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CN119371436A - 一种具有gpx4降解活性的青蒿琥酯protac衍生物、组合物和应用 - Google Patents

一种具有gpx4降解活性的青蒿琥酯protac衍生物、组合物和应用 Download PDF

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CN119371436A CN202411614041.XA CN202411614041A CN119371436A CN 119371436 A CN119371436 A CN 119371436A CN 202411614041 A CN202411614041 A CN 202411614041A CN 119371436 A CN119371436 A CN 119371436A
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Abstract

本发明属于抗癌药物技术领域，具体涉及具有GPX4降解活性的青蒿琥酯PROTAC衍生物、组合物和应用，结构式如下：；所述R为Cereblon蛋白配体或VHL蛋白配体，所述Linker为青蒿琥酯和R的连接基团；本发明提高其抗肿瘤的效果。

Description

一种具有GPX4降解活性的青蒿琥酯PROTAC衍生物、组合物和 应用
技术领域
本发明属于抗癌药物技术领域，具体涉及具有GPX4降解活性的青蒿琥酯衍生物、组合物和应用。
背景技术
膀胱癌是全球第二常见的泌尿系统恶性肿瘤，由于膀胱癌的高复发性，通常需要对患者进行长期监测及多种治疗，其被认为是治疗成本最高的恶性肿瘤。
铁死亡，定义为由广泛的脂质过氧化介导的膜损伤引起的铁依赖性调节坏死，其特征是氧化还原失衡和细胞内活性氧（ROS）水平升高。多项研究表明，铁死亡在肿瘤抑制中起关键作用，可用于癌症治疗。谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）是铁死亡的中央调节因子；GPX4的失活可导致磷脂氢过氧化物（PLOOH）的积累，从而诱导细胞膜损伤和铁死亡。研究者们发现了不少GPX4抑制剂，比如RSL3、ML162、DPI化合物、FIN56以及FINO2。目前，大多数已报道的GPX4小分子抑制剂为含有氯乙酰胺基团的共价抑制剂，这些化合物由于其强大的亲电性，可以与多种蛋白质结合，从而导致它们与GPX4结合的特异性不高。因此，开发高活性及高选择性的靶向GPX4降解剂成为该领域目前的研究热点。
蛋白水解靶向嵌合分子(PROTAC)是一种通过E3泛素连接酶途径降解特定内源性蛋白质的异型双功能分子,该分子由目标蛋白（POI）的配体和E3泛素连接酶的配体组成，它们由连接体(Linker）共价连接。与传统小分子药物不同，PROTAC只需要与其靶蛋白之间短暂的相互作用就可以引起目标蛋白质功能的丧失。PROTAC以其独特的作用方式可大幅降低药物分子的IC50值，其还具有细胞通透性好、组织特异性好、口服生物利用度高等优点，且PROTAC在提高选择性方面也具有更好的优势。
青蒿琥酯是青蒿素的半合成水溶性衍生物，作为重症疟疾的一线治疗药物，青蒿琥酯的其他药理作用在不断被发现。目前多项研究证明青蒿琥酯能通过诱导铁死亡发挥一定抗肿瘤作用且过程中常伴有GPX4蛋白的下调，然而青蒿琥酯展现出的抗癌活性与其抗疟疾活性相比仍有较大差距。并且青蒿琥酯有着溶解性较差、口服生物利用度低以及稳定性较差等缺陷。因此，基于PROTAC的优势，筛选可特异性降解GPX4蛋白的青蒿琥酯衍生物，将其应用于GPX4的靶向降解对肿瘤的治疗具有重要意义。目前还未见类似的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种具有GPX4降解活性的青蒿琥酯衍生物、组合物和应用，提高其抗肿瘤的效果。
本发明实施例提供一种具有GPX4降解活性的青蒿琥酯衍生物，结构式如下：
；
所述R为Cereblon蛋白配体或VHL蛋白配体，所述Linker为青蒿琥酯和R的连接基团。
可选的，Cereblon蛋白配体为沙立度胺或其衍生物；VHL蛋白配体的结构式为：
。
所述沙立度胺的结构式为：
。
可选的，所述Linker为X-R1-X，所述X为N或O，所述R1为饱和脂肪链、R2、CH2-R2-CH2，所述R2为(CH2CH2O)n1-(CH2)n2；或者，所述X为N，R1为(CH2)n-CO。
可选的，所述饱和脂肪链为C3-11的饱和脂肪链，所述n1为3，n2为2，所述n为3-7。
可选的，所述青蒿琥酯衍生物为如下化合物，
。
可选的，所述青蒿琥酯衍生物为如下化合物，
更优选为
本发明提供一种组合物，包括所述的青蒿琥酯衍生物或其药理上可接受的盐，还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、媒介物或其组合。
本发明提供一种所述的青蒿琥酯衍生物，或者所述的组合物的应用，所述青蒿琥酯衍生物或者组合物用于降解GPX4或抑制GPX4的药物。
可选的，所述药物为抗肿瘤的药物。
所述肿瘤为膀胱癌。
本发明实施例提供一种所述的青蒿琥酯衍生物的制备方法，所述Linker为X-R1-X，所述X为O，所述R1为饱和脂肪链，所述R为沙立度胺，青蒿琥酯衍生物的制备方法的步骤为，
步骤1：在酯化催化剂存在的条件下，青蒿琥酯与HO-R1-Br反应得到化合物3a-3e；
步骤2：2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3二酮与中间产物3a-3e发生取代反应得到青蒿琥酯PROTAC化合物A1-A5，反应路线如下：
。
所述Linker为X-R1-X，所述X为O，所述R1为饱和脂肪链，所述R为沙立度胺，青蒿琥酯衍生物的制备方法的步骤为，
步骤1：2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3二酮与HO-R1-Br反应得到化合物5f-5g；
步骤2：化合物5f-5g在酯化催化剂存在的条件下，与青蒿琥酯发生酯化反应得到化合物青蒿琥酯PROTAC化合物A6-A7；反应路线如下：
。
所述Linker为X-R1-X，所述X为N，所述R1为饱和脂肪链、R2、CH2-R2-CH2，所述R2为(CH2CH2O)n1-(CH2)n2，所述R为沙立度胺，青蒿琥酯衍生物的制备方法的步骤为，
步骤1：在缚酸剂存在的条件下，2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3二酮与式H2N-R1-NHBoc所示的化合物反应得到化合物8a-8f；
步骤2：化合物8a-8f在三氟乙酸存在的条件下经酸水解反应脱去Boc保护基得到化合物9a-9f；
步骤3：化合物9a-9f在酰化活化剂和酰胺缩合剂存在的条件下，与青蒿琥酯发生酰胺缩合反应得到青蒿琥酯PROTAC化合物A8-A13；反应路线如下：
。
所述Linker为X-R1-X，所述X为N，R1为(CH2)n-CO，所述R为VHL蛋白配体，青蒿琥酯衍生物的制备方法的步骤为：
步骤1：(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺与H2N -CH2-COOH发生酯化反应得到化合物12a-12b；
步骤2：化合物12a-12b在酰化活化剂和酰胺缩合剂存在的条件下，与青蒿琥酯发生酰胺缩合反应得到式青蒿琥酯PROTAC化合物B1-B2。
。
本发明的有益效果是，本发明的青蒿琥酯PROTAC化合物能够有效的降解GPX4蛋白，从而诱导肿瘤细胞铁死亡，可被用作GPX4降解剂，能有效抑制多种膀胱癌细胞的增殖，并在正常膀胱细胞中有较好的安全性，是一种优秀的抗肿瘤候选化合物。
本发明基于青蒿琥酯和E3泛素连接酶CRBN和VHL招募配体开发了一种结构新颖多样的具有GPX4降解活性的青蒿琥酯PROTAC化合物。与青蒿琥酯相比，本发明化合物对肿瘤细胞具有显著的细胞增殖抑制作用。发明人通过Western blot实验证实本发明蛋白靶向降解嵌合体能够结合GPX4蛋白并引发有效降解，进而引起细胞铁死亡，具有作为抗肿瘤药物治疗肿瘤的潜力。
附图说明
图1为化合物A7在RT4细胞中对靶蛋白GPX4浓度梯度降解作用的探究结果。
图2为化合物A7在RT4细胞中对靶蛋白GPX4通过泛素-蛋白酶体发挥降解作用机制的结果。
图3为化合物A7在T24细胞中对靶蛋白GPX4浓度梯度降解作用的探究结果。
图4为化合物A7在T24细胞中对靶蛋白GPX4通过泛素-蛋白酶体发挥降解作用机制的结果。
具体实施方式
为了便于理解本发明的技术方案，下面通过实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。下面结合具体实例和附图对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。提供这些实施例的目的是使对本发明的技术方案的理解更加透彻全面。下述方法中所涉及配料或材料，如无特殊说明，均为商业途径可获得。相关实验方法中如无特殊说明均为本技术领域现有常规方法。
实施例1：化合物A1的制备
。
取1 g青蒿琥酯（0.0026 mol）、0.159 g DMAP（0.0013 mol）和0.249g EDCI（0.0013 mol）完全溶解于15 mL二氯甲烷中制成均匀溶液，在搅拌下逐滴加入3-溴-1-丙醇（0.3948 g，0.0028 mol）；在室温下反应3.5 h，TLC监测反应进程。反应结束后使用硅胶柱分离纯化得到中间产物3a（0.4531 g，产率34.6%）。
将中间产物5a（0.4 g，0.00079 mol）溶解于10 mL DMF中，在搅拌下加入碘化钾(0.0131 g，0.000079 mol)和碳酸氢钠（0.1333 g，0.001587 mol）以及2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮（0.2609 g，0.00095 mol），80℃下避光反应12 h，TLC监测反应进程。反应结束后将反应液加入100 mL的水中，然后用80 mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相旋蒸浓缩后经硅胶柱分离纯化得到目标化合物A1（0.022 g 白色固体，产率：4%）。
化合物A1的数据：3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)propyl ((3R,5aS,6R,8aS,9R,10S,12R,12aR)-3,6,9-trimethyldecahydro-12H-3,12-epoxy[1,2]dioxepino[4,3-i]isochromen-10-yl) succinate (A1).1H NMR (600MHz, Methanol-d 4) δ 11.10 (s, 1H), 7.82 (dd,J= 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.52 (d,J=8.5 Hz, 1H), 7.46 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 5.63 (d,J= 9.8 Hz, 1H), 5.52 (d,J= 1.8Hz, 1H), 5.08 (dd,J= 12.9, 5.5 Hz, 1H), 4.25 (dt,J= 26.7, 5.8 Hz, 4H), 2.67 –2.64 (m, 1H), 2.62 – 2.59 (m, 2H), 2.27 (ddd,J= 9.8, 7.2, 4.3 Hz, 1H), 2.17(td,J= 14.0, 3.9 Hz, 1H), 2.08 (td,J= 6.1, 3.2 Hz, 2H), 2.05 – 1.96 (m, 3H),1.83 – 1.77 (m, 1H), 1.61 – 1.55 (m, 1H), 1.55 – 1.49 (m, 1H), 1.39 (d,J=11.9 Hz, 2H), 1.33 (s, 2H), 1.29 (d,J= 3.8 Hz, 1H), 1.28 (d,J= 2.8 Hz, 3H),1.22 (s, 3H), 1.18 – 1.15 (m, 1H), 0.88 (d,J= 6.4 Hz, 3H), 0.73 (d,J= 7.0 Hz,3H).13C NMR (151 MHz, Methanol-d4) δ 172.79, 171.81, 170.90, 169.94, 166.83,165.30, 155.74, 137.10, 133.24, 119.78, 116.37, 115.37, 103.58, 91.81, 90.59,79.84, 65.53, 60.88, 51.11, 48.75, 44.54, 35.97, 35.88, 33.69, 31.54, 29.43,28.66, 28.46, 27.88, 25.50, 22.10, 22.00, 20.99, 20.06, 11.69. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 716.3041。
实施例2：化合物A2的制备：
以5-溴-1-戊醇1.0 g（0.0060 mol）替换实施例1的3-溴-1-丙醇，其他条件不变，得到化合物A2（0.2076 g，产率：5.2%）。
。
化合物A2的数据：δ 7.99 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.44(dd, J = 7.9, 2.2 Hz, 2H), 5.73 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 1.7 Hz,1H), 5.11 (dt, J = 11.4, 5.7 Hz, 1H), 4.20 (dt, J = 57.1, 6.2 Hz, 4H), 2.80 –2.65 (m, 4H), 2.47 – 2.40 (m, 1H), 2.35 – 2.28 (m, 1H), 2.16 – 2.11 (m, 1H),2.03 (ddd, J = 14.6, 5.0, 3.3 Hz, 1H), 1.92 – 1.86 (m, 3H), 1.79 – 1.61 (m ,4H), 1.57 (dt, J = 13.9, 4.7 Hz, 1H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.44 – 1.40(m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.38 – 1.34 (m, 3H), 1.34 – 1.32 (m, 1H), 1.28 (s,3H), 1.22 (ddd, J = 11.3, 7.6, 3.9 Hz, 1H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.85(d, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, MeOD) δ 174.70, 174.04, 171.47, 168.70,167.30, 164.87, 158.04, 137.94, 135.15, 124.31, 120.55, 116.30, 105.65,93.73, 92.85, 81.35, 70.27, 65.64, 52.94, 50.42, 46.55, 38.25, 37.26, 35.29,33.04, 32.15, 30.08, 29.82, 29.54, 29.31, 25.88, 25.76, 23.68, 23.49, 22.81,20.56, 12.39.HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 744.3361。
实施例3：化合物A3的制备：
以6-溴-1-己醇1.1 g（0.0061 mol）替换实施例1的3-溴1-丙醇，其他条件不变，得到化合物A3（0.4558 g，产率：11.2%）。
。
化合物A3的数据：1H NMR (600 MHz, Methanol-d 4)1H NMR (600 MHz, Methanol-d 4) δ 8.09 (s, 1H), 7.77 (ddd,J= 8.4, 7.3, 2.5 Hz, 1H), 7.44 (dt,J= 5.8, 3.5Hz, 2H), 5.75 (dd,J= 9.8, 2.9 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.11 (dd,J= 12.8, 5.5Hz, 1H), 4.27 – 4.19 (m, 2H), 4.12 (t,J= 6.5 Hz, 2H), 2.87 (ddt,J= 9.6, 6.5,3.2 Hz, 1H), 2.79 – 2.60 (m, 5H), 2.49 – 2.42 (m, 1H), 2.31 (dd,J= 14.0, 4.0Hz, 1H), 2.14 (dtd,J= 10.1, 5.5, 2.8 Hz, 1H), 2.06 – 2.00 (m, 1H), 1.89 (dtd,J = 12.2, 6.7, 3.2 Hz, 3H), 1.77 – 1.65 (m, 4H), 1.62 – 1.55 (m, 4H), 1.53 –1.42 (m, 4H), 1.36 (s, 3H), 1.33 – 1.19 (m, 2H), 1.00 (ddd, J = 26.7, 13.6,4.3 Hz, 1H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150MHz, MeOD) δ 174.66, 173.99, 172.85, 172.84, 171.46, 168.69, 158.07, 137.96,135.16, 120.58, 118.17, 116.31, 105.64, 93.72, 92.87, 81.36, 70.46, 65.80,52.95, 50.42, 46.55, 38.25, 37.26, 35.28, 33.06, 32.21, 30.10, 29.83, 29.81,29.58, 26.65, 26.60, 25.88, 25.77, 23.67, 22.82, 20.56, 12.41. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 758.3523。
实施例4：化合物A4的制备:
以7-溴-1-庚醇1.2 g（0.0061 mol）替换实施例1的3-溴1-丙醇，其他条件不变，得到化合物A4（0.3525 g，产率：8.5%）。
。
化合物A4的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.66(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.08 (dd, J = 12.9, 5.5 Hz, 1H), 4.20 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 6.6, 1.5 Hz, 2H), 2.67 – 2.52 (m, 6H), 2.28(ddd, J = 9.8, 7.2, 4.4 Hz, 1H), 2.20 – 2.14 (m, 1H), 2.01 (dddd, J = 27.2,14.5, 5.3, 2.8 Hz, 2H), 1.80 – 1.72 (m, 3H), 1.60 – 1.54 (m, 4H), 1.48 – 1.43(m, 3H), 1.41 – 1.38 (m, 1H), 1.36 – 1.32 (m, 5H), 1.28 (s, 3H), 1.23 (d, J =5.6 Hz, 3H), 1.15 (td, J = 11.4, 6.7 Hz, 1H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.76(d, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 172.79, 171.83, 170.84, 169.95,166.86, 165.31, 162.31, 137.04, 133.25, 119.78, 116.21, 115.13, 103.57,91.79, 90.59, 79.84, 68.78, 64.08, 51.09, 48.73, 44.54, 35.95, 35.87, 35.78,33.68, 31.61, 31.54, 30.96, 30.77, 29.42, 28.67, 28.28, 28.03, 25.50, 25.30,25.20, 20.98, 20.04, 11.70. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 772.3676。
实施例5：化合物A5的制备
以8-溴-1-辛醇1.3 g（0.0061 mol）替换实施例1的3-溴1-丙醇，其他条件不变，得到化合物A5（0.4017g，产率：9.5%）。
。
化合物A5的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.10 (s, 1H), 7.83 – 7.78(m, 1H), 7.47 (dd, J = 43.9, 7.9 Hz, 2H), 5.65 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.54 (s,1H), 5.10 – 5.05 (m, 1H), 4.10 (dt, J = 114.3, 6.6 Hz, 4H), 2.67 – 2.55 (m,5H), 2.53 – 2.51 (m, 1H), 2.32 – 2.25 (m, 1H), 2.20 – 2.13 (m, 1H), 2.06 –1.95 (m, 2H), 1.83 – 1.72 (m, 3H), 1.63 – 1.51 (m, 5H), 1.47 – 1.36 (m, 5H),1.36 – 1.33 (m, 1H),1.33 – 1.29 (m, 5H), 1.28 (s, 3H), 1.26 – 1.22 (m, 2H),1.15 (td, J = 11.4, 6.6 Hz, 1H), 0.86 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.76 (d, J = 7.1Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 172.94, 171.98, 171.00, 170.10, 167.01,165.45, 156.18, 137.19, 133.40, 119.92, 116.35, 115.27, 103.72, 91.94, 90.74,79.99, 68.93, 64.24, 51.25, 48.88, 44.70, 35.93, 33.83, 32.68, 31.76, 30.91,29.17, 28.81, 28.71, 28.57, 28.54, 28.20, 25.65, 25.41, 25.36, 24.33, 22.15,21.14, 20.19, 11.85. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 786.3827。
实施例6：化合物A6的制备
取1.5 g 2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮（0.005474 mol,1当量）溶解于15 mLDMF中，在搅拌子搅拌下加入0.091 g碘化钾(0.000547 mol, 0.1当量)和0.919 g碳酸氢钠（0.01095 mol, 2当量）以并逐滴加入10-溴-1-癸醇（1.421 g, 1.1当量），80℃下避光反应12 h。反应结束后将反应液加入150 mL的水中，然后用100 mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相旋蒸浓缩后经硅胶柱分离纯化得到中间产物5f（0.9811 g, 产率：41.7%）。
将中间产物5f（0.9 g, 0.0021 mol 1当量）溶解于15 mL二氯甲烷中，在搅拌子搅拌下加入青蒿琥酯（0.9630 g, 0.002512 mol, 1.2当量）、DMAP（0.1539 g, 0.00126 mol,0.6当量）和EDCI（0.1956 g, 0.00126 mol, 0.6当量），室温下反应3.5 h，TLC监测反应进程。反应结束后使用硅胶柱分离纯化得到目标化合物A6（0.2592 g, 淡黄色油脂状，产率：15.5%）。
。
化合物A6的数据：1H NMR (600 MHz, Methanol-d4) δ 7.77 (dd, J = 8.4, 7.4Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.43 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 9.8, 2.0 Hz,1H), 5.52 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.11 (ddd, J = 12.5, 5.6, 3.4 Hz, 1H), 4.13 –4.07 (m, 4H), 2.92 – 2.84 (m, 1H), 2.79 – 2.63 (m, 6H), 2.46 (ddd, J = 9.8,7.2, 4.5 Hz, 1H), 2.32 (td, J = 14.0, 4.0 Hz, 1H), 2.14 (ddt, J = 10.4, 4.2,2.2 Hz, 1H), 1.89 – 1.83 (m, 2H), 1.77 (dd, J = 13.5, 3.9 Hz, 1H), 1.71 (dt,J = 13.3, 3.6 Hz, 1H), 1.65 – 1.52 (m, 5H), 1.47 – 1.40 (m, 4H), 1.35 (s,9H), 1.30 (s, 2H), 1.29 – 1.20 (m, 5H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.87 (d, J= 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, MeOD) δ 174.66, 173.99, 173.00, 172.83,171.49, 168.70, 158.08, 137.94, 135.16, 120.53, 118.15, 116.27, 105.64,93.72, 92.87, 81.36, 65.94, 61.54, 52.95, 50.41, 46.57, 38.25, 37.26, 35.29,33.07, 32.21, 30.49, 30.41, 30.31, 30.25, 30.10, 30.01, 29.81, 29.68, 26.98,25.88, 23.67, 22.86, 20.86, 20.57, 14.46, 12.42. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+:814.4109。
实施例7：化合物A7的制备
以11-溴-1-十一醇1.4 g（0.0061 mol）替换实施例6的10-溴-1-癸醇，其他条件不变，得到化合物A7（1.0474 g，产率：23.5%）。
。
化合物A7的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.11 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.67(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.20 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 4.03 – 3.99 (m, 2H), 2.69 – 2.60 (m, 2H), 2.63 – 2.58 (m,1H), 2.58 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 2.58 – 2.47 (m, 1H), 2.34 – 2.25 (m, 1H), 2.18(td, J = 14.0, 4.0 Hz, 1H), 2.06 – 1.97 (m, 3H), 1.83 – 1.73 (m, 3H), 1.66 –1.60 (m, 1H), 1.63 – 1.51 (m, 4H), 1.50 – 1.44 (m, 2H), 1.47 – 1.37 (m, 2H),1.37 – 1.32 (m, 2H), 1.29 (s, 3H), 1.25 (d, J = 21.8 Hz, 10H), 1.18 (t, J =7.1 Hz, 2H), 0.95 (td, J = 12.9, 12.5, 3.7 Hz, 1H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3H),0.77 (d, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 173.23, 172.26, 171.30,170.39, 167.32, 165.76, 156.50, 137.48, 133.72, 120.23, 116.69, 115.58,104.04, 92.25, 91.06, 80.29, 69.26, 64.55, 51.57, 49.20, 45.02, 36.43, 36.34,36.24, 34.16, 32.07, 31.43, 31.23, 29.44, 29.39, 29.15, 29.13, 28.90, 28.54,25.96, 25.80, 25.75, 24.65, 21.47, 21.22, 20.49, 14.55. HRMS (ESI) (m/z) [M+NH4]+: 828.4275。
实施例8：化合物A8的制备
取1.0 g 2-(2,6-二氧杂环哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮（0.0036 mol）溶解于8 mL DMF中，搅拌下逐滴加入818 μL DIPEA（0.0047 mol）和0.75 g 叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯（0.0040 mol），在90℃反应12 h，TLC监测反应进程。反应结束后将反应液倒入80 mL水中，用60 mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，有机相用饱和碳酸钠溶液洗两次，在无水硫酸镁上干燥，后用硅胶柱分离纯化得到中间产物8a（0.7364 g，产率：44.9%）。
将中间产物1（0.7g, 0.0016 mol）加到TFA/DCM=1/1（6 mL）的混合溶液中，室温搅拌1 h，反应结束后旋干，硅胶柱分离纯化得到中间产物9a（0.49 g，产率：89%）。
取中间产物2 0.49 g（0.0014 mol）溶解于8 mL DMF中，加入HATU 0.8 g (0.0020mol)和青蒿琥酯0.6 g（0.0016 mol），搅拌下逐滴加入DIPEA 1 mL (0.0057 mol)，室温下反应3.5 h，TLC监测反应进程。反应结束后将反应液加入80 mL水中，用60 mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相旋蒸浓缩后经硅胶柱分离纯化得到目标化合物A8（0.2889 g 总产率：11.3%）。
。
化合物A8的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 7.84 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01(d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.53 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.39 (d, J = 30.5 Hz, 1H),5.04 (dd, J = 12.9, 5.5 Hz, 1H), 4.58 (dd, J = 9.3, 4.5 Hz, 1H), 3.29 (q, J =6.8 Hz, 2H), 3.06 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.87 (ddd, J = 17.1, 13.8, 5.4 Hz,1H), 2.61 – 2.47 (m, 5H), 2.40 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.28 (t, J = 7.0 Hz, 2H),2.20 – 2.12 (m, 1H), 2.04 – 1.93 (m, 2H), 1.79 (ddd, J = 13.8, 6.9, 3.5 Hz,1H), 1.65 – 1.49 (m, 4H), 1.45 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.40 – 1.28 (m, 2H), 1.26(d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.22 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 1.13 (td, J = 11.3, 6.6 Hz,1H), 0.87 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.77 (d, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz,DMSO) δ 173.88, 172.84, 170.82, 170.13, 168.96, 167.33, 146.42, 136.30,132.21, 117.26, 110.41, 109.02, 103.18, 93.24, 90.04, 80.19, 52.16, 51.32,48.55, 45.09, 41.55, 38.14, 36.32, 36.08, 33.86, 30.99, 30.03, 29.20, 26.54,26.16, 25.68, 24.35, 22.17, 21.29, 20.14, 12.85. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+:733.3045。
实施例9：化合物A9的制备
以叔丁基（5-氨基戊基）氨基甲酸酯1.0 g（0.0049 mol）替换实施例8的叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯，其他条件不变，得到化合物A9（0.1075 g，产率：10.6%）。
。
化合物A9的数据：1H NMR (600 MHz, Methanol-d4) δ 8.73 (dd, J = 4.4, 1.4Hz, 1H), 8.43 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 1H), 7.05(dd, J = 9.9, 7.8 Hz, 2H), 6.63 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 5.74 (d, J = 8.7 Hz, 1H),5.47 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.07 (ddd, J = 12.6, 5.5, 2.2 Hz, 1H), 3.35 (d, J =7.0 Hz, 2H), 3.33 – 3.31 (m, 4H), 3.21 (td, J = 6.7, 4.3 Hz, 2H), 2.91 – 2.83(m, 1H), 2.79 – 2.70 (m, 4H), 2.45 (ddd, J = 9.8, 7.2, 4.5 Hz, 1H), 2.31(ddd, J = 14.6, 13.4, 3.9 Hz, 1H), 2.15 – 2.09 (m, 1H), 1.92 – 1.86 (m, 1H),1.77 – 1.65 (m, 4H), 1.57 (ddd, J = 8.8, 6.7, 4.1 Hz, 3H), 1.51 – 1.45 (m,2H), 1.44 – 1.39 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.33 – 1.28 (m, 2H), 0.94 (d, J = 6.3Hz, 3H), 0.86 (d, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, MeOD) δ 174.73, 174.10,173.02, 171.61, 170.80, 169.34, 148.83, 139.35, 134.73, 118.05, 111.75,109.52, 106.12, 95.55, 92.87, 82.07, 52.92, 50.21, 46.55, 43.30, 40.18,38.67, 37.26, 35.28, 33.06, 32.25, 31.26, 30.57, 30.01, 29.86, 25.89, 25.77,25.09, 23.83, 22.85, 20.58, 11.95. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+: 747.3225。
实施例10：化合物A10的制备
以N-Boc-1,6己二胺1.0g（0.0046 mol）替换实施例8的叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯，其他条件不变，得到化合物A10（0.1302 g，产率：12.3%）。
。
化合物A10的数据：1H NMR (600 MHz, Methanol-d4) δ 11.10 (s, 1H), 7.95(s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.5, 7.3 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.65 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.07(dd, J = 12.8, 5.5 Hz, 1H), 4.18 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.01 – 3.96 (m, 2H),2.67 – 2.62 (m, 2H), 2.59 – 2.55 (m, 2H), 2.52 – 2.47 (m, 2H), 1.81 – 1.70(m, 3H), 1.60 (ddd, J = 19.2, 14.6, 3.5 Hz, 2H), 1.53 (td, J = 7.8, 4.1 Hz,3H), 1.47 – 1.36 (m, 5H), 1.33 (s, 4H), 1.28 (s, 2H), 1.27 (s, 5H), 1.16 (s,1H), 0.86 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz,MeOD) δ 172.77, 171.80, 170.84, 169.92, 166.86, 162.30, 156.04, 137.01,133.26, 119.74, 116.22, 115.11, 103.58, 91.79, 90.60, 79.82, 64.09, 59.76,51.11, 48.75, 44.57, 35.99, 33.70, 31.60, 30.97, 30.76, 28.94, 28.68, 28.44,28.09, 25.49, 25.35, 24.19, 22.03, 21.02, 20.75, 20.02, 14.08. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+: 761.3378。
实施例11：化合物A11的制备
以N-Boc-1,8辛二胺1.0 g（0.0041 mol）替换实施例8的叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯，其他条件不变，得到化合物A11（0.0902 g，产率：8.4%）。
。
化合物A11的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 9.03 (s,1H), 7.82 (s, 1H), 7.57 (dd, J = 8.5, 7.1 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H),7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.04 (dd, J= 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.02 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.28 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.00(q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.87 (ddd, J = 17.1, 13.8, 5.5 Hz, 1H), 2.63 – 2.53 (m,3H), 2.42 – 2.33 (m, 2H), 2.27 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.17 (td, J = 14.0, 3.9Hz, 1H), 2.05 – 1.95 (m, 4H), 1.63 – 1.49 (m, 5H), 1.38 – 1.30 (m, 8H), 1.27(s, 3H), 1.22 – 1.21 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.5 Hz,3H), 0.75 (d, J = 7.1 Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 173.28, 171.69,170.66, 170.56, 169.42, 167.77, 146.90, 136.76, 132.66, 117.64, 110.84,109.47, 104.03, 92.05, 91.04, 80.32, 51.58, 49.00, 45.04, 42.31, 38.97,36.43, 36.36, 34.16, 32.11, 32.00, 31.45, 30.00, 29.89, 29.55, 29.49, 29.19,26.81, 26.76, 25.98, 24.65, 22.62, 21.23, 20.51, 14.55. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+: 789.3696。
实施例12：化合物A12的制备
以12-氨基-4,7,10-三氧杂十二烷酸叔丁酯1.0 g（0.0031 mol）替换实施例8的叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯，其他条件不变，得到化合物A12（0.2109 g，产率：18.5%）。
。
化合物A12的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.09 (s, 1H), 7.94 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.04(d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.60 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.53(s, 1H), 5.05 (dd, J = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.56 (dd,J = 5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.54 – 3.50 (m, 4H), 3.50 – 3.44 (m, 4H), 3.37 (t, J =5.9 Hz, 2H), 3.17 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.61 – 2.49 (m, 6H), 2.38 (td, J =6.9, 2.3 Hz, 2H), 2.27 (ddd, J = 9.8, 7.0, 4.3 Hz, 1H), 2.17 (td, J = 14.0,3.9 Hz, 1H), 2.08 – 1.95 (m, 3H), 1.64 – 1.50 (m, 3H), 1.45 – 1.30 (m, 3H),1.28 (s, 3H), 1.19 – 1.12 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 7.1Hz, 3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 172.82, 171.23, 170.57, 170.08, 168.95,167.30, 146.42, 136.25, 132.10, 117.46, 110.69, 109.25, 103.58, 91.61, 90.58,79.87, 69.80, 69.78, 69.78, 69.60, 69.10, 68.89, 53.60, 51.12, 48.56, 44.58,41.70, 38.61, 35.98, 33.71, 31.64, 30.99, 29.46, 28.95, 25.52, 24.19, 22.15,21.02, 20.06, 11.72. HRMS (ESI) (m/z) [M+H]+: 815.3719。
实施例13：化合物A13的制备
以N-Boc-4,7,10-三氧杂-1,13-十三烷二胺2.6 g（0.0045 mol）替换实施例8的叔丁基（4-氨基丁基）氨基甲酸酯，其他条件不变，得到化合物A13（0.1946 g，产率：16.5%）。
。
化合物A13的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 7.84 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01(d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.66 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.53(s, 1H), 5.04 (dd, J = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.02 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.57 –3.43 (m, 12H), 3.06 (dt, J = 9.0, 6.1 Hz, 2H), 2.92 – 2.83 (m, 1H), 2.58 (q,J = 6.9 Hz, 3H), 2.36 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.27 (ddd, J = 9.8, 7.1, 4.4 Hz,1H), 2.17 (td, J = 14.0, 4.0 Hz, 1H), 2.05 – 1.95 (m, 4H), 1.83 – 1.76 (m,3H), 1.65 – 1.55 (m, 4H), 1.55 – 1.49 (m, 1H), 1.46 – 1.37 (m, 2H), 1.28 (s,3H), 1.17 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 7.1 Hz,3H).13C NMR (150 MHz, DMSO) δ 172.83, 171.24, 170.33, 170.10, 168.85, 167.34,146.46, 136.30, 132.21, 117.10, 110.38, 109.06, 103.57, 91.61, 90.58, 79.87,69.80, 69.74, 69.71, 69.54, 68.22, 68.04, 59.77, 51.12, 48.53, 44.57, 40.05,35.97, 35.85, 33.71, 31.64, 30.98, 29.54, 29.34, 29.00, 28.89, 25.52, 24.19,22.17, 20.77, 20.06, 14.10. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+: 865.3861。
实施例14：化合物B1的制备
取1 g (2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺（0.0023 mol）溶解于20 mL二氯甲烷中，加入0.947g HATU（0.0025mol）和0.28 g 4-氨基丁酸（0.0027 mol），逐滴加入2.9 mL TEA，在室温下反应5 h，TLC监测反应进程。反应结束后，加入40 mL二氯甲烷稀释反应液，用40 mL饱和NH4Cl洗涤两次，再用40 mL蒸馏水洗两次，最后在无水硫酸镁上干燥，经硅胶柱分离纯化得到中间产物12a（0.8359 g，产率：68.7%）。
将0.8 g 20-1（0.0015 mol）溶解于10 mLDMF中，加入青蒿琥酯0.9 g（0.0024mol）和0.8 g HATU (0.0021 mol)，逐滴加入1 mL DIPEA，在室温下反应5 h，TLC监测反应进程，反应结束后硅胶柱分离纯化得到目标化合物B1（0.1956 g，总产率：9.5%）。
。
化合物B1的数据1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (s, 1H), 8.38 (d, J =7.8 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.84 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.45 – 7.42 (m, 2H),7.40 – 7.37 (m, 2H), 5.76 (s, 1H), 5.66 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H),4.92 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.53 – 4.50 (m, 1H), 4.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.64– 3.57 (m, 3H), 3.06 – 2.99 (m, 2H), 2.64 – 2.57 (m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.39(d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.31 – 2.10 (m, 5H), 2.01 (dtd, J = 14.7, 8.0, 4.0 Hz,2H), 1.84 – 1.76 (m, 2H), 1.67 – 1.55 (m, 4H), 1.50 – 1.42 (m, 2H), 1.38 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.35 – 1.30 (m, 1H), 1.29 (s, 3H), 1.21 – 1.14 (m, 2H), 0.94(d, J = 2.3 Hz, 9H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.77 (d, J = 7.1 Hz, 3H).13CNMR (151 MHz, DMSO) δ 171.69, 171.25, 170.61, 170.32, 169.55, 151.49, 147.76,144.66, 131.11, 129.69, 128.83, 126.38, 103.57, 91.61, 90.57, 79.87, 68.76,58.55, 56.43, 54.92, 51.13, 47.69, 44.58, 40.05, 38.26, 37.71, 35.96, 35.22,33.71, 32.54, 31.64, 29.56, 28.99, 26.45, 26.44, 25.71, 25.52, 24.19, 22.45,21.01, 20.07, 15.99, 11.73. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+: 918.4298。
实施例15：化合物B2的制备
以0.5 g 8-氨基辛酸（0.0031 mol）取代实施例14中的4-氨基丁酸，其他条件不变，得到化合物B2（0.3655 g，产率：16.7%）。
。
化合物B2的数据：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (s, 1H), 8.38 (d, J =7.8 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.79 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.46 – 7.42 (m, 2H),7.40 – 7.36 (m, 2H), 6.07 (s, 1H), 5.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.10 (d, J = 3.6Hz, 1H), 4.92 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.42 (t, J = 8.0Hz, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.77 (q, J = 7.9 Hz, 1H), 3.64 – 3.58 (m, 2H), 3.01(t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.63 – 2.52 (m, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.39 – 2.32 (m, 2H),2.24 (dt, J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 2.12 (dd, J = 8.1, 5.9 Hz, 2H), 2.01 (td, J= 9.3, 4.6 Hz, 2H), 1.90 – 1.76 (m, 4H), 1.71 (dt, J = 12.1, 4.1 Hz, 2H),1.54 – 1.40 (m, 5H), 1.40 – 1.30 (m, 7H), 1.24 (d, J = 4.7 Hz, 7H), 0.94 (s,9H), 0.89 (dd, J = 6.3, 2.9 Hz, 3H), 0.77 (dd, J = 7.1, 5.5 Hz, 3H).13C NMR(150 MHz, DMSO) δ 172.03, 170.62, 170.17, 169.60, 168.59, 151.49, 147.76,144.67, 131.11, 129.69, 128.82, 126.38, 103.57, 92.71, 90.40, 79.20, 68.75,67.69, 58.53, 56.31, 54.21, 47.68, 46.34, 40.06, 38.54, 37.72, 35.19, 34.87,33.47, 29.94, 29.45, 29.09, 28.49, 27.03, 26.44, 26.35, 25.52, 25.39, 22.45,21.92, 21.05, 21.01, 20.31, 20.07, 15.99, 11.54. HRMS (ESI) (m/z) [M+Na]+:974.4937。
本实施例还提供采用前述方法制得的基于青蒿琥酯的PROTAC化合物及应用。
试验例1
采用MTT法检测化合物的细胞抗肿瘤活性及毒性，并以青蒿琥酯和CRBN作为阳性对照。取处于对数期的人膀胱癌细胞(J82、T24、RT4)、人正常膀胱细胞SV-HUC-1分别按照每孔7000个细胞进行种板，将接种完的96孔培养板放置于培养箱中过夜，用不同浓度的化合物（0, 0.01, 0.1, 1, 10, 100 μM）处理96孔板，处理完成后将96孔培养板均放回培养箱中培养72小时，读取波长490 nm的吸光值（OD）。细胞抑制率(%)=[(空白对照OD值-给药OD值)/空白对照组OD值]*100%。经试验，本发明的化合物对人膀胱癌细胞株有明显抑制增殖作用，如下表1所示。
表1
通过采用上述技术方案，本发明合成的青蒿琥酯PROTAC衍生物，对多种膀胱癌细胞具有抑制作用，其中，化合物A7在RT4细胞中活性最强，相比于青蒿琥酯的抑制增殖活性增强超过10倍。
试验例2
Western Blot检测化合物A7对GPX4蛋白的降解活性。
试验步骤：将RT4或T24细胞以2.5 × 105的密度接种6孔板中，然后用特定浓度的A7处理细胞，同时使用PBS作为对照。将蛋白质提取物上样并在SDS-PAGE上电泳，然后将其转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。用5%牛奶封闭印迹，然后与GPX4（CST）、GAPDH （CST）在4℃下孵育过夜。 使用TBST洗涤30分钟后，将印迹与二抗一起孵育1小时。再次用PBS洗涤后，使用ChemiDoc系统（Tanon 4600，上海，中国）观察印迹。最后，使用ImageJ软件测量所得图像中条带的灰度值，用于蛋白质定量。
检测结果如说明书附图1及附图3所示，可以看出，化合物A7能够降解人膀胱癌细胞中的GPX4蛋白，并呈浓度依赖性。
试验例3
Western Blot检测化合物A7对GPX4蛋白的降解机制。
试验步骤：设置空白组、MG132加药组、A7加药组、A7加药组+MG132加药组。将RT4或T24细胞以2.5 × 105的密度接种6孔板中，按上述分组处理细胞。将蛋白质提取物上样并在SDS-PAGE上电泳，然后将其转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。用5%牛奶封闭印迹，然后与GPX4（CST）、GAPDH（CST）在4℃下孵育过夜。使用TBST洗涤30分钟后，将印迹与二抗一起孵育1小时。再次用PBS洗涤后，使用ChemiDoc系统（Tanon 4600，上海，中国）观察印迹。最后，使用ImageJ软件测量所得图像中条带的灰度值，用于蛋白质定量。
检测结果如说明书附图2及附图4所示，可以观察到，在不同GPX4高表达的细胞系中，用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞和用蛋白酶体抑制剂MG132预处理后再加入化合物A7，均没有降解活性，而直接加入化合物A7，则表现出显著的GPX4降解作用。说明蛋白酶体抑制剂MG132预处理后，能竞争性的结合或抑制化合物A7的降解作用，说明化合物A7通过泛素-蛋白酶体途径降解GPX4。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本申请的保护范围限于这些例子；在本申请的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本申请中一个或多个实施例的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
本申请中一个或多个实施例旨在涵盖落入本申请的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本申请中一个或多个实施例的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种具有GPX4降解活性的青蒿琥酯衍生物，其特征是，结构式如下：
；
所述R为Cereblon蛋白配体或VHL蛋白配体，所述Linker为青蒿琥酯和R的连接基团。
2.如权利要求1所述的青蒿琥酯衍生物，其特征是，Cereblon蛋白配体为沙立度胺或其衍生物；VHL蛋白配体的结构式为：
。
3.所述沙立度胺的结构式为：
。
4.如权利要求1或2所述的青蒿琥酯衍生物，其特征是，所述Linker为X-R1-X，所述X为N或O，所述R1为饱和脂肪链、R2、CH2-R2-CH2，所述R2为(CH2CH2O)n1-(CH2)n2；或者，所述X为N，R1为(CH2)n-CO。
5.如权利要求3所述的青蒿琥酯衍生物，其特征是，所述饱和脂肪链为C3-11的饱和脂肪链，所述n1为3，n2为2；所述n为3-7。
6.如权利要求4所述的青蒿琥酯衍生物，其特征是，所述青蒿琥酯衍生物为如下化合物，
。
7.如权利要求5所述的青蒿琥酯衍生物，其特征是，所述青蒿琥酯衍生物为如下化合物，
8.一种组合物，其特征是，包括如权利要求1-6任一项所述的青蒿琥酯衍生物或其药理上可接受的盐，还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、媒介物或其组合。
9.一种如权利要求1-6任一项所述的青蒿琥酯衍生物，或者如权利要求7所述的组合物的应用，所述青蒿琥酯衍生物或者组合物用于降解GPX4或抑制GPX4的药物。
10.如权利要求8所述的应用，其特征是，所述药物为抗肿瘤的药物。
11.如权利要求9所述的应用，其特征是，所述肿瘤为膀胱癌。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112457365A (zh) * 2019-09-09 2021-03-09 中国医学科学院药物研究所 一类靶向蛋白质水解通路的功能分子及其制备和应用
CN115724850A (zh) * 2022-12-07 2023-03-03 贵州医科大学 一类双青蒿素衍生物及其制备方法与应用
CN118724914A (zh) * 2024-06-05 2024-10-01 华侨大学 一种青蒿素PROTACs及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112457365A (zh) * 2019-09-09 2021-03-09 中国医学科学院药物研究所 一类靶向蛋白质水解通路的功能分子及其制备和应用
CN115724850A (zh) * 2022-12-07 2023-03-03 贵州医科大学 一类双青蒿素衍生物及其制备方法与应用
CN118724914A (zh) * 2024-06-05 2024-10-01 华侨大学 一种青蒿素PROTACs及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YAN LI等: "Facilitated Drug Repurposing with Artemisinin-Derived PROTACs:Unveiling PCLAF as a Therapeutic Target", 《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》, vol. 66, 8 August 2023 (2023-08-08) *

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