CN119095621A

CN119095621A - 用于治疗癌症的包括Fas轴拮抗剂和T-reg细胞消耗剂拮抗剂的联合疗法

Info

Publication number: CN119095621A
Application number: CN202380036238.7A
Authority: CN
Inventors: 玛丽亚·阿曼; 麦尔斯·卡拉尼可斯; 加布里埃尔·施内茨勒; 凯恩·安德鲁·福斯特; 艾桑·古拉尼; 塞尔吉奥·克萨达; 庆晨
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG; Cancer Research Technology Ltd
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG; Cancer Research Technology Ltd
Priority date: 2022-04-26
Filing date: 2023-04-26
Publication date: 2024-12-06
Also published as: JP2025514847A; WO2023208990A1; EP4514388A1; US20250257141A1

Abstract

本公开涉及Fas轴拮抗剂如抗FasL抗体与Treg细胞消耗疗法如抗CD25抗体以及可选的癌症疫苗的组合，该组合用于治疗癌症。

Description

用于治疗癌症的包括Fas轴拮抗剂和T-reg细胞消耗剂拮抗剂的联合疗法

技术领域

本发明涉及用于治疗癌症的Fas轴拮抗剂与Treg细胞消耗疗法的组合。

背景技术

使用抗CD25抗体消耗调节性T细胞(Treg)已被证明在各种癌症小鼠模型中都有效，例如参见WO2017/174331、WO2018/167104、WO2019/175222以及Solomon I et al,Nature Cancer,vol 1,p1153-1166(2020)中所述。然而，发现在一些免疫原性较差的小鼠模型中，反应率较低，在某些情况下显示出仅在减少肿瘤生长上实现部分反应。

已显示出，由抗CD25 Treg消耗抗体和遗传修饰的GM-CSF分泌肿瘤疫苗(GVAX)组成的治疗癌症的联合疗法在此类小鼠模型中在肿瘤大小和小鼠存活率方面提高了治疗效果。然而，在对这种联合疗法产生部分反应后，在某些情况下会发现随后肿瘤复发。

因此，虽然目前基于抗CD25抗体的疗法已显示出在癌症的初始治疗中有效，但仍需要提供进一步的可帮助预防肿瘤复发并进一步提高患者存活率的治疗方案。

发明内容

本发明涉及Treg细胞消耗疗法与Fas轴结合拮抗剂的组合，该组合用于治疗癌症。

本发明人发现，Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)与Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)以及可选的癌症疫苗(例如GVAX)联合使用，提供了一种降低肿瘤复发的可能性并提高患者存活率的癌症治疗方案。

因此，本发明的一个方面提供了用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法与Fas轴拮抗剂的组合。Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂是分开、同时或依次施用的。

本发明的一个方面提供了用于治疗癌症的抗CD25抗体和抗FasL抗体的组合。抗CD25抗体和抗FasL抗体是分开、同时或依次施用的。

本发明的另一方面提供了用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)，其中Treg细胞消耗疗法是与Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)联合使用的。

本发明的另一方面提供了用于治疗癌症的Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)，其中Fas轴拮抗剂是与Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)联合使用的。

本发明的另一方面提供了一种用于治疗癌症的癌症疫苗，其中癌症疫苗是与Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)和Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)联合使用的。

本发明的另一方面提供了一种治疗对象的癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的各Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂。

本发明的另一方面提供了一种治疗对象的癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的各抗CD25抗体和抗FasL抗体。

本发明的另一个方面提供了用于治疗或预防对象的癌症复发的Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)，其中对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，并且其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

本发明的另一个方面提供了用于治疗或预防对象的癌症复发的Treg细胞消耗疗法，其中Treg细胞消耗疗法是与Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)的至少一次给药联合使用的，其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

本发明的另一个方面提供了一种治疗或预防对象的癌症复发的方法，其中对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，其中该方法包括在Treg细胞消耗疗法之后向对象施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)的至少一次给药。

本发明的另一方面提供了一种治疗或预防对象的癌症复发的方法，包括向对象施用：

a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；和

b)Treg细胞消耗疗法的加强给药和Fas轴拮抗剂的给药；

其中，Treg细胞消耗疗法的加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。

本发明的另一方面提供了用于治疗或预防对象的癌症复发的Treg细胞消耗疗法的引发给药，其中，还向对象施用Treg细胞消耗疗法的加强给药和Fas轴拮抗剂的给药，其中，Treg细胞消耗疗法的加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。

本发明的另一方面提供了用于治疗或预防对象的癌症复发的以下的组合：a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；b)Treg细胞消耗疗法的加强给药；和c)Fas轴拮抗剂的给药，其中Treg细胞消耗疗法的引发给药和Treg细胞消耗疗法的加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。

本发明的另一方面提供了一种用于治疗或预防对象的癌症复发的方法，包括向对象施用：

a)抗CD25抗体的引发给药；和

b)抗CD25抗体的加强给药和抗FasL抗体的给药，

其中抗CD25抗体的加强给药在抗FasL抗体之前施用。

本发明的另一个方面提供了用于治疗或预防对象的癌症复发的抗CD25抗体的引发给药，其中进一步向对象施用抗CD25抗体的加强给药和抗FasL抗体的给药，其中抗CD25抗体的加强给药在抗FasL抗体之前施用。

本发明还提供了上述任一方面的实施方式，其中向对象进一步施用癌症疫苗，和/或对象还接受了癌症疫苗疗法。

本发明还提供了组分或组分的组合在任何公开的治疗方法中的用途。

本发明的其他方面和实施方式将在下面进行更详细的描述。

附图说明

图1：小鼠体内模型的研究设计。在第0天，向C57BL/6小鼠右侧腹皮下(s.c.)注射50,000个B16/BL6黑色素瘤细胞。将小鼠分成4组(图1A-D)，并在指定时间点给予200μg抗CD25^NIB抗体、1×10⁶个经辐照(150Gy)GVAX、同种型对照和/或200μg抗FasL(MFL3)抗体。

图2：小鼠体内模型显示了，在初始联合疗法(包括抗CD25抗体和癌症疫苗)之后，然后用以下进行进一步治疗的肿瘤生长情况：(A)同种型对照，(B)抗FasL抗体，(C)每周抗CD25抗体，和(D)抗FasL抗体和抗CD25抗体。

图3：在初始联合疗法(包括抗CD25抗体和癌症疫苗)之后，然后用同种型对照、抗FasL抗体、每周抗CD25抗体、或抗FasL抗体和抗CD25抗体的组合进行治疗，在指定天数内小鼠癌症模型中动物的存活率。

具体实施方式

本发明提供了用于治疗对象的癌症的Treg细胞消耗疗法和Fas轴结合拮抗剂的组合。具体而言，本发明提供了Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)作为第一组分，Fas轴结合拮抗剂(例如抗FasL抗体)作为第二(和可选的后续)组分，用于治疗对象的癌症。本发明还提供了治疗对象的癌症的方法，包括施用Treg细胞消耗疗法如抗CD25抗体，和施用Fas轴结合拮抗剂如抗FasL抗体。

本文中提到的“组合”或“联合”是指分开、同时或依次施用，除非上下文另有规定。

本发明人发现，联合施用抗CD25抗体与Fas轴结合拮抗剂有助于预防肿瘤复发并提高抗CD25抗体治疗的治疗效果。已知Treg有助于形成免疫抑制肿瘤微环境(TME)。在人中，Treg细胞的肿瘤浸润率高，更重要的是效应T细胞(Teff)与Treg细胞的比率低，这与多种人癌症的不良预后有关(Shang et al.,2015,Sci Rep.5:15179)。相反，高Teff/Treg细胞比率与人和小鼠对免疫疗法的良好反应相关(Hodi et al.,2008,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,105,3005-3010；Quezada et al.,2006,J Clin Invest.116(7):1935-45)。然而，在抗CD25抗体治疗期间，发明人已经发现在部分起反应的肿瘤中，肿瘤微环境(TME)会随着时间的推移发生变化。对部分起反应的肿瘤中的TME进行表征，发现了一些变化，包括活化效应T细胞的丢失、静息T细胞的增加、调节性T细胞(Treg)的增加以及M2样抑制性髓系细胞的增加。TME的这种变化，尤其是随着时间的推移，活性Teff细胞可能会丢失，而Treg细胞可能会增加，可能会导致原本起反应的肿瘤复发。

发明人发现，用FasL/Fas信号传导系统的抑制剂(即Fas轴拮抗剂)，例如用抗FasL抗体或抗Fas抗体，阻断Fas/FasL轴，可以抑制Fas介导的活化Teff细胞死亡。与其他T细胞相比，活化Teff细胞中Fas的表达更高；并且在复发之前的稳定性肿瘤中，活化Teff细胞中的％Fas+细胞呈现增加趋势，这表明活化Teff可能更容易受到Fas介导的细胞死亡的影响。

具体地，发明人发现，联合施用FasL/Fas信号传导系统的抑制剂(即Fas轴拮抗剂)，例如抗FasL抗体或抗Fas抗体，与Treg细胞消耗疗法(例如通过施用抗CD25抗体)，可选地进一步与癌症疫苗(例如GVAX)组合，可以维持免疫原性肿瘤微环境(TME)，特别是维持高Teff/Treg细胞比率，从而能够实现更好的治疗结果。

与单独施用抗CD25、或抗CD25与癌症疫苗联合施用、或单独施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)相比，本发明的治疗方案产生增强的治疗效果。

因此，本发明的第一方面提供了用于治疗癌症的包括Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂的组合。Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂是分开、同时或依次施用的。在一个实施方式中，该组合包括：a)第一组分，其包括Treg细胞消耗疗法；和b)第二组分，其包括Fas轴拮抗剂，第一组分和第二组分分开、同时或依次用于癌症治疗。

Treg细胞消耗疗法可以与一种或多种其他治疗剂联合施用。优选地，其他治疗剂是癌症疫苗。因此，在一些实施方式中，Treg细胞消耗疗法与癌症疫苗联合施用，其中癌症疫苗是与Treg细胞消耗疗法分开、同时或依次施用的。

因此，在本发明的一个实施方式中，提供了一种用于治疗癌症的组合，包括：a)第一组分，其包括Treg细胞消耗疗法，b)第二组分，其包括Fas轴拮抗剂，和c)第三组分，其包括癌症疫苗。优选分开施用Treg细胞消耗疗法、Fas轴拮抗剂和癌症疫苗。优选地，向对象施用Treg细胞消耗疗法，然后向对象施用癌症疫苗，然后向对象施用Fas轴拮抗剂。

优选地，治疗方案可以包括施用Treg细胞消耗疗法、Fas轴拮抗剂和/或癌症疫苗的多次给药。

在本发明的优选实施方式中，Treg细胞消耗疗法包括施用抗CD25抗体，优选与癌症疫苗联合施用。抗CD25抗体与癌症疫苗联合施用增强了Treg细胞消耗治疗的治疗效果。

在本发明的优选实施方式中，Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。因此，在本发明的一个实施方式中，提供了一种组合，其包括：a)第一组分，其包括抗CD25抗体，b)第二组分，其包括抗FasL抗体，和c)第三组分，其包括癌症疫苗，第一组分、第二组分和第三组分同时、分开或依次用于治疗癌症。

优选地，在施用抗CD25抗体和癌症疫苗之后施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)。“之后施用”的意思是，Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)优选在施用抗CD25抗体之后(并且可选地在施用癌症疫苗之后)足够长的时间施用，以使这些组分实现其期望效果。例如，在通过施用抗CD25抗体(以及可选地施用癌症疫苗)实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)。

在优选实施方式中，治疗方案包括向对象施用抗CD25抗体，然后施用癌症疫苗，然后施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)。

治疗方案可以包括施用抗CD25抗体、癌症疫苗和/或Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)的多次给药。在一个实施方式中，治疗方案包括施用抗FasL抗体的多次给药。在一个实施方式中，抗FasL抗体是与抗CD25抗体的进一步给药联合施用的，其中抗CD25抗体的进一步给药是在抗FasL抗体之前施用的。换句话说，治疗方案包括在施用抗CD25抗体的至少两次给药后施用抗FasL抗体的第一次给药。可以施用抗CD25抗体的多次给药以维持对象的Treg消耗。

在一个实施方式中，抗CD25抗体的第二次给药在施用抗CD25抗体的第一次给药后至少7天施用，优选地在施用抗CD25抗体的第一次给药后至少10天，更优选在施用抗CD25抗体的第一次给药后14至35天施用。

在一个实施方式中，抗FasL抗体的每次给药在抗CD25抗体的第二次给药和每次后续给药的20天内施用。例如，优选在通过施用抗CD25抗体实现对象的Treg细胞消耗之后施用抗FasL抗体。优选地，抗FasL抗体的每次给药在施用抗CD25抗体的第二次给药和每次后续给药后至少1天、优选至少3天、更优选至少7天施用。

在施用抗CD25抗体的第二次给药之后施用抗FasL抗体的给药，重复多次，即周期性进行。每次联合施用抗CD25抗体与抗FasL抗体可称为治疗周期。在一个实施方式中，抗CD25抗体/抗FasL抗体组合的每个治疗周期重复多次，优选地每个周期的开始之间间隔至少七天，即，包括施用抗CD25抗体和抗FasL抗体的每个治疗周期在至少7天的时间段进行。

优选地，每个治疗周期在7至48天的范围内，其中每个治疗周期的开始(即周期的第1天)从施用抗CD25抗体开始计算。治疗周期可以包括休息期，即治疗周期可以包括不施用抗体或可选不施用癌症疫苗的时间段。在一些实施方式中，抗CD25抗体的每次后续给药每周施用一次(Q1W)、每两周施用一次(Q2W)、每三周施用一次(Q3W)或每六周施用一次(Q6W)，其中在每次抗CD25抗体给药之间施用抗FasL抗体的给药。抗CD25抗体的每次后续给药以一定频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。

例如，在一个实施方式中，在施用抗CD25抗体的每次进一步给药后7天时施用抗FasL抗体，其中重复施用抗FasL抗体和抗CD25抗体多次，施用每次抗CD25抗体给药之间的时间间隔为至少14天。例如，在每个治疗周期的第1天施用抗CD25抗体，并在治疗周期的第8天施用抗FasL抗体，其中每个治疗周期为至少14天，并且其中如果施用癌症疫苗，则该疫苗可以在每个治疗周期的第2-7天中的任意一天或多天施用。

优选地，在对象由于用抗CD25抗体(和可选的癌症疫苗)治疗而具有已消耗的Treg水平时，施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)。

在治疗方案包括施用癌症疫苗的实施方式中，优选在施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)的第一次给药之前和在施用抗CD25抗体的第二次给药之前，施用癌症疫苗的第一次给药。

治疗方案还可以包括施用癌症疫苗的多次给药。优选在已经施用抗CD25抗体的第一次给药之后施用癌症疫苗的一次或多次给药。在进一步的实施方式中，癌症疫苗可以与抗CD25抗体基本上同时施用。治疗方案可以包括：

-首先施用抗CD25抗体；

-随后施用癌症疫苗的一次或多次给药；

-随后施用抗CD25抗体和Fas轴拮抗剂的一次或多次交替给药，其中抗CD25抗体的每次进一步给药是在Fas轴拮抗剂的给药之前施用的。

因此，在一个实施方式中，治疗方案依次包括：

a)施用抗CD25抗体；

b)施用癌症疫苗，优选其中施用癌症疫苗包括施用癌症疫苗的多次给药，优选癌症疫苗的3次给药；

c)施用抗CD25抗体；以及

d)施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)，

其中治疗方案包括以循环方式重复步骤c)和d)。优选地，包括步骤c)至d)的每个治疗周期进行至少7天的时间段。例如，步骤c)和d)中施用的抗CD25抗体和Fas轴拮抗剂的每次给药均按Q1W、Q2W、Q3W或Q6W施用。优选地，抗CD25抗体的每次后续给药以一定频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。优选地，在通过施用抗CD25抗体实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂。

在一些实施方式中，癌症疫苗的进一步给药还可以与抗CD25抗体的第二次给药和后续给药联合施用。换句话说，治疗方案可以包括：

-首先施用抗CD25抗体；

-随后施用癌症疫苗的一次或多次给药；

-随后施用抗CD25抗体、癌症疫苗和Fas轴拮抗剂的一次或多次给药，其中抗CD25抗体的每次进一步给药是在Fas轴拮抗剂的给药之前施用的，并且其中癌症疫苗的每次进一步给药在抗CD25抗体的每次进一步给药和Fas轴拮抗剂之间施用。

因此，在一个实施方式中，治疗方案依次包括：

a)施用抗CD25抗体；

b)施用癌症疫苗，优选其中施用癌症疫苗包括施用癌症疫苗的多次给药，优选癌症疫苗的3个给药；

c)施用抗CD25抗体；

d)施用癌症疫苗；以及

e)施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)，

其中治疗方案包括以循环方式重复步骤c)至e)。优选地，包括步骤c)至e)的每个治疗周期进行至少7天的时间段。例如，步骤c)至e)中施用的组分的每次给药均按Q1W、Q2W、Q3W或Q6W施用。优选地，抗CD25抗体的每次后续给药以一定频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。优选地，在通过施用抗CD25抗体实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂。

在本发明的一些实施方式中，Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)的初始给药，以及可选的癌症疫苗的初始一次或多次给药可被视为引发疗法。Treg细胞消耗疗法的第二次给药和后续给药，例如后续抗CD25抗体给药，以及可选的癌症疫苗的进一步给药，可被视为加强疗法。

根据本发明的“引发疗法”包括施用Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)和可选地在Treg细胞消耗疗法之后施用的癌症疫苗。在一些实施方式中，引发疗法可以包括在施用Treg细胞消耗疗法之后施用癌症疫苗的多次给药。

根据本发明的“加强周期”、“加强疗法”或“加强治疗”或类似术语包括施用Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)和Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)，以及可选的癌症疫苗。每个加强周期或疗法包括施用Treg细胞消耗疗法，然后可选地施用癌症疫苗的一次或多次给药(如果使用)，然后施用Fas轴拮抗剂。优选地，在通过施用Treg细胞消耗疗法(和可选的癌症疫苗)实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂。优选地，本发明包括多轮加强疗法，例如每个加强周期重复多次，即进行两次、三次、四次或更多次。

因此，在本发明的另一方面，提供了用于治疗对象的癌症的Treg细胞消耗疗法的引发给药和可选的癌症疫苗的引发给药，其中向对象进一步施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)以及Treg细胞消耗疗法的加强给药，其中Treg细胞消耗疗法的加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。在一些实施方式中，Treg细胞消耗疗法的加强给药可以与癌症疫苗的进一步加强给药联合施用。

“之前施用”的意思是，Treg细胞消耗疗法(例如抗CD25抗体)优选在施用Fas轴拮抗剂之前足够长的时间施用，以使Treg细胞消耗疗法实现其预期效果(例如，消耗对象的Treg细胞)。

在一个实施方式中，提供了用于治疗对象的癌症的抗CD25抗体的引发给药和可选的癌症疫苗的引发给药，其中向对象进一步施用抗FasL抗体的给药和抗CD25抗体的加强给药，其中在抗FasL抗体之前施用抗CD25抗体的加强给药。在一些实施方式中，可以在施用抗CD25抗体的加强给药之后，施用癌症疫苗的加强给药，然后施用抗FasL抗体。

在一个实施方式中，提供了用于治疗对象的癌症的抗FasL抗体的给药，其中首先向对象施用抗CD25抗体的引发给药，可选地施用癌症疫苗的引发给药，以及抗CD25抗体的加强给药。

本发明的另一个实施方式提供了一种治疗对象的癌症的方法，包括向对象施用：

a)抗CD25抗体的引发给药和癌症疫苗的引发给药；以及

b)抗FasL抗体的给药和抗CD25抗体的加强给药，

其中抗CD25抗体的加强给药在抗FasL抗体之前施用。

优选地，在施用抗CD25抗体的引发给药之后，周期性地施用抗FasL抗体以及抗CD25抗体的加强给药，即，重复步骤b)两次、三次、四次或更多次。优选地，每个治疗周期为至少7至48天，其中每个周期的开始(即每个周期的第1天)从施用抗CD25抗体的加强给药开始计算。例如，抗CD25抗体的每次加强给药按Q1W、Q2W、Q3W或Q6W施用，其中在抗CD25抗体的每次给药之间施用抗FasL抗体的给药。抗CD25抗体的加强给药以一定的频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。优选地，在通过施用抗CD25抗体实现对象的Treg细胞消耗之后施用抗FasL抗体。

优选地，抗FasL抗体在抗CD25抗体的每次加强给药后20天内施用。更优选地，抗FasL抗体的每次给药在抗CD25抗体的每次加强给药后至少1天，优选至少3天，更优选至少7天施用。

例如，在一个实施方式中，抗CD25抗体的加强给药在每个加强周期的第1天施用，并且抗FasL抗体在每个周期的第7天或更晚施用，其中每个周期为至少14天的周期。

在一个实施方式中，抗CD25抗体和癌症疫苗的初始引发疗法可以包括癌症疫苗的多次给药。

优选地，在抗CD25抗体的引发给药之后和抗CD25抗体的后续给药的施用之前施用癌症疫苗的多次给药。优选地，在施用抗CD25抗体后至少1天施用癌症疫苗的第一次给药。

在一个实施方式中，第一加强周期在施用抗CD25抗体的引发给药后至少7天开始，优选在施用抗CD25抗体的引发给药后至少10天、更优选在施用抗CD25抗体的引发给药后14至35天开始。每个加强周期优选为至少7天，更优选每个加强免疫周期为7至48天。优选地，抗CD25抗体和抗FasL抗体每个周期各施用一次。在一些实施方式中，可以在每个抗CD25抗体/抗FasL抗体周期内，将癌症疫苗的加强给药与抗CD25抗体的加强给药联合施用。优选地，癌症疫苗的加强给药在每个加强周期中抗CD25抗体和抗FasL抗体的每次给药的施用之间施用。

本发明的另一方面涉及治疗或预防对象癌症复发。本发明的一个实施方式提供了一种治疗或预防对象的癌症复发的方法，其中对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，其中该方法包括在Treg细胞消耗疗法之后向对象施用至少一次给药的Fas轴拮抗剂，例如抗FasL抗体。

在一个实施方式中，本发明提供了治疗或预防对象癌症复发的方法，其包括：

a)施用Treg细胞消耗疗法的引发给药；

b)施用癌症疫苗的一次或多次引发给药；

c)施用Treg细胞消耗疗法的加强给药；

d)可选地施用癌症疫苗的加强给药；以及

e)施用Fas轴拮抗剂的给药，

其中该方法包括以循环方式重复步骤c)至e)。优选地，包括步骤c)至e)的每个治疗周期进行至少7天的时间段。例如，步骤c)至e)中施用的组分的每次给药均按Q1W、Q2W、Q3W或Q6W施用。优选地，抗CD25抗体的每次后续给药以一定频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。优选地，在通过施用抗CD25抗体(和可选的癌症疫苗)实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂。

本发明的另一个实施方式提供了一种用于治疗或预防对象的癌症复发的Fas轴拮抗剂，例如抗FasL抗体，其中该对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，并且其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

本发明的另一个实施方式提供了一种用于治疗或预防对象的癌症复发的Treg细胞消耗疗法，其中Treg细胞消耗疗法是与至少一次给药的Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)联合使用的，其中其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

本发明的另一个实施方式提供了用于治疗或预防对象癌症复发的a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；b)Treg细胞消耗疗法的加强给药和c)Fas轴拮抗剂的给药的组合，其中Treg细胞消耗疗法的引发给药和Treg细胞消耗疗法的第一次加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。

本发明的另一个实施方式提供了用于治疗或预防对象癌症复发的a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；b)癌症疫苗的引发给药，c)Treg细胞消耗疗法的加强给药和d)Fas轴拮抗剂的给药的组合，其中Treg细胞消耗疗法的引发给药、癌症疫苗的引发给药和Treg细胞消耗疗法的加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用，并且其中癌症疫苗的引发给药在Treg细胞消耗疗法的引发给药和Treg细胞消耗疗法的第一次加强给药之间施用。

在一些实施方式中，治疗包括重复施用Treg细胞消耗疗法的加强给药和Fas轴拮抗剂，其中Treg细胞消耗疗法的每次加强给药在Fas轴拮抗剂的每次给药之前施用。Treg细胞消耗疗法的每次加强给药和Fas轴拮抗剂的给药的重复施用是周期性进行的。

优选地，该组合进一步包括e)癌症疫苗的加强给药，其中，癌症疫苗的每次加强给药在Treg细胞消耗疗法的每次加强给药与Fas轴拮抗剂的每次给药之间施用。Treg细胞消耗疗法的每次加强给药、癌症疫苗的每次加强给药和Fas轴拮抗剂的每次加强给药的重复施用是周期性进行的。

优选地，每个治疗周期进进行少7天的时间段。优选地，每个周期的范围为7至48天，其中每个周期的开始(即每个周期的第1天)从施用抗CD25抗体的加强给药开始计算。Treg细胞消耗疗法的加强给药(例如抗CD25抗体)以一定的频率施用，以维持对象的Treg细胞消耗。优选地，在通过施用Treg细胞消耗疗法实现对象的Treg细胞消耗之后施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)。

治疗或预防癌症的复发是指在对之前的癌症治疗有初步反应或部分反应后，避免癌症的复发、回归或再次出现。例如，在实体瘤的治疗中，癌症的复发可能涉及肿瘤体积的增加。

Treg细胞消耗疗法优选包括施用抗CD25抗体。在一些实施方式中，抗CD25抗体与另一种治疗剂(例如癌症疫苗)联合施用。抗CD25抗体和癌症疫苗的组合可以按照本发明第一方面所述进行施用。

Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)优选与抗CD25抗体的进一步给药联合施用，其中抗FasL抗体在抗CD25抗体的进一步给药之后施用。抗FasL抗体和抗CD25抗体的组合以及可选的癌症疫苗可以周期性地施用，如本发明的第一方面所述。

本发明的另一方面是一种治疗或预防对象癌症复发的方法，包括向对象施用治疗有效量的Treg细胞消耗疗法和治疗有效量的Fas轴拮抗剂。

本发明的另一方面是Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途。

本发明的另一方面提供了用于治疗癌症的抗CD25抗体，其中抗CD25抗体是与抗FasL抗体联合使用的。

本发明的另一方面提供了抗CD25抗体在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中抗CD25抗体是与抗FasL抗体联合使用的。

本发明的另一方面提供了用于治疗癌症的抗FasL抗体，其中抗FasL抗体是与抗CD25抗体联合使用的。

本发明的另一方面提供了用于制造治疗癌症的药物的抗FasL抗体，其中抗FasL抗体是与抗CD25抗体联合使用的。

本发明的另一方面提供了一种用于治疗癌症的癌症疫苗，其中癌症疫苗是与抗FasL抗体和抗CD25抗体联合使用的。

本发明的另一方面提供了癌症疫苗在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中，癌症疫苗是与抗FasL抗体和抗CD25抗体联合使用的。

尽管本发明的一些方面和实施方式进一步描述了Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体以及Treg细胞消耗疗法包括施用抗CD25抗体，但其他Fas轴拮抗剂和Treg细胞消耗疗法也可用于本发明。本发明涉及癌症的治疗。在一个实施方式中，癌症是CD25阳性癌症。癌症可以是血液癌或实体癌。

在一些实施方式中，癌症选自急性髓系白血病、弥漫性大细胞B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、肉瘤、结直肠癌，或更一般地说，任何人癌症，只要B16细胞系可代表用于验证化合物对其治疗管理有用的临床前模型。

在一些实施方式中，癌症涉及实体瘤(例如实体瘤癌症)，并且治疗用于治疗癌症或预防实体瘤复发。本文使用的“实体瘤”是组织的异常生长或肿块，通常不包含囊肿或液体区域，特别是白血病或非实体淋巴癌以外的肿瘤和/或转移瘤(无论位于何处)。实体瘤可能是良性的，也可能是恶性的。不同类型的实体瘤根据形成它们的细胞类型和/或它们所在的组织或器官来命名。实体瘤的例子有肉瘤(包括源自组织如松质骨、软骨、脂肪、肌肉、血管、造血或纤维结缔组织中的间叶来源的转化细胞的癌症)、癌(包括源自上皮细胞的肿瘤)、间皮瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤等。

本文中使用的“治疗”或“处理”癌症定义为实现至少一种积极的治疗效果，例如减少癌细胞数量、减小肿瘤大小、降低癌细胞浸润到外周器官的速率、或降低肿瘤转移或肿瘤生长的速率。

癌症的积极治疗效果可以用多种方式来衡量(例如Weber(2009)J Nucl Med 50,1S-10S)。举例来说，就肿瘤生长抑制而言，根据美国国家癌症研究所(NCI)的标准，42％的T/C％比率是抗肿瘤活性的最低水平。T/C＜10％被认为是高抗肿瘤活性水平，其中T/C(％)＝经治疗肿瘤体积中位数/对照肿瘤体积中位数×100。在一些实施方式中，通过治疗有效量实现的治疗是无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)或总生存期(OS)中的任一种。PFS，也称为“至肿瘤进展时间”，表示治疗期间和治疗后癌症不生长的时间长度，包括患者经历完全反应或部分反应的时间，以及患者经历病情稳定的时间。DFS是指患者在治疗期间和治疗后无病生存的时间长度。OS指的是与原始或未接受过治疗的个体或患者相比，预期寿命的延长。

本文使用的“预防”、“防止”(或预防法)是指延缓或预防癌症症状的发生。预防可以是绝对的(即不会发生疾病)或者可以仅对某些个体有效或在有限的时间内有效。

本发明涉及Fas轴结合拮抗剂的使用。本文使用的术语“Fas轴结合拮抗剂”是一种抑制Fas结合伴侣与FasL相互作用从而阻断Fas/FasL信号传导通路(也称为CD95/CD95L通路)并抑制Fas介导的细胞死亡的分子。具体而言，本发明中使用的FAS轴结合拮抗剂阻断了FasL/Fas诱导的细胞凋亡。Risso V et al(2022)Cell Death and Disease vol 13A248中讨论了靶向FasL/Fas信号传导的方法。

FasL，也称为Fas配体、CD95L或CD178，是属于肿瘤坏死因子(TNF)家族的II型膜结合蛋白。FasL是一种与其受体Fas(也称为FasR、APO-1或CD95)结合并诱导细胞凋亡的蛋白质。FasL主要在活化的T细胞和自然杀伤(NK)细胞上表达。Fas-FasL信号传导通路通过诱导细胞凋亡来调节免疫反应。

Fas轴结合拮抗剂包括Fas抑制剂，例如抗Fas抗体或其抗原结合片段，以及FasL抑制剂，例如抗FasL抗体或其抗原结合片段。还考虑了FAS轴结合拮抗剂的非抗体抑制剂，例如FasL抑制剂asunercept(APG101)，这是一种糖基化融合蛋白，包含与人IgG1的Fc结构域连接的人CD95胞外结构域。

在本发明的一个实施方式中，Fas轴结合拮抗剂是抗FasL抗体。本文使用的“抗FasL抗体”是指能够结合FasL的抗体或其抗体结合片段。抗FasL抗体是一种“中和”或“拮抗”抗体，这意味着抗体与FasL的结合导致FasL多肽诱导的生物活性的抑制。该抗体可以特异性地结合FasL的与Fas结合的结合位点，从而阻止FasL与Fas结合。优选地，抗体中和或拮抗FasL活性的能力可以通过其抑制Fas-FasL介导的细胞凋亡的能力来评估。抗FasL抗体可以抑制Fas配体诱导的Fas抗原表达细胞的凋亡。抗FasL抗体的活性可以通过本领域已知的测定和方法来评估。

抗FasL抗体是本领域已知的。抗FasL抗体的例子公开于例如WO2003/079750、WO1996/029350、EP0842948和EP0872488中。其内容以引用的方式并入本文中。

对已接受Treg细胞消耗疗法的对象施用Fas轴结合拮抗剂。

本文使用的“Treg细胞消耗疗法”或“Treg消耗疗法”是指与治疗前对象的Treg水平相比，导致对象的Treg水平降低的治疗方案。消耗Treg细胞的化合物是本领域已知的。Treg的消耗可以通过本领域已知的技术来测量，例如WO2018/167104和Simpson et al(2013)J Exp Med210,1695-710中公开的技术。其内容以引用的方式并入本文中。

本文使用的“调节性T细胞”(“Treg”、“Treg细胞”或“Tregs”)是指专门控制自身免疫、过敏和感染的CD4+T淋巴细胞谱系。通常，它们调节T细胞群的活动，但它们也可以影响某些先天免疫系统细胞类型。Treg通常通过生物标志物CD4、CD25和Foxp3的表达来识别。天然产生的Treg细胞通常占外周CD4+T淋巴细胞的约5％至10％。然而，在肿瘤微环境(即肿瘤浸润Treg细胞)中，它们可占总CD4+T淋巴细胞群的20％至30％。

在本发明的优选实施方式中，Treg细胞消耗疗法包括向对象单独施用抗CD25抗体或与其他治疗剂联合施用。优选地，其他治疗剂是癌症疫苗。

CD25是IL-2受体的α链，存在于活化T细胞、调节性T细胞、活化B细胞、一些NK T细胞、一些胸腺细胞、髓系前体细胞和少突胶质细胞中。CD25与CD122和CD132缔合形成作为IL-2的高亲和力受体的异三聚体复合物。人CD25的共识序列如下所示，并被标识为SEQ IDNO：1(Uniprot登录号P01589；成熟人CD25的胞外结构域，对应于带下划线的氨基酸22-240)。

本文使用的“抗CD25抗体”或“结合CD25的抗体”是指能够与IL-2受体的CD25亚基结合的抗体。该亚基也称为IL-2受体的α亚基。

抗CD25抗体是能够与IL-2受体的CD25亚基(抗原)特异性结合的抗体。

“特异性结合”、“特异性地结合”和“特异性的结合”应理解为抗体对于目标抗原的解离常数(Kd)小于约10^-6M、10^-7M、10^-8M、10^-9M、10^-10M、10^-11M、10^-12M或10^-13M。在优选的实施方式中，解离常数小于10^-8M，例如在10^-9M、10^-10M、10^-11M、10^-12M或10^-13M的范围内。

适用于本发明的抗CD25抗体是能够消耗或减少Treg细胞的抗体。

如本文所用，提及“消耗的”或“消耗”(关于抗CD25抗体剂消耗调节性T细胞)是指与未施用抗体时相比，Treg的数量、比率或百分比减少。在本文所述的本发明的具体实施方式中，超过约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或99％的调节性T细胞被消耗。

能够消耗Treg细胞并且适合用于本发明的抗CD25抗体包括例如在WO2017/174331、WO2018/167104、WO2019/008386、WO2019/175215、WO2019/175216、WO2019/175217、WO2019/175220、WO2019/17522、WO2019/175223、WO2019/175224、WO2019/175226中描述的那些，其内容通过引用并入本文。

在本发明的优选实施方式中，抗CD25抗体以高亲和力结合FcγR，优选以高亲和力结合活化受体。优选地，抗体以高亲和力结合FcγRI和/或FcγRIIa和/或FcγRIIIa。在具体实施方式中，抗体以小于约10^-6M、10^-7M、10^-8M、10^-9M或10^-10M的解离常数与至少一种活化Fcγ受体结合。

在一些实施方式中，抗体是IgG1抗体，优选是人IgG1抗体，其能够结合至少一种Fc活化受体。例如，该抗体可以结合选自FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb中的一种或多种受体。在一些实施方式中，该抗体能够结合FcγRIIIa。在一些实施方式中，该抗体能够结合FcγRIIIa和FcγRIIa以及可选的FcγRI。在一些实施方式中，抗体能够以高亲和力与这些受体结合，例如解离常数小于约10^-7M、10^-8M、10^-9M或10^-10M。

在一些实施方式中，该抗体以低亲和力结合抑制性受体FcγRIIb。在一些实施方式中，抗体以高于约10^-7M、高于约10^-6M或高于约10^-5M的解离常数与FcγRIIb结合。

在一些实施方式中，抗CD25抗体可以是无岩藻糖基化的。可以使用本领域中已知的技术修饰抗体的Fc区以改变糖基化特征。生产具有缺失或降低岩藻糖基化特征的抗体的可用技术包括市售技术(例如GlyMAXX(ProBiogen))和方法(例如在WO2011/035884中公开的方法)。

在一些实施方式中，抗CD25抗体诱导ADCC活性。抗CD25抗体对CD25+靶细胞表现出ADCC活性。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)是指一种细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体，从而导致靶细胞裂解。在一些实施方式中，抗CD25抗体诱导ADCP活性。“抗体依赖性细胞介导的吞噬”(ADCP)是指一种细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的吞噬细胞(如巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体，从而导致靶细胞的吞噬。

本发明所用的抗CD25抗体可以通过ADCC和ADCP活性发挥作用。可以使用本领域中已知且可用的分析方法来测量ADCC和ADCP。

在本发明的一些实施方式中，抗CD25抗体不抑制白细胞介素2(IL-2)与CD25的结合。本文中提到的“不抑制白细胞介素2与CD25的结合”可以可替代地表述为抗CD25抗体是非IL-2阻断抗体或“非阻断”抗体(相对于在抗CD25抗体存在下不阻断IL-2与CD25的结合)，即该抗体不阻断白细胞介素2与CD25的结合，特别是不抑制CD25表达细胞中的白细胞介素2信号传导。本文中对非IL-2阻断抗体的引用可以可替代地表述为“不抑制白细胞介素2与CD25结合”的抗CD25抗体或“不抑制IL-2信号传导”的抗CD25抗体。提及“非阻断”、“非IL-2阻断”、“不阻断”或“无阻断”等(相对于在抗CD25抗体存在下不阻断IL-2与CD25的结合)包括其中本发明的抗CD25抗体不阻断IL-2通过CD25进行信号传导的实施方式。也就是说，与不存在抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于50％的IL-2信号传导。在本文所述的本发明的特定实施方式中，与不存在抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于约50％、40％、35％、30％、优选少于约25％的IL-2信号传导。

一些抗CD25抗体可以允许IL-2与CD25结合，但仍阻断通过CD25受体的信号传导，这种抗体也可被称为“非阻断”、“非IL-2阻断”、“不阻断”或“无阻断”等(相对于在抗CD25抗体存在下不阻断通过CD25进行的IL-2信号传导)。与不存在抗CD25抗体时的信号传导相比，非IL-2阻断抗CD25抗体允许IL-2与CD25结合，以促进至少50％的通过CD25受体的信号传导水平。在本文所述的本发明的特定实施方式中，与不存在抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于约50％、40％、35％、30％、优选少于约25％的IL-2信号传导。

可以通过例如在WO2018/167104中讨论的以及本领域已知的方法来测量通过CD25进行的IL-2信号传导。可以在相同或基本相同的条件下对存在和不存在抗CD25抗体剂的情况下的IL-2信号传导进行比较。

在一些实施方式中，可以使用标准Stat-5磷酸化分析测量细胞中磷酸化的STAT5蛋白的水平来确定IL-2信号传导。例如，测量IL-2信号传导的Stat-5磷酸化分析可涉及，在抗CD25抗体存在下，以10ug/ml的浓度培养PMBC细胞30分钟，然后添加不同浓度的IL-2(例如10U/ml或不同浓度0.25U/ml、0.74U/ml、2.22U/ml、6.66U/ml或20U/ml)，进行10分钟。然后可以使细胞透化，随后可以使用荧光标记的抗体通过流式细胞术分析磷酸化的STAT5肽来测量STAT5蛋白的水平。IL-2信号传导阻断百分比可按如下方式计算：％阻断＝100×[(％Stat5+细胞无抗体组-％Stat5+细胞10ug/ml抗体组)/(％Stat5+细胞无抗体组)。

非阻断抗CD25抗体的实例描述于WO2018/167104、WO2019/175215、WO2019/175216、WO2019/175217、WO2019/175220、WO2019/17522、WO2019/175223、WO2019/17524、WO2019/17526中，其内容通过引用整体并入本文。

抗CD25抗体可以与人CD25胞外区内的表位特异性结合。在一些实施方式中，抗体与不同于IL-2结合位点的表位结合并且不阻断IL-2与CD25的结合。

如本文所用，“表位”是指由抗体或抗原结合片段结合的抗原部分。如本领域所熟知的，表位可以由连续的氨基酸(线性表位)或通过蛋白质的三级折叠并列的非连续氨基酸(构象表位)形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。

表位是构象性的，因为它由抗原中不共价连续但当抗原处于相关构象时在三维空间中彼此靠近的部分组成。例如，对于CD25，构象表位是由CD25胞外结构域中不连续的氨基酸残基组成的表位；线性表位是由CD25胞外结构域中连续的氨基酸残基组成的表位。文献中已知确定抗CD25抗体表位的确切序列和/或特别是氨基酸残基的方法，包括与来自抗原序列的肽竞争结合于来自不同物种的CD25序列(截短和/或诱变(例如通过丙氨酸扫描或其他定点诱变))、基于噬菌体展示的筛选、酵母呈递技术或(共)晶体学技术。确定表位的空间构象的方法也是本领域所熟知的，包括例如X射线晶体学和2-D核磁共振。例如参见EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology,Vol.66,Glenn E.Morris,Ed(1996)。因此，在一些实施方式中，抗CD25抗体可以识别构象表位。

在一些实施方式中，抗CD25抗体与表位结合，其中该表位包含一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸残基包含在选自以下的一个或多个氨基酸段中：SEQ ID NO：1的氨基酸150-163(YQCVQGYRALHRGP)(SEQ ID NO：52)、SEQ ID NO：1的氨基酸166-186(SVCKMTHGKTRWTQPQLICTG)(SEQ ID NO：53)、SEQ ID NO：1的氨基酸42-56(KEGTMLNCECKRGFR)(SEQ ID NO：54)和SEQ ID NO：1的氨基酸70-88(NSSHSSWDNQCQCTSSATR)(SEQ ID NO：55)。优选地，表位包含至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个、至少十二个、至少十三个、至少十四个、至少十五个、至少十六个、至少十七个、至少十八个或更多个氨基酸残基，所述氨基酸残基包含在选自以下的一个或多个氨基酸段中：SEQ ID NO：1的氨基酸150-163(YQCVQGYRALHRGP)(SEQ ID NO：52)、SEQ ID NO：1的氨基酸166-186(SVCKMTHGKTRWTQPQLICTG)(SEQ ID NO：53)、SEQ ID NO：1的氨基酸42-56(KEGTMLNCECKRGFR)(SEQ ID NO：54)和/或SEQ ID NO：1的氨基酸70-88(NSSHSSWDNQCQCTSSATR)(SEQ ID NO：55)。

在一些实施方式中，抗CD25抗体与人CD25的表位结合，其中该表位包含至少一个选自以下的序列：SEQ ID NO：1的氨基酸150-158(YQCVQGYRA)(SEQ ID NO：56)、SEQ ID NO：1的氨基酸176-180(RWTQP)(SEQ ID NO：57)、SEQ ID NO：1的氨基酸42-56(KEGTMLNCECKRGFR)(SEQ ID NO：54)和SEQ ID NO：1的氨基酸74-84(SSWDNQCQCTS)(SEQ IDNO：58)。这种抗体不会抑制IL-2与CD25的结合。

在一个实施方式中，抗CD25抗体与包含SEQ ID NO：1的氨基酸70-84的序列(NSSHSSWDNQCQCTS)(SEQ ID NO：59)的表位结合。

天然抗体和免疫球蛋白通常是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)组成。每条重链的氨基末端都有可变结构域(V_H)，随后是多个恒定结构域。每条轻链在氨基末端具有可变结构域(V_L)，在羧基末端具有恒定结构域。

可变区能够与结构互补的抗原靶标相互作用，且其特征是与不同抗原特异性的抗体的氨基酸序列存在差异。重链或轻链的可变区含有能够特异性结合抗原靶标的氨基酸序列。这些序列中含有由于它们在不同特异性的抗体之间具有极大的可变性而被称为“高变的”较小序列。这种高变区也称为“互补决定区”或“CDR”区。

这些CDR区解释了抗体对特定抗原决定簇结构的基本特异性。CDR代表可变区内不连续的氨基酸序列段，但无论物种如何，已发现这些关键氨基酸序列在可变重链区和可变轻链区内的位置与可变链的氨基酸序列具有相似的位置。对于各个重链(H)和轻链(L)，所有抗体的可变重链和轻链各具有3个CDR区域，各自与其他区域不相邻(称为H1、H2、H3、L1、L2、L3)。本文指定的CDR区是根据Kabat(Kabat et al.,1977.J Biol Chem 252,6609-6616)定义的。

在一些实施方式中，抗CD25抗体选自由以下组成的组：

(a)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：2-5中任一个的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQID NO：6-11中任一个的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

轻链可变区，包括：包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的CDR-L3；

(b)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的CDR-H3，和

轻链可变区，包括：包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的CDR-L3；以及

(c)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：31-33中任一个的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：34-38中任一个的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列的CDR-H3，和

轻链可变区，包括：包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些实施方式中，抗CD25抗体选自由以下组成的组：

(a)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

(b)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

(c)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

(d)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

(e)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

轻链可变区，包括：包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的CDR-L2和包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的CDR-L3；以及

(f)包含以下的抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，包括：包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的CDR-H2和包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR-H3，和

在一些实施方式中，抗CD25抗体选自由以下组成的组：

(a)抗体，包括：包含SEQ ID NO：16-21中任一个的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)抗体，包括：包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的轻链可变区；以及

(c)抗体，包括：包含SEQ ID NO：43-48中任一个的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方式中，抗CD25抗体选自由以下组成的组：

(a)抗体，包括：包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)抗体，包括：包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(c)抗体，包括：包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(d)抗体，包括：包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(e)抗体，包括：包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；

(f)抗体，包括：包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的轻链可变区；以及

(g)抗体，包括：包含与SEQ ID NO：16-21中任一个具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列的重链可变区和包含与SEQ ID NO：22具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列的轻链可变区。

下表提供了示例抗体的互补决定区(HCDR1-3和LCDR1-3)以及重链和轻链可变区的SEQ ID NO：

表1：

这种抗体在WO2019/175216、WO2019/175217和WO2019/1175222中进一步描述。其内容以引用的方式并入本文中。

本文中称为aCD25-a-686的抗体也可以称为RG6292。在优选实施方式中，抗CD25抗体是RG6292。抗CD25抗体称为“RG6292”，是一种无岩藻糖基化人IgG1单克隆抗体。RG6292包含具有SEQ ID NO：50的序列的重链序列和具有SEQ ID NO：51的序列的轻链序列。

这种抗体被称为“非IL-2阻断”抗体，不抑制IL-2与CD25的结合。

也可使用上述定义的抗体的变体。抗体的变体包括这样的抗体，其中每个CDR序列的序列包含具有以下特征的氨基酸序列：

(i)与其具有至少85％的同一性，和/或

(ii)相对于SEQ ID NO：2-15、23-28或31-42具有一个、两个或三个氨基酸取代。

抗体变体还包括这样的抗体，其中每个轻链和重链的序列包含具有以下特征的氨基酸序列：

(i)与其具有至少80％的同一性，和/或

(ii)相对于SEQ ID NO：16-22、29-30或43-51具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代。

例如，本发明的一个实施方式提供了用于治疗癌症的抗CD25抗体，该抗CD25抗体选自包含以下的组：

a)抗体或其抗原结合片段，包含：

-重链可变区，包含：CDR-H1，其包含与SEQ ID NO：2-5中任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；CDR-H2，其包含与SEQ ID NO：6-11中任一个具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；以及CDR-H3，其包含与SEQ ID NO：12具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，以及

-轻链可变区，包含：CDR-L1，其包含与SEQ ID NO：13具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；CDR-L2，其包含与SEQ ID NO：14具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；以及CDR-H3，其包含与SEQ ID NO：15具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；

b)抗体或其抗原结合片段，包含：

-重链可变区，包含：CDR-H1，其包含相对于SEQ ID NO：2-5中任一个具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；CDR-H2，其包含相对于SEQ ID NO：6-11中任一个具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；以及CDR-H3，其包含相对于SEQ ID NO：12具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，以及

-轻链可变区，包含：CDR-L1，其包含相对于SEQ ID NO：13具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；CDR-L2，其包含相对于SEQ ID NO：14具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列；以及CDR-H3，其包含相对于SEQ ID NO：15具有一个、两个或三个氨基酸取代的氨基酸序列，以及

c)抗体或其抗原结合片段，包含：

-重链可变区，包含：

i)与SEQ ID NO：16-21中任一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；或

ii)相对于SEQ ID NO：16-21具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代的氨基酸序列；

和

-轻链可变区，包含：

i)与SEQ ID NO：22具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；或

ii)相对于SEQ ID NO：22具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代的氨基酸序列。

本领域中已知的百分比(％)同一性是两个或更多个多肽序列或两个或更多个多核苷酸序列之间的关系，其通过比较序列而确定。在本领域中，同一性也意指多肽或多核苷酸序列(视情况而定)之间的序列相关程度，其通过这种序列串之间的匹配而确定。虽然存在许多测量两个多肽序列或两个多核苷酸序列之间的同一性的方法，但通常用于确定同一性的方法是在计算机程序中编码化的。用于确定两个序列之间的一致性的优选计算机程序包括但不限于GCG程序包((Devereux,et al.,Nucleic Acids Research,12,387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA(Atschul et al.,J.Molec.Biol.215,403(1990))。通过出于最优比较目的对序列进行对齐(例如，可以在第一序列中引入空位以与序列进行最佳对齐)并且比较相应位置处的氨基酸残基或核苷酸，来确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的百分比同一性。“最佳对齐”是获得最高的百分比同一性的两个序列的对齐。百分比同一性由所比较序列中的相同氨基酸残基或核苷酸的数量来确定的(即，％同一性＝相同位置数/位置总数×100)。通常，除非上下文另有规定或暗示，否则本文中提及的同一性％指的是分子整个长度上的同一性％。

本文所用的术语“抗体”既指完整的免疫球蛋白分子，也指其包含抗原结合位点的片段，包括多克隆、单克隆、遗传改造和其他修饰形式的抗体，包括但不限于：嵌合抗体、人源化抗体、异源偶联物和/或多特异性抗体(例如双特异性抗体、双抗体、三抗体和四抗体)以及抗体的抗原结合片段，包括例如Fab'、F(ab')₂、Fab、Fv、rIgG、多肽-Fc融合物、单链变体(scFv片段、VHH、鲨鱼单结构域抗体、单链或串联双抗体VHH、微型抗体、双环肽和其他替代免疫球蛋白支架)。在一些实施方式中，抗体可能缺乏在其天然产生的情况下将具有的共价修饰(例如，聚糖的附接)。在一些实施方式中，抗体可以含有共价修饰(例如，聚糖附接、可检测部分、治疗部分、催化部分或提供改善的抗体稳定性或施用的其他化学基团，例如聚乙二醇)。在一些实施方式中，抗体可以是掩蔽抗体的形式(例如)。掩蔽抗体可以包含阻断或“掩蔽”肽，其与抗体的抗原结合表面特异性结合并干扰抗体的抗原结合。掩蔽肽通过可裂解接头(例如蛋白酶)与抗体连接。在所需环境(即肿瘤环境)中选择性裂解接头，使掩蔽/阻断肽解离，使抗原结合能够发生在肿瘤中，从而限制潜在的毒性问题。“抗体”还可以指骆驼抗体(仅重链抗体)和抗体样分子，例如抗运载蛋白(Skerra(2008)FEBS J 275,2677-83)。在一些实施方式中，抗体是多克隆或寡克隆的，其作为一组抗体产生，各自与单个抗体序列相关并且结合抗原内或多或少不同的表位(例如人CD25胞外结构域内的与不同的参考抗人CD25抗体相关的不同表位，或FasL的不同表位)。如文献所述，多克隆或寡克隆抗体可以以单一制剂的形式提供用于医疗用途(Kearns JD et al.,2015.Mol CancerTher.14:1625-36)。

本发明中使用的抗体可以是单特异性的、双特异性的或多特异性的。“多特异性抗体”可对一个靶抗原或多肽的不同表位具有特异性，或者可包含对多于一个靶抗原或多肽具有特异性的抗原结合结构域。在本发明的一些实施方式中，抗体是单特异性的。在一些实施方式中，抗体以单价方式结合CD25或FasL(即一个抗体与一个CD25分子或一个FasL分子的比率)。在进一步的实施方式中，抗体是单特异性二价抗体，即抗体以一个抗体对两个CD25分子的比例结合CD25，或以一个抗体对两个FasL分子的比例结合FasL。

在本发明的一些实施方式中，抗体是单克隆的。该抗体可以另外或可替代地是人源化抗体或人抗体。在进一步的实施方式中，抗体是人抗体，或者在任何情况下是具有允许其在人对象中使用和施用的形式和特征的抗体。

本文中使用的“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”是指源自包括任何真核、原核或噬菌体克隆在内的单个克隆的抗体，而不是源自其产生方法。

本文使用的“人抗体”是指具有这样的可变区的抗体，其中的框架区和CDR区均源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则该恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可以包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变而引入的突变)。

抗体(Ab)和免疫球蛋白(Ig)是具有相同结构特征的糖蛋白。免疫球蛋白可以来自任何类别，例如IgA、IgD、lgG、IgE或IgM。免疫球蛋白可以具有任何亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在本发明的优选实施方式中，抗CD25抗体来自IgG类，优选IgG1亚类。在一个实施方式中，抗CD25抗体来自人IgG1亚类。在本发明的优选实施方式中，抗FasL抗体来自IgG类，优选IgG1亚类。在一个实施方式中，抗FasL抗体来自人IgG1亚类。

Treg细胞消耗疗法可以与癌症疫苗联合施用。癌症疫苗是本领域中已知的。本文中使用的“癌症疫苗”是指施用至癌症患者并旨在通过增强患者自身的免疫反应来消灭癌细胞的治疗性癌症疫苗。特别地，癌症疫苗将能够产生肿瘤抗原特异性反应。所选择的癌症疫苗将取决于所要治疗的癌症类型。癌症疫苗包括但不限于肽基疫苗、全细胞疫苗、树突状细胞疫苗和DNA疫苗。

在一个实施方式中，根据本发明施用的癌症疫苗是表达细胞因子的细胞免疫疗法。

本文使用的术语“表达细胞因子的细胞免疫疗法”是指包含经过遗传修饰以表达细胞因子(例如GM-CSF)的细胞群的组合物。这种“表达细胞因子的细胞免疫疗法”的细胞包含可操作地连接到表达和控制元件的细胞因子编码DNA序列，使得细胞表达细胞因子。这些细胞通常是肿瘤细胞，经过辐照以防止进一步细胞分裂。对于接受治疗的患者来说，这些细胞可能是自体的(患者特异性的)，也可能是同种异体的(非患者特异性的)。

在本发明的一个实施方式中，表达细胞因子的细胞免疫疗法包括表达GM-CSF的肿瘤细胞。例如可以是称为GVAX的癌症疫苗。GVAX包含经辐照的分泌GM-CSF的肿瘤细胞，其激活髓系细胞并使其成熟。

在本文描述的用途和方法中，Fas轴拮抗剂、抗FasL抗体、Treg细胞消耗疗法、抗CD25抗体和癌症疫苗各自以治疗有效量施用。如本文所用，术语“治疗有效量”是指当根据治疗给药方案施用于患有或易患疾病和/或病况的人群时足以治疗此类疾病和/或病况的(药剂或药物组合物的)量。治疗有效量是根据治疗方案降低疾病、病症和/或病况的一种或多种症状的发病率和/或严重程度，稳定和/或延迟其发作的量。本领域的普通技术人员应当理解，“治疗有效量”实际上并不要求在特定对象身上实现成功治疗。

抗体的适当用量的选择会在本领域技术人员的能力范围之内。例如，0.01、0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40或50mg/kg。在一些实施方式中，这种量是适合根据已被确定为与施用于相关人群(即，采用治疗给药方案)时所期望的或有益的结果相关的给药方案来施用的单位用量(或其整个部分)。用量还可能因施用途径、治疗周期或随后的剂量递增方案而变化，该方案可用于确定与以增加剂量施用抗体或癌症疫苗相关的最大耐受剂量和剂量限制毒性(如果存在)。

在本发明的一些实施方式中，每种组分在治疗方案中被施用多次。在一些实施方式中，给药方案可以包括以第一给药量进行的组分的第一次给药，然后是以与第一给药量相同的第二给药量进行一次或多次额外给药。可替代地，给药方案中每种组分的不同给药具有不同的给药量。在一些实施方式中，给药方案包括以第一给药量进行的第一次给药，然后是以与第一给药量不同的第二给药量进行的一次或多次额外给药。在一些实施方式中，可以以不同的给药量施用不同的抗体。可替代地，以基本上相同的给药量施用不同的抗体。在一些实施方式中，每次给药使用相同的抗CD25抗体、抗FasL抗体和癌症疫苗。可替代地，可以使用不同的抗CD25抗体和抗FasL抗体，例如不同的Fas轴拮抗剂，作为治疗方案的一部分。

根据本发明任一方面的抗体和癌症疫苗可以是另外包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物的形式。这些组合物包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散剂或悬浮剂、片剂、丸剂或脂质体。在一些实施方式中，优选的形式可取决于预期的施用方式和/或治疗应用。含有该抗体的药物组合物可以通过本领域已知的任何适当方法施用，包括但不限于口服、粘膜、吸入、局部、颊部、鼻腔、直肠或肠胃外(例如静脉内、输注、肿瘤内、结节内、皮下、腹膜内、肌内、皮内、透皮、或涉及物理破坏对象的组织并通过组织中的破口施用药物组合物的其他类型的施用)。例如，这种制剂可以是适合于皮内、肿瘤内或皮下施用或者静脉内输注的可注射或可输注溶液的形式。施用可涉及至少在选定的时间段内的连续给药(例如，灌注)。

在一些实施方式中，抗体可以与保护其免于快速释放和/或降解的载体一起制备，例如控释制剂，例如植入物、透皮贴剂和微胶囊化递送系统。可以使用可生物降解、生物相容性的聚合物。

本领域技术人员应当理解，例如，递送途径(例如，口服、静脉内、皮下、肿瘤内等)可能影响给药量，和/或所需给药量可能影响递送途径。例如，当目的是使特定部位或位置(例如，肿瘤内)内具有特别高浓度的某种药剂时，集中递送(例如，在此示例中为肿瘤内递送)可能是需要和/或有用的。在优化给定治疗性方案的途径和/或给药时间表时要考虑的其他因素可包括，例如，所治疗的特定癌症(例如，类型、阶段、位置等)、对象的临床病况(例如，年龄、整体健康状况等)以及医疗从业者已知的其他因素。

根据本发明使用的组合中的每个组分都应配制成分开施用。每种组分的药物组合物在制造和储存条件下通常应该是无菌和稳定的。该组合物可配制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或其他适合高药物浓度的有序结构。可以通过将需要量的抗体与一种上文列举的成分或上文列举的成分的组合(根据需要)掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌，来制备无菌可注射的溶液。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于本文讨论的悬浮剂、溶液剂、油性或水性溶媒中的乳剂、糊剂和可植入的缓释制剂或可生物降解制剂。可以使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂来制备无菌注射制剂。根据本发明使用的各药物组合物可以包括药学上可接受的分散剂、润湿剂、悬浮剂、等渗剂、包衣剂、抗菌剂和抗真菌剂、载体、赋形剂、盐或稳定剂，其在所采用的用量和浓度下对对象无毒。优选地，这种组合物还可包含用于治疗癌症的药学上可接受的载体或赋形剂，其与给定的施用方法和/或施用部位相兼容，例如用于肠胃外(例如皮下、皮内或静脉内注射)、肿瘤内或肿瘤周围施用。

本发明的另一方面提供了一种治疗癌症的试剂盒。该试剂盒包含至少两种活性组分，其中该试剂盒包含：

a)包含Treg细胞消耗疗法的第一组合物；和

b)包含Fas轴拮抗剂的第二组合物，

以及可选的，使用该组合物进行癌症治疗的联合疗法的说明。联合疗法可以包括按照本发明第一方面和其他方面所述的给药方案施用Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂。具体而言，给药方案可以包括在Treg细胞消耗疗法之后施用Fas轴拮抗剂。该试剂盒还可以包含另外的活性成分，c)包含癌症疫苗的第三组合物。

本发明所有其他方面的Treg细胞消耗疗法、Fas轴拮抗剂、抗CD25抗体、抗FasL抗体、癌症疫苗和给药及治疗方案可如本发明第一方面所述。

本文中使用术语“包括”描述的方面和实施方式可以包括范围内的其他特征或步骤。还应当理解，被描述为“包括”的方面和实施方式也描述了其中术语“包括”被术语“基本上由……组成”或“由……组成”替换的方面和实施方式。

短语“选自包括以下的组”在本文的任何地方可用短语“选自由以下组成的组”替代，反之亦然。

定义本发明及其优选方面和实施方式的一组条款如下：

1、一种治疗对象癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的各Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂。

2、根据条款2的方法，其中Treg消耗疗法包括施用治疗有效量的抗CD25抗体。

3、根据条款1或2的方法，其中方法还包括施用癌症疫苗。

4、根据条款1至3中任一项的方法，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

5、根据条款1至4中任一项的方法，包括向对象施用治疗有效量的抗CD25抗体、抗FasL抗体和癌症疫苗中的每一种。

6、根据条款5的方法，其中抗CD25抗体、抗FasL抗体和癌症疫苗是分开施用的。

7、根据条款6的方法，包括在施用抗CD25抗体和癌症疫苗之后施用抗FasL抗体。

8、根据条款5至7中任一项的方法，包括在通过施用抗CD25抗体消耗对象的Treg细胞之后施用抗FasL抗体。

9、根据条款5至8中任一项的方法，其中该方法包括向对象施用抗CD25抗体，随后施用癌症疫苗，然后施用抗FasL抗体。

10、根据条款5至9中任一项的方法，包括施用抗CD25抗体和抗FasL抗体的多次给药。

11、根据条款10的方法，包括在施用抗CD25抗体的至少两次给药后施用抗FasL抗体的第一次给药。

12、根据条款10或11中任一项的方法，其中抗FasL抗体的每次给药在抗CD25抗体的给药后20天内施用。

13、根据条款10至12中任一项的方法，其中抗FasL抗体的每次给药在施用抗CD25抗体的给药之后施用。

14、根据条款13的方法，其中在抗CD25抗体的给药之后施用抗FasL抗体，重复多次，抗CD25抗体给药之间的时间间隔为至少一周。

15、根据条款5至14中任一项的方法，包括施用癌症疫苗的多次给药。

16、根据条款15的方法，其中施用癌症疫苗的多次给药包括在抗CD25抗体的每次给药和抗FasL抗体之间施用癌症疫苗的给药。

17、根据条款16的方法，包括：

a)施用抗CD25抗体；

b)施用癌症疫苗，可选地，其中施用癌症疫苗包括施用癌症疫苗的多次给药；

c)施用抗CD25抗体；

d)可选地施用癌症疫苗；以及

e)施用Fas轴拮抗剂，

其中该方法包括在至少7天的治疗周期内重复步骤c)至e)。

18、根据条款5至17中任一项的方法，其中抗CD25抗体的所有给药使用相同的抗CD25抗体。

19、根据条款5至18中任一项的方法，其中癌症是CD25阳性癌症。

20、根据条款5至19中任一项的方法，其中癌症是血液癌。

21、根据条款5至20中任一项的方法，其中癌症是实体瘤。

22、根据条款5至21中任一项的方法，其中癌症选自急性髓系白血病、弥漫性大细胞B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、肉瘤和结直肠癌。

23、根据条款22的方法，其中癌症是急性髓系白血病或弥漫性大B细胞淋巴瘤。

24、根据条款22的方法，其中癌症是黑色素瘤。

25、根据条款5至24中任一项的方法，其中与不存在抗CD25抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于50％的通过CD25进行的IL-2信号传导。

26、根据条款25的方法，其中与不存在抗CD25抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于25％的通过CD25进行的IL-2信号传导。

27、根据条款5至26中任一项的方法，其中抗CD25抗体选自由以下组成的组：

(a)抗体，包括：

(b)抗体，包括：

(c)抗体，包括：

28、根据条款5至27中任一项的方法，其中抗CD25抗体是RG6292。

29、根据条款5至28中任一项的方法，其中抗CD25抗体与表位结合，该表位包含至少一个选自SEQ ID NO：1的氨基酸150-158、SEQ ID NO：1的氨基酸176-180、SEQ ID NO：1的氨基酸42-56和SEQ ID NO：1的氨基酸74-84的序列。

30、根据条款29的方法，其中抗CD25抗体与包含SEQ ID NO：1的氨基酸70-84的表位结合。

31、根据条款5至30中任一项的方法，其中癌症疫苗是表达细胞因子的细胞免疫疗法。

32、根据条款31中任一项的方法，其中表达细胞因子的细胞免疫疗法包括经辐照的表达GM-CSF的肿瘤细胞。

33、一种用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，其中Treg细胞消耗疗法抗体是与Fas轴拮抗剂和可选的癌症疫苗联合使用的。

34、一种用于治疗癌症的抗CD25抗体，其中抗CD25抗体是与抗FasL抗体和可选的癌症疫苗联合使用的。

35、一种用于治疗癌症的Fas轴拮抗剂，其中Fas轴拮抗剂是与Treg细胞消耗疗法和可选的癌症疫苗联合使用的。

36、一种用于治疗癌症的抗FasL抗体，其中抗FasL抗体是与抗CD25抗体和可选的癌症疫苗联合使用的。

37、一种用于治疗癌症的癌症疫苗，其中癌症疫苗是与Fas轴拮抗剂和Treg细胞消耗疗法联合使用的。

38、根据条款37的用途的癌症疫苗，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体，Treg细胞消耗疗法是抗CD25抗体。

39、一种用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂的组合，其中Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂是分开、同时或依次施用的。

40、根据条款39的用途的组合，其中Treg细胞消耗疗法包括抗CD25抗体。

41、根据条款40的用途的组合，还包含癌症疫苗。

42、根据条款41的用途的组合，其中组合包括：a)包含抗CD25抗体的第一组分；b)包含Fas轴拮抗剂的第二组分；和c)包含癌症疫苗的第三组分，第一组分、第二组分和第三组分是分开、同时或依次施用的。

43、根据条款42的用途的组合，其中Fas轴拮抗剂是在抗CD25抗体和癌症疫苗之后施用的。

44、根据条款42至43中任一项的用途的组合，其中Fas轴拮抗剂是在通过施用抗CD25抗体消耗对象的Treg细胞之后施用的。

45、根据条款42至44中任一项的用途的组合，其中向对象施用抗CD25抗体，随后施用癌症疫苗，然后施用Fas轴拮抗剂。

46、根据条款42至45中任一项的用途的组合，其中治疗包括施用抗CD25抗体的多次给药。

47、根据条款42至46中任一项的用途的组合，其中治疗包括施用Fas轴拮抗剂的多次给药。

48、根据条款42至47中任一项的用途的组合，其中治疗包括施用癌症疫苗的多次给药。

49、根据条款42至48中任一项的用途的组合，其中施用包括：

首先施用抗CD25抗体；

随后施用癌症疫苗的一次或多次给药；

随后施用抗CD25抗体和Fas轴拮抗剂的一次或多次交替给药，其中抗CD25抗体的每次进一步给药是在Fas轴拮抗剂之前施用的。

50、根据条款49的用途的组合，其中在至少7天的治疗周期内重复施用Fas轴拮抗剂的给药和抗CD25抗体的进一步给药的组合。

51、根据条款49或50中任一项的用途的组合，其中施用抗CD25抗体和Fas轴拮抗剂的一次或多次交替给药还包括施用癌症疫苗的一次或多次给药，其中抗CD25抗体和癌症疫苗的每次进一步给药是在Fas轴拮抗剂的给药之前施用的。

52、根据条款42至51中任一项的用途的组合，其中与不存在抗CD25抗体时的IL-2信号传导相比，抗CD25抗体抑制少于50％的通过CD25进行的IL-2信号传导。

53、根据条款42至52中任一项的用途的组合，其中抗CD25抗体是条款25至30中任一项所定义的抗CD25抗体。

54、根据条款39至53中任一项的用途的组合，其中癌症疫苗是表达细胞因子的细胞免疫疗法，优选地其中表达细胞因子的细胞免疫疗法包括表达GM-CSF的肿瘤细胞。

55、根据条款42至54中任一项的用途的组合，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

56、用于治疗癌症的抗CD25抗体、抗FasL抗体和癌症疫苗的组合，其中抗CD25抗体、抗FasL抗体和癌症疫苗是分开、同时或依次施用的。

57、一种治疗或预防对象的癌症复发的方法，其中对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，其中该方法包括在Treg细胞消耗疗法之后向对象施用Fas轴拮抗剂(例如抗FasL抗体)的至少一次给药。

58、根据权利要求57的方法，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

59、根据条款57或58的方法，其中Treg细胞消耗疗法包括施用抗CD25抗体。

60、根据条款57至59中任一项的方法，其中该方法还包括施用癌症疫苗。

61、根据条款57至60中任一项的方法，包括将Fas轴拮抗剂与抗CD25抗体的进一步给药联合施用。

62、根据条款61的方法，其中Fas轴拮抗剂的每次给药是抗CD25抗体的每次进一步给药之后施用的。

63、根据条款62的方法，其中该方法按照以下顺序包括：

a)施用抗CD25抗体；

c)施用抗CD25抗体；

d)施用癌症疫苗；以及

e)施用Fas轴拮抗剂，

其中该方法包括在至少7天的治疗周期内重复步骤c)至e)。

64、一种治疗对象的癌症的方法，包括向对象施用：

a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；和

b)Fas轴拮抗剂的给药和Treg细胞消耗疗法的加强给药，其中在Fas轴拮抗剂之前施用Treg细胞消耗疗法的加强给药。

65、根据条款64的方法，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

66、根据条款64或65中任一项的方法，包括施用Fas轴拮抗剂和抗CD25抗体的多次给药，其中Fas轴拮抗剂的每次给药在Treg细胞消耗疗法的加强给药之后施用。

67、根据条款64至66中任一项的方法，包括施用Fas轴拮抗剂的多次给药和Treg细胞消耗疗法的加强给药，其中Treg细胞消耗疗法的加强给药之间间隔至少7天。

68、根据条款64至67中任一项的方法，包括联合施用癌症疫苗的引发给药与Treg细胞消耗疗法的引发给药。

69、根据条款68的方法，其中癌症疫苗的引发给药在Treg细胞消耗疗法的引发给药之后和Treg细胞消耗疗法的加强给药之前施用。

70、根据条款69的方法，包括施用癌症疫苗的加强给药，其中癌症疫苗的每次加强给药与Treg细胞消耗疗法的每次加强给药联合施用。

71、根据条款70的方法，其中该方法包括：

a)施用Treg细胞消耗疗法的引发给药；

b)施用癌症疫苗的一次或多次给药；

c)施用Treg细胞消耗疗法的加强给药；

d)可选地施用癌症疫苗加强给药；以及

e)施用Fas轴拮抗剂的给药，

其中该方法包括在至少7天的治疗周期内重复步骤c)至e)。

72、根据条款64至71中任一项的方法，其中Treg细胞消耗疗法包括抗CD25抗体。

73、根据条款72的方法，其中抗CD25抗体是条款25至30中任一项所定义的抗CD25抗体。

74、根据条款60至63或68至73中任一项的方法，其中癌症疫苗是条款31至32中任一项所定义的癌症疫苗。

75、一种用于治疗或预防对象的癌症复发的Fas轴拮抗剂，其中该对象已接受用于治疗癌症的Treg细胞消耗疗法，并且其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

76、根据条款75的用途的Fas轴拮抗剂，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

77、一种用于治疗或预防对象的癌症复发的Treg细胞消耗疗法，其中Treg细胞消耗疗法是与Fas轴拮抗剂的至少一次给药联合使用的，其中Fas轴拮抗剂是在Treg细胞消耗疗法之后施用于对象的。

78、根据条款77的用途的Treg细胞消耗疗法，其中对象已接受初始Treg细胞消耗疗法以治疗癌症。

79、根据条款77或78中任一项的用途的Treg细胞消耗疗法，其中Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

80、用于治疗或预防对象的癌症复发的a)Treg细胞消耗疗法的引发给药；b)Treg细胞消耗疗法的加强给药和c)Fas轴拮抗剂给药的组合，其中Treg细胞消耗疗法的引发给药和Treg细胞消耗疗法的第一次加强给药在Fas轴拮抗剂之前施用。

81、根据条款80的用途的组合，还包括d)癌症疫苗的引发给药，其中癌症疫苗的引发给药在Treg细胞消耗疗法和Treg细胞消耗疗法的第一次加强给药之间施用。

82、根据条款80或81中任一项的用途的组合，其中治疗包括重复施用Treg细胞消耗疗法的加强给药和Fas轴拮抗剂，其中Treg细胞消耗疗法的每次加强给药在Fas轴拮抗剂的每次给药之前施用。

83、根据条款82的用途的组合，还包括e)癌症疫苗的加强给药，其中癌症疫苗的每次加强给药在Treg细胞消耗疗法的每次加强给药与Fas轴拮抗剂的每次给药之间施用。

84、根据条款80至83中任一项的用途的组合，其中Treg细胞消耗疗法包括抗CD25抗体并且Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

85、根据条款81或83中任一项的用途的组合，其中癌症疫苗是表达细胞因子的细胞免疫疗法，优选地其中表达细胞因子的细胞免疫疗法包括表达GM-CSF的肿瘤细胞。

86、根据条款33或77至79中任一项的用途的T细胞消耗疗法、根据条款34的用途的抗CD25抗体、根据条款35、75-76中任一项的用途的Fas轴拮抗剂、根据条款36的用途的抗FasL抗体、根据条款37或38中任一项使用的癌症疫苗或根据条款39-56或80-85中任一项的用途的组合，其中癌症是实体瘤。

87、一种试剂盒，包括：

a)包含Treg细胞消耗疗法的第一组合物；和

b)包含Fas轴拮抗剂的第二组合物，

以及可选的，使用该组合物进行癌症治疗的联合疗法的说明。

88、根据条款87的试剂盒，还包括c)含有癌症疫苗的第三组合物。

还应当理解，除非上下文另有要求，否则本申请公开了上述任何方面和实施方式相互之间的所有组合。类似地，除非上下文另有要求，否则本申请公开了优选和/或可选特征的所有组合，无论是单独地还是与任何其他方面一起。

现在将通过以下实施例并参考附图进一步描述本发明，这些实施例旨在帮助本领域的普通技术人员实施本发明，并且不旨在以任何方式限制本发明的范围。

实施例

小鼠

C57BL/6小鼠(6-8周龄雌性)由查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)提供。所有动物研究均在伦敦大学学院和英国内政部的伦理批准和规定下进行。

细胞系和组织培养

高度致瘤性和弱免疫原性细胞系B16/BL6小鼠黑色素瘤细胞从得克萨斯大学安德森癌症中心(德克萨斯州休斯顿)I.J.Fidler博士处获得。使用表达B16/BL6的GM-CSF(GVAX)执行疗法。这两种细胞系之前都曾被描述过(Van Elsas et al.,1999,J Exp Medvol.190(3)p355-366)。B16/BL6和GVAX细胞在罗斯威尔帕克纪念研究所(RPMI)培养基中培养，该培养基中添加有10％胎牛血清(FCS，Sigma)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和2mML-谷氨酰胺(均来自Gibco)，培养在37℃下和5％CO2的加湿氛围下进行。

治疗性抗体

抗CD25^NIB抗体的生产外包给Evitria AG(瑞士)。抗CD25^NIB抗体是一种小鼠非IL-2阻断抗CD25抗体(包含小鼠IgG2a骨架中克隆7D4的可变区，如Solomon I et al(2020)Nature Cancer,vol 1,p1153-1166，WO2018/167104中所述)。

同种型对照抗体(InVivoMAb多克隆亚美尼亚仓鼠IgG)(Cat.#BE0091)和抗FasL抗体(MFL3)(Cat.#BE0319)购自BioXcell。

体内肿瘤实验

在第0天，向C57BL/6小鼠右侧腹皮下(s.c.)注射50,000个B16/BL6黑色素瘤细胞。在第5天，腹膜内(i.p.)注射200μg抗CD25^NIB抗体。在肿瘤接种后第6、9和12天，在对侧腹部皮内(i.d.)注射1×10⁶个经辐照(150Gy)的GVAX细胞。

每周3-4次仔细测量肿瘤尺寸，并将体积计算为三个正交直径的乘积。使用肿瘤体积(mm³)相对于接种后天数绘制肿瘤生长曲线。

初始联合疗法后密切监测肿瘤生长。只有对初始联合疗法有反应的肿瘤才会被纳入进一步治疗。

在第28天给予同种型对照抗体(200ug，i.p.)和抗FasL(MFL3)mAb(200μg，i.p.)，此时大多数肿瘤缩小或保持稳定的尺寸。一周后给予第二次给药(也是200μg，i.p.)。在联合治疗组中，第25天和第35天给予抗CD25^NIB(200μg，i.p.)以维持Treg消耗。

概括起来，治疗组如下：

第1组：第5天，200μg抗CD25^NIB；第6、9和12天，1×10⁶个GVAX细胞；第28和36天，200μg同种型对照(图1A)。

第2组：第5天，200μg抗CD25^NIB；第6、9和12天，1×10⁶个GVAX细胞；第28和36天，200μg抗FasL抗体(图1B)。

第3组：第5天，200μg抗CD25^NIB；第6、9和12天，1×10⁶个GVAX细胞；第11、17、24天200μg抗CD25^NIB；之后每周注射一次，直至第56天(图1C)。

第4组：第5天，200μg抗CD25^NIB；第6、9和12天，1×10⁶个GVAX细胞；第25和36天，200μg抗CD25^NIB；第28和36天，200μg抗FasL抗体(图1D)。

每周测量2-3次肿瘤尺寸。当任何直径达到150mm时，对小鼠实施安乐死。

结果

图2和图3显示了随时间推移的肿瘤生长和存活率的结果。这些结果表明，使用抗FasL抗体与抗CD25抗体联合治疗显著预防了肿瘤生长复发并提高了存活率。

具体而言，这些实验表明，与同种型对照、单独的抗FasL抗体治疗和单独的抗CD25抗体治疗相比，在抗CD25抗体和GVAX的初始联合疗法中添加抗FasL抗体和抗CD25抗体的组合预防了肿瘤生长复发并提高了存活率。

由于随着时间的推移，活性Teff会减少，而Treg会增多，因此使用增强治疗方案(多周期抗FasL抗体和抗CD25抗体联合治疗)治疗稳定期肿瘤被认为可能提供更多的抗原特异性T细胞并维持TME中的Treg低计数，从而防止复发。认为抗FasL抗体阻断Fas/FasL轴抑制了Fas介导的活化Teff细胞的死亡。这种对Fas介导的活化Teffs细胞的死亡的抑制与Treg消耗相结合，有助于维持免疫原性TME，从而实现更好的治疗效果。

上述说明书中提及的所有出版物均以引用的方式并入本文中。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，对本发明所述用途和方法进行各种修改和变型都是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方式描述了本发明，但是应当理解，所要求保护的本发明不应不适当地限于这种特定的实施方式。事实上，对于分子生物学、细胞免疫学或相关领域的技术人员来说，对所述实施本发明的方式的各种修改是显而易见的，并且这些修改旨在属于下述权利要求的范围。

下表提供了本申请中引用的序列的总结：

表2：

Claims

1.Treg细胞消耗疗法和Fas轴拮抗剂的组合，所述组合用于治疗癌症，其中所述Treg细胞消耗疗法和所述Fas轴拮抗剂是分开、同时或依次施用的。

2.根据权利要求1所述的用途的组合，其中所述Treg细胞消耗疗法包括抗CD25抗体。

3.根据权利要求1或2所述的用途的组合，还包含癌症疫苗。

4.根据权利要求3所述的用途的组合，其中所述组合包括：a)包含所述抗CD25抗体的第一组分；b)包含所述Fas轴拮抗剂的第二组分；和c)包含所述癌症疫苗的第三组分，所述第一组分、所述第二组分和所述第三组分是分开、同时或依次施用的。

5.根据权利要求4所述的用途的组合，其中所述Fas轴拮抗剂是在所述抗CD25抗体和所述癌症疫苗之后施用的。

6.根据权利要求4至5中任一项所述的用途的组合，其中所述Fas轴拮抗剂是在通过施用所述抗CD25抗体消耗对象的Treg细胞之后施用的。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的用途的组合，其中向对象施用所述抗CD25抗体，随后施用所述癌症疫苗，然后施用所述Fas轴拮抗剂。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的用途的组合，其中所述治疗包括施用所述抗CD25抗体的多次给药。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的用途的组合，其中所述治疗包括施用所述Fas轴拮抗剂的多次给药。

10.根据权利要求4至9中任一项所述的用途的组合，其中所述治疗包括施用所述癌症疫苗的多次给药。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的用途的组合，其中所述施用包括：

-首先施用所述抗CD25抗体；

-随后施用所述癌症疫苗的一次或多次给药；

-随后施用所述抗CD25抗体和所述Fas轴拮抗剂的一次或多次交替给药，其中所述抗CD25抗体的每次进一步给药是在所述Fas轴拮抗剂的给药之前施用的。

12.根据权利要求11所述的用途的组合，其中在至少7天的治疗周期内重复施用Fas轴拮抗剂的给药和抗CD25抗体的进一步给药的组合。

13.根据权利要求11或12中任一项所述的用途的组合，其中施用所述抗CD25抗体和所述Fas轴拮抗剂的一次或多次交替给药还包括施用所述癌症疫苗的一次或多次给药，其中所述抗CD25抗体和所述癌症疫苗的每次进一步给药是在所述Fas轴拮抗剂的给药之前施用的。

14.根据权利要求4至13中任一项所述的用途的组合，其中与不存在抗体时的IL-2信号传导相比，所述抗CD25抗体抑制少于50％的通过CD25进行的IL-2信号传导。

15.根据权利要求4至14中任一项所述的用途的组合，其中所述癌症疫苗是表达细胞因子的细胞免疫疗法。

16.根据权利要求15所述的用途的组合，其中所述表达细胞因子的细胞免疫疗法包括表达GM-CSF的肿瘤细胞。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的用途的组合，其中所述Fas轴拮抗剂是抗FasL抗体。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的用途的组合，其中所述癌症是实体瘤。

19.一种用于治疗癌症的试剂盒，包括：

a)包含Treg细胞消耗疗法的第一组合物；

b)包含Fas轴拮抗剂的第二组合物，

以及可选的用于联合疗法的使用说明。

20.根据权利要求19所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括c)第三组合物，所述第三组合物包含癌症疫苗。