CN119925325A - N1,n5,n10-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及N¹,N⁵,N¹⁰‑三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用。本发明首次公开了N¹,N⁵,N¹⁰‑三对香豆酰基亚精胺(化学名称为N¹,N⁵,N¹⁰‑tri‑p‑coumaroylspermidine，分子式为C₃₄H₃₇N₃O₆，分子量为583.7，以下简称3NS)在制备预防和治疗肝纤维化以及肝损伤药物中的应用。3NS表现出低毒性，并能显著抑制TGF‑β1诱导的肝星状细胞LX‑2细胞中纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF的异常升高，同时提高对乙酰氨基酚诱导损伤的AML‑12肝细胞的存活率，且这种提高呈现浓度依赖性，具有很好的预防和治疗肝纤维化和肝损伤的作用，并具有一定的促肝细胞增生作用。3NS不仅具有良好的预防和治疗肝纤维化的效果，还具有促进肝细胞增生、保护肝脏免受化学物质引起的肝损伤的作用，因而适用于肝纤维化以及化学物质或药物引起的肝损伤等肝脏相关疾病的药物制备。

Description

N1,N5,N10-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用。

背景技术

肝脏是人体最大的实质性器官，承担着代谢、免疫调节和解毒等关键功能。病毒性肝炎、酒精及药物中毒性肝病、全身疾病的肝脏损害及随之而来的肝纤维化、肝硬化、肝功能衰竭等，已成为严重危害人类健康的常见病。肝纤维化是各种致病因子长期反复刺激肝脏，导致细胞外基质过度或异常沉积的一种慢性肝损伤的修复反应。肝纤维化以肝细胞损伤，通过旁分泌作用激活肝星状细胞，使其合成和分泌大量的I型胶原蛋白、纤维连接蛋白等多种成分并使细胞外基质(ECM)在肝脏中大量堆积为主要特征，抑制肝星状细胞合成和分泌I型胶原蛋白、纤维连接蛋白等纤维化标志物，是实现阻止甚至逆转肝纤维化的有效手段。化学性肝损伤是指由各类化学物质(包括药物)及其代谢产物所诱导的肝损伤，是急性肝损伤的主要原因之一。目前发现全球已知1100多种上市药物具有潜在的肝毒性。在中国最常见的肝损害药物主要是解热镇痛药对乙酰氨基酚(APAP)、抗结核药(异烟肼、利福平)等。

目前，临床上对于化学性肝损伤缺乏特异性的治疗手段，治疗原则是保护肝功能，预防仍是重点。因此，寻找有效的药物预防和治疗肝纤维化和肝损伤对肝脏疾病发展迫在眉睫。在肝脏受损后，比如在肝脏部分切除或肝细胞大量死亡(如在药物诱导的肝损伤或病毒感染等情况)后，剩余的肝细胞会通过增殖来补充损失的细胞并恢复肝脏功能，因此肝细胞的增生有助于肝脏进行自我修复和再生。此外，肝细胞的增生能力对于肝脏移植手术的成功也至关重要，因为移植后的肝细胞需要能够快速增殖以适应受体的生理需求。因此，肝细胞的增生在肝脏健康和疾病治疗中扮演着重要角色。

发明内容

本发明为解决上述问题，提供了N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用。

具体是通过以下技术方案来实现的：

N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用。

进一步的，所述N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺，化学名称为N¹,N⁵,N¹⁰-tri-p-coumaroylspermidine，分子式为C₃₄H₃₇N₃O₆，分子量为583.7，以下简称3NS，其具体结构式如下：

进一步的，所述肝脏药物，是预防和治疗肝纤维化的药物。

进一步的，所述肝脏药物，是预防和治疗肝损伤的药物。

一种肝脏药物，含有N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺。

进一步的，所述的治疗肝损伤的药物包括口服制剂或注射制剂。

进一步的，所述口服制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂、缓释剂中的任意一种。

N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺可以通过抑制肝星状细胞中纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF的基因表达来实现抑制肝纤维化的作用；还对由化学物质(包括药物)引起的肝损伤具有保护作用。

综上所述，本发明的有益效果在于：本发明首次公开了N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺(化学名称为N¹,N⁵,N¹⁰-tri-p-coumaroylspermidine，分子式为C₃₄H₃₇N₃O₆，分子量为583.7)在制备预防和治疗肝纤维化以及肝损伤药物中的应用。3NS表现出低毒性，并能显著抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞LX-2细胞中纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF的异常升高，同时提高对乙酰氨基酚诱导损伤的AML-12肝细胞的存活率，且这种提高呈现浓度依赖性，具有很好的预防和治疗肝纤维化和肝损伤的作用，并具有一定的促肝细胞增生作用。3NS不仅具有良好的预防和治疗肝纤维化的效果，还具有促进肝细胞增生、保护肝脏免受化学物质引起的肝损伤的作用，因而适用于肝纤维化以及化学物质或药物引起的肝损伤等肝脏相关疾病的药物制备。

附图说明

图1是3NS的化学结构。

图2是3NS在100μM下对LX-2肝星状细胞中纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF基因表达水平影响结果图。数据以表示(n＝3)。与对照组比，^##P<0.01,^###P<0.001；与模型组比，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

图3是不同浓度3NS对正常AML-12肝细胞存活率的影响结果图。数据以表示(n＝3)。与对照组(CON)比，^#P<0.05,^##P<0.01,^###P<0.001。

图4是不同浓度3NS对对乙酰氨基酚诱导损伤的AML-12肝细胞存活率的影响结果图。数据以表示(n＝3)。与对照组比，^###P<0.001；与模型组比，**P<0.01。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1展示了3NS显著降低人肝星状细胞LX-2中肝纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF的基因表达。

实验方法：实时荧光定量PCR法检测3NS对TGF-β1诱导的LX-2增殖模型中肝纤维化标志物mRNA表达量的影响

使用含有10％胎牛血清以及100kU/L青霉素和100mg/L链霉素的高糖培养基DMEM于37℃、5％CO₂培养箱中培养LX-2细胞。用培养基(1％FBS+1％双抗)调整细胞密度到17×10⁴个/mL，接入6孔板，将细胞分为对照组(CON)、模型组(TGF-β1，5ng/mL)、给药组(3NS，100μM)。每组3个复孔，每孔2000μL细胞悬液，37℃，5％CO₂饱和湿度条件下培养24h后，给药组加入相应浓度的药物无血清培养6h后，除对照组外，其余组每孔加入含TGF-β1(5ng/mL)的培养基共孵育24h。使用Trizol法提取细胞总RNA，使用核酸定量仪检测RNA浓度及纯度，立即逆转录成cDNA，逆转录反应体系与条件见表1和表2，引物序列见表3。实时荧光定量PCR反应体系总体积为20μL包含试剂及使用量见表4，实时荧光定量PCR扩增反应条件：UDG反应2min，循环1次；95℃预变性3min，循环1次；循环反应95℃ 5s，60℃ 30-34s，循环40次；熔解曲线条件为：仪器默认设置。进行扩增，并计算2^-ΔΔCT值。

表1逆转录反应体系

表2逆转录反应条件

表3引物序列

表4实时荧光定量PCR反应体系

实验结果

如图2所示，结果表明，100μM的3NS能够显著降低TGF-β1诱导产生的细胞纤维化标志物COL1A1、COL1A2、FN1和CTGF含量的异常升高。表明3NS具有较好的抗肝纤维化作用，在制备预防和治疗肝纤维化药物方面具有很好的应用前景。

实施例2展示了3NS对正常肝细胞AML-12的安全性和促进肝细胞增生作用

实验方法：CCK-8法检测细胞细胞存活率。

使用含有10％胎牛血清,100kU/L青霉素和100mg/L链霉素,1％胰岛素转铁蛋白硒(ITS)，40ng/mL地塞米松(DXMS)的高糖培养基DMEM于37℃、5％CO₂培养箱中培养AML-12细胞。取对数生长期的AML-12细胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，用培养基(10％FBS+1％双抗+1％ITS+40ng/mL DXMS)调整细胞密度到3×10⁴个/mL，接入96孔板，将细胞分为对照组(CON)、给药组(6.25，12.5，25,50,100μM)。每组3个复孔，每孔100μL细胞悬液，并设置没有细胞，只有培养基的空白组。37℃，5％CO₂饱和湿度条件下培养24h后，加入相应浓度的药物共孵育24h。随后，每孔加入10μL CCK-8，并在同等培养条件继续培养1h。酶标仪测定各孔450nm处的吸光度(A)，按下式计算细胞存活率：

实验结果

如图3所示，结果表明，在6.25～100μM浓度下3NS对正常的AML-12肝细胞没有毒性，且在25μM以上能显著促进肝细胞的增生。表明3NS具有较好的安全性，并能有效促进肝细胞增生，在制备肝损伤治疗药物方面具有很好的应用前景。

实施例3展示了3NS保护正常肝细胞免受对乙酰氨基酚引起的损伤。

实验方法：CCK-8法检测细胞存活率。

培养条件同实验2，将细胞分为对照组(CON)、APAP(10mM)组、给药组(6.25，12.5，25μM)组。每组3个复孔，并设置没有细胞，只有培养基的空白组。37℃，5％CO₂饱和湿度条件下培养24h后，除对照组外，其余组每孔加入终浓度为10mM的APAP无血清培养液孵育24h，给药组同时加入相应浓度的药物共孵育。随后，每孔加入10μL CCK-8，并在同等培养条件继续培养1h。用酶标仪测定各孔450nm处的吸光度(A)，按下式计算细胞存活率：

实验结果

如图4所示，结果表明，3NS能显著提高对乙酰氨基酚诱导损伤的AML-12细胞的存活率，且成浓度依赖性。表明3NS具有较好的保肝作用，在制备预防和治疗肝损伤药物方面具有很好的应用前景。

综上所述，本发明首次提供了一种3NS在制备预防和治疗肝纤维化和肝损伤药物中的应用。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在没有背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同含义和范围内的所有变化囊括在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用。

2.如权利要求1所述的N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用，其特征在于，所述N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺，化学名称为N¹,N⁵,N¹⁰-tri-p-coumaroylspermidine，分子式为C₃₄H₃₇N₃O₆，分子量为583.7。

3.如权利要求1所述的N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用，其特征在于，所述N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺，其具体结构式如下：

4.如权利要求1所述的N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用，其特征在于，所述肝脏药物，是预防和治疗肝纤维化的药物。

5.如权利要求1所述的N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺在制备肝脏药物方面的应用，其特征在于，所述肝脏药物，是预防和治疗肝损伤的药物。

6.一种肝脏药物，其特征在于，含有N¹,N⁵,N¹⁰-三对香豆酰基亚精胺。

7.如权利要求6所述的肝脏药物，其特征在于，所述的治疗肝损伤的药物包括口服制剂或注射制剂。

8.如权利要求7所述的肝脏药物，其特征在于，所述口服制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂、缓释剂中的任意一种。