Lys Thr Thr His Ala Asp Gly
260 265 270
Thr Cys Gly Asn Thr Ser Ala Thr Leu Lys Leu Asn Asp Gly Asn Arg
275 280 285
Thr Leu Ile Asp Phe Thr Phe Ile Val Asn Ala Ser Ala Ser Val Gln
290 295 300
Lys Phe Tyr Leu Arg Glu Val Asn Val Thr Leu Leu Asn Tyr Gln Asn
305 310 315 320
Gly Ser Val Ile Leu Ser Ala Asp Asn Asn Asn Leu Ser Lys Trp Asp
325 330 335
Ala Ser Leu Gly Asn Ser Tyr Met Cys Arg Lys Glu Gln Thr Leu Glu
340 345 350
Ile Asn Glu Asn Leu Gln Val His Thr Phe Asn Leu Trp Val Gln Pro
355 360 365
Phe Leu Val Lys Glu Asn Lys Phe Ser Ile Ala Glu Glu Cys Phe Ala
370 375 380
Asp Ser Asp Leu Asn Phe Leu Ile Pro Val Ala Val Gly Met Ala Leu
385 390 395 400
Gly Phe Leu Ile Ile Leu Val Phe Ile Ser Tyr Ile Ile Gly Arg Arg
405 410 415
Lys Ser Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Val
420 425
<210> 39
<211> 556
<212> PRT
<213> 斑胸草雀（Taeniopygia guttata）
<400> 39
Met Glu Cys Arg Glu Gly Glu Val Thr Arg Cys Lys Gln Lys Asn Asn
1 5 10 15
Leu Phe Ser Gly Ile Asn Asp Asp Ile Ser Gly Ala Lys Gln Ala Lys
20 25 30
Gln Arg Gln Cys Thr Pro Gln Lys Pro Pro Lys Arg Ala Thr Ala Thr
35 40 45
Leu Pro Leu Gln Arg Pro Pro Arg Gly Ile Pro Gly Pro Ala Pro Ala
50 55 60
Ala Val Ala Ala Ala Val Ala Ala Asp Arg Ile Thr Pro Ser Gly Ser
65 70 75 80
His Gln Thr Arg Pro Pro Glu Ala Ala Arg Asp Glu Arg Pro Val Arg
85 90 95
Asp Pro Arg Asn Arg Ala Ala Ala Pro Ser Gly His Trp Arg Arg Ala
100 105 110
Gly Gly Pro Gln Arg His Arg His His Arg His Arg Arg His Gly Pro
115 120 125
Ala Pro Leu Arg Arg Leu Leu Leu Arg Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala
130 135 140
Ala Ala Arg Phe Leu Gly Phe Phe Gln Ser Tyr Ala Val Glu Val Asp
145 150 155 160
Ile Lys Asp Ala Ser Asn Ala Thr Cys Leu Tyr Ala Asp Trp Met Met
165 170 175
Arg Phe Leu Ile Lys Tyr Glu Ser Asn Ser Gly Asp Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Thr Leu Asn Leu Ser Ser Ser Val Thr His Asn Gly Ser Val Cys Gly
195 200 205
Asn Asp Thr Gln Ala Ala Leu Val Ala Val Gln Phe Gly Glu Gly His
210 215 220
Ser Trp Ser Ile Asn Ile Thr Lys Asn Asn Glu Thr Tyr Gln Gly Asp
225 230 235 240
Phe Ile Thr Leu Thr Tyr Asn Thr Asn Asp Thr Ala Val Phe Pro Asp
245 250 255
Ala Lys Arg Lys Gly Pro Ile Thr Val Leu Val Arg Asp Pro Ser Arg
260 265 270
Pro Ile Gln Leu Asn Thr Val Phe Val Cys His Asn Ser Phe Val Ile
275 280 285
Glu Ala Glu Asn Thr Thr Gln Ile Phe Trp Asn Val Thr Met Gln Ala
290 295 300
Phe Val Gln Asn Gly Thr Val Ser Lys Lys Glu Ser Arg Cys Pro Ala
305 310 315 320
Asp Thr Pro Thr Ser Glu Pro Thr Val Pro Pro Thr Ile Ala Asn Val
325 330 335
Thr Thr Ala Ser Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ala Pro Thr Thr Ala Pro
340 345 350
Lys Pro Val Glu Asn Pro Val Thr Gly Asn Tyr Ser Leu Lys Ser Gly
355 360 365
Asn Lys Thr Cys Phe Leu Ala Thr Val Gly Leu Gln Leu Asn Val Ser
370 375 380
Gln Glu Lys Pro Leu Leu Ile Asn Ile Asn Pro Lys Thr Thr Val Ala
385 390 395 400
Asp Gly Ala Cys Gly Asn Thr Thr Ala Thr Leu Lys Leu Asn Asp Gly
405 410 415
Asn Ser Thr Leu Ile Gly Phe Thr Phe Ala Val Lys Asn Thr Ser Ala
420 425 430
Ser Val Gln Lys Phe Tyr Leu Arg Glu Val Asn Val Thr Leu Leu Asn
435 440 445
Arg Leu Asn Gly Ser Val Ile Ser Ser Ala Asp Asn Ser Asn Leu Ser
450 455 460
Lys Trp Asp Ala Phe Leu Gly Ser Ser Tyr Met Cys Arg Lys Glu Gln
465 470 475 480
Thr Leu Gln Ile Asn Glu Asn Val Gln Val His Thr Phe Asn Leu Trp
485 490 495
Ile Gln Pro Phe Leu Val Glu Ala Asn Lys Phe Ala Thr Ala Glu Glu
500 505 510
Cys Ile Ala Asp Ser Asp Leu Asn Phe Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly
515 520 525
Val Ala Leu Gly Phe Leu Ile Ile Leu Val Phe Ile Ser Tyr Ile Ile
530 535 540
Gly Arg Arg Lys Ser Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Val
545 550 555
<210> 40
<211> 408
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 40
Met Glu Arg Cys Ala Cys Pro Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ser Leu Val
1 5 10 15
Leu Met Gly Ala Met Ala Phe Asp Val Glu Ile Lys Asp Asp Lys Asn
20 25 30
Ala Thr Cys Ile Tyr Ala Lys Leu Ser Val Asn Val Thr Val Gln Tyr
35 40 45
Glu Thr Asn Thr Ser Ser Thr Lys Asn Val Thr Phe Ser Val Pro Ser
50 55 60
Glu Val Thr Thr Asn Gly Ser Ser Cys Gly Ser Asn Gly Lys Ala Pro
65 70 75 80
Ile Leu Val Ile Asn Phe Gly Asn Gly His Ser Trp Ser Leu Asn Phe
85 90 95
Thr Arg Asn Asp Ser Met Tyr Ser Gly Gly Ala Leu Ile Phe Thr Tyr
100 105 110
Asn Thr Asn Asp Ser Thr Leu Phe Pro Asp Ala Leu Lys Glu Gly Leu
115 120 125
Ile Ser Ser Thr Ala Ala Phe Leu Gly Pro Ile Pro Leu Asn Ser Thr
130 135 140
Tyr Lys Cys Ile Ser Ser Glu Val Val Val Ser Glu Asn Val Thr Gln
145 150 155 160
Ile Ile Ser Asp Val Lys Leu Glu Ala Phe Met Gln Asn Gly Thr Leu
165 170 175
Gly Lys Glu Val Ser Cys Asp Ala Asp Lys Pro Ser Pro Thr Pro Thr
180 185 190
Thr Asn Pro Ser Thr Thr Ala Ser Thr Thr Thr Pro Thr Pro Thr Ser
195 200 205
Lys Pro Leu Asp Asn Pro Thr Thr Gly Asn Tyr Ser Val Ser Asp Val
210 215 220
Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Ile Asn Thr Ser
225 230 235 240
Leu Leu Ser Glu Gly Lys Asn Ile Trp Thr Ala Phe Asn Ile Asp Pro
245 250 255
Thr Ala Met Ser Lys Asn Gly Thr Cys Ser Asn Gln Thr Gly Thr Leu
260 265 270
Ile Leu Thr Asp Asn Ser Thr Val Ile Glu Phe Thr Leu Ala Leu Lys
275 280 285
Asn Lys Asn His Phe Tyr Leu Lys Glu Val Asn Val Ala Leu Ile Asn
290 295 300
Gly Ser Ala Ser Ser Thr Arg Gln Asn Gln Asn Leu Ser Ala Trp Glu
305 310 315 320
Ala Ser Val Gly Ser Ser Tyr Met Cys His Lys Glu Gln Gln Ile Lys
325 330 335
Val Ser Glu Asp Leu Val Ile Asn Ser Phe Asp Val Arg Val Gln Leu
340 345 350
Phe Gly Val Lys Asn Glu Thr Phe Ala Thr Ala Gln Gln Cys Ser Leu
355 360 365
Asp Asp Asp Ser Ile Val Ile Pro Ile Val Val Gly Ala Ala Leu Ala
370 375 380
Gly Leu Ile Val Ile Ile Val Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Arg Lys
385 390 395 400
Gly Tyr Ser Gly Tyr Gln Thr Leu
405
<210> 41
<211> 404
<212> PRT
<213> 安大略鲑（Salmo salar）
<400> 41
Met Phe Arg Cys Ala Phe Leu Ile Leu Phe Leu Ala Leu Gly Asn Glu
1 5 10 15
Leu His Leu Ser His Gly Thr Glu Val Ser Val Asn Asn Thr Glu Asn
20 25 30
Lys Leu Cys Leu Tyr Ala Asn Leu Met Val Asn Phe Ser Val Thr Tyr
35 40 45
Glu Val Gly Val Asn Lys Asn Glu Thr Val Ile Phe Val Leu Pro Glu
50 55 60
Asn Val Thr Thr Glu Gly Ser Thr Cys Asp Asn Thr Thr Ser Thr Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Phe Gly His Gly His Ser Trp Thr Val Glu Phe Thr Lys
85 90 95
Lys Asn Lys Thr Tyr Gln Val Asp Thr Ile Val Phe Ser Tyr Asn Leu
100 105 110
Asn Asp Ser Ser Val Phe Pro Asn Ser Thr Ser Lys Glu Thr Lys Phe
115 120 125
Val Thr Val Lys Ser Ile Ile Thr Asn Val Ser Val Asp Thr Tyr Tyr
130 135 140
Ser Cys Lys Ser Glu Asn Val Leu Thr Val Glu Ser Val Ile Gln Thr
145 150 155 160
Leu Tyr Asp Val Ala Leu Gln Ala Phe Val Ile Asn Gly Ser Lys Ser
165 170 175
Asp Thr Asp Thr Val Cys Ser Ala Asp Met Thr Ser Thr Thr Val Ala
180 185 190
Pro Thr Thr Thr Val Thr Ser Thr Ala Ala Pro Thr Ser Thr Pro Thr
195 200 205
Leu Pro Thr Pro Thr Thr Gly Lys Tyr Ser Ile Ala Pro Asp Val Asn
210 215 220
Ser Thr Ala Cys Leu Met Ala Thr Phe Gly Leu Gln Ile Gly Tyr Lys
225 230 235 240
Gln Gly Asp Lys Glu Glu Thr Ile Asn Leu Val Pro Asn Ile Thr Glu
245 250 255
Val Gly Gly Ala Cys Gly Ala Asn Ser Ser Asp Leu Ile Leu Thr Ser
260 265 270
Asp Thr Ile Thr Ile Met Phe Thr Phe Ser Asn Asp Gly Lys Lys Phe
275 280 285
His Leu His Ala Leu Lys Val Thr Val Lys Pro Ala Thr Gly Asp Pro
290 295 300
Val Ile Ala Val Asn Asn Asn Met Ser Ile Trp Ala Ala Ala Val Gly
305 310 315 320
Ser Ser Tyr Met Cys Asn Lys Glu Gln Thr Leu Asn Val Thr Asp Thr
325 330 335
Leu Thr Leu Tyr Thr Phe Glu Leu Arg Val Gln Pro Phe Glu Val Asn
340 345 350
Lys Gly Glu Phe Ala Thr Ala His Glu Cys Ser Leu Asp Asp Thr Ser
355 360 365
Ile Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Ile Leu
370 375 380
Ile Val Val Ile Ala Tyr Val Ile Gly Arg Arg Lys Thr Tyr Val Gly
385 390 395 400
Tyr Gln Thr Leu
<210> 42
<211> 410
<212> PRT
<213> 罗非鱼（Oreochromis niloticus）
<400> 42
Met Lys Val Ser His Ala Thr Ala Gly Leu Val Val Trp Phe Val Val
1 5 10 15
Leu Gly Cys Ile Asp Ala Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Ser Asn Thr
20 25 30
Thr Cys Ile Lys Ala Asp Leu Ser Ala Ser Phe Ser Ile Ile Tyr Asn
35 40 45
Thr Thr His Ala Glu Arg Thr Val Gln Val Leu Leu Pro Asn Ser Thr
50 55 60
Thr Val Asp Thr Ala Asn Ser Thr Cys Gly Lys Asp Gly Ser Ser Pro
65 70 75 80
Arg Leu Val Ala Val Phe Gly Ser Gly Tyr Thr Leu Gly Leu Asn Phe
85 90 95
Ser Thr Asn Gly Thr Leu Tyr Gln Val Ser Ser Leu Thr Leu Gln Tyr
100 105 110
Asn Leu Ser Asp Thr Ser Val Phe Pro Asn Ala Thr Ile Ser Gly Val
115 120 125
Val Thr Leu Val Ser Ala Ser Val Gly Ile Glu Ala Asn Val Asn Thr
130 135 140
Thr Tyr Lys Cys Ala Ser Pro Thr Val Ile Asp Val Ala Thr Ala Lys
145 150 155 160
Val Asn Phe Thr Asp Met Arg Leu Glu Ala Tyr Met Pro Gly Asn Glu
165 170 175
Leu Ser Pro Asn Glu Thr Val Cys Phe Ala Asp Gln Thr Ser Thr Thr
180 185 190
Pro Ser Pro Thr Thr Val Ser Thr Thr Ala Val Pro Thr Gln Thr Pro
195 200 205
Pro Gly Thr Pro Gln Gln Gly Asn Tyr Thr Val Lys Asp Ala Asn Asp
210 215 220
Thr Ile Cys Leu Leu Ala Lys Met Gly Leu Gln Leu Asn Val Ser Tyr
225 230 235 240
Thr Ser Gln Asn Lys Thr Val Gln Asp Val Leu Asn Leu Asn Pro Asn
245 250 255
Val Thr Asn Ser Thr Gly Ser Cys Gly Ala Ser Ser Ala Thr Leu Val
260 265 270
Leu Thr Gln Thr Gln Ser Thr Ile Leu Thr Phe Asn Phe Thr Leu Asn
275 280 285
Ser Thr Thr Asn Lys Tyr His Leu Ser Gly Val Thr Leu Ile Ala Asn
290 295 300
Trp Phe Asp Ser Ala His Phe Ser Met Ser Asn Asn Ser Leu Asn Tyr
305 310 315 320
Leu Arg Ser Thr Leu Gly Tyr Ser Tyr Met Cys Asn Ala Glu Gln Thr
325 330 335
Leu Phe Val Thr Pro Ser Phe Ser Leu Asn Thr Phe Asp Leu Gln Val
340 345 350
Gln Pro Phe Gly Val Lys Ser Gly Arg Phe Ala Thr Ala Glu Glu Cys
355 360 365
Gln Met Asp Gln Asn Gln Met Ile Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala
370 375 380
Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Thr Leu Ile Ala Tyr Leu Ile Gly Lys
385 390 395 400
Arg Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Ala Ile
405 410
<210> 43
<211> 249
<212> PRT
<213> 红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）
<400> 43
Met Thr Gln Ile Gly Gly Val Gln Pro Val Phe Leu Ala Val Thr Val
1 5 10 15
His Leu Ile Leu Ala Thr Val Leu His Gln Thr Phe Ala Thr Val Thr
20 25 30
Pro Pro Val Thr Thr Ala Val Pro His Lys Glu Pro Gly Arg Pro Asp
35 40 45
Gln Gly Asp Tyr Gln Val Thr Ser Ser Asn Gly Thr Val Cys Phe Leu
50 55 60
Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Ile Thr Phe Asn Ser Thr Ser Gln
65 70 75 80
Asn Lys Thr Leu Gln Glu Val Ile Asn Ile Gln Pro Asn Arg Thr Lys
85 90 95
Ser Ser Gly Ser Cys Asp Thr Ser Ser Ala Leu Leu Thr Leu Thr Thr
100 105 110
Asp Ala Glu Lys Thr Asn Leu Thr Phe Val Phe Ala Leu Asn Thr Thr
115 120 125
Ser Asn Lys Tyr His Leu Ser Glu Val Ser Leu Ser Ala Ala Leu Ser
130 135 140
Asp Met Lys Glu Thr Phe Val Ala Gln Asn His Ser Leu Asp Tyr Leu
145 150 155 160
Arg Gly Thr Leu Gly Phe Ser Tyr Met Cys Arg Glu Arg Gln Thr Leu
165 170 175
Gly Val Thr Pro Asp Phe Ala Ile Asn Thr Phe Gln Val Gln Val Gln
180 185 190
Pro Phe Gly Val Thr Gly Lys Gln Phe Ala Ala Ala Glu Glu Cys Gln
195 200 205
Leu Asp Lys Asp Asp Met Leu Ile Pro Ile Ile Val Gly Ala Ala Leu
210 215 220
Ala Ala Leu Val Leu Ile Val Leu Ser Ala Tyr Leu Ile Gly Arg Lys
225 230 235 240
Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Ser Ile
245
<210> 44
<211> 418
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 44
Met Pro Arg Gln Leu Ser Ala Ala Ala Ala Leu Phe Ala Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Ile Leu His Asp Gly Ser Gln Met Arg Ala Lys Ala Phe Pro Glu
20 25 30
Thr Arg Asp Tyr Ser Gln Pro Ser Ala Ala Ala Thr Val Gln Asp Ile
35 40 45
Lys Lys Pro Val Gln Gln Pro Ala Lys Gln Ala Pro His Gln Thr Leu
50 55 60
Ala Ala Arg Phe Met Asp Gly His Ile Thr Phe Gln Thr Ala Ala Thr
65 70 75 80
Val Lys Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ala Thr Thr Lys Asn Thr Ala Thr
85 90 95
Thr Ser Pro Ile Thr Tyr Thr Leu Val Thr Thr Gln Ala Thr Pro Asn
100 105 110
Asn Ser His Thr Ala Pro Pro Val Thr Glu Val Thr Val Gly Pro Ser
115 120 125
Leu Val Pro Tyr Ser Leu Pro Pro Thr Ile Thr Pro Pro Ala His Thr
130 135 140
Thr Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Ser His Thr Thr Gly Asn Thr Thr
145 150 155 160
Gln Pro Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Ile Ala Leu
165 170 175
His Lys Ser Thr Thr Gly Gln Lys Pro Val Gln Pro Thr His Ala Pro
180 185 190
Gly Thr Thr Ala Ala Ala His Asn Thr Thr Arg Thr Ala Ala Pro Ala
195 200 205
Ser Thr Val Pro Gly Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Val Lys
210 215 220
Thr Gly Ile Tyr Gln Val Leu Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala
225 230 235 240
Glu Met Gly Ile Gln Leu Ile Val Gln Asp Lys Glu Ser Val Ser Trp
245 250 255
Gly His Arg Thr Ile Thr Leu Ser Ser Lys Ser Leu Ser Gly Gly Cys
260 265 270
Leu Ala Arg Asn Glu His Ser Pro His Pro Leu Phe Leu Phe Phe Glu
275 280 285
Lys Gly Pro Pro Ser Val Thr Gln Ala Glu Asp Glu Glu Ser Tyr Tyr
290 295 300
Ile Ser Glu Val Gly Ala Tyr Leu Thr Val Ser Asp Pro Glu Thr Ile
305 310 315 320
Tyr Gln Gly Ile Lys His Ala Val Val Met Phe Gln Thr Ala Val Gly
325 330 335
His Ser Phe Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser Leu Gln Leu Ser Ala His
340 345 350
Leu Gln Leu Lys Thr Thr Asp Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu
355 360 365
Asp Asp His Phe Gly Asn Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Ile
370 375 380
Val Leu Pro Val Ile Gly Ala Ile Val Val Gly Leu Cys Leu Met Gly
385 390 395 400
Met Gly Val Tyr Lys Ile Arg Leu Arg Cys Gln Ser Ser Gly Tyr Gln
405 410 415
Arg Ile
<210> 45
<211> 416
<212> PRT
<213> 东非狒狒（Papio anubis）
<400> 45
Met Pro Arg Gln Leu Ser Ala Ala Ala Val Leu Phe Ala Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Ile Leu His Asp Gly Ser Gln Met Arg Ala Lys Ala Phe Pro Lys
20 25 30
Thr Arg Asp Tyr Ser Gln Pro Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gln Asp Ile
35 40 45
Ala Lys Pro Val Gln Gln Pro Ala Asn Gln Ala Pro His Gln Thr Leu
50 55 60
Ala Ala Arg Leu Met Asp Gly His Ile Thr Phe Gln Thr Ala Ala Thr
65 70 75 80
Ile Lys Thr Pro Thr Thr Thr Pro Val Thr Thr Lys Asn Thr Pro Thr
85 90 95
Thr Ser Pro Ile Ile Tyr Thr Leu Val Thr Thr Gln Ala Thr Ser Asn
100 105 110
Asn Ser His Thr Ala Pro Pro Leu Thr Lys Val Thr Val Gly Pro Ser
115 120 125
Leu Ala Pro Tyr Ser Leu Pro Pro Thr Ile Thr Pro Pro Ala His Thr
130 135 140
Thr Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Asn His Thr Thr Gly Asn Ala Thr
145 150 155 160
Gln Pro Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Ile Ala Leu
165 170 175
His Lys Ser Thr Thr Gly Gln Lys Pro Val Gln Pro Thr His Ala Pro
180 185 190
Gly Thr Thr Ala Ala Ala His Asn Thr Thr Arg Thr Ala Ala Pro Ala
195 200 205
Ser Thr Val Pro Gly Ser Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Val Lys
210 215 220
Thr Gly Ile Tyr Gln Val Leu Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala
225 230 235 240
Glu Met Gly Ile Gln Leu Ile Val Gln Asp Lys Glu Ser Val Phe Ser
245 250 255
Pro Arg Arg Tyr Phe Asn Leu Asp Pro Asn Ala Thr Gln Ala Ser Gly
260 265 270
Asn Cys Gly Thr Arg Asn Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly
275 280 285
Phe Val Asn Leu Thr Phe Thr Lys Asp Glu Gly Ser Tyr Tyr Ile Ser
290 295 300
Glu Val Gly Ala Cys Leu Thr Val Ser Asp Pro Glu Thr Ile Tyr Gln
305 310 315 320
Gly Met Lys His Ala Val Val Met Phe Gln Thr Ala Val Gly His Ser
325 330 335
Phe Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser Leu Gln Leu Ser Ala His Leu Gln
340 345 350
Leu Lys Thr Thr Asn Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp
355 360 365
His Phe Gly Asn Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Ile Val Leu
370 375 380
Pro Val Ile Gly Ala Ile Val Val Gly Leu Cys Leu Val Gly Ile Gly
385 390 395 400
Val Tyr Lys Ile Arg Leu Arg Cys Gln Ser Ser Gly Tyr Gln Arg Ile
405 410 415
<210> 46
<211> 416
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 46
Met Pro Arg Gln Leu Ser Ala Ala Ala Val Leu Phe Ala Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Ile Leu His Asp Gly Ser Gln Met Arg Ala Lys Ala Phe Pro Lys
20 25 30
Thr Arg Asp Tyr Ser Gln Pro Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gln Asp Ile
35 40 45
Ala Lys Pro Val Gln Gln Pro Ala Asn Gln Ala Pro His Gln Thr Leu
50 55 60
Ala Ala Arg Leu Met Asp Gly His Ile Thr Phe Gln Thr Ala Ala Thr
65 70 75 80
Ile Lys Thr Pro Thr Thr Thr Pro Val Thr Thr Lys Asn Thr Pro Thr
85 90 95
Thr Ser Pro Ile Ile Tyr Thr Leu Val Thr Thr Gln Ala Thr Ser Asn
100 105 110
Asn Ser His Thr Ala Pro Pro Leu Thr Lys Val Thr Val Gly Pro Ser
115 120 125
Leu Ala Pro Tyr Ser Leu Pro Pro Thr Ile Thr Pro Pro Ala His Thr
130 135 140
Thr Gly Thr Ser Ser Ser Thr Val Asn His Thr Thr Gly Asn Ala Thr
145 150 155 160
Gln Pro Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Ile Ala Pro
165 170 175
His Lys Ser Thr Thr Gly Gln Lys Pro Val Gln Pro Thr His Ala Pro
180 185 190
Gly Thr Thr Ala Ala Ala His Asn Thr Thr Arg Thr Ala Ala Pro Ala
195 200 205
Ser Thr Val Pro Gly Ser Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Ile Lys
210 215 220
Thr Gly Ile Tyr Gln Val Leu Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala
225 230 235 240
Glu Met Gly Ile Gln Leu Ile Val Gln Asp Lys Glu Ser Val Phe Ser
245 250 255
Pro Arg Arg Tyr Phe Asn Leu Asp Pro Asn Ala Thr Gln Ala Ser Gly
260 265 270
Asn Cys Gly Thr Arg Asn Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly
275 280 285
Phe Val Asn Leu Thr Phe Thr Lys Asp Glu Gly Ser Tyr Tyr Ile Ser
290 295 300
Glu Val Gly Ala Cys Leu Thr Val Ser Asp Pro Glu Thr Ile Tyr Gln
305 310 315 320
Gly Met Lys His Ala Val Val Met Phe Gln Thr Val Val Gly His Ser
325 330 335
Phe Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser Leu Gln Leu Ser Ala His Leu Gln
340 345 350
Leu Lys Thr Thr Asn Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp
355 360 365
His Phe Gly Asn Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Ile Val Leu
370 375 380
Pro Val Ile Gly Ala Ile Val Val Gly Leu Cys Leu Val Gly Met Gly
385 390 395 400
Val Tyr Lys Ile Arg Leu Arg Cys Gln Ser Ser Gly Tyr Gln Arg Ile
405 410 415
<210> 47
<211> 428
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 47
Met Ser Trp Gln Leu Ser Ala Ala Val Ala Leu Phe Val Ser Leu Ala
1 5 10 15
Leu Ile Leu His Tyr Gly Ser Gln Ile Arg Ala Lys Met Phe Pro Glu
20 25 30
Thr Val Asp Phe Gln Pro Thr Thr Ala Ala Thr Val Arg Ala Thr Ala
35 40 45
Lys Pro Phe Leu His Leu Thr Asn Gln Val Pro Ser Gln Thr Leu Ala
50 55 60
Ala Arg Ser Met Asp Gly His Ile Ala Ser Gln Arg Ala Ala Thr Thr
65 70 75 80
Ser Ser Ser Glu Pro Pro Thr Thr His Thr Thr Val Lys Thr Leu Val
85 90 95
Thr Thr Ser Leu Val Thr Ala Asn Ser Thr Pro Ser Ser Ser Pro Ile
100 105 110
Ile Tyr Thr Leu Val Thr Thr Ile Val Thr Pro Asn Asn Ser Asn Thr
115 120 125
Ala Ala Pro Val Thr Glu Ala Thr Ile Gly Pro Ser Ala Asp Pro Gly
130 135 140
Ser Leu Pro Thr Thr Ser Thr Pro Leu Ala His Thr Thr Arg Thr Asn
145 150 155 160
Pro Ser Thr Leu Ser His Lys Thr Arg Lys Thr Thr His Phe Gly Asn
165 170 175
Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Thr Ser Thr His Lys Ser Thr
180 185 190
Ser Ser His Lys Ser Ala Gln Ser Thr His Ala Pro Gly Pro Thr Thr
195 200 205
Ala Ala His Asn Thr Thr Gln Thr Ala Ser Pro Ala Thr Pro Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Pro Lys Thr Gly Ile Tyr
225 230 235 240
Gln Val Leu Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala Glu Met Gly Ile
245 250 255
Glu Leu Met Val Gln Asp Thr Lys Ser Val Phe Ser Pro Gln Arg Tyr
260 265 270
Phe Asn Ile Asp Pro Asn Ala Thr Gln Thr Ser Gly Asn Cys Gly Ser
275 280 285
Gln Lys Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly Phe Val Asn Leu
290 295 300
Thr Phe Leu Lys Asp Glu Asn Ser Tyr Tyr Ile Asn Glu Val Gly Ala
305 310 315 320
Tyr Leu Ala Val Ser Asn Pro Glu Lys Ile Tyr Gln Gly Met Lys Ser
325 330 335
Ser Val Val Met Phe Glu Thr Gly Val Gly His Ser Phe Lys Cys Val
340 345 350
Ser Glu Gln Ser Ile Gln Leu Ser Thr His Leu Gln Leu Lys Thr Met
355 360 365
Asn Val Gln Phe Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp His Phe Gly Asn
370 375 380
Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Val Val Leu Pro Val Ile Gly
385 390 395 400
Ala Ile Val Leu Gly Leu Cys Ala Val Gly Leu Ile Val Tyr Gly Ile
405 410 415
His Leu Arg Arg Glu Ser Ser Gly Tyr Gln Arg Ile
420 425
<210> 48
<211> 430
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 48
Met Ser Trp Arg Leu Ser Ala Val Leu Val Ser Phe Val Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Phe Leu His Tyr Gly His His Met Lys Ala Lys Val Phe Pro Glu
20 25 30
Ile Thr Asp Ser Ser Ser Pro Thr Thr Ala Ala Thr Val Gln Ala Thr
35 40 45
Ala Glu Pro Ser Leu Trp Lys Pro Thr Asn His Thr Pro His Lys Thr
50 55 60
Leu Ala Ala Lys Ser Thr Asp Gly His Val Thr Ser Gln Ile Ala Thr
65 70 75 80
Thr Val Thr Asp Ser Glu Thr Leu Thr Thr His Thr Thr Ile Thr Thr
85 90 95
Leu Ala Ala Thr Ser Leu Ala Ala Thr Asn Ser Thr Pro Ser Thr Ser
100 105 110
Pro Thr Thr His Thr Leu Phe Thr Thr Leu Ala Thr Pro Asn Thr Ser
115 120 125
His Met Ala Ala Pro Val Thr Glu Ala Ala Ile Ser Pro Ser Ala Gly
130 135 140
Leu Ser Ser Leu Leu Pro Thr Ile Ile Pro Pro Ala His Thr Thr Gly
145 150 155 160
Thr Arg Ser Ser Thr Leu Ser Pro Thr Ala Gly Lys Thr Thr Gln Pro
165 170 175
Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Thr Ser Pro His Asn
180 185 190
Ser Thr Ala Ser Gln Lys Pro Thr His Pro Asn His Thr Pro Gly Pro
195 200 205
Thr Thr Gly Ala His Asn Thr Thr Gln Thr Ala Ser Pro Ala Thr Ile
210 215 220
Ala Pro Gly Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Ala Lys Thr Gly
225 230 235 240
Ile Tyr Gln Val Leu Asn Gly Ser Lys Leu Cys Ile Lys Ala Glu Met
245 250 255
Gly Ile Glu Leu Thr Val Gln Asp Thr Gln Ser Val Phe Ser Pro Gln
260 265 270
Arg Tyr Phe Asn Ile Asp Pro Asn Thr Thr Gln Ala Ser Gly Asn Cys
275 280 285
Gly Ser Arg Lys Ser Lys Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly Phe Val
290 295 300
Asn Leu Thr Phe Thr Lys Asp Glu Asn Ser Tyr Tyr Val Ser Gly Val
305 310 315 320
Gly Ala Tyr Leu Thr Val Ser Asn Pro Glu Lys Val Tyr Gln Gly Met
325 330 335
Lys Asn Ala Val Val Met Phe Glu Thr Met Ile Gly His Ser Phe Lys
340 345 350
Cys Val Ser Glu Gln Ser Ile Gln Leu Ser Pro His Leu Gln Leu Asn
355 360 365
Thr Met Asn Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp His Phe
370 375 380
Gly Asn Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Ile Val Leu Pro Val
385 390 395 400
Ile Gly Ala Ile Val Leu Gly Leu Cys Ala Val Gly Leu Ile Val Tyr
405 410 415
Gly Ile Arg Leu Lys Arg Glu Ser Ser Glu Tyr Gln Arg Ile
420 425 430
<210> 49
<211> 259
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 49
Met Thr Gln Ser Ser Arg Ser Val Leu Leu Leu Met Leu Ser Ser Leu
1 5 10 15
His Cys Leu Gly Ser Ser Leu Glu Ser Asn Pro Lys Asp Pro Ser Val
20 25 30
Leu Ala Glu Ala Pro Gly Gln Asn Lys Arg Asp Ser Asp Ile Ser Leu
35 40 45
Val Pro Gln Met Pro Val Leu Gln Pro Lys Glu Thr Ala Pro Pro Leu
50 55 60
Val Thr Tyr Thr Ile Arg Asn Pro Gln Gly Lys Val Cys Val Arg Ala
65 70 75 80
Ser Phe Gly Val Glu Phe Val Val Arg Glu Asn Lys Lys Lys Tyr Tyr
85 90 95
Phe Asn Leu Thr Pro Asn Ser Ala Arg Ala Thr Gly Tyr Cys Ala Asn
100 105 110
Gln Lys Thr Val Leu Ser Leu Glu Phe Ser Gly Gly Asn Leu Glu Phe
115 120 125
Thr Phe Ile Lys Asp Gly Asp Gln Ser Tyr Val Lys Thr Val Lys Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Ala Ala Pro Pro Cys Lys Asn Cys Pro Ser Lys Ile Tyr
145 150 155 160
Val Gly Leu Val Asp Asn Glu Lys Leu Phe Lys Ala Lys Asn Gly Leu
165 170 175
Ser Phe Asn Cys Lys Ser Glu Thr Met Leu Ile Leu Ala Asp Tyr Phe
180 185 190
Arg Leu Lys Leu Val Pro Leu Gln Ile Gln Ala Phe Asp Leu Val Asn
195 200 205
Gly Ala Phe Gly Lys Glu Val Glu Cys Trp Ala Asp Tyr Asn Lys Arg
210 215 220
Met Ile Pro Ile Ile Leu Gly Ala Val Ala Ala Ala Ile Cys Leu Ile
225 230 235 240
Ala Ile Leu Thr Tyr Val Leu Val Arg Glu His Arg Asn Gln Gly Tyr
245 250 255
Glu Gln Leu
<210> 50
<211> 432
<212> PRT
<213> 家马（Equus caballus）
<400> 50
Met Ala Trp Gln Leu Ser Ala Val Val Val Leu Phe Val Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Ile Leu Tyr Tyr Gly Ser His Val Arg Ala Asn Val Phe Pro Glu
20 25 30
Ile Thr Asp Tyr Ser Gln Pro Thr Thr Ala Ala Thr Ile Gln Thr Arg
35 40 45
Ala Gln Pro Ser Leu Ser Gln Pro Thr Asn Gln Val Pro His Lys Thr
50 55 60
Leu Ala Thr Arg Ser Met Asp Gly Gln Val Thr Ser Gln Thr Ala Ala
65 70 75 80
Thr Thr Val Asn Pro Glu Thr Pro Val Thr His Thr Thr Ile Lys Thr
85 90 95
Ala Ala Ala Thr Ser Leu Val Thr Thr Asn Ser Thr Leu Ser Thr Ser
100 105 110
Pro Ile Thr Asn Thr Leu Leu Thr Thr Leu Ala Thr Pro Asp Asn Thr
115 120 125
His Thr Thr Thr Pro Val Thr Glu Ala Thr Ile Gly Pro Ser Ala Gly
130 135 140
Pro Gly Ser Pro Pro Thr Thr Ile Thr Thr Thr Ser Ser Ala Tyr Thr
145 150 155 160
Thr Gly Thr Arg Ser Ser Thr Val Ser His Thr Thr Gly Lys Thr Thr
165 170 175
Gln Leu Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Thr Ser Pro
180 185 190
His Asn Ser Thr Thr Ser Gln Asn Pro Ala His Ser Thr His Thr Pro
195 200 205
Gly Pro Thr Thr Gly Thr Cys Asn Thr Thr Gln Thr Ala Ser Pro Thr
210 215 220
Thr Thr Ala Pro Gly Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Ser Ser Ala Lys
225 230 235 240
Thr Gly Met Tyr Gln Ile Leu Asn Gly Ser Lys Leu Cys Ile Lys Ala
245 250 255
Glu Met Gly Ile Gln Leu Thr Val Gln Asp Thr Lys Ser Ala Ser Pro
260 265 270
Pro Gln Gly Tyr Phe Asn Ile Asp Pro Asn Thr Thr Gln Val Ser Gly
275 280 285
Ile Cys Gly Ser Arg Lys Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Trp Gly Gly
290 295 300
Phe Val Asn Leu Thr Phe Thr Lys Asp Glu Asn Ser Tyr Tyr Ile Ser
305 310 315 320
Glu Val Gly Ala Tyr Leu Thr Val Ser Asn Pro Glu Lys Thr Tyr Gln
325 330 335
Gly Met Lys Ser Pro Val Val Met Phe Glu Thr Val Ile Gly His Ser
340 345 350
Phe Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser Leu Glu Leu Ser Thr Gln Leu His
355 360 365
Leu Lys Thr Thr Asn Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp
370 375 380
Asn Phe Gly Asn Val Asp Glu Cys Ser Ser Asp Tyr Thr Val Val Leu
385 390 395 400
Pro Val Ile Gly Ala Ile Val Leu Gly Leu Phe Ala Val Gly Leu Ile
405 410 415
Val Tyr Gly Val Arg Val Arg Arg Glu Ala Ser Gly Tyr Gln Arg Ile
420 425 430
<210> 51
<211> 433
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 51
Met Ser Trp Gln Ile Pro Ala Val Val Met Ser Phe Met Ala Leu Val
1 5 10 15
Ala Ile Trp Tyr Tyr Asp Ser His Tyr Asn Ser His Met Gln Ala Lys
20 25 30
Val Phe Pro Glu Ile Thr Gly Tyr Ser Ser Pro Thr Thr Gly Gln Ala
35 40 45
Thr Val Lys Pro Ser Leu Leu Gln Pro Thr Asn Tyr Val Pro His Lys
50 55 60
Thr Ala Ala Ala Arg Ser Thr Asp Gly His Val Thr Ser Gln Thr Val
65 70 75 80
Ala Lys Thr Ser Ser Ser Glu Thr Leu Thr Thr Asn Thr Thr Ile Asp
85 90 95
Val Leu Ala Thr Thr Ser Pro Val Thr Thr Lys Ser Thr Leu Pro Thr
100 105 110
Thr Pro Thr Thr His Thr Leu Val Thr Thr Leu Ala Thr Pro Asn Lys
115 120 125
Ser His Val Thr Phe Pro Val Thr Glu Ala Lys Val Gly Leu Ser Val
130 135 140
Gly Pro Ser Ser Pro Pro Val Thr Val Asn Pro Thr Ala His Thr Thr
145 150 155 160
Gly Asn Arg Pro Ser Thr Ala Ser His Thr Thr Gly Lys Thr Thr Gln
165 170 175
Leu Ser Asn Gln Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Thr Ser Pro His
180 185 190
Asn Ile Thr Thr Ser Gln Lys Pro Thr Gln Pro Thr His Thr Pro Gly
195 200 205
Pro Thr Thr Ala Thr Tyr Asn Thr Thr Gln Thr Ala Ser Pro Ala Thr
210 215 220
Ile Ala Pro Arg Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Leu Ser Pro Lys Thr
225 230 235 240
Gly Ile Tyr Gln Val His Asn Gly Ser Lys Leu Cys Ile Lys Ala Glu
245 250 255
Met Gly Ile Gln Leu Thr Val Gln Asp Ser Val Ser Val Phe Ser Pro
260 265 270
Gln Lys Tyr Phe Asn Ile Asp Pro Asn Ala Thr Gln Ala Ser Gly Asn
275 280 285
Cys Gly Ser Arg Lys Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly Phe
290 295 300
Val Asn Leu Thr Phe Thr Lys Gly Glu Lys Ser Tyr Tyr Ile Ser Glu
305 310 315 320
Val Glu Ala Tyr Leu Thr Val Ser Asn Pro Ala Lys Val Tyr Gln Gly
325 330 335
Leu Lys His Ala Met Met Met Phe Glu Thr Val Val Gly His Ser Phe
340 345 350
Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser Ile Gln Leu Ser Thr Tyr Leu Gln Leu
355 360 365
Lys Thr Met Asn Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp His
370 375 380
Phe Gly Asn Ala Asp Glu Cys Ile Ser Asp Arg Asn Arg Arg Glu Ile
385 390 395 400
Pro Val Ala Val Gly Leu Ser Ile Ala Val Leu Leu Ala Val Leu Leu
405 410 415
Thr Ala Cys Leu Val Thr Arg Lys Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Glu Arg
420 425 430
Met
<210> 52
<211> 429
<212> PRT
<213> 绵羊（Ovis aries）
<400> 52
Met Ser Trp Gln Ile Ser Ala Val Val Leu Phe Phe Val Ser Leu Ala
1 5 10 15
Val Ile Trp Tyr Tyr Asp Ser His Met Lys Ala Asn Val Phe Pro Glu
20 25 30
Ile Thr Gly Tyr Ser Ser Pro Thr Thr Gly Gln Ala Thr Val Lys Pro
35 40 45
Ser Leu Leu Gln Pro Thr Asn His Val Pro Cys Asn Thr Ala Ala Ala
50 55 60
Lys Ser Thr Asp Gly His Val Thr Ser Gln Thr Val Ala Lys Thr Ser
65 70 75 80
Ser Pro Glu Thr Leu Thr Thr Asn Thr Thr Ile Glu Val Leu Val Thr
85 90 95
Thr Ser Pro Val Thr Thr Gln Ser Thr Leu Pro Thr Thr Pro Thr Thr
100 105 110
His Thr Leu Val Thr Thr Leu Ala Thr Pro Ser Lys Ser His Val Thr
115 120 125
Phe Pro Val Thr Glu Ala Lys Ala Gly Leu Ser Ile Gly Pro Ser Ser
130 135 140
Pro Pro Val Thr Ile Asn Pro Ala Ala His Thr Thr Gly Asn Arg Pro
145 150 155 160
Ser Thr Ala Ser His Thr Thr Gly Lys Thr Thr Gln Leu Ser Asn Gln
165 170 175
Thr Thr Leu Pro Ala Thr Leu Ser Thr Ser Pro His Asn Ile Thr Thr
180 185 190
Ser Gln Lys Pro Thr Gln Pro Thr His Thr Pro Gly Pro Thr Thr Ala
195 200 205
Ala Asn Asn Thr Thr His Thr Ala Ser Pro Ala Thr Ile Ala Pro Arg
210 215 220
Pro Thr Leu Ala Pro Gln Pro Leu Ser Pro Lys Thr Gly Leu Tyr Gln
225 230 235 240
Val Leu Asn Gly Ser Lys Leu Cys Ile Lys Ala Glu Met Gly Ile Gln
245 250 255
Leu Thr Val Gln Asp Ser Val Ser Val Phe Ser Pro Gln Lys Tyr Phe
260 265 270
Asn Ile Asp Pro Asn Ala Thr Gln Ala Ser Gly Asn Cys Gly Ser Arg
275 280 285
Lys Ser Asn Leu Leu Leu Asn Phe Gln Gly Gly Phe Val Asn Leu Thr
290 295 300
Phe Ile Lys Asp Glu Asn Ser Tyr Tyr Ile Ser Glu Val Glu Ala Tyr
305 310 315 320
Leu Thr Val Ser Asn Pro Ala Lys Val Tyr Gln Gly Met Lys Tyr Ala
325 330 335
Met Met Met Phe Glu Thr Val Val Gly His Ser Phe Lys Cys Val Ser
340 345 350
Glu Gln Ser Ile Gln Leu Ser Asn His Leu Gln Leu Lys Thr Val Asn
355 360 365
Val Gln Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Asp Asp Arg Phe Gly Asn Ala
370 375 380
Asp Glu Cys Ile Ser Asp Arg Asn Arg Arg Glu Ile Pro Val Ala Val
385 390 395 400
Gly Leu Ser Ile Ala Val Leu Leu Ala Val Leu Leu Thr Ala Cys Leu
405 410 415
Val Thr Arg Lys Arg Pro Ser Arg Gly Tyr Glu Arg Met
420 425
<210> 53
<211> 408
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 53
Met Pro Gly Gln Thr Ser Ala Val Ala Val Leu Leu Cys Leu Ala Val
1 5 10 15
Ile Leu His Gly Tyr Gln Ile Arg Glu Lys Glu Phe Pro Glu Ala Arg
20 25 30
Gly Tyr Leu Gln Tyr Thr Ala Thr Thr Thr Glu Gln Ile Thr Ala Lys
35 40 45
Pro Pro Leu Pro Leu Thr Asn Gln Thr Ser His Ala Thr Leu Ala Ser
50 55 60
Arg Ser Lys Asp Asp Tyr Ile Gln Thr Ala Ala Glu Thr Ser Thr Phe
65 70 75 80
Glu Asp Thr Ala His Ile Thr Met Lys Thr Ala Ile Pro Val Thr Thr
85 90 95
Lys Ser Leu Leu Pro Ile Ser Ser Thr Ser Tyr Thr Phe Val Arg Thr
100 105 110
Asn Asn Ser His Met Thr Ala Ser Ser Thr Glu Asp Thr Ile Gly Ser
115 120 125
Gly Ser Ile Thr His Leu Pro Phe Pro Thr Thr Arg Ala Ser Leu Ala
130 135 140
Ala Val Asn His Ile Thr Gly Arg Ser Thr Gln Leu Gly Gly Gln Thr
145 150 155 160
Thr Leu Pro Lys Ala Leu Phe Thr Pro Ser His Glu Ser Thr Thr Thr
165 170 175
Gln Arg Pro Thr Leu Ser Thr Ile Val Ser Glu Leu Thr Pro Thr Gly
180 185 190
Lys Asp Arg Ser Thr Thr Ser Ser Val Pro Leu Val Pro Arg Pro Thr
195 200 205
Phe Val Thr Trp Ser Ser Pro Ala Lys Ile Gly Thr Tyr Glu Val Leu
210 215 220
Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala Glu Met Gly Ile Ala Leu Ile
225 230 235 240
Val Gln Glu Lys Gly Leu Asp Ser Ala Thr Gln Arg His Phe Asn Ile
245 250 255
Asp Pro Ser Leu Thr His Ala Ser Gly Lys Cys Gly Ser Gln Asn Ser
260 265 270
Asn Leu Phe Leu Asn Phe Gln Gly Gly Ser Val Asn Val Thr Phe Thr
275 280 285
Lys Glu Glu Asn Leu Tyr Tyr Val Ser Glu Val Gly Ala Tyr Leu Thr
290 295 300
Ile Ser Asn Thr Glu Lys Thr Tyr Gln Gly Lys Ser Thr Met Met Met
305 310 315 320
Phe Glu Thr Val Val Gly His Ser Phe Lys Cys Val Ser Glu Gln Ser
325 330 335
Ile Gln Leu Ser Ala Gln Leu Gln Met Lys Thr Met Asn Ile His Leu
340 345 350
Gln Ala Phe Asp Phe Glu Gly Asp Ser Phe Gly Ile Val Asp Glu Cys
355 360 365
Leu Ser Asp Tyr Thr Val Val Leu Pro Val Val Gly Ile Ile Val Val
370 375 380
Val Leu Cys Val Val Gly Leu Gly Ile Tyr Lys Ile Arg Gln Arg Arg
385 390 395 400
Gln Ser Ser Ala Tyr Gln Arg Ile
405
<210> 54
<211> 411
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 54
Met Pro Gly Gln Ile Ser Ala Val Ala Val Leu Phe Leu Ser Leu Thr
1 5 10 15
Val Ile Leu His Gly Tyr Gln Ile Arg Glu Lys Glu Phe Pro Lys Ala
20 25 30
Arg Gly Tyr Leu Gln Tyr Thr Ala Thr Ser Ala Glu Gln Ile Thr Thr
35 40 45
Lys Pro Leu Leu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ser His Ile Thr Leu Ala
50 55 60
Ser Arg Phe Lys Asp Asp Tyr Ile Gln Met Ala Ala Glu Thr Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Asn Thr Ala His Ile Thr Met Lys Thr Val Thr Pro Val Thr
85 90 95
Thr Lys Ser Leu Pro Pro Ile Ser Ser Ala Ser Tyr Thr Phe Val Arg
100 105 110
Ser Asn Asn Ala His Met Thr Ala Ser Ser Thr Asp Asp Thr Ile Gly
115 120 125
Ser Gly Ser Ile Ala His Leu Pro Val Pro Thr Thr Arg Ala Ser Leu
130 135 140
Ala Ile Val Asn Tyr Ile Thr Gly Arg Ala Thr Gln Leu Gly Gly Gln
145 150 155 160
Thr Thr Leu Pro Lys Thr Phe Phe Thr Ala Ser His Lys Ser Thr Thr
165 170 175
Asn Gln Arg Pro Thr Leu Ser Thr Asn Val Leu Gly Thr Ser Thr Pro
180 185 190
Thr His Lys Asp Arg Ser Thr Thr Ser Pro Val Pro Leu Val Pro Arg
195 200 205
Pro Thr Leu Val Thr Trp Ser Ser Pro Ala Lys Ile Gly Thr Tyr Glu
210 215 220
Val Leu Asn Gly Ser Arg Leu Cys Ile Lys Ala Glu Met Gly Leu Ala
225 230 235 240
Leu Ile Val Gln Glu Lys Asp Leu Asp Ser Ala Thr Gln Arg Tyr Phe
245 250 255
Asn Ile Asp Pro Ser Leu Thr His Ala Ser Gly Lys Cys Asp Ser Gln
260 265 270
Lys Ser Asn Leu Phe Leu Asn Phe Gln Gly Gly Ser Val Asn Ile Thr
275 280 285
Phe Thr Lys Glu Glu Asn Leu Tyr Tyr Ile Ser Glu Val Gly Ala Tyr
290 295 300
Leu Thr Ile Ser Asn Thr Glu Lys Thr Tyr Gln Gly Lys Lys Asn Thr
305 310 315 320
Leu Met Met Phe Glu Thr Val Val Gly His Ser Phe Lys Cys Val Ser
325 330 335
Glu Gln Ser Ile Gln Leu Ser Ala Gln Leu Gln Met Lys Thr Met Asn
340 345 350
Ile His Leu Gln Ala Phe Asp Phe Glu Gly Asp Ser Phe Gly Asn Val
355 360 365
Asn Glu Cys Leu Ser Asp Tyr Thr Val Val Leu Pro Met Val Ala Ile
370 375 380
Ile Val Val Val Ile Cys Val Val Gly Leu Ser Val Tyr Lys Ile Arg
385 390 395 400
Gln Arg His Gln Ser Ser Ala Tyr Gln Arg Ile
405 410
<210> 55
<211> 314
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 55
Met Asp Arg Val Ser Leu Leu Ser Thr Ile Leu Leu Leu Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Leu Tyr Ile Asn Asp Ala Tyr Ser Glu Asn Thr Phe Ala Gln Pro Ser
20 25 30
Asn Thr Thr Thr Pro Ala Pro Asn Thr Thr Thr Thr His Val Thr Ser
35 40 45
Asn Thr Thr Thr Leu Ala Pro Asn Thr Thr Thr Thr His Val Thr Ser
50 55 60
Asn Thr Thr Thr Leu Ala Pro Asn Thr Thr Thr Thr His Ile Thr Ser
65 70 75 80
Asn Thr Thr Thr Leu Ala Pro Asn Thr Thr Thr Thr Leu Ala Pro Asn
85 90 95
Thr Thr Thr Thr His Ser Val Thr Thr Thr Lys Thr Ala Ser Thr Thr
100 105 110
Thr Pro Thr Pro Thr Leu Glu Pro Lys Pro Ser Pro Pro Glu Thr Gly
115 120 125
Asn Tyr Thr Val Lys Ile Lys Asn Glu Phe Cys Ile Glu Ala Leu Met
130 135 140
Gly Leu Glu Leu Glu Leu Thr Asn Ser Thr Lys Thr Gln Gln Tyr Phe
145 150 155 160
Asn Ile Val Pro Ser Gln Ile Asn Ser Asn Gly Thr Cys Glu Lys Ser
165 170 175
Lys Ala Asn Leu Asn Leu Thr Phe Ala Asn Ser Tyr Ile Asn Phe Val
180 185 190
Phe Ala Gln Asp Asp Asn Ser Tyr Tyr Leu Asp Asn Val Thr Val Tyr
195 200 205
Phe Asn Leu Thr Arg Ser Glu Ser Trp Tyr Gly Asn Ala Thr Asn Gln
210 215 220
Lys Leu Leu Lys Thr Glu Asn Gly Tyr Ser Val Lys Cys Lys Asn Thr
225 230 235 240
Pro Lys Ile Gln Leu Gly Asp Thr Met Asn Leu Val Met Thr Asn Val
245 250 255
Lys Leu Gln Val Phe Asn Phe Lys Asp Asn Ser Phe Gly Lys Glu Thr
260 265 270
Thr Cys Lys Tyr Asp His Asn Phe Gly Leu Met Ile Ala Gly Ile Val
275 280 285
Ile Val Val Ile Val Val Leu Gly Val Ile Ile Tyr Phe Ile Trp His
290 295 300
Lys Arg Lys Ser Ser Gly Tyr Gln Arg Ile
305 310
<210> 56
<211> 478
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 56
Met Gly Arg Cys Cys Phe Tyr Thr Ala Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Val Thr Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Ser Ile Glu Lys Lys Ile Val Leu Arg Asn Gly Thr Glu
35 40 45
Ala Phe Asp Ser Trp Glu Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Thr Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Arg Gly Glu Thr
65 70 75 80
Pro Arg Val Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asn
85 90 95
Lys Ala Asn Ile Gln Phe Gly Asp Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Tyr Val Phe Glu Arg Asp Gln Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Lys Ile Asp Leu Ile Arg Thr Leu Asn Ile Pro Val Leu Thr Val Ile
130 135 140
Glu Trp Ser Gln Val Arg Phe Leu Arg Glu Ile Ile Glu Ala Met Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Gln Gln Lys Leu Phe Val Thr His Thr Val Asp Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Ile Leu Ser Leu Ile His Val Phe Arg
180 185 190
Pro Asp Ile Ser Pro Tyr Phe Gly Leu Phe Tyr Glu Lys Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Asp Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Ser Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Thr Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Ile Thr Asp Lys Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Thr Lys Asp Glu Val Leu Tyr Val Phe Pro Ser Asp
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Val Tyr Ile Thr Phe Ser Asp Tyr Glu Ser Val Gln
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Phe Arg Tyr Lys Val Pro Ala Glu Ile Leu Ala Asn
290 295 300
Thr Ser Asp Asn Ala Gly Phe Cys Ile Pro Glu Gly Asn Cys Leu Gly
305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Arg Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Glu Gly Met His Pro Asn Lys Glu Asp His Glu Thr Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Lys Ala Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Ile Tyr Val Lys Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asp
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Leu Asn Glu Ser Val His
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Ser Arg Leu Lys Ser Met Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Ile Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Val Phe Thr Trp Leu Ala Cys Lys Gly Gln Gly Ser Met
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 57
<211> 478
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 57
Met Gly Arg Cys Cys Phe Tyr Thr Ala Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Val Thr Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Ser Ile Glu Lys Lys Ile Val Leu Arg Asn Gly Thr Glu
35 40 45
Ala Phe Asp Ser Trp Glu Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Thr Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Arg Gly Glu Thr
65 70 75 80
Pro Arg Val Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asn
85 90 95
Lys Ala Asn Val Gln Phe Gly Asp Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Tyr Val Phe Glu Arg Asp Gln Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Lys Ile Asp Leu Ile Arg Thr Leu Asn Ile Pro Val Leu Thr Val Ile
130 135 140
Glu Trp Ser Gln Val His Phe Leu Arg Glu Ile Ile Glu Ala Met Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Gln Gln Lys Leu Phe Val Thr His Thr Val Asp Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Ile Leu Ser Leu Ile His Val Phe Arg
180 185 190
Pro Asp Ile Ser Pro Tyr Phe Gly Leu Phe Tyr Glu Lys Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Asp Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Thr Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Ile Thr Asp Lys Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Thr Lys Asp Glu Val Leu Tyr Val Phe Pro Ser Asp
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Val Tyr Ile Thr Phe Ser Asp Tyr Glu Ser Val Gln
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Phe Arg Tyr Lys Val Pro Ala Glu Ile Leu Ala Asn
290 295 300
Thr Ser Asp Asn Ala Gly Phe Cys Ile Pro Glu Gly Asn Cys Leu Gly
305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Arg Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Glu Gly Met His Pro Asn Lys Glu Asp His Glu Thr Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Lys Ala Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Ile Tyr Val Lys Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asp
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Leu Asn Glu Ser Val Leu
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Ser Arg Leu Lys Ser Val Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Ile Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Phe Val Phe Thr Trp Leu Ala Cys Lys Gly Gln Gly Ser Met
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 58
<211> 478
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 58
Met Gly Arg Cys Cys Phe Tyr Thr Val Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Ile Ala Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Thr Ile Glu Lys Asn Ile Val Leu Arg Asn Gly Ser Glu
35 40 45
Thr Phe Asp Ser Trp Lys Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Ala Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Arg Gly Glu Ile
65 70 75 80
Pro Arg Leu Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asp
85 90 95
Lys Ala Asp Ile Gln Phe Gly Asp Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Tyr Val Phe Glu Arg Asn Gln Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Lys Thr Asp Leu Ile Arg Thr Leu Asn Ile Pro Ala Val Thr Ala Met
130 135 140
Glu Trp Ala His Leu His Phe Phe Arg Glu Leu Ile Glu Ala Leu Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Gln Gln Thr Leu Phe Val Thr His Thr Val Asp Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Ile Leu Ser Leu Ile Asn Val Phe Lys
180 185 190
Pro Glu Ile Ser Pro Tyr Phe Gly Leu Tyr Tyr Gly Lys Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Asp Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Ser Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Thr Thr Asp Lys Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Asp Lys Asp Glu Ile Leu Tyr Val Phe Pro Ser Glu
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Val Tyr Ile Thr Phe Ser Asp Phe Lys Ser Val Gln
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Phe Arg Tyr Lys Val Pro Gly Glu Val Leu Ala Asn
290 295 300
Thr Ser Asp Asn Ala Gly Phe Cys Val Pro Lys Gly Asn Cys Leu Gly
305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Ile Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Ile Ser Phe Pro His Phe Tyr Glu Ala Asp Lys Lys Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Asp Gly Met Arg Pro Asn Lys Asp Tyr His Glu Thr Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Arg Ala Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Val Tyr Val Lys Lys Leu Asp Asp Phe Ile Glu Thr Gly Asn
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Ile Asn Glu Ser Val Leu
405 410 415
Ile Asp Lys Asp Thr Ala Ser Arg Leu Lys Ser Val Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Ile Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Val Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Ile Phe Thr Trp Leu Ala Cys Arg Gly Gln Gly Ser Met
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Pro Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 59
<211> 478
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 59
Met Gly Arg Cys Cys Phe Tyr Ala Val Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Ile Thr Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Thr Ile Glu Lys Asn Ile Val Leu Arg Asn Gly Ser Glu
35 40 45
Thr Phe Asp Ser Trp Lys Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Thr Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Asn Gly Glu Thr
65 70 75 80
Pro Arg Leu Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asn
85 90 95
Lys Asp Asp Ile Gln Phe Gly Asp Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Tyr Val Phe Glu Arg Asp Lys Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Lys Ile Asp Leu Leu Arg Thr Leu Asn Ile Pro Ala Leu Thr Ala Met
130 135 140
Glu Trp Thr Gln Leu Pro Leu Leu Arg Asp Ile Ile Glu Ala Leu Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Arg Gln Lys Leu Phe Val Thr His Thr Val Asp Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Ile Leu Ser Leu Ile Asn Thr Phe Lys
180 185 190
His Asp Val Ser Pro Tyr Phe Gly Leu Phe Tyr Gly Lys Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Asp Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Ser Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Thr Ala Asp Glu Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Thr Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Thr Arg Asp Glu Val Leu Tyr Val Phe Pro Ser Asp
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Val Tyr Ile Thr Phe Ser Asp Phe Glu Ser Val Gln
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Leu Arg Tyr Lys Val Pro Ala Glu Ile Leu Ala Asn
290 295 300
Thr Ser Asp Asn Ala Gly Phe Cys Ile Pro Lys Gly Asn Cys Leu Gly
305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Val Ser Val Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Lys Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Gly Gly Met His Pro Asn Lys Glu Tyr His Glu Thr Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Arg Ala Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Val Tyr Val Arg Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asn
385 390 395 400
Ile Gln Thr Leu Val Phe Pro Val Met Tyr Ile Asn Glu Ser Val Leu
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Ser Arg Leu Lys Ser Val Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Val Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Ile Phe Thr Trp Leu Ala Cys Arg Gly Gln Gly Ser Thr
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 60
<211> 478
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 60
Met Gly Arg Cys Cys Phe Tyr Thr Ala Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Val Thr Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Thr Ile Glu Lys Asn Met Val Leu Gln Asn Gly Thr Lys
35 40 45
Val Phe Asn Ser Trp Glu Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Ile Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Gln Gly Glu Ile
65 70 75 80
Pro Leu Leu Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asn
85 90 95
Lys Ala Asn Ile Gln Phe Gly Glu Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Thr Asn Lys Ala Tyr Val Phe Glu Arg Asn Gln Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Asn Val Asp Leu Ile Arg Thr Ile Asn Ile Pro Leu Leu Thr Val Val
130 135 140
Asp Leu Ala Gln Leu Thr Leu Leu Arg Glu Leu Ile Glu Ala Met Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Gln Gln Lys Leu Phe Val Ile His Thr Val His Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Ile Leu Ser Leu Val His Ile Phe Lys
180 185 190
Pro Asp Val Ser Pro Asn Phe Gly Leu Phe Tyr Glu Arg Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Glu Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Ser Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Thr Thr Asp Thr Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Ser Lys Asp Glu Val Leu Tyr Leu Phe Pro Ser Asp
260 265 270
Leu Cys Arg Ser Val His Ile Thr Phe Ser Ser Phe Glu Asn Val Glu
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Phe Arg Tyr Lys Val Pro Ala Glu Ile Leu Ala Asn
290 295 300
Thr Ser Glu Asn Ala Gly Phe Cys Ile Pro Glu Gly Asn Cys Met Asp
305 310 315 320
Ser Gly Val Leu Asn Ile Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Lys Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Lys Gly Met His Pro Asn Lys Glu Glu His Glu Ser Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Arg Gly Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Thr Tyr Val Arg Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asp
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Leu Asn Glu Ser Val Leu
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Asn Gln Leu Lys Ser Val Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Val Val Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Val Phe Thr Trp Leu Ala Cys Arg Gly Gln Gly Ser Met
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 61
<211> 531
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 61
Met Thr Arg Arg Ser Cys Thr Ile Tyr Ala Thr Gly Ile Val Cys Ala
1 5 10 15
His Leu Leu Ile Leu Gly Ile Ala Leu Leu Leu Ala Gln Val Phe Gln
20 25 30
Thr Met Ile Gln Glu Arg Ile Lys Lys Glu Ile Thr Leu Ala Glu Asn
35 40 45
Ser Arg Val Leu Asp Gly Trp Ile Asn Pro Pro Pro Pro Val Tyr Met
50 55 60
Gln Tyr Phe Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Asp Glu Phe Leu Ala Gly
65 70 75 80
Lys Glu Lys Ala Lys Val Thr Gln Met Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu
85 90 95
Tyr Arg Pro Arg Glu Asn Val Thr Tyr Leu Glu Asn Gly Thr Lys Ile
100 105 110
Phe Ala Thr Asn Pro Lys Ser Phe Val Phe Leu Arg Asn Met Ser Ala
115 120 125
Gly Asp Pro Glu Val Asp Arg Val Thr Thr Val Asn Ile Pro Met Ile
130 135 140
Ala Val Met Asn Glu Leu Asn Ser Tyr Ser Phe Phe Val Arg Thr Ala
145 150 155 160
Val Ser Met Tyr Met Gly Ser Met Gly Met Gly Leu Phe Met Asn Arg
165 170 175
Thr Val His Glu Ile Leu Trp Gly Phe Lys Asp Pro Leu Leu Thr Lys
180 185 190
Leu His Ala Met Arg Pro Glu Val Asp Glu His Phe Gly Leu Met Tyr
195 200 205
Asn Lys Asn Gly Thr His Glu Gly Glu Phe Val Phe His Thr Gly Glu
210 215 220
Lys Asn Tyr Met Asn Tyr Gly Lys Ile Asp Thr Trp Asn Gly Ile Ser
225 230 235 240
Gln Met Asn Trp Trp Ser Ser Asn Gln Ser Asn Met Ile Asn Gly Thr
245 250 255
Asp Gly Ser Val Phe His Thr Phe Leu Ser Arg Lys Glu Leu Leu Tyr
260 265 270
Ile Phe Ala Ala Asp Leu Cys Arg Ser Ile His Leu Gly Tyr Val Arg
275 280 285
Asp Met Glu Val Lys Gly Ile Pro Ala Phe Arg Phe Ala Pro Pro Ser
290 295 300
Asp Val Leu Ala Pro Pro Asp Glu Asn Pro Ala Asn Ala Gly Phe Cys
305 310 315 320
Val Pro Ala Gly Asp Cys Leu Gly Lys Gly Val Leu Lys Val Ser Val
325 330 335
Cys Arg Gln Gly Ala Pro Ile Val Val Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln
340 345 350
Ala Asp Glu Arg Tyr Ile Asn Ala Ile Glu Gly Met Asn Pro Asn Glu
355 360 365
Glu Glu His Glu Thr Tyr Leu Asp Ile Asn Pro Thr Thr Gly Val Pro
370 375 380
Ile Arg Ala Cys Lys Arg Ala Gln Leu Asn Ile Ile Leu Lys Arg Val
385 390 395 400
Arg Gly Phe Pro Asn Thr Lys Phe Leu Asn Glu Thr Ile Phe Pro Ile
405 410 415
Met Tyr Val Asn Glu Thr Ala Thr Ile Asp Asp Glu Ser Ala Ala Gln
420 425 430
Met Arg Met Leu Leu Leu Ile Val Thr Val Val Ser Asn Phe Pro Val
435 440 445
Ile Ile Leu Ala Leu Gly Val Ile Leu Leu Val Val Leu Ile Phe Leu
450 455 460
Val Cys Arg Asn Arg Gln Arg Lys Asn Glu Val Lys Arg Ile Asp Phe
465 470 475 480
Thr Glu Ala Phe His Ser Phe Ala Thr Thr Lys Asp Glu Thr Ala Tyr
485 490 495
Thr Gln Val Ser Asn Gln Ala Glu Asp Ser Pro Glu Asn Arg Asn Asn
500 505 510
Gln Pro Leu Arg Asn Gly Ser Tyr Ile Ala Met Ser Pro Val Glu Ala
515 520 525
Gln Lys Cys
530
<210> 62
<211> 478
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 62
Met Ala Arg Cys Cys Phe Tyr Thr Ala Gly Thr Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ser Val Thr Leu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Lys Ala
20 25 30
Val Asp Gln Thr Ile Glu Lys Asn Met Val Leu Gln Asn Gly Thr Lys
35 40 45
Val Phe Asp Ser Trp Glu Lys Pro Pro Leu Pro Val Tyr Ile Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Glu Glu Ile Leu Gln Gly Glu Ile
65 70 75 80
Pro Leu Leu Glu Glu Val Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Asn
85 90 95
Lys Ala Asn Val Gln Phe Gly Glu Asn Gly Thr Thr Ile Ser Ala Val
100 105 110
Thr Asn Lys Ala Tyr Ile Phe Glu Arg Asn Gln Ser Val Gly Asp Pro
115 120 125
Thr Val Asp Leu Ile Arg Thr Ile Asn Ile Pro Leu Leu Thr Val Val
130 135 140
Glu Met Ala Gln Gln Pro Phe Leu Arg Glu Ile Ile Glu Ala Met Leu
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Gln Gln Thr Leu Phe Val Thr His Thr Val His Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Glu Val Leu Ser Leu Val His Ile Phe Arg
180 185 190
Pro Asp Val Ser Pro Asn Phe Gly Leu Phe Tyr Glu Arg Asn Gly Thr
195 200 205
Asn Asp Gly Glu Tyr Val Phe Leu Thr Gly Glu Asp Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Thr Lys Ile Val Glu Trp Asn Gly Lys Thr Ser Leu Asp Trp Trp
225 230 235 240
Thr Thr Asp Thr Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Asp Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Ser Lys Asp Glu Thr Leu Tyr Ile Phe Pro Ser Asp
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Val Tyr Ile Thr Phe Ser Ser Phe Glu Asn Val Glu
275 280 285
Gly Leu Pro Ala Phe Arg Tyr Lys Val Pro Ala Glu Ile Leu Ala Asn
290 295 300
Ser Ser Glu Asn Ala Gly Phe Cys Ile Pro Glu Gly Asn Cys Met Asp
305 310 315 320
Ala Gly Val Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Asn Gly Ala Pro Ile Ile
325 330 335
Met Ser Phe Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Lys Phe Val Ser Ala
340 345 350
Ile Lys Gly Met Arg Pro Asn Lys Glu Glu His Glu Ser Phe Val Asp
355 360 365
Ile Asn Pro Leu Thr Gly Ile Ile Leu Arg Gly Ala Lys Arg Phe Gln
370 375 380
Ile Asn Thr Tyr Val Lys Lys Leu Asp Asp Phe Val Glu Thr Gly Asn
385 390 395 400
Ile Arg Thr Met Val Phe Pro Val Met Tyr Leu Asn Glu Ser Val Leu
405 410 415
Ile Asp Lys Glu Thr Ala Ser Gln Leu Lys Ser Val Ile Asn Thr Thr
420 425 430
Leu Ile Val Thr Asn Ile Pro Tyr Ile Ile Met Ala Leu Gly Val Phe
435 440 445
Phe Gly Leu Ile Phe Thr Trp Leu Ala Cys Arg Gly Gln Gly Ser Thr
450 455 460
Asp Glu Gly Thr Ala Asp Glu Arg Ala Pro Leu Ile Arg Thr
465 470 475
<210> 63
<211> 481
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 63
Met Arg Ser Leu Cys Leu Val Thr Val Gly Val Leu Ala Leu Thr Leu
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Ile Ser Leu Leu Val Ala His Val Phe Gln Thr Val
20 25 30
Val Asp Leu Gln Val Lys Gln Gly Thr Val Leu Lys Asn Gly Thr Glu
35 40 45
Thr Phe Glu Ala Trp Glu Asp Pro Pro Pro Pro Val Tyr Met Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Leu Glu Val Leu Gln Gly Ala Thr
65 70 75 80
Pro Leu Val Glu Glu Lys Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Tyr Arg Pro
85 90 95
Arg Val His Val Gln Phe Leu Asp Asn Gly Thr Lys Val Ser Ala Leu
100 105 110
Asn Pro Lys Thr Tyr Val Phe Glu Pro Glu Lys Ser Val Gly Asn Pro
115 120 125
Glu Val Asp Leu Ile Arg Thr Ile Asn Val Pro Ala Val Thr Ala Met
130 135 140
Glu Trp Thr Arg Ala Thr Ser Leu Gln Phe Ala Thr Glu Val Leu Leu
145 150 155 160
Leu Leu Tyr Gln Glu Ser Leu Phe Thr Val Arg Thr Val His Glu Leu
165 170 175
Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Lys Leu Leu Ser Thr Ile His Val Leu His
180 185 190
Pro Glu Ile Asp Pro Val Phe Gly Phe Phe Asn Lys Met Asn Gly Thr
195 200 205
Asp Asp Gly Glu Tyr Val Phe Leu Ser Gly Glu Met Asn Tyr Leu Asn
210 215 220
Phe Ser Arg Ile Val Glu Trp Lys Gly Lys Glu Ser Leu Asn Trp Trp
225 230 235 240
Thr Thr Lys Thr Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Thr Ser Phe
245 250 255
His Pro Leu Ile Ser Lys Asp Glu Asn Ile Tyr Ile Phe Ser Ser Asp
260 265 270
Phe Cys Arg Ser Leu Tyr Leu Val Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Val Ala
275 280 285
Gly Val Pro Thr Tyr Arg Phe Val Pro Ser Pro Met Val Phe Ala Asn
290 295 300
Thr Thr Val Asn Pro Asp Asn Ala Gly Phe Cys Val Pro Pro Gly Asn
305 310 315 320
Cys Pro Gly Ala Gly Val Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Gln Gly Ala
325 330 335
Pro Ile Phe Leu Ser Ala Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Gln Lys Phe
340 345 350
Val Ser Asp Ile Glu Gly Met His Pro Thr Lys Glu Tyr His Glu Thr
355 360 365
Phe Val Asp Ile Asn Pro Leu Thr Gly Leu Val Leu Gln Ala Ala Lys
370 375 380
Arg Met Gln Ile Asn Ile His Val Arg Lys Leu Pro Glu Phe Phe Glu
385 390 395 400
Thr Gly Asn Ile Arg Thr Leu Ile Phe Pro Val Met Tyr Ile Asn Glu
405 410 415
Ser Val Leu Ile Asp Glu Ala Ser Ala Asn Lys Leu Lys His Val Leu
420 425 430
Leu Glu Ala Ser Val Val Thr Gly Ile Pro Phe Val Ile Met Ala Ile
435 440 445
Gly Ile Val Phe Gly Ile Val Phe Ser Val Leu Val Cys Arg Ala Gln
450 455 460
Gly Ala Arg Glu Glu Ser Thr Glu Glu Glu Arg Ser Pro Leu Ile Arg
465 470 475 480
Thr
<210> 64
<211> 483
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 64
Met Val Lys Trp Ala Val Phe Gly Thr Ala Ala Val Ser Val Thr Leu
1 5 10 15
Leu Ile Val Ser Ile Val Leu Leu Leu Thr His Thr Phe Met Asp Ile
20 25 30
Val Glu Gly Gln Val Lys Gln Ala Ile Val Leu Lys Asn Glu Ser Glu
35 40 45
Val Phe Glu Asp Trp Ala Asn Pro Pro Pro Pro Val Tyr Met Gln Phe
50 55 60
Tyr Phe Phe Asn Val Thr Asn Pro Leu Glu Val Leu Ser Gly Glu Lys
65 70 75 80
Pro Phe Val Asp Glu Ile Gly Pro Tyr Thr Tyr Arg Glu Tyr Arg Pro
85 90 95
Arg Glu Asn Ile Thr Phe Ser Val Asn Gly Thr Glu Val Ser Ala Val
100 105 110
Thr Pro Lys Thr Tyr Val Phe Glu Pro Glu Lys Ser Ile Gly Asp Pro
115 120 125
Lys Val Asp Leu Ile Arg Thr Val Asn Ile Pro Leu Val Thr Ile Leu
130 135 140
Glu Met Thr Lys Asp Ser Ser Leu Leu Arg Pro Phe Ile Ile Ala Ala
145 150 155 160
Leu Lys Thr Tyr Lys Glu Gly Met Phe Val Thr Arg Thr Val Asp Glu
165 170 175
Leu Leu Trp Gly Tyr Lys Asp Ala Val Leu Ser Ile Leu His Pro Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Ile Ser Asp Thr Phe Gly Leu Phe Tyr Lys Met Asn Thr
195 200 205
Thr Asp Asp Gly Glu Tyr Ile Phe Leu Ser Gly Glu Lys Asp Tyr Leu
210 215 220
Glu Phe Thr Gln Ile Ala Glu Trp Lys Gly Gln Lys Ala Leu Asn Trp
225 230 235 240
Trp Thr Thr Glu Thr Cys Asn Met Ile Asn Gly Thr Asp Gly Thr Ser
245 250 255
Phe His Pro Leu Leu Asn Lys Asp Asp Thr Ile Tyr Met Phe Ser Ser
260 265 270
Asp Leu Cys Arg Ser Ile Tyr Ala Val Tyr Glu Ser Ser Glu Asn Ile
275 280 285
Lys Asp Ile Ser Val Phe Arg Phe Ser Pro Pro Ala Ser Val Phe Ala
290 295 300
Asn Val Ser Val Asn Pro Gln Asn Lys Gly Phe Cys Val Pro Glu Gly
305 310 315 320
Asn Cys Leu Pro Ser Gly Leu Leu Asn Val Ser Ile Cys Lys Glu Gly
325 330 335
Ala Pro Ile Val Leu Ser Ser Pro His Phe Tyr Gln Ala Asp Glu Asn
340 345 350
Val Ile Asn Ser Ile Arg Gly Met Lys Pro Val Lys Glu His His Met
355 360 365
Thr Phe Leu Asp Leu Asn Pro Leu Thr Gly Thr Leu Ile Gln Ala Ala
370 375 380
Lys Arg Ile Gln Val Asn Val Tyr Val Arg Lys Ile Asn Val Tyr Leu
385 390 395 400
Ile Thr Gln Asp Ile Gln Thr Leu Phe Phe Pro Val Met His Leu Asn
405 410 415
Glu Ser Val Leu Ile Asp Asp Lys Ser Ala Gly Arg Leu Arg Ser Ile
420 425 430
Leu Phe Gln Gly Arg Val Val Ala Asn Ile Pro Phe Ile Ile Met Gly
435 440 445
Leu Gly Ile Ile Leu Ala Phe Leu Phe Thr Thr Leu Ser Cys Leu Gln
450 455 460
Lys Arg Ser Arg Asp Glu Gly Thr Glu Glu Glu Arg Gly Pro Leu Ile
465 470 475 480
Arg Ala Ser
<210> 65
<211> 551
<212> PRT
<213> 黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）
<400> 65
Met Gln Leu Asp Asp Ile Leu His Ile Asn Asn Cys Lys Ala Asp Cys
1 5 10 15
Ser Ser Leu Ser Thr Thr Pro Asn Pro Lys Thr Asp Leu Val Asn Met
20 25 30
Asn Gly Pro Lys His Lys Phe Cys Thr Lys Leu Ser Ser Thr Tyr Leu
35 40 45
Arg Lys Trp Trp Ile Thr Ile Val Val Ala Ala Ala Leu Ile Ile Gly
50 55 60
Gly Ile Val Val Ala Cys Glu Phe Thr Val Leu Ile Asp Ala Val Val
65 70 75 80
Asp Arg Met Val Ala Leu Arg Pro Gly Ala Lys Thr Phe Gly Trp Trp
85 90 95
Ala Lys Pro Pro Val Glu Pro Arg Ile Ser Leu Tyr Ile Tyr Asn Val
100 105 110
Thr Asn Ala Asp Asp Phe Leu Ser Asn Gly Ser Lys Ala Ile Val Asp
115 120 125
Glu Val Gly Pro Tyr Val Tyr Ser Glu Thr Trp Glu Lys Val Asn Ile
130 135 140
Val Glu Asn Asp Asn Gly Thr Leu Ser Tyr Asn Leu Arg Lys Ile Tyr
145 150 155 160
Ser Phe Arg Glu Asp Leu Ser Val Gly Pro Glu Asp Asp Val Val Ile
165 170 175
Val Pro Asn Ile Pro Met Leu Ser Ala Thr Ser Gln Ser Lys His Ala
180 185 190
Ala Arg Phe Leu Arg Leu Ala Met Ala Ser Ile Met Asp Ile Leu Lys
195 200 205
Ile Lys Pro Phe Val Gln Val Ser Val Gly Gln Leu Leu Trp Gly Tyr
210 215 220
Glu Asp Pro Leu Leu Lys Leu Ala Lys Asp Val Val Pro Lys Glu Gln
225 230 235 240
Lys Leu Pro Tyr Glu Glu Phe Gly Leu Leu Tyr Gly Lys Asn Gly Thr
245 250 255
Ser Ser Asp Arg Val Thr Val Asn Thr Gly Val Asp Asp Ile Arg Arg
260 265 270
Tyr Gly Ile Ile Asp Asn Phe Asn Gly Arg Thr His Leu Pro His Trp
275 280 285
Thr Thr Asp Ala Cys Asn Thr Leu Ala Gly Thr Asp Gly Ser Ile Phe
290 295 300
Pro Pro His Ile Asp His Asp Arg Ile Leu His Val Tyr Asp Lys Asp
305 310 315 320
Leu Cys Arg Leu Leu Pro Leu Val Phe Glu Lys Glu Val Met Thr Ser
325 330 335
Asn Glu Val Pro Gly Tyr Arg Phe Thr Pro Pro Glu Trp Val Phe Ala
340 345 350
Asp Val Asp Ser His Pro Asp Asn Met Cys Phe Cys Pro Ala Gly Lys
355 360 365
Pro Ser Cys Ser Pro Asn Gly Leu Phe Asn Val Ser Leu Cys Gln Tyr
370 375 380
Asp Ser Pro Ile Met Leu Ser Phe Pro His Phe Tyr Leu Ala Asp Glu
385 390 395 400
Ser Leu Arg Thr Gln Val Glu Gly Ile Ser Pro Pro Met Lys Glu Lys
405 410 415
His Gln Phe Phe Phe Asp Val Gln Pro Lys Met Gly Thr Thr Leu Arg
420 425 430
Val Arg Ala Arg Ile Gln Ile Asn Leu Ala Val Ser Gln Val Phe Asp
435 440 445
Ile Lys Gln Val Ala Asn Phe Pro Asp Ile Ile Phe Pro Ile Leu Trp
450 455 460
Phe Glu Glu Gly Ile Asp Asn Leu Pro Asp Glu Val Thr Asp Leu Met
465 470 475 480
Arg Phe Ala Glu Gln Val Pro Pro Lys Ile Arg Val Ala Leu Ile Val
485 490 495
Gly Leu Cys Ala Leu Gly Val Ile Leu Leu Leu Leu Ser Thr Phe Cys
500 505 510
Leu Ile Arg Asn Ser His Arg Gln Ser Thr Leu His Leu Glu Gly Ser
515 520 525
Asn Tyr Leu Ala Thr Ala Gln Val Asp Met Asn Lys Lys Gln Asn Lys
530 535 540
Asp Asn Gln Pro Ala Arg Tyr
545 550
<210> 66
<211> 522
<212> PRT
<213> 冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）
<220>
<223> str. PEST
<400> 66
Met Tyr Gly Arg Ser Asn Arg Leu Cys Ala Lys Leu Ser Ser Ala Phe
1 5 10 15
Leu Arg Lys Trp Trp Phe Val Ile Ala Phe Ala Leu Ser Leu Leu Val
20 25 30
Leu Gly Ala Leu Val Thr Phe Gly Phe Thr Ala Phe Ile Arg Thr Ile
35 40 45
Ile Asp His Gln Val Ala Leu Arg Val Gly Gly Gln Ser Phe Gly Trp
50 55 60
Trp Ser Arg Pro Pro Val Glu Pro Ile Ile Arg Ile Phe Val Tyr Asn
65 70 75 80
Val Thr Asn Ala Asp Glu Phe Leu Asn Asn Gly Thr Lys Pro Ile Leu
85 90 95
Asp Glu Leu Gly Pro Tyr Val Tyr Val Gln Thr Trp Glu Lys Val Asn
100 105 110
Ile Lys Glu Asn Pro Asn Gly Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Arg Val
115 120 125
Tyr Ile Phe Asn Glu Asp Leu Ser Gly Gly Leu Glu Asp Asp Val Val
130 135 140
Ile Val Pro Asn Ile Pro Met Leu Ser Ala Thr Ser Gln Ser Lys His
145 150 155 160
Ala Ala Arg Phe Leu Arg Leu Ala Met Ala Ser Ile Met Asp Ile Leu
165 170 175
Lys Ile Lys Pro Phe Val Glu Val Ser Val Gly Gln Leu Leu Trp Gly
180 185 190
Tyr Glu Asp Pro Leu Leu Lys Leu Ala Lys Asp Val Val Pro Lys Glu
195 200 205
Gln Lys Leu Pro Tyr Glu Glu Phe Gly Leu Met Tyr Gly Lys Asn Ser
210 215 220
Thr Ser Lys Asp Thr Val Thr Val Trp Thr Gly Val Asp Asp Ile Thr
225 230 235 240
Gln Tyr Gly Ile Ile Asp Lys Tyr Asn Gly Arg Ser His Gln Thr His
245 250 255
Trp Leu Ser Glu Gln Cys Asn Arg Leu Asn Gly Thr Asp Gly Ser Ile
260 265 270
Phe Pro Pro Arg Ile Thr Lys Asn Ser Thr Leu His Val Tyr Glu Lys
275 280 285
Asp Leu Cys Arg Leu Leu Pro Leu Ser Phe Glu Lys Glu Val Thr Val
290 295 300
Arg Gly Gly Val Lys Gly Tyr Arg Phe Thr Pro Ser Pro Asp Val Phe
305 310 315 320
Ala Ser Val Asp Lys Asn Pro Asn Asn Met Cys Tyr Cys Pro Ala Gly
325 330 335
Pro Pro Cys Ala Pro His Gly Leu Phe Asn Val Ser Leu Cys Gln Tyr
340 345 350
Asp Ser Pro Ile Leu Leu Ser Phe Pro His Phe Tyr Met Ala Asp Gln
355 360 365
Thr Leu Arg Thr Ala Val Glu Gly Ile Ser Pro Pro Glu Lys Asp Lys
370 375 380
His Gln Leu Phe Ile Asp Val Gln Pro Asp Met Gly Thr Ala Leu Arg
385 390 395 400
Ala Arg Ala Arg Ile Gln Ile Asn Leu Ala Val Ser Gln Val Val Asp
405 410 415
Ile Lys Gln Val Ala Asn Phe Pro Asp Ile Val Phe Pro Ile Leu Trp
420 425 430
Phe Glu Glu Gly Ile Asp Ser Leu Pro Asp Glu Ile Leu Asp Leu Met
435 440 445
Lys Val Ala Thr Asn Ile Pro Pro Arg Ala Lys Phe Ile Leu Thr Ile
450 455 460
Ala Leu Phe Gly Leu Gly Gly Phe Leu Phe Val Val Ala Val Ile Cys
465 470 475 480
Leu Val Arg Lys Ser His Arg Gln Ser Thr Leu His Leu Glu Gly Ser
485 490 495
Asn Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Val Asp Gln Ala Lys Lys Lys Ala Lys
500 505 510
Met Asp Asn Gly Met Ser Ser Lys Ser Asn
515 520
<210> 67
<211> 338
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 67
Met Val Arg Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 68
<211> 338
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 68
Met Val Arg Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 69
<211> 338
<212> PRT
<213> 家兔（Oryctolagus cuniculus）
<400> 69
Met Gly Ala Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 70
<211> 341
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 70
Met Val Gly Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ala Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Leu Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Ser Lys Tyr Ala Lys Thr Glu Pro Asp Ser Met Gln Val Ile
305 310 315 320
Glu Phe Leu His Ile Asp Leu Lys Ser Ile Arg His Pro Leu Lys Val
325 330 335
Asn Pro Ile Gln Lys
340
<210> 71
<211> 337
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 71
Met Val Gly Arg Ser Gln Ser Asp Arg Asn Gln Leu Pro Leu Phe Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Gly
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Ser Thr Asp Asn Met Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Phe Val Glu Asp Lys Ser Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Val Asp Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg Ser Pro Phe Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Ser Asp Glu Gly Pro Tyr Ile Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Asn Gln His Thr Lys Thr Met Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ala Asp Ile Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Met Cys Ile Ala Tyr Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Met Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Ala Arg Asp Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Phe Leu Glu Ile Gln Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Arg Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ala Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Arg Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Ile Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Asn Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Lys Gln Ala Ile Leu Arg Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Lys Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Gln Gly Leu Glu Ile Arg Asn Thr Gly Ser Arg
260 265 270
Ser Val Leu Met Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Ile Thr Asn Thr Ser Leu Tyr
290 295 300
Leu Tyr Ile Gly Pro Gly Thr Pro Ile Asp Asn Ala Thr Ser Leu Ala
305 310 315 320
Ala Ser Leu Trp Leu Met Ala Asn Ile Leu Leu Cys Leu Phe Cys Thr
325 330 335
Cys
<210> 72
<211> 333
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 72
Met Ser Cys Leu Trp Ile His Ser Val Phe Ile Pro Gly Phe Phe Leu
1 5 10 15
Leu Phe Gly Phe Glu Gly Phe Pro Val Ile Ser Val Glu Ser Gln Arg
20 25 30
Ser Thr Asp Asn Ile Thr Ile Arg Gln Gly Asp Thr Thr Val Ile Arg
35 40 45
Cys Tyr Val Asp Asp Lys Val Ser Lys Val Ala Trp Leu Asn Arg Ser
50 55 60
Asn Ile Ile Phe Ala Gly Glu Asp Lys Trp Ser Leu Asp Pro Arg Val
65 70 75 80
Glu Leu Val Thr Gln Gly Gln Leu Glu Tyr Ser Leu Arg Ile Gln Lys
85 90 95
Val Asp Val Phe Asp Glu Gly Pro Tyr Thr Cys Ser Ile Gln Thr Lys
100 105 110
Gln Gln Ser Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val Gln Val Pro Ala
115 120 125
Ile Ile Tyr Lys Val Ser Glu Asp Ile Thr Val Asn Glu Gly Ser Asn
130 135 140
Val Ala Leu Thr Cys Leu Ala Asn Gly Arg Pro Asp Pro Ala Ile Thr
145 150 155 160
Trp Arg Leu Leu Asn Pro Ser Ala Glu Ala Leu Asp Val Gly Glu Tyr
165 170 175
Leu Glu Ile Ser Gly Val Val Arg Ser Gln Ala Gly Arg Tyr Glu Cys
180 185 190
Lys Ala Ser Asn Asp Val Ser Thr Pro Asp Val Lys Tyr Val Asn Val
195 200 205
Val Val Asn Tyr Pro Pro Tyr Ile Lys Asp Val Arg Ser Ser Glu Thr
210 215 220
Ala Val Gly Gln Ala Gly Val Leu His Cys Glu Ala Ser Ala Val Pro
225 230 235 240
Gln Pro Glu Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Glu Arg Arg Leu Ser Ser Ser
245 250 255
Gln Ser Leu Thr Ile Gln Val Ser Gly Ser Arg Thr Val Leu Val Val
260 265 270
Ala Asn Val Thr Glu Glu Asp Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val Ala Thr
275 280 285
Asn Arg Leu Gly Val His Asn Ala Ser Val Phe Leu Tyr Lys Pro Gly
290 295 300
Met Gly Arg Asp Ile Asn Ser Ala Gly Cys Ile Cys Gln Ser Leu Trp
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Cys Val Ser Ser Ala Leu Leu Gln Cys
325 330
<210> 73
<211> 197
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 73
Met Ser Gly Ser Ser Arg Arg Leu Leu Trp Ala Ala Thr Cys Leu Ala
1 5 10 15
Val Leu Cys Val Ser Ala Ala Gln Pro Asn Ile Thr Thr Leu Ala Pro
20 25 30
Asn Val Thr Glu Val Pro Thr Thr Thr Thr Lys Val Val Pro Thr Thr
35 40 45
Gln Met Pro Thr Val Leu Pro Glu Thr Cys Ala Ser Phe Asn Ser Cys
50 55 60
Val Ser Cys Val Asn Ala Thr Phe Thr Asn Asn Ile Thr Cys Phe Trp
65 70 75 80
Leu His Cys Gln Glu Ala Asn Lys Thr Tyr Cys Ala Asn Glu Pro Leu
85 90 95
Ser Asn Cys Ser Gln Val Asn Arg Thr Asp Leu Cys Ser Val Ile Pro
100 105 110
Pro Thr Thr Pro Val Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Pro Thr Thr Arg
115 120 125
Pro Ser Ser Pro Thr Pro Thr Pro Ser Val Val Thr Ser Ala Gly Thr
130 135 140
Thr Asn Thr Thr Leu Thr Pro Thr Ser Gln Pro Glu Arg Lys Ser Thr
145 150 155 160
Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly Val
165 170 175
Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu Arg
180 185 190
Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 74
<211> 197
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 74
Met Ser Arg Leu Ser Arg Ser Leu Leu Trp Ala Val Thr Cys Leu Ala
1 5 10 15
Val Leu Cys Val Leu Ser Ala Glu Glu Asn Pro Thr Pro His Thr Asn
20 25 30
Val Thr Ser Leu Ala Pro Thr Ser Asn Ile Thr Ser Ala Pro Val Thr
35 40 45
Ser Leu Pro Leu Val Thr Thr Pro Ala Pro Glu Thr Cys Glu Gly Arg
50 55 60
Asn Ser Cys Val Ser Cys Phe Asn Ala Ser Thr Val Asn Thr Thr Cys
65 70 75 80
Phe Trp Ile Glu Cys Lys Asp Glu Ser Tyr Cys Ser His Asn Ser Thr
85 90 95
Val Ser Asp Cys Gln Val Gly Asn Thr Thr Asp Phe Cys Ser Val Pro
100 105 110
Thr Ala Thr Leu Val Pro Thr Ala Asn Ser Thr Ala Lys Pro Thr Val
115 120 125
Gln Pro Ser Pro Ser Thr Thr Ser Lys Thr Val Thr Thr Ser Gly Thr
130 135 140
Thr Asn Thr Thr Val Thr Pro Thr Ser Gln Pro Val Arg Lys Ser Thr
145 150 155 160
Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly Val
165 170 175
Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu Arg
180 185 190
Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 75
<211> 194
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 75
Met Leu Gly Leu Ser Arg Gln Leu Leu Trp Ala Val Gly Cys Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Val Leu Thr Ala Ala Lys Asn Ser Thr Ile Leu Pro Pro
20 25 30
Ser Thr Thr Thr Pro Trp Leu Ser Pro Pro Thr Thr Gln Thr Thr Ser
35 40 45
Ala Pro Pro Lys Thr Leu Pro Thr Pro Ala Pro Glu Ile Cys Glu Asn
50 55 60
Arg Asn Ser Cys Ile Ser Cys Phe Asp Ala Asn Asn Thr Cys Phe Trp
65 70 75 80
Ile Glu Cys Lys Gly Lys Ser Tyr Cys Ser Asp Asn Ser Thr Val Ser
85 90 95
Asp Cys His Val Val Asn Gly Thr Asp Phe Cys Ser Gly Pro Thr Val
100 105 110
Thr Pro Leu Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Thr Thr Thr Leu Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Thr
130 135 140
Thr Leu Ala Pro Thr Thr Gln Pro Met Arg Lys Ser Thr Phe Asp Ala
145 150 155 160
Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly Val Gln Ala Val
165 170 175
Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu Arg Asn Tyr His
180 185 190
Thr Leu
<210> 76
<211> 198
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 76
Met Ser Gly Leu Ser Arg Pro Leu Leu Leu Ala Val Gly Cys Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Val Ile Thr Ala Ala Gly Asn Thr Thr Leu Ala Pro Asn
20 25 30
Val Thr Thr Ala Ser Ser Pro Pro Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Val
35 40 45
Ser Pro Thr Thr Leu Ser Pro Leu Pro Val Thr Thr Pro Ala Pro Asp
50 55 60
Ile Cys Gly Ser Arg Asn Ser Cys Val Ser Cys Val Asp Gly Asn Ala
65 70 75 80
Thr Cys Phe Trp Ile Glu Cys Lys Gly Lys Ser Tyr Cys Ser Asp Asn
85 90 95
Ser Thr Ala Gly Asp Cys Lys Val Val Asn Thr Thr Gly Phe Cys Ser
100 105 110
Val Pro Thr Thr Thr Pro Thr Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Thr Leu Pro Ser Thr Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ala Thr Thr Ser Gly
130 135 140
Thr Thr Asn Thr Thr Leu Ser Pro Thr Ile Gln Pro Thr Arg Lys Ser
145 150 155 160
Thr Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly
165 170 175
Val Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu
180 185 190
Arg Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 77
<211> 198
<212> PRT
<213> 绵羊（Ovis aries）
<400> 77
Met Ser Gly Leu Ser Arg Pro Leu Leu Leu Ala Val Gly Tyr Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Val Ile Thr Ala Ala Arg Asn Thr Thr Val Thr Pro Asn
20 25 30
Val Thr Thr Pro Ser Ser Pro Pro Pro Thr Thr Ala Thr Val Pro Val
35 40 45
Ser Pro Thr Thr Leu Thr Pro Pro Pro Val Thr Thr Pro Ala Pro Asp
50 55 60
Ile Cys Gly Ser Arg Asn Ser Cys Ile Ser Cys Val Asp Gly Asn Ala
65 70 75 80
Thr Cys Phe Trp Ile Glu Cys Lys Gly Lys Ser Tyr Cys Ser Asp Asn
85 90 95
Ser Thr Val Ser Asp Cys Lys Val Val Asn Thr Thr Gly Phe Cys Ala
100 105 110
Val Pro Thr Thr Thr Pro Thr Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Thr Leu Pro Ser Thr Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ala Thr Thr Ser Gly
130 135 140
Thr Ala Asn Thr Thr Leu Thr Pro Thr Ile Gln Pro Met Arg Lys Ser
145 150 155 160
Thr Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly
165 170 175
Val Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu
180 185 190
Arg Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 78
<211> 198
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 78
Met Ser Gly Leu Ser Arg Gln Leu Cys Trp Ala Ala Ala Cys Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Ala Leu Thr Ala Ala Gln Ser Phe Ser Ser Asp Pro Asn
20 25 30
Gly Thr Thr Thr Thr Thr Gln Ala Thr Thr Asp Ala Ala Thr Thr Arg
35 40 45
Val Thr Thr Ala Ala Pro Ala Thr Thr Pro Ala Pro Asp Pro Cys Asp
50 55 60
Asn Arg Asn Ser Cys Val Ser Cys Val Asn Thr Ser Val Asp Ala Thr
65 70 75 80
Ala Cys Ser Trp Ile Glu Cys Lys Glu Lys Ser Tyr Cys Ser His Asn
85 90 95
Thr Thr Val Ser Asp Cys Gln Val Val Asn Ser Thr Gln Leu Cys Ser
100 105 110
Ala Pro Glu Pro Thr Met Met Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Thr Gln Pro Ser Ser Ser Thr Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ser Gly
130 135 140
Thr Thr Asn Ile Thr Leu Ser Pro Thr Ser Gln Pro Gly Arg Lys Ser
145 150 155 160
Thr Phe Asp Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Ile Leu Gly
165 170 175
Val Gln Ala Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu
180 185 190
Arg Asn Tyr His Thr Leu
195
<210> 79
<211> 195
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 79
Met Ser Gly Ala Ser Arg Gly Leu Phe Trp Ala Ala Thr Cys Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Leu Ser Ala Ala Gln Ser Asn Ser Ser Ala Ser Pro Asn
20 25 30
Val Thr Asp Pro Pro Thr Thr Thr Ser Lys Val Val Pro Thr Thr Leu
35 40 45
Thr Thr Thr Lys Pro Pro Glu Thr Cys Glu Ser Phe Asn Ser Cys Val
50 55 60
Ser Cys Val Asn Ala Thr Leu Thr Asn Asn Ile Thr Cys Val Trp Leu
65 70 75 80
Asp Cys His Glu Ala Asn Lys Thr Tyr Cys Ser Ser Glu Leu Val Ser
85 90 95
Asn Cys Thr Gln Lys Thr Ser Thr Asp Ser Cys Ser Val Ile Pro Thr
100 105 110
Thr Pro Val Pro Thr Asn Ser Thr Ala Lys Pro Thr Thr Arg Pro Ser
115 120 125
Ser Pro Thr Pro Thr Pro Ser Val Val Thr Ser Ala Gly Ala Thr Asn
130 135 140
Thr Thr Val Thr Pro Thr Ser Gln Pro Glu Arg Lys Ser Thr Phe Asp
145 150 155 160
Ala Ala Ser Phe Ile Gly Gly Ile Val Leu Val Leu Gly Val Gln Ala
165 170 175
Val Ile Phe Phe Leu Tyr Lys Phe Cys Lys Ser Lys Glu Arg Asn Tyr
180 185 190
His Thr Leu
195
<210> 80
<211> 354
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 80
Met Arg Leu Ala Val Leu Phe Ser Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Val Thr Glu Ser Thr Gly Thr
35 40 45
Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Ser His Lys Thr Thr Thr His Arg Thr
50 55 60
Thr Thr Thr Gly Thr Thr Ser His Gly Pro Thr Thr Ala Thr His Asn
65 70 75 80
Pro Thr Thr Thr Ser His Gly Asn Val Thr Val His Pro Thr Ser Asn
85 90 95
Ser Thr Ala Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Ala Thr His Ser Pro Ala
100 105 110
Thr Thr Ser His Gly Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn Ser Thr
115 120 125
Ala Thr Ser Pro Gly Phe Thr Ser Ser Ala His Pro Glu Pro Pro Pro
130 135 140
Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Thr Ser Lys Glu Thr Ile Gly Asp Tyr
145 150 155 160
Thr Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val His Leu Gln Ala Gln Ile
165 170 175
Gln Ile Arg Val Met Tyr Thr Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp Gly
180 185 190
Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Val Gln Gly Ser Cys Glu
195 200 205
Gly Ala His Pro His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly His Leu Ser
210 215 220
Phe Gly Phe Met Gln Asp Leu Gln Gln Lys Val Val Tyr Leu Ser Tyr
225 230 235 240
Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro His Ala Ala Gln Trp Thr
245 250 255
Phe Ser Ala Gln Asn Ala Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly
260 265 270
Gln Ser Phe Ser Cys Ser Asn Ser Ser Ile Ile Leu Ser Pro Ala Val
275 280 285
His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Arg Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro His
290 295 300
Thr Gly Val Phe Gly Gln Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Arg Ser Ile
305 310 315 320
Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Ile Leu Leu Gly Leu Leu Ala Leu
325 330 335
Val Leu Ile Ala Phe Cys Ile Ile Arg Arg Arg Pro Ser Ala Tyr Gln
340 345 350
Ala Leu
<210> 81
<211> 354
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 81
Met Arg Leu Ala Val Leu Phe Ser Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Val Thr Glu Ser Thr Gly Thr
35 40 45
Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Ser His Lys Thr Thr Thr His Arg Thr
50 55 60
Thr Thr Thr Gly Thr Ala Ser His Gly Pro Thr Thr Ala Thr His Asn
65 70 75 80
Pro Thr Thr Thr Ser His Gly Asn Val Thr Val His Pro Thr Ser Asn
85 90 95
Ser Thr Ala Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Ala Thr His Ser Pro Ala
100 105 110
Thr Thr Ser His Gly Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn Ser Thr
115 120 125
Ala Thr Ser Pro Gly Phe Thr Ser Ser Ala His Pro Glu Pro Pro Pro
130 135 140
Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Thr Ser Lys Glu Thr Ile Gly Asp Tyr
145 150 155 160
Thr Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val His Leu Gln Ala Gln Ile
165 170 175
Gln Ile Arg Val Met Tyr Thr Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp Gly
180 185 190
Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Val Gln Gly Ser Cys Glu
195 200 205
Gly Ala His Pro His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly His Leu Ser
210 215 220
Phe Gly Phe Met Gln Asp Leu Gln Gln Lys Ala Val Tyr Leu Ser Tyr
225 230 235 240
Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro His Ala Ala Gln Trp Thr
245 250 255
Phe Ser Ala Gln Asn Ala Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly
260 265 270
Arg Ser Phe Ser Cys Ser Asn Ser Ser Ile Ile Leu Ser Pro Ala Val
275 280 285
His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Arg Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro His
290 295 300
Thr Gly Val Phe Gly Gln Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Arg Ser Ile
305 310 315 320
Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Ile Leu Leu Gly Leu Leu Ala Leu
325 330 335
Val Leu Ile Ala Phe Cys Ile Ile Arg Arg Arg Pro Ser Ala Tyr Gln
340 345 350
Ala Leu
<210> 82
<211> 335
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 82
Met Arg Leu Ala Val Phe Phe Ser Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Pro Ser
35 40 45
Pro Gly Thr Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Ser His Arg Thr Thr Thr
50 55 60
Trp Arg Ile Ser Thr Thr Thr His Thr Thr Asn Thr Thr Gly Thr Thr
65 70 75 80
Ser Ser Glu Ser Pro Thr Ala Thr His Ser Pro Ala Thr Thr Thr Ser
85 90 95
His Gln Asn Thr Thr Val His Pro Thr Ser Asn Ile Thr Ala Thr Ser
100 105 110
Pro Gly Pro Ser Thr Arg Ser Pro His Pro Glu Pro Pro Pro Ser Pro
115 120 125
Ser Pro Ser Pro Gly Ser Lys Glu Ala Ile Gly Asp Tyr Thr Trp Ser
130 135 140
Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val Arg Leu Gln Ala Gln Ile Gln Ile Arg
145 150 155 160
Val Leu Tyr Pro Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp Gly Ile Ser Val
165 170 175
Leu Asn Pro Asn Arg Thr Lys Ala Gln Gly Gly Cys Glu Gly Thr His
180 185 190
Ser His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Ser Gly Gln Leu Ser Phe Gly Phe
195 200 205
Lys Gln Asp Pro Leu Gln Ser Ala Val Tyr Leu Asn Tyr Met Ala Val
210 215 220
Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro Gln Ala Val Gln Trp Thr Phe Ser Val
225 230 235 240
Gln Asn Ser Ser Leu Arg Asp Leu Gln Thr Pro Leu Gly His Ser Phe
245 250 255
Ser Cys Arg Asn Ala Ser Ile Ile Val Ser Pro Ala Leu His Leu Asp
260 265 270
Leu Leu Ser Leu Lys Leu Gln Ala Ala Gln Leu Ser Pro Ser Gly Ala
275 280 285
Phe Gly Pro Ser Phe Ser Cys Pro Asn Asp Lys Ser Ile Leu Leu Pro
290 295 300
Leu Ile Ile Gly Leu Ile Leu Leu Gly Leu Leu Thr Leu Val Leu Val
305 310 315 320
Thr Phe Cys Ile Ile Arg Arg Arg Pro Pro Thr Tyr Gln Pro Leu
325 330 335
<210> 83
<211> 335
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 83
Met Arg Leu Pro Val Cys Leu Ile Leu Leu Gly Pro Leu Ile Ala Gln
1 5 10 15
Gly Thr Glu Glu Asp Cys Pro His Lys Lys Ala Val Thr Leu Leu Pro
20 25 30
Ser Phe Thr Met Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Ala Ser Pro Thr
35 40 45
Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Thr Ser His Gly Asn Val Thr Val His
50 55 60
Thr Ser Ser Gly Pro Thr Thr Val Thr His Asn Pro Ala Thr Thr Thr
65 70 75 80
Ser His Gly Asn Ala Thr Ile Ser His Ala Thr Val Ser Pro Thr Thr
85 90 95
Asn Gly Thr Ala Thr Ser Pro Arg Ser Ser Thr Val Gly Pro His Pro
100 105 110
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser Pro Arg Ser Lys Gly Ala Leu Gly
115 120 125
Asn Tyr Thr Trp Ala Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val Gln Leu Gln Ala
130 135 140
Gln Ile Gln Ile Arg Ile Leu Tyr Pro Ile Gln Gly Gly Arg Lys Val
145 150 155 160
Lys Leu Lys Trp Gly Leu Lys Arg Ala Trp Gly Ile Ser Val Leu Asn
165 170 175
Pro Asn Lys Thr Lys Val Gln Gly Gly Cys Asp Gly Thr His Pro His
180 185 190
Leu Ser Leu Ser Phe Pro Tyr Gly Gln Leu Thr Phe Gly Phe Lys Gln
195 200 205
Asp Leu His Gln Ser Pro Ser Thr Val Tyr Leu Asp Tyr Met Ala Val
210 215 220
Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro Gln Ala Ala Gln Trp Thr Phe Met Ala
225 230 235 240
Gln Asn Ser Ser Leu Arg Glu Leu Gln Ala Pro Leu Gly Gln Ser Phe
245 250 255
Cys Cys Gly Asn Ala Ser Ile Val Leu Ser Pro Ala Val His Leu Asp
260 265 270
Leu Leu Ser Leu Arg Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro Asp Lys Gly His
275 280 285
Phe Gly Pro Cys Phe Ser Cys Asn Arg Asp Gln Ser Leu Leu Leu Pro
290 295 300
Leu Ile Ile Gly Leu Val Leu Leu Gly Leu Leu Thr Leu Val Leu Ile
305 310 315 320
Ala Phe Cys Ile Thr Arg Arg Arg Gln Ser Thr Tyr Gln Pro Leu
325 330 335
<210> 84
<211> 354
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 84
Met Arg Leu Ala Val Leu Phe Leu Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Gly Thr
35 40 45
Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Ser His Lys Thr Thr Thr His Arg Thr
50 55 60
Thr Thr Thr Gly Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Ala Thr His Asn
65 70 75 80
Pro Thr Thr Thr Ser His Arg Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn
85 90 95
Ser Thr Ala Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Ala Thr His Arg Pro Ala
100 105 110
Thr Thr Ser His Gly Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn Ser Thr
115 120 125
Ala Thr Ser Pro Gly Leu Thr Ser Ser Ala His Pro Gly Pro Pro Pro
130 135 140
Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Ala Ser Lys Glu Thr Ile Gly Asp Tyr
145 150 155 160
Met Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val His Leu Gln Ala Gln Ile
165 170 175
Gln Ile Arg Val Met Tyr Thr Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp Gly
180 185 190
Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Val Gln Gly Ser Cys Glu
195 200 205
Gly Ala His Pro His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly His Leu Ser
210 215 220
Phe Gly Phe Met Gln Asp Leu Gln Gln Arg Val Val Tyr Leu Ser Tyr
225 230 235 240
Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro His Ala Ala Gln Trp Thr
245 250 255
Phe Ser Ala Gln Asn Ala Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly
260 265 270
Gln Ser Phe Ser Cys Ser Asn Ser Ser Ile Ile Leu Ser Pro Ala Val
275 280 285
His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Arg Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro His
290 295 300
Thr Gly Val Phe Gly Gln Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Arg Ser Ile
305 310 315 320
Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Val Leu Leu Gly Leu Leu Ala Leu
325 330 335
Val Leu Ile Ala Phe Cys Ile Val Arg Arg Arg Pro Ser Ala Tyr Gln
340 345 350
Ala Leu
<210> 85
<211> 330
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 85
Met Arg Phe Pro Val Cys Leu Thr Leu Leu Val Leu Leu Val Ala Gln
1 5 10 15
Gly Thr Gly Lys Asp Cys Pro His Lys Lys Ala Ala Thr Leu Leu Pro
20 25 30
Ser Phe Thr Glu Thr Pro Thr Thr Thr Gly Ser Thr Ala Ser Pro Thr
35 40 45
Thr Thr His Arg Pro Thr Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Thr Ser
50 55 60
His Arg Pro Thr Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Thr Ser His Arg
65 70 75 80
Pro Thr Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Thr Ser His Gly Asn Ala
85 90 95
Thr Val Ser Pro Thr Thr Asn Ser Pro Gly Phe Ser Thr Val Gly Pro
100 105 110
His Pro Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Ser Ser Thr
115 120 125
Gly Ala Leu Gly Asn Tyr Thr Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val
130 135 140
Gln Leu Gln Ala Gln Ile Gln Ile Arg Ile Leu Tyr Leu Thr Gln Gly
145 150 155 160
Gly Lys Lys Ala Trp Gly Leu Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys
165 170 175
Val Gln Gly Gly Cys Asp Ser Ala His Pro His Leu Ala Leu Ser Phe
180 185 190
Pro Tyr Gly Gln Leu Thr Phe Gly Phe Lys Gln Asp Arg His Gln Ser
195 200 205
His Ser Thr Val Tyr Leu Asn Tyr Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser
210 215 220
Phe Pro Gln Ala Ala Gln Trp Thr Phe Ser Ala Gln Asn Ser Ser Leu
225 230 235 240
Gln Glu Leu Gln Ala Pro Leu Gly Gln Ser Phe Cys Cys Gly Asn Thr
245 250 255
Ser Ile Val Leu Ser Pro Ala Ile His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Arg
260 265 270
Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro Asp Lys Gly His Phe Gly Pro Cys Phe
275 280 285
Ser Cys Ala Ser Asp Gln Ser Leu Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu
290 295 300
Val Leu Leu Gly Leu Leu Thr Leu Val Leu Ile Ala Phe Cys Val Thr
305 310 315 320
Arg Arg Arg Gln Ser Thr Tyr Gln Pro Leu
325 330
<210> 86
<211> 329
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 86
Met Arg Pro Ala Val Phe Phe Leu Gly Ala Leu Val Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Arg Ser Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Gly Ser
35 40 45
Pro Gly Thr Thr Ser His Ser Thr Thr Thr Ala Glu Thr Thr Ser His
50 55 60
Ala Pro Asn Thr Thr Thr His Gln Ala Pro Thr Thr Pro Gly His Arg
65 70 75 80
Asn Thr Thr Ile His Pro Thr Thr Ser Asn Ser Thr Ser Asn Thr Thr
85 90 95
Gly Thr Thr Gly Thr Gly Lys Pro His Thr Ser Thr Ser Tyr Thr Gln
100 105 110
Pro Gly Pro Gly Pro Arg Pro Pro Pro Pro Ser Pro Gly Pro Gly Pro
115 120 125
Gln Asp Ala Ile Gly Asp Tyr Thr Trp Thr Thr Gly Ser Gln Pro Cys
130 135 140
Ala Arg Leu Gln Ala Arg Ile Gln Ile Gly Val Val Tyr Pro Thr Gln
145 150 155 160
Ala Gly Gly Gln Ala Trp Gly Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Ser Thr
165 170 175
Lys Pro Trp Gly Asp Cys Asp Gly Ala Arg Pro His Leu Leu Leu Ser
180 185 190
Phe Pro Phe Gly Gln Leu Ser Phe Gly Phe Thr Gln Glu Pro Gln Gln
195 200 205
Gly Ser Val Tyr Leu Asp Tyr Leu Ala Leu Gln Tyr Asn Val Ser Phe
210 215 220
Pro Gln Ala Ala Gln Trp Thr Phe Ser Gly Gln Asn Ala Ser Leu Arg
225 230 235 240
Ala Leu Gln Ala Pro Leu Gly Gln Ser Phe Ser Cys Arg Asn Ala Ser
245 250 255
Ile Leu Leu Thr Pro Ala Leu Arg Leu Asp Leu Leu His Leu Lys Leu
260 265 270
Gln Ala Ala Gln Leu Pro Pro Ser Gly Ala Phe Gly Pro Ser Phe Ser
275 280 285
Cys Pro Ser Glu His Phe Asn Leu Leu Pro Leu Ile Val Gly Val Ile
290 295 300
Ser Leu Gly Leu Leu Ala Leu Ala Leu Val Thr Phe Cys Ile Ile Arg
305 310 315 320
Arg Arg Pro Pro Thr Tyr Gln Pro Leu
325
<210> 87
<211> 322
<212> PRT
<213> 家马（Equus caballus）
<400> 87
Met Arg Leu Ala Val Leu Phe Ser Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Glu Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Ala Ser
35 40 45
Pro Gly Thr Thr Ser His Gln Thr Thr Gln Ser His Arg Thr Thr Thr
50 55 60
Thr Gly Thr Thr Ser Asp His Pro Thr Thr Ala Thr His Asn Pro Thr
65 70 75 80
Thr Thr Ser His Gly Asn Thr Thr Val His Pro Thr Thr Ser Asn Ser
85 90 95
Thr Val Thr Ser Pro Gly Ser Ala Ser Ser Ser Pro His Pro Arg Pro
100 105 110
Pro Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Gly Ser Lys Glu Ala Ile Gly
115 120 125
Asp Tyr Ile Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val Arg Leu Gln Ala
130 135 140
Gln Ile Gln Ile Arg Val Leu Tyr Pro Thr Leu Gly Gly Gly Lys Ala
145 150 155 160
Trp Gly Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Ala Gln Gly Gly
165 170 175
Cys Ala His Pro His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly Gln Leu Ser
180 185 190
Phe Gly Phe Lys Gln Glu Pro Leu Gln Ser Thr Val Tyr Leu Asn Tyr
195 200 205
Ile Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro Gln Ala Ala Gln Trp Thr
210 215 220
Phe Leu Val Gln Asn Ser Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly
225 230 235 240
Gln Arg Phe Ser Cys Arg Asn Ala Ser Ile Ala Leu Ser Pro Ala Phe
245 250 255
His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Lys Leu Gln Ala Ala Gln Leu Thr Pro
260 265 270
Thr Gly Ala Phe Gly Pro Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Gln Ser Ile
275 280 285
Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Ile Leu Leu Gly Leu Phe Ala Leu
290 295 300
Val Leu Ile Thr Phe Cys Val Ile Arg Arg Arg Pro Pro Thr Tyr Gln
305 310 315 320
Ala Leu
<210> 88
<211> 305
<212> PRT
<213> 家兔（Oryctolagus cuniculus）
<400> 88
Met Arg Leu Pro Val Leu Phe Leu Ala Leu Leu Gly Leu His Ala Ala
1 5 10 15
Ser Ser Gly Thr Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Asn Pro His Thr Thr
20 25 30
Ser His Ser Thr Ala Thr Pro Gly Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr
35 40 45
Ala Thr Pro Thr Thr Gly His Gly Asn Val Thr Val His Pro Thr Thr
50 55 60
Ser Asn Thr Thr Ser Asn Thr Thr Thr Thr Thr Gly Thr Ser Pro Gly
65 70 75 80
Phe Ser Thr Ser Thr Pro His Pro Gly Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Pro Gly Ser Arg Glu Ala Val Gly Asn Tyr Thr Trp Thr Asn
100 105 110
Gly Ser Gln Pro Cys Val Gln Leu Gln Ala Gln Ile Gln Ile Arg Val
115 120 125
Leu Tyr Pro Thr Gln Gly Gly Gly Gln Ala Trp Gly Met Ser Val Leu
130 135 140
Asn Pro Asn Arg Thr Lys Ala Gln Gly Gly Cys Glu Gly Pro Arg Pro
145 150 155 160
His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly Gln Leu Ser Phe Gly Phe Lys
165 170 175
Gln Asp Pro Gly Gln Gly Gln Ser Ala Val Tyr Leu Ser Tyr Leu Ala
180 185 190
Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro Gln Ala Ala Arg Trp Thr Phe Ser
195 200 205
Ala Gln Asn Ala Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly Gln Ser
210 215 220
Phe Ser Cys Arg Asn Ala Ser Ile Ala Val Ser Pro Ala Leu His Leu
225 230 235 240
Asp Leu Leu Ser Leu Arg Val Gln Ala Ala Gln Leu Pro Arg Thr Gly
245 250 255
Ile Phe Gly Pro Ser Phe Ser Cys Pro Ala Asp His Pro Ser Ile Leu
260 265 270
Val Pro Leu Ile Ile Gly Leu Ile Leu Val Gly Leu Leu Ala Leu Val
275 280 285
Leu Val Ala Phe Cys Ile Ala Arg Arg Arg Pro Ser Ala Tyr Gln Ala
290 295 300
Leu
305
<210> 89
<211> 291
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 89
Met Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Glu Ser Thr Thr Ser His Arg Thr Thr Thr Pro Arg Thr Thr Thr Thr
20 25 30
Gly Thr Thr Ser His Gly Pro Thr Thr Val Thr His Asn Pro Ala Thr
35 40 45
Thr Thr Ser His Gly Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Ser Ser Thr
50 55 60
Ala Thr Ser Pro Gly Ser Ser Thr Arg Pro Pro His Pro Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Gly Ser Gln Glu Ala Ile Gly Asp
85 90 95
Tyr Thr Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val Gln Leu Gln Ala Gln
100 105 110
Ile Gln Ile Arg Val Leu Tyr Pro Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp
115 120 125
Gly Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Ala Leu Gly Gly Cys
130 135 140
Glu Gly Ala His Pro His Val Arg Leu Ser Phe Pro Tyr Gly Gln Leu
145 150 155 160
Thr Phe Gly Phe Lys Gln Gln Pro Gln Glu Ser Thr Val Tyr Leu Asn
165 170 175
Tyr Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro Arg Ala Ala Gln Trp
180 185 190
Thr Phe Ser Val Gln Asn Ser Ser Leu Arg Asp Leu Gln Thr Pro Val
195 200 205
Gly Arg Ser Tyr Ser Cys Arg Asn Ala Ser Ile Ile Leu Ser Thr Ala
210 215 220
Phe His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Lys Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro
225 230 235 240
Pro Thr Gly Asn Phe Gly Pro Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Gln Thr
245 250 255
Ile Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Ile Phe Leu Gly Leu Leu Ile
260 265 270
Leu Val Leu Val Thr Phe Cys Ile Ile Arg Arg Arg Pro Pro Ala Tyr
275 280 285
Gln Pro Leu
290
<210> 90
<211> 354
<212> PRT
<213> 东非狒狒（Papio anubis）
<400> 90
Met Arg Leu Ala Val Leu Phe Ser Gly Ala Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Gln Gly Thr Gly Asn Asp Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu
20 25 30
Leu Pro Ser Phe Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Glu Ser Thr Gly Thr
35 40 45
Thr Ser His Arg Thr Thr Lys Ser His Lys Thr Thr Thr His Arg Thr
50 55 60
Thr Thr Thr Gly Thr Thr Ser His Arg Pro Thr Thr Ala Thr His Asn
65 70 75 80
Pro Asn Thr Thr Ser His Arg Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn
85 90 95
Ser Thr Ala Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Ala Thr His Arg Pro Ala
100 105 110
Thr Thr Ser His Gly Asn Ala Thr Val His Pro Thr Ser Asn Ser Thr
115 120 125
Ala Thr Ser Pro Gly Leu Thr Ser Ser Ala His Pro Gly Pro Pro Pro
130 135 140
Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Ala Ser Lys Glu Thr Ile Gly Asp Tyr
145 150 155 160
Met Trp Thr Asn Gly Ser Gln Pro Cys Val His Leu Gln Ala Gln Ile
165 170 175
Gln Ile Arg Val Met Tyr Thr Thr Gln Gly Gly Gly Glu Ala Trp Gly
180 185 190
Ile Ser Val Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Val Gln Gly Ser Cys Glu
195 200 205
Gly Ala His Pro His Leu Leu Leu Ser Phe Pro Tyr Gly His Leu Ser
210 215 220
Phe Gly Phe Met Gln Asp Leu Gln Gln Arg Val Val Tyr Leu Ser Tyr
225 230 235 240
Met Ala Val Glu Tyr Asn Val Ser Phe Pro His Ala Ala Gln Trp Thr
245 250 255
Phe Ser Ala Gln Asn Ala Ser Leu Arg Asp Leu Gln Ala Pro Leu Gly
260 265 270
Gln Ser Phe Ser Cys Ser Asn Ser Ser Ile Ile Leu Ser Pro Ala Val
275 280 285
His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Arg Leu Gln Ala Ala Gln Leu Pro His
290 295 300
Thr Gly Val Phe Gly Gln Ser Phe Ser Cys Pro Ser Asp Arg Ser Ile
305 310 315 320
Leu Leu Pro Leu Ile Ile Gly Leu Val Leu Leu Gly Leu Leu Ala Leu
325 330 335
Val Leu Ile Ala Phe Cys Ile Val Arg Arg Arg Pro Ser Ala Tyr Gln
340 345 350
Ala Leu
<210> 91
<211> 323
<212> PRT
<213> 短尾负鼠（Monodelphis domestica）
<400> 91
Met Arg Leu Ser Leu Leu Leu Ser Gly Ile Leu Leu Gly Leu Leu Ala
1 5 10 15
Glu Gln Gly Ala Gly Asp Lys Cys Pro Gln Glu Lys Ser Val Thr Leu
20 25 30
Val Pro Ser Phe Thr Val Thr Thr Ile Ala Thr Glu Arg Ser Thr Thr
35 40 45
Ser Pro Glu Thr Thr Thr Ser Ser Gly Ser Thr Ala Thr Thr Tyr Arg
50 55 60
Thr Ser Thr Ala Ala Thr Thr Pro His Ser Asn Ser Thr Ala Thr Ser
65 70 75 80
Tyr Ser Thr Thr Ser Glu Gly Thr Ala Val Thr His Gly Thr Thr Thr
85 90 95
Ser Pro Arg Asn Thr Ser Thr Thr Ser Thr Ser Gln Ser Val Pro Val
100 105 110
Pro Pro Ser Pro Gln Pro Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ala Val Gly Asp
115 120 125
Tyr Ile Gly Ala Asn Gly Ser Gln Leu Cys Val His Leu Arg Ala Gln
130 135 140
Ile Gln Met Arg Val Leu Tyr Gln Ala Ser Gly Gly Gly Lys Leu Trp
145 150 155 160
Gly Ile Phe Val Leu Asn Pro Asn Arg Thr Met Ala Gln Gly Asn Cys
165 170 175
Glu Ala Asn His Ser Ser Leu Ile Leu Ser Phe Pro Asn Gly Lys Leu
180 185 190
Ile Phe Gly Phe Lys Gln Asp Ser Ile Lys Lys Ile Val Tyr Leu Ser
195 200 205
His Leu Ala Thr Glu Phe Asn Val Ser Phe Pro Ser Ala Thr Arg Trp
210 215 220
Ile Phe Ser Val Glu Asn Ser Ser Leu Gln Asp Leu Gln Thr Pro Leu
225 230 235 240
Gly His Ser Phe Ser Cys Arg Asn Arg Ser Ile Ala Leu Ser Pro Asp
245 250 255
Ile His Leu Asp Leu Leu Ser Leu Gln Leu Gln Ala Ala Gln Leu Ser
260 265 270
Ser Ser Gly Ala Phe Gly Ala Ala Phe Ser Cys Ser Ala Asp Leu Asn
275 280 285
Ile Leu Val Pro Leu Val Val Gly Leu Val Leu Leu Thr Leu Leu Ile
290 295 300
Leu Val Leu Ser Ala Phe Cys Ile Ser Arg Arg Arg Pro Pro Ala Tyr
305 310 315 320
Gln Pro Leu
<210> 92
<211> 263
<212> PRT
<213> 鸭嘴兽（Ornithorhynchus anatinus）
<400> 92
Met Gly Leu Thr Leu Pro Leu Pro Ala Gln Gly Ser Gln Cys Arg Ala
1 5 10 15
Asn Cys Pro His Lys Lys Ser Ala Thr Leu Val Pro Ser Phe Thr Val
20 25 30
Thr Pro Thr Ala Thr Ser Gly Pro Thr Thr Thr Ala His Gln Thr Thr
35 40 45
Thr Asp His Gly Thr Thr Thr Ser His Glu Thr Thr Thr Ser Gln Gly
50 55 60
Thr Ser Thr His Gly Thr Ser Thr Pro His Thr Thr Thr Thr Gly His
65 70 75 80
Gly Thr Thr Thr Gly His Gln Asn Thr Ser His Ser Thr Thr Thr Ser
85 90 95
His Gly Thr Ser Thr Pro His Lys Thr Thr Thr Arg His Pro Thr Thr
100 105 110
Ser His Gly Thr Thr Thr Ser His Gly Thr Ser Thr Gly His Trp Thr
115 120 125
Ala Arg Pro Thr Ile Arg Pro Gly Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro
130 135 140
Gly Lys Ala Val Gly Asn Tyr Thr Val Phe Asn Gly Ser Gln Pro Cys
145 150 155 160
Leu Arg Leu Arg Ala Glu Ile Arg Leu Trp Val Leu Tyr Gln Ala Gln
165 170 175
Glu Glu Gly Glu Ala Pro Pro Val Ser Gly Ala Ala Ser Phe Pro Pro
180 185 190
Pro Arg Pro Arg Pro Val Ala Gly Glu Gly Asp Gly Glu Arg Ser Arg
195 200 205
Val Thr Pro Val Ala Ser Ala Met Thr Val Glu Gly Gly Ser Arg Ala
210 215 220
Gly Phe Ala Met Leu Gly Ala Glu Val Arg Ser Arg Ala Pro Ser Leu
225 230 235 240
Gly Arg Ala Gly Lys Thr Arg Leu Arg Ile His Gln Pro Val Val Val
245 250 255
Leu Gln His Thr Tyr Tyr Val
260
<210> 93
<211> 280
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 93
Met Asp Leu Gln Gly Arg Gly Val Pro Ser Ile Asp Arg Leu Arg Val
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Phe His Thr Met Ala Gln Ile Met Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Ala Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly Arg Cys Gly His Ser Gln Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Ala Leu Lys Met Leu Phe Val Lys Glu Ser His Asn Met
115 120 125
Ser Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Arg Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Met Val Thr Leu Ala Ile Tyr
245 250 255
His Val His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 94
<211> 280
<212> PRT
<213> 黑猩猩（Pan troglodytes）
<400> 94
Met Asp Leu Arg Gly Arg Ala Val Pro Ser Ile Asp Arg Leu Arg Val
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Phe His Thr Met Ala Gln Ile Met Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Ala Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly Arg Cys Gly His Ser Glu Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Ala Leu Lys Met Leu Phe Val Lys Glu Ser His Asn Met
115 120 125
Ser Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Arg Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Leu Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Met Val Thr Leu Ala Ile Tyr
245 250 255
His Val His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 95
<211> 280
<212> PRT
<213> 猕猴（Macaca mulatta）
<400> 95
Met Asp Leu Gln Gly Arg Ala Val Pro Ser Val Asp Arg Leu Arg Val
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Phe His Thr Met Ala Gln Ile Met Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Ala Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly Arg Cys Gly His Ser Glu Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Ala Leu Lys Met Leu Phe Val Lys Glu Ser His Asn Thr
115 120 125
Ser Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Arg Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Met Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Val Thr Leu Thr Ile Tyr
245 250 255
His Val His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 96
<211> 280
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 96
Met Asp Leu Arg Gly Arg Ala Phe Pro Ser Val Tyr Arg Leu Arg Val
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Phe Tyr Thr Met Ala Arg Ile Thr Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly His Cys Gly His Asn Glu Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Ala Leu Lys Met Leu Phe Val Lys Glu Ser Arg Asn Ala
115 120 125
Ser Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Arg Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His Arg Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Ser Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Val Thr Leu Ala Ile Tyr
245 250 255
His Ile His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 97
<211> 280
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 97
Met Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Leu Gly Val Asp Gly Leu Arg Val
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Phe His Thr Val Thr Arg Ile Met Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly His Cys Gly His Asp Glu Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Ala Leu Lys Met Leu Phe Leu Lys Glu Ser His Asn Thr
115 120 125
Pro Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Lys Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Val Thr Leu Val Ile Tyr
245 250 255
His Ile His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 98
<211> 280
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 98
Met Asp Leu Arg Val Arg Thr Leu Leu Gly Gly Asp Arg Leu Arg Ile
1 5 10 15
Leu Leu Met Phe Phe His Val Met Val Gln Thr Val Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Glu Ile Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly His Cys Gly His Asn Glu Ser Glu Leu Glu Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
His Ala Tyr Thr Leu Arg Met Leu Phe Val Lys Glu Ser His Asn Thr
115 120 125
Ser Lys Gly Pro Glu Ala Thr Trp Asn Leu Asn Lys Val His Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Ala Pro Val Lys Val Asn
145 150 155 160
Lys Tyr Ile Ala Ser Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Met Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Gln Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Ile Thr Leu Val Ile Tyr
245 250 255
His Ile His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 99
<211> 280
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 99
Met Asp Leu Arg Gly Arg Ala Leu Leu Gly Gly Asp Arg Leu Arg Ile
1 5 10 15
Leu Leu Met Phe Phe His Ala Met Ala Gln Thr Val Ala Glu Gln Glu
20 25 30
Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser Thr Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe
35 40 45
Val Val Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala
50 55 60
Lys Phe Ile Val Pro Tyr Asp Val Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu
65 70 75 80
Ile Thr Glu Gln Ala Glu Ile Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Val Lys
85 90 95
Gly Arg Cys Gly His Asn Glu Ser Glu Leu Gln Val Phe Trp Val Asp
100 105 110
Arg Ala Tyr Thr Leu Lys Met Leu Phe Val Lys Glu Ser His Asn Thr
115 120 125
Ser Lys Gly Leu Glu Ala Thr Trp Lys Leu Ser Lys Val Gln Phe Val
130 135 140
Tyr Asp Ser Ser Glu Lys Thr His Phe Lys Asp Ala Val Ser Ala Gly
145 150 155 160
Lys His Thr Ala Asn Ser His His Leu Ser Ala Leu Val Thr Pro Ala
165 170 175
Gly Met Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser Leu Ala Ser
180 185 190
Ser Asp Pro Gln Lys Thr Val Thr Met Ile Leu Ser Ala Val His Ile
195 200 205
Gln Pro Phe Asp Ile Ile Ser Asp Phe Val Phe Ser Glu Glu His Lys
210 215 220
Cys Pro Val Asp Glu Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile
225 230 235 240
Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Ile Thr Leu Val Ile Tyr
245 250 255
His Ile His His Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp
260 265 270
Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
275 280
<210> 100
<211> 299
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 100
Met Ala Ala Gly Arg Leu Pro Gly Leu Leu Phe Leu Leu His Ala Ala
1 5 10 15
Ala Arg Leu Ala Ala Glu Gln Glu Val Glu Asn Leu Ser Gly Leu Ser
20 25 30
Pro Asn Pro Glu Lys Asp Ile Phe Val Val Arg Glu Asn Arg Thr Thr
35 40 45
Cys Leu Met Ala Glu Phe Ala Ala Lys Phe Val Val Pro Tyr Asp Val
50 55 60
Trp Ala Ser Asn Tyr Val Asp Leu Ile Thr Glu Gln Ala Asp Ile Pro
65 70 75 80
Leu Ser Arg Gly Ala Glu Met Lys Gly Lys Cys Gly Thr Asn Glu Ser
85 90 95
Glu Leu Glu Ile Ser Trp Leu Glu Arg Ala Tyr Thr Leu Lys Leu Phe
100 105 110
Phe Leu Lys Val Arg Gly Cys Pro Arg Arg Leu Gly Arg Gly Arg Cys
115 120 125
Ala Ala Ala Leu Arg Gly Pro Asp Gln Pro Cys Pro Pro Gln Glu Gly
130 135 140
His Asn Thr Ser Arg Gly Pro Glu Ala Phe Trp Arg Leu Ser Arg Ile
145 150 155 160
Gln Phe Ser Tyr Asp Thr Ser Glu Arg Thr Tyr Phe Lys Asp Ala Val
165 170 175
Ser Pro Gly Lys His Thr Ala Ser Ser His Arg Leu Ser Ala Leu Val
180 185 190
Thr Pro Ala Gly Lys Ser Tyr Glu Cys Gln Ala Gln Gln Thr Ile Ser
195 200 205
Leu Ile Ser Ser Asp His Gln Lys Ser Val Gln Leu Leu Leu Ser Glu
210 215 220
Val Arg Ile Gln Pro Phe Asp Ile Thr Ala Asp Phe Val Phe Ser Glu
225 230 235 240
Glu His Lys Cys Pro Val Asp Gln Arg Glu Gln Leu Glu Glu Thr Leu
245 250 255
Pro Leu Ile Leu Gly Leu Ile Leu Gly Leu Val Ile Val Ile Thr Leu
260 265 270
Cys Val Tyr His Ile His His Lys Leu Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile
275 280 285
Pro Arg Asp Arg Ser Gln Tyr Lys His Met Gly
290 295
<210> 101
<211> 276
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 101
Met Asp Tyr Arg Ala Cys Thr Ser Ala Leu Arg Met Pro Val Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Cys Thr Phe Ser Cys Asn Leu Ala Glu Gln Glu Val Glu
20 25 30
Asn Leu Ser Gly Leu Ser Ser Asn Pro Asp Lys Asn Ile Phe Ala Ile
35 40 45
Arg Glu Asn Gly Thr Thr Cys Leu Met Ala Glu Phe Ser Ala Arg Ile
50 55 60
Leu Val Pro Tyr Glu Val Pro Ser Ser Asn Glu Val Asp Trp Asp Leu
65 70 75 80
Glu Glu Ala Ser Ile Gln Leu Pro Arg Asp Thr Glu Ile Arg Gly Lys
85 90 95
Cys Trp Asn Asn Glu Ser Glu Leu His Leu Ser Trp Leu Asp Lys Ala
100 105 110
Tyr Thr Leu Lys Leu Phe Phe Ser Lys Glu Gly Gln Asp Ala Ser Lys
115 120 125
Ser Arg Ser Trp Lys Met Ser Lys Ile Gln Phe Leu Tyr Asp Pro Ser
130 135 140
Glu His Thr Ile Phe Lys Ser Gly Ala Arg Pro Gly Arg His Thr Ala
145 150 155 160
Asn Ser His His Leu Ser Leu Met Val Thr Pro Ala Gly Met Ser Tyr
165 170 175
Glu Cys Glu Ala Thr Gln Arg Ile Ser Leu Thr Ser Thr Asp His Gln
180 185 190
Lys Ile Val Val Leu Tyr Leu Ser Glu Val His Leu Gln Pro Phe Asp
195 200 205
Ile Lys Ser Asp Phe Val Tyr Ser Glu Glu Tyr Lys Cys Pro Thr Asp
210 215 220
Gln Arg Lys Gln Leu Glu Glu Thr Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Thr
225 230 235 240
Leu Gly Val Ala Ile Leu Ile Ile Val Ala Val Tyr His Ile His His
245 250 255
Lys Met Thr Ala Asn Gln Val Gln Ile Pro Arg Asp Arg Ser Leu Tyr
260 265 270
Lys His Met Gly
275
<210> 102
<211> 338
<212> PRT
<213> 褐家鼠（Rattus norvegicus）
<400> 102
Met Val Gly Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ala Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Leu Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Phe Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 103
<211> 338
<212> PRT
<213> 家马（Equus caballus）
<400> 103
Met Val Gly Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Thr Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Asn Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 104
<211> 338
<212> PRT
<213> 野猪（Sus scrofa）
<400> 104
Met Val Ala Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Leu Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Lys Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Asn Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 105
<211> 338
<212> PRT
<213> 家牛（Bos taurus）
<400> 105
Met Val Ala Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Lys Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Asn Leu Gly Met Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 106
<211> 417
<212> PRT
<213> 冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）
<220>
<223> str. PEST
<400> 106
Met Ser Phe Ala Gly Glu Ala Ala Ser Gln Ile Leu Asn Lys Ala Glu
1 5 10 15
Pro Leu Phe Ile Ser Arg Ser Glu Ala Phe Lys Phe Ala Val Gly Asp
20 25 30
Thr Ile Thr Leu Pro Cys Glu Val Ala Ser Pro Gly Thr Tyr Val Leu
35 40 45
Ala Trp Lys Arg Gly Ile Ala Ile Leu Thr Ala Gly Ser Val Lys Val
50 55 60
Thr Pro Asp Pro Arg Val Arg Leu Val Asn Gly Tyr Ser Leu Gln Ile
65 70 75 80
Arg Asp Ala Val Pro Gln Asp Ala Gly Asp Tyr Ile Cys Gln Ile Ala
85 90 95
Met Leu Asp Pro Arg Glu Ile Thr His Ser Val Glu Ile Leu Val Pro
100 105 110
Pro Lys Ile Thr His Val Thr Ser Gly Gly His Leu Gln Val Arg Lys
115 120 125
Gly Ser Pro Val Arg Leu Glu Cys Ser Ala Thr Gly Asn Pro Met Pro
130 135 140
Asn Ile Thr Trp Thr Arg Lys Asn Asn Leu Leu Pro Asn Gly Glu Glu
145 150 155 160
Gln Phe Thr Asn Pro Val Tyr Val Ile Glu Asn Met Asp Arg His Lys
165 170 175
Gly Gly Thr Tyr Ile Cys Thr Ala Asn Asn Gly Val Gly Gln Val Ala
180 185 190
Thr Ser Gln Ile Ile Leu His Val Leu Tyr Pro Pro Glu Ile Ser Val
195 200 205
Glu Asn Pro Thr Val Tyr Ser Gly Glu Gly Gln Glu Ala Met Leu Val
210 215 220
Cys Ile Val His Gly Glu Ser Gln Pro Glu Val Leu Trp His Lys Asp
225 230 235 240
Thr Met Gln Ile Asp Gln Thr Glu Arg His Val Ile Glu Asn Arg Gly
245 250 255
Ala Arg His Thr Leu Ile Ile Arg Lys Val His Pro Gln Asp Phe Gly
260 265 270
Asn Tyr Ser Cys Ile Ala Asp Asn Gln Leu Gly Lys Thr Arg Lys Thr
275 280 285
Val Thr Leu Thr Gly Lys Pro Lys Thr Ala Val Phe Arg Ser Val Pro
290 295 300
Asn Ser Gln Trp Lys Asp Lys Tyr Asn Ile Ser Trp Ile Val Asp Ser
305 310 315 320
His Ser Pro Ile Glu Glu Phe Lys Leu Tyr Tyr Arg Gln Met Thr Phe
325 330 335
Ser Ile Gly Gln Leu Gln Pro Leu Gln Thr Asp Trp Arg Asp Ile Val
340 345 350
Leu Pro Ala Phe Pro Tyr Ser His His Tyr Thr Gln Gly Met Ser Tyr
355 360 365
Leu Ile Arg Gly Leu Glu Pro Asp Gln Gln Tyr Glu Ala Arg Val Gln
370 375 380
Ser Arg Asn Arg Tyr Gly Trp Ser Asp Phe Ser Glu Ser Phe Leu Phe
385 390 395 400
Thr Thr Ser Asn Thr Gly Lys Trp Met Gly Gln Cys Cys Thr Asn Pro
405 410 415
Gly
<210> 107
<211> 334
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 107
Met Arg Pro Cys Leu Leu His Ser Ile Trp Met Leu Gly Phe Val Leu
1 5 10 15
Cys Leu Leu Ser Leu Gln Gly Leu Pro Val Arg Ser Gly Asp Phe Asn
20 25 30
Arg Ser Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr Ala Ile Leu
35 40 45
Arg Cys Phe Val Glu Asp Arg Ser Ser Arg Val Ala Trp Leu Asn Arg
50 55 60
Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly Asp Asp Lys Trp Ser Leu Asp Pro Arg
65 70 75 80
Val Glu Leu Glu Lys Arg Ser Leu Leu Glu Tyr Ser Leu Arg Ile Gln
85 90 95
Lys Val Asp Val Ser Asp Glu Gly Pro Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr
100 105 110
Lys Gln His Thr Lys Thr Thr Gln Val Tyr Leu Ile Val Gln Val Pro
115 120 125
Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ala Asp Ile Thr Val Asn Glu Gly Ser
130 135 140
Asn Val Thr Leu Met Cys Ile Ala Tyr Gly Arg Pro Glu Pro Met Ile
145 150 155 160
Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Ala Arg Asp Phe Glu Gly Glu Glu
165 170 175
Glu Phe Leu Glu Ile Gln Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser Gly Arg Tyr
180 185 190
Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ala Ser Ala Asp Val Lys Gln Val
195 200 205
Arg Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Ile Ile Thr Glu Ser Lys Ser Asn
210 215 220
Glu Ala Thr Thr Gly Lys Gln Ala Ile Leu Arg Cys Glu Ala Ser Ala
225 230 235 240
Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Lys Asp Asp Thr Arg Ile Asn
245 250 255
Ser Ala Gln Gly Leu Glu Ile Arg Asn Thr Gly Ser Arg Ser Val Leu
260 265 270
Met Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val
275 280 285
Ala Ala Asn Lys Leu Gly Ile Thr Asn Thr Ser Leu Tyr Leu Tyr Ile
290 295 300
Gly Pro Gly Thr Pro Ile Asp Ser Ala Thr Ser Leu Ala Ala Ser Leu
305 310 315 320
Trp Leu Met Ala Asn Leu Leu Phe Cys Leu Phe Cys Thr Cys
325 330
<210> 108
<211> 338
<212> PRT
<213> 家犬（Canis lupus familiaris）
<400> 108
Met Leu Gly Ala Arg Arg Pro Pro Arg Ser Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Arg Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Lys Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Asn Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 109
<211> 338
<212> PRT
<213> 短尾负鼠（Monodelphis domestica）
<400> 109
Met Val Gly Arg Val His Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Gly Val
20 25 30
Asp Phe Thr Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Tyr Val Glu Asp Lys Ser Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg Thr Ala Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His Gln Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Ile Glu Gly Gln
260 265 270
Ser Leu Leu Met Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Ile
290 295 300
Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Phe Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 110
<211> 338
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 110
Met Val Ala Arg Ala Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Phe Thr Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Leu Arg Cys Phe Val Glu Asp Arg Ser Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly Glu Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg Ser Pro Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Val Gln Thr Gln His His Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Ile Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Lys Glu Phe Glu
165 170 175
Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser
180 185 190
Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ala Ser Ala Asp Val
195 200 205
Lys Gln Val Arg Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser
210 215 220
Lys Ser Asn Glu Ala Ala Thr Gly Arg Gln Ala Leu Leu Arg Cys Glu
225 230 235 240
Ala Ser Ala Val Pro Thr Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr
245 250 255
Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Gly Ser Gln
260 265 270
Ser Leu Leu Met Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr
275 280 285
Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Tyr
290 295 300
Leu Tyr Arg Pro Gly Thr Gly Arg Val Asp Asn Gly Ser Val Ser Leu
305 310 315 320
Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser
325 330 335
Lys Cys
<210> 111
<211> 335
<212> PRT
<213> 斑胸草雀（Taeniopygia guttata）
<400> 111
Met Arg Thr Tyr Trp Leu His Ser Ile Trp Val Leu Gly Phe Phe Leu
1 5 10 15
Ser Leu Phe Ser Leu Gln Gly Leu Pro Val Arg Ser Val Asp Phe Thr
20 25 30
Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr Ala Ile Leu
35 40 45
Arg Cys Tyr Val Glu Asp Arg Ser Ser Lys Val Ala Trp Leu Asn Arg
50 55 60
Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly Glu Asp Lys Trp Ser Leu Asp Pro Arg
65 70 75 80
Val Glu Leu Glu Lys Arg Asn Pro Leu Glu Tyr Ser Leu Arg Ile Gln
85 90 95
Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr
100 105 110
Gln His His Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val Gln Val Pro
115 120 125
Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Ile Thr Val Asn Glu Gly Ser
130 135 140
Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu Pro Val Ile
145 150 155 160
Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Lys Glu Phe Glu Gly Glu Glu
165 170 175
Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser Gly Lys Tyr
180 185 190
Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ala Ser Ala Asp Val Lys Gln Val
195 200 205
Arg Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser Lys Ser Asn
210 215 220
Glu Ala Ala Thr Gly Arg Gln Ala Leu Leu Arg Cys Glu Ala Ser Ala
225 230 235 240
Val Pro Thr Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr Arg Ile Asn
245 250 255
Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Gly Ser Gln Ser Leu Leu
260 265 270
Met Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val
275 280 285
Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Tyr Leu Tyr Arg
290 295 300
Pro Gly Thr Gly Arg Val Asp Asn Gly Ser Met Ser Leu Ala Val Pro
305 310 315 320
Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser Lys Cys
325 330 335
<210> 112
<211> 334
<212> PRT
<213> 热带爪蟾（Xenopus tropicalis）
<400> 112
Met Arg Pro Cys Leu Leu His Ser Ile Trp Met Leu Gly Phe Val Leu
1 5 10 15
Cys Leu Leu Ser Leu Gln Gly Leu Pro Val Arg Ser Gly Asp Phe Asn
20 25 30
Arg Ser Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr Ala Ile Leu
35 40 45
Arg Cys Phe Val Glu Asp Arg Ser Ser Arg Val Ala Trp Leu Asn Arg
50 55 60
Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly Asp Asp Lys Trp Ser Leu Asp Pro Arg
65 70 75 80
Val Glu Leu Glu Lys Arg Ser Leu Leu Glu Tyr Ser Leu Arg Ile Gln
85 90 95
Lys Val Asp Val Ser Asp Glu Gly Pro Tyr Thr Cys Ser Val Gln Thr
100 105 110
Lys Gln His Thr Lys Thr Thr Gln Val Tyr Leu Ile Val Gln Val Pro
115 120 125
Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ala Asp Ile Thr Val Asn Glu Gly Ser
130 135 140
Asn Val Thr Leu Met Cys Ile Ala Tyr Gly Arg Pro Glu Pro Met Ile
145 150 155 160
Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Ala Arg Asp Phe Glu Gly Glu Glu
165 170 175
Glu Phe Leu Glu Ile Gln Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser Gly Arg Tyr
180 185 190
Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ala Ser Ala Asp Val Lys Gln Val
195 200 205
Arg Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Ile Ile Thr Glu Ser Lys Ser Asn
210 215 220
Glu Ala Thr Thr Gly Lys Gln Ala Ile Leu Arg Cys Glu Ala Ser Ala
225 230 235 240
Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Lys Asp Asp Thr Arg Ile Asn
245 250 255
Ser Ala Gln Gly Leu Glu Ile Arg Asn Thr Gly Ser Arg Ser Val Leu
260 265 270
Met Val Ala Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr Thr Cys Val
275 280 285
Ala Ala Asn Lys Leu Gly Ile Thr Asn Thr Ser Leu Tyr Leu Tyr Ile
290 295 300
Gly Pro Gly Thr Pro Ile Asp Ser Ala Thr Ser Leu Ala Ala Ser Leu
305 310 315 320
Trp Leu Met Ala Asn Leu Leu Phe Cys Leu Phe Cys Thr Cys
325 330
<210> 113
<211> 337
<212> PRT
<213> 罗非鱼（Oreochromis niloticus）
<400> 113
Met Gln Val Gly Arg Lys Ser Cys Trp Arg Gln Leu Gln Ala Ser Phe
1 5 10 15
Phe Arg Leu Leu Cys Leu Ile Pro Thr Gly Phe Pro Val Arg Ser Val
20 25 30
Asp Met Gln Arg Ala Thr Asp Asn Ile Thr Ile Arg Gln Gly Asp Thr
35 40 45
Ala Ile Ile Arg Cys Tyr Val Asp Asp Lys Val Ser Lys Val Ala Trp
50 55 60
Leu Asn Arg Ser Asn Ile Ile Phe Ala Gly Gln Asp Lys Trp Ser Leu
65 70 75 80
Asp Pro Arg Val Asp Leu Val Thr Lys Gly Gln Leu Glu Tyr Ser Leu
85 90 95
Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser
100 105 110
Ile Gln Thr Lys Gln Gln Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val
115 120 125
Gln Val Pro Ala Ser Ile Tyr Gln Val Ser Asn Asp Ile Thr Val Asn
130 135 140
Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Ser Cys Leu Ala Asn Gly Arg Pro Asp
145 150 155 160
Pro Ala Ile Thr Trp Arg Leu Leu Asn Pro Ser Ala Glu Pro Leu Asp
165 170 175
Gly Glu Glu Tyr Leu Asp Ile Ile Gly Ile Met Arg Thr Gln Ala Gly
180 185 190
Arg Tyr Glu Cys Lys Ala Ser Asn Asp Val Ala Thr Pro Asp Val Lys
195 200 205
Tyr Val Asn Val Ile Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Lys Lys Thr Gln
210 215 220
Ser Ser Glu Thr Pro Val Gly Arg Asn Gly Thr Leu Arg Cys Glu Val
225 230 235 240
Thr Ala Val Pro Thr Pro Glu Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Lys Arg
245 250 255
Leu Ala Asn Thr Gln Ser Ile Thr Ile Gln Thr Ser Gly Thr Thr Thr
260 265 270
Ser Leu Thr Ile Ala Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gly Asn Tyr Thr
275 280 285
Cys Val Ala Ser Asn Arg Leu Gly Val Gln Asn Ala Ser Leu Phe Leu
290 295 300
Tyr Arg Pro Gly Thr Gly Arg Asp Ile Asn Gly Ser Ala Cys Val Ser
305 310 315 320
Gln Ser Leu Trp Leu Leu Leu Ala Ser Phe Ala Cys Leu Phe Leu Lys
325 330 335
Cys
<210> 114
<211> 164
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 114
Leu Pro Ser Cys Lys Glu Asp Glu Tyr Pro Val Gly Ser Glu Cys Cys
1 5 10 15
Pro Lys Cys Ser Pro Gly Tyr Arg Val Lys Glu Ala Cys Gly Glu Leu
20 25 30
Thr Gly Thr Val Cys Glu Pro Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Ile Ala His
35 40 45
Leu Asn Gly Leu Ser Lys Cys Leu Gln Cys Gln Met Cys Asp Pro Ala
50 55 60
Met Gly Leu Arg Ala Ser Arg Asn Cys Ser Arg Thr Glu Asn Ala Val
65 70 75 80
Cys Gly Cys Ser Pro Gly His Phe Cys Ile Val Gln Asp Gly Asp His
85 90 95
Cys Ala Ala Cys Arg Ala Tyr Ala Thr Ser Ser Pro Gly Gln Arg Val
100 105 110
Gln Lys Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Thr Leu Cys Gln Asn Cys Pro
115 120 125
Pro Gly Thr Phe Ser Pro Asn Gly Thr Leu Glu Glu Cys Gln His Gln
130 135 140
Thr Lys Cys Ser Trp Leu Val Thr Lys Ala Gly Ala Gly Thr Ser Ser
145 150 155 160
Ser His Trp Val
<210> 115
<211> 562
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 115
Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met Val
20 25 30
Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala
35 40 45
Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu
50 55 60
Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly
65 70 75 80
Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly
85 90 95
His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val
100 105 110
Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro
115 120 125
Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile
130 135 140
Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val
145 150 155 160
His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala
165 170 175
Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln
180 185 190
Asp Arg Pro Ser Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ser Pro Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Val Pro Lys Ser Pro Ser Val Asp Lys Tyr Asn Val Ser
210 215 220
Gly Thr Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn
225 230 235 240
Leu Thr Tyr Glu Arg Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Leu Leu Asn
245 250 255
Ile Asn Pro Asn Lys Thr Ser Ala Ser Gly Ser Cys Gly Ala His Leu
260 265 270
Val Thr Leu Glu Leu His Ser Glu Gly Thr Thr Val Leu Leu Phe Gln
275 280 285
Phe Gly Met Asn Ala Ser Ser Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile Gln
290 295 300
Leu Asn Thr Ile Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ala Phe Lys Ala Ala
305 310 315 320
Asn Gly Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys
325 330 335
Cys Asn Ala Glu Glu His Val Arg Val Thr Lys Ala Phe Ser Val Asn
340 345 350
Ile Phe Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Lys Val Glu Gly Gly Gln Phe
355 360 365
Gly Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu Asn Ser Leu Glu Met Gly
370 375 380
Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp His Arg
385 390 395 400
Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala Cys Thr
405 410 415
Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr Glu Asn
420 425 430
Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu Glu Gly
435 440 445
Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His Ser Ser
450 455 460
Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu Thr Leu
465 470 475 480
Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys Ile Ala
485 490 495
Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala Lys Lys
500 505 510
Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp Glu Phe Thr Leu
515 520 525
Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val
530 535 540
Leu Ile Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln
545 550 555 560
Thr Ile
<210> 116
<211> 558
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 116
Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Met Gly Ala Pro Thr
20 25 30
Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp His Arg Ile Ser Thr
35 40 45
Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala Cys Thr Pro Glu Arg
50 55 60
Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp
65 70 75 80
Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu Glu Gly Trp Glu Pro
85 90 95
Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His Ser Ser Gly Cys Ala
100 105 110
Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe
115 120 125
Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys Ile Ala Lys Glu Thr
130 135 140
Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala Lys Lys Val Arg Arg
145 150 155 160
Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp Ala Met Phe Met Val Lys Asn
165 170 175
Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala Phe Ser
180 185 190
Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu Asp Leu
195 200 205
Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly Lys Glu
210 215 220
Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly His Thr
225 230 235 240
Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val Gln Leu
245 250 255
Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro Asn Ala
260 265 270
Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile Arg Ala
275 280 285
Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val His Met
290 295 300
Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu
305 310 315 320
Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln Asp Arg
325 330 335
Pro Ser Pro Thr Thr Ala Pro Pro Ala Pro Pro Ser Pro Ser Pro Ser
340 345 350
Pro Val Pro Lys Ser Pro Ser Val Asp Lys Tyr Asn Val Ser Gly Thr
355 360 365
Asn Gly Thr Cys Leu Leu Ala Ser Met Gly Leu Gln Leu Asn Leu Thr
370 375 380
Tyr Glu Arg Lys Asp Asn Thr Thr Val Thr Arg Leu Leu Asn Ile Asn
385 390 395 400
Pro Asn Lys Thr Ser Ala Ser Gly Ser Cys Gly Ala His Leu Val Thr
405 410 415
Leu Glu Leu His Ser Glu Gly Thr Thr Val Leu Leu Phe Gln Phe Gly
420 425 430
Met Asn Ala Ser Ser Ser Arg Phe Phe Leu Gln Gly Ile Gln Leu Asn
435 440 445
Thr Ile Leu Pro Asp Ala Arg Asp Pro Ala Phe Lys Ala Ala Asn Gly
450 455 460
Ser Leu Arg Ala Leu Gln Ala Thr Val Gly Asn Ser Tyr Lys Cys Asn
465 470 475 480
Ala Glu Glu His Val Arg Val Thr Lys Ala Phe Ser Val Asn Ile Phe
485 490 495
Lys Val Trp Val Gln Ala Phe Lys Val Glu Gly Gly Gln Phe Gly Ser
500 505 510
Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu Asn Ser Met Leu Ile Pro Ile Ala
515 520 525
Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr
530 535 540
Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
545 550 555
<210> 117
<211> 370
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 117
Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Met Gly Ala Pro Thr
20 25 30
Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp His Arg Ile Ser Thr
35 40 45
Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala Cys Thr Pro Glu Arg
50 55 60
Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp
65 70 75 80
Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu Glu Gly Trp Glu Pro
85 90 95
Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His Ser Ser Gly Cys Ala
100 105 110
Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe
115 120 125
Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys Ile Ala Lys Glu Thr
130 135 140
Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala Lys Lys Val Arg Arg
145 150 155 160
Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp Ala Met Phe Met Val Lys Asn
165 170 175
Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala Phe Ser
180 185 190
Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu Asp Leu
195 200 205
Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly Lys Glu
210 215 220
Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly His Thr
225 230 235 240
Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val Gln Leu
245 250 255
Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro Asn Ala
260 265 270
Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile Arg Ala
275 280 285
Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val His Met
290 295 300
Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala Tyr Leu
305 310 315 320
Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln Asp Leu
325 330 335
Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val
340 345 350
Leu Ile Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln
355 360 365
Thr Ile
370
<210> 118
<211> 375
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 118
Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met Val
20 25 30
Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala
35 40 45
Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu
50 55 60
Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly
65 70 75 80
Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly
85 90 95
His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val
100 105 110
Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro
115 120 125
Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile
130 135 140
Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val
145 150 155 160
His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala
165 170 175
Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln
180 185 190
Asp Leu Glu Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe
195 200 205
Leu Lys Asp His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu
210 215 220
Gly Cys Ala Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His
225 230 235 240
Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe
245 250 255
Lys Glu Leu Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His
260 265 270
Lys Lys His Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe
275 280 285
Glu Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala
290 295 300
Lys Asn Lys Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu
305 310 315 320
Glu Thr Ala Lys Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met
325 330 335
Asp Glu Phe Thr Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly
340 345 350
Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser
355 360 365
His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
370 375
<210> 119
<211> 527
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 119
Met Ala Pro Arg Ser Ala Arg Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Met His Cys Ala Ser Ala Ala Met Phe Met Val
20 25 30
Lys Asn Gly Asn Gly Thr Ala Cys Ile Met Ala Asn Phe Ser Ala Ala
35 40 45
Phe Ser Val Asn Tyr Asp Thr Lys Ser Gly Pro Lys Asn Met Thr Leu
50 55 60
Asp Leu Pro Ser Asp Ala Thr Val Val Leu Asn Arg Ser Ser Cys Gly
65 70 75 80
Lys Glu Asn Thr Ser Asp Pro Ser Leu Val Ile Ala Phe Gly Arg Gly
85 90 95
His Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Arg Asn Ala Thr Arg Tyr Ser Val
100 105 110
Gln Leu Met Ser Phe Val Tyr Asn Leu Ser Asp Thr His Leu Phe Pro
115 120 125
Asn Ala Ser Ser Lys Glu Ile Lys Thr Val Glu Ser Ile Thr Asp Ile
130 135 140
Arg Ala Asp Ile Asp Lys Lys Tyr Arg Cys Val Ser Gly Thr Gln Val
145 150 155 160
His Met Asn Asn Val Thr Val Thr Leu His Asp Ala Thr Ile Gln Ala
165 170 175
Tyr Leu Ser Asn Ser Ser Phe Ser Arg Gly Glu Thr Arg Cys Glu Gln
180 185 190
Asp Leu Glu Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe
195 200 205
Leu Lys Asp His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu
210 215 220
Gly Cys Ala Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His
225 230 235 240
Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe
245 250 255
Lys Glu Leu Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His
260 265 270
Lys Lys His Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe
275 280 285
Glu Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala
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Lys Asn Lys Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu
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325 330 335
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435 440 445
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450 455 460
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Ser Val Glu Glu Cys Leu Leu Asp Glu Asn Ser Met Leu Ile Pro Ile
485 490 495
Ala Val Gly Gly Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala
500 505 510
Tyr Leu Val Gly Arg Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile
515 520 525

Claims (23)

1.一种改良LAMP构建物，其包含：
a.LAMP蛋白的半胱氨酸保守片段；和
b.抗原性结构域。
2.权利要求1的改良LAMP构建物，其中：
a.所述抗原性结构域被放置在所述半胱氨酸保守片段的N-端处；
b.所述抗原性结构域被放置在单个半胱氨酸保守片段的C-端处；或
c.所述抗原性结构域被放置在两个半胱氨酸保守片段之间。
3.权利要求1或权利要求2的改良LAMP构建物，其中所述改良LAMP构建物包含图1中示出的ILC-1、ILC-2、ILC-3、ILC-4、ILC-5或ILC-6的结构。
4.权利要求3的改良LAMP构建物，其中每个抗原被连接物隔开。
5.权利要求4的LAMP构建物，其中所述连接物选自氨基酸序列GPGPG或PMGLP。
6.前述权利要求任一项的改良LAMP构建物，其中所述改良LAMP构建物包含超过一个半胱氨酸保守片段。
7.权利要求1-6任一项的改良LAMP构建物，其中所述半胱氨酸保守片段包含LAMP蛋白的同源结构域。
8.权利要求1-7任一项的改良LAMP构建物，其中所述改良LAMP构建物还包含LAMP蛋白的跨膜结构域。
9.权利要求1-8任一项的改良LAMP构建物，其中所述改良LAMP构建物还包含信号序列。
10.权利要求9的改良LAMP构建物，其中所述信号序列源自于LAMP蛋白。
11.权利要求1-10任一项的改良LAMP构建物，其中所述LAMP蛋白选自LAMP-1、LAMP2、LAMP-3、LIMP 2、Macrosailin、Endolyn、LAMP5或LIMBIC。
12.权利要求11的改良LAMP构建物，其中所述LAMP蛋白选自SEQ ID NO：1-113中的任一者。
13.权利要求12的改良LAMP构建物，其中所述LAMP蛋白与SEQ ID NO：1-113具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、96％、97％、98％或99％同一性。
14.一种多核苷酸，其编码权利要求1-13任一项的改良LAMP构建物。
15.一种宿主细胞，其包含权利要求14的多核苷酸。
16.一种组合物，其包含权利要求1-13任一项的改良LAMP构建物、权利要求14的多核苷酸或权利要求15的宿主细胞。
17.一种治疗患有疾病或障碍的对象的方法，其中所述方法包括以足以减轻或治疗所述疾病或障碍的量向需要的对象施用权利要求1-13任一项的改良LAMP构建物、权利要求14的多核苷酸、权利要求15的宿主细胞或权利要求16的组合物。
18.权利要求17的方法，其中所述方法包括初免步骤和至少一个加强步骤。
19.权利要求18的方法，其中所述改良LAMP构建物被用于所述初免步骤中。
20.权利要求18或19的方法，其中所述加强步骤包括施用抗原、改良LAMP构建物、由改良LAMP构建物编码的多肽或包含所述改良LAMP构建物的细胞。
21.权利要求17-20任一项的方法，其中用于初免的抗原与用于加强的抗原相同。
22.权利要求17-21任一项的方法，其中用于初免的抗原与用于加强的第二抗原源自于同一蛋白。
23.权利要求17-22任一项的方法，其中超过一种抗原被用于初免和/或加强。
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