CN118978508B

CN118978508B - 一种含氮杂环化合物

Info

Publication number: CN118978508B
Application number: CN202411061179.1A
Authority: CN
Inventors: 胡永韩; 乐美杰; 强静
Original assignee: Shanghai Xinnuo Life Sustaining Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Shanghai Xinnuo Life Sustaining Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2024-08-02
Filing date: 2024-08-02
Publication date: 2025-09-16
Anticipated expiration: 2044-08-02
Also published as: CN118978508A

Abstract

本发明公开了一种式(I)所示的新型IRAK4抑制剂化合物以及使用该化合物预防或治疗IRAK4介导的疾病的用途，这些用途包括但不限于类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫疾病，活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、复发性非霍奇金淋巴瘤及其他淋巴瘤。

Description

一种含氮杂环化合物

技术领域

本发明涉及一种新型IRAK4抑制剂化合物以及使用该化合物预防或治疗IRAK4介导的疾病的用途。

背景技术

慢性炎症性疾病与自身免疫性疾病威胁全球数百万人的生命，这些疾病与炎症介导的信号异常相关。另外，一些疾病，如2型糖尿病和心血管疾病等，也与介导炎症的信号异常有关。

白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)是细胞内丝氨酸-苏氨酸激酶IRAK家族的成员之一。激酶家族的其他成员还包括IRAK2、IRAK-M和IRAK3。当白介素-1受体(IL-1R)或者Toll样受体(TLR)与配体结合后，IRAK4能够介导信号传导，激活下游炎症因子的表达。TLR可以接受来自机体与微生物作用或者内源性物质刺激产生的配体信号，以及这些刺激引发的第一波炎症信号和先天免疫反应信号。TLR在许多疾病中，包括感染和自身炎症性疾病以及人类的许多其他疾病，起着非常重要的作用。像肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和其他主要的细胞因子一样，白细胞介素-1(IL-1)是炎症介导通路中的关键因子，能够传播和放大信号。由于TLR、IL-1R和其他细胞因子受体介导的信号通路有着相互交联的作用，所以TLR和IL-1R炎症通路下游的关键信号因子——IRAK4，在全身炎症反应中作用重大，能够作为治疗各种炎症相关性疾病的一个有效潜在靶点。

发明内容

本发明提供了一类全新结构的IRAK4抑制剂化合物、其用途及含其的药物组合物。该类化合物对IRAK4激酶的抑制效果较佳。

本发明提供了如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R₁为C_1-3烷基，R₂为卤素或H；

优选地，R₁为甲基或乙基，R₂为H或F。

如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐可以为下述化合物：

本发明还提供了如上化合物或其药学上可接受的盐在制备IRAK4抑制剂中的用途。

本发明还提供了如上化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述的药物用于预防或治疗由IRAK4异常表达介导的疾病。

所述的“由IRAK4异常表达介导的疾病”包括但不限于类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫疾病，活化B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、复发性非霍奇金淋巴瘤及其他淋巴瘤。

本发明还提供了一种药物组合物，其包含如上化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的药学上可接受的有机或无机盐。

如本文所用，术语“药学上可接受的”表示该物质或组合物与包含制剂和/或用其处理的哺乳动物的其他成分必须化学和/或毒理学上兼容。

本发明中的某些化合物具有手性碳原子、双键、碳环或杂环，由此产生的各构型异构体{旋光异构体(例如对映体、非对映体等)、顺反异构体等}以及它们的混合物(例如外消旋体)均在本发明的保护范围内。当本发明中的某些化合物表明特定构型时，是指该构型异构体存在且基本上不含其他异构体的化合物。

如本文所用，术语“抑制剂”是指为减少、阻断、防止、延迟活化、灭活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。

如本文所用，术语“IRAK4异常表达”即由通过IRAK4的信号传导引起的IRAK4活性增加。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

将(7R,7aS)-7-乙基-3,3-二甲基四氢吡咯[1,2-c]噁唑-5(1H)-酮(300mg,1.73mmol)和劳森试剂(Lawesson's reagent，350mg,0.86mmol)的甲苯(10mL)溶液加热至回流反应16小时。将反应液冷却至室温，浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)，得到0002A(100mg,29％黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝200.2@1.708min(LC-MS方法B)。

将0002A(100mg,0.5mmol)和碘甲烷(355mg,2.5mmol)的乙腈(5mL)溶液于25℃搅拌16小时。反应液浓缩得到0002B(87mg,99％黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝174(LC-MS方法A)。

向0002B(86mg,0.5mmol)和0006G(109mg,0.5mmol)的二甲亚砜(3mL)溶液中加入碳酸铯(488mg,1.5mmol)，加热到85℃反应16小时。反应液用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相用水(10mL×3)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)，得到0002C(40mg,22％黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝356.1@1.296min(LC-MS方法A)。

向0002C(35mg,0.1mmol)的二甲亚砜(1mL)溶液中加入碳酸钾(69mg,0.5mmol)，反应液冷却到10℃搅拌5分钟，缓慢加入过氧化氢(0.5mL,30％)，室温反应10分钟。加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，有机相用水(10mL×3)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。得到0002D(37mg,99％)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝374.1@1.69min(LC-MS方法B)。

将0002D(37mg,0.1mmol)和氰胺(42mg,10mmol)的乙醇(2mL)溶液室温反应16小时，浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-8％)，得到SB-0002(30mg,82％白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝368.2@5.716min(方法D).¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.623(bs,1H),8.182(s,1H),7.922(d,J＝5.6Hz,1H),7.855(bs,1H),7.720(bs,1H),7.454-7.467(m,2H),4.432-4.570(m,2H),4.246(s,1H),3.990(s,3H),2.990-3.023(m,1H),2.401-2.680(m,2H),1.574-1.639(m,1H),1.365-1.432(m,1H),0.938(t,3H)。

实施例2

将(S)-5-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(3.45g,30mmol)，2,2-二甲氧基丙烷(6.24g,60mmol)和对甲苯磺酸(190mg,1mmol)的甲苯(50mL)溶液加热回流反应16小时，然后冷却到室温。反应液浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)，得到0006A(4.4g,94％，黄色油状物)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝156.2@1.17min(方法A)。

将0006A(1.55g,10mmol)和劳森试剂(2.02g,5mmol)的甲苯(20mL)溶液加热回流反应16小时，然后冷却到室温。反应液浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)，得到0006B(250mg,15％，白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝172.2@1.38min(方法B)。

将0006B(171mg,1mmol)和碘甲烷(1.42g,10mmol)的乙腈(10mL)溶液于25℃反应16小时。反应液浓缩得到0006C(145mg,99％，白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝146.1@0.97min(方法B)。

向4-溴-3-甲氧基苯甲醛(6.45g,30mmol)的甲苯(150mL)溶液中加入2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(4.7g,45mmol)，反应液加热回流反应4小时，同时用分水器分离产生的水。冷却到0℃，保持内温低于5℃，依次加入三氟乙酸酐(12mL,90mmol)和三氟化硼乙醚(11.1mL,90mmol)溶液，升至室温继续反应16小时。将反应液倒入冰和氨水的混合液中，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)，得到0006D(4.7g,66％，深褐色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝238.1@1.71min(方法B)。

将0006D(1.5g,6.3mmol)，锌粉(41mg,0.63mmol)，氰化锌(1.158g,9.9mmol)，1,1'-二(二苯基膦)二茂铁(35mg,0.063mmol)，(二苄基丙酮)二钯(0)(29mg,0.315mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(12mL)溶液，加热到150℃微波反应1.5小时。将反应液过滤，向滤液中加入水，有固体析出，过滤，滤饼干燥得到0006E(1.1g,94％，黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝185.1@1.40min(方法B)。

向0006E(1.1g,5.98mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(1.547g,8.97mmol)，室温反应16小时。向反应液加入水，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到0006F(1.2g,99％，黄色固体)，不需纯化直接用于下一步反应。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝201.1@1.05min(方法B)。

将0006F(1.2g,6mmol)和三氯氧磷(10mL)的混合液加热到105℃反应2小时。将反应液浓缩干，残留物用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)洗涤，干燥得到0006G(850mg,64％，浅黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝219.0@1.86min(方法A)。

向0006G(22mg,0.1mmol)的二甲基亚砜(1mL)溶液加入碳酸钾(69mg,0.5mmol)和过氧化氢(0.2mL,30％)，室温反应30分钟。加水淬灭反应，反应液用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到0006H(24mg,99％，黄色固体)，不经纯化直接用于下一步反应。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝237.0@1.38min.(方法A)。

在-10℃下，向0006H(24mg,0.1mmol)和0006C(15mg,0.1mmol)的干燥N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入双(三甲基硅基)氨基钾(0.5M/甲苯，1mL,0.5mmol)，反应液升至室温搅拌4小时。反应液用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相用水(10mL×3)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-10％)，得到0006I(20mg,57％，黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝346.2@1.47min(方法B)。

将0006I(20mg,0.058mmol)和氰胺(24mg,0.58mmol)的乙醇(3mL)溶液于室温下反应16小时。将反应液浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-7％)，得到粗产品，进一步用Pre-HPLC(Column Xbridge 21.2*250mm C18,10um,流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)B:乙腈)纯化。得到SB-0006(3mg,15％，白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝340.2@4.71min(方法D).¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ8.421(s,1H),7.921(d,J＝5.6Hz,1H),7.690(s,1H),7.388(d,J＝5.6Hz,1H),4.554-4.641(m,2H),4.444-4.474(m,1H),3.119(s,3H),2.932-3.151(m,2H),2.508-2.559(m,1H),2.217-2.232(m,1H)。

实施例3

将(3S,4S,5S)-4-乙基-3-氟-5-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(160mg,1mmol)，2,2-二甲氧基丙烷(208mg,2mmol)和对甲苯磺酸(6mg,0.03mmol)的甲苯(50mL)溶液加热回流反应16小时，然后冷却到室温。反应液浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-20％)，得到0011A(160mg,80％，黄色油状物)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝202.2@1.31min(方法B)。

将0011A(0.2g,1mmol)和劳森试剂(202mg,0.5mmol)的甲苯(10mL)溶液加热回流反应4小时，然后冷却到室温。反应液浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0-50％)，得到0011B(120mg,55％，黄色油状物)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝218.1@1.83min(方法A)。

将0011B(120mg,0.55mmol)和碘甲烷(780mg,5.5mmol)的乙腈(5mL)溶液于25℃反应16小时。反应液浓缩得到0011C(105mg,99％，白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝192.1@1.34min(方法B)。

在-10℃下，向0006H(62mg,0.26mmol)和0011C(50mg,0.26mmol)的干燥N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入双(三甲基硅基)氨基钾(0.5M/甲苯，2.1mL,1.05mmol)，反应液加热到25℃反应4小时。用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相用水(10mL×3)饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物用快速色谱法分离纯化(甲醇/二氯甲烷＝0-6％)，得到0011D(100mg，97％，黄色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝392.1@1.68min(方法B)。

将0011D(100mg,0.255mmol)和氰胺(107mg,2.55mmol)的乙醇(5mL)溶液于室温下反应16小时。将反应液浓缩，残留物用制备Pre-HPLC(Column Xbridge21.2*250mm C18,10um,流动相A:水(10mmol/L碳酸氢铵)B:乙腈)纯化。得到SB-0011(2mg,2％，白色固体)。LCMS(ESI)[M+H]⁺＝386.2@6.15min(方法D).¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ8.375(s,1H),7.941(d,J＝5.6Hz,1H),7.498(s,1H),7.421(d,J＝5.6Hz,1H),4.776-4.852(m,1H),4.391-4.499(m,2H),4.135(s,3H),2.787-2.862(m,2H),1.700-1.772(m,2H),1.109-1.145(m,3H)。

附分析方法

¹H NMR和¹⁹F NMR谱在Bruker AVⅢ400上检测。

LCMS在Agilent 1200HPLC/6100SQ系统上检测，使用条件如下:

方法A:流动相:A:水(0.01％TFA)B:乙腈(0.01％TFA)；梯度相:5％B increaseto95％B within 1.4min,95％B with 1.6min(总运行时间:3min)；流速:2.3mL/min；柱型:SunFire C18,4.6*50mm,3.5μm；柱温:50℃.探测器:ADC ELSD,DAD(214nm and 254nm),ES-API。

方法B:流动相:A:水(10mM NH₄HCO₃)B:乙腈；梯度相:10％to 95％Bwithin1.5min,95％B with 1.5min(总运行时间:3min)；流速:1.8mL/min；柱型:XBridgeC18,4.6*50mm,3.5um；柱温:50℃.探测器:ADC ELSD,DAD(214nm and 254nm),MSD(ES-API)。

方法C:流动相:A:水(0.01％TFA)B:乙腈(0.01％TFA)；梯度相:5％B increaseto95％B within 1.2min,95％B with 13.8min(总运行时间:15min)；流速:2mL/min；柱型:SunFire C18,4.6*50mm,3.5μm；柱温:50℃.探测器:UV(214nm and 4nm),MS(ESI,Posmode,132to 1500amu)。

方法D:流动相:A:水(10mM NH₄HCO₃)B:乙腈；梯度相:10％to 95％B within8min,95％B with 7min(总运行时间:15min)；流速:1mL/min；柱型:XBridge C18,4.6*50mm,3.5um；柱温:40℃.探测器:UV(214nm and 4nm),MS(ESI,Pos mode,132to 1500amu)。

方法E:流动相:A:水(0.01％TFA)B:乙腈(0.01％TFA)；梯度相:5％B increase to95％B within 1.2min,95％B for 1.8min,back to 5％B within 0.01min.(总运行时间:15min)；流速:2mL/min；柱型:SunFire C18,4.6*50mm,3.5μm；柱温:40℃.探测器:UV(214nmand 4nm),MS(ESI,Pos mode,132to 1500amu)。

效果实施例IRAK4激酶活性抑制作用检测

检测IRAK4激酶的IC₅₀值。以Staurosporine作为阳性对照化合物。本实验采用迁移率变动分析法(Mobility shift assay)，在IRAK4激酶上进行化合物的筛选。

化合物浓度梯度的配制：受试化合物起始浓度10μM，4倍稀释，10个浓度，复孔检测。在384孔板中梯度稀释成100倍终浓度的10个不同浓度的溶液。然后用移液系统(Labcyte，Echo550)转移250nL到384反应板中备用。阴性对照孔和阳性对照孔中分别加250nL的100％DMSO。用激酶缓冲液(桑迪亚医药技术(上海)有限责任公司制备)配制2.5倍终浓度的激酶(Carna，09-145)溶液。在化合物孔和阳性对照孔(Staurosporine，selleckchem，S1421)分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的激酶缓冲液。1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。用激酶缓冲液配制25/15倍终浓度的ATP(Sigma，A2383)和底物(Kinase substrate 8，GL，112396)的混合溶液。加入15μL的25/15倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育相应时间。加入30μL终止检测液(桑迪亚医药技术(上海)有限责任公司制备)停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。用酶标仪(Caliper EZ ReaderⅡ)读取转化率。

数据分析：

计算公式：

％Inhibition是抑制率；Conversion％_sample是样品的转化率读数；

Conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；

Conversion％_max：阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。

拟合量效曲线：

以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。计算公式如下：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)*HillSlope))，结果见表1：

表1

化合物编号	IC₅₀(nM)
		SB-0002	0.84
SB-0006	1.77
		SB-0011	0.94

Claims

1.一种如下所述的化合物或其药学上可接受的盐：

2.一种药物组合物，其包含如权利要求1中所述的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。

3.如权利要求1-2中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐，以及药物组合物，在制备IRAK4激酶抑制剂药物中的用途。