CN119136814A - 包含甘草甜素源的动物食物组合物 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，用于预防和/或治疗过敏性炎症性皮肤病，其中所述动物食物组合物被配制成向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的量的甘草甜素。

Description

包含甘草甜素源的动物食物组合物

1.相关申请的交叉引用

本申请要求于2022年4月27日提交的欧洲专利申请第22170352.3号的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。

2.技术领域

本公开的主题涉及用于预防和/或治疗过敏性炎症性皮肤病、特别是用于预防和/或治疗特应性皮炎的动物食物组合物领域。

3.背景技术

报告强烈表明，过敏性疾病的发病率正在上升，特别是在西方社会(Pawankar等人，世界变态反应组织(2013年)11-9(Pawankar et al.,World Allergy Organization.(2013)11-9))。

过敏性炎症性皮肤病是慢性疾病，其特征是例如红斑、疼痛、发红、肿胀以及皮肤上出现小水泡或丘疹的临床症状。它们是动物(特别是狗)中第二常见的过敏性皮肤病，仅次于跳蚤过敏。这些过敏反应可以由通常无害的物质引起，例如草、霉菌孢子、屋尘螨和其他环境过敏原。

主要症状是皮肤发炎和瘙痒，通常与受感染动物的抓挠和表皮脱落相关，这是由遗传与环境因素相互作用引起的。过敏症状表现为湿疹性皮肤，并且患有特应性皮炎的动物(例如狗)常常会出现瘙痒或剧烈瘙痒、脱毛、表皮因深度抓挠而脱落、频繁舔舐爪子以及泪液分泌过多。继发性皮肤问题也很常见，包括皮肤感染和皮脂分泌过多。特别地，特应性皮炎是最常见的过敏性炎症性皮肤病之一。

此类疾病在多种表现形式中的共同特征是免疫应答偏向于所谓的辅助性T细胞2(Th-2)细胞因子的表达，即与促进IgE和嗜酸性粒细胞反应相关的炎症介质的表达。例如，相对于Th-1辅助细胞(Th-1helper cell)细胞因子(例如干扰素-γ(IFN-γ))或Th-17辅助细胞细胞因子(例如IL-17)，白细胞介素IL-4或IL-5的增加似乎使免疫应答倾向于过敏表型。另一方面，已知Th-1细胞因子IFN-γ可以抑制IgE合成、Th-2细胞增殖和T细胞上的IL-4受体表达(Spergel等人，《美国临床皮肤病学杂志》9(2008年)233-234，Laurence等人，《自然免疫学》8(2007年)903-905，以及Okamoto等人，《临床和实验免疫学》157(2009年)27-34(Spergel et al.,Am J Clin Derm.9(2008)233-234,Laurence et al.,NaturalImmunology.8(2007)903-905,and Okamoto et al.,Clinical and ExperimentalImmunology.157(2009)27–34))。因此，调节免疫应答以抑制Th-2，甚至促进Th-1细胞增殖和细胞因子产生的生物活性物质可以证明对治疗过敏反应或过敏性疾病有用。

已经描述了几种治疗特应性皮炎和瘙痒症的方法，包括使用超微粉化棕榈酰乙醇胺(Noli等人，《兽医皮肤科》2015年；26，432-40(Noli et al.；Vet Dermatol 2015；26,432-40))或抗组胺药，例如非索非那定(fexofenadine,)，或者药物，例如环孢菌素。然而，由于显著的副作用(以及在许多情况下成本高昂)，大多数可用药物并不适合长期使用。尽管免疫疗法在确定过敏原的情况下可以改善症状，但成功率仍然参差不齐。减少对药物的依赖的能力将被视为对该领域的宝贵贡献，也是营养干预的主要目标。

事实上，现在有证据表明，遗传易感性可以影响免疫系统以及皮肤屏障的功能/结构方面。已知的环境成分包括过敏原负荷和皮肤上存在的微生物种群。目前规定用于过敏性疾病的药物针对疾病“进展”的个别方面，通常与免疫有关，但仅是控制疾病，而非长期缓解或治愈。如果营养管理策略同时针对多个方面，则更有可能成功。

许多源自植物来源的天然产品已经显示出免疫调节的潜力(Block等人，《癌症综合治疗》2(2003年)247-267，Gertsch等人，《民族药理学杂志》136(2011年)385-391和Licciardi等人，《国际免疫药理学》11(2011年)390-398(Block et al.,IntegrativeCancer Therapies.2(2003)247-267,Gertsch et al.,Journal ofEthnopharmacology.136(2011)385-391and Licciardi et al.,Int Immunopharmacol.11(2011)390–398))。其中一些植物化学产品据称可以调节与过敏性疾病相关的免疫途径。然而，这些有益活动的科学支持水平参差不齐，并且在某些情况下，除了所记录的传统用途之外，几乎没有其他支持。

特别地，人们已经关注到光果甘草(Glycyrrhiza glabra)根，其先前已经显示出免疫调节特性。事实上，研究表明，甘草的一种重要的化学成分甘草甜素(glycyrrhizin)(也称为甘草酸)影响树突状细胞的成熟和信号传导活动(Bordbar等人，《免疫药理学和免疫毒理学》36(2014年)52-60，Kim等人，《免疫药理学和免疫毒理学》35(2013年)329-35以及Aipire等人，《科学报告》7(2017年)43796(Bordbar et al.,ImmunopharmacolImmunotoxicol.36(2014)52-60,Kim et al.,Immunopharmacol Immunotoxicol.35(2013)329-35and Aipire et al.,Sci Rep.7(2017)43796))，抑制某些Th-2型应答，同时趋向于Th-1应答(Bordbar等人，《细胞免疫学》280(2012年)44-49以及Hua等人，《国际免疫药理学》12(2012年)518-25(Bordbar et al.,Cell Immunol.280(2012)44-49and Hua et al.,IntImmunopharmacol.12(2012)518-25))。除甘草甜素外，甘草中的其他重要成分，即异甘草素和柚皮素，已被证明可以影响调节性T细胞的诱导和功能(Guo等人，《科学报告》5(2015年)14046(Guo et al.,.Sci Rep.5(2015)14046))。

因此，过去曾将甘草甜素加入动物食物组合物中，以预防和/或治疗过敏性炎症性疾病：例如，WO2021/003280描述了(i)甘草甜素源与(ii)一种或多种姜黄素类化合物源在动物体内用于此目的的组合物的用途，其公开内容整体并入本文。

然而，动物食物组合物中可以包含的甘草甜素的量通常很低。事实上，先前已经证明，甘草甜素的摄入与狗的高血压之间存在关联。因此，官方对甘草甜素的安全建议是，推定安全摄入量(PSI)，特别是对于狗而言，为1mg/kg全面饲料，估计0.3mg/天或每天0.02mg/kg体重(Bwt)(Bwt/天)(《欧洲食品安全局杂志》，2015年基于van Gelderen等人研究的建议，甘草酸：无作用水平的评估，《人类与实验毒理学》2000年，19，434-439(EFSA Journal,2015recommendations based on the study by van Gelderen et al.,Glycyrrhizicacid:the assessment of a no effect level,Human&Experimental Toxicology,2000,19,434-439))。

因此，组合物中包含的并因此可以提供所寻求的抗炎特性的活性化合物的量是有限的。因此，仍然需要针对过敏性炎症性皮肤病(例如特应性皮炎)的治疗方案。还需要用于治疗或预防此类疾病的替代天然产品。因此，仍然需要设计用于改善免疫功能和屏障防御的新型饮食。

此外，任然需要针对过敏性炎症性皮肤病(例如特应性皮炎)的新型治疗方案，特别是新型饮食，其对该疾病特别有效，而且对待治疗的个体安全且副作用有限。

4.发明内容

所公开主题的目的和优点将在以下描述中阐明，并在以下描述中显而易见，也将从所公开主题的实践中了解到。

本公开的第一方面涉及一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，其中所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。

特别地，该动物食物组合物可以被配制用于向动物提供每日量约0.02mg/kg体重至约2mg/kg体重的甘草甜素。

特别地，该动物食物组合物可以被配制用于向动物提供每日量约0.03mg/kg体重至约2mg/kg体重、特别是约0.05mg/kg体重至约1mg/kg体重、特别是约0.1mg/kg体重至约0.8mg/kg体重、特别是约0.2mg/kg体重至约0.6mg/kg体重的甘草甜素。

本公开还涉及一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，用作药物，其中，所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。

在一个特定的实施方式中，该动物食物组合物选自由营养全面的动物食物组合物、食品补充剂和盖料组合物所组成的组中。

在一个特定的实施方式中，该动物食物组合物的甘草甜素源包括甘草根提取物。

在一个特定的实施方式中，该动物食物组合物还包含亚油酸。

在一个特定的实施方式中，该动物食物组合物还包含EPA/DHA(二十碳五烯酸/二十二碳六烯酸)、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或其组合。

在一个特定的实施方式中，该过敏性炎症性皮肤病选自由以下所组成的组中：特应性皮炎(atopic dermatitis)、跳蚤过敏性皮炎(flea allergic dermatitis)、荨麻疹(urticaria)、昆虫叮咬过敏(insect bite allergy)、血管性水肿(angioedema)、吸入性过敏(inhalant allergy)、吸入性过敏性皮炎(inhalant allergic dermatitis)、食物过敏性皮炎(food allergic dermatitis)、接触性皮炎(contact dermatitis)、粟粒性皮炎(miliary dermatitis)、嗜酸性肉芽肿(eosinophilic granuloma)、头颈部瘙痒(head andneck pruritus)和全身性瘙痒(generalized pruritus)。

本公开的第二方面涉及一种试剂盒，其包含：

(i)第一部分，其包含甘草甜素源；和

(ii)第二部分，其包含一种或多种附加成分；

用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，其中，所述试剂盒被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。

本公开的第三方面涉及一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，其中，基于该动物食物组合物的干物质的总重量，甘草甜素的量为至少约5mg/kg。

特别地，基于动物食物组合物的干物质的总重量，甘草甜素的量可以为约5mg/kg至约100mg/kg。

特别地，基于动物食物组合物的干物质的总重量，甘草甜素的量可以为约5mg/kg至100mg/kg、特别是约10mg/kg至约75mg/kg、特别是约15mg/kg至约50mg/kg，以及特别是约20mg/kg至45mg/kg。

在一个特定的实施方式中，该动物食物组合物包含粗磨食品和/或该动物食物组合物还包含蛋白质源。

特别地，该动物食物组合物包括营养全面的食物组合物。

特别地，该动物食物组合物或试剂盒被配制用于口服施用。

特别地，该动物食物组合物或试剂盒中的甘草甜素源包括甘草根提取物。

特别地，该动物食物组合物可以包含一种或多种附加成分。

特别地，该动物食物组合物或试剂盒的一种或多种附加成分可以选自亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或其组合。

上文已经基本概述了本申请的特征和技术优点，以便可以更好地理解下文的具体实施方式。

下文将描述本申请的附加特征和优点，这些特征和优点构成了本申请权利要求的主题。本领域技术人员应当理解，所公开的构思和具体实施方式可以容易地用作修改或设计用于实现本申请的相同目的的其它结构的基础。本领域技术人员还应当认识到，此类等效构造不脱离所附权利要求书中阐述的本申请的精神和范围。通过以下描述，将更好地理解本申请在组织和操作方法方面所特有的新颖特征，以及其他目的和优点。

5.附图说明

图1示出了在甘草根提取物(licorice root extract，LRE)浓度不断增加的情况下尤尔卡特(Jurkat)细胞和人类外周血单个核细胞(PBMC)的存活率。通过台盼蓝排斥法评估细胞活力。两项测定的数据均表示为相对于单独使用抗CD3/CD28刺激的阳性对照(+vecontrol)的细胞存活率(空心菱形“◇”：PBMC的活力；实心圆“●”Jurkat细胞的活力)(平均值+/-SEM)。*表示细胞活力在统计学上显著降低(P<0.01)。根据这些测定，选择100mg/ml的LRE浓度作为解释细胞因子测定的临界点。*表示Jurkat和PBMC群体的细胞活力降低的LRE浓度(p<0.01)。

图2表示人类T细胞(PBMC)增殖和白细胞介素2(IL-2)释放。通过抗CD3/CD28刺激组合诱导细胞增殖(实心圆“●”：平均细胞增殖)并通过将[3H]胸苷掺入增殖的T细胞进行评估。通过ELISA测量来自活化细胞的白细胞介素-2释放(空心菱形“◇”：平均IL-2释放)并显示在同一坐标轴上。在这两种情况下，数据均表示为相对于单独活化阳性对照(+vecontrol)的活性(平均值+/-SEM)。甘草提取物在先前被证明无细胞毒性的浓度(<100mg/ml)对T细胞增殖或IL-2释放几乎没有影响。有证据表明，浓度为100mg/ml时，其对细胞增殖有影响。*表示IL-2表达显著降低的LRE浓度(p<0.05)；#表示细胞增殖显著降低的LRE浓度(p<0.05)。

图3示出了甘草根提取物对抗CD3/CD28活化人T细胞释放IFN-γ(空心方块“□”)、白细胞介素-17(空心圆“○”)和白细胞介素-5(空心三角形“△”)的影响。数据表示为相对于单独活化阳性对照(+ve control)的细胞因子浓度(平均值+/-SEM)。*表示单独显著抑制IL-5释放的甘草提取物浓度；#表示显著抑制所有3种细胞因子释放的甘草提取物浓度(p<0.05)。

6.具体实施方式

本公开的主题涉及提供一种用于预防和/或治疗动物(特别是狗)的炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病(特别是特应性皮炎，即犬特应性皮炎)的产品。特别地，该产品可以用于支持犬特应性皮炎的治疗。

本公开的主题在此提供了一种动物食物组合物，其包含量高于推荐每日剂量的甘草甜素源。

令人惊讶的是，本公开的主题已经确定甘草根的水提取物可以在无细胞毒性且不刺激增殖或白细胞介素2(IL-2)释放的浓度范围内抑制活化T细胞释放白细胞介素5(IL-5)。此外，本公开的主题能够证明，食用比狗的推荐每日剂量高出超过约20倍的量的甘草甜素不会引起成年狗的任何显著的血压稳态。此外，本公开的主题已经表明，食用比狗的推荐每日剂量高出超过约20倍的量的甘草甜素不会引起钾排泄和醛固酮分泌的任何变化，该结果表明，这种高剂量的甘草甜素不会影响肾功能。

因此，本公开的主题涉及一种动物食物组合物，其包含可以以高于通常推荐量的量向动物(特别是犬科动物，例如狗)提供的甘草甜素源，同时这种食物组合物仍是安全的，即不会引起血压升高，也不会影响肾功能，例如不会导致钾排泄增加或醛固酮分泌增加。这种组合物可用于预防和/或治疗动物的炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病，并且更特别地，用于患有特应性皮炎的动物。在特定的实施方式中，动物是犬科动物。在某些实施方式中，犬科动物是狗。

如本文所用，炎症性疾病或病症包括胃肠道炎症。

此外，本公开的主题提供了一种动物食物组合物，其表现出良好的整体适口性和消化率，特别是对狗而言，并且在整个制造过程中保持稳定。

更特别地，本公开的主题还提供了一种动物食物组合物，该食物组合物可以包括食品补充剂、盖料组合物和/或完整的食物组合物。本文公开的动物食物组合物由食品补充剂或完整的食物组合物组成，包含本文指定量的甘草甜素源。在一些实施方式中，该食物组合物为湿食物组合物的形式，例如肉汁组合物。可替代地，该食物组合物为干食物组合物的形式，例如粗磨食品的形式。

为了清楚起见而非限制，本公开主题的具体实施方式分为以下小节：

6.1.定义

6.2.动物食物组合物；

6.3.制备动物食物组合物的方法；和

6.4.治疗应用。

6.1.定义

本说明书中使用的术语在本公开的上下文中以及在使用各术语的特定上下文中通常具有其在本领域中的通常含义。下文或本说明书的其他地方讨论了某些术语，以在描述本发明的方法和组合物以及如何制造和使用它们时为专业人员提供额外的指导。

出于解释本说明书的目的，用以下定义将适，并且在适当的情况下，以单数使用的术语也将包括复数，反之亦然。如果下文所述的任何定义与通过引用并入本文的任何文件相冲突，则应以下文所述的定义为准。

如本文中所用，当与权利要求和/或说明书中的术语“包含(comprising)”一起使用时，词语“一(a)”或“一(an)”可以表示“一个(one)”，但它们也符合“一个或多个(one ormore)”、“至少一个(at least one)”和/或“一个或多于一个(one or more than one)”的含义。

术语“约(about)”或“大约(approximately)”是指在由本领域的普通技术人员测定的特定值的可接受误差范围内，这将部分取决于如何测量或测定该值，即，测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以表示在三个或多于三个标准偏差内。可替代地，“约”可以表示给定值的至多20％、优选至多10％、更优选至多5％并且更优选至多1％以内的范围。可替代地，特别是对于系统或过程，该术语可以表示在某值的一个数量级内，优选地在五倍以内，并且更优选地在二倍以内。

如本文所用，术语“包含(comprise(s))”、“包括(include(s))”、“具有(having)”、“具有(has)”、“可以(can)”、“含有(contain(s))”及其变体意在作为开放式过渡短语、术语或词语，不排除附加的动作或结构。本公开还考虑了其他实施方式“包含(comprising)”、“由……组成(consisting of)”和“基本上由……组成(consisting essentially of)”本文所述的实施方式或要素，无论是否明确阐述。

如本文所用，术语“约(about)”或“大约(approximately)”是指在由本领域的普通技术人员测定的特定值的可接受误差范围内，这将部分取决于如何测量或测定该值，即，测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以表示在三个或多于三个标准偏差内。可替代地，“约”可以表示给定值的至多20％、优选至多10％、更优选至多5％并且更优选至多1％以内的范围。

如本文所用，术语“过敏性的(allergic)”是指免疫系统对通常无害的物质(例如环境中存在的物质)失调或不受调节的敏感性，特别是超敏反应。如本文先前所述，过敏性炎症性皮肤病的特征是皮肤上产生红斑、疼痛、发红、肿胀和小水泡或丘疹。常受特应性皮炎影响的身体部位包括头部、耳廓、足部、腹侧腹部和腋窝。常见的过敏诱因包括但不限于：空气中的过敏原，例如花粉、动物皮屑、尘螨和霉菌；某些食物，特别是花生、木本坚果、小麦、大豆、鱼、贝类、蛋类和奶；昆虫叮咬，例如蜜蜂或黄蜂的叮咬；药物，特别是青霉素或基于青霉素的抗生素；乳胶或所接触的其他可引起皮肤过敏反应的物质；过敏性炎症性皮肤病包括特应性皮炎、跳蚤过敏性皮炎、荨麻疹、昆虫叮咬过敏、血管性水肿、吸入性过敏、吸入性过敏性皮炎、食物过敏性皮炎、接触性皮炎、粟粒性皮炎、嗜酸性肉芽肿、头颈部瘙痒和全身瘙痒。因此，在本文中应理解，术语“过敏性的”既可以与“自身抗原(auto-antigens)”相关，也可以与外源性抗原相关。

如本文所用，术语“动物(animal)”或“动物(animals)”是指反刍动物、家禽、猪、哺乳动物、马、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、仓鼠、牛、猫或犬科动物。在具体的实施方式中，术语“动物”是指犬科动物。例如，但不限于此，动物可以是企鹅、猎鹰、刺豚鼠、美洲红隼、蛇、熊、秃鹰、蚂蚁、黑斑羚、羚羊、犰狳、澳大利亚灌丛火鸡、鹿豚、白头鹫、长冠八哥、狐狸、蝙蝠、太阳鸟、蜜蜂、甲虫、熊猫、熊狸、天堂鸟、蟒、倭黑猩猩、白纹牛羚、棕熊、蚓螈、骆驼、狞猫、变色龙、猎豹、黑猩猩、龙猫、慈鲷、云豹、眼镜蛇、美冠鹦鹉、鳄鱼、鹰、亚洲豺犬、海豚、鸭嘴兽、针鼹、大象、鸸鹋、火烈鸟、马岛獴、青蛙、蟾蜍、加拉帕戈斯(galapagos)、狮尾狒狒、大食蚁兽,大熊猫、毒蜥、长颈鹿、山羊、绵羊、青蛙、大猩猩、胡锦雀、关岛秧鸡、原驼、长尾猴、河马、犀鸟、鹮、鬣蜥、水雉、美洲豹、鹭鹤、袋鼠、小袋鼠、翠鸟、王蛇、卷尾浣熊、几维(kiwi)、山羚、考拉、锦鲤、科莫多巨蜥、瓢虫、笑翠鸟、狐猴、豹、狮子、蜥蜴、猞猁、金刚鹦鹉、鹊鹅、海牛、山魈、白眉猴、有袋动物、猫鼬、椋鸟、猴、豹猫、狓(okapi)、负鼠、猩猩、大羚羊、鸵鸟、水獭、猫头鹰、非洲野狗(painted dog)、鹦鹉、孔雀、鹈鹕、北极熊、豪猪、草原犬鼠、叉角羚、普氏野马、浣熊、白腹麻鸭、小熊猫、驯鹿、犀牛、环尾猫熊、岩蹄兔、赛加羚羊、蝎子、海狮、文书鸟、薮猫、合趾猴、雪豹、蜘蛛、鹳、太阳熊、苏里南蟾蜍、扭角羚、貘、袋獾、马岛猬、虎、巨嘴鸟、大蜥蜴、乌龟、秃鹫、疣猪、横斑梅花雀、鲸鱼、非洲水牛、狼、毛鼻袋熊或斑马。

如本文所用，术语“犬科动物”包括选自由狼、郊狼、胡狼、澳洲野犬、豺、狐狸、貉和狗所组成的组中的动物，包括宠物动物。如本文所用，“狗”包括野狗和家养狗。在具体的实施方式中，术语“狗”是指家养狗。

如本文所用，术语“药物”是指针对动物疾病具有治疗、治愈或预防特性的任何物质或组合物。延伸而言，医药产品包括可用于或施用于动物以进行医学诊断或通过发挥药理学、免疫学或代谢作用来恢复、纠正或改变其生理功能的任何物质或组合物。

在本文的具体实施方式中，提及“实施方式(embodiments)”、“一种实施方式(anembodiment)”、“一个实施方式(one embodiment)”、“在各实施方式中(in variousembodiments)”等表示所述的实施方式可以包括特定的特征、结构或特性，但可能并不是每个实施方式都包括所述特定的特征、结构或特性。此外，此类短语不一定指相同的实施方式。此外，当结合一种实施方式描述一个特定特征、结构或特性时，认为无论是否明确描述，本领域的技术人员都知晓结合其他实施方式影响此类特征、结构或特性。在阅读具体实施方式之后，相关领域的技术人员将非常清楚如何在替代实施方式中实施本公开。

如本文所用，术语“对映异构体(enantiomers)”是指一对互为不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物或外消旋体。在适当的情况下，该术语用于表示外消旋混合物。

如本文所用，术语“对映纯”是指在检测限内由单个对映异构体组成的样本。

如本文所用，术语“非对映异构体”是指具有至少两个非对称原子但彼此不是镜像的立体异构体。绝对立体化学是根据Cahn-Ingold-Prelog R—S系统指定的。当化合物是纯对映异构体时，每个手性碳处的立体化学可以用R或S指定。绝对构型未知的解析化合物可以根据其在钠D线波长下使平面偏振光旋转的方向(右旋或左旋)指定为(+)或(-)。本公开主题的化合物含有一个或多个非对称中心，因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其他立体异构形式，其可以根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。本公开的主题意在包括所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间体混合物。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行解析。如果该化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果该化合物含有双取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有互变异构形式也应包括在内。

如本文所用，术语“异构体”是指具有相同分子式但原子排列和构型不同的不同化合物。此外，如本文所用，术语“立体异构体”是指对于本公开主题的给定化合物可以存在的各种立体异构构型中的任何一种，并且包括几何异构体。可以理解的是，取代基可以附接在碳原子的手性中心。因此，术语立体异构体包括化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。此外，如本文所用，术语“结构异构体(constitutional isomers)”是指具有相同数量和类型原子但原子连接方式不同的不同化合物，例如但不限于互变异构体。

如本文所用，术语“食物组合物”或“饮食”涵盖所有食物、饮食、食品补充剂或可能含有蛋白质、碳水化合物和/或粗脂肪的材料。食物也可以含有补充物质或添加剂，例如矿物质和维生素(参见《韦氏大学词典》(Merriam-Webster’s Collegiate Dictionary)，第10版，1993年)。此类食物组合物可以是营养全面的，也可以不是营养全面的。在一个实施方式中，根据本公开主题的动物食物组合物是营养全面的食物组合物。说明性地，本文所述的食物组合物可以包括但不限于蛋白质、粗脂肪、灰分、粗纤维、淀粉、钙、磷、钠、氯化物、钾、镁、铁、水、铜、锰、锌、硒、维生素A、维生素D3、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素B7、维生素B9、氯化胆碱、花生四烯酸、ω3脂肪酸或ω6脂肪酸。

如本文所用，“食品补充剂”是指浓缩的营养素源、用于营养或生理目的的物质、或意在弥补动物常规饮食中的不足的植物和植物制剂。食品补充剂通常是胶囊、锭剂、片剂、丸剂、粉末袋或液体形式(安瓿瓶、带有滴管的小瓶)。

如本文所用，术语“炎症”是指对细胞损伤的局部反应，其特征是毛细血管扩张、白细胞浸润、发红、发热和疼痛。

如本文所用，“营养全面的”意味着该组合物为动物(并且在特定的实施方式中，是狗)提供全面且均衡的营养需求。因此，营养充足的饲料是可以作为唯一口粮喂养所述动物(例如，所述狗)并且能够在没有额外食物(水除外)的情况下维持生命的饲料。该食物组合物可以含有载体、稀释剂或赋形剂。根据预期用途，可以选择适合动物使用的载体、稀释剂或赋形剂，例如适合犬科动物使用，例如狗。一般而言，营养全面的组合物包含至少一种蛋白质(或多肽)源例如蛋白质提取物、至少一种维生素源、至少一种矿物质源、至少一种微量元素源和至少一种脂肪源。

如本文所用，术语“预防”也可以包括降低动物中给定病况发生或再次发生的可能性。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”表示逆转、缓解、抑制该术语适用的疾病或病症的进展或者改善该术语适用的疾病或病症，或者逆转、缓解、抑制这种疾病或病症的一种或多种症状的进展或者改善这种疾病或病症的一种或多种症状。

如本文所用，术语“湿食物”或“湿食物组合物”通常是指相对于该食物组合物的总重量，具有约30重量％或更多、通常超过约40重量％的水分含量的食物组合物。优选地，相对于该食物组合物的总重量，湿食物组合物的水分含量小于约90重量％。通常，其是包括最终灭菌步骤(而不是干燥步骤)的过程的最终产品。在特定的实施方式中，湿食物包括大块形式，更特别是肉汁形式中的肉块。优选地，湿食物包括肉块和肉汁、大块的肉冻、面包、肉饼、慕斯、肉糜、小块形式。“肉块和肉汁”产品包括通过制作肉糜并将这种肉糜在压力下通过出口然后烹饪而制备的预成型的肉粒。将产品(例如熟肉)切成大块，最后与肉汁或酱汁混合。然后将这两种成分装填到容器中，通常是罐或小袋，其被缝合或密封并消毒。与碎肉饼相反，肉块和肉汁组合物在制备时具有物理上分离的、离散的大块(即碎肉块和谷物块)。这些离散的颗粒存在于最终容器中的肉汁型液体中。喂食时，肉块和肉汁产品会从罐中流出，并且可以容易地与其他干产品混合。虽然肉块和肉汁产品可以更好地保持各个成分的完整性，但是肉块和肉汁产品的异质配方有时并不受消费者青睐。湿食物组合物通常被包装在罐状容器中，并且由于其中含有水分而在外观上被认为是“湿的”。本领域中通常已知两种类型的湿组合物。第一种在本领域中被称为“碎肉饼”。肉饼产品通常是通过在加热下接触各成分的混合物而制备，以产生基本均匀的胞内蜂窝状团块或“碎肉饼”。然后将碎肉饼块装入圆柱形容器中，例如罐头。包装后，碎肉饼会呈现容器的形状，因此在喂食伴侣动物时，必须切开碎肉饼。优选地对湿食物组合物进行包装。通过这种方式，消费者能够从包装上识别食品中的成分，并确认其适合所述特定的宠物。包装可以是金属、塑料、纸张或卡片。

如本文所用，术语“干食物”或“干食物组合物”通常是指相对于该食物组合物的总重量水分含量小于约12重量％、相对于该食物组合物的总重量水分含量通常甚至小于约7重量％的食物或组合物。在特定的实施方式中，根据本公开主题的干食物具有至多约12重量％的水分含量。在一些实施方式中，所述干食物具有约7重量％或更少的水分含量，例如约5重量％。在特定的实施方式中，相对于该食物组合物的总重量，该干食物可以具有超过约3重量％的水分含量。例如，本文提供的实例说明了一种相对于食物组合物的总重量具有约9.5重量％的水分含量的干食物。在某些实施方式中，干食物由粗磨食品组成。在非限制性示例中，粗磨食品包括颗粒；丸粒；小块宠物食品、脱水肉、肉类似物、蔬菜及其组合；以及宠物零食，例如肉干或蔬菜干、生皮和饼干。干食物组合物可以通过将原料混合在一起并揉捏以制成可烹饪的一致面团来制造。通常，其可以是包括挤出步骤和随后的干燥步骤的过程的最终产品。

制作干食物的过程通常通过烘焙和/或挤出来完成。通常将面团送入被称为膨胀机和/或挤出机的机器中，该机器使用加压蒸汽或热水来烹饪原料。在挤出机内，面团处于极端压力和高温下。然后将面团推过模具(特定尺寸和形状的孔)，然后用刀切下。将膨化的面团块制成粗磨食品，方法是将其通过干燥机，使水分降至规定的目标，确保食物在食用前的稳定性。然后向粗磨食品喷洒脂肪、油、矿物质、维生素、天然提取物混合物，并且任选地密封在包装中。优选地对干食物组合物进行包装。通过这种方式，消费者能够从包装上识别食品中的成分，并确认其适合所述特定的宠物，即狗。包装可以是金属、塑料、纸张或卡片。

如本文所用，术语“半湿食物”或“半湿食物组合物”通常是指相对于该食物组合物的总重量，具有约12重量％至约30重量％的中等水分含量的食物组合物。因此，此类半湿食物组合物通常是允许水分含量值介于干食物和湿食物之间的工艺的最终产品。在一些实施方式中，所述工艺可以包括添加保湿剂的步骤。在一些实施方式中，所述工艺包括挤出步骤和随后的用过热蒸汽(SHS)处理步骤。在一些实施方式中，相对于该食物组合物的总重量，根据本公开主题的半湿食物含有超过约12重量％且至多约30重量％的水分。说明性地，相对于该食物组合物的总重量，半湿食物组合物具有约11重量％至约20重量％的水分，和/或约0.64至约0.75的水分活度，优选地两者兼有。

作为非限制性示例，半湿食物可以使用过热蒸汽(SHS)工艺获得，例如公开的专利申请W02009/018990、W02009/018996、WO2010/112097、WO2014/122072、WO2016/071372和/或WO2016/071367中所述的工艺或方法，其公开内容通过引用整体并入本文。

如本文所公开的，在某些实施方式中，当动物食物组合物是半湿食物时，其由软的半湿粗磨食品组成。

如本文所公开的，动物食物组合物的“水分含量”可以通过干燥失重法测定，其包括以下步骤：

(a)称量食物组合物样品，从而获得总重量；

(b)在烘箱中加热步骤a)的样品(例如135±2℃，240分钟)，直至水分全部排出，从而获得干燥样品；

(c)称量干燥样品；从而获得干重；

(d)计算总重量与干重之差，从而获得水分含量，如下所示：

水分含量＝(总重量)-(干重)

如本文所用，术语“水分活度”是指食物组合物中水的蒸气分压除以标准状态下水的蒸气分压的比值。可以采用本领域技术人员已知的几种方法测量水分活度，例如但不限于电阻电解式、电容式或露点湿度计。最优选地，其是指由国际标准ISO 21087规定的与测定动物食品和动物饲料中的水分活度相关的方法。

如本文所用，“溶剂”可以指乙酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、甲酸、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、正己烷、苯、甲苯、乙醚、氯仿、1,4-二氧六环、水或其组合，优选地为水。在非限制性实施方式中，溶剂是约80％w/w的水和约20％w/w的乙醇的混合物。

如本文所用，术语“重量百分比”或“wt％”或“按重量计”意在指：(i)组合物中成分/组分的以重量计的量占该组合物总重量的百分比；或(ii)材料中成分/组分的以重量计的量占最终材料或产品重量的百分比。除非另有说明，否则本文表述的所有重量百分比均按食物组合物干物质总重量的重计量。

如本文所用，以重量/kcal表示的成分的量由单位总动物食物组合物的代谢能(ME)的所述成分的重量组成。如本文所用，ME参数意在表示食用后直接代谢的食物组合物的能量值。在本公开主题的范围内，可以通过本领域已知的任何合适的方法测量ME值。说明性地，可以使用喂养试验测量ME值。实际上，在实验室中测定食物的总能量(GE)，并记录动物所吃的食物量。收集动物的粪便和尿液，测定各自的能量，分别称为粪能(FE)和尿能(UE)。然后如下计算ME：

ME(kcal/kg)＝[GE-(FE+UE)]/kg所食用的食物。

可替代地，ME值可以通过数学方法进行测量，特别是考虑到组合物中粗脂肪(CF)、粗蛋白(CP)和NFE(碳水化合物)的百分比。实际上，每个百分比都乘以其各自的阿特沃特系数(Atwater Factors)。然后将所得总和乘以10。该数学方法可以由以下公式表示：

ME(kcal/kg)＝10x[(3.5xCP)+(8.5xCF)+(3.5xNFE)]。

代谢能通常可根据标准方法测定，特别是根据美国国家科学研究委员会的方法确定。

如本文所用，以重量/千克食物组合物(例如重量/千克全面食物)表示的成分的量由单位重量(以千克为单位)的食物组合物(例如所述全面食物)的所述成分的重量组成。如本文所用，“全面食物”可以指为满足动物的能量、蛋白质、脂肪、维生素和矿物质需求而配制的所有膳食成分的定量混合物。如本文所用，以重量/千克体重(Bwt)/天表示的成分的量是单位体重(以千克为单位)的动物(例如，狗)的所述成分的每日量。在某些实施方式中，重量/千克体重是指每公斤所述动物体重喂养给该动物的成分的重量。

6.2.动物食物组合物

在某些实施方式中，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症的动物食物组合物可以包含甘草甜素、附加成分和添加剂。在特定的实施方式中，附加成分可以包括姜黄素、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E或其组合。在某些实施方式中，添加剂可以包括蛋白质、粗脂肪、纤维、无氮浸出物、碳水化合物、淀粉和/或其组合。

在某些实施方式中，本公开的主题可以被配制为动物食物组合物。在特定的实施方式中，可以根据喂养指南给狗喂食该动物食物组合物。

6.2.1.甘草甜素

如本文所用，术语“甘草甜素”是指光果甘草根(Glycyrrhiza glabra root)(即甘草(licorice)或甘草(liquorice))的成分。甘草甜素是甘草中最主要的化合物，是三萜糖苷。甘草是一种多年生植物，天然存在或栽培于欧洲和亚洲。此外，甘草甜素被认为具有多种药理作用，例如抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化和保肝作用(Sato等人，1996年；Rahman等人，2006年)。

甘草甜素的结构包含三萜部分(甘草次酸(glycyrrhetinic acid))和两个艾杜糖醛酸残基。甘草甜素的其他名称包括甘草酸(Glycyrrhizinic acid)、甘草酸(Glycyrrhizic acid)、甘草次酸糖苷和(3-β,20-β)-20-羧基-11-氧代-30-诺仑-12-烯-3-基-2-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基-α-D吡喃葡萄糖醛酸。

甘草甜素可以通过本领域技术人员已知的几种提取技术从各种天然植物中提取，例如超临界CO₂萃取、双水相萃取、溶剂萃取、第三相萃取、微波辅助萃取或超声波辅助萃取。

甘草甜素的CAS登录号为：1405-86-3，其特征是具有以下结构：

根据一个实施方式，甘草甜素可以是其药学上可接受的盐和/或外消旋、对映异构、非对映异构或互变异构形式中的一种。

药学上可接受的盐的非限制性实例是与酸或碱的盐，包括铵盐例如甘草酸单铵盐和碱金属盐例如甘草酸二钠、甘草酸三钠和甘草酸二钾。

在一个实施方式中，甘草甜素可以存在于一些天然存在的提取物和/或植物中，或通过化学方法获得(Shabkhiz MA、Eikani MH、Bashiri Sadr Z、Golmohammad F.从甘草根中过热水提取甘草酸，《食品化学》2016年，210:396-401(Shabkhiz MA,Eikani MH,BashiriSadr Z,Golmohammad F.Superheated water extraction of glycyrrhizic acid fromlicorice root.Food Chem.2016,210:396-401))。

根据一个实施方式，甘草甜素可以从甘草甜素源(例如粗甘草)中提取。甘草甜素源可以是获自植物材料的含甘草甜素的提取物。优选地，可以通过包括至少以下步骤的提取方法从含有甘草甜素的植物材料(例如粗甘草)中获得含甘草甜素的提取物：

(a)提供含有甘草甜素的植物材料；

(b)研磨步骤a)的植物材料，优选地在溶剂中，从而获得研磨混合物；

(c)从研磨混合物中提取甘草甜素，从而获得含甘草甜素的提取物；

(d)可选地，过滤甘草甜素提取物，从而获得经过滤的甘草甜素提取物；

(e)可选地，浓缩经过滤的甘草甜素提取物；

(f)可选地，对经过滤的甘草甜素提取物进行喷雾干燥，从而获得粉末；和

(g)可选地，将粉末过筛。

如本文所用，“含有甘草甜素的植物材料”是指甘草甜素源、优选光果甘草根、最优选含甘草甜素的甘草提取物或含甘草甜素的粗甘草。

根据一些实施方式，术语“植物(plants)”或“植物(plant)”包括甘草(glycyrrhiza)。在具体实例中，甘草选自由以下所组成的组中：刺果甘草(glycyrrhizaacanthocarpa)、粗毛甘草(glycyrrhiza aspera)、直甘草(glycyrrhiza astragalina)、白花甘草(glycyrrhiza bucharica)、刺毛甘草(glycyrrhiza echinate)、无腺毛甘草(glycyrrhiza eglandulosa)、黄甘草(glycyrrhiza eurycarpa)、臭甘草(glycyrrhizafoetida)、恶味甘草(glycyrrhiza foetidissima)、glycyrrhiza frearitis、光果甘草(glycyrrhiza glabra)、glycyrrhiza gontscharovii、glycyrrhiza iconica、胀果甘草(glycyrrhiza inflata)、膜夹甘草(glycyrrhiza korshinskyi)、北美甘草(glycyrrhizalepidota)、刺果甘草(glycyrrhiza pallidiflora)、圆果甘草(glycyrrhizasquamulose)、三叶甘草(glycyrrhiza triphylla)、乌拉尔甘草(glycyrrhiza uralensis)和云南甘草(glycyrrhiza yunnanensis)。

术语“甘草(licorice)”或“甘草(liquorice)”包括粗甘草、甘草根和光果甘草根。在非限制性实施方式中，甘草甜素源由甘草根提取物(LRE)组成。

给定植物源、提取物或食物组合物中的甘草甜素的量可以以每给定植物源、提取物或组合物的干物质总重量的重量表示。

相对于甘草干物质的总重量，甘草可以含有约1重量％至约30重量％、约1重量％至约25重量％、约5重量％至约20重量％、约6重量％至约20重量％或约6重量％至约12重量％的甘草甜素。如本文所用，约6重量％至约12重量％的甘草甜素包括基于甘草根干物质的总重量，约6.0重量％、约6.5重量％、约7.0重量％、约7.5重量％、约8.0重量％、约8.5重量％、约9.0重量％、约9.5重量％、约10.0重量％、约10.5重量％、约11.0重量％、约11.5重量％、约12.0重量％的甘草甜素。

甘草可以从市售来源获得，例如Naturex(纳图瑞克斯)提供的甘草根PE 12％甘草甜素制剂(产品编号；ED161596)。

在非限制性实施方式中，甘草甜素源包括含有甘草甜素的甘草或其提取物。还可以使用本领域技术人员已知的任何其他甘草甜素源，特别是除甘草之外的任何其他甘草甜素源。根据一些实施方式，甘草甜素源可以是纯甘草甜素。在一个非限制性实施方式中，甘草甜素源包括使用80％水和20％乙醇的混合物制备的含有12％甘草甜素的甘草根提取物。

在某些实施方式中，本公开的主题涉及一种用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法的动物食物组合物，其中所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。

在某些实施方式中，该动物食物组合物被配制成向动物提供每日量约0.02mg/kg至约2mg/kg、约0.03mg/kg至约2mg/kg、约0.05mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约0.8mg/kg、约0.2mg/kg至约0.6mg/kg、约0.02mg/kg至约1mg/kg或约1mg/kg至约2mg/kg体重的甘草甜素。

如本文所用，甘草甜素的每日量为约0.02mg/kg至约2mg/kg体重可以包括0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg和约2mg/kg体重。

在另一个实施方式中，该动物食物组合物被配制成向动物提供每日量约0.03mg/kg至约2mg/kg、约0.05mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约0.8mg/kg或约0.2mg/kg至约0.6mg/kg体重的甘草甜素。在特定的实施方式中，该动物食物组合物被配制成提供每日量约0.2mg/kg体重、约0.4mg/kg体重或约0.6mg/kg体重的甘草甜素。

在某些实施方式中，含有甘草甜素源的动物食物组合物可以用作药物，其中该动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。在某些实施方式中，该药物向动物提供每日量约0.02mg/kg至约2mg/kg、约0.02mg/kg至约1mg/kg或约1mg/kg至约2mg/kg体重的甘草甜素。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源，该甘草甜素源包含基于该动物食物组合物干物质的总重量，至少约5mg/kg的量的甘草甜素。在某些实施方式中，基于动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量为约5mg/kg至约100mg/kg。在特定的实施方式中，基于动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量为约5mg/kg至约50mg/kg、约5mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约75mg/kg、约15mg/kg至约50mg/kg、约20mg/kg至约45mg/kg或约50mg/kg至约100mg/kg。

在某些实施方式中，基于动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量为至少约5mg/kg。如本文所用，基于动物食物组合物干物质的总重量，至少约5mg/kg可以包括至少约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、约32mg/kg、约33mg/kg、约34mg/kg、约35mg/kg、约36mg/kg、约37mg/kg、约38mg/kg、约39mg/kg或约40mg/kg。

在某些实施方式中，基于动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量小于约100mg/kg。如本文所用，基于动物食物组合物干物质的总重量，小于约100mg/kg可以包括小于约99mg/kg、约98mg/kg、约97mg/kg、约96mg/kg、约95mg/kg、约94mg/kg、约93mg/kg、约92mg/kg、约91mg/kg、约90mg/kg、约89mg/kg、约88mg/kg、约87mg/kg、约86mg/kg、约85mg/kg、约84mg/kg、约83mg/kg、约82mg/kg、约81mg/kg、约80mg/kg、约79mg/kg、约78mg/kg、约77mg/kg、约76mg/kg、约75mg/kg、约74mg/kg、约73mg/kg、约72mg/kg、约71mg/kg、约70mg/kg、约69mg/kg、约68mg/kg、约67mg/kg、约66mg/kg、约65mg/kg、约64mg/kg、约63mg/kg、约62mg/kg、约61mg/kg、约60mg/kg、约59mg/kg、约58mg/kg、约57mg/kg、约56mg/kg、约55mg/kg、约54mg/kg、约53mg/kg、约52mg/kg、约51mg/kg或约50mg/kg。

6.2.2.其他成分

在某些实施方式中，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的动物食物组合物还包含亚油酸。

在特定的实施方式中，本文公开的用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的动物食物组合物还包含一种或多种姜黄素类化合物。

在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或其组合。在一些实施方式中，该动物食物组合物还可以附加地包含一种或多种维生素A、维生素B₃、维生素C、锌、维生素D、一种或多种脂肪酸和/或其组合。

6.2.2.1.姜黄素类化合物

如本文所用，术语“姜黄素类化合物(curcuminoid)”或“姜黄素类化合物(curcuminoids)”是指印度香料姜黄根粉中存在的酚类酚类化合物。姜黄根粉通常源自植物姜黄(Curcuma longa)的根。在姜黄属(Curcuma)姜科(Zingiberaceae)植物的其他物种的根中也发现了姜黄素类化合物。特别地，姜黄根粉可以含有相对于姜黄根粉干物质的总重量约60重量％至约80重量％的姜黄素、相对于姜黄根粉干物质的总重量约15重量％至约30重量％的脱甲氧基姜黄素以及相对于姜黄根粉干物质的总重量约2重量％至约6重量％的双脱甲氧基姜黄素。本公开主题的食物组合物中的姜黄素类化合物可以是任何形式，包括粉末或脂质提取物。在一个非限制性实施方式中，姜黄素类化合物可以在一些天然存在的提取物和/或植物中找到，也可以通过化学方式获得或合成。

在非限制性实施方式中，姜黄素类化合物源包括姜黄根粉提取物，即姜黄。在某些实施方式中，姜黄根粉提取物可以是来自Arjuna的或来自Naturex的姜黄根粉提取物。也可以使用本领域技术人员已知的任何其他姜黄素类化合物源。

姜黄素类化合物的其他可用来源还可以选自脂质体姜黄素、姜黄素纳米颗粒、姜黄素磷脂复合物(例如，MERIVA来源，占总姜黄素类化合物的约20％，Arjuna占总姜黄素类化合物的约90重量％)、姜黄素的结构类似物(例如，EF-24)、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素、四氢姜黄素和商业/DM，任何旨在提高姜黄素生物利用度的配方。

通常，除了姜黄之外，姜黄素类化合物还可以存在于其他植物材料中，例如爪哇姜黄(Curcuma xanthorrhiza)和莪术(Curcuma zedoania)。纯姜黄素类化合物在水中的溶解度较低。可以用有机溶剂(例如乙醇或丙酮)从含有姜黄素类化合物的植物(即姜黄根)中提取姜黄素类化合物。

在特定的实施方式中，根据本公开主题的姜黄素类化合物可以包括通式(I)的化合物：

其中R¹和R²独立地选自氢原子、甲氧基、甲基、羟基和乙氧基，或其药学上可接受的盐和/或外消旋、对映异构、非对映异构或互变异构形式中的一个。

在非限制性实施方式中，R¹和R²可以是相同的或不同的。

在非限制性实施方式中，姜黄素类化合物选自由姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双甲氧基姜黄素、四氢姜黄素或它们的组合所组成的组中。

作为参考，姜黄素(I)、去甲氧基姜黄素(II)、双甲氧基姜黄素(III)和四氢姜黄素(IV)的化学结构如下：

在某些实施方式中，姜黄素类化合物是姜黄素。在特定实施方式中，姜黄素类化合物(即姜黄素)源可以是姜黄根粉。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含范围为约0.01g/Mcal至约0.1g/Mcal、约0.01g/Mcal至约2g/Mcal、约0.01g/Mcal至约5g/Mcal、约5g/Mcal至约10g/Mcal或约0.01g/Mcal至约10g/Mcal的量的姜黄素类化合物源。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含低于约5g/Mcal、低于约2g/Mcal或低于约0.5g/Mcal的量的姜黄素类化合物源。

在特定的实施方式中，基于食物组合物干物质的总重量，该动物食物组合物包含范围为约0.01重量％至约0.1重量％、约0.01重量％至约5重量％、约5重量％至约10重量％、约0.1重量％至约10重量％或约0.01重量％至约10重量％的量的姜黄素类化合物源。

如本文所用，约0.01重量％至约10重量％的姜黄素类化合物源可以包括基于食物组合物干物质的总重量约0.01重量％、约0.1重量％、约1重量％、约2重量％、约3重量％、约4重量％、约5重量％、约6重量％、约7重量％、约8重量％、约9重量％或约10重量％的姜黄素类化合物源。

如本文所用，约0.01重量％至约0.1重量％的姜黄素类化合物源可以包括基于动物食物组合物干物质的总重量约0.01重量％、约0.011重量％、约0.012重量％、约0.013重量％、约0.014重量％、约0.015重量％、约0.016重量％、约0.017重量％、约0.018重量％、约0.019重量％、约0.02重量％、约0.021重量％、约0.022重量％、约0.023重量％、约0.024重量％、约0.025重量％、约0.026重量％、约0.027重量％、约0.028重量％、约0.029重量％、约0.03重量％、约0.031重量％、约0.032重量％、约0.033重量％、约0.034重量％、约0.035重量％、约0.036重量％、约0.037重量％、约0.038重量％、约0.039重量％、约0.04重量％、约0.041重量％、约0.042重量％、约0.043重量％、约0.044重量％、约0.045重量％、约0.046重量％、约0.047重量％、约0.048重量％、约0.049重量％、约0.05重量％、约0.051重量％、约0.052重量％、约0.053重量％、约0.054重量％、约0.055重量％、约0.056重量％、约0.057重量％、约0.058重量％、约0.059重量％、约0.06重量％、约0.061重量％、约0.062重量％、约0.063重量％、约0.064重量％、约0.065重量％、约0.066重量％、约0.067重量％、约0.068重量％、约0.069重量％、约0.07重量％、约0.071重量％、约0.072重量％、约0.073重量％、约0.074重量％、约0.075重量％、约0.076重量％、约0.077重量％、约0.078重量％、约0.079重量％、约0.08重量％、约0.081重量％、约0.082重量％、约0.083重量％、约0.084重量％、约0.085重量％、约0.086重量％、约0.087重量％、约0.088重量％、约0.089重量％、约0.09重量％、约0.091重量％、约0.092重量％、约0.093重量％、约0.094重量％、约0.095重量％、约0.096重量％、约0.097重量％、约0.098重量％、约0.099重量％、约0.1重量％的姜黄素化合物源。

在某些实施方式中，姜黄素类化合物源可以由纯姜黄素类化合物组成。

在非限制性示例中，相对于该组合物总重量，适合小型犬(参见说明书中提供的分类)的动物食物组合物(特别是干食物形式)可以包含约0.002重量％的甘草甜素和约0.0275wt％的姜黄素类化合物。根据另一个示例，相对于该组合物总重量，适合中型犬或大型犬(参见说明书中提供的分类)的动物食物组合物(特别是干食物形式)可以包含约0.003wt％的甘草甜素和约0.0275wt％的姜黄素类化合物。本文所述的动物食物组合物可以被配制用于向动物提供每日量约77mg/kg的姜黄素类化合物，特别是以湿食物的形式。

6.2.2.2.亚油酸

如本文所用，术语“亚油酸”是指多不饱和ω-6脂肪酸，其是动物的两种必需脂肪酸之一。

为测量食物组合物中亚油酸的含量，本领域技术人员可以参考任何众所周知的技术。例如，可以使用基于标准NF EN ISO 5508/5509通过气相色谱法的方法。因此，在一些实施方式中，本文所述的动物食物组合物包含一种或多种作为亚油酸源的物质。

亚油酸源，即含亚油酸的物质，可以包括植物油，但也可以使用动物油或粗脂肪。亚油酸源可以包括红花油、葵花油、大豆油、芝麻油、菜籽油、其他植物油或动物油/粗脂肪、肉类或其中两种或更多种的组合。在某些实施方式中，亚油酸源选自由红花油、葵花油、大豆油、芝麻油、菜籽油、肉类及它们的组合所组成的组中。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含的亚油酸的量范围为约1g/Mcal至约20g/Mcal，约1g/Mcal至约10g/Mcal、约8g/Mcal至约12g/Mcal、约10g/Mcal至约12g/Mcal或约10g/Mcal至约20g/Mcal。

在某些实施方式中，相对于动物食物组合物干物质的总重量，该动物食物组合物包含范围为约2重量％至约10重量％、约2重量％至约5.5重量％或约5.5重量％至约10重量％的量的亚油酸。

6.2.2.3.EPA/DHA

如本文所用，术语“EPA/DHA”指由以下组成的脂肪酸或脂肪酸混合物：(i)仅二十碳五烯酸(EPA)，(ii)仅二十二碳六烯酸(DHA)或(iii)二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的组合(EPA+DHA)因此，如本文所用，“EPA/DHA”的量是指(i)不存在DHA时的EPA量，(ii)不存在EPA时的DHA量，或(iii)EPA和DHA组合的量。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的组合，其EPA:DHA的重量比为约0.0001:1000至约1000:0.0001。在某些实施方式中，相对于动物食物组合物干物质的总重量，EPA:DHA的重量比为约0.0001:100、约1:1或约0.1:0.0001。在特定的实施方式中，EPA:DHA的重量比可以为约0.1:100、约100:0.1或0.1至100。在特定的实施方式中，相对于动物食物组合物干物质的总重量，EPA与DHA的重量或能量比可以为0.0001至1000。

根据一些实施方式，该动物食物组合物包含约0.1g/Mcal至约7g/Mcal、约0.1g/Mcal至约3g/Mcal、约1g/Mcal至约2g/Mcal、约1.25g/Mcal至约1.75g/Mcal或约3g/Mcal至约7g/Mcal的量的EPA/DHA。在某些实施方式中，相对于动物食物组合物干物质的总重量，该动物食物组合物包含约0.1重量％至约5重量％、约0.1重量％至约2.5重量％或约2.5重量％至约5重量％的量的EPA/DHA。

6.2.2.4.牛磺酸

牛磺酸是一种从肉类和鱼中获得的非必需氨基酸。其作为前体分子刺激皮肤中鞘糖脂的产生。鞘糖脂具有抗微生物特性。

根据本公开主题的牛磺酸可以具有以下结构：

或其药学上可接受的盐和/或外消旋、对映异构、非对映异构或互变异构形式中的一个。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含约1g/Mcal至约2g/Mcal、约1g/Mcal至约1.5g/Mcal或约1.5g/Mcal至约2g/Mcal的量的牛磺酸。

6.2.2.5.叶黄素

如本文所用，“叶黄素”是指叶黄素(xanthophyll)并且是已知天然存在的类胡萝卜素中的一种。叶黄素是一种亲脂性分子，通常不溶于水。

叶黄素仅由植物合成，与其他叶黄素一样，叶黄素在绿叶蔬菜例如菠菜、羽衣甘蓝和黄胡萝卜中含量很高。叶黄素与玉米黄质是同分异构体，区别仅在于一个双键的位置不同。叶黄素的主要天然立体异构体是(3R,3’R,6’R)-β,ε-胡萝卜素-3,3’-二醇。叶黄素以脂肪酸酯的形式存在于植物中，其中一种或两种脂肪酸与两个羟基结合。

根据本公开主题的叶黄素可以具有以下结构：

或其药学上可接受的盐和/或外消旋、对映异构、非对映异构或互变异构形式中的一个。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含约0.001g/Mcal至约0.002g/Mcal、约0.001g/Mcal至约0.0015g/Mcal或约0.0015g/Mcal至约0.002g/Mcal的量的叶黄素。

6.2.2.6维生素E

维生素E是几种生物学上相似的化合物的统称，包括具有相同生物活性的生育酚和生育三烯酚。动物组织中最具生物活性的维生素E(也是最活跃的抗氧化物质)的生物形式是α-生育酚。维生素E无法在体内合成。维生素E可以防止细胞膜完整性的丧失，其会对细胞和细胞器功能产生不利影响。根据本公开主题的一个方面的维生素E可以是任何形式。其可以是液体、半固体或固体。其可以是生育酚或生育三烯酚。其可以是α生育酚、(d-x或dl-oc)β-生育酚(d-、B或dl-)、γ-生育酚(dot或dim)、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚或δ-生育三烯酚。在特定的实施方式中，其是α-生育酚。

在某些实施方式中，维生素E的来源不是限制性的。维生素E源可以包括维生素E醋酸酯(例如，醋酸生育酚)、维生素E醋酸酯吸附物或喷雾干燥的维生素E醋酸酯。在某些实施方式中，维生素E的来源是合成的，但也可以使用天然来源。

作为参考，根据本公开主题的维生素E可以具有以下结构：

或其药学上可接受的盐和/或外消旋、对映异构、非对映异构或互变异构形式中的一个。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含约0.2g/Mcal至约0.3g/Mcal、约0.2g/Mcal至约0.25g/Mcal或约0.25g/Mcal至约0.3g/Mcal的量的维生素E。

6.2.3.添加剂

在一些实施方式中，本文所述的动物食物组合物是营养全面的并且还可以含有添加剂，例如蛋白质、粗脂肪、粗纤维、无氮浸出物、灰分、矿物质、维生素或调味料。

应当容易地理解，本公开的主题所涵盖的动物食物组合物的每个实施方式均包含多种成分，与该动物食物组合物干物质的总重量相比，每种成分以给定的重量百分比包含在所述组合物中。

本文公开的动物食物组合物包含蛋白质、粗脂肪、灰分、纤维、NFE以及可选的一种或多种其他添加剂，例如维生素、矿物质等，基于所述动物食物组合物干物质的总重量，其中包含的每种成分的重量总和为100重量％。

6.2.3.1.蛋白质

在某些实施方式中，根据本公开主题的动物食物组合物还可以含有蛋白质源。因此，蛋白质水平应当足够高以确保维持瘦体重。动物食物组合物可以含有一种或多种不同的蛋白质源。

在特定的实施方式中，如本文所述的动物食物组合物可以包含制造过程中使用的蛋白质源中所含的多种蛋白质。在某些实施方式中，本文所述的动物食物组合物可以包含来自多种蛋白质源的多种蛋白质。

在某些实施方式中，蛋白质未被水解。在一些其他实施方式中，蛋白质可以以至少部分水解、或者甚至完全水解的形式存在。根据本公开主题的动物食物组合物可以掺入以肉类或动物源性材料(例如牛肉、鸡肉、火鸡、羊肉、鱼、血浆、骨髓或其组合)的形式存在的蛋白质。在某些实施方式中，本文所述的动物食物组合物可以不含肉类。在非限制性实施方式中，该不含肉类的动物食物组合物包含肉类替代蛋白质源，例如大豆、玉米面筋或任何其他含蛋白质的大豆产品，以提供蛋白质源。本文公开的动物食物组合物可以包含附加的蛋白质源，例如大豆浓缩蛋白、乳蛋白、麸质等。

6.2.3.2.粗脂肪

根据本公开内容的动物食物组合物还可以含有营养上适量的粗脂肪。本说明书中使用的表述“粗脂肪”包括任何食物可接受的粗脂肪和/或油，无论它们在室温下的稠度如何，即，无论所述“粗脂肪”是以基本上流体的形式存在还是以基本上固体的形式存在。根据本公开主题的动物食物组合物可以包含动物源和/或植物源的粗脂肪。粗脂肪可以由本领域技术人员已知的各种来源中的任何一种提供。植物粗脂肪源包括但不限于小麦、向日葵、红花、油菜籽、橄榄、琉璃苣、亚麻籽、花生、黑加仑籽、棉籽、小麦胚芽、玉米胚芽以及源自这些的油和其他植物粗脂肪源。动物源可以包括，例如但不限于，鸡肉粗脂肪、火鸡粗脂肪、牛肉粗脂肪、鸭肉粗脂肪、猪肉粗脂肪、羊肉粗脂肪、鱼油或任何肉类、肉类副产品、海鲜、乳制品、蛋类等。食物的粗脂肪含量可以通过本领域技术人员已知的任何数量的方法测定。

6.2.3.3.纤维

纤维可选地包含在本文公开的动物食物组合物中。表述“纤维”类似于“膳食纤维”，并且出于本公开主题的目的应被解释为总纤维，表示其包括可溶性纤维和不溶性纤维。可溶性纤维可以被定义为抵抗小肠中的消化和吸收并在大肠中经历完全或部分发酵，与不溶性纤维相反，不溶性纤维可以被定义为抵抗小肠中的消化和吸收并且抵抗大肠中的发酵的非淀粉多糖。可溶性纤维被认为通过向结肠细胞提供短链脂肪酸作为能量来源而具有益生元作用。不溶性纤维被认为可用于转运和压载作用。纤维的非限制性实例包括甜菜浆、瓜尔豆胶、菊苣根、车前子、果胶、蓝莓、蔓越莓、南瓜、苹果、燕麦、豆类、柑橘、大麦或豌豆，以及第二组，包括纤维素、全麦制品、小麦燕麦、玉米麸、亚麻籽、葡萄、芹菜、四季豆、花椰菜、马铃薯皮、水果皮、蔬菜皮、花生壳和大豆纤维。

6.2.3.4.无氮浸出物(NFE)

如本文所用，并且如本领域常规理解的，无氮浸出物(NFE)由可以任选地包含在本文公开的食物组合物中的可溶性碳水化合物部分组成。NFE可以包括多种可溶性多糖、淀粉、树胶、粘液和果胶(如果存在于所述食物组合物中)。因此，如本领域常规已知的，NFE不包括粗纤维材料中的不溶性碳水化合物部分，而某些实施方式中，粗纤维材料可以存在于所述食物组合物中。通常，食物组合物中无氮浸出物的含量通过从所述食物组合物的总干物质中减去每种其它成分(蛋白质、粗脂肪、粗纤维、灰分)的含量而测定。在食物组合物的定性和定量特征表示为能量密度(例如，以g/Mcal为单位的代谢能量密度)的实施方式中，NFE含量通过从整个食物组合物的能量值中减去其他每种成分(蛋白质、粗脂肪、粗纤维、灰分)的能量值而测定。在食物组合物的定性和定量特征表示为重量百分比(例如，基于所述组合物的干物质的总重量的重量百分比)的实施方式中，NFE含量通过从所述食物组合物的总重量中减去其他成分(蛋白质、粗脂肪、粗纤维、灰分)的重量百分比而测定。

6.2.3.5.碳水化合物

如本文所用，术语“碳水化合物”是指在体内水解时代谢产生能量的多糖和糖的混合物。食物的碳水化合物含量可以通过本领域技术人员已知的任何数量的方法进行测定。碳水化合物可以作为本领域技术人员已知的各种碳水化合物源提供，包括淀粉(例如，任何种类，玉米、小麦、大麦)、甜菜渣(其含有少量糖)和车前子。

6.2.3.6.淀粉

本文公开的动物食物组合物中可选地包含的无氮浸出物的重要来源包括淀粉。如本文所用，术语“淀粉”是指由直链淀粉和支链淀粉组成的多糖。淀粉以微粒的形式存在于许多植物组织中，直径通常在1μm至100μm之间，具体取决于植物源。在化学上，淀粉是由与α-D(1-4)和/或α-D(1-6)键连接在一起的α-D-吡喃葡萄糖基单元组成的多糖，并且由两种分子类型组成：直链淀粉，由大约1000个α-D(1-4)连接的葡萄糖组成的直链聚葡聚糖；支链淀粉——支链葡聚糖，由大约4000个葡萄糖组成，支链以α-D(1-6)键的形式出现。如本文所用，淀粉包括A型、B型和C型淀粉的各种晶体结构，其含有不同比例的支链淀粉。A型淀粉主要存在于谷物中，而B型淀粉主要存在于块茎和富含直链淀粉的淀粉中。C型淀粉由A型和B型淀粉的混合物组成，主要存在于豆类中。通常，可消化淀粉在小肠中被α-淀粉酶、葡糖淀粉酶和蔗糖-异麦芽糖酶分解(水解)，产生游离葡萄糖，然后被吸收。本公开的食物组合物中包含的淀粉可以是任何适合饮食目的的淀粉。事实上，用于制备本文所述的动物食物组合物的原料中所含的天然淀粉在制造过程中容易发生变化。该动物食物组合物中淀粉的量包括动物食物组合物原料总量中所含的淀粉的量。然而，本文公开的动物食物组合物中包含的淀粉的量等于用于制备所述动物食物组合物的原料中包含的淀粉的总量。如果尚未知晓，用于制备本文所述的动物食物组合物的原料的淀粉含量可以根据本领域已知的常规技术来测定，并且特别是根据已知的旋光法，例如根据NF EN ISO 10520来测定。在一些实施方式中，原料可以含有改性淀粉或预糊化淀粉。淀粉含量可以根据NF EN ISO 15914进行测定。

6.2.3.6.灰分

灰分含量，如果作为本文所述食物组合物的分析测量结果而指定，则为其中所含矿物质总量的测量值。矿物质含量是其中包含的特定无机成分的量的测量值，其包括钙(Ca)、钠(Na)、钾(K)和氯(Cl)。

6.2.4.动物食物组合物配方

本公开的主题还涉及一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，其中基于动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量高于5mg/kg。本文所述的动物食物组合物可以如上所述。

根据一个实施方式，基于该动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量为约5mg/kg至约100mg/kg。

在某些实施方式中，基于该动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量可以为约5mg/kg至约100mg/kg、约10mg/kg至约75mg/kg、约15mg/kg至约50mg/kg或约20mg/kg至约45mg/kg。

在某些实施方式中，甘草甜素源可以包括甘草属(Glycyrrhiza)植物中的至少一种，优选光果甘草根，即甘草。在某些实施方式中，甘草甜素源是甘草。在特定的实施方式中，该动物食物组合物中的甘草甜素源包括甘草根提取物。

在特定的实施方式中，基于该动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素源以约0.01g/Mcal至约0.1g/Mcal的量存在。在特定的实施方式中，基于该动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素源以约0.01重量％至约10重量％的量存在。

在某些实施方式中，该动物食物组合物是营养全面的动物食物组合物、食品补充剂或盖料组合物。在一些实施方式中，该动物食物组合物由粗磨食品组成。在特定的实施方式中，该动物食物组合物包括营养全面的动物食物组合物。在特定的实施方式中，该动物食物组合物被配制用于口服施用。在某些实施方式中，该动物食物组合物包括食品补充剂和/或药物。

在特定的实施方式中，如本文所述的动物食物组合物还包含亚油酸。在某些实施方式中，亚油酸源选自由红花油、葵花油、大豆油、芝麻油、菜籽油、肉类及它们的组合所组成的组中。

在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含姜黄素类化合物、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或其组合。在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或其组合。在一些实施方式中，该动物食物组合物还包含蛋白质源。

在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和姜黄素类化合物。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和亚油酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和EPA/DHA。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和牛磺酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物和亚油酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物和EPA/DHA。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物和牛磺酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄类化合物素和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、亚油酸和EPA/DHA。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、亚油酸和牛磺酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、亚油酸和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、亚油酸和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、EPA/DHA和牛磺酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、EPA/DHA和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、EPA/DHA和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素、牛磺酸和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、牛磺酸和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、叶黄素和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸和EPA/DHA。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸和牛磺酸。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、EPA/DHA、牛磺酸和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、EPA/DHA、牛磺酸和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸和叶黄素。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素和维生素E。在某些实施方式中，该动物食物组合物包含甘草甜素源、姜黄素类化合物、亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素和维生素E。

在特定的实施方式中，本公开主题的动物食物组合物包含提供每日量约0.02mg/kg至约2mg/kg体重的甘草甜素的量的甘草。在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含约0.01g/Mcal至约10g/Mcal的姜黄素类化合物、约1g/Mcal至约20g/Mcal的亚油酸、约0.1g/Mcal至约7g/Mcal的EPA/DHA、约1g/Mcal至约2g/Mcal的牛磺酸、约0.001g/Mcal至约0.002g/Mcal的叶黄素、约0.2g/Mcal至约0.3g/Mcal的维生素E或其组合。

在特定的实施方式中，本公开主题的动物食物组合物包含提供每日量约0.02mg/kg至约1mg/kg体重的甘草甜素的量的甘草。在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含约0.01g/Mcal至约5g/Mcal的姜黄素类化合物、约10g/Mcal至约20g/Mcal的亚油酸、约0.1g/Mcal至约3g/Mcal的EPA/DHA、约1g/Mcal至约1.5g/Mcal的牛磺酸、约0.001g/Mcal至约0.0015g/Mcal的叶黄素、约0.2g/Mcal至约0.25g/Mcal的维生素E或其组合。

在特定的实施方式中，本公开主题的动物食物组合物包含提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素的量的甘草。在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含约8g/Mcal至约12g/Mcal的亚油酸、约1g/Mcal至约2g/Mcal的EPA/DHA、约1g/Mcal至约2g/Mcal的牛磺酸、约0.001g/Mcal至约0.002g/Mcal的叶黄素、约0.2g/Mcal至约0.3g/Mcal的维生素E或其组合。

在特定的实施方式中，本公开主题的动物食物组合物包含提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素的量的甘草。在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含约10g/Mcal至约12g/Mcal的亚油酸、约1.25g/Mcal至约1.75g/Mcal的EPA/DHA、约1g/Mcal至约1.5g/Mcal的牛磺酸、约0.001g/Mcal至约0.0015g/Mcal的叶黄素、约0.2g/Mcal至约0.25g/Mcal的维生素E或其组合。

在特定的实施方式中，本公开主题的动物食物组合物包含提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素的量的甘草、约10.5g/Mcal的亚油酸、约1.5g/Mcal的EPA/DHA、约1.2g/Mcal的牛磺酸、约0.0013g/Mcal的叶黄素、约0.244g/Mcal的维生素E。

在某些实施方式中，该动物食物组合物还包含蛋白质源、粗脂肪源、纤维源、NFE源、碳水化合物源、淀粉源或其组合。

在某些实施方式中，动物是犬科动物。在特定的实施方式中，犬科动物是狗。在方式实施方式中，该动物食物组合物包括干、湿和/或半湿食物组合物或者由干、湿和/或半湿食物组合物组成。

本公开的主题还提供了如本文所述的试剂盒。该试剂盒包含：

(i)第一部分，其包含甘草甜素源；和

(ii)第二部分，其包含一种或多种附加成分；

用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，其中该试剂盒被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。在某些实施方式中，该试剂盒包含甘草甜素和一种或多种本文公开的附加成分。

在某些实施方式中，甘草甜素源可以含有甘草属(Glycyrrhiza)植物中的至少一种，优选光果甘草(Glycyrrhiza glabra)根，即甘草。在某些实施方式中，甘草甜素源是甘草。在特定的实施方式中，该试剂盒中的甘草甜素源包括甘草根提取物。

在特定的实施方式中，该试剂盒包含干、湿和/或半湿食物组合物。在某些实施方式中，该试剂盒包含营养全面的动物食物组合物、食品补充剂或盖料组合物(toppercomposition)。在一些实施方式中，该试剂盒包含粗磨食品。在一个实施方式中，该试剂盒被配制用于口服施用。在一个实施方式中，该试剂盒包含食品补充剂和/或药物。

6.2.5.犬种和喂食指南

本公开特别涉及评估动物健康和福祉的方法。伴侣动物的特征可能因体型、性别、品种和物种而异。鉴于家养动物接受了大多数兽医护理，针对最常见的家养动物(例如狗)所研究的趋势和个体动物特征通常可以指示所研究的方法在应用于其他动物时的效力。

本公开特别涉及确定犬属(Canis)动物口腔生物测定学的方法。犬属(Canis)包括家养狗(Canis lupus familiaris)、狼、郊狼、狐狸、豺、澳洲野犬，并且本公开可以用于所有这些动物。在一些实施方式中，受试者是家养狗，在本文中简称为狗。该犬属(Canis)是犬科(Canidae)的一部分，包括许多现存物种。

如本文所用，表述“体型类别”是指根据特定动物品种的平均体重对动物(例如，狗、猫等)的定义。与不同品种的动物相比，同一品种的动物(例如，狗、猫等)可以具有相对一致的身体特征，例如体型、毛色、生理和行为。值得注意的是，下文的讨论集中在狗身上，然而，其他伴侣动物和野生动物意在涵盖在本公开的范围内，并且本公开并非意在限于狗。

狗可以是任何品种的狗，包括玩具品种、小型品种、中型品种、大型品种或巨型品种。玩具品种的非限制性实例包括猴澳大利亚丝毛比熊犬、波洛尼亚犬(Bolognese)、骑士查理士王猎犬、吉娃娃犬、中国冠毛犬、棉花面纱犬、英国玩具布鲁塞尔格林芬犬、哈瓦那犬、意大利灵缇犬、日本犬、查理士王猎犬、罗秦犬(小狮子狗)、马尔济斯犬、迷你杜宾犬、蝴蝶犬、北京犬、博美犬、巴哥犬、俄罗斯玩具犬和约克夏小型品种的实例包括但不限于法国斗牛犬、比格犬、腊肠犬、潘布鲁克威尔斯柯基犬、迷你雪纳瑞犬、骑士查理士王猎犬、西施犬和波士顿中型犬种的实例包括但不限于斗牛犬、可卡犬、喜乐蒂牧羊犬、边境牧羊犬、巴吉度猎犬、西伯利亚哈士奇犬、达尔马提亚犬、杜宾犬、斯塔福郡斗牛大型犬种的实例包括但不限于长须牧羊犬、大丹犬、那不勒斯獒犬、苏格兰猎鹿犬、波尔多獒犬、纽芬兰犬、英国獒犬、圣伯纳犬、兰伯格犬和爱尔兰猎狼犬。杂交品种通常可以根据其体重分为玩具犬、小型犬、中型犬和大型犬。在某些实施方式中，狗是玩具品种。在某些实施方式中，狗是中型、大型或巨型品种。在一些实施方式中，狗是两个或更多个品种的混合。在这种情况下，混合品种的狗仍然可以根据其体重按体型进行分类，并且可能表现出与狗身上发现的两个或更多个品种中的每一个相关的特征(例如，行为特征、遗传特征等)。

世界犬业联盟(Fédération Cynologique Internationale)目前认可346个纯种犬种。可以通过例如观察狗的身体特征或通过遗传分析来鉴定狗的品种。纯种狗是同一品种的两只狗的后代，有资格在具有该品种狗的登记簿的认可的俱乐部或协会进行登记。存在许多纯种狗登记体系，其中最著名的是英国养犬协会(Kennel Club)。

表1.

在某些实施方式中，根据Salt等人，2017年(表1)选择狗的体型类别(Salt等人，2017年，用于监测不同体型的狗的体重的生长标准图表《公共科学图书馆：综合》12:e0182064(Salt et al.,2017.Growth standard chartsfor monitoring bodyweight indogs of different sizes PLoS ONE 12:e0182064.))。在其他实施方式中，根据替代指称选择狗的体型类别。小型品种可以对应于平均体重为约6.5 kg至约9 kg的动物。中型品种可以对应于平均体重在约9kg至约30kg之间的动物。大型品种可以对应于平均体重在约30kg至约40kg之间的动物。大型品种可以对应于平均体重超过约40kg的动物。

在其他实施方式中，根据替代指称选择狗的体型类别。小型品种可以对应于平均体重至多约10kg的动物。中型品种可以对应于平均体重为约10kg至约25kg的动物。大型品种可以对应于平均体重为约25kg至约45kg的动物。巨型品种可以对应于平均体重为至少约45kg的动物。

众所周知，给动物喂食的食物每日量可以取决于动物的体重。对于狗而言尤其如此。建议的食物每日量可以按表2提供。

表2.

体型类别名称	建议的食物每日量
		小型	约30g至约200g
中型	约100g至约400g
		大型	约200g至约600g
巨型	约360g至约900g

在特定的实施方式中，基于该动物食物组合物干物质的总重量，甘草甜素的量为约5mg/kg至约100mg/kg体重，约10mg/kg至约75mg/kg体重，约15mg/kg至约50mg/kg体重，或约20mg/kg至约45mg/kg体重。

因此，本领域技术人员可以容易地确定食物组合物中应包含的甘草甜素的量或量范围(以重量计)，从而为动物(例如犬科动物，特别是狗)提供本文公开的优选每日量的甘草甜素，例如以每kg体重的甘草甜素每日量表示。

说明性地，为了预防和/或治疗9kg重的小型犬的过敏性皮肤病(例如特应性皮炎)，每天提供180g全面的食物组合物(例如粗磨食品形式)，其中包含的甘草甜素的量应超过约0.27(0.03x 9)mg。因此，所述全面的食物应包含每100g全面食物超过约0.15mg的甘草甜素或者每kg全面食物约0.015mg的甘草甜素。

如本文先前所述，包含甘草甜素的动物食物组合物可以包括食品补充剂组合物(即，不全面的食物组合物)或全面的食物组合物。

6.3.制备动物食物组合物的方法

本公开的主题还包括一种制造本文指定的动物食物组合物的方法。用于制造所述的动物食物组合物的工艺可以根据本领域已知的任何方法进行。

可以通过将原料混合在一起并揉捏以制成可烹饪的一致面团或肉糜(即混合物)来制造该动物食物组合物。这也适用于在包装中的烹饪步骤之前其中成分被混合、均质化的液体。制作干食物的过程通常通过烘焙和/或挤出来完成。通常将面团送入被称为膨胀机和/或挤出机的机器中，该机器使用加压蒸汽或水来烹饪原料。在挤出机内，面团处于极端压力和高温下。然后将面团推过模具(特定尺寸和形状的孔)，然后用刀切下。将膨化的面团块制成粗磨食品，方法是将其通过干燥机，使水分降至规定的目标，确保食物在食用前的稳定性。然后可以向粗磨食品喷洒脂肪、油、矿物质、维生素、天然提取物混合物、适口剂(palatants)，并且任选地密封在包装中。

该组合物可以是如本公开主题所述的干食物、湿食物或半湿食物。

因此，本公开的主题提供了一种制造包含甘草甜素源的动物食物组合物的方法，其中包括以下步骤：

a)制备甘草甜素源；

b)可选地混合一种或多种附加成分和/或添加剂，从而提供混合物；和

c)可选地加热该混合物。

在非限制性实施方式中，通过该制造方法制造的动物食物组合物包括粗磨食品和/或包含蛋白质源。

在某些实施方式中，甘草甜素源在步骤b)中与选自由姜黄素类化合物源、亚油酸源、EPA/DHA源、牛磺酸源、叶黄素源、维生素E源及它们的组合所组成的组中的成分混合。

在某些实施方式中，甘草甜素源在步骤b)中与选自由亚油酸源、EPA/DHA源、牛磺酸源、叶黄素源、维生素E源及它们的组合所组成的组中的成分混合。

在实施方式中，甘草甜素源在步骤b)中与选自由亚油酸源、EPA/DHA源、牛磺酸源、叶黄素源、维生素E源、蛋白质源、粗脂肪源、纤维源或它们的组合所组成的组中的成分混合。

6.4治疗应用

本公开的主题提供了如本文所述的动物食物组合物用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病、优选地用于预防和/或治疗特应性皮炎(包括犬科动物、特别是狗的特应性皮炎)的用途。

如本文所讨论的，过敏性炎症性皮肤病可以包括特应性皮炎、跳蚤过敏性皮炎、荨麻疹、昆虫叮咬过敏、血管性水肿、吸入性过敏、吸入性过敏性皮炎、食物过敏性皮炎、接触性皮炎、粟粒性皮炎、嗜酸性肉芽肿、头颈部瘙痒和全身瘙痒中的至少一种，优选特应性皮炎，包括犬科动物(特别是狗)的特应性皮炎。

在某些实施方式中，该动物食物组合物用于预防和/或治疗患有炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的动物、更特别是患有特应性皮炎(即犬特应性皮炎)的动物的方法。

在特定的实施方式中，该动物食物组合物用于预防和/或治疗特应性皮炎。根据另一个的实施方式，该动物食物组合物用于预防和/或治疗犬特应性皮炎。根据又一个实施方式，该动物食物组合物用于减少管理炎症性疾病或病症或者过敏性炎症性皮肤病的病况所需的药物的剂量和频率。

本公开的主题还包括一种预防和/或治疗动物的炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，包括至少用根据本公开主题的动物食物组合物喂养动物的步骤。

在某些实施方式中，该动物患有过敏性炎症性皮肤病，优选地，该动物患有特应性皮炎，更优选地，该动物是患有犬特应性皮炎的狗。

本文所述的动物食物组合物可以预防或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病，优选特应性皮炎。在某些实施方式中，仅用本文所述的食物组合物喂养动物。在某些实施方式中，部分地用本文所述的组合物食物和另一种食物组合物喂养动物。在某些实施方式中，将所述食物组合物作为补充食物或药物喂食给动物。在任何这些公开的方案中，均获得了有益的效果。

在某些实施方式中，“部分地”是指所述动物食物组合物占动物餐食的至少约30％、优选地占所述动物餐食的至少约30％、甚至占所述动物餐食的至少约70％、甚至占所述动物餐食的至少约80％、甚至占所述动物餐食的至少约90％。

通常，每天给动物、特别是狗提供食物。在某些实施方式中，本文公开的动物食物组合物可以作为治疗期间唯一的营养全面的食物提供给待治疗的动物。根据这些实施方式，在治疗期间每天向动物提供所述营养全面的动物食物组合物。

在某些实施方式中，可以将本文所述的动物食物组合物与另一种动物食物组合物、优选地与另一种营养全面的动物食物组合物交替提供给待治疗的动物，该另一种营养全面的食物组合物可以从已知的动物食物组合物中选择，包括多种商业化的动物食物组合物，特别是多种商业化的狗食物组合物。

在特定的实施方式中，每隔一天提供所述动物食物组合物，因此按照每两天的时间表提供。在某些实施方式中，按照每三天、四天、五天、六天、七天或更多天的时间表提供所述动物食物组合物。

应当理解，在喂养动物、特别是狗的日常实践中，动物主人无法总是每天给动物喂食动物食物组合物。在某些实施方式中，当每隔一天给动物喂食本文所述的动物食物组合物时，可以充分发挥预防或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病、并且特别是预防或治疗犬过敏性皮炎的有益效果。在特定的实施方式中，每三天、四天、五天、六天或七天喂食动物将导致有益效果降低，这可能需要更长的治疗时间。

在不受任何特定理论束缚的情况下，在特定的实施方式中，高效预防或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病(例如完全高效地预防或治疗犬过敏性皮炎)需要至少隔天、最优选每天为动物、特别是狗提供本文所述的动物食物组合物。

喂养本文所述的动物食物组合物的时间段可以从数周到数年，主要取决于过敏性炎症性皮肤病(即特应性皮炎)的严重程度。

正如本公开中已经说明的，短时间(即1个月)的治疗足以减少瘙痒。

在某些实施方式中，在较长的一段时间内向待治疗的动物提供动物食物组合物，例如在9个月或更长的一段时间内；例如12个月或更长的一段时间内，或(i)根据包括向动物(特别是狗)只提供本文所述的动物食物组合物的喂养时间表，或(ii)根据交替提供本文所述的动物食物组合物和另一种动物食物组合物的时间表。

本公开还涉及一种预防和/或治疗患有过敏性炎症性皮肤病的动物的炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，包括至少提出包括本公开主题中定义的动物食物组合物的喂养建议的步骤。

本公开还涉及甘草甜素源在制备用于治疗过敏性炎症性皮肤病的组合物中的用途。

在某些实施方式中，该动物食物组合物抑制活化T细胞释放一种或多种白细胞介素靶点。如本文所述，白细胞介素4(IL-4)和/或白细胞介素5(IL-5)的过表达可以指示免疫应答倾向于过敏表型。在某些实施方式中，该动物食物组合物抑制活化T细胞释放IL-5。在某些实施方式中，该动物食物组合物抑制活化T细胞释放IL-4。在具体实施方式中，该动物食物组合物抑制活化T细胞释放IL-5和IL-4。在替代实施方式中，该动物食物组合物不会刺激白细胞介素2(IL-2)的增殖或释放。

在某些实施方式中，该动物食物组合物可以用于抑制活化T细胞释放I-L4或IL-5。在某些实施方式中，该动物食物组合物可以用于预防和/或治疗以活化T细胞释放的IL-4或IL-5增加为特征的疾病。在特定的实施方式中，该以活化T细胞释放的IL-4或IL-5增加为特征的疾病选自由过敏性炎症性皮肤病所组成的组中，特别是选自由以下所组成的组中：特应性皮炎、跳蚤过敏性皮炎、荨麻疹、昆虫叮咬过敏、血管性水肿、吸入性过敏、吸入性过敏性皮炎、食物过敏性皮炎、接触性皮炎、粟粒性皮炎、嗜酸性肉芽肿、头颈部瘙痒和全身瘙痒。在特定的实施方式中，该以活化T细胞释放的IL-4或IL-5增加为特征的疾病是特应性皮炎。

本公开的主题还包括一种包含甘草甜素源的试剂盒，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病、优选特应性皮炎(即犬特应性皮炎)的方法。

本公开还涉及试剂盒用于制备治疗过敏性炎症性皮肤病的组合物的用途，该试剂盒包括第一部分和第二部分，该第一部分包含甘草甜素源，该第二部分包含一种或多种附加成分。

在某些实施方式中，本公开的主题涉及一种包含甘草甜素源的试剂盒，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法，其中所述试剂盒被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的甘草甜素。

在某些实施方式中，可以将本文所述的试剂盒与另一种动物食物组合物或试剂盒、优选地与另一种营养全面的动物食物组合物或试剂盒交替提供给待治疗的动物，该另一种营养全面的食物组合物可以从已知的动物食物组合物中选择，包括多种商业化的动物食物组合物，特别是多种商业化的狗食物组合物。

在特定的实施方式中，每隔一天提供所述试剂盒，因此按照每两天的时间表提供。在某些实施方式中，按照每三天、四天、五天、六天或七天的时间表提供所述试剂盒。

本文所述的试剂盒用于预防或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病、优选特应性皮炎的方法。在某些实施方式中，仅用本文所述的试剂盒喂养动物。在某些实施方式中，部分地用本文所述的试剂盒和另一种食物组合物或试剂盒喂养动物。在某些实施方式中，将所述试剂盒作为补充食物或药物来喂养动物。在任何这些公开的方案中，均获得了有益的效果。

7.实施例

出于理解而非限制的目的，通过参考以下实施例将更好地理解本公开的主题，这些实施例作为本公开主题的示例而提供，而非作为限制。

实施例1：甘草甜素安全性研究

材料和方法

本临床试验的目的是证明给狗喂食三剂甘草根提取物形式的甘草甜素(Glycyrrhizin，Gly)28天的安全性，该剂量远高于动物食用(特别是狗食用)的推荐剂量。

狗。该研究纳入了16只私人拥有的健康成年犬，包括雌性和雄性。特别地，这些狗是体重在5kg至21kg之间的比格犬、布列塔尼猎犬或腊肠犬。12只狗为雌性，4只狗为雄性。由于先前对其他物种的研究表明，雌性动物更容易在暴露于甘草甜素后血压升高，因此选择了更多数量的雌性进行研究。

甘草甜素源。甘草甜素源由甘草根提取物提供，该甘草根提取物包含12重量％的甘草甜素，配制在明胶胶囊中。甘草根提取物购自Naturex(纳图瑞克斯公司)(法国阿维尼翁)，产品编号为DAB40178。该产品提供有分析证明书，HPLC(高效液相色谱)法显示其含有12.6％的甘草甜素。

将市售的药用级明胶胶囊(Capsuline(凯普修林公司)，美国佛罗里达州达尼亚滩)用重量精确的甘草粉和100％纯麦芽糊精粉(Bulk Powders，英国科尔切斯特)的混合物填充满。制备甘草粉和麦芽糊精粉称重的组合的方式是，当被混合在一起并放入胶囊中时，按照0.2mg/kg体重(Bwt)/天、然后0.4mg/kg Bwt/天、然后0.6mg/kg Bwt/天的时间表为狗提供每日甘草甜素剂量。

剂量。根据五个不同的体重组计算待施用给每只狗的剂量。每组分别称量胶囊。将甘草根提取物与麦芽糊精混合，以便向每只狗提供相同体积的总粉状材料。将胶囊放在湿宠物食物肉丸里喂食给狗。

总共给狗喂食了三种不同剂量的甘草甜素，每种剂量喂食28天。这些剂量分别为0.2mg/kg Bwt/天、0.4mg/kg Bwt/天和0.6mg/kg Bwt/天。

每只狗都经历了以下方案周期，其针对每个测试浓度重复进行。第一周期的剂量为0.2mg甘草酸(Gly)/kg Bwt/天。第二周期的剂量为0.4mg Gly/kg Bwt/天。第三周期的剂量为0.6mg Gly/kg Bwt/天。

方案周期：

第1天：进行基线测量：血压以及血液和尿液中的钾、钠和钙、肌酐和醛固酮浓度。

第0天：开始给予甘草(甘草甜素的浓度根据方案的第一、第二或第三周期进行调整，如上所述)。每天在早餐时给每只狗提供一剂。

第1-27天：每天在早餐时给每只狗提供一剂。

第2天、第4天、第7天、第14天、第21天和28天：测量血压以及血液和尿液中的钾、钠和钙、肌酐和醛固酮浓度。

第28天：开始洗脱，给狗恢复单独的维持饮食，即不再给它们喂食甘草。洗脱期持续两周。在第34天和第41天再次测量血压以及血液和尿液中的钾、钠和钙、肌酐和醛固酮浓度。

如果周期结束时狗的测量结果与基线测量结果相比发生显著变化，则研究结束。如果周期结束时狗的测量结果与基线测量结果相比没有显著变化，则继续进行方案的下一周期。

方案详情。甘草根提取物按照方案的每个周期给定的甘草甜素(Gly)浓度按顺序给药：0.2mg/kg Bwt/天、0.4mg/kg Bwt/天和0.6mg/kg Bwt/天。只有在证明前一个周期未导致血压(BP)或血液和尿液参数发生显著变化后，才启动该方案的第二周期和第三周期。

多次测量每只动物的血压，丢弃第一次读数。通过示波法(Oscillometricmethod)测量血压。每次测量时，如果显示狗的平均血压已升至潜在有害的水平(通常>160mmgHg)，则可能根据兽医的判断，将该狗从研究中移除(暂时或永久)。在研究开始之前，所有狗均已习惯示波装置和血压(BP)测量过程。如果在BP程序之前或期间有证据表明任何狗出现应激反应，则将停止该狗的程序，待该狗恢复平静后再重新开始。必要时可以对狗进行临时强化习惯化训练。如果这些措施未能解决问题，那么这只狗将被永久地从研究中移除，并用一只非常匹配的替代动物代替。已知所使用的3个品种的典型血压范围，并在研究期间判断BP测量值是否正常时予以考虑。对于所使用的3个品种，BP的正常参考范围是：

比格犬：收缩压140+/-15，舒张压79+/-13

腊肠犬：收缩压142+/-10，舒张压85+/-15

布列塔尼猎犬：收缩压131+/-16，舒张压74+/-14

进行BP测量的条件根据以下程序进行。

环境偏僻且安静。患者被注射镇静剂，并被允许适应测量室5-10分钟，然后尝试测量。然后轻轻地将动物以舒适的体位约束，最好是腹卧或侧卧，以限制从心脏底部到袖带(cuff)的垂直距离。袖口宽度约为袖带部位周长的30％-40％。跟踪袖带的尺寸，每次均使用相同尺寸。将袖带放置在右前腿上，而探头则被预先夹在右前腿上。这使得采集当天的应激反应和时间压力更小。所有动物每次测量时均使用右前腿。在可能的情况下，每次均由同一个人为同一只狗进行血压测量。

仅在患者平静不动时进行测量。丢弃第一次测量结果。总共记录了5个连续一致的值。在一些患者中，所测的血压随着测量的进行呈下降趋势。对这些动物继续进行测量直至下降趋于平稳，然后记录5个连续一致的值。

根据需要重复测量血压，并根据需要改变袖带位置以获得一致的值。血压值基于所记录的5次测量结果的平均值。

在上文方案描述中指示的日期采集少量血液样本(4ml)以测定血液中的钾、钠和钙、肌酐和醛固酮浓度。如上所述每天自由接取尿液(至少3ml)，以确定尿液中钾、钠和钙的浓度。还测量了尿肌酐浓度，以便可以计算钠、钾和钙的排泄分数(Fractional ExcretionRate，FER)。

FER根据以下方程式计算：

(尿钾x血清肌酐x 100)/血清钾x尿肌酐)。

由于甘草根提取物(licorice root extract，LRE)/Gly作为单一成分进行评估，因此直接使用胶囊中经测量的甘草量进行给药是最有效的。因此，将适当剂量的LRE称重装入明胶胶囊中，然后按照狗的正常喂食时间表给药。

统计数据：使用线性混合模型评估饮食(甘草甜素剂量)的效果。动物被建模为随机项。使用Tukey HSD进行多重比较的α校正。双侧检验的显著性水平设定为5％。

评估了两种血压建模方法。在第一种方法中，计算每只狗和每个序列的基线与4周后的血压差，并将其设为因变量。在第二种方法中，将4周后的血压作为因变量，而将基线时的血压作为模型的协变量。

结果

血压。下表3提供了各测试剂量的甘草酸苷(Gly)随着时间推移的总体平均收缩压(mmHg)：

表3.

平均值	第0天	第2天	第4天	第7天	第14天	第21天	第28天
								0.2mg Gly	120	127	125	126	126	122	121
0.4mg Gly	118	117	119	125	122	120	124
								0.6mg Gly	125	119	123	125	123	124	122

这些结果表明，对于任何测试剂量，第0天和任何后续时间点之间的血压均没有显著差异。

钾排泄分数。下表4提供了各测试剂量的甘草酸苷(Gly)随着时间推移的总体平均钾排泄分数。结果以尿液中排泄的钾与肾脏过滤和保留的钾量相比的百分比表示。

表4.

平均值	第0天	第2天	第4天	第7天	第14天	第21天	第28天
								0.2mg Gly	16.54	15.74	15.59	15.06	13.33	20.02	16.54
0.4mg Gly	16.02	15.56	16.02	15.72	16.87	16.09	16.27
								0.6mg Gly	16.48	18.08	17.48	13.15	15.64	14.93	16.48

这些结果表明，在任何测试剂量下，第0天和任何后续时间点之间的钾排泄分数没有显著差异。

血浆醛固酮浓度。下表5提供了各测试剂量的甘草酸苷(Gly)随着时间推移的总体平均血浆醛固酮浓度(以pmol/L为单位)：

表5.

平均值	第0天	第7天	第14天	第28天
					0.2mg Gly	62.13	45.13	49.75	44.83
0.4mg Gly	54.00	52.25	56.38	70.57
					0.6mg Gly	36.50	42.57	59.00	63.25

这些结果表明，在任何测试剂量下，第0天和任何后续时间点之间的血浆醛固酮浓度没有显著差异。

总之，根据本研究的结果，在测试的剂量和持续时间内，甘草甜素对成年犬的血压稳态、钾排泄分数和血浆醛固酮浓度没有显著影响。

实施例2：甘草甜素的免疫调节潜力

材料和方法

用于生物测定的甘草根提取物制剂。甘草根提取物(licorice root extract，LRE)获自威廉姆兰森和逊公司(William Ransom&Son PLC)(英国)。制备时，将20g根粉悬浮在100ml 20％乙醇蒸馏水溶液中。然后将悬浮液在适度搅动下加热至60℃持续2小时，然后将所得的提取物通过沃特曼(Whatman)No.4滤纸过滤。用经过滤的固体材料再次重复该提取过程。然后将汇集的滤液在40℃的旋转蒸发器中浓缩过夜，以产生糊状提取物。新鲜的植物化学提取物在氮气下储存于-20℃。根据供应商的规格，提取物的甘草甜素浓度为18％w/w。LRE的浓度基于提取物的湿重。所有测定均使用相同的提取物进行。

将甘草根提取物称重并以100mg/mL悬浮于二甲基亚砜(DMSO-西格玛(Sigma)英国)中，然后在完全组织培养基(CTCM；RPMI-1640培养基(西格玛(Sigma))加胎牛血清(Sigma)至5％、2mM L-谷氨酰胺(Sigma)、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(Sigma))中进一步稀释至4mg/mL。这些原液在CTCM中进一步稀释，以使检测孔中的最终浓度在0.3μg/mL至1000μg/mL之间。

分离人外周血单个核细胞(HuPBMC)。使用Telford等人的方法分离HuPBMC。(Telford等人，《国际免疫药理学》4(2004年)1455-1466(Telford et al.,InternationalImmunopharmacology.4(2004)1455-1466))。简而言之，在征得年龄20岁-50岁健康人类志愿者同意的情况下获得肝素化血液(诺丁汉大学医学院研究伦理委员会，BT/04/2005)，在等体积的RPMI-1640培养基(Sigma)中稀释，并在Histopaque 1077(Sigma)上分层。以710xg离心20分钟后，收获血沉棕黄层并用RPMI-1640洗涤两次。细胞以106/mL悬浮于CTCM中。经细胞学测定，单个核细胞浓度为85％。

LRE对尤尔卡特(Jurkat)E6.1 T细胞系和HuPBMC的细胞毒性。使用人T淋巴细胞白血病Jurkat E6.1细胞系评估细胞毒性(Walsh等人，2008年)。在96孔U底板(Costar)中，在每孔含有10⁵个Jurkat E6.1细胞的200μL CTCM，以范围为0.3μg/mL至1000μg/mL的最终浓度对预稀释的LRE提取物进行一式三份的测试。于37℃在5％ CO₂中孵育24小时后，使用染料排除法(盐水中20μL 0.4％台盼蓝(Sigma，英国))在显微镜下对物镜分划板的10个随机区域进行计数，以评估细胞活力。通过与没有LRE的细胞的对照孵育进行比较来确定存活率。

使用正常、新鲜的人外周血单个核细胞进行与上文类似的细胞毒性试验。相同的预稀释提取物在0.1μg/ml-1000μg/ml范围内进行一式三份的测试，与10⁵个HuPBMC于37℃在5％ CO₂中一起孵育24小时。如前所，使用台盼蓝染料排除法评估细胞活力。通过与在没有LRE的情况下孵育的细胞进行比较来确定存活率。

HuPBMC的增殖和细胞因子释放测定。使用抗CD3抗体(BD Pharmingen，英国)联合抗CD28抗体(BD Pharmingen，英国)刺激HuPBMC T细胞增殖和细胞因子表达，以评估甘草提取物的调节作用。通过[3H]-胸苷掺入法测定细胞增殖。所有体外测定均采用6次重复测定进行。

在96孔U底板中，在每孔含有10⁵个HuPBMC细胞的200μL CTCM中，以范围为0.3μg/mL至1000μg/mL的最终浓度测试预稀释的根提取物(LRE)。该测定使用次优水平的抗CD3和抗CD28(每种的最终测定浓度为100ng/mL)。使用次优刺激可以确定潜在的刺激和抑制作用。还以0.5μM的最终浓度对仅地塞米松(Dexamethasone)进行了一式三份的测试作为阳性对照(最大免疫抑制)。对仅DMSO进行测试，作为载体对照。

对于白细胞介素-2测定，于37℃在5％ CO₂中孵育24小时后从每个孔中取出50μ培养基，并储存在-20℃，直至分析IL-2浓度。此时，用0.25μCi/孔[3H]胸苷(GE Healthcare(通用电气医疗公司)，英国)对细胞进行脉冲处理，并再孵育24小时，然后使用PackardFiltermate收集器将细胞收获到GF/c滤板(帕卡德(Packard)，英国)上。使用PackardTopcount NXT闪烁计数器测定过滤器上保留的放射性，并使用Prism 3.0软件通过非线性回归测定EC50(使增殖减少50％的有效浓度)。对于其余的细胞因子测定，于37℃在5％ CO₂中孵育48小时后，从每个孔中取出150μL培养基(紧接着收获细胞)，并储存在-20℃，然后进行IL-2、IL-5、IL-17和IFN-γ分析。

细胞因子分析。根据以下方案通过ELISA测定条件培养基中IL-2、IL-5、IL-17和IFN-γ的浓度：在pH 9.6的碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液中，用50μL的相关捕获抗体(BDPharmingen，英国；aIL-2，555051；aIL-5，55493；alFN-y，551221；aIL-17，560486)以1μg/mL涂覆96孔测定板(Nunc，英国)，并在4℃孵育过夜。然后将孔与200μL 1％牛血清白蛋白(BSA，Sigma，英国)在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中在室温下孵育1小时，然后用PBS+0.05％吐温(tween)20(Sigma，英国)洗涤三次。然后将50μL细胞培养上清液样本在等体积的PBS/tween+1％ BSA中稀释。将制备的样本和细胞因子标准品(人类，BD Pharmingen，英国：IL-2，555602；IL-5，554606；IFN-γ，554616；IL-17Sigma，H7791)添加到相关孔中。在4℃孵育过夜后，用PBS/tween洗涤孔三次，并在每个孔添加的PBS/tween+1％BSA中用0.5μg/mL的50μL相关生物素化检测抗体(人，BD Pharmingen，英国：αIL-2，555040；αIL-5，554491；αIFN-γ，554550；IL-17，555067)在室温下孵育1小时。在室温下，将洗涤过的板用50μL/孔1:1000链霉亲和素/过氧化物酶(BD Pharmingen，英国)在PBS/tween+1％BSA中孵育30分钟，最后用PBS/tween(吐温)洗涤后，在pH 6的0.1M醋酸盐缓冲液中用100μL/孔0.1mg/mL四甲基联苯胺底物(Sigma，UK)孵育。通过添加20μL 2M H₂SO₄停止反应，并在Dynex MRX板读数仪上在450nm处读取板。

统计分析。对于细胞因子测定，将LRE浓度与仅抗CD3/CD28刺激对照进行比较。使用单因素方差分析和随后的邓尼特事后检验(Dunnett’s post-test)来确定使用JMP14是否显著抑制细胞存活、增殖和细胞因子分泌。对于邓尼特事后比较(Dunnett post hoccomparison)，参考数据由仅刺激的阳性对照孵育提供。

结果

甘草根提取物对Jurkat E6.1 T细胞系和人PBMC的细胞毒性。Jurkat E6.1细胞先前曾被用于评估化合物的潜在免疫毒性(Walsh等人，《海洋药物》6(2008年)291-307(Walshet al.,Marine Drugs.6(2008)291-307))。此处提供了一种有用的方法来确定LRE是否能够在随后的免疫调节试验所使用的浓度范围内诱导单核细胞的细胞应激/死亡。甘草根提取物在浓度达100μg/ml时对Jurkat细胞系没有毒性(图1)。在300μg/ml时，有证据表明存在细胞毒性，大约30％的细胞死亡(p<0.01)，在1mg/ml提取物时增加到40％(p<0.01)。结论是，100μg/ml提取物的最大安全浓度对于免疫细胞测定的解释是可接受的。

使用HuPBMC细胞进行的类似毒性试验得到了类似的结果(图1)。当提取物浓度为300μg/ml时，细胞活力再次降低(p<0.01)，尽管在1mg/ml时没有进一步降低，但结果进一步证实，细胞测定的最大可解释提取物浓度为100μg/ml。

抗CD3/CD28刺激的HuPBMC增殖和白细胞介素2释放。在LRE存在的情况下测定HuPBMC群的增殖。在CD3/CD28刺激的同时，在0.3μg/ml-1000μg/ml范围内评估LRE的影响(图2)。在0.3μg/ml-30μg/ml LRE范围内，没有证据表明存在影响。在100μg/ml时增殖减少了大约40％。因此，当LRE浓度低于细胞毒性阈值时，增殖会受到影响。

白细胞介素-2(IL-2)是由活化的T细胞产生的一种关键细胞因子，在控制免疫细胞发育和增殖方面发挥作用。因此，其可以用作单核细胞群活化状态的指示器。在T细胞活化模型中进行评估时，没有证据表明白细胞介素-2的释放受到0.3μg/ml-100μg/ml浓度范围内的LRE的影响(图2)。然而，在300μg/ml LRE时IL-2的分泌减少大约30％，在1000μg/mlLRE时进一步减少10％。

总结这些观察结果，有证据表明LRE在浓度为300μg/ml及以上时具有细胞毒性影响。然而，增殖反应对浓度为100μg/ml的提取物更为敏感，导致显著降低(p<0.05)。白细胞介-2的分泌似乎不像细胞增殖那样对LRE敏感，300μg/ml是第一个引起显著减少的浓度(p<0.05)。然而，浓度较高时的影响并不那么显著。

对高LRE浓度时的观察结果的两种可能的解释是，抗增殖和抗IL-2作用仅与细胞应激/死亡相关，并且可能是早期细胞应激的指示器，可在细胞死亡开始前检测到。可替代地，抗增殖和抗IL-2作用可能不同于细胞死亡。

受刺激的HuPBMC表达白细胞介素-5、白细胞介素-17和干扰素-γ。为了进一步阐明LRE的潜在免疫调节作用，特别是确定其对不同辅助性T(Th)细胞类型的影响，将滴定浓度的提取物与抗CD3/CD28活化的HuPBMC一起孵育。通过定量培养基中干扰素-γ的分泌来推断Th1细胞活性。

同样，通过量化代理白细胞介素5来检测Th2活性。最后，通过检测白细胞介素-17(IL-17)来推断Th17活性(图3)。通过比较细胞因子分泌与单独存在活化剂(人类的抗CD3/CD28)时观察到的细胞因子分泌来评估免疫调节作用，从而校准至100％活性。

在HuPBMC测定中，LRE浓度在0.1μg/ml-10μg/ml之间时，干扰素-γ(IFNγ)和IL-17的分泌均没有显著减少。然而，在3μg/m和10μg/ml时，白细胞介素-5的分泌显著减少，与阳性对照相比分别减少了30％(P<0.05)和40％(p<0.005)。在LRE浓度为30μg/ml时，减少幅度更大，与阳性对照相比减少>50％(P<0.0001)，在100μg/ml时减少75％(P<0.0001)。在LRE浓度高于100μg/ml时，与阳性对照相比，所有3种细胞因子的表达均受到显著抑制(P<0.0001)。在这些较高浓度下，所观察到的影响可能与LRE的细胞毒性相关。因此，在浓度低于100μg/ml时，对细胞因子的不同影响被解释。由于观察到对增殖的影响，因此100μg/ml浓度有点不明确。在浓度高于100μg/ml时，细胞毒性可能解释了所有观察结果。LRE对三种细胞因子的不同影响的总结示于上文所述附图中的结果。

结论

总之，本发明人已经提供证据证明甘草根的水提取物能够在无细胞毒性且不刺激增殖或IL-2释放的浓度范围内抑制活化T细胞释放IL-5。并且该浓度范围对Th-1细胞因子IFN-γ和Th-17细胞因子IL-17没有显著影响。

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尽管已经详细描述了本公开的主题及其优点，但是应当理解，在不脱离所公开主题的精神和范围的情况下，可以在本文中进行各种改变、替换和变更。此外，本申请的范围无意限于说明书中所述的工艺、物质组成、方法和过程的特定实施方式。如本领域的普通技术人员将从本公开主题的公开内容中容易理解的，根据本公开的主题，可以利用当前存在的或之后将要开发的执行与本文所述的相应实施方式基本相同的功能或实现基本相同的结果的工艺、物质组成、方法或过程。因此，所附权利要求意在将此类工艺、物质组成、方法或过程包括在其范围内。

对于本申请中引用的各种专利、专利申请、出版物、产品描述、方案和序列登录号，其发明出于所有目的通过引用整体并入本文。

Claims (18)

1.一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，用于预防和/或治疗炎症性疾病或病症、过敏性炎症性皮肤病的方法中的用途，其中，所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的量的甘草甜素。

2.根据权利要求1所述之用途的动物食物组合物，其中，所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量约0.02mg/kg体重至约2mg/kg体重的量的甘草甜素。

3.根据权利要求1或2所述之用途的动物食物组合物，其中，所述动物食物组合物被配制用于向动物提供每日量约0.03mg/kg至约2mg/kg体重、特别是约0.05mg/kg至约1mg/kg体重、特别是约0.1mg/kg至约0.8mg/kg体重、特别是约0.2mg/kg至约0.6mg/kg体重的量的甘草甜素。

4.根据权利要求1至3中任一项所述之用途的动物食物组合物，其中，所述动物食物组合物选自由营养全面的动物食物组合物、食品补充剂和盖料组合物所组成的组中。

5.根据权利要求1至4中任一项所述之用途的动物食物组合物，其中，所述甘草甜素源包括甘草根提取物。

6.根据前述权利要求中任一项所述之用途的动物食物组合物，其中，所述组合物还包含亚油酸。

7.根据前述权利要求中任一项所述之用途的动物食物组合物，其中，所述组合物还包含EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或它们的组合。

8.根据前述权利要求任一项所述之用途的动物食物组合物，其中，所述过敏性炎症性皮肤病选自由以下所组成的组中：特应性皮炎、跳蚤过敏性皮炎、荨麻疹、昆虫叮咬过敏、血管性水肿、吸入性过敏、吸入性过敏性皮炎、食物过敏性皮炎、接触性皮炎、粟粒性皮炎、嗜酸性肉芽肿、头颈部瘙痒和全身瘙痒。

9.一种试剂盒，所述试剂盒包含：

(I)第一部分，其包含甘草甜素源；和

(ii)第二部分，其包含一种或多种附加成分；

用于预防和/或治疗过敏性炎症皮肤病的方法中的用途，其中所述试剂盒被配制用于向动物提供每日量至少约0.02mg/kg体重的量的甘草甜素。

10.一种包含甘草甜素源的动物食物组合物，其中，基于所述动物食物组合物的干物质的总重量，所述甘草甜素的量为至少约5mg/kg。

11.根据权利要求10所述的动物食物组合物，其中，基于所述动物食物组合物的干物质的总重量，所述甘草甜素的量为约5mg/kg至约100mg/kg。

12.根据权利要求10或11所述的动物食物组合物，其中，基于所述动物食物组合物的干物质的总重量，所述甘草甜素的量为约5mg/kg至100mg/kg、特别是约10mg/kg至75mg/kg、特别是约15mg/kg至50mg/kg以及特别是约20mg/kg至45mg/kg。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的动物食物组合物，其中，所述动物食物组合物包括粗磨食品和/或所述动物食物组合物还包含蛋白质源。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的动物食物组合物，其中，所述动物食物组合物包括营养完全的食物组合物。

15.根据权利要求10至14中任一项所述的动物食物组合物或根据权利要求9所述的试剂盒，其被配制用于口服施用。

16.根据权利要求10至15所述的动物食物组合物或根据权利要求9或15所述的试剂盒，其中，所述甘草甜素源由甘草根提取物组成。

17.根据权利要求10至16中任一项所述的动物食物组合物，所述组合物还包含一种或多种附加成分。

18.根据权利要求17所述的动物食物组合物或根据权利要求9、15或16所述的试剂盒，其中，所述一种或多种附加成分选自亚油酸、EPA/DHA、牛磺酸、叶黄素、维生素E和/或它们的组合。